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用复合生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法

阅读:209发布:2020-05-11

专利汇可以提供用复合生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了用复合 微 生物 菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,包括以下步骤:S1、制备复合微生物A制剂;S2、制备复合微生物B制剂;S3、施用复合微生物制剂:所述的复合微生物A制剂与复合微生物B制剂可同时施用也可分别施用。本发明用组合有益微生物生防菌感染灭活柑橘木虱虫害,切断柑橘黄龙病害传染源;用拮抗柑橘黄龙有害病菌--韧皮部杆菌的组合微生物有益菌,浸染 土壤 、根系、枝叶及柑橘韧皮、枝叶内部,占位、缠绕、灭活病菌,修复残留农化毒害和病菌的土壤,创造绿色、环保、生态恢复的良好环境,使柑橘黄龙病病害得到 预防 和根治。,下面是用复合生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法专利的具体信息内容。

1.用复合生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、制备复合微生物A制剂:将液体白僵菌菌剂、液体绿僵菌菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏金芽孢杆菌菌剂、吸附载体按质量比为:1~3:1~3:1~2:1~2:1~2:5~3进行混合均匀,得到含率≥15%的复合微生物A制剂;
S2、制备复合微生物B制剂:将液体绿色木霉菌剂、液体淡紫色拟青霉菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌剂、吸附载体按照质量比为2~
3:2~3:1~2:1~2:1~3:3~5进行混合均匀,得到含水率≥15%的复合微生物B制剂;
S3、施用复合微生物制剂:所述的复合微生物A制剂与复合微生物B制剂可同时施用也可分别施用,施用方法为:将复合微生物A制剂兑无菌水稀释100~500倍,过滤后,避开柑橘开花座蕾期,对柑橘枝叶全树喷洒及灌根,冬春季预防每月1次,夏秋季木虱爆发期每周1次;
将复合微生物B制剂兑无菌水稀释100~500倍,过滤后,冬春季在柑橘树冠下开环状沟,施放有机肥后,浇淋稀释后的复合微生物B制剂4~8L/株,按亩成片施用最佳,每年施用
1次;若有个别柑橘树有黄龙病早期症状,也可单株加大1-2倍用量施用。
2.如权利要求1所述的用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,其特征在于,所述的复合微生物B制剂还包括微量元素,所述微量元素的添加量为所述的复合微生物B制剂质量的0.1%~0.2%,所述微量元素选自B、Zn、Mn、Cu、Co中任意一种或两种以上的混合物。
3.如权利要求1-2任意一项所述的用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,其特征在于,所述吸附载体为膨化蛭石粉、腐殖酸粉、草炭土中任意一种。
4.如权利要求1-2任意一项所述的用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,其特征在于,所述液体白僵菌菌剂、液体绿僵菌菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌菌剂、液体绿色木霉菌剂、液体淡紫色拟青霉菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌剂中的有效活菌数≥2000万cfu/ml。
5.如权利要求1所述的用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,其特征在于,所述复合微生物A制剂的制备方法具体包括以下步骤:
(1)分别配制白僵菌、绿僵菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌的液体培养基,再分别向五种液体菌培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃,120~140r/min,pH值在6.5~7.5条件下进行菌种的一级扩大培养,得到五种一级A菌液;
(2)再分别取五种一级A菌液向五种所述液体菌培养基中接种各自对应的菌种,在30~
