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一种制备治疗湿性关节炎的功能型饮品的方法

阅读:901发布:2024-01-08

专利汇可以提供一种制备治疗湿性关节炎的功能型饮品的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种制备 治疗 风 湿性关节炎的功能型饮品的方法,属于 生物 技术领域。所述具有治疗风湿性关节炎的功能型饮品为 蜂毒 活性肽溶液与蜂胶黄 酮 溶液复合配置所得,蜂毒活性肽溶液为从蜂毒中经分离得来的动物多肽溶液,蜂胶黄酮溶液为从蜂胶原胶中提取得到的活性物质,采用葡聚糖凝胶色谱,结合高速 粉碎 、离心、 有机 溶剂 提取的方法获得蜂毒活性肽和蜂胶黄酮。本发明所得具有治疗风湿性关节炎的饮品,与药物阿司匹林相比,具有治疗风湿性关节炎但不造成损害肾功能的作用,饮用本发明所提供的饮品,较大程度上缓解风湿病患者身体的痛苦,且对身体 副作用 小,可长期饮用。,下面是一种制备治疗湿性关节炎的功能型饮品的方法专利的具体信息内容。

1.一种制备治疗湿性关节炎功能饮品的方法,步骤如下:
①蜂胶黄溶液的制备
将蜂胶放入酒精度为45-75°的白酒中,70-90℃浴提取1.5-4.5h,共提取1-3次,以
2500-5500r/min离心4-8min进行固液分离,除去固体蜂胶残渣,用酒精度为45-75°的白酒将蜂胶黄酮提取液配置成浓度为0.1-0.5mg/mL的蜂胶黄酮溶液;
蜂毒活性肽溶液的制备
将蜂毒经葡聚糖凝胶G-25用蒸馏水洗脱,流速控制在25-30mL/h,测定各分离组分的分子量,在葡聚糖凝胶柱下收集分子量为2035Da、2587Da、2840Da的层析组分并冷冻干燥,所得固体样品为蜂毒活性肽,将蜂毒活性肽用纯净水配置成浓度为0.015-0.055mg/mL的蜂毒活性肽溶液;
③治疗风湿性关节炎饮品的制备
将①中浓度为0.015-0.055mg/mL的蜂毒活性肽溶液与②中浓度为0.1-0.5mg/mL蜂胶黄酮溶液的按照体积比V(蜂毒活性肽):V(蜂胶)=1:4-10进行复配,所得即为具有治疗风湿性关节炎功能饮品。
2.如权利要求1所述的制备治疗风湿性关节炎功能饮品的方法,复配为将获得的浓度为0.05mg/mL蜂毒活性肽溶液与浓度为0.326mg/mL蜂胶黄酮溶液按照体积比V(蜂毒活性肽):V(蜂胶)=1:7进行复配,正常小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为99.29±5.89 pg/mL、100.81±8.72 pg/mL、101.29±7.39 pg/mL 、126.64±32.06 mmol/L,不饮用复配饮品小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为110.54±5.64 pg/mL、216.22±12.86 pg/mL、110.35±5.49 pg/mL 、187.17±8.54 mmol/L,饮用复配饮品小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为100.25±5.82pg/mL、106.04±9.76pg/mL、107.23±9.55 pg/mL 、151.53±54.99 mmol/L,服用阿司匹林小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为106.37±2.38 pg/mL、116.87±13.34 pg/mL、102.55±4.88 pg/mL 、156.63±33.89 mmol/L。
3.如权利要求1所述的制备治疗风湿性关节炎功能饮品的方法,酒精度为食品级白酒中所含乙醇的体积百分比。
4.如权利要求1所述的制备治疗风湿性关节炎功能饮品的方法,葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示,G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围,25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克。
5.如权利要求1所述的制备治疗风湿性关节炎功能饮品的方法,洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相,流动相与固定相作用比样品弱,样品各组分按先后顺序从固定相洗出
6.如权利要求1所述的制备治疗风湿性关节炎功能饮品的方法,Da为蜂毒活性肽分子量的单位。
7.如权利要求1所述的制备治疗风湿性关节炎功能饮品的方法,分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T与其相对分子质量对数值lgMr标准曲线回归方程,标准品为抗菌肽标准品、化性谷胱甘肽标准品、还原性谷胱甘肽标准品。
8.如权利要求1所述的制备治疗风湿性关节炎功能饮品的方法,冷冻干燥为将所得组分冷冻至水的点以下,并置于高真空10-40Pa的容器中,通过供热使物料中的水分直接从固态冰升华为水汽的一种干燥方法。
9.如权利要求1所述的制备治疗风湿性关节炎功能饮品的方法,蜂毒活性肽包括蜂毒肽、蜂毒明肽、细胞肥大脱粒肽。
10.如权利要求1所述的制备治疗风湿性关节炎功能饮品的方法,体积比为蜂毒活性肽溶液与蜂胶黄酮溶液体积的比值。

