磺酰脲衍生物、其药物组合物及应用 |
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| 申请号 | CN201610816035.1 | 申请日 | 2016-09-09 | 公开(公告)号 | CN106518946A | 公开(公告)日 | 2017-03-22 |
| 申请人 | 上海迪诺医药科技有限公司; | 发明人 | 利群; 高大新; 刘胜洋; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及一种磺酰脲类化合物以及含有相同组分组合物的制备方法和其作为FXR和/或TGR5激动剂的用途，该激动剂为如式(I)所示的化合物，或其药学上可接受的盐，前药， 溶剂 化物，异构体，以及稳定同位素衍 生物 。本发明涉及的化合物可用于 治疗 由FXR和/或TGR5介导的 疾病 ，包括：原发性胆汁性肝硬化，非酒精性脂肪肝， 门 静脉高压症，胆汁酸腹泻和胆汁淤积，II型糖尿病和 肥胖症 等领域。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种如式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂化物、水合物、稳定的同位素衍生物及药学上可接受的盐； |
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| 说明书全文 | 磺酰脲衍生物、其药物组合物及应用技术领域[0001] 本发明涉及一种磺酰脲类化合物以及含有相同组分组合物其异构体、前药或药学上可接受的盐、稳定的同位素衍生物、其药物组合物、制备方法及应用。 背景技术[0002] 法尼酯X受体(FXR)是核激素受体超级家族中的一员，属于由配体激活的转录因子之一，这个家族包括类固醇受体，视黄醇受体，和甲状腺荷尔蒙受体。FXR广泛存在于肝脏，肠道，肾脏，肾上腺和其他胆酸存在的组织中。胆酸或其牛磺酸或甘氨酸酰胺偶联物是已知的FXR内源性配体，包括鹅去氧胆酸(CDCA)，脱氧胆酸(DCA)，石胆酸(LCA)，他们可以在生理浓度下与FXR结合并激活FXR受体。FXR在胆汁平衡、糖代谢和脂类代谢中起到重要的调控作用。 [0003] 胆酸是胆固醇的代谢产物，在肝脏合成后分泌到十二指肠里，它们的作用是增加膳食中的脂类和维生素溶解度和帮助吸收。大部分的胆酸随后在回肠里通过肠肝循环再度回到肝脏。在肝脏，胆固醇转化成胆酸是通过反馈机制来调节的。胆酸降低细胞色素P450CYP7A的转录，后者编码一种用来催化限速步骤中胆汁酸的合成的蛋白酶。在回肠里，胆酸诱导肠胆酸结合蛋白(IBABP)的产生。IBABP是一种细胞质蛋白，通过其与胆酸很高的结合能力，可能起到参与胆酸的细胞摄取和运输的作用。总之，在胆汁酸和胆固醇体内平衡中，FXR同时刺激IBABP产生和抑制靶基因(CYP7A)的表达。 [0004] FXR参与许多生理过程，在控制肝脏的脂质，胆固醇和碳水化合物的代谢方面起到至关重要的作用(Inflamm Res.2015，64，9-20)，包括肝胆汁淤积，胆石病，葡萄糖代谢，肠上皮的保护，肝细胞再生，肠道和肝脏肿瘤的形成，糖尿病所性引发的肾病，改善阴茎勃起功能障碍，血管反应调节，抑制肺部炎症感染等等。由于这些不同的生理功能,FXR是一个有价值的潜在药物靶标。有许多合成的配体激动剂已经开发出来(Current Topics in Medicinal Chemistry,2014,14,2188-2205)。FXR激动剂似乎有特定的保肝作用，可以防止脂肪在肝脏的累积和降低肝脏的纤维化和炎症。FXR激动剂目前在临床开发上主要是用于治疗严重肝脏疾病，包括原发性胆汁性肝硬化(PBC，一种由于胆汁淤积所造成的肝脏慢性炎症)，非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，非酒精肝炎(NASH)，肝脏再生和炎性肠病(IBD)等等。 [0005] 除了调节肠肝循环，甘油三酯，胆固醇等肝特异性功能外，胆酸还能调节能源和葡萄糖稳态。FXR被发现控制着肠道中(回肠)一个关键的细胞因子FGF-15/19的表达(Cell Metab.2005,2,217)。FGF-15/19具有胰岛素增敏，体重降低和血脂降低的作用，从而进一步将FXR激动剂的作用延伸至其它所有响应于FGF15/19的组织中。 [0006] 除了激活FXR，胆酸和二次胆酸(比如LCA)还可以激活四个其它的核激素受体(PXR，CAR，VDR，和FXRS)和一个重要的G蛋白偶联受体TGR5(也称为GPBAR1或者M-BAR)。TGR5的表达因器官而异，存在于内分泌腺体，脂肪，肌肉，免疫器官，脊髓，和肠神经系统。TGR5促进cAMP的合成和胰高血糖素样肽(GLP-1)和分泌，从而来达到调节脂质，葡萄糖和能量代谢等若干代谢功能(Br J Pharmacol，2012，165:414-423.)，从而提示了它一系列的细胞和生理活性。它的激活可以控制血糖，调节血脂平衡，提高能量消耗，并发挥抗炎作用及抗癌作用等，进而有望成为治疗一系列代谢性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病和癌症的药物靶点。 [0007] TGR5在胆汁酸代谢的作用已经在灭活TGR5鼠上得到证实。相比野生型小鼠，TGR5灭活鼠的胆汁酸池容量显著降低21％～25％，表明TGR5促进胆汁酸的动态平衡。TGR5的激活也增加了内皮一氧化氮酶的表达(Trends Pharmacol Sci，2009，30:139-159.)，它可能限制了胆汁酸的肝毒性和脂质过氧化作用。另外，TGR5还和糖及能量的代谢相关，使得TGR5激动剂及其衍生物有望用于潜在治疗二型糖尿病和肥胖症(Animal Cells and Systems,2014，18,359–364)。此外，TGR5还发现可以调节单核细胞的炎症细胞因子，证明TGR5紧密参与调节人类疾病中的免疫及炎性反应。 [0008] 近年研究表明，FXR及TGR5在糖代谢、脂代谢、能量代谢及胆汁调节等方面发挥重要作用，这使它们成为代谢综合症、糖尿病、异常血脂症、动脉粥样硬化和胆汁淤积肝病等疾病的潜在靶标。尽管，对这两个靶点的研究还在不断深入，但目前还没有针对这两个靶点的药物上市，因此还有很大的开发空间。 发明内容[0009] 本发明所要解决的技术问题在于，提供了一种对于法尼酯衍生物X受体(FXR)和/或G蛋白偶联胆汁酸受体1(TGR5)具有调节作用的磺酰脲类衍生物、其立体异构体、前药或药学上可接受的盐、其稳定的同位素衍生物、其药物组合物、制备方法及应用。 [0010] 一方面，本发明提供了一种如式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂化物、水合物、稳定的同位素衍生物及药学上可接受的盐； [0011] [0012] 其中，A1选自连接键、-(CHR9)n-、-C2-4烯基-、或者-C2-4炔基-；n为1、2、3或4； [0013] A2选自-N(R12)C(O)N(R12)S(O)2-、-S(O)2N(R12)C(O)N(R12)-、-N(R12)C(S)N(R12)S(O)2-、或者-S(O)2N(R12)C(S)N(R12)-； [0014] 当A2为-N(R12)C(O)N(R12)S(O)2-、或-N(R12)C(S)N(R12)S(O)2-时，R选自取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的杂环烷基烷基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂芳基烷基、或-NR11R11a； [0015] 当A2为-S(O)2N(R12)C(O)N(R12)-、或-S(O)2N(R12)C(S)N(R12)-时，R选自取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的杂环烷基烷基、取代或未取代的芳基烷基、或取代或未取代的杂芳基烷基；或者，所述R和R12与它们共同连接的N一起形成3-8元单杂环烷基； [0016] 当所述的R为取代的烷基、取代的环烷基、取代的杂环烷基、取代的芳基、取代的杂芳基、取代的环烷基烷基、取代的杂环烷基烷基、取代的芳基烷基、或取代的杂芳基烷基时，可被1～3个R13基团取代在任意位置，所述R13基团选自卤素、氨基、羟基、羧基、氰基、硝基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的杂环烷基烷基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂芳基烷基、取代或未取代的C2-4烯基、取代或未取代的C2-4炔基、-OR11、-S(O)0-2R11、-S(O)1-2NR11R11a、-OC(O)R11、-OC(O)NR11R11a、-NR11R11a、-N(R11)C(＝R14)R11a、-N(R11)C(＝R14)NR11R11a、-N(R11)S(O)1-2R11a、-C(O)R11、-C(＝R14)NR11R11a、或-C(O)OR11； [0017] 当所述的R13为取代的烷氧基、取代的烷基、取代的环烷基、取代的杂环烷基、取代的芳基、取代的杂芳基、取代的环烷基烷基、取代的杂环烷基烷基、取代的芳基烷基、取代的杂芳基烷基、取代的C2-4烯基、或取代的C2-4炔基时，可进一步被1～3个选自卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤代C1-3烷基、卤代C1-3烷氧基、-S(O)0-2R15、-S(O)1-2NR15R15a、-OC(O)R15、-OC(O)NR15R15a、-NR15R15a、-N(R15)C(＝R14)R15a、-N(R15)C(＝R14)NR15R15a、-N(R11)S(O)1-2R15a、-C(O)R15、-C(＝R14)NR15R15a、或-C(O)OR15的取代基取代在任意位置； [0018] R1选自氢、羟基、取代或未取代的烷基、或卤素； [0019] R2选自氢、取代或未取代的烷基、或羟基； [0020] 