Verfahren zur Herstellung eines lagerfähigen azadirachtin- reichen Insektizids aus Samenkernen des Neem-Baumes

Beschreibung:

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines lagerfähigen azadirachtinreichen Insektizids aus Bestand¬ teilen insbesondere aus den Samenkernen des Neem-Baumes, bei dem zunächst die Bestandteile zerkleinert werden und den zerkleinerten Bestandteilen ein Lösungsmittel zugesetzt ist, das das Azadirachtin aus den Bestandteilen extrahiert, wobei im Anschluß hieran das Azadirachtin im Lösungsmittels angereichert wird.

Zahlreiche Untersuchungen haben zur Erkenntnis geführt, daß davon ausgegangen werden kann, daß unter den Inhaltstoffen der verschiedenen Teile - insbesondere der Früchte - des Neem-Baumes (Azadirachta indica A. Juss) solche mit optima¬ len Eigenschaften für einen umweltfreundlichen Pflan¬ zenschutz enthalten sind. Azadirachtin gehört in diesem Zu¬ sammenhang zu den potentesten und in größeren Mengen (ca. 1 bis 20 g pro kg) in den Früchten des Neem-Baumes vorkommen¬ den Substanzen.

Die Früchte des Neem-Baumes wurden bereits zur Herstellung eines Insektizids verwandt, zB mit einem Verfahren gemäß US-PS 4,556,562. Nach diesem Verfahren werden ethanollösli- che Inhaltsstoffe mit diesem Alkohol bei 80 °C extrahiert. Im Anschluß hieran wird der Alkohol abgedampft und der Rückstand mit einer Detergentien-Wassermischung formuliert. Bei diesem bekannten Extrationsverfahren wie auch bei ande¬ ren bekannten Extrationsverfahren, bei denen organische Lö- sungs ittel verwendet werden, muß zur Gewinnung eines fe¬ sten Wirkstoffkonzentrates das Lösungsmittel abgedampft werden. Alle bekannten Verfahren, die ein ölarmes Produkt ergeben, erfordern zahlreiche arbeitsintensive Reinigungs- schritte (Ausschütteln, Einengen) wobei ohne Anwendung noch aufwendigerer Trennverfahren wie beispielsweise chromato¬ graphischer Methoden, die Azadirachtingehalte des Produktes nur zwischen wenigen bis zu etwa 35 % liegen.

Schwierigkeiten bereitet insbesondere die wirtschaftliche Abtrennung des störenden Öls. Dieses Öl wird gemäß den der- zeit bekannten Extraktionsmethoden entweder vor oder nach der Isolierung der azadirachtinreichen Inhaltsstoffe abge¬ trennt.

Das Öl kann zB durch Extration mit Kohlenwasserstoffen (zB Petroläther, Hexan) oder durch Pressen aus den gemah- lenen Neem-Kernen entfernt werden. Insbesondere beim Pres¬ sen tritt eine Temperaturerhöhung des Nee -Materials ein, welche zu einer mehr oder weniger starken Zersetzung des Azadirachtins führt und damit die spätere Ausbeute an Wirk¬ stoff erheblich verringert.

Der durch die Extraktion der gemahlenen Neem-Kerne mit or¬ ganischen Lösungsmitteln wie Alkoholen, Ketonen oder halo- genierten Kohlenwasserstoffen erhaltene Rohextrakt wird häufig nach der Überführung in ein mit Wasser mischbares Lösungsmittel durch Ausschütteln mit Kohlenwasserstoffen (zB Petroläther, Hexan) von Öl befreit. Der Nachteil die¬ ses Verfahrens besteht darin, daß ein Teil des Wirkstoffes in die ölphase gelangt und somit den Ertrag mindert. - 3 -

Zur Isolierung des azadirachtinhaltigen Wirkstoffes ist es des weiteren bekannt einen wäßrigen Extrakt der Neem-Kerne zu verwenden, dem der Wirkstoff mit Methyl-t-Butylether entzogen wird. Im Anschluß hieran wird der Methyl-t-Bu- tylether abgedampft und der Rückstand wird in Methanol auf¬ genommen. Im Anschluß wird dieser mit Petrolether ausge¬ schüttelt und eingeengt. Durch diese Maßnahme erhält man eine Ausbringung von 0,8 % bezogen auf die Neem-Kerne eines biologisch aktiven Produktes. Ein derartiges Verfahren ist wirtschaftlich nicht einsetzbar.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde ein wirtschaftli¬ ches und damit preiswertes Verfahren vorzuschlagen, das technisch einfach ist und eine hohe Ausbringung von azadi- rachtinhaltigem Insektizid ermöglicht, wobei das erhaltene Insektizid weitgehend frei von öl ist.

