用于降低生物制剂粘度的化合物
阅读：356发布：2020-05-08
专利汇可以提供用于降低生物制剂粘度的化合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及式I的 聚乙二醇化 氨 基 酸化 合物及其药学上可接受的盐，其中X、R1、R2、R3A、R3B和n如本文所定义。本发明还涉及组合物，其包含与高浓度的活性 生物 成分(ABI)组合的本发明的聚乙二醇化氨基酸化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。在本发明的实施方式中，所述ABI为特异性结合人程序性死亡受体1(PD-1)的抗PD-1 抗体 或其 抗原 结合 片段 。本发明还涉及用于降低药物组合物的 水 溶液的 粘度 的方法，其包括将本发明化合物加入到溶液中。本发明还提供了通过向需要此 治疗 的受试者施用 治疗有效量 的本发明的药物组合物来治疗诸如癌症的病理 疾病 或病症的方法。，下面是用于降低生物制剂粘度的化合物专利的具体信息内容。
1.式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，
其中：
X为
R1为H或甲基；
R2为H或
R3A和R3B各自为H或一起形成氧代；
R4A和R4B各自为H或一起形成氧代；
R5为H或甲基；并且
n每次出现时独立地为1至5；
并且其中 表示与化合物其余部分的连接点。
2.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为H。
3.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为
4.权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为
1
5.权利要求1-4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R为甲基。
6.权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3A和R3B为H。
7.权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3A和R3B结合形成氧代。
8.权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中n每次出现时独立地为1至3。
9.具有以下结构的权利要求1的化合物：
或其药学上可接受的盐。
10.一种药物组合物，其包含活性生物成分(ABI)和权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述ABI为抗体或其抗原结合片段或治疗性蛋白质。
11.权利要求10所述的药物组合物，其中所述ABI为以约50-250mg/mL的浓度存在的抗体或其抗原结合片段。
12.根据权利要求10或11所述的药物组合物，其还包含浓度为约5mM至约20mM的约pH
5.0至约pH 6.0的组氨酸缓冲剂。
13.根据权利要求10-12中任一项所述的药物组合物，其还包含约0.01％至约0.04％w/v的非离子表面活性剂。
14.根据权利要求13所述的药物组合物，其中所述非离子表面活性剂为聚山梨酯80。
15.根据权利要求14所述的药物组合物，其中聚山梨酯80以约0.02％w/v的重量比存在。
16.根据权利要求10-15中任一项所述的药物组合物，其还包含稳定剂。
17.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述稳定剂为蔗糖。
18.根据权利要求17所述的药物组合物，其中所述蔗糖以约6％至约8％w/v的重量比存在。
19.根据权利要求10-18中任一项所述的药物组合物，其中所述ABI为特异性结合人程序性死亡受体1(PD-1)的抗PD-1抗体或其抗原结合片段。
20.权利要求19所述的药物组合物，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含三个轻链互补决定区(CDR)和三个重链CDR，所述三个轻链CDR包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3，所述三个重链CDR包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8。
21.权利要求20所述的药物组合物，其中所述抗人PD-1抗体或其抗原结合片段包含VL区和VH区，所述VL区包含SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列，所述VH区包含SEQ ID NO：9中所示的氨基酸序列。
22.权利要求21所述的药物组合物，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含轻链和重链，所述轻链包含SEQ ID NO：5中所示的氨基酸序列或由其组成，所述重链包含SEQ ID NO：10中所示的氨基酸序列或由其组成。
23.权利要求22所述的药物组合物，其中所述抗人PD-1抗体或其抗原结合片段为派姆单抗。
24.权利要求11和19-23中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段以100-250mg/mL的浓度存在，并且其中所述组合物包含10mM组氨酸、7％蔗糖和0.02％聚山梨酯80。
25.权利要求10-24中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物为水溶液。
26.权利要求10-25中任一项所述的药物组合物，其还包含第二ABI。
27.一种药物组合物，其包含100至200mg/mL派姆单抗、10mM组氨酸缓冲剂和权利要求
1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
28.权利要求27所述的药物组合物，其还包含蔗糖和聚山梨酯80。
29.一种用于降低药物制剂的粘度的方法，其包括：
(a)提供一种药物制剂，其包含浓度为约50mg/mL至约250mg/mL的ABI，其中所述制剂呈水溶液形式；和
(b)将根据权利要求1-9中任一项的化合物加入到所述溶液中；
其中加入所述化合物后所述药物制剂的粘度为≤25mPa-S。
30.一种用于治疗疾病或病理状况的方法，其包括向需要此治疗的受试者施用治疗有效量的根据权利要求10至28中任一项的药物组合物。
31.权利要求30所述的方法，其中所述药物组合物通过静脉内或皮下施用而施用。
32.根据权利要求1至9中任一项的化合物或其药学上可接受的盐用于降低水溶液形式的药物组合物的粘度的用途，其中所述药物组合物包含以约50-250mg/mL的浓度存在的活性生物成分(ABI)。
用于降低生物制剂粘度的化合物
技术领域
[0002] 相关申请的交叉引用
[0003] 本申请要求于2017年9月5日提交的美国临时申请号62/554,134的权益，其内容通过引用以其整体并入本文。
[0005] 本申请的序列表通过EFS-Web以ASCII格式的序列表电子提交，文件名为“24494WOPCT-SEQLIST-07AUG2018.TXT”，创建日期为2018年8月7日，大小为33.1Kb。通过EFS-Web提交的此序列表是说明书的一部分，并通过引用以其整体并入本文。
背景技术
[0006] 生物技术的进步已允许推出许多治疗性重组蛋白和单克隆抗体产品。商业上可行的生物产品通常需要开发含有高浓度(50mg/mL或更高)的活性生物成分的液体制剂，尤其是当皮下施用是优选的递送途径时。然而，由于若干原因，这些产品的制剂仍是一个挑战，包括提供足够的稳定性、克服潜在的聚集体形成以及克服与高浓度的蛋白质或抗体相关的高粘度。参见Shire等人，Challenges in the Development of High Protein Concentration Formulations.J.Pharm.Sci.93(6)：1390-1402(2004)。由于制造和递送困难，高粘度液体制剂特别成问题。
[0007] 已经提出了若干通过改变制剂组分来控制制剂粘度的方法。有关综述参见Jezek等人，Viscosity of concentrated therapeutic protein compositions，Advanced Drug Delivery Reviews，63:1101-1117(2011)；Tomar等人，Molecular basis of high viscosity in concentrated antibody solutions；Strategies for high concentration drug product development.MABS 8(2)：216-228(2116)。例如，EP 2 116
265提出了在生理pH范围之外调节制剂的pH作为降低粘度的手段或在制剂中包含＞100mM盐。Liu等人(US 2007/0053900)提出了组氨酸和/或精氨酸-HCl与其他制剂组分组合使用，以控制包含高浓度抗体的制剂的粘度。Kaisheva等人(US 2003/0138417)公开了在高浓度抗体制剂中使用选自各种盐或氨基酸，特别是脯氨酸的张力调节剂与琥珀酸盐或组氨酸缓冲液和聚山梨酯的组合。Bowen等人(WO 2011/139718)提出了将特定化合物加入到生物制剂中以降低粘度，包括某些带电荷的氨基酸。Soane等人(US 9,605,051)公开了咖啡因作为与高浓度治疗性抗体制剂一起使用的降低粘度的赋形剂。通过制剂组分控制生物制剂的溶液粘度的其他方法公开于Larson等人，WO 2015/038818，Dauty等人，和US申请公开号2014/
0044708中。
265提出了在生理pH范围之外调节制剂的pH作为降低粘度的手段或在制剂中包含＞100mM盐。Liu等人(US 2007/0053900)提出了组氨酸和/或精氨酸-HCl与其他制剂组分组合使用，以控制包含高浓度抗体的制剂的粘度。Kaisheva等人(US 2003/0138417)公开了在高浓度抗体制剂中使用选自各种盐或氨基酸，特别是脯氨酸的张力调节剂与琥珀酸盐或组氨酸缓冲液和聚山梨酯的组合。Bowen等人(WO 2011/139718)提出了将特定化合物加入到生物制剂中以降低粘度，包括某些带电荷的氨基酸。Soane等人(US 9,605,051)公开了咖啡因作为与高浓度治疗性抗体制剂一起使用的降低粘度的赋形剂。通过制剂组分控制生物制剂的溶液粘度的其他方法公开于Larson等人，WO 2015/038818，Dauty等人，和US申请公开号2014/
0044708中。
[0008] 尽管上文讨论了用于降低生物制剂的粘度的提议的制剂组分，但仍需要能够控制包含高浓度蛋白质或抗体的溶液的粘度的制剂赋形剂和组合物。
[0009] 发明概述
[0011]
[0012] 或其药学上可接受的盐，其中：
[0013]
[0014] R1为H或甲基；
[0015] R2为H或
[0017] R4A和R4B各自为H或一起形成氧代；
[0018] R5为H或甲基；并且
[0019] n每次出现时独立地为1至5；
[0020] 并且其中 表示与化合物其余部分的连接点。
[0021] 式I的化合物可用于降低包含活性生物成分；即抗体或其抗原结合片段或治疗性蛋白质的药物制剂的粘度。因此，在某些实施方式中，本发明提供了包含式I的化合物或其药学上可接受的盐、活性生物成分(ABI)以及药学上可接受的载体的组合物。在特定的实施方式中，本发明的药物组合物任选地包含一种或多种另外的赋形剂。在一些实施方式中，所述ABI以高浓度，例如约50mg/mL至约250mg/mL存在于所述组合物中。在特定的实施方式中，所述ABI为特异性结合人PD-1的抗人PD-1抗体或其抗原结合片段。本发明还包括通过将式I的化合物或其药学上可接受的盐施用于需要其的患者，或通过施用包含式I的化合物或其盐以及药学上可接受的载体的组合物来治疗病理性疾病或病症的方法。
[0023] 发明详述
[0024] 本发明涉及式(I)的新的PEG化氨基酸及其用途。所述化合物可用作赋形剂以降低包含高浓度生物治疗剂的制剂的粘度，如下文更全面地讨论。
[0025] I.定义和缩写
[0026] 如在整个说明书和所附权利要求书中使用的以下缩写适用：
[0027] ABI 活性生物成分
[0028] API 活性药物成分
[0030] CDR 除非另有说明，否则使用Kabat编号系统定义的免疫球蛋白可变区中的互补决定区
[0032] CHO 中国仓鼠卵巢
[0033] CI 置信区间
[0034] CTLA4 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4
[0035] DCM 二氯甲烷
[0036] DIEA N,N-二异丙基乙胺
[0037] DMF N,N-二甲基甲酰胺
[0038] D2O 氘水
[0039] DTPA 二亚乙基三胺五乙酸
[0040] EC50 导致50％功效或结合的浓度
[0042] EtOAc 乙酸乙酯
[0043] EtOH 乙醇
[0046] HATU (1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐)
[0047] HRP 辣根过氧化物酶
[0048] HNSCC 头颈鳞状细胞癌
[0049] IC50 导致50％抑制的浓度
[0050] IgG 免疫球蛋白G
[0051] IHC 免疫组化(immunohistochemistry)或免疫组化的(immunohistochemical)[0052] LC-MS 液相色谱-质谱法(也简称LCMS)
[0053] mAb 单克隆抗体
[0054] Me 甲基
[0055] MeOH 甲醇
[0056] MES 2-(N-吗啉代)乙磺酸
[0057] NCBI 国家生物技术信息中心
[0058] NMR 核磁共振
[0059] NSCLC 非小细胞肺癌
[0060] PCR 聚合酶链反应
[0061] PD-1 程序性死亡1(又称程序性细胞死亡-1和程序性死亡受体1)
[0062] PD-L1 程序性细胞死亡1配体1
[0063] PD-L2 程序性细胞死亡1配体2
[0064] PEG 聚乙二醇
[0065] PS80 聚山梨酯80
[0066] TEA 三乙胺(也简称Et3N)
[0067] TFA 三氟乙酸
[0068] TLC 薄层色谱
[0069] TNBC 三阴性乳腺癌
[0070] VH 免疫球蛋白重链可变区
[0071] VK 免疫球蛋白κ轻链可变区
[0072] VL 免疫球蛋白轻链可变区
[0073] v/v 体积/体积
[0074] WFI 注射用水
[0075] w/v 重量/体积
[0076] 为了可以更容易地理解本发明，下面特别地定义了某些技术和科学术语。除非在本文件别处特别地定义，否则本文所用的所有其他技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。
[0077] 如在整个说明书中以及在所附权利要求书中所使用的，单数形式“一(a)”、“一种(an)”和“所述(the)”包括复数引用，除非上下文另外清楚地指出。
[0078] 除非上下文清楚地指出了所指示的可能性之一，否则对“或”的提及指示一种或两种可能性。在一些情况下，使用“和/或”来突出一种或两种可能性。
[0079] 如本文所用，“活性生物成分”(或“ABI”)是指药物制剂的活性成分，其为抗体或其抗原结合片段或者治疗性蛋白质或肽。ABI为生物药物制剂的组分，其在施用于患者时可用于诱导期望的积极治疗效果，例如治疗或预防疾病或病症，这可能包括停止或延迟疾病或病理状况的进展，降低疾病临床症状的严重程度或持续时间，相对于类似未治疗患者的预期生存期延长患者的生存期，以及引起疾病或病症的完全或部分缓解。“活性药物成分”(或“API”)是指药物制剂中可用于治疗或预防病理性疾病或病症的任何活性成分，其包括但不限于抗体及其抗原结合片段、蛋白质和小分子。
[0080] 如本文所用，“抗体B”为高亲和力的人源化IgG1抗IL23p19单克隆抗体。
[0081] “治疗(Treat)”或“治疗(treating)”意指将本发明的组合物施用于患者以诱导积极的治疗效果。该术语不一定表示完全消除所有疾病或病症症状。“治疗”癌症或免疫病症是指将本发明的组合物施用于患有免疫病症或癌性病症，或被诊断为或易患癌症或病原性感染(例如病毒、细菌、真菌)的患者，以达到至少一种积极的治疗效果，例如，减少癌细胞的数量、减少肿瘤的大小、减少癌细胞浸入周围器官的速率或降低肿瘤转移或肿瘤生长的速率。“治疗”可包括以下一项或多项：诱导/增加抗肿瘤免疫反应，刺激对病原体、毒素和/或自身抗原的免疫反应，刺激对病毒感染的免疫反应，减少一种或多种肿瘤标志物的数量，抑制肿瘤细胞的生长或存活，消除或减小一种或多种癌性病变或肿瘤的大小，降低一种或多种肿瘤标志物的水平，改善、降低癌症的严重程度或持续时间，相对于未治疗的类似患者的预期生存期，延长患者的生存期。
[0082] “免疫病症”或“免疫紊乱”涵盖例如病理性炎症、炎性病症和自身免疫病症或疾病。“免疫病症”还指感染、持续性感染和增生状况，例如癌症、肿瘤和血管生成，包括抵抗免疫系统根除的感染、肿瘤和癌症。“癌性病症”包括例如癌症、癌细胞、肿瘤、血管生成和癌前性状况如发育异常。
[0083] 可以以许多方式测量癌症中的积极治疗效果(参见，W.A.Weber，J.Nucl.Med.50:1S-10S(2009))。例如，关于肿瘤生长抑制，根据NCI标准，T/C≤42％为最小水平的抗肿瘤活性。T/C<10％被认为是高抗肿瘤活性水平，其中T/C(％)＝所治疗的中位肿瘤体积/对照的中位肿瘤体积×100。在一些实施方式中，通过施用本发明的制剂实现的治疗为无进展生存期(PFS)、无疾病生存期(DFS)或总生存期(OS)中的任何一种。PFS，也称为“肿瘤进展时间”，是指治疗期间和治疗后癌症不生长的时间长度，并且包括患者经历完全响应或部分响应的时间量，以及患者经历稳定的疾病的时间量。DFS是指患者在治疗期间和治疗后保持无病的时间长度。OS是指与初始(naive)或未治疗的个体或患者相比预期寿命的延长。尽管本发明的制剂、治疗方法和用途的实施方式可能无法有效地在每位患者中获得积极的治疗效果，但它应在统计学上显著数量的受试者中实现，如通过本领域已知的任何统计检验所确定的
2
那样，例如学生t检验、chi检验、根据Mann和Whitney进行的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验。
2
那样，例如学生t检验、chi检验、根据Mann和Whitney进行的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验。
[0084] 术语“患者”(在本文中可替代地称为“受试者”或“个体”)是指能够用本发明的制剂治疗的哺乳动物(例如，大鼠、小鼠、狗、猫、兔)，最优选人。术语“患者”还可以包括非人类动物，包括牲畜和家畜，其包括但不限于牛、马、绵羊、猪、山羊、兔、猫、狗和其他需要治疗的哺乳动物。在一些实施方式中，患者为成年患者。在其他实施方式中，患者为儿科患者。“需要治疗”的患者是被诊断为、怀疑患有或易患本发明的组合物旨在治疗的疾病或病症的个体，或需要预防病症的患者。
[0085] 术语“抗体”是指表现出期望的生物学活性的任何形式的抗体。因此，它以最广泛的意义使用，并且具体地涵盖但不限于单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、人源化的、完全人抗体和嵌合抗体。“亲本抗体”是为了预期用途修饰抗体之前将免疫系统暴露于抗原而获得的抗体，所述预期用途例如是用作人治疗性抗体的抗体的人源化。
[0086] 通常，基本抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体包括两个相同的多肽链对，每对具有一个“轻”链(约25kDa)和一个“重”链(约50-70kDa)。每条链的氨基端部分包括主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区。每个轻/重链对的可变区形成抗体结合位点。因此，通常，完整的抗体具有两个结合位点。重链的羧基端部分可以限定主要负责效应子功能的恒定区。通常，将人轻链分类为κ和λ轻链。此外，通常将人重链分类为μ、δ、γ、α或ε，并且将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区由约12个或更多个氨基酸的“J”区相连，其中重链还包括约10个或更多个氨基酸的“D”区。一般参见，Fundamental Immunology Ch.7(Paul，W.编，第2版，Raven Press，N.Y.(1989)。
[0087] 通常，重链和轻链的可变域均包含位于相对保守的框架区(FR)内的三个高变区，也称为互补决定区(CDR)。所述CDR通常由框架区对齐，从而能够结合至特定表位。通常，从N-端到C-端，轻链和重链可变域均包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。通常，根据Sequences of Proteins of Immunological Interest，Kabat等人；National Institutes of Health，Bethesda，Md.；第5版；NIH公开号91-3242期(1991)；Kabat(1978)Adv.Prot.Chem.32:1-75；Kabat等人，(1977)J.Biol.Chem.252:6609-6616；Chothia等人，(1987)J Mol.Biol.196:901-917或Chothia等人，(1989)Nature 342:878-883的定义，将氨基酸分配至每个结构域。
[0088] “特异性结合”特定靶蛋白的抗体是这样的抗体：与其他蛋白相比，其表现出优先结合该靶标，但该特异性不需要绝对结合特异性。如果抗体结合会确定靶蛋白在样品中的存在，例如不产生不希望的结果如假阳性，则该抗体被认为对其预定靶标是“特异性的”。可用于本发明的抗体或其结合片段将以比与非靶蛋白的亲和力大至少2倍、优选地大至少10倍、更优选地大至少20倍和最优选地大至少100倍的亲和力结合靶蛋白。如本文所用，在以下情况下述及抗体特异性结合包含给定氨基酸序列(例如成熟的人PD-1分子的氨基酸序列)的多肽：所述抗体结合包含该序列的多肽，但不结合缺乏该序列的蛋白。
[0089] “嵌合抗体”是指这样的抗体：其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种(例如，人)或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，同时所述链的其余部分与源自另一物种(例如，小鼠)或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及这样抗体的片段中的对应序列相同或同源，只要它们表现出期望的生物活性即可。
[0090] 术语“药学上有效量”或“治疗有效量”意指由此将足够的治疗组合物或制剂引入患者以治疗疾病或病症的量。本领域技术人员认识到，该水平可以根据患者的特征如年龄、体重等而变化。术语“有效量”当与本发明化合物(即式I的化合物)一起使用时，意指相对于不含该化合物的相同制剂，足以降低制剂粘度的化合物的量。活性药物成分或活性生物成分的“有效量”意指足以引起细胞、组织、系统、动物或人中寻求的应答的量。在一个实施方式中，有效量是用于减轻所治疗的疾病或病症的症状的“治疗有效量”。在另一实施方式中，有效量是用于预防所防止的疾病或病症的症状的“预防有效量”。当活性化合物(即，活性成分)以盐形式施用时，活性成分的量是指化合物的游离酸或游离碱形式。当“有效量”用于修饰本发明化合物，即式I的化合物时，意指在制剂中存在足够量的化合物以执行所需的功能，例如降低或保持溶液的粘度在可接受的范围内。