37℃、120~140r/min条件下进行菌种的二级扩大培养,得到五种二级A菌液,其中,每种一级A菌液的接种量为其液体菌培养基质量的0.9~1.1%;
(3)再取五种二级A菌液向五种所述液体菌培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃、120~140r/min条件下进行菌种的三级扩大培养,得到五种三级液体A菌剂,其中,每种二级A菌液的接种量为其三级液体菌培养基质量的1~1.5%;
(4)在对吸附载体灭菌后,将所述五种经过三级扩繁的A菌液依次与吸附载体混合均匀,得到所述复合微生物A制剂。
6.如权利要求1所述的用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,其特征在于,所述复合微生物B制剂的制备方法具体包括以下步骤:
(1)分别配制液体绿色木霉菌剂,液体淡紫色拟青霉菌剂,液体枯草芽孢杆菌菌剂,液体地衣芽孢杆菌菌剂,液体苏云金芽孢杆菌剂的五种液体培养基,再分别向五种液体培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃条件下,进行菌种的一级扩大培养,得到五种一级扩繁B菌液;
(2)再分别取五种一级B菌液向五种所述液体培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃条件下,进行菌种的二级扩大培养,得到五种二级扩繁B菌液,其中,每种一级B菌液的接种量为其液体培养基质量的0.9~1.1%;
(3)再分别取五种二级扩繁B菌液向五种所述液体培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃条件下,进行菌种的三级扩大培养,得到五种三级扩繁B菌液,其中,每种二级B菌液的接种量为其液体培养基质量的1~1.5%;
(4)在对吸附载体灭菌后,将五种三级扩繁B菌液分别与吸附载体混合均匀,得到所述复合微生物B制剂。
7.如权利要求5所述的用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,其特征在于,所述白僵菌菌剂的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:糖蜜
4.0%,蛋白胨1.0%,酵母膏1.0%,磷酸氢二0.15%,硫酸镁0.05%,酸钠0.03%,硫酸锰0.04%,钼酸钠0.05%,硫酸0.08%,硫酸锌0.4%,硫酸亚0.1%,无菌水补足100%;
所述绿僵菌菌剂的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:糖蜜4.0%,蛋白胨1.0%,酵母膏1.0%,磷酸氢二钾0.15%,硫酸镁0.05%,硼酸钠0.03%,硫酸锰0.04%,钼酸钠0.05%,硫酸铜0.08%,硫酸锌0.4%,硫酸亚铁0.1%,无菌水补足
100%;所述枯草芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.5%,磷酸氢二钾0.05%,酵母膏0.05%,肉膏0.02%,蛋白胨0.05%,
0.025%,氯化钠0.02%,硫酸锰0.001%,无菌水补足100%;所述地衣芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.5%,酵母膏1.0%,硫酸镁0.3%,牛肉膏0.1%,蛋白胨0.05%,碳酸钙0.025%,氯化钠0.02%,无菌水补足100%;
所述苏云金芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖2.0%,酵母膏0.5%,硫酸镁0.1%,牛肉膏0.05%,蛋白胨0.5%,碳酸钙0.02%,无菌水补足100%。
8.如权利要求6所述的用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,其特征在于,所述绿色木霉菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖
1.0%,玉米粉1.3%,大豆粉0.5%,磷酸氢二钾0.3%,硝酸铵0.2%,无菌水补足100%;所述淡紫色拟青霉菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组份组成:
葡萄糖1.5%,可溶性淀粉1.0-0.5%,硫酸铵1.0-0.5%,磷酸氢二钾0.1%,硫酸锌0.01%,碳酸钙0.025%,硫酸锰0.001%,无菌水95-97%;所述枯草芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.5%,磷酸氢二钾0.05%,酵母膏
