一种防参止痒颗粒的指纹图谱测定方法
阅读：436发布：2020-05-08
专利汇可以提供一种防参止痒颗粒的指纹图谱测定方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种防参止痒颗粒指纹图谱的测定方法，所述方法，步骤如下：(1)供试品溶液的制备：取防参止痒颗粒，加入甲醇，超声提取，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的右旋薄荷 酮 、人参炔醇、苦参 碱 、苍术素、 牛 蒡甙、 齐墩果酸 、常春藤皂 苷元 、阿魏酸、知母皂苷、地黄苷、 甘 草酸 铵、亚麻苦甙对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；(4)根据色谱图和标准对照指纹图谱进行对照，符合一致为合格品。，下面是一种防参止痒颗粒的指纹图谱测定方法专利的具体信息内容。
1.一种防参止痒颗粒指纹图谱的测定方法，所述方法，步骤如下：
(1)供试品溶液的制备：取防参止痒颗粒粉碎，加入甲醇，超声提取，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的右旋薄荷酮、人参炔醇、苦参碱、苍术素、牛蒡甙、齐墩果酸、常春藤皂苷元、阿魏酸、知母皂苷、地黄苷、甘草酸铵、亚麻苦甙对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；
(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；
(4)根据色谱图和标准对照指纹图谱进行对照，符合一致为合格品。
2.根据权利要求1所述的测定方法，步骤如下：
1)供试品溶液的制备：取待检测防参止痒颗粒0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称重，超声(700W，50kHz)处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，过
0.22μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：分别取右旋薄荷酮、人参炔醇、苦参碱、苍术素、牛蒡甙、齐墩果酸、常春藤皂苷元、阿魏酸、知母皂苷、地黄苷、甘草酸铵、亚麻苦甙对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度分别为27.3、83.3、93.5、33.7、87.4、27.6、35.6、19.8、29.1、17.5、25.2、
19.6μg/mL的混合对照品溶液；
3)将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据供试品溶液色谱图采用计算机模拟技术，根据同一性原则和标准对照指纹图谱进行比对，如果90％以上拟合，则为合格品；
其中，高效液相色谱的色谱条件如下：
采用PHENOMENEX LUNA C-18色谱柱；流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水溶液(体积分数)；梯度洗脱：
0-25min，流动相A5％-22％，流动相B 95％-78％；
25-38min，流动相A22％-46％，流动相B 78％-54％；
38-54min，流动相A46％-55％，流动相B 54％-45％；
54-76min，流动相A55％-75％，流动相B 45％-25％；
76-90min，流动相A75％-85％，流动相B 25％-15％；
流动相流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长为：0～48min，220nm；48～68min，
254nm；68～90min，330nm。进样量：10μL。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其中，所述标准对照指纹图谱建立方法如下：
1)取多批次检测合格的防参止痒颗粒约0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称重，超声(700W，50kHz)处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：
分别取右旋薄荷酮、人参炔醇、苦参碱、苍术素、牛蒡甙、齐墩果酸、常春藤皂苷元、阿魏酸、知母皂苷、地黄苷、甘草酸铵、亚麻苦甙对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度分别为
27.3、83.3、93.5、33.7、87.4、27.6、35.6、19.8、29.1、17.5、25.2、19.6μg/mL的混合对照品溶液；
3)将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据多批次供试品溶液色谱图采用计算机模拟技术，根据同一性原则绘制标准对照指纹图谱，得到标准对照指纹图谱；其中，高效液相色谱的色谱条件如下：
采用PHENOMENEX LUNA C-18色谱柱；流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水溶液(体积分数)；梯度洗脱：
