苯衍生物取代的5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-A][1,4]苯并二氮杂和6H-吡咯并[1,2-A][1,4]苯并二氮杂抗真菌剂 |
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| 申请号 | CN201180056445.6 | 申请日 | 2011-11-18 | 公开(公告)号 | CN103228659B | 公开(公告)日 | 2017-11-24 |
| 申请人 | 詹森药业有限公司; | 发明人 | L.米尔佩尔; L.J.R.M.梅斯; K.德维特; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及新的抗 真菌 剂式(I) 5,6‑二氢‑4H‑吡咯并[1,2‑a][1,4]苯并二氮杂䓬和6H‑吡咯并[1,2‑a][1,4]苯并二氮杂䓬，其中R1、R2、R3、R4、R5和R6具有 权利要求 中定义的意义。根据本发明的化合物主要对皮真菌和全身性真菌感染具有活性。本发明进一步涉及这类新的化合物、含有作为活性成分的所述化合物的药用组合物的制备方法以及所述化合物作为药物的用途。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种式(I)化合物 |
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| 说明书全文 | 苯衍生物取代的5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-A][1,4]苯并二氮杂䓬和6H-吡咯并[1,2-A][1,4]苯并二氮杂䓬抗真菌剂 发明领域 [0001] 本发明涉及新的抗真菌剂5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-a][1,4]苯并二氮杂䓬和6H-吡咯并[1,2-a][1,4]苯并二氮杂䓬，二者都被苯衍生物取代，它们主要对皮真菌和全身性真菌感染具有活性。本发明进一步涉及这类新的化合物、含有作为活性成分的所述化合物的药用组合物的制备方法以及所述化合物作为药物的用途。 [0002] 发明背景 [0003] 皮真菌是通常引起动物和人的皮肤病的一组有3种类型的真菌中的常见标志。这些变形(无性真菌或半知菌)属有：小孢霉属(Microsporum)、表皮癣菌属(Epidermophyton)和发癣菌属(Trichophyton)。这3类菌属中有约40个种类。 [0004] 由于皮真菌能从角质化材料中得到营养，其引起皮肤、毛发和指甲感染。微生物大量定居于角质组织，因宿主对代谢副产物的响应而引起炎症。由于其不能穿透免疫活性宿主的活体组织，因此它们通常受限于表皮的角质层。然而，微生物偶尔侵入皮下组织，导致脓癣发展。侵入引起宿主轻微至严重程度不等的响应。据报道，酸性蛋白酶、弹性蛋白酶、角蛋白酶和其它蛋白酶起毒力因子的作用。 [0005] 全身性真菌感染(SFI)是威胁生命的疾病，其最通常地以因为治疗恶性疾病而医疗介入引起的免疫力下降影响患者。现代医院中的SFI数字持续增加，已经涉及SFI的不同真菌的数量很多且仍在增加。虽然有许多侵袭性念珠菌病和曲霉病的病例，但是存在由于其它霉菌如尖端赛多孢子菌(Scedosporium apiospermum)、镰孢(Fusarium spp.)和接合菌属(Zygomycetes)、根霉菌属(Rhizopus)和毛霉(Mucor spp.)所致的感染的发病率的增加。因此，能很好治疗全部这些感染的有效治疗药需具有非常广谱的活性。在过去数十年中，已经将伊曲康唑、氟康唑、酮康唑和静脉注射或脂质体两性霉素B用于SFI，就抗菌谱、安全性或给药方便性而言，所有这些药剂都有其局限性。最近，已经研究第三代唑类并被引入市场，增加了重症监护室的治疗选项。针对威胁生命的侵袭性SFI诸如念珠菌病、曲霉病和镰孢(Fusarium)类引起的感染，临床相关剂量的伏立康唑(VfendTM)和泊沙康唑(NoxafilTM)表现出更多的治疗改善。而且，泊沙康唑对出现的接合菌(Zygomycetes spp.)引起的感染表现出功效。棘白菌素类，诸如阿尼芬净、卡泊芬净和米卡芬净，它们是真空细胞壁中的1,3-β-葡聚糖合成的非竞争性抑制剂，对假丝酵母和曲霉显示出高功效，但对隐球菌属(Cryptococcus)、镰孢属(Fusarium)或接合菌无活性。在所有的抗真菌药中，唑类仍代表着通过抑制真菌中麦角固醇生物合成必需的酶14-α-脱甲基酶而呈现最广的抗真菌谱的唯一一类化合物。 [0006] 甲真菌病是最常见的指甲疾病，占所有指甲异常中的约一半。成年人口中甲真菌病的流行程度为约6-8 %。甲真菌病的病原体包括皮真菌、假丝酵母和非皮真菌霉菌。在温带西方国家，皮真菌是引起甲真菌病的最常见真菌；同时，假丝酵母和非皮真菌霉菌更频繁地涉及热带和亚热带。红色发癣菌(Trichophyton rubrum)是涉及甲真菌病的最常见的皮真菌。可能涉及的其它皮真菌有指间发癣菌(Trichophyton interdigitale)、絮状表皮癣菌(Epidermophyton floccosum)、堇色发癣菌(Trichophyton violaceum)、石膏状小孢霉(Microsporum gypseum)、断发毛癣菌(Trichophyton tonsurans)、苏丹奈斯发癣菌(Trichophyton soudanense)和疣状毛癣菌(Trichophyton verrucosum)。其它病原体包括假丝酵母和非皮真菌霉菌，尤其是霉菌繁殖成员柱霉属(Scytalidium) (也称为新节格孢属(Neoscytalidium))、帚霉属(Scopulariopsis)和曲霉属(Aspergillus)。 [0007] 在J. Chem. Soc.(C), 2732-2734 (1971)；J. Heterocyclic Chem., 13, 711-716 (1976)；和J. Heterocyclic Chem., 16, 241-244 (1979)中已经描述5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-a][1,4]苯并二氮杂䓬。这些参考文献中公开的化合物都在4位的苯基部分上具有不同的取代基，而且，在任何这些参考文献中均未报告生物学活性。 [0008] WO02/34752描述作为一类新的抗真菌剂化合物的4位取代的5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-a][1,4]苯并二氮杂䓬。然而，WO02/34752未公开4位苯基部分上的本取代模式。 [0009] De Wit K.的哲学博士论文描述体外和体内真菌学评价平台的实现和抗真菌剂吡咯并苯并二氮杂䓬的活性图(PhD论文；Antwerp大学, 比利时；药学、生物医学和兽医学专业；生物医学系；2011；220 页)。 [0010] 与现有技术中公开的化合物相比，本发明的抗真菌剂化合物或本发明化合物的部分在结构上不同，并可具有改善的代谢稳定性，改善的PK (药代动力学)性质、改善的血浆蛋白结合、降低的hERG通道抑制、减少的细胞色素P450负荷(liabilities)或改善的生物利用度。所述化合物优选地具有广泛的抗真菌谱，并保持适当的高疗效和适当的低毒性或其它副作用。 [0011] 因此，本发明的目的是提供具有抗真菌剂活性的新的化合物，以克服或改善现有技术的至少一个缺点，或者提供有用的供选择的化合物。 [0012] 发明概述 [0013] 已经发现，本发明化合物可用作抗真菌剂化合物。 [0014] 本发明涉及新的式(I)化合物： [0015] [0016] 及其立体异构形式，其中 [0018] R2是氢或卤代； [0019] R3和R4是氢； [0020] 或者R3和R4共同形成键； [0021] R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基亚硫酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基； [0022] R6是氢或卤代； [0023] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0024] 本发明还涉及式(I)化合物和包含它们的药用组合物的制备方法。 [0025] 本化合物是体内对抗真菌的有用药物。 [0026] 本发明中描述的新的化合物可用于治疗或预防因皮真菌引起的感染，全身性真菌感染和甲真菌病。 [0027] 本发明中描述的新的化合物可对多种真菌有活性，所述真菌有例如假丝酵母(Candida spp.), 例如白假丝酵母(Candida albicans)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、克鲁斯假丝酵母(Candida kruceï)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、乳酒假丝酵母(Candida kefyr)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)；曲霉(Aspergillus spp.)，例如烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、黄曲霉(Aspergillus flavus)；新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)；申克氏孢子丝菌(Sporothrix schenckii)；絮状表皮癣菌；小孢霉(Microsporum spp.), 例如狗小孢霉(Microsporum canis)、石膏状小孢霉；发癣菌(Trichophyton spp.)，例如须发癣菌(Trichophyton mentagrophytes)、红色发癣菌、昆克努发癣菌(Trichophyton quinckeanum)、断发毛癣菌、疣状毛癣菌、堇色发癣菌、指间发癣菌、苏丹奈斯发癣菌；镰孢，例如腐皮镰孢(Fusarium solani)、尖镰孢(Fusarium oxysporum)、层出镰孢(Fusarium proliferatum)、轮枝镰孢(Fusarium verticillioides)；根毛霉(Rhizomucor spp.), 例如米赫根毛霉(Rhizomucor miehei)、微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)；卷枝毛霉(Mucor circinelloides)；根霉(Rhizopus spp.), 例如米根霉(Rhizopus oryzae)、小孢根霉(Rhizopus microspores)；粃糠状鳞斑霉(Malassezia furfur)；枝顶孢霉 (Acremonium spp.)；拟青霉属(Paecilomyces)；帚霉属(Scopulariopsis)；爪甲白癣菌(Arthrographis spp.)；柱霉属(Scytalidium)；赛多孢子菌(Scedosporium spp.)，例如尖端赛多孢子菌(Scedosporium apiospermum)、多育赛多孢子菌(Scedosporium prolificans)；木霉；青霉(Penicillium spp.)；马尔尼菲青霉(Penicillium marneffei)； 芽生裂殖菌属(Blastoschizomyces)。 [0028] 鉴于本化合物的上述药理学，因而断定它们适用作药物。 [0029] 本发明还涉及根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物，其用于治疗或预防真菌感染。 [0030] 与现在技术中公开的化合物相比，本发明化合物或化合物的部分的一个优点在于其增强的生物利用度、改善的代谢稳定性、改善的PK性质、减弱的hERG通道抑制或者减少的细胞色素P450负荷。 [0031] 现在将进一步描述本发明。在以下段落中，更加详细地定义本发明的不同方面。这样定义的各方面可与其它任何方面结合，除非明确地说明有相反的情况。尤其是，指明为优选的任何特征或优点可与指明为优选的任何其它特征或优点结合。 [0032] 详述 [0034] 作为基团或基团的一部分的术语“卤代”或“卤素”为氟代、氯代、溴代、碘代的统称，除非另有指定或上下文明确表明。 [0035] 作为基团或基团的一部分的术语"C1-4烷基"指式CnH2n+1烃基，其中n是介于1-4之间的数字。C1-4烷基包含1-4个碳原子，优选地1-3个碳原子，还更优选地1-2个碳原子。烷基可为直链或支链，并可如本文所述取代。当本文在碳原子后使用下标时，下标指指定基团可含有的碳原子数。因此，例如，C1-4烷基包括具有1-4个碳原子的全部直链或支链烷基，并因此包含，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-甲基-乙基、丁基及其异构体(例如正丁基、异丁基和叔丁基)等。 [0036] 作为基团或基团的一部分的术语“C1-4烷氧基”指具有式–ORa的基团，其中Ra是C1-4烷基。适用的C1-4烷氧基的非限定性实例包括甲基氧基(也称为甲氧基)、乙基氧基(也称为乙氧基)、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。 [0037] 术语"C1-4烷基磺酰基"指具有1-4个碳原子的直链或支链烷基磺酰基，诸如甲基磺酰基、乙基磺酰基、丙基磺酰基、异丙基磺酰基、丁基磺酰基、异丁基磺酰基、仲丁基磺酰基、叔丁基磺酰基等。 [0038] 术语"C1-4烷基羰基"指具有1-5个碳原子的直链或支链烷基羰基，诸如甲基羰基、乙基羰基、丙基羰基、异丙基羰基、丁基羰基、异丁基羰基、仲丁基羰基、叔丁基羰基等。 [0039] 根据化学文摘社商定的系统命名规则，采用高级化学开发公司(Advanced Chemical Development, Inc.)的系统命名软件生成本发明化合物的化学名称(ACD/Name product 10.01版；Build 15494, 2006年12月1日)。 [0040] 如果有互变异构形式，应明确，非描述的其它互变异构形式也包含在本发明范围内。 [0041] 如以下式(Q)中表示的，对三环系统中的原子编号： [0042] [0043] 应理解，某些式(I)化合物及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可含有一个或多个手性中心，并作为立体异构形式存在。 [0044] 如描述中使用的，无论何时采用术语“式(I)化合物”，都指包含其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0045] 可交换使用前文或后文中的术语“立体异构体”、“立体异构形式” 或“立体化学异构形式”。 [0046] 如前文使用的术语“立体异构形式”定义式(I)化合物可能具有的全部可能的异构形式。除非另有提及或指明，化合物的化学名称表示全部可能的立体化学异构形式的混合物。 [0047] “式(I)化合物”的定义本身包括式(I)化合物的或者作为纯立体异构体或者作为两种或更多种立体异构体的混合物的全部立体异构体。对映异构体是相互并非叠加镜像的立体异构体。对映异构体对的1：1混合物是外消旋体或外消旋混合物。非对映异构体(或非对映体)是并非对映异构体的立体异构体，即，它们并不作为镜像而相关。更具体说来， 立构中心可具有R构型或S构型；二价环(部分的)饱和基团上的取代基可具有或者顺式或者反式构型。涵盖双键的化合物可在所述双键上具有E 或Z立体化学。式(I)化合物的立体异构形式包含在本发明范围内。因此，在化学上可能的情况下，本发明包括对映异构体、非对映异构体、 外消旋体、E型异构体、Z型异构体、顺式异构体、反式异构体及其混合物。 [0048] 根据Cahn-Ingold-Prelog系统指定绝对构型。将不对称原子上的构型指定为R或S。根据其中它们旋转平面偏振光的方向，绝对构型未知的拆分化合物可指定为(+)或(-)。 [0049] 当指明具体立体异构形式时，这意味着所述形式是基本是不含，即涉及少于50 %，优选少于20 %，更优选少于10 %，甚至更优选少于5 %，进一步优选少于2 %和最优选少于1 %的其它异构体。因此，例如当指明本发明化合物为(R)时，这意味着化合物基本不含(S)异构体；例如当指明本发明化合物为E时，这意味着化合物基本不含Z异构体；例如当指明本发明化合物为顺式时，这意味着化合物基本不含反式异构体。 [0050] 某些式(I)化合物也可以其互变异构形式存在。尽管未在上式中明确指明的这类形式打算要包含在本发明范围内。 [0051] 已经在本文中以单一互变异构形式画出的式(I)化合物，不同的互变异构体相互等效，且所有可能的互变异构形式都包含在本发明范围内。 [0052] 用了治疗用途，式(I)化合物的盐是其中抗衡离子是药学上可接受的那些。然而，非药学上可接受的酸和碱的盐也可在例如药学上可接受的化合物的制备或纯化方面发现用途。所有盐，无论是否是药学上可接受的，都包括在本发明的范围内。 [0053] 如上文或下文中提及的药学上可接受的酸和碱加成盐打算包含有治疗活性的无毒的式(I)化合物能形成的酸和碱加成盐形式。可方便地通过用这类适当的酸处理碱形式，得到药学上可接受的酸加成盐。适当的酸包括，例如，无机酸诸如氢卤酸，例如盐酸或氢溴酸，硫酸，硝酸、磷酸等酸；或有机酸，例如，乙酸、丙酸、羟乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(即乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环拉酸、水杨酸、对氨基水杨酸、扑酸等酸。相反地，可用适当的碱处理将所述盐形式转化为游离碱形式。 [0054] 也可通过用适当的有机碱或无机碱处理将含有酸性质子的式(I)化合物转化为其无毒的金属或胺加成盐形式。适当的碱盐形式包括，例如，铵盐、碱和碱土金属盐，例如锂、钠、钾、镁、钙盐等，与有机碱例如伯、仲和叔脂族和芳族胺诸如甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、四种丁胺异构体、二甲胺、二乙胺、二乙醇胺、二丙胺、二异丙胺、二正丁胺、吡咯烷、哌啶、吗啉、三甲胺、三乙胺、三丙胺、奎宁环、吡啶、喹啉和异喹啉所成的盐；苄星、N-甲基-D-葡糖胺、海巴明盐和与氨基酸，例如，精氨酸、赖氨酸等所成的盐。相反，可用酸处理使盐形式转化为游离酸形式。 [0055] 术语溶剂合物包括式(I)化合物能形成的水合物和溶剂加合物形式及其盐。这类形式的实例有例如水合物、醇化物等。 [0056] 可合成呈如在下述方法中制备的呈对映异构体混合物尤其是对映异构体的外消旋混合物形式的式(I)化合物，可按照领域内已知的拆分程序将混合物相互分离。式(I)化合物的对映异构形式的分离方式涉及采用手性固定相的液相层析法。所述纯立体化学异构形式也可衍生自适当起始原料的相应的纯立体化学异构形式，前提是发生立体有择反应。优选地，如果想要特定的立体异构体，可通过立体有择的制备方法合成所述化合物。这些方法会有利地采用对映异构体纯起始原料。 [0057] 在本申请框架中，根据本发明的化合物固有地意欲包含其化学元素的全部同位素组合。在本申请的框架中，化学元素，尤其是当就根据式(I)的化合物提及时，包括全部同位素和该元素的同位素混合物。例如，当提及氢时，应理解指1H、2H、3H及其混合物。 [0058] 因此，根据本发明化合物本身包括带一种或多种元素的一种或多种同位素及其混合物，包括放射性化合物，也称为放射性示踪的化合物，其中一种或多种非放射性原子已经被其一种放射性同位素替代。术语"放射性示踪的化合物"意指含有至少一种放射性原子的任何根据式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。例如，可用正电子或用γ放射性同位素标记化合物。对于放射性配体结合技术，3H-原子或125I-原子是要被置换的原子的选择。为了成像，最常使用的正电子发射(PET)放射性同位素有11C、18F、15O和13N，它们全由加速器生成，并分别具有20、100、2和10分钟的半衰期。既然这些放射性同位素的半衰期如此短暂，仅在现场具有生成其的加速器的机构采用其才是可行的，因此限制了其使用。这些中最广泛采用的有18F、99mTc、201Tl和123I。这些放射性同位素的处理、其生成、分离和在分子中的结合为技术人员所知。 [0059] 具体说来，放射性原子选自氢、碳、氮、硫、氧和卤素。具体说来，放射性同位素选自3H、11C、18F、122I、123I、125I、131I、75Br、76Br、77Br和 82Br。 [0061] 上述术语和用于本说明书的其它术语为本领域技术人员所熟知。 [0062] 现在提出本发明化合物的优选特征。 [0063] 本发明涉及新的式(I)化合物： [0064] [0065] 及其立体异构形式，其中 [0066] R1是氢、卤代、C1-4烷基或C1-4烷氧基； [0067] R2是氢或卤代； [0068] R3和R4是氢； [0069] 或者R3和R4共同形成键； [0070] R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基亚硫酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基； [0071] R6是氢或卤代； [0072] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0073] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其立体异构形式，其中 [0074] R1是氢、卤代、C1-4烷基或C1-4烷氧基； [0075] R2是氢或卤代； [0076] R3和R4是氢； [0077] 或者R3和R4共同形成键； [0078] R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基； [0079] R6是氢或卤代； [0080] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0081] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其立体异构形式，其中 [0082] R1是氢、卤代、C1-4烷基或C1-4烷氧基；特别是R1是卤代； [0083] R2是氢或卤代； [0084] R3和R4是氢； [0085] 或者R3和R4共同形成键； [0086] R5是C1-4烷基羰基或C1-4烷基磺酰基；尤其是C1-4烷基羰基； [0087] R6是氢或卤代； [0088] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0089] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其立体异构形式，其中 [0090] R1是氢、卤代、C1-4烷基或C1-4烷氧基；特别是R1是卤代； [0091] R2是氢或卤代； [0092] R3和R4是氢； [0093] 或者R3和R4共同形成键； [0094] R5是C1-4烷基羰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基； [0095] R6是氢或卤代； [0096] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0097] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其立体异构形式，其中 [0098] R1是氢、卤代、C1-4烷基或C1-4烷氧基；特别是R1是卤代； [0099] R2是氢或卤代； [0100] R3和R4是氢； [0101] R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基亚硫酰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基；特别是R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基；更特别是R5是C1-4烷基羰基； [0102] R6是氢或卤代； [0103] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0104] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其立体异构形式，其中 [0105] R1是氢、卤代、C1-4烷基或C1-4烷氧基；特别是R1是卤代； [0106] R2是氢或卤代； [0107] R3和R4共同形成键； [0108] R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基亚硫酰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的5 C1-4烷基；特别是R是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基；更特别是R5是C1-4烷基羰基； [0109] R6是氢或卤代；特别是R6是氢； [0110] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0111] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其立体异构形式，其中 [0112] R1是卤代； [0113] R2是氢或卤代； [0114] R3和R4共同形成键； [0115] R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基；特别是R5是C1-4烷基羰基或C1-4烷基磺酰基； [0116] R6是氢或卤代； [0117] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0118] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其立体异构形式，其中 [0119] R1是卤代； [0120] R2是氢或卤代； [0121] R3和R4是氢； [0122] 或者R3和R4共同形成键； [0123] R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基亚硫酰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的5 C1-4烷基；特别是R是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基； [0124] R6是氢或卤代； [0125] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0126] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其立体异构形式，其中 [0127] R1是卤代； [0128] R2是氢或卤代； [0129] R3和R4是氢； [0130] 或者R3和R4共同形成键； [0131] R5是C1-4烷基羰基； [0132] R6是氢或卤代； [0133] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0134] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物及其立体异构形式，其中 [0135] R1是卤代；尤其是氯代或氟代；更特别是氯代； [0136] R2是氢或卤代；尤其是氢、氯代或氟代； [0137] R3和R4是氢； [0138] 或者R3和R4共同形成键； [0139] R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基；尤其是甲基羰基、甲基磺酰基或1-羟乙基； [0140] R6是氢或卤代；尤其是是氢或氟代；更特别是氢； [0141] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0142] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或1 2 1 2 其任何亚组，其中R 是卤代、C1-4烷基或C1-4烷氧基；和其中R是卤代；尤其是其中R和R都是卤代。 [0143] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或其任何亚组，其中R1和R2中的至少一个并非氢。 [0144] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或其任何亚组，其中R1是卤代。 [0145] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或其任何亚组，其中R2是卤代。 [0146] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或其任何亚组，其中R3和R4共同形成键。 [0147] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或其任何亚组，其中R5是C1-4烷基羰基；C1-4烷基磺酰基；或被一个羟基部分取代的C1-4烷基。 [0148] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或其任何亚组，其中R5是C1-4烷基羰基；尤其是甲基羰基。 [0149] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或其任何亚组，其中R5是C1-4烷基磺酰基。 [0150] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或其任何亚组，其中R5是甲基羰基、甲基磺酰基或1-羟乙基； [0151] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或其任何亚组，其中R6是卤代。 [0152] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或其任何亚组，其中R6是氢。 [0153] 感兴趣的化合物基团涉及具有选自(I-x)和(I-y)的一种或多种结构式的新的式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物 [0154] [0155] 其中全部取代基与前文实施方案中任一个中定义的含义相同。 [0156] 本发明的一个实施方案涉及那些式(I)化合物或具有式(I-x)的它的任何亚组。 [0157] 本发明的一个实施方案涉及那些式(I)化合物或具有式(I-y)的它的任何亚组。 [0158] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I-x)和(I-y)化合物及其立体异构形式，其中[0159] R1是卤代；尤其是氯代或氟代；更特别是氯代； [0160] R2是氢或卤代；尤其是氢、氯代或氟代； [0161] R3和R4是氢； [0162] 或者R3和R4共同形成键； [0163] R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基亚硫酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基；特别是R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基；更特别是甲基羰基、甲基磺酰基或1-羟乙基； [0164] R6是氢或卤代；尤其是是氢或氟代；更特别是氢； [0165] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0166] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I-x)化合物及其立体异构形式，其中 [0167] R1是卤代；尤其是氯代或氟代；更特别是氯代； [0168] R2是氢或卤代；尤其是氢、氯代或氟代； [0169] R3和R4是氢； [0170] 或者R3和R4共同形成键； [0171] R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基亚硫酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基；特别是R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基；更特别是甲基羰基、甲基磺酰基或1-羟乙基； [0172] R6是氢或卤代；尤其是是氢或氟代；更特别是氢； [0173] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0174] 在一个实施方案中，本发明涉及式(I-y)化合物及其立体异构形式，其中 [0175] R1是卤代；尤其是氯代或氟代；更特别是氯代； [0176] R2是氢或卤代；尤其是氢、氯代或氟代； [0177] R3和R4是氢； [0178] 或者R3和R4共同形成键； [0179] R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基亚硫酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基；特别是R5是C1-4烷基羰基、C1-4烷基磺酰基或被一个羟基部分取代的C1-4烷基；更特别是甲基羰基、甲基磺酰基或1-羟乙基； [0180] R6是氢或卤代；尤其是是氢或氟代；更特别是氢； [0181] 及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0182] 本发明的一个实施方案涉及如在其它任何实施方案中提及的那些式(I)化合物或其任何亚组，其中R3和R4始终共同形成键。 [0183] 在下一个实施方案中，式(I)化合物选自： [0184] [0185] 包括它们的任何立体化学异构形式，及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物。 [0186] 认为上述感兴趣的各实施方案的全部可能的组合都涵盖在本发明范围内。 [0187] 本发明还涵盖式(I)化合物及其亚组的制备方法。 [0188] 可通过如下文描述的一连串步骤制备式(I)化合物及其亚组。它们通常由可通过商业途径得到或通过对本领域技术人员显而易见的标准途径制备的起始原料制备。也可采用有机化学领域技术人员常用的标准合成工艺制备本发明化合物。 [0189] 可根据流程1制备其中R5a是C1-4烷基羰基和其中其它取代基如前面定义的本发明化合物： [0190] 流程1 [0191] [0192] 可按照本领域已知的胺转化为亚胺的氧化反应，由式(I-a)表示的化合物制备其中R3和R4共同形成额外键的式(I)化合物，所述化合物由式(I-b)表示。例如，可通过在反应惰性溶剂诸如卤代烃例如二氯甲烷(DCM)或三氯甲烷中，使式(I-a)化合物与氧化剂诸如，四乙酸铅或二氧化锰反应，进行这些氧化反应。可通过搅拌或任选加热反应混合物提高反应速度。 [0193] 作为选择，可通过式(II)中间体的分子内环化作用制备式(I-b)化合物。例如，在酸诸如，POCl3的存在下，式(II)中间体中的酰胺可起到C-亲电试剂的作用，导致闭环。例如，可在适用的溶剂诸如，DCM (CH2Cl2)中进行反应。搅拌和加热可提高反应速度。 [0194] 可通过使式(IV)中间体与式(XI)酸H+X-反应转化为盐(III)和在升高的温度下，优选在回流温度下，在适当的溶剂诸如醇，例如甲醇(MeOH)、乙醇(EtOH)、异丙醇中，使所述式(III)盐与式(XII)醛反应，制备式(I-a)化合物。 [0195] 作为选择，式(IV)中间体可首先与式(XII)醛反应，从而生成的亚胺可在式(XI)酸H+X-的存在下环化为式(I-a)化合物。 [0196] 作为选择，可通过采用本领域技术人员熟知的方法，经还原式(I-b)化合物，得到式(I-a)化合物。 [0197] 可通过式(III)中间体和(XIII)中间体之间的偶合反应制备式(II)中间体。可在偶合剂诸如通常1-羟基-1H-苯并三唑(HOBT)和N'-(乙基甲亚氨酰基(carbonimidoyl))-N,N-二甲基-1,3-丙二胺单盐酸盐(EDCI)的存在下，进行所述反应。例如，可在碱诸如三乙胺(Et3N)和适用的溶剂诸如，DCM的存在下，进行反应。作为选择，(XIII)酰氯衍生物或(XIII)反应性酯衍生物也可用于这类反应，以制备式(II)中间体。 [0198] 本领域技术人员可容易地制备式(XIII)中间体或其酰氯衍生物或酯衍生物。 [0199] 通过还原式(V) 1-(2-氰基-苯基)吡咯衍生物制备式(III)中间体和(IV)中间体。例如，本领域技术人员熟知的几种程序可用来还原腈官能团诸如： [0200] 1. LiAlH4/THF [S. Raines, S.Y. Chai和F.P. Palopoli；J. Heterocyclic Chem., 13, 711-716 (1976)] [0201] 2. i. 双(2-甲氧基乙氧基)铝酸钠(Red-Al®) 70% w/w甲苯，RT：ii. NaOH 10%, RT [G.W.H. Cheeseman和S.G. Greenberg；J. HeterocyclicChem., 16, 241-244(1979)][0202] 3a. i. KBH4/CF3COOH, THF；ii. H2O；iii. HCl [P. Trinka, P. Slégel和J. Reiter；J. Prakt. Chem., 338, 675-678(1996)] [0203] 3b. 硼烷-二甲硫(1：1), THF [0204] 4a. RaNi (雷尼镍) / H2 [0205] 4b. RaNi /噻吩溶液/ (MeOH/NH3) [0206] 甚至也可采用其它熟知方法还原腈官能团。 [0207] 式(V)中间体依次可通过商业途径得到，或者作为选择，可容易地通过，例如，在酸诸如4-氯吡啶盐酸盐的存在下，或在酸性溶剂诸如冰醋酸中，在升高的温度下，优选在回流温度下，用在惰性溶剂诸如二氧杂环己烷或四氢呋喃(THF)中的四氢-2,5-二甲氧基呋喃处理式(VI) 2-氨基苄腈衍生物制备。作为选择，也可从式(X)中间体制备式(V)中间体。例如，通常，在碱诸如，Cs2CO3或NaH的存在下，在适用的溶剂诸如通常是DMF中，使其中卤代被定义为Br、I、Cl或F的式(X)中间体与吡咯反应。 [0208] 作为选择，例如，可用在适用的溶剂诸如，THF中的硼烷-二甲硫(1：1)处理式(VII)中间体制备式(IV)中间体。反应通常在酸诸如HCl的存在下进行。在反应已经进行后，可用适用的碱诸如NaOH碱化反应混合物。在升高的温度下，优选在回流温度下进行反应。 [0209] 可自式(VIII)中间体制备式(VII)中间体。可在HOBT和EDCI的存在下，使式(VIII)中间体与氮来源诸如，NH3.H2O反应。这种类型的反应通常在适用的溶剂如DMF中进行。搅拌反应混合物可提高反应速度。 [0210] 可在酸诸如吡啶盐酸盐(1:1)的存在下，在升高的温度下，优选在回流温度下，通过用在惰性溶剂诸如二氧杂环己烷中的四氢-2,5-二甲氧基呋喃处理式(IX)中间体，容易地制备式(VIII)中间体。作为选择，(IX) 反应性酯衍生物也可用于该种类型的反应，以制备式(VIII)中间体。 [0211] 可根据流程2，制备其中R5b被定义为H-(CH2)1-3-CH(OH)-和其中其它取代基如前面定义的、根据式(I-c)的本发明化合物： [0212] 流程2 [0213] [0214] 可根据流程1中描述的反应方案制备式(I-ab)化合物。在式(I-ab)中，R5ab被定义为C1-3烷基羰基和全部其它取代基如前面定义。 [0215] 可还原式(I-ab)化合物中的R5ab羰基，得到根据式(I-c)的化合物。例如，通常在还原剂诸如，氢化铝锂(LiAlH4)或硼氢化钠(NaBH4)的存在下，进行该反应。在干燥的非质子有机溶剂通常是DCM、Et2O或THF的存在下，进行该反应，随后经水后处理。 [0216] 可通过采用如流程1中描述的类似反应方案制备式(I-f)化合物 [0217] [0218] 其中R5f表示被一个羟基部分取代的C1-4烷基。在该情况下，可用式(XII-a)中间体代替式(XII)中间体。 [0219] 可根据如流程2b中表示的熟知方案制备式(XII-a)中间体。在第一个步骤中，式(XVIII)中间体的羟基可被保护基(PG)封闭。它们可在反应步骤后去保护。