일반적 항-염증성 반응을 부여하는 다중 프로스타글란딘 수용체에서 작용하는 화합물

일반적 항-염증성 반응을 부여하는 다중 프로스타글란딘 수용체에서 작용하는 화합물{COMPOUNDS ACT AT MULTIPLE PROSTAGLANDIN RECEPTORS GIVING A GENERAL ANTI-INFLAMMATORY RESPONSE}

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2010년 8월 20일에 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 제 61/375,406호에 관한 것이고, 이는 전체로서 참고로 본명세서에 명시적으로 포함된다.

발명의 배경

발명의 분야

본 발명은 화합물, 이의 제조를 위한 공정, 이를 함유하는 약제학적 조성물 및 의약에서의 이의 용도, 특히 DP ₁ , FP, TP, EP ₁ EP ₃ 및 EP ₄ 프로스타글란딘 (PG) 수용체에 대한 리간드의 작용에 의해 매개된 병태의 치료에서의 이의 용도에 관한 것이다. 본 화합물은 아래에 나타낸 일반적 구조를 가지고 상이한 프로스타글란딘 수용체에 작용하고 이에 의해 일반적 항-염증성 반응을 제공한다.

EP ₁ 수용체는 7-막관통 수용체이고 그의 자연적 리간드는 프로스타글란딘 PGE ₂ 이다. PGE ₂ 은 또한 다른 EP 수용체 (타입 EP ₂ , EP ₃ 및 EP ₄ )에 대해서도 친화성을 가진다. EP ₁ 수용체는 평활근 수축, 통증 (특히 염증성, 신경성 및 내장성), 염증, 알레르기성 활성, 신장 조절 및 위 또는 장 점액 분비와 관련되어 있다.

프로스타글란딘 E ₂ (PGE ₂ )은 마우스 척수 내에서 EP ₁ 수용체 서브타입을 통해 이통 및 EP ₂ 및 EP ₃ 수용체를 통해 통각과민증을 나타낸다. 또한, EP ₁ 넉아웃 마우스에서 통증-감수성 반응이 대략 50% 감소되는 것으로 나타났다. EP ₁ 수용체 길항제 (ONO-8711)는 만성 수축 손상의 래트 모델에서 통각과민증 및 이통을 감소시키고 수술후 통증의 설치류 모델에서 기계적 통각과민증을 저해한다. 과민성의 인간 모델에서의 내장성 통증의 치료에서 EP ₁ 수용체 길항제의 효능이 입증되었다. 따라서, 선택적인 프로스타글란딘 리간드, 작동제 또는 길항제는, 어느 프로스타글란딘 E 수용체 서브타입이 고려되는 지에 따라, 종래의 비-스테로이드성 항-염증성 약물와 유사한 항-염증성, 해열성 및 진통성 특성을 가지고, 또한, 호르몬-유도 자궁 수축을 저해하고 항암 효과를 가진다. 이들 화합물은 무분별한 사이클로옥시게나제 저해제인 NSAIDs의 일부 메카니즘-기초 부작용을 유도하는 능력이 감소되어 있다. 특히, 상기 화합물은 심혈관 독성에 대한 감소된 가능성, 출혈 횟수에 대한 감소된 효과 및 아스피린-민감성 천식 개체에서 천식 발작을 유도하는 능력 감소를 가진다. 더우기, 잠재적으로 유익한 프로스타글란딘 경로를 절약한 결과, 이들 약제는 NSAIDS 및/또는 COX-2 저해제에 비해 향상된 효능을 가질 수 있다. (EP4 수용체 길항제에 의해 치료될 수 있는 다른 질환에 대해서는 공개번호 미국 2005/0065200 참조, 이는 참고로서 그 전체가 본 명세서에 포함된다.)

EP ₃ 수용체는 통증 및 통각과민증 및 고열증에서 시사되었다. 따라서, EP ₃ 길항제는 통증, 염증 및 열을 치료하기 위해 유용할 수 있다. 부가적 용도는 조산, 과활성 방광 장애, 암 및 심혈관 질환의 치료를 포함한다.

TP (또한 TxA ₂ 로서 공지된) 수용체는 내인성 매개자 트롬복산에 의해 자극되는 프로스타노이드 수용체 서브타입이다. 이 수용체의 활성화는 주로 그의 혈소판 응집 및 평활근 수축 효과에 의해 발생되는 다양한 생리학적 작용을 유발하고, 따라서 프로스타사이클린 수용체 활성화와는 반대이다.

TP 수용체는 사구체 및 사구체외 혈관 조직에서 인간 신장에서 확인되었다. TP 수용체의 활성화는 사구체 모세혈관을 수축시키고 사구체 여과 속도를 억제하고, 이는 TP 수용체 길항제가 사구체 신염, 당뇨병 및 폐혈증에서의 신장 기능 장애에 대해 유용할 수 있음을 나타낸다.

TP 수용체의 활성화는 기관지수축, 미세혈관 투과 증가, 점액성 부종 및 점액 분비의 형성을 유도하고, 이들은 기관지 천식의 대표적인 특징적 특성이다. TP 길항제는 잠재적 천식 치료제로서 연구되어, 예를 들면, 경구로 활성인 세라트로다스트(Seratrodast (AA-2414))이 나왔다. 라마트로반은 항-천식 화합물로서 현재 임상 시험 III상 진행 중인 또다른 TP 수용체 길항제이다.

DP ₁ 수용체는 특정 개인에서 천식 반응을 개시할 수 있기 때문에, DP ₁ 길항제 특성을 가지는 화합물은 항-천식 약물로서 유용할 수 있다. (DP 길항제로 치료될 수 있는 다른 질환 및 병태의 개시에 대해서는 공개번호 2004/0162323 참조.) 마지막으로, FP 수용체는 안압을 조절하고 위장관 및 자궁에서 괄약근의 평활근 수축을 매개한다. 따라서, FP 수용체의 길항제는 생식기 장애를 치료하기 위해 유용하다. (FP 수용체 길항제로 치료될 수 있는 다른 질환 및 병태에 대해서는 미국 특허 번호 6,511,999 참조.)

발명의 요약

본 발명은 N-알킬-2-(1-(2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드 , 예를 들면 N-알킬-2-(1-(5-치환-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드인 화합물을 제공하고, 여기서 상기 5 치환기는 할로 및 알킬옥시 라디칼로 구성된 그룹으로부터 선택된다.

본 발명의 일부 구체예가 다음 단락에서 기술되어 있다:

1. N-알킬-2-(1-(5-치환-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드인 화합물, 여기서 상기 5 치환기는 할로 및 알킬옥시 라디칼로 구성된 그룹으로부터 선택됨.

2. 단락 1에 있어서, 상기 알킬 라디칼은 n-알킬 라디칼인 화합물.

3. 단락 2에 있어서, 상기 n-알킬 라디칼은 5 내지 10 탄소 원자를 포함하는 화합물.

4. 단락 1 - 3에 있어서, 상기 n-알킬 라디칼은 옥틸인 화합물.

5. 단락 1- 2에 있어서, 상기 알킬 라디칼은 시클로알킬 라디칼인 화합물.

6. 단락 5에 있어서, 상기 시클로알킬 라디칼은 시클로헥실-n-알킬 라디칼인 화합물.

7. 단락 5 - 6에 있어서, 상기 시클로헥실-n-알킬 라디칼은 시클로헥실부틸인 화합물.

8. 단락 1에 있어서, 상기 5-치환기는 플루오로 및 클로로로 구성된 그룹으로부터 선택되는 화합물.

9. 단락 1에 있어서, 상기 알킬옥시는 메틸옥시 및 디옥솔로 구성된 그룹으로부터 선택되는 화합물.

10. 다음으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 화합물:

N-알킬-2-(1-(5-치환-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드, 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산 및 알킬 그의 에스테르, 여기서 상기 치환기는 할로 및 알킬옥시 라디칼로 구성된 그룹으로부터 선택됨.

11. 단락 1 - 10에 있어서, 상기 화합물음 다음으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 화합물:

(S)-N-(4-시클로헥실부틸)-2-(1-(5-플루오로-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드,

(S)-N-(4-시클로헥실부틸)-2-(1-(5-메톡시-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드,

(S)-N-(4-시클로헥실부틸)-2-(1-(5-클로로-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드,

N-(4-시클로헥실부틸)-2-(1-{[6-(3-옥소{[(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)-1,3-벤조디옥솔-5-일]메틸}피롤리딘-2-일)-1,3-옥사졸-4-카복사미드 및

2-{1-[5-플루오로-2-(3-옥소-3-{[(트리플루오로메틸)설포닐]아미도}프로필)벤질]피롤리딘-2-일}-N-옥틸-1,3-옥사졸-4-카복사미드.

12. 다음 식을 가지는 화합물:

여기서 R ₁ 는 CO ₂ R ₇ 및 CON(R ₇ )SO ₂ R ₇ 로 구성된 그룹으로부터 선택되고 여기서 R ₇ 는 H, 알킬 및 아릴로 구성된 그룹으로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬 및 아릴은 할로 또는 할로알킬로 치환될 수 있고,

R ₂ 는 H, 알킬, 할로겐, OR ₇ 및 OC(R ₇ ) ₂ O로 구성된 그룹으로부터 선택되고; 및

R ₃ 는 H 및 알킬로 구성된 그룹으로부터 선택되고; 단, R ₁ 이 CO ₂ R ₇ 일 때는, R ₂ 는 H가 아니다.

13. 단락 12에 있어서, R ₂ 는 F, Cl, OCH ₃ 및 O(CH ₂ )O로 구성된 그룹으로부터 선택되는 화합물.

14. 단락 12에 있어서, R ₃ 는 알킬인 화합물.

15. 단락 12 - 13에 있어서, R ₃ 는 (CH ₂ ) _n CH ₂ R ₇ 이고, 여기서 n는 4 내지 9의 정수이고 및 R ₇ 는 H 또는 시클로헥실인 화합물.

