一种含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物及其制备方法

申请号 CN201510666894.2 申请日 2015-10-15 公开(公告)号 CN105249326A 公开(公告)日 2016-01-20
申请人 维尔信科技(潍坊)有限公司; 发明人 郑中立; 张玉娟;
摘要 本 发明 公开了一种含有 益生菌 和中药提取物的 发酵 果蔬组合物及其制备方法,所述发酵果蔬组合物包含发酵果蔬、发酵或者未发酵的中药或中药提取物、由一种或多种低聚糖组成的 益生元 、益生菌和辅料,所述益生菌包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的一种或几种;所述果蔬包括南瓜、冬瓜、猕猴桃、大豆、木瓜、紫薯、胡萝卜、板栗、山药、玛卡果、薏米、茯苓、当归、葛根、莲子中的一种或几种的组合;所述中药或中药提取物包括黄芪、橄榄叶、葡萄籽、生姜、栀子、锯叶棕、南瓜籽、石榴籽、石榴皮、覆盆子、肉苁蓉、北美升麻、红花苜蓿或其提取物中的一种或几种。本发明是有调节肠道菌群、增强免疫 力 和改善睡眠功能等功效的食品、药物或保健品。
权利要求

1.一种含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,其特征在于:所述发酵果蔬组合物包含发酵果蔬、发酵或者未发酵的中药或中药提取物、由一种或多种低聚糖组成的益生元、益生菌和辅料,所述益生菌包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的一种或几种。
2.如权利要求1所述的含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,其特征在于:所述发酵果蔬采用可食用的野生或种植的植物的根、茎、叶、花、果实以及真菌类的子实体中的一种或几种的组合,经所述益生菌菌种发酵后得到。
3.如权利要求2所述的含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,其特征在于:所述果蔬包括南瓜、冬瓜、猕猴桃、大豆、木瓜、紫薯、胡萝卜、板栗、山药、玛卡果、薏米、茯苓、当归、葛根、莲子中的一种或几种的组合。
4.如权利要求1所述的含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,其特征在于:所述中药或中药提取物包括黄芪、橄榄叶、葡萄籽、生姜、栀子、锯叶棕、南瓜籽、石榴籽、石榴皮、覆盆子、肉苁蓉、北美升麻、红花苜蓿或其提取物中的一种或几种。
5.如权利要求1所述的含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,其特征在于:所述益生元包括菊粉、低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、低聚乳果糖、大豆低聚糖、苏糖、籽糖、乳糖、帕拉金糖、低聚龙胆糖中的一种或几种。
6.如权利要求1所述的含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,其特征在于:所述乳杆菌属包括嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、保加利亚乳杆菌、德式乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格式乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌;所述双歧杆菌属包括青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、两双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌;所述链球菌属包括嗜热链球菌。
7.如权利要求1所述的含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,其特征在于:所述辅料包括基酸、维生素、白糖、脱脂奶粉、食用盐、海藻酸钠、食用、食用小苏打中的一种或几种,还包括糊精和环糊精中的一种或两种。
8.如权利要求7所述的含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,其特征在于:所述氨基酸包括赖氨酸、精氨酸、苏氨酸中的一种或几种;所述维生素包括维生素C、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B12中的一种或几种。
9.如权利要求1所述的含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,其特征在于每2g所述发酵果蔬组合物中:
含有发酵果蔬粉0.1~1g;
