肠道健康促进组合物
阅读：85发布：2020-05-08
专利汇可以提供肠道健康促进组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且公开并描述了用于促进肠道健康的组合物。在一个实例中，该组合物可以包括矢车菊素和花翠素的组合，其量足以 治疗 肠道通透性过高。在另一个实例中，该组合物可进一步包括益生素掺混物和寡聚果糖。本文进一步提出治疗对象中与胃肠道健康相关的状况或障碍的方法。在一个实例中，该方法可以包括使对象胃肠道上皮细胞中的紧密连接完整性最大化。，下面是肠道健康促进组合物专利的具体信息内容。
1.肠道健康促进组合物，其包含足以治疗肠道通透性过高的量的矢车菊素和花翠素的组合。
2.权利要求1所述的组合物，其中所述矢车菊素和所述花翠素共同以维持肠道通透性的量存在。
3.权利要求1所述的组合物，其中所述矢车菊素和所述花翠素共同以减轻肠道通透性过高的量存在。
4.权利要求1所述的组合物，其中所述矢车菊素和所述花翠素中的至少一种的来源源自黑米组分、蓝莓组分、黑醋栗组分、岩高兰组分、越桔组分、野樱莓组分或其组合。
5.权利要求4所述的组合物，其中所述矢车菊素和所述花翠素的来源源自黑米组分、蓝莓组分和黑醋栗组分。
6.权利要求4所述的组合物，其中所述组合物包括黑米组分，并且所述黑米组分源自选自黑米粒、黑米浓缩物、黑米提取物、黑米粉或其组合的成员。
7.权利要求6的组合物，其中所述黑米组分是黑米提取物。
8.权利要求7所述的组合物，其中所述黑米提取物源自黑米粒。
9.权利要求6的组合物，其中所述黑米组分占所述组合物的活性部分的约2.5wt％至约
20wt％。
10.权利要求6的组合物，其中所述黑米组分占所述组合物的活性部分的约10wt％至约
15wt％。
11.权利要求6的组合物，其中所述黑米组分占所述组合物的活性部分的约2.5wt％至约7.5wt％。
12.权利要求6所述的组合物，其中所述黑米组分具有约10wt％至约30wt％范围的标准化花青素含量。
13.权利要求6的组合物，其中所述黑米组分具有约20wt％的标准化花青素含量。
14.权利要求6的组合物，其中所述黑米组分具有约25wt％的标准化花青素含量。
15.权利要求6所述的组合物，其中所述黑米组分源自Oryza sativa L。
16.权利要求4所述的组合物，其中所述组合物包含蓝莓组分，并且所述蓝莓组分包括选自蓝莓果、蓝莓提取物、蓝莓浓缩物、蓝莓汁、蓝莓粉或其组合的成员。
17.权利要求16的组合物，其中所述蓝莓组分是蓝莓粉。
18.权利要求16的组合物，其中所述蓝莓组分是蓝莓汁。
19.权利要求16的组合物，其中所述蓝莓组分占所述组合物的活性部分的约1wt％至约
30wt％。
20.权利要求16的组合物，其中蓝莓组分占所述组合物的活性部分的约1wt％至约
10wt％。
21.权利要求16所述的组合物，其中所述蓝莓组分占所述组合物的活性部分的约
25wt％至约30wt％。
22.权利要求16所述的组合物，其中所述蓝莓组分具有约0.5wt％至约30wt％范围的标准化花青素含量。
23.权利要求16所述的组合物，其中所述蓝莓组分具有约0.5wt％至约5wt％范围的标准化花青素含量。
24.权利要求16所述的组合物，其中所述蓝莓组分具有约20wt％至约30wt％范围的标准化花青素含量。
25.权利要求16所述的组合物，其中，所述蓝莓组分源自Vaccinium uliginosum L。
26.权利要求4所述的组合物，其中所述组合物包含黑醋栗组分，并且所述黑醋栗组分包括选自黑醋栗果、黑醋栗提取物、黑醋栗浓缩物、黑醋栗汁、黑醋栗粉或其组合的成员。
27.权利要求26的组合物，其中所述黑醋栗组分是黑醋栗提取物。
28.权利要求26的组合物，其中所述黑醋栗组分占活性部分的约0.5wt％至约15wt％。
29.权利要求26的组合物，其中所述黑醋栗组分占活性部分的约1wt％至约5wt％。
30.权利要求26所述的组合物，其中所述黑醋栗组分具有约20wt％至约40wt％范围的标准化花青素含量。
31.权利要求26的组合物，其中所述黑醋栗组分具有约30wt％的标准花青素含量。
32.权利要求26所述的组合物，其中所述黑醋栗组分源自Ribes nigrum。
33.权利要求4所述的组合物，其中所述组合物包含岩高兰组分，并且所述岩高兰组分包括选自岩高兰果、岩高兰提取物、岩高兰浓缩物、岩高兰汁、岩高兰粉或其组合的成员。
34.权利要求33所述的组合物，其中所述岩高兰组分包括岩高兰果。
35.权利要求33所述的组合物，其中所述岩高兰组分包括岩高兰提取物。
36.权利要求33的组合物，其中所述岩高兰组分占所述组合物的活性部分的约1wt％至约30wt％。
37.权利要求33所述的组合物，其中所述岩高兰组分占所述组合物的约5wt％至
25wt％。
38.权利要求33所述的组合物，其中所述岩高兰组分具有约40wt％至约50wt％范围的标准花青素含量。
39.权利要求33所述的组合物，其中所述岩高兰组分具有约46.7wt％的标准化花青素含量。
40.权利要求28所述的组合物，其中所述岩高兰组分源自Empetrum nigrum。
41.权利要求4所述的组合物，其中所述组合物包含越桔组分，并且所述越桔组分包括选自越桔果、越桔提取物、越桔浓缩物、越桔汁、越桔粉或其组合的成员。
42.权利要求41所述的组合物，其中所述越桔组分包括越桔提取物。
43.权利要求41所述的组合物，其中所述越桔组分的范围为所述组合物的活性部分的约0.5wt％至约30wt％。
44.权利要求41所述的组合物，其中所述越桔组分的范围为所述组合物的约2wt％至约
20wt％。
45.权利要求41所述的组合物，其中所述越桔组分具有约1wt％至约30wt％范围的标准化花青素含量。
46.权利要求41所述的组合物，其中所述越桔组分具有约5wt％至约15wt％范围的标准化花青素含量。
47.权利要求41所述的组合物，其中所述越桔组分包括通过HPLC测量的36wt％花青素或通过UV测量的25wt％花青素。
48.权利要求41所述的组合物，其中所述越桔组分源自Vaccinium myrtillus。
49.权利要求4所述的组合物，其中所述矢车菊素和所述花翠素中的至少一种的来源源自黑米组分、蓝莓组分和黑醋栗组分。
50.权利要求49所述的组合物，其中所述黑米组分、所述蓝莓组分和所述黑醋栗组分的比例为约1∶1∶1。
51.权利要求49所述的组合物，其中所述黑米组分、所述蓝莓组分和所述黑醋栗组分的比例为约1∶1.4∶4.3。
52.权利要求1的组合物，进一步包含益生素掺混物。
53.权利要求52所述的组合物，其中所述益生素掺混物包含菊粉。
54.权利要求53所述的组合物，其中所述菊粉是具有果糖单元通过β(2-1)键连接的寡糖和多糖的菊苣菊粉。
55.权利要求53的组合物，其中所述菊粉源自香蕉、洋葱、面粉、大蒜、芦笋、小麦、黑麦、韭菜、菊苣根、甜菜或其组合。
56.权利要求53的组合物，其中所述菊粉占所述组合物的约15wt％至约60wt％。
57.权利要求53的组合物，其中所述菊粉占所述组合物的约15wt％至约25wt％。
58.权利要求53的组合物，其中所述菊粉占所述组合物的约40wt％至约60wt％。
59.权利要求52所述的组合物，其中益生素掺混物包含寡聚果糖。
60.权利要求59所述的组合物，其中所述寡聚果糖是短链寡聚果糖(DP≤5)。
61.权利要求60所述的组合物，其中所述短链寡聚果糖源自蔗糖。
62.权利要求60所述的组合物，其中所述短链寡聚果糖源自甘蔗。
63.权利要求59所述的组合物，其中所述寡聚果糖占所述组合物的活性部分的约
10wt％至约40wt％。
64.权利要求59所述的组合物，其中所述寡聚果糖占所述组合物的活性部分的约
10wt％至约20wt％。
65.权利要求59所述的组合物，其中所述寡聚果糖占所述组合物的活性部分的约
25wt％至约40wt％。
66.权利要求59所述的组合物，其中所述寡聚果糖包含半乳寡聚糖。
67.权利要求1的组合物，进一步包含菊粉和寡聚果糖的益生素掺混物。
68.权利要求67所述的组合物，其中所述菊粉和寡聚果糖共同占所述组合物的约
55wt％至约95wt％。
69.权利要求67所述的组合物，其中所述矢车菊素和所述花翠素的组合来源占所述组合物的约5wt％至约50wt％。
70.权利要求1的组合物，进一步包含药学上可接受的载体。
71.权利要求1的组合物，进一步包含甜味剂、防腐剂、调味剂、增稠剂或其组合。
72.权利要求1的组合物，其中所述组合物是口服剂型。
73.权利要求72所述的组合物，其中所述口服剂型包括胶囊、片剂、粉末、饮料、糖浆、口香糖、薄片、糖果、悬浮液或食物。
74.权利要求72所述的组合物，其中所述口服剂型包括粉末。
75.权利要求72所述的组合物，其中所述口服剂型设计成每天一次被给予有需要的对象。
76.权利要求75所述的组合物，其中所述口服剂型设计成在早晨被给予所述对象。
77.权利要求72所述的组合物，其中所述口服剂型包括选自以下的成员：黑米组分、蓝莓组分、黑醋栗组分、岩高兰组分、越桔组分、野樱莓组分或其组合。
78.权利要求77所述的组合物，其中所述口服剂型包含黑米组分，并且所述黑米组分的范围为所述口服剂型的约500mg至约800mg。
79.权利要求78的组合物，其中所述黑米组分具有约15wt％至约30wt％的标准化花青素含量。
80.权利要求77的组合物，其中所述口服剂型包含蓝莓组分，并且所述蓝莓组分占所述口服剂型的约100mg至约3,000mg。
81.权利要求80的组合物，其中所述蓝莓组分具有约0.5wt％至约25wt％的标准化花青素含量。
82.权利要求77的组合物，其中所述口服剂型包含黑醋栗组分，并且所述黑醋栗组分占所述口服剂型的约200mg至约3,000mg。
83.权利要求82所述的组合物，其中所述黑醋栗组分具有约2.5wt％至约30wt％的标准化花青素含量。
84.权利要求77的组合物，其中所述口服剂型包含岩高兰组分，并且所述岩高兰组分占所述口服剂型的约100mg至约1,000mg。
85.权利要求84所述的组合物，其中所述岩高兰组分具有约1wt％至约30wt％的标准化花青素含量。
86.权利要求77所述的组合物，其中所述口服剂型包含越桔组分，并且所述越桔组分的范围为所述口服剂型的约100mg至约700mg。
87.权利要求86所述的组合物，其中所述越桔组分具有约30wt％至约40wt％的标准化花青素含量。
88.权利要求77所述的组合物，其中所述口服剂型包含野樱莓组分，并且所述野樱莓组分的范围为所述口服组合物的约50mg至约700mg。
89.权利要求88所述的组合物，其中所述野樱莓组分具有约1wt％至约35wt％的标准化花青素含量。
90.权利要求77的组合物，其中所述口服剂型进一步包含益生素掺混物。
91.权利要求90所述的组合物，其中所述益生素掺混物占所述口服剂型的约1克至2克。
92.权利要求91的组合物，其中所述益生素掺混物在所述口服剂型中提供约1克至约2克纤维。
93.权利要求77的组合物，其中所述口服剂型进一步包含寡聚果糖。
94.权利要求93所述的组合物，其中所述寡聚果糖占所述口服剂型的约1克至约1.5克。
95.权利要求93所述的组合物，其中所述寡聚果糖占所述口服剂型的约3克至约4克。
96.权利要求72所述的组合物，其中所述口服剂型包含约200mg至约300mg的花青素。
97.治疗对象中与胃肠道健康相关的状况或障碍的方法，包括最大化所述对象的胃肠道上皮细胞的紧密连接完整性。
98.权利要求97所述的方法，其中改善所述对象的胃肠道健康。
99.权利要求98所述的方法，其中所述对象的胃肠道健康改善包括所述对象的排便习惯改善。
100.权利要求98所述的方法，其中所述对象的胃肠道健康改善包括减少所述对象的胃气胀、不适、矢气或其组合。
101.权利要求98所述的方法，其中所述对象的胃肠道健康改善包括减轻肠道通透性过高。
102.权利要求98所述的方法，其中所述对象的胃肠道健康改善包括肠道失调减少。
103.权利要求98所述的方法，其中所述对象的胃肠道健康改善包括钙卫蛋白粪便水平降低。
104.权利要求98所述的方法，其中所述对象的胃肠道健康改善包括短链脂肪酸水平增加。
105.权利要求97所述的方法，其中所述状况或障碍包括炎症、炎性肠病、肠易激综合征、慢性肠道疾病、腹部疾病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、食物不耐受、消化不良、低水平慢性肠道炎症、胃肠道感染或其组合。
106.权利要求105所述的方法，其中所述炎症总体减少。
107.权利要求106所述的方法，其中所述炎症减少上至73％。
108.权利要求75所述的方法，其中3周的补充导致炎症生物标志物适度减少。
109.权利要求97所述的方法，其中所述状况或障碍包括营养物吸收不足、内毒素血症、肠道通透性过高或其组合。
110.权利要求97所述的方法，其中所述状况或障碍包括肥胖、肥胖相关病理、过敏、心血管状况、I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿关节炎、胰岛素抵抗、癌症、代谢综合征、哮喘、神经变性疾病或其组合。
111.权利要求97所述的方法，其中所述状况或障碍是心血管状况。
112.权利要求111所述的方法，其中所述心血管状况是未服用心血管药物的对象的高密度脂蛋白胆固醇增加。
113.权利要求111所述的方法，其中所述心血管状况包括HbA1c水平降低。
114.权利要求113所述的方法，其中HbA1c水平降低是从糖尿病前期水平到正常水平。
115.权利要求111所述的方法，其中所述心血管状况包括血浆连蛋白水平降低。
116.权利要求97所述的方法，其中所述状况是外周胰岛素抵抗，并且所述方法降低外周胰岛素抵抗。
117.权利要求97所述的方法，其中所述状况或障碍是I型糖尿病或II型糖尿病。
118.权利要求97所述的方法，其中所述状况或障碍包括一氧化氮相关障碍、iNOS的表达、COX-2、NADPH氧化酶的表达或其组合。
119.权利要求97所述的方法，其中所述状况或障碍来源于通过胃肠道上皮细胞的紧密连接的病原体、抗原和促炎因子。
120.权利要求97所述的方法，其中最大化紧密连接完整性包括保护所述对象的胃肠道免受TNFα诱导的上皮细胞单层通透化。
121.权利要求120所述的方法，其中保护量是对所述对象的胃肠道中的矢车菊素和花翠素量浓度依赖性的。
122.权利要求97所述的方法，其中所述方法还包括增加所述上皮细胞的跨上皮电阻。
123.权利要求97所述的方法，其中所述方法还包括增加FITC葡聚糖旁细胞转运。