说明书全文

一种制备治疗湿性关节炎的功能型饮品的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种制备治疗风湿性关节炎的功能型饮品的方法,属于生物技术领域。

背景技术

[0002] 风湿性关节炎是一种常见的慢性自身免疫性疾病,其病理表现是炎性滑膜增生以及关节软骨和骨骼的破坏,中医将其归入“痹证”的范畴。传统中医对防治风湿性关节炎疾病具有悠久的历史,蜂针治疗痹证在临床运用广泛。蜂针中的蜂针液即为蜂毒,蜂毒中的蜂毒肽、蜂毒明肽、细胞肥大脱粒肽具有抗菌消炎、镇痛等功效,蜂胶中的黄具有抗炎、镇痛等功效,由于蜂胶具有多重药理活性,蜂胶产品在市场上受到广大消费者的青睐,现已广泛应用于医药、保健品、化妆品等领域。
[0003] 蜂胶黄酮是从蜂胶原胶中提取得来的,具有易制备、周期短等特点,蜂毒活性肽是从蜂毒中经分离得来的,具有低量高效、无污染等特点,两者结合可以研制开发出机体镇痛消炎等产品,具有很大的市场开发前景,因而引起了医学领域广泛的关注。
[0004] 细胞毒药物、肾上腺皮质激素、非甾体类抗炎药等作为临床治疗风湿性关节炎的主要药物,以上药物对人体重要的脏器和组织各有不同的毒性作用。Favalli (Favalli, E.G., et al., Methotrexate for the treatment of rheumatoid arthritis in the biologic era: still an "anchor" drug [J]. Autoimmunity Reviews, 2014, 13(11): 1102.)报道了甲蝶呤作为一种细胞毒药物治疗风湿性关节炎,但甲氨蝶呤对肝、等脏器功能都有损害。Bilasy(Bilasy, S.E., et al., Myelosuppressive and hepatotoxic potential of leflunomide and methotrexate combination in a rat model of rheumatoid arthritis[J]. Pharmacological Reports Pr, 2015, 67(1): 102.)报道了来氟米特治疗风湿性关节炎,疗效与甲氨蝶呤相似,耐受性优于甲氨蝶呤,但接受来氟米特治疗的风湿患者出现了间质性肺炎、肺纤维化的症状。Katchamart(Katchamart, W., et al., Methotrexate monotherapy versus methotrexate combination therapy with non-biologic disease modifying antirheumatic drugs for rheumatoid arthritis[J]. Cochrane Database of Systematic Reviews, 2010, 4(4): CD008495.)报道了甲氨蝶呤单药治疗联合治疗的疗效和毒性,但联合用药需要考虑药物的疗效和毒性。董中国(董中国等, 针药并用治疗血管神经性头痛临床观察[J]. 黑龙江医药科学, 2008, 31(4): 44-44.)报道了蜂针加中药治疗风湿性关节炎,总有效率90.023%,但治疗时间至少为一个月,治疗时间较长。杨亚旭(杨亚旭等, 蜂毒素联合杜仲黄酮外用治疗类风湿关节炎的实验研究[J]. 时珍国医国药, 2016, 27(8): 1833-1836.)报道了蜂毒素联合杜仲黄酮外用治疗类风湿关节炎,蜂毒肽联合杜仲黄酮浓度均为1μg/μL,1:1混合使用可以有效的治疗类风湿性关节炎,但蜂毒肽与杜仲黄酮用量大,增加了成本。
[0005] 上述方法应用西药甲氨蝶呤、来氟米特作为临床治疗风湿性关节炎的主要药物,这些药物在治疗过程中存在对身体脏器副作用大的缺陷;蜂针、蜂毒肽、黄酮等组分治疗风湿性关节炎,在治疗过程中存在治疗时间长,存在用量大的问题。

