抑制类风湿因子干扰的脂蛋白a胶乳增强免疫比浊试剂专利检索-绵羊反刍动物家畜畜牧业专利检索查询-专利查询网

抑制类 风湿因子干扰的脂蛋白a胶乳增强免疫比浊 试剂

阅读：234发布：2020-05-13

专利汇可以提供抑制类风湿因子干扰的脂蛋白a胶乳增强免疫比浊试剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供一种抑制类风湿因子干扰的脂蛋白a胶乳增强免疫比浊试剂，它包括试剂1和试剂2，所述试剂1为促进抗原和抗体反应的溶液，所述试剂2为包被有抗体致敏的胶乳颗粒分散液，所述试剂1中包含1‑40g/L的N‑羟基琥珀酰亚胺。本发明的试剂盒能够有效消除胶乳增强免疫比浊的样品中含有类风湿因子对免疫检测结果的干扰，提高测量的准确性和精确度，它具有良好的通用性。，下面是抑制类风湿因子干扰的脂蛋白a胶乳增强免疫比浊试剂专利的具体信息内容。

权利要求

1.抑制类风湿因子干扰的脂蛋白a胶乳增强免疫比浊试剂，其特征在于：包括试剂1和试剂2，所述试剂1为促进抗原和抗体反应的溶液，所述试剂2为包被有抗体致敏的胶乳颗粒分散液，所述试剂1中包含为5-30g/L、10-20g/L、10-30g/L或20-40g/L的N-羟基琥珀酰亚胺；所述试剂1中还包括缓冲液、生物防腐剂、加速剂、表面活性剂和IgM抗体；和所述试剂2中包括缓冲液、生物防腐剂、表面活性剂、封闭剂和稳定剂。
2.根据权利要求1的所述胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述加速剂是聚乙二醇、葡聚糖和聚乙烯吡络烷酮中的任一种或其组合。
3.根据权利要求2的所述胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述试剂1中包括25-
200mmol/L TRIS缓冲液、1-150g/L的氯化钠、0.5-4g/L加速剂、100-400mg/L抗人IgM抗体、
0.1-5g/L叠氮化钠和1-20g/L的曲拉通。
4.根据权利要求3的所述胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述试剂1中包括
100mmol/L TRIS缓冲液，30g/L的氯化钠，1g/L聚乙二醇4000，200mg/L兔抗人IgG，1.0g/L叠氮化钠和3g/L曲拉通。
5.根据权利要求1的所述胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述试剂2中包括10-
100mmol/L硼酸盐缓冲液、0.1-10g/L的生物防腐剂Proclin300、0.1-5g/L的表面活性剂
709、1-10g/L牛血清白蛋白和0.1-5g/L的抗体致敏的胶乳颗粒。
6.根据权利要求5的所述胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述试剂2中包括
20mmol/L硼酸盐缓冲液，0.3g/L兔抗人脂蛋白a抗体致敏的胶乳颗粒，0.3g/L生物防腐剂Proclin300，0.5g/L表面活性剂709，5g/L牛血清白蛋白，和50g/L蔗糖。
7.根据权利要求1的所述胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述胶乳增强免疫比浊试剂盒致敏胶乳上包被的是动物抗人IgG多克隆或单克隆抗体。
8.根据权利要求7的所述胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述动物的种属包括兔、山羊、绵羊、鸡和鼠。

说明书全文

抑制类风湿因子干扰的脂蛋白a胶乳增强免疫比浊 试剂

技术领域

[0001] 本发明涉及体外诊断试剂领域，具体涉及一种抑制类风湿因子干扰的脂蛋白a胶乳增强免疫比浊试剂。

背景技术

[0002] 脂蛋白a主要是在肝脏合成，主要的生理功能可能是阻止血管内血块溶解，病理上可促进动脉粥样硬化形成。脂蛋白a是血液中脂蛋白的成分之一，结构复杂，是一种与血纤维蛋白溶解酶原有相同性质的糖蛋白。脂蛋白水平持续升高与心绞痛、心肌梗死、脑溢血有密切关系，是脑卒中和冠心病的独立危险因子。其升高常见于动脉粥样硬化性心脑血管病、急性心肌梗死、家族性高胆固醇血症、肾病综合征、糖尿病肾病、妊娠、服用生长激素等。脂蛋白a是公认的致动脉粥样硬化的独立危险因素。降低可见于肝脏疾病、酗酒、摄入新霉素等药物。临床主要的检测方法有：透射免疫比浊法、ELISA法等。

