溴化1-[17β-(乙酰氧基)-3α-羟基-2β-(4-吗啉基)-5α-雄烷-16β- 基]-1-(2-丙烯基)吡咯烷鎓(罗库溴铵，化合物I)具有以下结构：

并具有分子式C32H53BrN2O4和分子量609.70。将罗库溴铵用作非去极化 神经肌肉阻断剂，其具有对中间发作的迅速反应(a rapid to intermediate onset)，取决于剂量和中间持续时间。其通过竞争在运动(motor)终板处 的胆碱能受体起作用。该作用受乙酰胆碱脂酶抑制药如新斯的明和腾喜 隆对抗。
在北美罗库溴铵以为名销售，在其它地区以 商标名销售。其作为仅用于静脉注射的透明无色-黄色/橙色 的无菌无热原等张溶液供应。
罗库溴铵的制备方法公开于美国专利第5,817,803号和4,894,369号 以及美国公开第2005/0159398号中。
美国专利第4,894,369号(“369专利”)公开了采用色谱法然后由二 氯甲烷和醚结晶精制的罗库溴铵制备方法。
美国公开第2005/0159398号公开了经双乙酰化中间体制备的罗库 溴铵，其中罗库溴铵以约87％的收率和约98％HPLC面积的纯度得到。
类似于任意的合成化合物，罗库溴铵盐可含有源自多种来源如降解 的外来化合物或杂质。该外来化合物或杂质可以是未反应的原料、合成 副产物、副反应产物和/或降解产物。在罗库溴铵盐或任何活性药物成分 (API)中的杂质均是不期望的，在极端情况下其甚至可能对使用包含该 API的剂型治疗的患者有害。
除作为API保存期限因素的稳定性外，采用商业化生产工艺生产的 API纯度显然是商业化的必要条件。在商业化生产工艺期间引入的杂质 必需控制为极少量，并优选基本不存在。例如，International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use(ICH Q7A Good Manufacturing Practice Guidance for Active Pharmaceutical Ingredients，2000年11月10日)要求， 在生产工艺中通过限定原料品质，控制工艺参数如温度、压力、时间和 化学计量比，并结合精制步骤如结晶、蒸馏以及液-液萃取，保持工艺杂 质低于规定限度。
化学反应的产品混合物很少为具有符合制药标准的足够纯度的单 一化合物。反应的副产品和副产物以及在反应中使用的助剂在多数情况 下同样也存在于产品混合物中。在API罗库溴铵生产期间的某些阶段， 必须典型地通过HPLC、TLC或GC分析来分析纯度，以确定其是否适 于继续生产以及最终适用于制药产品中。API不需要绝对纯净，因为绝 对纯度是一种理论上完美的情况，基本通常不可能实现。相反，将纯度 标准设定为期望保证API尽可能地不含杂质，从而对于临床应用尽可能 地安全。如上所述，在美国，Food and Drug Administration guidelines建 议将一些杂质的含量限定为低于0.1％。
通常，副产品、副产物和助剂(统称“杂质”)采用光谱法和/或使用 另一种物理方法，并随后结合峰位置如在色谱中的峰或在TLC板中的点 来鉴别(Strobel p953，Strobel，H.A.；Heineman，W.R.，Chemical Instrumentation：A Systematic Approach，(第三版，Wiley & Sons，New York 1989))。然后，所述杂质可例如通过其在色谱中的相对位置来鉴定， 所述在色谱中的位置通常以样品在色谱柱的注入与特定组分通过检测 器的洗脱之间的分钟数来测量。所述在色谱中的相对位置称作“保留时 间”。
