一种药物在制备降低LL‑37表达的药物中的应用
阅读：547发布：2024-01-07
专利汇可以提供一种药物在制备降低LL‑37表达的药物中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种药物在制备降低LL‑37表达的药物中的应用，所述药物由如下重量份的 原料药 制成：黄芪100‑150重量份，党参80‑120重量份，丹参60‑100重量份，葛根60‑100重量份，淫羊藿60‑100重量份，山楂60‑100重量份，地黄40‑80重量份，当归40‑80重量份，黄连40‑80重量份，醋延胡索40‑80重量份，灵芝40‑80重量份，人参20‑30重量份，炙甘草20‑30重量份。本发明的药物组合物能降低不稳定型心绞痛患者 外周血单个核细胞 细胞上清液中LL‑37的浓度。，下面是一种药物在制备降低LL‑37表达的药物中的应用专利的具体信息内容。
1.一种药物在制备降低LL-37表达的药物中的应用，其特征是，所述药物由如下重量份的原料药制成：
黄芪100-150重量份，党参80-120重量份，丹参60-100重量份，葛根60-100重量份，淫羊藿60-100重量份，山楂60-100重量份，地黄40-80重量份，当归40-80重量份，黄连40-80重量份，醋延胡索40-80重量份，灵芝40-80重量份，人参20-30重量份，炙甘草20-30重量份。
2.权利要求1所述的应用，其特征在于：所述降低LL-37表达是指降低血液单个核细胞细胞上清液中LL-37的浓度。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征是，所述药物由如下重量份的原料药制成：
4.如权利要求1或2所述的应用，其特征是，所述药物由如下重量份的原料药制成：
5.如权利要求1或2所述的应用，其特征是，所述药物由如下重量份的原料药制成：
6.如权利要求1或2所述的应用，其特征是，所述药物由如下重量份的原料药制成：
7.如权利要求1或2所述的应用，其特征是，所述药物的制备方法包括以下步骤：取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山楂与一半量的黄芪，粉碎成细粉，其余八味原料药与剩余黄芪加水煎煮1-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90-95℃时相对密度为1.05～
1.15，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩至90-95℃时相对密度为
1.15～1.25的清膏，与上述药粉混合，制成片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、滴丸、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。
8.如权利要求7所述的应用，其特征是，所述药物的制备方法包括以下步骤：取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山楂与一半量的黄芪，粉碎成细粉，其余八味原料药与剩余黄芪加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90℃时相对密度为1.06～1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩至90℃时相对密度为1.20～1.22的清膏，与上述药粉混合，制成片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、滴丸、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。
9.如权利要求1或2所述的应用，其特征是，所述药物的滴丸制剂的制备方法包括如下步骤：
取原料药，用10重量倍的水浸60分钟，煮沸2小时，取出药液，药渣再加8重量倍的水煎煮90分钟，合并二次药液，滤过；药液通过已处理好的JD-1大孔吸附树脂柱，树脂用量为原料药重量的1.5倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清后，用树脂重量3倍的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，后用1.5体积倍水冲洗，合并洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.08-1.15，喷雾干燥，得提取物喷雾干燥药粉，加入常规辅料制备得滴丸。
10.如权利要求9所述的应用，其特征是，所述喷雾干燥的条件为：进料速度为35—
40ml/min，雾化速度：25000—35000rpm，进风温度：130—160℃，出风温度：70—80℃。