可根据普遍惯例采用常规保护基。通常，2-四氢吡喃基可用作醇的保护基。在该情况下，例如，可在酸诸如，PPTS (4-甲基-苯磺酸)的存在下，使式(XVIII)中间体与二氢吡喃反应。在第二个步骤中，将式(XIX)中间体转化为式(XII-a)中间体。这通常在第一个步骤中用在非质子无水溶剂例如THF中的正丁基锂，随后在第二个步骤中加入DMF进行。例如，可在惰性氛围诸如，N2下进行反应。 [0220] 流程2b [0221] [0222] 可根据流程3制备其中R5c被定义为C1-4烷基磺酰基和其中的其它取代基如前面定义的本发明化合物： [0223] 流程3 [0224] [0225] 可通过氧化式(XVI)中间体中的硫基团制备式(I-d)化合物。通常，例如，可在氧化剂诸如过硫酸氢钾(oxone)和适用的溶剂诸如，THF的存在下进行反应。 [0226] 可根据领域内已知的胺转化为亚胺的氧化反应，由式(XV)表示的中间体制备式(XVI)中间体。例如，可通过在反应惰性溶剂诸如卤代烃例如二氯甲烷(DCM)或三氯甲烷中，使式(XV)中间体与温和氧化剂诸如，四乙酸铅或二氧化锰反应进行这些氧化反应。可通过搅拌和任选加热反应混合物提高反应速度。 [0227] 可通过与式(XI)酸H+X-反应使式(IV)中间体转化为盐(III)，和在升高的温度下，优选在回流温度下，在适当溶剂诸如醇，例如甲醇(MeOH)、乙醇(EtOH)、异丙醇中，使所述式(III)盐与式(XIV)醛反应，由式(IV)中间体制备式(XV)中间体。 [0228] 作为选择，式(IV)中间体可首先与式(XIV)醛反应，这样生成的亚胺可在式(XI)酸+ -HX的存在下环化为式(XV)中间体。 [0229] 式(I-e)化合物 [0230] [0231] 可通过采用如在流程3中对中间体(XV)所述的类似反应制备，但从式(XVII)中间体开始 [0232] 。 [0233] 作为选择，可从式(XV)中间体制备式(I-e)化合物。在该类型的反应中，首先用胺保护基诸如通常是叔丁氧基羰基、苄基或甲苯磺酰基保护式(XV)中间体的NH基团，随后用诸如对流程3中的‘氧化2’描述的反应条件氧化硫。最后将受保护NH基团去保护。 [0234] 全部起始原料都可通过商业途径得到或者可被本领域技术人员容易地制备。 [0235] 在全部这些制备中，可从反应介质中分离反应产物，如需要，例如，可根据本领域广泛知道的方法诸如，萃取、结晶、研制和层析，进一步纯化。具体说来，例如，可采用手性固定相诸如，Chiralpak® AD (直链淀粉3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)或Chiralpak® AS, 二者购自日本的Daicel化学工业有限公司，经层析法分离立体异构体。 [0236] 可通过采用本领域已知的程序得到本发明化合物和中间体的纯立体异构形式。可用光学活性酸通过选择性结晶它们的非对映异构体盐使对映异构体相互分离。作为选择，可采用手性固定相，通过层析技术分离对映异构体。所述的纯立体异构形式也可衍生自适当起始原料的相应纯的立体异构形式，前提是反应立体有择地或立体专一地发生。优选如果要想特定的立体异构体，将通过立体选择性或立体专一性制备方法合成所述的化合物。这些方法将有利地采用手性纯的起始原料。显然打算将式(I)化合物的立体异构形式包含在本发明范围内。 [0237] 式(I)化合物的手性纯形式形成化合物的优选基团。因此，在手性纯的式(I)化合物的制备中，中间体及其盐形式的手性纯形式是特别有用的。中间体的对映异构体混合物也用于具有相应构型的式(I)化合物的制备。 [0238] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对丝孢纲(hyphomycetes)、二形病原性真菌(dimorphic pathogens)、皮真菌、接合菌、透明丝孢纲(hyaline hyphomycetes)、酵母菌和酵母样微生物有活性。 [0239] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对二形病原性真菌、酵母菌和酵母样微生物有活性。 [0240] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对霉菌有活性。 [0241] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对多种真菌，诸如假丝酵母，例如白假丝酵母、光滑念珠菌、克鲁斯假丝酵母、近平滑假丝酵母、乳酒假丝酵母、热带假丝酵母；曲霉，例如烟曲霉、黑曲霉、黄曲霉；新型隐球菌；申克氏孢子丝菌；絮状表皮癣菌；小孢霉，例如狗小孢霉、石膏状小孢霉；发癣菌，例如须发癣菌、红色发癣菌、昆克努发癣菌、断发毛癣菌、疣状毛癣菌、堇色发癣菌、指间发癣菌、苏丹奈斯发癣菌；镰孢，例如腐皮镰孢、尖镰孢、层出镰孢、轮枝镰孢；根毛霉，例如米赫根毛霉、微小根毛霉；卷枝毛霉；根霉，例如米根霉、小孢根霉)；粃糠状鳞斑霉；枝顶孢霉；拟青霉属；帚霉属；爪甲白癣菌；柱霉属；赛多孢子菌，例如尖端赛多孢子菌、多育赛多孢子菌；木霉；青霉；马尔尼菲青霉；芽生裂殖菌属有活性。 [0242] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对多种真菌，诸如近平滑假丝酵母；曲霉，例如烟曲霉、黑曲霉、黄曲霉；新型隐球菌；申克氏孢子丝菌；絮状表皮癣菌；小孢霉，例如狗小孢霉、石膏状小孢霉；发癣菌，例如须发癣菌、红色发癣菌、昆克努发癣菌、断发毛癣菌、疣状毛癣菌、堇色发癣菌、指间发癣菌、苏丹奈斯发癣菌；镰孢，例如腐皮镰孢、尖镰孢、层出镰孢、轮枝镰孢；根毛霉，例如米赫根毛霉、微小根毛霉；卷枝毛霉；根霉，例如米根霉、小孢根霉)；枝顶孢霉；拟青霉属；帚霉属；爪甲白癣菌；柱霉属；赛多孢子菌，例如尖端赛多孢子菌、多育赛多孢子菌；木霉；青霉；马尔尼菲青霉；芽生裂殖菌属具有活性。 [0243] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对多种真菌，诸如近平滑假丝酵母；曲霉，例如烟曲霉、黑曲霉、黄曲霉；新型隐球菌；絮状表皮癣菌；小孢霉，例如狗小孢霉、石膏状小孢霉；发癣菌，例如须发癣菌、红色发癣菌、昆克努发癣菌、断发毛癣菌、疣状毛癣菌、堇色发癣菌、指间发癣菌、苏丹奈斯发癣菌；镰孢，例如腐皮镰孢、尖镰孢、层出镰孢、轮枝镰孢；根毛霉，例如米赫根毛霉、微小根毛霉；卷枝毛霉；根霉，例如米根霉、小孢根霉)；枝顶孢霉；拟青霉属；帚霉属；爪甲白癣菌；柱霉属；赛多孢子菌，例如尖端赛多孢子菌、多育赛多孢子菌；木霉；青霉；马尔尼菲青霉；芽生裂殖菌属；尤其是曲霉，例如烟曲霉、黑曲霉、黄曲霉；新型隐球菌；絮状表皮癣菌；小孢霉，例如狗小孢霉、石膏状小孢霉；发癣菌\例如须发癣菌、红色发癣菌、昆克努发癣菌、断发毛癣菌、疣状毛癣菌、堇色发癣菌、指间发癣菌、苏丹奈斯发癣菌；镰孢，例如腐皮镰孢、尖镰孢、层出镰孢、轮枝镰孢；根毛霉，例如米赫根毛霉、微小根毛霉；卷枝毛霉；根霉，例如米根霉、小孢根霉)；枝顶孢霉；拟青霉属；帚霉属；爪甲白癣菌；柱霉属；赛多孢子菌，例如尖端赛多孢子菌、多育赛多孢子菌；木霉；青霉；马尔尼菲青霉；芽生裂殖菌属具有活性。 [0244] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对多种真菌，诸如近平滑假丝酵母；曲霉；新型隐球菌；申克氏孢子丝菌；小孢霉；镰孢；赛多孢子菌；尤其是近平滑假丝酵母；曲霉；新型隐球菌；小孢霉；镰孢；赛多孢子菌；更特别是曲霉；新型隐球菌；小孢霉；镰孢；赛多孢子菌具有活性。 [0245] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对多种真菌，诸如近平滑假丝酵母；曲霉；新型隐球菌；发癣菌；申克氏孢子丝菌；小孢霉；镰孢；赛多孢子菌；尤其是曲霉；小孢霉；发癣菌具有活性。 [0246] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对真菌，诸如近平滑假丝酵母；曲霉，例如烟曲霉、黑曲霉、黄曲霉；新型隐球菌；申克氏孢子丝菌；絮状表皮癣菌；狗小孢霉；发癣菌，例如须发癣菌、红色发癣菌、昆克努发癣菌；尤其是近平滑假丝酵母；曲霉，例如烟曲霉、黑曲霉、黄曲霉；新型隐球菌；絮状表皮癣菌；狗小孢霉；发癣菌，例如须发癣菌、红色发癣菌、昆克努发癣菌；更特别是曲霉，例如烟曲霉、黑曲霉、黄曲霉；新型隐球菌；絮状表皮癣菌；狗小孢霉；发癣菌，例如须发癣菌、红色发癣菌、昆克努发癣菌具有活性。 [0247] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对近平滑假丝酵母、烟曲霉、新型隐球菌、申克氏孢子丝菌、狗小孢霉、须发癣菌、红色发癣菌、尖端赛多孢子菌和多育赛多孢子菌；尤其是烟曲霉、狗小孢霉、须发癣菌、红色发癣菌、尖端赛多孢子菌和多育赛多孢子菌具有活性。 [0248] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对真菌，诸如近平滑假丝酵母；曲霉；新型隐球菌；小孢霉；发癣菌；赛多孢子菌具有活性。 [0249] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对近平滑假丝酵母、烟曲霉、新型隐球菌、申克氏孢子丝菌、狗小孢霉、须发癣菌、红色发癣菌、尖端赛多孢子菌、多育赛多孢子菌；尤其是近平滑假丝酵母、烟曲霉、新型隐球菌、狗小孢霉、须发癣菌、红色发癣菌、尖端赛多孢子菌和多育赛多孢子菌；更特别是烟曲霉、新型隐球菌、狗小孢霉、须发癣菌、红色发癣菌、尖端赛多孢子菌和多育赛多孢子菌具有活性。 [0250] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对近平滑假丝酵母、烟曲霉、新型隐球菌、申克氏孢子丝菌、狗小孢霉、须发癣菌、红色发癣菌、尖端赛多孢子菌、多育赛多孢子菌、米根霉、米赫根毛霉、卷枝毛霉具有活性。 [0251] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对近平滑假丝酵母B66126、烟曲霉B42928、新型隐球菌B66663、申克氏孢子丝菌B62482、狗小孢霉B68128、须发癣菌B70554、红色发癣菌B68183、尖端赛多孢子菌IHEM3817、多育赛多孢子菌IHEM21157具有活性。 [0252] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对近平滑假丝酵母B66126、烟曲霉B42928、新型隐球菌B66663、申克氏孢子丝菌B62482、狗小孢霉B68128、须发癣菌B70554、红色发癣菌B68183、尖端赛多孢子菌IHEM3817、多育赛多孢子菌IHEM21157、米根霉IHEM5223、米赫根毛霉IHEM13391和卷枝毛霉IHEM21105具有活性。 [0253] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对感染皮肤、头发和指甲的各种真菌以及皮下和全身性真菌病原体具有活性。 [0254] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对3种皮真菌属：发癣菌属、小孢霉属和表皮癣菌属；尤其是对发癣菌和小孢霉属具有活性。 [0255] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对皮真菌和曲霉；尤其是皮真菌和烟曲霉；更特别是狗小孢霉、须发癣菌、红色发癣菌和烟曲霉；甚至更特别是狗小孢霉、须发癣菌和红色发癣菌具有活性。 [0256] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对须发癣菌、红色发癣菌和曲霉；尤其是须发癣菌、红色发癣菌和烟曲霉具有活性。 [0257] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对须发癣菌；红色发癣菌；曲霉，例如烟曲霉；镰孢；毛霉；接合菌；赛多孢子菌；狗小孢霉；申克氏孢子丝菌；新型隐球菌和近平滑假丝酵母具有活性。 [0258] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对皮真菌具有活性。 [0259] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对烟曲霉具有活性。 [0260] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对狗小孢霉，尤其是狗小孢霉B68128具有活性。 [0261] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对红色发癣菌，尤其是红色发癣菌B68183具有活性。 [0262] 式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物可对多种真菌，诸如一种或多种上述真菌具有活性。 [0263] 当口服或局部给予时，式(I)化合物及其立体异构形式及其药学上可接受的加成盐和溶剂合物是有效的抗真菌剂。 [0264] 本发明化合物可用作麦角固醇合成抑制剂。 [0265] 鉴于式(I)化合物的功效，提供治疗患有任何一种上述疾病的温血动物，包括人的方法，或者预防温血动物，包括人患上任何一种上述疾病的方法。因此，提供式(I)化合物作为药物的用途。还提供式(I)化合物在制备用于治疗真菌感染的药物方面的用途。进一步提供式(I)化合物在治疗真菌感染方面的用途。 [0266] 如本文用的，术语"治疗"打算指可减缓、中断、阻止或停止感染的发展但不一定指完全消除全部症状的所有方法。 [0267] 本发明涉及根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐及其溶剂合物，其用作药物。 [0268] 本发明还涉及用于治疗或预防真菌感染；尤其是由一种或多种上述真菌引起的真菌感染的根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐及其溶剂合物。 [0269] 本发明还涉及用于治疗真菌感染，尤其是由一种或多种上述真菌引起的真菌感染的根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐及其溶剂合物。 [0270] 本发明还涉及用于治疗或预防真菌感染；尤其是由一种或多种上述真菌引起的真菌感染的根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐及其溶剂合物。 [0271] 本发明还涉及用于治疗真菌感染；尤其是由一种或多种上述真菌引起的真菌感染的根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐及其溶剂合物。 [0272] 本发明还涉及用于治疗或预防，尤其是治疗真菌感染；尤其是由一种或多种选自上述真菌引起的真菌感染的根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐及其溶剂合物。 [0273] 本发明还涉及用于治疗或预防真菌感染，尤其是由一种或多种上述真菌引起的真菌感染的根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐及其溶剂合物。 [0274] 本发明还涉及用于治疗或预防真菌感染的根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐及其溶剂合物，其中的真菌感染由选自假丝酵母；曲霉；新型隐球菌；申克氏孢子丝菌；絮状表皮癣菌；小孢霉；发癣菌；镰孢；根毛霉；卷枝毛霉；根霉；粃糠状鳞斑霉；枝顶孢霉；拟青霉属；帚霉属；爪甲白癣菌；柱霉属；赛多孢子菌；木霉；青霉；马尔尼菲青霉；和芽生裂殖菌属；尤其是其中真菌感染是由选自近平滑假丝酵母；曲霉；新型隐球菌；申克氏孢子丝菌；絮状表皮癣菌；小孢霉；发癣菌；镰孢；根毛霉；卷枝毛霉；根霉；枝顶孢霉；拟青霉属；帚霉属；爪甲白癣菌；柱霉属；赛多孢子菌；木霉；青霉；马尔尼菲青霉；和芽生裂殖菌属的一种或多种真菌引起；甚至更特别是其中的真菌感染由选自狗小孢霉、须发癣菌、红色发癣菌和烟曲霉的一种或多种真菌引起。 [0275] 本发明描述的新的化合物可用于治疗或预防选自由皮真菌、全身性真菌感染和甲真菌病引起的感染疾病或病况。 [0276] 例如，本发明描述的新的化合物可用于治疗或预防疾病或病况，诸如由皮真菌、全身性真菌感染或甲真菌病引起的感染。 [0277] 本发明还涉及根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐及其溶剂合物在制备药物方面的用途。 [0278] 本发明还涉及根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐及其溶剂合物在制备治疗或预防，尤其是治疗真菌感染，尤其是由一种或多种上述真菌引起的真菌感染的药物中的用途。 [0280] 鉴于式(I)化合物的功效，提供治疗患有真菌感染，尤其是由一种或多种上述真菌引起的真菌感染温血动物，包括人的方法，或者预防温血动物，包括人患上真菌感染，尤其是由一种或多种上述真菌引起的真菌感染的方法。 [0281] 所述方法包括给予，即全身或局部给予，优选经口给予温血动物，包括人有效量的式(I)化合物、其立体异构形式或其药学上可接受的加成盐或溶剂合物。 [0282] 所述方法包括给予，即全身或局部给予，优选经口给予温血动物，包括人有效量的式(I)化合物。 [0283] 在治疗这类疾病中，技术人员可从下文呈现的试验结果中确定有效治疗的日剂量。有效治疗日剂量将介于约0.005 mg/kg-50 mg/kg，尤其是0.01 mg/kg-50 mg/kg体重，更特别是介于0.01 mg/kg-25 mg/kg体重，优选介于约0.01 mg/kg-约15 mg/kg, 更优选介于约0.01 mg/kg-约10 mg/kg，甚至更优选介于约0.01 mg/kg-约1 mg/kg，最优选介于约0.05 mg/kg-约1 mg/kg体重。根据本发明的化合物，本文中也称为活性成分的量，它是实现治疗效果所需要的，当然将随病例，例如随具体化合物、给药途径、接受者的年龄和状况和要治疗的具体障碍或疾病而不同。 [0284] 治疗方法还可包括按每日1-4次之间的摄入的方案给予活性成分。在这些治疗方法中，优选在给予前配制根据本发明的化合物。如下文中描述的，采用熟知和易于得到的成分通过已知程序制备适用的药用制剂。 [0285] 尽管可能单独给予活性成分，但优选将其作为药用组合物呈现。 [0286] 本发明还提供治疗或预防真菌感染的包含治疗有效量的式(I)化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的组合物。 [0287] 从与组合物的其它成分的相容和不有害于其接受者的意义上说，载体或稀释剂必须是“可接受的”。 [0288] 可单独或与一种或多种其它治疗剂联合给予适用于治疗或预防真菌感染的本发明化合物。联合治疗包括给予含有式(I)化合物的单一药物剂量制剂和一种或多种其它治疗剂，以及给予式(I)化合物和呈其特有的单独的药物剂量制剂的各种其它治疗剂。例如，式(I)化合物和治疗剂可以单一口服剂量组合物诸如片剂或胶囊剂共同给予患者，或者各药剂可以分开的口服剂量制剂给予。 [0289] 鉴于其有用的药理学性质，为了给药，可将本化合物配制成各种药物形式。为了给药，可将根据本发明的化合物，具体为根据式(I)的化合物、其药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐、其立体化学异构形式或其任何亚组或组合配制成各种药物形式。作为可能引用的适当的组合物，所有组合物通常用作全身给予药物。 [0290] 为制备本发明药用组合物，将有效量的作为活性成分的特定化合物，任选呈加成盐形式，合并在与药学上可接受的载体的紧密混合物中，该载体可根据针对给药而想要的制剂形式呈广泛的多种形式。这些药用组合物令人满意地呈适于，特别是经口、直肠、经皮、经胃肠外注射或经吸入的单一剂型。例如，在呈口服剂型的组合物的制备中，例如，在口服液体制剂诸如混悬剂、糖浆剂、酏剂、乳剂和溶液剂的情况下可采用任何常见的药物介质诸如，水、二醇、油、醇等；或者在散剂、丸剂、胶囊剂和片剂的情况下，采用固体载体诸如淀粉、糖、白陶土、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。片剂和胶囊剂代表最有利的口服剂量单位形式，因为其易于给药，在这种情况下，显然采用固体药物载体。对于胃肠外组合物，载体将通常包括呈至少大部分的无菌水，尽管，例如，为了帮助溶解可包含其它成分。例如，可制备注射溶液剂，其中载体包含盐水溶液、葡萄糖溶液或盐水溶液和葡萄糖溶液的混合物。可在油中配制含有式(I)化合物的注射溶液剂以延长作用。用于这种目的的适当的油有，例如，花生油、芝麻油, 棉籽油、玉米油、大豆油、合成的长链脂肪酸的甘油酯和这些与其它油的混合物。还可制备注射混悬剂，在这种情况下，可采用适当的液体载体、助悬剂等。还包括打算在使用前立刻转化为液体形式制剂的固体形式制剂。在适于经皮给予的组合物中，载体任选包含任选与较小比例的具有任何性质的适用添加剂合并的渗透促进剂和/或适用的湿润剂，该添加剂不引入显著的对皮肤的有害作用。所述添加剂可促进给予皮肤和/或可有助于制备想要的组合物。可以各种方式，例如，作为透皮贴剂、作为点贴剂(spot-on)、作为软膏剂给予这些组合物。式(I)化合物的酸加成盐或碱加成盐更适于制备含水组合物，因为其超过相应的碱形式或酸形式的增加的水溶性。 [0291] 透指甲(Transungual)组合物呈溶液形式，且载体任选包含渗透促进剂，它有利于抗真菌剂渗透进入和通过指甲的角质化指甲层。溶剂介质包括与助溶剂诸如具有2-6个碳原子的醇，例如乙醇混合的水。 [0292] 为提高溶解度和/或式(I)化合物在药用组合物中的稳定性，可有利地采用α-、β-或γ-环糊精或其衍生物，尤其是羟基烷基取代的环糊精，例如2-羟基丙基-β-环糊精或磺丁基-β-环糊精。助溶剂诸如醇还能提高溶解度和/或根据本发明的化合物在药用组合物中的稳定性。 [0293] 活性成分对环糊精的比例可广泛变化。例如可采用1/100-100/1的比例。感兴趣的活性成分对环糊精的比例介于约1/10-10/1范围。更感兴趣的活性成分对环糊精的比例介于约1/5-5/1范围。 [0294] 根据给药方式，药用组合物将优选包含0.05-99 %重量，更优选0.1-70 %重量，甚至更优选0.1-50 %重量的式(I)化合物，和，1-99.95 %重量，更优选30-99.9 %重量，甚至更优选50-99.9 %重量的药学上可接受的载体，全部百分比都基于组合物的总重量。 [0295] 例如，对于胃肠外组合物，还可包含提高溶解度的其它成分，例如环糊精。适当的环糊精有α-、β-或γ-环糊精或醚和其混合醚，其中环糊精的葡萄糖苷单元的一个或多个羟基经C1-6烷基，具体为甲基、乙基或异丙基取代，例如随机甲基化的β-CD；羟基C1-6烷基，具体为羟乙基、羟丙基或羟丁基；羧基C1-6烷基，具体为羧甲基或羧乙基；C1-6烷基羰基，具体为乙酰基。作为络合剂和/或增溶剂尤其值得注意的有β-CD、随机甲基化的β-CD、2,6-二甲基-β-CD、2-羟乙基β-CD、2-羟乙基γ-CD、2-羟基丙基γ-CD和(2-羧基甲氧基)丙基-β-CD、和尤其是2-羟基丙基-β-CD (2-HP-β-CD)。 [0296] 术语混合醚表示环糊精衍生物，例如，其中至少两个环糊精羟基经不同基团例如羟丙基和羟乙基醚化。 [0297] 平均摩尔取代度(M.S.)用作每摩尔葡萄糖苷的烷氧基单元的平均摩尔数的量度。平均取代度(D.S.)指每葡萄糖苷单元的取代羟基的平均数。可通过各种分析技术诸如核磁共振(NMR), 质谱(MS)和红外光谱(IR)确定M.S.和D.S.。根据所用技术，对一个给定环糊精衍生物，可得到略有不同的值。优选地，如经质谱测定的，M.S.介于0.125-10的范围和D.S.介于0.125-3的范围。 [0298] 适于经口或者直肠给药的其它组合物包括由固体分散体组成的颗粒，分散体包含式(I)化合物和一种或多种适当的药学上可接受的水溶性聚合物。 [0299] 术语“固体分散体”将系统确定为包含至少两种组分在这种情况下为式(I)化合物和水溶性聚合物的固态(与液态或气态相对)，其中一种组分被几乎均匀分散到另一组分或其它多种组分(假如包含药学上可接受的本领域一般熟知的其它配制剂，诸如增塑剂、防腐剂等)。当所述各组分的分散体如此时，则系统在化学和物理上完全均匀或匀质，或者由如在热力学中定义的一个相组成，这样的固体分散体将被称为“固溶体”。固溶体是优选的物理系统，因为其中的各组分通常易于为给予其的有机体可生物利用的。该优点或许可容易地解释为：当与液体介质诸如胃肠液接触时所述固溶体可形成液体溶液。易于溶解至少可部分地归因于从固溶体溶解各组分所需的能量小于从晶体固相或微晶体固相溶解所需要的能量的事实。 [0300] 术语“固体分散体”还包括比固溶体更不完全匀质的分散体。这类分散体不在化学和物理上完全均匀或者包含不止一种相。例如，术语“固体分散体”还涉及具有范围或小区域的系统，其中不定形、微晶或晶状式(I)化合物或不定形、微晶或晶状水溶性聚合物或二者几乎均匀地分散在包含水溶性聚合物或式(I)化合物或者包含式(I)化合物和水溶性聚合物的固溶体的另一个相中。所述范围是被某些物理特征特别标记的固体分散体内的区域，尺寸小、均匀并随机地分散于整个固体分散体。 [0301] 可进一步地方便地将本抗真菌剂化合物以纳米粒的形式配制，其具有以足以保持少于1000 nm的有效平均粒径的量吸附在其表面的表面修饰剂。认为有用的表面修饰剂包括物理附着到抗真菌剂表面却不化学地键连至抗真菌剂的那些。 [0302] 适用的表面修饰剂可优选自已知的有机和无机药用赋形剂。这类赋形剂包括各种聚合物、低分子量低聚物、天然产物和表面活性剂。优选的表面修饰剂包括非离子表面活性剂和阴离子表面活性剂。 [0304] 所述小珠包含圆形或球形的核心、亲水聚合物包衣薄膜和抗真菌剂和密封包衣层。 [0305] 适于作为小珠中核心用途的材料多种多样，前提是所述材料是药学上可接受的并具有适当的直径和坚固性。这类材料的实例有聚合物、无机物质、有机物质和糖类及其衍生物。 [0306] 为方便给药和剂量均匀，将上述药用组合物配制成单位剂型是特别有利的。 [0307] 如在本说明书和权利要求书中使用的单位剂型指物理上分散的适于作为单一剂量的单位，各单位含有经计算能产生想要的治疗效果的与所需药用载体在一起的预定量的活性成分。这类单位剂型的实例有片剂(包括划痕片剂或包衣片剂)、胶囊剂、丸剂、栓剂、粉末袋剂、薄片剂(wafers)、注射溶液剂或混悬剂、茶匙剂、汤匙剂等及其分开的多种制剂。 [0308] 既然根据本发明的化合物是有效的口服化合物，包含所述口服化合物的药用组合物就是特别有利的。 [0309] 以下各实施例说明本发明。 [0310] 实验部分 [0311] 下文中，术语“DCM”指二氯甲烷；“LCMS”指液相层析法/质谱法；“TLC”指薄层层析法；“DIPE”指二异丙醚；“PE”指石油醚；“TFA”指三氟乙酸；“HPLC”指高效液相层析法；“r.t.”指室温；“m.p.”指熔点；“min”指分钟；“h”指小时；“EtOAc”指乙酸乙酯；“EtOH”指乙醇；“r.m.”指反应混合物；“q.s.”