保留时间可基于仪器条件以及多种其它参数在平均值附近变化。为 减少这类变化对杂质的精确鉴别产生的影响，研究人员采用“相对保留 时间”(“RRT”)来鉴别杂质(Strobel p.922)。杂质的RRT为其保留时间除 以参比物的保留时间。可有利地选择不同于API的化合物，其在混合物 中加入的或存在的量足够大以可以被检测到且足够少从而不会饱和色 谱柱，并使用该化合物作为测定RRT的参比物。
如本领域技术人员公知的，工艺杂质的处理通过理解其化学结构和 合成路线，以及鉴定影响终产物中杂质含量的参数，得到极大地强化。
根据欧洲药典(European pharmacopoeia)，罗库溴铵应包含不大于 0.2％HPLC面积的杂质A。此外，根据ICH指南(Q3C Impurities：Tables and list，2003年11月)，罗库溴铵应含不多于约5000ppm的乙醚和 600ppm的二氯甲烷。本发明包括胜过(exceed)欧洲药典第五版(European Pharmacopoeia 5th edition)(附录5.4，第4013-4014页)和ICH指南(ICH Guidelines)所规定限度的罗库溴铵。
类似于任意的合成化合物，罗库溴铵可包含源自多种来源的外来化 合物和/或杂质。其可以是未反应原料、反应的副产物、副反应的产物或 降解产物。本发明通过以高纯度提供罗库溴铵解决这些问题。
发明概述
本发明的一个实施方式包括罗库溴铵，化合物I，

其在醋酸和高氯酸中具有99％-101％的电势分析值，具有低于约0.2 ％HPLC面积的杂质A，以及分别以小于或等于约850ppm和600ppm的 量具有溶剂乙醚和二氯甲烷中的至少一种。优选地，该罗库溴铵具有不 足约0.1％HPLC面积的杂质A，更优选约0.1％HPLC面积-约0.02％ HPLC面积的杂质A，以及最优选约0.07％HPLC面积-约0.02％HPLC 面积的杂质A。优选地，该罗库溴铵具有约99％-约100％HPLC面积的 纯度。优选地，该罗库溴铵具有低于2000ppm的溶剂总量。
本发明的另一个实施方式包括一种药学制剂，其含有所述罗库溴铵 和至少一种药学上可接受的赋形剂。
本发明的另一个实施方式包括一种制备所述药学制剂的方法，包括 将所述罗库溴铵与至少一种药学上可接受的赋形剂混合。
本发明的再一个实施方式包括所述药学制剂在制备用于肌肉松弛 的药物中的用途。
发明详细描述
如这里使用的，当涉及罗库溴铵时，术语“基本上纯的”表示罗库 溴铵在醋酸和高氯酸中具有99-101％的电势分析值，小于约0.2％HPLC 面积的杂质A，以及分别以小于或等于约850ppm和600ppm的量具有 溶剂乙醚和二氯甲烷中的至少一种。
本发明包括一种制备基本上纯的罗库溴铵的方法。所述方法部分地 降低了在罗库溴铵合成期间吡咯烷的用量，这进而降低了不期望的副产 物的量。同样，在该方法中罗库溴铵合成期间的后处理工序将产品中残 留溶剂的含量降至欧洲药典和ICH指南标准可接受的水平。
’369专利的实施例23公开了通过(2α，3α，5α，16β，17β)-2-(4-吗啉 基)-16-(1-吡咯烷基)-雄烷-3，17-二醇17-乙酸酯与8.1当量烯丙基溴反应 的罗库溴铵制备方法。该反应通常在压力及室温下进行22小时，见’369 专利第8栏，27-46行。下面的对比例1重复了在’369专利中公开的方法， 并表明该方法提供了具有16519ppm乙醚和176ppm二氯甲烷的罗库溴 铵。从而，尽管所述方法采用了色谱并随后结晶精制，但是在’369专利 的实施例23中公开的方法仍然得到了包含超过ICH指南纯度标准允许 的残留溶剂的罗库溴铵。
本发明的方法不需要现有技术中要求的额外精制步骤，即得到了符 合欧洲药典和ICH指南纯度标准的罗库溴铵。
如这里使用的，除非另外说明，否则当用于产品时术语“湿”表示 包含多于约850ppm乙醚和600ppm二氯甲烷的产品。
如这里使用的，除非另外说明，否则术语“杂质A”表示2β-(4- 吗啉基)-16β-(1-吡咯烷基)-5α-雄烷-3α-醇-17β-乙酸酯，化合物VIII。