所述发酵或未发酵的中药提取物包括黄芪提取物0~1g、橄榄叶提取物0~1g、葡萄籽提取物0~1g、生姜提取物0~1.2g、栀子提取物0~1.2g、锯叶棕提取物0~1.2g、南瓜籽提取物0~1.2g、石榴籽提取物0~1g、石榴皮提取物0~1g、覆盆子提取物0~1g、肉苁蓉提取物0~1g、北美升麻提取物0~0.8g、红花苜蓿提取物0~0.9g,上述各中药提取物至少有一种组分的含量不为0g;
所述益生元包括菊粉0~1g、低聚果糖0~1g、低聚木糖0~1g、低聚半乳糖0~1g、低聚异麦芽糖0~1g、低聚乳果糖0~1g、大豆低聚糖0~1g、水苏糖0~1g、棉籽糖0~
1g、乳酮糖0~1g、帕拉金糖0~1g、低聚龙胆糖0~1g,上述各种益生元至少有一种组分的含量不为0g;
6
所述发酵果蔬组合物中活菌总数≥10cfu/g。
10.如权利要求9所述的含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,其特征在于:所述黄芪提取物中黄芪多糖不低于5%,黄芪甲苷不低于0.01%;所述橄榄叶提取物中橄榄苦苷的含量不低于4%;所述葡萄籽提取物中原花青素含量不低于5%;所述生姜提取物的规格不低于100:1的提取比例;所述栀子提取物中番红花总苷的含量不低于0.5%、栀子苷的含量不低于0.5%;所述锯叶棕提取物中脂肪酸的含量不低于5%;所述南瓜籽提取物的规格不低于100:1的提取比例;所述石榴籽提取物中多酚的含量不低于4%;所述石榴皮提取物中鞣花酸的含量不低于1%;所述覆盆子提取物的规格不低于100:1的提取比例;所述肉苁蓉提取物的规格不低于100:1的提取比例;所述北美升麻提取物的规格不低于100:1的提取比例;所述红花苜蓿的规格不低于100:1的提取比例。
11.如权利要求1至10任一项所述的含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,其特征在于:所述组合物与一种或多种医药上可接受的载体或赋形剂或稀释剂按照适当的比例混合,制成冲剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、乳剂或混悬剂;或添加适量甜味剂、蜂蜜、花粉中的至少一种,制成方便、快速食品。
12.如权利要求1所述的一种含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物的制备方法,其特征在于包含以下步骤:
A)菌种活化培养:将活化好的益生菌菌种接种到液体培养基中,40~44℃静置培养
22~28h,备用;所述益生菌菌种包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的一种或几种;
B)发酵:将辅料溶于水中,82~86℃剪切15~20min,然后将果蔬和中药或者中药提取物加入,混合均匀,调节pH值为6.3~6.8,在胶体磨内58~62℃、18~20MPa匀质10~
15min;然后100~105℃灭菌15~20min,灭菌完成后冷却至42~45℃,接种步骤(A)得到的活化菌液,于40~44℃发酵4~7h,至pH降低到4.3~4.6时结束发酵,得到发酵液;
C)喷雾干燥:将所述发酵液经喷雾干燥设备进行喷雾干燥,得到发酵粉;所述喷雾干燥设备的进口温度为170~200℃,出口温度为85~95℃;
D)制备益生菌冷冻干燥粉:将所述益生菌菌种分别经多层微囊包埋处理,然后经冷冻干燥,分别干燥成冷冻干燥粉,所述益生菌菌种包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的一种或几种;
E)组合物制备:将所述发酵液喷雾干燥成粉,加入步骤D)的益生菌冷冻干燥粉,然后添加益生元得到所述发酵果蔬组合物。
13.如权利要求1所述的一种含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物的制备方法,其特征在于包含以下步骤:
A)菌种活化培养:将活化好的益生菌菌种接种到液体培养基中,40~44℃静置培养
22~28h,备用,所述益生菌菌种包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的一种或几种;
B)发酵:将辅料溶于水中,82~86℃剪切15~20min,然后将果蔬加入,混合均匀,调节pH值为6.3~6.8,在胶体磨内58~62℃、18~20MPa匀质10~15min;然后100~
105℃灭菌15~20min,灭菌完成后冷却至42~45℃,接种步骤(A)得到的活化菌液,于
40~44℃发酵4~7h,至pH降低到4.3~4.6时结束发酵,得到发酵液;
C)喷雾干燥:将所述发酵液经喷雾干燥设备进行喷雾干燥,得到果蔬发酵粉;所述喷雾干燥设备的进口温度为170~200℃,出口温度为85~95℃;
D)制备益生菌冷冻干燥粉:将所述益生菌菌种分别经多层微囊包埋处理,然后经冷冻干燥,分别干燥成冷冻干燥粉,所述益生菌菌种包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的一种或几种;
E)组合物制备:将所述发酵液喷雾干燥成粉,加入步骤D)的益生菌冷冻干燥粉,然后添加中药或者中药提取物、益生元得到所述发酵果蔬组合物。

