复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法及应用
阅读：913发布：2020-05-16
专利汇可以提供复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法及应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于中药注射液 质量 控制方法技术领域，具体涉及复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法及应用。复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：(1)获取复方苦参注射液1H-NMR初级 代谢物 指纹图谱A；(2)获取复方苦参注射液1H-NMR次级代谢物指纹图谱B；(3)对复方苦参注射液1H-NMR初级代谢产物指纹图谱A和 次级代谢产物 指纹图谱B进行指认和鉴定，确定指纹图谱A和B的特征峰；复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的应用，用于复方苦参注射液的质量检测。本发明建立的复方苦参注射液的1H-NMR指纹图谱，能同时表征复方苦参注射液中21种初级代谢物和次级代谢物，弥补了HPLC指纹图谱对部分成分无法检测的 缺陷 。，下面是复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法及应用专利的具体信息内容。
1.复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)取复方苦参注射液，蒸干，取干粉溶解于TSP重水溶液中得到混合溶液，将混合溶液做离心处理后，取上清液于核磁管中，进行核磁共振仪测试，使用核磁数据处理软件对谱图进行处理，获得复方苦参注射液1H-NMR初级代谢物指纹图谱A；
(2)取复方苦参注射液，加入等体积的乙酸乙酯反复萃取2-3次，合并萃取液，将合并后的萃取液蒸干，将留下的干粉溶解于重水溶液中得到混合溶液，将混合溶液做离心处理后，取上清液于核磁管中，使用核磁共振仪测试，并用核磁数据处理软件对谱图进行处理，获得复方苦参注射液1H-NMR次级代谢物指纹图谱B；
(3)对复方苦参注射液1H-NMR初级代谢产物指纹图谱A和次级代谢产物指纹图谱B进行指认和鉴定，利用标准品对照结合指纹图谱A和B中的核磁共振信号的化学位移、峰形及偶合常数，进行分析，确定指纹图谱A和B的特征峰；
指纹图谱A的特征峰为：苏氨酸、醋酸、脯氨酸、琥珀酸、胆碱、甘氨酸、乳糖、蔗糖、β-D-葡萄糖、α-D-葡萄糖、尿苷、延胡索酸、羟嘌呤醇、次黄嘌呤和甲酸盐；
指纹图谱B的特征峰为：苦参碱、N-甲基金雀花碱、氧化苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱、大泽米苷。
2.根据权利要求1所述的复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤(1)中所取的复方苦参注射液为0.5-2mL。
3.根据权利要求2所述的复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤(1)中的混合溶液中干粉为50-200mg，TSP重水溶液为700-1000μL。
4.根据权利要求1所述的复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤(2)中所取的复方苦参注射液为20-100mL。
5.根据权利要求4所述的复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤(2)中的混合溶液中重水溶液的体积为700-1000μL。
6.根据权利要求5所述的复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤(1)和步骤(2)中的蒸干均为采用水浴的方法蒸干。