0-25min，流动相A5％-22％，流动相B 95％-78％；
25-38min，流动相A22％-46％，流动相B 78％-54％；
38-54min，流动相A46％-55％，流动相B 54％-45％；
54-76min，流动相A55％-75％，流动相B 45％-25％；
76-90min，流动相A75％-85％，流动相B 25％-15％；
流动相流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长为：0～48min，220nm；48～68min，
254nm；68～90min，330nm。进样量：10μL。
一种防参止痒颗粒的指纹图谱测定方法
技术领域：
[0001] 本发明涉及一种药用制剂的检测方法，具体涉及一种中药制剂防参止痒颗粒指纹图谱的测定方法。背景技术：
[0002] 防参止痒颗粒一种已经上市的中成药，由辽宁康辰药业有限公司生产，其配方中包括荆芥、防风、苦参、苍术、蝉蜕、牛蒡子、木通、当归、知母、生地黄、甘草、亚麻子、石膏等中药，具有祛风清热、燥湿止痒的功效，临床用于急性荨麻疹。防参止痒颗粒质量标准收载于《新药转正标准》第86册，标准中仅对方中的阿魏酸、苦参碱进行了含量测定，而现有的防参止痒颗粒质量控制方法如专利CN109298097A中测定了防参止痒颗粒中右旋薄荷酮、人参炔醇、苦参碱、苍术素、牛蒡甙、齐墩果酸、常春藤皂苷元、阿魏酸等若干种化学成分的含量。但防参止痒颗粒作为复方制剂，单纯通过检测几种指标成分定量来控制其药品质量显然是不全面的，也不能体现中药复方制剂的整体性特征。因此，开发建立一种简便易行，准确性高，重复性良好且能尽可能多地反映复方制剂所含多成分的指纹图谱检测方法对于防参止痒颗粒的质量控制和评价非常必要。
发明内容：
发明内容：
[0003] 针对上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种防参止痒颗粒指纹图谱构建方法。本发明通过对防参止痒颗粒指纹图谱的研究，提供了一种操作简便、稳定、精密度高和重现性好，可用于防参止痒颗粒的质量检测和评价的方法，弥补了现有质量控制方法的不足，使防参止痒颗粒的质量控制技术更为完善、科学。
[0004] 为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
[0005] (1)供试品溶液的制备：取防参止痒颗粒粉碎，加入甲醇，超声提取，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
[0006] (2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的右旋薄荷酮、人参炔醇、苦参碱、苍术素、牛蒡甙、齐墩果酸、常春藤皂苷元、阿魏酸、知母皂苷、地黄苷、甘草酸铵、亚麻苦甙对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；
[0007] (3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；
[0008] (4)根据色谱图和标准对照指纹图谱进行对照，符合一致为合格品。
[0009] 优选的，本发明的测定方法，步骤如下：
[0010] 1)取待检测的防参止痒颗粒0.5g，粉碎，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称重，超声(700W，50kHz)处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。
[0011] 2)对照品溶液的制备：分别取右旋薄荷酮、人参炔醇、苦参碱、苍术素、牛蒡甙、齐墩果酸、常春藤皂苷元、阿魏酸、知母皂苷、地黄苷、甘草酸铵、亚麻苦甙对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度分别为27.3、83.3、93.5、33.7、87.4、27.6、35.6、19.8、29.1、17.5、25.2、19.6μg/mL的混合对照品溶液。
[0012] 3)将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据供试品溶液色谱图采用计算机模拟技术，根据同一性原则和标准对照指纹图谱进行比对，如果90％以上拟合，则为合格品。
[0013] 其中，高效液相色谱的色谱条件如下：
[0015] 0-25min，流动相A5％-22％，流动相B 95％-78％；
[0016] 25-38min，流动相A22％-46％，流动相B 78％-54％；
[0017] 38-54min，流动相A46％-55％，流动相B 54％-45％；
[0018] 54-76min，流动相A55％-75％，流动相B 45％-25％；
[0019] 76-90min，流动相A75％-85％，流动相B 25％-15％。
[0021] 其中所述标准对照指纹图谱建立方法如下：
[0022] 1)取多批次检测合格的防参止痒颗粒约0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称重，超声(700W，50kHz)处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。