16. 단락 12에 있어서, R ₇ 는 메틸, 에틸, i-프로필, 트리플루오로메틸 및 시클로프로필로 구성된 그룹으로부터 선택되는 화합물.

17. 단락 12에 있어서, R ₁ 는 NHSO ₂ R ₇ 인 화합물.

18. 단락 17에 있어서, R ₇ 는 메틸, 에틸, i-프로필, 트리플루오로메틸 및 시클로프로필로 구성된 그룹으로부터 선택되는 화합물.

19. 단락 12 및 17에 있어서, R2는 F, Cl, OCH ₃ 및 O(CH ₂ )O로 구성된 그룹으로부터 선택되는 화합물.

20. 단락 12 및 17에 있어서, R ₃ 는 (CH ₂ ) _n CH ₂ R ₇ , 여기서 n는 4 내지 9의 정수이고 및 R ₇ 는 H 또는 시클로헥실인 화합물

21. N-알킬-2-(1-(5-치환-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드를 제조하는 방법, 이 방법은 상응하는 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산을 시아누르산 및 리플루오로메탄설폰아미드과 반응시켜 상기 N-알킬-2-(1-(5-치환-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드를 얻는 것을 포함함.

22. 단락 21에 있어서, 상기 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산은 상응하는 프로피온 알킬 에스테르, 즉 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산 알킬 에스테르를 가수분해함에 의해 상기 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산을 얻음에 의해 제조되는 방법.

23. 단락 22에 있어서, 상기 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산 알킬 에스테르는 상응하는 알데히드 및 프롤린을 반응시키는 것, 즉 2R-피롤리딘-2-일-옥사졸-4-카복실산 알킬아미드를 3-(4-치환-2-포밀-페닐)-프로피온산 알킬 에스테르와 반응시켜 상기 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산 알킬 에스테르를 얻는 것에 의해 제조되는 방법.

24. 단락 21, 22 또는 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 페닐 치환기는 플루오로, 클로로, 메톡시 및 디옥솔로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.

25. 단락 21, 22 또는 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 N-알킬은 옥틸 및 시클로헥실부틸로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.

26. 단락 21, 22 또는 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 프로피온산 알킬 에스테르는 프로피온산 메틸 에스테르인 방법.

27. 단락 26에 있어서, 상기 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산을 피리딘의 존재 하에서 환류에서 시아누르산과 반응시키고, 얻어진 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트 및 물로 희석하여 크루드 유기 생성물을 분리하고 상기 크루드 유기 생성물을 CH ₂ Cl ₂ 및 DMAP 내에 용해시키고, 트리플루오로메탄설폰아미드를 부가하고 얻어진 혼합물을 실온에서 질소 하에서 교반하여 상기 N-알킬-2-(1-(5-치환-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드를 얻는 방법.

28. 다음 식을 가지는 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법:

여기서 R ₁ 는 CO ₂ R ₇ 및 CON(R ₇ )SO ₂ R ₇ 로 구성된 그룹으로부터 선택되고 여기서 R ₇ 는 H, 알킬 및 아릴로 구성된 그룹으로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬 및 아릴은 할로 또는 할로알킬로 치환될 수 있고

R ₂ 는 H, 알킬, 할로겐, OR ₇ 및 OC(R ₇ ) ₂ O로 구성된 그룹으로부터 선택되고; 및

R ₃ 는 H 및 알킬로 구성된 그룹으로부터 선택되고; 단, R ₁ 이 CO ₂ R ₇ 일 때는, R ₂ 는 H가 아니다.

29 단락 28에 있어서, 상기 화합물은 DP ₁ , FP, EP ₁ , EP ₃ , TP 및/또는 EP ₄ 수용체 매개된 질환 또는 병태를 치료하기 위해 투여되는 방법.

30. DP ₁ , FP, EP ₁ , EP ₃ , TP 및/또는 EP ₄ 수용체 매개된 질환 또는 병태를 치료하기 위해 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법, 여기서 상기 화합물은 다음 식을 가지고:

여기서 R ₁ 는 CO ₂ R ₇ 및 CON(R ₇ )SO ₂ R ₇ 로 구성된 그룹으로부터 선택되고 여기서 R ₇ 는 H, 알킬 및 아릴로 구성된 그룹으로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬 및 아릴은 할로 또는 할로알킬로 치환될 수 있고

R ₂ 는 H, 알킬, 할로겐, OR ₇ 및 OC(R ₇ ) ₂ O로 구성된 그룹으로부터 선택되고; 및

R ₃ 는 H 및 알킬로 구성된 그룹으로부터 선택된다.

도 1은 본 발명의 화합물을 제조함에 있어서 유용한 특정 중간체 알데히드 화합물의 제조를 위한 반응 식을 나타내고; 및,
도 2은 도 1의 알데히드와 프롤린 화합물의 반응 생성물로부터 본 발명의 화합물의 제조를 위한 반응 식을 나타낸다.

개시되어 있는 발명을 정의하기 위해 다음 용어가 사용된다.

"알킬"은 직쇄, 분지쇄 또는 시클릭 포화 지방족 탄화수소를 지칭한다. 바람직하게는, 상기 알킬 기는 1 내지 12 탄소를 가진다. 더욱 바람직하게는, 상기 알킬 기는 4 내지 10 탄소, 가장 바람직하게는 4 내지 8 탄소의 알킬이다. 대표적인 알킬 기는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 3차 부틸, 펜틸, 헥실 등을 포함한다. 상기 알킬 기는 히드록실, 시아노, 알콕시, =O, =S, NO ₂ , 할로겐, 디메틸 아미도, 및 SH로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있다.

"시클로알킬"은 시클릭 포화 지방족 탄화수소 기를 지칭한다. 바람직하게는, 상기 시클로알킬 기는 3 내지 12 탄소를 가진다. 더욱 바람직하게는, 상기 시클로알킬 기는 4 내지 7 탄소, 가장 바람직하게는 5 또는 6 탄소를 가진다.

"아릴"은 공역 파이 전자 시스템을 가지는 적어도 하나의 링을 가지는 방향족 기를 지칭하고 카보시클릭 아릴, 헤테로시클릭 아릴 및 바이아릴 기를 포함한다. 상기 아릴 기는 알킬, 히드록실, 할로겐, COOR ⁶ , NO ₂ , CF ₃ , N(R ⁶ ) ₂ , CON(R ⁶ ) ₂ , SR ⁶ , 설폭시, 설폰, CN 및 OR ⁶ 로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있고, 여기서 R ⁶ 는 알킬이다.

"카보시클릭 아릴"은 아릴 기를 지칭하고 여기서 상기 링 원자는 탄소이다.

"헤테로아릴"은 링 원자로서 1 내지 3 헤테로원자를 가지는 아릴 기를 지칭하고, 상기 링 원자의 나머지는 탄소이다. 헤테로원자는 산소, 황, 및 질소를 포함한다. 따라서, 헤테로시클릭 아릴 기는 푸라닐, 티에닐, 피리딜, 피롤릴, N-저급 알킬 피롤로, 피리미딜, 피라지닐, 이미다졸릴 등을 포함한다. 바람직하게는, 상기 헤테로아릴 기는 2 내지 10 탄소를 가진다. 더욱 바람직하게는, 상기 헤테로아릴 기는 3 내지 10 탄소, 가장 바람직하게는 3 탄소를 가진다.

본 발명은 추가로는 약제학적으로-허용가능한 부형제와 조합하여 상기 화합물을 함유하는 약제학적 조성물 및 의약에서의 그의 용도, 특히 DP ₁ , FP, EP ₁ , EP ₃ 및 EP ₄ 프로스타글란딘 (PG) 수용체에 대한 리간드의 작용에 의해 매개된 병태의 치료에서의 그의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 또한 트롬복산 (TP) 수용체에 대한 리간드의 작용에 의해 매개된 병태를 치료하기 위해 유용하다.

본 발명은 다음 일반식을 가지는 화합물을 제공한다:

여기서 R ₁ 는 CO ₂ R ₇ 및 CON(R ₇ )SO ₂ R ₇ 로 구성된 그룹으로부터 선택되고 여기서 R ₇ 는 H, 알킬 및 아릴로 구성된 그룹으로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬 및 아릴은 할로 또는 할로알킬, 예를 들면 플루오로 또는 플루오로알킬로 치환될 수 있고;

R ₂ 는 H, 알킬, 할로겐, OR ₇ 및 OC(R ₇ ) ₂ O로 구성된 그룹으로부터 선택되고;

R ₃ 는 H 및 알킬로 구성된 그룹으로부터 선택되고; 단, R ₁ 이 CO ₂ R ₇ 일 때는, R ₂ 는 H가 아니고;

바람직하게는, R ₁ 는 CO ₂ H, CO ₂ C ₃ H ₇ 및 NHSO ₂ R ₇ 로 구성된 그룹으로부터 선택된다.

더욱 바람직하게는 R ₁ 는 NHSO ₂ R _7;

바람직하게는, R ₇ 는 메틸, 에틸, i-프로필, 트리플루오로메틸 및 시클로프로필로 구성된 그룹으로부터 선택되고;

바람직하게는, R ₂ 는 F, Cl, CH ₃ O, OCH ₂ O 및 H로 구성된 그룹으로부터 선택되고; 및,

바람직하게는, R ₃ 는 (CH ₂ ) _n CH ₂ R ₇ , 여기서 n는 4 내지 9의 정수이고 및 R ₇ 는 H 또는 시클로헥실이다.