0.05%,牛肉膏0.02%,蛋白胨0.05%,碳酸钙0.025%,氯化钠0.02%,硫酸锰0.001%,无菌水98.7%;所述地衣芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组份所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.5%,酵母膏1.0%,硫酸镁0.3%,牛肉膏0.1%,蛋白胨1.0%,碳酸钙
0.025%,氯化钠0.2%,无菌水97%;所述苏云金芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖2.0%,酵母膏0.5%,硫酸镁0.1%,牛肉膏
0.05%,蛋白胨0.5%,磷酸氢二钾0.03%,磷酸氢二钠0.01%,碳酸钙0.02%,硫酸亚铁
0.002%,无菌水补足100%。
9.如权利要求8所述的用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,其特征在于,所述绿色木霉菌的液体培养基、淡紫色拟青霉菌的液体培养基、枯草芽孢杆菌的液体培养基、地衣芽孢杆菌的液体培养基、苏云金芽孢杆菌的液体培养基的培养条件为:温度28~30℃,初始PH6~7,好震荡培养60-120h,震荡频率120-180r/min。

说明书全文

用复合生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及农业管理技术领域,具体涉及用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法。

背景技术

[0002] 柑橘黄龙病是柑橘黄龙病病原菌--韧皮部杆菌感染引起,对柑橘种植可造成毁灭性的病害。这种病原菌主要由柑橘木虱传播。一般在柑橘树龄2-3年时发病,一旦发病难以根治,不仅使果农几年的辛苦劳作付诸东流,而且还要再花费精把病树整棵挖掉销毁。柑橘黄龙病的难以根治及长期发生,给种植户造成严重损失。仅广西自治区2018年就有71个市县发生柑橘黄龙病灾害,柑橘损失约50万吨,经济损失约10亿元。
[0003] 柑橘黄龙病的防治是世界性难题,到目前尚没有根治的有效方法。现有的技术至少存在以下不足:(1)灭虫与防治病害相互脱节,是造成黄龙病无法根治的原因之一。(2)化学农药与化学杀菌剂或者与微生物制剂组合防治,都会造成因相互排斥抵消而效果不佳。(3)基本上都是使用化学农药,随着害虫和病菌抗药性的增加,化学农药越用越多,致使药残和面源污染严重增加,生态环境遭到破坏。化学农药只是表面作用,对于植株内部深层的病菌无法杀灭,这也是柑橘黄龙病目前无法根治的原因之一。(4)由于对人畜禽及害虫天敌有伤害,对生态环境有污染,在食品中有化学残留,因此应限制用量,不便于大面积施用,难以实现柑橘黄龙病的大规模整片根除。

发明内容

[0004] 针对上述存在的技术不足,本发明的目的是提供用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,用组合有益微生物生防菌感染灭活柑橘木虱虫害,切断柑橘黄龙病害传染源;用拮抗柑橘黄龙有害病菌--韧皮部杆菌的组合微生物有益菌,浸染土壤、根系、枝叶及柑橘韧皮、枝叶内部,占位、缠绕、灭活病菌,修复残留农化毒害和病菌的土壤,创造绿色、环保、生态恢复的良好环境,使柑橘黄龙病病害得到预防和根治。
[0005] 为解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:
[0006] 本发明提供用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,包括以下步骤:
[0007] S1、制备复合微生物A制剂:将液体白僵菌菌剂、液体绿僵菌菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏金芽孢杆菌菌剂、吸附载体按质量比为:1~3:1~3:1~2:1~2:1~2:5~3进行混合均匀,得到含率≥15%的复合微生物A制剂;
[0008] S2、制备复合微生物B制剂:将液体绿色木霉菌剂、液体淡紫色拟青霉菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌剂、吸附载体按照质量比为2~3:2~3:1~2:1~2:1~3:3~5进行混合均匀,得到含水率≥15%的复合微生物B制剂;
