乙醇梭菌蛋白在肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料中的应用
阅读：64发布：2020-05-12
专利汇可以提供乙醇梭菌蛋白在肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种 肉食性鱼类 低 淀粉 (淀粉 水 平 饲料 。所述饲料的部分 蛋白质 原料使用新型 微 生物 蛋白— 乙醇 梭菌蛋白，适用于对淀粉不耐受的肉食性鱼类。对比实验证明，本发明饲料不仅能大幅度降低鱼粉的使用量，满足肉食性鱼类生长发育所需的营养素需求，还能显著降低饲料的容重，提高低淀粉饲料的径向膨化率、颗粒硬度、糊化程度、水中 稳定性 ；而且通过改善颗粒内部孔径结构提高吸油率，降低漏油率。本发明还显著改善了低淀粉浮性膨化饲料的加工稳定 质量 。，下面是乙醇梭菌蛋白在肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料中的应用专利的具体信息内容。
1.一种肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料，其特征是，在所述饲料制备的原料中，含有用于部分替代鱼粉的乙醇梭菌蛋白，其重量百分比占制备饲料的原料的9-34.5％。
2.权利要求1所述的低淀粉膨化浮性饲料，原料中鱼粉和乙醇梭菌蛋白之间的重量份比例为：FM 0-30；ECM 9-34.5；其中，FM为低温干燥鱼粉，ECM为乙醇梭菌蛋白。
3.权利要求2所述的低淀粉膨化浮性饲料，原料中鱼粉和乙醇梭菌蛋白之间的重量份比例为：FM 10-20；ECM 18-27。
4.权利要求2所述的低淀粉膨化浮性饲料，原料中鱼粉和乙醇梭菌蛋白之间的重量份比例为：FM 10；ECM 27。
5.权利要求1～3中任一所述的低淀粉膨化浮性饲料，原料中所用的淀粉源为木薯粉和小麦面粉两种。
6.权利要求5所述的低淀粉膨化浮性饲料，木薯粉和小麦面粉的用量比例为：木薯粉5份，小麦面粉6份，所述份是重量份。
7.权利要求1～3所述的低淀粉膨化浮性饲料，原料中其他营养物质成分是：棉籽浓缩蛋白14.8份，大豆浓缩蛋白16.3份，小麦面粉6份，木薯粉5份，谷朊粉6份，6大豆油8.9-11.1份，所述份是重量份。
8.权利要求7所述的低淀粉膨化浮性饲料，原料还含有中纤维素1-3.1份，磷酸二氢钙
1-1.8份，维生素和矿物质预混料1.4份，所述份是重量份。
9.权利要求1～3中任一所述的低淀粉膨化浮性饲料，是按以下方法制备的，步骤为：固体原料粉碎，饲料原料混合，然后进行调质、挤压膨化、制粒、晾干，得到饲料颗粒，其特征是，调质后的物料的水分含量应达到27-30％。
10.权利要求9所述的低淀粉膨化浮性饲料，饲料中所需的油脂类原料在饲料颗粒成型后再添加。
乙醇梭菌蛋白在肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料中的应用
技术领域
背景技术
[0002] “低淀粉浮性饲料”(即，水产饲料行业对淀粉含量10％以内的饲料的定义)适用于肉食性上层水生活习性的鱼类。因为鱼类尤其是肉食性鱼类对糖类，特别是对淀粉利用能力较低。当饲料中的淀粉添加量超过耐受水平时，会导致肝糖原和脂肪过度积累，葡萄糖和脂肪代谢紊乱、从而引起慢性炎症、细胞凋亡，最终导致肝损伤。
[0003] 肉食性鱼类，如大口黑鲈(Micropterus salmoides)，是重要的淡水养殖品种，但传统养殖受饲料配制(如，依赖冰鲜饵料，鱼粉等)影响制约，致生产成本过高，病害频发。低淀粉膨化浮性饲料进入市场后，推动了其迅速发展。如2018年大口黑鲈产量突破50万吨。
[0004] 低淀粉膨化饲料生产中，使用的蛋白原料的特性对产品的质量有很大影响，因为挤压膨化过程中蛋白质会发生变性，变性的蛋白质分子之间发生疏水键和二硫键键合，产生组织化作用。低淀粉膨化浮性饲料生产中，选择营养价值较高以及加工特性良好的蛋白原料是解决低淀粉膨化浮性饲料生产问题的关键因素之一。