[0003] 胶乳增强免疫比浊法常规检测的一个限制是易于受到由可能存在于测试样品中的嗜异性抗体引起的干扰，尤其是类风湿因子引起的干扰。类风湿因子(rheumatoid factor，RF)是在类风湿性关节炎(RA)病人血清中发现，是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中，它是一种抗变性IgG的抗体，属IgM型。可与IgGFc段结合。RA病人和约50％的健康人体内都存在有产生RF的B细胞克隆，在变性IgG(或与抗原结合的IgG)或EB病毒直接作用下，可大量合成RF。在商业免疫类检测试剂中所采用的抗体大多是动物来源的IgG类抗体，Fc段与人IgG的Fc段具有较高的同源性，能被RF识别并结合，所以在待测物质为阴性、RF阳性的检测样本中，免疫检测试剂有可能被RF捕获产生信号，从而导致假阳性结果。

[0004] 目前在现有的免疫检测试剂研制中，减少类风湿因子或异嗜性干扰的方法通常有：(1)从样品中去除干扰性的免疫球蛋白或使其失活。比如使用IgG固相吸附剂吸附样本中的类风湿因子，或使用含有2-巯基乙醇的稀释液稀释样本，以降解IgM型类风湿因子，但这会使检测操作复杂化，并且有可能在去除干扰蛋白的同时也减少了待测物质的含量或活性。(2)使用减少干扰的封闭剂，大多为IgG，市场上有许多商品化的封闭剂。但由于类风湿因子或异嗜性抗体的多样化，以及各种产品所使用的抗体不同，目前尚未有一种产品可以有效消除所有干扰，通常需要使用不同产品进行组合、筛选，不但增加工作量、挺高试剂成本，另一方面由于使用多种不明成分的封闭剂，也不可控制地引入新的干扰检测结果的因素。(3)修饰测定抗体以使其更不易与类风湿因子反应。目前最常使用的一种方法是将检测IgG抗体酶切去除Fc片段，用F(ab’)2替代完整的IgG，既保留其识别结合抗体的活性，又消除Fc的干扰，减少试剂的非特异性反应。但在IgG的酶切、纯化制备工艺中会损失一部分抗体且对抗体活性也有一定程度影响，提高试剂成本，更重要的是试剂制备过程进一步复杂，对控制试剂批间差设置了不可逾越的障碍，从而限制了此类试剂在临床上的推广。

[0005] 现有的胶乳增强免疫比浊法试剂盒，一般包括试剂1和试剂2，试剂1为促进抗原和抗体反应的缓冲液，试剂2为包被有抗体的胶乳颗粒分散液。

发明内容

[0006] 为解决上述问题，本发明提供一种抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂盒，该试剂盒组成简单，针对胶乳增强免疫比浊试剂具有广泛的通用性，可以有效地消除类风湿因子的干扰，提高检测结果的特异性和准确性。

[0007] 本发明提供一种抑制类风湿因子干扰的脂蛋白a胶乳增强免疫比浊试剂，它包括试剂1和试剂2，所述试剂1为促进抗原和抗体反应的溶液，所述试剂2为包被有抗体致敏的胶乳颗粒分散液，所述试剂1中包含1-40g/L的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，优选地为5-30g/L、10-20g/L、10-30g/L或20-40g/L的N-羟基琥珀酰亚胺。在一些实施方式中，试剂1中N-羟基琥珀酰亚胺的量可以是1g/L、2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、11g/L、
12g/L、13g/L、14g/L、15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L、20g/L、21g/L、22g/L、23g/L、24g/L、25g/L、26g/L、27g/L、28g/L、29g/L、30g/L、31g/L、32g/L、33g/L、34g/L、35g/L、36g/L、
37g/L、38g/L、39g/L或40g/L。

[0008] 在一种实施方式中，所述试剂1中还包括缓冲液、生物防腐剂、加速剂、表面活性剂和IgM抗体；和所述试剂2中包括缓冲液、生物防腐剂、表面活性剂、封闭剂和稳定剂。

[0009] 缓冲液可以为本领域中常规使用的缓冲溶液。在一些实施方式中，所述缓冲溶液可以各自独立地为MOPS、good's缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液以及其任意组合。