[0023] 2)对照品溶液的制备：
[0024] 分别取右旋薄荷酮、人参炔醇、苦参碱、苍术素、牛蒡甙、齐墩果酸、常春藤皂苷元、阿魏酸、知母皂苷、地黄苷、甘草酸铵、亚麻苦甙对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度分别为27.3、83.3、93.5、33.7、87.4、27.6、35.6、19.8、29.1、17.5、25.2、19.6μg/mL的混合对照品溶液。
[0025] 3)将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据多批次供试品溶液色谱图采用计算机模拟技术，根据同一性原则绘制标准对照指纹图谱，得到标准对照指纹图谱。
[0026] 其中，高效液相色谱的色谱条件如下：
[0027] 采用PHENOMENEX LUNA C-18色谱柱；流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水溶液(体积分数)；梯度洗脱：
[0028] 0-25min，流动相A5％-22％，流动相B 95％-78％；
[0029] 25-38min，流动相A22％-46％，流动相B 78％-54％；
[0030] 38-54min，流动相A46％-55％，流动相B 54％-45％；
[0031] 54-76min，流动相A55％-75％，流动相B 45％-25％；
[0032] 76-90min，流动相A75％-85％，流动相B 25％-15％。
[0033] 流动相流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长为：0～48min，220nm；48～68min，254nm；68～90min，330nm。进样量：10μL。
[0034] 本发明所述防参止痒颗粒为一种已经上市的药物，成份：荆芥、防风、苦参、苍术、蝉蜕、牛蒡子、木通、当归、知母、生地黄、甘草、亚麻子、石膏，功能主治：消风止痒、润燥生津。用于用于急性荨麻疹(风热型)、瘙痒症(血虚风燥型痒风)。生产企业：辽宁康辰药业有限公司。
[0035] 本发明检测方法，是经过筛选获得的，筛选过程如下：
[0036] 1仪器与材料
[0037] 1.1材料
[0038]
[0039] 1.2试药
[0040] 对照品：右旋薄荷酮、人参炔醇、苦参碱、苍术素、牛蒡甙、齐墩果酸、常春藤皂苷元、地黄苷、阿魏酸、知母皂苷、甘草酸铵、亚麻苦甙标准品，均购自中国食品药品检定研究院。各标准品纯度均大于98.0％。荆芥、防风、苦参、苍术、牛蒡子、木通、当归、知母、生地黄、甘草、亚麻子药材，采购自辽宁省药材有限责任公司；样品：防参止痒颗粒批号分别为20180201、20180202、20180203、20180301、20180302、20180303、20180304、20180503、
20180504、20180505，由辽宁康辰药业有限公司提供。
20180504、20180505，由辽宁康辰药业有限公司提供。
[0041] 1.3试剂
[0042]
[0043] 2方法与结果
[0044] 2.1防参止痒颗粒指纹图谱建立
[0045] 2.1.1色谱条件：
[0046] 采用PHENOMENEX LUNA C-18色谱柱；流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水溶液(体积分数)；梯度洗脱：
[0047] 0-25min，流动相A5％-22％，流动相B 95％-78％；
[0048] 25-38min，流动相A22％-46％，流动相B 78％-54％；
[0049] 38-54min，流动相A46％-55％，流动相B 54％-45％；
[0050] 54-76min，流动相A55％-75％，流动相B 45％-25％；
[0051] 76-90min，流动相A75％-85％，流动相B 25％-15％。
[0052] 流动相流速为1.0ml/min;柱温为30℃；检测波长为：0～48min，220nm；48～68min，254nm；68～90min，330nm。进样量：10μL。
[0053] 2.1.2供试品溶液的制备：
[0054] 取防参止痒颗粒约0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称重，超声(700W，50kHz)处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。
[0055] 2.1.3对照品溶液的制备：
[0056] 分别取右旋薄荷酮、人参炔醇、苦参碱、苍术素、牛蒡甙、齐墩果酸、常春藤皂苷元、阿魏酸、知母皂苷、地黄苷、甘草酸铵、亚麻苦甙对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度分别为27.3、83.3、93.5、33.7、87.4、27.6、35.6、19.8、29.1、17.5、25.2、19.6μg/mL的混合对照品溶液。
[0057] 2.1.4药材供试品的制备：
[0058] 将荆芥、防风、苦参、苍术、牛蒡子、木通、当归、知母、生地黄、甘草、亚麻子等十一味药材粉碎成粉末，取各单味药材粉末约0.2g，精密称定，按照供试品溶液的制备方法，即得药材供试品溶液。