[0005] 鱼粉是水产饲料中最重要的蛋白来源，但是，由于近年来海洋环境的不断恶化以及渔业资源的减少导致鱼粉价格不断上涨，掺假严重。而且不同新鲜度，不同来源的鱼粉加工性能差别很大，鱼粉质量不稳定也是导致低淀粉膨化浮性饲料生产过程和加工质量不稳定的重要原因之一。作为最大的鱼粉进口国，鱼粉缺乏问题在我国日益严峻，急需寻求新型蛋白源替代鱼粉。
[0006] 目前在水产养殖中主要采用三类蛋白源替代鱼粉，分别为动物蛋白源、植物蛋白源和单细胞蛋白源。动物性蛋白存在生物安全性问题，而植物性蛋白存在营养素缺乏，抗营养因子含量高，消化率低等问题。同时，植物性蛋白如大豆、玉米是主粮原料，在饲料中大量使用存在粮食安全问题。
[0007] 淀粉是保证物料具有足够粘度和受热膨胀的重要成分，传统生产膨化浮性饲料的工艺中，饲料中淀粉水平达到20％以上才能保证膨化机的稳定生产。而且，当饲料配方中淀粉含量低于10％时，不仅生产过程中会出现饲料生产稳定性差、经常发生非计划停机故障，同时，由于颗粒膨化率低，容重高、颗粒饲料在水中会发生部分下沉甚至全部下沉等问题，无法满足上层生活习性肉食性鱼类水面采食的摄食习性，造成双重浪费。
[0008] 在申请号为201811049614.3的专利中公开了一种提高大黄鱼长速和存活率的低淀粉膨化配合饲料，包括：俄罗斯白鱼粉，秘鲁鱼粉，美国鸡肉粉，谷朊粉，玉米蛋白粉，豆粕，高筋面粉，木薯淀粉，酶解鱼溶浆，精炼鱼油，大豆磷脂油，磷酸二氢钙，维生素预混物，矿物盐预混物，氯化胆碱，叶黄素，抗氧化剂，防霉剂。该专利中的饲料淀粉含量7.4％-9.4％，是典型的低淀粉饲料。但是该饲料膨化率较低(仅为1.4-1.6)。本领域的常识为，低于1.5膨化率的颗粒在后喷涂油脂后，容重会进一步增加，极有可能出现饲料下沉的现象。
[0009] 同样，在申请号20130044057.7的专利中公开了一种大口黑鲈无鱼粉浮性膨化饲料及其制备方法。包括脱酚棉籽蛋白，血球蛋白粉，大豆浓缩蛋白，大米蛋白粉，鱼溶浆蛋白，磷酸二氢钙，小麦面筋蛋白，小麦粉，磷脂油等原料。该专利中没有使用鱼粉，但鱼溶浆蛋白(使用量15-17份)含有大量的水溶性鱼蛋白，此外，该饲料中小麦粉使用量达到22份，淀粉含量至少15％以上，不属于低淀粉饲料。尽管如此，其加工后膨胀率仅为1.5，仍然可能引起颗粒下沉。
[0010] 而水上层生活习性的肉食性鱼类习惯摄食浮性颗粒饲料，当饲料下沉至水底则不会再被采食，而造成浪费和污染。
[0011] 因此，肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料的生产技术中需要解决两大问题：
[0012] 一是降低蛋白源的成本，找到新型的蛋白源鱼粉生产低淀粉膨化浮性饲料取代冰鲜饵料；
[0013] 二是解决低淀粉饲料在水中稳定性差、膨化率低、易沉降、生产不稳定等问题。
[0014] 乙醇梭菌蛋白(Ethanol clostridium meal,ECM)是以乙醇梭菌(Clostridium autoethanogenum)为发酵菌种生产的一种新型菌体蛋白，是一种单细胞蛋白。乙醇梭菌最早由Abrini等人(1994)从兔子粪便中分离得到，在生产工艺中以一氧化碳(CO)气体为原料，进行液态发酵，发酵液经离心、干燥后获得高蛋白质生物饲料原料乙醇梭菌蛋白。乙醇梭菌蛋白的蛋白含量高、氨基酸种类齐全、平衡性较好，无明确抗营养因子存在。目前除少量文献研究外，尚未实际用于水产饲料的原料使用。
[0015] 魏洪城等人(2018)探究了乙醇梭菌蛋白替代豆粕对草鱼生长性能、血浆生化指标及肝胰脏和肠道组织病理的影响。但是，该研究针对的是草鱼，为植物食性鱼类，不是肉食性鱼类。众所周知，草鱼可食用水草，对淀粉耐受力较强。上述文献中，其配方中主要以适合生产浮性饲料的植物蛋白为主，且含有高水平的淀粉(20％以上，包括30％面粉和21.4％次粉)，不存在加工工艺上的难题。该文献推荐乙醇梭菌蛋白在草鱼饲料中的使用量仅为5％，而且不是用于替代鱼粉。
[0016] 使用乙醇梭菌蛋白作为一种新型蛋白源，替代鱼粉并将其应用于肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料中的研究无论是饲料加工工艺还是养殖肉食性鱼的实验研究在国际上均尚处于空白。所以，研究乙醇梭菌蛋白在肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料中的应用非常必要。