[0009] S3、施用复合微生物制剂:所述的复合微生物A制剂与复合微生物B制剂可同时施用也可分别施用,施用方法为:将复合微生物A制剂兑无菌水稀释100~500倍,过滤后,避开柑橘开花座蕾期,对柑橘枝叶全树喷洒及灌根,冬春季预防每月1次,夏秋季木虱爆发期每周1次;
[0010] 将复合微生物B制剂兑无菌水稀释100~500倍,过滤后,冬春季在柑橘树冠下开环状沟,施放有机肥后,浇淋稀释后的复合微生物B制剂4~8L/株,按亩成片施用最佳,每年施用1次;若有个别柑橘树有黄龙病早期症状,也可单株加大1-2倍用量施用。
[0011] 优选地,所述的复合微生物B制剂还包括微量元素,所述微量元素的添加量为所述的复合微生物B制剂质量的0.1%~0.2%,所述微量元素选自B、Zn、Mn、Cu、Co中任意一种或两种以上的混合物。
[0012] 优选地,所述吸附载体为膨化蛭石粉、腐殖酸粉、草炭土中任意一种。
[0013] 优选地,所述液体白僵菌菌剂、液体绿僵菌菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌菌剂、液体绿色木霉菌剂、液体淡紫色拟青霉菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌剂中的有效活菌数≥2000万cfu/ml。
[0014] 优选地,所述复合微生物A制剂的制备方法具体包括以下步骤:
[0015] (1)分别配制白僵菌、绿僵菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌的液体培养基,再分别向五种液体菌培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃,120~140r/min,pH值在6.5~7.5条件下进行菌种的一级扩大培养,得到五种一级A菌液;
[0016] (2)再分别取五种一级A菌液向五种所述液体菌培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃、120~140r/min条件下进行菌种的二级扩大培养,得到五种二级A菌液,其中,每种一级A菌液的接种量为其液体菌培养基质量的0.9~1.1%;
[0017] (3)再取五种二级A菌液向五种所述液体菌培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃、120~140r/min条件下进行菌种的三级扩大培养,得到五种三级液体A菌剂,其中,每种二级A菌液的接种量为其三级液体菌培养基质量的1~1.5%;
[0018] (4)在对吸附载体灭菌后,将所述五种经过三级扩繁的A菌液依次与吸附载体混合均匀,得到所述复合微生物A制剂。
[0019] 优选地,所述复合微生物B制剂的制备方法具体包括以下步骤:
[0020] (1)分别配制液体绿色木霉菌剂,液体淡紫色拟青霉菌剂,液体枯草芽孢杆菌菌剂,液体地衣芽孢杆菌菌剂,液体苏云金芽孢杆菌剂的五种液体培养基,再分别向五种液体培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃条件下,进行菌种的一级扩大培养,得到五种一级扩繁B菌液;
[0021] (2)再分别取五种一级B菌液向五种所述液体培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃条件下,进行菌种的二级扩大培养,得到五种二级扩繁B菌液,其中,每种一级B菌液的接种量为其液体培养基质量的0.9~1.1%;
[0022] (3)再分别取五种二级扩繁B菌液向五种所述液体培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃条件下,进行菌种的三级扩大培养,得到五种三级扩繁B菌液,其中,每种二级B菌液的接种量为其液体培养基质量的1~1.5%;
[0023] (4)在对吸附载体灭菌后,将五种三级扩繁B菌液分别与吸附载体混合均匀,得到所述复合微生物B制剂。
[0024] 优选地,所述白僵菌菌剂的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:糖蜜4.0%,蛋白胨1.0%,酵母膏1.0%,磷酸氢二0.15%,硫酸镁0.05%,酸钠0.03%,硫酸锰0.04%,钼酸钠0.05%,硫酸0.08%,硫酸锌0.4%,硫酸亚0.1%,无菌水补足100%;所述绿僵菌菌剂的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:糖蜜4.0%,蛋白胨1.0%,酵母膏1.0%,磷酸氢二钾0.15%,硫酸镁
