| 序号 | 专利名 | 申请号 | 申请日 | 公开（公告）号 | 公开（公告）日 | 发明人 |
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| 261 | CRISPR障碍的调节 | CN202280089151.1 | 2022-11-17 | CN118556126A | 2024-08-27 | M·D·王; P·M·霍尔 |
| 提供了和CRISPR Cas蛋白同时使用的经修饰的向导RNA(gRNA)。经修饰的向导RNA在其5'或3'端包括至少5个核苷酸，所述至少5个核苷酸包括反向重复序列，所述反向重复序列具有靶向DNA中的间隔子序列的区段。所述反向重复序列被配置成使得当存在所述DNA和所述Cas蛋白时，所述反向重复序列可以同时与所述间隔子序列和包括所述间隔子序列的所述DNA的互补链杂交。所述经修饰的gRNA影响所述Cas蛋白与DNA的相互作用。 | ||||||
| 262 | 一种基于单表达框的双组份双转录单元CRISPR/Cas表达框结构及其应用 | CN202410591275.0 | 2024-05-14 | CN118460594A | 2024-08-09 | 胡楠; 田洪林; 李艳华; 李道政; 王思婷; 张耀龙 |
| 本发明给出了一种基于单表达框的双组份双转录单元CRISPR/Cas表达框结构，从5'端到3'端依次包括Pol II型启动子、Cas基因，Poly(A)、tRNA1、Pol III型启动子、tRNA2、ccdB、向导RNA、tRNA3、Poly(T)、终止子等。所述表达框的优势在于，Cas和向导RNA在同一个表达框表达，可以在同一表达框产生2个转录本：转录本1由Pol III型启动子启动转录，经tRNA剪切只释放出sgRNA；转录本2由Pol II型启动子启动转录，经tRNA剪切可产生携带Poly（A）尾的Cas mRNA和sgRNA。该表达框系统结构紧凑，基因编辑效率高，靶点构建方便成功率高。 | ||||||
| 263 | 一种印第安纳沙门氏菌分子检测方法及试剂盒 | CN202410188685.0 | 2024-02-20 | CN117947194A | 2024-04-30 | 张笛; 龚建森; 盛中伟; 沈海玉; 董永毅; 李婷婷; 吴坤; 许明; 窦新红; 王怡 |
| 本发明涉及一种基于CRISPR的印第安纳沙门氏菌检测试剂盒及其方法，所述试剂盒包括F引物、R引物、向导RNA、Cas12b蛋白、单链核酸报告分子；所述F引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述R引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；所述向导RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示；所述单链核酸报告分子为5’‑/6‑FAM/CCCCCCCC/BHQ1/‑3’。本发明成功开发了一种印第安纳沙门氏菌检测试剂盒，采用本发明的试剂盒进行检测，核酸扩增和检测同步进行，无需开盖检测。实验结果表明，本发明印第安纳沙门氏菌检测系统具有较好的特异性和灵敏度。 | ||||||
| 264 | Cas3/Cascade蛋白复合物、CRISPR/Cas系统及其检测方法与应用 | CN202310884185.6 | 2023-07-18 | CN117050970A | 2023-11-14 | 胡涛; 胡纯一 |
| 本发明涉及生物检测技术领域，提供了一种源于嗜热古细菌的Cas3/Cascade蛋白复合物，包括TsiCas3和TsiCascade；所述TsiCas3包括Cas3HD、Cas3HEL，TsiCascade包括Cas5、Cas6、Cas7、Cas8和Cas11。本发明还提供了一种CRISPR/Cas系统以及基于CRISPR/Cas系统的核酸分子检测方法及应用。本发明CRISPR/Cas系统包括TsiCas3/Cascade蛋白复合物、ssDNA探针和向导RNA；一旦靶核酸与向导RNA杂交结合，TsiCas3/Cascade蛋白复合物被激活，会无序地切割非靶向单链DNA，再使用检测方法加以检测。 | ||||||
| 265 | CRISPR/Cas9系统的一种新应用 | CN202010939675.8 | 2020-09-09 | CN114231547A | 2022-03-25 | 邱金龙; 张丹丹; 姜丹丹; 尹康权 |
