技术领域
[0001] 本
发明涉及药物分析技术领域，特别涉及一种葡甲胺中异构体的HPLC检测方法。
背景技术
[0002] 葡甲胺(N-Methyl-D-glucamine)是一种重要的
原料药，常用于医学领域。其CAS号为：6284-40-8，分子式为C7H17NO5，分子量为：195.21，化学结构为：
[0003]
[0004] 其异构体的化学结构式为：
[0005]
[0006] 葡甲胺在药物制剂中常被用作
碱性剂，在低pH条件下可以与阳离子药物形成离子对，提高难溶性药物的溶解性，对一些难溶性药物如美洛昔康、
水飞蓟宾等有良好的增溶作用。从葡甲胺原料药的生产工艺分析，有可能会产生葡甲胺异构体，为了保证用药安全性，需要研究葡甲胺中的异构体。在此之前，未找到葡甲胺异构体分析方法的文献资料，因此，需要提供一种葡甲胺异构体的HPLC检测方法。
发明内容
[0007] 有鉴于此，本发明提供了一种葡甲胺中异构体的HPLC检测方法。该方法可有效分离葡甲胺与异构体，可实现对原料药的
质量控制。
[0008] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0009] 本发明提供了一种葡甲胺中异构体的HPLC检测方法，包括如下步骤：
[0010] 在碱性条件下，将葡甲胺样品与二
碳酸二叔丁酯发生衍生化反应，加稀释液，得到葡甲胺衍生化产物溶液；
[0011] 采用反相高效液相色谱法对葡甲胺衍生化产物溶液进行检测，按面积归一化法计算葡甲胺中异构体的含量，得到葡甲胺样品中异构体的纯度，色谱条件如下：
[0012] 色谱柱：C18色谱柱；
[0013] 流动相A为体积百分含量0.05％～0.15％的
磷酸水溶液；
[0014] 流动相B为乙腈和甲醇的
混合液，乙腈与甲醇的体积比为(25～35)：(65～75)；
[0015] 梯度洗脱程序为：
[0016]洗脱时间 A相(％) B相(％)
0min 90 10
15min 70 30
16min 70 30
30min 20 80
[0017] 。
[0018] 葡甲胺及其异构体均无紫外吸收，在本发明中，采用衍生化方法使之紫外吸收增强，再通过反相液相色谱进行检测分析。
[0019] 作为优选，流动相A为体积百分含量0.1％的磷酸水溶液。
[0020] 作为优选，流动相B中，乙腈与甲醇的体积比为30：70。
[0021] 作为优选，C18色谱柱的填料粒径为3.0～5.0μm，色谱柱长为100～250mm，色谱柱直径为2.0～4.6mm。
[0022] 优选地，C18色谱柱为Agilent Eclipse Plus-C18，填料粒径为3.5μm，色谱柱长为100mm，色谱柱直径为4.6mm。
[0023] 作为优选，检测
波长为190～210nm。
[0024] 优选地，检测波长为200nm。
[0025] 作为优选，流速为0.8～1.2mL/min。
[0026] 优选地，流速为1.0mL/min。
[0027] 作为优选，柱温为28～32℃。
[0028] 优选地，柱温为30℃。
[0029] 作为优选，进样量为8～12μL。
[0030] 优选地，进样量为10μL。
[0031] 作为优选，碱性条件的调节
试剂为三乙胺。
[0032] 作为优选，稀释液为0.4vt％～0.6vt％磷酸水溶液与甲醇的混合液。
[0033] 作为优选，0.4vt％～0.6vt％磷酸水溶液与甲醇的体积比为(1～3)：(7～9)。
[0034] 作为优选，葡甲胺衍生化产物溶液的浓度为5～10mmol/L。
[0035] 优选地，稀释液为0.5vt％磷酸水溶液与甲醇的混合液。
[0036] 优选地，0.5vt％磷酸水溶液与甲醇的体积比为2：8。
[0037] 优选地，葡甲胺衍生化产物溶液的浓度为6～8mmol/L。
[0038] 本发明提供了一种葡甲胺中异构体的HPLC检测方法，该方法包括：在碱性条件下，将葡甲胺样品与二碳酸二叔丁酯发生衍生化反应，加稀释液，得到葡甲胺衍生化产物溶液；采用反相高效液相色谱法对葡甲胺衍生化产物溶液进行检测，按面积归一化法计算葡甲胺中异构体的含量，得到葡甲胺样品中异构体的纯度，色谱条件如下：C18色谱柱；流动相A为体积百分含量0.05％～0.15％的磷酸水溶液；流动相B为乙腈和甲醇的混合液，乙腈与甲醇的体积比为(25～35)：(65～75)；梯度洗脱。有益效果如下：
[0039] 本方法提供一种衍生化方法，利用反相高效液相色谱与紫外联用对衍生化后的葡甲胺进行异构体分析，并建立了对葡甲胺衍
生物的异构体测定的高效液相色谱分析方法。可对葡甲胺原料药中可能产生的异构体进行监控，保证用药安全。
附图说明
[0040] 图1：葡甲胺及葡甲胺异构体衍生化后混合物色谱图；
[0041] 图2：葡甲胺衍生化后色谱图；
[0042] 图3：葡甲胺异构体衍生化后色谱图。
具体实施方式
[0043] 本发明公开了一种葡甲胺中异构体的HPLC检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳
实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0044] 本发明提供的葡甲胺中异构体的HPLC检测方法中所用原料药、试剂或仪器均可由市场购得。
[0045] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0046] 实施例1：葡甲胺与葡甲胺异构体衍生化产物的液相色谱分析
[0047] 高效液相色谱仪：安捷伦1260-VWD检测器；
[0048] 流动相：A相：0.1％磷酸水溶液(V/V)；
[0049] B相：乙腈：甲醇＝30：70(V/V)；
[0050] 洗脱梯度：
