含有游离脂肪酸和/或游离脂肪酸衍生物的微乳液形式组合物
阅读：1018发布：2020-11-25
专利汇可以提供含有游离脂肪酸和/或游离脂肪酸衍生物的微乳液形式组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供适合用作递送媒介物的 植物 支持制剂，或递送媒介物的组分，以向植物递送一种或多种植物学有益物质，并且增强该被递送物质在植物中或植物上的迁移，该制剂包含由在 水 性载体中的基于 脂肪酸 的组分的囊泡或微海绵的分散液组成的微－乳液，该基于脂肪酸的组分包含至少一种选自 游离脂肪酸 和游离脂肪酸衍 生物 的基于长链脂肪酸的物质。该分散液的优选特征在于至少50％的该囊泡或微海绵的直径尺寸在50nm和5微米之间。该分散液的特征还进一步在于该微－乳液具有在－25mV和－60mV之间的动电势。，下面是含有游离脂肪酸和/或游离脂肪酸衍生物的微乳液形式组合物专利的具体信息内容。
1.植物学有益的植物支持制剂，其包含由在水性载体中的基于脂 肪酸的组分的囊泡或微海绵的分散液组成的微-乳液，该基于脂肪酸的 组分包含至少一种选自游离脂肪酸和游离脂肪酸衍生物的基于长链脂 肪酸的物质。
2.权利要求1的植物支持制剂，其中该分散液的特征在于至少95％ 的该囊泡或微海绵的直径尺寸在50nm到5微米之间。
3.权利要求1的植物支持制剂，其特征在于该微-乳液具有-35mV 到-60mV之间的动电势。
4.权利要求1的植物支持制剂，该基于脂肪酸的组分选自油酸、 亚油酸、α-亚油烯酸、γ-亚油烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸[C20:5 ω3]、二十二碳六烯酸[C22:6ω3]和蓖麻油酸及其衍生物，选自其C1 到C6烷基酯、其甘油-聚乙二醇酯和主要由基于蓖麻油酸的油如蓖麻油 组成的氢化或未氢化的天然油与环氧乙烷的反应产物。
5.权利要求1的植物支持制剂，其中该微-乳液的脂肪酸组分由 酯化脂肪酸的混合物组成或包含酯化脂肪酸的混合物。
6.权利要求5的植物支持制剂，其中该微-乳液的脂肪酸组分由已 知为维生素F乙酯的产物组成。
7.权利要求1的植物支持制剂，其中该微-乳液的脂肪酸组分包含 已知为二十碳五烯酸[C20:5ω3]和二十二碳六烯酸[C22:6ω3]的长链 脂肪酸或由其组成。
8.权利要求5、6或7的植物支持制剂，其中该微-乳液的脂肪酸 组分另外包含主要由基于蓖麻油酸的油组成的氢化天然油与环氧乙烷 的反应产物。
9.权利要求8的植物支持制剂，其中主要由基于蓖麻油酸的油组 成的天然油与环氧乙烷的反应产物是由蓖麻油生产的。
10.权利要求1的植物支持制剂，其加入溶于脂肪酸混合物中的气 体。
11.权利要求10的植物支持制剂，其中该气体选自一氧化二氮、 氧硫化碳和二氧化碳。
12.生产植物支持制剂的方法，包含将基于脂肪酸的组分与水混合 来得到微-乳液，以及将适宜的气体引入混合物的步骤，所选气体适宜 使该微-乳液具有所需囊泡尺寸分布或所需动电势。
13.权利要求12的方法，其中用加热和优选通过高速剪切机方法 的搅拌，来进行该脂肪酸组分的混合。
14.权利要求12的方法，其中在该微-乳液的基于脂肪酸的组分与 水混合之前向水中引入气体。
15.权利要求14的方法，其中该气体被溶于水中以得到该气体在 水中的饱和溶液，然后将该气体的饱和溶液与所制备的该微-乳液的脂 肪酸组分混合。
16.权利要求15的方法，其中通过用该气体在水中鼓泡、或者将 水在超过大气压力的压力下暴露于该气体一段时间，所述时间超过使水 变成被该气体饱和所需的时间，来制备气体在水中的饱和溶液。
17.权利要求12的方法，其中该气体选自一氧化二氮、氧硫化碳 和二氧化碳。
18.用于植物处理的制剂，包含由权利要求1到11任一项中所述 的植物支持制剂组成的载体媒介物，并且其还包含植物学有益物质，选 自已知作为植物营养素有用的物质；包含除草剂、杀真菌剂、杀细菌剂、 杀虫剂、抗植物病毒剂的植物农药；植物生长调节剂；植物免疫介导剂； 生物刺激素；用于植物转化以允许在植物中引入新特征或性质的遗传材 料，该新特征或性质包括抗旱性、抗病虫害性和增加的果实生产。
19.权利要求18的制剂，其特征在于其是可以作为液体喷洒在植物 上的形式，并且其包含其它增进效率、稳定性或易施用性的添加剂。
20.权利要求18的制剂，包含是至少一种下述元素来源的至少一 种植物营养素：碳、氢、氧、氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、锰、锌、 铜、硼、钼和氯。
21.权利要求18的制剂，包含农药有效浓度的选自杀虫剂、除草 剂、杀真菌剂、植物调节剂、脱叶剂和干燥剂的至少一种植物农药。
22.权利要求21的制剂，其中该农药选自下述化学和生物(有机) 农药：合成砷、含二甲苯Bt液、不含二甲苯Bt液、可湿性Bt粉剂、 有益生物、生物动力学制剂、波尔多拌合物—铜、氢氧化物/固定态铜、 硼酸、氨基甲酸酯类、氯化烃类、铬酸根离子、柠檬酸、氢氧化铜、硫 酸铜，选自肉桂、丁香、蒜、薄荷、胡椒薄荷、迷迭香、百里香和白胡 椒的草药制剂，合成除草剂、水化熟石灰、吡虫啉-新烟碱类杀虫剂、 茚虫威(p)-手性噁二嗪杀虫剂、昆虫提取物、异氰酸酯、月桂基硫酸 盐、石硫合剂、马拉硫磷、苹果酸、甲基溴化物、甲基亚砜、乳状孢子 病-甲虫杆菌、合成杀线虫剂、线虫病、烟碱，选自胡萝卜油、蓖麻 油(U.S.P.或等价物)、香柏油、肉桂油、香茅油、柠檬油、丁香油、 玉米油、棉籽油、休眠喷洒油、蒜油、老鹳草油、柠檬草油、亚麻籽油、 薄荷油、胡椒薄荷油、迷迭香油、芝麻油、大豆油、夏用油、百里香油 和除草油的油，选自乙酰甲胺磷、保棉磷、地散磷、硫线磷、氯氧磷、 毒虫畏、毒死蜱、甲基毒死蜱、虫螨磷、库马磷、ddvp(敌敌畏)、氯 亚胺硫磷、敌匹硫磷、百治磷、乐果、敌噁磷、乙拌磷、乙硫磷、灭线 磷、乙基对硫磷、苯线磷、杀螟硫磷、倍硫磷、地虫硫磷、氯唑磷、马 拉硫磷、甲胺磷、杀扑磷、甲基对硫磷、速灭磷、久效磷、二溴磷、砜 吸磷、甲拌磷、伏杀硫磷、亚胺硫磷、磷胺、丁基嘧啶磷、甲基嘧啶磷、 丙溴磷、胺丙畏、治螟磷、硫丙磷、替美磷、特丁磷、司替罗磷、脱叶 磷(def)和敌百虫的有机磷酸酯，五氯酚、合成农药、石油馏出物、 石油喷雾助剂、2-苯乙基丙酸酯(丙酸2-苯乙基酯)、信息素、增效醚， 选自藜芦、除虫菊、苦木、沙巴草、香茅、芝麻(包括土生芝麻植物茎)、 丁香酚和香叶醇的植物提取物，山梨酸钾、腐败全蛋固体、合成拟除虫 菊酯、岩盐-草防治、鱼藤酮、鱼尼丁、海洋动物粪便、皂基除草剂、 氯化钠、月桂基硫酸钠、土壤熏蒸剂、链霉素、毒鼠碱、硫、病毒喷雾 剂和锌金属条(仅由金属锌和杂质组成)。
23.权利要求18的制剂，包含除草有效浓度的具有选自模拟植物 生长素、有丝分裂抑制剂、光合成抑制剂、氨基酸合成抑制剂和脂生物 合成抑制剂的作用模式的至少一种除草剂。
24.权利要求23的制剂，包含选自2，4-滴(2，4-二甲基苯酚)、 二氯吡啶酸、精吡氟禾草灵、唑嘧磺草胺-三唑并吡啶除草剂、杀木膦、 草甘膦、环嗪酮、甲基咪草烟、咪唑烟酸、胺氯吡啶酸、稀禾定、绿草 定的除草剂。
25.根据权利要求18，包含至少一种选自下述的杀真菌剂：1，3二 氯丙烯、2，5-二氯苯甲酸甲酯、8羟基喹啉、噻二唑素-S-甲基、加特 罗、亚磷酸铵、抗坏血酸、嘧菌酯、芽孢杆菌DB 101、芽孢杆菌DB 102、 芽孢杆菌隔离群B246、巴达克、苯霜灵、苯菌灵、联苯菊酯、联苯三唑 醇、硼砂、硼酸等价物、啶酰菌胺、糠菌唑、乙嘧酚磺酸酯、captab、 多菌灵、萎锈灵、二氧化氯、氯化苦、百菌清、毒死蜱、乙酸铜铵、碳 酸铜铵、铜的氢氧化物、王铜、氢氧化铜、霜脲氰、环丙唑醇、嘧菌环 胺、棉隆、溴氰菊酯、双氯酚、氯硝胺、氯化二二苯乙酮基二甲基铵、 苯醚甲环唑、敌螨普、二苯胺、乙拌磷、二氰蒽醌、十二环吗啉、多果 定、氟环唑、噁唑菌酮、醇类、抗氧化剂类、咪唑菌酮、氯苯嘧啶醇、 腈苯唑、环酰菌胺、咯菌腈、氟硅唑、粉唑醇、灭菌丹、三乙膦酸铝、 呋霜灵、糠醛、双胍辛乙酸盐、己唑醇、羟基喹啉硫酸酯、抑霉唑、异 菌脲、异丙菌胺、醚菌酯、石灰、林丹、代森锰锌、代森锰、精甲霜灵、 马拉硫磷、甲霜灵、精甲霜灵(精甲霜灵)、威百亩、溴甲烷、代森联、 矿物质油、磷酸二氢钾、腈菌唑、辛噻酮、氧化萎锈灵、石蜡复合物(轻 矿物质油)、戊菌唑、戊菌隆、亚磷酸、多硫化硫、亚磷酸钾、膦酸钾、 咪鲜胺锌配合物、咪酰胺、咪酰胺锰氯配合物、咪酰胺锌配合物、腐霉 利、丙溴磷、丙环唑、霜霉威HCl、丙环唑、丙森锌、食树脂假单胞菌、 唑菌胺酯、嘧霉胺、QAC、克热净、苯氧喹啉、五氯硝苯、水杨酸、硅 噻菌胺、钠-o-苯酚苯酚盐(Na盐)、螺环菌胺、硫、TBTO、戊唑醇、噻 苯达唑、噻苯达唑、甲基硫菌灵、福美双、甲基立枯磷、三唑酮、三唑 醇、丁蜗锡、哈茨木霉、十三吗啉、肟菌酯、杀铃脲、嗪氨灵、灭菌唑、 乙烯菌核利、氧化锌、代森锌和苯酰菌胺。
26.权利要求18的制剂，包含杀细菌有效浓度的选自已知适合在 植物上使用以对抗细菌侵染植物的杀细菌剂的至少一种杀细菌剂。
27.权利要求18的制剂，包含杀虫有效浓度的选自下述的至少一 种杀虫剂：
(E)-7-十二烯基乙酸酯、(E，E)-8，10十二碳二烯-1-醇、1，3二氯 丙烯、3(S)乙基-6-异丙烯基-9-十二碳二烯(docadien)-1基乙酸酯、 蒜、苏云金杆菌血清型H-7、苏云金杆菌I.、苏云金杆菌aiziwai kurstaki变种、苏云金杆菌kurstaki变种、球孢白僵菌、慢生型大豆 根瘤菌、慢生型大豆根瘤菌WB 74、Luinus VK慢生根瘤菌、X S21慢 生根瘤菌属、spum慢生根瘤菌、毒死蜱、除虫脲、E8，E10-十二碳二 烯醇、EDB、黄绿绿僵菌隔离群IMI 330 189、淡紫拟青霉菌菌株251、 豌豆根瘤菌菜豆生物型、蚕豆TJ9型豌豆根瘤菌、苜蓿根瘤菌、多杀 菌素、硫、哈茨木霉、Z-8-十二烯基乙酸酯、阿维菌素、阿维菌素、乙 酰甲胺磷、啶虫脒、氟丙菊酯、涕灭威、α-氯氰菊酯、磷化铝、双甲 脒、印楝素、保棉磷、丙硫克百威、β-氟氯氰菊酯、β-氯氰菊酯、联 苯菊酯、硼砂、溴鼠灵、溴螨酯、噻嗪酮、噻嗪酮、硫线磷、甲萘威、 克百威、丁硫克百威、巴丹盐酸盐、溴虫清、毒死蜱、香茅油、四螨嗪、 十二碳二烯醇(E，E-8，10-十二碳二烯-1-醇)、铜、杀鼠醚、桃异形小卷 蛾、杀螟腈、氟氯氰菊酯、三环锡、氯氰菊酯、灭蝇胺、右旋烯丙菊酯、 棉隆、溴氰菊酯、甲基内吸磷、二嗪磷、敌敌畏、三氯杀螨醇、鼠得克、 除虫脲、imethoate、乙拌磷、埃玛菌素、硫丹、S-氰戊菊酯、灭线磷、 灭线磷、二溴乙烷、乙螨唑、苯线磷、苯线磷、喹螨醚、苯丁素、苯丁 锡、杀螟硫磷、苯氧威、甲氰菊酯、唑螨酯、倍硫磷、氰戊菊酯、EDTA 铁钠、pronil、氟虫腈、氟虫脲、氟氯苯菊酯、噻唑磷、夫马洁林、糠 醛、γ-BHC、蒜提取物、氟蚁腙、吡虫啉、茚虫威、λ-氯氟氰菊酯、 熏衣草基、千里酸酯、虱螨脲、磷化镁、代森锰锌、枫内酯、马拉硫磷、 四聚乙醛、威百亩、甲胺磷、杀扑磷、甲硫威、灭多威、溴甲烷、甲基 -对硫磷、速灭磷、弥拜菌素、矿物质油、氟酰脲、氧乐果、邻-苯基苯 酚、杀线威、砜吸磷、石蜡复合物(矿物质油)、对硫磷、氯菊酯、稻 丰散、甲拌磷、亚胺硫磷、辛硫磷、抗蚜威、多硫化硫、脂肪酸钾盐、 丙溴磷、炔螨特、残杀威、蛋白质水解物、丙硫磷、除虫菊素、吡丙醚、 喹硫磷、菜籽油、鱼藤酮、硅基趋避剂、氟硅酸钠、多杀菌素、螺螨酯、 硫、吐酒石、τ-氟胺氰菊酯、虫酰肼、替美磷、特丁磷、杀虫畏、十 四烯基乙酸酯、三氯杀螨砜、噻虫啉、噻虫嗪、硫双威、塞仑、敌百虫、 杀铃脲、特诱酮、ζ-氯氰菊酯、磷化锌。
28.权利要求18的制剂，包含杀病毒有效浓度的选自已知适合在 植物上使用以对抗侵染植物的病毒的杀病毒剂的至少一种杀病毒剂。
29.权利要求18的制剂，包含植物生长调节有效浓度的选自下述 产物的至少一种植物生长调节剂：2-(1-2-甲基萘基)乙酰胺、2-(1-2- 甲基萘基)乙酸、2-(1-萘基)乙酰胺、2-(1-萘基)乙酸、2，4-滴(钠盐)、 3，5，6 TPA、4-吲哚-3-基丁酸、6-苄基腺嘌呤、烷氧化脂肪烷基胺聚合 物、烷基胺聚合物、盐酸化氨基乙氧乙烯基甘氨酸、氨化硝酸盐、植物 激素、砷酸钙、甲萘威、矮壮素、氯普芬、氯酞酸甲酯、调果酸、氨基 氰、丁酰肼、正癸-1-醇、2，4-滴丙酸、2，4-滴丙酸(2-丁氧乙基酯)、 噻节因、敌螨普、二溴敌草快、敌草隆、乙烯利、精吡氟禾草灵、赤霉 素、草甘膦-异丙胺、草硫膦、精吡氟氯禾灵、吲哚基乙酸、抑芽丹、 甲哌鎓、甲基环丙烯、矿物质油、正癸醇、辛-1-醇、多效唑、二氯百 草枯、二甲戊乐灵、调环酸钙、水杨酸、氯酸钠、噻苯隆、抗倒酯和烯 效唑。
30.权利要求18的制剂，包含生物刺激有效浓度的选自已知为植 物激素的产物的至少一种生物刺激素。
31权利要求30的制剂，其中该植物激素是油菜素甾醇类。
32.向植物施用权利要求1到11中任一项要求的植物支持制剂的 方法，包含通过空气或表面施用方法、通过混入水载灌溉系统、或合适 时通过躯干注射施用该制剂的步骤。
33.向植物施用植物学有益物质的方法，包含通过空气或表面施用 方法、通过混入水载灌溉系统、或合适时通过躯干注射施用权利要求18 到31任一项中要求的制剂的步骤。
34.刺激至少一个植物生长阶段、或改善植物生产或作物产量、或 植物外观或提高植物疾病抗性的方法，包含向植物施用权利要求1到11 任一项中要求的植物支持制剂的步骤。
35.向植物提供植物营养素的方法，包含将权利要求20中要求的 制剂向植物或合适时其场所施用的步骤。
36.对抗植物有害生物的方法，包含将权利要求21要求的制剂向 植物或合适时其场所施用的步骤。
37.刺激植物生长或产量的方法，包含将权利要求30或31中要求的 制剂向植物施用的步骤。
技术领域
本发明涉及植物支持制剂，其本身是植物学有益的并且其还适合 用作递送媒介物或递送媒介物(delivery vehicle)的组分、用于向 植物的递送以及在植物中分布或迁移各种对植物具有植物学有益作用 的分子、化合物、生物制剂或化学制剂(文中一起作为“植物学有益 物质”提及)形式的植物学有益物质。本文使用措辞“植物支持”表 示该制剂具有这样的性质，在不加入其它植物学有益物质时它可以作 为递送媒介物，在至少一个植物生长阶段对植物具有生长刺激作用， 改善植物的生产或作物产量，或改善植物外观或增强植物的疾病抗性。 其还涉及植物支持制剂和递送媒介物的生产方法，和作为递送媒介物 和任意一种或多种各植物学有益物质将该制剂混入的各种制剂的制 备，以及牵涉使用本发明递送媒介物将该植物学有益物质向植物施用 的方法，接着本发明递送媒介物还适用来在植物中或植物上引起植物 学有益物质的迁移或分布。将被理解或变得明显的是在用于植物时提 及的“有益作用”，是从人类角度理解的，所以诸如在不希望植物防 治中用作除草剂的植物毒性物质也打算包含在本文提到的“植物学有 益物质”中。
发明背景
出于提高植物生长以改善植物生产(在作物和田地植物的情况下) 或外观(在观赏植物的情况下)的目的，大量种类繁多的物质被施用 至植物。该物质包括上述定义为植物学有益物质的组。其包含肥料、 大量-和微量-营养素种类两者、生长刺激剂或调节剂并包括杀真菌剂、 杀虫剂和除草剂的农药。用于本文的词汇“植物”意在涵盖陆地和包 括海洋植物的水生植物，而“观赏植物”意在涵盖所有不是意在生产 有经济价值的作物的植物。
植物学有益物质的施用普遍被认为是需要改进的技术，因为大量 百分比的施用物质并没有被其施用的植物吸收或者在其施用的植物上 保留。除了这种浪费作为结果导致的昂贵材料的浪费以及生产成本不 必要的增加，未被利用的物质还引起土壤和水源的污染。
经显示，没有参考文献用经设计的生物递送系统来论述增强特定 营养素或生长调节剂向植物的施用和/或该营养素或生长调节剂在整 个植物中的系统性迁移。在农业领域已知营养素和其它植物学有益物 质可以制剂为所谓的螯合剂或助剂。与本发明不同，该螯合剂是明显 可辨别的没有涉及递送系统的类别并且被用作微量-营养素来源，其通 过用金属与螯合剂通过配位成键化合形成。该金属-螯合物键的稳定性 影响植物对金属微量营养素-铜、铁、锰和锌的利用度。有效的螯合物 是这样的，其在土壤中螯合的微量营养素被其它阳离子取代的速率是 很慢的，如此保持施用的微量营养素为螯合形式。螯合物通常只对阳 离子物质适用。如EDTA的螯合剂被认为对环境有不利影响。
按照加利福尼亚食品和农业部列出的前驱有机材料(Preliminary Organic Materials)中对螯合物的规定，天然螯合剂是被允许的而缺 乏文献记载的合成螯合剂被限制仅用于微营养素喷雾剂。其它所有合 成螯合剂的用途都是被禁止的。EDTA、木质素磺酸盐和木质素磺酸被 认为是协同螯合剂。最近，公布了递送阳离子的穿梭机制体系。该穿 梭机制体系由长链多糖组成，其可以在集簇(纳米集簇)中与阳离子 配合，从而使营养素-螯合物呈中性。该螯合剂(穿梭机制配体)随后 包封集簇化的营养素并将其穿梭至细胞壁处递送营养素。该递送被认 为通过随机过程进行，由此植物上的管孔和该穿梭配体都由自然现象 热振动导致其收缩和扩张。认为当螯合剂收缩和管孔扩张同步时，营 养素就被递送。卸载矿物质后，该穿梭配体即从植物表面退回，并被 吸回纳米集簇，其在此不断重复此过程。该穿梭螯合体系可以扩展至 土壤中的其它潜在阳离子。然而，该体系仍然基于使用螯合物，只能 与阳离子化合物配合，不能穿透植物组织。
由Nutri-Tech Solutions在南非投入市场的Cloak Spray油， 是乳化的芸苔油和omega-3鱼油的有机混合剂。Cloak油被认为是高 品质的协同展布剂和粘着剂(见下)，其被宣称可改善所有叶用肥料 的性能。然而，并没有提出关于在植物中的物质迁移或递送其它物质 或通过植物根系施肥的权利要求。
向植物细胞中引入材料或物质的最确定的方法是在湿润剂、展布 剂或粘着剂存在下喷雾该物质。通过该技术在湿润剂存在下，材料被 喷雾至植物叶片上，该湿润剂可以使该材料附着在叶片的蜡质层上， 由此增加被植物吸收的物质和植物叶片自身的接触时间。当某些材料 被吸收时，通常含有粘着剂的湿润剂使叶片变粘且吸附灰尘，从而引 起气孔阻塞。已描述了农业领域涉及施用方法的载体，但并不涉及因 为向目标细胞或生物的递送增加引起的活性化合物的活性增强。发现 为在除草剂和激素种类中增强某些活性化合物的活性的助剂的用途， 与可以用来克服进入植物的屏障的递送系统最接近。
虽然这些技术在合适的环境中对易被植物吸收的某些化合物有 效，它们被认为通常不适合许多大量-和微量-营养素以及很多农药和 生长调节剂的有效递送。所以长期需要可以选择性的将化合物引入植 物细胞以增强生长或处理植物病害或营养缺乏的适宜方法。
助剂是化学和生物活性(非化学惰性)化合物并可以按照它们的功 能(活化剂或效用)、它们的化学(比如有机硅)或来源(植物或石油)分 类。它们产生明显作用。绝大多数助剂都与某些材料或条件不配伍并 可引起植物和动物中的毒性作用，还有某些助剂具有移动并污染地表 或地底水源的潜在能力。在水边使用助剂可以是有问题的，因为在某 些水生物种中可以出现不良作用。
发明对象
本发明的对象是：提供植物支持制剂，其自身在使用时施用该植 物支持制剂的植物的生长、外观、生产和/或产量方面具有有益作用， 并且该制剂还适宜用作递送媒介物、或递送媒介物的组分，该媒介物 用于一种或多种植物学有益物质向植物的递送和植物学有益物质在植 物中的分布或迁移，提供加入该媒介物的含有或不含至少一种植物学 有益物质的制剂，提供生产该媒介物的方法和制备合并该媒介物和至 少一种植物学有益物质的制剂的方法，以及涉及本发明递送媒介物的 用途的向植物施用植物学有益物质的方法，该媒介物随后还用来影响 该植物学有益物质在植物上或内的迁移或分布。
发明概述
按照本发明提供植物学有益且适合用作递送媒介物的植物支持制 剂，或递送媒介物的组分，以向植物递送一种或多种植物学有益物质， 并且增强该被递送物质在植物中或植物上的迁移，该制剂包含由在水 性载体中的基于脂肪酸的组分的囊泡或微海绵的分散液组成的微-乳 液，该基于脂肪酸的组分包含至少一种选自游离脂肪酸和游离脂肪酸 衍生物的基于长链脂肪酸的物质。
该分散液的优选特征在于至少95％的该囊泡或微海绵的直径尺寸 在50nm和5微米之间。将理解该分散液中的囊泡或微海绵是弹性的 而且不必然是完美球形，所以术语“直径尺寸”不理解为具几何精确 度的术语。还将理解，离开高度复杂仪器的使用在三维上测定该直径 尺寸是不可实行的。所以通过显微观察方法在二维中测定，因此如二 维所视表示横穿所观测囊泡或微海绵的最大尺寸。
该分散液的特征还进一步在于该微-乳液具有从-35mV到-60mV 的动电势。
该基于脂肪酸的组分可选自油酸、亚油酸、α-亚油烯酸、γ-亚 油烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸[C20：5ω3]、二十二碳六烯酸 [C22：6ω3]和蓖麻油酸(ricinoleic acid)，及其衍生物，选自其 C1到C6烷基酯、其甘油-聚乙二醇酯和主要由基于蓖麻油酸的油如蓖麻 油组成的氢化或未氢化的天然油与环氧乙烷的反应产物。
在本发明的一种形式中，该微-乳液的脂肪酸组分可包含或由酯化 脂肪酸的混合物组成，在此优选使用已知为维生素F乙酯的产品。该 产品可根据维生素F乙酯的商品名德国柏林CLR Chemicals Laboratorium Dr.Kurt Richter有限公司的CLR 110 000 Sh.L.U./g 购得。该产品的典型脂肪酸分布如下：
C16.0 ： 8，3％
C18.0 ： 3，5％
C18.1 ： 21，7％
C18.2 ： 34，8％
C18：3 ： 28，0％
>C18 ： 1，6％
未知： 2，1％
该脂肪酸组分可以可选的包括或由已知为二十碳五烯酸[C20：5ω 3]和二十二碳六烯酸[C22：6ω3]和蓖麻油酸的长链脂肪酸组成。上述 产品可从Roche Lipid Technology根据商品名“Ropufa′30′n-3oil” 购得。已发现在希望向植物递送憎水性物质时加入这些酸是有用的。 可以用于此目的的可选产品是可从BASF得到的Incromega类的产品之 一。
除了前面提及的物质或物质的混合物，该脂肪酸组分还可另外包 含主要由基于蓖麻油酸的油组成的氢化天然油与环氧乙烷的反应产 物。优选从已知脂肪酸成分主要由蓖麻油酸组成的蓖麻油生产该物质。 可以通过氢化、乙基化和如聚乙二醇的基团加成来的方法来改性该产 品。一系列该产品由BASF在不同级别的商品名Cremophor下市场化了。 根据针对某些施用的本发明的优选形式，提供了递送媒介物，其中使 用的Cremophor级别、或改性蓖麻油酸的其它组合物是如下的一类， 其中该蓖麻油酸是通过向其加成包含从35到45个环氧乙烷单元的聚 乙二醇基团来改性的。
该媒介物可以加入溶于该脂肪酸混合物的适宜气体，所选气体适 宜使该微-乳液具有所需囊泡尺寸分布和所需动电势。
该气体优选地选自一氧化二氮、氧硫化碳和二氧化碳。
根据本发明的另一个方面，提供了用来生产如上定义的植物支持 制剂或递送媒介物的方法，其包含将该基于脂肪酸的组分与水混合来 得到微-乳液，以及将适宜的气体引入混合物的步骤，所选气体适宜使 该微-乳液具有所需囊泡尺寸分布和所需动电势。
脂肪酸组分的混合优选用加热和优选通过高速剪切机方法的搅拌 来进行。
该气体可在该微-乳液的基于脂肪酸的组分与水混合之前或之后 引入水中。所以在本发明的一个形式中，该气体可被溶于水中以得到 该气体在水中的饱和溶液，然后将该气体的饱和水溶液与所制备的该 微-乳液的脂肪酸组分混合。可通过用该气体在水中鼓泡、或者将水在 超过大气压力的压力下暴露于该气体一段时间，所述时间超过使水变 成被该气体饱和所需的时间，来制备该气体在水中的饱和溶液。在本 发明的可选形式中，首先可在水中制备脂肪酸组分的乳液，然后可通 过将该乳液暴露在气体中充气。这优选通过鼓泡完成。
该气体优选地选自一氧化二氮、氧硫化碳和二氧化碳。
可通过根据本发明的递送媒介物来递送至植物的植物学有益物 质，可以是任意一种或多种已知作为植物营养素有用的物质；植物农 药包含除草剂、杀真菌剂、杀细菌剂、杀虫剂、抗植物病毒剂；植物 生长调节剂；植物免疫介导剂；生物刺激素或者用于植物转化以允许 在植物中加入新特征或性质的遗传材料。上述性质可特别地由抗旱性、 抗病虫害性和增加的果实生产组成。
制剂通常以可作为可液体喷雾的形式获得。其包括本发明列举的 物质的活性成分，增进效力、稳定性或易施用性的任意添加剂如表面 活性剂和其它助剂，以及包括溶剂、载体或染料的其它成分。施用方 法和要处理的种类决定哪种制剂是优选的。
所以本发明还提供包含至少一种上述递送媒介物中的植物营养素 的植物营养素组合物。可以通过增强包括气态营养素的营养素的递送 来刺激在其萌芽期、营养期或结实期的植物生长。该植物营养素可以 选自元素：碳、氢、氧、氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、锰、锌、铜、 硼、钼、和氯。
本发明进一步提供植物农药组合物，其包含农药有效浓度的上述 递送媒介物中的至少一种植物农药。农药是意在预防、消灭、驱避或 缓解任意病虫害的任意物质或物质的混合物。农药不仅涉及杀虫剂， 还涉及除草剂、杀真菌剂和各种用来防治病虫害的其它物质。按美国 法律，农药还是意在用作植物调节剂、脱叶剂或干燥剂的任意物质或 物质的混合物。在本说明书中，意在使用上述的广义术语。
所以，在本发明范围中提供媒介物，并提供制剂，该制剂包括选 自下述化学和生物(有机)农药的农药形式的任意一种或多种植物学有 益物质：合成砷、含二甲苯的Bt液、不含二甲苯的Bt液、Bt可湿性 粉剂、有益生物、生物动力学制剂、波尔多拌合物(Bordeaux mixes) —铜、氢氧化物/固定态铜、硼酸、氨基甲酸酯类、氯化烃类、铬酸根 离子、柠檬酸、氢氧化铜、硫酸铜，选自肉桂、丁香、蒜、薄荷、胡 椒薄荷、迷迭香、百里香和白胡椒的草药制剂，合成除草剂、水化熟 石灰、吡虫啉-新烟碱类杀虫剂、茚虫威(p)-手性噁二嗪杀虫剂、昆 虫提取物、异氰酸酯、月桂基硫酸盐、石硫合剂、马拉硫磷、苹果酸、 甲基溴化物、甲基亚砜、乳状孢子病(milky spore disease)-甲 虫杆菌(B.popillae)、合成杀线虫剂、线虫病、烟碱，选自胡萝卜油、 蓖麻油(U.S.P.或等价物)、香柏油、肉桂油、香茅油、柠檬油、丁 香油、玉米油、棉籽油、休眠喷洒油、蒜油、老鹳草油、柠檬草油、 亚麻籽油、薄荷油、胡椒薄荷油、迷迭香油、芝麻油、大豆油、夏用 油、百里香油和除草油的油，选自乙酰甲胺磷、保棉磷、地散磷、硫 线磷、氯氧磷、毒虫畏、毒死蜱、甲基毒死蜱、虫螨磷、库马磷、ddvp (敌敌畏)、氯亚胺硫磷、敌匹硫磷、百治磷、乐果、敌噁磷、乙拌磷、 乙硫磷、灭线磷、乙基对硫磷、苯线磷、杀螟硫磷、倍硫磷、地虫硫 磷、氯唑磷、马拉硫磷、甲胺磷、杀扑磷、甲基对硫磷、速灭磷、久 效磷、二溴磷、砜吸磷、甲拌磷、伏杀硫磷、亚胺硫磷、磷胺、丁基 嘧啶磷、甲基嘧啶磷、丙溴磷、胺丙畏、治螟磷、硫丙磷、替美磷、 特丁磷、司替罗磷、脱叶磷(def)和敌百虫的有机磷酸酯，五氯酚、 合成农药、石油馏出物、石油喷雾助剂、2-苯乙基丙酸酯(丙酸2-苯 乙基酯)、信息素、增效醚，选自藜芦、除虫菊、苦木、沙巴草、香 茅、芝麻(包括土生芝麻植物茎)、丁香酚和香叶醇的植物提取物， 山梨酸钾、腐败全蛋固体(putrescent whole egg solids)、合成 拟除虫菊酯、岩盐-草防治、鱼藤酮、鱼尼丁、海洋动物粪便、皂基除 草剂、氯化钠、月桂基硫酸钠、土壤熏蒸剂、链霉素、毒鼠碱、硫、 病毒喷雾剂和锌金属条(仅由金属锌和杂质组成)。
本发明还提供除草组合物，其包含在上述递送媒介物中的除草剂 有效浓度的至少一种除草剂，和其作用模式无关，从而包括除草制剂， 该除草制剂的作用模式是具有下列作用模式的组中的任一种，即：
模拟植物生长素(2，4-滴、二氯吡啶酸、胺氯吡啶酸、绿草定)， 其模拟植物生长激素(植物生长素)在易感植物种类中引起不受控制的 和混乱的生长；
有丝分裂抑制剂(杀木膦)，其在春季阻止再出芽并在夏季阻止新 生长(也已知为强迫休眠剂)；
光合成抑制剂(环嗪酮)，其在光合成中阻断特定的反应，导致细 胞分解；
氨基酸合成抑制剂(草甘膦、咪唑烟酸和甲基咪草烟)，其阻止用 于构造蛋白质所需氨基酸的合成；
脂类生物合成抑制剂(精吡氟禾草灵和稀禾定)，其阻止用于细胞 膜生长和维持所需脂类的合成(Weed Control Methods Handbook，The Nature Conservancy，Tu等人)。
所以，在本发明的范围内提供媒介物，并提供制剂，该制剂包括 选自下述的除草剂形式的任意一种或多种植物学有益物质：2，4-滴 (2，4-二甲酚)、二氯吡啶酸、精吡氟禾草灵、唑嘧磺草胺-三唑并吡 啶除草剂、杀木膦、草甘膦、环嗪酮、甲基咪草烟、咪唑烟酸、胺氯 吡啶酸、稀禾定、绿草定。