124.权利要求97所述的方法，其中所述状况来源于促炎因子，并且所述促炎因子包括晚期糖基化终产物。
125.权利要求97所述的方法，其中所述状况来源于促炎因子，并且所述促炎因子包括脂多糖。
126.权利要求97所述的方法，其中所述状况来源于促炎因子，并且所述促炎因子包括细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6或其组合。
127.权利要求97所述的方法，其中所述状况或障碍涉及与信号传导途径NF-kB、ERK1/2或其组合相关的状况或障碍。
128.权利要求97所述的方法，其中所述紧密连接完整性的最大化减轻高脂肪诱导的肠道通透化。
129.权利要求97所述的方法，其中所述上皮细胞包括Caco-2细胞单层。
130.权利要求97所述的方法，其中所述方法还包括优化胃肠道中肠道微生物群的平衡。
131.权利要求130所述的方法，其中优化肠道微生物群的平衡包括增加胃肠道中的共生细菌水平。
132.权利要求131所述的方法，其中所述共生细菌属于双歧杆菌(bifidobacteria)属。
133.权利要求131所述的方法，其中所述共生细菌属于拟杆菌门(bacteroidetes)。
134.权利要求131所述的方法，其中所述共生细菌包括粪便拟杆菌(bacterdies caccae)、单形拟杆菌(bacteriodes uniformis)或其组合。
135.权利要求131所述的方法，其中在每日向有需要的对象施用所述方法8周后，所述共生细菌的增加为至少20％。
136.权利要求130所述的方法，其中优化肠道微生物群的平衡包括增加细菌的多样性。
137.权利要求136所述的方法，其中所述细菌的多样性包括至少200个菌种。
138.权利要求130所述的方法，其中所述方法还包括减少有害肠道细菌。
139.权利要求138所述的方法，其中所述有害肠道细菌包括厚壁菌门(firmicutes)。
140.权利要求139所述的方法，其中在每日向所述对象施用所述方法8周后，所述厚壁菌门的减少大于15％的减少。
141.权利要求140所述的方法，其中在向所述对象施用所述方法8周后，厚壁菌门∶拟杆菌门比例降低约3％。
142.权利要求138所述的方法，其中所述有害肠道细菌包括放线菌(Actinobacteria)。
143.权利要求142所述的方法，其中在每日向所述对象施用所述方法8周后，所述放线菌的减少为至少5％。
144.权利要求138所述的方法，其中所述有害肠道细菌包括幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)。
145.权利要求138所述的方法，其中所述有害肠道细菌包括梭菌(Clostridium)。
146.权利要求138所述的方法，其中所述有害肠道细菌包括克雷伯菌(Klebisella)。
147.权利要求97所述的方法，其中所述方法包括为共生细菌提供燃料来源。
肠道健康促进组合物
[0001] 政府利益
[0002] 本发明的部分研究是在国家食品和农业研究所(National Institute of Food and Agriculture)的资助下在政府支持下进行的。政府在本发明中具有某些权利。
背景技术
[0003] 胃肠道系统是组织、器官、宿主细胞和细菌细胞的复杂网络。衰老、饮食、药物、肠道微生物群的破坏以及个体的生活方式情况可对该网络产生负面作用。这些作用可以包括破坏肠道微生物群的平衡、增加胃肠道组织中的炎症、以及破坏胃肠道系统的上皮细胞屏障。这些作用最终可能导致系统性(全身性，systemic)问题。促进和恢复肠道健康的制剂和方法将提供益处。附图说明
[0004] 本发明的特征和优点将从下面的详细描述中显而易见，并且详细描述结合附图一起示例本发明的特征。应理解，这些图仅仅描述了示例性实施方式和结果，因此不应被视为在范围上的限制。
[0005] 图1示意性地显示人胃肠道和相关结构；
[0006] 图2示意性地显示小肠和内衬肠道的上皮细胞层；
[0007] 图3示意性地显示了上皮细胞中紧密连接(tight junction)的概观及在紧密连接屏障被破坏时其系统性影响；
[0008] 图4示意性地显示肠上皮细胞层、紧密连接、旁细胞途径(paracellular pathway)和跨细胞途径；
[0009] 图5示意性地显示矢车菊素(cyanidin)的化学结构；
[0010] 图6示意性地显示了花翠素(delphinidin)的化学结构；
[0011] 图7示意性地显示了矮牵牛素(petunidin)的化学结构；
[0012] 图8示意性地显示芍药花青素(peonidin)的化学结构；
[0013] 图9示意性地显示锦葵色素(malvidin)的化学结构；
[0014] 图10图形地显示根据本公开的一个实例的经上皮电阻(TEER)方法；
[0015] 图11图形地显示根据本公开的一个实例的用于各种提取物的TEER电阻；
[0016] 图12图形地显示根据本公开的一个实例的用于各种提取物的旁细胞转运；
[0017] 图13图形地显示根据本公开的一个实例的用于各种提取物的TEER电阻；
[0018] 图14图形地显示根据本公开的一个实例的用于各种提取物的PCP FITC-葡聚糖；
[0019] 图15图形地显示根据本公开的一个实例的用于矢车菊素的TEER电阻；
[0020] 图16图形地显示根据本公开的一个实例的用于花翠素的TEER电阻；
[0021] 图17和18图形地显示根据本公开的一个实例的用于表儿茶素的TEER电阻；
[0022] 图19图形地显示根据本公开的一个实例的用于儿茶素的TEER电阻；
[0023] 图20图形地显示根据本公开的一个实例的用于总儿茶素的TEER电阻；
[0024] 图21图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的平均结肠长度；
[0025] 图22图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的平均结肠重量；
[0026] 图23图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的平均结肠重量/长度；
[0027] 图24图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的增重和FITC葡聚糖通透性；
[0028] 图25图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的FITC-DX旁细胞转运；
[0029] 图26图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的内毒素测量水平；
[0030] 图27图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的GTT(AUC)测量水平；
[0031] 图28图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的ITT(AUC)测量水平；
[0032] 图29图形地显示根据本文所示的一个实例测量的内毒素和葡萄糖耐受性测试水平；
[0033] 图30图形地显示根据本文所示的一个实例测量的内毒素和空腹胰岛素水平；
[0034] 图31图形地显示根据本文所示的一个实例测量的内毒素和IL-6测试水平；
[0035] 图32图形地显示根据本文所示的一个实例测量的内毒素和IL-1β水平；
[0036] 图33图形地显示根据本文所示的一个实例测量的内毒素和IL-1α测试水平；
[0037] 图34图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的HOMA-IR测量水平；
[0038] 图35图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的脂联素(adiponectin)测量水平；
[0039] 图36图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的瘦素测量水平；
[0040] 图37和38图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的甘油三酯测量水平；
[0041] 图39和40图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的胆固醇测量水平；
[0042] 图41图形地显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的肝甘油三酯测量水平；
[0043] 图42摄影显示根据本文所示的一个实例的从在安乐死前被喂食不同饮食的小鼠中提取的小鼠肝脏；
[0044] 图43摄影显示根据本文所示的一个实例的基于不同饮食的小鼠的粪便；
[0045] 图44图形地显示在补充本文所示的组合物之后的肠道微生物组(microbiome)的平均厚壁菌门(firmicutes)：拟杆菌门(bacterodetes)比例；
[0046] 图45图形地显示在补充本文所示的组合物之后的钙卫蛋白(calprotectin)浓度；
[0047] 图46图形地显示在补充本文所示的组合物之后的基线BSS评分和肠道运动的变化；和
[0048] 图47图形地显示在补充本文所示的组合物之后的胃气胀(bloating)、腹痛和矢气(gas)的基线评分变化。
具体实施方式
[0049] 在公开和描述本发明的实施方式之前，应理解，不意图受限于本文中所公开的具体结构、工艺步骤或材料，而还包括相关领域普通技术人员所认识到的其等同形式。还应理解，这里所使用的术语仅用于描述具体的实例，而不是意图限制。除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语均具有与本公开所属领域普通技术人员的普遍理解相同的含义。在说明书和所附权利要求中，除非上下文明确另有规定，单数形式包括复数指代。
[0050] 如本文所使用的，单数形式“一个或一种(a，an)”、“该或所述(the)”具体地为复数指代提供了明确的支持，除非内容明确另有规定。例如，“一种益生素纤维”(“a prebioticfiber”)为一种或多种益生素纤维提供支持。
[0051] 这里使用的术语“约”是指偏差程度。其意味着大致，在某个范围内，大致或左右。当术语“约”与数值范围一起使用时，其通过将界限延伸到略高于所述数值和略低于所述数值来改动该范围。应理解，在本说明书中，对于与术语“约”联用的数值的支持也被提供给该确切的数值本身，如同没有使用“约”。
[0052] 浓度、量和其它数值数据可以在这里以范围形式表示或呈现。应当理解，这种范围形式仅为了方便和简洁而使用，因此应当被灵活地解释为不仅包括明确描述为范围的极限或端点的数值，而且还包括该范围内包括的所有个体数值和/或子范围，如同每个数值(包括分数)和子范围是被明确描述。作为示例，“约1至约5”的数值范围应被解释为不仅包括被明确描述的数值约1至约5，而且还包括在所示范围内的个体数值和子范围。因此，该数值范围中包括例如诸如2、2.6、3、3.8和4的个体数值、和诸如1-3、2-4和3-5的子范围、以及个体1、2、3、4和5。
[0053] 本文中所用的“浓缩物”是指在小于来源本身体积的体积中包含至少等量的活性部分、化合物或其它组分的来源提取物。在一个实例中，“浓缩物”可以是源自组分的在浓缩过程中不包括使用任何溶剂的干燥粉末。
[0054] 比较性术语，例如“更有效”、“大于”、“改善”、“增强”和类似术语，可用于说明在制剂或方法中实现的效果或存在的性质与被比较的事物相比具有可测量的更好或更积极的结果。在一些情况下，可与现有技术、或与在导致更积极结果的制剂或方法被给予之前的性质状态，进行比较。
[0055] 如本文所使用的，“包含(comprises或comprising)”、“含有”和“具有”等可以具有美国专利法中赋予其的含义，并且可以意味着“包括(includes或including)”和类似意思，并且总体上被解释为开放式术语。术语“由……组成(consisting of或consists of)”是封闭式术语，并且仅包括结合这些术语具体列出的组分、结构、步骤等以及符合美国专利法规定的那些。或“主要由……组成(consisting essentially of或consists essentially of)”具有美国专利法总体上赋予其的含义。具体地，这种术语总体上是封闭式术语，除了允许包含不会实质性地影响其结合使用的项目(一个或多个)的基本和新颖的特性或功能的另外的项目、材料、组分、步骤或要素。例如，存在于组合物中但不影响组合物的属性或特性的痕量要素，如果存在于“主要由……组成”的语言下，则是允许的——即使没有在这种术语紧跟的项目列举中被明确地叙述。当在书面描述中使用一个开放式术语如“包含”或“包括”时，可以理解，为“主要由……组成”的用语以及“由……组成”的用语也提供了直接支持，如同明确进行了描述，反之亦然。
[0056] 术语“剂量单位”被理解为是指能够被给予对象或患者以提供足以达到或有助于所要达到的治疗效果的活性剂量的单个组合物单位。在一些实施方式中，“剂量单位”是一个单位，并且可以被容易地处理和包装，保持作为物理和化学稳定的单位剂量，该单位剂量包含活性成分本身或其与固体或液体药物载体材料的混合物。此外，“剂量(dosage或dose)”可以指代这种剂量单位。或者，“剂量”可以包括共同提供期望量的活性剂的多个剂量单位，以便在单个时间点给予对象。可以按照时间表施用多个剂量以建立用药方案。
[0057] 短语活性成分的“有效量”、“治疗有效量”或“治疗有效率”是指无毒但充足的量或递送率的活性成分，以在治疗递送活性剂所针对的疾病或状况时达到治疗效果。应理解，各种生物因素可能影响物质执行其预定任务的能力。因此，“有效量”、“治疗有效量”或“治疗有效率”可在某些情况下取决于这些生物因素。此外，虽然治疗效果的实现可以由医生或其他合格医务人员利用本领域已知的评价来测量，但已知，个体差异和对治疗的响应可使治疗效果的实现成为主观决定。治疗有效量或递送率的确定完全属于药物科学和医学领域的普通技术。