0.05%,硼酸钠0.03%,硫酸锰0.04%,钼酸钠0.05%,硫酸铜0.08%,硫酸锌0.4%,硫酸亚铁0.1%,无菌水补足100%;所述枯草芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.5%,磷酸氢二钾0.05%,酵母膏0.05%,肉膏0.02%,蛋白胨0.05%,0.025%,氯化钠0.02%,硫酸锰0.001%,无菌水补足100%;所述地衣芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖
1.5%,酵母膏1.0%,硫酸镁0.3%,牛肉膏0.1%,蛋白胨0.05%,碳酸钙0.025%,氯化钠
0.02%,无菌水补足100%;所述苏云金芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖2.0%,酵母膏0.5%,硫酸镁0.1%,牛肉膏0.05%,蛋白胨0.5%,碳酸钙0.02%,无菌水补足100%。
[0025] 优选地,所述绿色木霉菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.0%,玉米粉1.3%,大豆粉0.5%,磷酸氢二钾0.3%,硝酸铵0.2%,无菌水补足100%;所述淡紫色拟青霉菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组份组成:葡萄糖1.5%,可溶性淀粉1.0-0.5%,硫酸铵1.0-0.5%,磷酸氢二钾0.1%,硫酸锌0.01%,碳酸钙0.025%,硫酸锰0.001%,无菌水95-97%;所述枯草芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.5%,磷酸氢二钾0.05%,酵母膏0.05%,牛肉膏0.02%,蛋白胨0.05%,碳酸钙0.025%,氯化钠0.02%,硫酸锰0.001%,无菌水98.7%;所述地衣芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组份所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.5%,酵母膏1.0%,硫酸镁0.3%,牛肉膏0.1%,蛋白胨1.0%,碳酸钙0.025%,氯化钠0.2%,无菌水97%;所述苏云金芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖2.0%,酵母膏0.5%,硫酸镁
0.1%,牛肉膏0.05%,蛋白胨0.5%,磷酸氢二钾0.03%,磷酸氢二钠0.01%,碳酸钙
0.02%,硫酸亚铁0.002%,无菌水补足100%。
[0026] 优选地,所述绿色木霉菌的液体培养基、淡紫色拟青霉菌的液体培养基、枯草芽孢杆菌的液体培养基、地衣芽孢杆菌的液体培养基、苏云金芽孢杆菌的液体培养基的培养条件为:温度28~30℃,初始PH6~7,好震荡培养60-120h,震荡频率120-180r/min。
[0027] 本发明与现有技术相比具有以下有益效果:
[0028] 1、本发明采用两部分有效组合的微生物,杀灭柑橘木虱和灭活黄龙病菌同时并举,首先切断病菌传染源,使病害不再蔓延,再通过对病菌缠绕、占位、吞噬等有益微生物菌与病菌的竞争,使病菌削弱直至灭活,实现对柑橘黄龙病的防控乃至根治。
[0029] 2、本发明所采用的两部分有效组合的微生物互不拮抗,杀灭柑橘木虱和灭活黄龙病菌协同作战发挥极大的微生物灭菌效果。
[0030] 3、本发明研制的杀灭柑橘木虱的A制剂,是一组有益真菌与有益细菌的组合菌,对柑橘木虱有极大浸染杀灭作用,可以通过接触感染给害虫,害虫之间也能相互传染且害虫无法产生抗药性,对人畜禽及害虫天敌无任何伤害,绿色环保,无化学残留,便于大面积喷施,可以实现大规模整片灭除柑橘木虱。本发明研制的防治柑橘黄龙病的B制剂,也是一组有益真菌与有益细菌的组合菌,对柑橘黄龙病病菌-韧皮部杆菌有极大拮抗和灭活作用,可以通过柑橘的根系、枝干、枝叶乃至于韧皮内部浸染灭活病菌。同样对人畜禽及害虫天敌无任何伤害且病菌不产生抗药性,绿色环保,无化学残留,便于大面积施用,为大规模整片根除柑橘黄龙病做出了可能。

具体实施方式

[0031] 下面将结合本发明实施例中对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
[0032] 实施例1
[0033] 用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,包括以下步骤:
[0034] S1、制备复合微生物A制剂:将液体白僵菌菌剂、液体绿僵菌菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌菌剂、吸附载体按质量比为:1:1:1:1:1:5进行混合均匀,得到含水率≥15%的复合微生物A制剂;