本发明还提供杀真菌组合物，其包含杀真菌有效浓度的上述递送 媒介物中的至少一种杀真菌剂。该杀真菌剂可选自：1，3二氯丙烯、 2，5-二氯苯甲酸甲酯、8羟基喹啉、噻二唑素-S-甲基、加特罗、亚磷 酸铵、抗坏血酸、嘧菌酯、芽孢杆菌(bacillus subtilis)DB 101、 芽孢杆菌DB 102、芽孢杆菌隔离群B246、巴达克(Bardac)、苯霜灵、 苯菌灵、联苯菊酯、联苯三唑醇、硼砂、硼酸等价物、啶酰菌胺、糠 菌唑、乙嘧酚磺酸酯、captab、多菌灵、萎锈灵、二氧化氯、氯化苦、 百菌清、毒死蜱、乙酸铜铵、碳酸铜铵、铜的氢氧化物、王铜、氢氧 化铜、霜脲氰、环丙唑醇、嘧菌环胺、棉隆、溴氰菊酯、双氯酚、氯 硝胺、氯化二二苯乙酮基二甲基铵、苯醚甲环唑、敌螨普、二苯胺、 乙拌磷、二氰蒽醌、十二环吗啉、多果定、氟环唑、噁唑菌酮、醇类、 抗氧化剂类、咪唑菌酮、氯苯嘧啶醇、腈苯唑、环酰菌胺、咯菌腈、 氟硅唑、粉唑醇、灭菌丹、三乙膦酸铝、呋霜灵、糠醛、双胍辛乙酸 盐、己唑醇、羟基喹啉硫酸酯、抑霉唑、异菌脲、异丙菌胺、醚菌酯、 石灰、林丹、代森锰锌、代森锰、精甲霜灵、马拉硫磷、甲霜灵、精 甲霜灵(精甲霜灵)、威百亩、溴甲烷、代森联、矿物质油、磷酸二 氢钾、腈菌唑、辛噻酮、氧化萎锈灵、石蜡复合物(轻矿物质油)、 戊菌唑、戊菌隆、亚磷酸、多硫化硫、亚磷酸钾、膦酸钾、咪鲜胺 (prochlorax)锌配合物、咪酰胺、咪酰胺锰氯配合物、咪酰胺锌配合 物、腐霉利、丙溴磷、丙环唑(propaconazole)、霜霉威HCl、丙环唑、 丙森锌、食树脂假单胞菌、唑菌胺酯、嘧霉胺、QAC、克热净(Quazatine)、 苯氧喹啉、五氯硝苯、水杨酸、硅噻菌胺、钠-o-苯酚苯酚盐(Na盐)、 螺环菌胺、硫、TBTO、戊唑醇、噻苯达唑、噻苯达唑、甲基硫菌灵、 福美双、甲基立枯磷、三唑酮、三唑醇、丁蜗锡、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、十三吗啉、肟菌酯、杀铃脲、嗪氨灵、灭菌唑、乙烯菌 核利、氧化锌、代森锌和苯酰菌胺。
本发明还提供杀细菌组合物，其包含杀细菌有效浓度的上述递送 媒介物中的至少一种杀细菌剂。该杀细菌剂可以选自已知适宜用于植 物上对抗侵染植物的细菌的杀细菌剂。
本发明还提供杀虫组合物，其包含杀虫有效浓度的上述递送媒介 物中的至少一种杀虫剂。该杀虫剂可选自：
(E)-7-十二烯基乙酸酯、(E，E)-8，10十二碳二烯-1-醇、1，3二 氯丙烯、3(S)乙基-6-异丙烯基-9-十二碳二烯(docadien)-1基乙 酸酯、蒜(Allium sativum)、苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis) 血清型H-7、苏云金杆菌I.、苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis) aiziwai kurstaki变种、苏云金杆菌kurstaki变种、球孢白僵菌 (Beauveria bassiana)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、慢生型大豆根瘤菌WB 74、Luinus VK慢生根瘤菌 (Bradyrhizobium sp Luinus VK)、X S21慢生根瘤菌属 (Bradyrhizobium sp X S21)、spum慢生根瘤菌(Bradyrhizobium spum)、毒死蜱、除虫脲、E8，E10-十二碳二烯醇、EDB、黄绿绿僵菌 (Metarhizium anisopliae var acridium)隔离群IMI 330 189、淡 紫拟青霉菌(Paecilomyces lilacinus)菌株251、豌豆根瘤菌 (Rhizobium leguminosarum)菜豆(phaseoli)生物型、蚕豆(viciae)TJ 9型豌豆根瘤菌、苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti)、多杀菌素、硫、 哈茨木霉、z-8-十二烯基乙酸酯、阿维菌素、阿维菌素、乙酰甲胺磷、 啶虫脒、氟丙菊酯、涕灭威、α-氯氰菊酯、磷化铝、双甲脒、印楝素、 保棉磷、丙硫克百威、β-氟氯氰菊酯、β-氯氰菊酯、联苯菊酯、硼 砂、溴鼠灵、溴螨酯、噻嗪酮、噻嗪酮、硫线磷、甲萘威、克百威、 丁硫克百威、巴丹盐酸盐、溴虫清(chlorphenapyr)、毒死蜱、香茅油、 四螨嗪、十二碳二烯醇(codlimone)(E，E-8，10-十二碳二烯-1-醇)、铜、 杀鼠醚、桃异形小卷蛾(Cryptophlebia leucotreta)、杀螟腈、氟氯 氰菊酯、三环锡、氯氰菊酯、灭蝇胺、右旋烯丙菊酯、棉隆、溴氰菊 酯、甲基内吸磷、二嗪磷、敌敌畏、三氯杀螨醇、鼠得克、除虫脲、 imethoate、乙拌磷、埃玛菌素、硫丹、S-氰戊菊酯、灭线磷、灭线磷、 二溴乙烷、乙螨唑、苯线磷、苯线磷、喹螨醚、苯丁素(fenbutatin)、 苯丁锡、杀螟硫磷、苯氧威、甲氰菊酯、唑螨酯、倍硫磷、氰戊菊酯、 EDTA铁钠、pronil、氟虫腈、氟虫脲、氟氯苯菊酯、噻唑磷、夫马洁 林、糠醛、γ-BHC、蒜提取物、氟蚁腙、吡虫啉、茚虫威、λ-氯氟氰 菊酯、熏衣草基(lavandulyl)、千里酸酯(senecioate)、虱螨脲、磷 化镁、代森锰锌、枫内酯、马拉硫磷、四聚乙醛、威百亩、甲胺磷、 杀扑磷、甲硫威、灭多威、溴甲烷、甲基-对硫磷、速灭磷、弥拜菌素、 矿物质油、氟酰脲、氧乐果、邻-苯基苯酚、杀线威、砜吸磷、石蜡复 合物(矿物质油)、对硫磷、氯菊酯、稻丰散、甲拌磷、亚胺硫磷、 辛硫磷、抗蚜威、多硫化硫、脂肪酸钾盐、丙溴磷、炔螨特、残杀威、 蛋白质水解物、丙硫磷、除虫菊素、吡丙醚、喹硫磷、菜籽油、鱼藤 酮、硅基趋避剂、氟硅酸钠、多杀菌素、螺螨酯、硫、吐酒石、τ- 氟胺氰菊酯、虫酰肼、替美磷、特丁磷、杀虫畏、十四烯基乙酸酯、 三氯杀螨砜、噻虫啉、噻虫嗪、硫双威、塞仑、敌百虫、杀铃脲、特 诱酮、ζ-氯氰菊酯、磷化锌。
本发明还提供杀病毒组合物，其包含杀病毒有效浓度的上述递送 媒介物中的至少一种杀病毒剂。该杀病毒剂可以选自已知适宜用于植 物上对抗侵染植物的病毒的杀病毒剂。
本发明进一步提供植物生长调节剂组合物，其包含植物生长调节 有效浓度的上述递送媒介物中的至少一种植物生长调节剂。该植物生 长调节剂可以优选地的是d1-α-生育酚或其生理活性异构体，其产物 也已知为维生素E，其存在在调节植物繁殖阶段的发生中特别有用， 即，可被用于调节植物开花的发生并因此使植物育果阶段提前。然而 更一般地，该递送媒介物可以用来向植物递送下述任一种或多种产品：
2-(1-2-甲基萘基)乙酰胺、2-(1-2-甲基萘基)乙酸、2-(1-萘基) 乙酰胺、2-(1-萘基)乙酸、2，4-滴(钠盐)、3，5，6 TPA、4-吲哚-3- 基丁酸、6-苄基腺嘌呤、烷氧化脂肪烷基胺聚合物、烷基胺聚合物、 盐酸化氨基乙氧乙烯基甘氨酸、氨化硝酸盐、植物激素、砷酸钙、甲 萘威、矮壮素、氯普芬、氯酞酸甲酯、调果酸、氨基氰、丁酰肼、正 癸-1-醇、2，4-滴丙酸、2，4-滴丙酸(2-丁氧乙基酯)、噻节因、敌螨 普、二溴敌草快、敌草隆、乙烯利、精吡氟禾草灵、赤霉素、草甘膦- 异丙胺、草硫膦、精吡氟氯禾灵、吲哚基乙酸、抑芽丹、甲哌鎓、甲 基环丙烯、矿物质油、正癸醇、辛-1-醇、多效唑、二氯百草枯、二甲 戊乐灵、调环酸钙、水杨酸、氯酸钠、噻苯隆、抗倒酯和烯效唑。
本发明还提供增强植物或植物部分的结构和功能完整性的方法。
本发明还提供向植物施用植物学有益物质的方法，其包括将物质 制剂在根据本文描述和本发明的递送媒介物中以及向植物施用制剂产 品的步骤。该施用可以是通过机械的或人工喷雾的空气或表面施用方 法、通过混入水载灌溉系统、或合适时通过躯干注射。
本发明还提供通过同时供给防御通信分子前体、抗氧化剂、乙烯、 油酸和十六碳三烯酸按下面描述的机制支持植物的局部防御和获得性 抗性的方法。
水杨酸(SA)在局域防御和系统性获得性抗性(SAR)中作为信号分 子的牵连是熟知的。SA合成被向病原菌或紫外线的暴露所活化。水杨 酸通信被至少两种机制介导，用反馈回路来调制作用。这些反馈回路 还可提供点位来整合发育、环境和其它防御-关联信号，并由此微调植 物的防御反应。(Jyoti Shah The salicylic acid loop in plant defense.Current Opinion in Plant Biology 2003，6：365-371)
研究显示了脂类过氧化在SA-活化的抗性基因表达中的作用。SA 活化α-加双氧酶(α-DOX1)。α-DOX1氧化16-C和18-C脂肪酸，后者是 本发明制剂的组分。另外，脂肪酸16:3和18:3是潜在的防御通信分子- 羟脂(oxylipins)的合成前体。由此，各研究成果显示脂肪酸衍生信号 在植物防御中的SA-通信调制中有牵连(Jyoti Shah The salicylic acid loop in plant defense.Current Opinion in Plant Biology 2003，6：365-371)。
多种刺激可以活化SA合成/通信。植物中的叶绿体/质体可以是信 号的来源，该信号影响对病原菌的反应。叶绿体/质体的功能/完整性 对植物-病原菌相互作用的结果是重要的。叶绿体/质体对脂类新陈代 谢和脂类衍生信号的产生也是重要的。脂类信号对至少一种通道的水 杨酸活化是必需的。乙烯，其有助于水果成熟和着色，使通过该通道 的通信成为可能。研究显示本发明的组分油酸的存在对两种抗性通道 中的脂类衍生信号是必需的。此外，抗性的遗传阻遏与十六碳三烯酸 (C16:3)的含量减少关联。所以外源性16:3的递送应该有助于植物抗 性。
发明实施例
现在纯粹通过参考下述制剂、实施例和图形的非限制性说明的方 式来举例说明本发明，其中
图1是图，如实施例5中描述其说明通过使用本发明植物支持制 剂处理的南瓜植株上的节数的增加；
图2是图，如实施例5中描述其说明通过使用本发明植物支持制 剂处理的南瓜植株上的叶片尺寸的增加；
图3是图，如实施例5中描述其显示在不同时期收获自使用本发 明植物支持制剂处理的植株的中号到大号南瓜的数目；
图4是图，如实施例5中描述其显示在不同时期收获自使用本发 明植物支持制剂处理的植株与未处理的对照植株比较的特大号南瓜的 数目；
图5是图，如实施例5中描述其显示在不同时期收获自使用本发 明植物支持制剂处理的植株与未处理对照植株比较的所有南瓜的数 目；
图6是图，如实施例5中描述其显示在不同时期收获自使用本发 明植物支持制剂处理的植株与未处理对照植株比较的青椒的数目；
图7、8、9和10是如实施例6实验1中描述用本发明植物支持制 剂处理的小西葫芦植株的局部显微照片；
图11和12是图，如实施例6实验2中描述其说明用不同的本发 明植物支持制剂处理的君子兰植株的生长；
图13是图，如实施例16中描述其显示移植后12周期间用经 Elementol R处理的莴苣植株与对照植株比较的平均顶端直径；
图14是图，如实施例16中描述其显示移植后12周期间用经 Elementol R处理的莴苣植株与对照植株比较的植株高度的平均生长 的比较；
图15是图，如实施例16中描述其显示用经Elementol R处理的 莴苣植株与对照植株比较的逐株对比，使用在第一次处理时具有相似 叶片数的植株；
图16是图，如实施例16中描述其说明在试验期间与对照植株比 较由莴苣植株的Elementol R处理引起的Fm:Dm比的平均增加％。
图17是图，如实施例16中描述其说明经Elementol R处理的莴 苣植株和对照植株在湿度％方面的差异；
图18是图，如实施例16中描述其说明实验期间在Elemental R 处理的莴苣植株和对照植株中的呼吸作用速率每mg蛋白质；
图19是两个图，如实施例16中描述其显示实验期间经Elementol R处理的莴苣植株和对照植株之间平均叶绿素A和B含量每mg蛋白质 每新鲜质量的对比；
图20是图，如实施例16中描述其反映从经蛋白质mg和新鲜质量 校正的叶绿素得到的叶绿素A:B比例；
图21是图，如实施例17中描述其显示最初几个移植后周(WAT) 期间在经Elementol R处理的西红柿植株和对照西红柿植株上形成的 花蕾的平均数的变化；
图22是图，如实施例17中描述其显示经Elementol R处理的西 红柿植株和对照西红柿植株的花蕾生产的平均增加％；
图23是图，如实施例17中描述其显示在实验期间3个西红柿植 株的积累平均产量的线性增加；
图24是图，如实施例17中描述其显示经处理的西红柿植株的平 均积累果数与平均积累蕾数的比例；
图25是图，如实施例17中描述其显示经Elementol R处理的西 红柿植株与对照植株比较的平均果中湿度％；
图26是图，如实施例18中描述其显示(CC)、Elementol R(E)及其组合对13周期间从每组三植株中收获的积累果数的变化的 影响；
图27是图，如实施例18中描述其显示，与单独用Elementol R 或处理的植株中观察到的增加相比，从用包埋在Elementol R 中的处理的植株中观察到的总积累果实质量；
图28是图，如实施例18中描述其显示通过Elementol R和CC 组合，新鲜果实质量的增加；
图29是图，如实施例18中描述其显示用Elementol R、 和组合处理剂的第一次施用(第5周)和第二次施用(第9周)后的呼吸 作用速率每蛋白质含量；
图30是图，如实施例18中描述其说明在试验的第13周测定的叶 绿素B每mg蛋白质的量的比较；
图31是图，如实施例18中描述其显示经Elementol R处理的、 CC处理的和组合处理的植株在第13周以HClO4作背景的白利糖度读数 的比较；
图32如实施例19中描述，是体外实验中在萌芽纸上萌芽的萝卜 的照片；
图33是图，如实施例19中描述其说明从用肥料对照以及各种 Elementol R剂量处理的小麦胚芽鞘测得的平均长度的比较；
图34是图，如实施例19中描述其显示在田地试验中栽培的单次 施用Elementol R的小麦谷粒产量的增加；
图35是图，如实施例19中描述其显示用杀真菌剂克菌丹处理的 种子、用克菌丹和Elementol R组合处理的种子或用未处理的种子栽 培出的玉米植株的平均植株、根和叶重量的比较。
制备1
植物支持制剂的制备，该植物支持制剂适宜用作向植物递送植物 学有益物质的递送媒介物。
本发明制剂可如下制备：
步骤1：在环境压力下用压力容器和鼓泡器使指定的气体在希 望体积的水中饱和(在此实施例中是一氧化二氮，但采用二氧化碳时使 用经少量改动的相同一般过程)。该容器通过流控阀和压力调节器与一 氧化二氮供给相连。在96小时期间为封闭的容器提供2巴压力的一氧 化二氮，在前文提到的温度下和上述提到的压力下，水在这期间内被 一氧化二氮饱和。在单独使用碱性或储备配方(文中称为Elementol B) 制剂的情况中，或用作营养素或大部分合成有机农药的递送媒介物时， 使用不含氯的水。当该储备制剂要用来向植物递送肽或生物催化剂 (biocatalisator)时，水用磷酸盐缓冲至pH5.8。
步骤2：制备下述基于脂肪酸的组合物：
首先，将从德国柏林CLR Chemicals Laboratorium Dr.Kurt Richter有限公司得到的维生素F乙酯CLR 110 000 Sh.L.U./g加 热至75℃，该维生素F乙酯主要包含21％油酸、34％亚油烯酸和28％羧 基端用亚乙基团酯化改性的亚油酸。然后，将聚乙二醇化、氢化的脂 肪酸--蓖麻油酸(也由INCI命名已知为PEG-n-氢化蓖麻油)加热至 80℃，并在70℃与第一组基于脂肪酸的维生素F乙酯混合。对叶面施 用，第一组脂肪酸与后者脂肪酸的比例通常是3:1。在向大型容器中 添加该制剂的情况中的比例是5:1到6:1，该大型容器通过在受控环 境中连续滴灌来供给植物。
步骤3：变化百分比的d1-α-生育酚(最终浓度从用作一般抗 氧化剂(Elementol B)时的0.1％到用作植物繁殖期的调节剂或起同步 作用(Elementol R)时的0.25％v/v)被加入上述加热的脂肪酸混合物， 作为抗氧化剂或作为生长调节剂。
步骤4：将水或缓冲水加热至73℃，并借助高速剪切机将其与 该脂肪酸混合物混合，达到取决于制剂具体用途的从3.2到4％的最终 浓度。该脂肪酸混合物组成包括纳米范围尺寸的囊泡的基础制剂，在 Malvern测量仪通过颗粒尺寸分析测定其尺寸。
步骤5：可向该基础制剂加入额外的乙基化脂肪酸类--DHA(二 十二碳六烯酸(decahexonoic acid))和EPA(二十碳五烯酸 (eicosapentanoic acid))。本发明的两种脂肪酸的优选量是0.5％。 这些脂肪酸的加入导致微海绵而不是囊泡的形成，其具有在Malvern 测量仪上通过颗粒尺寸分析测定的2-5μm的尺寸。
步骤6：为向植物施用，用水稀释该基础制剂。取决于施用方 法、栽培类型(例如滴灌、使用人工、拖拉机或飞机的叶面喷雾)，通 常该稀释比对茎施用为1:1、对露天观赏植物为1:10、对根株苗床为 1:200、对果园为1:600和1:800、对露天大田作物和受控环境为 1:1000、果实着色为1:1500，而且在无土栽培体系中为1:5000。
可大量方便的生产从50nm到50μm的尺寸较为均匀的稳定颗粒。 该颗粒尺寸和形状可以被可重复的控制。通过方法测定上文制备的 Elementol B和Elementol R的动电势，发现其分别是-46mV和-38mV。 该微乳液的颗粒尺寸变化可以被组合物的变化影响，类似的该乳液的 动电势也可以被组合物的变化影响。
制备2
制剂的一般制备，该制剂包含在作为递送媒介物组分的本发明植 物支持制剂中的植物学有益物质。
步骤1：如制备1步骤6中的描述，通过在室温或田间温度下 于施用稀释前将希望物质充分混合于Elementol制剂中，可以将一种 或多种植物学有益物质包埋在上述基础Elementol或缓冲Elementol 制剂中。可通过摇晃或搅拌来进行混合。混合后，通常允许制剂在用 水稀释施用前‘熟化’至少30分钟，但不超过3小时。在大分子量物 质如肽的情况下，制剂在4℃放置过夜。
实施例1
ELEMENTOL作为在西瓜上施用叶片营养素的递送媒介物的用途
前言：
与前述所选的160Ha苗圃中的西瓜作物相反，本实验的西瓜作物 具有低产量潜力，尽管与前述实践相比没有改变。下述在2005年一月 间观察到：
1.)早期衰老发生在2005年一月间。其是分散的现象。
2.)后者主要归因于引起根效率降低的线虫。这导致许多果实变 形并患“蒂腐病”。
3.)叶面真菌侵染是常见的，与每10天的杀真菌剂的前摄施用无 关。更替该杀真菌剂以降低真菌的抗性风险。
试验：
决定维持杀真菌剂计划，但引入营养素施用作为叶片喷雾剂。
该实验喷雾剂，每公顷，包括下述：
溶于26.0升水的5kg CaCl2。
1.0升“氨基酸复合钙”(100g/升Ca)
0.5升“氨基酸复合铜”(75g/升Cu)
6ml Elementol B
该概念具有下列目的：
1.)用该铜和Elementol B来增强植物对真菌侵染的内在抗性以 及
2.)在“分生组织”处能得到钙，以在未来的叶片和根发育期间 改善“细胞壁完整性”，潜在导致额外的真菌抗性和改善的叶片和根 效率。
将Elementol B加入氨基酸，并允许混合剂在稀释前“熟化”15 分钟。通过加入28.5升CaCl2水完成稀释。提前48小时制备该CaCl2 水。提前溶解CaCl2的目的是使氯受“UV”，希望在试验期间降低该 元素的影响。1.56升“氨基酸/Elementol混合剂”，与28.5升“Ca- 富集”水一起，使得每公顷总共施用约30升制剂。通过空气叶片喷雾 施用。
10天后重复同样的施用，制剂中的Elementol B增加至12ml/ha。
对照：
对照带与试验带同样处理，但排除Elementol B。
重复：
因为试验和对照都接受了两次空气施用，通过使用SATLOC差分全 球定位系统(DGPS)获得重复完整性。此仪器作为标准设备装载在飞行 器上。第一次施用的每次“喷雾操作”都被保存。这允许第二次施用 相对第一次施用以小于0.5米的偏差施用。
观察：
在第一次施用的48小时内，处理带和对照带间存在视觉区别。试 验带显示“复壮”迹象。与对照相比，处理植株显示了更深得多的绿 色。同时，与对照相比，这些植株显示了可观察的开花增加。该现象 提示栽培者要求增加了Elementol B组分(12ml/ha)的第二次施用。
两次施用都在2005年一月间完成。
尽管施用体积很低(各自6ml & 12ml)，Elementol B处理过 的西瓜在对照之后较长时间衰老。这种衰老延迟从2到5周不等。尽 管此处理没减少果实变形，其确实显著的降低了蒂腐病。
由于初始问题在田间的分散发生，仅作了观察。
实施例2
ELEMENTOL B作为在糖豆(SUGAR BEANS)上叶面施用的递送媒介物 的用途
前言：
在120Ha苗圃上，距离910mm(旧3英尺间隔)的种床上，完成糖 豆种植。
试验：
该试验具有下列目的：
用拖拉机，将Elementol B与杀真菌剂一起作为叶面施用喷雾， 以观察关于开花/产量的任何植物反应。
对此试验，用GPS技术和地标，标定10公顷的区域。
该实验喷雾剂，每公顷，包含下述：
200升水
40ml Elementol Basic
250ml C
对照：
对照区域包含同一地块上的10公顷。30米的缓冲区域分开试验 和对照。该施用的喷雾剂不包括Elementol。
重复：
通过用GPS技术和地标标定试验和对照地块两者为重复做准备。 施用两次喷雾剂。
观察：
通过手工取样荚果。使用的取样方法是10x10米的随机苗行。 该方式也用来取样对照。
结论：
取样结果如下：
含Elementol B的 C：2,390kg/ha
不含Elementol的：2,180kg/ha
后续实验显示Elementol B有助于抗真菌作用以及产量的改善。
实施例3
通过草莓上的叶面施用测定ELEMENTOL R的植物毒性和有益作用
前言：
在2005年4月初期间开始在12ha试验苗圃中种植草莓。植物材 料都是第一代。种植地块向西方向倾斜下降并且高度约为平均海平面 以上100米。土壤具有小于5％的粘土成分和0.5％的有机碳成分。
试验：
该试验具有下列目的：
用拖拉机，将Elementol R作为叶面施用喷雾，以观察关于开花 的任何植物反应。
该实验喷雾剂，每公顷，包含下述：
200升水
250ml Elementol R
在下列条件下完成喷雾：
温度： 23摄氏度(湿和干鳞茎间的Δ：<5℃)
湿度： 28％
雾滴分布： 平均15/cm2
处理地块： 地块6 & 7
对照地块： 地块5
生理学： 一旦20％的植株开始开花即开始喷雾。
对照：
在向地块6&7施用Elementol R期间关闭对照隧道#5，防止漂移 污染。
观察：
通过随机取样，两个处理的地块比对照地块多生产100％可得到的 花。在施用后21天作此观察。没有观察到植物毒性的迹象。
实施例4
ELEMENTOL B作为在柑橘属水果(脐橙LINA品种)上叶片硼酸施 用的递送媒介物的用途
前言：
试验果园是15Ha的果园，其中的树约12岁龄，意味着树是成熟 的。每公顷植物群体是617树/ha。Lina脐橙是早熟品种。使这些最 先上市对栽培者具有很大的财务利益。
结果植物内的高水平赤霉酸，导致果实着色的延迟。田间经验指 出，通过将计算体积的硼作为叶片喷雾剂施用可以降低绝大多数植物 的营养生长率。通常使用的硼源是硼酸(H3BO3)。
在试验季期间，由同一个栽培者将硼酸以计算方式施用至过-硝化 的柠檬。柠檬的过-硝化引起旺盛的生长和减少的果实形成。用硼酸来 实现该生长现象的控制。
试验：
用硼酸在柠檬上实现了旺盛生长的抑制，设想这种施用和 Elementol B组合可在树上导致脐橙早着色，由此节省了在受控气氛 室中使用乙烯的脱绿。
该试验在Lina品种脐橙上进行。表面积是15公顷。目的是树的 早着色。在试验区域中没有标出对照。监测邻近该试验的栽培者的果 园作为可能的对照。
该实验喷雾剂，每公顷，包含下述：
2000升水
130ml Elementol B
1kg硼酸
在加Elementol前，硼酸被溶解/悬浮与水中。在最终稀释加水前 允许30分钟熟化时间。
观察：
树上经处理的Linas比邻近的对照早2周着色。这些脐橙比周围 所有的早一周摘取。
实施例5
对ELEMENTOL R影响黄瓜植物产量的受控环境研究：
材料和方法：
材料
覆盖Dicla塑料的隧道(2um厚具有内在植物UV-保护的塑料)和 2x5000l的槽和泵、锯屑生长媒介、15升塑料袋、来自南非Dicla 的幼苗(黄瓜)、来自King Athur的青椒幼苗、Stihl鼓风喷雾器、来 自Ocean或Omnia(南非)的硝酸钙、NutriVeg(Omnia)或HydroGro (Ocean)、硝酸(Ocean)、硫酸钾(Ocean)。
方法：
一般装置：一个隧道和槽各自分配给测试产品，一个隧道和槽各 自用作对照。用风门片的开闭通过空气降温来冷却隧道。根据温度， 风门片和门通常在18:00到19:00间关闭整夜，每天早晨在06:00到 08:00打开。隧道的取向是南北向，朝向主要风向以帮助降温。在该 隧道中不使用人工加热或降温系统。
植物：
黄瓜：夏初在每个隧道中，将720个3周龄的黄瓜幼苗从苗盘移 植到包括锯屑的塑料袋。以6行每行120株完成种植。为对照隧道选 择最强壮的植株。
青椒：在测试隧道中，500株King Arthur幼苗被种植在10升填 满锯屑的塑料袋中，而504相似的幼苗被种植在15升填满锯屑的塑 料袋中。最初2个月不加Elementol R的植物生长在隧道外，然后在 结辣椒的季节移入隧道。从外面将植物移入隧道后的两周开始向测试 植物添加Elementol R。在该测试中观察到青椒产量的显著区别。研 究了除用Elementol R处理外的其它原因使植物可能更喜测试隧道内 部的可能性。为对照该可能性，打断Elementol R处理10天时间(第 120-130天)，随后继续。
灌溉：
黄瓜：小植株一天3次通过4升/小时的滴灌器接受15分钟的滴 灌，如此总共3升/天。6周后，当植物开始结可以收获并适应隧道内 的高达45℃的夏季高温的果实时，灌溉增加至30-40分/天(>4升/天)。
青椒：小植株的处理类似黄瓜的处理，但是8周后灌溉体积增加 至>5升/天/株。
测试产品：
该测试产品是植物有益的递送系统，叫做Elementol R。假设该 系统可以增加
a)溶解度以及
b)营养素的吸收，更具体是钙。
该测试产品通过根灌溉施用。Elementol R与槽内营养素混合， 该槽向测试隧道提供灌溉。
用于灌溉的营养素混合物如下：
向每个充满50001钻孔水的槽，加入500ml硝酸以将pH降至6.0， 之后用水预混2kg营养素混合物和2kg硝酸钙并以此顺序加至槽中。 对测试槽和隧道，用1l Elementol和水预混。在青椒的情况中，在植 物开始结果时用500g硫酸钾代替500g硝酸钙。每两周，向满槽加 入如Prasine的100ml消毒剂，以预防藻类生长。每第四天，只用钻 孔水冲洗植物，之后继续输送营养素。
分析：
黄瓜：
在植物生长的各阶段期间研究了下列参数：
i)植物长度
ii)叶片长度
iii)节数
iv)黄瓜产量
植物长度：在初始生长期间，可以测量植物长度。从锯屑面到最 高主干分支处测量每行随机选择的20株植物(每隧道120株植物)的长 度。用石灰标记测量过的植株塑料袋，以预防同一植株的重复测量。 计算每行的平均植物长度并用于比较。
用植物长度中描述的相似的植株数和选择和计算程序，测定植株 的最低两片叶片的叶片长度。
节间数：用植物长度中描述的相似的植株数和选择和计算程序， 计数形成的分支数。
黄瓜产量：收获黄瓜。仅计数并称重那些适合在高端市场连锁店 中销售的黄瓜。不考虑那些弯曲的、黄色的黄瓜或者一般外观不符合 销售需要的黄瓜。
青椒：
因为冬季来临，停止青椒实验。隧道中安装的电子加热系统被证 明是不够的以致植物被暴露在小于2℃的温度下。仅测定该青椒的可 销售产量。
结果与讨论：
黄瓜：
测定处于移植后4、5和6周龄的120株随机选择的幼苗的植物长 度。计算代表每个隧道的平均生长的平均长度。表1举例说明该幼苗 的平均周生长。尽管初始时平均对照植物比测试隧道的植物高(第4 周)，如在开始Elementol R处理后两周的测定，用添加的Elementol R灌溉的植物比对照隧道的植物生长得更快。
图1举例说明通过在幼苗移植并开始处理3周后向营养素混合物 添加Elementol R的节数的增加。测定6行每行中随机选择的20株植 物的节，注意使用与长度测定不同的植株。在每行中，处理3周后， 用经Elementol R处理的植物包括更多节，尽管平均下来的增加小于 1节(0.73)每株。用Elementol-营养素混合物灌溉的植物的标准误差 更小，表示在植物生长上的同步作用。
当0.73节每处理3周的增加投射于总共18周的生长期时， Elementol R施用导致的节数/株的平均差别是4.4节/株，其是统计 上显著的。增加的节的重要性是，其表明了植物将发育的叶片和结果 芽数两者。
图2举例说明通过Elementol R施用的叶片尺寸增加。在每个隧 道中测定120株植物的叶片长度；在开始Elementol R施用后三周每 行20株植物。作为植物长度的情况，在开始Elementol施用前，在测 试隧道中的植物叶片的尺寸比对照植物的叶片尺寸稍小。Elementol 处理引起的叶片尺寸差别是显著的并且在植物发育中是重要的，因为 叶片负责光合作用。再一次地，接受Elementol R的植物的标准误差 较小。
通常接受的黄瓜产量周期是12周，尽管有些生产者以16周的周 期收获果实。在图3和4中，举例说明了12周周期内的植物产量，所 以下述举例说明的植物年龄是以下加合：
从播种到幼苗生长的3周(未处理)+收获前经Elementol R处理的 生长的3周+用经Elementol R处理的收获的12周。因为缺少正式的 杀虫剂计划导致的重度白苍蝇侵染，尽管植物第20周时还在生产花， 于此时停止研究。
