一种阴道微生物检测双重荧光染色液及其应用
阅读：2发布：2020-08-19
专利汇可以提供一种阴道微生物检测双重荧光染色液及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且发明 公开了一种 阴道 微 生物 检测双重 荧光 染色 液，所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液；所述的双重荧光染色液A液由荧光染色剂、辅助染色剂、染色液缓冲 试剂 、 抑菌剂 和 水 组成，双重荧光染色液B液由染色液缓冲试剂、 碱 性调节试剂、抗淬灭剂、抑菌剂和水组成。本发明具有操作流程简单，快速检测及病原微生物染色后容易观测识别的优点。并且本发明克服了血性标本、精液标本和基底层细胞标本等污染标本对检测结果的干扰，有效提高了准确性和检出率。，下面是一种阴道微生物检测双重荧光染色液及其应用专利的具体信息内容。
1.一种阴道微生物检测双重荧光染色液，其特征在于：所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液；所述的双重荧光染色液A液由荧光染色剂、辅助染色剂、染色液缓冲试剂、抑菌剂和水组成，双重荧光染色液B液由染色液缓冲试剂、碱性调节试剂、抗淬灭剂、抑菌剂和水组成。
2.根据权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液，其特征在于：所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为生物荧光染料，
所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂由主要组成成分和辅助染色剂组成，所述的主要组成成分为异硫氰酸荧光素FITC、Sybr Green I、Sybr Green Ⅱ、Light Green、Ever Green、碘化丙啶、吡啰红G、藻红素、多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物PerCP或溴化乙啶中的一种或几种的组合；辅助染色剂为果绿、甲基绿或亮绿中的一种或几种的组合。
3.根据权利要求2所述的阴道微生物检测双重荧光染色液，其特征在于：所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为Sybr Green I染色剂和PerCP染色剂，所述的Sybr Green I染色剂中的染料的体积比的范围为0.05-5000μL/L；所述的PerCP染色剂的质量浓度范围为
0.1-5000μg/L；
所述的辅助染色剂为甲基绿染色剂，所述的甲基绿染色剂的染料的质量浓度范围为1-
100mg/L。
4.根据权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液，其特征在于：所述的染色液缓冲试剂为乙酸-乙酸钠缓冲体系、磷酸盐缓冲体系或Tris-HCl缓冲体系中的一种或几种的组合；
双重荧光染色液A液为乙酸-乙酸钠缓冲体系，乙酸和乙酸钠的质量浓度分别为0.01-
100g/L和0.1-100g/L。
5.根据权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液，其特征在于：所述的双重荧光染色液B液中的染色液缓冲试剂为磷酸盐缓冲体系，所述的染色液缓冲试剂为无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠，所述的无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠的质量浓度分别为0.1-50g/L和0.1-200g/L。
6.根据权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液，其特征在于：所述的双重荧光染色液B液中碱性调节试剂为无机碱，所述的无机碱为氢氧化钾或氢氧化钠，所述的无机碱的质量浓度为1-500mg/L；
所述的抗淬灭剂为1,4-二偶氮双环[2,2,2]-辛烷、N-丙基没食子酸盐、甘油、对苯二胺或抗坏血酸中的一种或几种的组合；
所述的抑菌剂为硫柳汞、叠氮钠、Proclin 300或庆大霉素中的一种或几种的组合。
7.根据权利要求6所述的阴道微生物检测双重荧光染色液，其特征在于：所述的抗淬灭剂为甘油，抗淬灭剂的质量浓度为0.5-50g/L；所述的抑菌剂为Proclin 300，抑菌剂的质量浓度为0.01-10g/L。
8.权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液，其特征在于：所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液，所述的双重荧光染色液A液包括：