[0051] 表1洗脱梯度程序
[0052]洗脱时间 A相(％) B相(％)
0min 90 10
15min 70 30
16min 70 30
30min 20 80
[0053] 色谱柱：Agilent Eclipse Plus-C18 4.6×100mm，3.5μm；
[0054] 检测波长：200nm；
[0055] 流速：1.0mL/min；
[0056] 柱温：30℃；
[0057] 进样量：10μL；
[0058] 稀释液：0.5％磷酸水：甲醇＝2：8；
[0059] 样品溶液配制：精密称取葡甲胺约130mg，置于50mL玻璃瓶中，加0.8mL水溶解样品，加入1.6mL三乙胺丙
酮溶液(101mg/mL)，再加入0.8mL(BOC)2O丙酮溶液(500mg/mL)和1.0mL丙酮溶液，室温搅拌反应20分钟结束。加稀释液溶解并稀释至刻度，混匀。
[0060] 异构体溶液配制：精密称取葡甲胺异构体约130mg，置于50mL玻璃瓶中，加0.8mL水溶解样品，加入1.6mL三乙胺丙酮溶液(101mg/mL)，再加入0.8mL(BOC)2O丙酮溶液(500mg/mL)和1.0mL丙酮溶液，室温搅拌反应20分钟结束。加稀释液溶解并稀释至刻度，混匀。
[0061] 混合溶液配制：精密称取样品约130mg，置于50mL玻璃瓶中，加0.8mL水溶解样品，加入1.6mL三乙胺丙酮溶液(101mg/mL)，再加入0.8mL(BOC)2O丙酮溶液(500mg/mL)和1.0mL丙酮溶液，室温搅拌反应20分钟结束。精密移取0.5mL异构体溶液置上述容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，混匀。
[0062] 检测结果：结果参见附图1-3，其中，RT＝10.7min为葡甲胺衍生化产物的峰，RT＝11.3min为葡甲胺异构体衍生化产物的峰。
[0063] 对比例1：葡甲胺与葡甲胺异构体衍生化产物的液相色谱分析
[0064] 高效液相色谱仪：安捷伦1260-VWD检测器；
[0065] 流动相：A相：0.1％磷酸水溶液(V/V)；
[0066] B相：乙腈：甲醇＝30：70(V/V)；
[0067] 洗脱梯度：
[0068] 表2洗脱梯度程序
[0069]洗脱时间 A相(％) B相(％)
0min 90 10
15min 46 54
25min 5 95
28min 5 95
[0070] 色谱柱：Agilent Eclipse Plus-C18 4.6×100mm，3.5μm；
[0071] 检测波长：200nm；
[0072] 流速：1.0mL/min；
[0073] 柱温：30℃；
[0074] 进样量：10μL；
[0075] 稀释液：0.5％磷酸水：甲醇＝2：8；
[0076] 异构体溶液配制：精密称取葡甲胺异构体约130mg，置于50mL玻璃瓶中，加0.8mL水溶解样品，加入1.6mL三乙胺丙酮溶液(101mg/mL)，再加入0.8mL(BOC)2O丙酮溶液(500mg/mL)和1.0mL丙酮溶液，室温搅拌反应20分钟结束。加稀释液溶解并稀释至刻度，混匀。
[0077] 混合溶液配制：精密称取样品约130mg，置于50mL玻璃瓶中，加0.8mL水溶解样品，加入1.6mL三乙胺丙酮溶液(101mg/mL)，再加入0.8mL(BOC)2O丙酮溶液(500mg/mL)和1.0mL丙酮溶液，室温搅拌反应20分钟结束。精密移取0.5mL异构体溶液置上述容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，混匀。
[0078] 检测结果显示：葡甲胺衍生化产物峰(RT＝7.9min)与葡甲胺异构体衍生化产物峰(RT＝8.0min)，两个峰的分离度为1.2。
[0079] 对比例2：葡甲胺与葡甲胺异构体衍生化产物的液相色谱分析
[0080] 高效液相色谱仪：安捷伦1260-VWD检测器；
[0081] 流动相：A相：0.1％磷酸水溶液(V/V)；
[0082] B相：乙腈：甲醇＝30：70(V/V)；
[0083] 洗脱梯度：
[0084] 表3洗脱梯度程序
[0085]洗脱时间 A相(％) B相(％)
0min 90 10
15min 46 54
25min 5 95
28min 5 95
[0086] 色谱柱：Agilent ZORBAXSB-C18 4.6×250mm，5μm；
[0087] 检测波长：200nm；
[0088] 流速：1.0mL/min；
[0089] 柱温：30℃；
[0090] 进样量：10μL；
[0091] 稀释液：0.5％磷酸水：甲醇＝2：8；
[0092] 异构体溶液配制：精密称取葡甲胺异构体约130mg，置于50mL玻璃瓶中，加0.8mL水溶解样品，加入1.6mL三乙胺丙酮溶液(101mg/mL)，再加入0.8mL(BOC)2O丙酮溶液(500mg/mL)和1.0mL丙酮溶液，室温搅拌反应20分钟结束。加稀释液溶解并稀释至刻度，混匀。
[0093] 混合溶液配制：精密称取样品约130mg，置于50mL玻璃瓶中，加0.8mL水溶解样品，加入1.6mL三乙胺丙酮溶液(101mg/mL)，再加入0.8mL(BOC)2O丙酮溶液(500mg/mL)和1.0mL丙酮溶液，室温搅拌反应20分钟结束。精密移取0.5mL异构体溶液置上述容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，混匀。
[0094] 检测结果：葡甲胺衍生化产物峰与葡甲胺异构体衍生化产物峰均拖尾，且分离不好。
[0095] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