[0035] S2、制备复合微生物B制剂:将液体绿色木霉菌剂、液体淡紫色拟青霉菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌剂、吸附载体按照质量比为2:2:1:1:1:3进行混合均匀,得到含水率≥15%的复合微生物B制剂;
[0036] S3、施用复合微生物制剂:复合微生物A制剂与复合微生物B制剂可同时施用也可分别施用,施用方法为:将复合微生物A制剂兑无菌水稀释300倍,过滤后,避开柑橘开花座蕾期,对柑橘枝叶全树喷洒及灌根,冬春季预防每月1次,夏秋季木虱爆发期每周1次;
[0037] 将复合微生物B制剂兑无菌水稀释300倍,过滤后,冬春季在柑橘树冠下开环状沟,施放有机肥后,浇淋稀释后的复合微生物B制剂4~8L/株,按亩成片施用最佳,每年施用1次;若有个别柑橘树有黄龙病早期症状,也可单株加大1-2倍用量施用。
[0038] 进一步的,复合微生物B制剂还包括微量元素,微量元素的添加量为所述的复合微生物B制剂质量的0.1%~0.2%,微量元素选自B、Zn、Mn、Cu、Co中任意一种或两种以上的混合物。
[0039] 作为进一步的改进,所述吸附载体为膨化蛭石粉、腐殖酸粉、草炭土中任意一种。
[0040] 进一步的,液体白僵菌菌剂、液体绿僵菌菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌菌剂、液体绿色木霉菌剂、液体淡紫色拟青霉菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌剂中的有效活菌数≥2000万cfu/ml。
[0041] 进一步的,复合微生物A制剂的制备方法具体包括以下步骤:
[0042] (1)分别配制白僵菌、绿僵菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌的液体培养基,再分别向五种液体菌培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃,120~140r/min,pH值在6.5~7.5条件下进行菌种的一级扩大培养,得到五种一级A菌液;
[0043] (2)再分别取五种一级A菌液向五种所述液体菌培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃、120~140r/min条件下进行菌种的二级扩大培养,得到五种二级A菌液,其中,每种一级A菌液的接种量为其液体菌培养基质量的0.9~1.1%;
[0044] (3)再取五种二级A菌液向五种所述液体菌培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃、120~140r/min条件下进行菌种的三级扩大培养,得到五种三级液体A菌剂,其中,每种二级A菌液的接种量为其三级液体菌培养基质量的1~1.5%;
[0045] (4)在对吸附载体灭菌后,将所述五种经过三级扩繁的A菌液依次与吸附载体混合均匀,得到所述复合微生物A制剂。
[0046] 作为进一步的改进,所述复合微生物B制剂的制备方法具体包括以下步骤:
[0047] (1)分别配制液体绿色木霉菌剂,液体淡紫色拟青霉菌剂,液体枯草芽孢杆菌菌剂,液体地衣芽孢杆菌菌剂,液体苏云金芽孢杆菌剂的五种液体培养基,再分别向五种液体培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃条件下,进行菌种的一级扩大培养,得到五种一级扩繁B菌液;
[0048] (2)再分别取五种一级B菌液向五种所述液体培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃条件下,进行菌种的二级扩大培养,得到五种二级扩繁B菌液,其中,每种一级B菌液的接种量为其液体培养基质量的0.9~1.1%;
[0049] (3)再分别取五种二级扩繁B菌液向五种所述液体培养基中接种各自对应的菌种,在30~37℃条件下,进行菌种的三级扩大培养,得到五种三级扩繁B菌液,其中,每种二级B菌液的接种量为其液体培养基质量的1~1.5%;
[0050] (4)在对吸附载体灭菌后,将五种三级扩繁B菌液分别与吸附载体混合均匀,得到所述复合微生物B制剂。