11.如权利要求10所述的应用，其特征是，所述喷雾干燥的条件为：进料速度为37ml/min，雾化速度：30000rpm，进风温度：145～147℃，出风温度：71～76℃。
12.如权利要求9所述的应用，其特征是，在得提取物物喷雾干燥药粉后，按如下方法制备成滴丸：
称取聚乙二醇-4000，于80-85℃下水浴至彻底溶胀，加入上述提取物喷雾干燥药粉，加入比例为药粉：聚乙二醇-4000＝1：4，于85℃下保温搅拌均匀，使药粉完全溶解分散在聚乙二醇-4000中；移入滴丸机中，保持滴距和滴温，调整滴制参数为：油浴温度：85℃，药液温度：80℃，滴盘温度：87℃，制冷温度：12℃，管口温度：37℃，滴头口径为：3mm/5mm，滴速：1滴/2秒—1滴/5秒；调节开关使液滴适速滴入冷凝剂二甲基硅油或液体石蜡中，药滴经过冷凝收缩成滴丸，收集滴丸，以转速1500-3000转/分离心脱油，再进入筛选干燥机进行筛选干燥，即得本发明药物滴丸。
一种药物在制备降低LL-37表达的药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及一种药物的新用途，具体地，本发明涉及一种药物在制备降低LL-37表达的药物中的应用，属于中药应用领域。
背景技术
[0002] 抗菌性多肽是由高等生物体的多种组织和细胞产生的具有不同序列、不同结构的阳离子兼性肽。人体内的抗菌性多肽分为：防御素和组织蛋白酶抑制剂，LL-37是目前为止在人体内发现的唯一一种组织蛋白酶抑制素类抗菌性多肽，是由人阳离子微生物蛋白18在丝氨酸蛋白酶3的酶解作用下产生的活性C端片段，有37个氨基酸残基且N端前两个氨基酸均为亮氨酸(L)，故称其为LL-37.。LL-37作为天然免疫系统的重要组成部分，不仅具有广谱的抗菌特性，还具有其他广泛的生物学作用，如：调节免疫、调节炎症反应、调控凋亡及参与组织修复中的信号通路等，所以也可以称其为免疫调节剂。
发明内容
[0005] 本发明的目的是提供一种药物在制备降低LL-37表达的药物中的应用，所述药物由如下重量份的原料药制成：
[0006] 黄芪100-150重量份，党参80-120重量份，丹参60-100重量份，葛根60-100重量份，淫羊藿60-100重量份，山楂60-100重量份，地黄40-80重量份，当归40-80重量份，黄连40-80重量份，醋延胡索40-80重量份，灵芝40-80重量份，人参20-30重量份，炙甘草20-30重量份。
[0007] 所述降低LL-37表达是指降低血液单个核细胞细胞上清液中LL-37的浓度。
[0008] 优选的，该药物由如下重量份的原料药制成：
[0009]
[0010] 或，
[0011]
[0012] 或，
[0013]
[0014] 或，
[0015]
[0016] 取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、滴丸、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。
[0017] 本发明药物的制备方法包括如下步骤：
[0018] 取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山楂与一半量的黄芪，粉碎成细粉，其余八味原料药与剩余黄芪加水煎煮1-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90-95℃时相对密度为1.05～1.15，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩至90-95℃时相对密度为1.15～1.25的清膏，与上述药粉混合，制成片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、滴丸、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。
[0019] 本发明药物的制备方法优选包括如下步骤：
[0020] 取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山楂与一半量的黄芪，粉碎成细粉，其余八味原料药与剩余黄芪加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90℃时相对密度为1.06～1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩至90℃时相对密度为1.20～1.22的清膏，与上述药粉混合，制成片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、滴丸、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。
[0021] 本发明药物制剂中滴丸的制备方法包括如下步骤：