或者，所述R1和R2与它们共同连接的碳原子一起形成C3-6环烷基或3-6元杂环烷基； [0021] R3选自氢、取代或未取代的烷基烷基、2-烯丙基、卤素、或C3-6环烷基； [0022] R4和R5分别独立的选自氢、羟基、-OC(O)CH3，-OS(O)3H,-OP(O)3H，-P(O)3H2，或-OC6H8O6H；或者，R4和R5共同形成羰基； [0023] 或者，所述R4和R5与它们共同连接的碳原子一起形成C3-6环烷基或3-6元杂环烷基； [0024] R6选自氢或羟基； [0025] R7选自氢、羟基、烷氧基或卤素； [0026] R8选自氢、或取代或未取代的烷基； [0027] R9选自氢、取代或未取代的烷基、芳基或杂芳基；或者，R8和R9通过碳原子和/或杂原子相互连接形成C3-6环烷基或3-6元杂环烷基； [0028] R10选自氢或羟基； [0029] 当所述的R1、R2、R3、R8、或R9分别独立的为取代的烷基时，可进一步被1～3个选自卤素、或羟基的取代基取代； [0030] R11和R11a分别独立的选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的杂环烷基烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂芳基烷基；或者，所述的R11和R11a与它们所连接的N原子一起形成3-8元的单杂环烷基；当所述的R11或R11a为取代的烷基、取代的环烷基、取代的杂环烷基、取代的环烷基烷基、取代的杂环烷基烷基、取代的芳基、取代的杂芳基、取代的芳基烷基、或取代的杂芳基烷基时，可被如下1-2个选自卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤代C1-3烷基、卤代C1-3烷氧基、-S(O)0-2R15、-S(O)0-2NR15R15a、-OC(O)R15、-OC(O)NR15R15a、-NR15R15a、-N(R15)C(＝R14)R15a、-N(R15)C(＝R14)NR15R15a、-N(R11)S(O)0-2R15a、-C(O)R15、-C(＝R14)NR15R15a、或-C(O)OR15的取代基取代在任意位置； [0031] R12选自氢或烷基； [0032] ＝R14选自＝O、＝S、＝N(R15)、或＝N(OR15)； [0033] R15和R15a分别独立的选自氢或烷基。 [0034] 本发明中，所述的如式I所示的化合物，其中，R6选自氢或羟基，当R6为羟基时，可以是α-羟基或β-羟基。优选R6为α-羟基或氢，所述的α-或β-的立体化学构型如下： [0035] [0036] 所述的式I所示的化合物优选为式IA或IB； [0037] [0038] 其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R10、R和A1的定义如前所述。 [0039] 所述的式I所示的化合物优选为式IA-1或IB-1； [0040] [0041] 其中，R6、R7和R10分别独立的选自氢或羟基； [0042] R3、R8、R10和A1的定义如前所述。 [0043] 所述的如式I所示的化合物优选为式IA-2、IA-3或IA-4； [0044] [0045] 其中，R7为氢、羟基、烷氧基或卤素； [0046] R3、R8、R10和A1的定义如前所述。 [0047] 所述的如式I所示的化合物更优选为式IA-1～IA-4或IB-1，其中， [0048] R3选自氢或C1-3烷基； [0049] R6、R7和R10分别独立的选自氢或羟基； [0050] A1为连接键或者-(CHR9)n-；n为1、2或3； [0051] R选自取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的C6-10芳基、取代或未取代的5-6元杂芳基、取代或未取代的C3-8环烷基C1-6烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基C1-6烷基、取代或未取代的C6-10芳基C1-6烷基、或取代或未取代的5-6元杂芳基C1-6烷基； [0052] 当所述的R为取代的C1-6烷基、取代的C3-8环烷基、取代的3-8元杂环烷基、取代的C6-10芳基、取代的5-6元杂芳基、取代的C3-8环烷基C1-6烷基、取代的3-8元杂环烷基C1-6烷基、取代的C6-10芳基C1-6烷基、或取代的5-6元杂芳基C1-6烷基时，可被1～3个R13基团取代在任意位置，所述R13基团选自卤素、氨基、羟基、羧基、氰基、硝基、取代或未取代的C1-4烷基、取代或未取代的C1-4烷氧基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的5-6元杂芳基、取代或未取代的C3-8环烷基C1-4烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基C1-4烷基、取代或未取代的苯基C1-4烷基、取代或未取代的5-6元杂芳基C1-4烷基、取代或未取代的C2-4烯基、取代或未取代的C2-4炔基、-OR11、-S(O)0-2R11、-S(O)0-2NR11R11a、-OC(O)R11、-OC(O)NR11R11a、-NR11R11a、-N(R11)C(O)R11a、-N(R11)C(O)NR11R11a、-N(R11)S(O)0-2R11a、-C(O)R11、-C(O)NR11R11a、或-C(O)OR11； [0053] 当所述的R13为取代的C1-4烷氧基、取代的C1-4烷基、取代的C3-8环烷基、取代的3-8元杂环烷基、取代的苯基、取代的5-6元杂芳基、取代的C3-8环烷基C1-4烷基、取代的3-8元杂环烷基C1-4烷基、取代的苯基C1-4烷基、取代的5-6元杂芳基C1-4烷基、取代的C2-4烯基、或取代的C2-4炔基时，可进一步被1～3个选自卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤代C1-3烷基、或卤代C1-3烷氧基的取代基取代在任意位置； [0054] R8选自氢或C1-6烷基； [0055] R9选自氢、C1-6烷基、苯基或5-6元杂芳基；或者，R8和R9通过碳原子相互连接形成3-6元环烷基； [0056] R11和R11a分别独立的选自氢、取代或未取代的C1-4烷基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的5-6元杂芳基、取代或未取代的苯基C1-4烷基、取代或未取代的5-6元杂芳基C1-4烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基C1-4烷基、或取代或未取代的C3-8环烷基C1-4烷基；或者，所述的R11和R11a与它们所连接的N原子一起形成3-8元的单杂环烷基；当所述的R11或R11a为取代的C1-3烷基、取代的C3-8环烷基、取代的3-8元杂环烷基、取代的苯基、取代的5-6元杂芳基、取代的苯基C1-4烷基、取代的5-6元杂芳基C1-4烷基、取代的3-8元杂环烷基C1-4烷基、或取代的C3-8环烷基C1-4烷基时，可进一步被1～3个选自卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤代C1-3烷基、或卤代C1-3烷氧基的取代基取代在任意位置； [0057] R12选自氢或C1-3烷基。 [0058] 所述的式I所示的化合物更优选为式IA1～IA6、IB1中的任意一种； [0059] [0060] [0061] 其中，A1为连接键、-CH2-、-CH2CH2-、或 [0062] R选自取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的C6-10芳基、取代或未取代的5-6元杂芳基、取代或未取代的C3-8环烷基C1-6烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基C1-6烷基、取代或未取代的C6-10芳基C1-6烷基、或取代或未取代的5-6元杂芳基C1-6烷基； [0063] 当所述的R为取代的C1-6烷基、取代的C3-8环烷基、取代的3-8元杂环烷基、取代的C6-10芳基、取代的5-6元杂芳基、取代的C3-8环烷基C1-6烷基、取代的3-8元杂环烷基C1-6烷基、取代的C6-10芳基C1-6烷基、或取代的5-6元杂芳基C1-6烷基时，可被1～3个R13基团取代在任意位置，所述R13基团选自卤素、氨基、羟基、羧基、氰基、硝基、取代或未取代的C1-4烷基、取代或未取代的C1-4烷氧基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的5-6元杂芳基、取代或未取代的C3-8环烷基C1-4烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基C1-4烷基、取代或未取代的苯基C1-4烷基、取代或未取代的5-6元杂芳基C1-4烷基、取代或未取代的C2-4烯基、取代或未取代的C2-4炔基、-OR11、-S(O)0-2R11、-S(O)0-2NR11R11a、-OC(O)R11、-OC(O)NR11R11a、-NR11R11a、-N(R11)C(O)R11a、-N(R11)C(O)NR11R11a、-N(R11)S(O)0-2R11a、-C(O)R11、-C(O)NR11R11a、或-C(O)OR11； [0064] 