7.根据权利要求6所述的复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤(1)中TSP重水溶液的浓度为1-10μM。
8.根据权利要求7所述的复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤(1)和步骤(2)中的离心处理均为在10000～16000rpm的转速下离心10-15分钟。
9.根据权利要求8所述的复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤(1)和步骤(2)用于核磁共振仪测试所取的上清液均为550-600μL。
10.利用权利要求1-9所述方法构建的复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的应用，其特征在于：用于复方苦参注射液的质量检测。
复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法及应用
技术领域
背景技术
[0002] 复方苦参注射液收载于卫生部药品标准第14册，标准编号为WS3-B-2752-97，是由苦参和白土苓两味药提取精制而成的，具有清热利湿、凉血解毒、散结止痛的作用，主要用于癌性疼痛的出血，亦可用于抗肿瘤、镇痛、增强免疫等。
[0003] 复方苦参注射液含有多种化学成分，但卫生部药品标准(WS3-B-2752-97)只规定了苦参碱的含量测定方法。2010年6月23日公开的200910244324.9号国家专利中，报道了有关复方苦参注射液的质量控制方法，建立了复方苦参注射液的HPLC指纹图谱。另外，已有文献建立了同时测定复方苦参注射液中苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱含量的方法。上述方法尽管有许多优点，但检测指标均为复方苦参注射液的次级代谢物。然而，复方苦参注射液中还含有大量的初级代谢物，其含量远远高于次级代谢物，对复方苦参注射液的质量控制有较大影响。使用上述方法进行检测时，常用的色谱柱在分离过程中会损失极性较大的水溶性成分，因此HPLC指纹图谱方法检测不到复方苦参注射液的初级代谢物。综上，为提高复方苦参注射液的质量，确保临床合理安全应用，需建立一种全面有效地表征复方苦参注射液化学组成的指纹图谱，实现对复方苦参注射液产品的全面质量控制。
发明内容
[0004] 本发明针对HPLC指纹图谱方法检测不到复方苦参注射液的初级代谢物的问题提供了一种能够全面有效地表征复方苦参注射液化学组成的复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法及应用。
[0005] 为达到上述目的本发明采用了以下技术方案：
[0006] 复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
[0007] (1)取复方苦参注射液，蒸干，取干粉溶解于TSP重水溶液中得到混合溶液，将混合溶液做离心处理后，取上清液于核磁管中，进行核磁共振仪测试，使用核磁数据处理软件对谱图进行处理，获得复方苦参注射液1H-NMR初级代谢物指纹图谱A；
[0008] (2)取复方苦参注射液，加入等体积的乙酸乙酯反复萃取2-3次，合并萃取液，将合并后的萃取液蒸干，将留下的干粉溶解于重水溶液中得到混合溶液，将混合溶液做离心处理后，取上清液于核磁管中，使用核磁共振仪测试，并用核磁数据处理软件对谱图进行处理，获得复方苦参注射液1H-NMR次级代谢物指纹图谱B；
[0009] (3)对复方苦参注射液1H-NMR初级代谢产物指纹图谱A和次级代谢产物指纹图谱B进行指认和鉴定，利用标准品对照结合指纹图谱A和B中的核磁共振信号的化学位移、峰形及偶合常数，进行分析，确定指纹图谱A和B的特征峰；
[0011] 指纹图谱B的特征峰为：苦参碱、N-甲基金雀花碱、氧化苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱、大泽米苷。
[0012] 进一步，所述步骤(1)中所取的复方苦参注射液为0.5-2mL。