[0022] 取原料药，用8-12重量倍的水浸40-80分钟，煮沸1-3小时，取出药液，药渣再加6-10重量倍的水煎煮70-110分种，合并二次药液，滤过；药液通过已处理好的JD-1(WLD)大孔吸附树脂柱，树脂用量为原料药重量的1-3倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清后，用树脂重量2-4倍的60-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，后用1-2体积倍水冲洗，合并洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.05-1.20，喷雾干燥，得提取物喷雾干燥药粉，加入常规辅料制备得滴丸。
[0023] 本发明药物制剂中滴丸的制备方法优选包括如下步骤：
[0024] 取原料药，用10重量倍的水浸60分钟，煮沸2小时，取出药液，药渣再加8重量倍的水煎煮90分钟，合并二次药液，滤过；药液通过已处理好的JD-1(WLD)大孔吸附树脂柱，树脂用量为原料药重量的1.5倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清后，用树脂重量3倍的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，后用1.5体积倍水冲洗，合并洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.08-1.15，喷雾干燥，得提取物喷雾干燥药粉，加入常规辅料制备得滴丸。
[0026] 其中，上述制备方法中喷雾干燥的条件控制优选为：进料速度为37ml/min，雾化速度：30000rpm，进风温度：145～147℃，出风温度：71～76℃。
[0027] 其中，上述制备方法中得提取物后，滴丸的制备方法还可以为：称取聚乙二醇-4000，于60-90℃下水浴至彻底溶胀，加入上述提取物喷雾干燥药粉，加入质量比例为药粉∶聚乙二醇-4000＝1∶2-6，于80-90℃下保温搅拌均匀，使药粉完全溶解分散在聚乙二醇-
4000中；移入滴丸机中，保持滴距和滴温，调整滴制参数为：油浴温度：80-90℃，药液温度：
75-85℃，滴盘温度：85-90℃，制冷温度：10-15℃，管口温度：35-40℃，滴头口径为：3mm/
5mm，滴速：1滴/1秒-1滴/7秒；调节开关使液滴适速滴入冷凝剂二甲基硅油或液体石蜡中，药滴经过冷凝收缩成滴丸，收集滴丸，以转速1000-4000转/分离心脱油，再进入筛选干燥机进行筛选干燥，即得本发明药物滴丸。
4000中；移入滴丸机中，保持滴距和滴温，调整滴制参数为：油浴温度：80-90℃，药液温度：
75-85℃，滴盘温度：85-90℃，制冷温度：10-15℃，管口温度：35-40℃，滴头口径为：3mm/
5mm，滴速：1滴/1秒-1滴/7秒；调节开关使液滴适速滴入冷凝剂二甲基硅油或液体石蜡中，药滴经过冷凝收缩成滴丸，收集滴丸，以转速1000-4000转/分离心脱油，再进入筛选干燥机进行筛选干燥，即得本发明药物滴丸。
[0028] 其中，上述制备方法中得提取物后，滴丸的制备方法还可以优选为：
[0029] 称取聚乙二醇-4000，于80-85℃下水浴至彻底溶胀，加入上述提取物喷雾干燥药粉，加入质量比例为药粉∶聚乙二醇-4000＝1∶4，于85℃下保温搅拌均匀，使药粉完全溶解分散在聚乙二醇-4000中；移入滴丸机中，保持滴距和滴温，调整滴制参数为：油浴温度：85℃，药液温度：80℃，滴盘温度：87℃，制冷温度：12℃，管口温度：37℃，滴头口径为：3mm/5mm，滴速：1滴/2秒-1滴/5秒；调节开关使液滴适速滴入冷凝剂二甲基硅油或液体石蜡中，药滴经过冷凝收缩成滴丸，收集滴丸，以转速1500-3000转/分离心脱油，再进入筛选干燥机进行筛选干燥，即得本发明药物滴丸。
[0030] 本发明的有益效果为：
[0031] 本发明的药物组合物能降低不稳定型心绞痛患者外周血单个核细胞细胞上清液中LL-37的浓度，其中50mg/L组LL-37浓度最低(253.77±22.26)ng/ml，对照组为(402.31±18.04)ng/ml，10mg/L组为(301.54±14.18)ng/ml，差异有统计学意义(P＜0.01)。
附图说明：
附图说明：
[0032] 图1：西雅图心绞痛评分与冠心病患者血清LL-37的相关性分析。
具体实施方式
[0033] 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0034] 实施例1：
[0035] 用于降低LL-37表达的药物片剂由如下重量份的原料药制成：
[0036]
[0037]