[0059] 2.1.5精密度试验：
[0060] 取同一批防参止痒颗粒供试品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1.1”项下色谱条件连续进样6次，以9号色谱峰为参照峰(S)，计算得到各共有峰相对峰面积和相对保留时间。结果测得各共有色谱峰的相对保留时间RSD＜1.0％，共有峰的相对峰面积RSD＜2.0％，表明仪器的精密度良好。
[0061] 表1 精密度试验共有峰的相对保留时间
[0062]
[0063] 表2 精密度试验共有峰的相对峰面积
[0064]
[0065]
[0066] 2.1.6重复性试验：取同一批防参止痒颗粒供试品，按“2.1.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，并按“2.1.1”项下色谱条件依次进样测定，以9号色谱峰为参照峰(S)，计算得到各共有峰相对峰面积和相对保留时间。结果测得各共有色谱峰的相对保留时间RSD＜1.0％，共有峰的相对峰面积RSD＜4.0％，表明该方法重复性良好。
[0067] 表3 重复性试验共有峰的相对保留时间
[0068]
[0069]
[0070] 表4 重复性试验共有峰的相对峰面积
[0071]
[0072]
[0073] 2.1.7稳定性试验：
[0074] 取同一防参止痒颗粒供试品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下的色谱条件分别于0、2、4、8、12、24h进样测定，以9号色谱峰为参照峰(S)，计算得到各共有峰相对峰面积和相对保留时间。结果测得各共有色谱峰的相对保留时间RSD＜1.0％，共有峰的相对峰面积RSD＜4.0％，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
[0075] 表5 稳定性试验共有峰的相对保留时间
[0076]
[0077] 表6 稳定性试验共有峰的相对峰面积
[0078]
[0079] 2.1.8指纹图谱的建立：
[0080] 取10批防参止痒颗粒样品，按“2.1.2”项下方法制备样品溶液，并按“2.1.1”项下色谱条件依次进样测定。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行指纹图谱分析，用中位数法生成指纹图谱，结果见图1。
[0081] 表7 10批样品的共有峰面积
[0082]
[0083]
[0084] 10批样品色谱图与对照图谱相似度分别为0.995、0.997、0.997、0.992、0.992、0.993、0.993、0.997、0.992、0.997。结果见表8。
[0085] 表8 10批防参止痒颗粒样品相似度评价结果
[0086] S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10S1 1 0.992 0.992 0.985 0.985 0.99 0.99 0.992 0.985 0.992
S2 0.992 1 0.991 0.983 0.982 0.992 0.992 0.999 0.982 0.988
S3 0.992 0.993 1 0.983 0.982 0.992 0.992 0.991 0.982 0.978
S4 0.985 0.983 0.983 1 0.989 0.976 0.976 0.983 0.976 0.983
S5 0.985 0.982 0.982 0.987 1 0.976 0.975 0.982 0.921 0.982
S6 0.99 0.992 0.992 0.976 0.976 1 0.976 0.992 0.976 0.992
S7 0.99 0.992 0.992 0.976 0.975 0.988 1 0.992 0.975 0.992
S8 0.992 0.987 0.987 0.983 0.982 0.992 0.992 1 0.982 0.934
S9 0.985 0.982 0.982 0.988 0.985 0.976 0.975 0.982 1 0.982
S10 0.992 0.978 0.987 0.983 0.982 0.992 0.992 0.954 0.982 1
R 0.995 0.997 0.997 0.992 0.992 0.993 0.993 0.997 0.992 0.997
S2 0.992 1 0.991 0.983 0.982 0.992 0.992 0.999 0.982 0.988
S3 0.992 0.993 1 0.983 0.982 0.992 0.992 0.991 0.982 0.978
S4 0.985 0.983 0.983 1 0.989 0.976 0.976 0.983 0.976 0.983
S5 0.985 0.982 0.982 0.987 1 0.976 0.975 0.982 0.921 0.982
S6 0.99 0.992 0.992 0.976 0.976 1 0.976 0.992 0.976 0.992
S7 0.99 0.992 0.992 0.976 0.975 0.988 1 0.992 0.975 0.992