[0091] 术语“约”，当修饰物质或组合物的量(例如，mM或M)、制剂组分的百分比(v/v或w/v)，溶液/制剂的pH或表征方法中的步骤的参数的值等时，是指可能例如通过在物质或组合物的制备、表征和/或使用中涉及的典型测量、处理和取样程序；通过这些程序中的无意错误；通过用于制备或使用组合物或实施程序的成分的制造、来源或纯度中的差异；等等而发生的数值量的变化。在某些实施方式中，“约”可以意指适当单位的±0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0或5.0的变化。在某些实施方式中，“约”可以意指±0.1％、0.5％、
1％、2％、3％、4％、5％或10％的变化。
1％、2％、3％、4％、5％或10％的变化。
[0092] 术语“癌症”、“癌性(cancerous)”或“恶性”是指或描述哺乳动物中通常以细胞生长不受控制为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于癌(carcinoma)、淋巴瘤、白血病、母细胞瘤和肉瘤。此类癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌、骨髓瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃肠(道)癌(gastrointestinal(tract)cancer)、肾癌(renal cancer)、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、成淋巴细胞性白血病(lymphoblastic leukemia)、淋巴细胞性白血病(lymphocytic leukemia)、结直肠癌(colorectal cancer)、子宫内膜癌、肾癌(kidney cancer)、前列腺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、软骨肉瘤、神经母细胞瘤、胰腺癌、多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme)、宫颈癌、脑癌、胃癌、膀胱癌、肝细胞癌(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌和头颈癌。
[0093] “Chothia”意指在Al-Lazikani等人，JMB 273:927-948(1997)中描述的抗体编号系统。
[0094] 如本文所用，“Kabat”意指由Elvin A.Kabat((1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.)开创的免疫球蛋白比对和编号系统。
[0095] 术语“PD-1结合片段”、“其抗原结合片段”、“其结合片段”或“其片段”包括仍基本上保留其与抗原(人PD-1)结合和抑制其活性(例如，阻断PD-1与PDL1和PDL2的结合)的生物学活性的抗体的片段或衍生物。因此，术语“抗体片段”或PD-1结合片段是指全长抗体的一部分，通常是其抗原结合或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段。通常，结合片段或衍生物保留其PD-1抑制活性的至少10％。在一些实施方式中，结合片段或衍生物保留其PD-1抑制活性的至少25％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％(或更多)，尽管具有足以发挥期望的生物学效应的亲和力的任何结合片段都将是有用的。在一些实施方式中，抗原结合片段以比无关抗原的亲和力至少大两倍，优选至少大十倍，更优选至少大20倍，最优选至少大100倍的亲和力与其抗原结合。在一个实施方式中，抗体的亲和力大于约109升/mol，例如通过Scatchard分析确定的。Munsen等人(1980)Analyt.Biochem.107:220-239。还意图PD-1结合片段可以包括具有基本上不改变其生物学活性的保守氨基酸取代的变体。
[0096] “人抗体”是指仅包含人免疫球蛋白蛋白序列的抗体。如果在小鼠中、在小鼠细胞中或在源自小鼠细胞的杂交瘤中产生的话，人抗体可能含有鼠碳水化合物链。类似地，“小鼠抗体”或“大鼠抗体”是指分别仅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗体。
[0097] “人源化抗体”是指含有来自非人(例如，鼠)抗体以及人抗体的序列的抗体形式。这种抗体含有源自非人免疫球蛋白的最少序列。通常，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个、并且通常两个可变结构域，其中所有的或基本上所有的高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，并且所有的或基本上所有的FR区是人免疫球蛋白序列的FR区。人源化抗体还任选地包含免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常为人免疫球蛋白的恒定区)的至少一部分。啮齿动物抗体的人源化形式通常包含亲本啮齿动物抗体的相同CDR序列，尽管为了增加亲和力、增加人源化抗体的稳定性或为了其他原因可以包括某些氨基酸取代。
[0098] 可用于本发明组合物中的抗体还包括具有修饰的(或封闭的)Fc区以提供改变的效应子功能的抗体。参见，例如，美国专利号5,624,821；WO2003/086310；WO2005/120571；WO2006/0057702；Presta(2006)Adv.Drug Delivery Rev.58:640-656。这种修饰可用于增强或抑制免疫系统的各种反应，在诊断和治疗中可能具有有益作用。Fc区的改变包括氨基酸变化(取代、缺失和插入)、糖基化或去糖基化以及添加多个Fc。Fc的变化也可以改变治疗性抗体中抗体的半衰期，并且更长的半衰期将导致给药频率降低，同时增加便利性并减少材料的使用。参见Presta(2005)J.Allergy Clin.Immunol.116:731(734-35)。
[0099] “完全人抗体”是指仅包含人免疫球蛋白蛋白序列的抗体。如果在小鼠中、在小鼠细胞中或在衍生自小鼠细胞的杂交瘤中产生，则完全人抗体可能含有鼠类碳水化合物链。类似地，“小鼠抗体”是指仅包含小鼠免疫球蛋白序列的抗体。可以通过噬菌体展示或其他分子生物学方法，在人类中、在具有人免疫球蛋白种系序列的转基因动物中产生完全人抗体。
[0100] “高变区”是指负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。高变区包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(例如如通过Kabat编号系统(Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.)测定的轻链可变域中的残基24-34(CDRL1)、50-56(CDRL2)和89-97(CDRL3)和重链可变域中的残基31-35(CDRH1)、50-65(CDRH2)和95-102(CDRH3)，和/或来自“高变环”的那些残基(即轻链可变域中的残基26-32(L1)、50-52(L2)和91-96(L3))和重链可变域中的26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3))(Chothia和Lesk(1987)J.Mol.Biol.196：901-917)。如本文所用，术语“框架”或“FR”残基是指除本文中定义为CDR残基的高变区残基以外的那些可变域残基。CDR和FR残基根据Kabat的标准序列定义确定。Kabat等人(1987)Sequences of Proteins of Immunological Interest，National Institutes of Health，Bethesda Md。
[0101] “保守修饰的变体”或“保守取代”是指氨基酸的取代是本领域技术人员已知的，并且可以在通常不改变所得分子的生物学活性的情况下，甚至在多肽的必需区域中进行。这样的示例性取代优选根据表1所示的那些进行，如下所示：
[0102] 表1.示例性的保守氨基酸取代
[0103]
[0104]
[0105] 另外，本领域技术人员认识到，通常，多肽的非必需区域中的单个氨基酸取代不会实质上改变生物活性。参见，例如，Watson等人(1987)Molecular Biology of the Gene，The Benjamin/Cummings Pub.Co.，第224页(第4版)。
[0106] 如整个说明书和权利要求书所用，短语“基本上由…组成(consists essentially of)”或变体如“基本上由…组成(consist essentially of)”或“基本上由…组成(consisting essentially of)”指示包括任何列举的要素或要素集合，并任选地包括具有与列举的要素类似或不同的性质的其他要素，所述其他要素不会实质上改变指定的剂量方案、方法或组合物的基本或新的特性。作为非限制性实例，基本上由列举的氨基酸序列组成的结合化合物还可以包括不会实质上影响结合化合物的特性的一个或多个氨基酸，包括一个或多个氨基酸残基的取代。
[0107] “包含(comprising)”或变体如“包含(comprise)”、“包含(comprises)”或包含(comprised of)在整个说明书和权利要求书中以包括性含义使用，即，指定所述特征的存在，但不排除可实质上增强本发明的任何实施方式的操作或效用的其他特征的存在或添加，除非由于表达语言或必要的暗示而在上下文另外要求。
[0108] “分离的抗体”和“分离的抗体片段”是指纯化状态，并且在这样的上下文中意指命名的分子基本上不含有其他生物学分子如核酸、蛋白质、脂质、碳水化合物，或其他物质如细胞碎片和生长培养基。通常，术语“分离的”无意于指完全不存在这种物质或不存在水、缓冲剂或盐，除非它们以实质上干扰如本文所述的结合化合物的实验或治疗用途的量存在。
[0109] 如本文所用，“单克隆抗体”或“mAb”或“Mab”是指基本上均一的抗体的群体，即，除了可能以小量存在的可能的天然存在的突变外，包含所述群体的抗体分子在氨基酸序列上是相同的。相反，常规(多克隆)抗体制剂通常包括许多在它们的可变域(特别是它们的CDR)中具有不同氨基酸序列的不同抗体，它们经常对不同表位是特异性的。修饰词“单克隆”指示所述抗体获自基本上同源的抗体群体的特征，并且不应解释为需要通过任何特定方法生产所述抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过Kohler等人(1975)Nature 256：495首次描述的杂交瘤方法制备，或可以通过重组DNA方法(参见，例如，美国专利号4,816,
567)制备。也可以使用在例如Clackson等人(1991)Nature 352：624-628和Marks等人(1991)J.Mol.Biol.222：581-597中描述的技术从噬菌体抗体文库分离“单克隆抗体”。还参见Presta(2005)J.Allergy Clin.Immunol.116:731。
567)制备。也可以使用在例如Clackson等人(1991)Nature 352：624-628和Marks等人(1991)J.Mol.Biol.222：581-597中描述的技术从噬菌体抗体文库分离“单克隆抗体”。还参见Presta(2005)J.Allergy Clin.Immunol.116:731。
[0110] “肿瘤”当其应用于诊断出癌症或疑似具有癌症的受试者时，是指恶性的或潜在恶性的任何大小的肿瘤或组织团块，并包括原发性肿瘤和继发性肿瘤。实体瘤是组织的异常生长或团块，通常不含有囊肿或液体区域。不同类型的实体瘤用形成它们的细胞的类型来命名。实体瘤的实例是肉瘤、癌和淋巴瘤。白血病(血液的癌症)通常不形成实体瘤(美国国立癌症研究所(National Cancer Institute)，癌症术语词典(Dictionary of Cancer Terms))。
[0111] 如本文所用，“可变区”或“V区”意指IgG链的片段，其在不同抗体之间的序列是可变的。它延伸至轻链中的Kabat残基109和重链中的Kabat残基113。
[0113] 术语“药物制剂”是指如下制剂，其在该形式中允许活性成分有效，并且其不含有对要施用所述制剂的受试者而言有毒的其他组分。
[0114] “药学上可接受的”是指可以合理地施用于受试者以提供有效剂量的所用活性成分的赋形剂(媒介物、添加剂)和组合物，并且其“通常被认为是安全的”，例如，其是生理学上可耐受的并且当施用于人时，通常不产生变态反应或类似的不适反应，例如胃部不适等。在另一实施方式中，该术语是指由联邦或州政府的监管机构批准的或列在美国药典或用于动物(尤其是人类)的另一普遍认可的药典中的分子实体和组合物。
[0115] “稳定的制剂”是其中的API在储存时基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物学活性的制剂。用于测量蛋白质稳定性的各种分析技术在本领域中是可用的，并且在Peptide and Protein Drug Delivery，247-301，Vincent Lee编，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.(1991)和Jones，A.Adv.Drug Delivery Rev.10:29-90(1993)中进行了综述。可以在选定的温度下选定的时间段内测量稳定性。
[0116] “稳定的”药物抗体制剂是在冷藏温度(2-8℃)下观察至少3个月，优选6个月，更优选1年，甚至更优选直至2年没有显著变化的药物抗体制剂。另外，“稳定的”液体制剂包括在包括25℃和40℃的温度下持续包括1个月、3个月、6个月、12个月和/或24个月的时间表现出期望的特征的液体制剂。稳定性的典型可接受标准如下。通常，如通过SEC-HPLC所测量的，不超过约10％，优选不超过约5％的抗体单体发生降解。所述药物抗体制剂是无色的，或者通过目测分析是澄清至微乳白色的。所述制剂的浓度、pH和渗透压度变化不超过+/-10％。效力通常在参考的50-150％之内。通常，观察到不超过约10％，优选不超过约5％的截短(clipping)。通常，形成不超过约10％，优选不超过约5％的聚集。
[0117] 如果在目检颜色和/或澄清度后，或者通过UV光散射、尺寸排阻色谱法(SEC)和动态光散射测量，抗体没有显示出显著的聚集增加、沉淀和/或变性，则所述抗体在药物制剂中“保持其物理稳定性”。蛋白质构象的变化可以通过确定蛋白质三级结构的荧光光谱法和确定蛋白质二级结构的FTIR光谱法进行评估。
[0118] 如果抗体没有显示出显著的化学变化，则所述抗体在药物制剂中“保持其化学稳定性”。化学稳定性可以通过检测和定量蛋白质的化学变化形式来评估。经常改变蛋白质化学结构的降解过程包括水解或截短(通过诸如尺寸排阻色谱法和SDS-PAGE等方法进行评估)、氧化(通过诸如与质谱法结合的肽谱法或MALDI/TOF/MS等方法进行评估)、脱酰胺(通过诸如离子交换色谱法、毛细管等电聚焦、肽谱法、异天冬氨酸测量等方法进行评估)和异构化(通过测量异天冬氨酸含量、肽谱法等进行评估)。
[0119] 如果抗体在给定时间的生物活性在制备药物制剂时展现的生物活性的预定范围内，则抗体在药物制剂中“保持其生物学活性”。抗体的生物活性可以例如通过抗原结合测定来确定。
[0120] 本发明的一个实施方式是如最初定义的或如在前述实施方式、子实施方式、方面、类别或子类别中的任一个中定义的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物或其盐是基本上纯的形式。如本文所用，“基本上纯的”意指适当地至少约60重量％，典型地至少约70重量％，优选地至少约80重量％，更优选地至少约90重量％(例如，约90重量％至约99重量％)，甚至更优选地至少约95重量％(例如，约95重量％至约99重量％，或约98重量％至100重量％)，最优选地至少约99重量％(例如，100重量％)的含有式I的化合物或其盐的产物(例如，从反应混合物分离以得到所述化合物或盐的产物)由所述化合物或盐组成。可以使用标准分析方法如薄层色谱法、凝胶电泳、高效液相色谱法和/或质谱法确定所述化合物和盐的纯度水平。如果采用一种以上的分析方法且所述方法提供确定的纯度水平的实验上显著的差异，则以提供最高纯度水平的方法为准。100％纯度的化合物或盐是如通过标准分析方法所确定的不含有可检测的杂质的化合物或盐。
[0121] 关于具有一个或多个不对称中心且可以作为立体异构体的混合物存在的本发明化合物，基本上纯的化合物可以是基本上纯的立体异构体的混合物或基本上纯的各非对映异构体或对映异构体，除非另有明确地说明。本发明包括式I的化合物的所有立体异构形式。除非指明具体的立体化学，本发明意图包括这些化合物所有这样的异构体形式。存在于式I化合物中的不对称中心可以都彼此独立地具有(R)构型或(S)构型。当与手性碳的键在本发明的结构式中被描述为直线时，应当理解，所述式包括手性碳的(R)和(S)构型，且因此包括对映异构体及其混合物。类似地，当在没有手性碳的手性指定的情况下列举化合物名称时，应当理解，所述名称包括手性碳的(R)和(S)构型，且因此包括各对映异构体、非对映异构体及其混合物。具体立体异构体或其混合物的生产可以在得到这类立体异构体或混合物的实施例中鉴别，但这决不限制所有立体异构体及其混合物被包括在本发明范围内。
[0122] 本发明包括所有可能的对映异构体和非对映异构体以及两种或更多种立体异构体以所有比例的混合物，例如对映异构体和/或非对映异构体的混合物。因而，以下形式的对映异构体是本发明的主题：对映异构纯的形式(作为左旋和右旋对映体)，外消旋体的形式，和两种对映异构体以所有比率的混合物的形式。在顺/反异构现象的情况下，本发明包括顺式形式和反式形式以及这些形式以所有比率的混合物。如果需要的话，通过用常规方法(例如色谱法或结晶)分离混合物，通过使用立体化学上均匀的合成起始原料，或通过立体选择性的合成，可以进行各个立体异构体的制备。任选地，可以在分离立体异构体之前进行衍生化。立体异构体的混合物的分离可以在式I的化合物的合成过程中在中间步骤实现，或它可以在最终的外消旋产物上进行。绝对立体化学可以通过结晶产物或结晶中间体的X-射线晶体学来确定，如果必要的话，所述结晶产物或结晶中间体用含有已知构型的手性中心的试剂衍生化。除非指示这样的外消旋体、对映异构体或非对映异构体的特定异构体、盐、溶剂化物(包括水合物)或溶剂化的盐，否则本发明包括这样的外消旋体、对映异构体、非对映异构体的所有这样的异构体、以及盐、溶剂化物(包括水合物)和溶剂化的盐及其混合物。
[0123] “氧代”意指通过双键与另一个原子连接的氧原子，并且可以表示为“＝O”。
[0124] 当任何变量(例如，n)在任何组分中或在式I中出现超过一次时，它在每次出现时的定义独立于它在每次其它出现时的定义。并且，取代基和/或变量的组合只有在该组合产生稳定化合物时才是允许的。
[0125] 如本文所用，波浪线 指示与所述化合物的其余部分的连接点。
[0126] 在贯穿本公开所用的标准命名法下，最后描述命名的侧链的末端部分，其前面是朝向连接点的相邻官能团。
[0127] 在选择本发明化合物中，本领域普通技术人员将认识到，遵照众所周知的化学结构连接性和稳定性的原则选择各种取代基，即R1、R2等。
[0128] 除非有相反的明确说明，否则本文引用的所有范围均包含端值。例如，在式I中，“n为1至5”意指n可以为1、2、3、4或5。还应理解，本文引用的任何范围在其范围内包括该范围内的所有子范围。因此，例如，“n为1至5”旨在包括作为其方面，n为1至4，n为1至3，n为1或2，n为2至5，n为2至4，以及n为2或3。
[0129] “稳定的”化合物是这样的化合物：其可以制备和分离，并且其结构和性能在一段时间内保持或可以导致保持基本上不变，所述时间足以允许为了本文描述的目的使用所述化合物(例如，治疗性施用于受试者)。本发明化合物限于被式I包括的稳定的化合物。
[0130] 术语“化合物”是指化合物，并且在某些实施方式中，在它们稳定的程度上，是指其任何水合物或溶剂化物。水合物是与水络合的化合物，并且溶剂化物是与有机溶剂络合的化合物。
[0131] 如上所述，本发明化合物可以药学上可接受的盐的形式使用。本领域技术人员将认识到本发明化合物可形成盐的那些情况。术语“药学上可接受的盐”是指具有与母体化合物相似的有效性并且在生物学上或其他方面都不是所不希望的(例如，对其接受者既无毒又不以其它方式有害)的盐(包括内盐如两性离子)。因此，本发明的一个实施方式提供了本发明化合物的药学上可接受的盐。本文所用的术语“盐”表示以下任一种：与无机和/或有机酸形成的酸性盐，以及与无机和/或有机碱形成的碱性盐。本发明化合物的盐可以通过本领域普通技术人员已知的方法形成，例如，通过使本发明化合物与一定量(如当量量)的酸或碱，在诸如盐在其中沉淀的介质中或在水性介质中反应，随后冷冻干燥来形成。所有这样的酸盐和碱盐均意图为本发明范围内的药学上可接受的盐，并且出于本发明的目的，所有酸和碱盐均被认为等同于相应化合物的游离形式。
[0132] 如本文所述，本发明包括药物组合物，其包含式I的化合物、活性生物成分、任选的一种或多种其他活性成分(例如，第二ABI或API)以及药学上可接受的载体。载体的特征将取决于施用途径。“药学上可接受的”意指药物组合物的成分必须彼此相容，不干扰活性成分(一种或多种)的有效性，并且对其接受者无害(例如，无毒)。因此，根据本发明的组合物除抑制剂外还可含有稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂和本领域公知的其他材料。
[0133] 本发明组合物的施用可以适当地为肠胃外，其中使用本领域熟知的配制方法将所述组合物适当地配制用于通过选定途径进行施用，所述方法包括例如Remington–The Science and Practice of Pharmacy，第21版，2006，第39、41、42、44和45章中所述的制备和施用制剂的方法。在一个实施方式中，本发明化合物在医院环境中静脉内施用。在另一实施方式中，施用为皮下施用。
[0134] II.本发明化合物：
[0135] 本发明化合物(即式I的化合物)可用作包含活性生物成分(即抗体或其抗原结合片段)的药物制剂，特别是包含高浓度的活性生物成分的制剂中的赋形剂，以降低制剂的粘度。包含高浓度ABI和本发明化合物的组合物能够通过静脉内或皮下施用来施用于需要其的患者。
[0136] 在本文所述的本发明化合物的各个实施方式的每一个中，除非另有指明，否则每个变量(包括式I及其各个实施方式的那些)独立于其它变量进行选择。
[0137] 对于本文所述的本发明化合物的各个实施方式的每一个，包括式I及其各个实施方式的那些以及实施例的化合物，本发明涵盖所述化合物的所有形式，例如，所述化合物及其任何药学上可接受的盐的任何溶剂化物、水合物、立体异构体和互变异构体，除非另外指出。另外，在本文所述的实施例中，本发明化合物可以盐的形式描述。在这种情况下，应当理解，本发明化合物包括这样的盐的游离酸或游离碱形式，以及所述游离酸或游离碱形式的任何药学上可接受的盐。
[0138] 在一个方面，本发明包括式I的化合物：
[0139]
[0140] 或其药学上可接受的盐，其中X、n、R1、R2、R3A和R3B如本文对式(I)的化合物所定义(即如发明概述中所定义)；其中所述化合物可适合用作液体药物制剂中的赋形剂以降低溶液的总体粘度。
[0141] 本发明的第一实施方式(实施方式E1)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X、n、R1、R2、R3A和R3B如发明概述中的式(I)中所定义。