Diese Aufgabe wird mit den Merkmalen des Anspruches 1 ge¬ löst.

Gemäß der Erfindung werden die Neem-Kerne vorteilhaft zunächst zerkleinert, wobei als Lösungsmittel Wasser zuge- setzt wird. Diese Extraktion des Azadirachtins aus* den Ker¬ nen kann mehrfach mit frischem Wasser wiederholt werden, bis der Wirkstoff bis zu 90 % aus dem Mahlgut entfernt ist. Im Anschluß hieran muß der Wirkstoff aus dem Wasser extra¬ hiert werden, was auf zwei Arten geschehen kann.

Zum einen wird dem Wasser, welches den Wirkstoff enthält, ein nicht vollständig mit Wasser mischbares organisches Lö¬ sungsmittel zugesetzt, welches eine größere Löslichkeit für das Azadirachtin hat als das Wasser selbst. Nach erfolgter Durchmischung und Aufnahme des Azadirachtins durch das or- ganische Lösungsmittel erfolgt eine Ruhephase, in der eine Phasentrennung eintritt. Diese Art der Gewinnung des Azadi- rachtins in zunächst wäßriger Lösung hat den Vorteil, daß störendes Öl nicht in der azadirachtin reichen Phase an¬ fällt und somit nicht mehr mühselig aus dieser entfernt werden muß. Im Anschluß daran wird die das Azadirachtin enthaltende Lösung eingeengt, worauf dann das Konzentrat in die 1 bis 20-fachen Volumenmenge eines flüssigen Kohlenwas¬ serstoffes eingegeben und mit diesem verrührt wird. Als Produkt erhält man einen sich am Boden abscheidenden azadi- rachtiπreichen Niederschlag, der entnommen und getrocknet werden kann. Mit diesem Verfahren wird ein fester Wirkstoff mit großer Lagerfähigkeit erhalten.

Gemäß dem zweiten Weg des erfindungsgemäßen Verfahrens wird dem das Azadirachtin enthaltene Wasser ein Tensid mit einer Trübungstemperatur zugegeben, die vorteilhaft zwischen 20 und 80 °C liegt. Dieses Tensid hat wiederum eine höhere Löslichkeit für das Azadirachtin als das Wasser, so daß nach Temperaturerhöhung über die Trübungstemperatur und der dadurch bedingten Phasentrennung die azadirachtinreiche Phase abgetrennt werden kann. Der so erhaltene Wirkstoff kann entweder unmittelbar eingesetzt werden oder aber auch für eine weitere Lagerung eingeengt werden.

Die auf dem ersten oder zweiten Weg gewonnen Wirkstoffkon¬ zentrate können vorteilhaft mit Tensiden formuliert werden, wobei vorteilhaft Polyäthylenoxidderivate, wie sie auch zur Extraktion eingesetzt werden, verwendet werden.

Das erfindungsgemäße Verfahren wird nachstehend anhand meh¬ rerer Beispiele näher erläutert.

Beide im folgenden beschriebene Verfahren basieren auf der Anwendung von Wasser als primärem Extraktionsmittel. Hierzu werden die Samenkerne der getrockneten Neem-Früchte (bei¬ spielsweise unter Verwendung eines Fleischwolfes mit einer Scheibe deren Löcher Durchmesser von etwa 3 bis 8 mm besit¬ zen) gemahlen. Das erhaltene Mahlgut wird sodann in die etwa 5 bis 20-fache Menge (optimal so, daß die Mahlgutphase ca. 30 bis 50 % des Gesamtansatzes beträgt; bei Sedimenta- tion entspricht das ca. der 6 bis 10-fachen Menge Wasser, beispielsweise bei Zentrifugation nur etwa einem Wasserzu¬ satz der 2 bis 5-fachen Mahlgutmenge) Wasser bei Raumtempe¬ ratur (ca. 20 °C) eingerührt, während 3 bis etwa 12 Stunden (oder mehr - das Gleichgewicht der Verteilung von Azadi- rachtin zwischen Mahlgut und Wasser ist nach etwa 5 Stunden weitgehend erreicht - Temperaturerhöhung bis 70 °C be¬ schleunigt die Gleichgewichtseinstellung etwas) mehrfach gerührt (ca. alle 30 Minuten) und dann zur Sedimentation für 1 bis 3 Stunden stehen gelassen. Die Trennung der wäß- rigen Phase vom Bodensatz kann durch verschiedene physika¬ lische Maßnahmen wie Filtration, Sedimentation, Zentrifuga¬ tion erfolgen. Nach dieser Zeit bildet sich ein aus den nicht gelösten Resten der Neem-Kerne bestehender Bodensatz, von dem die leicht trübe wässrige Lösung abgetrennt wird.