发明内容

[0006] 本发明的目的是为了解决风湿性关节炎药物副作用大、疗效低的问题,提供一种治疗风湿性关节炎的饮品。
[0007] 本发明获得的浓度为0.05mg/mL蜂毒活性肽溶液与浓度为0.326mg/mL蜂胶黄酮溶液按照体积比V(蜂毒活性肽):V(蜂胶)=1:7进行复配,正常小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为99.29±5.89 pg/mL、100.81±8.72 pg/mL、101.29±7.39 pg/mL 、126.64±32.06 mmol/L,不饮用复配饮品小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为110.54±5.64 pg/mL、216.22±12.86 pg/mL、110.35±5.49 pg/mL 、187.17±8.54 mmol/L,饮用复配饮品小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为100.25±5.82pg/mL、106.04±9.76pg/mL、
107.23±9.55 pg/mL 、151.53±54.99 mmol/L,服用阿司匹林小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为106.37±2.38 pg/mL、116.87±13.34 pg/mL、102.55±4.88 pg/mL 、156.63±33.89 mmol/L。本发明的一种制备治疗痛风性关节炎功能饮品的方法,步骤如下:
①蜂胶黄酮溶液的制备
将蜂胶放入酒精度为45-75°的白酒中,70-90℃浴提取1.5-4.5h,共提取1-3次,以
2500-5500r/min离心4-8min进行固液分离,除去固体蜂胶残渣,用酒精度为45-75°的白酒将蜂胶黄酮提取液配置成浓度为0.1-0.5mg/mL的蜂胶黄酮溶液;
所述酒精度为食品级白酒中所含乙醇的体积百分比。
[0008] ②蜂毒活性肽溶液的制备将蜂毒经葡聚糖凝胶G-25用蒸馏水洗脱,流速控制在25-30mL/h,测定各分离组分的分子量,在葡聚糖凝胶柱下收集分子量为2035Da、2587Da、2840Da的层析组分并冷冻干燥,所得固体样品为蜂毒活性肽,将蜂毒活性肽用纯净水配置成浓度为0.015-0.055mg/mL的蜂毒活性肽溶液;
所述葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示,G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围,25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克;
所述洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相,流动相与固定相作用比样品弱,样品各组分按先后顺序从固定相洗出
所述Da为蜂毒活性肽分子量的单位;
所述分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T(min)与其相对分子质量对数值(lgMr)标准曲线回归方程,标准品为抗菌肽标准品(Mr =1422Da)、化性谷胱甘肽标准品(Mr =612Da)、还原性谷胱甘肽标准品(Mr =307.32Da)。
[0009] 所述冷冻干燥为将所得组分冷冻至水的点以下,并置于高真空(10-40Pa)的容器中,通过供热使物料中的水分直接从固态冰升华为水汽的一种干燥方法;所述蜂毒活性肽包括蜂毒肽、蜂毒明肽、细胞肥大脱粒肽;
③治疗风湿性关节炎饮品的制备
将①中浓度为0.015-0.055mg/mL的蜂毒活性肽溶液与②中浓度为0.1-0.5mg/mL蜂胶黄酮溶液的按照体积比V(蜂毒活性肽):V(蜂胶)=1:4-10进行复配,所得即为具有治疗风湿性关节炎功能饮品。
[0010] 所述体积比为蜂毒活性肽溶液与蜂胶黄酮溶液体积的比值;所述复配为蜂毒活性肽溶液与蜂胶黄酮溶液的混合。
[0011] 采用本方法生产的治疗风湿性关节炎的功能饮品,饮用复配饮品组与不饮用复配饮品组相比TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别降低了10.29 pg/mL、110.18 pg/mL、3012 pg/mL、35.64 mmol/L与现有技术相比较,本发明制备治疗风湿性关节炎的功能饮品的方法,具有以下显著特点:(1)本发明获得的饮品治疗风湿性关节炎的效果与阿司匹林相似,但不造成肾脏的损伤;
(2)本发明获得的治疗风湿性关节炎的饮品相对于董中国(董中国等, 针药并用治疗血管神经性头痛临床观察[J]. 黑龙江医药科学, 2008, 31(4): 44-44.),治疗时间缩短
20天;
(3)本发明获得的治疗风湿性关节炎的饮品相对于杨亚旭(杨亚旭等, 蜂毒素联合杜仲黄酮外用治疗类风湿关节炎的实验研究[J]. 时珍国医国药, 2016, 27(8): 1833-
1836.),每毫升节省蜂毒0.95mg,黄酮0.674mg。
[0012] 实施例1:① 蜂胶黄酮溶液的制备
将蜂胶放入酒精度为60°的白酒中,80℃水浴提取3h,共提取1次,以5000r/min离心