| 本申请公开了一种新的基于CRISPR/Cas9系统的基因组编辑系统，其包含载体1和载体2，其中载体1包含可操作地连接的Cas9核酸酶的编码核酸序列和λ‑Red同源重组系统的编码核酸序列，载体2包含可操作地连接的用于靶定到基因组特定位置的向导RNA的编码核酸序列、用于目标突变体构建的同源重组片段的核酸序列和可被诱导表达以靶定到载体2自身的向导RNA的编码核酸序列。本申请还公开了细胞进行基因编辑的方法。 | ||||||
| 266 | 一种基于CRISPR-Cas12a系统的运动发酵单胞菌基因组编辑方法及其应用 | CN201910692112.0 | 2019-07-30 | CN110358767A | 2019-10-22 | 杨世辉; 沈威; 彭文舫; 马立新 |
| 本发明属于基因编辑技术领域，尤其涉及一种基于CRISPR-Cas12a系统的运动发酵单胞菌基因组编辑方法及其应用。旨在以运动发酵单胞菌Zymomonas mobilis ZM4为模式菌株，基于CRISPR-Cas12a系统构建用于运动发酵单胞菌基因组编辑的方法，实现对基因组的定向编辑，为在该菌株中开展理性设计异源代谢途径及细胞工厂用于生物质燃料和生物材料的生产提供一套基因编辑工具，促进代谢工程等相关研究领域的发展。技术要点包括：构建诱导型表达的Cas12a重组菌株及含人工CRISPR表达单元的编辑质粒；设计向导RNA；将向导RNA引物序列退火后连接至编辑质粒中；将靶质粒转入感受态细胞表达编辑。 | ||||||
| 267 | 一种可调控基因表达的人类胚胎干细胞系及其应用 | CN201810036648.2 | 2018-01-15 | CN108559731A | 2018-09-21 | 荣知立; 林瑛; 马淑凤 |
| 本发明公开了一种可调控基因表达的人类胚胎干细胞系及其应用。本发明可调控基因表达的人类胚胎干细胞系包含可控表达外源性融合蛋白系统和至少一种向导RNA，所述可控表达外源性融合蛋白系统包括四环素诱导表达系统和以Cas9蛋白和具有转录激活活性的p300核心结构域构成的融合蛋白；所述向导RNA为靶向基因启动子区的14bp短序列或针对基因组区域的20bp的长序列。本发明可实时控制Cas9-p300在人类胚胎干细胞中表达，实现在人类胚胎干细胞分化的不同阶段特定基因激活和切割双功能，大大的扩展了人类胚胎干细胞在医学和生命科学领域中的应用。 | ||||||
| 268 | 一种用于基因工程的骨干质粒载体及应用 | CN201410225911.4 | 2014-05-23 | CN103981215A | 2014-08-13 | 秦瑞英; 杨剑波; 李莉; 魏鹏程; 李浩; 杨亚春; 倪大虎; 倪金龙; 宋丰顺; 陆徐忠; 马卉 |
| 本发明公开了一种用于基因工程的骨干质粒载体，所述骨干质粒载体中，向导RNA表达框和Cas9核酸酶表达框位于同一双元载体中，向导RNA表达框由水稻U6启动子，壮观霉素抗性基因、人工合成的sgRNA骨架序列和Poly-T终止子依次构成；Cas9核酸酶表达框由ZmUBI启动子，水稻偏好密码子改造后的Cas9编码序列和35s终止子依次构成。本发明还提供了利用所述质粒载体构建的含有靶标序列的重组载体，及其在水稻基因打靶中的应用。 | ||||||
| 269 | 一种水稻基因组定点改造方法 | CN201310278482.2 | 2013-07-04 | CN103382468A | 2013-11-06 | 高彩霞; 单奇伟; 王延鹏; 李君; 陈坤玲 |
| 本发明公开了一种实现水稻目的基因中靶标片段上的随机插入和/或随机缺失的基因改造方法。本发明的方法包含以下步骤：使水稻组织中含有向导RNA和Cas9核酸酶，然后在向导RNA和Cas9核酸酶共同作用下，目的基因上的双链靶标片段被剪切，再通过水稻细胞的自身DNA修复功能，最终实现水稻目的基因中靶标片段上的随机插入和/或随机缺失。实验证明，本发明方法能够成功地对水稻进行基因突变。 | ||||||
| 270 | 用于即时核酸检测的组合物和方法 | CN202411221633.5 | 2022-01-07 | CN119913238A | 2025-05-02 | 殷昊; 芦舒涵; 张楹; 佟晓晗; 张坤; 周溪; 张定宇 |
| 提供了用于简单、无仪器且灵敏的方法的组合物和方法，该方法能够对目的核酸分子进行快速、即时检测。这基于一个令人惊讶的发现，即扩增及基于CRISPR的切割和检测的相对效率可以调整为利于扩增，直到生成足够的扩增产物实现检测。示例方法包括设计向导RNA和引物以靶向非最优PAM序列，或序列工程化Cas核酸酶以降低其在与该向导RNA形成核糖核蛋白或者结合或切割底物核酸方面的活性。 | ||||||