在收获开始时，将黄瓜按中号至大号分类(至多37cm)。然而，在 第4周末并直到收获的第20周，收获的黄瓜长度在41到47cm，引起 更少的黄瓜个数，但从重量方面是更好的收成。因此，产量结果分成 两个时间段。
有必要指出两个隧道的收获是同时进行的，所以产量和具体的星 期几有关联。比测试隧道晚3天收获对照隧道，可以在第9到13周给 出更一致的黄瓜产量分布，这可能是轻度人为的。在第14周期间，灌 溉和泵的供电中断48h的时间，引起对照和Elementol-处理的植物两 者产量的显著降低。不灌溉引起的压力显得被Elementol-处理的植物 更好的耐受，由图4可见。
表2 显示来自两个隧道的黄瓜产量的总差别和％差别。
青椒：
图6举例说明70天期间的青椒产量。在种植后3个月(90天)开 始收获，收获前两周开始用Elementol R处理。第160天后，植物暴 露于如此的低温以致停止实验，尽管植物还在生产可收获的果实。
图6中举例说明了Elementol R对青椒产量的影响。第一个箭头 表示中断10天Elementol处理的开始，而第二个箭头表示继续 Elementol R处理的时间。每个点表示10天期间该隧道的总收成。在 测试隧道内中断Elementol R处理后，可立即观察到产量的下降。该 产量降低并稳定在和对照隧道相似的水平，指出该增加的产量可以特 定的归因于Elementol R的存在。
表3 显示总产量和产量每隧道的％差别。
两组间的％差别的测定实际上只可以在处理中断前的时间段进行， 因为估计该中断的长期作用是困难的。
结论
研究了Elementol R对两种不同植物种类-黄瓜的和青椒的产量的 影响。向植物营养素混合物添加Elementol R引起了两种植物种类可 收获果实产量的统计学上的显著增加。
实施例6
小西葫芦(DICOTHYL)植物中的渗透和分布-
农业应用中ELEMENTOL B技术的潜力研究：
项目背景如下：
实验背景
Elementol B主要由功能-特定的数量和不饱和脂肪酸和一氧化二氮的 组合组成。
进行初步实验以测定
1)Elementol B在植物中的渗透(permeation)/穿透 (penetration)和Elementol B在植物中随时间的迁移以及
2)Elementol B对向植物递送植物营养素的可能贡献。
方法和材料：
Elementol制备：
在室温下，用225g一氧化二氮饱和的纯水(N2O-H2O)稀释45g基础 Elementol媒介。剧烈摇动该混合物并加入1250μl荧光标记物Nile Red(1，6μg/μl；Molecular Probes，荷兰)。
实验1
测试对象：
为此探索性研究从秧田得到种植于包含木屑(支持媒介)的袋中的 溶液培养培育的(n＝3)花期小西葫芦植物(dicothyl)。如下分配植物：
植物1：对照-不施用。
植物2：向含木屑的支持媒介袋加入100ml制备的Elementol 混合物以研究根施用。
植物3：用Elementol混合物喷雾整个植物，除在喷雾前用塑 料覆盖的一片叶片。
在如上施用Elementol混合物后，植物不再接受其它营养素而是 每天浇水。3周后，从尺寸和重量角度比较收获的小西葫芦。
渗透(permeation)/穿透(penetration)以及迁移显形法：
切割叶片得到来自没有显著叶脉区域的植物组织和来自显著叶脉 的横切组织。沿着主根长度进行根切割。用带有倒置Nikon Eclipse 300显微镜、配有Spectra Physics Krypton/Argon和Helium/Neon 激光的Nikon PCM2000上的共聚焦激光扫描显微法来显形荧光标记的 Elementol的吸收和迁移。使用下列物镜-Plan Apo 100x/1.4Oil DIC H、Plan Apo 60x/1.4O ilDIC H和Plan Fluor/0.75DIC M。通 过荧光检测器和光电倍增管来数字化捕捉共聚焦图像(显微照片)。通 过Nikon DMX视频照相机系统实时完成显微成像。用3D扫描头与深度 z-步驱动组合获得深度数据。
结果：
结果举例说明于用共聚焦激光扫描显微法得到的显微照片中。
植物1：在此显微照片中，没有向植物施用Elementol。因自体荧 光，材料显形。
植物2：Elementol R(预先用荧光标记物Nile Red标记)通过叶 片被植物吸收，并且在覆盖和处理部分的显著叶脉的截面中和叶片的 切开组织中显形。在该显微照片中，几乎所有Elementol囊泡都渗透 了叶片自身的细胞，同时几乎没有Elementol囊泡保留在植物的显著 叶脉中。叶片各部分的叶片穿透和迁移在小于60分钟内发生(平均时 间约20分钟)。
植物3：Elementol B囊泡通过根穿透植物并在根节片中和显著叶 脉的截面中显形。根渗透和迁移在小于60分钟内被观察到。
第一个收获的小西葫芦的重量如下给出：
植物1：尽管在该植物上观察到几朵花，在收获日时不存在小西 葫芦，而植物2和3通过一次Elementol B和水的施用生产了果实。
植物2：64，95g
植物3：28，38g
不再继续该实验。
实验2
在溶液培养-培育的君子兰中营养素增强的摄取和/或递送
有时候从提供的溶液培养介质摄取某些矿物质和痕量元素是有问 题的。实验1显示了Elementol囊泡被植物吸收且甚至可以有助于其 生长的很小数目的植株。在实验2中，将基础的溶液培养营养素混合 物包埋在Elementol囊泡中并监测植物的生长。
测试对象：
5组每组6个君子兰种子被种植在植物支持器纸箱中的木屑中。 每天如下处理该组：
组1接受5ml H2O
组2接受5ml以规定浓度稀释于H2O中的溶液培养媒介
组3接受5ml与低浓度Elementol B(1.98％)混合至规定浓度的 溶液培养媒介。
组4接受5ml与高浓度Elementol B(4％)混合至组3和4中使 用的相同浓度的溶液培养媒介
组5接受5ml用一氧化二氮饱和的H2O稀释至其它组使用的相同 浓度的溶液培养媒介。
结果：
鳞茎形成：
5周后，研究鳞茎得到下列结果：
组3显示显著的鳞茎形成：种子中的2个显示从单个种子形成多 个鳞茎，而组5显示鳞茎形成但是鳞茎显得软且如粘泥。组1显示不 良的小鳞茎形成。组2显示鳞茎形成，但是鳞茎称重仅是组3鳞茎的 38％。
植物生长：
植物生长通过测量示出的时间段后的植物最长叶片的长度来测 定，如图11和12示出的，其举例说明随时间的生长和5周后的生长 比较。组2的生长包括溶于H2O或N2O-H2O中的溶液培养营养素但没有 同等水平的Elementol B，接受过N2O-H2O的组的叶片稍长于只接受过 水的植物。对接受过与Elementol B混合的溶液培养营养素的组，接 受过低Elementol浓度的组显示所有组中最佳的生长，而接受过高 Elementol浓度的组显示最差的生长。生长在植物支持器纸箱中的植 物，由于在接受过高Elementol浓度的植物支持器的木屑中和纸箱上 霉的生长，以及该组鳞茎的粘泥性，排水问题是明显的。在此阶段， 从该组不能得到结论。必须研究Elementol稀释系列。
实施例7
为在草莓上的叶片营养素(钙)施用作递送媒介物的ELEMENTOL R 的用途
前言：
在2005年4月初期间开始在12ha试验苗圃中种植草莓。植物材 料都是第一代。种植地块向西方向倾斜下降并且高度约为平均海平面 以上100米。土壤具有小于5％的粘土成分和0.5％的有机碳成分。
试验：
该试验具有下列目的：
用拖拉机，将Elementol B和钙作为叶面施用喷雾，以观察关于 叶片中改善的钙水平的任何植物反应。
该实验喷雾剂，每公顷，包含下述：
250升水
250ml
5kg CaC l2
试验和对照：
试验地块是编号5、6 & 7，而对照地块是1、2、3 & 4。用提到 的组合处理该试验地块，而用商业化的“富里酸(fulvicacid)/CaCl2” 复合物处理该对照地块。试验和对照两者中的钙百分比是相同的。
观察：
施用21天后测定试验地块中的叶片钙水平，结果如下：
地块 处理前Ca％ 处理后Ca％ 增加％
5 0.86 1.00 16.28
6 0.85 1.01 18.52
7 0.88 1.07 21.59
施用21天后测定对照地块中的叶片钙水平，结果如下：
地块 处理前Ca％ 处理后Ca％ 损失％
1 0.86 0.85 1.16
2 1.15 0.84 26.95
3 1.08 0.80 25.93
4 1.03 0.84 18.45
结论：
从结果清楚，当CaCl2和Elementol R组合施用至草莓时，叶片 钙水平有明确的改善。
实施例8
叶面施用以测定在樱桃灯笼椒上的作用的ELEMENTOL R的用途
前言：
用来自秧田的幼苗在1.2ha测试苗圃上完成种植。滴灌该植物。 行间间隔使植物间隔300mm，而苗行是间隔450mm的双行。每公顷植 物群体是30,000。
施肥途径是，主要以硝酸钙和硝酸钾的形式提供约300kg/ha的 氮。目标产量是30吨/ha。十二月间开花并持续，而在二月末开始收 获并持续至六月末。最佳采摘是从三月中到五月中，之后量开始逐渐 减少。采摘高峰期间每10天可以收获4吨/ha。
试验：
该试验具有下列目的：
将Elementol R作为叶片使用喷雾，以观察在“增加的开花”以 及临近收获期的早着色上的作用。
该实验喷雾剂，每公顷，包含下述：
200升水
200ml Elementol R
对照：
该对照区域包含相同地块上的小块区域且不接受Elementol R。
观察：
临近十二月末，与对照相比在试验中观察到更多的花，但是并未 进行计数。
临近一月末，与对照相比该试验中的果实显示提前着色的迹象， 但是因高温导致该对照上的着色而使观察有困难。然而，觉得，与该 对照相比该试验具有更佳的着色。
结论：
因为其它因素比如温度、施肥分布等可影响结果，不清楚该 Elemenol是否在实际上确实显著地有助于樱桃灯笼的提前着色。然而 栽培者确实觉得存在差别。
真正显著的是栽培者在收获期内生产了29吨/ha，其中24吨是有 商业价值的。与该区域平均相比，此产量实质上更佳。
因栽培者的观察，他在植物开始开花时增加Elementol R施用至 连续4周250ml/ha，带来下述结果：
植物更大，同时叶片覆盖更佳；
因Elementol R施用，收获的果实产量增加15％；
经经Elementol处理的植物的着色是“强有力的”。
栽培者发现至少需要3次处理，然后才观察到Elementol R的最 大影响。
实施例9
为向日葵上的营养素叶面施用作递送媒介物的Elementol B的用 途
前言：
在距离910mm(旧3英尺间隔)的种床中完成种植。种植时的植物 种群计算为40000种子每公顷，而期望萌芽35000到38000株。
方式(试验)：
牵涉隔开约1Km的两块大田，不是因为为试验来规定或准备，而 只是因为它们相互密切邻接一块可以作另一块的对照。该试验苗圃范 围约95ha而对照苗圃约200ha。
用下述制剂喷雾试验植物：
1升/ha“AminoPotas”(100g/l“K”与氨基酸配合或螯合)
1/2升/ha“Aminocalcium”(100g/l“Ca”与氨基酸配合或 螯合)
5kg/ha尿素(2.3kg“N”如NH4)
50ml/ha Elementol B
27升/ha水
该喷雾混合物在混合槽中混合且通过空气喷雾施用。
对照：
除Elementol B，该对照用相同的混合物喷雾。
观察：
通过分离组合收获器的送料斗(种子一旦从花转筒分离就流入的 容器)的“称入”，完成测量以确定在该试验和对照间的产量差别。
结论：
取样结果如下：
试验： 2,735kg/ha
对照： 1,650kg/ha
差别： 1,085kg/ha
平均增加： 65.8％
实施例10
苹果脱绿中ELEMENTOL R的用途
在果园的试验行中，当果实开始形成时手工喷雾施用Elementol R，而该果园中的其它行不接受处理剂。Elementol R喷雾过的苹果基 本上在未处理过的苹果之前脱绿。
对由于Elementol处理导致强有力着色的樱桃灯笼椒得到类似结 果。(4次施用)施用率11/ha(见实施例8)。使苹果、柑橘属水果 和樱桃灯笼椒的着色结果重要的事实是，这些结果显示Elementol R 施用在C3和C4植物上、在一年生和多年生植物上、在受控环境和露 天试验田上具有相同的影响。
实施例11
葡萄藤上的ELEMENTOL叶面施用的作用
选择相同葡萄园里的两棵葡萄藤来比较向整个葡萄藤单次施用 Elementol B的作用，包括手工喷雾茎，但除了根。
处理过的葡萄藤茎的直径显著的增厚且叶片指数戏剧性地增加。 果实的产量也更高。
实施例12
通过ELEMENTOL的真菌保护以及使用ELEMENTOL B的玫瑰架存期 的增加
用代森(Dithane)处理已知对白锈病侵染高度易感的成功红(Red Success)玫瑰，该代森按照制造商的说明书制成并施用。用类似的代 森制剂喷雾试验植物，向该代森制剂加入Elementol B以获得1比10 的稀释。
发现当其周围所有植物被侵染时，经代森/Elementol B处理的植 物没有白锈病迹象，此外似乎在采摘后枯萎前持续很长时间。
实施例13
ELEMENTOL导致效果增强的比较实验
目的：小酸模(steenboksuring)的根除。
杂草：小酸模，耐寒且顽固用任何处理都几乎不可能根除的杂 草。
处理：
Roundup Turbo在下述方式中用作除草剂。在加入的除草剂和栽 培手段方面，用与处理苗圃相同的方式处理并评价参考对照苗圃。分 配各处理苗圃。下面更详细的描述该处理。
测试处理：
0.6％浓度的Roundup Turbo和40ml Elementol B被稀释至401 并施用至1ha。用该混合物喷雾80ha的大田。
参考处理：
Roundup Turbo在下述方式中用作除草剂：该除草剂被稀释至 2.8％Roundup Turbo的最终浓度，不加入Elementol B。每公顷施用 类似的体积至类似的栽培面积(80ha)。
对照小区：在种植了绵毛马唐(Smutsvinger)草的较大的田间呈带 状设置该处理小区。用该大田的未处理区域作对照小区。
施用方法：
在剂量率和施用设备(压力喷嘴)方面，施用方法对测试和参考处 理两者完全相同。通过用拖拉机和喷雾装置喷雾施用该除草剂。在深 冬期间，只施用一次该除草剂。不向该测试或参考处理剂加入湿润剂 或助剂。
结果和观察：
a)施用一周后，在测试植物中该草或小酸模表现出枯萎，但不在 参考植物中表现。
b)两周后，该测试处理植物表现出典型植物毒性症状即叶片变黄 (萎黄病)随后坏死。
c)施用一个半月后，绝大多数小酸模表现出严重的植物毒性，而 其它草都死亡。
d)报告的观察包括在处理和未处理(对照)植物间的所有抑制或 刺激的变化。该变化可以是结构(叶片和茎变形)作用，和/或生长和发 育评价。
结论
尽管在测试处理剂中少使用79％Roundup，Elementol B的存在亦 增加了结果的杂草死亡。
实施例14
ELEMENTOL R导致苹果根株床和苗圃树强化的比较实验 (2005/2006)
根株床：这是从特定根茎栽培的茎的集合，其实施例是M7或M9。 该栽培的目的是生产大量的“茎”，可在其上嫁接选择的苹果品种。 该品种可以是Gala、Royal Gala、Brae burn、Oregon Red Spur等。 在此栽培期间，通过可以从任意集合嫁接的茎的量来衡量成功。茎厚 度是主要标准而根质量和体积是次要的。不允许嫁接过细的茎。
苗圃树：这是在为初始生长而移植前已被嫁接的根茎。理想地使 这些生长到至少1.5米高，然后考虑准备商业移植。
试验目的
首要目的是引入Elementol R，以达到其具有的在苗圃环境中改善 茎厚度的作用。首先在随机处理的橡树上注意到此作用。
次要的目的是增进商业移植经嫁接树的生长。
方法
使用方法是与某叶面施用的营养素喷雾一起的叶片喷雾。用100ml Elementol R/20升水处理80根株床，意味着与营养素一起每根株床 施用1.25ml Elementol R。在2005年十一月间开始此施用，并每隔10 天重复。该计划维持至今。
对照
对照根株床接受同样的处理，除了不加入Elementol R。
结果
在2006年二月第一周得到的结果：处理的床生产了63/100(63％) 可嫁接茎，而对照仅生产了34/100(34％)。平均茎厚度是11mm。
在2006年二月第二周得到的结果：从Elementol R计划中的根茎茎 嫁接的树平均高2m，而未用Elementol栽培的平均高1.5m。经Elementol R处理的树开始羽化，即发育侧芽，而未施用Elementol R的树完全不 存在羽化。
必须认识到为对照和试验两者保留大约6周发育。尽管预期对照可 改善，其不可能与使用Elementol R的试验相比。可在不偏离本发明上 述陈述表达的发明主旨的前提下设计很多本发明的变化。
实施例15
测定ELEMENTOL R在具硬鳞(hardscaled)种子萌芽中的作用的比 较实验
箭叶(Arrow Leaf)苜蓿草籽已知是具硬鳞的在萌芽中缺少一致性 的种子。通过将各种量的种子在干净的水、未稀释的Elementol R和在 Elementol的5％水溶液中浸泡24，随后将浸泡过的种子填在种床上，并 观察其萌芽，显示本发明Elementol制剂在这些种子的萌芽方面是有益 的。发现在Elementol的5％水溶液中浸泡过24小时的种子比其它两组种 子高30％的萌芽率。
实施例16
ELEMENTOL R的生物刺激作用：莴苣的生长和发育中ELEMENTOL 叶面施用的作用
1.材料、植物生长和处理
植物：莴苣或该科的直立莴苣(cos，romaine(Lactuca sativa))： 紫菀科(Asteraceae)/菊科(Compositae)(紫菀/菊科)。
栽培品种：使用红诗(Red Poem)品种莴苣(Lactuca sativa L.)， 其从当地苗圃购买时是齐苗的(约六周龄)。
1.1培育方法：非-循环溶液培养“滴液”系统
使用适合栽盆的带孔PVC管道，并与蓄水池和水泵连接以通过PVC 管道向植物提供等量的水和营养素。密封泄漏处保证不从系统漏水。 在管道和水泵下放置包含营养素溶液的蓄水池向植物提供水合营养 素。该泵与计时器连接以控制向植物提供的水和营养素的量。在隔开 的蓄水池中接受径流以使系统非-循环化，并抛弃它。
为控制每株植物的水量，用喷嘴来调节系统内的压力并向每株植 物提供等量的水(±9ml一天四次)。非-循环滴液系统保证植物接受优 化的供水，并且营养素媒介pH和EC(电导)是恒定的。测量了供应蓄 水池和径流蓄水池中的营养素的EC，这使得可以测定提供的营养素的 量对比抛弃的量。由此可以计算植物使用或支持媒介保留的营养素的 量。所以当EC降低或增加太多时，可以相应的添加或保留从营养素溶 液提供给植物的营养素。使用PW 9526数字电导仪来以毫西门子每厘 米(mS.cm-1)测量EC。营养素媒介的非-循环化可以遏止系统内从被侵 染植物向未侵染植物的疾病传播。
1.2生长媒介、营养素和移植
在溶液培养系统中椰子纤维被用作支持媒介。其是惰性媒介，具 有为良好的根发育和良好水保持而保留足够的水和空气的能力。
使用具有下述成分的Hydrotech营养素溶液：大量元素：氮(N)68 g/kg、钾(K)208g/kg、磷(P)42g/kg、镁(Mg)30g/kg、硫(S)64 g/kg。微量元素：铁(Fe)1254mg/kg、铜(Cu)22mg/kg、锌(Zn)149 mg/kg、锰(Mn)299mg/kg、硼(B)373mg/kg和钼(Mo)37mg/kg。
由Hygrotech营养素溶液和硝酸钙营养素溶液等量组成的营养 素：36g Hygrotech和36g硝酸钙溶于2L水并加入包含38L水的蓄 水池中。该营养素溶液的pH和电导是营养素溶液中存在的溶解离子的 指标，并被监测。
该莴苣被从最初的容器移植到包含椰子纤维和在容器底部的粗 (course)沙粒的溶液培养容器，以保证对根的足够的引水和通气。在 该莴苣被移植前，清洗其根周围任何可能的其它土壤。植物称重。移 植后植物被置于系统中使驯化一周，随后开始实验过程。
每周还将植物按随机循序排列以保证其接受等量的阳光、热量、 水等。
1.3玻璃房条件
在玻璃房内完成实验以保证溶液培养体系中给植物的最优温度和 湿度水平。可以控制绝大多数大气条件，而且病害危险降到最低。每 周十二点用温度记录仪在溶液培养系统正上方测量玻璃房的温度。
通过空调调节玻璃房内的温度。温度调节在最高24℃以及最小 15。最高温度是28℃而最低温度是4℃。通过使用温度湿度图 (thermohydrograph)得到最高和最低温度并且记录白天和夜间两者的 温度。
通过使用旋转温度湿度图测量相对湿度(RH)并且考虑了白天和夜 间的湿度。相对湿度可以通过大气的最大湿度百分比，％RH来测量。 最高RH％是98％而最低RH％是29％(2006年3月26日)。
1.4光强度
用量子/射频/光度计测量在玻璃房内的光强度。每天十二点在溶 液培养系统正上方测量光强度。多云和阴天条件影响该光强度。季节 的改变也影响光强度。在冬季月份期间，光强度比更温暖月份记录的 光强度更低。12h00的最大光强度是4600μE.m-2sec-1。12h00的最小 光强度是850μE.m-2sec-1。
采取措施使所有植物暴露于等量的阳光和其它非-生物因素。每周 将植物移动成不同的排列。
1.5植物处理
对照植物(C)完全不接受处理。上述含Elementol R的处理剂如下 制备：
3ml Elementol R与250ml H2O混合
该测试植物的叶片处理包括向叶片上喷雾该Elementol R混合物 直至饱和状态但刚好在滴液状态之前。用喷雾瓶喷雾该植物并采取措 施不污染系统或支持媒介。每四周(第1、5和9周)处理植物直到该实 验结束。对每两株用作对照的植物，有3株植物是用Elementol R混 合物处理的。通过用同样的处理剂处理两株或两株以上的植物，每次 处理可以得到良好的平均。
1.6病害的处理
在莴苣上发生各种病害。用系统地处理真菌病害。只 要发现病害即通过向叶面施用稀释的(加入500ml水的3 ml杀真菌剂)处理植物。
2.生长和发育相关的参数的测量
在莴苣幼苗移植前，用Mettler PJ 3000称将其称重，并在此后 每周称重。测定非-植物材料和栽盆的重量并从总质量中减去，以测定 每周生长的植物重量。
2.1生长和发育
每周测量莴苣顶端(head)的生长。从三个直径值计算平均顶端 直径值。从椰衣纤维顶部到最高叶片顶部来测量植物高度。然后计算 每次处理的平均顶部直径和高度。
根据顶端直径的测量，Elementol处理在试验期间使植物的平均 生长增强了11％(见图13，其显示了在移植12周期间内Elementol R- 处理过的莴苣植物的平均顶端直径与对照植物的对比)。星号表示处理 时间。在试验期间给予三次Elementol处理。)
按下式计算增加％：
植物的植株高度平均生长的比较对处理和对照植物来说很类似， 直到11周植物达到成熟(见图14，其是显示了在移植后12周期间内 Elementol R-处理过的莴苣植物中的植物高度的平均相对生长与对照 植物的对比)。注意在第11周生长的戏剧性增加。生长的增加与开花 相关-经Elementol R处理的植物首先开花，表示Elementol R可 以缩短发育时间。
植物发育增强的另一个测量是比较处理植物和对照植物的叶片数 (见图15，其是用Elementol R-处理的莴苣植株与对照植株比较的逐 株对比图，使用在第一次处理时具有相似叶片数的植株)。星号表示处 理周(第1和第5周)。算得5周期间的平均增强是20.7％。
2.2.新鲜和干质量(Fm:Dm)，Fm:Dm比例以及水％
该比例表示每克植物材料中存在的水量和干质量。干质量是除去 所有水后的干材料的量，并且是生长效率的指标。每两周测定植物的 新鲜和干质量。为测定新鲜质量，从新鲜叶片上切割十片尺寸完全相 同的圆柱形圆片并测定每个圆片的质量。在72℃将圆片置入Labotec 炉中72小时。然后测定干质量。通过用干质量除新鲜质量得到新鲜质 量和干质量的比例。
算得在试验期间由Elementol R处理引起的Fm∶Dm的总平均增加％ 为39.5％(见图16，其是举例说明试验期间莴苣植物Elementol R-处 理引起的Fm∶Dm比例的平均增加％与对照植物的对比)。算得试验期内 的总平均增加％为39.5％。还见图17，其是举例说明Elementol R-处 理过的莴苣植物和对照植物在湿度％方面的差别。
为测定叶片中的湿度％，使用下述计算方法：
湿度％指出植物中存在的水量。莴苣中存在水量一定与该莴苣的干 质量相关。在试验期期间湿度％相对稳定，尽管在试验最后6周(第8 到14周)期间Elementol-处理植物的湿度保持湿度5％含量，这表明 Elementol处理引起某种固定水的能力。该更高的湿度不足以解释 Fm:Dm比例的还要高很多的增加。
3.生理学相关参数的测定
用植物呼吸作用、光合作用、叶绿素、蛋白质(12％ SDS PAGE)和 糖的含量作为生理学参数。除了反映植物的健康，这些参数可以提供 Elementol引起的生长和发育增强的原因指标。对所有植物每周测定 所有这些参数(除了糖)。
3.1蛋白质含量
如下描述的方法，从第一周开始每两周测定蛋白质。每周取±1 克的新鲜质量以测定每种植物的蛋白质浓度。用研钵和研杵在含有2 mM EDTA、14mM β-2-巯基-乙醇和2mM PMSF的5cm3mM Tris-HCl缓 冲溶液(pH 6.8)中研磨新鲜叶片。在冷冻离心机上用12000rpm离心粗 提取物十分钟。除去上层清液并稀释5倍。按Bradford(1976)的 Bio-Rad方法测定该稀释液的蛋白质浓度。用0.5mg/ml浓度的牛γ- 球蛋白作标准在Bio-Rad全自动定量绘图酶标仪上测定该稀释液在 595nm的吸光度。通过对每个植物测定四个读数可以足够精确的测定 蛋白质浓度。
每周测定处理植物和对照植物的蛋白质浓度，其没有显示显著差 别。
3.2呼吸作用和光合作用
可以通过测压法用可潜式微分Gilson呼吸器，测定呼吸作用的耗 O2速率以及光合作用速率。每几分钟读取用nmol O2每小时每克新鲜质 量表示的读数。本发明修改自Stauffer(1972)。随后进行气体交换 稳态法。在避光条件下测量呼吸作用，而在稳定光强度调节下测定光 合作用和呼吸作用两者。
从每种植物的新鲜叶片上切割十片直径约1.5cm的叶片圆片。为 保证对每种植物的良好代表性，从随机叶片上随机地摘取圆片。称重 圆片，然后和500μl蒸馏H2O置于Warburg反应器中。向中央孔加入 300μl 12％ KOH和折叠的滤纸以增加对来自反应器间气氛的CO2的吸 收面积。KOH吸收CO2形成碳酸氢盐并保证只测定消耗和合成的O2量。 每个反应器接到该装置上并使其在所需期间避光平衡。设备在25℃的 水浴中摇动时，平衡发生。在平衡后关闭大气和压强计阀门以实现气 密系统。以设计好的时间间隔读取读数(R)：R1是在避光下10和20 分钟间的压强计读数差别。P&R是光照下40和50分钟间的压强计读 数差别。R2是在避光下65和75分钟间的压强计读数差别。压强计读 数与气体体积的变化相关，后者等同于消耗和合成的O2量。通过下述 公式，得到呼吸作用和光合作用的速率：
呼吸作用：
光合作用：
将速率O2μl/分转化为：
μl O2/h/g Fm→(Δμl/分x60分)÷g新鲜质量
气体交换值按Gregory和Purvis方法(1965)用下列方程校正：
其中：
X ＝ 标准温度和压强(STP)下测定的气体总体积(mm3)
ΔVg ＝ 呼吸器上的体积变化
T’ ＝ 标准温度，273°K
T ＝ 热浴温度，25℃
Pb ＝ 主要大气压，mm Hg
Pw ＝ 在进行实验的主要温度下的水蒸气压
P’ ＝ 标准压强，760mm Hg
如果：
所以1μl＝0.745234μl布隆方丹(BFN)真实体积。
大气的[O2] ＝ ±21％
1mol O2 ＝ 22.414dm3(升)
＝ 22.414升(dm3)＝1mol O2
如果： 1升 ＝ 0.0446149mol O2
在海平面 1μl ＝ 0.0446149μmol O2
在BFN： 1μl ＝ 0.745234μl＝0.0332485μmol O2
将μl O2转化为μmol O2：
μl O2/h/g Fm→Δμl μl O2/h/g Fm x 0.0332485μ mol O2
通过应用上述提及的公式每周测定呼吸作用和光合作用速率，校 正测定值以补偿海平面和更高海拔的空气压强差异。呼吸作用和光合 作用速率以及光合作用：呼吸作用比例在试验的13周期间内相对恒定 且可比较。然而，当对蛋白质校正过呼吸作用以后，发现经Elementol 处理的植物的呼吸速率存在增加。
测量呼吸作用和光合作用速率并用来相互对比。光合作用速率必 须总是大于呼吸作用，因为碳的获取必须超过碳的使用，否则将存在 碳的净损失。光合作用：呼吸作用比例越高，则生长速率越好，因为该 比例高时碳净收益更高。在试验的13周内该比例相对恒定。
光合作用，与呼吸作用类似，显示“U”形；当种植莴苣时该植物 非常绿并具有高叶绿素含量。在初始生长期光合作用和呼吸作用速率 都高，因为年幼植物的快速新陈代谢还需要呼吸由高光合作用速率提 供给该植物的足够量的糖。然后光合作用和呼吸作用降低，之后光合 作用速率再次增加。光合作用速率必须总是超过呼吸作用速率以向植 物提供足够初级新陈代谢的糖并且在次级新陈代谢期间向植物提供 糖，以及为后续用途储存其它化合物。在最后几周期间光合作用速率 增加以匹配呼吸作用速率的升高。更高的光合作用还是因为最后几周 存在更多的叶绿素。此更高的叶绿素含量导致更好的光合作用能力。