[0058] 术语“提取物”是指使用溶剂制备的那些物质，溶剂例如乙醇、水、蒸汽、过热水、甲醇、己烷、氯仿液体、液体CO2、液体N2、丙烷、超临界CO2或其任何组合。如本文所使用的，提取物可以指液体形式的提取物，或者可以指由液体形式进一步加工获得的产物，例如干燥粉末或其它固体形式。提取物可以有多种形式，包括但不限于固体、液体、颗粒、切碎型、馏分等，并且可以通过任意多种程序或方案进行，例如切碎、研磨、粉碎、沸腾、蒸煮、浸泡、浸渍、灌注、施加气体等，并且可以利用任何合适的试剂，例如水、醇、蒸汽或其它有机材料。提取物一般具有给定的纯度百分比，并且可以是相对高纯度的。在一些实施方式中，提取物可以是由来源的特定部分如植物的皮、果肉、叶、花、果实、核仁、种子等制成的植物提取物，或可由整个来源制成。在一些方面，提取物可包括一种或多种活性组分或活性剂。在一些方面，提取物的纯度可以通过提取方法或方案来控制或取决于提取方法或方案。
[0059] 如本文所用的，“制剂”和“组合物”可互换地使用，并指代至少两种成分的组合。在一些实施方式中，至少一种成分可以是活性剂或以其他方式具有在被给予对象时发挥生理活性的特性。
[0060] 除非另有具体说明，否则本文包括或叙述的制剂或组合物成分将假定为以wt％表示。此外，假定以比例形式呈现的成分量为以wt％(例如，％w/w)比例表示。
[0061] 短语“肠道通透性过高”指的是胃肠道系统的通透性高于正常(即高于平均对象的通透性)，并且在一些情况下可指胃、小肠和/或大肠的通透性增加。
[0062] 如本文所使用的，“线性抑制效应”或“剂量响应”是指在剂量-响应曲线上由所有浓度的抑制物导致的分泌或生物合成线性减少。例如，在低浓度下抑制然后在较高浓度下抑制失败或分泌增加表示没有线性抑制效应。
[0063] 术语“或”是以“和/或”的“包涵性”意义使用，而不是以“任一/或”的“排他性”意义使用的。
[0064] 如本文所使用的，“药学上可接受的”总体上指的是适合与活性剂或成分结合给予对象的材料。例如，“药学上可接受的载体”可以是可以适当地与活性剂组合以提供适合给予对象的组合物或制剂的任何物质或材料。用以或用于制备给予对象的制剂或组合物的赋形剂、稀释剂和其他成分可与该术语联用。
[0065] 术语“防止”及其变型是指对具体的不期望的生理状况的预防。预防可以是部分的或完全的。部分预防可能导致生理状况的发作延迟。本领域技术人员将认识到生理状况延迟发作的期望性，并且将知道将本发明的组合物给予存在某些生理状况风险的对象以延迟那些状况的发作。例如，本领域技术人员将认识到，肥胖的对象存在升高的冠状动脉疾病风险。因此，本领域技术人员将给予本发明的组合物以改善肥胖个体的肠道微生物群。
[0067] 如本文所使用的，当涉及材料数量或量、效果或其组合物的特定特性而使用时，“基本上(substantial或substandtially)”指的是足以提供该材料意图提供的效果或该材料意图提供的特性的量。在某些情况下，允许的偏差的确切程度可取决于特定的上下文。类似地，“基本上不含”等是指组合物中缺少所述要素或剂。具体地，被认定“基本上不含”的要素完全不存在于该组合物中，或仅以足够少的量被包含，该量少到对组合物没有可测量的影响。
[0068] 如本文所使用的，术语“不显著”或“在临床上不显著”是指向对象给予组合物的效果的程度。例如，如果效果(结果，result)的程度不引起对象的临床变化，则该效果在临床上不显著。
[0069] 在本文中使用并且在本领域中被充分理解的术语“治疗”(“treat”、“treating”或“treatment”)意为获得有益或期望结果的方法，非限制地包括在被治疗对象中的临床结果。有益或期望的结果可以包括但不限于缓解或改善状况的一种或多种体征或症状、减轻疾病的程度、稳定(即不恶化)疾病或状况的状态、延缓或减缓疾病进展、改善或缓和疾病状态、减少疾病的复发、和缓解(无论部分还是全部)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”(“treat”、“treating”或“treatment”)还可意为与不接受治疗情况下的预期的寿命相比延长寿命并且可以是预防性的。这种预防性治疗也可以称为疾病或状况的防止或预防。预防可以是部分的或完全的。部分预防可能导致生理状况延迟发作。
[0070] 本文中所用的术语“溶剂”是指具有从植物产物提取固体材料所需的特性的气态、水性或有机性液体。溶剂的实例包括但不限于水、蒸汽、过热水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、己烷、氯仿、液体CO2、液体N2、丙烷或这些材料的任何组合。
[0071] 如本文所使用的，为了方便起见，可以在同一列表中展示多个项目、结构要素、组成要素和/或材料。然而，这些列表应该被解释为，该列表的每个成员都作为单独和唯一的成员被独立标识。因此，这种列表中的个体成员都不应仅仅基于其在同一群组中被展示而没有相反说明就被解释为实际上等效于同一列表中的任何其他成员。
[0072] 在任何方法或过程权利要求中所述的任何步骤可以任何顺序执行，并且不限于权利要求中呈现的顺序，除非另有说明。
[0073] 胃肠道系统是涉及食物消化以及能量和营养物吸收的关联和相关结构的通道。胃肠道，如图1所示，由口和肛门之间的所有结构组成。整个胃肠道约9米长，可分为上胃肠道和下胃肠道。下胃肠道包括小肠和大肠。小肠约20英尺长，并且具有高度折叠的结构——其包括称为绒毛的指状保护体。绒毛内是单层上皮细胞和毛细血管层。小肠的主要功能是吸收消化产物。营养物可以穿过上皮细胞层并进入下方的毛细血管。这些营养物可以最终进入较大的血管并行进到肝脏，在此其被加工和调节以释放到身体中。大肠约3英尺长，并且用于收集在小肠中未被消化的固体物质和吸收水。大肠负载有合成维生素的细菌。
[0074] 如前所述，小肠具有由单层上皮细胞构成的屏障。这些上皮细胞通过紧密连接而被密封。紧密连接可以通过调节水和离子的旁细胞转运和跨细胞途径来调节肠道通透性。参见图3。除了负责营养物的吸收之外，该细胞层还在维持粘膜免疫稳态、防止炎症方面具有作用，并且构成第一防线以防止有害细菌/细菌毒素和/或可引发慢性炎症的其它抗原的进入。通过该细胞层的任何细菌、细菌毒素、抗原、水和离子可以进入血流，影响其它器官，并且可以对个体总体具有系统性作用。参见图4。生活方式和饮食因素，例如高强度运动、高脂饮食和过度营养，也可影响肠道通透性，并且可以具有增加穿过紧密连接和进入循环的毒素通透性的作用。
[0075] 紧密连接的破坏导致紧密连接屏障泄漏，并且可导致肠道通透性增加。通透性增加可以是几种炎症和肥胖相关病理的病理生理学的主要因素。低水平的慢性炎症可对肠道屏障通透化(permeabilization)产生负面影响。
[0076] 肿瘤坏死因子α(TNFα)也可以是中心潜在介导剂。TNFα引起凋亡；然而，分布的这些变化通过其促进屏障通透化和选定紧密连接蛋白表达的能力而发生。最终，TNFα可以在促进紧密连接屏障功能障碍方面发挥作用。紧密连接功能的损失和肠道通透性的增加可以是过敏(例如腹部疾病)、炎性肠病(克罗恩病和溃疡性结肠炎)、食物不耐受、消化不良、低水平慢性肠道炎症(例如与肥胖以及I型和II型糖尿病相关的那些)、胰岛素抵抗、自闭症、多发性硬化、营养不良、代谢综合征、癌症、哮喘、痛经、和类风湿关节炎的病理原因。
[0077] 个体胃肠道系统健康的另一个因素是肠道的微生物群。该微生物群是影响个体健康和生理的细菌、古细菌、病毒和真核生物的复杂网络。据估计，胃肠道微生物群达到约3.9×1013个微生物。个体的微生物群的组成在数量、多样性、组织学和活性方面可以大不相同。已经证明，肠道微生物的丰度和多样性受到抗生素、年龄、饮食、种族、地理位置、生理应激、心理应激和性别的显著影响。
[0078] 肠道微生物群的改变可引起内毒素的产生增加。随着年龄和/或与加速衰老相关状况(例如，肥胖或高脂饮食)，可以产生这样的微生物群：具有很少并且多样性较低的有益细菌并且具有较多数量并且多样性较高的非有益细菌。微生物群的不平衡还可导致胃肠道衬层(lining)的炎症增加、肠细胞壁的完整性改变，并且可导致肠道通透性。这些变化可导致胃肠道感染、哮喘/特应性(atopy)、肥胖、代谢综合征、癌症、类风湿关节炎、克罗恩病和溃疡性结肠炎发生。相比之下，平衡和多样性的微生物群可以提供感染抗性，允许健康的衰老，防止肠道障碍，促进多酚代谢，并且可以产生可吸收的生物活性物质。肠道微生物组还可以在代谢、免疫发展、内分泌信号传导和神经信号传导中起作用。
[0079] 类黄酮在防止和改善肠道屏障通透化方面发挥重要作用。肠道中的微生物群能够代谢类黄酮，释放可吸收的生物活性物质。这些生物活性物质可以恢复维持和/或恢复营养物平衡。因此，类黄酮具有抑制炎症、调节选定信号传导级联、和调节细胞氧化还原状态的能力。然而，具有不同化学/空间结构的大量现有类黄酮以及微生物群在大肠产生的多种代谢产物排除了简单概括作为一类的类黄酮的健康益处和作用机制的可能性。
[0080] 花青素(anthocyanins，AC)是主要的类黄酮亚群之一，其存在并为多种水果和蔬菜(例如浆果、红卷心菜、黑米)提供颜色。存在几种不同的AC，区别在于羟基的数目和取代、键合的糖部分、羧酸盐(酯)类型、和与糖的键合。不同类别的花青素的一部分包括矢车菊素、花翠素、芍药花青素、矮牵牛素和锦葵色素。
[0081] 目前的证据表明，亲代AC存在于胃肠道的整个长度中。在结肠处，AC可以被肠道中的微生物代谢成几种代谢产物。因此，理论上，小肠和在更小程度上大肠可以暴露于大量饮食亲代AC。尽管饮食AC有对胃肠道系统有益的潜力，但在肠道通透性增加的条件下的详情大多未知。AC可通过直接和间接作用在胃肠道发挥有益作用。间接作用可以与AC调节微生物群，影响微生物群介导的AC代谢的潜在能力有关。“更健康”的微生物群和选定活性代谢物的形成可以进而介导AC对肠道健康的间接作用，并导致系统性作用。
[0082] 下面将详细地参考本发明的具体实施方式。虽然将结合这些具体实施方式描述本发明，但应理解，并不意图将本发明限于这些具体实施方式。相反，意图涵盖由所附权利要求所限定的本发明的精神和范围内可包括的替代形式、修改和等同形式。在以下描述中，为了提供对本发明的透彻理解，阐述了大量具体细节。本发明可以在没有部分或全部这些具体细节的情况下实施。在其它情况下，为了不要不必要地模糊本发明，没有详细描述公知的工艺操作。
[0083] 本公开涉及用于改善对象肠道健康的组合物和方法。在一个实例中，展示了肠道健康促进组合物。该组合物可以包括足以治疗肠道通透性过高的量的矢车菊素和花翠素(花青素的种类)的组合。在一个实例中，矢车菊素和花翠素可以共同以维持肠上皮细胞的紧密连接完整性的量存在。在另一个实例中，矢车菊素和花翠素可以共同以恢复肠上皮细胞的紧密连接完整性的量存在。
[0084] 矢车菊素和花翠素可保护肠上皮细胞抵抗TNFα，包括在跨上皮电阻(TEER)中的单层通透性的损失和FITC-葡聚糖的旁细胞转运增加。相反，锦葵色素、芍药花青素和矮牵牛素似乎没有对肠上皮细胞提供保护作用抵抗TNFα诱导的TEER通透性，并且似乎没有增加FITC-葡聚糖的旁细胞转运。在不受理论束缚的情况下，矢车菊素和花翠素的保护作用可能是由于矢车菊素和花翠素的B环上存在邻苯二酚基团。本发明人测试的不含B环的花青素不呈现这些保护作用。在一个实例中，该活性可以是选择性的。在另一个实例中，保护作用可以是剂量依赖性的。
[0085] 在另一个实例中，本公开提供了治疗对象中与胃肠道健康相关的状况或障碍的方法，包括使对象的胃肠道上皮细胞的紧密连接完整性最大化。在另一个实例中，提出了使对象胃肠道上皮细胞的紧密连接完整性最大化的方法。在又一个实例中，本公开提供了治疗肠道通透性过高的方法。在一些实例中，这些方法可目标在于(i)在胃肠道系统中维持和/或建立健康的微生物组，(ii)在胃肠道系统中维持和/或建立炎性平衡，和/或(iii)维持和/或形成肠细胞屏障完整性。
[0086] 在一些实施方式中，肠道健康促进组合物可以包括矢车菊素、花翠素或其组合，并且在一些实施方式中，这些剂可以治疗有效量存在。在一个实例中，该组合物可以包括矢车菊素和花翠素的组合，其量足以治疗肠道通透性过高。在一个实例中，矢车菊素和花翠素可以共同以维持肠道通透性的量存在。在另一个实例中，矢车菊素和花翠素可以共同以减轻肠道通透性过高的量存在。在又一个实例中，矢车菊素和花翠素能够影响微生物组并且能够提供抗炎性质。
[0087] 组合物中矢车菊素和花翠素的量可以变化。在一个实例中，矢车菊素和花翠素可以分别或共同在组合物或组合物活性部分的约5wt％至约50wt％的范围内。在另一个实例中，矢车菊素和花翠素可以分别或共同在组合物或组合物活性部分的约12wt％至约45wt％的范围内。在另一个实例中，矢车菊素和花翠素可以分别或共同在组合物或组合物活性部分的约12wt％至约25wt％的范围内。
[0088] 矢车菊素和花翠素可以源自各种来源。在一个实例中，矢车菊素和花翠素中的至少一种的来源可以源自黑米组分、蓝莓组分、黑醋栗(black current)组分、岩高兰(crowberry)组分、越桔(bilberry)组分、野樱莓(black chokeberry)组分或其组合。在另一个实例中，矢车菊素和花翠素的来源可以源自黑米组分、蓝莓组分和黑醋栗组分。在又一个实例中，矢车菊素和花翠素的来源可以源自黑米组分和越桔组分。在另一个实例中，矢车菊素和花翠素的来源可以源自黑醋栗组分和蓝莓组分。在另一个实例中，矢车菊素和花翠素可以人工生成或合成(例如“合成型”)。
[0089] 在一个实例中，该组合物可以包括黑米组分。黑米组分可以源自黑米粒、黑米浓缩物、黑米提取物、黑米粉或其组合。在一个实例中，黑米组分可以是黑米提取物。例如，可以通过浓缩黑米粒并使浓缩的黑米粒通过树脂吸收(色谱柱)来获得液体米提取物。在一个实例中，溶剂可以是水和乙醇。在一个实例中，柱可以用70％乙醇和30％水溶液洗脱。在另一个实例中，柱可以用75％乙醇和25％水溶液洗脱。然后，将洗脱液浓缩成浓液体提取物，干燥并包装。在另一个实例中，黑米提取物可以源自黑米粒。在一个实例中，黑米可以源自Oryza sativa L。
[0090] 在一个实例中，黑米提取物可构成组合物或组合物活性部分的约2.5wt％至约20wt％。在另一个实例中，黑米组分可以组合物或组合物活性部分的约10wt％至约15wt％存在。在另一个实例中，黑米提取物可以组合物或组合物活性部分的约2.5wt％至约5wt％存在。在又一个实例中，黑米组分可以组合物或组合物活性部分的约2.5wt％至约7.5wt％存在。
[0091] 在一个实例中，黑米组分可以具有标准化的花青素含量。在一个实例中，黑米组分可以具有从约10wt％至约30wt％范围的标准化花青素含量。在另一个实例中，黑米组分可以具有约20wt％的标准化花青素含量。在另一个实例中，黑米组分可以具有约25wt％的标准化花青素含量。在一个实例中，标准花青素含量可通过HPLC测量。在另一个实例中，标准花青素含量可以通过UV测量。