5min进行固液分离,除去固体蜂胶残渣,用酒精度为60°的白酒将蜂胶黄酮提取液配置成浓度为0.326mg/mL的蜂胶黄酮溶液;所述酒精度为食品级白酒中所含乙醇的体积百分比。
[0013] ② 蜂毒活性肽溶液的制备将蜂毒经葡聚糖凝胶G-25用蒸馏水洗脱,流速控制在28mL/h,测定各分离组分的分子量,在葡聚糖凝胶柱下收集分子量为2035Da、2587Da、2840Da的层析组分并冷冻干燥,所得固体样品为蜂毒活性肽,将蜂毒活性肽用纯净水配置成浓度为0.05mg/mL的蜂毒活性肽溶液;
所述葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示,G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围,25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克;
所述洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相,流动相与固定相作用力比样品弱,样品各组分按先后顺序从固定相洗出;
所述Da为蜂毒活性肽分子量的单位;
所述分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T(min)与其相对分子质量对数值(lgMr)标准曲线回归方程,标准品为抗菌肽标准品(Mr =1422Da)、氧化性谷胱甘肽标准品(Mr =612Da)、还原性谷胱甘肽标准品(Mr =307.32Da)。
[0014] 所述冷冻干燥为将所得组分冷冻至水的冰点以下,并置于高真空(10-40Pa)的容器中,通过供热使物料中的水分直接从固态冰升华为水汽的一种干燥方法;所述蜂毒活性肽包括蜂毒肽、蜂毒明肽、细胞肥大脱粒肽;
③治疗风湿性关节炎饮品的制备
将①中浓度为0.05mg/mL蜂毒活性肽溶液的与②中浓度为0.326mg/mL的蜂胶黄酮溶液按照体积比V(蜂毒活性肽):V(蜂胶)=1:7进行复配,所得即为具有治疗风湿性关节炎功能饮品。
[0015] 所述体积比为蜂毒活性肽溶液与蜂胶黄酮溶液体积的比值;所述复配为蜂毒活性肽溶液与蜂胶黄酮溶液的混合。
[0016] 正常小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为99.29±5.89 pg/mL、100.81±8.72 pg/mL、101.29±7.39 pg/mL 、126.64±32.06 mmol/L,不饮用复配饮品小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为110.54±5.64 pg/mL、216.22±12.86 pg/mL、110.35±5.49 pg/mL 、187.17±8.54 mmol/L,饮用复配饮品小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为
100.25±5.82pg/mL、106.04±9.76pg/mL、107.23±9.55 pg/mL 、151.53±54.99 mmol/L,服用阿司匹林小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为106.37±2.38 pg/mL、116.87±
13.34 pg/mL、102.55±4.88 pg/mL 、156.63±33.89 mmol/L。
[0017] 实施例2:①蜂胶黄酮溶液的制备
将蜂胶放入酒精度为70°的白酒中, 90℃水浴提取4h,共提取2次,以4000r/min离心
6min进行固液分离,除去固体蜂胶残渣,用酒精度为70°的白酒将蜂胶黄酮提取液配置成浓度为0.217mg/mL的蜂胶黄酮溶液;
所述酒精度为食品级白酒中所含乙醇的体积百分比。
[0018] ②蜂毒活性肽溶液的制备将蜂毒经葡聚糖凝胶G-25用蒸馏水洗脱,流速控制在30mL/h,测定各分离组分的分子量,在葡聚糖凝胶柱下收集分子量为2035Da、2587Da、2840Da的层析组分并冷冻干燥,所得固体样品为蜂毒活性肽,将蜂毒活性肽用纯净水配置成浓度为0.03mg/mL的蜂毒活性肽溶液;
所述葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示,G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围,25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克;
所述洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相,流动相与固定相作用力比样品弱,样品各组分按先后顺序从固定相洗出;
所述Da为蜂毒活性肽分子量的单位;
所述分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T(min)与其相对分子质量对数值(lgMr)标准曲线回归方程,标准品为抗菌肽标准品(Mr =1422Da)、氧化性谷胱甘肽标准品(Mr =612Da)、还原性谷胱甘肽标准品(Mr =307.32Da)。
[0019] 所述冷冻干燥为将所得组分冷冻至水的冰点以下,并置于高真空(10-40Pa)的容器中,通过供热使物料中的水分直接从固态冰升华为水汽的一种干燥方法;所述蜂毒活性肽包括蜂毒肽、蜂毒明肽、细胞肥大脱粒肽;