发明内容
[0017] 本发明所要解决的技术问题一是找到新型的蛋白源，缓解鱼粉短缺问题，提供营养成分全面且均衡的专用低淀粉膨化浮性饲料配方，满足肉食性鱼类生长发育所需的全部营养需求，二是饲料必须达到在水中稳定性好、不沉降、膨胀率高，且生产稳定的要求。
[0018] 本发明经实验，用以下几个手段达到了上述发明目的。
[0019] 1、本发明人发现，在肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料的原料中，添加一种新型微生物蛋白原料——乙醇梭菌蛋白，可部分替代鱼粉。
[0020] 本发明人对添加乙醇梭菌蛋白的低淀粉饲料进行了各种指标的测评，包括饲料的容重、膨化率、吸水性、水溶性、吸油率、漏油率等实验，还用大口黑鲈进行了养殖实验，测评了大口黑鲈生长性能、血液指标和肝脏组织学分析(详见实施例)，根据多项指标的的综合评价结果，才得到合适乙醇梭菌蛋白添加比例。
[0021] 因此，本发明采用的技术方案是：
[0022] 一种肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料，其特征是，在所述饲料制备的原料中，含有用于部分替代鱼粉的乙醇梭菌蛋白(ECM)，其重量百分比占制备饲料的原料的9-34.5％。
[0023] 所述饲料中的鱼粉和乙醇梭菌蛋白两种蛋白原料之间的重量份比例为：
[0024] FM 0-30；ECM 9-34.5；
[0025] 其中，FM为低温干燥鱼粉，ECM为乙醇梭菌蛋白。
[0026] 根据饲料的容重、膨化率、吸水性、水溶性、大口黑鲈大口黑鲈生长性能、血液指标和肝脏组织学分析实验的综合评价结果，得到优选比例为：
[0027] FM 10-20；ECM 18-27。
[0028] 根据饲料的容重、膨化率、吸油率、漏油率、吸水性、水溶性、大口黑鲈大口黑鲈生长性能、血液指标和肝脏组织学分析实验的综合评价结果，得到最佳比例为：
[0029] FM 10；ECM 27。
[0030] 加入乙醇梭菌蛋白不仅替代了部分鱼粉，缓解了鱼粉短缺的难题。还因为乙醇梭菌蛋白吸水性高，黏度大，在低淀粉饲料中起到粘结作用，弥补了淀粉低在水中稳定性差、膨化率低、易沉降、生产不稳定等问题的缺点。
[0031] 2、淀粉源的选择
[0032] 所用的淀粉源为木薯粉和小麦面粉两种，二者以适当比例搭配使用也是保证低淀粉膨化浮性饲料质量的关键点之一。
[0033] 小麦面粉是鱼类最易消化吸收的淀粉源，但在饲料中膨胀效果和浮水率不高。因此本发明搭配了支链淀粉含量高、糊化后黏性高，具有良好的加工特性的木薯粉。本发明发现，加入木薯粉能够改善饲料质量，提高膨胀效果和浮水率。
[0034] 但木薯粉过量使用会导致饲料消化能降低，所以本发明研究了配方中木薯粉和小麦面粉的合适配比，得出；木薯粉和小麦面粉的用量的优选比例为：木薯粉5份，小麦面粉6份，所述份是重量份。
[0035] 3、饲料加工过程中在物料调质后的水分含量研究
[0036] 由于乙醇梭菌蛋白吸水性高于鱼粉，经研究发现，饲料加工过程中在物料调质后的水分含量应达到27-30％，不同于现有技术中的调质后水分含量为22-27％。
[0037] 提高调质的水分含量有助于促进高黏度物料吸水充足，物料黏度增加，同时促进淀粉糊化，从而改善饲料的膨胀度。
[0038] 4、饲料原料中的油脂加入方式
[0039] 本发明研究发现，油脂会急剧降低物料黏度和在膨化机腔的滞留时间，使得物料熟化度和膨化率下降，不利于浮性饲料生产。
[0040] 本发明还发现，各种外源油脂在饲料制粒成型后再添加，都能够最大程度减少对低淀粉浮性饲料加工的不利影响。
[0041] 因此，本发明给出的方案是，饲料颗粒烘干后再添加油脂，得到成品；
[0042] 这也不同于现有技术的常规方法中的在各原料混合时就一并加入油脂。