本发明的一个实施方式包括基本上纯的罗库溴铵，化合物I。

优选地，所述罗库溴铵在乙酸和高氯酸中具有99-101％的电势分析 值，小于约0.1％HPLC面积的杂质A，以及分别以小于或等于约850ppm 和600ppm的量具有溶剂乙醚和二氯甲烷中的至少一种。更优选所述罗 库溴铵在乙酸和高氯酸中具有99-101％的电势分析值，约0.1％-约0.02 ％HPLC面积的杂质A，以及分别以小于或等于约850ppm和600ppm的 量具有溶剂乙醚和二氯甲烷中的至少一种。最优选所述罗库溴铵在乙酸 和高氯酸中具有99-101％的电势分析值，约0.07％-约0.02％HPLC面积 的杂质A，以及分别以小于或等于约850ppm和600ppm的量具有溶剂 乙醚和二氯甲烷中的至少一种。
优选地，所述罗库溴铵具有约99％-约100％HPLC面积的纯度。
优选地，所述罗库溴铵具有低于2000ppm的溶剂总量。
所使用的HPLC为根据在欧洲药典第5版(附录5.4，4013-4014页) 中报道的欧洲药典HPLC法(European Pharmacopoeia HPLC method)。
本发明进一步包括一种制备基本上纯的罗库溴铵化合物I的方法， 包括将2β-(4-吗啉基)-16β-(1-吡咯烷基)-5α-雄烷-3α-醇-17β-乙酸酯 (化合物VIII)

与极性质子惰性有机溶剂、相对于每摩尔化合物VIII约1.3-约3当量的 烯丙基溴以及无机碱合并；分离罗库溴铵；在极性质子惰性有机溶剂中 溶解该分离的罗库溴铵；添加任选地与碱组合的脱色剂；过滤该混合物 以得到滤液；向该滤液中添加抗溶剂，并在约840rpm-1000rpm下搅拌 以得到悬浮液；回收罗库溴铵湿固体；并在不大于约35℃温度下干燥该 湿的罗库溴铵。
具有在乙酸和高氯酸中99-101％电势分析值、小于约0.1％HPLC面 积的杂质A和分别以小于或等于约850ppm和600ppm的量含有溶剂乙 醚和二氯甲烷中的至少一种的罗库溴铵可通过以下步骤制备：将2β-(4- 吗啉基)-16β-(1-吡咯烷基)-5α-雄烷-3α-醇-17β-乙酸酯(化合物VIII)、 基于每摩尔化合物VIII约1.3-约3当量的烯丙基溴、其中水含量低于约 0.1％(通过KF测量)的极性质子惰性有机溶剂以及无机碱合并；分离 罗库溴铵；在极性质子惰性有机溶剂中溶解式I的罗库溴铵；在低于约 22℃温度下除去所述极性质子惰性有机溶剂以得到油状残渣；在极性质 子惰性溶剂中溶解该油状残渣；添加任选地与碱组合的脱色剂以形成混 合物；过滤该混合物得到滤液；将该滤液加入抗溶剂中，并在约 840rpm-1000rpm下搅拌得到悬浮液；由该悬浮液回收式I的罗库溴铵湿 固体；并在不高于约35℃温度下干燥该罗库溴铵。
具有在乙酸和高氯酸中99-101％电势分析值、约0.1％-约0.02％ HPLC面积的杂质A和分别以小于或等于约850ppm和600ppm的量含 有溶剂乙醚和二氯甲烷中的至少一种的罗库溴铵可通过以下步骤制备： 将2β-(4-吗啉基)-16β-(1-吡咯烷基)-5α-雄烷-3α-醇-17β-乙酸酯(化合 物VIII)，基于每摩尔化合物VIII约1.3-约3当量的烯丙基溴，其中水含 量低于约0.05％(通过KF测量)的选自由卤化烃、酯、酮及其混合物 组成的组的极性质子惰性有机溶剂，和选自由氧化铝、碳酸钠、碳酸氢 钠和碳酸钾组成的组的无机碱组合；分离罗库溴铵；在选自由卤化烃、 酯、酮及其混合物组成的组的极性质子惰性有机溶剂中溶解式I的罗库 溴铵；在低于约25℃温度下除去极性质子惰性有机溶剂以得到油状残 渣；在选自由卤化烃、酯、酮及其混合物组成的组的极性质子惰性有机 溶剂中溶解该油状残渣；添加任选地与碱组合的脱色剂，所述脱色剂选 自由氧化铝、活性炭和硅胶组成的组，所述碱选自由碳酸钠、碳酸氢钠 和碳酸钾组成的组；过滤；将滤液加入选自由卤化烃、醚、酯、芳香烃 及其混合物组成的组的抗溶剂中；在约840rpm-1000rpm下搅拌以得到 悬浮液；回收式I的罗库溴铵湿固体；并在不高于约35℃温度下干燥所 述罗库溴铵。