[0010] 在一种实施方式中，所述加速剂是聚乙二醇、葡聚糖和聚乙烯吡络烷酮中的任一种或其组合。通过在脂蛋白a检测试剂盒加入加速剂，使得脂蛋白a检测试剂盒不仅可以促进抗原抗体的结合，使其快速形成复合物，又能抑制免疫复合物的解离，使沉淀出现快，提高了检测的速度；而且还不会因此而扩大非特异性范围，使得脂蛋白a检测试剂盒保持一个宽的线性范围。另外，加速剂可将脂蛋白a抗体固定在乳胶微粒上，可特异性的增强浊度的变化，从而提高试剂盒的检测灵敏度。

[0011] 封闭剂的作用是为了与胶乳颗粒中游离的-COOH位点结合，避免游离的羧基位点对检测结果造成不良影响，本发明试剂2中封闭剂可以是各种蛋白质，优选BSA蛋白作为封闭剂。

[0012] 稳定剂的主要作用是保护抗体的活性及防止胶乳颗粒的凝集、下沉，同时还可以增加试剂盒中各组分的稳定性，延长产品的货架期及开瓶后使用时间。常用的稳定剂为糖类、醇类、蛋白类以及一些氨基酸等。

[0013] 在一种实施方式中，所述试剂1中包括25-200mmol/L TRIS缓冲液、1-150g/L的氯化钠、0.5-4g/L加速剂、100-400mg/L抗人IgM抗体、0.1-5g/L叠氮化钠和1-20g/L的曲拉通。

[0014] 在一些实施方式中，试剂1中TRIS缓冲液浓度可以为25-100mmol/L或100-200mmol/L。在一些实施方式中，试剂1中氯化钠的量是1-30g/L、30-120g/L或120-150g/L。
在一些实施方式中，试剂1中抗人IgM抗体的量是100-200mg/L、200-300mg/L或300-400mg/L。在一些实施方式中，试剂1中生物防腐剂的量是0.1-1g/L、1-3g/L、或1-5g/L。在一些实施方式中，试剂1中加速剂的量是0.5-1g/L、1-2g/L、或2-4g/L。在一些实施方式中，试剂1表面活性剂剂的量是1-3g/L、1.5-3g/L、1.5-20g/L或3-20g/L。

[0015] 在一些实施方式中，所述生物防腐剂可以为二氯乙酰胺、咪唑烷基脲、生物防腐剂ProClin系列、山梨酸钾、苯甲酸钠、尼泊金酯、叠氮化钠等或其任意组合。

[0016] 在一种实施方式中，所述试剂1中包括100mmol/L TRIS缓冲液，30g/L的氯化钠，1g/L聚乙二醇4000，200mg/L兔抗人IgG，1.0g/L叠氮化钠和3g/L曲拉通。

[0017] 在一种实施方式中，所述试剂2中包括10-100mmol/L硼酸盐缓冲液、0.1-10g/L的生物防腐剂Proclin300、0.1-5g/L的表面活性剂709、1-10g/L牛血清白蛋白和0.1-5g/L的抗体致敏的胶乳颗粒。

[0018] 在一些实施方式中，试剂2中硼酸盐缓冲液浓度可以为10-50mmol/L、或50-100mmol/L。

[0019] 在一些实施方式中，试剂2中生物防腐剂的量是0.1-1g/L、1-3g/L、3-5g/L或5-10g/L。在一些实施方式中，试剂2中表面活性剂剂的量是0.1-0.5g/L、0.5-1g/L、1-2g/L或
2-3g/L。在一些实施方式中，试剂2中封闭剂的量是1-2g/L、1-3g/L、2-5g/L、3-5g/L或5-
10g/L。在一些实施方式中，试剂2中抗体致敏的胶乳颗粒的浓度为0.1-1g/L或1-5g/L。

[0020] 在一种实施方式中，所述试剂2中包括20mmol/L硼酸盐缓冲液，0.3g/L兔抗人脂蛋白a抗体致敏的胶乳颗粒，0.3g/L生物防腐剂Proclin300，0.5g/L表面活性剂709，5g/L牛血清白蛋白，和50g/L蔗糖。