[0044] 本发明所述的肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料的原料中，所需要的其他营养物质，可根据各种需要，选用本技术领域人员使用的任何原料，包括蛋白质、脂肪、淀粉源及维生素和矿物质等基础营养物质。
[0045] 在本发明的一个实例中，其他营养物质的基础营养物质配方是：棉籽浓缩蛋白14.8份，大豆浓缩蛋白16.3份，小麦面粉6份，木薯粉5份，谷朊粉6份，6大豆油8.9-11.1份，所述份是重量份。
[0047] 具体详见表1。
[0048] 本发明的低淀粉膨化浮性饲料的制备方法，包括固体原料粉碎，饲料原料混合，然后进行调质、挤压膨化、制粒、晾干，得到饲料颗粒等步骤。其特征是，调质后的物料的水分含量高于现有技术的水分，应达到27-30％；饲料中所需的油脂类原料应在饲料颗粒成型后再以喷涂形式添加。
[0049] 本发明对制成的使用乙醇梭菌蛋白替代鱼粉的肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料进行了以下各项实验(具体数据详见实施例)：
[0050] 1、容重；
[0051] 2、径向膨化率；
[0052] 3、溶失率；
[0053] 4、吸油率和漏油率；
[0054] 5、浮水率；
[0055] 6、颗粒硬度；
[0056] 7、吸水性和水溶性(吸水性(WAI)和水溶性(WSI)指数)。
[0057] 试验结果表明，本发明提供的低淀粉膨化浮性饲料的容重、溶失率、漏油率显著下降；膨化率、颗粒硬度、吸油率显著升高；饲料横截面孔隙变大其数量增多，提高了饲料的糊化程度，提高了饲料在水中维持完整性的能力(具体数据详见实施例)。表明本发明的方案非常优良，特别是，首次发现乙醇梭菌蛋白的加工性能良好。
[0058] 本发明的有益效果是：
[0059] 1、首次在肉食性鱼类饲料中用乙醇梭菌蛋白替代鱼粉
[0061] 2、能够满足肉食性鱼类生长发育所需的全部营养需求
[0062] 实验证明，本发明的肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料(淀粉含量<10％)能够满足以大口黑鲈为代表的肉食性鱼类生长发育所需的全部营养需求，并解决了由于配方中淀粉含量过高导致的肝脏损伤、生长性能下降等问题。对大口黑鲈的存活率、末均重、增重率、特定生长率、摄食率和饲料系数都无显著性影响，对大口黑鲈的肝脏组织没有负面影响[0063] 3、产品质量好，浪费少
[0064] 本发明的饲料可降低饲料的容重，提高饲料的径向膨化率、颗粒硬度、糊化程度、水中稳定性，并通过改善颗粒内部孔径结构提高吸油率，降低漏油率，并提高了生产稳定性，减少了由于产品质量不合格导致的浪费以及非计划停机。
[0065] 4、提供了一种肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料的制备方法及关键工艺参数[0066] 本发明为水产饲料行业提供了一种肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料的制备方法及关键工艺参数，有利于行业进步。附图说明
[0067] 图1是鱼粉组饲料和本发明肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料的横断截面扫描电镜图；
[0068] 图2是鱼粉组、ECM10组和ECM40组大口黑鲈肝脏组织切片图。
具体实施方式
[0069] 以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
[0070] 实施例1肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料的配方、制备和实验验证
[0071] 一、实验目的：验证乙醇梭菌蛋白替代鱼粉后，对肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料产品质量的影响，以及对生产稳定性的影响
[0072] 二、实验材料——肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料的配方和制备