双重荧光染色液B液包括：
9.权利要求1所述的阴道微生物检测双重荧光染色液在阴道分泌物、宫颈脱落细胞样本中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：通过荧光染色剂对阴道分泌物样本、宫颈脱落细胞样本中的细胞和微生物进行特殊染色，实现区分上皮细胞、白细胞、细菌、真菌和滴虫。
一种阴道微生物检测双重荧光染色液及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及微生物荧光染色技术领域，尤其是涉及一种阴道微生物检测双重荧光染色液及其应用。
背景技术
[0002] 女性下生殖道共生着许多微生物菌群，对病原体的侵入有自然防御功能，但是当阴道的微生态失调、自然防御功能遭到破坏，病原体则易侵入，导致阴道炎、宫颈炎、盆腔炎等疾病的发生，增加了艾滋病和宫颈癌的风险；患有阴道炎的女性在怀孕时会影响精子的质量，甚至导致不孕；即使怀孕孕期也很容易引起宫内感染、产道感染等环节感染胎儿、新生儿，造成流产、早产、先天发育畸形、智力低下等严重后果。
[0003] 阴道微生物增殖感染引发的感染类型主要有细菌性阴道病、外阴阴道假丝酵母菌病、滴虫性阴道炎、需氧菌性阴道炎以及细胞溶解性阴道病等。细菌性阴道病是一种由阴道加德纳菌和一些厌氧菌的混合感染，导致阴道内微生态平衡失调，其中线索细胞阳性是细菌性阴道病诊断的一个重要指标。外阴阴道假丝酵母菌病是假丝酵母菌在一定条件下感染女性下生殖道引起的一种阴道炎症，其中80％-90％的外阴阴道假丝酵母菌病是由白假丝酵母菌增殖感染引起，所以观察阴道分泌物样本中真菌孢子、芽生孢子以及假菌丝是重要的镜检指标。滴虫性阴道炎主要是由阴道毛滴虫感染引起，是一种常见的性传播疾病。阴道毛滴虫呈梨形，长为10-30μm，适宜在25-40℃、pH5.5-6.6的潮湿环境下生长。镜检中阴道毛滴虫阳性是滴虫性阴道炎感染的诊断标准，临床样本送检过程中需要注意保温。
[0004] 国内医院常用的阴道分泌物检验方法为生理盐水湿片镜检，直接检查清洁度及有无滴虫和真菌菌丝。该方法操作简单方便，成本低但主观性强。该方法对于样本中的细胞以及微生物均没有染色效果，根据各成分的形态来辨别，但是由于整个涂片背景较复杂，有时候较难观察识别一些微小的微生物，如真菌类感染。而且对于滴虫感染，如果样本在送检过程中样本保存不当，如温度过低会导致滴虫死亡或活性较低，则在镜下不容易被观察到，容易造成漏诊。
[0005] 革兰氏染色也是目前部分医院采用的镜检染色方法之一，该方法可以清晰观察到样本中的微生物情况，如微生物的革兰氏阳性或阴性，但是该方法操作复杂，一般需进行4步染色方法，且染色过程中对于染色的技术要求较高，如脱色过程若过度脱色，则会造成结果的不准确，所以对医技人员要求较高。而且由于滴虫的形态和尺寸与白细胞、细胞核非常相近，因此极易造成对于滴虫检测的干扰。
[0006] 目前市面上出现一种对于阴道分泌物样本中的真菌、厌氧菌和毛滴虫的荧光染色产品，但该方法制片和染色复杂，需要在玻片上进行两次涂片以及两次染色，而且观察过程中还需要切换不同的显微镜光源，操作中比较繁琐。
[0007] 传统的微生物染色技术，直接湿片镜检镜下干扰物质较多，对于少量假丝酵母菌的孢子及滴虫很难观察；革兰氏检测对于滴虫检测灵敏度较差，极易造成漏检。免疫荧光技术也逐渐应用到阴道微生物检测中，但是该检测方法检测目标单一，对于未知样本需要同时进行多次检查，而且该检测方法操作步骤繁琐，耗时较长。干化学酶法同样对于病原菌较少感染的样本灵敏度较差，不利于早期发现，而且对于样本中常见的血性标本、精液标本和基底层细胞标本等污染标本检测准确性较低，容易误诊。PCR检测方法灵敏度高，但是操作流程复杂、费时，且需要昂贵的仪器和试剂。
发明内容
[0008] 本发明的目的是针对上述问题，提供一种快速检测阴道微生物的双重荧光染色液及其应用。
[0009] 为达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：本发明的一种阴道微生物检测双重荧光染色液，所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液；所述的双重荧光染色液A液由荧光染色剂、辅助染色剂、染色液缓冲试剂、抑菌剂和水组成，双重荧光染色液B液由染色液缓冲试剂、碱性调节试剂、抗淬灭剂、抑菌剂和水组成。
[0010] 进一步地，所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为生物荧光染料，[0011] 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂由主要组成成分和辅助染色剂组成，所述的主要组成成分为异硫氰酸荧光素FITC、Sybr Green I、Sybr GreenⅡ、Light Green、Ever Green、碘化丙啶PI、吡啰红G、藻红素、多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物PerCP或溴化乙啶中的一种或几种的组合；辅助染色剂为果绿、甲基绿或亮绿中的一种或几种的组合。