| 271 | 用于即时核酸检测的组合物和方法 | CN202411221632.0 | 2022-01-07 | CN119286993A | 2025-01-10 | 殷昊; 芦舒涵; 张楹; 佟晓晗; 张坤; 周溪; 张定宇 |
| 提供了用于简单、无仪器且灵敏的方法的组合物和方法，该方法能够对目的核酸分子进行快速、即时检测。这基于一个令人惊讶的发现，即扩增及基于CRISPR的切割和检测的相对效率可以调整为利于扩增，直到生成足够的扩增产物实现检测。示例方法包括设计向导RNA和引物以靶向非最优PAM序列，或序列工程化Cas核酸酶以降低其在与该向导RNA形成核糖核蛋白或者结合或切割底物核酸方面的活性。 | ||||||
| 272 | 一种中高温Argonaute蛋白在特异性切割靶核酸中的应用 | CN202211260452.4 | 2022-10-14 | CN115975985B | 2023-09-26 | 马立新; 王飞; 王珑瑜; 谢晓晨; 陈晚苹 |
| 本发明公开了一种中高温Argonaute蛋白在特异性切割靶核酸中的应用，所述Argonaute蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码该Argonaute蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供了上述Argonaute蛋白的体外合成方法，并发现该蛋白对两种向导5’OH‑gRNA和5’P‑gRNA具有结合活性，其能够利用这两种向导去切割靶ssDNA和利用5’OH‑gRNA去切割靶RNA，实现靶向DNA或靶向RNA编辑，同时还可切割质粒。因此，本发明为基于原核生物来源的Argonaute蛋白的基因克隆和分子检测提供了一种新的工具。 | ||||||
| 273 | 一种基于CRISPR/Cas12a系统的核酸检测试剂盒和检测方法 | CN202211362447.4 | 2022-11-02 | CN115948614B | 2023-09-19 | 请求不公布姓名 |
| 本发明属于病原核酸检测技术领域，具体公开了一种基于CRISPR/Cas12a系统的核酸检测试剂盒和检测方法，该试剂盒包括crDNA扩增引物对、Cas12a蛋白、用于变温扩增的DNA聚合酶、RNA聚合酶和单链DNA报告分子；所述crDNA扩增引物对包含启动子序列，用于扩增能够体外转录产生crRNA的转录模板，所述crRNA包括用于与所述Cas12a蛋白结合的锚定序列和用于靶向靶标序列的向导序列，所述向导序列的长度为43bp～75bp。本发明试剂盒无需额外提供RNA，有利于试剂盒的保存与运输，可用于POCT检测，适用于对各种病毒的现场快速高灵敏筛查，可最大程度遏止病毒的传播，具有广阔的应用前景。 | ||||||
| 274 | 具核梭杆菌检测剂及其用途 | CN202211735336.3 | 2022-12-31 | CN116574819A | 2023-08-11 | 孙爱娟; 秦环龙; 田甜; 徐荣荣; 曹展; 张田田; 林红霞; 孙玉龙; 王弢 |
| 本申请涉及一种具核梭杆菌检测剂，所述检测剂包括CRISPR检测试剂，所述CRISPR检测试剂包含Cas效应蛋白、信号报告探针和一种或多种被设计成结合至相应靶分子的向导RNA，其中，所述靶分子包括具核梭杆菌核酸。本申请在发现血液中游离核酸中存在具核梭杆菌核酸，并且发现该具核梭杆菌核酸能够作为结直肠肿瘤标志物的的基础上，通过研究CRISPR检测技术对不同扩增体系下的具核梭杆菌核酸进行向导RNA设计，发现CRISPR检测技术能够提高各种扩增方法的扩增产物检测结果的灵敏度，进而提高血浆检测具核梭杆菌的灵敏度，从而提高了结直肠癌筛查和诊断的准确性。 | ||||||
| 275 | PEAV的RAA-CRISPR/Cas12a检测组合物、反应装置、试纸条及试剂盒 | CN202310211472.0 | 2023-03-07 | CN116287460A | 2023-06-23 | 张永宁; 王文龙; 周磊; 盖新娜; 韩军; 郭鑫; 杨汉春 |
| 本发明公开了PEAV的RAA‑CRISPR/Cas12a检测组合物、反应装置、试纸条及试剂盒，基于RAA和CRISPR/Cas12a技术相结合的PEAV核酸快速可视化检测方法的引物对、向导RNA(gRNA)、探针、反应装置、试纸条和试剂盒，以PEAV的N基因为诊断靶标，设计、筛选、优化并最终获得了能够特异性检测PEAV核酸的通用引物对、通用向导RNA以及两种不同探针。在实现对PEAV快速、特异、灵敏和便携检测的同时，本发明提供的反应装置有效避免了扩增子开盖转移极易造成气溶胶污染和检测时间延长的问题，适用于PEAV的现场、快速、可视化检测，应用前景广阔。 | ||||||