说明书全文

一种含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物及其制备

方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种果蔬组合物,具体涉及一种含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物。

背景技术

[0002] 乳酸菌是指发酵糖类主要产物为乳酸的一类革兰氏阳性细菌的总称,广泛存在于人、畜、禽肠道、许多食品、物料及少数临床样品中。乳酸菌能提高食品的营养价值,改善食品味,提高食品保藏性和附加值,同时,乳酸菌的生理功能与机体的生命活动息息相关,乳酸菌能够调节机体胃肠道正常菌群、保持微生态平衡,提高食物消化率和生物价,降低血清胆固醇,控制内毒素,抑制肠道内腐败菌生长繁殖和腐败产物的产生,制造营养物质,刺激组织发育,从而对机体的营养状态、生理功能、细胞感染、药物效应、毒性反应、免疫反应、肿瘤发生、衰老过程和突然的应急反应等产生作用。因此,乳酸菌的特殊生理活性和营养功能,日益引起人们的关注。
[0003] 人类面对抗生素的日渐无能为的现状,正在不断寻求新的更加有效的生物抗菌产品,世界发达国家首先认识并开创了以使用乳酸菌为代表的免疫疗法革命。瑞典科学家研究发布的结果是,治疗胃和大肠炎症时直接喝乳酸菌比用抗生素更好,危险性非常低。同时,近年来的大量研究表明,人体内的低度、全身性的慢性炎症是衰老和老年性疾病(如:前列腺疾病、更年期综合症)、肥胖、便秘、糖尿病、冠心病以及很多癌症的重要诱发因素。重新建立合理的菌群结构,消除慢性炎症,就能修复我们的身体。微生态研究表明,衰老、老年性疾病以及癌症等一些疾病,均可导致菌群失调,进而促使疾病发生发展。
[0004] 发酵中药,是对传统中药的重大创新,真正实现了中药疗效提速、减毒增效,改善口感,是对传统中药产业的革命,开创了中药的新时代。通过益生菌的生长代谢和生命活动来炮制中药,可以比一般的炮制手段更大幅度的改变药性,提高疗效,降低毒副作用,扩大适应性。一方面,益生菌发酵可形成多种具有良好药效的次生代谢产物,另一方面,益生菌的次生代谢产物可以和中药或者果蔬中的成分发生反应形成新的化合物,或益生菌能以中药或果蔬中的有效成分为前体,经其代谢形成新的化合物。益生菌次生代谢产物能和中药或果蔬中的有效成分发生复方、协同作用。益生菌在中药和果蔬的存在的特殊环境中也可能发生新的代谢反应,因为中药和果蔬的某些物质成分可能对益生菌的生长和代谢有促进或抑制的作用,从而改变益生菌的代谢途径,从而形成新的成分或改变各成分的相互比例,益生菌的分解作用有可能将中药中的有毒物质进行分解,从而减低药物的毒副作用。也有可能经益生菌的分解作用使原来不易消化吸收的物质变得易于吸收,由于微生物生长主要消耗的是动植物蛋白质、糖等常规物质,有因此可对中药和果蔬中的有效成分有浓缩作用。
[0005] 随着科学的发展,人们在长期的防病治病的临床与研究中发现日常食用的果蔬中的多种成分均有很好的保健、治疗功效。其所含的蛋白质、基酸、脂肪、化合物、维生素和矿物质等,都是人体所必需的营养成分。目前市场上,发酵果蔬产品,和发酵中药产品,比比皆是,但是将果蔬和中药有机结合,混合发酵的功能性产品还比较少。
[0006] 据FDA/WHO专家针对《食品用益生菌评价指南》和益生菌的保健功能及其作用机理讨论认为,益生菌有利于身体健康,特别对消化道系统,免疫系统和心血管系统有健康作用。为了预防健康状态。建议每天服用益生菌。
[0007] 目前,市场上益生菌发酵果蔬类产品和益生菌发酵中药类产品,已经不少研究和产品,然而却都存在各自的弊端,发酵果蔬类产品,营养全面,但其保健功效偏低;发酵中药类产品有其一定的治疗预防效果,但其口感不好,疗程长,见效缓慢;同时,益生菌产品也比比皆是,主要是单纯含有活的益生菌以及益生菌菌体的制剂,功效单一。