[0012] 进一步地，所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为Sybr Green I染色剂和PerCP染色剂，所述的Sybr Green I染色剂中的染料的体积比的范围为0.05-5000μL/L；所述的PerCP染色剂质量浓度范围为0.1-5000μg/L；
[0013] 所述的辅助染色剂为甲基绿染色剂，所述的甲基绿染色剂的染料的质量浓度范围为1-100mg/L。
[0014] 更进一步地，所述的染色液缓冲试剂为乙酸-乙酸钠缓冲体系、磷酸盐缓冲体系或Tris-HCl缓冲体系中的一种或几种的组合；
[0015] 双重荧光染色液A液为乙酸-乙酸钠缓冲体系，乙酸和乙酸钠的质量浓度分别为0.01-100g/L和0.1-100g/L。
[0016] 进一步地，所述的双重荧光染色液B液中的染色液缓冲试剂为磷酸盐缓冲体系，所述的染色液缓冲试剂为无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠，所述的无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠的质量浓度分别为0.1-50g/L和0.1-200g/L。
[0017] 进一步地，所述的双重荧光染色液B液中碱性调节试剂为无机碱，所述的无机碱为氢氧化钾或氢氧化钠，所述的无机碱的质量浓度为1-500mg/L；
[0019] 所述的抑菌剂为硫柳汞、叠氮钠、Proclin 300或庆大霉素中的一种或几种的组合。
[0020] 更进一步地，所述的抗淬灭剂为甘油，抗淬灭剂的质量浓度为0.5-50g/L；所述的抑菌剂为Proclin 300，抑菌剂的质量浓度为0.01-10g/L。
[0021] 进一步地，所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液，所述的双重荧光染色液A液包括：
[0022]
[0023] 双重荧光染色液B液包括：
[0024]
[0025] 本发明所述的阴道微生物检测双重荧光染色液在阴道分泌物、宫颈脱落细胞样本中的应用。
[0026] 进一步地，通过荧光染色剂对阴道分泌物样本中的细胞和微生物进行特殊染色，实现区分上皮细胞、白细胞、细菌、真菌和滴虫。
[0027] 有益效果：本发明具有操作流程简单，快速检测及病原微生物染色后容易观测识别的优点。并且本发明克服了血性标本、精液标本和基底层细胞标本等污染标本对检测结果的干扰，有效提高了准确性和检出率。
[0028] 本发明与现有技术相比，具有如下优点：
[0029] (1)本发明配制的阴道微生物检测双重荧光染色液是一款新型的快速阴道炎症感染检测产品，可用于检测新鲜或冰冻临床样本中真菌、细菌、滴虫以及线索细胞。染液中的荧光物质与样本中的目标物质结合，可以在荧光显微镜下观察到上皮细胞、白细胞、线索细胞、真菌、细菌以及滴虫的具体形态。
[0030] (2)本发明配制的阴道微生物检测双重荧光染色液对样本要求低，对于死亡或活性较低的滴虫性阴道炎样本依然可以进行染色，可以清晰看到滴虫形态结构。
[0031] (3)本发明配制的阴道微生物检测双重荧光染色液对血性标本、精液标本和基底层细胞标本等污染标本染色无影响，成熟红细胞在荧光显微镜下不显色且精子和底层细胞染色后结构清晰，可以准确识别。附图说明
[0032] 图1为本发明的实施例4外阴阴道假丝酵母菌感染样本染色结果图；
[0033] 图2为本发明的实施例4外阴阴道假丝酵母菌感染样本染色结果图；
[0034] 图3为本发明的实施例4外阴阴道假丝酵母菌感染样本染色结果图；
[0035] 图4为本发明的实施例4外阴阴道假丝酵母菌感染样本染色结果图；
[0036] 图5为本发明的实施例4外阴阴道假丝酵母菌感染样本染色结果图；
[0037] 图6为本发明的实施例4滴虫感染样本染色观察结果图；
[0038] 图7为本发明的实施例4细菌性阴道病样本染色结果图；
[0039] 图8为本发明的外阴阴道假丝酵母菌感染样本传统湿片法观察结果图；
[0040] 图9为本发明的滴虫感染样本传统湿片法观察结果图；
[0041] 图10为本发明的细菌性阴道病传统湿片法观察结果图；
[0042] 图11为本发明的外阴阴道假丝酵母菌感染样本革兰氏染色结果；
[0043] 图12为本发明的滴虫感染样本革兰氏染色结果；
[0044] 图13为本发明的细菌性阴道病样本革兰氏染色结果。
具体实施方式
[0045] 以下对本发明原理和特征进行实例描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