| 276 | 用于即时核酸检测的组合物和方法 | CN202280002216.4 | 2022-01-07 | CN115335536A | 2022-11-11 | 殷昊; 芦舒涵; 张楹; 佟晓晗; 张坤; 周溪; 张定宇 |
| 提供了用于简单、无仪器且灵敏的方法的组合物和方法，该方法能够对目的核酸分子进行快速、即时检测。这基于一个令人惊讶的发现，即扩增及基于CRISPR的切割和检测的相对效率可以调整为利于扩增，直到生成足够的扩增产物实现检测。示例方法包括设计向导RNA和引物以靶向非最优PAM序列，或序列工程化Cas核酸酶以降低其在与该向导RNA形成核糖核蛋白或者结合或切割底物核酸方面的活性。 | ||||||
| 277 | 通过细胞外囊泡来递送CRISPR/MCAS9以用于基因组编辑 | CN202080039873.7 | 2020-04-02 | CN113923983A | 2022-01-11 | 蔡后建 |
| 本文公开了一种用于基因编辑的融合蛋白，其包含Cas9结构域，所述Cas9结构域被配置成封装到外泌体中并定位至受体细胞的细胞核。还公开了包含编码所公开的Cas9融合蛋白的核酸序列的重组多核苷酸。还公开了包含所公开的多核苷酸的细胞。还公开了制备基因编辑组合物的方法，其涉及在适于产生封装向导RNA和融合蛋白的细胞外囊泡的条件下培养所公开的细胞。还公开了涉及封装所公开的Cas9融合蛋白和向导RNA的细胞外囊泡的基因编辑组合物。最后，本文还公开了用于在细胞中编辑基因的方法，其涉及使所述细胞与本文公开的基因编辑组合物接触。 | ||||||
| 278 | 经改造的Cas9蛋白及其用途 | CN201980069492.0 | 2019-10-24 | CN113166738A | 2021-07-23 | 秦园博 |
| 本发明涉及一种蛋白质，其由下述序列构成且具有与向导RNA结合的能力，所述序列包含如下氨基酸序列：在序列号2所示的氨基酸序列中，具有在第721～755位之间连续的缺失区域，与该缺失区域分别相邻的氨基酸通过由3～10个氨基酸残基构成的接头连接。该蛋白质尽管存在缺失区域、与全长的dSaCas9相比缩小，但是与向导RNA结合的能力以及DNA结合亲和性得到了维持。小型化的dSaCas9蛋白的使用使更多的基因向载体中的搭载成为可能。 | ||||||
| 279 | 重组后不产生移码突变的载体、在爪蛙基因组中进行基因定点敲入的方法及应用 | CN201510021863.1 | 2015-01-15 | CN104611368B | 2018-05-25 | 陈永龙; 石照应 |
| 本发明提供了一种重组后不产生移码突变的载体、在爪蛙基因组中进行基因定点敲入的方法及应用。该方法包含以下步骤:1)使爪蛙受精卵中含有向导RNA、Cas9核酸酶以及带有胰腺ela‑荧光筛选标签和Cas9靶标片段的供体载体，2)在向导RNA和Cas9核酸酶共同作用下，爪蛙基因组中目的基因中以及供体载体上的双链Cas9靶标片段被剪切，3)通过爪蛙细胞的自身DNA修复功能，实现在爪蛙基因组中的基因定点敲入；4)G0代胚胎通过胰腺ela‑荧光标签进行筛选，并对F1进行southern blot鉴定。本发明为利用爪蛙为模式动物研究遗传学和研究人类疾病奠定基础。 | ||||||
| 280 | 一种用于基因工程的骨干质粒载体及应用 | CN201410225911.4 | 2014-05-23 | CN103981215B | 2016-06-29 | 秦瑞英; 杨剑波; 李莉; 魏鹏程; 李浩; 杨亚春; 倪大虎; 倪金龙; 宋丰顺; 陆徐忠; 马卉 |
| 本发明公开了一种用于基因工程的骨干质粒载体，所述骨干质粒载体中，向导RNA表达框和Cas9核酸酶表达框位于同一双元载体中，向导RNA表达框由水稻U6启动子，壮观霉素抗性基因、人工合成的sgRNA骨架序列和Poly-T终止子依次构成；Cas9核酸酶表达框由ZmUBI启动子，水稻偏好密码子改造后的Cas9编码序列和35s终止子依次构成。本发明还提供了利用所述质粒载体构建的含有靶标序列的重组载体，及其在水稻基因打靶中的应用。 | ||||||
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