Zur Erhöhung der Ausbeute kann die Extraktion mit frischem Wasser und dem Bodensatz wiederholt werden. Im allgemeinen befinden sich nach 2 bis 3 Extraktionen etwa 90 % des vor¬ handenen Azadirachtrin in der wäßrigen Phase. Die wäßrige Phasen (Wasserextrakt) können zur weiteren Verarbeitung vereinigt werden.

Lösun smittelextraktion

Dem Wasserextrakt wird ein mit Wasser nicht vollständig mischbares organisches Lösungsmittel zB Ketone (wie Buta- non, Pentanon, Hexanon), Alkohole (wie 1-Butanol, Penta- nol) , Ester (wie Essigsäureethyleεter, Essigsäure-n-bu- tylester) oder halogenierte Kohlenwasserstoffe (wie Di- chlormethan, Trichlor ethan) etwa im Verhältnis Lösungsmit- tel : Wasser « l : 10 unter Durchmischung zugesetzt und dann mehrere Stunden stehen gelassen, bis sich die nicht mischbaren Phasen getrennt haben (ca. 5 bis 24 Stunden) . Die organische Phase wird abgetrennt und auf ca. 1/5 bis 1/10 des Volumens eingeengt. Das erhaltene Konzentrat wird langsam in das 5 bis 20-fache Volumen an flüssigen Kohlen¬ wasserstoffen wie Hexan, Petrolether eingerührt, worauf sich ein weißer bis gelblicher Niederschlag bildet. Nach einigen Minuten hat sich der Niederschlag am Gefäßboden ge- sammelt, so daß die unpolare organische Lösung leicht abge¬ gossen werden kann. Nach Trocknen des Niederschlages be¬ trägt der Azadirachtingehalt etwa 30 bis 60 % mit einer Ausbeute von 80 bis 95 % in Bezug auf den Azadi¬ rachtingehalt der verwendeten Neem-Kerne. Die insektizide Aktivität des Produktes kommt derjenigen des reinen Azadi¬ rachtin praktisch gleich, da auch die anderen vorhandenen Inhaltsstoffe - vermutlich - insektizid wirken.

Extraktion mittels Tensiden

Der Wasserextrakt wird bei Raumtemperatur mit etwa 1 bis 10% (optimal sind ca. 4 %) eines Tensids mit Trübungstempe¬ ratur zwischen etwa 20 und 80 "c (wie p-tertiär-bctylphe- nol-7,5-glykolether, p-tertiär-Octylphenol-8-10-gly- kolether, Ölsäure-amidheptaglykolether, Dodecylalkohol- heptaglykolether, p-Iso-nonylphenoldekaglykolether) ge- mischt und auf eine Temperatur, die um einige Grade - etwa 5° - oberhalb der Trübungstemperatur liegt, erwärmt. Die nach kurzem Stehen gebildete tensid- und azadirachtinreiche (untere) Phase wird abgetrennt und kann direkt als Pflanzenschutzmittelkonzentrat verwendet werden. Beispiel 1 :

Extraktion mittels Essigsäureethylester

1 kg Neem-Kerne werden unter Verwendung eines Fleischwol¬ fes, mit einer Vorsatzscheibe deren Löcher einen Durchmes- ser von etwa 4 mm besitzen, gemahlen und in 2,5 1 Wasser mit einer Temperatur von 30 °C eingerührt. Nach 10 stündi¬ gem Stehen wird die wäßrige Phase vom Mahlgutrückstand ab¬ gegossen. Der Mahlgutrückstand wird zur weiteren Entfernung der wäßrigen Phase durch ein Leinentuch gepreßt. Die ge- samte erhaltene wäßrige Phase (1,9 1) wird mit 250 ml Es¬ sigsäureethylester gemischt und im Schütteltrichter bei Raumtemperatur 6 Stunden stehen gelassen. Nach dieser Zeit wird die obere, esterreiche Phase (ca. 150 ml) abgetrennt, zur wäßrigen Phase 200 ml Essigsäureethyleser zugegeben und wieder gemischt. Nach Abnahme der Esterphase nach ca. 4 Stunden wird die Extraktion mit 200 ml Ester wiederholt. Die drei Esterphasen (insgesamt ca. 500 ml) werden verei¬ nigt und im Vakuum bei ca. 45 °C auf 1/10 ihres Volumens eingeengt. Der Destillationsrückstand wird noch warm lang- sam in 400 ml Petrolether eingerührt, wobei der azadirachtinhaltige Wirkstoff ausfällt und sich nach ca. 30 Minuten vollständig am Boden abgesetzt hat. Die flüssige Phase wird abgeschüttet, der Niederschlag in ca. 20 ml fri¬ schen Petrolether aufgenommen, zentrifugiert und der Pe- trolether vom Niederschlag abgeschüttet. Nach Trocknung des Niederschlages für 12 Stunden bei 30 °C werden 4,61 g eines leicht gelblichen Pulvers erhalten, dessen Azadirachtinge- halt nach HPLC-Analyse 44 % beträgt.