[0046] 本发明实施例的试剂原料来源如表1所示。
[0047] 表1
[0048]
[0049]
[0050] 实施例1
[0051] 双重荧光染色液1
[0052] 1.配方组成如表2所示。
[0053] 表2
[0054]
[0055]
[0056] 2.配制方法如下：
[0057] 染色液A液配制：
[0058] 精密分析天平称取配方量的乙酸钠，加入配方中所述质量纯化水溶解。溶解后加入配方量的乙酸溶液，混合均匀。依次加入配方量的甲基绿、Sybr Green I、PerCP、Proclin 300。所以试剂加入完毕后，将混合溶液持续搅拌至完全溶解，分装至干净容器中避光保存。
[0059] 染色液B液配制：
[0060] 精密分析天平称取配方量的十二水合磷酸氢二钠，加入配方中所述质量纯化水溶解。溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠，混合均匀。依次加入配方量的氢氧化钠、甘油、Proclin 300。所有试剂加入完毕后，将混合溶液持续搅拌至完全溶解，分装至干净容器中保存。
[0061] 实施例2
[0062] 双重荧光染色液2
[0063] 1.配方组成如表3所示。
[0064] 表3
[0065]
[0066]
[0067] 2.配制方法如下：
[0068] 染色液A液配制：精密分析天平称取配方量的乙酸钠，加入配方中所述质量纯化水溶解。溶解后加入配方量的乙酸溶液，混合均匀。依次加入配方量的甲基绿、Sybr Green I、PerCP、Proclin 300。所以试剂加入完毕后，将混合溶液持续搅拌至完全溶解，分装至干净容器中避光保存。
[0069] 染色液B液配制：
[0070] 精密分析天平称取配方量的十二水合磷酸氢二钠，加入配方中所述质量纯化水溶解。溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠，混合均匀。依次加入配方量的氢氧化钠、甘油、Proclin 300。所有试剂加入完毕后，将混合溶液持续搅拌至完全溶解，分装至干净容器中保存。
[0071] 实施例3
[0072] 双重荧光染色液3
[0073] 1.配方组成如表4所示。
[0074] 表4
[0075]
[0076]
[0077] 2.配制方法如下：
[0078] 染色液A液配制：
[0079] 精密分析天平称取配方量的十二水合磷酸氢二钠，加入配方中所述质量纯化水溶解。溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠，混合均匀。依次加入配方量的异硫氰酸荧光素、碘化丙啶、果绿、Proclin 300。所有试剂加入完毕后，将混合溶液持续搅拌至完全溶解，分装至干净容器中避光保存。
[0080] 染色液B液配制：
[0081] 精密分析天平称取配方量的十二水合磷酸氢二钠，加入配方中所述质量纯化水溶解。溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠，混合均匀。依次加入配方量的氢氧化钠、甘油、Proclin 300。所以试剂加入完毕后，将混合溶液持续搅拌至完全溶解，分装至干净容器中保存。
[0082] 实施例4
[0083] 双重荧光染色液4
[0084] 1.配方组成如表5所示。
[0085] 表5
[0086]
[0087]
[0088] 2.配制方法如下：
[0089] 染色液A液配制：
[0090] 精密分析天平称取配方量的十二水合磷酸氢二钠，加入配方中所述质量纯化水溶解。溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠，混合均匀。依次加入配方量的异硫氰酸荧光素、碘化丙啶、果绿、Proclin 300。所有试剂加入完毕后，将混合溶液持续搅拌至完全溶解，分装至干净容器中避光保存。
[0091] 染色液B液配制：
[0092] 精密分析天平称取配方量的十二水合磷酸氢二钠，加入配方中所述质量纯化水溶解。溶解后加入配方量的无水磷酸二氢钠，混合均匀。依次加入配方量的氢氧化钠、甘油、Proclin 300。所以试剂加入完毕后，将混合溶液持续搅拌至完全溶解，分装至干净容器中保存。
[0093] 实施例5
[0094] 本发明的一种阴道微生物检测双重荧光染色液，所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液。所述的双重荧光染色液A液由荧光染色剂、辅助染色剂、染色液缓冲试剂、抑菌剂和水组成，双重荧光染色液B液由染色液缓冲试剂、碱性调节试剂、抗淬灭剂、抑菌剂和水组成。
[0095] 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为生物荧光染料，