当所述的R13为取代的C1-4烷氧基、取代的C1-4烷基、取代的C3-8环烷基、取代的3-8元杂环烷基、取代的苯基、取代的5-6元杂芳基、取代的C3-8环烷基C1-4烷基、取代的3-8元杂环烷基C1-4烷基、取代的苯基C1-4烷基、取代的5-6元杂芳基C1-4烷基、取代的C2-4烯基、或取代的C2-4炔基时，可进一步被1～3个选自卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤代C1-3烷基、或卤代C1-3烷氧基的取代基取代在任意位置； [0065] R11和R11a分别独立的选自氢、取代或未取代的C1-4烷基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的5-6元杂芳基、取代或未取代的苯基C1-4烷基、取代或未取代的5-6元杂芳基C1-4烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基C1-4烷基、或取代或未取代的C3-8环烷基C1-4烷基；或者，所述的R11和R11a与它们所连接的N原子一起形成3-8元的单杂环烷基；当所述的R11或R11a为取代的C1-3烷基、取代的C3-8环烷基、取代的3-8元杂环烷基、取代的苯基、取代的5-6元杂芳基、取代的苯基C1-4烷基、取代的5-6元杂芳基C1-4烷基、取代的3-8元杂环烷基C1-4烷基、或取代的C3-8环烷基C1-4烷基时，可进一步被1～3个选自卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤代C1-3烷基、或卤代C1-3烷氧基的取代基取代在任意位置。 [0066] 所述的如式I所示的化合物进一步更优选为式IA1～IA6；其中， [0067] R选自取代或未取代的C3-6烷基、取代或未取代的C3-8单环环烷基、取代或未取代的3-8元单杂环烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基、取代或未取代的5-6元单环杂芳基、取代或未取代的8-10元双环杂芳基、取代或未取代的苯基C1-3烷基；当R被取代时，可被1～3个R13基团取代在任意位置，所述R13基团选自氟、氯、硝基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-C(O)OR11、-S(O)0-2R11、-OC(O)R11、-OC(O)NR11R11a、-NR11R11a、-NHC(O)R11、-NHC(O)NR11R11a、-C(O)R11、-C(O)NR11R11a、四氮唑、苯基、吡啶基、或嘧啶基； [0068] R11和R11a分别独立地选自氢或C1-3烷基。 [0069] 所述的如式I所示的化合物为以下化合物： [0070] [0071] [0072] [0073] 第二方面，本发明还涉及一种药物组合物，其包括所述的如式I、IA、IB、IA-1～IA-4、IB-1、IA1～IA6、或IB1所示的化合物、稳定的同位素取代衍生物、其药学上可接受的盐和/或前药，以及药学上可接受的辅料。 [0074] 所述药物组合物中，所述药学上可接受的辅料可包括药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。根据治疗目的，可将药物组合物制成各种类型的给药单位剂型，如片剂、丸剂、粉剂、液体、悬浮液、乳液、颗粒剂、胶囊、栓剂和针剂(溶液及悬浮液)等，优选液体、悬浮液、乳液、栓剂和针剂(溶液及悬浮液)等。 [0075] 为了使片剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知并广泛使用的赋形剂。例如，载体，如乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素和硅酸等；粘合剂，如水、乙醇、丙醇、普通糖浆、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明胶溶液，羧甲基纤维素、紫胶、甲基纤维素和磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干淀粉、藻酸钠、琼脂粉和海带粉，碳酸氢钠、碳酸钙、聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘酯、淀粉和乳糖等；崩解抑制剂，如白糖、甘油三硬脂酸酯、椰子油和氢化油；吸附促进剂，如季胺碱和十二烷基硫酸钠等；润湿剂，如甘油、淀粉等；吸附剂，如淀粉、乳糖、高岭土、膨润土和胶体硅酸等；以及润滑剂，如纯净的滑石，硬脂酸盐、硼酸粉和聚乙二醇等。还可以根据需要选用通常的涂渍材料制成糖衣片剂、涂明胶膜片剂、肠衣片剂、涂膜片剂、双层膜片剂及多层片剂。 [0076] 为了使丸剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知的并广泛使用的赋形剂，例如，载体，如乳糖，淀粉，椰子油，硬化植物油，高岭土和滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯树胶粉，黄蓍胶粉，明胶和乙醇等；崩解剂，如琼脂和海带粉等。 [0077] 为了使栓剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知并广泛使用的赋性剂，例如，聚乙二醇，椰子油，高级醇，高级醇的酯，明胶和半合成的甘油酯等。 [0078] 为了制备针剂形式的药物组合物，可将溶液或悬浮液消毒后(最好加入适量的氯化钠，葡萄糖或甘油等)，制成与血液等渗压的针剂。在制备针剂时，也可使用本领域内任何常用的载体。例如，水，乙醇，丙二醇，乙氧基化的异硬脂醇，聚氧基化的异硬脂醇和聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯等。此外，还可加入通常的溶解剂、缓冲剂和止痛剂等。 [0079] 本发明中，所述的组合物在药物组合物中的含量无特殊限制，可在很宽的范围内进行选择，通常可为质量百分比的10～90％，较佳的为质量百分比30～80％。 [0080] 本发明中，所述药物组合物的给药方法没有特殊限制。可根据病人年龄、性别和其它条件及症状，选择各种剂型的制剂给药。例如，片剂、丸剂、溶液、悬浮液、乳液、颗粒剂或胶囊口服给药；针剂可以单独给药，或者和注射用输送液(如葡萄糖溶液及氨基酸溶液)混合进行静脉注射；栓剂为给药到直肠。 [0081] 本发明还提供了药物组合物，该组合物包括如式I、IA、IB、IA-1～IA-4、IB-1、IA1～IA6、IB1所示的化合物，用于治疗由FXR和/或TGR5介导的疾病。 [0082] 所述的药物组合物可进一步含有其它种类的治疗胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱导的胆汁淤积、药物诱导的胆汁淤积、妊娠性胆汁淤积、与肠胃营养相关的胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PBS)、进行性家族性胆汁淤积(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、化疗相关的脂肪性肝炎(CASH)、药物诱导的胆管损伤、肝硬化、酒精诱导的肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石病、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、肥胖症、糖尿病、糖尿病肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸的预防、静脉阻塞病、高血压、门静脉高压、代谢综合征、高胆固醇血病、炎性肠道疾病的药物或其它种类的治疗剂。所述的辅料可为药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂等。 [0083] 体外测试表明，如式I所示化合物及其药学上可接受的盐或组合物具有有价值的药理学特性，因此可用作药物，具体而言，本发明化合物为法尼酯衍生物X受体(FXR)和/或G蛋白偶联胆汁酸受体1(TGR5)的激动剂，可以调节FXR和/或TGR5的活性，用作治疗FXR和/或TGR5介导的疾病，也可用于制备用于治疗FXR和/或TGR5介导的疾病的药物，所述疾病是由于糖类代谢、脂类代谢、能量代谢、胆汁酸代谢等代谢紊乱性疾病引起或者是免疫性疾病、炎性反应或癌症等疾病，具体而言，所述疾病包括但不限于： [0084] 代谢性疾病包括但不限于：胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱导的胆汁淤积、药物诱导的胆汁淤积、妊娠性胆汁淤积、与肠胃营养相关的胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PBS)、进行性家族性胆汁淤积(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、化疗相关的脂肪性肝炎(CASH)、药物诱导的胆管损伤、肝硬化、酒精诱导的肝硬化、囊性纤维化、胆管梗阻、胆石病、肝纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、肥胖症、胰岛素抵抗、高血压、糖尿病、糖尿病肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸的预防、静脉阻塞病、门静脉高压、代谢综合征、高胆固醇血病。 [0085] 免疫性疾病和/或炎性反应包括但不限于：过敏症、关节炎、阑尾炎、支气管哮喘、急性胰腺炎、过敏性皮疹、牛皮癣等炎症性疾病，或自发炎性肠道疾病(克罗恩病、溃疡性结肠炎)、短肠综合征(后辐射结肠炎)、微观性结肠炎、肠易激综合症、细菌过度生长的消化道疾病，及类风湿性关节炎、多发性硬化症、I型糖尿病、纤维化等自身免疫性疾病。 [0086] 癌症包括但不限于：大肠癌、肝癌、肝细胞癌、胆道癌、肾癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、脑癌等癌症。 [0087] 上述疾病涉及FXR受体调节和/或TGR5受体调节。一方面，该化合物是选择性的FXR激动剂。一方面，该化合物是选择性的TGR5激动剂。一方面，该化合物是FXR和TGR5的共同激动剂。一方面，该化合物是FXR部分激动剂或部分调节剂。 [0088] 第三方面，本发明还提供了所述的如式I所示的磺酰脲类衍生物的制备方法，所述方法为以下任一方法： [0089] 方法1，所述的制备方法包括如下步骤：溶剂中，如式1A所示化合物在非质子溶剂中，和R的磺酰基异氰酸酯反应得到如式IA所示化合物； [0090] [0092] 方法2，所述的制备方法包括如下步骤：溶剂中，如式1B所示化合物在非质子溶剂中，和R的异氰酸酯反应得到如式IB所示化合物； [0093] [0094] 所述的成磺酰脲反应的条件和步骤可为本领域常规的缩合反应的条件和步骤，本发明特别优选以下反应条件：所述的溶剂优选四氢呋喃；所述的反应的温度优选0～50℃；所述的反应时间优选0～24小时。 [0095] 在上述方法1或2中，如果1A、1B或R基团中包含有其它羟基或氨基基团时，该羟或氨基基团均应通过保护基保护，才能避免有任何副反应。如果存在上述氨基保护基团或羟基保护基团则需要经过后续的脱保护步骤后，得到如式IA或IB所示化合物。任何合适的氨基保护基团，例如：叔丁氧羰基(Boc)基团，均可以用于保护氨基基团。如果使用Boc作为保护基，后续的脱保护反应可以在标准条件，例如，对甲苯磺酸/甲醇体系，二氯甲烷/三氟乙酸体系、饱和的氯化氢乙醚溶液、或三氟甲磺酸三甲基硅酯/2,6-二甲基吡啶/二氯甲烷体系中进行；任何合适的羟基保护基团，例如：用乙酰基或苄基保护羟基，后续的脱保护反应可以在标准条件，例如，乙酰基保护羟基后续的脱保护反应可以是：氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂在四氢呋喃、水、甲醇、或乙醇中或者上述溶剂形成的混合溶剂中进行脱保护反应，得到相应的羟基；苄基保护的羟基可以用钯炭在氢气条件下脱保护，得到相应的羟基。 [0096] 本发明中，除非另有说明，取代基名称前未冠有“取代或未取代的”定义的均指未取代的情况，例如：“烷基”是指未取代的烷基，“环烷基”是指未取代的环烷基。 [0097] 本发明中，除非另有说明，所述“可被1～3个R13基团取代在任意位置”中的“任意位置”是指本领域技术人员惯用的合理的取代位置。 [0099] 术语“烷基”是指包含1-20个碳原子的饱和直链或支链烃基，优选1～8个碳原子，更优选1～6个碳原子，烷基的代表性例子包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、4,4-二甲基戊基、2,2,4-三甲基戊基、十一烷基、十二烷基，及它们的各种异构体等。当“烷基”作为其它基团的链接基团时，如-(CH2)r-，它可以是支链或直链；r为1-6的整数，r优选为1、2或3，例子包括但不限于-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH(CH3)-。术语“C1-6烷基”是指包含1-6个碳原子的烷基；术语“C1-4烷基”是指包含1-4个碳原子的烷基；术语“C1-3烷基”是指包含1-3个碳原子的烷基。 [0100] 术语“环烷基”是指包含3-20个碳原子的饱和或部分不饱和(包含1或2个双键)的单环或多环基团，其中所述环烷基环上任意的不饱和的碳原子可以被氧化为羰基。所述环烷基优选C3-10环烷基，更优选C3-8环烷基。“单环环烷基”优选C3-10单环烷基，更优选C3-8单环烷基，例如：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环癸基、环十二烷基、环己烯基。“多环环烷基”包括“桥环基”、“并环环烷基”和“螺环烷基”，“桥环基”是指单环环烷基或双环环烷基上任意两个不相链接的碳原子被1-3个额外的碳原子之间的亚烷基桥连接(即，-(CH2)t-形式的桥接基团，其中t是1、2或3)。桥环基的代表性例子包括但不限于：冰片基、双环[2.2.1]庚烯基、双环[3.1.1]庚烷基、双环[2.2.1]庚烷基、双环[2.2.2]辛烷基、双环[3.2.2]壬烷基、双环[3.3.1]壬烷基、双环[4.2.1]壬烷基、金刚烷基等。“并环环烷基”包含稠合到苯基、单环环烷基、单环杂环烷基或单环杂芳基上的环烷基环，并环环烷基包括但不限于：苯并环丁烯、苯并环丁烷、苯并环己烷、苯并环庚烷、吡啶并环丁烷、吡啶并环戊烷、吡啶并环己烷、2,3-二氢-1-H-茚、2,3-环戊烯并吡啶、5,6-二氢-4H-环戊基[B]噻吩、十氢萘等。“螺环烷基”是指两个环烷基共用一个碳原子形成的双环基团，螺环烷基包括但不限于：螺[2.4]庚烷基、螺[4.5]癸烷基等。多环环烷基优选6-12元。所述的多环环烷基优选双环环烷基。单环环烷基或多环环烷基可以通过环上任意的碳原子链接到母体分子上。术语“C3-10环烷基”是指包含3-10个碳原子的环烷基，包括单环环烷基、桥环基、螺环基和并环环烷基。 [0101] 术语“杂环烷基”指由碳原子以及选自氮、氧或硫等杂原子组成的饱和或部分不饱和(包含1或2个双键)的非芳香环状基团，此环状基团可为单环或多环基团，在本发明中，杂环烷基中杂原子个数优选1、2、3或4，杂环烷基中的氮、碳或硫原子可任选的被氧化。氮原子可任选进一步被其他基团取代而形成叔胺或季铵盐。优选3-10元杂环烷基，更优选3-8元杂环烷基。所述“杂环烷基”包括“单环杂环烷基”和“多环杂环烷基”。“单环杂环烷基”优选3-10元单环杂环烷基，更优选3-8元单环杂环烷基。例如：氮丙啶基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、吗啉-4-基、硫代吗啉-4-基、硫代吗啉-S-氧化物-4-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、N-烷基哌啶-4-基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、N-烷基吡咯烷-2-基、哌嗪-1-基、4-烷基哌嗪-1-、四氢-2H-吡喃基等。“多环杂环烷基”包括“桥杂环基”、“并环杂环烷基”和“螺杂环基”，“桥杂环基”是指单环杂环烷基任意两个不相链接的环原子被1-3个额外的碳原子和杂原子/1-3个额外的碳原子/1个额外的杂原子形成的直链基团桥连结(所述的直链基团选自但不限于：-CH2-、-O-、-NH-、-S-、-CH2CH2-、-CH2O-、-CH2S-、-CH2NH-、-CH2CH2CH2-、-CH2OCH2-、-CH2CH2O-、-CH2CH2NH-、-CH2NHCH2-)，桥杂环基的代表性例子包括但不限于：2-氧杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、3-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、6-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、1-氮杂二环[2.2.2]辛烷基、2-氮杂二环[2.2.2]辛烷基、3-氮杂双环[3.3.1]壬烷基、3-氧杂双环[3.2.1]壬烷基、8-氮杂双环[3.2.1]壬烷基等。“并环杂环烷基”包含稠合到苯基、单环环烷基、单环杂环烷基或单环杂芳基的单环杂环烷基环，双环并环杂环烷基包括但不限于：2,3-二氢苯并呋喃基、1,3-二氢异苯并呋喃基、二氢吲哚基、2,3-二氢苯并[b]噻吩基、二氢苯并哌喃基、1,2,3,4-四氢喹啉基、 等。“螺杂环基”是指两个杂环烷基或一个环烷基和一个杂环烷基共用一个碳原子形成的双环基团。所述多环杂环烷基优选为双环杂环烷基，所述双环杂环烷基包括： 双环并环杂环烷基和双环螺杂环烷基。多环杂环烷基为6-15元，优选6-12元。单环杂环烷基和多环杂环烷基可以通过环上任意的环原子链接到母体分子上。上述环原子特指组成环骨架的碳原子和/或氮原子。术语“3-8元杂环烷基”是指包含3-8个碳原子和杂原子的单环杂环基、桥杂环基、并环杂环烷基或螺杂环基。 [0102] 术语“环烷基烷基”是指环烷基与母核结构之间通过烷基连接。由此，“环烷基烷基”包含上述烷基和环烷基的定义。 [0103] 术语“杂环烷基烷基”是指杂环烷基与母核结构之间通过烷基连接。由此，“杂环烷基烷基”包含上述烷基和杂环烷基的定义。 [0104] 术语“烷氧基”指通过氧桥连接的具有所述碳原子数目的环状或者非环状烷基，包含烷基氧基、环烷基氧基和杂环烷基氧基。由此，“烷氧基”包含上述烷基、杂环烷基和环烷基的定义。 [0105] 术语“烯基”指含有至少1个碳碳双键的直链、支链或者环状非芳香烃基。其中可以存在1-3个碳碳双键，优选存在1个碳碳双键。包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基、2-烯丙基 和环己烯基。所述的烯基可以被取代。术语“C2-4烯基”是指具有2-4个碳原子的烯基。 [0106] 术语“炔基”是指含有至少1个碳碳三键的直链、支链或者环状烃基。其中可以存在1-3个碳碳三键，优选存在1个碳碳三键。包括乙炔基、丙炔基、丁炔基和3-甲基丁炔基。术语“C2-4炔基”是指具有2-4个碳原子的炔基。 [0107] 术语“芳基”是指任何稳定的6-10元单环或双环芳香族基团，例如：苯基、萘基、四氢萘基、2,3-二氢化茚基或联苯基等。术语“C6芳基”是指苯基。 [0108] 术语“杂芳基”是指至少1个环上的碳原子被选自氮、氧或硫的杂原子置换所形成的单环或双环芳香环基团，其可为5-7元单环杂芳基或7-12元双环杂芳基，优选5-6元单环杂芳基和8-10元双环杂芳基。