[0092] 在另一个实例中，组合物可以包括蓝莓组分。蓝莓组分可以包括选自蓝莓果、蓝莓提取物、蓝莓浓缩物、蓝莓汁、蓝莓粉或其组合的成员。在一个实例中，蓝莓组分可以是蓝莓粉。在另一个实例中，蓝莓组分可以是蓝莓汁。在又一个实例中，蓝莓组分可以是源自蓝莓汁的蓝莓粉。在另一个实例中，蓝莓组分可以是蓝莓提取物。例如，可以通过用水提取蓝莓果来获得蓝莓果提取物。提取物可以被过滤，然后用水洗涤滤液并用75％乙醇通过树脂吸附进行解析。然后可以在真空压力下浓缩并喷雾干燥提取物。然后将浓缩的提取物研磨、筛分和包装。在一个实例中，蓝莓组分可以是沼泽蓝莓(bog blueberry)组分。在一个实例中，蓝莓组分可以源自Vaccinium uliginosum L.。
[0093] 在一个实例中，蓝莓组分可以在组合物或组合物活性部分的约1wt％至约30wt％范围内。在另一个实例中，蓝莓组分可以在组合物或组合物活性部分的约1wt％至约10wt％范围内。在又一个实例中，蓝莓组分可以在组合物或组合物活性部分的约25wt％至约30wt％范围内。
[0094] 在一个实例中，蓝莓组分可以具有标准化的花青素含量。在一个实例中，蓝莓组分可以具有从约0.5wt％至约30wt％范围的标准化花青素含量。在另一个实例中，蓝莓组分可以具有从约0.5wt％至约5wt％范围的标准化花青素含量。在又一个实例中，蓝莓组分可以具有从约20wt％至约30wt％范围的标准化花青素含量。在另一个实例中，蓝莓组分可以具有约25wt％的标准化花青素含量。在又一个实例中，蓝莓组分可以具有通过UV测量约17％或通过HPLC测量约25％的标准化花青素。
[0095] 在一个实例中，组合物可以包括黑醋栗组分。在一个实例中，黑醋栗组分可以包括黑醋栗果、黑醋栗提取物、黑醋栗浓缩物、黑醋栗汁、黑醋栗粉或其组合。在另一个实例中，黑醋栗组分可以是黑醋栗粉。在又一个实例中，黑醋栗组分可以是黑醋栗汁。在另一个实例中，黑醋栗组分可以是黑醋栗提取物。在一个实例中，可以使用水、树脂交换和乙醇来提取黑醋栗提取物。在一个实例中，黑醋栗可以是无环氧乙烷的产物。在一个实例中，黑醋栗组分可以源自Ribes nigrum。
[0096] 在一个实例中，黑醋栗组分可以是组合物或活性部分的约0.5wt％至约15wt％。在另一个实例中，黑醋栗组分可以是组合物或组合物活性部分的约1wt％至约5wt％。在又一个实例中，黑醋栗组分可以是组合物或组合物活性部分的约10wt％至约15wt％。
[0097] 在一个实例中，黑醋栗组分可以具有标准化的花青素含量。在一个实例中，黑醋栗组分可以具有从约20wt％至约40wt％范围的标准化花青素含量。在另一个实例中，黑醋栗组分可以具有约30wt％的标准花青素含量。在另一个实例中，黑醋栗组分可以具有约2.5wt％至约10wt％范围的标准化花青素含量。在一个实例中，黑醋栗组分可以具有约
5wt％的标准化花青素含量。
5wt％的标准化花青素含量。
[0098] 在一个实例中，组合物可以包括岩高兰组分。在一个实例中，岩高兰组分可以是岩高兰果、岩高兰提取物、岩高兰浓缩物、岩高兰汁、岩高兰粉或其组合。在另一个实例中，岩高兰组分可以是岩高兰果。在又一个实例中，岩高兰组分可以是岩高兰提取物。在一个实例中，可使用水和乙醇提取岩高兰提取物。在一个实例中，岩高兰组分可以源自Empetrum nigrum。
[0099] 在一个实例中，岩高兰组分可以在组合物或组合物活性部分的约1wt％至约30wt％范围内。在另一个实例中，岩高兰组分可以在组合物或组合物活性部分的约5wt％至
25wt％范围内。在另一个实例中，岩高兰组分可以在组合物或组合物活性部分的约5wt％至约15wt％范围内。
25wt％范围内。在另一个实例中，岩高兰组分可以在组合物或组合物活性部分的约5wt％至约15wt％范围内。
[0100] 在一个实例中，岩高兰组分可以具有标准化的花青素含量。在一个实例中，岩高兰组分可以具有约40wt％至约50wt％范围的标准花青素含量。在另一个实例中，岩高兰组分可以具有约46.7wt％的标准化花青素含量。
[0101] 在一个实例中，组合物可以包括越桔组分。在一个实例中，越桔组分可以是越桔果、越桔提取物、越桔浓缩物、越桔汁、越桔粉或其组合。在一个实例中，越桔组分可以是越桔粉。在另一个实例中，越桔组分可以是越桔提取物。在另一个实例中，可用乙醇和水提取越桔提取物。在一个实例中，乙醇与水的提取比例可以为150∶1。在一个实例中，越桔组分可以源自Vaccinium myrtillus。
[0102] 组合物中的越桔组分量可以变化。在一个实例中，越桔组分可以在组合物或组合物活性部分的约0.5wt％至约30wt％范围内。在另一个实例中，越桔组分可以在组合物或组合物活性部分的约2wt％至约20wt％范围内。在另一个实例中，越桔组分可以在组合物或组合物活性部分的约5wt％至约15wt％范围内。
[0103] 在一个实例中，越桔组分可以具有标准化的花青素含量。在一个实例中，越桔组分可以具有约1wt％至约40wt％范围的标准化花青素含量。在另一个实例中，越桔组分可以具有约5wt％至约25wt％范围的标准化花青素含量。在又一个实例中，越桔组分可以具有约20wt％至约40wt％范围的标准化花青素含量。在另一个实例中，越桔组分可以具有约
36wt％的花青素含量(通过HPLC测量)或约25wt％(通过UV测量)的花青素含量。
36wt％的花青素含量(通过HPLC测量)或约25wt％(通过UV测量)的花青素含量。
[0104] 在一个实例中，矢车菊素和花翠素中的至少一种的来源可以源自黑米组分、蓝莓组分和黑醋栗组分。在另一个实例中，组合物可以包括比例约为1∶1∶1的黑米组分、蓝莓组分和黑醋栗组分。在另一个实例中，黑米组分、蓝莓组分和黑醋栗组分的比例可以为约1∶1.4∶4.3。在又一个实例中，黑米组分、蓝莓组分和黑醋栗组分的比例可以为约1∶2∶4。
[0105] 在一个实例中，组合物还可以包括益生素成分或掺混物。益生素可以是来自水果、蔬菜和谷物的天然存在的物质。益生素可以通过刺激结肠中至少1种细菌的生长或活性来支持微生物组和胃肠道系统。
[0106] 在一个实例中，益生素或益生素掺混物可以包括菊粉(inulin)、寡聚果糖或其组合。在一个实例中，益生素或益生素掺混物可以包括菊粉。在另一个实例中，益生素或益生素掺混物可以包括寡聚果糖。在另一个实例中，益生素或益生素掺混物可以包括菊粉和寡聚果糖。在一些实例中，益生素或益生素掺混物可以通过增加有益细菌可用的燃料(fuel)来促进健康的微生物组。
[0107] 在组合物的一个实例中，益生素或益生素掺混物可以包括菊粉。在一个实例中，菊粉可以是粉末。在一个实例中，菊粉可以是菊苣菊粉(chicory inulin)。在另一个实例中，菊粉可以是具有果糖单元通过β(2-1)键连接的寡糖和多糖的菊苣菊粉。在另一个实例中，菊粉的来源可以由Bleguim, GR.Beneo-Orafti提供。在一些实例中，菊粉的来源可以源自香蕉、洋葱、面粉、大蒜、芦笋、小麦、黑麦、韭菜、菊苣根、甜菜或其组合。在一个实例中，菊粉可以通过在热水中扩散而被从来源中回收。在一些实例中，菊粉可以通过酶处理被水解或部分水解。
[0108] 在一个实例中，菊粉可以不同量存在于组合物中。在一个实例中，菊粉可以在组合物或组合物活性部分的约15wt％至约60wt％范围内。在另一个实例中，菊粉可以在组合物或组合物活性部分的约15wt％至约25wt％范围内。在又一个实例中，菊粉可以在组合物或组合物活性部分的约40wt％至约60wt％范围内。
[0109] 在一个实例中，组合物可以包括寡聚果糖(FOS)。在一个实例中，FOS可以是短链FOS(具有≤5的聚合度(DP))。寡聚果糖可以源自多种来源，包括谷物、水果和蔬菜。在一个实例中，短链FOS可以源自蔗糖。在另一个实例中，短链FOS可以源自甘蔗。在另一个实例中，短链FOS可以源自非GMO来源。在又一个实例中，FOS可以是半乳寡聚糖(GOS)。
[0110] 在一个实例中，FOS可以在组合物中以不同的量存在。在一个实例中，FOS可以在组合物或组合物活性部分的约10wt％至约40wt％范围内。在另一个实例中，FOS可以在组合物或组合物活性部分的约10wt％至约20wt％范围内。在又一个实例中，寡聚果糖可以在组合物或组合物活性部分的约25wt％至约40wt％范围内。
[0111] 在一个实例中，组合物可以包括菊粉和寡聚果糖。当存在时，在一个实例中，菊粉和寡聚果糖可以共同为组合物或组合物活性部分的约55wt％至约95wt％。在另一个实例中，菊粉和寡聚果糖可以共同为组合物或组合物活性部分的约70wt％至约90wt％。
[0113]
[0114] 表2：示例性配方
[0115]
[0116] 表3：示例性配方
[0117]
[0118] 表4：示例性配方
[0119]
[0120] 在一些实例中，组合物可以进一步被配制以包括另外的赋形剂。
[0122] 在一个实例中，组合物可以包括药学上可接受的载体。在另一个实例中，组合物可以包括甜味剂、防腐剂、调味剂、增稠剂或其组合。在又一个实例中，组合物还可以包括包衣、等渗剂、吸收延迟剂、粘合剂、粘性剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、甜味剂、吸收剂、洗涤剂、乳化剂、抗氧化剂、维生素、矿物、蛋白质、脂肪、碳水化合物或其组合。在一些实例中，制剂可包括用于持续释放给定化合物的聚合物。可以使用为产生具体期望的组合物或制剂而需要的几乎任何数量或类型的成分。
[0123] 在一个实例中，组合物可以是口服制剂的形式。在一个实例中，口服剂型包括胶囊、片剂、粉末、饮料、糖浆、口香糖、薄片(wafer)、糖果、悬浮液或食物。在另一个实例中，口服剂型可以是胶囊、片剂、软胶、锭剂、囊剂、粉末、饮料、糖浆、悬浮液或食物的形式。在另一个实例中，口服制剂可以被配制成食物或饮料，并且例如作为小吃(snackbar)、谷物、饮料、口香糖或任何其他容易摄取的形式提供。在一个实例中，口服剂型可以被掺入液体饮料如水、牛奶、果汁或苏打水中。在另一个实例中，口服剂型可以被配制成营养饮料。营养饮料可以是预混制剂或可以是可以加入饮料的粉末混合物。在另一个实例中，粉末混合物可以是颗粒的形式。在另一个实例中，组合物可以是可以撒在食物上的粉末。
[0124] 在一个实例中，口服剂型可设计成每天一次被给予对其有需要的对象。在一个实例中，口服剂型可设计成在早晨被给予对象。在另一个实例中，口服剂型可以在下午或晚上被给予。在又一个实例中，剂型可设计成在给药-停药-再给药的基础上被给予。例如，剂型可以被如下给予：2天给药和1天停药，3天给药和2天停药，3天给药和4天停药，4天给药和3天停药，5天给药和2天停药；或6天给药和1天停药，这些方案中的每一种连续重复一段时间。在另一个实例中，剂量方案可以每天交替给药和停药。剂量周期也可以改变。例如，剂型可设计成被给予2周、3周、1个月、6周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年、1年半或无限期。
[0125] 口服剂型可以包括本文所述的任何组合物。在一个实例中，口服剂型包括选自黑米组分、蓝莓组分、黑醋栗组分、岩高兰组分、越桔组分、野樱莓组分或其组合的成员。
[0126] 在一个实例中，口服剂型可以包括黑米组分，并且黑米组分可以在口服剂型的约500mg至约800mg范围内。在另一个实例中，黑米组分可以具有约15wt％至约30wt％的标准化花青素含量。
[0127] 在一个实例中，口服剂型可以包括蓝莓组分，并且蓝莓组分可以在口服剂型的大约100mg至大约3,000mg范围内。在另一个实例中，蓝莓组分的范围可以为约50mg至约500mg。在另一个实例中，蓝莓组分的范围可以为约2,000mg至约3,000mg。在又一个实例中，蓝莓组分可以具有约0.5wt％至约25wt％的标准化花青素含量。
[0128] 在一个实例中，口服剂型可以包括黑醋栗组分，并且黑醋栗组分可以在口服剂型的约200mg至约3,000mg范围内。在另一个实例中，黑醋栗组分的范围可以为约50mg至约500mg。在另一个实例中，黑醋栗组分的范围可以为约2,000mg至约3,000mg。在又一个实例中，黑醋栗组分具有约2.5wt％至约30wt％的标准化花青素含量。
[0129] 在一个实例中，口服剂型可包括岩高兰组分，并且岩高兰组分可在口服剂型的约100mg至约1,000mg范围内。在一个实例中，岩高兰组分具有约1wt％至约50wt％的标准化花青素含量。在另一个实例中，岩高兰组分具有约1wt％至约30wt％的标准化花青素含量。在又一个实例中，岩高兰组分具有约40wt％至约50wt％范围的标准化花青素含量。
[0130] 在另一个实例中，口服剂型可包括越桔组分，并且越桔组分可在口服剂型的约100mg至约700mg范围内。在一个实例中，越桔组分可以具有约30wt％至约40wt％的标准化花青素含量。
[0131] 在另一个实例中，口服剂型可以包括野樱莓组分，并且野樱莓组分可以在约50mg至约700mg范围内。在另一个实例中，野樱莓组分的范围可以为约100mg至约600mg。在又一个实例中，野樱莓组分的范围可以为约200mg至约500mg。在一个实例中，野樱莓组分可以具有约1wt％至约35wt％的标准化花青素含量。
[0132] 在一个实例中，口服剂型可进一步包括益生素或益生素掺混物。益生素或益生素掺混物可以包括菊粉、寡聚果糖或其组合。在一个实例中，菊粉可在口服剂量中以约1克至2克的量存在。在另一个实例中，菊粉可以在口服剂型中提供约1克至约2克的纤维。
[0133] 在一个实例中，口服剂型可以包括寡聚果糖(FOS)。在一个实例中，FOS可以在口服剂型的约1克到约1.5克范围内。在另一个实例中，FOS可以在口服剂型的约3克至约4克范围内。
[0134] 口服剂型可提供各种量的花青素。在一个实例中，口服剂型总共提供约200mg至约300mg的花青素。在另一个实例中，口服剂型可提供50mg至100mg的花青素。在一个实例中，口服剂型可提供约80mg的花青素。在另一个实例中，口服剂型可以提供约215mg的花青素。
[0135] 口服剂型还可以提供各种量的纤维。在一个实例中，口服剂型可总共提供约1.5克至约3克纤维。在一个实例中，口服形式可提供约2.6g、2.7g或2.9g纤维。
[0136] 本发明还包括制备本发明组合物的方法。在一个实施方式中，该方法可以包括将成分(无论原料成分还是提取成分)组合，并将组合的成分加工成期望的组合物形式。在一个实例中，期望的组合物形式可以是片剂、胶囊、粉末、食物或饮料。本领域技术人员知道可用于组合组分的程序。