[0096] 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂由主要组成成分和辅助染色剂组成，所述的主要组成成分为Sybr Green I、异硫氰酸荧光素FITC、碘化丙啶PI、吡啰红G、藻红素、溴化乙啶中的六种的组合；其他辅助染色剂为果绿。
[0097] 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为Sybr Green I染色剂和PerCP染色剂，所述的Sybr Green I染色剂中的染料的体积比为0.05μL/L；所述的PerCP染色剂质量浓度为5000μg/L。
[0098] 所述的染色液缓冲试剂为乙酸-乙酸钠缓冲体系；
[0099] 双重荧光染色液A液为乙酸-乙酸钠缓冲体系，乙酸和乙酸钠的质量浓度分别为0.01g/L和80g/L。
[0100] 所述的双重荧光染色液B液中的染色液缓冲试剂为磷酸盐缓冲体系，所述的染色液缓冲试剂为无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠，所述的无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠的质量浓度分别为50g/L和0.1g/L；
[0101] 所述的其他辅助染色剂为甲基绿染色剂，所述的甲基绿染色剂的染料的质量浓度为100mg/L。
[0102] 所述的双重荧光染色液B液中碱性调节试剂为无机碱，所述的无机碱为氢氧化钾，所述的无机碱的质量浓度为1mg/L；
[0103] 所述的抗淬灭剂为1,4-二偶氮双环[2,2,2]-辛烷、N-丙基没食子酸盐、甘油、对苯二胺和抗坏血酸中的五种的组合；
[0104] 所述的抑菌剂为硫柳汞、叠氮钠和Proclin 300中的三种的组合。
[0105] 所述的抗淬灭剂为甘油，抗淬灭剂的质量浓度为0.5g/L；所述的抑菌剂为Proclin 300，抑菌剂的质量浓度为10g/L。
[0106] 本发明所述的阴道微生物检测双重荧光染色液在阴道分泌物、宫颈脱落细胞样本中的应用。
[0107] 通过荧光染色剂对阴道分泌物样本中的细胞和微生物进行特殊染色，实现区分上皮细胞、白细胞、细菌、真菌和滴虫。
[0108] 实施例6
[0109] 实施例6与实施例5的区别在于：
[0110] 本发明的一种阴道微生物检测双重荧光染色液，所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液。
[0111] 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为生物荧光染料，
[0112] 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂由主要组成成分和辅助染色剂组成，所述的主要组成成分为异硫氰酸荧光素FITC、Sybr GreenⅡ、Light Green、Ever Green、多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物PerCP和溴化乙啶中的六种的组合；辅助染色剂为甲基绿和亮绿中的两种的组合。
[0113] 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为Sybr Green I染色剂和PerCP染色剂，所述的Sybr Green I染色剂中的染料的体积比为5000μL/L；所述的PerCP染色剂质量浓度为0.1μg/L。
[0114] 所述的染色液缓冲试剂为Tris-HCl缓冲体系；
[0115] 双重荧光染色液A液为乙酸-乙酸钠缓冲体系，乙酸和乙酸钠的质量浓度分别为90g/L和100g/L。
[0116] 所述的双重荧光染色液B液中的染色液缓冲试剂为磷酸盐缓冲体系，所述的染色液缓冲试剂为无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠，所述的无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠的质量浓度分别为0.1g/L和100g/L；
[0117] 所述的辅助染色剂为甲基绿染色剂，所述的甲基绿染色剂的染料的质量浓度为1mg/L。
[0118] 所述的双重荧光染色液B液中碱性调节试剂为无机碱，所述的无机碱为氢氧化钠，所述的无机碱的质量浓度为100mg/L；
[0119] 所述的抗淬灭剂为1,4-二偶氮双环[2,2,2]-辛烷、N-丙基没食子酸盐、甘油、对苯二胺或抗坏血酸中的一种或几种的组合；
[0120] 所述的抑菌剂为叠氮钠和庆大霉素中的两种的组合。
[0121] 所述的抗淬灭剂为甘油，抗淬灭剂的质量浓度为50g/L；所述的抑菌剂为Proclin 300，抑菌剂的质量浓度为0.01g/L。