发明内容

[0008] 本发明所要解决的第一个技术问题是:针对现有技术存在的不足,提供一种含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,将果蔬和中药进行有机组合,经益生菌发酵后,甘甜可口,营养全面,便于消化和吸收,服用方便,结合益生菌的肠道微生态系统调理功能,是一种集食疗、预防治疗、调理三重功效于一体的组合物。
[0009] 本发明所要解决的第二个技术问题是:针对现有技术存在的不足,提供一种含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物的制备方法,通过将果蔬和中药进行有机组合,经益生菌发酵,得到的组合物甘甜可口,营养全面,便于消化和吸收,服用方便,结合益生菌的肠道微生态系统调理功能,是一种集食疗、预防治疗、调理三重功效于一体的组合物。
[0010] 为解决上述第一个技术问题,本发明的技术方案是:
[0011] 一种含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,所述发酵果蔬组合物包含发酵果蔬、发酵或者未发酵的中药或中药提取物、由一种或多种低聚糖组成的益生元、益生菌菌种和辅料,所述益生菌菌种包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的一种或几种。
[0012] 作为一种优选的技术方案,所述发酵果蔬采用可食用的野生或种植的植物的根、茎、叶、花、果实以及真菌类的子实体中的一种或几种的组合经所述益生菌菌种发酵后得到。
[0013] 作为进一步优选的技术方案,所述果蔬包括南瓜、冬瓜、猕猴桃、大豆、木瓜、紫薯、胡萝卜、板栗、山药、玛卡果、薏米、茯苓、当归、葛根、莲子中的一种或几种的组合。
[0014] 作为一种优选的技术方案,所述中药或中药提取物包括黄芪、橄榄叶、葡萄籽、生姜、栀子、锯叶棕、南瓜籽、石榴籽、石榴皮、覆盆子、肉苁蓉、北美升麻、红花苜蓿或其提取物中的一种或几种。
[0015] 作为一种优选的技术方案,所述益生元包括菊粉、低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、低聚乳果糖、大豆低聚糖、水苏糖、籽糖、乳糖、帕拉金糖、低聚龙胆糖中的低聚糖中一种或几种。
[0016] 作为一种优选的技术方案,所述乳杆菌属包括嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、保加利亚乳杆菌、德式乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格式乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌中的一种或几种组合;所述双歧杆菌属包括青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、两双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌中的一种或几种组合;所述链球菌属包括嗜热链球菌。
[0017] 作为一种优选的技术方案,所述辅料包括氨基酸、维生素、白糖、食用盐、海藻酸钠、食用、食用小苏打中的一种或几种,还包括糊精和环糊精中的一种或两种。
[0018] 作为进一步优选的技术方案,所述氨基酸包括人体必需氨基酸和半必需氨基酸中一种或几种,如:赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、精氨酸、组氨酸等;所述维生素包括维生素B族、维生素C、维生素E中的一种或几种。如:维生素B2、维生素B3、维生素B12、维生素E、维生素C等。