[0137] 本文进一步提出治疗对象肠道通透性过高的方法。在一个实例中，该方法可以包括向对象给予肠道健康促进组合物。在一个实例中，该肠道健康促进组合物可以如本文所述。
[0138] 在另一个实例中，肠道健康促进组合物可在每日基础上被给予对象。在一个实例中，该给予可以在早晨进行。在又一个实例中，该给予可以长期进行，例如，每天给予，给予至少3周、至少4周、至少6周、至少8周、至少12周、至少6个月、至少9个月、至少一年、至少两年、这些之间的任何时间段、或无限期。
[0139] 另外，提出治疗对象中与胃肠道健康相关的状况或障碍的方法。在一个实例中，该方法可以包括使对象胃肠道上皮细胞的紧密连接完整性最大化。在另一个实例中，该方法可包括减轻对象的肠道通透性过高。
[0140] 在一个实例中，该方法可以改善对象的胃肠道健康。胃肠道健康的改善可以变化。
[0141] 在一个实例中，该改善可包括在与施用该方法之前对象的排便习惯相比时，对象的排便习惯改善。在另一个实例中，对象的排便习惯改善可包括在排便动作期间和之后的用力减少。在又一个实例中，改善可以是胃气胀、不适、矢气或其组合减少。在另一个实例中，改善可以是降低对象的肠道通透性。在又一个实例中，改善可以是漏肠综合征的症状/发生减少。
[0143] 在该方法的一个实例中，状况或障碍可包括炎症、炎性肠病、肠易激综合征、慢性肠道疾病、腹部疾病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、食物不耐受、消化不良、低水平慢性肠道炎症、胃肠道感染或其组合。
[0144] 在另一个实例中，状况或障碍可以是炎症，并且对象的胃肠道中的炎症可以在与施用该方法之前对象的胃肠道炎症相比时减少。在另一个实例中，减少可以是约50％的炎症减少。在又一个实例中，减少可以是约60％的炎症减少。在另一个实例中，减少可以是约70％的炎症减少。在一个实例中，减少可以是上至73％的炎症减少。在另一个实例中，3周的补充可导致炎性生物标志物适度减少。
[0145] 在另一个实例中，状况或障碍可包括营养物吸收不足、内毒素血症、肠道通透性过高或其组合。
[0146] 在另一个实例中，状况或障碍可包括肥胖、肥胖相关的病理、过敏、心血管状况、I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿关节炎、胰岛素抵抗、癌症、代谢综合征、哮喘、神经变性疾病或其组合。
[0147] 在一个实例中，状况或障碍可以是心血管状况或障碍。在一个实例中，心血管状况或障碍可以是未服用心血管药物的对象的高密度脂蛋白胆固醇增加。在另一个实例中，心血管状况或障碍可以是HbA1c水平降低。在又一个实例中，HbA1c水平降低可以是从糖尿病前期水平到正常水平——通过HbA1c水平从6-6.4％降低到6％以下来测量。在另一个实例中，HbA1c水平降低可以是从糖尿病水平到糖尿病前期水平。这是从6.5％以上的水平降低到6％至6.4％的水平。
[0148] 在另一个实例中，心血管状况或障碍可与血浆连蛋白(zonulin)水平增加相关。在一个实例中，在与施用该方法之前的血浆连蛋白水平相比时，施用该方法可降低血浆连蛋白水平。血浆连蛋白的增加可以指示肠道通透性。连蛋白可以通过拆解紧密连接和允许较大分子如乳果糖通过来调节肠道通透性。给予本文的组合物可以使紧密连接的完整性最大化；因此，最小化穿过肠道衬层的连蛋白量。
[0149] 在另一个实例中，状况可以是外周胰岛素抵抗，并且该方法可以减少外周胰岛素抵抗。在另一个实例中，状况或障碍可以是I型糖尿病或II型糖尿病。
[0150] 在另一个实例中，状况或障碍可以是一氧化氮相关的障碍、iNOS的表达、COX-2、NADPH氧化酶的表达或其组合。在一个实例中，状况或障碍可来源于可穿过紧密连接的病原体、抗原和促炎因子。
[0151] 在一个实例中，该方法可以包括最大化紧密连接完整性、或减轻肠道通透性过高。最大化紧密连接完整性可包括保护对象的胃肠道免受TNFα诱导的单层上皮细胞通透化。在另一个实例中，保护量可以是对对象的胃肠道中的矢车菊素和花翠素量浓度依赖性。在一个实例中，保护量是剂量依赖性的。
[0152] 在又一个实例中，该方法还可以包括增加上皮细胞的跨上皮电阻。在另一个实例中，该方法可以包括增加FITC葡聚糖的旁细胞转运。
[0153] 在一个实例中，状况或障碍可来源于促炎因子。在一个实例中，促炎因子可以是晚期糖基化终产物。在另一个实例中，促炎因子可以是脂多糖。在另一个实例中，促炎因子可包括细胞因子肿瘤坏死(因子)α(TNF-α)、IL-6或其组合。
[0154] 在该方法的一个实例中，状况或障碍可涉及与信号传导途径NF-kB、ERK1/2或其组合相关的状况或障碍。
[0155] 在一个实例中，紧密连接完整性的最大化可以减轻高脂肪诱导的肠道通透化。
[0156] 在另一个实例中，上皮细胞可以包括Caco-2细胞单层。
[0157] 在另一个实例中，该方法可以包括优化胃肠道中肠道微生物的平衡。在一个实例中，优化肠道微生物群的平衡可包括在与施用该方法之前胃肠道中的共生细菌水平相比时，增加胃肠道中的共生细菌水平。在另一个实例中，共生细菌可以属于双歧杆菌(bifidobacteria)属。在一个实例中，共生细菌可以属于拟杆菌(bacteroidetes)门。在另一个实例中，共生细菌可以是粪便拟杆菌(bacterdies caccae)、单形拟杆菌(bacteriodes uniformis)或其组合。在又一个实例中，每日向对象施用该方法8周后共生细菌的增加可以是至少20％。在另一个实例中，每日向对象施用该方法8周后共生细菌的增加可以是大约5％，可以是大约10％，可以是大约15％，或者可以是大约25％。
[0158] 在该方法的一个实例中，优化肠道微生物群的平衡可包括在与施用该方法之前肠道中存在的细菌的多样性相比时，增加细菌的多样性。在一个实例中，细菌的多样性可以包括至少200个菌种。在另一个实例中，该方法可包括在与施用该方法之前存在的有害肠道细菌水平相比时，减少有害肠道细菌。在一个实例中，有害肠道细菌可以包括厚壁菌门(firmicutes)。在一些研究中，已经发现厚壁菌门构成肥胖个体的肠道微生物组的较高部分。在又一个实例中，每日向对象施用该方法8周后的厚壁菌门的减少可以大于厚壁菌门水平的15％减少。在另一个实例中，每日向对象施用该方法8周后的厚壁菌门的减少可以大于5％减少、约10％减少、约12％减少、约15％减少、或约20％减少。
[0159] 在一个实例中，该方法可以包括通过改变厚壁菌门∶拟杆菌门比例来优化肠道微生物群。在一个实例中，在向对象施用该方法8周后，厚壁菌门∶拟杆菌门比例可降低约3％。厚壁菌门∶拟杆菌门比例可以是肥胖的促成因素。具有高体重指数的个体显示门(phylum)级水平上的肠道微生物群差异，并且可以具有高厚壁菌门浓度以及可以具有低拟杆菌门水平。注意，微生物群的变化未被关联到热量，而是被关联到体重指数。因此，如果被给予一段时间，改变这个比例可以实现个体的体重减轻。
[0160] 在减少有害肠道细菌的方法的另一个实例中，有害肠道细菌可以包括放线菌(Actinobacteria)。在一个实例中，每日向对象施用该方法8周后，放线菌的减少可以为至少约5％。
[0161] 在减少有害肠道细菌的方法的又一个实例中，有害肠道细菌可以包括幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)。幽门螺杆菌可与溃疡和烧心相关。在该方法的另一个实例中，有害肠道细菌可以包括梭菌(Clostridium)。在又一个实例中，有害肠道细菌可以包括克雷伯菌(Klebisella)。
[0162] 在一个实例中，该方法还可以包括为肠道微生物组中的共生细菌提供燃料源。在这样做时，该方法可以产生更大部分的共生细菌，其最终可导致系统性健康益处。
[0163] 在另一个实例中，提供了最大化对象的胃肠道上皮细胞的紧密连接完整性的方法。在在该方法的一个实例中，紧密结完整性的改善可以包括恢复紧密连接完整性。在该方法的另一个实例中，改善可包括保持紧密结完整性。在另一个实例中，该方法可以提供系统性健康益处。这些健康益处可包括诸如下列的状况或障碍的改善：例如腹部疾病、IBS、克罗恩病、溃疡性结肠炎、食物不耐受、过敏、消化不良、低水平慢性炎症、肥胖、I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿关节炎、胰岛素抵抗、代谢综合征、哮喘、特发性、肠道屏障渗漏、紧密连接屏障功能障碍、血浆葡萄糖水平、血浆游离脂肪酸水平、高密度脂蛋白水平降低、肝脂肪变性、肠道中的厚壁菌门∶拟杆菌门水平、腹部胃气胀、腹气、腹痛、肠功能、有利肠道细菌的生长、短链脂肪酸产生、血浆连蛋白水平、HbA1c水平、糖尿病、糖尿病前期、营养物吸收和其组合。
[0164] 通过向对象给予上述胃肠道健康促进组合物，可以实现上述各种方法的益处。在一个实例中，组合物可以被长期每日给予。在另一个实例中，组合物可以基于用药方案在给药-停药-再给药基础上被给予。例如，剂量方案可以是2天给药，然后1天不给药。在另一个实例中，给药方案可以是5天给药，然后2天不给药。在又一个实例中，剂量方案可以是3天给药，然后1、2、3或4天不给药。在另一个实例中，剂量方案可以是4天给药，然后1、2、3或4天不给药。在一些实例中，长期可以变化。在一个实例中，长期可以是约4周。在另一个实例中，延长的时间可以是约6周、约8周、约12周、16周、20周、约6个月、约9个月、约1年或长于1年的时间。在一些实例中，施用该方法一段时间的益处可以随施用时间越长而增加。
[0165] 实施方式
[0166] 本文提出的一个实施方式是肠道健康促进组合物，其包含足以治疗肠道通透性过高的量的矢车菊素和花翠素的组合。
[0167] 在组合物的一个实施方式中，矢车菊素和花翠素共同以保持肠道通透性的量存在。
[0168] 在组合物的一个实施方式中，矢车菊素和花翠素共同以降低肠道通透性的量存在。
[0169] 在组合物的一个实施方式中，可以包括源自黑米组分、蓝莓组分、黑醋栗组分、岩高兰组分、越桔组分、野樱莓组分或其组合的矢车菊素和花翠素中的至少一种的来源。
[0170] 在组合物的一个实施方式中，矢车菊素和花翠素的来源源自黑米组分、蓝莓组分和黑醋栗组分。
[0171] 在组合物的一个实施方式中，组合物包括黑米组分，并且黑米组分源自选自黑米粒、黑米浓缩物、黑米提取物、黑米粉或其组合的成员。
[0172] 在组合物的一个实施方式中，黑米组分是黑米提取物。
[0173] 在组合物的一个实施方式中，黑米提取物源自黑米粒。
[0174] 在组合物的一个实施方式中，黑米组分占组合物活性部分的约2.5wt％至约20wt％。
[0175] 在组合物的一个实施方式中，黑米组分占组合物活性部分的约10wt％至约15wt％。
[0176] 在组合物的一个实施方式中，黑米组分占组合物活性部分的约2.5wt％至约7.5wt％。
[0177] 在组合物的一个实施方式中，黑米组分具有约10wt％至约30wt％范围的标准化花青素含量。
[0178] 在组合物的一个实施方式中，黑米组分具有约20wt％的标准化花青素含量。
[0179] 在组合物的一个实施方式中，黑米组分具有约25wt％的标准化花青素含量。
[0180] 在组合物的一个实施方式中，黑米组分源自Oryza sativa L。
[0181] 在组合物的一个实施方式中，组合物包含蓝莓组分，并且蓝莓组分包括选自蓝莓果、蓝莓提取物、蓝莓浓缩物、蓝莓汁、蓝莓粉或其组合的成员。
[0182] 在组合物的一个实施方式中，蓝莓组分是蓝莓粉。
[0183] 在组合物的一个实施方式中，蓝莓组分是蓝莓汁。
[0184] 在组合物的一个实施方式中，蓝莓组分占组合物活性部分的约1wt％至约30wt％。
[0185] 在组合物的一个实施方式中，蓝莓组分占组合物活性部分的约1wt％至约10wt％。
[0186] 在组合物的一个实施方式中，蓝莓组分占组合物活性部分的约25wt％至约30wt％。
[0187] 在组合物的一个实施方式中，蓝莓组分具有约0.5wt％至约30wt％范围的标准化花青素含量。
[0188] 在组合物的一个实施方式中，蓝莓组分具有约0.5wt％至约5wt％范围的标准化花青素含量。
[0189] 在组合物的一个实施方式中，蓝莓组分具有约20wt％至约30wt％范围的标准化花青素含量。
[0190] 在组合物的一个实施方式中，蓝莓组分源自Vaccinium uliginosum L。
[0191] 在组合物的一个实施方式中，组合物包括黑醋栗组分，并且黑醋栗组分包括选自黑醋栗果、黑醋栗提取物、黑醋栗浓缩物、黑醋栗汁、黑醋栗粉或其组合的成员。
[0192] 在组合物的一个实施方式中，黑醋栗组分是黑醋栗提取物。
[0193] 在组合物的一个实施方式中，黑醋栗组分占活性部分的约0.5wt％至约15wt％。
[0194] 在组合物的一个实施方式中，黑醋栗组分占活性部分的约1wt％至约5wt％。
[0195] 在组合物的一个实施方式中，黑醋栗组分具有约20wt％至约40wt％范围的标准化花青素含量。
[0196] 在组合物的一个实施方式中，黑醋栗组分具有约30wt％的标准花青素含量。
[0197] 在组合物的一个实施方式中，黑醋栗组分源自Ribes nigrum。
[0198] 在组合物的一个实施方式中，组合物包括岩高兰组分，并且岩高兰组分包括选自岩高兰果、岩高兰提取物、岩高兰浓缩物、岩高兰汁、岩高兰粉或其组合的成员。
[0199] 在组合物的一个实施方式中，岩高兰组分包括岩高兰果。
[0200] 在组合物的一个实施方式中，岩高兰组分包括岩高兰提取物。
[0201] 在组合物的一个实施方式中，岩高兰组分占组合物活性部分的约1wt％至约30wt％。
[0202] 在组合物的一个实施方式中，岩高兰组分占组合物的约5wt％至约25wt％。
[0203] 在组合物的一个实施方式中，岩高兰组分具有约40wt％至约50wt％范围的标准花青素含量。
[0204] 在组合物的一个实施方式中，岩高兰组分具有约46.7wt％的标准化花青素含量。
[0205] 在组合物的一个实施方式中，岩高兰组分源自Empetrum nigrum。
[0206] 在组合物的一个实施方式中，组合物包括越桔组分，并且越桔组分包括选自越桔果、越桔提取物、越桔浓缩物、越桔汁、越桔粉或其组合的成员。
[0207] 在组合物的一个实施方式中，越桔组分包括越桔提取物。
[0208] 在组合物的一个实施方式中，越桔组分的范围为组合物活性部分的约0.5wt％至约30wt％。
[0209] 在组合物的一个实施方式中，越桔组分的范围为组合物的约2wt％至约20wt％。
[0210] 在组合物的一个实施方式中，越桔组分的标准化花青素含量范围为约1wt％至约30wt％。