[0142] 第二实施方式(实施方式E2)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X为：
[0143] 并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0144] 第三实施方式(实施方式E3)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X为：
[0145] 并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0146] 第四实施方式(实施方式E4)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X为：
[0147] 并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0148] 第五实施方式(实施方式E5)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X为：
[0149] 并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0150] 第六实施方式(实施方式E6)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X为：
[0151] 并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0152] 第七实施方式(实施方式E7)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X在实施方式E2-E6中的任一个中定义，R1为H，并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0153] 第八实施方式(实施方式E8)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X在实施方式E2-E6中的任一个中定义，R1为甲基，并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0154] 第九实施方式(实施方式E9)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X在实施方式E2-E6中的任一个中定义，R1在实施方式E7-E8中的任一个中定义，R2为H，并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0155] 第十实施方式(实施方式E10)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X在实施方式E2-E6中的任一个中定义，R1在实施方式E7-E8中的任一个中定义，R2为并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0156] 第十一实施方式(实施方式E11)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X在实施方式E2-E6中的任一个中定义，R1在实施方式E7-E8中的任一个中定义，R2为并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0157] 在实施方式E11的一个子实施方式中，R2为
[0158] 在实施方式E11的另一子实施方式中，R2为
[0159] 在实施方式E11的另一子实施方式中，R2为
[0160] 第十二实施方式(实施方式E12)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X在实施方式E2-E6中的任一个中定义，R1在实施方式E7-E8中的任一个中定义，R2为并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0161] 在实施方式E12的一个子实施方式中，R2为
[0162] 在实施方式E12的另一子实施方式中，R2为
[0163] 在实施方式E10-E12的一个子实施方式中，R2中的n为1。在实施方式E10-E12的其他子实施方式中，R2中的n为2。在实施方式E10-E12的其他子实施方式中，R2中的n为3。在实施方式E10-E12的其他子实施方式中，R2中的n为4。在实施方式E10-E12的又一子实施方式中，R2中的n为5。在实施方式E10-E12的其他子实施方式中，R2中的n为1至4、1至3或1至2。
[0164] 第十三实施方式(实施方式E13)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X在实施方式E2-E6中的任一个中定义，R1在实施方式E7-E8中的任一个中定义，R2在实施方式E9-E12中的任一个中定义，R3A和R3B各自为H，并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0165] 第十四实施方式(实施方式E14)为式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中X在实施方式E2-E6中的任一个中定义，R1在实施方式E7-E8中的任一个中定义，R2在实施方式E9-E13中的任一个中定义，R3A和R3B一起形成氧代，并且所有其他变量如实施方式E1中所定义。
[0166] 本发明的第十五实施方式(实施方式E15)为具有以下结构或由以下结构组成的式I的化合物：
[0167]
[0168]
[0169] 或其药学上可接受的盐。
[0170] 本发明的其他实施方式包括以下：
[0171] (a)一种药物组合物，其包含有效量的活性生物成分、如上所定义的式I的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
[0172] (b)(a)的药物组合物，其gauge包含有效量的第二活性生物成分或活性药物成分。
[0173] (c)(a)的药物组合物，其中所述ABI为抗体或其抗原结合片段。
[0174] (d)(c)的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合选自以下的抗原：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、LAG3、BTLA、TIM3、HVEM、GITR、CD27、TIGIT、ILT2、ILT3、ILT4、ILT5、SIRPα、NKG2A、NKG2C、NKG2E、TSLP、IL10、VISTA、VEGF、EGFR、Her2/neu、VEGF受体、其他生长因子受体、CD20、CD28、CD40、CD-40L、CD70、OX-40、4-1BB和ICOS。
[0175] (e)(d)的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合选自以下的抗原：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、LAG3、GITR、CD27和TIGIT。
[0176] (f)(c)的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合PD-1、PD-L1或PD-L2。
[0177] (g)(f)的药物组合物，其中所述ABI为派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、匹地珠单抗(pidilizumab)、阿特朱单抗(atezolizumab)、阿维单抗(avelumab)或杜鲁伐单抗(durvalumab)。
[0178] (h)(c)的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合PD-1。
[0179] (i)(a)的药物组合物，其中所述ABI为派姆单抗。
[0180] (j)(f)、(g)或(h)的药物组合物，其还包含第二ABI，其中所述第二ABI为特异性结合选自以下的抗原的抗体或其抗原结合片段：CTLA4、LAG3、GITR、CD27和TIGIT。
[0181] (k)一种治疗疾病或其他病理状况的方法，其包括向需要此治疗的受试者施用包含有效量的如上所定义的式I的化合物或其药学上可接受的盐以及治疗有效量的ABI的组合物。
[0182] (l)一种治疗癌性病症的方法，其包括向需要此治疗的受试者施用有效量的如上所定义的式I的化合物或其药学上可接受的盐以及治疗有效量的ABI。
[0183] (m)一种治疗疾病或其他病理状况的方法，其包括向需要此治疗的受试者施用治疗有效量的(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)或(j)的药物组合物。
[0184] (n)一种治疗癌性病症的方法，其包括向需要此治疗的受试者施用治疗有效量的(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)或(j)的药物组合物。
[0185] (q)如(1)或(n)中所述的治疗癌性病症的方法，其中所述癌症选自：黑色素瘤、肺癌、头颈癌、膀胱癌、乳腺癌、胃肠道癌、多发性骨髓瘤、肝细胞癌、淋巴瘤、肾癌、间皮瘤、卵巢癌、食道癌、肛门癌、胆道癌、结直肠癌、宫颈癌、甲状腺癌、涎腺癌、前列腺癌(例如激素难治性前列腺腺癌)、胰腺癌、结肠癌、食道癌、肝癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤和其他肿瘤性恶性肿瘤。
[0186] 本发明还包括用于降低生物制剂(即包含ABI的制剂)的粘度的式I的化合物或其药学上可接受的盐。
[0187] 本发明还包括一种药物制剂，其包含式I的化合物或其药学上可接受的盐以及选自以下的ABI：(a)抗PD-1抗体或其抗原结合片段、(b)抗PDL1抗体或其抗原结合片段、(c)抗PDL2抗体或其抗原结合片段、(d)抗Her2/Neu抗体或其抗原结合片段、(e)抗OX40抗体或其抗原结合片段、(e)抗4-1BB抗体或其抗原结合片段、(f)抗CTLA4抗体或其抗原结合片段、(g)抗LAG3抗体或其抗原结合片段、(h)抗GITR抗体或其抗原结合片段、(i)抗CD27抗体或其抗原结合片段和(j)抗-TIGIT抗体或其抗原结合片段，(i)用于治疗癌症、(ii)用作治疗癌症的药物或(iii)用于制备(或制造)治疗癌症的药物。在这些用途中，本发明化合物可以任选地与一种或多种另外的治疗剂组合使用。
[0188] 在本发明化合物和盐的实施方式中，应理解的是，每个实施方式可以与一个或多个其他实施方式组合，其程度是这种组合提供了稳定的化合物或盐，并与所述实施方式的描述相一致。还应理解，以上(a)至(q)提供的组合物和方法的实施方式应理解为包括化合物和/或盐的所有实施方式，包括由实施方式的组合产生的此类实施方式。
[0189] 本发明的另外的实施方式包括上述药物组合物、组合和方法以及前述段落中所述的用途，其中在其中使用的本发明化合物是上述实施方式、子实施方式、类别或子类别之一的化合物。所述化合物在这些实施方式中可以任选地以药学上可接受的盐的形式使用。
[0190] 本发明的另外的实施方式包括前述段落中所述的每种药物组合物、组合、方法和用途，其中在本文中采用的本发明化合物或其盐是基本上纯的。
[0191] III.本发明的组合物
[0192] 本发明提供了稳定的生物制剂(即药物组合物)，其包含本发明化合物(即式I的化合物)或其药学上可接受的盐，以及活性生物成分(ABI)，其中所述ABI为抗体或其抗原结合片段，或治疗性蛋白质或肽。在另外的实施方式中，本发明提供了稳定的制剂，其包含本发明化合物和治疗有效量的活性药物成分。在特定的实施方式中，所述API为小分子。
[0193] 本发明还提供了药物组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐，以及与选自以下的抗原特异性结合的抗体或其抗原结合片段：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、LAG3、BTLA、TIM3、HVEM、GITR、CD27、TIGIT、ILT2、ILT3、ILT4、ILT5、SIRPα、NKG2A、NKG2C、NKG2E、TSLP、IL10、VISTA、VEGF、EGFR、Her2/neu、VEGF受体、其他生长因子受体、CD20、CD28、CD40、CD-40L、CD70、OX-40、4-1BB和ICOS。
[0194] 在本发明的实施方式中，ABI的量为治疗上可接受的量。
[0195] 在特定的实施方式中，本发明涉及一种药物组合物，其包含本发明的化合物(即式(I)的化合物)或其药学上可接受的盐，以及与人PD-1特异性结合的作为活性生物成分的抗人PD-1抗体或其抗原结合片段(例如人或人源化抗PD-1抗体)(PD-1ABI)，以及使用本发明制剂的方法。任何抗PD-1抗体或其抗原结合片段均可用于本发明的组合物和方法。在特定的实施方式中，所述PD-1ABI为抗PD-1抗体，其选自派姆单抗(包括任何派姆单抗生物类似药)和纳武单抗(包括任何纳武单抗生物类似药)。在特定的实施方式中，所述抗PD-1抗体为派姆单抗。在替代实施方式中，所述抗PD-1抗体为纳武单抗。表2提供了示例性抗人PD-1抗体派姆单抗和纳武单抗的氨基酸序列。表3中显示了可用于本发明的制剂和方法的替代PD-1抗体和抗原结合片段。
[0196] 在一些实施方式中，用于本发明的药物组合物的抗人PD-1抗体或其抗原结合片段包含CDRL1、CDRL2和CDRL3的三个轻链CDR和/或CDRH1、CDRH2和CDRH3的三个重链CDR。
[0197] 在本发明的一个实施方式中，CDRL1为SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：1的变体，CDRL2为SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：2的变体，并且CDRL3为SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：3的变体。
[0198] 在一个实施方式中，CDRH1为SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：6的变体，CDRH2为SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：7的变体，并且CDRH3为SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：8的变体。
[0199] 在一个实施方式中，三个轻链CDR为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3，并且三个重链CDR为SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8。
[0200] 在本发明的一个替代实施方式中，CDRL1为SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：11的变体，CDRL2为SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：12的变体，并且CDRL3为SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：13的变体。
[0201] 在一个实施方式中，CDRH1为SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：16的变体，CDRH2为SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：17的变体，并且CDRH3为SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：18的变体。
[0202] 在一个实施方式中，三个轻链CDR为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3，并且三个重链CDR为SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8。
[0203] 在一个替代实施方式中，三个轻链CDR为SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13，并且三个重链CDR为SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18。
[0204] 在本发明的另一实施方式中，CDRL1为SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：21的变体，CDRL2为SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：22的变体，并且CDRL3为SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：23的变体。
[0205] 在又一实施方式中，CDRH1为SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：24的变体，CDRH2为SEQ ID NO：25或SEQ ID NO：25的变体，并且CDRH3为SEQ ID NO：26或SEQ ID NO：26的变体。
[0206] 在另一实施方式中，三个轻链CDR为SEQ ID NO：21，SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：23，并且三个重链CDR为SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26。
[0207] 在某些实施方式中，本发明提供了药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及抗人PD-1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗PD-1抗体或抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区。在一些实施方式中，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：4的变体，并且所述重链可变区包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：9的变体。在另外的实施方式中，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：14的变体，并且所述重链可变区包含SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：19的变体。在另外的实施方式中，所述重链可变区包含SEQ ID NO：27或SEQ ID NO：27的变体，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：28的变体、SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：29的变体、或者SEQ ID NO：30或SEQ ID NO：30的变体。在此类实施方式中，变体轻链或重链可变区序列与参考序列相同，除了具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代。在一些实施方式中，所述取代在构架区中(即，在CDR以外)。在一些实施方式中，一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代是保守取代。
[0208] 在本发明的药物组合物的一个实施方式中，所述抗人PD-1抗体或抗原结合片段包含包含或组成为SEQ ID NO：4的轻链可变区以及包含或组成为SEQ ID NO：9的重链可变区。在另一实施方式中，所述抗人PD-1抗体或抗原结合片段包含包含或组成为SEQ ID NO：14的轻链可变区以及包含或组成为SEQ ID NO：19的重链可变区。在本发明制剂的一个实施方式中，所述抗人PD-1抗体或抗原结合片段包含包含或组成为SEQ ID NO：28的轻链可变区以及包含或组成为SEQ ID NO：27的重链可变区。在另一实施方式中，所述抗人PD-1抗体或抗原结合片段包含包含或组成为SEQ ID NO：29的轻链可变区以及包含或组成为SEQ ID NO：27的重链可变区。在另一实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含包含或组成为SEQ ID NO：30的轻链可变区以及包含或组成为SEQ ID NO：27的重链可变区。
[0209] 在另一实施方式中，本发明的药物组合物包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及抗人PD-1抗体或抗原结合蛋白，其具有与上述VL结构域或VH结构域之一具有至少95％、90％、85％、80％、75％或50％的序列同源性的VL结构域和/或VH结构域，并表现出与PD-1的特异性结合。在另一实施方式中，本发明的药物组合物的抗人PD-1抗体或抗原结合蛋白包含具有至多1、2、3、4或5个或更多个氨基酸取代的VL和VH结构域，并表现出与PD-1的特异性结合。
[0210] 在以上任何实施方式中，所述PD-1ABI可以是特异性结合人PD-1的全长抗PD-1抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，所述PD-1ABI为选自任何类别的免疫球蛋白(包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE)的全长抗PD-1抗体。优选地，所述抗体为IgG抗体。可以使用任何同种型的IgG，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。可以将不同的恒定域附加至本文提供的VL和VH区。例如，如果本发明的抗体(或片段)的特定预期用途是要求改变效应子功能，则可以使用除IgG1以外的重链恒定域。尽管IgG1抗体提供长半衰期和效应子功能，例如补体激活和抗体依赖性细胞的细胞毒性，但对于抗体的所有用途而言，这种活性可能并不是理想的。在此类情况下，例如可以使用IgG4恒定域。
[0211] 在本发明的实施方式中，所述PD-1ABI为抗PD-1抗体，其包含轻链和重链，所述轻链包含或由SEQ ID NO：5所示的氨基酸残基序列组成，所述重链包含或由SEQ ID NO：10所示的氨基酸残基序列组成。在替代实施方式中，所述PD-1ABI为抗PD-1抗体，其包含轻链和重链，所述轻链包含或由SEQ ID NO：15所示的氨基酸残基序列组成，所述重链包含或由SEQ ID NO：20所示的氨基酸残基序列组成。在进一步的实施方式中，所述PD-1API为抗PD-1抗体，其包含轻链和重链，所述轻链包含或由SEQ ID NO：32所示的氨基酸残基序列组成，所述重链包含或由SEQ ID NO：31所示的氨基酸残基序列组成。在另外的实施方式中，所述PD-1API为抗PD-1抗体，其包含轻链和重链，所述轻链包含或由SEQ ID NO：33所示的氨基酸残基序列组成，所述重链包含或由SEQ ID NO：31所示的氨基酸残基序列组成。在另外的实施方式中，所述PD-1API为抗PD-1抗体，其包含轻链和重链，所述轻链包含或由SEQ ID NO：34所示的氨基酸残基序列组成，所述重链包含或由SEQ ID NO：31所示的氨基酸残基序列组成。在本发明的一些共制剂中，所述PD-1API为派姆单抗或派姆单抗生物类似药。在本发明的一些共制剂中，PD-1API为纳武单抗或纳武单抗生物类似药。