经经Elementol处理的植物的呼吸作用速率通常比对照稍高，但 此区别在统计学上不显著，除了正好在第5周的第二次Elementol处 理(图18)之后。
3.3叶绿素含量
新生活物质的合成需要通过光合作用过程从太阳得到的能量供 应。叶绿素是光合作用的必须成分。叶绿素是主要的吸光色素。在色 素蛋白质复合体中或周围特别排列的叶绿素分子叫做光合系统，其包 埋在叶绿体的类囊体膜中。天然存在几个不同的叶绿素形式，包括叶 绿素a、叶绿素b。许多植物中还形成保护色素。这些辅助色素中的一 些，特别是类胡萝卜素，适于吸收和消散过剩的光能，或作为抗氧化 剂。其它色素如类胡萝卜素(caretenoids)于不同波长下在吸光中起作 用。
光合作用总反应在下列方程中给出(产生一己糖)(Stern，2003)。
6CO2+12H2O+光→叶绿素→C6H12O6+6O2
光合作用期间牵涉两个光反应，其包括光合系统I(PS I)和光合 系统II(PS II)。它们在不同波长下以最高效率吸收光。这两个系统 必须共同起作用才有效率。系统可以是光敏的或非光敏的。光合作用 期间的主要反应牵涉可能通过已知为Z流程的机制的从水到NADP的电 子输运。光合作用速率可以通过用测压技术测定消耗的二氧化碳或释 放的氧来测量。光合作用的不同类型存在并命名为C3光合作用(绝大 多数植物)；C4光合作用，绝大多数草以及CAM(景天植物酸代谢)光 合作用，后者存在于绝大多数肉质植物中。影响光合作用的因素包括 光强度和量、水的获取量、对太阳和背阴区域的适应、CO2的获取量、 温度、叶龄和碳水化合物迁移。
每周通过从植物的随机叶片上随机地剪切10个相同尺寸的圆片 用MacKinney提取方法(1941)测定叶绿素含量。用研杵在研钵中于 80％丙酮中在冰上研磨这些圆片，随后在冷冻离心机中以12000rpm离 心此匀浆10分钟。上层清液稀释5X。通过使用Pye unicam SP8-400 uv/vis分光光度计测定每个稀释清液吸光度值。在1cm玻璃池中在 663nm和645nm测定吸光度值。
叶绿素浓度如下测定(MacKinney(1941))：
叶绿素a(mg/g)＝[12.7(A663)-2.69(A645)x(V÷(1000 x W))]
叶绿素b(mg/g)＝[22.9(A645)-4.68(A663)x(V÷(1000 x W))]
其中：A ＝ 在给定波长的稀释清液的吸光度
V ＝ 提取物最终体积
W ＝ 所用圆片的新鲜质量
当在实验中的和对照植物中的叶绿素量之间进行比较时，应该基 于蛋白质和新鲜质量来校正，因为它们在两组间显示了差异。与对照 植物比较，经经Elementol R处理的植物显示叶绿素a和叶绿素b两 者的平均增加(图19)。
有趣的是，特别是在叶绿素a中的但某种程度上也在叶绿素b中 的增加，反映在Elementol-经处理植物中观察到的植物高度、叶片数 目和蛋白质的量的类似增加。在整个实验期间对叶绿素a和叶绿素b 分别观察到14％和20％的平均增加，而在实验最后4周(第9到13周) 对叶绿素a和叶绿素b分别观察到42％和34％的平均增加。总的结果有 力地表明Elementol处理引起的叶绿素增加直接对ElementolR的生 物刺激作用负责。
尽管叶绿素A和B的相对增加有差异，但经Elementol处理的植 物和对照植物比较经校正的叶绿素a比b的比例未显示差异(见图20， 其反映从经mg蛋白质和新鲜质量校正的叶绿素得到叶绿素A:B比例。 该几乎相等的曲线证实植物光合作用器官上不存在任何植物毒性作 用)。
3.4糖含量
存在的糖量是可利用营养素量的直接结果。增加N和P率逐渐增 加莴苣中的葡萄糖含量，但缩短架存期(www.ars.usda.gov)。呼吸作 用速率和光合作用速率对可利用糖量有影响。
Boehringer Mannheim(Kit nr.10 716 260 035)的UV方法用 来测定莴苣叶片中存在的蔗糖、果糖和葡萄糖浓度。蔗糖较葡萄糖以 更高得多的浓度存在。与经Elementol R处理的植物相比，在对照植 物中发现小但统计学显著的蔗糖量增加。另一方面蔗糖在经处理植物 中比在对照植物中稍多。
3.5白利糖度(Brix)
植物韧皮汁液含有许多为植物提供能量的物质。使用的有关质量 的术语叫做Brix指数，该概念在19世纪由德国化学家A.F.W.Brix 引入。白利糖度值是在溶液中的可溶固体含量(S SC)百分比的度量。尽 管白利糖度常常用蔗糖百分比表示，但重要的是应认识到此处“蔗糖” 实际上是蔗糖、果糖、维生素、氨基酸、蛋白质、激素和其它固体的 总和(www1.agric.gov.ab.ca)。植物中碳水化合物的主要储存形式， 即淀粉，是不可溶的，所以对白利糖度没有直接贡献。
每一度白利糖度等价于1克糖和其它SSC每100克汁液。一般地， 白利糖度越高，糖含量就越高，特别是增加的蔗糖和葡萄糖水平 (Baxter等人，2005)并且这通常知道更佳的味道(Baxter等人， 2005；www1.agric.gov.ab.ca)。高白利糖度、高EC和低pH通常与 高果实质量有联系(www.cals.ncsu.edu)。
当在有利条件下栽培作物时，可以在这些产品中期望更高的白利 糖度，所述有利条件是比如无限制提供矿物质和其它所需营养素、阳 光充足以及温度的溶液培养系统(www1.agric.gov.ab.ca)。Bisogni 等人(1976)发现SSC与甜度、味道和总体质量之间的相关性。Winsor (1966)报告最佳质量的果实是糖和有机酸都高的那些。
白利糖度等于在韧皮汁液中溶解的固体％。高白利糖度的汁液具有 降低的水活性和相应降低的冰点，以及相当的更大湿度保持倾向。
白利糖度更高的产品还具有更长的架存期，并且对病害侵染和疾 病更具抗性。虽然温度、pH等可以影响生物体是否生长或生长多快， 但水活度可以是最重要的因素。所以水活度在测定架存期和田间成功 的关键因素。通常汁液白利糖度水平超过12％还确保抗吮汁昆虫侵染。
最重要地，高白利糖度相应地提供食物的更高营养含量并且保证 良好的、真实自然成熟的味道，特别是折射计显示扩散或展开的读数 时，这代表有益量的各种复合溶解的植物蛋白质和味道成分。
白利糖度常常用来测定某些所选食物的质量。白利糖度读数是莴 苣叶片中存在的所有溶解物质的读数，不仅是糖或蔗糖成分。实际上 用白利糖度来测定莴苣的质量。
在室温用白利糖度读数1.3475的10％蔗糖溶液校准白利糖度折射 计。用中和过的HClO4作为标准。从白利糖度读数和糖％中减去该读数。 校准后，将样品放入折射计以白利糖度读数和糖％读取白利糖度读数。
另一个方法被用来测定白利糖度读数。在200μl水中研磨± 0.1克新鲜质量(这样该样品被稀释了4X)然后20μl样品被放入折射 计并读取白利糖度读数。
尽管蔗糖含量更低，白利糖度值表明得自经Elementol处理的植 物的更佳质量的莴苣。因为白利糖度反映莴苣中的不溶物，Elementol- 处理过的莴苣富含非蔗糖植物材料。使用HClO4方法得到的经 Elementol处理的增加％是15％，使用水方法的增加％是12％。得自两 种方法的3％的差异应该是由于因存在更多的在HClO4中可溶的有机 酸、激素或油基维生素。
实施例17
在受控环境中ELEMENTOL R施用对果实产量和质量的生物刺激作 用
1.材料、植物生长和处理
栽培品种：西红柿该科的番茄(Lycopersicon esculentum Mill)：茄科(Solanaceae)品种。
幼苗：佛罗里达达得西红柿(Floradade)幼苗，约六到八周龄， 购自布隆方丹当地苗圃。这些幼苗中的十二株被移植到玻璃房中准备 好的溶液栽培系统中。该玻璃房位于the Free State大学的植物科学 楼楼顶。
1.1.培育方法：
设置两个相同的不断涨落循环的溶液栽培系统。每个系统由2个 充满支持媒介的长方形石棉盘(90cm x 20cm)组成，该盘由经灭菌的、 中等尺寸的硅石沙粒组成。每盘的三株幼苗移植成间隔±30cm并且行 间隔±42cm。这种分隔提供±0.135cm2每株，共总9株/1.22m2。
为限制藻类和细菌生长，使用黑色不透明的PVC管道、配件和蓄 水池来建造循环系统。每个系统分别有内带小水泵的70升蓄水池。两 个泵都连接于一个数字计时器，后者调节浇水循环的间隔。使浇水时 间同步以使盘充满至给定水平，这样计时器关闭后，水即灌入蓄水池。 每天从06:00到18:00浇灌植物六次，每次5分钟。
1.2温室条件
温室中的温度部分通过空调控制。夜间和白天平均温度分别从16 ℃到25℃变动。三台仪器，即温度计、温湿记录仪和旋转湿度计，用 来测定温度。温度计装在东墙上(朝北)。将温湿记录仪策略性地置于 温室内以从周一到周五24h提供温室条件的记录。温湿记录仪提供温 度和相对湿度两者的指示。用LI-185A型号光度计在离地面2m高处 测量三个不同位置的光强度。光强度随维度和季节明显地变化。这是 地球的倾斜和围绕太阳的转动的结果。正午光强度(LI)随冬季月份的 临近降低，随后的增加从第14个移植后周(WAT)开始直到第25个WAT 结束。
按与周测定相同的步骤测定温度、相对湿度和辐照强度。五月到 七月间每天从8:00到16:00每隔两小时读取读数。相对湿度(RH)是在 特定温度和压力下空气中实际存在的水分重量与单位空气体积保湿量 的比例(Smith & Bartok，2006)。正午RH开始增加至82％，但从移植 后第18周起发现低至50％的下降(24thWA)。RH取决于温度，因为暖空 气比冷空气具有更大的保湿量；所以尽管水量保持恒定，随着空气温 度增加，相对湿度降低。然而，在此情况中温度保持相对恒定；所以 RH降低可以是植物旺盛生长的结果，后者引起密集的和高度的蒸腾作 用，直到收获期的开始。随收获期结束增长的活力和蒸腾作用速率自 然中止。
1.2.营养素溶液
施用的营养素溶液，即Hygrotech Hygroponic，是为溶液栽培西 红柿生产特别研发的优化营养素混合物。该混合物开始由Hygroponic Mix和硝酸钙组成。从第三个花束到试验系统末尾添加硝酸钾。在自 来水中溶解每种成分的设计浓度的组合。
用70升营养素溶液充满蓄水池，并按需要补足。每隔一周，在重 新充满前，用干净自来水冲洗蓄水池以除去可能聚集的有害物质。分 别使用PHM 85精度pH计和PW 9526数字电导计，在重新充满蓄水池 之前和之后测量每个蓄水池中的营养素溶液的pH和EC。
2.1.3.处理
在第二个WAT期间，用黑色尼龙细绳将植物耙在一起以支持植物。 在第二周期间，施用可施用处理剂的六次施用中的第一次。如下总结 处理剂：
处理 缩写 处理剂成分 对照 C 不施用 Elementol R P 3ml Elementol R/250ml H2O(2xdist)
特别排列植物以努力使每次处理拥有阳光植物和背阴植物。所 以植物间仅存的区别是特定的叶片处理。
2.物理参数：生长、发育和植物产量
2.1植物高度
用测量胶带测定每株植物的高度(从沙粒面到最高顶端)。一旦植 物植物触到屋顶以及植物重量压倒该植物，即停止该步骤。
两种处理的植物显示高度的线性增加，在移植后第10周处理过植 物和对照植物两者的平均高度在130-160cm之间。
2.2再生发育
首先通过计数植物上的花蕾数评价Elementol R对植物产量的影 响。植物的发育和生长直接与花蕾、花和果实的形成相关。一旦可辨 认的花蕾出现即记录花蕾，并在明确的黄色出现时记录花。移植后3 周出现第一个花蕾，对照(C)植物在移植后7周达到平均约25个蕾。
虽然Elementol R(Er)处理对植物高度没有统计学显著作用，但 Elementol R处理引起统计学显著的平均花蕾数增加，特别是在移植 后从第5周到第7周(图21)。
与对照比较，Elementol R处理从第6周开始显著刺激蕾的形成。 按照实施例16中描述的公式计算增加％，记录到92％的增加，从可计 数清楚可辨认花蕾的第4周开始到第7周花蕾平均增加44％(下述表1 和图22)。
为防止发育中植物的损伤和稠密生长的溶液栽培设备中蕾计数的 不实用性，决定移植后7周中止此步骤。
2.3产量
在实施例16中无法测定Elmentol R对产量的贡献，因为此处叶 片和植物生长是相关的参数。然而在西红柿植物的情况中，如果通过 溶液栽培方式给予植物的营养是足够的，花蕾的增加应该反映植物产 量的增加。所以计数果实。在果实需达到5mm直径后才记录其的出现。 在实验期间的平均积累果实产量记录在表2中(还见图23)。
对照植物和经处理植物两者产量的周增加从第3周开始是线性 的，从移植开始到第3周有滞后期。使用Fisher t-检验(1尾)，来 分析该产量数据，该检验返回与Student’s t-检验相关的可能性并决 定两个样品是否可能来自两个基础总体。可能性值测定为0.000261， 表示为经Elementol R处理的果实和对照果实得到的产量系列相同的 可能性小于1/1000。
再次使用实施例1中描述的公式算出实验期间除了第1周的产量 的平均增加是53.7％。
计算每株平均积累产量。如期望的，果实产量每株的增加％完全等 同于为总积累产量得到的增加％(53.7％)。
为两组的果实比蕾比例的计算(表3)显示开始7周内步进的但类 似的降低，之后停止蕾计数。在第7周，从100个蕾仅生长26或26 个果实(见图24)。这样可能是由于相对得到的高产量而不足的营养， 虽然使用了为溶液栽培方式生长的西红柿优化的营养素混合物。产量 越高，营养不足的影响就越大。所以，如果针对增加的产量调整过营 养，相对对照植物可能会得到经Elementol R处理的植物的更大的产 量增加。
2.4.果实的物理参数
2.4.1.湿度
总果实产量和可溶固体含量两者在经加工西红柿市场上的经济成 功中扮演重要角色。为处理目的选择西红柿时，特别注意生化质量。 例如，可溶固体含量高的果实，含水较少且较甜并且因此对处理和加 糖制备合适质构的糊剂的需要更少(Baxter等人，2005)。另外，大量 器官感觉和营养参数被用来定义果实质量。这些质量参数包括糖、可 滴定酸(TA)、电导(EC)、维生素C和酚类化合物含量、可溶固体含量 (SSC)和坚实度，仅以此为例(Anza，Riga & Garbisu，2006)。
因此平均湿度给出关于西红柿质量的指示。为测定湿度，将每个 代表性西红柿的切片放入陪替氏培养皿(预先测定其重量)并用 Sauter RL 200微天平方法称重。然后将其放入±68℃的labotech 炉中7天。经过脱水期，再次称重包括西红柿切片的陪替氏培养皿。 重量的损失代表了西红柿中存在的水分的量。平均地，尽管差异在统 计学上不显著，经Elementol R处理的果实比对照组包含稍少的水分 (见图25，如实施例17中描述其显示经Elementol R处理的西红柿植 株与对照植株比较的平均果中湿度％。经Elementol R处理的果实通常 具有较低的相对总西红柿质量的湿度，这表示具有如糖和蛋白质的更 多可溶物，其导致更高质量的西红柿)。
在实验期间经Elementol处理的果实的干质量的平均增加％是 -1.05％，表示在经处理的植物和对照植物之间不存在区别。然而，相 对的干质量具有宽分布。算得两个范围源自相同组的可能性(即相似性) 的T-检验为0.330525。比较湿质量:干质量比例时，观察到相反的模 式。这可能表示用于此测定的步骤是不准确的。可能的原因是没有考 虑果实的有机酸和油含量。
3.果实的生化参数
3.1.电导(EC)和pH
每第二周，客观地选择代表每次处理的15个果实。用Polytron 匀浆器在试管中研磨该果实的一部分。分别使用PHM 85精度pH计和 PW 9526数字电导计，测定该组织的pH和EC。
更大的电流量意味着果实中更高浓度的溶解离子。总果实产量和 可溶固体含量两者在经加工西红柿市场上的经济成功中扮演重要角 色。为处理目选择西红柿时，特别注意生化质量。例如，可溶固体含 量高的果实，含水较少且较甜并且因此对处理和加糖制备合适质构的 糊剂的需要更少(Baxter等人，2005)。
果实的EC显示步进的增加。在实验期间测定的对照植物的平均 EC是3.395，而经Elementol R处理的植物是3.393。当比较果实的 pH和EC值时，表现出反相关，尽管是很平缓的斜线。
实验期间，测得对照果实的平均pH是4.245，测得经Elementol R 处理的植物的pH为4.248。所以，尽管经处理植物产量的大大增加， 在关于湿度、干质量、EC或pH方面的果实质量没有区别。各值间的 密切相关性还表示了测定的准确性。
3.2.碳水化合物
西红柿的果实质量和产量很大程度上取决于果实质量的一种生化 成分，即可溶糖含量(Damon等人，1988；Islam等人，1996)。在非原 质体葡萄糖和果糖浓度以约1:1的比例存在(Damon等人，1988)，而 在发育的所有阶段己糖浓度至少比蔗糖大四倍。Guan和Janes(1991) 发现在西红柿果实中蔗糖水平相对低，其不依赖光强度并且在发育期 间持续降低。在他们研究中的光照-和避光-生长的蔗糖含量未显示任 何显著差异。所以碳水化合物的积累可能是由蔗糖的新陈代谢驱动。
为检测收获的西红柿的碳水化合物含量的样品制备：通过向试管 中的5ml二次蒸馏水中加入10g代表性果实组织来制备样品。用 Polytron匀浆器匀浆该混合物±30秒。用额外的2ml二次蒸馏H2O将 在试管壁上的残余材料冲洗到试管中。振动该试管30分钟，接着激烈 涡旋，随后快速倾入小量杯中。当果泥在电动搅拌器上搅拌时，用1M 和5M的KOH调节pH至±8.00，随后使该溶液(±13-17ml)达到20ml 的最终体积。该溶液的一份(微离心管中的±1.5ml)在12000rpm离心 10分钟。用巴斯德吸管吸取上层清液并转移至干净的试管中。在最终 分析前，在-20℃保存测试样品。
为测定果实的糖含量，使用Boehringer Mannheim/R-Biopharm 制造的蔗糖/D-葡萄糖/D-果糖-测试盒(10 716 260 035)。改变规 定步骤至体积1ml。在计算碳水化合物含量时考虑稀释因子。
表3 表示在本实验第13周收获的果实的葡萄糖、果糖和蔗糖含量 的比较。
经Elementol R处理的西红柿显示了果糖和蔗糖含量的显著增加， 其导致消费者更喜欢的更甜的西红柿。
3.3白利糖度
白利糖度值是汁液中总可溶固体(TSS)的百分数的指示。每第二 周，测定用于pH和EC的15个代表性水果的样品果泥的白利糖度值。 因此用Polytron匀浆器在试管中研磨该果实的一部分的步骤，与测定 果实的pH和EC中的完全相同。稍稍倾斜果泥容器以用巴斯德滴管吸 取澄清的果汁样品。用折射计方法测定白利糖度值。高白利糖度、高 EC和低pH与高质量有联系(www.cals.ncsu.edu)。关于在收获第13 周期间观察到的果实的EC和低pH或湿度方面，尽管事实上未观察到 对照西红柿和经Elementol处理的果实间有统计学显著差异，但平均 白利糖度值为8％的来自经Elementol处理的植物的果实比平均白利糖 度值为7.4％的对照植物更佳。两组都具有显著高出关于西红柿的平均 公开值的白利糖度值。
总之，Elementol R处理对西红柿产量以及关于湿度％、不可溶物 和糖方面的收获果实的质量都有增加。
实施例18
通过ELEMENTOL R方法对商业生物刺激剂的摄取和迁移的增强
1.实验目的
前面两个实施例显示，在关于植物生长和产量方面Elementol R 可以单独作为生物刺激剂。本实验研究了是否向Elementol R中预- 包埋商业生物刺激剂可以增强该生物刺激剂的摄取和迁移， 其在通过溶液栽培生长的莴苣和西红柿中导致植物生长和产量的增 加，其超过对Elementol R观察到的或已知轻度影响的植物 生长和产量。
2.实验装置：
实验装置与实施例16和17中描述的类似，除了施用的生物刺激 剂(单独或与Elementol R组合)。该实验按与实施例16和17中的描 述类似的方法进行，将不再描述。
2.1商业化生物刺激剂
，对环境温和的植物强化剂，包括一组叫做油菜素甾醇 (brassinosteriod)的植物激素(Schnabl等人，2001)。油菜素甾醇是 高级植物中存在的生长-促进甾醇。油菜素甾醇被认为通过在植物中增 加茎延伸和调节基因表达在低浓度影响植物的生长。使用观 察到改善的幼苗发育、强壮的根和芽、最佳的花发育。油菜素甾醇， 作为纯植物激素，据报道不仅增加作物产量还增加作物质量 (Prusakova等人，1999)。包含提取自群落生态学上活跃的野 生植物的高质量生化活性物质。
由于栽培者的干预，绝大多数栽培植物失去了保护自身对抗病原 菌的能力。增加植物对所有类型逆境和病原菌的抗性。油菜 素甾醇在活化植物自身抗性和耐性机制中扮演决定性的角色。 在该类中首次以最佳方式成功催化植物自身防御能力的活 化。植物发育诱发抗性增加植物抗病原菌的能力。
该生物刺激剂是水溶性粉剂，其在作为叶片喷雾剂或种子处理剂 施用至作物时增加根发育、加速营养素吸收、加强营养素同化作用、 诱导花蕾形成、增加产量(Hüster，1999，Schnabl等人，2001， Pretorius，2004年被Alam引用)并诱导植物对病原菌和生物逆境的 天然抗性(2004年被Alam在Agra Forum引用；Hüster，1999； Schnabl等人，2001)。Khripach等人(2000)也声称此新发现的植物 激素具有调节离子向植物细胞中摄取的能力。
2.2叶面施用计划
2.2.1莴苣
不同植物组的处理剂制备如下：
按照剂量说明：＝2g/L
那么：＝0.5g/250ml
i)(CC)
0.5g CC+250ml H2O
ii)Elementol R(E)
3ml E+250ml H2O
iii)全强度和Elementol组合(CC/E)
0.5g CC+3ml E+250ml H2O
iv)半强度和Elementol组合(1/2CC/E)
0.25g CC+3ml E+250ml H2O
v)四分之一强度和Elementol组合(1/4CC/E)
0.125g CC+3ml E+250ml H2O
2.2.2.西红柿
处理剂名称 缩写 处理剂成分 Elementol R PE 3ml Elementol R/250ml H2O(2xdist) ComCat CC 0.5g Comcat/250ml H2O(2xdist) ComCat & Elementol CC/E 0.5g Comcat+3ml Elementol R/250ml H2O(2xdist) 0.5Comcat & Elementol R 0.5CC/E 0.25g Comcat+3ml Elementol R/250 ml H2O(2xdist)
3.结果
3.1生长和发育和顶端直径
3.1.1.莴苣
在E中预-包埋CC对植物高度的植物顶端直径影响不大。植物中 的某些未增加100％，这说明它们的尺寸没有翻倍。用CC和E单独处 理的某些在经处理的植物中表现最佳，但区别不是统计学显著的，除 了从第11周开始，此时经Elementol R处理的植物超过其它所有处理。 这些组合中的某些可以具有植物上的抑制作用，然而E和CC单独都具 有刺激效果。
在开始的7到8周植物达到最大顶端直径，之后顶端直径缩小， 可能是因为不断的修剪植物以获得生理学实验使用的植物材料。
3.1.2西红柿
施用导致莴苣生长速率的轻度降低。然而，当 与两种浓度(CC/E and 0.5CC/E)中任一种的Elementol一起施用时， 植物生长中的这种降低以剂量依赖性的方式得到缓解，但生长还是显 著低于Elementol R单独处理。
3.2西红柿的平均花蕾
单一Elementol R、(CC)以及组合处理显示花蕾的明显 增加，特别是从移植后第5到第7周。这些处理间没有测得明显差异， 尽管CC显示最少的增加。
3.3平均西红柿产量
所有处理间没有观察到果实尺寸和质量的明显差异。(CC) 施用，作为生物刺激剂，未能成功在通过溶液栽培方式生长的西红柿 中增加果实尺寸和质量。满强度和Elementol R施用在果实 尺寸和质量变化上没有作用，但是CC/E组合处理剂引起更大的果实尺 寸和果实直径和新鲜质量(见下)。这说明该低/Elementol 浓度减速整个收获期观察到的果实质量降低，这意味着收获期中更好 的物理产量。下表反映平均产量/株：
Elementol R显著地刺激西红柿产量(实施例17)。然而，当 在全(CC/E)和半(0.5CC/E)强度两者中与Pheroids混合时， 明显刺激果实生产(见图26，其显示了(CC)、Elementol R(E) 及其组合对13周期间从每组三植株中收获的积累果数的变化的影响) 和随后收获的果实的质量(见图27，其显示了与单独用Elementol R 或处理的植株中观察到的增加相比，当用包埋在Elementol R 中的处理植物时观察到总积累果实质量的戏剧性增加)。
与从CC得到的值相比，算得CC/E和0.5CC/E的产量方面的增加％ 分别为99％和81％，而CC/E和0.5CC/E的总收获质量分别为199％和 204％。CC/E和0.5CC/E各自33％和21％的增加，远小于Elementol单 独引起果实产量和质量的增加(图26和27)。Elementol作为新型载体 分子被证明是分子的有效迁移剂。还显示Elementol R增加 的摄取以发挥后者的生物-刺激作用。这两种产品的协同效应 也可以发挥作用。
3.2湿度％以及新鲜和干质量(Fm∶Dm)比例
3.2.1莴苣
所有处理对植物Fm:Dm比例有刺激作用。
3.2.2西红柿
单一CC显示比单一E高的平均新鲜果实质量。然而，在E中预- 包埋CC更进一步增加西红柿的平均新鲜质量(见图28)。未观察到CC/E 和0.5CC/E间有显著差异，除了第13周，因为Fm的标准偏差很大， 这可能不是显著的。
4.莴苣的生理学相关参数
4.1蛋白质含量：每次处理后一周测量
蛋白质含量在第2周最高并且对所有处理在该实验的12周中显示 下降。从第4到12周CC有平均最少的蛋白质的量。在最后一周所有 植物有相对相同的蛋白质的量。CC/E组合对蛋白质有最佳的刺激作 用。
4.2呼吸作用速率
所有植物处理显示相对相同的呼吸作用速率。在第9周，经CC/E 处理的植物有最佳的呼吸作用速率。除CC/E组合呼吸作用速率一直降 低至第9周，然后在最后4周再次增加。所有植物处理显示这种“U” 形状，因为在生长长期和花期有更高的能量需求。CC/E组合是在呼吸 作用速率中唯一显示增加的处理(图29)。这样在第9周，CC/E组合处 理在植物上具有刺激作用。所有牵涉E的处理在此周中具有比单一CC 更高的呼吸作用速率。
当用蛋白质的量表示呼吸作用速率时，观察到涨落现象。在每次 植物被处理后，经CC/E处理的植物的呼吸作用每蛋白质的量显示增加 (第5周和第9周；见图29)。所以E和CC的组合刺激呼吸作用速率 每mg蛋白质。在第13周末E植物具有最高的呼吸作用速率每mg蛋白 质，可能是因为经Elementol R处理的植物在用CC或CC和E的组合 处理的植物之前开花，这需要高呼吸作用速率来为开花提供足够的量 的能量。
4.3光合作用速率
同样，在第9周期间CC/E的光合作用速率很高。在第11周光合 作用速率显著下降，这表示CC/E引起的刺激可能持续期短。在第13 周末1/4CC/P组合的组显示最高的光合作用，这表示1/4CC/P组合更久 的刺激光合作用。在蛋白质的量方面表达光合作用速率导致大约与呼 吸作用每mg蛋白质相同的结果，除了经1/4CC/P处理的植物在第13周 末显示最高的光合作用速率，这表示该处理在光合作用每mg蛋白质上 有持续期更长的作用。
光合作用必须总是超过呼吸作用速率。光合作用超过呼吸作用越 多，碳的积累量就越高，这导致更多的糖的合成。有更多的糖可以呼 吸那么能量的获取就更佳。这种能量为新陈代谢过程提供“燃料”。 越高的比例导致越好的生长。同样，1/4CC/P组合从第5周到第13周 在光合作用：呼吸作用比例中显示增加。该组合在第13周末具有最佳 的比例。
4.4叶绿素含量
虽然有涨落，可以观察到叶绿素a的总体增加。通过将叶绿素a 的量与植物中存在的蛋白质的量相关联，显示如下。在第13周，E处 理有最高的叶绿素a每mg蛋白质，随后第一是1/4CC/E、第二是1/2CC/E 并且第三是CC/E，然后是CC。这样最少量的CC和E的组合给叶绿素 A最大刺激(见图30，其举例说明在试验的第13周测定的叶绿素B每 mg蛋白质的量的比较)。CC对叶绿素B的量具有抑制作用，并且在 Elementol R囊泡中CC的包埋增强该抑制效果。然而，CC浓度的稀释 引起叶绿素B/mg蛋白质的增加。所以当在Elementol R中包埋时应该 减少CC的剂量。
叶绿素B显示类似的模式。在叶绿素B情况中，观察到总体增加。 在图32中，显示叶绿素B的量每mg蛋白质。此时，1/4CC/E组合和 1/2CC/E组合也显示最佳的叶绿素B浓度每mg蛋白质。E也具有高浓 度的叶绿素B每mg蛋白质。这样与E使用的更少量的CC刺激叶绿素 A和叶绿素B合成两者。CC抑制叶绿素B含量，但是CC/E组合戏剧性 的抑制叶绿素B的量，这说明E中的预-包埋增加CC的摄取和迁移。 CC的75％稀释液显得消除了CC的抑制作用。为使该抑制作用起作用， 在E中包埋CC必须引起CC/E的剂量依赖性的摄取和迁移，如可在图 30中观察到的。
4.5糖含量
葡萄糖和蔗糖两者的含量被E中的CC包埋刺激。植物的糖含量对 CC和E是类似的，但是CC/E的组合以平均91％增加蔗糖含量并以平均 64％增加葡萄糖含量。同时，发现当强度减小时蔗糖和葡萄糖 两者的含量增加。
4.6白利糖度