[0211] 在组合物的一个实施方式中，越桔组分具有约5wt％至约15wt％范围的标准化花青素含量。
[0212] 在组合物的一个实施方式中，越桔组分包括通过HPLC测量的36wt％的花青素或通过UV测量的25wt％的花青素。
[0213] 在组合物的一个实施方式中，越桔组分源自Vaccinium myrtillus。
[0214] 在组合物的一个实施方式中，矢车菊素和花翠素中的至少一种的来源源自黑米组分、蓝莓组分和黑醋栗组分。
[0215] 在组合物的一个实施方式中，黑米组分、蓝莓组分和黑醋栗组分的比例为约1∶1∶1。
[0216] 在组合物的一个实施方式中，黑米组分、蓝莓组分和黑醋栗组分的比例为约1∶1.4∶4.3。
[0217] 在组合物的一个实施方式中，组合物还包含益生素掺混物。
[0218] 在组合物的一个实施方式中，益生素掺混物包含菊粉。
[0219] 在组合物的一个实施方式中，菊粉是菊苣菊粉，其具有果糖单元通过β(2-1)键连接的寡糖和多糖。
[0220] 在组合物的一个实施方式中，菊粉源自香蕉、洋葱、面粉、大蒜、芦笋、小麦、黑麦、韭菜、菊苣根、甜菜或其组合。
[0221] 在组合物的一个实施方式中，菊粉占组合物的约15wt％至约60wt％。
[0222] 在组合物的一个实施方式中，菊粉占组合物的约15wt％至约25wt％。
[0223] 在组合物的一个实施方式中，菊粉占组合物的约40wt％至约60wt％。
[0224] 在组合物的一个实施方式中，益生素掺混物包含寡聚果糖。
[0225] 在组合物的一个实施方式中，寡聚果糖是短链寡聚果糖(DP≤5)。
[0226] 在组合物的一个实施方式中，短链寡聚果糖源自蔗糖。
[0227] 在组合物的一个实施方式中，短链寡聚果糖源自甘蔗。
[0228] 在组合物的一个实施方式中，寡聚果糖占组合物活性部分的约10wt％至约40wt％。
[0229] 在组合物的一个实施方式中，寡聚果糖占组合物活性部分的约10wt％至约20wt％。
[0230] 在组合物的一个实施方式中，寡聚果糖占组合物活性部分的约25wt％至约40wt％。
[0231] 在组合物的一个实施方式中，寡聚果糖包含半乳寡聚糖。
[0232] 在组合物的一个实施方式中，组合物还包含菊粉和寡聚果糖的益生素掺混物。
[0233] 在组合物的一个实施方式中，菊粉和寡聚果糖共同占组合物的约55wt％至约95wt％。
[0234] 在组合物的一个实施方式中，矢车菊素和花翠素的组合来源占组合物的约5wt％至约50wt％。
[0235] 在组合物的一个实施方式中，组合物还包含药学上可接受的载体。
[0236] 在组合物的一个实施方式中，组合物还包含甜味剂、防腐剂、调味剂、增稠剂或其组合。
[0237] 在组合物的一个实施方式中，组合物是口服剂型。
[0238] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型包括胶囊、片剂、粉末、饮料、糖浆、口香糖、薄片、糖果、悬浮液或食物。
[0239] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型包括粉末。
[0240] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型设计成每天一次被给予有需要的对象。
[0241] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型设计成在早晨被给予对象。
[0242] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型包括选自黑米组分、蓝莓组分、黑醋栗组分、岩高兰组分、越桔组分、野樱莓组分或其组合的成员。
[0243] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型包括黑米组分，并且黑米组分的范围为口服剂型的约500mg至约800mg。
[0244] 在组合物的一个实施方式中，黑米组分具有约15wt％至约30wt％的标准化花青素含量。
[0245] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型包含蓝莓组分，并且蓝莓组分占口服剂型的约100mg至约3,000mg。
[0246] 在组合物的一个实施方式中，蓝莓组分具有约0.5wt％至约25wt％的标准化花青素含量。
[0247] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型包括黑醋栗组分，并且黑醋栗组分占口服剂型的约200mg至约3,000mg。
[0248] 在组合物的一个实施方式中，黑醋栗组分具有约2.5wt％至约30wt％的标准化花青素含量。
[0249] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型包含岩高兰组分，并且岩高兰组分占口服剂型的约100mg至约1,000mg。
[0250] 在组合物的一个实施方式中，岩高兰组分具有约1wt％至约30wt％的标准化花青素含量。
[0251] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型包含越桔组分，并且越桔组分的范围为口服剂型的约100mg至约700mg。
[0252] 在组合物的一个实施方式中，越桔组分具有约30wt％至约40wt％的标准化花青素含量。
[0253] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型包括野樱莓组分，并且野樱莓组分的范围为口服组合物的约50mg至约700mg。
[0254] 在组合物的一个实施方式中，野樱莓组分具有约1wt％至约35wt％的标准化花青素含量。
[0255] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型还包含益生素掺混物。
[0256] 在组合物的一个实施方式中，益生素掺混物占口服剂型的约1克至2克。
[0257] 在组合物的一个实施方式中，益生素掺混物在口服剂型中提供约1克至约2克纤维。
[0258] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型还包含寡聚果糖。
[0259] 在组合物的一个实施方式中，寡聚果糖占口服剂型的约1克至约1.5克。
[0260] 在组合物的一个实施方式中，寡聚果糖占口服剂型的约3克至约4克。
[0261] 在组合物的一个实施方式中，口服剂型包括约200mg至约300mg的花青素。
[0262] 在一个实施方式中，本文还提出了治疗肠道通透性过高的方法。
[0263] 在该方法的一个实施方式中，该方法可以包括向对象给予肠道健康促进组合物。
[0264] 在该方法的一个实施方式中，肠道健康促进组合物包含矢车菊素和花翠素的组合，其量足以治疗肠道通透性过高。
[0265] 在该方法的一个实施方式中，肠道健康促进组合物还包含益生素掺混物。
[0266] 在该方法的一个实施方式中，肠道健康促进组合物还包含寡聚果糖。
[0267] 在该方法的另一个实施方式中，肠道健康促进组合物的给予可以是每日。
[0268] 在该方法的一个实施方式中，给予可以在早晨进行。
[0269] 在该方法的一个实施方式中，给予可进行至少3周。
[0270] 在一个实施方式中，本文进一步提出了治疗对象中与胃肠道健康相关的状况或障碍的方法，包括使对象的胃肠道上皮细胞的紧密连接完整性最大化。
[0271] 在该方法的一个实施方式中，在与施用该方法之前对象的胃肠道系统的健康相比时，该对象的胃肠道健康得到改善。
[0272] 在该方法的一个实施方式中，对象的胃肠道健康改善包括在与施用该方法之前对象的排便习惯相比时，对象的排便习惯改善。
[0273] 在该方法的一个实施方式中，对象的胃肠道健康改善包括在与在施用该方法之前胃气胀、不适、矢气或其组合的发生相比时，减少对象的胃气胀、不适、矢气或其组合的发生。
[0274] 在该方法的一个实施方式中，对象的胃肠道健康改善包括减轻肠道通透性过高。
[0275] 在该方法的一个实施方式中，对象的胃肠道健康改善包括在与施用该方法之前的肠道失调水平相比时，肠道失调改善。
[0276] 在该方法的一个实施方式中，对象的胃肠道健康改善包括钙卫蛋白粪便水平降低。
[0277] 在该方法的一个实施方式中，对象的胃肠道健康改善包括短链脂肪酸水平增加。
[0278] 在该方法的一个实施方式中，状况或障碍包括炎症、炎性肠病、肠易激综合征、慢性肠道疾病、腹部疾病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、食物不耐受、消化不良、低水平慢性肠道炎症、胃肠道感染或其组合。
[0279] 在该方法的一个实施方式中，炎症总体减少。
[0280] 在该方法的一个实施方式中，炎症减少上至73％。
[0281] 在该方法的一个实施方式中，3周补充胃肠道健康促进组合物导致炎症生物标志物适度减少。
[0282] 在该方法的一个实施方式中，状况或障碍包括对营养物吸收不足、内毒素血症、肠道通透性过高或其组合。
[0283] 在该方法的一个实施方式中，状况或障碍包括肥胖、肥胖相关病理、过敏、心血管状况、I型糖尿病、II型糖尿病、类风湿关节炎、胰岛素抵抗、癌症、代谢综合征、哮喘、神经变性疾病或其组合。
[0284] 在该方法的一个实施方式中，状况或障碍是心血管状况。
[0285] 在该方法的一个实施方式中，心血管状况是未服用心血管药物的对象的高密度脂蛋白胆固醇增加。
[0286] 在该方法的一个实施例中，心血管状况包括HbA1c水平降低。
[0287] 在该方法的一个实施例中，HbA1c水平降低是从糖尿病前期水平到正常水平。
[0288] 在该方法的一个实施方式中，心血管状况包括血浆连蛋白水平降低。
[0289] 在该方法的一个实施方式中，状况是外周胰岛素抵抗，并且该方法降低外周胰岛素抵抗。
[0290] 在该方法的一个实施方式中，状况或障碍是I型糖尿病或II型糖尿病。
[0291] 在该方法的一个实施方式中，状况或障碍包括一氧化氮相关障碍、iNOS的表达、COX-2、NADPH氧化酶的表达或其组合。
[0292] 在该方法的一个实施方式中，状况或障碍来源于通过胃肠道上皮细胞的紧密连接的病原体、抗原和促炎因子。
[0293] 在该方法的一个实施方式中，最大化紧密连接完整性包括保护对象的胃肠道免受TNFα诱导的单层上皮细胞通透化。
[0294] 在该方法的一个实施方式中，保护量是对对象的胃肠道中的矢车菊素和花翠素量浓度依赖性的。
[0295] 在该方法的一个实施方式中，该方法还包括增加上皮细胞的跨上皮电阻。
[0296] 在该方法的一个实施方式中，该方法还包括增加FITC葡聚糖旁细胞转运。
[0297] 在该方法的一个实施方式中，状况来源于促炎因子，并且促炎因子包括晚期糖基化终产物。
[0298] 在该方法的一个实施方式中，状况来源于促炎因子，并且促炎因子包括脂多糖。
[0299] 在该方法的一个实施方式中，状况来源于促炎因子，并且促炎因子包括细胞因子肿瘤坏死(因子)α(TNF-α)、IL-6或其组合。
[0300] 在该方法的一个实施方式中，状况或障碍涉及与信号传导途径NF-kB、ERK1/2或其组合相关的状况或障碍。
[0301] 在该方法的一个实施方式中，紧密连接完整性的最大化减轻了高脂肪诱导的肠道通透化。
[0302] 在该方法的一个实施方式中，上皮细胞包括Caco-2细胞单层。
[0303] 在该方法的一个实施方式中，该方法还包括优化胃肠道中肠道微生物群的平衡。
[0304] 在该方法的一个实施方式中，优化肠道微生物群的平衡包括使胃肠道中的共生细菌水平增加到施用该方法之前胃肠道中的共生细菌水平以上。
[0305] 在该方法的一个实施方式中，共生细菌属于双歧杆菌属。
[0306] 在该方法的一个实施方式中，共生细菌属于拟杆菌门。
[0307] 在该方法的一个实施方式中，共生细菌包括粪便拟杆菌、单形拟杆菌或其组合。
[0308] 在该方法的一个实施方式中，每日向有需要的对象施用该方法8周后的共生细菌增加为至少20％。
[0309] 在该方法的一个实施方式中，优化肠道微生物群的平衡包括增加细菌的多样性。
[0310] 在该方法的一个实施方式中，细菌的多样性包括至少200个菌种。
[0311] 在该方法的一个实施方式中，该方法还包括与施用该方法之前的有害肠道细菌水平相比，降低有害肠道细菌水平。
[0312] 在该方法的一个实施方式中，有害肠道细菌包括厚壁菌门。
[0313] 在该方法的一个实施方式中，每日向对象施用该方法8周后厚壁菌门的减少大于15％减少。
[0314] 在该方法的一个实施方式中，在向对象施用该方法8周后，厚壁菌门∶拟杆菌门比例降低大约3％。
[0315] 在该方法的一个实施方式中，有害肠道细菌包括放线菌。
[0316] 在该方法的一个实施方式中，在每日向对象施用该方法8周后，放线菌的减少为至少5％。
[0317] 在该方法的一个实施方式中，有害肠道细菌包括幽门螺杆菌。
[0318] 在该方法的一个实施方式中，有害肠道细菌包括梭菌。
[0319] 在该方法的一个实施方式中，有害肠道细菌包括克雷伯菌。
[0320] 在该方法的一个实施方式中，该方法包括为共生细菌提供燃料来源。
[0321] 实施例
[0322] 实施例1-
[0323] 花青素(AC)对肿瘤坏死(因子)α诱导的Caco-2细胞屏障完整性损失的作用的台式研究(bench top study)
[0324] 测量花青素(AC)和含有不同类型AC的7种富AC提取物的能力，以确定其抑制肿瘤坏死(因子)α(TNFα)诱导的Caco-2细胞单层通透化的能力。还测试AC，以确定AC化学结构/构象和(确定)AC含量程度与AC抑制TNF-α诱导的Caco-2细胞单层通透化的任何保护能力之间的关系。
[0325] 材料
[0326] Caco-2细胞从American Type Culture Collection(Rockville，MA)获得。
[0327] 细胞培养基和试剂来自Invitrogen/Life technologies(Grand Island,NY)。
[0328] HBSS 1X(21-022-CV)从Corning(Manassas，VA)获得。
[0329] Milicell细胞培养插入物12mm和30mm(0.4μm孔聚酯膜)(分别为PIHP01250和PIHP03050)从EMD Millipore(Hayward，CA)获得。