[0212] 通常，本发明的药物组合物的抗PD-1抗体和抗原结合片段的氨基酸序列变体将具有与参考抗体或抗原结合片段(例如重链、轻链、VH、VL或人源化序列)的氨基酸序列具有至少75％的氨基酸序列同一性，更优选至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，最优选至少95％、98％或99％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。关于序列的同一性或同源性在本文中定义为候选序列中与抗PD-1残基相同的氨基酸残基的百分比，其是在比对序列并引入空位(gap)之后(如果必要的话)以达到最大百分比的序列同一性，并且不考虑将任何保守取代作为序列同一性的一部分。N端、C端或内部延伸、缺失或插入抗体序列中的任一种均不得解释为影响序列同一性或同源性。
[0213] 序列同一性是指当两个序列最佳比对时，两个多肽的氨基酸在等效位置相同的程度。可以使用BLAST算法确定序列同一性，其中选择算法的参数以在各个参考序列的整个长度上给出各个序列之间的最大匹配。以下参考文献涉及经常用于序列分析的BLAST算法：BLAST ALGORITHMS：Altschul，S.F.等人，(1990)J.Mol.Biol.215:403-410；Gish，W.等人，(1993)Nature Genet.3:266-272；Madden，T.L.等人，(1996)Meth.Enzymol.266:131-141；
Altschul，S.F.等人，(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-3402；Zhang，J.等人，(1997)Genome Res.7:649-656；Wootton，J.C.等人，(1993)Comput.Chem.17:149-163；Hancock，J.M.等人，(1994)Comput.Appl.Biosci.10:67-70；ALIGNMENT SCORING SYSTEMS：Dayhoff，M.O.等人，"A model of evolutionary change in proteins."Atlas of Protein Sequence and Structure，(1978)第5卷，增刊3.M.O.Dayhoff(编)，第345-352页，Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，DC；Schwartz，R.M.等人，"Matrices for detecting distant relationships."Atlas of Protein Sequence and Structure，(1978)第5卷，增刊3."M.O.Dayhoff(编)，第353-358页，Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，DC；Altschul，S.F.，(1991)J.Mol.Biol.219:555-565；States，D.J.等人，(1991)Methods 3:66-70；Henikoff，S.等人，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915-
10919；Altschul，S.F.等人，(1993)J.Mol.Evol.36:290-300；ALIGNMENT STATISTICS：
Karlin，S.等人，(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-2268；Karlin，S.等人，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5877；Dembo，A.等人，(1994)Ann.Prob.22:2022-2039；
和Altschul，S.F."Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments."Theoretical and Computational Methods in Genome Research(S.Suhai编)，(1997)第1-14页，Plenum，New York。
Altschul，S.F.等人，(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-3402；Zhang，J.等人，(1997)Genome Res.7:649-656；Wootton，J.C.等人，(1993)Comput.Chem.17:149-163；Hancock，J.M.等人，(1994)Comput.Appl.Biosci.10:67-70；ALIGNMENT SCORING SYSTEMS：Dayhoff，M.O.等人，"A model of evolutionary change in proteins."Atlas of Protein Sequence and Structure，(1978)第5卷，增刊3.M.O.Dayhoff(编)，第345-352页，Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，DC；Schwartz，R.M.等人，"Matrices for detecting distant relationships."Atlas of Protein Sequence and Structure，(1978)第5卷，增刊3."M.O.Dayhoff(编)，第353-358页，Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，DC；Altschul，S.F.，(1991)J.Mol.Biol.219:555-565；States，D.J.等人，(1991)Methods 3:66-70；Henikoff，S.等人，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915-
10919；Altschul，S.F.等人，(1993)J.Mol.Evol.36:290-300；ALIGNMENT STATISTICS：
Karlin，S.等人，(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-2268；Karlin，S.等人，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5877；Dembo，A.等人，(1994)Ann.Prob.22:2022-2039；
和Altschul，S.F."Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments."Theoretical and Computational Methods in Genome Research(S.Suhai编)，(1997)第1-14页，Plenum，New York。
[0214] 同样，任何类别的轻链都可以用于本文的组合物和方法中。具体地，κ、λ或其变体可用于本发明的组合物和方法中。
[0215] 表2.示例性的PD-1抗体序列
[0216]
[0217]
[0218]
[0219]
[0220] 表3.在本发明的组合物中可用的另外的PD-1抗体和抗原结合片段
[0221]
[0222]
[0223] 在本发明的药物组合物的一些实施方式中，ABI(例如抗PD-1抗体或其抗原结合片段)以约10mg/mL至约250mg/mL的浓度存在。在另外的实施方式中，ABI以约25mg/mL至约250mg/mL、约50mg/mL至约250mg/mL、约75mg/mL至约250mg/mL、约100mg/mL至约250mg/mL、约10mg/mL至约200mg/mL、约25mg/mL至约200mg/mL、约50mg/mL至约200mg/mL、约75mg/mL至约200mg/mL、约100mg/mL至约200mg/mL、约10mg/mL至约150mg/mL、约25mg/mL至约150mg/mL、约50mg/mL至约150mg/mL、约75mg/mL至约150mg/mL、约100mg/mL至约150mg/mL、约
100mg/mL至约250mg/mL或约100mg/mL至约200mg/mL的浓度存在。
100mg/mL至约250mg/mL或约100mg/mL至约200mg/mL的浓度存在。
[0224] 在替代实施方式中，ABI以约10mg/mL、约20mg/mL、约25mg/mL、约30mg/mL、约40mg/mL、约50mg/mL、约60mg/mL、约70mg/mL、约75mg/mL、约80mg/mL、约90mg/mL、约100mg/mL、约110mg/mL、约120mg/mL、约130mg/mL、约140mg/mL、约150mg/mL、约160mg/mL、约170mg/mL、约
180mg/mL、约190mg/mL、约200mg/mL、约210mg/mL、约220mg/mL、约230mg/mL、约240mg/mL或约250mg/mL的浓度存在。
180mg/mL、约190mg/mL、约200mg/mL、约210mg/mL、约220mg/mL、约230mg/mL、约240mg/mL或约250mg/mL的浓度存在。
[0225] 如本文所述，式I的化合物可用于降低溶液的粘度，从而允许在溶液制剂中使用高浓度的ABI(即，无需冻干/重构即可获得高浓度的ABI)。因此，在某些实施方式中，本发明的药物组合物为水溶液。在本发明该方面的实施方式中，溶液的粘度为<30mPa.s(毫帕斯卡秒或cP(厘泊))、mPa-S、≤29mPa-S、≤28mPa-S、≤27mPa-S、≤26mPa-S、≤25mPa-S、≤24mPa-S、≤23mPa-S、≤22mPa-S、≤21mPa-S、≤20mPa-S、≤19mPa-S或≤18mPa-S。在另外的实施方式中，溶液的粘度为约15mPa-S至约30mPa-S、约17mPa-S至约28mPa-S、约17mPa-S至约27mPa-S、约17mPa-S至约26mPa-S、约17mPa-S至约25mPa-S、约18mPa-S至约28mPa-S、约
18mPa-S至约27mPa-S、约18mPa-S至约26mPa-S、约18mPa-S至约25mPa-S、约19mPa-S至约
28mPa-S、约19mPa-S至约27mPa-S、约19mPa-S至约26mPa-S、约19mPa-S至约25mPa-S、约
20mPa-S至约28mPa-S、约20mPa-S至约27mPa-S、约20mPa-S至约26mPa-S或约20mPa-S至约
25mPa-S。可以使用本领域已知的任何粘度计来测量粘度，例如mVROC(芯片上的粘度计/流变仪(Viscometer/Rheometer-On-A-Chip)，RheoSense，Inc.，San Ramon，CA)。
18mPa-S至约27mPa-S、约18mPa-S至约26mPa-S、约18mPa-S至约25mPa-S、约19mPa-S至约
28mPa-S、约19mPa-S至约27mPa-S、约19mPa-S至约26mPa-S、约19mPa-S至约25mPa-S、约
20mPa-S至约28mPa-S、约20mPa-S至约27mPa-S、约20mPa-S至约26mPa-S或约20mPa-S至约
25mPa-S。可以使用本领域已知的任何粘度计来测量粘度，例如mVROC(芯片上的粘度计/流变仪(Viscometer/Rheometer-On-A-Chip)，RheoSense，Inc.，San Ramon，CA)。
[0226] 如开发的特定制剂的需要所指示，可将一种或多种另外的赋形剂加入到本发明的药物组合物中。此类另外的赋形剂可安全用于药物组合物中，并且不会不利地影响制剂的稳定性。可以加入到本发明制剂中的另外的赋形剂的一个实例包括助剂，可以加入助剂以增加患者免疫系统对ABI的免疫应答。可以加入到所述制剂中的另外的赋形剂包括但不限于：缓冲剂、稳定剂、增溶剂、张力调节剂、螯合剂、防腐剂、右旋糖酐、硫酸右旋糖酐、右旋糖酐T40、二乙醇胺、胍、氯化钙、柠檬酸钠、白蛋白、明胶、聚乙二醇(PEG)、脂质和肝素。本领域技术人员能够容易地确定所需药物制剂中应包含哪些另外的赋形剂，这取决于其在制剂中的功能以及预计的施用方式、剂量和其他因素，例如制剂的预期储存时间和温度。本领域技术人员会认识到，另外的赋形剂的量可以变化，并且可以容易地确定既对人类或动物施用安全又对所需功能有效的适当的量。通常，另外的赋形剂可以约10至约500mM的浓度存在。
[0227] IV.使用方法
[0228] 在一个方面，本发明涉及一种用于降低药物制剂粘度的方法，其包括将式I的化合物加入到制剂中，其中所述制剂为水溶液。在本发明的实施方式中，所述药物制剂包含ABI。在特定实施方式中，所述ABI以50mg/mL或更高、75mg/mL或更高、100mg/mL或更高、125mg/mL或更高、150mg/mL或更高、175mg/mL或更高或200mg/mL或更高的浓度存在。
[0229] 因此，本发明提供了一种用于降低药物制剂粘度的方法，其包括：
[0230] (a)提供包含ABI和式I的化合物的药物制剂，其中所述ABI以约50mg/mL至约250mg/mL的浓度存在，其中所述制剂呈水溶液的形式；和
[0231] (b)将式I的化合物加入到所述溶液中；
[0232] 其中加入所述化合物后的药物制剂的粘度为≤30mPa-S、≤29mPa-S、≤28mPa-S、≤27mPa-S、≤26mPa-S、≤25mPa-S、≤24mPa-S、≤23mPa-S、≤22mPa-S、≤21mPa-S、≤20mPa-S、≤19mPa-S或≤18mPa-S。
[0233] 本发明的药物组合物在溶液中的粘度低于包含相同赋形剂和在相同pH下但不存在式I的化合物的药物组合物。在本发明的某些实施方式中，本发明的药物组合物在溶液中的粘度低于包含精氨酸或其药学上可接受的盐、组氨酸或其药学上可接受的盐、苯丙氨酸或其药学上可接受的盐、酪氨酸或其药学上可接受的盐、或赖氨酸或其药学上可接受的盐的相同组合物(即不含式I的化合物)。
[0234] 本发明还涉及一种治疗受试者中的癌症的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包含(1)ABI(2)式(I)的化合物或药学上可接受的盐以及(3)药学上可接受的载体，其中所述ABI为治疗癌症的抗体或其抗原结合片段或治疗性蛋白质或肽。在该方法的特定实施方式中，通过静脉内施用将组合物施用于受试者。在其他实施方式中，通过皮下施用将组合物施用于受试者。
[0235] 在本发明的任何方法中，癌症可以选自：黑色素瘤、肺癌、头颈癌、膀胱癌、乳腺癌、胃肠道癌、多发性骨髓瘤、肝细胞癌、淋巴瘤、肾癌、间皮瘤、卵巢癌、食道癌、肛门癌、胆道癌、结肠直肠癌、宫颈癌、甲状腺癌、唾液癌、前列腺癌(例如激素难治性前列腺腺癌)、胰腺癌、结肠癌、食道癌、肝癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤和其他肿瘤性恶性肿瘤(neoplastic malignancies)。
[0236] 在一些实施方式中，肺癌为非小细胞肺癌。
[0237] 在替代实施方式中，肺癌为小细胞肺癌。
[0238] 在一些实施方式中，淋巴瘤为霍奇金淋巴瘤。
[0239] 在其他实施方式中，淋巴瘤为非霍奇金淋巴瘤。在特定的实施方式中，淋巴瘤为纵隔大B细胞淋巴瘤。
[0240] 在一些实施方式中，乳腺癌为三阴性乳腺癌。
[0241] 在进一步的实施方式中，乳腺癌为ER+/HER2-乳腺癌。
[0242] 在一些实施方式中，膀胱癌为尿路上皮癌。
[0243] 在一些实施方式中，头颈癌为鼻咽癌。在一些实施方式中，癌症为甲状腺癌。在其他实施方式中，癌症为唾液腺癌。在其他实施方式中，癌症为头部和颈部的鳞状细胞癌。
[0244] 在一些实施方式中，癌症为具有高水平的微卫星不稳定性(MSI-H)的实体瘤。
[0245] 在一些实施方式中，癌症选自：黑色素瘤、非小细胞肺癌、复发性或难治性经典霍奇金淋巴瘤、纵隔大B细胞淋巴瘤、头颈鳞状细胞癌、尿路上皮癌、食道癌、胃癌、子宫颈癌和肝细胞癌。
[0246] 在以上治疗方法的其他实施方式中，癌症为血红素恶性肿瘤。在某些实施方式中，血红素恶性肿瘤为急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病(CML)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV阳性DLBCL、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(HL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、多发性骨髓瘤(MM)、髓样细胞白血病1蛋白(Mcl-1)、骨髓增生异常综合症(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)。
[0247] 在本文所述的方法和治疗中涵盖表现出改善的无疾病存活和总存活的恶性肿瘤(其与肿瘤浸润性淋巴细胞在活组织检查或外科手术材料中的存在有关)，例如黑色素瘤、结肠直肠癌、肝癌、肾癌、胃癌/食管癌、乳腺癌、胰腺癌和卵巢癌。已知此类癌症亚型易受T淋巴细胞的免疫控制。另外，包括使用本文所述的抗体可以抑制其生长的难治性或复发性恶性肿瘤。
[0248] 在一些实施方式中，将本发明的组合物施用于患有癌症的受试者，所述癌症的特征在于在受试组织样品中PD-L1和/或PD-L2的表达升高，所述组织样品包括：卵巢、肾、结肠直肠、胰腺、乳腺、肝脏、胃、食道癌和黑色素瘤。可以从用本发明的组合物治疗中受益的其他癌症包括与病毒持续感染相关的那些癌症，所述病毒例如人免疫缺陷病毒、甲型、乙型和丙型肝炎病毒、EB病毒、已知在病因上与例如卡波西氏肉瘤、肝癌、鼻咽癌、淋巴瘤、宫颈癌、外阴癌、肛门癌、阴茎癌和口癌有关的人乳头瘤病毒。
[0249] 另外的方面包括使用本发明的药物组合物治疗患有、怀疑患有感染或传染病或处于感染或传染病风险中的患者的方法。在本发明该方面的特定实施方式中，所述药物组合物的ABI为拮抗剂抗PD-1抗体或抗原结合片段。因此，本发明提供了一种在哺乳动物受试者中治疗慢性感染的方法，其包括向所述受试者施用有效量的本发明的组合物。在该方法的一些特定实施方式中，通过静脉内施用将组合物施用于受试者。在其他实施方式中，通过皮下施用将组合物施用于受试者。
[0250] 在这方面，本发明的组合物可单独使用或与疫苗组合使用，以刺激对病原体、毒素和自身抗原的免疫应答。本发明的组合物可用于刺激对人类感染的病毒的免疫应答，所述病毒包括但不限于：人免疫缺陷病毒、甲型、乙型和丙型肝炎病毒、EB病毒、人巨细胞病毒、人乳头瘤病毒和疱疹病毒。包含拮抗剂抗PD-1抗体或抗体片段的本发明的组合物可用于刺激对细菌或真菌寄生虫以及其他病原体感染的免疫应答。乙型和丙型肝炎以及HIV的病毒感染属于被认为是慢性病毒感染的那些感染。
[0251] 本发明的组合物可以与一种或多种“另外的治疗剂”组合施用于患者。另外的治疗剂可以是生物治疗剂(包括但不限于针对下列物质的抗体：VEGF、EGFR、Her2/neu、VEGF受体、其他生长因子受体、CD20、CD40、CD-40L、OX-40、4-1BB和ICOS)、生长抑制剂、免疫原性剂(例如，减毒癌细胞、肿瘤抗原、抗原呈递细胞(例如以肿瘤衍生抗原或核酸脉冲刺激的树突细胞)、免疫刺激性细胞因子(例如，IL-2、IFNα2、GM-CSF)，以及转染有编码免疫刺激细胞因子(例如但不限于GM-CSF)的基因的细胞。
[0252] 如上所述，在本发明方法的一些实施方式中，所述方法还包括施用另外的治疗剂。在特定实施方式中，所述另外的治疗剂为抗LAG3抗体或其抗原结合片段、抗GITR抗体或其抗原结合片段、抗TIGIT抗体或其抗原结合片段、抗CD27抗体或其抗原结合片段、ILT2抗体或其抗原结合片段、ILT3抗体或其抗原结合片段、ILT4抗体或其抗原结合片段、ILT5抗体或其抗原结合片段或者IL-10抗体或其抗原结合片段。在一个实施方式中，另外的治疗剂为表达IL-12的新城疫病毒载体。在进一步的实施方式中，另外的治疗剂为迪那昔布
(dinaciclib)。在仍进一步的实施方式中，另外的治疗剂为STING激动剂。在进一步的实施方式中，另外的治疗剂为迪那昔布。在仍进一步的实施方式中，另外的治疗剂为PARP抑制剂。在进一步的实施方式中，另外的治疗剂为迪那昔布。在另外的实施方式中，另外的治疗剂为MEK抑制剂。在另外的实施方式中，另外的治疗剂为CXCR2拮抗剂。在另外的实施方式中，另外的治疗剂为navarixin。在另外的实施方式中，另外的治疗剂为奥拉帕尼(olarparib)。在另外的实施方式中，另外的治疗剂为司美替尼(selumetinib)。
(dinaciclib)。在仍进一步的实施方式中，另外的治疗剂为STING激动剂。在进一步的实施方式中，另外的治疗剂为迪那昔布。在仍进一步的实施方式中，另外的治疗剂为PARP抑制剂。在进一步的实施方式中，另外的治疗剂为迪那昔布。在另外的实施方式中，另外的治疗剂为MEK抑制剂。在另外的实施方式中，另外的治疗剂为CXCR2拮抗剂。在另外的实施方式中，另外的治疗剂为navarixin。在另外的实施方式中，另外的治疗剂为奥拉帕尼(olarparib)。在另外的实施方式中，另外的治疗剂为司美替尼(selumetinib)。
[0253] 合适的施用途径可例如包括肠胃外递送，包括肌肉内、皮下以及鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内。药物可以多种常规方式施用，例如腹膜内、肠胃外、动脉内或静脉内注射。
[0254] 另外的治疗剂的剂量选择取决于若干因素，包括实体的血清或组织更新率，症状水平，实体的免疫原性以及所治疗的个体中靶细胞、组织或器官的可及性。另外的治疗剂的剂量应为提供可接受水平的副作用的量。因此，每种另外的治疗剂(例如生物治疗剂或化学治疗剂)的剂量和给药频率将部分取决于特定的治疗剂、所治疗的癌症的严重程度以及患者特征。选择适当剂量的抗体、细胞因子和小分子的指南是可得到的。参见，例如，Wawrzynczak(1996)Antibody Therapy，Bios Scientific Pub.Ltd，Oxfordshire，UK；Kresina(编)(1991)Monoclonal Antibodies，Cytokines and Arthritis，Marcel Dekker，New York，NY；Bach(编)(1993)Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases，Marcel Dekker，New York，NY；Baert等人(2003)New
Engl.J.Med.348:601-608；Milgrom等人(1999)New Engl.J.Med.341:1966-1973；Slamon等人(2001)New Engl.J.Med.344:783-792；Beniaminovitz等人(2000)New Engl.J.Med.342:
613-619；Ghosh等人(2003)New Engl.J.Med.348:24-32；Lipsky等人(2000)New
Engl.J.Med.343:1594-1602；Physicians'Desk Reference 2003(Physicians'Desk Reference，第57版)；Medical Economics Company；ISBN：1563634457；第57版(2002年11月)。临床医师可以例如使用本领域已知或怀疑会影响治疗或预计影响治疗的参数或因素来确定适当的剂量方案，并且将取决于例如患者的临床病史(例如，先前的疗法)、要治疗的癌症的类型和阶段以及在联合疗法中对一种或多种治疗剂产生反应的生物标志物。