[0122] 实施例7
[0123] 实施例7与实施例5的区别在于：
[0124] 本发明的一种阴道微生物检测双重荧光染色液，所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液。
[0125] 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为生物荧光染料，
[0126] 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂由主要组成成分和辅助染色剂组成，所述的主要组成成分为Sybr Green I、吡啰红G或溴化乙啶中的三种的组合；辅助染色剂为甲基绿。
[0127] 所述的双重荧光染色液A液中荧光染色剂为Sybr Green I染色剂和PerCP染色剂，所述的Sybr Green I染色剂中的染料的体积比为3000μL/L；所述的PerCP染色剂质量浓度为0.1μg/L。
[0128] 双重荧光染色液A液为乙酸-乙酸钠缓冲体系，乙酸和乙酸钠的质量浓度分别为100g/L和0.1g/L。
[0129] 所述的双重荧光染色液B液中的染色液缓冲试剂为磷酸盐缓冲体系，所述的染色液缓冲试剂为无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠，所述的无水磷酸二氢钠和十二水合磷酸氢二钠的质量浓度分别为30g/L和200g/L；
[0130] 所述的辅助染色剂为甲基绿染色剂，所述的甲基绿染色剂的染料的质量浓度为80mg/L。
[0131] 所述的双重荧光染色液B液中碱性调节试剂为无机碱，所述的无机碱为氢氧化钾，所述的无机碱的质量浓度为500mg/L；
[0132] 所述的抗淬灭剂为1,4-二偶氮双环[2,2,2]-辛烷、N-丙基没食子酸盐中的两种的组合；
[0133] 所述的抑菌剂为庆大霉素。
[0134] 所述的抗淬灭剂为甘油，抗淬灭剂的质量浓度为30g/L；所述的抑菌剂为Proclin 300，抑菌剂的质量浓度为8g/L。
[0135] 实施例8
[0136] 本发明所述的阴道微生物检测双重荧光染色液，所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液，所述的双重荧光染色液A液包括：
[0137]
[0138]
[0139] 双重荧光染色液B液包括：
[0140]
[0141] 实施例9
[0142] 实施例9与实施例8的区别在于：
[0143] 本发明所述的阴道微生物检测双重荧光染色液，所述的阴道微生物检测双重荧光染色液包括独立的双重荧光染色液A液和双重荧光染色液B液，所述的双重荧光染色液A液包括：
[0144]
[0145] 双重荧光染色液B液包括：
[0146]
[0147]
[0148] 试验例1
[0149] 临床分泌物样本的染色
[0150] 选择确诊的外阴阴道假丝酵母菌病、滴虫性阴道炎、细菌性阴道病样本，向取样拭子所在试管中加入适量的生理盐水，振荡后将拭子涂抹在载玻片上。将载玻片置于温度为60-70℃加热台上，样本干燥后取下干片备用。将上述双重荧光染色液中配制的A液分别滴加到不同类型样本玻片上，覆盖样本后静置15-30s，纯化水冲洗玻片除去A液。待玻片上水分稍干燥后分别滴加1滴双重荧光染色液的B液，盖上盖玻片，使用吸水纸吸去多余染色液。
选择波长为450nm-500nm的蓝光作为激发光，置于生物(荧光)显微镜物镜下，进行直接镜检。上述不同样本经实施例1-4中染色液染色后效果描述如下表6所示。
选择波长为450nm-500nm的蓝光作为激发光，置于生物(荧光)显微镜物镜下，进行直接镜检。上述不同样本经实施例1-4中染色液染色后效果描述如下表6所示。
[0151] 表6
[0152]
[0153] 实施例1-4中染色液对于部分临床样本的染色效果分别如下图1、图2、图3、图4所示。
[0154] 试验例2
[0155] 120例临床标本检测阳性率对比
[0156] 对120例患者的标本分别采用本发明实施例1中的配方和背景技术中所述湿片法以及革兰氏染色方法进行检测，结果如下表7所示：
[0157] 表7
[0158]
[0159] 利用本发明的阴道微生物检测荧光染色液对临床阴道分泌物样本进行染色，本产品染色结果(图5、图6、图7)真菌、滴虫以及线索细胞辨识度高，形态清晰；湿片法镜下结果(图8、图9、图10)杂质较多，且真菌孢子不好辨认，查找效率低且干扰物质较多；革兰氏染色结果(图11、图12、图13)，真菌孢子和线索细胞比湿片效果好一点，但是仍然没有荧光染色呈现效果好，荧光染色可以清晰的看到内部核，而且革兰氏染色中滴虫形态辨认困难。从而验证了本发明的阴道微生物检测荧光染色液的优越性和有效性，本发明染色液显著提高了阳性检出率。
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