在本发明中，杂原子个数优选1、2或3，所述杂芳基包括但不限于：吡咯基、咪唑基、1,2,4-三氮唑基、1,2,3-三氮唑基、四氮唑基、吲唑基、异吲唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并[d][1,3]二氧戊环基、苯并吡咯基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、吲唑基、苯并哒嗪基、苯并咪唑基、吲哚基等。 [0109] 术语“芳基烷基”是指芳基与母核结构之间通过烷基连接。由此，“芳基烷基”包含上述烷基和芳基的定义。 [0110] 术语“杂芳基烷基”是指杂环烷基与母核结构之间通过烷基连接。由此，“杂芳基烷基”包含上述烷基和杂芳基的定义。 [0111] 术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘。 [0112] 术语“卤代烷基”是指被卤素任意取代的烷基，包括但不限于：-CF3、-CHF2。由此，“卤代烷基”包含以上卤素和烷基的定义。 [0113] 术语“卤代烷氧基”是指被卤素任意取代的烷氧基。由此，“卤代烷氧基”包含以上卤素和烷氧基的定义。 [0114] 术语“氨基”是指-NH2。 [0115] 术语“羟基”是指-OH。 [0116] 术语“硝基”是指-NO2。 [0117] 术语“氰基”是指-CN。 [0118] 术语“羧基”是指-C(O)OH。 [0119] 术语“磺酰基”是指-S(O)2-，所述的磺酰基包括烷基磺酰基、环烷基磺酰基、杂环烷基磺酰基、芳基磺酰基和杂芳基磺酰基，是指烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基通过-S(O)2-与母体结构连接，上述不同磺酰基包含以上烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基和磺酰基的定义。 [0120] 术语“磺酰脲基团”是指磺酰基与脲基通过脲上的氮原子相互连接形成的基团，例如： 其中R和R12定义如上所述，磺酰脲基可通过脲上的氮原子或通过磺酰基上的硫原子连接到母体分子上。 [0121] 结构“-OC6H8O6H”表示六碳糖醛酸通过氧苷键与母体分子相互连接。例如： [0122] 符号“＝”表示双键。 [0123] 本发明所述“室温”是指15-30℃。 [0124] 所述的稳定的同位素取代衍生物包括：式I中任意的氢原子被1-5个氘原子取代得到的同位素取代衍生物、式I中任意的碳原子被1-3个碳14原子取代得到的同位素取代衍生物或式I中任意的氧原子被1-3个氧18原子取代得到的同位素取代衍生物。 [0125] 所述的“前药”是指化合物在体内代谢后转换成原始活性化合物。代表性的讲，前药为非活性物质，或者比活性母体化合物活性小，但可以提供方便的操作、给药或者改善代谢特性。 [0126] 本发明所述的“药学上可接受的盐”在Berge，et al.，“Pharmaceutically acceptable salts”，J.Pharm.Sci.,66,1-19(1977)中有讨论，并对药物化学家来说是显而易见，所述的盐是基本上无毒性的，并能提供所需的药代动力学性质、适口性、吸收、分布、代谢或排泄等。 [0127] 本发明药学上可接受的盐可通过一般的化学方法合成。 [0129] 本发明所述的“溶剂化物”是指包含化学计量或非化学计量溶剂的溶剂添加形式。一些化合物在结晶固体状态下倾向于捕捉固定摩尔比例的溶剂分子，因此形成了溶剂化物。如果溶剂是水，形成的溶剂化物即为“水合物”，如果溶剂是乙醇时，形成的溶剂化物即为乙醇化物。水合物是由一个或一个以上水分子与该物质结合形成水合物，其中，水分子的状态为H2O，这样的结合能够形成包含一个或多个水分子的水合物。 [0130] 本发明所述“异构体”是指本发明的式(I)化合物可以有不对称中心和外消旋体、外消旋混合物和单个非对映异构体，所有这些异构体，包括立体异构体、几何异构体均包含在本发明中。在本发明中，式I化合物或其盐以立体异构的形式(例如，其含有一个或多个不对称碳原子)存在时，单独的立体异构体(对映异构体和非对映异构体)以及它们的混合物包括在本发明的范围内。本发明还包括式I表示的化合物或盐的单独异构体，以及与其中一个或多个手性中心反转的异构体的混合物。本发明的范围包括：立体异构体的混合物，以及纯化的对映异构体或对映异构体/非对映异构体富集的混合物。本发明包括所有对映异构体及非对应异构体所有可能的不同组合的立体异构体的混合物。本发明包括上文定义的所有具体基团的立体异构体的全部组合和子集。本发明还包括式I化合物或其盐的几何异构体，所述几何异构体包括顺反异构体。 具体实施方式[0131] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。 [0132] 本发明所有化合物的结构可通过核磁共振(1H NMR)和/或质谱检测(MS)鉴定。 [0133] 1H NMR化学位移(δ)以PPM记录(10-6)。NMR通过Bruker AVANCE-400光谱仪进行。合适的溶剂是氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(MeOD-d4)，氘代二甲亚砜(DMSO-d6)，四甲基硅烷作为内标(TMS)。 [0134] 液质联用(LCMS)由Agilent 1200HPLC/6120质谱仪测定，使用XBridge C18，4.6×50mm，3.5μm，梯度洗脱条件一：80-5％溶剂A1和20-95％溶剂B1(1.8分钟)，然后95％溶剂B1和5％溶剂A1(3分钟以上)，百分数为某一溶剂占总溶剂体积的体积百分数。溶剂A1：0.01％三氟乙酸(TFA)的水溶液；溶剂B1：0.01％三氟乙酸的乙腈溶液；百分数为溶质占溶液的体积百分数。梯度洗脱条件二：80-5％溶剂A2和20-95％溶剂B2(1.5分钟)，然后95％溶剂B2和 5％溶剂A2(2分钟以上)，百分数为某一溶剂占总溶剂体积的体积百分数。溶剂A2：10mM的碳酸氢铵的水溶液；溶剂B2：乙腈。 [0135] 本发明化合物的纯化可以使用常规的硅胶板、柱色谱或使用快速分离机进行分离纯化，洗脱体系可以是乙酸乙酯/石油醚体系或二氯甲烷/甲醇体系。 [0136] 快速分离机(Flash柱层析)(flash system/CheetahTM)使用的是Agela Technologies MP200，配套使用的分离柱为Flash columm Silica-CS(80g)，Cat No.CS140080-0。 [0137] 薄层硅胶板(TLC)是烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板。柱色谱一般使用烟台黄海200-300目硅胶作为载体。 [0138] 实施例1：化合物1.7的合成 [0139] [0140] 步骤1：化合物1.1的合成 [0141] 在5L四口圆底烧瓶中加入鹅去氧胆酸(190g，484mmol)，溴化钠(2.5g，24mmol)，四丁基溴化铵(0.5g,1.55mmol)，甲醇(616mL)，乙酸(200mL)，水(49mL)，和乙酸乙酯(1.33L)。反应液室温搅拌15分钟直至溶液澄清，冷却至0℃。次氯酸钠(～5％，756g，508mmol)缓慢滴加入反应体系，控制内温1-2℃(放热)，滴加完毕后继续搅拌30分钟，缓慢升温到5℃。在此温度下搅拌3小时，直至TLC跟踪原料消失。加入饱和亚硫酸氢钠(3.3％，83g，26mmol)淬灭反应，直至淀粉碘化钾检测无过氧化物。再加入水(2L)搅拌半小时后冷却至10℃静置分层，除去水相，有机相过滤，得到滤饼用冰水洗涤(200mL)。固体为产品，干燥后得到化合物1.1(149g,产率：79％)为白色粉末。 [0142] m/z:[M-H]–389 [0143] 步骤2：化合物1.2的合成 [0144] 将化合物1.1(20g，51.2mmol)溶于甲醇(100mL)中，再加入浓硫酸(1g),反应液加热回流过夜。TLC跟踪原料消失后，减压旋蒸除溶剂，加入水(100mL)，乙酸乙酯(200mL)，有机相分离后用分别用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、减压旋蒸除溶剂后得到粗品，粗品通过Flash柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝95:5)得到化合物1.2(16g，产率：77％)为浅黄色油状物。 [0145] m/z:[M+H]+405 [0146] 步骤3：化合物1.3的合成 [0147] 在100mL三口瓶里在氮气保护下加入无水四氢呋喃(10mL)和二异丙胺(1.5g，14.9mmol)，并在干冰丙酮浴下，将内温冷至-78℃。氮气保护下，将正丁基锂(6mL，15mmol， 2.5M的正己烷溶液)缓慢滴入，并在-78℃搅拌0.5小时。氮气保护下，缓慢滴加三甲基氯硅烷(TMSCl)(2.15g，19.9mmol)，搅拌10分钟后，将化合物1.2(1g，2.5mmol)溶在无水四氢呋喃(5mL)中，并在氮气保护下，缓慢滴入反应体系中，-78℃搅拌0.5小时，氮气保护下加入三乙胺(3.75g，37mmol)，反应体系在-78℃下搅拌1小时，反应液内温逐渐升到-20℃，往反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)，待反应液升至室温，静置分层，并用乙酸乙酯(3× 20mL)萃取水相。将有机相合并，分别用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，滤液减压旋蒸得到化合物1.3(1.4g，产率：100％)。 [0148] 1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ4.75(dd,J＝1.8,6.0Hz,1H),3.69(s,3H),3.53(m,1H),2.33-2.41(m,1H),2.15-2.28(m,1H),1.02-2.02(m,22H),0.94(d,J＝6.4Hz,3H),0.84(s, 3H),0.70(s,3H),0.13-0.18(m,18H)。 [0149] 步骤4：化合物1.4的合成 [0150] 在250mL的三口瓶在氮气保护下加入化合物1.3(5.5g，10mmol)，无水二氯甲烷(30mL)，和乙醛(1.1mL，25mmol)，并在干冰丙酮浴下,将内温冷至-60℃。接着将三氟化硼乙醚(5.22g，37mmol)溶在无水二氯甲烷(15mL)中，在氮气下缓慢滴入反应瓶中，-60℃搅拌2小时。然后将反应液缓慢升至室温，加入饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)萃灭反应，并用二氯甲烷(3×40mL)萃取水相。将有机相合并起来，用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，滤液减压旋蒸得到粗品。粗品用硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝7：3)纯化得到化合物1.4(3.0g，产率：69％)。 [0151] 1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ6.14-6.18(m,1H),3.56-3.69(m,4H),2.55-2.58(m,1H),2.20-2.44(m,4H),1.62-2.06(m,9H),1.68(d,J＝7.2Hz,3H),1.07-1.51(m,10H),1.00(s, 3H),0.92(d,J＝6.2Hz,3H),0.63(s,3H)。 [0152] m/z:[M+H]+431 [0153] 步骤5：化合物1.5的合成 [0154] 将化合物1.4(1.3g，3.02mmol)溶于MeOH(50mL)中，加入10％钯碳(130mg)。在1个大气压的氢气下，室温搅拌反应48小时，直至TLC检测原料反应消失。过滤除去钯碳，减压旋蒸除去溶剂，得到化合物1.5(1.1g,产率：84％)。 [0155] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.67(s,3H),3.57(m,1H),2.57(t,J＝11.5Hz,1H),2.37(m,1H),2.24(dd,J＝6.6,9.6Hz,1H),2.20(m,1H),1.22(s,3H),1.01-1.98(m,23H),0.93(d,J＝6.2Hz,3H),0.85(t,J＝7.4Hz,3H),0.67(s,3H)。 [0156] m/z:[M+H]+433 [0157] 步骤6：化合物1.6的合成 [0158] 将化合物1.5(1.23g，2.84mmol)溶于甲醇(10mL)和水(1mL)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(284mg)。反应液加热回流过夜。冷却后减压除去溶剂，用水稀释后，6M盐酸酸化，用乙酸乙酯萃取水相(3×50mL)。有机相合并干燥，过滤旋干得到化合物1.6(1.1g，产率：92％)。 [0159] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.46(m,1H),2.83(dd,J＝13.0,5.5Hz,1H),2.50(t,J＝11.2Hz,1H),2.34(m,1H),2.20(m,1H),1.22(s,3H),0.99-1.88(m,23H),0.96(d,J＝6.6Hz, 3H),0.81(t,J＝7.4Hz,3H),0.71(s,3H)。 [0160] m/z:[M-H]–417 [0161] 步骤7：化合物1.7的合成 [0162] 将化合物1.6(1.1g，2.63mmol)溶解在四氢呋喃和水混合溶剂里(12mL，体积比5/1)冷却至0℃，分批加入硼氢化钠(495mg，13.1mmol)。反应1小时后，加入10mL甲醇淬灭反应。减压蒸馏除去溶剂后，残渣溶解于水中，用1M盐酸酸化后，乙酸乙酯萃取水相。合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后，蒸除溶剂，残渣经过Flash柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝9：1)得到化合物1.7(600mg，产率：54％)为白色粉末。 [0163] 1H NMR(400MHz,CD3OD):δ3.60(br.s,1H),3.32(m,1H),2.33(m,1H),2.20(m,1H),1.01-2.04(m,25H),0.97(d,J＝6.2Hz,3H),0.91(s,3H),0.90(t,J＝7.0Hz,3H),0.69(s, 3H)。 [0164] m/z:[M-H]–419 [0165] 实施例2：化合物2.5的合成 [0166] [0167] 步骤1：化合物2.1的合成 [0168] 将化合物1.7(10g，24mmol)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)(300mg，2.4mmol)溶于乙酸酐(50mL)和甲苯(100mL)的混合溶液中，该反应体系在110℃下反应2天后冷却至室温，减压旋蒸除去溶剂后，残渣溶解于乙酸乙酯(200mL)中，有机相用冷水(3×50mL)和饱和食盐水(100mL)洗涤，分离有机相并用无水硫酸钠干燥后，浓缩，残渣经过Flash柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0～50％)，得到化合物2.1(10.4g，产率：86％)为白色固体。 [0169] m/z:[M-H]–503 [0170] 步骤2：化合物2.2的合成 [0171] 冰浴条件下，将化合物2.1(1.0g，2.0mmol)溶于干燥的四氢呋喃(30mL)中，缓慢滴加硼烷四氢呋喃溶液(1.0M，5.0mL)，加毕，反应体系在10℃下搅拌4小时，然后用冷的盐酸溶液(1.0M，10mL)淬灭反应。混合物搅拌30分钟后用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(25mL)洗涤，分离有机相并用无水硫酸钠干燥后，浓缩，残渣经过Flash柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0～40％)，得到化合物2.2(780mg，产率：80％)为白色固体。 [0172] 步骤3：化合物2.3的合成 [0173] 将化合物2.2(1.3g，2.65mmol)、碘(1.35g，5.30mmol)、咪唑(270mg，3.98mmol)和三苯基膦(1.04g，3.98mmol)溶于二氯甲烷(60mL)中，反应体系在室温下搅拌5小时，然后用饱和的硫代硫酸钠水溶液(50mL)淬灭反应。混合物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(25mL)洗涤，分离有机相并用无水硫酸钠干燥后，浓缩，残渣经过Flash柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0～10％)，得到化合物2.3(1.3g，产率：82％)为白色固体。 [0174] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.12(s,1H),4.54-4.63(m,1H),3.11-3.25(m,2H),2.10(s,3H),2.06(s,3H),1.05-2.02(m,27H),0.88-0.96(m,9H),0.66(s,3H)。 [0175] 步骤4：化合物2.4的合成 [0176] 将化合物2.3(1.0g，1.66mmol)、三甲基氰硅烷碘(1.65g，16.7mmol)、和四丁基氟化铵(2.63g，8.33mmol)溶于乙腈(60mL)中，反应体系在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩除去溶剂。残渣经过Flash柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0～10％)，得到化合物2.4(800mg，产率：96％)为白色固体。 [0177] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.12(s,1H),4.56-4.59(m,1H),2.31-2.34(m,2H),2.10(s,3H),2.06(s,3H),1.12-2.10(m,27H),0.82-0.96(m,9H),0.64(s,3H)。 [0178] 步骤5：化合物2.5的合成 [0179] 将化合物2.4(300mg，0.60mmol)加入到氢氧化钠的甲醇溶液(15mL，10％，w/w)中，反应体系在70℃下搅拌过夜，然后将该反应体系冷却至室温，用盐酸溶液(2.0M)调节pH＝5～6，并搅拌30分钟后用二氯甲烷萃取(3×30mL)。合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，分离有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩除去溶剂。残渣经过Flash柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0～80％)，得到化合物2.5(260mg，产率：98％)为白色固体。 [0180] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.73(s,1H),3.42-3.44(m,1H),2.31-2.35(m,2H),0.98-1.98(m,27H),0.90-0.95(m,9H),0.68(s,3H)。 [0181] m/z:[M-H]–433 [0182] 实施例3：化合物3.2的合成 [0183] [0184] 步骤1：化合物3.1的合成 [0185] 冰浴条件下，将化合物2.1(3.65g，7.24mmol)加入到三氟乙酸(6.6mL)和三氟乙酸酐(11.4g，54.3mmol)中，搅拌至溶解后分批加入亚硝酸钠(1.5g，21.7mmol)，加毕，反应体系在冰浴下继续搅拌1小时后，再在40℃下搅拌2小时。反应体系用饱和的碳酸氢钠水溶液中和，然后用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，分离有机相并用无水硫酸钠干燥后，浓缩，残渣经过Flash柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0～20％)，得到化合物3.1(2.4g，产率：70％)为淡黄色油状物。 [0186] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.11(s,1H),4.54-4.62(m,1H),2.22-2.38(m,2H),2.10(s,3H),2.05(s,3H),1.16-1.98(m,26H),0.95(s,3H),0.89(t,J＝7.2Hz,3H),0.68(s,3H)。 [0187] 步骤2：化合物3.2的合成 [0188] 将化合物3.1(317mg，0.67mmol)加入到氢氧化钠的甲醇溶液(15mL，10％，w/w)中，反应体系在100℃下搅拌过夜，然后将该反应体系冷却至室温，减压浓缩除去溶剂。残渣溶于冷水中(20mL)，用盐酸溶液(3.0M)调节pH＝6～7，并搅拌30分钟后用乙酸乙酯萃取(3×20mL)。合并有机相，并用饱和食盐水(20mL)洗涤，分离有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残渣经过Flash柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷＝0～3％)，得到化合物3.2(175mg，产率： 64％)为白色固体。 [0189] m/z:[M-H]–405 [0190] 实施例4：化合物4.4的合成 [0191] [0192] 步骤1：化合物4.1的合成 [0193] 将化合物1.7(1.1g，2.6mmol)，乙酸酐(5mL)和4-二甲氨基吡啶(32mg，0.26mmol)，溶于甲苯(50mL)中，反应体系加热回流分水过夜。将反应体系冷却至室温后，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。有机相减压蒸干后，用硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝3:1～1:3)纯化，得到化合物4.1(850mg，产率：64％)。 [0194] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.11(br.s,1H),4.52-4.61(m,1H),2.34-2.55(m,2H),2.09(s,3H),2.05(s,3H),1.06-1.99(m,26H),0.87-0.95(m,9H),0.66(s,3H)。 [0195] m/z:[M-H]–503 [0196] 步骤2：化合物4.2的合成 [0197] 将化合物4.1(500mg，0.99mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(0.1mL)和二氯甲烷(12mL)中。然后滴加入草酰氯(593mg，4.7mmol)，再将反应体系加热回流0.5小时，然后直接将反应液旋干，得到化合物4.2(520mg，产率：100％)为黄色固体，不用纯化，留待下一步使用。 [0198] 步骤3：化合物4.3的合成 [0199] 将化合物4.2(520mg，0.99mmol)溶入丙酮(15mL)中，然后冰浴冷至0℃，滴加入饱和叠氮化钠水溶液(1.5mL)，并在0℃反应0.5小时后升至室温继续搅拌反应3小时，向反应体系中加入水(5mL)淬灭反应，用二氯甲烷(3×20mL)萃取反应体系，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，然后小心旋干(温度不超过30℃)，得到粗品为黄色油状中间体(450mg)。将粗品(450mg，0.85mmol)加入甲苯(15mL)中，然后加入叔丁醇(2mL)。该体系加热至100℃搅拌30分钟。反应体系冷却至室温后，将反应液直接减压旋干的粗品，粗品用硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10:1～1:2)纯化得到化合物4.2(120mg，产率：21％)为白色固体。 [0200] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.10(br.s,1H),4.53-4.61(m,1H),4.45(br.s,1H),3.21(br.s,1H),2.98-3.07(m,1H),2.09(s,3H),2.05(s,3H),1.44(s,9H),1.06-1.99(m,24H),0.87-0.96(m,10H),0.64(s,3H)。 [0201] m/z:[M-H]–574 [0202] 步骤4：化合物4.4的合成 [0203] 将化合物4.3(120mg，0.21mmol)溶入二氯甲烷(10mL)中，然后用冰浴将反应体系冷却至0℃，滴加三氟乙酸(2.5mL)，并在0℃下反应0.5小时后升至室温继续搅拌3小时，然后减压旋蒸除去溶剂，得到化合物4.4(125mg，产率：100％)为白色固体，为三氟乙酸盐。 [0204] 实施例5：化合物4.5和4.6的合成 [0205] 根据实施例4化合物4.4的合成方法，用化合物2.5和3.2为原料合成化合物4.5和4.6，均为三氟乙酸盐。 [0206] [0207] 实施例6：化合物5.2的合成 [0208] [0209] 步骤1：化合物5.1的合成 [0210] 将化合物2.3(1.0g，1.66mmol)溶于乙醇(10mL)中，加入亚硫酸纳水溶液(150mL，5％，w/w)。反应体系在100℃下搅拌24小时后冷却至室温，减压浓缩除去乙醇，剩余溶液通过大孔吸附树脂MCI-Gel HP-20(以聚苯乙烯-二乙烯基苯为基体)，先用水冲淋除去无机离子后再用甲醇水溶液(70％)冲淋，收集洗脱液，减压浓缩得到化合5.1(1.0g，产率：100％)为类白色固体。 [0211] m/z:[M-Na]–553 [0212] 步骤2：化合物5.2的合成 [0213] 将化合物5.1(1g，1.73mmol)溶于二氯亚砜(5mL)和甲苯(20mL)中，将反应体系加热回流并搅拌5小时，之后将反应体系冷却至室温，减压浓缩除去溶剂。残渣溶于四氢呋喃(5mL)中，加入氢氧化铵水溶液(50mL，10％)。反应体系在室温下搅拌过夜，减压浓缩除去溶剂。残渣经过Flash柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷＝0～5％)，得到化合物5.2(550mg，产率：39％)为白色固体。 [0214] m/z:[M-H]–552 [0215] 实施例7：化合物6.1的合成 [0216] 化合物6.1利用实施例2化合物2.3的合成方法，用化合物3.2为起始原料合成化合物6.1。 [0217] [0218] m/z:[M-H]–585 [0219] 实施例8：化合物7.1的合成 [0220] 化合物7.1利用实施例6化合物5.2的合成方法，用化合物6.1为起始原料合成化合物7.1。 [0221] [0222] 实施例9：化合物I-1的合成 [0223] [0224] 步骤1：化合物1.12的合成 [0225] 将化合物1.11(150mg，0.26mmol)溶入四氢呋喃(15mL)中，然后冰浴冷至0℃，缓慢滴加苯磺酰异氰酸酯(38mg，0.21mmol)，并在0℃反应0.5小时后升至室温继续搅拌反应过夜，往反应液中加入5mL水淬灭反应，用二氯甲烷(3×20mL)萃取反应液，有机相合并，用饱和食盐水洗，然后小心旋干，得到粗品为黄色油状物，将粗品用硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10:1～1:2)纯化得到化合物1.12为白色固体(64mg，产率：38％)。 [0226] m/z:[M-H]–657 [0227] 步骤2：化合物I-1的合成 [0228] 将化合物1.12(64mg，0.10mmol)溶入甲醇(5mL)中，然后冰浴冷至0℃，滴加入10％氢氧化钠甲醇溶液(5mmol)，并在0℃反应0.5小时后升温至回流，继续搅拌反应过夜，向反应体系中加入水(5mL)淬灭反应，用二氯甲烷(3×20mL)萃取反应液，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，然后减压旋蒸除去溶剂，残留物用硅胶柱色谱(二氯甲烷/甲醇＝100:1～10:1)纯化得到化合物I-1(14mg，产率：25％)为白色固体。 [0229] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.92(d,J＝7.2Hz,2H),7.68(t,J＝7.2Hz,1H),7.57(t,J＝8.0Hz,2H),6.53(br.s,1H),3.73(br.s,1H),3.43-3.45(m,1H),3.29-3.31(m,1H),3.18-3.21(m,1H),1.02-1.99(m,25H),0.92-0.97(m,9H),0.67(s,3H)。 [0230] m/z:[M-H]–573 [0231] 实施例10：化合物I-2～I-11的合成 [0232] 化合物I-2～I-11的合成是根据实施例7化合物I-1的合成方法，把其中的苯磺酰异氰酸酯用相应的取代的苯磺酰异氰酸酯代替得到化合物I-2～I-11。 [0233] [0234] [0235] [0236] 实施例11：化合物I-12～I-20的合成 [0237] 化合物I-12～I-20的合成是根据实施例7化合物I-1的合成方法，把其中的苯磺酰异氰酸酯用相应的取代的磺酰基异氰酸酯代替得到化合物1-12～1-22。 [0238] [0239] [0240] [0241] 实施例12：化合物I-21～I-26的合成 [0242] 化合物I-21～I-26的合成是根据实施例7化合物I-1的合成方法，用化合物4.5和相应的取代的磺酰基异氰酸酯反应得到化合物1-21～1-26。 [0243] [0244] [0245] [0246] 实施例13：化合物I-27～I-30的合成 [0247] 化合物I-27～I-30的合成是根据实施例7化合物I-1的合成方法，用化合物4.6和相应的取代的磺酰基异氰酸酯反应得到化合物1-27～1-30。 [0248] [0249] [0250] 实施例14：化合物I-31的合成 [0251] [0252] 步骤1：化合物5.3的合成 [0253] 向化合物5.2(350mg，0.64mmol)和4-三氟甲基苯异氰酸(119mg，0.64mmol)的二氯甲烷(15mL)溶剂，加入DIPEA(106mg，0.96mmol)。反应搅拌室温搅拌过夜。反应液用水洗，分离有机相，有机相干燥浓缩，残留物用柱层析(二氯甲烷：甲醇＝95:5)纯化得到化合物5.3(260mg，产率：56％)为白色固体。 [0254] m/z:[M-H]-739 [0255] 步骤2：化合物I-31的合成 [0256] 将化合物5.3(250mg，0.34mmol)加入到10％氢氧化钠/甲醇溶液(10mL)中，反应体系回流过夜，反应液冷却后，用盐酸(2.0M)调pH值到2～3。混合物用二氯甲烷萃取，分离有机相，有机相干燥浓缩，残留物经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝95:5)纯化得到化合物I-31(120mg，产率：54％)为白色固体。 [0257] m/z:[M-H]-655 [0258] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.57(s,1H),8.32(br.s,1H),7.60(s,4H),3.71-3.72(m,1H),3.29-3.52(m,3H),1.02-2.04(m,27H),0.85-0.95(m,9H),0.65(s,3H)。 [0259] 实施例15：化合物I-32的合成 [0260] 化合物I-32的合成是根据实施例14化合物I-31的合成方法，把其中的4-三氟甲基苯异氰酸替换为4-三氟甲氧基苯异氰酸得到化合物1-32。 [0261] [0262] m/z:[M-H]-671 [0263] 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.41(d,J＝8.8Hz,2H),7.17(d,J＝8.4Hz,2H),6.75(s,1H),4.73(s,2H),4.52-4.61(m,1H),3.74(s,1H),3.03-3.18(m,2H),1.07-2.02(m,27H), 0.90-0.99(m,9H),0.69(s,3H)。 [0264] 实施例16：化合物I-33～I-35的合成 [0265] 化合物I-33～I-35的合成是根据实施例14化合物I-31的合成方法，用化合物7.1和相应的取代的异氰酸酯反应得到化合物1-33～1-35。 [0266] [0267] [0268] 生物测试实施例： [0269] 实施例1：FXR TR-FRET试验 [0270] FXR激动剂的筛选是利用TR-FRET(Time-resolved fluorescence resonance energy transfer时间分辨荧光共振能量转移)方法进行生物活性测定。该方法测量化合物调节FXR配体结合域蛋白(ligand binding domain，LBD)与生物素标记的多肽(SRC-1)之间的相互作用的能力。当配体结合到FXR配体结合域时会促使此区域的构象发生变化，从而产生高亲和性募集其辅酶多肽(SRC-1)。当两者靠得很近时，光子能从一个受激发的荧光团转移到另一个荧光团，并诱导后者产生荧光从而可以进行检测。与FXR亲和力越高的化合物，诱导的荧光信号越强。 [0271] 测试是在384孔测试板中进行，将N-末端GST-标记的FXR配体结合域蛋白FXR-LBD(3nM，Life Technology)和铕标记的抗-GST抗体(50nl，Cisbio)在pH7.5的Tris-HCl缓冲液中混合，再将生物素标记的SRC1肽(500nM，GL)和APC标记的链霉(50nl，Cisbio)在缓冲液中混合，然后将上述两种混合液按照1:1混合后每孔加20μL到384孔测试板中，所述实施例化合物100％DMSO溶液，使得DMSO在最终体积为20mL的混合液里面的浓度为1％。并在室温下孵育3小时。信号的检测是用EnVision Muti-Label读数器(Perkin Elmer公司)读取，测量波长为615nm处和665nm的相对荧光单位(RFU)。信号用RFU665nm/RFU615nm来计算。化合物的活性表示为％活化＝[化合物信号-基底信号]/[最大信号-基底信号]×100％。化合物如果能够促进FXR和其配体结合域蛋白复合物的形成，将会诱导荧光信号随着化合物浓度的增加而增强。使用GraphPad Prism5将剂量响应数据点用标准回归模型曲线拟合计算出EC50值。 [0272] 实施例2：FXR Reporter试验 [0273] 化合物在肝细胞HepG2中GAL4荧光素酶报告基因生物活性测定 [0274] 将每孔60,000的肝细胞HepG2接种在96孔板中，并用FuGENE转染试剂(Promega)将pBIND-FXR_LBD(50ng)和pGL5Luc(50ng)共转染近HepG2细胞。在37℃，5％二氧化碳培养箱中孵温育24小时后，将化合物加入到细胞中，DMSO的终浓度为0.6％，在37℃，5％二氧化碳培养箱继续孵育18小时。使用双荧光素酶报告基因检测试剂盒(Promega)，按照供应商的试剂盒的规程进行荧光素酶活性测定。相对光单位(RLU)由EnVision Muti-Label读数器(Perkin Elmer公司)进行测定。化合物的活性表示为％活化＝(化合物的RLU-基底RLU)/(最大RLU-基底RLU)×100％。化合物如果能够激活FXR的活性，发光信号随着化合物浓度的增加而增强。使用GraphPad Prism 5将剂量响应数据点用标准回归模型曲线拟合计算出EC50值。 [0275] 实施例3：TGR5-cAMP Reporter生物活性的测定 [0276] 过表达人类TGR5的HEK293细胞以10,000个细胞的浓度/6μL/每孔重悬浮于刺激缓冲液HBSS 1X(Invitrogen)，其中含有5mM HEPES(Invitrogen公司)，0.1％的BSA(PerkinElmer)，和0.5mM IBMX(Sigma公司)。从LANCE cAMP384试剂盒(Perkin Elmer)向细胞悬浮液中添加1％的Alexa Fluor 647标记的cAMP抗体。化合物的DMSO溶液由一系列3倍稀释，10点曲线拟合(安捷伦)。然后将120nL的化合物溶液转移到384孔的OptiPlate板(Perkin Elmer)，6μL的刺激缓冲液，6μL的细胞悬液(含Alexa标记的抗体)。混合物在室温下孵育1小时之后，从LANCEcAMP 384试剂盒(Perkin Elmer)中添加12μL的检测混合物。平板再在室温下培养1小时。由Envision Muti-Label读数器(Perkin Elmer公司)读取620nM和665nm的相对光单位(RLU)。化合物的活性表示为％活化＝(化合物的RLU-基底RLU)/(最大RLU-基底RLU)×100％。使用GraphPad Prism 5将剂量响应数据点用标准回归模型曲线拟合计算出EC50值。 [0277] 本发明所述化合物活性测试结果，EC50值报告的范围为：+表示1-100μM，++表示0.5-1μM，+++表示0.1-0.5μM，++++表示0.05-0.1μM，+++++表示≤0.05μM。 [0278]化合物编号 FXR TR-FRET FXR Reporter TGR5Reporter I-1 +++++ +++ / I-2 +++++ / ++ I-3 +++++ +++ + I-4 +++++ +++ + I-5 +++++ / + I-6 +++++ +++ + I-7 +++++ ++++ + I-8 +++++ +++ + I-9 +++ / +++ I-10 +++++ +++ + I-11 +++++ +++ + I-12 +++++ +++ ++ I-13 +++++ +++ / I-14 +++++ + / I-15 +++++ + + I-16 +++++ ++ ++ I-17 ++ + +++ I-18 +++++ / + I-19 +++++ ++++ + I-20 +++++ / + I-21 +++++ +++ + I-22 +++++ +++++ + I-24 +++++ / + I-25 ++++ / / I-26 +++++ / ++ I-27 +++++ ++ + I-28 +++++ ++ + I-29 +++++ +++ + I-30 +++++ / + I-31 ++++ / ++++ I-33 +++ / + I-34 ++ / +++ I-35 ++ / ++ GW4064 ++++ +++ + OCA ++++ ++ + |
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