Engl.J.Med.348:601-608；Milgrom等人(1999)New Engl.J.Med.341:1966-1973；Slamon等人(2001)New Engl.J.Med.344:783-792；Beniaminovitz等人(2000)New Engl.J.Med.342:
613-619；Ghosh等人(2003)New Engl.J.Med.348:24-32；Lipsky等人(2000)New
Engl.J.Med.343:1594-1602；Physicians'Desk Reference 2003(Physicians'Desk Reference，第57版)；Medical Economics Company；ISBN：1563634457；第57版(2002年11月)。临床医师可以例如使用本领域已知或怀疑会影响治疗或预计影响治疗的参数或因素来确定适当的剂量方案，并且将取决于例如患者的临床病史(例如，先前的疗法)、要治疗的癌症的类型和阶段以及在联合疗法中对一种或多种治疗剂产生反应的生物标志物。
[0255] 可获得各种文献参考以促进选择用于另外的治疗剂的药学上可接受的载体或赋形剂。参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S.Pharmacopeia：National Formulary，Mack Publishing Company，Easton，PA(1984)；Hardman等人(2001)Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics，McGraw-Hill，New York，NY；Gennaro(2000)Remington：The Science and Practice of Pharmacy，Lippincott，Williams，and Wilkins，New York，NY；Avis等人(编)(1993)Pharmaceutical Dosage Forms：Parenteral Medications，Marcel Dekker，NY；Lieberman等人(编)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets，Marcel Dekker，NY；Lieberman等人(编)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms：Disperse Systems，Marcel Dekker，NY；Weiner and Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity and Safety，Marcel Dekker，Inc.，New York，NY。
[0256] 在一些实施方式中，通过连续输注或以例如一天、每周1-7次、一周、两周、三周、每月、每两个月等的间隔的剂量来施用本发明的组合物。优选的剂量方案为涉及避免显著不希望的副作用的最大剂量或剂量频率的剂量方案。总的每周剂量通常为至少0.05μg/kg、0.2μg/kg、0.5μg/kg、1μg/kg、10μg/kg、100μg/kg、0.2mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、10mg/kg、
25mg/kg、50mg/kg体重或更高。参见，例如，Yang等人(2003)New Engl.J.Med.349:427-434；
Herold等人(2002)New Engl.J.Med.346:1692-1698；Liu等人(1999)
J.Neurol.Neurosurg.Psych.67:451-456；Portielji等人(20003)Cancer
Immunol.Immunother.52:133-144。小分子治疗剂，例如肽模拟物、天然产物或有机化学试剂的期望剂量以摩尔/kg为基准与抗体或多肽基本相同。
25mg/kg、50mg/kg体重或更高。参见，例如，Yang等人(2003)New Engl.J.Med.349:427-434；
Herold等人(2002)New Engl.J.Med.346:1692-1698；Liu等人(1999)
J.Neurol.Neurosurg.Psych.67:451-456；Portielji等人(20003)Cancer
Immunol.Immunother.52:133-144。小分子治疗剂，例如肽模拟物、天然产物或有机化学试剂的期望剂量以摩尔/kg为基准与抗体或多肽基本相同。
[0257] 在某些实施方式中，给药将包括在治疗过程中向受试者施用1.0、3.0和10mg/kg的递增剂量的药物制剂，即包含ABI和式I的化合物的制剂。所述制剂可以是重构的液体制剂，或者它可以是先前未冻干的液体制剂。时程可以变化，并且可以持续，只要获得期望的效果即可。在某些实施方式中，剂量递增将持续直至约10mg/kg的剂量。在某些实施方式中，受试者将具有黑色素瘤或其他形式的实体瘤的组织学或细胞学诊断，并且在某些情况下，受试者可以患有不可测量的疾病。在某些实施方式中，受试者将已经用其他化学疗法治疗，而在其他实施方式中，受试者将是原初治疗者
[0258] 在仍另外的实施方式中，给药方案将包括在整个治疗过程中施用1、3或10mg/kg剂量的本文所述的任何药物制剂(即，包含ABI和式I的化合物的制剂)。对于这种恒定的给药方案，剂量之间的间隔将为约14天(±2天)。在某些实施方式中，剂量之间的间隔将为约21天(±2天)。
[0259] 在某些实施方式中，给药方案将包括以患者内剂量递增(intra-patient dose escalation)的方式施用约0.005mg/kg至约10mg/kg的剂量。在某些实施方式中，将以每3周或每2周的间隔施用5mg/kg或10mg/kg的剂量。在仍另外的实施方式中，对于黑色素瘤患者或患有其他实体瘤的患者，将以三周的间隔施用3mg/kg的剂量。在这些实施方式中，患者应患有不可切除的疾病；然而，患者可以以前接受过外科手术。
[0260] 在某些实施方式中，将对受试者施用本文所述的任何药物制剂的30分钟IV输注。在递增剂量的某些实施方式中，在第一剂量和第二剂量之间的给药间隔将为约28天(±1天)。在某些实施方式中，在第二剂量和第三剂量之间的间隔将为约14天(±2天)。在某些实施方式中，对于第二剂量之后的剂量，给药间隔将为约14天(±2天)。
[0261] 皮下施用可通过使用注射器或使用其他注射装置(例如 装置)；注射笔；或无针装置(例如MediJector和 )注射来进行。
[0262] 本发明的实施方式还包括一种或多种本文所述的生物制剂，其(i)用于、(ii)用作用于以下的药物或组合物，或(iii)用于制备用于以下的药物：(a)疗法(例如，人体疗法)；(b)药物；(c)诱导或增加抗肿瘤免疫反应；(d)减少患者中一种或多种肿瘤标志物的数量；
(e)停止或延缓肿瘤或血液癌的生长；(f)停止或延缓PD-1相关疾病的进展；(g)阻止或延迟癌症进展；(h)稳定PD-1相关疾病；(i)抑制肿瘤细胞的生长或存活；(j)消除或缩小一种或多种癌性病变或肿瘤的大小；(k)减少PD-1相关疾病的进展、发作或严重程度；(l)降低PD-1相关疾病如癌症的临床症状的严重程度或持续时间；(m)相对于类似未治疗患者的预期生存期而言，延长患者的生存期；n)诱导癌性病症或其他PD-1相关疾病的完全或部分缓解；
(o)治疗癌症；或(p)治疗感染或传染病。
(e)停止或延缓肿瘤或血液癌的生长；(f)停止或延缓PD-1相关疾病的进展；(g)阻止或延迟癌症进展；(h)稳定PD-1相关疾病；(i)抑制肿瘤细胞的生长或存活；(j)消除或缩小一种或多种癌性病变或肿瘤的大小；(k)减少PD-1相关疾病的进展、发作或严重程度；(l)降低PD-1相关疾病如癌症的临床症状的严重程度或持续时间；(m)相对于类似未治疗患者的预期生存期而言，延长患者的生存期；n)诱导癌性病症或其他PD-1相关疾病的完全或部分缓解；
(o)治疗癌症；或(p)治疗感染或传染病。
[0263] 为了描述和公开可能与本发明结合使用的方法和材料的目的，本文提及的所有出版物均通过引用并入本文。
[0264] 已经参考附图在本文中描述了本发明的不同实施方式，应当理解，本发明不限于那些精确的实施方式，并且在不脱离所附权利要求所限定的本发明的范围或精神的情况下，本领域技术人员可以在其中进行各种改变和修改。实施例
[0265] 实施例1
[0266] 化合物1(C1)：(S)-12-((1H-咪唑-4-基)甲基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸的制备
[0267]
[0268] 步骤1.(S)-12-((1H-咪唑-4-基)甲基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸甲酯的制备：
[0269] 在0℃下向(S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(1-1)(5g，29.6mmol)在二氯甲烷(25mL)和三乙胺(8.97，89mmol)中的溶液中滴加二氯甲烷(25mL)中的2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙酰氯(1-2)(5.81g，29.6mmol)(由酸新鲜制备)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC确认反应完成。将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中，然后将其浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈液体状的(S)-12-((1H-咪唑-4-基)甲基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸甲酯(1-3)。LC-MS ESI/APCI C14H23N3O6[M+1]+计算值330.35，实测值330.2。1H NMR 400MHz，DMSO-d6：δ8.15(d，J＝10.40Hz，1H)，7.63(s，1H)，6.86(s，1H)，4.58(t，J＝9.20Hz，1H)，3.92(s，
2H)，3.65(s，3H)，3.58(s，3H)，3.50-3.52(m，8H)，2.97(d，J＝9.20Hz，2H)。
2H)，3.65(s，3H)，3.58(s，3H)，3.50-3.52(m，8H)，2.97(d，J＝9.20Hz，2H)。
[0270] 步骤2.(S)-12-((1H-咪唑-4-基)甲基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸的制备：
[0271] 向(S)-12-((1H-咪唑-4-基)甲基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸甲酯(1-3)(4.7g，14.2mmol)在MeOH(50.0mL)和水(10.0mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(0.85g，21.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。将1.5N HCl加入到反应混合物中并将其在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-12-((1H-咪唑-4-基)甲基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸(C1)。LC-MS ESI/APCI C13H21N3O6[M+H]+计算值316.33，实测值316.4。1H NMR 400MHz，D2O：δ8.22(s，1H)，7.06(s，1H)，4.41(t，J＝4.80Hz，1H)，3.94(s，2H)，3.52-3.54(m，8H)，3.26(s，3H)，3.16(q，J＝4.80Hz，1H)，2.98(q，J＝8.40Hz，1H)。
[0272] 实施例2
[0273] 化合物2(C2)：(S)-12-(3-胍基丙基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸的制备
[0274]
[0275] 步骤1.(S)-12-(3-胍基丙基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸乙酯的制备：
[0276] 在0℃下向(S)-2-氨基-5-胍基戊酸乙酯(2-1)(5g，24.72mmol)在二氯甲烷(25mL)和三乙胺(10.34ml，74.2mmol)中的溶液中滴加二氯甲烷(25mL)中的2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙酰氯(2-2)(4.86g，24.72mmol)(由酸新鲜制备)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中，将其浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈液体状的(S)-12-(3-胍基丙基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸乙酯(2-3)。LC-MS ESI/APCI C15H30N4O6[M+1]+计算值363.42，实测值363.2。1H NMR 400MHz，DMSO-d6：δ8.01(s，
1H)，7.83(s，1H)，4.26(t，J＝8.00Hz，1H)，4.14(q，J＝1.20Hz，2H)，4.09-4.10(m，2H)，3.95(s，2H)，3.53-3.54(m，8H)，3.43(s，3H)，1.87-1.84(m，2H)，1.46-1.48(m，2H)，1.19(t，J＝
9.60Hz，3H)。
1H)，7.83(s，1H)，4.26(t，J＝8.00Hz，1H)，4.14(q，J＝1.20Hz，2H)，4.09-4.10(m，2H)，3.95(s，2H)，3.53-3.54(m，8H)，3.43(s，3H)，1.87-1.84(m，2H)，1.46-1.48(m，2H)，1.19(t，J＝
9.60Hz，3H)。
[0277] 步骤2.(S)-12-(3-胍基丙基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸的制备：
[0278] 向(S)-12-(3-胍基丙基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸乙酯(2-3)(4g，11.04mmol)在甲醇(50mL)和水(10mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(0.662g，
16.56mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用1.5N HCl中和并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。
粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-12-(3-胍基丙基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-
13-酸(C2)。LC-MS ESI/APCI C13H26N4O6[M+H]+计算值335.19，实测值335.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ4.14-4.16(m，1H)，4.01(s，2H)，3.60-3.61(m，6H)，3.53-3.53(m，2H)，3.30(s，3H)，
3.11(t，J＝6.36Hz，2H)，1.79-1.81(m，1H)，1.66-1.68(m，1H)，1.51-1.52(m，2H)。
16.56mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用1.5N HCl中和并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。
粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-12-(3-胍基丙基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-
13-酸(C2)。LC-MS ESI/APCI C13H26N4O6[M+H]+计算值335.19，实测值335.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ4.14-4.16(m，1H)，4.01(s，2H)，3.60-3.61(m，6H)，3.53-3.53(m，2H)，3.30(s，3H)，
3.11(t，J＝6.36Hz，2H)，1.79-1.81(m，1H)，1.66-1.68(m，1H)，1.51-1.52(m，2H)。
[0279] 实施例3
[0280] 化合物3(C3)：(S)-5-胍基-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)戊酸的制备
[0281]
[0282] 方案中使用的各种起始原料和试剂是可商购的或本领域技术人员容易制备的。化合物3-2按照Seifert等人，J.Med.Chem.2014，57，9870-9888中所公开的文献方案合成。
[0283] 步骤2.(S)-5-胍基-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)戊酸乙酯的制备：
[0284] 向(S)-2-氨基-5-胍基戊酸乙酯(3-3)(30.0g，148mmol)在MeOH(300.0mL)中的溶液中加入2-(2-甲氧基乙氧基)乙醛(3-2)(26.2g，222mmol)和乙酸(1.69ml，29.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并分批加入氰基硼氢化钠(13.8g，222mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇洗脱以得到(S)-5-胍基-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)戊酸乙酯(3-4)。LC-MS ESI/APCI C13H28N4O4[M+H]+计算值305.3，实测值305.2。
[0285] 步骤3.(S)-5-胍基-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)戊酸乙酯的制备：
[0286] 将HATU(25.5g，67.1mmol)、三乙胺(12.47ml，89mmol)、DMF(100mL)中的(S)-5-胍基-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)戊酸乙酯(3-4)(17.70g，58.2mmol)加入到2-(2-甲氧基乙氧基)乙酸(3-5)(6g，44.7mmol)在DMF(30ml)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并将产物用二氯甲烷(5X 100mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈固体状的(S)-5-胍基-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)戊酸乙酯(3-6)。LC-MS ESI/APCI C18H36N4O7[M+H]+计算值421.5，实测值421.2。
[0287] 步骤4.(S)-5-胍基-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)戊酸的制备：
[0288] 向(S)-5-胍基-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)戊酸乙酯(3-6)(4g，9.07mmol)在MeOH(40.0mL)和水(8.0mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(0.571g，14.27mmol)并将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用1.5N HCl中和并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-5-胍基-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)戊酸(C3)。LC-MS ESI/APCI C16H32N4O7[M+H]+计算值1
393.44，实测值393.4。H NMR 400MHz，D2O：δ4.33-4.31(m，1H)，4.24(s，2H)，3.58-3.62(m，
12H)，3.23(s，3H)，3.28(s，3H)，3.09-3.11(m，2H)，1.89-1.92(m，1H)，1.64-1.67(m，1H)，
1.47-1.48(m，2H)。
393.44，实测值393.4。H NMR 400MHz，D2O：δ4.33-4.31(m，1H)，4.24(s，2H)，3.58-3.62(m，
12H)，3.23(s，3H)，3.28(s，3H)，3.09-3.11(m，2H)，1.89-1.92(m，1H)，1.64-1.67(m，1H)，
1.47-1.48(m，2H)。
[0289] 实施例4
[0290] 化合物4(C4)：(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸的制备
[0291]
[0292] 步骤1.(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸甲酯的制备：
[0293] 向(S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(4-1)(15g，89mmol)在甲醇(150mL)中的溶液中加入2-(2-甲氧基乙氧基)乙醛(4-2)(15.6g，133mmol)和乙酸(1.01ml，17.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并分批加入氰基硼氢化钠(8.36g，133mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇洗脱以得到(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸甲酯(4-3)。LC-MS ESI/APCI C12H21N3O4[M+H]+计算值272.3，实测值272.2。
[0294] 步骤2.(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸甲酯的制备：