[0038] 所述药物片剂的制备方法，包括以下步骤：取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山楂与一半量的黄芪，粉碎成细粉，其余八味原料药与剩余黄芪加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90℃时相对密度为1.06～1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩至90℃时相对密度为1.20～1.22的清膏，与上述药粉混合，制成颗粒，干燥，压制成1000片(小片)，包糖衣或薄膜衣片，或压制成500片(大片)，包薄膜衣，即得。小片每片重0.3g，每日服用3次，一次4～6片；大片每片重0.6g，每日服用3次，一次2～3片。
[0039] 用于制备降低LL-37表达的药物。降低LL-37表达的
[0040] 实施例2：
[0041] 用于降低LL-37表达的药物胶囊剂由如下重量份的原料药制成：
[0042]
[0043] 所述药物胶囊剂的制备方法，包括以下步骤：取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山楂与一半量的黄芪，粉碎成细粉，其余八味原料药与剩余黄芪加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90℃时相对密度为1.06～1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩至90℃时相对密度为1.20～1.22的清膏，与上述药粉混合，制成胶囊剂。
[0044] 用于制备降低LL-37表达的药物，所述降低LL-37表达是指降低血液单个核细胞上清液中LL-37的浓度。
[0045] 实施例3：
[0046] 用于降低LL-37表达的药物颗粒剂由如下重量份的原料药制成：
[0047]
[0048] 所述药物颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山楂与一半量的黄芪，粉碎成细粉，其余八味原料药与剩余黄芪加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90℃时相对密度为1.06～1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩至90℃时相对密度为1.20～1.22的清膏，与上述药粉混合，制成颗粒剂。用于制备降低LL-37表达的药物，降低LL-37表达是指降低血液单个核细胞细胞上清液中LL-37的浓度。
[0049] 实施例4：
[0050] 用于降低LL-37表达的药物丸剂由如下重量份的原料药制成：
[0051]
[0052] 所述药物丸剂的制备方法，包括以下步骤：取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成丸剂。用于制备抗动脉粥样硬化药物、具有明显的抗动脉粥样硬化的作用。
[0053] 用于制备降低LL-37表达的药物，所述降低LL-37表达是指降低血液单个核细胞细胞上清液中LL-37的浓度。
[0054] 实施例5：
[0055] 用于降低LL-37表达的药物口服液由如下重量份的原料药制成：
[0056]
[0057] 所述药物口服液的制备方法，包括以下步骤：取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成口服液。用于制备抗动脉粥样硬化药物、具有明显的抗动脉粥样硬化的作用。用于制备降低LL-37表达的药物，所述降低LL-37表达是指降低血液单个核细胞细胞上清液中LL-37的浓度。
[0058] 实施例6：
[0059] 用于降低LL-37表达的药物注射剂由如下的原料药制成：
[0060]
[0061] 所述药物注射剂的制备方法，包括以下步骤：取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射剂。用于制备抗动脉粥样硬化药物、具有明显的抗动脉粥样硬化的作用。用于制备降低LL-37表达的药物，所述降低LL-37表达是指降低血液单个核细胞细胞上清液中LL-37的浓度。
[0062] 实施例7：
[0063] 用于降低LL-37表达的药物滴丸由如下重量份的原料药制成：
[0064]
[0065] 所述药物滴丸的制备方法，包括以下步骤：
[0066] 取原料药，用10重量倍的水浸60分钟，煮沸2小时，取出药液，药渣再加8重量倍的水煎煮90分钟，合并二次药液，滤过；药液通过已处理好的JD-1(WLD)大孔吸附树脂柱，树脂用量为原料药重量的1.5倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清后，用树脂重量3倍的70％乙醇洗脱，收集洗脱液，后用1.5体积倍水冲洗，合并洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.08-1.15，喷雾干燥，得提取物喷雾干燥药粉，加入常规辅料制备得滴丸，丸重49-52mg/粒，口服，一次10粒，一日3次。用于制备降低LL-37表达的药物，所述降低LL-37表达是指降低血液单个核细胞细胞上清液中LL-37的浓度。