下表中给出用HClO4作背景的白利糖度测量值。白利糖度测量莴 苣叶片中存在的所有溶解物质，不仅是糖或蔗糖成分。实际上用白利 糖度来测定莴苣的质量。高白利糖度读数表明很多溶解物质以及很多 糖，这表示优良的质量和健康的叶片。这可以有助于低生长率和发育 不良的植物。
使用HClO4的经处理植物的平均白利糖度读数(也见图31)
处理剂 白利糖度读数(％) E 4.4261±0.2867 CC 4.7652±0.3586 CC/E 6.6760±0.5235
组合引起的白利糖度读数的增加表示Elementol载体引起的更高 的CC的摄取和迁移。
实施例19：
幼苗生长中的ELEMENTOL R的体外和体内作用：
1.实验目的
研究在C3和C4植物两者中的萌芽和幼苗生长中Elementol R的 作用。在光合作用过程中，CO2和水是底物而碳水化合物和氧是产物 (Jakob和Heber 1996)。按照其光合作用机理将植物分为C3、C4或 CAM。C3途径牵涉卡尔文循环，而C4途径使用的循环中3-磷酸甘油酸 (3-phosphoglyceric acid)不是第一个产物。C4光合作用提供的机 理具有碳同化作用的高速率并且对光呼吸作用更具抗性。
研究了单一Elementol R固有的和其与抗真菌剂混合的作用(见下 述玉米大田试验)。
2.幼苗生长中Elementol R的体外作用
按实施例16到18中的描述控制关于湿度和温度方面的条件。如 下处理三组萝卜种子：
组 对照 Elementol 125 Elementol 250 剂量 201水/ha 125ml/201/ha 250ml/201/ha 缩写 C E125 E250
种子在上述处理剂中浸泡过夜然后暴露于萌芽纸。就其对萝卜根 长度的影响测量不同处理剂的作用(见图32，其如实施例19描述， 是体外实验中在萌芽纸上萌芽的萝卜的照片。该短对照幼苗两边增加 的根长度是由于更快的萌芽和生长)。对Ep125和250分别观察到超过 对照53.3和52.6％的根长度增加。
3.玻璃房试验中幼苗生长中Elementol R的体内作用
在玻璃房试验中的小麦上完成下述实验：
栽培品种：卡里埃加(Kariega)小麦
关于温度和相对湿度方面的生长条件是相对恒定的。在土中种植 植物并通过滴灌浇灌。
处理由两组组成：接受肥料的参照组(RG)和接受Elementol R的测 试(E)组。参照组的种子按供应商的说明用肥料(3:1:0)种植。用与上 述体外试验中的描述类似的浓度用Elementol R在三个叶片期处理植 物，但在顶叶上和临近开花前使用20ml E/100L/ha。通过叶面施用来 施用处理剂。该试验布局由随机的小区设计组成并且进行3个半月。
每周研究下列参数：
任何植物毒性迹象，
幼苗尺寸和高度的差异
小麦胚芽鞘的平均生长(mm)
对照 Ep 125 Ep 250 Ep 500
22 24 27 28
上表说明小幼苗的早期反应，而且是一般反应的代表。生长反应 与Elementol的剂量成比例变化。Elementol R的施用导致关于小麦 胚芽鞘生长方面的线性剂量反应(见图33，其说明从用肥料对照以及 各种Elementol R剂量处理的小麦胚芽鞘测得的平均长度的比较)偏 离线性剂量反应的标准偏差格外地小，这表示数据的高可信度。这样 的线性剂量反应可以用来表示对生物体系的特定干涉导致特定的反 应。由此胚芽鞘生长中的反应是由特定剂量的Elementol R的施用特 别地引起的。图33显示并未达到最大剂量，所以使用更高剂量可能进 一步增加生长。算得使用500ml/ha剂量的Elementol R的生长增加为 27.3％。未观察到毒性迹象(叶烧伤、坏死等)。
4.大田试验
4.1小麦大田试验中Elementol R的体内作用
栽培品种是PAN 3377。在南非中部自由州按照正常农业技术栽培 小麦。
与在玻璃房中试验一样，这两组由肥料对照(3:2:1)和500ml/100L 水/ha剂量的Elementol R组成。处理被限制为在三个叶片期的单次施 用。该试验布局是随机的小区设计。本试验持续7个月。
测定产量并表示在图34中。与参照肥料组相比，在经Elementol R处理的组中观察到108kg的产量平均增加。未观察到植物毒性。
4.2豌豆大田试验中Elementol R的体内作用
在南非北部自由州的Koedoesfontein农场按正常农业技术栽培 豌豆，有以下例外：100个干燥豌豆浸泡在500ml钻孔水(对照组)或 5％Elementol R中过夜。稀释剂是取自同样来源的水。对照组豌豆在 浸泡期间全部吸收水，而Elementol组豌豆仅吸收300ml的5 ％Elementol R。将豌豆置于两个隔开的小区以防止两组间任何可能的 污染。每天通过喷洒浇灌植物。
从第7天开始观察到萌芽和幼苗生长。在第10天比较每个小区中 量高至少300mm的幼苗的数目。在第10天，在Elementol R中浸泡的 种子的小区中数出57株幼苗，而对照组中出现18株幼苗。这表示萌 芽和幼苗生长3.1倍的增加。此外，Elementol R组的萌芽只需要相 当于对照组0.6倍的水。这方面在干燥地区可证明是非常有价值的。
4.3干燥玉米大田试验中Elementol R的体内作用
使用遗传修饰的栽培品种，其由生产大号种子的公司提供。均分 一袋经处理的种子，用克菌丹处理袋中种子的一份，而以下述方式用 混有Elementol R的克菌丹处理另一份。克菌丹是广谱的接触杀真菌 剂，它从20世纪50年代开始就被用于玉米种子。它通常染成粉红色， 并在种子袋和播种箱留下粉红色的粉末。它对抗宽范围的土壤真菌十 分有效。将规定的克菌丹量直接与种子混合(克菌丹参照组)。对测试 组，用2％的Elementol R中的类似量克菌丹与种子混合。用各自的处 理剂短暂地混合或搅拌两组种子然后放置干燥。在南非的西北省于3 或5行玉米大田长度的小区中种植种子，该玉米大田在每个处理组两 侧有未处理地块。不用浇灌按一般农业技术完成栽培。
在行中每隔4株拔起1株植物以收集未经处理组、克菌丹参照组 和Elementol R/克菌丹组各组的植物。从大田内5m处开始收集植物 并朝大田中央进行，直到收集到每组50株植物。
测定每株植物的总植物质量、根质量和叶质量。图35显示每组的 平均质量的比较。未经处理的种子作为对照。单独使用克菌丹的种子 处理未引起植物叶片生长的任何变化，仅轻微增加根质量，而用2％ Elementol R/Captan混合物处理的种子显示叶片质量、根质量以及随 之的总植物质量的增加。
可在不偏离本发明上述陈述表达的发明主旨的前提下设计很多本 发明的变化。
实施例20
用CO2代替N2O制备的ELEMENTOL囊泡的迁移
按Elementol B制备1的描述制备Elementol C，但在制备过程中用 CO2作气体。测定囊泡尺寸从300nm到2μm变化。用Malvern Z-测量仪 测得动电势为-44mV。
在含有CO2的Elementol C中分散的囊泡被用Nile红荧光标记至1μ M最终浓度。用刷子在一株常春藤植物的叶片上涂布该混合物。在另一 株常春藤植物的叶片上涂布水对照。30分钟后，收集被涂布叶片的对 生叶并用实验1实施例6中描述的共聚焦激光扫描显微法研究荧光的存 在。在用荧光标记的Elementol C涂布过的植物的被收集叶片中存在荧 光囊泡，而收集自用水涂布的植物的叶片中未发现这种荧光。该荧光 不相应于叶绿体或类囊体膜中观察到的自体荧光。这样在测试叶片中 观察到的荧光被证明是借助含CO2的Elementol C从一片叶片迁移到其 对生叶的结果。
分子模拟指出氧硫化碳也具有在Elementol囊泡和微海绵制备中 一氧化二氮和二氧化碳的相关性质。
植物学有益物质的施用普遍被认为是需要改进的技术，因为大量 百分比的施用物质并没有被其施用的植物吸收或者在其施用的植物上 保留。除了这种浪费作为结果导致的昂贵材料的浪费以及生产成本不 必要的增加，未被利用的物质还引起土壤和水源的污染。
经显示，没有参考文献用经设计的生物递送系统来论述增强特定 营养素或生长调节剂向植物的施用和/或该营养素或生长调节剂在整 个植物中的系统性迁移。在农业领域已知营养素和其它植物学有益物 质可以制剂为所谓的螯合剂或助剂。与本发明不同，该螯合剂是明显 可辨别的没有涉及递送系统的类别并且被用作微量-营养素来源，其通 过用金属与螯合剂通过配位成键化合形成。该金属-螯合物键的稳定性 影响植物对金属微量营养素-铜、铁、锰和锌的利用度。有效的螯合物 是这样的，其在土壤中螯合的微量营养素被其它阳离子取代的速率是 很慢的，如此保持施用的微量营养素为螯合形式。螯合物通常只对阳 离子物质适用。如EDTA的螯合剂被认为对环境有不利影响。
按照加利福尼亚食品和农业部列出的前驱有机材料(Preliminary Organic Materials)中对螯合物的规定，天然螯合剂是被允许的而缺 乏文献记载的合成螯合剂被限制仅用于微营养素喷雾剂。其它所有合 成螯合剂的用途都是被禁止的。EDTA、木质素磺酸盐和木质素磺酸被 认为是协同螯合剂。最近，公布了递送阳离子的穿梭机制体系。该穿 梭机制体系由长链多糖组成，其可以在集簇(纳米集簇)中与阳离子 配合，从而使营养素-螯合物呈中性。该螯合剂(穿梭机制配体)随后 包封集簇化的营养素并将其穿梭至细胞壁处递送营养素。该递送被认 为通过随机过程进行，由此植物上的管孔和该穿梭配体都由自然现象 热振动导致其收缩和扩张。认为当螯合剂收缩和管孔扩张同步时，营 养素就被递送。卸载矿物质后，该穿梭配体即从植物表面退回，并被 吸回纳米集簇，其在此不断重复此过程。该穿梭螯合体系可以扩展至 土壤中的其它潜在阳离子。然而，该体系仍然基于使用螯合物，只能 与阳离子化合物配合，不能穿透植物组织。
由Nutri-Tech Solutions在南非投入市场的Cloak Spray油， 是乳化的芸苔油和omega-3鱼油的有机混合剂。Cloak油被认为是高 品质的协同展布剂和粘着剂(见下)，其被宣称可改善所有叶用肥料 的性能。然而，并没有提出关于在植物中的物质迁移或递送其它物质 或通过植物根系施肥的权利要求。
向植物细胞中引入材料或物质的最确定的方法是在湿润剂、展布 剂或粘着剂存在下喷雾该物质。通过该技术在湿润剂存在下，材料被 喷雾至植物叶片上，该湿润剂可以使该材料附着在叶片的蜡质层上， 由此增加被植物吸收的物质和植物叶片自身的接触时间。当某些材料 被吸收时，通常含有粘着剂的湿润剂使叶片变粘且吸附灰尘，从而引 起气孔阻塞。已描述了农业领域涉及施用方法的载体，但并不涉及因 为向目标细胞或生物的递送增加引起的活性化合物的活性增强。发现 为在除草剂和激素种类中增强某些活性化合物的活性的助剂的用途， 与可以用来克服进入植物的屏障的递送系统最接近。
虽然这些技术在合适的环境中对易被植物吸收的某些化合物有 效，它们被认为通常不适合许多大量-和微量-营养素以及很多农药和 生长调节剂的有效递送。所以长期需要可以选择性的将化合物引入植 物细胞以增强生长或处理植物病害或营养缺乏的适宜方法。
助剂是化学和生物活性(非化学惰性)化合物并可以按照它们的功 能(活化剂或效用)、它们的化学(比如有机硅)或来源(植物或石油)分 类。它们产生明显作用。绝大多数助剂都与某些材料或条件不配伍并 可引起植物和动物中的毒性作用，还有某些助剂具有移动并污染地表 或地底水源的潜在能力。在水边使用助剂可以是有问题的，因为在某 些水生物种中可以出现不良作用。
发明对象
本发明的对象是：提供植物支持制剂，其自身在使用时施用该植 物支持制剂的植物的生长、外观、生产和/或产量方面具有有益作用， 并且该制剂还适宜用作递送媒介物、或递送媒介物的组分，该媒介物 用于一种或多种植物学有益物质向植物的递送和植物学有益物质在植 物中的分布或迁移，提供加入该媒介物的含有或不含至少一种植物学 有益物质的制剂，提供生产该媒介物的方法和制备合并该媒介物和至 少一种植物学有益物质的制剂的方法，以及涉及本发明递送媒介物的 用途的向植物施用植物学有益物质的方法，该媒介物随后还用来影响 该植物学有益物质在植物上或内的迁移或分布。
发明概述
按照本发明提供植物学有益且适合用作递送媒介物的植物支持制 剂，或递送媒介物的组分，以向植物递送一种或多种植物学有益物质， 并且增强该被递送物质在植物中或植物上的迁移，该制剂包含由在水 性载体中的基于脂肪酸的组分的囊泡或微海绵的分散液组成的微-乳 液，该基于脂肪酸的组分包含至少一种选自游离脂肪酸和游离脂肪酸 衍生物的基于长链脂肪酸的物质。
该分散液的优选特征在于至少95％的该囊泡或微海绵的直径尺寸 在50nm和5微米之间。将理解该分散液中的囊泡或微海绵是弹性的 而且不必然是完美球形，所以术语“直径尺寸”不理解为具几何精确 度的术语。还将理解，离开高度复杂仪器的使用在三维上测定该直径 尺寸是不可实行的。所以通过显微观察方法在二维中测定，因此如二 维所视表示横穿所观测囊泡或微海绵的最大尺寸。
该分散液的特征还进一步在于该微-乳液具有从-35mV到-60mV 的动电势。
该基于脂肪酸的组分可选自油酸、亚油酸、α-亚油烯酸、γ-亚 油烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸[C20：5ω3]、二十二碳六烯酸 [C22：6ω3]和蓖麻油酸(ricinoleic acid)，及其衍生物，选自其 C1到C6烷基酯、其甘油-聚乙二醇酯和主要由基于蓖麻油酸的油如蓖麻 油组成的氢化或未氢化的天然油与环氧乙烷的反应产物。
在本发明的一种形式中，该微-乳液的脂肪酸组分可包含或由酯化 脂肪酸的混合物组成，在此优选使用已知为维生素F乙酯的产品。该 产品可根据维生素F乙酯的商品名德国柏林CLR Chemicals Laboratorium Dr.Kurt Richter有限公司的CLR 110 000 Sh.L.U./g 购得。该产品的典型脂肪酸分布如下：
C18.0 ： 3，5％
C18.1 ： 21，7％
C18.2 ： 34，8％
C18：3 ： 28，0％
>C18 ： 1，6％
未知： 2，1％
该脂肪酸组分可以可选的包括或由已知为二十碳五烯酸[C20：5ω 3]和二十二碳六烯酸[C22：6ω3]和蓖麻油酸的长链脂肪酸组成。上述 产品可从Roche Lipid Technology根据商品名“Ropufa′30′n-3oil” 购得。已发现在希望向植物递送憎水性物质时加入这些酸是有用的。 可以用于此目的的可选产品是可从BASF得到的Incromega类的产品之 一。
除了前面提及的物质或物质的混合物，该脂肪酸组分还可另外包 含主要由基于蓖麻油酸的油组成的氢化天然油与环氧乙烷的反应产 物。优选从已知脂肪酸成分主要由蓖麻油酸组成的蓖麻油生产该物质。 可以通过氢化、乙基化和如聚乙二醇的基团加成来的方法来改性该产 品。一系列该产品由BASF在不同级别的商品名Cremophor下市场化了。 根据针对某些施用的本发明的优选形式，提供了递送媒介物，其中使 用的Cremophor级别、或改性蓖麻油酸的其它组合物是如下的一类， 其中该蓖麻油酸是通过向其加成包含从35到45个环氧乙烷单元的聚 乙二醇基团来改性的。
该媒介物可以加入溶于该脂肪酸混合物的适宜气体，所选气体适 宜使该微-乳液具有所需囊泡尺寸分布和所需动电势。
该气体优选地选自一氧化二氮、氧硫化碳和二氧化碳。
根据本发明的另一个方面，提供了用来生产如上定义的植物支持 制剂或递送媒介物的方法，其包含将该基于脂肪酸的组分与水混合来 得到微-乳液，以及将适宜的气体引入混合物的步骤，所选气体适宜使 该微-乳液具有所需囊泡尺寸分布和所需动电势。
脂肪酸组分的混合优选用加热和优选通过高速剪切机方法的搅拌 来进行。
该气体可在该微-乳液的基于脂肪酸的组分与水混合之前或之后 引入水中。所以在本发明的一个形式中，该气体可被溶于水中以得到 该气体在水中的饱和溶液，然后将该气体的饱和水溶液与所制备的该 微-乳液的脂肪酸组分混合。可通过用该气体在水中鼓泡、或者将水在 超过大气压力的压力下暴露于该气体一段时间，所述时间超过使水变 成被该气体饱和所需的时间，来制备该气体在水中的饱和溶液。在本 发明的可选形式中，首先可在水中制备脂肪酸组分的乳液，然后可通 过将该乳液暴露在气体中充气。这优选通过鼓泡完成。
该气体优选地选自一氧化二氮、氧硫化碳和二氧化碳。
可通过根据本发明的递送媒介物来递送至植物的植物学有益物 质，可以是任意一种或多种已知作为植物营养素有用的物质；植物农 药包含除草剂、杀真菌剂、杀细菌剂、杀虫剂、抗植物病毒剂；植物 生长调节剂；植物免疫介导剂；生物刺激素或者用于植物转化以允许 在植物中加入新特征或性质的遗传材料。上述性质可特别地由抗旱性、 抗病虫害性和增加的果实生产组成。
制剂通常以可作为可液体喷雾的形式获得。其包括本发明列举的 物质的活性成分，增进效力、稳定性或易施用性的任意添加剂如表面 活性剂和其它助剂，以及包括溶剂、载体或染料的其它成分。施用方 法和要处理的种类决定哪种制剂是优选的。
所以本发明还提供包含至少一种上述递送媒介物中的植物营养素 的植物营养素组合物。可以通过增强包括气态营养素的营养素的递送 来刺激在其萌芽期、营养期或结实期的植物生长。该植物营养素可以 选自元素：碳、氢、氧、氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、锰、锌、铜、 硼、钼、和氯。
本发明进一步提供植物农药组合物，其包含农药有效浓度的上述 递送媒介物中的至少一种植物农药。农药是意在预防、消灭、驱避或 缓解任意病虫害的任意物质或物质的混合物。农药不仅涉及杀虫剂， 还涉及除草剂、杀真菌剂和各种用来防治病虫害的其它物质。按美国 法律，农药还是意在用作植物调节剂、脱叶剂或干燥剂的任意物质或 物质的混合物。在本说明书中，意在使用上述的广义术语。
所以，在本发明范围中提供媒介物，并提供制剂，该制剂包括选 自下述化学和生物(有机)农药的农药形式的任意一种或多种植物学有 益物质：合成砷、含二甲苯的Bt液、不含二甲苯的Bt液、Bt可湿性 粉剂、有益生物、生物动力学制剂、波尔多拌合物(Bordeaux mixes) —铜、氢氧化物/固定态铜、硼酸、氨基甲酸酯类、氯化烃类、铬酸根 离子、柠檬酸、氢氧化铜、硫酸铜，选自肉桂、丁香、蒜、薄荷、胡 椒薄荷、迷迭香、百里香和白胡椒的草药制剂，合成除草剂、水化熟 石灰、吡虫啉-新烟碱类杀虫剂、茚虫威(p)-手性噁二嗪杀虫剂、昆 虫提取物、异氰酸酯、月桂基硫酸盐、石硫合剂、马拉硫磷、苹果酸、 甲基溴化物、甲基亚砜、乳状孢子病(milky spore disease)-甲 虫杆菌(B.popillae)、合成杀线虫剂、线虫病、烟碱，选自胡萝卜油、 蓖麻油(U.S.P.或等价物)、香柏油、肉桂油、香茅油、柠檬油、丁 香油、玉米油、棉籽油、休眠喷洒油、蒜油、老鹳草油、柠檬草油、 亚麻籽油、薄荷油、胡椒薄荷油、迷迭香油、芝麻油、大豆油、夏用 油、百里香油和除草油的油，选自乙酰甲胺磷、保棉磷、地散磷、硫 线磷、氯氧磷、毒虫畏、毒死蜱、甲基毒死蜱、虫螨磷、库马磷、ddvp (敌敌畏)、氯亚胺硫磷、敌匹硫磷、百治磷、乐果、敌噁磷、乙拌磷、 乙硫磷、灭线磷、乙基对硫磷、苯线磷、杀螟硫磷、倍硫磷、地虫硫 磷、氯唑磷、马拉硫磷、甲胺磷、杀扑磷、甲基对硫磷、速灭磷、久 效磷、二溴磷、砜吸磷、甲拌磷、伏杀硫磷、亚胺硫磷、磷胺、丁基 嘧啶磷、甲基嘧啶磷、丙溴磷、胺丙畏、治螟磷、硫丙磷、替美磷、 特丁磷、司替罗磷、脱叶磷(def)和敌百虫的有机磷酸酯，五氯酚、 合成农药、石油馏出物、石油喷雾助剂、2-苯乙基丙酸酯(丙酸2-苯 乙基酯)、信息素、增效醚，选自藜芦、除虫菊、苦木、沙巴草、香 茅、芝麻(包括土生芝麻植物茎)、丁香酚和香叶醇的植物提取物， 山梨酸钾、腐败全蛋固体(putrescent whole egg solids)、合成 拟除虫菊酯、岩盐-草防治、鱼藤酮、鱼尼丁、海洋动物粪便、皂基除 草剂、氯化钠、月桂基硫酸钠、土壤熏蒸剂、链霉素、毒鼠碱、硫、 病毒喷雾剂和锌金属条(仅由金属锌和杂质组成)。
本发明还提供除草组合物，其包含在上述递送媒介物中的除草剂 有效浓度的至少一种除草剂，和其作用模式无关，从而包括除草制剂， 该除草制剂的作用模式是具有下列作用模式的组中的任一种，即：
模拟植物生长素(2，4-滴、二氯吡啶酸、胺氯吡啶酸、绿草定)， 其模拟植物生长激素(植物生长素)在易感植物种类中引起不受控制的 和混乱的生长；
有丝分裂抑制剂(杀木膦)，其在春季阻止再出芽并在夏季阻止新 生长(也已知为强迫休眠剂)；
光合成抑制剂(环嗪酮)，其在光合成中阻断特定的反应，导致细 胞分解；
氨基酸合成抑制剂(草甘膦、咪唑烟酸和甲基咪草烟)，其阻止用 于构造蛋白质所需氨基酸的合成；
脂类生物合成抑制剂(精吡氟禾草灵和稀禾定)，其阻止用于细胞 膜生长和维持所需脂类的合成(Weed Control Methods Handbook，The Nature Conservancy，Tu等人)。
所以，在本发明的范围内提供媒介物，并提供制剂，该制剂包括 选自下述的除草剂形式的任意一种或多种植物学有益物质：2，4-滴 (2，4-二甲酚)、二氯吡啶酸、精吡氟禾草灵、唑嘧磺草胺-三唑并吡 啶除草剂、杀木膦、草甘膦、环嗪酮、甲基咪草烟、咪唑烟酸、胺氯 吡啶酸、稀禾定、绿草定。
本发明还提供杀真菌组合物，其包含杀真菌有效浓度的上述递送 媒介物中的至少一种杀真菌剂。该杀真菌剂可选自：1，3二氯丙烯、 2，5-二氯苯甲酸甲酯、8羟基喹啉、噻二唑素-S-甲基、加特罗、亚磷 酸铵、抗坏血酸、嘧菌酯、芽孢杆菌(bacillus subtilis)DB 101、 芽孢杆菌DB 102、芽孢杆菌隔离群B246、巴达克(Bardac)、苯霜灵、 苯菌灵、联苯菊酯、联苯三唑醇、硼砂、硼酸等价物、啶酰菌胺、糠 菌唑、乙嘧酚磺酸酯、captab、多菌灵、萎锈灵、二氧化氯、氯化苦、 百菌清、毒死蜱、乙酸铜铵、碳酸铜铵、铜的氢氧化物、王铜、氢氧 化铜、霜脲氰、环丙唑醇、嘧菌环胺、棉隆、溴氰菊酯、双氯酚、氯 硝胺、氯化二二苯乙酮基二甲基铵、苯醚甲环唑、敌螨普、二苯胺、 乙拌磷、二氰蒽醌、十二环吗啉、多果定、氟环唑、噁唑菌酮、醇类、 抗氧化剂类、咪唑菌酮、氯苯嘧啶醇、腈苯唑、环酰菌胺、咯菌腈、 氟硅唑、粉唑醇、灭菌丹、三乙膦酸铝、呋霜灵、糠醛、双胍辛乙酸 盐、己唑醇、羟基喹啉硫酸酯、抑霉唑、异菌脲、异丙菌胺、醚菌酯、 石灰、林丹、代森锰锌、代森锰、精甲霜灵、马拉硫磷、甲霜灵、精 甲霜灵(精甲霜灵)、威百亩、溴甲烷、代森联、矿物质油、磷酸二 氢钾、腈菌唑、辛噻酮、氧化萎锈灵、石蜡复合物(轻矿物质油)、 戊菌唑、戊菌隆、亚磷酸、多硫化硫、亚磷酸钾、膦酸钾、咪鲜胺 (prochlorax)锌配合物、咪酰胺、咪酰胺锰氯配合物、咪酰胺锌配合 物、腐霉利、丙溴磷、丙环唑(propaconazole)、霜霉威HCl、丙环唑、 丙森锌、食树脂假单胞菌、唑菌胺酯、嘧霉胺、QAC、克热净(Quazatine)、 苯氧喹啉、五氯硝苯、水杨酸、硅噻菌胺、钠-o-苯酚苯酚盐(Na盐)、 螺环菌胺、硫、TBTO、戊唑醇、噻苯达唑、噻苯达唑、甲基硫菌灵、 福美双、甲基立枯磷、三唑酮、三唑醇、丁蜗锡、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、十三吗啉、肟菌酯、杀铃脲、嗪氨灵、灭菌唑、乙烯菌 核利、氧化锌、代森锌和苯酰菌胺。
本发明还提供杀细菌组合物，其包含杀细菌有效浓度的上述递送 媒介物中的至少一种杀细菌剂。该杀细菌剂可以选自已知适宜用于植 物上对抗侵染植物的细菌的杀细菌剂。
本发明还提供杀虫组合物，其包含杀虫有效浓度的上述递送媒介 物中的至少一种杀虫剂。该杀虫剂可选自：
(E)-7-十二烯基乙酸酯、(E，E)-8，10十二碳二烯-1-醇、1，3二 氯丙烯、3(S)乙基-6-异丙烯基-9-十二碳二烯(docadien)-1基乙 酸酯、蒜(Allium sativum)、苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis) 血清型H-7、苏云金杆菌I.、苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis) aiziwai kurstaki变种、苏云金杆菌kurstaki变种、球孢白僵菌 (Beauveria bassiana)、慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、慢生型大豆根瘤菌WB 74、Luinus VK慢生根瘤菌 (Bradyrhizobium sp Luinus VK)、X S21慢生根瘤菌属 (Bradyrhizobium sp X S21)、spum慢生根瘤菌(Bradyrhizobium spum)、毒死蜱、除虫脲、E8，E10-十二碳二烯醇、EDB、黄绿绿僵菌 (Metarhizium anisopliae var acridium)隔离群IMI 330 189、淡 紫拟青霉菌(Paecilomyces lilacinus)菌株251、豌豆根瘤菌 (Rhizobium leguminosarum)菜豆(phaseoli)生物型、蚕豆(viciae)TJ 9型豌豆根瘤菌、苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti)、多杀菌素、硫、 哈茨木霉、z-8-十二烯基乙酸酯、阿维菌素、阿维菌素、乙酰甲胺磷、 啶虫脒、氟丙菊酯、涕灭威、α-氯氰菊酯、磷化铝、双甲脒、印楝素、 保棉磷、丙硫克百威、β-氟氯氰菊酯、β-氯氰菊酯、联苯菊酯、硼 砂、溴鼠灵、溴螨酯、噻嗪酮、噻嗪酮、硫线磷、甲萘威、克百威、 丁硫克百威、巴丹盐酸盐、溴虫清(chlorphenapyr)、毒死蜱、香茅油、 四螨嗪、十二碳二烯醇(codlimone)(E，E-8，10-十二碳二烯-1-醇)、铜、 杀鼠醚、桃异形小卷蛾(Cryptophlebia leucotreta)、杀螟腈、氟氯 氰菊酯、三环锡、氯氰菊酯、灭蝇胺、右旋烯丙菊酯、棉隆、溴氰菊 酯、甲基内吸磷、二嗪磷、敌敌畏、三氯杀螨醇、鼠得克、除虫脲、 imethoate、乙拌磷、埃玛菌素、硫丹、S-氰戊菊酯、灭线磷、灭线磷、 二溴乙烷、乙螨唑、苯线磷、苯线磷、喹螨醚、苯丁素(fenbutatin)、 苯丁锡、杀螟硫磷、苯氧威、甲氰菊酯、唑螨酯、倍硫磷、氰戊菊酯、 EDTA铁钠、pronil、氟虫腈、氟虫脲、氟氯苯菊酯、噻唑磷、夫马洁 林、糠醛、γ-BHC、蒜提取物、氟蚁腙、吡虫啉、茚虫威、λ-氯氟氰 菊酯、熏衣草基(lavandulyl)、千里酸酯(senecioate)、虱螨脲、磷 化镁、代森锰锌、枫内酯、马拉硫磷、四聚乙醛、威百亩、甲胺磷、 杀扑磷、甲硫威、灭多威、溴甲烷、甲基-对硫磷、速灭磷、弥拜菌素、 矿物质油、氟酰脲、氧乐果、邻-苯基苯酚、杀线威、砜吸磷、石蜡复 合物(矿物质油)、对硫磷、氯菊酯、稻丰散、甲拌磷、亚胺硫磷、 辛硫磷、抗蚜威、多硫化硫、脂肪酸钾盐、丙溴磷、炔螨特、残杀威、 蛋白质水解物、丙硫磷、除虫菊素、吡丙醚、喹硫磷、菜籽油、鱼藤 酮、硅基趋避剂、氟硅酸钠、多杀菌素、螺螨酯、硫、吐酒石、τ- 氟胺氰菊酯、虫酰肼、替美磷、特丁磷、杀虫畏、十四烯基乙酸酯、 三氯杀螨砜、噻虫啉、噻虫嗪、硫双威、塞仑、敌百虫、杀铃脲、特 诱酮、ζ-氯氰菊酯、磷化锌。
本发明还提供杀病毒组合物，其包含杀病毒有效浓度的上述递送 媒介物中的至少一种杀病毒剂。该杀病毒剂可以选自已知适宜用于植 物上对抗侵染植物的病毒的杀病毒剂。
本发明进一步提供植物生长调节剂组合物，其包含植物生长调节 有效浓度的上述递送媒介物中的至少一种植物生长调节剂。该植物生 长调节剂可以优选地的是d1-α-生育酚或其生理活性异构体，其产物 也已知为维生素E，其存在在调节植物繁殖阶段的发生中特别有用， 即，可被用于调节植物开花的发生并因此使植物育果阶段提前。然而 更一般地，该递送媒介物可以用来向植物递送下述任一种或多种产品：
2-(1-2-甲基萘基)乙酰胺、2-(1-2-甲基萘基)乙酸、2-(1-萘基) 乙酰胺、2-(1-萘基)乙酸、2，4-滴(钠盐)、3，5，6 TPA、4-吲哚-3- 基丁酸、6-苄基腺嘌呤、烷氧化脂肪烷基胺聚合物、烷基胺聚合物、 盐酸化氨基乙氧乙烯基甘氨酸、氨化硝酸盐、植物激素、砷酸钙、甲 萘威、矮壮素、氯普芬、氯酞酸甲酯、调果酸、氨基氰、丁酰肼、正 癸-1-醇、2，4-滴丙酸、2，4-滴丙酸(2-丁氧乙基酯)、噻节因、敌螨 普、二溴敌草快、敌草隆、乙烯利、精吡氟禾草灵、赤霉素、草甘膦- 异丙胺、草硫膦、精吡氟氯禾灵、吲哚基乙酸、抑芽丹、甲哌鎓、甲 基环丙烯、矿物质油、正癸醇、辛-1-醇、多效唑、二氯百草枯、二甲 戊乐灵、调环酸钙、水杨酸、氯酸钠、噻苯隆、抗倒酯和烯效唑。
本发明还提供增强植物或植物部分的结构和功能完整性的方法。
本发明还提供向植物施用植物学有益物质的方法，其包括将物质 制剂在根据本文描述和本发明的递送媒介物中以及向植物施用制剂产 品的步骤。该施用可以是通过机械的或人工喷雾的空气或表面施用方 法、通过混入水载灌溉系统、或合适时通过躯干注射。
本发明还提供通过同时供给防御通信分子前体、抗氧化剂、乙烯、 油酸和十六碳三烯酸按下面描述的机制支持植物的局部防御和获得性 抗性的方法。
水杨酸(SA)在局域防御和系统性获得性抗性(SAR)中作为信号分 子的牵连是熟知的。SA合成被向病原菌或紫外线的暴露所活化。水杨 酸通信被至少两种机制介导，用反馈回路来调制作用。这些反馈回路 还可提供点位来整合发育、环境和其它防御-关联信号，并由此微调植 物的防御反应。(Jyoti Shah The salicylic acid loop in plant defense.Current Opinion in Plant Biology 2003，6：365-371)