[0330] 异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖(46944-100MG-F)和人肿瘤坏死因子α(TNFα)(T6674-10UG)从Sigma Chem.Co.(St.Louis,MO)获得。
[0331] 人干扰素γ(IFN-γ)(#8901SC)从Cell Signaling Technology(Danvers，MA)获得。
[0332] 纯花青素：花翠素3-O-葡萄糖苷(myrtillin)(0938)、矢车菊素3-O-葡萄糖苷(kuromanin)氯化物(0915S)和锦葵色素-3-O-葡萄糖苷(Oenin)(0911S)从Extrynthese(Genay Cedex，法国)获得。
[0333] 富含花青素的粉末提取物由Pharmanex Research(Nu Skin Enterprise)提供，并且包括野樱莓提取物粉末(35％总AC)、黑米提取物(20％总AC)、野生蓝莓提取物(5％总AC)、越桔提取物(36％总AC)、岩高兰提取物粉末(30％总AC)、蓝莓提取物(25％总AC)和红葡萄提取物(至少10％总AC)。
[0334] 方法
[0335] 化学结构的解析通过根据Allinger的分子力学(MM2)利用在ChemBio3D Ultra 11.0.1(Cambridge Science Computing，Inc.)中可获得的程序进行。花青素的结构呈现在图-5-9中。
[0336] 在37℃和5％(v/vl)CO2气氛下，在无酚红的最低基础培养基(minimum essential medium，MEM)中培养Caco-2细胞。MEM培养基补充有：10％(v/v)胎牛血清；抗生素(50μg/ml青霉素和50μg/ml链霉素)；1％非必需氨基酸(NEAA)；和1％丙酮酸钠。将细胞在汇合后培养21天，以便分化成肠上皮细胞。在21天的过程中，每3天更换培养基。
[0337] 21天后，在Millicell细胞插入物(30mm，0.4μm孔聚酯膜)中，caco-2细胞分化成极化单层，并被置于6孔板中。顶侧(apical)腔室由1.5ml培养基组成。在最初向顶侧腔室加入15μl溶于20％(v/v)乙醇的1mg/ml提取物溶液后，将细胞在37℃和5％(v/vl)CO2下温育。
[0338] 取样在0、1小时和3小时时进行。对于初始时间点，将15μl培养基从顶侧腔室取出，并加入等体积的提取物。将板轻轻搅动，并立即从上腔室取出200μl样品。在1小时和3小时时，取样顶侧腔室和基底侧(basolateral)腔室。将所有样品立即用2.5μL的12M HCl酸化，并置于-80℃冷冻机中直至分析时。
[0339] 通过高效液相色谱(HPLC)-质谱(MS)/MS确定各提取物中在与细胞层相互作用后存在的多酚代谢产物。在连接有二极管阵列检测器(DAD)的Agilent系1200仪器(AgilentTechnologies，Santa Clara，CA)上进行液相色谱，该二极管阵列检测器在280和
520nm波长下监测细胞。利用具有SecurityGuard 套筒(PFP，4.0×2.0mm)的Phenomenex Kinetex F5五氟苯基HPLC柱(2.6μM，100×4.6mm)进行分离，流速为0.70mL min-1并且温度为37℃。注射器温度设定为4℃，并且7μL注射。采用由1.0％甲酸(v/v)水溶液(流动相A)和
1.0％甲酸(v/v)乙腈溶液(流动相B)组成的二元梯度(Fisher Science，Fair Lawn，NJ)。梯度如下：在0分钟时1％B，在7分钟时7.5％B，在14分钟时7.6％B，在17分钟时10％B，在18.5分钟时12％B，在24分钟时30％B，在25分钟时90％B，在26-30分钟时1％B。利用具有电喷雾注射的Agilent 6430三重四极杆质谱仪(Agilent Technologies，Santa Clara，CA，USA)和选择为采集模式的多反应监测(MRM)获得质谱数据。最佳MS/MS源参数设定如下，雾化器在
40psi，毛细电压+4000V(或-3500V)，气体温度325℃，流量5L-min。鞘流气为250℃，鞘流量为11L-min。
520nm波长下监测细胞。利用具有SecurityGuard 套筒(PFP，4.0×2.0mm)的Phenomenex Kinetex F5五氟苯基HPLC柱(2.6μM，100×4.6mm)进行分离，流速为0.70mL min-1并且温度为37℃。注射器温度设定为4℃，并且7μL注射。采用由1.0％甲酸(v/v)水溶液(流动相A)和
1.0％甲酸(v/v)乙腈溶液(流动相B)组成的二元梯度(Fisher Science，Fair Lawn，NJ)。梯度如下：在0分钟时1％B，在7分钟时7.5％B，在14分钟时7.6％B，在17分钟时10％B，在18.5分钟时12％B，在24分钟时30％B，在25分钟时90％B，在26-30分钟时1％B。利用具有电喷雾注射的Agilent 6430三重四极杆质谱仪(Agilent Technologies，Santa Clara，CA，USA)和选择为采集模式的多反应监测(MRM)获得质谱数据。最佳MS/MS源参数设定如下，雾化器在
40psi，毛细电压+4000V(或-3500V)，气体温度325℃，流量5L-min。鞘流气为250℃，鞘流量为11L-min。
[0340] 花青素参考标准品由下列组成：锦葵色素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-半乳糖苷、花翠素-3-O-葡萄糖苷、天竺葵色素-3-O-葡萄糖苷和芍药花青素-3-O-葡萄糖苷(Extransynthese，Genay Cedex，法国)。被检测到了但没有参考标准品的花青素通过锦葵色素3-O-葡萄糖苷的等同形式定量。酚酸参考标准品包括丁香酸、香草酸、原儿茶酸、4-羟基苯甲酸、没食子酸(Sigma-Aldrich St.Louis,MO)和3-O-甲基没食子酸(Extrasynthese,Genay Cedex,法国)。间苯三酚醛由Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)提供。
[0341] 为了测量经上皮电阻(TEER)，通过在置于12孔板中的跨孔插入物(12mm，0.4μm孔聚酯膜)中培养，使细胞分化成极化单层。上皮细胞单层最初与干扰素γ一起被温育24小时以上调TNF-α受体。然后，将上腔室的单层与富花青素提取物(1-10μg/ml)或纯化的化合物，或与myrtillin氯化物、kuromanin氯化物和oenin氯化物——以0.25、0.5和1μM浓度加入顶侧隔室——一起预温育30分钟。随后将TNFα(5ng/ml)加入到基底侧隔室，并将细胞再培养6小时。
[0342] 为了确定TEER评估，从顶侧和基底侧隔室取出培养基，用HBSS 1X冲洗细胞，并将相同溶液加入两隔室中，并测量TEER。使用Millicell-ERS电阻系统(Millipore，Bedford，MA)测量TEER，该系统包括双电极伏安计。见图10。TEER以下列计算：
[0343] TEER＝(Rm-Ri)×A
[0344] (I)
[0345] 其中，Rm是跨膜电阻；Ri是无细胞培养基的固有电阻；和A是膜表面积(cm2)[0346] 为了确定旁细胞转运，测量FITC-葡聚糖(4kDa)的顶侧至基底侧清除率。在与TNFα一起温育6小时后，用新鲜血清和无酚红MEM替换两个隔室中的培养基；然后将FITC-葡聚糖加入顶侧隔室中(最终浓度100μM)，并使其温育3.5小时。随后，收集100μl基底侧隔室中的培养基并用100μl HBSS 1X稀释。在荧光板式读取器中，在λexc：485nm和λem：530nm下测量荧光。使用Statview 5.0(SAS Institute Inc.,Cary,NC)通过单向方差分析(ANOVA)分析数据。利用Fisher最小显著性差异检验检查组平均值间的差异。认为P值<0.05是统计学显著的。数据显示为平均值±SEM。
[0347] 结果
[0348] 通过HPLC-MS/MS评估的各种提取物中的AC浓度如表5所示。
[0349] 表5：花青素含量
[0350]
[0351] 在不同的提取物中，总AC含量在各提取物的8.5-82μmol/g之间变化。对于个体AC，矢车菊素、花翠素、矮牵牛素、芍药花青素和锦葵色素的不同糖苷的含量分别在各提取物的0至30.05；0至37.43；0至9.70；0至3.45；和0至34.56μmol/g范围内。
[0352] 在所研究的提取物中发现的AC非糖基化形式(花青素)的化学结构和构象示于图5-9中。虽然所有矢车菊素的环A和C是相同的，但矢车菊素、花翠素、矮牵牛素、芍药花青素和锦葵色素的B环相对于C环的定位分别显示39、37、34、39和43度的diedric角值。B环的位置可以在矢车菊素和花翠素的有益性质中起作用。如图7-9可见，矮牵牛素、芍药花青素和锦葵色素不包含相同的B环定位。
[0353] 岩高兰提取物含有最高的总AC含量82mol/g，并且递送多样性较高的个体AC(矢车菊素、花翠素、矮牵牛素、芍药花青素和花翠素糖苷)中的一种(只有越桔AC是更多样性的)。因此，选择岩高兰提取物以确定富AC提取物防止TNFα诱导的Caco-2单层通透化的浓度依赖性能力，评估测量TEER和FITC-葡聚糖的旁细胞转运。在下腔室(Caco-2单层的基底侧)中，在5ng/ml TNFα存在下，温育Caco-2单层。这导致TEER显著降低(28％，p<0.05)和FITC-葡聚糖旁细胞转运增加(220％，p<0.05)。这些发现表明，在当前实验条件下，TNFα引起Caco-2细胞单层通透化增加。向上腔室(Caco-2单层的顶侧)加入岩高兰提取物(1-10μg/ml)造成单层TEER的浓度依赖性恢复和TNFα诱导的FITC-葡聚糖向下腔室转运的抑制。如图11和12可见，TEER值随着提取物量增加而增加，并且旁细胞转运值随着提取物量增加而减少。这表明了剂量依赖性效果。然后，确定所有富AC提取物抑制TNFα诱导的Caco-2细胞单层通透化的相对能力。在5μg/ml浓度下，提取物对抑制TNFα诱导的TEER和FITC-葡聚糖旁细胞转运改变具有差异性作用。见13和14图。
[0354] 表6：提取物标识符
[0355]标识符 提取物/制剂
C 对照-无提取物；TNFα未被诱导
TNF 诱导的肿瘤坏死(因子)α
1 野樱莓提取物
2 黑粒米提取物
3 野生蓝莓
4 越桔提取物
5 岩高兰提取物
6 蓝莓提取物
7 红葡萄
C 对照-无提取物；TNFα未被诱导
TNF 诱导的肿瘤坏死(因子)α
1 野樱莓提取物
2 黑粒米提取物
3 野生蓝莓
4 越桔提取物
5 岩高兰提取物
6 蓝莓提取物
7 红葡萄
[0356] 野樱莓(1)、黑粒米(2)和蓝莓(6)提取物最有效抑制TNFα诱导的TEER改变，而黑粒米(2)、越桔(4)和岩高兰(5)提取物最有效抑制TNFα诱导的FITC-葡聚糖旁细胞转运改变。提取物对TNFα诱导的单层通透化的保护作用是浓度依赖性的。
[0357] 为了评价提取物中存在的AC是否可以涉及提取物对Caco-2细胞屏障完整性的有益作用，评估TEER与总提取物AC含量和个体提取物AC含量之间的相关性。TEER值与总AC含量、或与提取物中芍药花青素、锦葵色素和矮牵牛素的含量不显著相关；然而，TEER值与提取物的矢车菊素(r：0.73)和花翠素(r：0.81)糖苷含量显著相关(p<0.03)，见图15和16，表明这些特定AC的保护作用。
[0358] 表7：花青素含量与防止TNFα诱导的TEER降低的保护能力之间的相关性
[0359]
[0360]
[0361] *p<0.05，只有矢车菊素和花翠素浓度与针对TNFα诱导的通透性的保护能力显著正相关，换句话说，只有矢车菊素和花翠素，而非总AC或其它个体AC，是保护性的。
[0362] 表8：提取物的表儿茶素、儿茶素和总儿茶素含量
[0363] 标识符 提取物/制剂 表儿茶素 儿茶素 总儿茶素1 野樱莓提取物 8.4 4.7 13.1
2 黑粒米提取物 - - -
3 野生蓝莓 - 0.9 0.9
4 越桔提取物 2.9 2.7 5.6
5 岩高兰提取物 9.5 5.7 15.2
6 蓝莓提取物 - - -
7 红葡萄 2.8 3.0 5.8
2 黑粒米提取物 - - -
3 野生蓝莓 - 0.9 0.9
4 越桔提取物 2.9 2.7 5.6
5 岩高兰提取物 9.5 5.7 15.2
6 蓝莓提取物 - - -
7 红葡萄 2.8 3.0 5.8
[0364] 发现表儿茶素和儿茶素防止TNFα诱导的肠道屏障完整性损失。见图17-20。
[0365] 实施例2-毒性研究
[0366] 进行了毒性研究，以确定包含矢车菊素、花翠素和益生素掺混物的组合物在向Wistar大鼠口服给予90天后的毒性。该研究还评价了剂量响应关系和未观察到的不利影响水平的确定。
[0367] 材料-环境
[0368] 随机选择健康的Wistar大鼠(Rattus norvegicus)以参与研究。然后将6-8周龄之间的60只雌性和60只雌性大鼠分配到6个不同的组中。
[0369] 将动物单独圈养在标准尺寸(40.5x 24x 18.5cm)的聚碳酸酯笼子中，笼子有灭菌的玉米芯垫层。每周并且必要时更频繁地更换垫层，以保持动物清洁和干燥。
[0370] 室温保持在22±3℃之间，并且相对湿度在30-70％之间。人工光照循环12小时光照和12小时黑暗。动物室中每小时至少12次更换空气。
[0372] 方法
[0373] 选定的大鼠由兽医检查，然后使其在初次用药前适应测试条件5天。在研究开始之前，利用计算机生成的随机分配表，将大鼠分配到六个不同的组中。动物的重量变化是最小限度的，并且不超过平均重量的±20％。
[0374] 表9：小鼠和饮食分组
[0375]
[0376] 在用药当天，每天准备口服制剂。将制剂溶解在水溶液中。预计高剂量相当于人剂量。
[0377] 制剂由蓝莓提取物(3.6％)、黑醋栗提取物(5.2％)、黑米提取物(15.6％)、菊苣菊粉(48％)和短链寡聚果糖(27.6％)组成，并且每天一次在每天同一时间被口服给予连续90天。制剂给予量为10ml/kg体重。
[0378] 每天观察所有动物的临床体征和症状。动物在其家笼中、在取出/手持观察期间、在阔野中被单独观察感官反应性。在家笼中，观察动物的姿势、呼吸速率和程度、阵挛性不自主运动、强直性不自主运动、发声和眼睑闭合。在手持观察期间，观察动物的眼睑闭合、流泪、眼睛和皮肤检查、竖毛和流涎。在阔野观察期间，观察动物的步态、活动性、觉醒、呼吸、阵挛性运动、强直性运动、发声、饲养(rearing)、尿液滩、粪球、刻板行为(stereotype)和怪异行为。在感官反应性观察期间，评估动物的感官反应性，包括点击响应、触摸响应、掐尾响应和接近响应。