[0013] 再进一步，所述步骤(1)中的混合溶液中干粉为50-200mg，TSP重水溶液为700-1000μL。
[0014] 更进一步，所述步骤(2)中所取的复方苦参注射液为20-100mL。
[0015] 更进一步，所述步骤(2)中的混合溶液中重水溶液的体积为700-1000μL。
[0016] 更进一步，所述步骤(1)和步骤(2)中的蒸干均为采用水浴的方法蒸干。
[0017] 更进一步，所述步骤(1)中TSP重水溶液的浓度为1-10μM。
[0018] 更进一步，所述步骤(1)和步骤(2)中的离心处理均为在10000～16000rpm的转速下离心10-15分钟。
[0019] 更进一步，所述步骤(1)和步骤(2)用于核磁共振仪测试所取的上清液均为550-600μL。
[0020] 复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的应用，用于复方苦参注射液的质量检测。
[0021] 与现有技术相比本发明具有以下优点：
[0024] 图1复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱A
[0025] 图2复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱B
[0026] 图3不同批次复方苦参注射液的1H-NMR指纹图谱A
[0027] 图4不同批次复方苦参注射液的1H-NMR指纹图谱指纹图谱B
[0028] 图5 1H-NMR指纹图谱相似度分析
[0029] 图6不同批次复方苦参注射液初级代谢产物的相对含量柱状图
[0030] 图7不同批次复方苦参注射液次级代谢产物的相对含量柱状图
具体实施方式
[0031] 为了进一步阐述本发明的技术方案，下面结合附图及实施例对本发明进行进一步说明。
[0032] 实施例1
[0033] 复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
[0034] (1)取1mL复方苦参注射液，采用水浴的方法蒸干，取100mg干粉溶解于800μL的TSP重水溶液中得到混合溶液，所述TSP重水溶液浓度为3.125μM，将混合溶液在13000rpm的转速下离心10分钟后，取600μL上清液于核磁管中，在25℃下于600MHzNMR仪上测定，测定频率1H-NMR 600.13MHz，扫描范围-5～15ppm，扫描次数64次，谱宽＝12335.5Hz，延迟时间(RD)＝1.0s，复方苦参注射液初级代谢产物采用noesyppr1d序列，谱图导入MestReNova(version 6.1.0，Mestrelab Research，Santiago de Compostella，Spain)，以TSP溶剂峰定标，手动进行基线和相位校正，获得复方苦参注射液1H-NMR初级代谢物指纹图谱A，如图
1；
1；
[0035] (2)取30mL复方苦参注射液，加入等体积的乙酸乙酯反复萃取3次，合并萃取液，将合并后的萃取液采用水浴的方法蒸干，将留下的干粉溶解于800μL重水溶解溶液中得到混合溶液，将混合溶液在13000rpm的转速下离心10分钟后，取600μL上清液于核磁管中，在25℃下于600MHz NMR仪上测定，测定频率1H-NMR 600.13MHz，扫描范围-5～15ppm，扫描次数64次，谱宽＝12335.5Hz，延迟时间(RD)＝1.0s，复方苦参注射液次级代谢产物采用zgcppr序列，谱图导入MestReNova(version 6.1.0，Mestrelab Research，Santiago de Compostella，Spain)，手动进行基线和相位校正，获得复方苦参注射液1H-NMR次级代谢物指纹图谱B，如图2；
[0036] (3)对复方苦参注射液1H-NMR初级代谢产物指纹图谱A和次级代谢产物指纹图谱B进行指认和鉴定，利用标准品对照结合指纹图谱A和B中的核磁共振信号的化学位移、峰形及偶合常数，进行分析，确定指纹图谱A和B的特征峰；