본 발명의 가장 바람직한 화합물은 다음으로 구성된 그룹으로부터 선택된다:

(S)-N-(4-시클로헥실부틸)-2-(1-(5-플루오로-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드;

(S)-N-(4-시클로헥실부틸)-2-(1-(5-메톡시-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드;

(S)-N-(4-시클로헥실부틸)-2-(1-(5-클로로-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드;

N-(4-시클로헥실부틸)-2-(1-{[6-(3-옥소{[(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)-1,3-벤조디옥솔-5-일]메틸}피롤리딘-2-일)-1,3-옥사졸-4-카복사미드; 및,

2-{1-[5-플루오로-2-(3-옥소-3-{[(트리플루오로메틸)설포닐]아미도}프로필)벤질]피롤리딘-2-일}-N-옥틸-1,3-옥사졸-4-카복사미드.

특정의 본 발명의 화합물은 - 트롬복산 A 2 수용체 길항제 또는 트롬복산 A 2 신테타제 저해제로서 보고된 화합물일지라도 -- 미국 특허 5,280,034에서 규정된 바와 같은 유사한 화합물을 제조하기 위한 방법에 따라 제조될 수 있고, 상기 문헌은 참고로서 본 명세서에 포함된다. 도 1 및 2에 나타낸 바와 같이, 바람직하게는, 특정의 바람직한 본 발명의 화합물은 상응하는 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산을 시아누르산 및 트리플루오로메탄설폰아미드과 반응시켜 상기 N-알킬-2-(1-(5-치환-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드를 얻는 것을 포함하는 N-알킬-2-(1-(5-치환-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드를 제조하는 방법에 의해 제조된다. 상기 방법에서, 상기 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산을 피리딘, 또는 다른 적절한 염기의 존재 하에서, 환류에서 시아누르산과 반응시켜, 얻어진 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 바람직하게는 에틸 아세테이트 및 물로 희석하여 유기 생성물을 분리하고, 상기 크루드 유기 생성물을 CH ₂ Cl ₂ 및 DMAP 내에 용해시키고, 트리플루오로메탄설폰아미드를 부가하고 얻어진 혼합물을 실온에서 질소 또는 다른 불활성 기체 하에서 교반하여 상기 N-알킬-2-(1-(5-치환-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드를 얻을 수 있다.

상기 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산은 상응하는 프로피온 알킬 에스테르, 즉 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산 알킬 에스테르를 가수분해하여 상기 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산을 얻는 것에 의해 제조될 수 있다.

상기 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산 알킬 에스테르는 상응하는 알데히드 및 프롤린을 반응시키는 것에 의해 제조된다, 즉 2R-피롤리딘-2-일-옥사졸-4-카복실산 알킬아미드은 3-(4-치환-2-포밀-페닐)-프로피온산 알킬 에스테르와 반응시켜 상기 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산 알킬 에스테르를 얻을 수 있다.

바람직하게는, 상기 페닐 치환기는 플루오로, 클로로, 메톡시 및 디옥솔로 구성된 그룹으로부터 선택된다.

바람직하게는, 상기 N-알킬은 옥틸 및 시클로헥실부틸로 구성된 그룹으로부터 선택된다.

바람직하게는, 상기 프로피온산 알킬 에스테르는 프로피온산 메틸 에스테르이다.

도 1 및 2 및 실시예에서 사용된 시약 및 조건은 다음과 같이 생략될 수 있다:

Ac는 아세틸 또는 아세테이트;

DCM는 디클로로메탄;

TFA는 트리플루오로아세트산;

DBU은 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔을 지칭하고;

DMF는 디메틸포름아미드;

Me는 메틸;

Et는 에틸;

THF는 테트라하이드로푸란;

DMAP는 4-디메틸아미도피리딘;

HEPES (4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산;

HMTA는 헥사메틸렌테트라민; 및,

HBTU는 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트이다.

다음 실시예는 본 발명을 예시하는 의도이다.

실시예 1

일반적 방법 1

N-페닐비스(트리플루오로메탄설핀이미드) (1.41 g, 3.94 mmol)를 DMF (3 mL) 내 페닐 (3.57 mmol) 및 트리에틸아민 (0.56 mL, 4 mmol)의 용액에 실온에서 및 질소 분위기 하에서 조금씩 부가하였다. 얻어진 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응을 물 (3 ml)로 소광시키고 상기 혼합물을 디에틸 에테르 (2×10 ml)로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고 (MgSO ₄ ), 여과하고 상기 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 크루드 화합물을 용리제로서 20 % CH ₂ Cl ₂ / 80 % 이소-헥산을 사용하는 20 g SPE 카트리지 내에서 칼럼에 의해 정제하여 소정의 트리플레이트를 흑색 액체로서 얻었다 (98%).

실시예 1a

트리플루오로-메탄설폰산-4-플루오로-2-포밀-페닐 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 10.26 (s, 1H, C H O), 7.69 (m, 1H, Ar H ), 7.45 (m, 2H, Ar H ). ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) γ -73.1, -110

실시예 1b

트리플루오로-메탄설폰산-4-클로로-2-포밀

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 10.22 (s, 1H, C H O), 7.95 (d, 1H, J= 2.6 Hz, Ar H ), 7.68 (dd, 1H, J= 2.6, 8.6 Hz, Ar H ), 7.38 (d, 1H, J= 8.6 Hz, Ar H ). ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) -73.2

실시예 1c

트리플루오로-메탄설폰산-4-메톡시-2-포밀

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 10.26 (s, 1H, C H O), 7.29 (m, 3H, Ar H ), 3.90 (s, 3H, -OC H ₃ ). ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) -73.2

실시예 2

일반적 방법 2

THF (10 ml) 내 트리플레이트 (일반적 방법 1로부터) (3.37 mmol), 메틸 아크릴레이트 (0.70 ml), 트리에틸아민 (0.9 ml, 6.8 mmol) 및 Pd(dppf) ₂ Cl ₂ (0.026 g)의 혼합물을 환류에서 16 시간 동안 질소 분위기 하에서 가열하였다. 물 (10 ml)를 부가하고 상기 화합물을 에테르 (3x10 ml)로 추출하였다. 조합시킨 에테르 층을 식염수로 세척하고 (10 ml), 건조시키고 (MgSO4) 및 이후 진공 하에서 건조까지 증발시켰다.

이후 상기 크루드 화합물을 용리제로서 30 % EtOAc / 70 % 이소-헥산을 사용하는 25G 실리카 카트리지 내에서 칼럼에 의해 정제하여 상기 공역 에스테르를 옅은 갈색 고체로서 얻었다 (41%).

실시예 2a

(E)-3-(4-플루오로-2-포밀-페닐)-아크릴산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 10.30 (s, 1H, C H O), 8.43 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -C H =CH-CO ₂ CH ₃ ), 7.61 (m, 2H, Ar H ), 7.34 (m, 1H, Ar H ), 6.37 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -CH=C H -CO ₂ CH ₃ ), 3.85 (s, 3H, -CO ₂ C H ₃ ). ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) δ -110

실시예 2b

(E)-3-(4-클로로-2-포밀-페닐)-아크릴산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 10.25 (s, 1H, C H O), 8.41 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -C H =CH-CO ₂ CH ₃ ), 7.84 (s, 1H, Ar H ), 7.88 (s, 2H, Ar H ), 6.37 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -CH=C H -CO ₂ CH ₃ ), 3.82 (s, 3H, -CO ₂ C H ₃ ).

실시예 2c

(E)-3-(4-메톡시-2-포밀-페닐)-아크릴산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 10.35 (s, 1H, C H O), 8.47 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -C H =CH-CO ₂ CH ₃ ), 7.61 (d, 1H, J= 8.6Hz, Ar H ), 7.39 (s, 1H, Ar H ), 7.16 (m, 1H, Ar H ), 6.33 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -CH=C H -CO ₂ CH ₃ ), 3.91 (s, 3H, -OC H ₃ ), 3.83 (s, 3H, -CO ₂ C H ₃ ).

실시예 2d

(E)-3-(6-포밀-벤조[1,3]디옥솔-5-일)-아크릴산 메틸 에스테르

이 유도체를 일반적 방법 2에 따르지만 상기 상업적으로 이용가능한 방향족 브로미드로부터 출발하여 제조하였다

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 10.27 (s, 1H, CHO), 8.45 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -CH=CH-CO ₂ CH ₃ ), 7.37 (s, 1H, ArH), 7.07 (s, 1H, ArH), 6.33 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -CH=CH-CO ₂ CH ₃ ), 612 (s, 2H, -OCH ₂ O-), 3.85 (s, 3H, -CO ₂ CH ₃ ).

실시예 3

일반적 방법 3

상기 불포화 메틸 에스테르 (일반적 방법 2로부터) (0.3 mmol)를 THF (2 mL) 및 MeOH (4 ml)의 혼합물 내에 용해시켰다. 알루미나 촉매 (35 mg) 상의 팔라듐을 부가하고 상기 현탁액을 1.5 시간 동안 실온에서 수소 분위기 하에서 교반하였다. 상기 촉매를 Hyflo을 통한 여과에 의해 제거하고 여액을 진공 하에서 증발시켜 노란색 고체를 얻었다 (70%).

실시예 3a

3-(4-플루오로-2-포밀-페닐)-프로피온산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 10.30 (s, 1H, C H O), 7.61 (m, 2H, Ar H ), 7.34 (m, 1H, Ar H ), 3.85 (s, 3H, -CO ₂ C H ₃ ), 2.88 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ Me), 2.63 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ Me). ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) δ -110

실시예 3b

3-(4-클로로-2-포밀-페닐)-프로피온산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 10.25 (s, 1H, C H O), 7.84 (s, 1H, Ar H ), 7.88 (s, 2H, Ar H ), 3.82 (s, 3H, -CO ₂ C H ₃ ), 2.87 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ Me), 2.59 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ Me).

실시예 3c

3-(4-메톡시-2-포밀-페닐)-프로피온산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 10.35 (s, 1H, C H O), 7.61 (d, 1H, J= 8.6Hz, Ar H ), 7.39 (s, 1H, Ar H ), 7.16 (m, 1H, Ar H ), 3.91 (s, 3H, -OC H ₃ ), 3.83 (s, 3H, -CO ₂ C H ₃ ), 2.92 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ Me), 2.61 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ Me).