具有在乙酸和高氯酸中99-101％电势分析值、约0.07％-约0.02％ HPLC面积的杂质A和分别以小于或等于约850ppm和600ppm的量含 有溶剂乙醚和二氯甲烷中的至少一种的罗库溴铵可通过以下步骤制备： 将2β-(4-吗啉基)-16β-(1-吡咯烷基)-5α-雄烷-3α-醇-17β-乙酸酯(化合 物VIII)，基于每摩尔化合物VIII约2当量的烯丙基溴，其中水含量小 于约0.03％(通过KF测量)的选自由二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮及其 混合物组成的组的极性质子惰性有机溶剂，和选自由氧化铝、碳酸钠、 碳酸氢钠和碳酸钾组成的组的无机碱组合；分离罗库溴铵；在极性质子 惰性有机溶剂中溶解式I的罗库溴铵，所述有机溶剂选自由二氯甲烷、 乙酸乙酯、丙酮及其混合物组成的组；在低于约25℃温度下除去所述极 性质子惰性有机溶剂以得到油状残渣；在选自由二氯甲烷、乙酸乙酯、 丙酮及其混合物组成的组的极性质子惰性有机溶剂中溶解该油状残渣； 添加任选地与碱组合的脱色剂，所述脱色剂选自由氧化铝、活性炭和硅 胶组成的组，所述碱选自由碳酸钠、碳酸氢钠和碳酸钾组成的组；过滤； 将滤液加入选自由二氯甲烷、二乙醚、二异丙醚、乙酸乙酯、甲苯及其 混合物组成的组的抗溶剂中；在约840rpm-1000rpm下搅拌以得到悬浮 液；回收式I罗库溴铵的湿固体；并在不大于约35℃温度下干燥所述罗 库溴铵。
优选将2β-(4-吗啉基)-16β-(1-吡咯烷基)-5α-雄烷-3α-醇-17β-乙 酸酯在与烯丙基溴和所述无机碱合并前溶解在极性质子惰性有机溶剂 中。此后，在低于约35℃温度下除去1/3所述溶剂体积，以得到根据 Karl Fisher测量具有低于约0.1％水含量的溶液。该步骤可重复至少两 次。优选该溶剂通过蒸馏除去。任选地，添加和除去溶剂的步骤可采用 本领域公知的常规方法替换，其可使得根据Karl Fischer测定的水含量 低于约0.1％。优选该化合物VIII、极性质子惰性有机溶剂和烯丙基溴 的混合物具有较低的水含量，更优选通过Karl Fischer测量低于约0.1％ 的水含量，更优选通过Karl Fischer测量低于约0.05％的水含量，和最 优选通过Karl Fischer测量低于约0.03％的水含量。
任选地，所述化合物VIII、烯丙基溴和极性质子惰性有机溶剂在它 们合并前可分别使用无机碱处理。该无机碱优选当合并所述反应物时加 入。所述碱的加入避免了导致不期望的副产品如质子化种类(式1)的竞 争反应。

优选地，基于每摩尔化合物VIII使用2当量烯丙基溴。
优选地，将化合物VIII、极性质子惰性有机溶剂、约1.3-约3当量 烯丙基溴和无机碱合并后得到的混合物，在约15℃-约40℃温度下，更 优选在约35℃-约40℃温度下搅拌。
优选地，将所述混合物搅拌约20小时-约24小时。更优选将所述混 合物搅拌约22小时-约24小时。
所述极性质子惰性有机溶剂选自由卤化烃、酯、酮及其混合物组成 的组。优选地，卤化烃选自二氯甲烷。优选的酯为乙酸乙酯。优选地， 酮为丙酮。更优选该极性质子惰性有机溶剂为二氯甲烷。
无机碱包括但不限于氧化铝、碳酸钠、碳酸氢钠或碳酸钾。优选地， 该无机碱为碳酸钠。
优选分离罗库溴铵后将其溶解在极性质子惰性有机溶剂中，并除去 该溶剂以得到油状残渣。根据需要溶解和蒸发可重复多次，以除去过量 的烯丙基溴。
所述脱色剂包括但不限于氧化铝、活性炭或硅胶。当该脱色剂不为 碱性时，可将碱与该脱色剂组合使用。优选该脱色剂为氧化铝。优选所 述碱为碳酸氢钠。