[0067] 实验例1：
[0068] 为阐明本发明药物降低LL-37表达的效果，用按上述实施例1方法制备得到的片剂(以下称本发明药物)进行下列实验以证明其疗效，但不能对本发明的范围构成任何限制。
[0069] 一.研究对象和方法
[0070] 1.研究对象
[0071] 1.1收集2016年6月至2016年12月间就诊于大连医科大学附属第二医院心内五科的冠心病患者30例，其中稳定型心绞痛患者15例，男性6例、女性9例，平均年龄65.6±9.72岁，不稳定型心绞痛患者15例，其中男性5例、女性10例，平均年龄68.87±9.80，同期收集健康志愿者15例，其中男性5例、女性10例，平均年龄47.07±17.79岁；
[0072] 1.2入选标准
[0073] 1.2.1稳定型心绞痛的入选标准：参考2007年《慢性稳定性心绞痛诊断与治疗指南》，有典型心绞痛发作的病史，(1)部位：典型的心绞痛部位为胸骨后或左胸前，范围常不局限，可以放射至颈部、咽部、颌部、上腹部、肩背部、左臂及左手指侧，也可放射至其他部位。每次心绞痛发作部位往往是相似的。(2)性质：呈紧缩感、呈紧缩感、绞榨感、压迫感、烧灼感、胸憋、胸闷或有窒息感、沉重感，有的患者只述为胸部不适，主观感觉个体差异较大，但一般不会是针刺样疼痛，有的表现为乏力、气短。(3)持续时间：呈阵发性发作，持续数分钟，一般不会超过10分钟，也不会转瞬即逝或持续数小时。(4)诱发及缓解：发作与劳力或情绪激动有关，如快走、爬坡时诱发，停下休息即可缓解，多发生于劳力当时而不是之后。舌下含服硝酸甘油可在2-5分钟内迅速缓解症状。
[0074] 1.2.2不稳定型心绞痛的入选标准：参考2007年《不稳定性心绞痛和非ST段抬高心肌梗死诊断和治疗指南》，有以下临床表现：(1)静息性心绞痛：心绞痛发作在休息时，并且持续时间通常在20分钟以上；(2)初发心绞痛：1个月内新发生的心绞痛，可表现为自发性发作或劳力性发作并存，疼痛分级在III级以上；(3)恶化劳力型心绞痛：既往有心绞痛病史，近1月内心绞痛恶化加重，发作次数频繁、时间延长或痛阈减低。
[0075] 1.3排除标准
[0076] (1)急性心肌梗死、急性心力衰竭，合并严重高血压控制欠佳者、重度心律失常；(2)合并严重糖尿病且血糖控制欠佳者；(3)合并COPD急性发作患者；(4)合并严重皮肤病患者；(4)合并恶性肿瘤患者；(5)有自身免疫性疾病或免疫缺陷病史者；(6)各种急性慢性感染性疾病，严重的肝肾疾病。
[0077] 2.实验材料
[0078] 人外周血淋巴细胞分离液、佛波酯(PMA)、离子霉素均购于Sigma公司，RPMI1640培养基购于HycLone，人抗菌肽LL37ELISA Kit购自武汉优尔生科技股份有限公司。
[0079] 3.研究方法
[0080] 3.1临床资料：记录入选者的年龄、性别、高血压病史、糖尿病史、吸烟史、身高、体重，计算体质指数(Body mass index，BMI)；
[0081] 3.2实验室检查：检测入选者总胆固醇(total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、甘油三酯(triglyceride，TG)、同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)、超敏C反应蛋白(hypersensitive creative protein，hs-CRP)、β-2微球蛋白(β-2microglobulin，β-2MG)。
[0082] 3.3标本采集：所有入选者均于清晨空腹时采集外周静脉血普通血清管3ml，2000r/min，10min离心，取上清置于2ml冻存管中，保存于-80℃冰箱待测；入选的冠心病不稳定型心绞痛患者中随机抽取5人采外周静脉血EDTA抗凝管3ml用于提取单个核细胞；
[0083] 3.4外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells，PBMC)分离：采用改进的Ficoll-Hypaque密度分离法提取外周血单核细胞。向EDTA抗凝的外周静脉血3ml中加入等体积的PBS液(不含Ca、Mg，PH 7.2-7.6)充分混匀。另取一15ml无菌离心管，加入人淋巴细胞分离液3ml，然后倾斜离心管，用无菌毛细吸管在距离淋巴细胞分离液液面上约1cm处将细胞悬液小心而缓慢的加于淋巴细胞分离液液面上，使稀释的血液重叠于分离液之上，2000r/min，30min离心，可见管内分为四层，将移液器轻轻插入至第2层的白膜层，此层为PBMC(单核细胞和淋巴细胞富集层)。转移至另一新的离心管中，像离心管中加入3-4倍以上的PBS混匀，1500r/min，10min离心，离心后弃上清，用以洗涤单个核细胞，重复洗涤2次，再以RPMI-1640培养基离心洗涤1次，吸尽上清，充分去除血小板等杂质，加入200ul RPMI-1640重悬细胞备用。