足量；“THF”指四氢呋喃；“HOAc”指乙酸；“HOBT”指1-羟基- 1H-苯并三唑；“Me2S”指二甲硫；“PPTS”指与吡啶混合的4-甲基-苯磺酸(1:1)；“DHP指二氢吡喃；和“EDCI”指N'-(乙基甲亚氨酰基(carbonimidoyl))-N,N-二甲基-1,3-丙二胺单盐酸盐。 [0312] 本领域技术人员应理解，例如，在各实施例中的某些反应中需要采用无水条件和/或必须使用惰性保护氛围如N2或氩气。 [0313] A. 中间体的制备 [0314] 实施例A1 [0315] a)中间体1的制备 [0316] [0317] 使2-氨基-4,6-二氯苯甲酰胺(30 g, 0.15 mol)溶解于POCl3 (108 g, 0.7 mol)。100℃下搅拌溶液2 h，然后倾入冰中。过滤并干燥得到的混合物。残余物经硅胶柱层析法纯化(洗脱液：PE/EtOAc 20/1)。收集想要的部分，蒸发溶剂，生成10.5 g中间体1 (37.5 %得率)。 [0318] b)中间体2的制备 [0319] [0320] 搅拌并回流中间体1 (8.13 g, 0.043 mol)和四氢-2,5-二甲氧基呋喃(6.55 g, 0.049 mol)在HOAc (80 ml)中的混合物直到反应完成(经TLC监测)。冷却并蒸发混合物。经柱层析法纯化残余物(洗脱液：DIPE/EtOAc 20/1)。收集想要的部分，蒸发溶剂，生成8.2 g中间体2 (80.5 %得率)。 [0321] c)中间体3的制备 [0322] [0323] 在N2 氛围下，将硼烷-二甲硫(1：1) (BH3在Me2S中的3.1 ml 10 M溶液, 0.03 mol)逐滴加至中间体2 (6.52 g, 0.0275 mol)和THF (50 ml)的混合物中。在回流温度下加热r.m. 10 h。随后，冷却混合物至r.t.，逐滴加入HCl (6 N)。再次在回流温度下加热混合物30 min，然后冷却至0℃。加入NaOH (6 N)，用EtOAc萃取释放的胺。分离的有机层经干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发溶剂。加入二氧杂环己烷(q.s.)中的HCl，再次蒸发。产物经DCM洗涤。得量：6.5 g中间体3 (85.5 %；.HCl)。 [0324] 实施例A2 [0325] a)中间体4的制备 [0326] [0327] 100℃下搅拌3-氯-2-氟-苄腈(25 g, 160.7 mmol)、吡咯(12.94 g, 192.8 mmol)和Cs2CO3 (62.81 g, 192.8 mmol)在DMF (150 ml)中的混合物过夜。冷却混合物并倒入冰水中。滤出固体并溶解于DCM。溶液经干燥(Na2SO4)，过滤和蒸发，生成29 g中间体4 (90.1 %得率)。 [0328] b) 中间体5的制备 [0329] [0330] 使中间体4 (29 g, 143 mmol)溶解于THF (200 ml)。N2氛围下，向溶液缓慢加入10 M BH3.Me2S溶液(15.45 ml, 154.5 mmol)。搅拌并回流r.m.过夜。然后，冷却混合物并用 6 N HCl酸化，直到pH 1。随后，搅拌混合物并回流30 min。再次冷却混合物，并倒入冰水中。 用NaOH将混合物调节至pH 8-9，然后用EtOAc萃取。分离的有机层经干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。使残余物溶解于HCl/二氧杂环己烷。在减压下蒸发溶剂。用DCM (50 ml)洗涤残余物。滤出固体并真空干燥。得量：22 g中间体5 (64.7 %得率；.HCl)。 [0331] 实施例A3 [0332] a) 中间体6的制备 [0333] [0334] 将四氢-2,5-二甲氧基呋喃(49.9 g, 0.378 mol)加至2-氨基-4-氯苄腈(50.0 g, 0.328 mol)的HOAc (300 ml)溶液。搅拌并回流r.m. 2 h，然后冷却。随后，蒸发溶剂。残余物经硅胶的快速柱层析法纯化(洗脱液：DCM)。收集产物部分，蒸发溶剂。得量：13 g中间体6 (98.4 %得率)。 [0335] b) 中间体7的制备 [0336] [0337] 使中间体6 (33 g, 0.163 mol)溶解于THF (250 ml)。N2氛围下，向溶液缓慢加入10 M BH3的Me2S (17.6 ml, 0.176 mol)溶液。搅拌并回流r.m.过夜。随后，冷却混合物，并用6 N HCl溶液酸化至pH 1。再次搅拌混合物和回流30 min。冷却混合物并倒入冰水中。用NaOH将该混合物调节至pH 8-9，然后用EtOAc萃取。分离的有机层经干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发溶剂。使残余物溶解于HCl/二氧杂环己烷。蒸发该溶液的溶剂，用DCM (50 ml)洗涤残余物。滤出固体并真空干燥。得量：23.5 g中间体7 (59.4 %得率；.HCl)。 [0338] 实施例A4 [0339] a) 中间体8的制备 [0340] [0341] 将3,5-二氟苯胺(129 g, 1.00 mol)和浓HCl (350 ml)在H2O (1 l)中的混合物加至2,2,2-三氯-乙醛(179 g, 1.22 mol)和Na2SO4 (1500 g)在H2O (2 l)中的混合物。随后，加入H2O (500 ml)中的NH2OH.HCl (207 g, 3.00 mol)，加热r.m.至回流1 h。然后，冷却r.m.至0℃。收集固体并溶解于EtOAc。干燥该溶液(Na2SO4)，过滤，蒸发溶剂，生成灰色固体。得量：160 g中间体8 (80 %得率)。 [0342] b) 中间体9的制备 [0343] [0344] 50℃下，将中间体8 (160 g, 0.8 mol)分批加至浓H2SO4 (1 l)中。将溶液加热至100℃ 2 h，然后倒入冰水(3 l)中。收集沉淀(约0.8 mol)，并溶解于1 N NaOH (2 l)。0℃下，将H2O2 (300 ml)加至该溶液，在使r.m.达到室温后，搅拌其过夜。随后，过滤混合物，将 2N HCl加至滤液直到pH 1。滤出沉淀并溶解于EtOAc (2 l)。溶液经干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发溶剂，生成呈黄色固体的120 g中间体9 (83 %得率)。 [0345] c) 中间体10的制备 [0346] [0347] 加热中间体9 (60.0 g, 0.346 mol)、四氢-2,5-二甲氧基呋喃(45.7 g, 0.346 mol)和吡啶盐酸盐(1:1) (40 g, 0.346 mol)在二氧杂环己烷(500 ml)中的混合物至回流过夜。除去溶剂，使残余物溶解于EtOAc (100 ml)。用盐水和H2O洗涤该溶液。分离的有机层经干燥(MgSO4)，过滤，蒸发溶剂，生成70 g中间体10，其原样直接用于下一反应步骤。 [0348] d) 中间体11的制备 [0349] [0350] 将NH3.H2O (100 ml)加至中间体10 (70 g (粗), 约0.311 mol)、HOBT (47 g, 0.346 mol)和EDCI (70 g, 0.346 mol)的DMF (300 ml)溶液。搅拌r.m.过夜。除去溶剂，使残余物溶解于EtOAc。用盐水和H2O洗涤该溶液。分离的有机层经干燥(MgSO4)，过滤，蒸发溶剂。得量：55 g中间体11，其原样直接用于下一反应步骤。 [0351] e) 中间体12的制备 [0352] [0353] 将10 M BH3的Me2S (40.5 ml, 0.405 mol)溶液加至中间体11 (45 g, 0.2025 mol)在THF (500 ml)中的混合物中。N2氛围下，回流r.m.过夜。随后，加入6 N HCl (10 ml)，同时在冰水浴上冷却混合物。再次回流混合物30 min，然后加入固体NaOH直到pH >9，同时在冰水浴上冷却混合物。用DCM萃取混合物(2次300 ml)。分离的有机层经干燥(MgSO4)，过滤，蒸发溶剂。用HCl/2-丙醇使褐色残余物转化为HCl盐(.HCl)。得量：35 g中间体12 (71 %得率)。 [0354] 实施例A5 [0355] a) 中间体13的制备 [0356] [0357] 回流中间体3 (2.8 g, 10.0 mmol)和4-(甲硫基)苯甲醛(1.8 g, 12.0 mmol)在EtOH (15 ml)中的混合物4 h。冷却和结晶混合物过夜。滤出沉淀，用异丙醚洗涤，真空干燥。得量：2.85 g 粗中间体13 (.HCl)，其原样用于下一反应步骤。如想要，可进一步经HPLC纯化产物。 [0358] b) 中间体14的制备 [0359] [0360] 用NH3.H2O (10 ml)中和粗中间体13 (2.8 g；约6.9 mmol)，用DCM萃取混合物。分离的有机层经干燥(Na2SO4)，过滤，真空蒸发溶剂。在DCM (40 ml)中搅拌残余物，将MnO2 (7.2 g, 83.1 mmol)加至该溶液。r.t.下搅拌r.m. 48 h，然后经硅藻土过滤(洗脱液：PE/EtOAc从5/1至2/1)。收集想要的部分，真空蒸发溶剂。得量：1.60 g中间体14 (62.2 %得率)。 [0361] 实施例A6 [0362] a) 中间体15的制备 [0363] [0364] 25℃下，将DHP (7 ml)和PPTS (0.58 g)加至4-溴-苯乙醇(9.4 g；0.0467 mol)的DCM (q.s.)溶液。25℃下搅拌溶液10小时。用水洗涤混合物(3 x 50 ml)，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发溶剂。得量：12.63 g中间体15 (95 %得率)。 [0365] b) 中间体16的制备 [0366] [0367] 无水条件下的反应。 [0368] -78℃下，将2 M正丁基锂的正己烷(15 ml)溶液逐滴加至中间体15 (8.62 g)的THF (150 ml)溶液。-78℃下，搅拌该混合物1小时。然后逐滴加入DMF (7 ml)，-78℃下搅拌反应混合物另外2小时。使反应混合物与NH4Cl溶液合并，并用EtOAc萃取。用饱和NaCl溶液洗涤经合并的各有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发溶剂。经硅胶柱层析法进行纯化(洗脱液：石油醚/EtOAc 8/1)。收集想要的部分，蒸发溶剂。得量：6.57 g 中间体16 (94 %得率)。 [0369] 实施例A7 [0370] a) 中间体17的制备 [0371] [0372] 将2,5-二甲氧基四氢呋喃(180 mmol)加至2-氨基-4-氯苄腈(164 mmol)在HOAc (250 ml)中的混合物。回流下搅拌反应混合物30分钟。减压下浓缩反应混合物。将饱和的NaHCO3水溶液加至浓缩物。用EtOAc萃取混合物。用饱和NaHCO3水溶液和水洗涤经合并的各有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤，蒸发。得到深黑色晶体。使得到的粗产物溶解于DCM并经硅胶塞过滤。得量：中间体17 (99 %得率；黄色晶状固体)。 [0373] b) 中间体18的制备 [0374] [0375] 经2分钟将无水THF (20 ml)中的氢化铝(III)锂(250 mmol)加至冰冷却的中间体17 (114 mmol)的无水THF (200 ml)溶液。加入后，搅拌反应混合物1小时。在剧烈搅拌下，先后将反应混合物、EtOAc (300ml)加至冰冷却的2,3-二羟基琥珀酸钾钠四水合物 (Rochelle氏盐)的15 %水溶液。搅拌混合物30 min。分离各层，用EtOAc (300 mL)萃取含水层。用水(50 ml)洗涤经合并的各有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤，减压下蒸发，生成黄色半透明油。 [0376] 使得到的油溶解于乙醚(800 ml)和将二氧杂环己烷(28,5 ml)中的4 M HCl加至该溶液。过滤生成的悬液，用乙醚洗涤。50℃下干燥滤渣，生成中间体18 (65 %得率；黄色固体)。 [0377] B. 化合物的制备 [0378] 实施例B1 [0379] a) 化合物12的制备 [0380] [0381] 搅拌并回流中间体3 (0.552 g, 0.002 mol)和4-乙酰基-苯甲醛(0.385 g, 0.0026 mol)在EtOH (4 ml)中的混合物3 h。然后，经放置过夜冷却混合物并自混合物中结晶。滤出产物，洗涤(EtOH)和干燥。得量：0.684 g化合物12 (84.2 %得率)。 [0382] b) 化合物22的制备 [0383] [0384] 在NH3.H2O (4 ml)中搅拌化合物12 (0.390 g, 0.00096 mol)。用DCM (20 ml)萃取该混合物。分离的有机层经干燥(Na2SO4)和过滤。过滤后，用MnO2 (2.5 g, 0.028 mol)搅拌溶液4天，然后除去溶剂。真空干燥产物。得量：0.010 g化合物2 (2.8 %得率)。 [0385] 实施例B2 [0386] a) 化合物32的制备 [0387] [0388] 回流中间体5 (1.5 g, 6.17 mmol)和4-乙酰基-苯甲醛(1.0 g, 6.78 mmol)在EtOH (10 ml)中的混合物4 h。随后，r.t.下放置混合物过夜。真空蒸发溶剂。残余物经制备型HPLC纯化(SEPAX TM：21.2 x 250 mm；洗脱液：10%-40% CH3CN (0.1 % TFA)/H2O (0.1 % TFA)；流速25 ml/min；20 min)。收集想要的部分，用饱和NaHCO3溶液中和。