研究显示了脂类过氧化在SA-活化的抗性基因表达中的作用。SA 活化α-加双氧酶(α-DOX1)。α-DOX1氧化16-C和18-C脂肪酸，后者是 本发明制剂的组分。另外，脂肪酸16:3和18:3是潜在的防御通信分子- 羟脂(oxylipins)的合成前体。由此，各研究成果显示脂肪酸衍生信号 在植物防御中的SA-通信调制中有牵连(Jyoti Shah The salicylic acid loop in plant defense.Current Opinion in Plant Biology 2003，6：365-371)。
多种刺激可以活化SA合成/通信。植物中的叶绿体/质体可以是信 号的来源，该信号影响对病原菌的反应。叶绿体/质体的功能/完整性 对植物-病原菌相互作用的结果是重要的。叶绿体/质体对脂类新陈代 谢和脂类衍生信号的产生也是重要的。脂类信号对至少一种通道的水 杨酸活化是必需的。乙烯，其有助于水果成熟和着色，使通过该通道 的通信成为可能。研究显示本发明的组分油酸的存在对两种抗性通道 中的脂类衍生信号是必需的。此外，抗性的遗传阻遏与十六碳三烯酸 (C16:3)的含量减少关联。所以外源性16:3的递送应该有助于植物抗 性。
发明实施例
现在纯粹通过参考下述制剂、实施例和图形的非限制性说明的方 式来举例说明本发明，其中
图1是图，如实施例5中描述其说明通过使用本发明植物支持制 剂处理的南瓜植株上的节数的增加；
图2是图，如实施例5中描述其说明通过使用本发明植物支持制 剂处理的南瓜植株上的叶片尺寸的增加；
图3是图，如实施例5中描述其显示在不同时期收获自使用本发 明植物支持制剂处理的植株的中号到大号南瓜的数目；
图4是图，如实施例5中描述其显示在不同时期收获自使用本发 明植物支持制剂处理的植株与未处理的对照植株比较的特大号南瓜的 数目；
图5是图，如实施例5中描述其显示在不同时期收获自使用本发 明植物支持制剂处理的植株与未处理对照植株比较的所有南瓜的数 目；
图6是图，如实施例5中描述其显示在不同时期收获自使用本发 明植物支持制剂处理的植株与未处理对照植株比较的青椒的数目；
图7、8、9和10是如实施例6实验1中描述用本发明植物支持制 剂处理的小西葫芦植株的局部显微照片；
图11和12是图，如实施例6实验2中描述其说明用不同的本发 明植物支持制剂处理的君子兰植株的生长；
图13是图，如实施例16中描述其显示移植后12周期间用经 Elementol R处理的莴苣植株与对照植株比较的平均顶端直径；
图14是图，如实施例16中描述其显示移植后12周期间用经 Elementol R处理的莴苣植株与对照植株比较的植株高度的平均生长 的比较；
图15是图，如实施例16中描述其显示用经Elementol R处理的 莴苣植株与对照植株比较的逐株对比，使用在第一次处理时具有相似 叶片数的植株；
图16是图，如实施例16中描述其说明在试验期间与对照植株比 较由莴苣植株的Elementol R处理引起的Fm:Dm比的平均增加％。
图17是图，如实施例16中描述其说明经Elementol R处理的莴 苣植株和对照植株在湿度％方面的差异；
图18是图，如实施例16中描述其说明实验期间在Elemental R 处理的莴苣植株和对照植株中的呼吸作用速率每mg蛋白质；
图19是两个图，如实施例16中描述其显示实验期间经Elementol R处理的莴苣植株和对照植株之间平均叶绿素A和B含量每mg蛋白质 每新鲜质量的对比；
图20是图，如实施例16中描述其反映从经蛋白质mg和新鲜质量 校正的叶绿素得到的叶绿素A:B比例；
图21是图，如实施例17中描述其显示最初几个移植后周(WAT) 期间在经Elementol R处理的西红柿植株和对照西红柿植株上形成的 花蕾的平均数的变化；
图22是图，如实施例17中描述其显示经Elementol R处理的西 红柿植株和对照西红柿植株的花蕾生产的平均增加％；
图23是图，如实施例17中描述其显示在实验期间3个西红柿植 株的积累平均产量的线性增加；
图24是图，如实施例17中描述其显示经处理的西红柿植株的平 均积累果数与平均积累蕾数的比例；
图25是图，如实施例17中描述其显示经Elementol R处理的西 红柿植株与对照植株比较的平均果中湿度％；
图26是图，如实施例18中描述其显示(CC)、Elementol R(E)及其组合对13周期间从每组三植株中收获的积累果数的变化的 影响；
图27是图，如实施例18中描述其显示，与单独用Elementol R 或处理的植株中观察到的增加相比，从用包埋在Elementol R 中的处理的植株中观察到的总积累果实质量；
图28是图，如实施例18中描述其显示通过Elementol R和CC 组合，新鲜果实质量的增加；
图29是图，如实施例18中描述其显示用Elementol R、 和组合处理剂的第一次施用(第5周)和第二次施用(第9周)后的呼吸 作用速率每蛋白质含量；
图30是图，如实施例18中描述其说明在试验的第13周测定的叶 绿素B每mg蛋白质的量的比较；
图31是图，如实施例18中描述其显示经Elementol R处理的、 CC处理的和组合处理的植株在第13周以HClO4作背景的白利糖度读数 的比较；
图32如实施例19中描述，是体外实验中在萌芽纸上萌芽的萝卜 的照片；
图33是图，如实施例19中描述其说明从用肥料对照以及各种 Elementol R剂量处理的小麦胚芽鞘测得的平均长度的比较；
图34是图，如实施例19中描述其显示在田地试验中栽培的单次 施用Elementol R的小麦谷粒产量的增加；
图35是图，如实施例19中描述其显示用杀真菌剂克菌丹处理的 种子、用克菌丹和Elementol R组合处理的种子或用未处理的种子栽 培出的玉米植株的平均植株、根和叶重量的比较。
制备1
植物支持制剂的制备，该植物支持制剂适宜用作向植物递送植物 学有益物质的递送媒介物。
本发明制剂可如下制备：
步骤1：在环境压力下用压力容器和鼓泡器使指定的气体在希 望体积的水中饱和(在此实施例中是一氧化二氮，但采用二氧化碳时使 用经少量改动的相同一般过程)。该容器通过流控阀和压力调节器与一 氧化二氮供给相连。在96小时期间为封闭的容器提供2巴压力的一氧 化二氮，在前文提到的温度下和上述提到的压力下，水在这期间内被 一氧化二氮饱和。在单独使用碱性或储备配方(文中称为Elementol B) 制剂的情况中，或用作营养素或大部分合成有机农药的递送媒介物时， 使用不含氯的水。当该储备制剂要用来向植物递送肽或生物催化剂 (biocatalisator)时，水用磷酸盐缓冲至pH5.8。
步骤2：制备下述基于脂肪酸的组合物：
首先，将从德国柏林CLR Chemicals Laboratorium Dr.Kurt Richter有限公司得到的维生素F乙酯CLR 110 000 Sh.L.U./g加 热至75℃，该维生素F乙酯主要包含21％油酸、34％亚油烯酸和28％羧 基端用亚乙基团酯化改性的亚油酸。然后，将聚乙二醇化、氢化的脂 肪酸--蓖麻油酸(也由INCI命名已知为PEG-n-氢化蓖麻油)加热至 80℃，并在70℃与第一组基于脂肪酸的维生素F乙酯混合。对叶面施 用，第一组脂肪酸与后者脂肪酸的比例通常是3:1。在向大型容器中 添加该制剂的情况中的比例是5:1到6:1，该大型容器通过在受控环 境中连续滴灌来供给植物。
步骤3：变化百分比的d1-α-生育酚(最终浓度从用作一般抗 氧化剂(Elementol B)时的0.1％到用作植物繁殖期的调节剂或起同步 作用(Elementol R)时的0.25％v/v)被加入上述加热的脂肪酸混合物， 作为抗氧化剂或作为生长调节剂。
步骤4：将水或缓冲水加热至73℃，并借助高速剪切机将其与 该脂肪酸混合物混合，达到取决于制剂具体用途的从3.2到4％的最终 浓度。该脂肪酸混合物组成包括纳米范围尺寸的囊泡的基础制剂，在 Malvern测量仪通过颗粒尺寸分析测定其尺寸。
步骤5：可向该基础制剂加入额外的乙基化脂肪酸类--DHA(二 十二碳六烯酸(decahexonoic acid))和EPA(二十碳五烯酸 (eicosapentanoic acid))。本发明的两种脂肪酸的优选量是0.5％。 这些脂肪酸的加入导致微海绵而不是囊泡的形成，其具有在Malvern 测量仪上通过颗粒尺寸分析测定的2-5μm的尺寸。
步骤6：为向植物施用，用水稀释该基础制剂。取决于施用方 法、栽培类型(例如滴灌、使用人工、拖拉机或飞机的叶面喷雾)，通 常该稀释比对茎施用为1:1、对露天观赏植物为1:10、对根株苗床为 1:200、对果园为1:600和1:800、对露天大田作物和受控环境为 1:1000、果实着色为1:1500，而且在无土栽培体系中为1:5000。
可大量方便的生产从50nm到50μm的尺寸较为均匀的稳定颗粒。 该颗粒尺寸和形状可以被可重复的控制。通过方法测定上文制备的 Elementol B和Elementol R的动电势，发现其分别是-46mV和-38mV。 该微乳液的颗粒尺寸变化可以被组合物的变化影响，类似的该乳液的 动电势也可以被组合物的变化影响。
制备2
制剂的一般制备，该制剂包含在作为递送媒介物组分的本发明植 物支持制剂中的植物学有益物质。
步骤1：如制备1步骤6中的描述，通过在室温或田间温度下 于施用稀释前将希望物质充分混合于Elementol制剂中，可以将一种 或多种植物学有益物质包埋在上述基础Elementol或缓冲Elementol 制剂中。可通过摇晃或搅拌来进行混合。混合后，通常允许制剂在用 水稀释施用前‘熟化’至少30分钟，但不超过3小时。在大分子量物 质如肽的情况下，制剂在4℃放置过夜。
实施例1
ELEMENTOL作为在西瓜上施用叶片营养素的递送媒介物的用途
前言：
与前述所选的160Ha苗圃中的西瓜作物相反，本实验的西瓜作物 具有低产量潜力，尽管与前述实践相比没有改变。下述在2005年一月 间观察到：
1.)早期衰老发生在2005年一月间。其是分散的现象。
2.)后者主要归因于引起根效率降低的线虫。这导致许多果实变 形并患“蒂腐病”。
3.)叶面真菌侵染是常见的，与每10天的杀真菌剂的前摄施用无 关。更替该杀真菌剂以降低真菌的抗性风险。
试验：
决定维持杀真菌剂计划，但引入营养素施用作为叶片喷雾剂。
该实验喷雾剂，每公顷，包括下述：
溶于26.0升水的5kg CaCl2。
1.0升“氨基酸复合钙”(100g/升Ca)
0.5升“氨基酸复合铜”(75g/升Cu)
6ml Elementol B
该概念具有下列目的：
1.)用该铜和Elementol B来增强植物对真菌侵染的内在抗性以 及
2.)在“分生组织”处能得到钙，以在未来的叶片和根发育期间 改善“细胞壁完整性”，潜在导致额外的真菌抗性和改善的叶片和根 效率。
将Elementol B加入氨基酸，并允许混合剂在稀释前“熟化”15 分钟。通过加入28.5升CaCl2水完成稀释。提前48小时制备该CaCl2 水。提前溶解CaCl2的目的是使氯受“UV”，希望在试验期间降低该 元素的影响。1.56升“氨基酸/Elementol混合剂”，与28.5升“Ca- 富集”水一起，使得每公顷总共施用约30升制剂。通过空气叶片喷雾 施用。
10天后重复同样的施用，制剂中的Elementol B增加至12ml/ha。
对照：
对照带与试验带同样处理，但排除Elementol B。
重复：
因为试验和对照都接受了两次空气施用，通过使用SATLOC差分全 球定位系统(DGPS)获得重复完整性。此仪器作为标准设备装载在飞行 器上。第一次施用的每次“喷雾操作”都被保存。这允许第二次施用 相对第一次施用以小于0.5米的偏差施用。
观察：
在第一次施用的48小时内，处理带和对照带间存在视觉区别。试 验带显示“复壮”迹象。与对照相比，处理植株显示了更深得多的绿 色。同时，与对照相比，这些植株显示了可观察的开花增加。该现象 提示栽培者要求增加了Elementol B组分(12ml/ha)的第二次施用。
两次施用都在2005年一月间完成。
尽管施用体积很低(各自6ml & 12ml)，Elementol B处理过 的西瓜在对照之后较长时间衰老。这种衰老延迟从2到5周不等。尽 管此处理没减少果实变形，其确实显著的降低了蒂腐病。
由于初始问题在田间的分散发生，仅作了观察。
实施例2
ELEMENTOL B作为在糖豆(SUGAR BEANS)上叶面施用的递送媒介物 的用途
前言：
在120Ha苗圃上，距离910mm(旧3英尺间隔)的种床上，完成糖 豆种植。
试验：
该试验具有下列目的：
用拖拉机，将Elementol B与杀真菌剂一起作为叶面施用喷雾， 以观察关于开花/产量的任何植物反应。
对此试验，用GPS技术和地标，标定10公顷的区域。
该实验喷雾剂，每公顷，包含下述：
200升水
40ml Elementol Basic
250ml C
对照：
对照区域包含同一地块上的10公顷。30米的缓冲区域分开试验 和对照。该施用的喷雾剂不包括Elementol。
重复：
通过用GPS技术和地标标定试验和对照地块两者为重复做准备。 施用两次喷雾剂。
观察：
通过手工取样荚果。使用的取样方法是10x10米的随机苗行。 该方式也用来取样对照。
结论：
取样结果如下：
含Elementol B的 C：2,390kg/ha
不含Elementol的：2,180kg/ha
后续实验显示Elementol B有助于抗真菌作用以及产量的改善。
实施例3
通过草莓上的叶面施用测定ELEMENTOL R的植物毒性和有益作用
前言：
在2005年4月初期间开始在12ha试验苗圃中种植草莓。植物材 料都是第一代。种植地块向西方向倾斜下降并且高度约为平均海平面 以上100米。土壤具有小于5％的粘土成分和0.5％的有机碳成分。
试验：
该试验具有下列目的：
用拖拉机，将Elementol R作为叶面施用喷雾，以观察关于开花 的任何植物反应。
该实验喷雾剂，每公顷，包含下述：
200升水
250ml Elementol R
在下列条件下完成喷雾：
温度： 23摄氏度(湿和干鳞茎间的Δ：<5℃)
湿度： 28％
雾滴分布： 平均15/cm2
处理地块： 地块6 & 7
对照地块： 地块5
生理学： 一旦20％的植株开始开花即开始喷雾。
对照：
在向地块6&7施用Elementol R期间关闭对照隧道#5，防止漂移 污染。
观察：
通过随机取样，两个处理的地块比对照地块多生产100％可得到的 花。在施用后21天作此观察。没有观察到植物毒性的迹象。
实施例4
ELEMENTOL B作为在柑橘属水果(脐橙LINA品种)上叶片硼酸施 用的递送媒介物的用途
前言：
试验果园是15Ha的果园，其中的树约12岁龄，意味着树是成熟 的。每公顷植物群体是617树/ha。Lina脐橙是早熟品种。使这些最 先上市对栽培者具有很大的财务利益。
结果植物内的高水平赤霉酸，导致果实着色的延迟。田间经验指 出，通过将计算体积的硼作为叶片喷雾剂施用可以降低绝大多数植物 的营养生长率。通常使用的硼源是硼酸(H3BO3)。
在试验季期间，由同一个栽培者将硼酸以计算方式施用至过-硝化 的柠檬。柠檬的过-硝化引起旺盛的生长和减少的果实形成。用硼酸来 实现该生长现象的控制。
试验：
用硼酸在柠檬上实现了旺盛生长的抑制，设想这种施用和 Elementol B组合可在树上导致脐橙早着色，由此节省了在受控气氛 室中使用乙烯的脱绿。
该试验在Lina品种脐橙上进行。表面积是15公顷。目的是树的 早着色。在试验区域中没有标出对照。监测邻近该试验的栽培者的果 园作为可能的对照。
该实验喷雾剂，每公顷，包含下述：
2000升水
130ml Elementol B
1kg硼酸
在加Elementol前，硼酸被溶解/悬浮与水中。在最终稀释加水前 允许30分钟熟化时间。
观察：
树上经处理的Linas比邻近的对照早2周着色。这些脐橙比周围 所有的早一周摘取。
实施例5
对ELEMENTOL R影响黄瓜植物产量的受控环境研究：
材料和方法：
材料
覆盖Dicla塑料的隧道(2um厚具有内在植物UV-保护的塑料)和 2x5000l的槽和泵、锯屑生长媒介、15升塑料袋、来自南非Dicla 的幼苗(黄瓜)、来自King Athur的青椒幼苗、Stihl鼓风喷雾器、来 自Ocean或Omnia(南非)的硝酸钙、NutriVeg(Omnia)或HydroGro (Ocean)、硝酸(Ocean)、硫酸钾(Ocean)。
方法：
一般装置：一个隧道和槽各自分配给测试产品，一个隧道和槽各 自用作对照。用风门片的开闭通过空气降温来冷却隧道。根据温度， 风门片和门通常在18:00到19:00间关闭整夜，每天早晨在06:00到 08:00打开。隧道的取向是南北向，朝向主要风向以帮助降温。在该 隧道中不使用人工加热或降温系统。
植物：
黄瓜：夏初在每个隧道中，将720个3周龄的黄瓜幼苗从苗盘移 植到包括锯屑的塑料袋。以6行每行120株完成种植。为对照隧道选 择最强壮的植株。
青椒：在测试隧道中，500株King Arthur幼苗被种植在10升填 满锯屑的塑料袋中，而504相似的幼苗被种植在15升填满锯屑的塑 料袋中。最初2个月不加Elementol R的植物生长在隧道外，然后在 结辣椒的季节移入隧道。从外面将植物移入隧道后的两周开始向测试 植物添加Elementol R。在该测试中观察到青椒产量的显著区别。研 究了除用Elementol R处理外的其它原因使植物可能更喜测试隧道内 部的可能性。为对照该可能性，打断Elementol R处理10天时间(第 120-130天)，随后继续。
灌溉：
黄瓜：小植株一天3次通过4升/小时的滴灌器接受15分钟的滴 灌，如此总共3升/天。6周后，当植物开始结可以收获并适应隧道内 的高达45℃的夏季高温的果实时，灌溉增加至30-40分/天(>4升/天)。
青椒：小植株的处理类似黄瓜的处理，但是8周后灌溉体积增加 至>5升/天/株。
测试产品：
该测试产品是植物有益的递送系统，叫做Elementol R。假设该 系统可以增加
a)溶解度以及
b)营养素的吸收，更具体是钙。
该测试产品通过根灌溉施用。Elementol R与槽内营养素混合， 该槽向测试隧道提供灌溉。
用于灌溉的营养素混合物如下：
向每个充满50001钻孔水的槽，加入500ml硝酸以将pH降至6.0， 之后用水预混2kg营养素混合物和2kg硝酸钙并以此顺序加至槽中。 对测试槽和隧道，用1l Elementol和水预混。在青椒的情况中，在植 物开始结果时用500g硫酸钾代替500g硝酸钙。每两周，向满槽加 入如Prasine的100ml消毒剂，以预防藻类生长。每第四天，只用钻 孔水冲洗植物，之后继续输送营养素。
分析：
黄瓜：
在植物生长的各阶段期间研究了下列参数：
i)植物长度
ii)叶片长度
iii)节数
iv)黄瓜产量
植物长度：在初始生长期间，可以测量植物长度。从锯屑面到最 高主干分支处测量每行随机选择的20株植物(每隧道120株植物)的长 度。用石灰标记测量过的植株塑料袋，以预防同一植株的重复测量。 计算每行的平均植物长度并用于比较。
用植物长度中描述的相似的植株数和选择和计算程序，测定植株 的最低两片叶片的叶片长度。
节间数：用植物长度中描述的相似的植株数和选择和计算程序， 计数形成的分支数。
黄瓜产量：收获黄瓜。仅计数并称重那些适合在高端市场连锁店 中销售的黄瓜。不考虑那些弯曲的、黄色的黄瓜或者一般外观不符合 销售需要的黄瓜。
青椒：
因为冬季来临，停止青椒实验。隧道中安装的电子加热系统被证 明是不够的以致植物被暴露在小于2℃的温度下。仅测定该青椒的可 销售产量。
结果与讨论：
黄瓜：
测定处于移植后4、5和6周龄的120株随机选择的幼苗的植物长 度。计算代表每个隧道的平均生长的平均长度。表1举例说明该幼苗 的平均周生长。尽管初始时平均对照植物比测试隧道的植物高(第4 周)，如在开始Elementol R处理后两周的测定，用添加的Elementol R灌溉的植物比对照隧道的植物生长得更快。
图1举例说明通过在幼苗移植并开始处理3周后向营养素混合物 添加Elementol R的节数的增加。测定6行每行中随机选择的20株植 物的节，注意使用与长度测定不同的植株。在每行中，处理3周后， 用经Elementol R处理的植物包括更多节，尽管平均下来的增加小于 1节(0.73)每株。用Elementol-营养素混合物灌溉的植物的标准误差 更小，表示在植物生长上的同步作用。
当0.73节每处理3周的增加投射于总共18周的生长期时， Elementol R施用导致的节数/株的平均差别是4.4节/株，其是统计 上显著的。增加的节的重要性是，其表明了植物将发育的叶片和结果 芽数两者。
图2举例说明通过Elementol R施用的叶片尺寸增加。在每个隧 道中测定120株植物的叶片长度；在开始Elementol R施用后三周每 行20株植物。作为植物长度的情况，在开始Elementol施用前，在测 试隧道中的植物叶片的尺寸比对照植物的叶片尺寸稍小。Elementol 处理引起的叶片尺寸差别是显著的并且在植物发育中是重要的，因为 叶片负责光合作用。再一次地，接受Elementol R的植物的标准误差 较小。
通常接受的黄瓜产量周期是12周，尽管有些生产者以16周的周 期收获果实。在图3和4中，举例说明了12周周期内的植物产量，所 以下述举例说明的植物年龄是以下加合：
从播种到幼苗生长的3周(未处理)+收获前经Elementol R处理的 生长的3周+用经Elementol R处理的收获的12周。因为缺少正式的 杀虫剂计划导致的重度白苍蝇侵染，尽管植物第20周时还在生产花， 于此时停止研究。
在收获开始时，将黄瓜按中号至大号分类(至多37cm)。然而，在 第4周末并直到收获的第20周，收获的黄瓜长度在41到47cm，引起 更少的黄瓜个数，但从重量方面是更好的收成。因此，产量结果分成 两个时间段。
有必要指出两个隧道的收获是同时进行的，所以产量和具体的星 期几有关联。比测试隧道晚3天收获对照隧道，可以在第9到13周给 出更一致的黄瓜产量分布，这可能是轻度人为的。在第14周期间，灌 溉和泵的供电中断48h的时间，引起对照和Elementol-处理的植物两 者产量的显著降低。不灌溉引起的压力显得被Elementol-处理的植物 更好的耐受，由图4可见。
表2 显示来自两个隧道的黄瓜产量的总差别和％差别。
青椒：
图6举例说明70天期间的青椒产量。在种植后3个月(90天)开 始收获，收获前两周开始用Elementol R处理。第160天后，植物暴 露于如此的低温以致停止实验，尽管植物还在生产可收获的果实。
图6中举例说明了Elementol R对青椒产量的影响。第一个箭头 表示中断10天Elementol处理的开始，而第二个箭头表示继续 Elementol R处理的时间。每个点表示10天期间该隧道的总收成。在 测试隧道内中断Elementol R处理后，可立即观察到产量的下降。该 产量降低并稳定在和对照隧道相似的水平，指出该增加的产量可以特 定的归因于Elementol R的存在。
表3 显示总产量和产量每隧道的％差别。
两组间的％差别的测定实际上只可以在处理中断前的时间段进行， 因为估计该中断的长期作用是困难的。
结论
研究了Elementol R对两种不同植物种类-黄瓜的和青椒的产量的 影响。向植物营养素混合物添加Elementol R引起了两种植物种类可 收获果实产量的统计学上的显著增加。
实施例6
小西葫芦(DICOTHYL)植物中的渗透和分布-
农业应用中ELEMENTOL B技术的潜力研究：
项目背景如下：
实验背景
Elementol B主要由功能-特定的数量和不饱和脂肪酸和一氧化二氮的 组合组成。
进行初步实验以测定
1)Elementol B在植物中的渗透(permeation)/穿透 (penetration)和Elementol B在植物中随时间的迁移以及
2)Elementol B对向植物递送植物营养素的可能贡献。
方法和材料：
Elementol制备：
在室温下，用225g一氧化二氮饱和的纯水(N2O-H2O)稀释45g基础 Elementol媒介。剧烈摇动该混合物并加入1250μl荧光标记物Nile Red(1，6μg/μl；Molecular Probes，荷兰)。
实验1
测试对象：
为此探索性研究从秧田得到种植于包含木屑(支持媒介)的袋中的 溶液培养培育的(n＝3)花期小西葫芦植物(dicothyl)。如下分配植物：
植物1：对照-不施用。
植物2：向含木屑的支持媒介袋加入100ml制备的Elementol 混合物以研究根施用。
植物3：用Elementol混合物喷雾整个植物，除在喷雾前用塑 料覆盖的一片叶片。
在如上施用Elementol混合物后，植物不再接受其它营养素而是 每天浇水。3周后，从尺寸和重量角度比较收获的小西葫芦。
渗透(permeation)/穿透(penetration)以及迁移显形法：
切割叶片得到来自没有显著叶脉区域的植物组织和来自显著叶脉 的横切组织。沿着主根长度进行根切割。用带有倒置Nikon Eclipse 300显微镜、配有Spectra Physics Krypton/Argon和Helium/Neon 激光的Nikon PCM2000上的共聚焦激光扫描显微法来显形荧光标记的 Elementol的吸收和迁移。使用下列物镜-Plan Apo 100x/1.4Oil DIC H、Plan Apo 60x/1.4O ilDIC H和Plan Fluor/0.75DIC M。通 过荧光检测器和光电倍增管来数字化捕捉共聚焦图像(显微照片)。通 过Nikon DMX视频照相机系统实时完成显微成像。用3D扫描头与深度 z-步驱动组合获得深度数据。
结果：
结果举例说明于用共聚焦激光扫描显微法得到的显微照片中。
植物1：在此显微照片中，没有向植物施用Elementol。因自体荧 光，材料显形。
植物2：Elementol R(预先用荧光标记物Nile Red标记)通过叶 片被植物吸收，并且在覆盖和处理部分的显著叶脉的截面中和叶片的 切开组织中显形。在该显微照片中，几乎所有Elementol囊泡都渗透 了叶片自身的细胞，同时几乎没有Elementol囊泡保留在植物的显著 叶脉中。叶片各部分的叶片穿透和迁移在小于60分钟内发生(平均时 间约20分钟)。
植物3：Elementol B囊泡通过根穿透植物并在根节片中和显著叶 脉的截面中显形。根渗透和迁移在小于60分钟内被观察到。
第一个收获的小西葫芦的重量如下给出：
植物1：尽管在该植物上观察到几朵花，在收获日时不存在小西 葫芦，而植物2和3通过一次Elementol B和水的施用生产了果实。
植物2：64，95g
植物3：28，38g
不再继续该实验。
实验2
在溶液培养-培育的君子兰中营养素增强的摄取和/或递送
有时候从提供的溶液培养介质摄取某些矿物质和痕量元素是有问 题的。实验1显示了Elementol囊泡被植物吸收且甚至可以有助于其 生长的很小数目的植株。在实验2中，将基础的溶液培养营养素混合 物包埋在Elementol囊泡中并监测植物的生长。
测试对象：
5组每组6个君子兰种子被种植在植物支持器纸箱中的木屑中。 每天如下处理该组：
组1接受5ml H2O
组2接受5ml以规定浓度稀释于H2O中的溶液培养媒介
组3接受5ml与低浓度Elementol B(1.98％)混合至规定浓度的 溶液培养媒介。
组4接受5ml与高浓度Elementol B(4％)混合至组3和4中使 用的相同浓度的溶液培养媒介
组5接受5ml用一氧化二氮饱和的H2O稀释至其它组使用的相同 浓度的溶液培养媒介。
结果：
鳞茎形成：
5周后，研究鳞茎得到下列结果：
组3显示显著的鳞茎形成：种子中的2个显示从单个种子形成多 个鳞茎，而组5显示鳞茎形成但是鳞茎显得软且如粘泥。组1显示不 良的小鳞茎形成。组2显示鳞茎形成，但是鳞茎称重仅是组3鳞茎的 38％。
植物生长：
植物生长通过测量示出的时间段后的植物最长叶片的长度来测 定，如图11和12示出的，其举例说明随时间的生长和5周后的生长 比较。组2的生长包括溶于H2O或N2O-H2O中的溶液培养营养素但没有 同等水平的Elementol B，接受过N2O-H2O的组的叶片稍长于只接受过 水的植物。对接受过与Elementol B混合的溶液培养营养素的组，接 受过低Elementol浓度的组显示所有组中最佳的生长，而接受过高 Elementol浓度的组显示最差的生长。生长在植物支持器纸箱中的植 物，由于在接受过高Elementol浓度的植物支持器的木屑中和纸箱上 霉的生长，以及该组鳞茎的粘泥性，排水问题是明显的。在此阶段， 从该组不能得到结论。必须研究Elementol稀释系列。
实施例7
为在草莓上的叶片营养素(钙)施用作递送媒介物的ELEMENTOL R 的用途
前言：
在2005年4月初期间开始在12ha试验苗圃中种植草莓。植物材 料都是第一代。种植地块向西方向倾斜下降并且高度约为平均海平面 以上100米。土壤具有小于5％的粘土成分和0.5％的有机碳成分。
试验：
该试验具有下列目的：
用拖拉机，将Elementol B和钙作为叶面施用喷雾，以观察关于 叶片中改善的钙水平的任何植物反应。
该实验喷雾剂，每公顷，包含下述：
250升水
250ml
5kg CaC l2
试验和对照：
试验地块是编号5、6 & 7，而对照地块是1、2、3 & 4。用提到 的组合处理该试验地块，而用商业化的“富里酸(fulvicacid)/CaCl2” 复合物处理该对照地块。试验和对照两者中的钙百分比是相同的。