[0295] 向2-(2-甲氧基乙氧基)乙酸(4-4)(4.2g，31.3mmol)在二氯甲烷(40ml)中的溶液中加入二氯甲烷(60mL)中的HATU(17.86g，47.0mmol)、三乙胺(8.80ml，62.6mmol)和(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸甲酯(4-3)(8.5g，31.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并将产物用二氯甲烷(5X 100mL)萃取。然后将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈固体状的(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸甲酯(4-4)。LC-MS ESI/APCI C17H29N3O7[M+H]+计算值388.42，实测值388.2。
[0296] 步骤4.(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸的制备：
[0297] 向(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸甲酯(4-5)(7.1g，15.21mmol)在MeOH(70.0mL)和水(15.0mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(1.08g，27.1mmol)并将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用1.5N HCl中和并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸(C4)。LC-MS ESI/APCI C16H27N3O7[M+H]+计算值374.44，实测值374.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ8.49(s，1H)，7.15(s，1H)，4.35-4.36(m，1H)，4.27(s，2H)，3.48-3.50(m，12H)，3.29-3.27(m，2H)，3.29(s，3H)，
3.25(s，3H)。
3.25(s，3H)。
[0298] 实施例5
[0299] 化合物5(C5)：(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸的制备[0300]
[0301] 步骤2.(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸乙酯的制备：
[0302] 向(S)-2-氨基-5-胍基戊酸乙酯(5-3)(10.0g，49.5mmol)在MeOH(100.0mL)中的溶液中加入2-(2-甲氧基乙氧基)乙醛(5-2)(23.3g，198mmol)和乙酸(0.565ml，9.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃，分批加入氰基硼氢化钠(4.66g，74.2mmol)并将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并将产物用二氯甲烷(5X 100mL)萃取。然后将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸乙酯(5-4)。LC-MS ESI/APCI C18H38N4O6[M+1]+计算值406.28，实测值407.4。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ7.42(bs，1H)，7.25(bs，1H)，6.85(bs，2H)，4.12-4.05(m，2H)，3.49-3.47(m，4H)，
3.43-3.40(m，8H)，3.38-3.36(m，1H)，3.24(s，6H)，3.11-3.09(m，2H)，2.80-2.66(m，4H)，
1.63-1.60(m，2H)，1.50-1.43(m，2H)，1.20(t，J＝7.2Hz，3H)。
3.43-3.40(m，8H)，3.38-3.36(m，1H)，3.24(s，6H)，3.11-3.09(m，2H)，2.80-2.66(m，4H)，
1.63-1.60(m，2H)，1.50-1.43(m，2H)，1.20(t，J＝7.2Hz，3H)。
[0303] 步骤3.(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸的制备：
[0304] 向(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸乙酯(5-4)(5.4g，13.3mmol)在MeOH(60.0mL)和水(10.0mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(0.797g，
19.9mmol)并将反应混合物在室温下搅拌5h。通过TLC确认反应完成。将1.5N HCl加入到反应混合物中并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸(C5)。LC-MS ESI/APCI C16H34N4O6[M+H]+计算值379.4，实测值379.0。1H NMR(400MHz，D2O)：δ
3.86-3.66(m，4H)，3.86-3.76(m，1H)，3.62-3.60(m，4H)，3.57-3.55(m，4H)，3.47-3.39(m，
4H)，3.29(s，6H)，3.17(t，J＝6.8Hz，2H)，1.86-1.80(m，2H)，1.74-1.62(m，2H)。
19.9mmol)并将反应混合物在室温下搅拌5h。通过TLC确认反应完成。将1.5N HCl加入到反应混合物中并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸(C5)。LC-MS ESI/APCI C16H34N4O6[M+H]+计算值379.4，实测值379.0。1H NMR(400MHz，D2O)：δ
3.86-3.66(m，4H)，3.86-3.76(m，1H)，3.62-3.60(m，4H)，3.57-3.55(m，4H)，3.47-3.39(m，
4H)，3.29(s，6H)，3.17(t，J＝6.8Hz，2H)，1.86-1.80(m，2H)，1.74-1.62(m，2H)。
[0305] 实施例6
[0306] 化合物6(C6)：(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸的制备
[0307]
[0308] 步骤2.(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯的制备：
[0309] 向(S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(6-3)(10g，59.1mmol)在MeOH(100.0mL)中的溶液中加入2-(2-甲氧基乙氧基)乙醛(6-2)(27.9g，236mmol)和乙酸(0.67ml，11.82mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并分批加入氰基硼氢化钠(5.57g，89mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并将产物用二氯甲烷(5X100mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(6-4)。LC-MS ESI/APCI C17H31N3O6[M+1]+计算值
374.44，实测值374.2。
374.44，实测值374.2。
[0310] 步骤3.(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸的制备：
[0311] 向(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(6-4)(6.5g，17.30mmol)在MeOH(65.0mL)和水(12.0mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(1.03g，
25.95mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用1.5N HCl中和并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。
粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸(C6)。LC-MS ESI/APCI C16H29N3O6[M+H]+计算值360.41，实测值360.2。1H NMR(400MHz，D2O)：400MHz，D2O：δ8.22(s，1H)，7.15(s，1H)，3.90(t，J＝7.20Hz，1H)，3.60-3.62(m，4H)，
3.55-3.56(m，4H)，3.50-3.50(m，4H)，3.28(s，6H)，3.19-3.19(m，4H)，3.06-3.07(m，2H)。
25.95mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用1.5N HCl中和并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。
粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸(C6)。LC-MS ESI/APCI C16H29N3O6[M+H]+计算值360.41，实测值360.2。1H NMR(400MHz，D2O)：400MHz，D2O：δ8.22(s，1H)，7.15(s，1H)，3.90(t，J＝7.20Hz，1H)，3.60-3.62(m，4H)，
3.55-3.56(m，4H)，3.50-3.50(m，4H)，3.28(s，6H)，3.19-3.19(m，4H)，3.06-3.07(m，2H)。
[0312] 实施例7
[0313] 化合物7(C7)：(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸盐酸盐的制备
[0314]
[0315] 步骤2.(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸甲酯的制备：
[0316] 向(S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(7-3)(15g，89mmol)在甲醇(150mL)中的溶液中加入2-(2-甲氧基乙氧基)乙醛(7-2)(15.6g，133mmol)和乙酸(1.01ml，17.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并分批加入氰基硼氢化钠(8.36g，133mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇洗脱以得到(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸甲酯(7-4)。LC-MS ESI/APCI C12H21N3O4[M+H]+计算值272.3，实测值272.2。
[0317] 步骤3.(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸甲酯的制备：
[0318] 向2-(2-甲氧基乙氧基)乙酸(7-5)(4.2g，31.3mmol)在二氯甲烷(40ml)中的溶液中加入二氯甲烷(60ml)中的HATU(17.86g，47.0mmol)、三乙胺(8.80ml，62.6mmol)和(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸甲酯(7-4)(8.5g，31.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并将产物用二氯甲烷(5X 100mL)萃取。然后将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈固体状的(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸甲酯(7-6)。LC-MS ESI/APCI C17H29N3O7[M+H]+计算值388.42，实测值388.2。
[0319] 步骤4.(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸盐酸盐的制备：
[0320] 向(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸甲酯(7-6)(7.1g，18.34mmol)在MeOH(70.0mL)和水(15.0mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(1.1g，27.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用1.5N HCl酸化至pH 2-3并在减压下浓缩。粗产物通过反相色谱纯化，用0.1％HCl/水洗脱以得到呈固体状的(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)乙酰氨基)丙酸盐酸盐(C7)。LC-MS ESI/APCI C16H27N3O7[M+H]+计算值374.44，实测值374.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ8.52(s，1H)，7.22(s，1H)，4.32(s，2H)，
4.28-4.29(m，1H)，3.54-3.54(m，12H)，3.43-3.43(m，2H)，3.30(s，3H)，3.25(s，3H)。
4.28-4.29(m，1H)，3.54-3.54(m，12H)，3.43-3.43(m，2H)，3.30(s，3H)，3.25(s，3H)。
[0321] 实施例8
[0322] 化合物8(C8)：(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸二盐酸盐的制备
[0323]
[0324] 步骤2.(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸乙酯的制备：
[0325] 向(S)-2-氨基-5-胍基戊酸乙酯(8-3)(10.0g，49.5mmol)在MeOH(100.0mL)中的溶液中加入2-(2-甲氧基乙氧基)乙醛(8-2)(23.3g，198mmol)和乙酸(0.565ml，9.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并分批加入氰基硼氢化钠(4.66g，74.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并将产物用二氯甲烷(5X 100mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸乙酯(8-4)。LC-MS ESI/APCI C18H38N4O6[M+1]+计算值407.28，实测值407.4。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ
7.42(bs，1H)，7.25(bs，1H)，6.85(bs，2H)，4.12-4.05(m，2H)，3.49-3.47(m，4H)，3.43-3.40(m，8H)，3.38-3.36(m，1H)，3.24(s，6H)，3.11-3.09(m，2H)，2.80-2.66(m，4H)，1.63-1.60(m，2H)，1.50-1.43(m，2H)，1.20(t，J＝7.2Hz，3H)。
7.42(bs，1H)，7.25(bs，1H)，6.85(bs，2H)，4.12-4.05(m，2H)，3.49-3.47(m，4H)，3.43-3.40(m，8H)，3.38-3.36(m，1H)，3.24(s，6H)，3.11-3.09(m，2H)，2.80-2.66(m，4H)，1.63-1.60(m，2H)，1.50-1.43(m，2H)，1.20(t，J＝7.2Hz，3H)。
[0326] 步骤3.(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸二盐酸盐的制备：
[0327] 向(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸乙酯(8-4)(5.4g，13.3mmol)在MeOH(60.0mL)和水(10.0mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(0.797g，
19.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。将1.5N HCl加入到反应混合物中并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。反应混合物用1.5N HCl酸化至pH 2-3并在减压下浓缩。粗产物通过反相色谱纯化，用
0.1％HCl/水洗脱以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸二盐酸盐(C8)。LC-MS ESI/APCI C16H34N4O6[M+H]+计算值379.25，实测值379.0。1H NMR(400MHz，D2O)：δ3.86-3.66(m，4H)，3.86-3.76(m，1H)，3.62-3.60(m，4H)，3.57-3.55(m，
4H)，3.47-3.39(m，4H)，3.29(s，6H)，3.17(t，J＝6.8Hz，2H)，1.86-1.80(m，2H)，1.74-1.62(m，2H)。
19.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。将1.5N HCl加入到反应混合物中并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。反应混合物用1.5N HCl酸化至pH 2-3并在减压下浓缩。粗产物通过反相色谱纯化，用
0.1％HCl/水洗脱以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸二盐酸盐(C8)。LC-MS ESI/APCI C16H34N4O6[M+H]+计算值379.25，实测值379.0。1H NMR(400MHz，D2O)：δ3.86-3.66(m，4H)，3.86-3.76(m，1H)，3.62-3.60(m，4H)，3.57-3.55(m，
4H)，3.47-3.39(m，4H)，3.29(s，6H)，3.17(t，J＝6.8Hz，2H)，1.86-1.80(m，2H)，1.74-1.62(m，2H)。
[0328] 实施例9
[0329] 化合物9(C9)：(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸二盐酸盐的制备
[0330]
[0331] 步骤2.(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯的制备：
[0332] 向(S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(9-3)(10g，59.1mmol)在MeOH(100.0mL)中的溶液中加入2-(2-甲氧基乙氧基)乙醛(9-2)(27.9g，236mmol)和乙酸(0.67ml，11.82mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并分批加入氰基硼氢化钠(5.57g，89mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并将产物用二氯甲烷(5X100mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(9-4)。LC-MS ESI/APCI C17H31N3O6[M+1]+计算值
374.44，实测值374.2。
374.44，实测值374.2。
[0333] 步骤3.(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸二盐酸盐的制备：
[0334] 向(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(9-4)(6.5g，17.30mmol)在MeOH(65.0mL)和水(12.0mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(1.03g，
25.95mmol)并将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用
1.5N HCl酸化至pH 2-3并在减压下浓缩。将残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物通过反相色谱纯化，用0.1％HCl/水洗脱以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸二盐酸盐(C9)。LC-MS ESI/APCI C16H29N3O6[M+H]+计算值360.41，实测值360.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ8.58(s，1H)，7.34(s，
1H)，4.43(t，J＝4.60Hz，1H)，3.79-3.80(m，4H)，3.58-3.59(m，6H)，3.47-3.48(m，6H)，
3.39-3.40(m，2H)，3.26(s，6H)。
25.95mmol)并将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用
1.5N HCl酸化至pH 2-3并在减压下浓缩。将残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物通过反相色谱纯化，用0.1％HCl/水洗脱以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸二盐酸盐(C9)。LC-MS ESI/APCI C16H29N3O6[M+H]+计算值360.41，实测值360.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ8.58(s，1H)，7.34(s，
1H)，4.43(t，J＝4.60Hz，1H)，3.79-3.80(m，4H)，3.58-3.59(m，6H)，3.47-3.48(m，6H)，
3.39-3.40(m，2H)，3.26(s，6H)。
[0335] 实施例10
[0336] 化合物10(C10)：(S)-6-氨基-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰氨基)己酸的制备[0337]
[0338] 化合物10-2通过遵循Journal of the American Chemical Society，2015，第137卷，6975–6978中阐述的方案合成。
[0339] 步骤2.(S)-6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰氨基)己酸的制备：