[0051] 作为进一步的改进,所述白僵菌菌剂的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:糖蜜4.0%,蛋白胨1.0%,酵母膏1.0%,磷酸氢二钾0.15%,硫酸镁0.05%,硼酸钠0.03%,硫酸锰0.04%,钼酸钠0.05%,硫酸铜0.08%,硫酸锌0.4%,硫酸亚铁0.1%,无菌水补足100%;所述绿僵菌菌剂的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:糖蜜4.0%,蛋白胨1.0%,酵母膏1.0%,磷酸氢二钾0.15%,硫酸镁0.05%,硼酸钠0.03%,硫酸锰0.04%,钼酸钠0.05%,硫酸铜0.08%,硫酸锌0.4%,硫酸亚铁0.1%,无菌水补足100%;所述枯草芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.5%,磷酸氢二钾0.05%,酵母膏0.05%,牛肉膏0.02%,蛋白胨0.05%,碳酸钙0.025%,氯化钠0.02%,硫酸锰0.001%,无菌水补足100%;
所述地衣芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:
蔗糖1.5%,酵母膏1.0%,硫酸镁0.3%,牛肉膏0.1%,蛋白胨0.05%,碳酸钙0.025%,氯化钠0.02%,无菌水补足100%;所述苏云金芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖2.0%,酵母膏0.5%,硫酸镁0.1%,牛肉膏0.05%,蛋白胨0.5%,碳酸钙0.02%,无菌水补足100%。
[0052] 作为进一步的改进,绿色木霉菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.0%,玉米粉1.3%,大豆粉0.5%,磷酸氢二钾0.3%,硝酸铵0.2%,无菌水补足100%;所述淡紫色拟青霉菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组份组成:葡萄糖1.5%,可溶性淀粉1.0-0.5%,硫酸铵1.0-0.5%,磷酸氢二钾0.1%,硫酸锌0.01%,碳酸钙0.025%,硫酸锰0.001%,无菌水95-97%;所述枯草芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.5%,磷酸氢二钾0.05%,酵母膏0.05%,牛肉膏0.02%,蛋白胨0.05%,碳酸钙0.025%,氯化钠
0.02%,硫酸锰0.001%,无菌水98.7%;所述地衣芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组份所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1.5%,酵母膏1.0%,硫酸镁0.3%,牛肉膏
0.1%,蛋白胨1.0%,碳酸钙0.025%,氯化钠0.2%,无菌水97%;所述苏云金芽孢杆菌的液体培养基配方,按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖2.0%,酵母膏
0.5%,硫酸镁0.1%,牛肉膏0.05%,蛋白胨0.5%,磷酸氢二钾0.03%,磷酸氢二钠0.01%,碳酸钙0.02%,硫酸亚铁0.002%,无菌水补足100%。
[0053] 作为进一步的改进,绿色木霉菌的液体培养基、淡紫色拟青霉菌的液体培养基、枯草芽孢杆菌的液体培养基、地衣芽孢杆菌的液体培养基、苏云金芽孢杆菌的液体培养基的培养条件为:温度28~30℃,初始PH6~7,好氧震荡培养60-120h,震荡频率120-180r/min。
[0054] 实验地点:广西壮族自治区武鸣县双桥乡跃进村覃家柑橘园
[0055] 实验时间:2018年3-6月
[0056] 实施情况:农户覃大叔种植3亩沃柑,树龄第3年,每亩种植50~60株。去年3月农户发现柑橘地里2株树有部分叶片变黄,叶质硬化,重点观察几天,黄化持续发展,形成黄绿相间一片斑驳黄化的症状。在病树和周围30米左右还没有染病的树叶上发现有少量柑橘木虱。请农技专业人员来看,确定是黄龙病中期。农户将其中1株较严重的病树挖掉并烧毁。对剩余的1株发病程度约50%的病树开始用A制剂和B制剂实施治疗,具体采取以下方法:在树冠投影地面上开30x30cm深x宽的环状沟,沟内先均匀撒施有机肥5kg,然后将已经用清水稀释300倍的B菌剂5L均匀浇灌在沟内的有机肥上,然后覆土。同时,将已经用清水稀释300倍的A菌剂,在无、无雨、阳光不强烈暴晒的下午4点之后,对这株有黄龙病柑橘树及周围的40株柑橘从树冠到树根全树及树周围的土壤进行喷洒,每周1次(避开沃柑的开花座蕾期)。
一共喷洒6次。