[0073] 1.肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料配方，包括两部分：
[0074] 1)基础营养配方(重量百分比)：棉籽蛋白(含粗蛋白61.51％，粗脂肪2.36％)14.8％，大豆浓缩蛋白(含粗蛋白64％，粗脂肪0.25％)16.3％，小麦面粉6％，木薯粉5％，谷朊粉6％，6大豆油8.9-11.1％，纤维素1-3.1％，磷酸二氢钙1-1.8％，维生素和矿物质预混料1.4％。
[0075] 2)两种蛋白原料：以乙醇梭菌蛋白(含粗蛋白83.2％，粗脂肪1.9％，北京首朗生物科技有限公司出品)梯度替代鱼粉(含粗蛋白72％，粗脂肪8.84％，丹麦999鱼粉)；
[0076] 3)分组
[0077] 配制成FM:ECM不同比例的4组饲料，分别命名为ECM10(FM:ECM＝30:9)、ECM20(FM:ECM＝20:18)、ECM30(FM:ECM＝10:27)和ECM40(FM:ECM＝0:34.5)
[0078] 另外，不添加乙醇梭菌蛋白，仅以鱼粉作为蛋白原料的为对照组(Control)。
[0079] 饲料配方及营养水平如表1所示。
[0080] 表1饲料配方及营养水平(％)
[0081]
[0082]
[0083] 2.上述肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料的制备方法
[0084] 将固体饲料原料用超微粉碎机进行粉碎，98％原料过80目筛网，将所有饲料原料按照配方比例进行称重，并按照逐级扩大的原则进行混合。
[0085] 混合物料由容积式喂料器送入调质器，喂料速度设定为70kg/h并在试验过程中保持恒定，调质器中物料温度保持在95℃。膨化加工参数根据试验设计进行调整，包括调质后物料水分含量、膨化机螺杆转速和模头温度，其它参数保持恒定，膨化加工工艺参数如表2所示。
[0086] 膨化加工参数通过自动采集系统进行记录，包括调质器水流量、调质器蒸汽流量、膨化机螺杆转速、膨化腔温度以及膨化机螺杆扭矩。膨化机加工参数达到设定值稳定15min后采集样品，样品烘干至水分低于10％，采用真空喷涂方法喷施大豆油和鱼油，包装后用于分析检测和养殖试验。
[0087] 表2膨化加工工艺参数表
[0088]
[0089]
[0090] 三、肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料的实验项目及实验方法
[0091] 1、容重
[0092] 将体积为1L的容器去皮，将试样倒入漏斗中，然后使用漏斗将饲料装满容器，用铁板刮平容器口，量取重量，称重之前不能震动或敲打容器，称得的重量即为饲料的容重。每个样品重复三次，取平均值作为该样品的容重(单位g/L)。
[0093] 2、径向膨化率
[0094] 每份样品随机取20粒，用游标卡尺测量其直径，取其平均值作为样品直径。样品的径向膨化率＝颗粒直径/模孔直径。
[0095] 3、溶失率
[0096] 称取10g饲料(准确至0.1g)放入已备好的圆筒形网筛内，然后置于盛有水深为5.5cm的容器中，水温为(25±2)℃，浸泡，然后把网笼从水中缓慢提升至水面，又缓慢沉入水中，使饲料离开筛底，浸泡20分钟，如此反复三次后，取出网筛，斜放沥干附水，把网筛内饲料置于105℃烘箱内烘干至恒重，同时，称取一份未浸水同样重量的试料(对照料)，置105℃烘箱内烘干至恒重，再分别称重，按以下公式进行计算。每个试样应取两个平行样进行测定，以其算数平均值为结果，数值表示至一位小数，允许相对误差≤4％。
[0097]
[0098] 式中：
[0099] S：溶失率，单位为百分率(％)；
[0100] m1：对照料烘干后质量，单位为克(g)；
[0101] m2：浸泡料烘干后质量，单位为克(g)。
[0102] 4、吸油率和漏油率
[0103] 使用实验室规模的真空喷涂机研究饲料的吸油率。将未喷涂的颗粒100g和过量大豆油150g加入喷涂机并抽真空，混合均匀后缓慢释放空气。使用吸油纸轻轻按压颗粒以除去多余的油脂，然后称重M1。
[0104]