[0340] 在0℃下向(S)-2-氨基-6-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸(10-2)(9.18g，37.3mmol)在二氯甲烷(50mL)和三乙胺(11.3g，111mmol)中的溶液中滴加二氯甲烷(50mL)中的2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰氯(10-3)(5.66g，37.3mmol)(由酸新鲜制备)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用15％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈液体状的(S)-6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰氨基)己酸(10-4)。LC-MS ESI/APCI C16H30N2O7[M+1]+计算值363.41，实测值363.2。
[0341] 步骤3.(S)-6-氨基-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰氨基)己酸的制备：
[0342] 向(S)-6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰氨基)己酸(10-4)(4g，11.04mmol)在二氯甲烷(20.0mL)中的搅拌溶液中加入TFA(8.50ml，110mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用1.5N HCl中和并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-6-氨基-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰氨基)己酸(C10)。LC-MS ESI/APCI C11H22N2O5[M+H]+计算值263.3，实测值263.4。1H NMR 400MHz，D2O：δ4.14(t，J＝5.20Hz，1H)，4.01(s，2H)，3.65-3.66(m，2H)，3.56-3.57(m，2H)，3.31(s，3H)，2.89(t，J＝7.60Hz，2H)，
1.78-1.78(m，1H)，1.64-1.66(m，3H)，1.55-1.55(m，2H)。
1.78-1.78(m，1H)，1.64-1.66(m，3H)，1.55-1.55(m，2H)。
[0343] 实施例11
[0344] 化合物11(C11)：(S)-6-氨基-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)己酸的制备[0345]
[0346] 步骤2.(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-6-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸的制备：
[0347] 向(S)-2-氨基-6-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸(11-2)(6g，24.36mmol)在MeOH(60.0mL)中的溶液中加入2-(2-甲氧基乙氧基)乙醛(11-3)(11.51g，97mmol)和乙酸(0.27ml，4.87mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃。分批加入氰基硼氢化钠(4.59g，73.1mmol)并将反应混合物在室温下搅拌20小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇洗脱以得到(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-6-+((叔丁氧基羰基)氨基)己酸(11-4)。LC-MS ESI/APCI C21H42N2O8[M+H]计算值451.56，实测值451.2。
[0348] 步骤3.(S)-6-氨基-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)己酸的制备：
[0349] 向(S)-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)-6-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸(11-4)(3g，6.6mmol)在二氯甲烷(15.0mL)中的搅拌溶液中加入TFA(5.06ml，66.6mmol)并将反应混合物在室温下搅拌4小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用饱和碳酸氢钠中和并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-6-氨基-2-(双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)己酸(C11)。LC-MS ESI/APCI C16H34N2O6[M+H]+计算值351.45，实测值351.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ3.52-3.53(m，13H)，3.28(s，6H)，3.26-3.28(m，4H)，2.91(t，J＝7.60Hz，2H)，1.74-1.76(m，2H)，1.58-1.60(m，2H)，1.43-1.44(m，2H)。
[0350] 实施例12
[0351] 化合物12(C12)：(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸的制备
[0352]
[0353] 步骤2.(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸甲酯的制备：
[0354] 向(S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(12-3)(10g，59mmol)在甲醇(150mL)中的溶液中加入2-(2-甲氧基乙氧基)乙醛(12-2)(10.47g，88.7mmol)和乙酸(1.01ml，17.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并分批加入氰基硼氢化钠(5.49g，88.7mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇洗脱以得到(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸甲酯(12-4)。LC-MS ESI/APCI C12H21N3O4[M+H]+计算值272.3，实测值272.2。
[0355] 步骤3.(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸的制备：
[0356] 向(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸甲酯(12-4)(5g，18.4mmol)在MeOH(50.0mL)和水(10.0mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(1.1g，27.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸(C12)。LC-MS ESI/APCI C11H19N3O4[M+H]+计
1
算值258.28，实测值258.2。H NMR 400MHz，D2O：δ7.54(s，1H)，6.78(s，1H)，3.49-3.50(m，
6H)，3.26(s，3H)，3.24(t，J＝7.20Hz，1H)，2.76-2.76(m，2H)，2.66-2.67(m，1H)，2.50-2.52(m，1H)。
1
算值258.28，实测值258.2。H NMR 400MHz，D2O：δ7.54(s，1H)，6.78(s，1H)，3.49-3.50(m，
6H)，3.26(s，3H)，3.24(t，J＝7.20Hz，1H)，2.76-2.76(m，2H)，2.66-2.67(m，1H)，2.50-2.52(m，1H)。
[0357] 实施例13
[0358] 化合物13(C13)：(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-组氨酸的制备
[0359]
[0360] 步骤1.(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-组氨酸甲酯的制备：
[0361] 在0℃下向(S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(13-1)(5g，29.6mmol)在二氯甲烷(25mL)和三乙胺(8.97，89mmol)中的溶液中滴加二氯甲烷(25mL)中的2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰氯(13-2)(4.49g，29.6mmol)(由酸新鲜制备)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中，将其浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈液体状的(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-组氨酸甲酯(13-3)。LC-MS ESI/APCI C12H19N3O5[M+1]+计算值286.30，实测值286.2。
[0362] 步骤2.(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-组氨酸的制备：
[0363] 向(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-组氨酸甲酯(13-3)(4.7g，16.4mmol)在MeOH(47.0mL)和水(5.0mL)中的溶液中加入氢氧化钠(0.98g，24.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。将1.5N HCl加入到反应混合物中，将其在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-组氨酸(C13)。LC-MS ESI/APCI C11H17N3O5[M+H]+计算值272.27，实测值272.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ8.22(s，1H)，7.06(s，1H)，4.41(q，J＝4.96Hz，
1H)，3.93(d，J＝3.00Hz，2H)，3.55-3.57(m，4H)，3.25(s，3H)，3.13-3.16(m，1H)，2.99-3.00(m，1H)。
1H)，3.93(d，J＝3.00Hz，2H)，3.55-3.57(m，4H)，3.25(s，3H)，3.13-3.16(m，1H)，2.99-3.00(m，1H)。
[0364] 实施例14
[0365] 化合物14(C14)：(S)-5-胍基-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)戊酸的制备[0366]
[0367] 步骤2.(S)-5-胍基-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)戊酸乙酯的制备：
[0368] 向(S)-2-氨基-5-胍基戊酸乙酯(14-3)(30.0g，148mmol)在MeOH(300.0mL)中的溶液中加入2-(2-甲氧基乙氧基)乙醛(14-2)(26.2g，222mmol)和乙酸(1.69ml，29.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并分批加入氰基硼氢化钠(13.8g，222mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中，将其浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇洗脱以得到(S)-5-胍基-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)戊酸乙酯(14-4)。LC-MS ESI/APCI C13H28N4O4[M+H]+计算值305.3，实测值305.2。
[0369] 步骤3.(S)-5-胍基-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)戊酸的制备：
[0370] 向(S)-5-胍基-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)戊酸乙酯(14-4)(5g，16.4mmol)在MeOH(50.0mL)和水(5.0mL)中的溶液中加入氢氧化钠(0.98g，24.6mmol)并将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。将1.5N HCl加入到反应混合物中并将其在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(S)-5-胍基-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)戊酸(C14)。LC-MS ESI/APCI C11H24N4O4[M+H]+计算值277.34，实测值277.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ3.55-3.56(m，6H)，3.28(s，3H)，3.15-3.17(m，1H)，3.10(t，J＝6.80Hz，2H)，2.81-2.82(m，1H)，2.68-
2.70(m，1H)，1.50-1.52(m，4H)。
2.70(m，1H)，1.50-1.52(m，4H)。
[0371] 实施例15
[0372] 化合物15(C15)：(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-精氨酸二盐酸盐的制备[0373]
[0374] 步骤1.(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-L-精氨酸乙酯的制备：
[0375] 在0℃下向(S)-2-氨基-5-胍基戊酸乙酯(15-1)(5g，24.72mmol)在二氯甲烷(25mL)和三乙胺(10.34ml，74.2mmol)中的溶液中滴加二氯甲烷(25mL)中的2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰氯(15-2)(3.76g，24.72mmol)(由酸新鲜制备)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈液体状的(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-L-精氨酸乙酯(15-3)。LC-MS ESI/APCI C13H26N4O5[M+1]+计算值319.37，实测值319.2。
[0376] 步骤2.(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-精氨酸二盐酸盐的制备：
[0377] 向(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-L-精氨酸乙酯(15-3)(6.1g，19.1mmol)在MeOH(61.0mL)和水(6.0mL)中的溶液中加入氢氧化钠(1.15g，28.7mmol)并将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用1.5N HCl酸化至pH(2-3)并在减压下浓缩。将残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物通过反相色谱纯化，用0.1％HCl/水洗脱以得到(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-精氨酸二盐酸盐(C15)。LC-MS ESI/APCI C11H22N4O5[M+1]+计算值291.32，实测值291.2。1H NMR 400MHz，DMSO-d6：δ
9.36(s，1H)，7.72(s，1H)，7.67(s，4H)，3.89(t，J＝6.00Hz，1H)，3.85(s，2H)，3.58-3.59(m，
2H)，3.44-3.47(m，2H)，3.26(s，3H)，3.02-3.04(m，2H)，1.64-1.65(m，2H)，1.56-1.57(m，
2H)。
9.36(s，1H)，7.72(s，1H)，7.67(s，4H)，3.89(t，J＝6.00Hz，1H)，3.85(s，2H)，3.58-3.59(m，
2H)，3.44-3.47(m，2H)，3.26(s，3H)，3.02-3.04(m，2H)，1.64-1.65(m，2H)，1.56-1.57(m，
2H)。
[0378] 实施例16
[0379] 化合物16(C16)：((2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰基)-L-组氨酸的制备
[0380]
[0381] 步骤1.(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰基)-L-组氨酸甲酯的制备：
[0382] 在0℃下向(S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(16-1)(5g，29.6mmol)在二氯甲烷(25mL)和三乙胺(8.97，89mmol)中的溶液中滴加二氯甲烷(25mL)中的2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰氯(16-2)(5.81g，29.6mmol)(由酸新鲜制备)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并将混合物浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈液体状的(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰基)-L-组氨酸甲酯(16-3)。LC-MS ESI/APCI C16H27N3O7[M+1]+计算值374.18，实测值374.2。
[0383] 步骤2.((2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰基)-L-组氨酸的制备：
[0384] 向(S)-12-((1H-咪唑-4-基)甲基)-10-氧代-2,5,8-三氧杂-11-氮杂十三烷-13-酸甲酯(16-3)(4.7g，14.2mmol)在MeOH(50.0mL)和水(10.0mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(0.85g，21.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。将1.5N HCl加入到反应混合物中并将其在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过硅藻土床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的((2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰基)-L-组氨酸(C16)。LC-MS ESI/APCI C15H25N3O7[M+H]+计算值317.33，实测值317.17。1H NMR 400MHz，D2O：δ8.52(s，1H)，7.22(s，1H)，4.70-4.59(m，1H)，3.99-3.97(m，2H)，3.54-3.61(m，11H)，3.26-3.28(m，4H)，3.09-3.07(m，2H)。
[0385] 实施例17
[0386] 化合物17(C17)：(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰基)-L-精氨酸的制备
[0387]
[0388] 步骤1.(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰基)-L-精氨酸乙酯的制备：
[0389] 在0℃下向L-精氨酸乙酯(17-1)(9g，44.5mmol)在二氯甲烷(100mL)和三乙胺(10.34ml，74.2mmol)中的溶液中滴加二氯甲烷(25mL)中的2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰氯(17-2)(10.71g，44.5mmol)(由酸新鲜制备)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用10％甲醇/二氯甲烷洗脱以得到呈液体状的(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰基)-L-精氨酸乙酯(17-3)。LC-MS ESI/APCI C17H34N4O7[M+1]+计算值407.24，实测值407.2。
[0390] 步骤2.(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰基)-L-精氨酸的制备：
[0391] 向(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰基)-L-精氨酸乙酯(17-3)(5g，11.19mmol)在甲醇(50mL)和水(10mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(0.74g，18.45mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。反应混合物用1.5N HCl中和并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-酰基)-L-精氨酸(C17)。LC-MS ESI/APCI C15H30N4O7[M+H]+计算值379.21，实测值379.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ4.35-4.36(m，1H)，4.05(s，2H)，3.58-3.69(m，10H)，3.52-3.53(m，2H)，3.29-0.00(m，3H)，3.14(t，J＝6.80Hz，2H)，1.86-1.87(m，1H)，
1.69-1.70(m，1H)，1.54-1.56(m，2H)。
1.69-1.70(m，1H)，1.54-1.56(m，2H)。
[0392] 实施例18
[0393] 化合物18(C18)：(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-L-组氨酸的制备
[0394]
[0395] 步骤2.(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-L-组氨酸甲酯的制备：
[0396] 向L-组氨酸甲酯(18-1)(6.0g，53.2mmol)在MeOH(50.0mL)中的溶液中加入2,5,8,11-四氧杂环十三烷-13-醛(18-2)(70.97g，53.2mmol)和乙酸(1.69ml，29.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并分批加入氰基硼氢化钠(3.34g，