观察：
施用21天后测定试验地块中的叶片钙水平，结果如下：
地块 处理前Ca％ 处理后Ca％ 增加％
5 0.86 1.00 16.28
6 0.85 1.01 18.52
7 0.88 1.07 21.59
施用21天后测定对照地块中的叶片钙水平，结果如下：
地块 处理前Ca％ 处理后Ca％ 损失％
1 0.86 0.85 1.16
2 1.15 0.84 26.95
3 1.08 0.80 25.93
4 1.03 0.84 18.45
结论：
从结果清楚，当CaCl2和Elementol R组合施用至草莓时，叶片 钙水平有明确的改善。
实施例8
叶面施用以测定在樱桃灯笼椒上的作用的ELEMENTOL R的用途
前言：
用来自秧田的幼苗在1.2ha测试苗圃上完成种植。滴灌该植物。 行间间隔使植物间隔300mm，而苗行是间隔450mm的双行。每公顷植 物群体是30,000。
施肥途径是，主要以硝酸钙和硝酸钾的形式提供约300kg/ha的 氮。目标产量是30吨/ha。十二月间开花并持续，而在二月末开始收 获并持续至六月末。最佳采摘是从三月中到五月中，之后量开始逐渐 减少。采摘高峰期间每10天可以收获4吨/ha。
试验：
该试验具有下列目的：
将Elementol R作为叶片使用喷雾，以观察在“增加的开花”以 及临近收获期的早着色上的作用。
该实验喷雾剂，每公顷，包含下述：
200升水
200ml Elementol R
对照：
该对照区域包含相同地块上的小块区域且不接受Elementol R。
观察：
临近十二月末，与对照相比在试验中观察到更多的花，但是并未 进行计数。
临近一月末，与对照相比该试验中的果实显示提前着色的迹象， 但是因高温导致该对照上的着色而使观察有困难。然而，觉得，与该 对照相比该试验具有更佳的着色。
结论：
因为其它因素比如温度、施肥分布等可影响结果，不清楚该 Elemenol是否在实际上确实显著地有助于樱桃灯笼的提前着色。然而 栽培者确实觉得存在差别。
真正显著的是栽培者在收获期内生产了29吨/ha，其中24吨是有 商业价值的。与该区域平均相比，此产量实质上更佳。
因栽培者的观察，他在植物开始开花时增加Elementol R施用至 连续4周250ml/ha，带来下述结果：
植物更大，同时叶片覆盖更佳；
因Elementol R施用，收获的果实产量增加15％；
经经Elementol处理的植物的着色是“强有力的”。
栽培者发现至少需要3次处理，然后才观察到Elementol R的最 大影响。
实施例9
为向日葵上的营养素叶面施用作递送媒介物的Elementol B的用 途
前言：
在距离910mm(旧3英尺间隔)的种床中完成种植。种植时的植物 种群计算为40000种子每公顷，而期望萌芽35000到38000株。
方式(试验)：
牵涉隔开约1Km的两块大田，不是因为为试验来规定或准备，而 只是因为它们相互密切邻接一块可以作另一块的对照。该试验苗圃范 围约95ha而对照苗圃约200ha。
用下述制剂喷雾试验植物：
1升/ha“AminoPotas”(100g/l“K”与氨基酸配合或螯合)
1/2升/ha“Aminocalcium”(100g/l“Ca”与氨基酸配合或 螯合)
5kg/ha尿素(2.3kg“N”如NH4)
50ml/ha Elementol B
27升/ha水
该喷雾混合物在混合槽中混合且通过空气喷雾施用。
对照：
除Elementol B，该对照用相同的混合物喷雾。
观察：
通过分离组合收获器的送料斗(种子一旦从花转筒分离就流入的 容器)的“称入”，完成测量以确定在该试验和对照间的产量差别。
结论：
取样结果如下：
试验： 2,735kg/ha
对照： 1,650kg/ha
差别： 1,085kg/ha
平均增加： 65.8％
实施例10
苹果脱绿中ELEMENTOL R的用途
在果园的试验行中，当果实开始形成时手工喷雾施用Elementol R，而该果园中的其它行不接受处理剂。Elementol R喷雾过的苹果基 本上在未处理过的苹果之前脱绿。
对由于Elementol处理导致强有力着色的樱桃灯笼椒得到类似结 果。(4次施用)施用率11/ha(见实施例8)。使苹果、柑橘属水果 和樱桃灯笼椒的着色结果重要的事实是，这些结果显示Elementol R 施用在C3和C4植物上、在一年生和多年生植物上、在受控环境和露 天试验田上具有相同的影响。
实施例11
葡萄藤上的ELEMENTOL叶面施用的作用
选择相同葡萄园里的两棵葡萄藤来比较向整个葡萄藤单次施用 Elementol B的作用，包括手工喷雾茎，但除了根。
处理过的葡萄藤茎的直径显著的增厚且叶片指数戏剧性地增加。 果实的产量也更高。
实施例12
通过ELEMENTOL的真菌保护以及使用ELEMENTOL B的玫瑰架存期 的增加
用代森(Dithane)处理已知对白锈病侵染高度易感的成功红(Red Success)玫瑰，该代森按照制造商的说明书制成并施用。用类似的代 森制剂喷雾试验植物，向该代森制剂加入Elementol B以获得1比10 的稀释。
发现当其周围所有植物被侵染时，经代森/Elementol B处理的植 物没有白锈病迹象，此外似乎在采摘后枯萎前持续很长时间。
实施例13
ELEMENTOL导致效果增强的比较实验
目的：小酸模(steenboksuring)的根除。
杂草：小酸模，耐寒且顽固用任何处理都几乎不可能根除的杂 草。
处理：
Roundup Turbo在下述方式中用作除草剂。在加入的除草剂和栽 培手段方面，用与处理苗圃相同的方式处理并评价参考对照苗圃。分 配各处理苗圃。下面更详细的描述该处理。
测试处理：
0.6％浓度的Roundup Turbo和40ml Elementol B被稀释至401 并施用至1ha。用该混合物喷雾80ha的大田。
参考处理：
Roundup Turbo在下述方式中用作除草剂：该除草剂被稀释至 2.8％Roundup Turbo的最终浓度，不加入Elementol B。每公顷施用 类似的体积至类似的栽培面积(80ha)。
对照小区：在种植了绵毛马唐(Smutsvinger)草的较大的田间呈带 状设置该处理小区。用该大田的未处理区域作对照小区。
施用方法：
在剂量率和施用设备(压力喷嘴)方面，施用方法对测试和参考处 理两者完全相同。通过用拖拉机和喷雾装置喷雾施用该除草剂。在深 冬期间，只施用一次该除草剂。不向该测试或参考处理剂加入湿润剂 或助剂。
结果和观察：
a)施用一周后，在测试植物中该草或小酸模表现出枯萎，但不在 参考植物中表现。
b)两周后，该测试处理植物表现出典型植物毒性症状即叶片变黄 (萎黄病)随后坏死。
c)施用一个半月后，绝大多数小酸模表现出严重的植物毒性，而 其它草都死亡。
d)报告的观察包括在处理和未处理(对照)植物间的所有抑制或 刺激的变化。该变化可以是结构(叶片和茎变形)作用，和/或生长和发 育评价。
结论
尽管在测试处理剂中少使用79％Roundup，Elementol B的存在亦 增加了结果的杂草死亡。
实施例14
ELEMENTOL R导致苹果根株床和苗圃树强化的比较实验 (2005/2006)
根株床：这是从特定根茎栽培的茎的集合，其实施例是M7或M9。 该栽培的目的是生产大量的“茎”，可在其上嫁接选择的苹果品种。 该品种可以是Gala、Royal Gala、Brae burn、Oregon Red Spur等。 在此栽培期间，通过可以从任意集合嫁接的茎的量来衡量成功。茎厚 度是主要标准而根质量和体积是次要的。不允许嫁接过细的茎。
苗圃树：这是在为初始生长而移植前已被嫁接的根茎。理想地使 这些生长到至少1.5米高，然后考虑准备商业移植。
试验目的
首要目的是引入Elementol R，以达到其具有的在苗圃环境中改善 茎厚度的作用。首先在随机处理的橡树上注意到此作用。
次要的目的是增进商业移植经嫁接树的生长。
方法
使用方法是与某叶面施用的营养素喷雾一起的叶片喷雾。用100ml Elementol R/20升水处理80根株床，意味着与营养素一起每根株床 施用1.25ml Elementol R。在2005年十一月间开始此施用，并每隔10 天重复。该计划维持至今。
对照
对照根株床接受同样的处理，除了不加入Elementol R。
结果
在2006年二月第一周得到的结果：处理的床生产了63/100(63％) 可嫁接茎，而对照仅生产了34/100(34％)。平均茎厚度是11mm。
在2006年二月第二周得到的结果：从Elementol R计划中的根茎茎 嫁接的树平均高2m，而未用Elementol栽培的平均高1.5m。经Elementol R处理的树开始羽化，即发育侧芽，而未施用Elementol R的树完全不 存在羽化。
必须认识到为对照和试验两者保留大约6周发育。尽管预期对照可 改善，其不可能与使用Elementol R的试验相比。可在不偏离本发明上 述陈述表达的发明主旨的前提下设计很多本发明的变化。
实施例15
测定ELEMENTOL R在具硬鳞(hardscaled)种子萌芽中的作用的比 较实验
箭叶(Arrow Leaf)苜蓿草籽已知是具硬鳞的在萌芽中缺少一致性 的种子。通过将各种量的种子在干净的水、未稀释的Elementol R和在 Elementol的5％水溶液中浸泡24，随后将浸泡过的种子填在种床上，并 观察其萌芽，显示本发明Elementol制剂在这些种子的萌芽方面是有益 的。发现在Elementol的5％水溶液中浸泡过24小时的种子比其它两组种 子高30％的萌芽率。
实施例16
ELEMENTOL R的生物刺激作用：莴苣的生长和发育中ELEMENTOL 叶面施用的作用
1.材料、植物生长和处理
植物：莴苣或该科的直立莴苣(cos，romaine(Lactuca sativa))： 紫菀科(Asteraceae)/菊科(Compositae)(紫菀/菊科)。
栽培品种：使用红诗(Red Poem)品种莴苣(Lactuca sativa L.)， 其从当地苗圃购买时是齐苗的(约六周龄)。
1.1培育方法：非-循环溶液培养“滴液”系统
使用适合栽盆的带孔PVC管道，并与蓄水池和水泵连接以通过PVC 管道向植物提供等量的水和营养素。密封泄漏处保证不从系统漏水。 在管道和水泵下放置包含营养素溶液的蓄水池向植物提供水合营养 素。该泵与计时器连接以控制向植物提供的水和营养素的量。在隔开 的蓄水池中接受径流以使系统非-循环化，并抛弃它。
为控制每株植物的水量，用喷嘴来调节系统内的压力并向每株植 物提供等量的水(±9ml一天四次)。非-循环滴液系统保证植物接受优 化的供水，并且营养素媒介pH和EC(电导)是恒定的。测量了供应蓄 水池和径流蓄水池中的营养素的EC，这使得可以测定提供的营养素的 量对比抛弃的量。由此可以计算植物使用或支持媒介保留的营养素的 量。所以当EC降低或增加太多时，可以相应的添加或保留从营养素溶 液提供给植物的营养素。使用PW 9526数字电导仪来以毫西门子每厘 米(mS.cm-1)测量EC。营养素媒介的非-循环化可以遏止系统内从被侵 染植物向未侵染植物的疾病传播。
1.2生长媒介、营养素和移植
在溶液培养系统中椰子纤维被用作支持媒介。其是惰性媒介，具 有为良好的根发育和良好水保持而保留足够的水和空气的能力。
使用具有下述成分的Hydrotech营养素溶液：大量元素：氮(N)68 g/kg、钾(K)208g/kg、磷(P)42g/kg、镁(Mg)30g/kg、硫(S)64 g/kg。微量元素：铁(Fe)1254mg/kg、铜(Cu)22mg/kg、锌(Zn)149 mg/kg、锰(Mn)299mg/kg、硼(B)373mg/kg和钼(Mo)37mg/kg。
由Hygrotech营养素溶液和硝酸钙营养素溶液等量组成的营养 素：36g Hygrotech和36g硝酸钙溶于2L水并加入包含38L水的蓄 水池中。该营养素溶液的pH和电导是营养素溶液中存在的溶解离子的 指标，并被监测。
该莴苣被从最初的容器移植到包含椰子纤维和在容器底部的粗 (course)沙粒的溶液培养容器，以保证对根的足够的引水和通气。在 该莴苣被移植前，清洗其根周围任何可能的其它土壤。植物称重。移 植后植物被置于系统中使驯化一周，随后开始实验过程。
每周还将植物按随机循序排列以保证其接受等量的阳光、热量、 水等。
1.3玻璃房条件
在玻璃房内完成实验以保证溶液培养体系中给植物的最优温度和 湿度水平。可以控制绝大多数大气条件，而且病害危险降到最低。每 周十二点用温度记录仪在溶液培养系统正上方测量玻璃房的温度。
通过空调调节玻璃房内的温度。温度调节在最高24℃以及最小 15。最高温度是28℃而最低温度是4℃。通过使用温度湿度图 (thermohydrograph)得到最高和最低温度并且记录白天和夜间两者的 温度。
通过使用旋转温度湿度图测量相对湿度(RH)并且考虑了白天和夜 间的湿度。相对湿度可以通过大气的最大湿度百分比，％RH来测量。 最高RH％是98％而最低RH％是29％(2006年3月26日)。
1.4光强度
用量子/射频/光度计测量在玻璃房内的光强度。每天十二点在溶 液培养系统正上方测量光强度。多云和阴天条件影响该光强度。季节 的改变也影响光强度。在冬季月份期间，光强度比更温暖月份记录的 光强度更低。12h00的最大光强度是4600μE.m-2sec-1。12h00的最小 光强度是850μE.m-2sec-1。
采取措施使所有植物暴露于等量的阳光和其它非-生物因素。每周 将植物移动成不同的排列。
1.5植物处理
对照植物(C)完全不接受处理。上述含Elementol R的处理剂如下 制备：
3ml Elementol R与250ml H2O混合
该测试植物的叶片处理包括向叶片上喷雾该Elementol R混合物 直至饱和状态但刚好在滴液状态之前。用喷雾瓶喷雾该植物并采取措 施不污染系统或支持媒介。每四周(第1、5和9周)处理植物直到该实 验结束。对每两株用作对照的植物，有3株植物是用Elementol R混 合物处理的。通过用同样的处理剂处理两株或两株以上的植物，每次 处理可以得到良好的平均。
1.6病害的处理
在莴苣上发生各种病害。用系统地处理真菌病害。只 要发现病害即通过向叶面施用稀释的(加入500ml水的3 ml杀真菌剂)处理植物。
2.生长和发育相关的参数的测量
在莴苣幼苗移植前，用Mettler PJ 3000称将其称重，并在此后 每周称重。测定非-植物材料和栽盆的重量并从总质量中减去，以测定 每周生长的植物重量。
2.1生长和发育
每周测量莴苣顶端(head)的生长。从三个直径值计算平均顶端 直径值。从椰衣纤维顶部到最高叶片顶部来测量植物高度。然后计算 每次处理的平均顶部直径和高度。
根据顶端直径的测量，Elementol处理在试验期间使植物的平均 生长增强了11％(见图13，其显示了在移植12周期间内Elementol R- 处理过的莴苣植物的平均顶端直径与对照植物的对比)。星号表示处理 时间。在试验期间给予三次Elementol处理。)
按下式计算增加％：
植物的植株高度平均生长的比较对处理和对照植物来说很类似， 直到11周植物达到成熟(见图14，其是显示了在移植后12周期间内 Elementol R-处理过的莴苣植物中的植物高度的平均相对生长与对照 植物的对比)。注意在第11周生长的戏剧性增加。生长的增加与开花 相关-经Elementol R处理的植物首先开花，表示Elementol R可 以缩短发育时间。
植物发育增强的另一个测量是比较处理植物和对照植物的叶片数 (见图15，其是用Elementol R-处理的莴苣植株与对照植株比较的逐 株对比图，使用在第一次处理时具有相似叶片数的植株)。星号表示处 理周(第1和第5周)。算得5周期间的平均增强是20.7％。
2.2.新鲜和干质量(Fm:Dm)，Fm:Dm比例以及水％
该比例表示每克植物材料中存在的水量和干质量。干质量是除去 所有水后的干材料的量，并且是生长效率的指标。每两周测定植物的 新鲜和干质量。为测定新鲜质量，从新鲜叶片上切割十片尺寸完全相 同的圆柱形圆片并测定每个圆片的质量。在72℃将圆片置入Labotec 炉中72小时。然后测定干质量。通过用干质量除新鲜质量得到新鲜质 量和干质量的比例。
算得在试验期间由Elementol R处理引起的Fm∶Dm的总平均增加％ 为39.5％(见图16，其是举例说明试验期间莴苣植物Elementol R-处 理引起的Fm∶Dm比例的平均增加％与对照植物的对比)。算得试验期内 的总平均增加％为39.5％。还见图17，其是举例说明Elementol R-处 理过的莴苣植物和对照植物在湿度％方面的差别。
为测定叶片中的湿度％，使用下述计算方法：
湿度％指出植物中存在的水量。莴苣中存在水量一定与该莴苣的干 质量相关。在试验期期间湿度％相对稳定，尽管在试验最后6周(第8 到14周)期间Elementol-处理植物的湿度保持湿度5％含量，这表明 Elementol处理引起某种固定水的能力。该更高的湿度不足以解释 Fm:Dm比例的还要高很多的增加。
3.生理学相关参数的测定
用植物呼吸作用、光合作用、叶绿素、蛋白质(12％ SDS PAGE)和 糖的含量作为生理学参数。除了反映植物的健康，这些参数可以提供 Elementol引起的生长和发育增强的原因指标。对所有植物每周测定 所有这些参数(除了糖)。
3.1蛋白质含量
如下描述的方法，从第一周开始每两周测定蛋白质。每周取±1 克的新鲜质量以测定每种植物的蛋白质浓度。用研钵和研杵在含有2 mM EDTA、14mM β-2-巯基-乙醇和2mM PMSF的5cm3mM Tris-HCl缓 冲溶液(pH 6.8)中研磨新鲜叶片。在冷冻离心机上用12000rpm离心粗 提取物十分钟。除去上层清液并稀释5倍。按Bradford(1976)的 Bio-Rad方法测定该稀释液的蛋白质浓度。用0.5mg/ml浓度的牛γ- 球蛋白作标准在Bio-Rad全自动定量绘图酶标仪上测定该稀释液在 595nm的吸光度。通过对每个植物测定四个读数可以足够精确的测定 蛋白质浓度。
每周测定处理植物和对照植物的蛋白质浓度，其没有显示显著差 别。
3.2呼吸作用和光合作用
可以通过测压法用可潜式微分Gilson呼吸器，测定呼吸作用的耗 O2速率以及光合作用速率。每几分钟读取用nmol O2每小时每克新鲜质 量表示的读数。本发明修改自Stauffer(1972)。随后进行气体交换 稳态法。在避光条件下测量呼吸作用，而在稳定光强度调节下测定光 合作用和呼吸作用两者。
从每种植物的新鲜叶片上切割十片直径约1.5cm的叶片圆片。为 保证对每种植物的良好代表性，从随机叶片上随机地摘取圆片。称重 圆片，然后和500μl蒸馏H2O置于Warburg反应器中。向中央孔加入 300μl 12％ KOH和折叠的滤纸以增加对来自反应器间气氛的CO2的吸 收面积。KOH吸收CO2形成碳酸氢盐并保证只测定消耗和合成的O2量。 每个反应器接到该装置上并使其在所需期间避光平衡。设备在25℃的 水浴中摇动时，平衡发生。在平衡后关闭大气和压强计阀门以实现气 密系统。以设计好的时间间隔读取读数(R)：R1是在避光下10和20 分钟间的压强计读数差别。P&R是光照下40和50分钟间的压强计读 数差别。R2是在避光下65和75分钟间的压强计读数差别。压强计读 数与气体体积的变化相关，后者等同于消耗和合成的O2量。通过下述 公式，得到呼吸作用和光合作用的速率：
呼吸作用：
光合作用：
将速率O2μl/分转化为：
μl O2/h/g Fm→(Δμl/分x60分)÷g新鲜质量
气体交换值按Gregory和Purvis方法(1965)用下列方程校正：
其中：
X ＝ 标准温度和压强(STP)下测定的气体总体积(mm3)
ΔVg ＝ 呼吸器上的体积变化
T’ ＝ 标准温度，273°K
T ＝ 热浴温度，25℃
Pb ＝ 主要大气压，mm Hg
Pw ＝ 在进行实验的主要温度下的水蒸气压
P’ ＝ 标准压强，760mm Hg
如果：
所以1μl＝0.745234μl布隆方丹(BFN)真实体积。
大气的[O2] ＝ ±21％
1mol O2 ＝ 22.414dm3(升)
＝ 22.414升(dm3)＝1mol O2
如果： 1升 ＝ 0.0446149mol O2
在海平面 1μl ＝ 0.0446149μmol O2
在BFN： 1μl ＝ 0.745234μl＝0.0332485μmol O2
将μl O2转化为μmol O2：
μl O2/h/g Fm→Δμl μl O2/h/g Fm x 0.0332485μ mol O2
通过应用上述提及的公式每周测定呼吸作用和光合作用速率，校 正测定值以补偿海平面和更高海拔的空气压强差异。呼吸作用和光合 作用速率以及光合作用：呼吸作用比例在试验的13周期间内相对恒定 且可比较。然而，当对蛋白质校正过呼吸作用以后，发现经Elementol 处理的植物的呼吸速率存在增加。
测量呼吸作用和光合作用速率并用来相互对比。光合作用速率必 须总是大于呼吸作用，因为碳的获取必须超过碳的使用，否则将存在 碳的净损失。光合作用：呼吸作用比例越高，则生长速率越好，因为该 比例高时碳净收益更高。在试验的13周内该比例相对恒定。
光合作用，与呼吸作用类似，显示“U”形；当种植莴苣时该植物 非常绿并具有高叶绿素含量。在初始生长期光合作用和呼吸作用速率 都高，因为年幼植物的快速新陈代谢还需要呼吸由高光合作用速率提 供给该植物的足够量的糖。然后光合作用和呼吸作用降低，之后光合 作用速率再次增加。光合作用速率必须总是超过呼吸作用速率以向植 物提供足够初级新陈代谢的糖并且在次级新陈代谢期间向植物提供 糖，以及为后续用途储存其它化合物。在最后几周期间光合作用速率 增加以匹配呼吸作用速率的升高。更高的光合作用还是因为最后几周 存在更多的叶绿素。此更高的叶绿素含量导致更好的光合作用能力。
经经Elementol处理的植物的呼吸作用速率通常比对照稍高，但 此区别在统计学上不显著，除了正好在第5周的第二次Elementol处 理(图18)之后。
3.3叶绿素含量
新生活物质的合成需要通过光合作用过程从太阳得到的能量供 应。叶绿素是光合作用的必须成分。叶绿素是主要的吸光色素。在色 素蛋白质复合体中或周围特别排列的叶绿素分子叫做光合系统，其包 埋在叶绿体的类囊体膜中。天然存在几个不同的叶绿素形式，包括叶 绿素a、叶绿素b。许多植物中还形成保护色素。这些辅助色素中的一 些，特别是类胡萝卜素，适于吸收和消散过剩的光能，或作为抗氧化 剂。其它色素如类胡萝卜素(caretenoids)于不同波长下在吸光中起作 用。
光合作用总反应在下列方程中给出(产生一己糖)(Stern，2003)。
6CO2+12H2O+光→叶绿素→C6H12O6+6O2
光合作用期间牵涉两个光反应，其包括光合系统I(PS I)和光合 系统II(PS II)。它们在不同波长下以最高效率吸收光。这两个系统 必须共同起作用才有效率。系统可以是光敏的或非光敏的。光合作用 期间的主要反应牵涉可能通过已知为Z流程的机制的从水到NADP的电 子输运。光合作用速率可以通过用测压技术测定消耗的二氧化碳或释 放的氧来测量。光合作用的不同类型存在并命名为C3光合作用(绝大 多数植物)；C4光合作用，绝大多数草以及CAM(景天植物酸代谢)光 合作用，后者存在于绝大多数肉质植物中。影响光合作用的因素包括 光强度和量、水的获取量、对太阳和背阴区域的适应、CO2的获取量、 温度、叶龄和碳水化合物迁移。
每周通过从植物的随机叶片上随机地剪切10个相同尺寸的圆片 用MacKinney提取方法(1941)测定叶绿素含量。用研杵在研钵中于 80％丙酮中在冰上研磨这些圆片，随后在冷冻离心机中以12000rpm离 心此匀浆10分钟。上层清液稀释5X。通过使用Pye unicam SP8-400 uv/vis分光光度计测定每个稀释清液吸光度值。在1cm玻璃池中在 663nm和645nm测定吸光度值。
叶绿素浓度如下测定(MacKinney(1941))：
叶绿素a(mg/g)＝[12.7(A663)-2.69(A645)x(V÷(1000 x W))]
叶绿素b(mg/g)＝[22.9(A645)-4.68(A663)x(V÷(1000 x W))]
其中：A ＝ 在给定波长的稀释清液的吸光度
V ＝ 提取物最终体积
W ＝ 所用圆片的新鲜质量
当在实验中的和对照植物中的叶绿素量之间进行比较时，应该基 于蛋白质和新鲜质量来校正，因为它们在两组间显示了差异。与对照 植物比较，经经Elementol R处理的植物显示叶绿素a和叶绿素b两 者的平均增加(图19)。
有趣的是，特别是在叶绿素a中的但某种程度上也在叶绿素b中 的增加，反映在Elementol-经处理植物中观察到的植物高度、叶片数 目和蛋白质的量的类似增加。在整个实验期间对叶绿素a和叶绿素b 分别观察到14％和20％的平均增加，而在实验最后4周(第9到13周) 对叶绿素a和叶绿素b分别观察到42％和34％的平均增加。总的结果有 力地表明Elementol处理引起的叶绿素增加直接对ElementolR的生 物刺激作用负责。
尽管叶绿素A和B的相对增加有差异，但经Elementol处理的植 物和对照植物比较经校正的叶绿素a比b的比例未显示差异(见图20， 其反映从经mg蛋白质和新鲜质量校正的叶绿素得到叶绿素A:B比例。 该几乎相等的曲线证实植物光合作用器官上不存在任何植物毒性作 用)。
3.4糖含量
存在的糖量是可利用营养素量的直接结果。增加N和P率逐渐增 加莴苣中的葡萄糖含量，但缩短架存期(www.ars.usda.gov)。呼吸作 用速率和光合作用速率对可利用糖量有影响。
Boehringer Mannheim(Kit nr.10 716 260 035)的UV方法用 来测定莴苣叶片中存在的蔗糖、果糖和葡萄糖浓度。蔗糖较葡萄糖以 更高得多的浓度存在。与经Elementol R处理的植物相比，在对照植 物中发现小但统计学显著的蔗糖量增加。另一方面蔗糖在经处理植物 中比在对照植物中稍多。
3.5白利糖度(Brix)
植物韧皮汁液含有许多为植物提供能量的物质。使用的有关质量 的术语叫做Brix指数，该概念在19世纪由德国化学家A.F.W.Brix 引入。白利糖度值是在溶液中的可溶固体含量(S SC)百分比的度量。尽 管白利糖度常常用蔗糖百分比表示，但重要的是应认识到此处“蔗糖” 实际上是蔗糖、果糖、维生素、氨基酸、蛋白质、激素和其它固体的 总和(www1.agric.gov.ab.ca)。植物中碳水化合物的主要储存形式， 即淀粉，是不可溶的，所以对白利糖度没有直接贡献。
每一度白利糖度等价于1克糖和其它SSC每100克汁液。一般地， 白利糖度越高，糖含量就越高，特别是增加的蔗糖和葡萄糖水平 (Baxter等人，2005)并且这通常知道更佳的味道(Baxter等人， 2005；www1.agric.gov.ab.ca)。高白利糖度、高EC和低pH通常与 高果实质量有联系(www.cals.ncsu.edu)。
当在有利条件下栽培作物时，可以在这些产品中期望更高的白利 糖度，所述有利条件是比如无限制提供矿物质和其它所需营养素、阳 光充足以及温度的溶液培养系统(www1.agric.gov.ab.ca)。Bisogni 等人(1976)发现SSC与甜度、味道和总体质量之间的相关性。Winsor (1966)报告最佳质量的果实是糖和有机酸都高的那些。
白利糖度等于在韧皮汁液中溶解的固体％。高白利糖度的汁液具有 降低的水活性和相应降低的冰点，以及相当的更大湿度保持倾向。
白利糖度更高的产品还具有更长的架存期，并且对病害侵染和疾 病更具抗性。虽然温度、pH等可以影响生物体是否生长或生长多快， 但水活度可以是最重要的因素。所以水活度在测定架存期和田间成功 的关键因素。通常汁液白利糖度水平超过12％还确保抗吮汁昆虫侵染。
最重要地，高白利糖度相应地提供食物的更高营养含量并且保证 良好的、真实自然成熟的味道，特别是折射计显示扩散或展开的读数 时，这代表有益量的各种复合溶解的植物蛋白质和味道成分。
白利糖度常常用来测定某些所选食物的质量。白利糖度读数是莴 苣叶片中存在的所有溶解物质的读数，不仅是糖或蔗糖成分。实际上 用白利糖度来测定莴苣的质量。
在室温用白利糖度读数1.3475的10％蔗糖溶液校准白利糖度折射 计。用中和过的HClO4作为标准。从白利糖度读数和糖％中减去该读数。 校准后，将样品放入折射计以白利糖度读数和糖％读取白利糖度读数。
另一个方法被用来测定白利糖度读数。在200μl水中研磨± 0.1克新鲜质量(这样该样品被稀释了4X)然后20μl样品被放入折射 计并读取白利糖度读数。
尽管蔗糖含量更低，白利糖度值表明得自经Elementol处理的植 物的更佳质量的莴苣。因为白利糖度反映莴苣中的不溶物，Elementol- 处理过的莴苣富含非蔗糖植物材料。使用HClO4方法得到的经 Elementol处理的增加％是15％，使用水方法的增加％是12％。得自两 种方法的3％的差异应该是由于因存在更多的在HClO4中可溶的有机 酸、激素或油基维生素。
实施例17
在受控环境中ELEMENTOL R施用对果实产量和质量的生物刺激作 用
1.材料、植物生长和处理
栽培品种：西红柿该科的番茄(Lycopersicon esculentum Mill)：茄科(Solanaceae)品种。
幼苗：佛罗里达达得西红柿(Floradade)幼苗，约六到八周龄， 购自布隆方丹当地苗圃。这些幼苗中的十二株被移植到玻璃房中准备 好的溶液栽培系统中。该玻璃房位于the Free State大学的植物科学 楼楼顶。
1.1.培育方法：