过滤可采用本领域常用的任意方法实施。典型地，过滤在装备有氮 气入口和真空机的密闭过滤器中实施。优选地，过滤后将滤液以约0.55- 约0.610L/min，优选约0.58L/min的添加流速加入抗溶剂中。
优选地，向抗溶剂中的滤液添加在剧烈搅拌下实施，以避免在罗库 溴铵中高含量的残留溶剂。优选地，搅拌以约840rpm速率实施。优选 所述抗溶剂选自由卤化烃、醚、酯、芳香烃及其混合物组成的组。优选 的卤化烃是二氯甲烷。优选的醚为二乙醚或二异丙醚。优选所述酯为乙 酸乙酯。优选的芳香烃为甲苯。优选地，所述滤液中的溶剂为二氯甲烷 和抗溶剂为二乙醚。典型地，当溶剂为二氯甲烷和抗溶剂为二乙醚时， 所述反应生成了约112％-118％w/w的罗库溴铵。
优选地，将罗库溴铵在不高于约35℃温度下真空干燥至少5天。尽 管不拘泥于任何理论，然而该干燥方法被认为是防止杂质A形成的一个 因素。
本发明另一个实施方式包括药学制剂，其包括基本上纯的罗库溴铵 和至少一种药学上可接受的赋形剂。赋形剂的选择和用量可由制剂科学 家基于经验、对本领域标准方法和参考工作的研究容易地决定。赋形剂 可包括但不限于稀释剂、粘结剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、防腐剂、 增粘剂、缓冲剂、芳香剂和着色剂。
所述药学制剂可以固体或液体剂型提供。固体剂型包括但不限于药 片、粉末、胶囊、囊剂(sachet)和锭剂(troche)。液体剂型包括但不限于 适于静脉注射的形式。在液体剂型中，罗库溴铵和任意其它固态赋形剂 溶解或悬浮在液态载体中。
在再一个实施方式中，本发明包括一种制备所述包含基本上纯的罗 库溴铵和至少一种药学上可接受的赋形剂的药学制剂的方法。
在再一个实施方式中，本发明包括所述药学制剂在制备用于肌肉松 弛的药物中的用途。
由于已经参考特定优选实施方式如此描述了本发明，本领域技术人 员会认识到对上述记载和说明的本发明的改进，所述改进不会超出说明 书公开的本发明的主旨和范围。列举以下实施例以促进理解本发明，但 其不用于，且不应将其解释为，以任何方式限制本发明的范围。
实施例
用于测定残留溶剂含量的GC法
气相色谱法包括使用6％cianopropilfenil-94％Metilpolisiloxa (Zebron-624，Part No 7HM-G005-31)的填料和柱或长度为30、直径为 0.32mm以及膜厚为1.8μm的等价物。注射器温度为140℃，检测器温 度为250℃，以及在注入样品(注射器模式分流)前将烘箱在50℃温热20 分钟，然后以15℃/min的速率加热至220℃并保持2分钟。采用1μL 注射体积，并使用5.53psi恒压下的氦气作为载气。使用FID检测器， 氢气流速为30ml/min，以及空气流速为300ml/min。
内标(ISS)通过用DMSO将25μL苯混合至250mL制备。储液如下 制备。储液1：在50mL容量瓶中加入30mL ISS和1mL甲醇，用ISS 稀释至容积。储液2：在100mL容量瓶中将50mL ISS加入1mL乙腈和 1mL二氯甲烷中，用ISS稀释至容积。储液3：在25mL容量瓶中加入 15mL ISS和4mL二乙醚，并用ISS稀释至容积。标准储液通过在25mL 容量瓶中混合4mL储液1、1mL储液2和1mL储液3，并用ISS稀释至 容积制备。下表总结了标准储液中每种溶剂的最终浓度。
  溶剂   mg/mL   甲醇   2.531   二乙醚   4.544   乙腈   0.314   二氯甲烷   0.532
样品溶液通过向2mL ISS中加入200mg样品制备。下表总结了溶剂 的保留时间(RT)和相对保留时间(RRT)。
  溶剂   RT   RRT   甲醇   6.7’   0.30   二乙醚   8.7’   0.39   乙腈   10.9’   0.49   二氯甲烷   11.3’   0.51   苯(IS)   22.3’   1.00