[0057] 实验结果:经观察,20天时病树黄叶已开始减少,原来的黄叶叶片基部和叶缘开始泛绿,许多叶片的叶脉由黄白色变成淡绿色。枝叶间没有看到再有木虱,树下地面上发现已经死亡的柑橘木虱。60天时,病树除了少量已经干瘪的几片黄叶外,新鲜的树叶已经全部变为深绿色,已经没有活的木虱,沃柑开花座蕾正常,已经完全没有柑橘黄龙病的症状。这株治好的病树,收获时挂果22kg,已经完全治愈。这株树周围的柑橘树也都生长良好,没有被感染黄龙病。施过A、B两种菌剂的40株柑橘树,与同地的其它柑橘树对比,长势好,沃柑产量增加约10%以上,而且品质和口感明显提高。
[0058] 实施例2
[0059] 用复合微生物菌剂生态防治柑橘黄龙病的方法,包括以下步骤:
[0060] S1、制备复合微生物A制剂:将液体白僵菌菌剂、液体绿僵菌菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌菌剂、吸附载体按质量比为:3:3:2:2:2:3进行混合均匀,得到含水率≥15%的复合微生物A制剂;
[0061] S2、制备复合微生物B制剂:将液体绿色木霉菌剂、液体淡紫色拟青霉菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌剂、吸附载体按照质量比为3:3:2:2:3:5进行混合均匀,得到含水率≥15%的复合微生物B制剂;
[0062] S3、施用复合微生物制剂:复合微生物A制剂与复合微生物B制剂可同时施用也可分别施用,施用方法为:将复合微生物A制剂兑无菌水稀释500倍,过滤后,避开柑橘开花座蕾期,对柑橘枝叶全树喷洒及灌根,冬春季预防每月1次,夏秋季木虱爆发期每周1次;
[0063] 将复合微生物B制剂兑无菌水稀释300倍,过滤后,冬春季在柑橘树冠下开环状沟,施放有机肥后,浇淋稀释后的复合微生物B制剂4~8L/株,按亩成片施用最佳,每年施用1次;若有个别柑橘树有黄龙病早期症状,也可单株加大1-2倍用量施用。
[0064] 进一步的,复合微生物B制剂还包括微量元素,微量元素的添加量为所述的复合微生物B制剂质量的0.1%~0.2%,微量元素选自B、Zn、Mn、Cu、Co中任意一种或两种以上的混合物。
[0065] 作为进一步的改进,吸附载体为膨化蛭石粉、腐殖酸粉、草炭土中任意一种。
[0066] 进一步的,液体白僵菌菌剂、液体绿僵菌菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌菌剂、液体绿色木霉菌剂、液体淡紫色拟青霉菌剂、液体枯草芽孢杆菌菌剂、液体地衣芽孢杆菌菌剂、液体苏云金芽孢杆菌剂中的有效活菌数≥2000万cfu/ml。
[0067] 进一步的,复合微生物A制剂、复合微生物B制剂的制备方法同实施例1;
[0068] 进一步的,白僵菌菌剂和绿色木霉菌的液体培养基配方同实施例1。
[0069] 进一步的,绿色木霉菌的液体培养基、淡紫色拟青霉菌的液体培养基、枯草芽孢杆菌的液体培养基、地衣芽孢杆菌的液体培养基、苏云金芽孢杆菌的液体培养基的培养条件同实施例1。
[0070] 实验地点:广西壮族自治区武鸣县红岭乡小林村韦场长柑橘园
[0071] 实验时间:2018年3-12月
[0072] 实验品种:砂糖橘
[0073] 实施情况:柑橘种植大户韦老板租了20目亩山坡地种植砂糖橘,树龄已是第4年,每亩种植50~60株。2018年3月农户发现橘子园里有些树冠中发生少量黄梢,在浓绿的树冠丛中十分显眼。这种情况的树在位于橘园岭底的1.3亩地里分布有20株。而且还发现在枝叶中有很多木虱。经植保专业人员确定是黄龙病早期。4月初,开始对岭底的1.3亩地的整个小片区进行防治。用A制剂和B制剂对已经发病的柑橘树实施治疗,对尚未发病的柑橘树展开防控。具体采取以下方法:1、结合花前整枝复剪,尽量把发病的枝叶剪除。2、在4月初砂糖橘开花现蕾前,将已经用清水稀释500倍的A菌剂,在避开风雨和阳光暴晒的条件下,对这1.3亩小片区全部柑橘从树冠到树根全树及树周围的土壤进行1次喷洒。5月下旬砂糖橘坐果后开始继续喷洒,每月喷洒1~3次,一共喷洒7次。3、在每株柑橘树的树冠投影地面上开30x30cm深x宽的环状沟,沟内先均匀撒施有机肥5kg,然后将已经用清水稀释300倍的B菌剂
5~10L均匀浇灌在沟内的有机肥上(对已发病的浓度和用量可酌情增加),然后覆土。
[0074] 实验结果:1个月后,病树树冠上没有剪掉的黄叶已开始减少,原来卷曲变形的黄叶叶片许多已舒展变绿。但仍有少量木虱,估计是邻地打农药从那边跑过来的,4个月后,树叶已经全部变为深绿色,已经完全没有柑橘黄龙病的症状。
[0075] 显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
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