[0105] 称取测完吸油率的颗粒100g置于吸油纸上24h后称重M2。
[0106]
[0107] 5、浮水率
[0108] 每个配方的浮力测试是把10个颗粒投放到装有75％水的2L烧杯中，每个配方测试3次。放置30min后记录浮性饲料的个数，则浮水率为：
[0109]
[0110] 6、颗粒硬度
[0111] 利用质构仪(型号：TA-XY2i，产地：英国Stable Micro)检测颗粒硬度。每份试验样品取随机取30粒进行测量，设定探针速度为1mm/s，力度25kg，颗粒受力形变40％后探针抬起，取该阶段图谱峰值作为硬度的测量结果，取30粒颗粒硬度的平均值作为样品硬度。
[0112] 7、吸水性和水溶性
[0113] 吸水性(WAI)和水溶性(WSI)指数
[0114] 样品粉碎后过100目筛。取2.5g粉状膨化样品于60mL离心管中，加入30mL蒸馏水，置于30℃的恒温水箱中30min，然后用3000g离心10min。将上清液缓慢倒入恒重的铝杯中，在135℃烘箱中烘干2h。称量离心管中凝胶的质量。每个样品测量3次。吸水性(WAI)和水溶性(WAI)用以下公式进行计算：
[0115]
[0116] 式中WAI：吸水性指数；Wg：凝胶重(g)
[0117]
[0118] 式中WSI：水溶性指数(％)；
[0119] Wss：悬浮液烘干后样品重量(g)；
[0120] Wds：干燥后样品的重量(g)
[0121] 8、数据分析及统计
[0122] 试验结果用平均数±标准差表示，对数据进行单因素方差分析(ANOVA)，并结合Duncan’s法进行多重比较，检验处理间的差异显著性(P<0.05)。
[0123] 四、试验结果
[0124] 1、容重显著下降
[0125] 随着乙醇梭菌蛋白替代量的增加，饲料容重显著下降(P<0.05)；容重越低，说明饲料颗粒单位重量越低，更适合在水面漂浮。目前市场上低淀粉浮性饲料的容重普遍在400g/L左右，而使用20-40份乙醇梭菌蛋白生产的低淀粉饲料容重低于380g/L，可保证其吸水后仍在水面漂浮。
[0126] 2、改善膨化效果
[0127] 添加乙醇梭菌蛋白可以改善膨化效果；
[0128] ECM20组的径向膨化率与对照组无显著性差异(P>0.05)，其余三组的径向膨化率均显著高于对照组(P<0.05)；
[0129] 3、溶失率显著降低，提高了饲料的水中稳定性
[0130] 各试验组的溶失率均显著低于对照组(P<0.05)，说明添加乙醇梭菌蛋白可以提高饲料的水中稳定性；
[0131] 4、提高了饲料的吸油性，降低了漏油率
[0132] ECM30、ECM40组的吸油率显著大于对照组(P<0.05)，
[0133] ECM20、ECM30和ECM40组的漏油率显著小于对照组(P<0.05)，说明添加乙醇梭菌蛋白可以提高饲料的吸油性；添加乙醇梭菌蛋白后饲料的孔隙变大且数量增多(如图1所示)，有助于提高饲料的吸油性。
[0134] 5、确保浮水率
[0135] 添加了乙醇梭菌蛋白，容重降低，能确保颗粒吸水后仍不下沉；
[0136] 6、饲料的结构更致密，不易产生碎粒
[0137] 各试验组的颗粒硬度均显著高于对照组(P<0.05)，说明添加乙醇梭菌蛋白后饲料的结构更致密，不易产生碎粒；
[0138] 7、提高饲料的糊化程度
[0139] 随着乙醇梭菌蛋白添加量的增加，吸水性指数(WAI)先显著升高再显著下降(P<0.05)；WAI可以反映糊化程度，证明适量添加乙醇梭菌蛋白可以提高饲料的糊化程度；
[0140] 8、提高饲料在水中维持完整性的能力
[0141] 随着乙醇梭菌蛋白添加量的增加，水溶性指数(WSI)先显著下降，再显著升高(P<0.05)。WSI可以反映肿胀凝胶颗粒在水中维持完整性的能力，证明适量添加乙醇梭菌蛋白可以提高饲料在水中维持完整性的能力。
[0142] 以上各指标实验结果数据见表3
[0143] 表3乙醇梭菌蛋白替代鱼粉对膨化饲料产品质量的影响
[0144]
[0145]
[0146] 注：同一行中不同肩标字母表示差异显著(P<0.05)。
[0147] 五、实验结论