设置两个相同的不断涨落循环的溶液栽培系统。每个系统由2个 充满支持媒介的长方形石棉盘(90cm x 20cm)组成，该盘由经灭菌的、 中等尺寸的硅石沙粒组成。每盘的三株幼苗移植成间隔±30cm并且行 间隔±42cm。这种分隔提供±0.135cm2每株，共总9株/1.22m2。
为限制藻类和细菌生长，使用黑色不透明的PVC管道、配件和蓄 水池来建造循环系统。每个系统分别有内带小水泵的70升蓄水池。两 个泵都连接于一个数字计时器，后者调节浇水循环的间隔。使浇水时 间同步以使盘充满至给定水平，这样计时器关闭后，水即灌入蓄水池。 每天从06:00到18:00浇灌植物六次，每次5分钟。
1.2温室条件
温室中的温度部分通过空调控制。夜间和白天平均温度分别从16 ℃到25℃变动。三台仪器，即温度计、温湿记录仪和旋转湿度计，用 来测定温度。温度计装在东墙上(朝北)。将温湿记录仪策略性地置于 温室内以从周一到周五24h提供温室条件的记录。温湿记录仪提供温 度和相对湿度两者的指示。用LI-185A型号光度计在离地面2m高处 测量三个不同位置的光强度。光强度随维度和季节明显地变化。这是 地球的倾斜和围绕太阳的转动的结果。正午光强度(LI)随冬季月份的 临近降低，随后的增加从第14个移植后周(WAT)开始直到第25个WAT 结束。
按与周测定相同的步骤测定温度、相对湿度和辐照强度。五月到 七月间每天从8:00到16:00每隔两小时读取读数。相对湿度(RH)是在 特定温度和压力下空气中实际存在的水分重量与单位空气体积保湿量 的比例(Smith & Bartok，2006)。正午RH开始增加至82％，但从移植 后第18周起发现低至50％的下降(24thWA)。RH取决于温度，因为暖空 气比冷空气具有更大的保湿量；所以尽管水量保持恒定，随着空气温 度增加，相对湿度降低。然而，在此情况中温度保持相对恒定；所以 RH降低可以是植物旺盛生长的结果，后者引起密集的和高度的蒸腾作 用，直到收获期的开始。随收获期结束增长的活力和蒸腾作用速率自 然中止。
1.2.营养素溶液
施用的营养素溶液，即Hygrotech Hygroponic，是为溶液栽培西 红柿生产特别研发的优化营养素混合物。该混合物开始由Hygroponic Mix和硝酸钙组成。从第三个花束到试验系统末尾添加硝酸钾。在自 来水中溶解每种成分的设计浓度的组合。
用70升营养素溶液充满蓄水池，并按需要补足。每隔一周，在重 新充满前，用干净自来水冲洗蓄水池以除去可能聚集的有害物质。分 别使用PHM 85精度pH计和PW 9526数字电导计，在重新充满蓄水池 之前和之后测量每个蓄水池中的营养素溶液的pH和EC。
2.1.3.处理
在第二个WAT期间，用黑色尼龙细绳将植物耙在一起以支持植物。 在第二周期间，施用可施用处理剂的六次施用中的第一次。如下总结 处理剂：
处理 缩写 处理剂成分 对照 C 不施用 Elementol R P 3ml Elementol R/250ml H2O(2xdist)
特别排列植物以努力使每次处理拥有阳光植物和背阴植物。所 以植物间仅存的区别是特定的叶片处理。
2.物理参数：生长、发育和植物产量
2.1植物高度
用测量胶带测定每株植物的高度(从沙粒面到最高顶端)。一旦植 物植物触到屋顶以及植物重量压倒该植物，即停止该步骤。
两种处理的植物显示高度的线性增加，在移植后第10周处理过植 物和对照植物两者的平均高度在130-160cm之间。
2.2再生发育
首先通过计数植物上的花蕾数评价Elementol R对植物产量的影 响。植物的发育和生长直接与花蕾、花和果实的形成相关。一旦可辨 认的花蕾出现即记录花蕾，并在明确的黄色出现时记录花。移植后3 周出现第一个花蕾，对照(C)植物在移植后7周达到平均约25个蕾。
虽然Elementol R(Er)处理对植物高度没有统计学显著作用，但 Elementol R处理引起统计学显著的平均花蕾数增加，特别是在移植 后从第5周到第7周(图21)。
与对照比较，Elementol R处理从第6周开始显著刺激蕾的形成。 按照实施例16中描述的公式计算增加％，记录到92％的增加，从可计 数清楚可辨认花蕾的第4周开始到第7周花蕾平均增加44％(下述表1 和图22)。
为防止发育中植物的损伤和稠密生长的溶液栽培设备中蕾计数的 不实用性，决定移植后7周中止此步骤。
2.3产量
在实施例16中无法测定Elmentol R对产量的贡献，因为此处叶 片和植物生长是相关的参数。然而在西红柿植物的情况中，如果通过 溶液栽培方式给予植物的营养是足够的，花蕾的增加应该反映植物产 量的增加。所以计数果实。在果实需达到5mm直径后才记录其的出现。 在实验期间的平均积累果实产量记录在表2中(还见图23)。
对照植物和经处理植物两者产量的周增加从第3周开始是线性 的，从移植开始到第3周有滞后期。使用Fisher t-检验(1尾)，来 分析该产量数据，该检验返回与Student’s t-检验相关的可能性并决 定两个样品是否可能来自两个基础总体。可能性值测定为0.000261， 表示为经Elementol R处理的果实和对照果实得到的产量系列相同的 可能性小于1/1000。
再次使用实施例1中描述的公式算出实验期间除了第1周的产量 的平均增加是53.7％。
计算每株平均积累产量。如期望的，果实产量每株的增加％完全等 同于为总积累产量得到的增加％(53.7％)。
为两组的果实比蕾比例的计算(表3)显示开始7周内步进的但类 似的降低，之后停止蕾计数。在第7周，从100个蕾仅生长26或26 个果实(见图24)。这样可能是由于相对得到的高产量而不足的营养， 虽然使用了为溶液栽培方式生长的西红柿优化的营养素混合物。产量 越高，营养不足的影响就越大。所以，如果针对增加的产量调整过营 养，相对对照植物可能会得到经Elementol R处理的植物的更大的产 量增加。
2.4.果实的物理参数
2.4.1.湿度
总果实产量和可溶固体含量两者在经加工西红柿市场上的经济成 功中扮演重要角色。为处理目的选择西红柿时，特别注意生化质量。 例如，可溶固体含量高的果实，含水较少且较甜并且因此对处理和加 糖制备合适质构的糊剂的需要更少(Baxter等人，2005)。另外，大量 器官感觉和营养参数被用来定义果实质量。这些质量参数包括糖、可 滴定酸(TA)、电导(EC)、维生素C和酚类化合物含量、可溶固体含量 (SSC)和坚实度，仅以此为例(Anza，Riga & Garbisu，2006)。
因此平均湿度给出关于西红柿质量的指示。为测定湿度，将每个 代表性西红柿的切片放入陪替氏培养皿(预先测定其重量)并用 Sauter RL 200微天平方法称重。然后将其放入±68℃的labotech 炉中7天。经过脱水期，再次称重包括西红柿切片的陪替氏培养皿。 重量的损失代表了西红柿中存在的水分的量。平均地，尽管差异在统 计学上不显著，经Elementol R处理的果实比对照组包含稍少的水分 (见图25，如实施例17中描述其显示经Elementol R处理的西红柿植 株与对照植株比较的平均果中湿度％。经Elementol R处理的果实通常 具有较低的相对总西红柿质量的湿度，这表示具有如糖和蛋白质的更 多可溶物，其导致更高质量的西红柿)。
在实验期间经Elementol处理的果实的干质量的平均增加％是 -1.05％，表示在经处理的植物和对照植物之间不存在区别。然而，相 对的干质量具有宽分布。算得两个范围源自相同组的可能性(即相似性) 的T-检验为0.330525。比较湿质量:干质量比例时，观察到相反的模 式。这可能表示用于此测定的步骤是不准确的。可能的原因是没有考 虑果实的有机酸和油含量。
3.果实的生化参数
3.1.电导(EC)和pH
每第二周，客观地选择代表每次处理的15个果实。用Polytron 匀浆器在试管中研磨该果实的一部分。分别使用PHM 85精度pH计和 PW 9526数字电导计，测定该组织的pH和EC。
更大的电流量意味着果实中更高浓度的溶解离子。总果实产量和 可溶固体含量两者在经加工西红柿市场上的经济成功中扮演重要角 色。为处理目选择西红柿时，特别注意生化质量。例如，可溶固体含 量高的果实，含水较少且较甜并且因此对处理和加糖制备合适质构的 糊剂的需要更少(Baxter等人，2005)。
果实的EC显示步进的增加。在实验期间测定的对照植物的平均 EC是3.395，而经Elementol R处理的植物是3.393。当比较果实的 pH和EC值时，表现出反相关，尽管是很平缓的斜线。
实验期间，测得对照果实的平均pH是4.245，测得经Elementol R 处理的植物的pH为4.248。所以，尽管经处理植物产量的大大增加， 在关于湿度、干质量、EC或pH方面的果实质量没有区别。各值间的 密切相关性还表示了测定的准确性。
3.2.碳水化合物
西红柿的果实质量和产量很大程度上取决于果实质量的一种生化 成分，即可溶糖含量(Damon等人，1988；Islam等人，1996)。在非原 质体葡萄糖和果糖浓度以约1:1的比例存在(Damon等人，1988)，而 在发育的所有阶段己糖浓度至少比蔗糖大四倍。Guan和Janes(1991) 发现在西红柿果实中蔗糖水平相对低，其不依赖光强度并且在发育期 间持续降低。在他们研究中的光照-和避光-生长的蔗糖含量未显示任 何显著差异。所以碳水化合物的积累可能是由蔗糖的新陈代谢驱动。
为检测收获的西红柿的碳水化合物含量的样品制备：通过向试管 中的5ml二次蒸馏水中加入10g代表性果实组织来制备样品。用 Polytron匀浆器匀浆该混合物±30秒。用额外的2ml二次蒸馏H2O将 在试管壁上的残余材料冲洗到试管中。振动该试管30分钟，接着激烈 涡旋，随后快速倾入小量杯中。当果泥在电动搅拌器上搅拌时，用1M 和5M的KOH调节pH至±8.00，随后使该溶液(±13-17ml)达到20ml 的最终体积。该溶液的一份(微离心管中的±1.5ml)在12000rpm离心 10分钟。用巴斯德吸管吸取上层清液并转移至干净的试管中。在最终 分析前，在-20℃保存测试样品。
为测定果实的糖含量，使用Boehringer Mannheim/R-Biopharm 制造的蔗糖/D-葡萄糖/D-果糖-测试盒(10 716 260 035)。改变规 定步骤至体积1ml。在计算碳水化合物含量时考虑稀释因子。
表3 表示在本实验第13周收获的果实的葡萄糖、果糖和蔗糖含量 的比较。
经Elementol R处理的西红柿显示了果糖和蔗糖含量的显著增加， 其导致消费者更喜欢的更甜的西红柿。
3.3白利糖度
白利糖度值是汁液中总可溶固体(TSS)的百分数的指示。每第二 周，测定用于pH和EC的15个代表性水果的样品果泥的白利糖度值。 因此用Polytron匀浆器在试管中研磨该果实的一部分的步骤，与测定 果实的pH和EC中的完全相同。稍稍倾斜果泥容器以用巴斯德滴管吸 取澄清的果汁样品。用折射计方法测定白利糖度值。高白利糖度、高 EC和低pH与高质量有联系(www.cals.ncsu.edu)。关于在收获第13 周期间观察到的果实的EC和低pH或湿度方面，尽管事实上未观察到 对照西红柿和经Elementol处理的果实间有统计学显著差异，但平均 白利糖度值为8％的来自经Elementol处理的植物的果实比平均白利糖 度值为7.4％的对照植物更佳。两组都具有显著高出关于西红柿的平均 公开值的白利糖度值。
总之，Elementol R处理对西红柿产量以及关于湿度％、不可溶物 和糖方面的收获果实的质量都有增加。
实施例18
通过ELEMENTOL R方法对商业生物刺激剂的摄取和迁移的增强
1.实验目的
前面两个实施例显示，在关于植物生长和产量方面Elementol R 可以单独作为生物刺激剂。本实验研究了是否向Elementol R中预- 包埋商业生物刺激剂可以增强该生物刺激剂的摄取和迁移， 其在通过溶液栽培生长的莴苣和西红柿中导致植物生长和产量的增 加，其超过对Elementol R观察到的或已知轻度影响的植物 生长和产量。
2.实验装置：
实验装置与实施例16和17中描述的类似，除了施用的生物刺激 剂(单独或与Elementol R组合)。该实验按与实施例16和17中的描 述类似的方法进行，将不再描述。
2.1商业化生物刺激剂
，对环境温和的植物强化剂，包括一组叫做油菜素甾醇 (brassinosteriod)的植物激素(Schnabl等人，2001)。油菜素甾醇是 高级植物中存在的生长-促进甾醇。油菜素甾醇被认为通过在植物中增 加茎延伸和调节基因表达在低浓度影响植物的生长。使用观 察到改善的幼苗发育、强壮的根和芽、最佳的花发育。油菜素甾醇， 作为纯植物激素，据报道不仅增加作物产量还增加作物质量 (Prusakova等人，1999)。包含提取自群落生态学上活跃的野 生植物的高质量生化活性物质。
由于栽培者的干预，绝大多数栽培植物失去了保护自身对抗病原 菌的能力。增加植物对所有类型逆境和病原菌的抗性。油菜 素甾醇在活化植物自身抗性和耐性机制中扮演决定性的角色。 在该类中首次以最佳方式成功催化植物自身防御能力的活 化。植物发育诱发抗性增加植物抗病原菌的能力。
该生物刺激剂是水溶性粉剂，其在作为叶片喷雾剂或种子处理剂 施用至作物时增加根发育、加速营养素吸收、加强营养素同化作用、 诱导花蕾形成、增加产量(Hüster，1999，Schnabl等人，2001， Pretorius，2004年被Alam引用)并诱导植物对病原菌和生物逆境的 天然抗性(2004年被Alam在Agra Forum引用；Hüster，1999； Schnabl等人，2001)。Khripach等人(2000)也声称此新发现的植物 激素具有调节离子向植物细胞中摄取的能力。
2.2叶面施用计划
2.2.1莴苣
不同植物组的处理剂制备如下：
按照剂量说明：＝2g/L
那么：＝0.5g/250ml
i)(CC)
0.5g CC+250ml H2O
ii)Elementol R(E)
3ml E+250ml H2O
iii)全强度和Elementol组合(CC/E)
0.5g CC+3ml E+250ml H2O
iv)半强度和Elementol组合(1/2CC/E)
0.25g CC+3ml E+250ml H2O
v)四分之一强度和Elementol组合(1/4CC/E)
0.125g CC+3ml E+250ml H2O
2.2.2.西红柿
处理剂名称 缩写 处理剂成分 Elementol R PE 3ml Elementol R/250ml H2O(2xdist) ComCat CC 0.5g Comcat/250ml H2O(2xdist) ComCat & Elementol CC/E 0.5g Comcat+3ml Elementol R/250ml H2O(2xdist) 0.5Comcat & Elementol R 0.5CC/E 0.25g Comcat+3ml Elementol R/250 ml H2O(2xdist)
3.结果
3.1生长和发育和顶端直径
3.1.1.莴苣
在E中预-包埋CC对植物高度的植物顶端直径影响不大。植物中 的某些未增加100％，这说明它们的尺寸没有翻倍。用CC和E单独处 理的某些在经处理的植物中表现最佳，但区别不是统计学显著的，除 了从第11周开始，此时经Elementol R处理的植物超过其它所有处理。 这些组合中的某些可以具有植物上的抑制作用，然而E和CC单独都具 有刺激效果。
在开始的7到8周植物达到最大顶端直径，之后顶端直径缩小， 可能是因为不断的修剪植物以获得生理学实验使用的植物材料。
3.1.2西红柿
施用导致莴苣生长速率的轻度降低。然而，当 与两种浓度(CC/E and 0.5CC/E)中任一种的Elementol一起施用时， 植物生长中的这种降低以剂量依赖性的方式得到缓解，但生长还是显 著低于Elementol R单独处理。
3.2西红柿的平均花蕾
单一Elementol R、(CC)以及组合处理显示花蕾的明显 增加，特别是从移植后第5到第7周。这些处理间没有测得明显差异， 尽管CC显示最少的增加。
3.3平均西红柿产量
所有处理间没有观察到果实尺寸和质量的明显差异。(CC) 施用，作为生物刺激剂，未能成功在通过溶液栽培方式生长的西红柿 中增加果实尺寸和质量。满强度和Elementol R施用在果实 尺寸和质量变化上没有作用，但是CC/E组合处理剂引起更大的果实尺 寸和果实直径和新鲜质量(见下)。这说明该低/Elementol 浓度减速整个收获期观察到的果实质量降低，这意味着收获期中更好 的物理产量。下表反映平均产量/株：
Elementol R显著地刺激西红柿产量(实施例17)。然而，当 在全(CC/E)和半(0.5CC/E)强度两者中与Pheroids混合时， 明显刺激果实生产(见图26，其显示了(CC)、Elementol R(E) 及其组合对13周期间从每组三植株中收获的积累果数的变化的影响) 和随后收获的果实的质量(见图27，其显示了与单独用Elementol R 或处理的植株中观察到的增加相比，当用包埋在Elementol R 中的处理植物时观察到总积累果实质量的戏剧性增加)。
与从CC得到的值相比，算得CC/E和0.5CC/E的产量方面的增加％ 分别为99％和81％，而CC/E和0.5CC/E的总收获质量分别为199％和 204％。CC/E和0.5CC/E各自33％和21％的增加，远小于Elementol单 独引起果实产量和质量的增加(图26和27)。Elementol作为新型载体 分子被证明是分子的有效迁移剂。还显示Elementol R增加 的摄取以发挥后者的生物-刺激作用。这两种产品的协同效应 也可以发挥作用。
3.2湿度％以及新鲜和干质量(Fm∶Dm)比例
3.2.1莴苣
所有处理对植物Fm:Dm比例有刺激作用。
3.2.2西红柿
单一CC显示比单一E高的平均新鲜果实质量。然而，在E中预- 包埋CC更进一步增加西红柿的平均新鲜质量(见图28)。未观察到CC/E 和0.5CC/E间有显著差异，除了第13周，因为Fm的标准偏差很大， 这可能不是显著的。
4.莴苣的生理学相关参数
4.1蛋白质含量：每次处理后一周测量
蛋白质含量在第2周最高并且对所有处理在该实验的12周中显示 下降。从第4到12周CC有平均最少的蛋白质的量。在最后一周所有 植物有相对相同的蛋白质的量。CC/E组合对蛋白质有最佳的刺激作 用。
4.2呼吸作用速率
所有植物处理显示相对相同的呼吸作用速率。在第9周，经CC/E 处理的植物有最佳的呼吸作用速率。除CC/E组合呼吸作用速率一直降 低至第9周，然后在最后4周再次增加。所有植物处理显示这种“U” 形状，因为在生长长期和花期有更高的能量需求。CC/E组合是在呼吸 作用速率中唯一显示增加的处理(图29)。这样在第9周，CC/E组合处 理在植物上具有刺激作用。所有牵涉E的处理在此周中具有比单一CC 更高的呼吸作用速率。
当用蛋白质的量表示呼吸作用速率时，观察到涨落现象。在每次 植物被处理后，经CC/E处理的植物的呼吸作用每蛋白质的量显示增加 (第5周和第9周；见图29)。所以E和CC的组合刺激呼吸作用速率 每mg蛋白质。在第13周末E植物具有最高的呼吸作用速率每mg蛋白 质，可能是因为经Elementol R处理的植物在用CC或CC和E的组合 处理的植物之前开花，这需要高呼吸作用速率来为开花提供足够的量 的能量。
4.3光合作用速率
同样，在第9周期间CC/E的光合作用速率很高。在第11周光合 作用速率显著下降，这表示CC/E引起的刺激可能持续期短。在第13 周末1/4CC/P组合的组显示最高的光合作用，这表示1/4CC/P组合更久 的刺激光合作用。在蛋白质的量方面表达光合作用速率导致大约与呼 吸作用每mg蛋白质相同的结果，除了经1/4CC/P处理的植物在第13周 末显示最高的光合作用速率，这表示该处理在光合作用每mg蛋白质上 有持续期更长的作用。
光合作用必须总是超过呼吸作用速率。光合作用超过呼吸作用越 多，碳的积累量就越高，这导致更多的糖的合成。有更多的糖可以呼 吸那么能量的获取就更佳。这种能量为新陈代谢过程提供“燃料”。 越高的比例导致越好的生长。同样，1/4CC/P组合从第5周到第13周 在光合作用：呼吸作用比例中显示增加。该组合在第13周末具有最佳 的比例。
4.4叶绿素含量
虽然有涨落，可以观察到叶绿素a的总体增加。通过将叶绿素a 的量与植物中存在的蛋白质的量相关联，显示如下。在第13周，E处 理有最高的叶绿素a每mg蛋白质，随后第一是1/4CC/E、第二是1/2CC/E 并且第三是CC/E，然后是CC。这样最少量的CC和E的组合给叶绿素 A最大刺激(见图30，其举例说明在试验的第13周测定的叶绿素B每 mg蛋白质的量的比较)。CC对叶绿素B的量具有抑制作用，并且在 Elementol R囊泡中CC的包埋增强该抑制效果。然而，CC浓度的稀释 引起叶绿素B/mg蛋白质的增加。所以当在Elementol R中包埋时应该 减少CC的剂量。
叶绿素B显示类似的模式。在叶绿素B情况中，观察到总体增加。 在图32中，显示叶绿素B的量每mg蛋白质。此时，1/4CC/E组合和 1/2CC/E组合也显示最佳的叶绿素B浓度每mg蛋白质。E也具有高浓 度的叶绿素B每mg蛋白质。这样与E使用的更少量的CC刺激叶绿素 A和叶绿素B合成两者。CC抑制叶绿素B含量，但是CC/E组合戏剧性 的抑制叶绿素B的量，这说明E中的预-包埋增加CC的摄取和迁移。 CC的75％稀释液显得消除了CC的抑制作用。为使该抑制作用起作用， 在E中包埋CC必须引起CC/E的剂量依赖性的摄取和迁移，如可在图 30中观察到的。
4.5糖含量
葡萄糖和蔗糖两者的含量被E中的CC包埋刺激。植物的糖含量对 CC和E是类似的，但是CC/E的组合以平均91％增加蔗糖含量并以平均 64％增加葡萄糖含量。同时，发现当强度减小时蔗糖和葡萄糖 两者的含量增加。
4.6白利糖度
下表中给出用HClO4作背景的白利糖度测量值。白利糖度测量莴 苣叶片中存在的所有溶解物质，不仅是糖或蔗糖成分。实际上用白利 糖度来测定莴苣的质量。高白利糖度读数表明很多溶解物质以及很多 糖，这表示优良的质量和健康的叶片。这可以有助于低生长率和发育 不良的植物。
使用HClO4的经处理植物的平均白利糖度读数(也见图31)
处理剂 白利糖度读数(％) E 4.4261±0.2867 CC 4.7652±0.3586 CC/E 6.6760±0.5235
组合引起的白利糖度读数的增加表示Elementol载体引起的更高 的CC的摄取和迁移。
实施例19：
幼苗生长中的ELEMENTOL R的体外和体内作用：
1.实验目的
研究在C3和C4植物两者中的萌芽和幼苗生长中Elementol R的 作用。在光合作用过程中，CO2和水是底物而碳水化合物和氧是产物 (Jakob和Heber 1996)。按照其光合作用机理将植物分为C3、C4或 CAM。C3途径牵涉卡尔文循环，而C4途径使用的循环中3-磷酸甘油酸 (3-phosphoglyceric acid)不是第一个产物。C4光合作用提供的机 理具有碳同化作用的高速率并且对光呼吸作用更具抗性。
研究了单一Elementol R固有的和其与抗真菌剂混合的作用(见下 述玉米大田试验)。
2.幼苗生长中Elementol R的体外作用
按实施例16到18中的描述控制关于湿度和温度方面的条件。如 下处理三组萝卜种子：
组 对照 Elementol 125 Elementol 250 剂量 201水/ha 125ml/201/ha 250ml/201/ha 缩写 C E125 E250
种子在上述处理剂中浸泡过夜然后暴露于萌芽纸。就其对萝卜根 长度的影响测量不同处理剂的作用(见图32，其如实施例19描述， 是体外实验中在萌芽纸上萌芽的萝卜的照片。该短对照幼苗两边增加 的根长度是由于更快的萌芽和生长)。对Ep125和250分别观察到超过 对照53.3和52.6％的根长度增加。
3.玻璃房试验中幼苗生长中Elementol R的体内作用
在玻璃房试验中的小麦上完成下述实验：
栽培品种：卡里埃加(Kariega)小麦
关于温度和相对湿度方面的生长条件是相对恒定的。在土中种植 植物并通过滴灌浇灌。
处理由两组组成：接受肥料的参照组(RG)和接受Elementol R的测 试(E)组。参照组的种子按供应商的说明用肥料(3:1:0)种植。用与上 述体外试验中的描述类似的浓度用Elementol R在三个叶片期处理植 物，但在顶叶上和临近开花前使用20ml E/100L/ha。通过叶面施用来 施用处理剂。该试验布局由随机的小区设计组成并且进行3个半月。
每周研究下列参数：
任何植物毒性迹象，
幼苗尺寸和高度的差异
小麦胚芽鞘的平均生长(mm)
对照 Ep 125 Ep 250 Ep 500
22 24 27 28
上表说明小幼苗的早期反应，而且是一般反应的代表。生长反应 与Elementol的剂量成比例变化。Elementol R的施用导致关于小麦 胚芽鞘生长方面的线性剂量反应(见图33，其说明从用肥料对照以及 各种Elementol R剂量处理的小麦胚芽鞘测得的平均长度的比较)偏 离线性剂量反应的标准偏差格外地小，这表示数据的高可信度。这样 的线性剂量反应可以用来表示对生物体系的特定干涉导致特定的反 应。由此胚芽鞘生长中的反应是由特定剂量的Elementol R的施用特 别地引起的。图33显示并未达到最大剂量，所以使用更高剂量可能进 一步增加生长。算得使用500ml/ha剂量的Elementol R的生长增加为 27.3％。未观察到毒性迹象(叶烧伤、坏死等)。
4.大田试验
4.1小麦大田试验中Elementol R的体内作用
栽培品种是PAN 3377。在南非中部自由州按照正常农业技术栽培 小麦。
与在玻璃房中试验一样，这两组由肥料对照(3:2:1)和500ml/100L 水/ha剂量的Elementol R组成。处理被限制为在三个叶片期的单次施 用。该试验布局是随机的小区设计。本试验持续7个月。
测定产量并表示在图34中。与参照肥料组相比，在经Elementol R处理的组中观察到108kg的产量平均增加。未观察到植物毒性。
4.2豌豆大田试验中Elementol R的体内作用
在南非北部自由州的Koedoesfontein农场按正常农业技术栽培 豌豆，有以下例外：100个干燥豌豆浸泡在500ml钻孔水(对照组)或 5％Elementol R中过夜。稀释剂是取自同样来源的水。对照组豌豆在 浸泡期间全部吸收水，而Elementol组豌豆仅吸收300ml的5 ％Elementol R。将豌豆置于两个隔开的小区以防止两组间任何可能的 污染。每天通过喷洒浇灌植物。
从第7天开始观察到萌芽和幼苗生长。在第10天比较每个小区中 量高至少300mm的幼苗的数目。在第10天，在Elementol R中浸泡的 种子的小区中数出57株幼苗，而对照组中出现18株幼苗。这表示萌 芽和幼苗生长3.1倍的增加。此外，Elementol R组的萌芽只需要相 当于对照组0.6倍的水。这方面在干燥地区可证明是非常有价值的。
4.3干燥玉米大田试验中Elementol R的体内作用
使用遗传修饰的栽培品种，其由生产大号种子的公司提供。均分 一袋经处理的种子，用克菌丹处理袋中种子的一份，而以下述方式用 混有Elementol R的克菌丹处理另一份。克菌丹是广谱的接触杀真菌 剂，它从20世纪50年代开始就被用于玉米种子。它通常染成粉红色， 并在种子袋和播种箱留下粉红色的粉末。它对抗宽范围的土壤真菌十 分有效。将规定的克菌丹量直接与种子混合(克菌丹参照组)。对测试 组，用2％的Elementol R中的类似量克菌丹与种子混合。用各自的处 理剂短暂地混合或搅拌两组种子然后放置干燥。在南非的西北省于3 或5行玉米大田长度的小区中种植种子，该玉米大田在每个处理组两 侧有未处理地块。不用浇灌按一般农业技术完成栽培。
在行中每隔4株拔起1株植物以收集未经处理组、克菌丹参照组 和Elementol R/克菌丹组各组的植物。从大田内5m处开始收集植物 并朝大田中央进行，直到收集到每组50株植物。
测定每株植物的总植物质量、根质量和叶质量。图35显示每组的 平均质量的比较。未经处理的种子作为对照。单独使用克菌丹的种子 处理未引起植物叶片生长的任何变化，仅轻微增加根质量，而用2％ Elementol R/Captan混合物处理的种子显示叶片质量、根质量以及随 之的总植物质量的增加。
可在不偏离本发明上述陈述表达的发明主旨的前提下设计很多本 发明的变化。
实施例20
用CO2代替N2O制备的ELEMENTOL囊泡的迁移
按Elementol B制备1的描述制备Elementol C，但在制备过程中用 CO2作气体。测定囊泡尺寸从300nm到2μm变化。用Malvern Z-测量仪 测得动电势为-44mV。
在含有CO2的Elementol C中分散的囊泡被用Nile红荧光标记至1μ M最终浓度。用刷子在一株常春藤植物的叶片上涂布该混合物。在另一 株常春藤植物的叶片上涂布水对照。30分钟后，收集被涂布叶片的对 生叶并用实验1实施例6中描述的共聚焦激光扫描显微法研究荧光的存 在。在用荧光标记的Elementol C涂布过的植物的被收集叶片中存在荧 光囊泡，而收集自用水涂布的植物的叶片中未发现这种荧光。该荧光 不相应于叶绿体或类囊体膜中观察到的自体荧光。这样在测试叶片中 观察到的荧光被证明是借助含CO2的Elementol C从一片叶片迁移到其 对生叶的结果。
分子模拟指出氧硫化碳也具有在Elementol囊泡和微海绵制备中 一氧化二氮和二氧化碳的相关性质。
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