[0037] 指纹图谱A的特征峰为：指纹图谱A(初级代谢物)的特征峰为：苏氨酸(δ＝1.33±0.02，d，J＝6.6Hz)、醋酸(δ＝1.93±0.02，s)、脯氨酸(δ＝2.08±0.02，m)、琥珀酸(δ＝2.42±0.02，s)、胆碱(δ＝3.21±0.02，s)、甘氨酸(δ＝3.60±0.02，s)、乳糖(δ＝5.20±0.02，d，J＝3.6Hz)、蔗糖(δ＝5.42±0.02，d，J＝3.6Hz)、β-D-葡萄糖(δ＝4.65±0.02，d，J＝
7.8Hz)、α-D-葡萄糖(δ＝5.24±0.02，d，J＝3.6Hz)、尿苷(δ＝5.89±0.02，dd，J＝1.8Hz，J＝1.8Hz)、延胡索酸(δ＝6.53±0.02，s)、羟嘌呤醇(δ＝8.18±0.02，s)、次黄嘌呤(δ＝8.22±0.02，s)和甲酸盐(δ＝8.46±0.02，s)；
7.8Hz)、α-D-葡萄糖(δ＝5.24±0.02，d，J＝3.6Hz)、尿苷(δ＝5.89±0.02，dd，J＝1.8Hz，J＝1.8Hz)、延胡索酸(δ＝6.53±0.02，s)、羟嘌呤醇(δ＝8.18±0.02，s)、次黄嘌呤(δ＝8.22±0.02，s)和甲酸盐(δ＝8.46±0.02，s)；
[0038] 指纹图谱B的特征峰为：指纹图谱B(次级代谢物)的特征峰为：苦参碱(δ＝2.96±0.02，t)、N-甲基金雀花碱(δ＝7.58±0.02，dd，J＝7.2Hz，J＝7.2Hz)、氧化苦参碱(δ＝4.22±0.02，dd，J＝7.2Hz，J＝7.2Hz)、槐定碱(δ＝1.91±0.02，d，J＝14.4Hz)、氧化槐果碱(δ＝
5.84±0.02，d，J＝9.6Hz)、大泽米苷(δ＝4.58±0.02，d，J＝6.6Hz)。
5.84±0.02，d，J＝9.6Hz)、大泽米苷(δ＝4.58±0.02，d，J＝6.6Hz)。
[0039] 表1复方苦参注射液中的特征指纹峰归属
[0040]
[0041] 实施例2
[0042] (1)取0.5mL复方苦参注射液，采用水浴的方法蒸干，取50mg干粉溶解于700μL的TSP重水溶液中得到混合溶液，所述TSP重水溶液浓度为1μM，将混合溶液在10000rpm的转速下离心13分钟后，取550μL上清液于核磁管中，在25℃下于600MHz NMR仪上测定，测定频率1H-NMR 600.13MHz，扫描范围-5～15ppm，扫描次数64次，谱宽＝12335.5Hz，延迟时间(RD)＝1.0s，复方苦参注射液初级代谢产物采用noesyppr1d序列，谱图导入MestReNova(version 6.1.0，Mestrelab Research，Santiago de Compostella，Spain)，以TSP溶剂峰定标，手动进行基线和相位校正，获得复方苦参注射液1H-NMR初级代谢物指纹图谱A，如图
1；
1；
[0043] (2)取20mL复方苦参注射液，加入等体积的乙酸乙酯反复萃取2次，合并萃取液，将合并后的萃取液采用水浴的方法蒸干，将留下的干粉溶解于700μL重水溶液中得到混合溶液，将混合溶液在10000rpm的转速下离心13分钟后，取550μL上清液于核磁管中，在25℃下于600MHz NMR仪上测定，测定频率1H-NMR 600.13MHz，扫描范围-5～15ppm，扫描次数64次，谱宽＝12335.5Hz，延迟时间(RD)＝1.0s，复方苦参注射液次级代谢产物采用zgcppr序列，谱图导入MestReNova(version 6.1.0，Mestrelab Research，Santiago de Compostella，Spain)，手动进行基线和相位校正，获得复方苦参注射液1H-NMR次级代谢物指纹图谱B，如图2；
[0044] (3)对复方苦参注射液1H-NMR初级代谢产物指纹图谱A和次级代谢产物指纹图谱B进行指认和鉴定，利用标准品对照结合指纹图谱A和B中的核磁共振信号的化学位移、峰形及偶合常数，进行分析，确定指纹图谱A和B的特征峰；