用DCM萃取混合物。分离的有机层经干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发溶剂，生成0.68 g呈油的化合物31 (33 %得率)。 [0389] b) 化合物15的制备 [0390] [0391] r.t.下搅拌化合物32 (0.68 g, 2.02 mmol)和MnO2 (2.63 g, 30.28 mmol)在DCM (20 ml)中的混合物48 h。随后，混合物经硅藻土过滤，真空蒸发滤液。经柱层析法纯化残余物(洗脱液：PE/EtOAc 10/1)。收集想要的部分，蒸发溶剂，生成0.6 g化合物15 (89 %得率)。 [0392] 实施例B3 [0393] a) 化合物8的制备 [0394] [0395] 将4-乙酰基-苯甲醛(1.46 g, 9.78 mmol)加至中间体7 (2.00 g, 8.23 mmol)的EtOH (15 ml)溶液。搅拌并回流r.m. 4 h, 然后冷却。放置过夜后，滤出沉淀并真空干燥，生成粗产物。粗产物经HPLC纯化(SEPAXTM：21.2 x 250 mm；洗脱液：35%-55% CH3CN (0.1 % TFA)/H2O (0.1 % TFA)；流速15 ml/min；25 min)。收集产物部分，蒸发有机溶剂。用饱和NaHCO3溶液将残余物调节至pH 7。加入DCM (q.s.)，分离有机层。分离的有机层经干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发溶剂。得量：2.1 g化合物8 (68.4 %得率)。 [0396] b) 化合物18的制备 [0397] [0398] r.t.下搅拌化合物8 (2.0 g, 5.9 mmol)和MnO2 (6.1 g, 71.2 mmol)的DCM (50 ml)溶液2天。过滤混合物，浓缩滤液，生成0.650 g化合物18 (36.3 %得率)。 [0399] 实施例B4 [0400] a) 化合物33的制备 [0401] [0402] 回流中间体12 (1.5 g, 6.13 mmol)和4-乙酰基苯甲醛(1 g, 6.74 mmol)在EtOH (10 ml)中的混合物4 h，然后于r.t.下放置过夜。滤出沉淀，用EtOH (q.s.)洗涤并真空干 TM 燥，生成呈浅白色固体的粗产物。粗产物经HPLC纯化(Synergi ：50 x 250 mm；洗脱液： 10%-40% CH3CN (0.1 % TFA)/H2O (0.1 % TFA)；流速80 ml/min；25 min)。收集想要的部分，蒸发溶剂，生成三氟乙酸盐。用饱和NaHCO3溶液中和产物，并用DCM萃取。分离的有机层经干燥，蒸发，用HCl/二氧杂环己烷将残余物转化为HCl盐(1：1)。得量：0.7 g化合物33 (30.5 %得率；.HCl)。 [0403] b) 化合物24的制备 [0404] [0405] 用NH3.H2O (10 ml)中和化合物33 (0.6 g, 1.6 mmol)并用DCM萃取。分离的有机层经干燥(Na2SO4)，过滤，真空蒸发溶剂。使残余物溶解于DCM (20 ml)，将MnO2 (1.67 g, 19.2 mmol)加至溶液。r.t.下搅拌混合物48 h。随后，混合物经硅藻土过滤。真空浓缩滤液，经柱层析法纯化残余物(洗脱液：PE/EtOAc 15/1)。收集想要的部分，蒸发溶剂。得量：0.37 g化合物24 (69 %得率；白色固体)。 [0406] 实施例B5 [0407] a) 化合物5的制备 [0408] [0409] 搅拌并回流2-氯-6-(1H-吡咯-1-基)苯甲胺盐酸盐(1:1) (1.00 g, 0.004 mol；经对A1.c中的中间体3描述的方案类似的方案制备)和4-乙酰基苯甲醛(0.59 g, 0.004 mol)在EtOH (10 ml)中的混合物2 h。使混合物结晶过夜。滤出沉淀，用EtOH (5 ml)洗涤3次，于80℃真空干燥。得量：0.94 g化合物5 (63 %得率)。 [0410] b) 化合物17的制备 [0411] [0412] 25℃下，将H2O (25 ml)和NH4OH (5 ml)的混合物加至DCM (50 ml)和化合物5 (0.380 g, 0.97 mmol)的悬液。25℃下搅拌混合物15 min。随后，分离各层。分离的有机层经干燥(MgSO4)，过滤，蒸发溶剂。在DCM (50 ml)中搅拌残余物，将MnO2 (0.90 g, 0.01 mol)加至溶液。25℃下搅拌混合物120 h。混合物经硅藻土过滤，蒸发滤液。使残余物自EtOH结晶。滤出产物并干燥。得量：0.25 g化合物17 (75 %得率)。 [0413] 实施例B6 [0414] a) 化合物14的制备 [0415] [0416] 搅拌并回流3,5-二氯-2-(1H-吡咯-1-基)苯甲胺盐酸盐(1:1) (1.86 g, 0.0067 mol；经对A1.c中的中间体3描述的方案类似的方案制备)和4-乙酰基苯甲醛(0.992 g, 0.0067 mol)在EtOH (20 ml)中的混合物2 h。使混合物结晶过夜。滤出产物，用EtOH(10 ml)洗涤2次，80℃下真空干燥。得量：2.49 g 化合物14 (91 %得率；.HCl)。 [0417] b) 化合物26的制备 [0418] [0419] 用H2O (30 ml)、NH4OH (10 ml)和H2O (20 ml)洗涤化合物14 (0.812 g, 0.002 mol)在DCM (20 ml)中的混合物。干燥有机层(MgSO4)和过滤。将MnO2 (1.8 g, 0.02 mol)加至滤液。25℃下搅拌混合物96 h，并经硅藻土过滤。蒸发滤液，生成0.24 g化合物26 (33 %得率)。 [0420] 实施例B7 [0421] 化合物30的制备 [0422] [0423] r.t.下，将过硫酸氢钾(3.3 g, 5.4 mmol)的H2O (10 ml)溶液缓慢加至中间体14 (1.0 g, 2.7 mmol)在THF (15 ml)中的混合物。搅拌r.m. 2 h。随后，将混合物分配在DCM和NaHCO3之间。有机层经干燥(MgSO4)，过滤，蒸发溶剂，生成浅黄色残余物。该残余物经硅胶的柱层析法纯化(洗脱液：PE/EtOAc从8/1至3/1)。收集想要的部分，真空蒸发溶剂。得量：550 mg化合物30 (50 %得率)。 [0424] 实施例B8 [0425] 化合物1的制备 [0426] [0427] 25℃下搅拌化合物5 (0.372 g, 0.001 mol)、DCM (20 ml)、NH4OH (5 ml)和H2O (20 ml)的混合物15 min。分离各层。用H2O (20 ml)洗涤分离的有机层，干燥(MgSO4)并过滤。在冰上冷却滤液，将NaBH4 (0.019 g, 0.0005 mol)缓慢加至0℃下搅拌2 h的冷却的r.m.中。随后，加入H2O (30 ml)，用EtOAc萃取产物。分离的有机层经干燥(MgSO4)，过滤，蒸发溶剂。残余物经制备型TLC纯化(洗脱液：DCM/MeOH 30/1)。得量：0.18 g化合物1 (53 %得率)。 [0428] 实施例B9 [0429] 化合物34的制备 [0430] [0431] 搅拌并回流中间体3 (0.552 g；0.002 mol)和中间体16 (0.609 g；0.0026 mol)在EtOH (10 ml)中的混合物3小时。然后，使混合物变凉并结晶过夜。滤出晶体并干燥，生成0.410 g化合物34 (50 %得率)。 [0432] 实施例B10 [0433] 化合物39的制备 [0434] [0435] 通过碱萃取至DCM，随后经无水Na2SO4干燥，使中间体18转化为游离胺形式。将中间体18 (5.55 mmol)的该游离胺加至中间体16 (4.27 mmol)在无水DCM (100 ml)、AcOH (1747 mmol)和过量的无水Na2SO4的混合物中。搅拌反应混合物5天。然后，将反应混合物加至NaHCO3的水溶液(发泡的)直到碱性。经DCM萃取后，合并的各有机层经无水Na2SO4干燥，过®滤，减压下蒸发，生成粗产物。得到的粗产物经快速层析法纯化(ISOLERA 1-Biotage ) (10% EtOAc在己烷中至100% EtOAc)。收集想要的部分，蒸发溶剂。得量：化合物39 (2.5 %得率)。 [0436] 已经通过采用如在前述各实施例中描述的类似反应方案，制备以下化合物。‘Co. No.’指化合物编号。‘Pr.’指根据该方案合成化合物的实施例编号。如果未指明盐形式，则得到的化合物为游离碱。 [0437] 作为R和S对映异构体的外消旋混合物得到其中R3和R4是氢且并未在表1a或1b中对其立构中心指明具体的立体化学的化合物。 [0438] 表1a： [0439] [0440] [0441] [0442] [0443] 表1b： [0444] [0445] [0446] [0447] 分析结果 [0448] LCMS –通用程序 [0449] 采用包含泵、二极管阵列检测器(DAD) (采用220 nm波长)、柱式加热器和如在以下各方法中详述的柱的Agilent 1100组件进行HPLC测定。将来自柱的流体分送至Agilent MSD Series G1946C和G1956A。用API-ES (大气压电喷雾电离)构建MS检测器。从100向1000扫描，获得质谱。毛细管针电压对于正极电离模式为2500 V、对于负极电离模式为3000 V。碎裂电压为50 V。以10 l/min的流速将干燥气体温度保持在350℃。 [0450] LCMS方法1 [0451] 除了通用程序之外，在YMC-Pack ODS-AQ，50x2.0 mm 5μm柱，以0.8 ml/min流速进行反相HPLC。采用两种流动相(流动相A：含0.1 % TFA的水；流动相B：含0.05 % TFA的乙腈)。首先，保持100 % A 1分钟。然后在4分钟内将梯度应用于40 % A和60 % B并保持2.5分钟。采用2μl的典型注入体积。炉温为50℃ (MS极性：正) [0452] LCMS方法2 [0453] 除了通用程序之外，在YMC-Pack ODS-AQ，50x2.0 mm 5μm柱上，以0.8 ml/min流速进行反相HPLC。采用2种流动相(流动相A：含0.1 % TFA的水；流动相 B：含0.05 % TFA的CH3CN)。首先，保持90 % A和10 % B 0.8 min。然后在3.7分钟内将梯度应用于20 % A 和80 % B，并保持3 min。采用2μl的典型注入体积。炉温为50℃ (MS极性：正)。 [0454] 熔点 [0455] 对于许多化合物，用购自上海精密科学仪器有限公司的WRS-2A 熔点装置确定熔点(m.p.)。用0.2-5.0℃/min的线性加热速度测定熔点。报道值为熔化范围。最高温度为300℃。 [0456] 分析测定结果示于表2。 [0457] 表2：保留时间(Rt)以分钟表示，[M+H]+峰(质子化分子)和m.p. (熔点以℃表示)。(“n.d.”指不确定；“dec”指分解)。 [0458] [0459] 1H NMR [0460] 对于多种化合物，采用CHLOROFORM-d (氘化氯仿, CDCl3)或DMSO-d6 (氘化DMSO, 二甲-d6亚砜)作为溶剂，分别以300 MHz和400 MHz运行，将1H NMR谱纪录在具有标准脉冲序列的Bruker DPX-300或Bruker DPX-400分光计上。按相对用作内标的四甲基硅烷(TMS)的每百万的份额(ppm)报道化学位移(δ)。 [0461] [0462] [0463] [0464] D. 药理学实施例 [0465] 实施例D.1：体外抗真菌活性的测定 [0466] 在96孔板(U形底, Greiner Bio-One)上进行标准敏感性筛选。在100 % DMSO中，随后通过中间体在水中稀释的步骤，制备20 mM化合物原液的连续稀释液(2倍或4倍)。然后将这些连续稀释液(10 µl)点样到试验板上，将其在黑暗中4℃下存放最长时间2周。以64 µM作为试验中的最高浓度，包括适当宽的剂量范围。培养基RPMI-1640补充以L-谷氨酰胺、2%葡萄糖并以pH 7.0 ± 0.1的3-(N-吗啉代)-丙磺酸(MOPS)缓冲。 [0467] 冷藏保存不同的真菌菌种/分离菌(表3a)并只在使用前以1/1000稀释于培养基。然后将含有103 菌落形成单位(cfu)的200 µl标准接种物加至各孔。在各板上包含阳性对照(100 %生长= 无抗真菌剂的真菌培养基)和阴性对照(0 %生长= RPMI-MOPS培养基)。最佳孵化时间和最佳温度取决于真菌菌种，酵母菌类的最佳孵化时间为24 h (37℃)至一周，皮真菌的时间更长(27℃)。根据存活细胞能将非荧光蓝刃天青转化为粉红色和在额外的孵化时间(表3a中提及的‘resa’时间)后发荧光的试卤灵可用荧光计读出(λex 550 nm和λem 590 nm)的原理，在向各孔加入10 µl 0.005% (w/v)刃天青(Sigma Aldrich)后，测出真菌生长的抑制，作为pIC50值的结果列于表3b。 [0468] 表3a：不同真菌菌种的孵化条件。‘Resa时间’表示向试验系统加入刃天青后额外的孵化时间。 [0469]菌种 温度(℃) 时间 Resa时间 狗小孢霉 27 9天 24小时 须发癣菌 27 7天 24小时 红色发癣菌 27 7天 24小时 尖端赛多孢子菌 37 48小时 17小时 多育赛多孢子菌 37 48小时 17小时 申克氏孢子丝菌 27 4天 24小时 烟曲霉 27 48小时 17小时 近平滑假丝酵母 37 24小时 4小时 新型隐球菌 37 24小时 4小时 米根霉 37 24小时 6小时 米赫根毛霉 37 48小时 17小时 卷枝毛霉 27 48小时 17小时 [0470] 表3b：试验化合物的体外活性(‘n.d.’