실시예 3d

3-(6-포밀-벤조[1,3]디옥솔-5-일)-프로피온산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 10.27 (s, 1H, C H O), 7.37 (s, 1H, Ar H ), 7.07 (s, 1H, Ar H ), 612 (s, 2H, -OC H ₂ O-), 3.85 (s, 3H, -CO ₂ C H ₃ ), 2.93 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ Me), 2.63 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ Me).

실시예 4

일반적 방법 4

DMF (150 ml) 내 Z-보호된-L-세린 (5g, 20.9 mmol), 아민 (25,1 mmol), WSC (6 g, 31.4 mmol), N-메틸모르폴린 (2.55 ml, 23 mmol)의 용액을 실온에서 16 시간 동안 질소 분위기 하에서 교반하였다.

반응 혼합물을 진공 하에서 건조까지 증발시키고 잔사를 EtOAc (100 ml) 내에 재용해시켰다. 이 용액을 2M의 용액 HCl (2×75 mL), 포화 소듐 바이카보네이트의 용액 (2x75mL), 식염수 (2x75 mL)로 세척하고 건조시켰다 (Na ₂ SO ₄ ). 상기 용매를 증발시켜 상기 Z-보호된 세린 아미드를 백색 고체로서 얻었다 (64%).

실시예 4a

(2-히드록시-1-옥틸카바모일-에틸)-카바믹-산 벤질 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 7.37 (m, 5H, Ar H ), 6.56 (m, 1H, N H ), 5.83 (m, 1H, N H ), 5.15 (s, 2H, ArC H ₂ -), 4.16 (m, 2H, C H ₂ OH), 3.67 (m, 1H, NHC H CO), 3.24 (m, 2H, CONHC H ₂ -), 1.49 (m, 2H, NHCH ₂ -C H ₂ -), 1.27 (m, 10H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.89 (m, 3H, -C H ₃ )

실시예 5

일반적 방법 5

상기 Z-보호된 세린아미드 (일반적 방법 4로부터) (0.98 mmol)를 THF (25 ml) 및 MeOH (18 ml)의 혼합물 내에 용해시켰다. 이후 Pd(OH) ₂ (52 mg)를 부가하고 상기 반응 혼합물을 16 시간 동안 실온에서 수소 분위기 하에서 교반하였다. 상기 팔라듐 하이드록사이드를 Hyflo 을 통한 여과에 의해 제거하고 여액을 진공 하에서 증발시켜 유리 세린 아미드를 노란색 고체로서 얻었다 (98%).

실시예 5a

2-아미노-3-히드록시-N- 옥틸 - 프로피온아미드

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 3.84-3.73 (m, 2H, C H ₂ OH), 3.47 (m, 1H, NHC H CO), 3.26 (m, 2H, CONHC H ₂ -), 2.49 (bs, 2H, N H ₂ ), 1.52 (m, 2H, NHCH ₂ -C H ₂ -), 1.29 (m, 10H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.89 (m, 3H, -C H ₃ )

실시예 6

일반적 방법 6

디메틸포름아미드 (150 ml) 내 N-벤질옥시카르보닐-L-프롤린 (14.86 mmol) 및 유리 세린 아미드 (일반적 방법 5로부터) (16.35 mmol) 용액에 질소 분위기 하에서, N-메틸모르폴린 (3.6 mL, 32.7 mmol)를 부가하고, 이후 HBTU (6.2 g, 16.35 mmol)를 부가하였다. 얻어진 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다.

이 시간 후 상기 용액을 진공 하에서 농축하고 잔사를 에틸 아세테이트 (100 mL) 내에 용해시켰다. 상기 용액을 2M HCl 용액 (100 mL), NaHCO ₃ 의 포화 용액 (100 mL)로 세척하고 MgSO ₄ 상에서 건조시켰다. 여과 및 진공 하에서 농축하고 소정의 화합물을 농후한 오일로서 얻었다.

실시예 6a

2 R -(2-히드록시-1-옥틸카바모일-에틸카바모일)-피롤리딘-1-카복실산 벤질 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 7.35 (m, 5H, Ar H ), 5.15 (s, 2H, ArC H ₂ -), 4.48 (m, 1H, NC H CONH), 4.33 (m, 2H, C H ₂ OH), 4.07 (m, 1H, NHC H CO), 3.59 (m, 2H, C H ₂ NCO), 3.19 (m, 2H, CONHC H ₂ -), 2.20 (m, 2H, -C H ₂ -CH ₂ -), 1.94 (m, 2H, -CH ₂ -C H ₂ -), 1.49 (m, 2H, NHCH ₂ -C H ₂ -), 1.27 (m, 10H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.88 (m, 3H, -C H ₃ )

실시예 7

일반적 방법 7

디클로로메탄 (200 ml) 내 아미드 (일반적 방법 6로부터) (14.86 mmol)의 용액에, -25℃에서 질소 분위기 하에서, 데옥소-플루오르 (17.09 mmol)의 40% 용액을 부가하고 얻어진 혼합물을 실온에서 2.5 시간 동안 교반하였다.

이 시간 후, NaHCO ₃ 의 포화 용액 (200 mL)를 부가하고 상기 혼합물을 더욱 CH ₂ Cl ₂ (100 mL)로 희석하였다. 유기 층을 분리하고, 이후 포화 식염수 (150 mL)로 세척하고, MgSO ₄ 상에서 건조시켰다. 여과 및 진공에서 농축하여 상기 크루드 화합물을 농후한 오일로서 얻었다.

잔사를 에틸 아세테이트/이소-헥산 1:1로부터 시작하여 에틸 아세테이트/메탄올 9:1까지의 용매 구배를 사용하여 실리카 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 농후한 오일로서 분리하였다 (72%)

실시예 7a

2 R -(4-옥틸카바모일-4,5-디하이드로-옥사졸-2-일)-피롤리딘-1-카복실산 벤질 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 7.37 (m, 5H, Ar H ), 5.12 (s, 2H, ArC H ₂ -), 4.70-4.30 (m, 4H, NC H CONH + C H ₂ O- + NHC H CO), 3.55 (m, 2H, C H ₂ NCO), 3.22 (m, 2H, CONHC H ₂ -), 2.22 (m, 1H, -C H ₂ -CH ₂ -), 2.05 (m, 3H, -CH ₂ -C H ₂ -), 1.53 (m, 2H, NHCH ₂ -C H ₂ -), 1.26 (m, 10H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.88 (m, 3H, -C H ₃ )

실시예 8

일반적 방법 8

질소 분위기 하에서 및 물 배쓰 내 탈기 디클로로메탄 (21 mL) 내 구리 브로미드 (7.48 mmol)의 현탁액에, HMTA (7.48 mmol)를 부가하고 이후 DBU (7.48 mmol)를 부가하고 얻어진 혼합물을 15 분 동안 교반하였다. 이후, 디클로로메탄 (11 ml) 내 옥사졸리딘 (일반적 방법 7로부터) (1.87 mmol)의 용액을 부가하고 얻어진 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다.

이 시간 후, 상기 용액을 진공 하에서 농축하고 잔사를 에틸 아세테이트 (30 mL) 및 NH ₄ Cl 및 NH ₃ (30 mL)의 1:1 포화 용액 사이에서 분배시켰다. 이후, 상기 유기 층을 분리하고 식염수로 세척하고 (30 mL), 및 MgSO ₄ 상에서 건조시켰다. 여과 및 진공에서 농축하여 상기 크루드 화합물을 농후한 오일로서 얻었다.

잔사를 SPE 에틸 아세테이트/이소-헥산 40%: 60%을 사용하여 10g 실리카 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 노란색 고체로서 분리하였다 (80%)

실시예 8a

2 R -(4-옥틸카바모일-옥사졸-2-일)-피롤리딘-1-카복실산 벤질 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.10(s, 1H, =C H ), 8.01(s, 1H, =C H ), 7.37 (m, 7H, Ar H ), 7.13 (m, 3H, Ar H ), 6.88-6.79 (m, 2H, N H ), 5.21-4.95 (m, 8H, NC H CONH + PhC H ₂ O- + NHC H CO), 3.70 (m, 4H, C H ₂ NCO), 3.59 (m, 4H, CONHC H ₂ -), 2.30 (m, 2H, -C H ₂ -CH ₂ -), 2.06 (m, 6H, -CH ₂ -C H ₂ -), 1.61 (m, 4H, NHCH ₂ -C H ₂ -), 1.29 (m, 20H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.88 (m, 6H, -C H ₃ )

실시예 9

일반적 방법 9

상기 Z-보호된 옥사졸 (일반적 방법 8) (0.98 mmol)를 MeOH (25 ml) 내에 용해시키고 이후 Pd(OH) ₂ (52 mg)를 부가하고 상기 현탁액을 밤새 실온에서 수소 하에서 교반하였다. 상기 팔라듐 하이드록사이드를 Hyflo을 통한 여과에 의해 제거하고 여액을 진공 하에서 증발시켜 노란색 고체를 얻었다 (95%).

실시예 9a

2 R -피롤리딘-2-일-옥사졸-4-카복실산 옥틸아미드

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.15(s, 1H, =C H ), 7.03 (m, 1H, N H ), 4.46 (m, 1H, NC H- 옥사졸), 3.39 (dd, 2H, J=7, 14 Hz, CONHC H ₂ -), 3.24 (m, 2H, -C H ₂ N-), 2.30-1.88 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.59 (m, 2H, NHCH ₂ -C H ₂ -), 1.28 (m, 10H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.88 (m, 3H, -C H ₃ )

일반적 방법 10

CH ₂ Cl ₂ (15 mL) 내 알데히드 (일반적 방법 3로부터) (1.49 mmol) 및 유리 프롤린 (일반적 방법 9로부터) (1.24 mmol)의 용액에 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (0.369 g, 1.74 mmol)를 부가하였다. 상기 혼합물을 질소 분위기 하에서 16 시간 동안 실온에서 교반하였다.