样品按照以下顺序注入：(a)1μL内标溶液；(b)1μL工作标准溶 液(三次)；(c)1μL内标溶液；(d)1μL样品溶液第一制剂；和(e)1μL 样品溶液第二制剂。
样品量(以ppm计)采用以下步骤计算。积分除空白峰外的所有峰， 并如下计算：
$\mathrm{ppm}=\frac{\mathrm{Rspl}}{\mathrm{Rstd}}\times \frac{\mathrm{Cstd}}{\mathrm{Cspl}}\times 100\times 10000$
其中，
Rsp1为样品溶液中每种溶剂的峰面积与内标的峰面积之比。
Rstd为工作标准溶液中每种溶剂的峰面积与内标的峰面积之比。
Csp1为样品浓度。
Cstd为标准浓度(mgl/mL)。
HPLC法
每个HPLC根据欧洲药典第5版(附录5.4，4013-4014页)实施。
采用以下条件：
试验溶液：在溶剂混合物(水∶乙腈，10∶90v/v)中溶解0.100g要分析 的产品，并稀释至10.0mL。
参比溶液：用所述溶剂混合物(水∶乙腈，10∶90v/v)将1.0mL试验溶 液稀释至100.0mL。用流动相将1.0mL该溶液稀释至10.0mL。
柱：      Hypersil Silica 5μm，250×4.6mm。
温度：    30℃。
流动相：  用4.53g氢氧化四甲铵制备的100份(v/v)调节至 pH为7.4的溶液和900份(v/v)乙腈的混合物。
流速：    2.0ml/min。
检测：    在210nm下运行的UV。
注射体积：5μl。
运行时间：2.5倍于罗库溴铵的保留时间。
限制：
将杂质峰面积乘以相应的校正系数：化合物VIII的校正系数＝0.47。
测定方法
将40ml冰醋酸R中的0.400g被滴定物溶解在0.1M高氯酸R中。 通过电势分析来测定端点。
对比例1：美国专利No.4,894,369的实施例23所述的溴化1-[17β-乙酰 氧基-3α-羟基-2β-(4-吗啉基)-5α-雄烷-16β-基]-1(2-丙烯基)吡咯烷鎓 化合物I的制备
将烯丙基溴(1.95mL)加入(2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4-吗啉 基)-16-(1-吡咯烷基)-雄烷-3，17-二醇17-乙酸酯(1.35g，2.76mmol)的二氯 甲烷(27mL)溶液中，并将该溶液于室温下在压力瓶(125mL容量)中密封 22h(IP，采用TLC)。在15℃下减压除去溶剂，粗固体(2.44g)在氧化铝 (Fluka型5016A)上层析，并用二氯甲烷洗脱。将纯净级分合并，通过 溶剂蒸发浓缩，并用二氯甲烷(15mL)吸收。在20℃下加入二乙醚 (100mL)，以沉淀纯罗库溴铵，其通过在氮气气氛下过滤收集，并用二 乙醚(13.5mL)洗涤。得到的化合物在真空下于32-33℃干燥5天。研磨产 品17h，然后连续干燥以提供1.15g(1.88mmol，85.2％w/w收率、68.1％ 摩尔收率)浅色奶油状固体。熔点＝164-165℃并且干燥[α]D20+29.0°(c＝ 按照PharmaEurope法)。美国专利No.4,894,369报道了熔点＝161-169℃， 和[α]D20+18.7°(在CHCl3中c＝1.03)。HPLC纯度为98.2％面积，杂质 A含量为0.1％面积。存在1106ppm乙醚和7073ppm二氯甲烷。电势分 析值93％。
实施例2：溴化1-[17β-乙酰氧基-3α-羟基-2β-(4-吗啉基)-5α-雄烷-16 β-基]-1(2-丙烯基)吡咯烷鎓化合物I的制备