[0084] 3.5给药组的制备：给药组(按照本发明实施例1制得)用1640培养液培养液溶解实施例1制得的片剂，配制1.0g/L的原液。用MTT法检验实施例1制得的片剂对PBMC的毒性作用，根据预实验结果选取10mg/L、50mg/L作为实施例1制得的片剂干预的终浓度。
[0085] 3.6实验分组及处理：以不同浓度实施例1制得的片剂(10mg/L、50mg/L)预处理单个核细胞12h，以空白为对照组，再用50ng/ml佛波酯(PMA)刺激单个核细胞4h后，2000r/min，10min，留取细胞上清液置于2ml冻存管中，保存于-80℃冰箱中待测。
[0086] 3.7ELISA法检测血清及细胞培养液中LL37的浓度：按照ELISA试剂盒说明书方法，将试剂盒提供的原倍标准品在EP管中加入标准品稀释液倍比稀释，分别设标准品孔、空白孔、待测样品孔。在标准品孔中加入标准品50ul、待测样品孔中加入待测物50ul，除空白孔外加入生物素化抗体工作液A，封板较封孔，37℃温箱孵育1小时，洗板3次，除去空白孔外，加入酶结合物工作液B，封板较封孔，37℃温箱避光孵育30分钟，洗板5次，加入显色液，37摄氏度温箱避光孵育15分钟，迅速加入终止液，混匀后即刻在450nm波长测定各孔的OD值，计算血清中及细胞培养液中LL37的浓度。
[0087] 3.8西雅图心绞痛量表(Seattle angina questionnaire，SAQ)：测定共19项问题，包括躯体受限程度、心绞痛稳定状态、心绞痛发作频率、治疗满意程度、疾病的认知度5个维度。对19个条目逐项评分以及SAQ总分，再将得分按如此公式转化为标准积分，标准积分＝(实际得分-该方面最低得分)/(该方面最高分-该方面最低分)*100，评分越高患者生活质量和机体功能状态越好。
[0088] 4.统计学方法
[0089] 所有数据采用SPSS 22.0统计软件分析，对计量资料进行正态检验，符合正态分布的数据组间比较采用t检验，以均数±标准差表示，不符合正态分布的数据组间比较采用非参数检验，以中位数表示。两个变量的相关性分析，符合正态分布采用Pearson相关性分析，不符合正态分布采用Spearman相关性分析。P＜0.05为差异有统计学意义。
[0090] 二.结果
[0091] 1.冠心病患者和健康者基本资料及实验室结果分析
[0092] 三组间年龄无统计学差异(P＜0.05)。不稳定型心绞痛患者的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平较健康组明显升高；稳定型心绞痛和不稳定型心绞痛患者的超敏C反应蛋白(Hs-CRP)均显著高于健康组(P＜0.05)；β-2微球蛋白(β-2MG)水平在稳定型心绞痛及不稳定型心绞痛中较健康组均明显升高(P＜0.05)。总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)、同型半胱氨酸(Hcy)水平在三组间没有显著差异；心绞痛发作频率，不稳定型心绞痛患者明显高于稳定型心绞痛组(P＜0.01)。
[0093] 表1冠心病和健康者的比较
[0094]
[0095]
[0096] SAQ第2大项代表西雅图心绞痛评分表心绞痛稳定程度；
[0097] *，p<0.05，与健康人群组相比有统计学差异；#，p<0.05，与稳定型心绞痛组相比有统计学差异。
[0098] 2.不稳定型心绞痛、稳定型心绞痛及健康人群三组血清中LL-37的表达水平[0099] 冠心病不稳定型心绞痛患者血清LL-37的水平显著高于稳定型心绞痛患者及健康者(P＜0.05)；健康人群与稳定型心绞痛患者之间无统计学差异(P＞0.05)，见表2。
[0100] 表2不稳定型心绞痛组、稳定型心绞痛组及健康人群组血清LL-37表达水平的比较[0101]
[0102] *，p<0.05，与不稳定型心绞痛组相比有统计学差异；
[0103] #，p<0.05，与稳定型心绞痛组相比有统计学差异。
[0104] 3.西雅图心绞痛评分与冠心病患者血清LL-37的相关性分析本研究采用西雅图心绞痛评分量表五个维度中用于评估心绞痛稳定状态的第2大项，结果显示评分与血清LL-37成负相关，R＝-0.784，P＜0.01。见附图1。
[0105] 4.不同浓度给药组预处理不稳定型心绞痛患者的PBMC后细胞上清液中LL-37的浓度
[0106] 用不同浓度给药组预处理不稳定型心绞痛患者的PBMC后，用ELISA法测细胞上清液中LL-37的浓度，实验结果表明：实施例1制得的片剂以剂量依赖的方式使细胞上清液中LL-37的含量减低，其中50mg/L组细胞上清中LL-37的浓度最低，见表3。
[0107] 表3不同剂量给药组PBMC细胞上清液中LL-37浓度比较
[0108]
[0109] *，P＜0.05，与对照组比较有统计学差异；
[0110] #，P＜0.05，与10mg/L组比较有统计学差异。
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