指未确定；‘Inf.’指感染；值指pIC50 值)[0471] [0472] [0473] [0474] 对于Inf. ‘L’，化合物 15、16、18、19、20、22、24和28的pIC50值已经确定，且都<4.2。 [0475] 实施例D. 2：肝脏代谢稳定性试验 [0476] 肝制剂(微粒体组分)得自BD Gentest (San Jose, Ca, US)。采用以下试验条件评价代谢稳定性。通过震摇含有1 mg微粒体蛋白制剂/ml, NADPH-生成系统(“NADPH”指β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐，还原的) (0.1 mM NADP, 5.0 mM MgCl2, 1.65 mM葡萄糖-6-磷酸和0.125 U葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)和0.5 M Na-K-磷酸盐缓冲液(pH 7.4)的反应混合物(250 µl)，进行所有孵化。37℃下预孵化混合物5 min，加入5 μM试验化合物开始酶促反应。在0 (对照)和15分钟(min)后，加入DMSO (500 µl)结束反应。以1200 g离心10 min除去沉淀出的材料。在配有大气压化学电离源的ThermoFinnigan LCQ Deca XP离子阱质谱仪上经LC-MS/MS分析上清液。如Kantharaj等2003 ((Kantharaj E., Tuytelaars A, Proost PEA, Ongel Z, van Assouw HP & Gilissen RAHJ (2003). 同时用离子阱质谱法测定药物代谢稳定性和鉴别代谢. Rapid Commun. Mass Sprectrom, 17卷, 2661-2668)所述计算剩余化合物的%，并用以下方程计算代谢的化合物的%： [0477] 代谢的化合物的%= 100%-剩余的化合物的%。 [0478] 结果列于表4。 [0479] 表4：采用人肝微粒体(hLM)、鼠肝微粒体(mLM)和豚鼠微粒体(gpLM)代谢的化合物的% [0480] [0481] 实施例D.3：血浆蛋白结合试验 [0482] 涂布K3-EDTA (乙二胺四乙酸)的试管中以1900 g离心豚鼠血液10 min新鲜制备血浆。如Van Liemp等2010 (Van Liemp S, Morrison D, Sysmans L, Nelis P & Mortishire-Smith R (2010). 血浆蛋白结合的更高通量平衡透析试验的开发和确认. Journal of the Association for Laboratory Automation, 2010, 印刷中)描述的，采用快速平衡装置(RED)，评价5 μM浓度下的化合物的血浆蛋白结合。简单说来，使豚鼠血浆与5 μM试验化合物混合，然后施加于RED。37℃下孵化4 h后实现平衡。装置的缓冲液和血浆格中的化合物浓度经LC-MS/MS测定。 [0483] 对于化合物15，结合分数为98.48 %。 [0484] 实施例D.4：细胞色素P450抑制试验 [0485] 方案A：采用cDNA表达蛋白的细胞色素P450结果(抑制率)。 [0486] 在Black Costar 96孔板中，根据Crespi等1997，稍有修改(Crespi CL, Miller VP & Penman BW (1997). 人药物代谢细胞色素P450的抑制的微量测定板试验. Anal. Biochem. 248卷, 1898-1900)进行全部基于荧光的试验。试验条件概述于表5a。对于细胞色素P450 3A4，采用三种不同的荧光底物。各反应混合物包括适当浓度的酶、NADPH-生成系统(“NADPH”指β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，还原的)、钠/钾缓冲液(pH 7.4)中的底物。对于各细胞色素P450批次，采用11种浓度确定Michealis-Menten动力学。 [0487] 为用荧光底物确定10 μM时的IC50值或抑制率，在二甲亚砜(DMSO)中制备5mM抑制剂原液。之后，在乙腈中制备其它稀释液。产生少于10%抑制率的最终的有机溶剂浓度为2% (v/v)。连续稀释化合物，得到介于1 nM-10 μM范围的最终浓度。37℃下，预加热其中1 μL缓冲液被化合物溶液置换的反应混合物5 min，通过加入β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)启动反应。加入阻断剂终止反应，采用Fluoroscan (Labsystems, 布鲁塞尔, 比利时)测量荧光。 [0488] 表5a：细胞色素P450抵制试验条件 [0489] [0490] 在表5a中，采用以下缩写词：3-氰基-7-乙氧基香豆素(CEC)、7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素(MFC)、3-[2-(N,N-二乙基-N-甲基氨基)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素(AMMC), 7-苄氧基-三氟甲基香豆素(BFC), 7-苄氧基喹啉(BQ)和联苄基荧光素(DBF)。 [0491] 表5b表示采用10 μM cDNA表达蛋白的细胞色素P450结果(抑制百分率 [0492] [0493] 表5c 采用10 μM cDNA表达蛋白的细胞色素P450结果(抑制百分率)– 本申请与现有技术的比较 [0494] [0495] [0496] [0497] 方案B：人肝微粒体细胞色素P450抑制试验。 [0498] 采用人肝微粒体确定化合物18对细胞色素1A2和2D6的CYP450抑制潜力。 [0499] 采用人肝微粒体和单独的探针底物(对CYP1A2的试卤灵和对CYP2D6的右美沙芬)，在整个浓度范围(0-30微摩尔)孵化试验化合物 (TCs)，以通过TC评估探针底物的抑制的IC50-值。使TCs溶解于溶剂条件A (0.15% DMSO + 0.46%乙腈)或条件B (0.30% DMSO + 0.68%乙腈)。 [0500] 在含有1.0 mg/ml 人肝微粒体(BD Gentest)和探针底物(或者试卤灵或者右美沙芬)和一系列试验化合物浓度(0-30微摩尔)、250 微升的总体积的0.1 M磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中进行各试验。37℃下预孵化10 min后，加入1.0 mM最终浓度的NADPH开始反应。37℃下孵化10 min后，用2体积的冷DMSO猝灭反应。4℃下，以4000 rpm离心试样10 min，分析上清液。用试卤灵经荧光分析CYP1A2，同时用LC-MS检测评价CY2D6抑制潜力。 [0501] 由于对两种细胞色素P450s (1A2和2D6)的%抑制率弱，不能构成IC50曲线以确定化合物18的IC50值：对于CYP1A2采用溶剂条件 A，30 μM下的抑制率为20-25 %；和采用溶剂条件 B，30 μM下的抑制率为25-35 %。对于CYP2D6，采用溶剂条件B，30 μM下的抑制率为40-45 %。 [0502] 方案C：人肝微粒体细胞色素P450合剂(cocktail)抑制试验 [0503] 对于6种细胞色素P450s中的每一种，整个浓度范围(0-30微摩尔)下用人肝微粒体和探针底物孵化试验化合物(TCs)，经TC预测抑制探针底物的IC50值。 [0504] 带适当内标的探针底物和最终试验浓度概述于表6a。 [0505] 含有0.2 mg/ml人肝微粒体(BD Gentest)和由非那西丁、甲苯磺丁脲、S-美芬妥英、右美沙芬、阿莫地喹和咪唑安定(表6a)组成的探针底物混合物和一系列试验化合物浓度(0-30微摩尔)、总体积为100微升的0.1 M磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中进行试验。37℃下，预孵化10 min 后，加入最终浓度1.0 mM的NADPH开始反应。孵化中的最终有机溶剂为0.15% DMSO和0.8%乙腈。37℃下孵化10 min后，用由DMSO和内标(表6a)组成的1.6体积的冷猝灭溶液猝灭反应。4℃下以4000 rpm离心试样10 min，用180微升水稀释60微升上清液。将各试样注入UPLC/MS系统，同时测定探针底物代谢物及其相关氘化内标。根据以下计算抑制百分率： [0506] 抑制率% = (1 – Ri/R) * 100，其中Ri和R是分别存在和不存在抑制剂情况下代谢物对内标峰面积的比例。以抑制百分比数据对转化的试验化合物浓度的对数作图，随后拟合曲线，确定IC50值。 [0507] 表6a：人肝微粒体P450抑制合剂试验的探针底物和内标。 [0508]细胞色素P450 探针底物 探针底物浓度 (微摩尔) 内标 1A2 非那西丁 80 对乙酰氨基酚-D4 2C8 阿莫地喹 2 N-脱乙基阿莫地喹-D4 2C9 甲苯磺丁脲 100 4-羟基甲苯磺丁脲-D9 2C19 S-美芬妥英 30 4-羟基美芬妥英-D3 2D6 右美沙芬 3 右美沙芬-D3 3A4/5 咪唑安定 2 1’-羟基咪唑安定-D4 [0509] 表6b 表示pIC50值– 本申请与现有技术的比较 [0510] [0511] [0512] [0513] 实施例D.5：辛醇/水分配系数的对数计算值(ClogP) [0514] 采用Bio-Loom软件(BioByte)得到辛醇/水分配系数的对数的计算值。 [0515] 表7：ClogP [0516] [0517] E. 组合物实施例 [0518] 如全部的这些实施例采用的“活性成分”涉及式(I)化合物，包括其任何立体化学异构形式、其药学上可接受的盐或其溶剂合物；特别是涉及示例的化合物中的任一种。 [0519] 实施例E1：注射溶液剂 [0520] 使1.8克4-羟基苯甲酸甲酯和0.2克氢氧化钠溶解于约0.5 l注射用沸水中。冷却至约50℃后，加入并搅拌0.05克丙二醇和4克活性成分。将溶液冷却至室温并补充注射用水q.s. ad 1 l，得到含有4 mg/ml活性成分的溶液。溶液经过滤灭菌并装入无菌容器中。 [0521] 实施例E2：透指甲组合物 [0522] 将0.144 g KH2PO4、9 g NaCl、0.528 g Na2HPO4.2H2O加至800 ml H2O，并搅拌混合物。用NaOH调节pH至7.4，加入500 mg NaN3。加入乙醇(42% v/v)，用HCl调节pH至2.3。 [0523] 将15 mg活性成分加至2.25 ml PBS (磷酸盐缓冲盐水)/乙醇(42 %；pH 2.3)，搅拌并用超声处理混合物。加入0.25 ml PBS/乙醇(42 %；pH 2.3)，进一步搅拌并用超声处理混合物，直到全部活性成分溶解，生成想要的透指甲组合物。 [0524] 实施例E3：口服滴剂 [0525] 60 80℃下，使500克A.I.溶解于0.5 l氢氧化钠溶液和1.5 l 聚乙二醇。冷却至30~40℃后，加入35 l聚乙二醇，充分搅拌混合物。然后边搅拌边加入1750克糖精钠的2.5 l纯~ 化水溶液，加入2.5 l 可可香精和聚乙二醇q.s.至50 l体积，得到含有10 mg/ml A.I.的口服滴剂溶液。将生成的溶液装入适用的容器。 [0526] 实施例E4：胶囊剂 [0527] 将20克A.I.、6克月桂基硫酸钠、56克淀粉、56克乳糖、0.8克胶态二氧化硅和1.2克硬脂酸镁一起剧烈搅拌。随后，将产生的混合物装入1000 适用的硬明胶胶囊，各含有20 mg活性成分。 [0528] 实施例E5：薄膜包衣片剂 [0529] 片芯的制备 [0530] 充分混合100克A.I.、570克乳糖和200克淀粉的混合物，之后用5克十二烷基硫酸钠和10克聚乙烯吡咯烷酮的约200 ml水溶液湿润。使湿粉末混合物过筛，干燥，再过筛。然后，加入100克微晶纤维素和15克氢化植物油。充分混合全部并压制成片剂，得到10.000片片剂，各含有10 mg活性成分。 [0531] 包衣 [0532] 向10克甲基纤维素的75 ml变性乙醇溶液加入5克乙基纤维素的150 ml二氯甲烷溶液。然后加入75 ml二氯甲烷和2.5 ml 1,2,3-丙三醇。融化10克聚乙二醇并溶解于75 ml二氯甲烷。将后一溶液加入前者，然后加入2.5克硬脂酸镁、5克聚乙烯吡咯烷酮和30 ml浓着色悬液，全部匀化。在包衣装置中用这样得到的混合物对片芯包衣。 [0533] 实施例E6：2 %霜剂 [0534] 将硬脂醇(75 mg)、十六醇(20 mg)、山梨醇酐单硬脂酸酯(20 mg)和豆蔻酸异丙酯(10 mg)放入双壁夹套式容器并加热，直到混合物完全融化。将该混合物加至单独制备的温度为70-75℃的纯水、丙二醇(200 mg)和聚山梨醇酯60 (15 mg)混合物中，同时用均化器均化液体。将产生的混合物冷却至25℃以下，同时连续混合。随后将A.I. (20 mg)、聚山梨醇酯80 (1 mg)和纯化水q.s. ad 1g溶液和无水亚硫酸钠(2 mg)的纯化水溶液加至乳液，同时持续混合。均化霜剂并装入适用的管中。 [0535] 实施例E7：2 %霜剂 [0536] 搅拌A.I. (2 g)、磷脂酰胆碱(20 g)、胆固醇(5 g)和乙醇(10 g)的混合物并于55-60℃下加热，直到完全溶解，并加至对羟基苯甲酸甲酯(0.2 g)、对羟基苯甲酸丙酯(0.02 g)、乙二胺四乙酸二钠(0.15 g)和氯化钠(0.3 g)的纯化水(ad 100 g)溶液，同时均化。加入纯化水中的羟丙基甲基纤维素(1.5 g)，搅拌混合物，直到完全膨胀。 |
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