상기 혼합물을 15 mL의 CH ₂ Cl ₂ 로 희석하고 물을 부가하였다. 유기 층을 분리하고, 포화 식염수 (30 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na ₂ SO ₄ ) 및 상기 용매를 증발시켜 필요한 생성물을 노란색 고체로서 얻었다 (85 %).

실시예 10a

3-(2-{2 R -[4-(4-시클로헥실-부틸카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-플루오로-페닐)-프로피온산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.13 (s, 1H, =C H ), 7.55 (dd, 1H, J= 5.5, 8.4 Hz, Ar H ), 7.17 (m, 1H, N H ), 7.05 (dd, 1H, J= 2.6, 9.5 Hz, Ar H ), 6.96 (dt, 1H, J= 2.6, 8.4, Ar H ), 4.03 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.81 (s, 3H, -CO ₂ C H ₃ ), 3.76 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.53 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.41 (dd, 2H, J=7, 14 Hz, CONHC H ₂ -), 3.10 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ Me), 3.00 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.70 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ Me), 2.40 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.69-1.85 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.71-1.55 (m, 9H, NHC H ₂ -C H ₂ -), 1.36 (m, 2H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.25-1.19 (m, 6H, -C H ₂ -C H ₂ -). ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) δ -111

실시예 10b

3-(2-{2 R -[4-(4-시클로헥실-부틸카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-클로로-페닐)-프로피온산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.18 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -C H =CH-CO ₂ Me), 8.12 (s, 1H, =C H ), 7.47 (m, 1H, Ar H ), 7.29 (m, 1H, Ar H ), 7.22 (m, 2H, Ar H + N H ), 6.31 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -CH=C H -CO ₂ Me), 3.97 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.80 (s, 3H, -CO ₂ C H ₃ ), 3.73 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.52 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.40 (dd, 2H, J=7, 14 Hz, CONHC H ₂ -), 3.05 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ Me), 2.99 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.71 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ Me), 2.41 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.69-1.85 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.71-1.55 (m, 9H, NHC H ₂ -C H ₂ -), 1.36 (m, 2H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.25-1.19 (m, 6H, -C H ₂ -C H ₂ -).

실시예 10c

3-(2-{2 R -[4-(4-시클로헥실-부틸카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-메톡시-페닐)-프로피온산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.23 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -C H =CH-CO ₂ Me), 8.14 (s, 1H, =C H ), 7.55 (d, 1H, J= 8.4Hz, Ar H ), 7.24 (m, 1H, N H ), 6.82 (m, 2H, Ar H ), 6.27 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -CH=C H -CO ₂ Me), 4.02 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.82 (s, 3H, Ar-OC H ₃ ), 3.80 (s, 3H, -CO ₂ C H ₃ ), 3.72 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.50 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.41 (dd, 2H, J=7, 14 Hz, CONHC H ₂ -), 3.15 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ Me), 2.99 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.70 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ Me), 2.41 (c, 1H, J= 8.6Hz, -C H ₂ N-), 2.69-1.85 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.71-1.55 (m, 9H, NHC H ₂ -C H ₂ -), 1.36 (m, 2H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.25-1.19 (m, 6H, -C H ₂ -C H ₂ -).

실시예 10d

3-(6-{2R-[4-(4-시클로헥실-부틸카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-벤조[1,3]디옥솔-5-일)-프로피온산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.18 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -C H =CH-CO ₂ Me), 8.16 (s, 1H, =C H ), 7.28 (m, 1H, N H ), 7.04 (s, 1H, Ar H ), 6.76 (s, 1H, Ar H ), 6.21 (d, 1H, J= 15.9 Hz, -CH=C H -CO ₂ Me), 5.96 (s, 2H, -OC H ₂ O-), 3.96 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.72 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.43 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.40 (dd, 2H, J=7, 14 Hz, CONHC H ₂ -), 2.96 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.85 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ Me), 2.69 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ Me), 2.37 (c, 1H, J= 8.6Hz, -C H ₂ N-), 2.69-1.85 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.71-1.55 (m, 9H, NHC H ₂ -C H ₂ -), 1.36 (m, 2H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.25-1.19 (m, 6H, -C H ₂ -C H ₂ -).

실시예 10e

3-(2-{2 R -[4-(옥틸카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-플루오로-페닐)-프로피온산 메틸 에스테르

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.09 (s, 1H, =C H ), 7.08 (dd, 1H, J= 5.5, 8.4 Hz, Ar H ), 7.01 (m, 1H, N H ), 6.98 (dd, 1H, J= 2.6, 9.5 Hz, Ar H ), 6.97 (dt, 1H, J= 2.6, 8.4, Ar H ), 3.88 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.76 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.68 (s, 3H, -CO ₂ C H ₃ ), 3.42 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.41 (dd, 2H, J=7, 14 Hz, CONHC H ₂ -), 3.10 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ Me), 3.00 (m, 2H, -C H ₂ N-), 2.70 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ Me), 2.69-1.85 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.71-1.55 (m, 2H, NHCH ₂ -C H ₂ -), 1.36 (m, 2H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.25-1.19 (m, 8H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.89 (m, 3H, -C H ₃ ).

¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) δ -111

실시예 11

일반적 방법 11

상기 에스테르 (일반적 방법 10로부터) (1.82 mmol)를 THF (20 mL) 내에 용해시키고 물 (10 mL) 내 LiOH의 용액 (0.302 g, 7.3 mmol)을 부가하였다. 얻어진 혼합물을 60℃에서 16 시간 동안 가열하였다.

이후, EtOAc를 부가하고 (10ml) 및 상기 용액을 2M의 용액 HCl로 중화하였다. 유기 층을 분리하고, 식염수 (10 mL)로 세척하고 건조시켰다 (Na ₂ SO ₄ ). 상기 혼합물을 여과하고 상기 용매를 증발시켜 크루드 생성물을 얻었다.

상기 화합물을 용리제로서: 2 % MeOH / 98 % CH ₂ Cl ₂ 을 사용하여 10g SPE 카트리지 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 상기 카복실산을 백색 고체로서 얻었다 (70%).

실시예 11a

3-(2-{2 R -[4-(4-시클로헥실-부틸카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-플루오로-페닐)-프로피온산

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.18 (s, 1H, =C H ), 7.10 (m, 2H, Ar H + N H) , 6.97 (m, 1H, Ar H ), 6.88 (m, 1H, Ar H ), 3.90 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.77 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.40 (m, 3H, -NC H ₂ Ar + CONHC H ₂ -), 2.99 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.88 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ H), 2.59 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ H), 2.41 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.24-1.90 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.60 (m, 2H, NHC H ₂ -C H ₂ -), 1.27 (m, 10H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.88 (m, 5H, -C H ₂ -C H ₂ -). ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) δ -111

실시예 11b

3-(2-{2 R -[4-(4-시클로헥실-부틸카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-클로로-페닐)-프로피온산

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.16 (s, 1H, =C H ), 7.19 (m, 2H, Ar H ), 7.09 (d, 1H, J= 8.4Hz, Ar H ), 7.02 (m, 1H, N H ), 3.91 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.76 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.40 (m, 3H, -NC H ₂ Ar + CONHC H ₂ -), 3.00 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.87 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ H), 2.60 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ H), 2.41 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.24-1.90 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.60 (m, 2H, NHC H ₂ -C H ₂ -), 1.27 (m, 10H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.88 (m, 5H, -C H ₂ -C H ₂ -).

실시예 11c

3-(2-{2 R -[4-(4-시클로헥실-부틸카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-메톡시-페닐)-프로피온산

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.18 (s, 1H, =C H ), 7.07 (m, 2H, Ar H + N H ), 6.77 (m, 2H, Ar H ), 3.91 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.77 (s, 3H, ArOC H ₃ ), 3.77 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.38 (m, 3H, -NC H ₂ Ar + CONHC H ₂ -), 3.00 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.85 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ H), 2.59 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ H), 2.41 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.24-1.90 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.60 (m, 2H, NHC H ₂ -C H ₂ -), 1.27 (m, 10H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.88 (m, 5H, -C H ₂ -C H ₂ -).

실시예 11c

3-(6-{2R-[4-(4-시클로헥실-부틸카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-벤조[1,3]디옥솔-5-일)-프로피온산

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.19 (s, 1H, =C H ), 7.11 (m, 1H, N H ), 6.69 (s, 1H, Ar H ), 6.64 (s, 1H, Ar H ), 5.89 (s, 2H, -OC H ₂ O-), 3.84 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.72 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.39 (dd, 2H, J=7, 14 Hz, CONHC H ₂ -), 3.29 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.00 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.79 (m, 2H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ H), 2.60 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ H), 2.38 (c, 1H, J= 8.6Hz, -C H ₂ N-), 2.69-1.85 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.71-1.55 (m, 9H, NHC H ₂ -C H ₂ -), 1.36 (m, 2H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.25-1.19 (m, 6H, -C H ₂ -C H ₂ -).

실시예 11d

3-(2-{2 R -[4-(옥틸카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-플루오로-페닐)-프로피온산

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.16 (s, 1H, =C H ), 7.09 (m, 2H, Ar H + N H ), 6.95 (dd, 1H, J= 2.6, 9.5 Hz, Ar H ), 6.82 (dt, 1H, J= 2.6, 8.4, Ar H ), 3.85 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.73 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.36 (m, 3H, -NC H ₂ Ar + CONHC H ₂ -), 2.86 (m, 3H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ Me + -C H ₂ N-), 2.60 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ Me), 2.36 (m, 1H, -C H ₂ N), 2.24-1.80 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.71-1.55 (m, 4H, NHCH ₂ -C H ₂ -), 1.25-1.19 (m, 8H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.89 (m, 3H, -C H ₃ ).

¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) δ -111

실시예 12

일반적 방법 12

THF (7 mL) 내 포화 산 (일반적 방법 11로부터) (0.15 mmol)의 용액에, 질소 분위기 하에서, 피리딘 (0.45 mmol) 및 시아누릭 플루오라이드 (1.125 mmol)를 부가하고 얻어진 혼합물을 4 시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하도록 방치하고, 이후 에틸 아세테이트 (15 mL) 및 물 (10 mL)로 희석하였다. 유기 층을 분리하고, NaHCO ₃ 의 포화 용액 (10 mL)로 세척하고, 이후 포화 식염수 (10 mL)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO ₄ ), 여과하고 상기 용매를 진공 하에서 증발시켰다.

크루드를 CH ₂ Cl ₂ (7 mL) 내에 재용해시키고 DMAP (0.6 mmol) 및 트리플루오로메탄설폰아미드 (0.45 mmol)을 부가하였다. 얻어진 혼합물을 실온에서 질소 하에서 16 시간 동안 교반하였다.

이 시간 후, 상기 반응 혼합물을 더욱 CH ₂ Cl ₂ (15 mL)로 희석하고 물 (10 mL)를 부가하였다. 유기 층을 분리하고, 2M의 용액 HCl (5 mL)로 세척하고, 이후 포화 식염수 (10 mL)로 세척하고 건조시키고 (MgSO ₄ ), 여과하고 상기 용매를 진공 하에서 증발시켰다.

잔사를 에틸 아세테이트로부터 출발하여 에틸 아세테이트/메탄올 9:1까지의 용매 구배를 사용하여 10g SPE 실리카 카트리지를 통해 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 농후한 오일로서 분리하였다 (60%)

실시예 12a

S)-N-(4-시클로헥실부틸)-2-(1-(5-플루오로-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.27 (s, 1H, =C H ), 7.24 (m, 1H, N H) , 7.05 (dd, 1H, J= 6, 8.4 Hz, Ar H ), 6.85 (m, 2H, Ar H ), 3.91 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.74 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.36 (m, 2H, CONHC H ₂ -), 3.23 (d, 1H, -NC H ₂ Ar), 2.99 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.59 (m, 4H, ArC H ₂ C H ₂ CO ₂ H), 2.49 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.40-2.20 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.90 (m, 2H, NHCH ₂ -C H ₂ -), 1.27 (m, 10H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.88 (m, 5H, -C H ₂ -C H ₂ -). ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) δ -79, -118

LC-MS (M ⁺ +1) 631

실시예 12b

(S)-N-(4-시클로헥실부틸)-2-(1-(5-클로로-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.33 (s, 1H, =C H ), 7.15 (m, 2H, Ar H) , 7.04 (m, 1H, Ar H ), 7.02 (m, 1H, N H ), 4.01 (m, 2H, -NC H ₂ Ar + NC H- 옥사졸), 3.39 (m, 3H, CONHC H ₂ - + -NC H ₂ Ar), 3.15 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.70-2.46 (m, 5H, ArC H ₂ C H ₂ CONH + -C H ₂ N-), 2.29 (m, 2H, -C H ₂ -C H ₂ -), 2.03 (m, 2H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.90 (m, 2H, NHCH ₂ -C H ₂ -), 1.27 (m, 10H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.88 (m, 5H, -C H ₂ -C H ₂ -). ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) -79

LC-MS (M ⁺ +1) 647

실시예 12c

(S)-N-(4- 시클로헥실부틸 )-2-(1-(5- 메톡시 -2-(3-옥소-3-( 트리플루오로메틸설폰아미도 )프로필)벤질) 피롤리딘 -2-일) 옥사졸 -4- 카복사미드

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.23 (s, 1H, =C H ), 7.06 (m, 2H, Ar H) , 6.75 (m, 2H, Ar H + N H ), 3.95 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.77 (m, 4H, NC H 옥사졸 + ArOC H ₃ ), 3.41 (m, 2H, CONHC H ₂ ), 3.25 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.01 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.71 (m, 3H, ArC H ₂ C H ₂ CO ₂ H), 2.71 (m, 3H, ArC H ₂ C H ₂ CO ₂ H), 2.51 (m, 1H, ArC H ₂ C H ₂ CO ₂ H), 2.41 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.21 (m, 2H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.97 (m, 2H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.90 (m, 2H, NHCH ₂ -C H ₂ -), 1.27 (m, 10H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.88 (m, 5H, -C H ₂ -C H ₂ -). ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) δ -79

LC-MS (M ⁺ +1) 643

실시예 12d

N-(4-시클로헥실부틸)-2-(1-{[6-(3-옥소{[(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)-1,3-벤조디옥솔-5-일]메틸}피롤리딘-2-일)-1,3-옥사졸-4-카복사미드

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.34 (s, 1H, =C H ), 7.32 (m, 1H, N H ), 6.62 (s, 1H, Ar H ), 6.60 (s, 1H, Ar H ), 5.88 (s, 2H, -OC H ₂ O-), 3.86 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.74 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.41 (m, 3H, CONHC H ₂ - + -NC H ₂ Ar), 3.05 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.38 (m, 4H, ArC H ₂ C H ₂ CO ₂ H), 2.00 (c, 1H, J= 8.6Hz, -C H ₂ N-), 2.69-1.85 (m, 4H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.71-1.55 (m, 9H, NHC H ₂ -C H ₂ -), 1.36 (m, 2H, -C H ₂ -C H ₂ -), 1.25-1.19 (m, 6H, -C H ₂ -C H ₂ -). ¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) δ -79.7

LC-MS (M ⁺ +1) 657

실시예 12e

2-{1-[5-플루오로-2-(3-옥소-3-{[(트리플루오로메틸)설포닐]아미도}프로필)벤질]피롤리딘-2-일}-N-옥틸-1,3-옥사졸-4-카복사미드.

¹ H-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz): 8.38 (s, 1H, =C H ), 7.09 (m, 1H, N H ), 7.01 (m, 1H, Ar H ), 6.84 (m, 2H, Ar H ), 3.92 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 3.76 (t, 1H, J= 7.7Hz, NC H- 옥사졸), 3.36 (m, 2H, CONHC H ₂ -), 3.17 (d, 1H, J= 11.9Hz, -NC H ₂ Ar), 2.98 (m, 1H, -C H ₂ N-), 2.63-2.30 (m, 5H, ArCH ₂ C H ₂ CO ₂ Me + -C H ₂ -CH ₂ - + -C H ₂ N-), 2.19 (m, 2H, ArC H ₂ CH ₂ CO ₂ Me), 1.92 (m, 2H, -CH ₂ -C H ₂ -), 1.25-1.19 (m, 12H, -C H ₂ -C H ₂ -), 0.89 (m, 3H, -C H ₃ ).

¹⁹ F-NMR(CDCl ₃ , 300 MHz) δ -79.7, -118.5

LC-MS (M ⁺ +1) 605

상기 화합물을 인간 재조합 프로스타노이드 수용체 (DP ₁ , EP _1-4 , FP, IP 및 TP) 안정한 세포주를 사용하여 다음과 같이 PG 길항제 활성에 대해 시험하였다:

Ca ²⁺ 신호로서 G _s 및 G _i 커플링된 프로스타노이드 수용체의 반응을 측정하기 위해, 키메라 G 단백질 cDNAs을 사용하였다. 안정한 세포주 과발현 인간 프로스타노이드 DP ₁ , EP _1-4 , FP, IP, 및 TP 수용체를 다음과 같이 확립하였다:

간략히, 인간 프로스타노이드 DP ₁ , EP ₂ , 및 EP ₄ 수용체 cDNAs을 헤마글루타닌 (HA) 에피토프를 함유하는 키메라 G _qs cDNA와 공-형질감염시키고; 인간 프로스타노이드 EP ₃ 수용체를 키메라 G _qi -HA와 공-형질감염시키고; 인간 EP ₁ , FP, IP, 및 TP 수용체 cDNAs을 외인성 G-단백질 없이 발현시켰다. G _qs 및 G _qi 키메라 cDNAs (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA), 더불어 프로스타노이드 수용체의 cDNAs을 하이그로마이신 B 선택 마커를 가진 pCEP ₄ 벡터 내로 클로닝하였다. HEK-293 EBNA (엡스테인-바르 바이러스 핵 항원) 세포 내로의 형질감염을 FuGENE 6 형질감염 시약 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN, USA)에 의해 달성하였다. 안정한 형질감염체를 하이그로마이신 내성에 따라 선택하였다. G _qs 및 G _qi 는 HA 에피토프를 함유하였기 때문에, 항-마우스 HA 모노클로날 항체 및 고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)-공역 2차 항체를 사용하여 웨스턴 블로팅 분석에 의해 G-단백질 발현을 검출하고, 반면 FLIPR 스크리닝에 의해 프로스타노이드 수용체의 기능적 발현을 검출하였다. 이들 안정한 세포주를 Ca ²⁺ 신호전달에 대한 FLIPR 기능적 어세이 (아래에 기술된 바와 같이)에 의해 표준 작동제의 일련의 희석액에 대해 10μM에서 이전에 공개된 길항제를 사용하여 검증하였다.