[0021] 在一种实施方式中，所述胶乳增强免疫比浊试剂盒致敏胶乳上包被的是动物抗人IgG多克隆或单克隆抗体。

[0022] 在一种实施方式中，所述动物的种属包括兔、山羊、绵羊、鸡和鼠。

[0023] 在一种实施方式中，本发明提供上述试剂盒的应用，样品的体积与试剂的体积比为1:10-1:150；样品是血清或血浆。

[0024] 本发明采用在试剂1中添加NHS，加入NHS后，样品中RF因子与抗人IgG结合的能力减低，而标记抗体与待测抗原的结合能力不受影响。试剂1加入加速剂后，与NHS相结合进一步增强了抗RF因子干扰的能力。此外，试剂1中的抗人IgM抗体，能够与减活后的RF因子结合，从而彻底消除RF因子对测定结果的干扰。因此，本发明的试剂盒能够提高检测结果的特异性和准确性；另外本试剂盒组成简单，具有较高的灵敏度，具有广泛的通用性。

具体实施方式

[0025] 为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合实施例对本发明作进一步说明，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都应当属于本申请保护的范围。

[0026] 实施例一:含有不同NHS量的脂蛋白a测定试剂实验

[0027] 1.含有不同NHS量的脂蛋白a测定试剂1

[0028] 脂蛋白a测定试剂11-A：100mmol/LTRIS缓冲液，30g/L的氯化钠，200mg/L兔抗人IgG，1.0g/L叠氮化钠，3g/L曲拉通，0g/LNHS；

[0029] 脂蛋白a测定试剂11-B、C、D、E、F、G、H和I中各组分与试剂11-A相同，除了NHS浓度不同，它们分别为1g/L NHS、5g/L NHS、10g/L NHS、20g/LNHS、30g/LNHS、40g/LNHS、45g/LNHS和50g/L NHS。

[0030] 2.脂蛋白a测定试剂2：20mmol/L硼酸盐缓冲液，0.3g/L兔抗人脂蛋白a抗体致敏的胶乳颗粒，0.3g/L生物防腐剂Proclin300，0.5g/L表面活性剂709，5g/L牛血清白蛋白，50g/L蔗糖。

[0031] 3.含有不同类风湿因子含量的脂蛋白a样本制备：在含有420mg/L的脂蛋白a纯品的样品中分别加入不同的RF，配制成含有0、100、200、500、1000IU/mL RF的溶液。

[0032] 以上配制的九种脂蛋白a测定试剂(11-A，11-B，11-C，11-D，11-E，11-F，11-G，11-H，11-I，各试剂的NHS量不同)，对含有0、100、200、500、1000IU/mL的RF的脂蛋白a样本进行检测。

[0033] 表1：脂蛋白a测定试剂盒试验结果

[0034]

[0035] 以上数据可知：试剂1中无NHS时，测定结果明显随着RF因子含量增加而升高，由最初的423mg/L升高到652mg/L，试剂1中添加NHS可以明显减少RF因子的干扰，当NHS含量为20g/L时，RF因子对测定结果影响基本没有。但当NHS量逐渐增加到45g/L、50g/L时，测定结果明显偏低，显示为副干扰。

[0036] 实施例二:含有不同加速剂的脂蛋白a测定试剂实验

[0037] 1.含有不同加速剂的脂蛋白a测定试剂1

[0038] 脂蛋白a测定试剂12-A：100mmol/L TRIS缓冲液，30g/L的氯化钠，200mg/L兔抗人IgG，1.0g/L叠氮化钠，3g/L曲拉通，10g/LNHS；

[0039] 脂蛋白a测定试剂12-B、C、D、E、F和I中各组分与试剂2-A相同，除了加入加速剂不同，它们分别为1g/L聚乙二醇2000、1g/L聚乙二醇4000、1g/L聚乙二醇8000和1g/L聚乙烯吡络烷酮。

[0040] 2.脂蛋白a测定试剂2：20mmol/L硼酸盐缓冲液，0.3g/L兔抗人脂蛋白a抗体致敏的胶乳颗粒，0.3g/L生物防腐剂Proclin300，0.5g/L表面活性剂709，5g/L牛血清白蛋白，50g/L蔗糖。

[0041] 3.含有不同类风湿因子含量的脂蛋白a样本制备：在含有420mg/L的脂蛋白a纯品的样品中分别加入不同的RF，配制成含有0、100、200、500、1000IU/mL RF的溶液。