53.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇洗脱以得到(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-L-组氨酸甲酯(18-3)。LC-MS ESI/APCI C16H29N3O6[M+H]+计算值360.21，实测值360.2。
53.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇洗脱以得到(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-L-组氨酸甲酯(18-3)。LC-MS ESI/APCI C16H29N3O6[M+H]+计算值360.21，实测值360.2。
[0397] 步骤3.(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-L-组氨酸的制备：
[0398] 向(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-L-组氨酸甲酯(18-3)(4.5g，12.5mmol)在MeOH(50.0mL)和水(5.0mL)中的溶液中加入氢氧化钠(0.75g，18.78mmol)并将反应混合物在室温下搅拌5小时。通过TLC确认反应完成。将1.5N HCl加入到反应混合物中并在减压下浓缩。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状+的(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-L-组氨酸(C18)。LC-MS ESI/APCI C15H27N3O6[M+H] 计算值346.19，实测值346.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ4.37(t，J＝4.00Hz，1H)，4.05(s，2H)，
3.52-3.53(m，12H)，3.29(s，3H)，3.14(t，J＝6.80Hz，2H)，1.87-1.88(m，1H)，1.69-1.70(m，
1H)，1.54-1.56(m，2H)。
3.52-3.53(m，12H)，3.29(s，3H)，3.14(t，J＝6.80Hz，2H)，1.87-1.88(m，1H)，1.69-1.70(m，
1H)，1.54-1.56(m，2H)。
[0399] 实施例19
[0400] 化合物19(C19)：(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)-L-组氨酸的制备[0401]
[0402] 步骤2.(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)-L-组氨酸甲酯的制备：
[0403] 向(S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(19-1)(5g，29.6mmol)在甲醇(75mL)中的溶液中加入2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙醛(19-2)(7.1g，44.3mmol)和乙酸(1.01ml，17.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应混合物冷却至0℃并分批加入氰基硼氢化钠(2.79g，44.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。通过TLC确认反应完成。然后将饱和碳酸氢钠加入到反应混合物中并浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱纯化，用7％甲醇洗脱以得到(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)-L-组氨酸+甲酯(19-3)。LC-MS ESI/APCI C14H25N3O5[M+H]计算值316.18，实测值316.2。
[0404] 步骤3.(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)-L-组氨酸的制备：
[0405] 向(S)-3-(1H-咪唑-4-基)-2-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基)丙酸甲酯(19-3)(3g，9.51mmol)在MeOH(50.0mL)和水(10.0mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(0.57g，14.2mmol)并将反应混合物在室温下搅拌5h。通过TLC确认反应完成。将粗残留物溶于甲醇中，通过CELITE床过滤并将滤液再次浓缩。粗产物首先通过硅胶快速柱色谱纯化，用5％氨/甲醇洗脱，并再次通过反相色谱纯化，用水洗脱以得到呈固体状的(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙基)-L-组氨酸(C19)。LC-MS ESI/APCI C13H23N3O5[M+H]+计算值302.16，实测
1
值302.2。H NMR 400MHz，D2O：δ8.20(s，1H)，7.16(s，1H)，3.85(t，J＝6.40Hz，1H)，3.70(t，J＝4.80Hz，2H)，3.59-3.61(m，6H)，3.52-3.53(m，2H)，3.28(s，3H)，3.16-3.17(m，4H)。
1
值302.2。H NMR 400MHz，D2O：δ8.20(s，1H)，7.16(s，1H)，3.85(t，J＝6.40Hz，1H)，3.70(t，J＝4.80Hz，2H)，3.59-3.61(m，6H)，3.52-3.53(m，2H)，3.28(s，3H)，3.16-3.17(m，4H)。
[0406] 实施例20
[0407] 化合物20(C20)：(S)-2-(双(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸的制备[0408]
[0409] 步骤1.制备得到(S)-10-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)乙基)-11-(3-胍基丙基)-2,2,3,3-四甲基-4,7-二氧杂-10-氮杂-3-硅取代十二烷
(siladodecan)-12-酸乙酯：
(siladodecan)-12-酸乙酯：
[0410] 向(S)-2-氨基-5-胍基戊酸乙酯(20-1)(10g，49.6mmol)在MeOH(100mL)中的搅拌溶液中加入2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)乙醛(20-2)(43.2g，198mmol)和乙酸(1.0mL)，并将反应混合物在0℃下搅拌15分钟。然后在相同温度下加入氰基硼氢化钠(2.79g，44.3mmol)。然后将所得混合物在室温下搅拌16小时。TLC和LCMS分析显示形成所需产物。将饱和碳酸氢钠溶液(50mL)加入到反应混合物中，然后将其浓缩。水层用DCM(5x 100mL)回萃。将合并的有机层用盐水(1x150mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗材料通过60-120目硅胶柱色谱纯化，用10％MeOH洗脱以得到呈液体状的(S)-10-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)乙基)-11-(3-胍基丙基)-2,2,3,3-四甲基-4,7-二氧杂-10-氮杂-3-硅取代十二烷-12-酸乙酯(20-3)。LC-MS ESI/APCI C28H62N4O6Si2[M+H]+计算值606.42，实测值606.1。
[0411] 步骤2.(S)-2-(双(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸乙酯的制备：
[0412] 向(S)-10-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)乙基)-11-(3-胍基丙基)-2,2,3,3-四甲基-4,7-二氧杂-10-氮杂-3-硅取代十二烷-12-酸乙酯(20-3)(5.1g，8.40mmol)在CH2Cl2(20mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷(10.5ml，42.0mmol)中的HCl并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物浓缩以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸乙酯。
[0413] 步骤3.(S)-2-(双(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸的制备：
[0414] 向(S)-2-(双(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸乙酯(3.11g，8.22mmol)在MeOH(50mL)中的搅拌溶液中加入水(10mL)和NaOH(0.493g，12.33mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。TLC和LCMS分析显示形成所需产物。将反应混合物浓缩，并用1.5N HCl中和并浓缩。将残留物溶于甲醇中，通过CELITE过滤并浓缩以得到粗产物。粗材料通过硅胶柱色谱纯化，用3-5％氨/甲醇洗脱以得到呈固体状的(S)-2-(双(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)-5-胍基戊酸(C20)。LC-MS ESI/APCI C14H30N4O6[M+H]+计算值351.22，实测值351.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ3.82-3.83(m，1H)，3.77-3.78(m，4H)，3.64-3.65(m，4H)，3.55-3.56(m，4H)，3.42-3.48(m，4H)，3.17(t，J＝6.80Hz，2H)，1.82-1.84(m，4H)。
[0415] 实施例21
[0416] 化合物21(C21)：(S)-2-(双(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸的制备
[0417]
[0418] 步骤1.(S)-11-((1H-咪唑-4-基)甲基)-10-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)乙基)-2,2,3,3-四甲基-4,7-二氧杂-10-氮杂-3-硅取代十二烷-12-酸甲酯的制备：
[0419] 向(S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(21-1)(5g，29.6mmol)在MeOH(50mL)中的搅拌溶液中加入2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)乙醛(21-2)(32.3g，148mmol)和乙酸(0.846ml，14.78mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌15分钟。然后在相同温度下加入氰基硼氢化钠(2.79g，44.3mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。TLC和LCMS分析显示形成所需产物。将饱和碳酸氢钠溶液(50mL)加入到反应混合物中，将其浓缩。水层用CH2Cl2(5x 100mL)回萃。合并的有机层用盐水(1x150mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗材料通过60-120目硅胶柱色谱纯化，用10％MeOH/二氯甲烷洗脱以得到呈液体状的(S)-11-((1H-咪唑-4-基)甲基)-10-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)乙基)-2,2,3,3-四甲基-4,7-二氧杂-10-氮杂-3-硅取代十二烷-12-酸甲酯(21-3)。LC-MS ESI/APCI C28H57N3O6Si2[M+H]+计算值589.38，实测值589.2。
[0420] 步骤2：向(S)-11-((1H-咪唑-4-基)甲基)-10-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)乙基)-2,2,3,3-四甲基-4,7-二氧杂-10-氮杂-3-硅取代十二烷-12-酸甲酯3(8g，13.94mmol)在CH2Cl2(80mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷(8.68g，69.7mmol)中的HCl，并将反应混合物在0℃下搅拌1小时。TLC和LCMS分析显示形成所需产物。将反应混合物在真空下浓缩以得到所需化合物(S)-2-(双(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯，其未经任何纯化即用于下一步骤。
[0421] 步骤3：向(S)-2-(双(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(3.0g，8.69mmol)在甲醇(30mL)中的搅拌溶液中加入NaOH(0.521g，13.03mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。TLC和LCMS分析显示形成所需产物。将反应混合物浓缩，水性液用1.5N HCl中和并浓缩，将残留物溶于甲醇中，通过CELITE过滤，浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用3-5％氨/甲醇洗脱以得到产物，将其通过反相色谱进一步纯化，用水洗脱，以得到呈液体状的(S)-2-(双(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸(C21)。LC-MS ESI/APCI C14H25N3O6[M+H]+计算值332.17，实测值332.2。1H NMR 400MHz，D2O：δ8.21(s，1H)，7.15(s，1H)，3.96(t，J＝7.12Hz，1H)，3.66-3.67(m，4H)，3.57-
3.59(m，4H)，3.50-3.51(m，4H)，3.25-3.26(m，6H)。
3.59(m，4H)，3.50-3.51(m，4H)，3.25-3.26(m，6H)。
[0422] 实施例22
[0423] 化合物22(C22)：[(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-苯丙氨酸的制备
[0424]
[0425] 将(S)-2-氨基-3-(4-(叔丁氧基)苯基)丙酸叔丁酯盐酸盐(22-1)(2.75g，10.67mmol)和2-(2-甲氧基乙氧基)乙酸(22-2)(1.717g，12.0mmol)悬浮于50mL CH2Cl2中。
加入2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(T3P)溶液(50％的EtOAc溶液，13.58ml，21.34mmol)，之后立即加入DIEA(2.79mL，16mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。然后将混合物用TFA(8.16ml，107mmol)处理并搅拌过夜。将混合物在高真空下浓缩。将残留物在硅胶上进行色谱分离，用0-70％己烷/EtOAc-EtOH(3:1)洗脱以得到呈油+
状的(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-苯丙氨酸(C22)。LC-MS ESI/APCI C14H19NO5[M+1] 计算值282.13，实测值282.18。1H NMR 400MHz，DMSO-d6：δ12.71(s，1H)，7.76(d，J＝8.21Hz，
1H)，7.19-7.31(m，5H)，4.53(m，1H)，3.85(m，2H)，3.47(m，4H)，3.25(s，1H)，3.12(dd，J＝
4.81Hz，14.10Hz，1H)，2.98(dd，J＝9.19Hz，14.20Hz，1H)
加入2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(T3P)溶液(50％的EtOAc溶液，13.58ml，21.34mmol)，之后立即加入DIEA(2.79mL，16mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。然后将混合物用TFA(8.16ml，107mmol)处理并搅拌过夜。将混合物在高真空下浓缩。将残留物在硅胶上进行色谱分离，用0-70％己烷/EtOAc-EtOH(3:1)洗脱以得到呈油+
状的(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-苯丙氨酸(C22)。LC-MS ESI/APCI C14H19NO5[M+1] 计算值282.13，实测值282.18。1H NMR 400MHz，DMSO-d6：δ12.71(s，1H)，7.76(d，J＝8.21Hz，
1H)，7.19-7.31(m，5H)，4.53(m，1H)，3.85(m，2H)，3.47(m，4H)，3.25(s，1H)，3.12(dd，J＝
4.81Hz，14.10Hz，1H)，2.98(dd，J＝9.19Hz，14.20Hz，1H)
[0426] 实施例23
[0427] 化合物23(C23)：(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-酪氨酸的制备
[0428]
[0429] 将(S)-2-氨基-3-(4-(叔丁氧基)苯基)丙酸叔丁酯盐酸盐(23-1)(3.48g，10.55mmol)和2-(2-甲氧基乙氧基)乙酸(23-2)(1.698g，12.66mmol)悬浮于50mL CH2Cl2中。
加入2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(T3P)溶液(50％的EtOAc溶液，13.43mL，21.10mmol)，之后立即加入DIEA(2.76ml，15.82mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。然后将混合物用TFA(8.07ml，105mmol)处理并搅拌过夜。将混合物在高真空下浓缩。将残留物在硅胶上进行色谱分离，用0-70％己烷/EtOAc-EtOH(3:1)洗脱以得到呈油状的(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-酪氨酸(C23)。将油状物在室温下缓慢静置固化一周以得到半固体。LC-MS ESI/APCI C14H19NO6[M+1]+计算值298.12，实测值298.19。1H NMR
400MHz，DMSO-d6：δ12.74(s，1H)，9.19(s，1H)，7.65(d，J＝9.37Hz，1H)，6.99(d，J＝8.45Hz，
2H)，6.66(d，J＝8.62Hz，2H)，4.44(m，1H)，3.85(m，2H)，3.41-3.56(m，4H)，3.26(s，1H)，
2.99(dd，J＝5.15Hz，14.00Hz，1H)，2.86(dd，J＝8.58Hz，13.91Hz，1H)
加入2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(T3P)溶液(50％的EtOAc溶液，13.43mL，21.10mmol)，之后立即加入DIEA(2.76ml，15.82mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。然后将混合物用TFA(8.07ml，105mmol)处理并搅拌过夜。将混合物在高真空下浓缩。将残留物在硅胶上进行色谱分离，用0-70％己烷/EtOAc-EtOH(3:1)洗脱以得到呈油状的(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基)-L-酪氨酸(C23)。将油状物在室温下缓慢静置固化一周以得到半固体。LC-MS ESI/APCI C14H19NO6[M+1]+计算值298.12，实测值298.19。1H NMR
400MHz，DMSO-d6：δ12.74(s，1H)，9.19(s，1H)，7.65(d，J＝9.37Hz，1H)，6.99(d，J＝8.45Hz，
2H)，6.66(d，J＝8.62Hz，2H)，4.44(m，1H)，3.85(m，2H)，3.41-3.56(m，4H)，3.26(s，1H)，
2.99(dd，J＝5.15Hz，14.00Hz，1H)，2.86(dd，J＝8.58Hz，13.91Hz，1H)
[0430] 实施例24
[0431] 包含聚乙二醇化赋形剂的药物组合物的粘度
[0432] 派姆单抗制剂包含以下：10mM组氨酸缓冲液、浓度为200mg/mL的派姆单抗和浓度为200mM的测试赋形剂(如本文所述的本发明的聚乙二醇化赋形剂)，pH调节至pH 5.5。不含赋形剂的派姆单抗制剂由pH5.5的10mM组氨酸缓冲液中的200mg/mL派姆单抗组成。与派姆单抗制剂一起使用的10mM组氨酸缓冲液由无菌水中的10mM L-组氨酸组成，pH调节至5.5。
[0433] 抗体B制剂包含以下：10mM组氨酸缓冲液、浓度为177mg/mL的抗体B和浓度为200mM的测试赋形剂(如本文所述的本发明的聚乙二醇化赋形剂)，pH调节至pH 6.0。不含赋形剂的抗体B制剂由pH 6.0的10mM组氨酸缓冲液中的177mg/mL抗体B组成。与抗体B一起使用的10mM组氨酸缓冲液由无菌水中的10mM L-组氨酸组成，pH调节至6.0。
[0434] 粘度测量：所有粘度测量均使用mVROC(芯片上的粘度计/流变仪，RheoSense，Inc.，San Ramon，CA)进行。将测试制剂放入250μl Hamilton气密注射器中，然后将其放入mVROC的注射器护套内。仪器将制剂注入芯片中，以适当的流速进行粘度测量。大多数测量重复进行两次。
[0435] 下表4中提供了测试制剂的粘度。结果表明，相对于不含本发明赋形剂的相同制剂，所测试的聚乙二醇化赋形剂(即式I的化合物)能够降低高浓度单克隆抗体制剂的粘度。此外，所有包含10mM组氨酸缓冲液、200mg/mL派姆单抗和0.2M式I的化合物的测试制剂的粘度均低于包含10mM组氨酸缓冲液、200mg/mL派姆单抗、0.2M精氨酸或组氨酸的测试制剂，这表明本发明化合物相对于工业上通常使用的化合物提供了优异的降粘能力。类似地，包含
10mM组氨酸缓冲液、177mg/mL抗体B和0.2M式I的化合物的测试制剂的粘度低于不含式I的化合物的相同制剂。
10mM组氨酸缓冲液、177mg/mL抗体B和0.2M式I的化合物的测试制剂的粘度低于不含式I的化合物的相同制剂。
[0436] 表4.测试制剂的粘度
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