③治疗风湿性关节炎饮品的制备
将①中浓度为0.03mg/mL的蜂毒活性肽溶液与②中浓度为0.217mg/mL的蜂胶黄酮溶液按照体积比V(蜂毒活性肽):V(蜂胶)=1:9进行复配,所得即为具有治疗风湿性关节炎功能饮品。
[0020] 所述体积比为蜂毒活性肽溶液与蜂胶黄酮溶液体积的比值;所述复配为蜂毒活性肽溶液与蜂胶黄酮溶液的混合。
[0021] 正常小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为99.29±5.89 pg/mL、100.81±8.72 pg/mL、101.29±7.39 pg/mL 、126.64±32.06 mmol/L,不饮用复配饮品小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为110.54±5.64 pg/mL、216.22±12.86 pg/mL、110.35±5.49 pg/mL 、187.17±8.54 mmol/L,饮用复配饮品小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为
100.91±7.89pg/mL、109.87±3.22pg/mL、103.64±4.95pg/mL 、189.94±27.17mmol/L,服用阿司匹林小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为106.37±2.38 pg/mL、116.87±
13.34 pg/mL、102.55±4.88 pg/mL 、156.63±33.89 mmol/L。
[0022] 实施例3:①蜂胶黄酮溶液的制备
将蜂胶放入酒精度为50°的白酒中,70℃水浴提取2h,共提取3次,以3000r/min离心
4min进行固液分离,除去固体蜂胶残渣,用酒精度为50°的白酒将蜂胶黄酮提取液配置成浓度为0.109mg/mL的蜂胶液;
所述酒精度为食品级白酒中所含乙醇的体积百分比。
[0023] ②蜂毒活性肽溶液的制备将蜂毒经葡聚糖凝胶G-25用蒸馏水洗脱,流速控制在26mL/h,测定各分离组分的分子量,在葡聚糖凝胶柱下收集分子量为2035Da、2587Da、2840Da的层析组分并冷冻干燥,所得固体样品为蜂毒活性肽,将蜂毒活性肽用纯净水配置成浓度为0.0182mg/mL的蜂毒活性肽溶液;
所述葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示,G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围,25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克;
所述洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相,流动相与固定相作用力比样品弱,样品各组分按先后顺序从固定相洗出;
所述Da为蜂毒活性肽分子量的单位;
所述分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T(min)与其相对分子质量对数值(lgMr)标准曲线回归方程,标准品为抗菌肽标准品(Mr =1422Da)、氧化性谷胱甘肽标准品(Mr =612Da)、还原性谷胱甘肽标准品(Mr =307.32Da)。
[0024] 所述冷冻干燥为将所得组分冷冻至水的冰点以下,并置于高真空(10-40Pa)的容器中,通过供热使物料中的水分直接从固态冰升华为水汽的一种干燥方法;所述蜂毒活性肽包括蜂毒肽、蜂毒明肽、细胞肥大脱粒肽;
③治疗风湿性关节炎饮品的制备
将①中浓度为0.0182mg/mL的蜂毒活性肽溶液与②中浓度为0.109mg/mL的蜂胶黄酮溶液按照体积比V(蜂毒活性肽):V(蜂胶)=1:5进行复配,所得即为具有治疗风湿性关节炎功能饮品。
[0025] 所述体积比为蜂毒活性肽溶液与蜂胶黄酮溶液体积的比值;所述复配为蜂毒活性肽溶液与蜂胶黄酮溶液的混合。
[0026] 正常小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为99.29±5.89 pg/mL、100.81±8.72 pg/mL、101.29±7.39 pg/mL 、126.64±32.06 mmol/L,不饮用复配饮品小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为110.54±5.64 pg/mL、216.22±12.86 pg/mL、110.35±5.49 pg/mL 、187.17±8.54 mmol/L,饮用复配饮品小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为
100.70±18.46pg/mL、107.89±5.39pg/mL、109.21±2.46pg/mL 、209.99±12.28mmol/L,服用阿司匹林小鼠TNF-α、IL-6、IL-1β和血尿氮值分别为106.37±2.38 pg/mL、116.87±
13.34 pg/mL、102.55±4.88 pg/mL 、156.63±33.89 mmol/L。
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