[0148] 乙醇梭菌蛋白替代鱼粉后，对肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料产品质量具有改善作用，并且可以提高生产稳定性。
[0149] 实施例2肉食性鱼类低淀粉膨化浮性饲料大口黑鲈养殖试验
[0150] 一、实验目的
[0151] 验证使用乙醇梭菌蛋白替代鱼粉后，对以大口黑鲈为代表的肉食性鱼类生长性能、肝脏组织的影响。
[0152] 二、实验方法
[0153] 1、实验饲料
[0154] 使用实施例1中的饲料进行养殖试验。
[0155] 2、实施地点
[0156] 在国家水产饲料安全评价基地(北京，南口)室内循环流水养殖系统中进行。
[0157] 3、试验用水产靶动物
[0158] 大口黑鲈，购自广东佛山良种场。
[0159] 随机挑选体质健康、个体均匀的大口黑鲈(平均体重47.99±0.01g)，分配到容积为0.26m3的圆锥形养殖桶中。
[0160] 本试验设计5个处理组，每处理组4个重复，每桶25尾鱼。
[0161] 4、方法
[0162] 每天表观饱食投喂2次，投喂时间分别为8:00，16:00。
[0163] 定期检测水质，水质条件保持在溶氧DO＞7.0mg/L；氨氮水平＜0.5mg/L；pH＝7.5-8.5；水温20±2℃。
[0164] 养殖试验从2018年8月15日到2018年10月8日，共8周。
[0165] 5、试验结果
[0166] 1)对大口黑鲈生长性能的影响见表4。
[0167] 表4乙醇梭菌蛋白替代鱼粉对大口黑鲈生长性能的影响( n＝4)
[0168]
[0169] 注：同一行中不同肩标字母表示差异显著(P<0.05)。
[0170] 由表4的数据可知，乙醇梭菌蛋白替代鱼粉后各组大口黑鲈的存活率都达到100％。末均重、增重率、特定生长率、摄食率和饲料系数各组无显著差异。
[0171] 2)饲料中不同乙醇梭菌蛋白水平对大口黑鲈血浆生化指标的影响
[0172] 见表5。
[0173] 表5乙醇梭菌蛋白替代鱼粉对大口黑鲈血液生化指标的影响( n＝8)[0174]
[0175]
[0176] 注：同一行中不同肩标字母表示差异显著(P<0.05)。
[0177] 添加乙醇梭菌蛋白后各试验组血浆中葡萄糖(Glucose)、谷丙转氨酶(ALT)活性和甘油三酯(TG)显著低于对照组(P<0.05)；
[0178] ECM30组的谷草转氨酶(AST)活性显著低于对照组和ECM10组(P<0.05)；
[0179] ECM10组的总胆固醇(TC)显著高于其他各组(P<0.05)，而其它各组总胆固醇(TC)无显著性差异(P>0.05)；
[0180] ECM10组的高密度脂蛋白(HDL-C)显著高于对照组(P<0.05)；
[0181] ECM30组的低密度脂蛋白(LDL-C)显著低于对照组(P<0.05)。
[0182] 试验组高密度脂蛋白/总胆固醇(HDL-C/TC)与对照组无显著性差异(P>0.05)。
[0183] 3)饲料中不同乙醇梭菌蛋白水平对大口黑鲈肝脏组织的影响
[0184] Control组、ECM10组和ECM40组大口黑鲈肝脏组织切片结果见图2。
[0185] 三组大口黑鲈肝细胞排列较为整齐，细胞界限较为明显，细胞核清晰可见，均未见明显异常。
[0186] 乙醇梭菌蛋白替代鱼粉后对大口黑鲈的生长性能无显著性影响，血浆中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性降低，甘油三酯(TG)显著下降，高密度脂蛋白/总胆固醇(HDL-C/TC)无显著性差异。
[0187] 说明乙醇梭菌蛋白具有改善肝功能和脂代谢的作用，且对大口黑鲈的肝脏组织结构没有负面影响。乙醇梭菌蛋白作为一种新型蛋白源替代鱼粉后养殖效果较好，可以用其替代鱼粉，提高养殖经济效益。
[0188] 以上仅为本发明的几个具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明公开的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
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