Bei zweimaliger Wiederholung der Wasserextraktion des Mahl- gutrückstandes mit Essigsäureethylester werden noch 0,87 g und 0,58 g pulverförmiges Rohazadirachtin mit Azadirach- tingehalten von 35 und 41 % erhalten. Insgesamt ergab diese Extraktion also 6,06 g gelbliches Pulver bei einer Azadi- rachtinmenge von 2,6 g. Die Analyse des Azadirachtingehal- tes der Neem-Kerne von denen ausgegangen wurde ergibt 2,9 g Azadirachtin/kg Kerne. Die Gesamtausbeute an Azadirachtin beträgt also 90 %.

Beispiel 2:

Extraktion mit Tensiden

5 kg Neem-Kerne werden unter Verwendung eines Fleischwol¬ fes, mit einer Vorsatzscheibe deren Löcher einen Durchmes- ser von etwa 6 mm besitzen, gemahlen und in 70 1 Wasser mit einer Temperatur von 20 °C eingerührt. Nach 10 stündigem Stehen wird die obere, wäßrige Phase (45 1) vom Mahlgut¬ rückstand (35 1) abgetrennt und in einem 60 1 Faß mit Aus¬ lauf unten mit 1,45 1 p-tertiär-Octylphenol-7,5-glykolether bei 18 " C gut durchmischt.

Mittels eines an einem auf 75 °C eingestellten Umwälzther¬ mostaten angeschlossenen PVC-Schlauches (15 m Länge, 2 cm äußerer Durchmesser), der in das 60 1 Faß gewickelt ist, wird der tensidhaltige Wasserextrakt innerhalb von 3 Stun- den auf 63 °C erwärmt, wobei sich schon bald eine tensid- reiche Phase am Faßboden abscheidet, die ca. alle 30 Minu¬ ten durchgerührt wird. Bei erreichen einer Temperatur von 63 ^* C wird die Lösung noch ca. 30 Minuten stehen gelassen und sodann die untere Phase (5,5 1) abgelassen. Der Azadi- rachtingehalt der oberen und unteren Phase beträgt 2,7 bzw. 5,4 g. Für die tensidreiche Phase entspricht dies einer Azadirachtinkonzentration von 1 g Azadirachtin/1. Diese Lö¬ sung kann beispielsweise nach Verdünnung mit Wasser im Ver¬ hältnis l : 50 direkt als Pflanzenschutzmittel eingesetzt werden. Durch Wiederholung der Phasentrennung mit frischem Tensid oder Erhöhung der anfänglichen Tensidkonzentration kann die Ausbeute gesteigert werden.

Für dieses Verfahren ist es sinnvoll die Trübungstemperatur in einem möglichst weiten Temperaturbereich einstellen zu können. Dies ist beispielsweise möglich bei Verwendung von Mischungen verschiedener Tenside (wie p-tertiär-Octyl- phenol-7,5-glykolether und p-tertiär-Octylphenol-8-10-gly- kolether; für diese beiden Substanzen wird ein nahezu li¬ nearer Zusammenhang zwischen der Trübungstemperatur und der Massenzusammensetzung der beiden Tenside gefunden).

Zusammenfassend ist festzuhalten:

Ausführliche Wirksamkeitsuntersuchungen (bezogen auf den Azadirachtingehalt) zeigen, daß die biologische Aktivität der gemäß dem erfindungsgemäßen Verfahren gewonnenen Wirk¬ stoffe, derjenigen des reinen Azadirachtin etwa gleich kommt.

Die beschriebenen Verfahren haben den Vorteil, daß sie mit einem Minimum an Extraktionsschritten und wenigen organi¬ schen Lösungsmitteln auskommen und dabei der Ölgehalt der Produkte trotzdem vernachlässigbar ist. Aus den bei diesen Verfahren anfallenden Rückständen kann nach Wunsch das Neem-Öl leicht nach bekannten Verfahren extrahiert werden.

Die beschriebenen Verfahren stellen eine sehr einfache und wirtschaftliche Möglichkeit da, ein botanisches, umwelt¬ freundliches Insektizid herzustellen.