[0379] 在研究过程中每周第1天和在尸检当天将动物称重。
[0380] 在处理的最后一周，收集和分析尿液用于物理参数和显微镜检查。为了收集尿液，将动物圈养在代谢笼中16-18小时，该笼底部连接刻度管。
[0381] 在第91天，在尸检前采集血样用于血液学和化学分析，并且在采血前将动物禁食过夜16-18小时。在第91天，对组1-4中的动物通过过量的CO2进行尸检并进行身体(物理，physically)检查。打开颅腔、胸腔和内脏腔并进行宏观检查。将器官进行组织和脂肪修整并称重。然后收集器官和组织并将其保存在10％缓冲福尔马林中，除了睾丸固定在改良Davidson液体中。在第105天，对5-6组中的动物进行尸检，身体检查，并对其器官称重。
[0382] 结果
[0383] 在研究期间，物理观察大部分正常和/或所有组一致，并且确定为毒理学不显著。未观察到阵挛性或强直性行为。唯一的怪异行为是咬纸行为。每天观察所有组(包括对照组)的咬纸行为。触摸响应和接近响应很快。观察掐尾为退缩，并且瞳孔响应正常。
[0384] 治疗组和对照组的血液学和临床化学没有显示任何显著差异。尿液化学也未显示所有实验动物之间有任何显著差异，并且与G1和G4组的动物相当。
[0385] 研究中各组的平均体重相似。平均体重在研究期间逐渐增加。未观察到食物消耗量的变化。记录了器官重量比的不显著变化，并认为其是毒理学上不显著的。在两种性别和随机分布的对照组中均发现组织病理学损伤。因此，认为该损伤本质上是随机的。
[0386] 研究得出如下结论：在研究中给予的任何剂量下，制剂在物理、生理、神经行为、生物化学、血液学和组织病理学参数方面未产生任何显著的毒理学变化。没有任何处理相关的变化被认为是毒理学显著的。
[0387] 实施例3-动物研究1
[0388] 使用高脂肪饮食诱导肥胖的小鼠模型来研究富含花青素的饮食防止和/或减轻肥胖诱导的肠炎症、肠道屏障通透性增加和胰岛素抵抗的潜在能力。评价花青素补充对高脂肪饮食诱导的(a)肠道炎症、(b)肠道通透性、(c)肠道微生物群和(d)花青素代谢的影响。
[0389] 材料
[0390] 从Jackson实验室获得60只健康雄性C57BL/6J小鼠(20-23g)，并将其圈养在标准不锈钢笼中(4只小鼠/笼)。利用小鼠室和垫层提供富集环境。在开始处理前使小鼠适应一周。将小鼠分组并对其(10只小鼠/组/时间点)喂食下列中的一种：对照饮食；对照饮食+花青素；高脂肪饮食；高脂肪饮食+2％花青素；高脂肪饮食+20％花青素；或高脂肪饮食+40％花青素。以下描述这些饮食中的组分。
[0391] 对照饮食，TD.06416，从Harlen Teklad,WI获得，调节到大约10％的脂肪卡路里。
[0392] 高脂肪饮食，TD.06414，从Harlen Teklad,WI获得，并且是60％脂肪饮食。已知这种饮食随着时间诱导增重和肥胖发展。与增重同时，已知这种饮食会产生脂质水平(甘油三酯、胆固醇和脂肪细胞积累)增加；血糖升高、胰岛素不敏感发展；以及当长期喂食时的糖尿病。
[0393] 花青素混合物从Nu Skin Enterprises获得。该混合物由黑米提取物、黑醋栗提取物和蓝莓提取物构成。
[0394] 方法
[0395] 将小鼠圈养在不锈钢笼中。每个笼中圈养4只小鼠。每组中放置10只小鼠。
[0396] 表10：饮食和用药数据
[0397]
[0398] 对各组小鼠喂食上述指定饮食中的一种。每周监测食物摄入。每两周收集一次体重，并制备新鲜饮食。在第0、2、4、6、8、10和12周收集和测试粪便。在第4周和第10周收集尿液。在第8周和第13周收集灌胃(gavage)。在第10周和第12周与第13周中途采集血液。在第14周，将小鼠实施安乐死。
[0399] 为了测量肠道通透化，在饮食上在第8周通过灌胃给予FITC葡聚糖的旁细胞转运。
[0400] 进行胃肠道不同部分中的基因阵列。
[0401] 作为紧密连接蛋白的表达和调节机制的评价，测量紧密连接的完整性。
[0402] 通过测量肠粘膜中的F480+巨噬细胞浸润、血浆CRP、TNF、MCP-1和肝脏/肠粘膜的iNOS表达来确定炎症。
[0403] 此外，在第10周和第11周进行ITT/GTT，以确定胰岛素敏感性、肠道健康和微生物群之间的关系。
[0404] 结果
[0405] 在饮食过程中，各组小鼠具有稳定的增重。在第0-8周期间观察到最大量的增重，并且在第8-12周期间增加较少。总体而言，高脂肪饮食和高脂肪饮食+2％AC的小鼠在研究中增重最多。
[0406] 表12：平均增重
[0407]
[0408] 小鼠被喂食以补充有60％脂肪源卡路里的饮食，在该饮食的8-16周内，发展肥胖、胰岛素抵抗和肠道通透化。
[0409] 尽管增重，但高脂肪饮食小鼠消耗的食物量小于对照饮食小鼠消耗的食物量。在研究期间，各组摄入的食物量在每周2-5克之间。对照和对照+花青素饮食的动物一般每周消耗3 1/4至4 1/2食物。高脂肪饮食和高脂肪+饮食的动物一般每周消耗2 1/4至3 1/4克食物。各组的能量摄入相似。该研究支持了饮食与总重之间的联系；然而，研究还表明，花青素的补充总体上具有总增重降低趋势。
[0410] 此外，确定小鼠的结肠总长和体重。图21、22和23。还测量了FTC-葡聚糖通透性、肠道通透性和内毒素血症。分别图24、25和26。高脂肪饮食小鼠具有最多的旁细胞转运，表明肠道通透性较高。补充有甚至少量花青素的高脂肪饮食降低或维持较低水平的肠道通透性。高脂肪饮食小鼠还经历较高量的内毒素血症。
[0411] 测试血液的葡萄糖和胰岛素浓度，如图27和28所示。
[0412] 表13：血浆葡萄糖和胰岛素浓度
[0413]
[0414] 高脂肪饮食和含20％AC饮食的小鼠呈现最高的葡萄糖和胰岛素水平。此外，随着内毒素增加，葡萄糖耐受性和禁食胰岛素水平也增加。图29和30。内毒素水平也随着IL-6和IL-1α水平增加而增加；然而，1L-β水平未显示与内毒素水平相关的趋势。图31-33。
[0415] HOMA-IR(胰岛素抵抗的稳态模型评估，这是胰岛素敏感性的生物标志物)、脂联素和瘦素水平也分别在图34、35和36中示出。脂联素是源自脂肪细胞的、具有抗动脉粥样硬化、抗炎和抗糖尿病性质的、在肥胖时降低的细胞因子。瘦素是源自脂肪细胞的、在控制饱腹感和能量消耗方面起作用的另一种细胞因子。瘦素不敏感，如胰岛素不敏感一样，已经与增重和肥胖相关。Ghrelin是已知刺激食欲的激素。
[0416] 此外，测量血浆、肝脏和粪便中的甘油三酯和胆固醇水平。见图37-40。如预期，高脂肪饮食导致血浆甘油三酯增加，然而，这种增加被所有三种AC剂量防止。图37。
[0417] 已经充分证实，高脂肪饮食导致该小鼠肝脂肪变性(脂肪肝)，因此，还测量了肝脏甘油三酯水平和胆固醇水平。虽然在高脂肪饮食对照组中甘油三酯显著增加，但40％AC饮食防止肝脏中的脂质积累，因为在对照组、对照+AC和HF+40％AC组中肝脏的甘油三酯水平相似。图38。所有含花青素饮食中的胆固醇水平也低于高脂肪饮食。图39和40。含花青素饮食中的肝甘油三酯水平也低于高脂肪饮食。图41。在图42和43中可以看到各饮食的小鼠肝脏及其粪便的代表性图像。
[0418] 值得关注的是，发现在食用高脂肪+40％AC饮食的小鼠中粪便的甘油三酯水平最高，表明花青素抑制脂肪吸收——这是AC掺混物可以防止高脂肪饮食诱导的肝脂肪变性和胰岛素不敏感的一种可能的机制。在食用高脂肪饮食和高脂肪+2％和20％AC组的小鼠中血浆胆固醇水平升高，仅40％AC饮食降低血浆胆固醇水平。这可以表明，含有花青素的补充剂可以降低血浆总胆固醇水平。所有高脂肪饮食组呈现在粪便中的胆固醇水平(似乎不受饮食中加入AC影响的一个参数)增加。
[0419] 实施例4-人的研究
[0420] 进行本研究以确定含有花青素、菊粉和益生素纤维的组合物对肥胖成人的微生物组成的影响。
[0421] 材料
[0422] 在下表14中，单剂量的组合物含有1.9g菊粉、1.1g寡聚果糖、144mg蓝莓、206mg黑醋栗提取物和618mg黑米提取物。
[0423] 表14：组合物
[0424]
[0425] 方法
[0426] 在研究开始前两周进行初次筛选。在初次筛选期间，潜在参与者完成对其病史的回顾，指出所有伴随治疗，并确定任何纳入和排除标准。还测量了潜在参与者的静息血压、心率、体重、身高和体重指数。当适用时进行妊娠测试。
[0427] 51名参与者在完成2周试验期后被纳入研究。参与者主要为女性(73％)和白种人(93％)。被接受的参与者是20-60岁的男性和女性。其BMI在29.9至39.9±1kg/m2(29.2～40.6kg/m2)范围内。参与者同意：在整个试验期间保持其身体活动水平；停止使用益生素(pre-biotic)和益生素(pro-biotics)和/或多酚补充剂；以及在基线评估之前和研究期间停止食用含有花青素的食物(蓝莓、野樱莓、樱桃、葡萄、葡萄汁、石榴、红莓、越橘(huckleberries)、草莓和葡萄酒)两。
[0428] 指示参与者每天早晨随早餐服用一袋制剂——通过将其混合到他们选择的饮料或食物中。如果参与者忘记了一剂，则指示他们在想起时就服用下一剂。参加者每天服用不超过一袋。参与者还记录伴随治疗、不利事件、食物记录、每日排便习惯和每日腹部不适的日记。此外，参与者完成胃气胀和气胀提问并且评估人体测量的测量结果。
[0429] 参与者在初次评估时和研究的第0、29和57天会见了调查小组。在第0天和第57天收集粪便样品、尿液样品和血液样品。
[0430] 粪便样品在第0天和第57天的48小时内收集。由威斯康辛州(Wisconsin)的U的实验室测量粪便样品中的微生物组成和钙卫蛋白。在照明平台和R&D系统(Minneapolis Mn.)上通过16srRNA测量微生物组成。
[0431] 在初次评估和研究结束时评估实验室参数(CBC、电解质(N、K、Cl、Ca)、HbA1c、肌酸、AST、ALT、GGT和胆红素)。
[0432] 在KGK Synergize诊所进行尿液筛查。血液参数由LifeLabs中心实验室通过标准方法测量。
[0433] 表15：每次探视所进行的测试
[0434]方案 预筛选 第0天 第29天 第57天
身高 X
体重 X X X X
心率 X
BP X X X
病史回顾 X X
身体检查 X X
妊娠测试 X
粪便样品 X
制剂分配 X
每日记录的日记分配/收集 X X X
排便习惯日记和问卷分配 X
粪便样品试剂盒分配 X
粪便样品试剂盒收集 X
身高 X
体重 X X X X
心率 X
BP X X X
病史回顾 X X
身体检查 X X
妊娠测试 X
粪便样品 X
制剂分配 X
每日记录的日记分配/收集 X X X
排便习惯日记和问卷分配 X
粪便样品试剂盒分配 X
粪便样品试剂盒收集 X
[0435] 按照KGK Synergize的标准操作程序执行数据输入和验证。对服用至少80％的治疗剂量的所有参与者的结果进行统计学分析。测试变量的正态性和对数正态性。通过适当的非参数检验分析非正态变量。通过配对Student t检验正式测试数值有效性和端点的显著性。
[0436] 结果
[0437] 最初纳入研究的51名参与者中的46名完成了研究。4个参与者在第0天探视之后以及在第29天的第一比较测量之前退出。一人在第29天和第57天的探视之间退出。
[0438] 微生物多样性
[0439] 补充以该组合物的参与者经历了其微生物组成方面有利的变化，如其厚壁菌门∶拟杆菌门比例的变化所证明。图44。该比例从4.98降至1.45(厚壁菌门从74.9％降至59％；拟杆菌门从13.8％增至34.5％)。此外，放线菌从8.5％减少到3.4％。在补充后，总共8个门(6种细菌、1种古细菌和1种其它)和40个属(7种放线菌、8种拟杆菌、1种广古菌
(Eurychaeota)、21种厚壁菌和3种变形菌(Proteobacteria))被改变。
(Eurychaeota)、21种厚壁菌和3种变形菌(Proteobacteria))被改变。
[0440] 表16：粪便中的细菌的门
[0441]
[0442] 表16：续
[0443]
[0444] 表17：粪便中的放线菌门、拟杆菌门和厚壁菌门的比例
[0445]
[0446]
[0447] 炎症
[0448] 在研究之后，粪便钙卫蛋白水平降低，表明胃肠道炎症减少的趋势。钙卫蛋白水平在下表中列出，和在图45中图示。
[0449] 表18：钙卫蛋白浓度
[0450]
[0451] 排便习惯
[0452] 发现在第6周和第7周时Bristol粪便评分与基线相比有5％增加。在研究过程中排便次数没有变化；然而，排便习惯得到改善。图46。参与者报告了在排便之前(33％)和停止排便时(51-54％)的用力减少以及不完全排便减少。
[0453] 表19：每日排便习惯的变化
[0454]
[0455]
[0456] 表19：续
[0457]
[0458] 胃气胀、不适和矢气
[0459] 参与者经历第3至8周与基线相比时胃气胀减少(第4周，41％；第5周，52％；和第8周，50％)。图47。
[0460] 表20：胃气胀
[0461]
[0462] 参与者还经历了腹痛和矢气的减少。矢气的严重程度随时间减少，从第5周的22％减少至第8周的11％。图47。
[0463] 表21：腹痛的变化
[0464]
[0465] 表22：矢气的变化
[0466]
[0467] 生命体征
[0468] 参与者经历了从基线到研究结束时舒张血压的临床上不显著降低。
[0469] 表23：生命体征
[0470]
[0471] 结论
[0472] 总体而言，本研究表明，该制剂能够改善轻度至中度肥胖但其他方面健康的个体的肠道微生物组。在该研究中，参与者经历了厚壁菌门比例显著减少和拟杆菌门比例显著增加。在补充的情况下，从第0天至第57天，厚壁菌门∶拟杆菌门比例降低。该比例从4.98变为1.45。此外，放线菌水平降低。这三个门占在基线(97.2％)时和补充后(96.9％)的细菌组成的97％。
[0473] 研究中的18名参与者记录了30个不利事件。在所报告的30个事件中，11个被评估为不可能，7个被评估为无关。其中2个不良事件被确定为可能的并且包括粪便变色和牙齿变色。10个可能的不良事件包括腹部不适、腹泻、粪便变色、排便频繁和呕吐的报告。
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