S8 0.992 0.987 0.987 0.983 0.982 0.992 0.992 1 0.982 0.934
S9 0.985 0.982 0.982 0.988 0.985 0.976 0.975 0.982 1 0.982
S10 0.992 0.978 0.987 0.983 0.982 0.992 0.992 0.954 0.982 1
R 0.995 0.997 0.997 0.992 0.992 0.993 0.993 0.997 0.992 0.997
[0087] 2.1.9指纹图谱共有峰的指认与归属：
[0088] 取“2.1.3”项下制备的混合对照品溶液与“2.1.4”项下制备的十一味药材溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，结果见图3与图4。根据色谱峰的保留时间信息，对指纹图谱的共有峰进行药材归属，确定指纹图谱的27个共有峰中，第1号峰属于当归药材，第2号峰属于荆芥药材，第3号峰属于防风药材，第4号峰为常春藤皂苷元，第5号峰属于地黄药材，第6号峰属于苦参药材，第7号峰属于防风药材，第8号峰为齐墩果酸，第9号峰为亚麻苦甙，第
10号峰为苦参碱，第11号峰属于防风药材，第12号峰为地黄苷，第13号峰属于防风药材，第
14号峰属于苦参药材，第15号峰为人参炔醇，第16号峰为牛蒡甙，第17号峰属于苦参药材，第18号峰为右旋薄荷酮，第19号峰为甘草酸铵，第20号峰为知母皂苷，第21号峰属于苍术药材，第22号峰属于甘草药材，第23号峰为阿魏酸，第24号峰属于防风药材，第25号峰为苍术素，第26号峰属于荆芥药材，第27号峰属于木通药材。可见，防参止痒颗粒口服液组成药材的主要成分(除蝉蜕与石膏成分无紫外吸收外)均在本专利技术得到的指纹图谱中得到了整体表征。
10号峰为苦参碱，第11号峰属于防风药材，第12号峰为地黄苷，第13号峰属于防风药材，第
14号峰属于苦参药材，第15号峰为人参炔醇，第16号峰为牛蒡甙，第17号峰属于苦参药材，第18号峰为右旋薄荷酮，第19号峰为甘草酸铵，第20号峰为知母皂苷，第21号峰属于苍术药材，第22号峰属于甘草药材，第23号峰为阿魏酸，第24号峰属于防风药材，第25号峰为苍术素，第26号峰属于荆芥药材，第27号峰属于木通药材。可见，防参止痒颗粒口服液组成药材的主要成分(除蝉蜕与石膏成分无紫外吸收外)均在本专利技术得到的指纹图谱中得到了整体表征。
[0089] 需要说明的是，本发明的指纹图谱的构建方法是经过科学实验而筛选得到的，并非是本领域的常规选择，本发明主要对供试品溶液的制备方法，色谱条件，检测波长和分析时间等条件进行了优选。
[0090] 其中：
[0091] 1)供试品溶液配制方法的考察：
[0092] 对不同提取溶剂(水提、30％甲醇、50％甲醇、80％甲醇、甲醇、乙醇、乙酸乙酯)超声法进行考察，结果见图5。结果表明甲醇对待测成分的提取效果优于乙酸乙酯和乙醇提取，所得图谱信息量较大，既含脂溶性成分也包括水溶性成分，符合指纹图谱整体性的要求，其尽可能反映了药材所含的全部信息，因此选择甲醇做为提取溶剂。
[0093] 本实验考察了不同超声时间(10、30、45、60min)，结果表明30min以上，提取效果无明显差别，故优选提取时间为30min，结果见图6。
[0094] 2)色谱条件的选择及优化：
[0095] 在流动相系统的选择中，本实验考察了乙腈-水、乙腈-0.01％甲酸水、乙腈-0.1％磷酸水、乙腈-0.5％磷酸水、甲醇-水、甲醇-0.01％甲酸水、甲醇-0.1％磷酸水、甲醇-0.5％磷酸水八种流动相，结果见图7，结果表明，甲醇的洗脱能力优于乙腈，基线平、分离度好且灵敏度高；加入磷酸可有效改善基线漂移现象，因此选用甲醇-0.1％磷酸水溶液作为流动相，色谱峰检测比较全面，峰形对称，分离度较好，且基线较平稳，不易漂移，有利于指纹图谱的分析。
[0096] 3)检测波长的选择：采用光电二极管阵列检测器(PDAD)在190～400nm波长范围内对12种待检成分进行光谱扫描，结果常春藤皂苷元、齐墩果酸、亚麻苦甙、苦参碱、地黄苷、人参炔醇、牛蒡甙、右旋薄荷酮、甘草酸铵、知母皂苷、阿魏酸、苍术素的最大吸收波长分别为207、210、219、220、210、230、280、252、254、258、323、340nm。再结合液相色谱图，最终将波长设定为0～48min，220nm；48～68min，254nm；68～90min，330nm。
[0097] 4)分析时间的选择：在选择指纹图谱的洗脱时间时记录了2h的色谱图。结果表明90min以后基本没有明显的色谱峰出现，同时为了照顾批次样品的差异性，保证所有批次样品的特征峰都能够被检出，因此选择90min作为分析时间。
[0098] 5)柱温的选择：试验了四个不同柱温(如25℃，30℃，35℃)对指纹图谱检测结果的影响，结果见图8。结果显示柱温为30℃时，色谱峰保留时间适宜，基线平稳，各色谱峰分离度较好，峰形对称，因此选择柱温为30℃。
[0099] 6)流速的选择：试验了四个流速(0.8ml/min，0.9ml/min，1.0ml/min，1.2ml/min)对指纹图谱检测结果的影响。结果表明：流速为1.0ml/min时，分离效果最佳，各色谱峰保留时间适宜，分离度好，基线平稳，峰形对称，因此选择流速为1.0ml/min。