Ca ²⁺ 신호전달 연구를 384-포맷으로 FLIPR TETRA 시스템 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)을 사용하여 수행하였다. 이는 GPCRs 및 이온 채널과 관련된 Ca ²⁺ 신호전달을 모니터링하는 세포-기초 어세이에 대한 고성능 장비이다. 세포를 BioCoat 다중-D-라이신 코팅된, 흑색 벽, 투명 바닥 384-웰 플레이트 (BD Biosciences, Franklin lakes, NJ, USA) 내에서 5 x 10 ⁴ 세포/웰의 밀도로 파종하고 37℃에서 인큐베이터 내에서 밤새 부착되도록 방치하였다. 상기 세포를 이후 HBSS-HEPES 완충액 (바이카보네이트 및 페닐 레드 없는 행크 균형 염 용액, 20mM HEPES, pH 7.4)로 ELx405 Select CW Microplate Washer (BioTek, Winooski, VT, USA)을 사용하여 두 번 세척하였다. 2 x 10 ^-6 M의 최종 농도에서 Ca ²⁺ -민감성 염료 Fluo-4AM (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 암소에서 60 분 건조-로딩 후, 상기 플레이트를 HBSS-HEPES 완충액으로 4 번 세척하여 과량의 염료를 제거하고 각각의 웰 내에 50μl 완충액을 남겼다. 상기 플레이트를 이후 상기 FLIPR TETRA 장비 내에 놓고 37℃에서 평형화도록 방치하였다. AGN-211377를 TP 수용체를 과발현시키는 세포에 대해 0.1μM, 0.3μM, 1μM, 3μM, 10μM, 및 30μM; 또는 0.067μM, 0.1μM, 0.2μM, 0.3μM, 0.67μM, 및 1μM의 최종 농도가 되도록 각각의 웰에 25μl 부피로 부가하였다.

4.5 분 후, 25μl 부피로, 상응하는 수용체에 대한 상기 표준 작동제의 7-점 일련의 희석액을 인간 재조합 DP ₁ , EP ₁ , EP ₂ , EP ₃ , EP ₄ , FP, 및 IP 수용체를 발현하는 세포에 대한 10-배 일련의 희석 증분으로 최종 농도 10 ^-11 M 내지 10 ^-5 M에서 주입하였다. 인간 재조합 TP 수용체에 대한 표준 작동제에 대한 용량 범위는 10 ^-12 M 내지 10 ^-6 M이었다. 상기 표준 작동제에 대한 음성 대조군으로서 HBSS-HEPES 완충액을 사용하였다. 세포를 470-495nm에서 LED (발광 다이오드) 여기로 여기시키고 515-575nm에서 발광 필터를 통해 발광을 측정하였다. 어세이 플레이트를 FLIPR ^TETRA 을 사용하여 3.5 분 동안 판독하였다. 형광 강도의 피크 증가를 각각의 웰에 대해 기록하였다. 각각의 플레이트 상에서, 음성 대조군, 양성 대조군의 용량 반응, 및 각각의 용량에 대한 길항제-작동제의 공-치료는 삼중이었다. 표준 작동제는 다음과 같았다: DP =BW 245C, EP ₁ -EP ₄ =PGE ₂ , FP =17-페닐-PGF _2α IP =Cicaprost, 및 TP =U-46619. 약물을 함유하는 각각의 웰 내 피크 형광 변화를 10 ^-6 M에서 표준 작동제를 사용하여 비히클 대조군에 상대적으로 표현하였다 (양성 대조군). 농도-반응 곡선을 얻기 위해, 화합물을 소정의 농도 범위에 걸쳐 각각의 플레이트에서 삼중으로 시험하였다.

인간 재조합 프로스타노이드 수용체 DP ₂ 에 대한 Ca ²⁺ 신호 연구

Millipore에서 발생된 Chem-5 전매 특허숙주 세포주 내에서 안정하게 발현된 인간 DP ₂ 수용체에 대한 항-천식 활성을 모니터링하기 위해 FLIPR 기능적 어세이를 수행하였다. 표준 작동제 부가 이전에, 상기 화합물을 비히클 대조군 (HBSS-HEPES 완충액 내 1% 에탄올)와 함께 10μM에서 상기 어세이 웰을 통해 떨어뜨렸다. 상기 어세이 플레이트를 실온에서 10 분 동안 암소에서 인큐베이션하였다. 이후 상기 표준 작동제 PGD ₂ 의 10 ^-12 M 내지 10 ^-5 M의 8-점 일련의 희석 용량 반응을 수행하였다. 어세이 플레이트를 상기 FLIPR ^TETRA 을 사용하여 90 초 동안 판독하였다. 상기 형광 측정값을 수집하여 IC ₅₀ 값을 계산하였다. n=3을 얻도록 상기 어세이를 적어도 3 회 수행하였다.

모든 플레이트를 적절한 기준선 보정으로 처리하였다. 최대 형광 값을 내보냈다. n=1의 원료 데이터를 우선 비선형 회귀 곡선 피팅을 사용하여 Activity Base에 의해 처리하여 상기 양성 대조군 (=10 ^-6 M의 상기 표준 작동제)에 상대적인 각각의 데이터 점의 퍼센트 활성을 계산하였다. 이후 이 데이터의 n=3을 GraphPad Prism 4으로 내보내어 상기 표준 작동제의 평균 EC ₅₀ 을 계산하였고, 최저 상수를 0으로하고 최대 상수를 100으로 하는 제약으로, IC ₅₀ (상기 표준 작동제 활성의 절반을 저해하기 위해 필요한 상기 길항제의 농도)을 비선형 회귀 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다. Kb = [길항제 농도]/ (IC ₅₀ /EC ₅₀ -1) 의 계산. 길항이 검출되지 않았을 때 또는 Kb ≥10,000nM 일 때는, 상기 길항제는 활성이 없다 (NA)고 정의된다.

상기 시험의 결과가 아래에 표 1에 보고되어 있다.

표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 바람직한 화합물은 FP, DP, EP ₁ , EP ₃ , EP ₄ 및 TP 수용체에서는 특히 활성을 가지는 팬 길항제이지만 EP ₂ 및 IP 수용체에서는 훨씬 작게 활성이다. 따라서, 이들 화합물은 IP 및 EP ₂ 수용체 봉쇄와 관련되어 있는 잠재적 부작용 및 생물학적 제약 없이, FP, DP, EP ₁ , EP ₃ , EP ₄ 및 TP 수용체에 의해 매개된 질환 및 병태를 치료함에 있어서 유용하도록 만드는 생물학적 선택성 프로필을 가진다. 따라서, 본 발명 화합물의 화합물은 DP ₁ , FP, EP ₁ , EP _3, TP 및/또는 EP ₄ 수용체 매개된 질환 또는 병태를 치료하기 위해 투여될 수 있다.

예를 들면, 상기 병태 또는 질환은 염증과 관련될 수 있거나, 또는 DP ₁ , FP, EP ₁ , EP ₃ , TP 및/또는 EP ₄ 수용체 매개된 병태 또는 질환은 알레르기성 병태, 천식, 알레르기성 천식, 무호흡증, 알레르기성 결막염, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 포도막염 및 관련 장애, 아테롬성 동맥 경화증, 혈액 응고 장애, 골 장애, 암, 세포성 종양 변형, 만성 폐쇄성 폐 질환 및 폐 염증의 다른 형태, 폐렴, 울혈성 심부전, 당뇨병성 신증, 항-응고의 치료를 필요로 하는 질환 또는 병태, 골 형성 및 재흡수의 제어를 필요로 하는 질환, 생식 장애, 조산, 자궁내막증 녹내장, 고열병, 면역 및 자가면역 질환, 염증성 병태, 전이성 종양 성장, 편두통, 점액 분비 장애, 비충혈, 비염, 폐색성 혈관 질환, 안내압항진, 안내압저하, 골다공증, 류마티스성 관절염, 통증, 통년성 비염, � �� 울혈, 폐성 저혈압, 레이노병, 장기 이식에서의 거부 및 바이패스 수술, 호흡기 질환, 다모증, 비루, 쇼크, 수면 장애, 및 수면-각성 사이클 장애, 과활성 방광 장애로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있다.

상기 화합물은 백내장 제거 및 인공 렌즈 삽입, 안 이식 수술, 굴절교정 방사 각막절제술 및 다른 안과학적 레이저 수술에 대한 안과학에서 수술 보조제로서 또는 피부 절개 수반하는 수술, 통증 및 염증 및 반흔 형성/수술 후 켈로이드의 완화에서 수술 보조제로서, 근육 및 관절에서의 스포츠 손상 및 일반적 통증 및 통증을 치료하기 위해 투여될 수 있다. 바람직하게는, DP ₁ , FP, EP ₁ , EP3 , TP, 및/또는 EP ₄ 수용체 매개된 병태 또는 질환은 EP ₁ 및/또는 EP ₄ 수용체 매개된 병태 또는 질환이다.

바람직하게는, DP ₁ , FP, EP ₁ , EP ₃ , TP 및/또는 EP ₄ 수용체 매개된 병태 또는 질환은 알레르기성 질환, 예를 들면 피부학적 알레르기, 또는 눈 알레르기, 또는 호흡기 알레르기, 예를 들면 비충혈, 비염, 및 천식이다.

상기 병태 또는 질환은 통증과 관련될 수 있다.

상기 병태 또는 질환은 관절염, 편두통, 및 두통으로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있다.

상기 병태 또는 질환은 위장관과 관련될 수 있고, 여기서 상기 병태 또는 질환은 위궤양, 속쓰림, 환류 식도염, 미란성 식도염, 비-궤양 소화불량, 헬리코박터 필로리에 의한 감염, 후두염, 및 과민성 장 증후군일 수 있다.

상기 병태 또는 질환은 통각과민증 및 이통으로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있거나, 또는 상기 병태 또는 질환은 점액 분비와 관련될 수 있고, 여기서 상기 점액 분비는 위장관 이거나 코, 부비강, 목, 또는 폐에서 일어난다.

상기 병태 또는 질환 복부 경련과 관련되어 있고, 예를 들면 상기 병태 또는 질환은 과민성 장 증후군일 수 있다.

상기 병태 또는 질환은 출혈 장애, 또는 수면 장애, 또는 비만세포증일 수 있다.

상기 병태 또는 질환 체온 상승, 또는 안내압항진 및 녹내장, 또는 안내압저하와 관련될 수 있다.

상기 병태는 통증, 염증 및 다른 원치 않는 후유증을 치료하기 위한 수술 절차와 관련될 수 있고, 여기서 상기 수술 절차는 절개, 레이저 수술 또는 이식을 포함한다.