在20-22℃及N2气氛下将2β-(4-吗啉基)-16β-(1-吡咯烷基)-5α-雄 烷-3α，17β-二醇17-乙酸酯(化合物VIII)(8.65Kg，17.7mol)和二氯甲烷 (130L)，加入装有搅拌桨(1750-840rpm)的185L玻璃反应器中。然后， 在32-35℃及大气压下蒸馏40L二氯甲烷，并使溶液达到20-25℃。该体 积用40L二氯甲烷替换，并在32-35℃下提取相同体积，将该混合物冷 却至20-25℃。向该反应器中加入碳酸钠(8.65Kg)，并搅拌(840rpm)该混 合物5min，然后加入烯丙基溴(4.3Kg，35.5mol)。在32-35℃下搅拌 (840rpm)得到的悬浮液24小时。然后将该混合物冷却至室温(20-25℃)， 并在真空(11mm Hg)下在封闭过滤器(housing filter)中过滤，以除去用二 氯甲烷(8.65L)冲洗的盐。在真空下除去溶剂混合物，并保持温度低于20 ℃。将得到的油状产物用二氯甲烷(45L)溶解，并在真空下浓缩，保持温 度低于20℃；该步骤重复两次。在二氯甲烷(86.5L)中于室温及氮气气氛 下再次溶解该残渣，并添加氧化铝(4.3Kg)。得到的混合物在20-22℃下 搅拌30min，然后过滤。在20-22℃下对着挡水板(流速0.58L/min)将 该溶液(52.77L)缓慢加入(90min)至含有二乙醚(452L)并装有螺旋桨类型 (1680rpm)的1500L玻璃反应器中，同时连续搅拌(840rpm)。将得到的悬 浮液搅拌(840rpm)30分钟，然后在密闭过滤器中于氮气气氛(最大 2Kg/m2)下滤除固体，用二乙醚(2×3L)洗涤并排液至少24h。将得到的固 体在35℃于真空(11mm Hg)下干燥至少5天，以提供9.70Kg(0.016mol， 112.13％w/w收率、89.88％摩尔收率)灰白色固体。湿熔点为218℃，湿 [α]D20+17.9°(在CHCl3中c＝1.0)。该干燥材料的熔点为210℃，干燥 [α]D20+18.9°(在CHCl3中c＝1.0)。
HPLC纯度为99.9％面积，杂质A以0.07％面积存在。存在的残余 溶剂为甲醇(30ppm)、乙醚(850ppm)、乙腈(27ppm)和二氯甲烷(19ppm)。
实施例3：溴化1-[17β-乙酰氧基-3α-羟基-2β-(4-吗啉基)-5α-雄烷-16 β-基]-1(2-丙烯基)吡咯烷鎓化合物I碱(base)的原位制备
在20-22℃及N2气氛下向三颈烧瓶中加入二氯甲烷(20mL)、碳酸钠 (2.0g，0.081mol)加入以及缓慢地将烯丙基溴(0.692mL，0.00818mol)加入， 该三颈烧瓶装有加热罩(heated mantle)、温度计和磁力搅拌器。搅拌该混 合物5min，并加入2β-(4-吗啉基)-16β-(1-吡咯烷基)-5α-雄烷-3α，17 β-二醇17-乙酸酯(化合物VIII)(2.0g，4.09×10-3mol)。将该得到的混合 物搅拌5-10min。在回流下搅拌所得溶液22小时。然后将该混合物冷却 至室温(20-25℃)，并在氮气气氛下过滤(0.45微米的膜)。真空下除去溶 剂并保持温度低于20℃。得到的泡沫用二氯甲烷(10mL)溶解，并在真空 下浓缩，保持温度低于20℃；重复该步骤两次。在二氯甲烷(22mL)中于 室温及氮气气氛下再次溶解该残渣。
将该混合物分成两份(每份11mL)；将其中一份用氧化铝(1.0g)处理， 搅拌30分钟，然后过滤(0.45微米的膜)。将该溶液缓慢加入含有二乙醚 (74mL)的烧瓶中，同时连续剧烈搅拌。得到的悬浮液在20-25℃下搅拌 30分钟，在氮气气氛下过滤，并用乙醚(10mL)洗涤。真空及氮气气氛下 排干得到的固体10-15min，在40℃干燥至少40h，以提供1.04g(1.7× 10-3mol，104％w/w收率、83.1％摩尔收率)的灰白色固体，具有99.86 ％HPLC面积(结合了校正系数)的纯度，并含有0.02％HPLC面积(结合 了校正系数)的杂质A。