[0100] 本发明的有益效果：
[0101] (1)本发明采用磷酸水溶液-甲醇系统，采用梯度洗脱的方法建立了防参止痒颗粒的指纹图谱，该方法操作简单，稳定可靠，精密度高，分离度好，指纹图谱的稳定性和重现性较好，且信息量大。
[0102] (2)由于指纹图谱不是为了测定某个成分的精确含量，而是要充分反映化学成分的信息，因此，本发明选择可变波长法进行测定，指标成分出峰较多，反映的信息更为完全，各个峰吸收值良好，基线平稳。
[0103] (3)本发明采用指纹图谱作为防参止痒颗粒的质量控制手段，较现有技术如专利CN109298097A只测定若干化学成分含量而判定制剂整体质量的片面性，实现了较大进步，同时又减少了为质量达标而人为处理的可能性，通过对多个批次的样品进行系统分析，能更加全面、科学评价防参止痒颗粒的质量，从而使产品的质量和疗效得到保证。附图说明
[0104] 图1为防参止痒颗粒标准指纹图谱；
[0105] 图2为10批次防参止痒颗粒HPLC指纹图谱；
[0106] 图3为混合对照品图谱，其中色谱峰对应成分为：4.常春藤皂苷元、8.齐墩果酸、9.亚麻苦甙、10.苦参碱、12.地黄苷、15.人参炔醇、16.牛蒡甙、18.右旋薄荷酮、19.甘草酸铵、20.知母皂苷、23.阿魏酸、25.苍术素；
[0107] 图4为对照药材图谱，其中1.亚麻子、2.甘草、3.防风、4.木通、5.当归、6.地黄、7.荆芥、8.牛蒡子、9.苍术、10.苦参、11.知母、12.标准图谱；
[0108] 图5为不同提取溶剂的图谱，其中1.乙酸乙酯、2.乙醇、3.甲醇、4. 80％甲醇、5. 50％甲醇、6. 30％甲醇、7.水提；
[0109] 图6为不同超声时间的图谱，其中1. 60min、2. 45min、3. 30min、4. 10min；
[0110] 图7为不同流动相的图谱，其中1.甲醇-0.5％磷酸水、2.乙腈-0.5％磷酸水、3.甲醇-0.1％磷酸水、4.乙腈-0.1％磷酸水、5.乙腈-水、6.甲醇-水、7.甲醇-0.01％甲酸水、8.乙腈-0.01％甲酸水；
[0111] 图8为不同柱温的图谱，其中1. 30℃、2. 35℃、3. 25℃。
具体实施方式
[0112] 以下通过实施例对本发明做进一步的说明，但不作为对本发明的限制。
[0113] 实施例1
[0114] 1)分别取10批次检测合格的防参止痒颗粒(批号20191101-20191110)约0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称重，超声(700W，50kHz)处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。
[0115] 2)对照品溶液的制备：
[0116] 分别取右旋薄荷酮、人参炔醇、苦参碱、苍术素、牛蒡甙、齐墩果酸、常春藤皂苷元、阿魏酸、知母皂苷、地黄苷、甘草酸铵、亚麻苦甙对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度分别为27.3、83.3、93.5、33.7、87.4、27.6、35.6、19.8、29.1、17.5、25.2、19.6μg/mL的混合对照品溶液。
[0117] 3)将步骤1)制备的供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据多批次供试品溶液色谱图采用计算机模拟技术，根据同一性原则绘制标准对照指纹图谱，得到标准对照指纹图谱。
[0118] 其中，高效液相色谱的色谱条件如下：
[0119] 采用PHENOMENEX LUNA C-18色谱柱；流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水溶液(体积分数)；梯度洗脱：
[0120] 0-25min，流动相A5％-22％，流动相B 95％-78％；
[0121] 25-38min，流动相A22％-46％，流动相B 78％-54％；
[0122] 38-54min，流动相A46％-55％，流动相B 54％-45％；
[0123] 54-76min，流动相A55％-75％，流动相B 45％-25％；
[0124] 76-90min，流动相A75％-85％，流动相B 25％-15％。
[0125] 流动相流速为1.0ml/min；柱温为30℃；检测波长为：0～48min，220nm；48～68min，254nm；68～90min，330nm。进样量：10μL。
[0126] 4)取待检测防参止痒颗粒(批号20191111)约0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称重，超声(700W，50kHz)处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。
[0127] 5)将步骤4)制备的供试品溶液和步骤2)制备的对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到供试品溶液色谱图，与步骤3)得到的标准对照指纹图谱进行比对，如果90％以上拟合，则判定为合格品。
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