마지막으로, 상기 병태는 통증 및 염증 및 수술 후 반흔 및 켈로이드 형성과 관련될 수 있다.

본 발명의 조성물로 치료될 수 있는 다양한 질환 및 병태의 면에서 다음 식을 가지는 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드럭을 포함하는 약제학적 제품이 제공되고

여기서 R ₁ 는 CO ₂ R ₇ 및 CON(R ₇ )SO ₂ R ₇ 로 구성된 그룹으로부터 선택되고 여기서 R ₇ 는 H, 알킬 및 아릴로 구성된 그룹으로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬 및 아릴은 할로 또는 할로알킬, 예를 들면 플루오로 또는 플루오로알킬로 치환될 수 있고;

R ₂ 는 H, 알킬, 할로겐, OR ₇ 및 OC(R ₇ ) ₂ O로 구성된 그룹으로부터 선택되고; 및

R ₃ 는 H 및 알킬로 구성된 그룹으로부터 선택되고; 여기서 상기 제품은 포도막염, 알레르기성 질환, 천식, 알레르기성 천식, 알레르기성 비염, 아테롬성 동맥 경화증, 혈액 응고 장애, 골 장애, 암, 세포성 종양 변형, 만성 폐쇄성 폐 질환 및 폐 염증의 다른 형태, 울혈성 심부전, 당뇨병성 신증, 항-응고의 치료를 필요로 하는 질환 또는 병태, 골 형성 및 재흡수의 제어를 필요로 하는 질환, 생식 장애, 고열병, 괴저, 녹내장, 저체온증, 면역 및 자가면역 질환, 염증성 질환, 전이성 종양 성장, 편두통, 점액 분비 장애, 비충혈, 비염, 폐색성 혈관 질환, 안내압항진, 안내압저하, 골다공증, 통증, 통년성 비염, 폐 울혈, 폐성 저혈압, 레이노병, 장기 이식에서의 거부 및 바이패스 수술, 호흡기 질환, 류마티스성 관절염, 비루, 쇼크, 수면 장애, 수면-각성 사이클 장애, 스포츠 손상, 근육 통증 및 통증로 구성된 그룹� ��로부터 선택된 질환 또는 병태의 치료 또는 예방용으로, 및 통증, 염증 및 반흔/켈로이드 형성의 최소화를 위한 수술 보조제로서 포장 및 라벨링된다.

본 업계에서의 숙련가는 투여를 위해 본 명세서에서 개시되어 있는 상기 화합물을 그 자체가 본 업계에서 널리 공지된 약제학적으로 허용가능한 부형제와 함께 혼합될 수 있음을 쉽게 이해할 것이다. 상세하게는, 전신적으로 투여되는 약물은 경구 또는 전신 투여 또는 흡입용으로 적합한 산제, 환제, 정제 등으로서, 또는 용액, 유제, 현탁액, 에어로졸, 시럽 또는 엘릭서제로서 제제화될 수 있다.

고체 투여 형태에 대해, 비독성 고체 담체는 약제학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 폴리알킬렌 글리콜, 활석, 셀룰로스, 글루코스, 수크로스 및 마그네슘 카보네이트를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 상기 고체 투여 형태는 비코팅될 수 있고 또는 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시키고 이에 의해 장기간에 걸쳐 지속 작용을 제공하는 공지의 기술에 의해 코팅될 수 있다. 예를 들면, 시간 지연 물질 가령 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트가 사용될 수 있다. 상기 고체 투여 형태는 제어 방출용 삼투성 치료 정제를 형성하기 위해 미국 특허 제4,256,108호; 제4,166,452호; 및 제4,265,874호에서 기술되어 있는 기술에 의해 또한 코팅될 수 있다. 액체 약제학적으로 투여가능한 투여 형태는, 예를 들면, 담체, 가령 예를 들면, 물, 식염수, 수성 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 내 하나 이상의 본 발명의 화합물 및 임의의 약제학적 보조제의 용액 또는 현탁액을 포함하고 이에 의해 용액 또는 현탁액을 형성한다. 필요하다면, 투여되는 상기 약제학적 조성물은 소량의 비독성 보조 물질 가령 습윤제 또는 유화제, pH 완충제 등을 또한 함유할 수 있다. 그러한 보조 약제의 대표적인 예시는 소듐 아세테이트, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민, 소듐 아세테이트, 트리에탄올아민 올레에이트, 등이다. 그러한 투여 형태를 제조하는 실제 방법은 공지되어 있거나, 또는 본 업계에서의 숙련가에게 명백하고; 예를 들면, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 16th Edition, 1980 참조. 투여되는 상기 제형의 조성물은 어떤 경우에도, 소정의 치료 효과를 제공하기 위해 효과적인 하나 이상의 현재 유용한 화합물의 양을 함유한다.

비경구 투여는 일반적으로 피하, 근육내 또는 정맥내 주사를 특징으로 한다. 주사가능한 제형은 종래의 형태로, 액체 용액 또는 현탁액, 주사 이전 액체 내 용액 또는 현탁액용으로 적절한 고체 형태, 또는 유제로서 제조될 수 있다. 적절한 부형제는, 예를 들면, 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등이다. 또한, 필요하다면, 투여되는 상기 주사가능한 약제학적 조성물은 또한 소량의 비독성 보조 물질 가령 습윤 또는 유화 약제, pH 완충 약제 등을 함유할 수 있다.

투여되는 현재 유용한 화합물 또는 본 발명의 화합물의 양은 물론 치료 효과 또는 요망되는 효과, 치료되는 특이적 포유동물, 상기 포유동물의 질환의 경중도 및 특성, 투여 방식, 상기 특정의 화합물 또는 사용되는 화합물의 강도 및 약물동력학, 및 처방 의사의 판단에 따라 다르다. 현재 유용한 화합물 또는 화합물들의 치료적으로 효과적인 투여량은 바람직하게는 약 0.5 ng/kg/일 내지 약 250 mg/kg/일 또는 약 1 ng/kg/일 내지 약 100 mg/kg/일의 범위 내이다.

안과용 적용에 대해, 주요 비히클로서 생리학적 식염수 용액을 사용하여 용액을 종종 제조한다. 안과용 용액은 바람직하게는 적절한 완충액 시스템으로 편안한 pH에서 유지되어야만 한다. 상기 제형은 또한 종래의, 약제학적으로 허용가능한 보존제, 안정화제 및 계면활성제를 함유한다.

본 발명의 약제학적 조성물 내에 사용될 수 있는 보존제는 벤잘코늄 클로라이드, 클로로부탄올, 티메로살, 페닐머큐릭 아세테이트 및 페닐머큐릭 나이트레이트를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 유용한 계면활성제는 예를 들면, Tween 80이다. 유사하게, 본 발명의 안과용 제제 내에 다양한 유용한 비히클이 사용될 수 있다. 이들 비히클은, 폴리비닐 알콜, 포비돈, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, 폴록사머, 카복시메틸 셀룰로스, 히드록시에틸 셀룰로스 및 정제수를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

필요 또는 편리에 따라 긴장성 조정제가 부가될 수 있다. 긴장성 조정제는, 염, 특히 소듐 클로라이드, 포타슘 클로라이드, 만니톨 및 글리세린, 또는 어떤 다른 적절한 안과적으로 허용가능한 긴장성 조정제를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

결과로서 얻어진 제제가 안과적으로 허용가능한 한, pH를 조정하기 위한 다양한 완충액 및 수단이 사용될 수 있다. 따라서, 완충제는 아세테이트 완충제, 시트레이트 완충제, 포스페이트 완충제 및 보레이트 완충제를 포함한다. 필요에 따라 이들 제제의 pH를 조정하기 위해 산 또는 염기가 사용될 수 있다.

유사하게, 본 발명에서 사용하기 위한 안과적으로 허용가능한 항산화제는, 소듐 메타비설파이트, 소듐 티오설페이트, 아세틸시스테인, 부틸화 히드록시아니솔 및 부틸화 히드록시톨루엔을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.

안과용 제제 내에 포함될 수 있는 다른 부형제 성분은 킬레이트제이다. 유용한 킬레이트제는 에덴테이트 디소듐이지만, 다른 킬레이트제도 그 대신 또는 그와 함께 사용될 수 있다.

외용 용도를 위해, 본 발명의 화합물을 함유하는 크림, 연고, 겔, 용액 또는 현탁액 등이 사용된다. 외용 제제는 일반적으로 약제학적 담체, 공용매, 유화제, 투과촉진제, 보존제 시스템, 및 연화제를 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물의 실제 투여량은 특정의 화합물, 및 치료될 병태에 따라 다르고, 적절한 투여량의 선택은 숙련된 기술자의 지식의 충분히 이내이다.

본 발명은 상기 예시된 구체예에 의해 범위가 제한되어서는 안되고, 예시된 구체예는 본발명의 특정 양상의 예시로서 단지 의도된다. 본명세서에 개시된 것 이외에 본발명의 다양한 변형도, 최초로 출원된 청구범위를 포함하는 명세서를 주의깊게 읽음에 의해, 본 업계에서의 숙련가에게 명백할 것이다. 특히, 본 발명은 본 명세서에서 개시되어 있는 상기 N-알킬-2-(1-(5-치환-2-(3-옥소-3-(트리플루오로메틸설폰아미도)프로필)벤질)피롤리딘-2-일)옥사졸-4-카복사미드 화합물에 의해 예시되었지만, 상응하는, 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산 알킬 에스테르 및 상응하는 3-(2-{2R-[4-(4-알킬카바모일)-옥사졸-2-일]-피롤리딘-1-일메틸}-4-치환-페닐)-프로피온산, 예를 들면 상기 일반식의 화합물, 더불어 그의 비치환 유도체도 본 발명의 방법의 실시에서 사용될 수 있다.

모든 그러한 변형은 첨부된 치료 방법 청구항 및 그의 패키지 청구항의 범위 내에 속함이 의도된다