[0042] 以上配制的五种脂蛋白a测定试剂(12-A，12-B，12-C，12-D，12-E)，对含有0、100、200、500、1000IU/mL的RF的脂蛋白a样本进行检测。

[0043] 表2：脂蛋白a测定试剂盒试验结果

[0044]

[0045] 以上数据可知：当加入加速剂聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇8000和聚乙烯吡络烷酮后，测定结果显示加入加速剂的B/C/D/E组的结果由于没有加入加速剂的A组，消除RF因子干扰的效果更好，说明在试剂1中同时加入了NHS和加速剂后消除RF因子干扰的效果比单独加入NHS的效果更好；另外，在不同的加速剂聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇8000和聚乙烯吡络烷酮之间，不同分子量之间的聚乙二醇效果差别不大。

[0046] 实施例三:含有不同浓度加速剂的脂蛋白a测定试剂实验

[0047] 1.含有不同加速剂的脂蛋白a测定试剂1

[0048] 脂蛋白a测定试剂13-A：100mmol/L TRIS缓冲液，100g/L的氯化钠，50mg/L兔抗人IgG，叠氮化钠1.0g/L，表面活性剂曲拉通3g/L，10g/LNHS，1g/L聚乙二醇4000；

[0049] 脂蛋白a测定试剂13-B、C、D、E、F中各组分与试剂13-A相同，除了加入加速剂聚乙二醇4000浓度不同，它们分别为0.1、0.5、2、4和8g/L聚乙烯吡络烷酮。

[0050] 2.脂蛋白a测定试剂2：20mmol/L硼酸盐缓冲液，0.3g/L兔抗人脂蛋白(a)抗体致敏的胶乳颗粒，0.3g/L生物防腐剂Proclin300，0.5g/L表面活性剂709，5g/L牛血清白蛋白，50g/L蔗糖。

[0051] 3.含有不同类风湿因子含量的脂蛋白a样本制备：在含有420mg/L的脂蛋白a纯品的样品中分别加入不同的RF，配制成含有0、100、200、500、1000IU/mL RF的溶液。

[0052] 以上配制的六种脂蛋白a测定试剂(13-A，13-B，13-C，13-D，13-E，13-F)，对含有0、100、200、500、1000IU/mL的RF的脂蛋白a样本进行检测。

[0053] 表3：脂蛋白a测定试剂盒试验结果

[0054]

[0055] 以上数据可知：当加入不同浓度的聚乙二醇4000后，在0.1-8mg/L的浓度范围中，在0.5-4mg/L范围内测定结果效果更好，说明在试剂1中同时加入了NHS和0.5-4mg/L加速剂聚乙二醇4000后消除RF因子干扰的效果比单独加入NHS的效果更好，同时反应速度也越快。

[0056] 应该理解到披露的本发明不仅仅限于描述的特定的方法、方案和物质，因为这些均可变化。还应理解这里所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方式方案的目的，而不是意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅受限于所附的权利要求。

[0057] 本领域的技术人员还将认识到，或者能够确认使用不超过常规实验，在本文中所述的本发明的具体的实施方案的许多等价物。这些等价物也包含在所附的权利要求中。

标题	发布/更新时间	阅读量
一种抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体	2020-05-11	156
苏丹红III半抗原、偶联抗原、抗体及胶体金快速检测装置及其用途	2020-05-12	919
乙肝病毒(HBV)感染的个体的使用绵羊副痘病毒(PPVO)和至少一种另外的抗病毒药物的组合疗法	2020-05-08	198
一种发掘特异性功能抗体的方法	2020-05-14	156
一种快速检测绵羊LRRFIP1基因CNV标记的方法及其应用	2020-05-13	198
一种抗人心肌肌钙蛋白I的抗体及其应用	2020-05-11	506
一种绵羊皮革鞣制剂的制备方法	2020-05-13	335
恶性卡他热病毒的检测试剂盒、制备方法及其用途	2020-05-13	723
一种氯氮平衍生物及其制备方法与氯氮平检测试剂	2020-05-12	685
一种绵羊脂肪细胞提取袋	2020-05-14	416

抑制类风湿因子干扰的脂蛋白a胶乳增强免疫比浊试剂

抑制类风湿因子干扰的脂蛋白a胶乳增强免疫比浊试剂

技术领域

背景技术

发明内容

具体实施方式

该功能需要专业版企业版VIP权限，您可以：