[0045] 指纹图谱A的特征峰为：指纹图谱A(初级代谢物)的特征峰为：苏氨酸(δ＝1.33±0.02，d，J＝6.6Hz)、醋酸(δ＝1.93±0.02，s)、脯氨酸(δ＝2.08±0.02，m)、琥珀酸(δ＝2.42±0.02，s)、胆碱(δ＝3.21±0.02，s)、甘氨酸(δ＝3.60±0.02，s)、乳糖(δ＝5.20±0.02，d，J＝3.6Hz)、蔗糖(δ＝5.42±0.02，d，J＝3.6Hz)、β-D-葡萄糖(δ＝4.65±0.02，d，J＝
7.8Hz)、α-D-葡萄糖(δ＝5.24±0.02，d，J＝3.6Hz)、尿苷(δ＝5.89±0.02，dd，J＝1.8Hz，J＝1.8Hz)、延胡索酸(δ＝6.53±0.02，s)、羟嘌呤醇(δ＝8.18±0.02，s)、次黄嘌呤(δ＝8.22±0.02，s)和甲酸盐(δ＝8.46±0.02，s)；
7.8Hz)、α-D-葡萄糖(δ＝5.24±0.02，d，J＝3.6Hz)、尿苷(δ＝5.89±0.02，dd，J＝1.8Hz，J＝1.8Hz)、延胡索酸(δ＝6.53±0.02，s)、羟嘌呤醇(δ＝8.18±0.02，s)、次黄嘌呤(δ＝8.22±0.02，s)和甲酸盐(δ＝8.46±0.02，s)；
[0046] 指纹图谱B的特征峰为：指纹图谱B(次级代谢物)的特征峰为：苦参碱(δ＝2.96±0.02，t)、N-甲基金雀花碱(δ＝7.58±0.02，dd，J＝7.2Hz，J＝7.2Hz)、氧化苦参碱(δ＝4.22±0.02，dd，J＝7.2Hz，J＝7.2Hz)、槐定碱(δ＝1.91±0.02，d，J＝14.4Hz)、氧化槐果碱(δ＝
5.84±0.02，d，J＝9.6Hz)、大泽米苷(δ＝4.58±0.02，d，J＝6.6Hz)。
5.84±0.02，d，J＝9.6Hz)、大泽米苷(δ＝4.58±0.02，d，J＝6.6Hz)。
[0047] 实施例3
[0048] (1)取2mL复方苦参注射液，采用水浴的方法蒸干，取200mg干粉溶解于1000μL的TSP重水溶液中得到混合溶液，所述TSP重水溶液浓度为10μM，将混合溶液在16000rpm的转速下离心15分钟后，取580μL上清液于核磁管中，在25℃下于600MHz NMR仪上测定，测定频率1H-NMR 600.13MHz，扫描范围-5～15ppm，扫描次数64次，谱宽＝12335.5Hz，延迟时间(RD)＝1.0s，复方苦参注射液初级代谢产物采用noesyppr1d序列，谱图导入MestReNova(version 6.1.0，Mestrelab Research，Santiago de Compostella，Spain)，以TSP溶剂峰定标，手动进行基线和相位校正，获得复方苦参注射液1H-NMR初级代谢物指纹图谱A，如图1；
[0049] (2)取100mL复方苦参注射液，加入等体积的乙酸乙酯反复萃取3次，合并萃取液，将合并后的萃取液采用水浴的方法蒸干，将留下的干粉溶解于1000μL重水溶液中得到混合溶液，将混合溶液在16000rpm的转速下离心15分钟后，取580μL上清液于核磁管中，在25℃下于600MHz NMR仪上测定，测定频率1H-NMR 600.13MHz，扫描范围-5～15ppm，扫描次数64次，谱宽＝12335.5Hz，延迟时间(RD)＝1.0s，复方苦参注射液次级代谢产物采用zgcppr序列，谱图导入MestReNova(version 6.1.0，Mestrelab Research，Santiago de Compostella，Spain)，手动进行基线和相位校正，获得复方苦参注射液1H-NMR次级代谢物指纹图谱B，如图2；
[0050] (3)对复方苦参注射液1H-NMR初级代谢产物指纹图谱A和次级代谢产物指纹图谱B进行指认和鉴定，利用标准品对照结合指纹图谱A和B中的核磁共振信号的化学位移、峰形及偶合常数，进行分析，确定指纹图谱A和B的特征峰；
[0051] 指纹图谱A的特征峰为：指纹图谱A(初级代谢物)的特征峰为：苏氨酸(δ＝1.33±0.02，d，J＝6.6Hz)、醋酸(δ＝1.93±0.02，s)、脯氨酸(δ＝2.08±0.02，m)、琥珀酸(δ＝2.42±0.02，s)、胆碱(δ＝3.21±0.02，s)、甘氨酸(δ＝3.60±0.02，s)、乳糖(δ＝5.20±0.02，d，J＝3.6Hz)、蔗糖(δ＝5.42±0.02，d，J＝3.6Hz)、β-D-葡萄糖(δ＝4.65±0.02，d，J＝
7.8Hz)、α-D-葡萄糖(δ＝5.24±0.02，d，J＝3.6Hz)、尿苷(δ＝5.89±0.02，dd，J＝1.8Hz，J＝1.8Hz)、延胡索酸(δ＝6.53±0.02，s)、羟嘌呤醇(δ＝8.18±0.02，s)、次黄嘌呤(δ＝8.22±0.02，s)和甲酸盐(δ＝8.46±0.02，s)；
7.8Hz)、α-D-葡萄糖(δ＝5.24±0.02，d，J＝3.6Hz)、尿苷(δ＝5.89±0.02，dd，J＝1.8Hz，J＝1.8Hz)、延胡索酸(δ＝6.53±0.02，s)、羟嘌呤醇(δ＝8.18±0.02，s)、次黄嘌呤(δ＝8.22±0.02，s)和甲酸盐(δ＝8.46±0.02，s)；
[0052] 指纹图谱B的特征峰为：指纹图谱B(次级代谢物)的特征峰为：苦参碱(δ＝2.96±0.02，t)、N-甲基金雀花碱(δ＝7.58±0.02，dd，J＝7.2Hz，J＝7.2Hz)、氧化苦参碱(δ＝4.22±0.02，dd，J＝7.2Hz，J＝7.2Hz)、槐定碱(δ＝1.91±0.02，d，J＝14.4Hz)、氧化槐果碱(δ＝
5.84±0.02，d，J＝9.6Hz)、大泽米苷(δ＝4.58±0.02，d，J＝6.6Hz)。
5.84±0.02，d，J＝9.6Hz)、大泽米苷(δ＝4.58±0.02，d，J＝6.6Hz)。
[0053] 实施例4
[0054] 本方法用于复方苦参注射液的质量检测。
[0055] 收集市售10批复方苦参注射液(记为：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)，按实施例1的方法测定1H-NMR指纹图谱，得到不同批次复方苦参注射液的1H-NMR指纹图谱A和B，如图3，图4。应用MestReNova软件以δ0.04ppm积分段对指纹图谱A(化学位移区间0.38-9.98)和指纹图谱B(化学位移区间0.76-9.83)进行分段积分，其中指纹图谱Bδ4.68-5.08为残余水峰不进行积分，将积分后的数据导入到Excel表中，即得到每段化学位移值下的相对峰面积积分值，通过夹角余弦法分别计算初级代谢物和次级代谢物1H-NMR指纹图谱的相似度，相似度大于0.95则认为注射液合格。结果见图5。
[0056] 实施例5
[0057] 不同批次复方苦参注射液初级代谢产物的相对含量比较
[0058] 对复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱A进行分析，以TSP为内标，通过积分面积计算15种初级代谢产物的相对含量。从图6可以看出不同批次之间代谢产物苏氨酸、醋酸、乳糖、蔗糖、α-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、延胡索酸、羟嘌呤醇、甲酸盐的相对含量存在较大差异。由该实施例可以看出，核磁共振指纹图谱可以用于复方苦参注射液中初级代谢产物的均一性比较。
[0059] 实施例6
[0060] 不同批次复方苦参注射液次级代谢产物的相对含量比较
[0061] 对复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱B进行分析，以TSP为内标，通过积分面积计算6种次级代谢产物的相对含量。从图7可以看出不同批次之间代谢产物N-甲基金雀花碱、槐定碱和大泽米苷的相对含量存在较大差异。由该实施例可以看出，核磁共振指纹图谱可以用于复方苦参注射液中次级代谢产物的均一性比较。
[0062] 以上显示和描述了本发明的主要特征和优点,对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
[0063] 此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
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