[0019] 作为一种优选的技术方案,每2g所述发酵果蔬组合物中:
[0020] 含有发酵果蔬粉0.1~1g;
[0021] 所述发酵或未发酵的中药提取物包括黄芪提取物0~1g、橄榄叶提取物0~1g、葡萄籽提取物0~1g、生姜提取物0~1.2g、栀子提取物0~1.2g、锯叶棕提取物0~1.2g、南瓜籽提取物0~1.2g、石榴籽提取物0~1g、石榴皮提取物0~1g、覆盆子提取物0~1g、肉苁蓉提取物0~1g、北美升麻提取物0~0.8g、红花苜蓿提取物0~0.9g,上述各中药提取物组分的含量不能同时为0g,且至少有一种组分的含量不为0g;
[0022] 所述益生元包括菊粉0~1g、低聚果糖0~1g、低聚木糖0~1g、低聚半乳糖0~1g、低聚异麦芽糖0~1g、低聚乳果糖0~1g、大豆低聚糖0~1g、水苏糖0~1g、棉籽糖
0~1g、乳酮糖0~1g、帕拉金糖0~1g、低聚龙胆糖0~1g,上述各种益生元组分的含量不能同时为0g,且至少有一种组分的含量不为0g;
[0023] 作为进一步优选的技术方案,所添加的低聚异麦芽糖、低聚木糖、低聚果糖的纯度均不低于9.5%,低聚半乳糖纯度不低于9.8%,大豆低聚糖的纯度不低于8%,菊粉的纯度不低于9%,低聚乳果糖不低于9.9%,水苏糖不低于9.5%,棉籽糖不低于9.9%,乳酮糖不低于9.9%,帕拉金糖不低于9.9%,耦合果糖不低于9.9%,低聚龙胆糖不低于9.9%。
[0024] 所述发酵果蔬组合物中活菌总数≥106cfu/g。
[0025] 作为进一步优选的技术方案,所述黄芪提取物中黄芪多糖不低于5%,黄芪甲苷不低于0.01%;橄榄叶提取物中橄榄苦苷的含量不低于4%;所述葡萄籽提取物中原花青素含量不低于5%;所述生姜提取物的规格不低于100:1的提取比例;所述栀子提取物中番红花总苷的含量不低于0.5%、栀子苷的含量不低于0.5%;所述锯叶棕提取物中脂肪酸的含量不低于5%;所述南瓜籽提取物的规格不低于100:1的提取比例;所述石榴籽提取物中多酚的含量不低于4%;所述石榴皮提取物中鞣花酸的含量不低于1%;所述覆盆子提取物的规格不低于100:1的提取比例;所述肉苁蓉提取物的规格不低于100:1的提取比例;所述北美升麻提取物的规格不低于100:1的提取比例;所述红花苜蓿的规格不低于100:1的提取比例。
[0026] 南瓜是葫芦科,一年生草本植物,据中国传统中医典籍记载:进食南瓜后“有补中(脾胃)益气之效”(《本草纲目》),“利小便”(明.《滇南本草》)。现代医学研究发现南瓜含有多种生理活性物质,具有很高的药用价值。南瓜已被国内外公认为特级保健品,是集食品、保健品、药品为一身的营养保健品,其作用和用途相当广泛。对糖尿病、高血糖、高血压、高血脂、肥胖症等有特殊的疗效;对胃溃疡、动脉粥样硬化等有良好的保健作用。可促进肝肾细胞再生,有较好的防癌效果,同时对改善便秘效果显著,是理想的天然保健食疗品[0027] 冬瓜味甘淡,性寒,清香爽口,具有利水、清热、化痰、解渴等功效,尤其是维生素C的含量较多,还含有多种矿物盐,如、磷、等。且含盐量高,钠盐含量低,所以最适合高血压、肾脏病、浮肿病等患者食用。含有大量的食物纤维能改善血糖水平,有治疗糖尿病的功效,还能降低体内胆固醇,降血脂,防止动脉粥样硬化。
[0028] 猕猴桃是一种营养价值丰富的水果,具有多重功效和作用,被人们称为果中之王。它含有丰富的矿物质,包括丰富的钙、磷、铁,还含有胡萝卜素和多种维生素,对保持人体健康具有重要的作用。猕猴桃能有效防治、预防大便秘结、防治结肠癌及动脉硬化,红心猕猴桃含有较多的膳食纤维和寡糖、蛋白质分解酵素。可快速清除体内堆积的有害代谢产物,防治、预防大便秘结、防治结肠癌及动脉硬化。
[0029] 大豆营养全面,含量丰富,其蛋白质的含量不仅高,而且质量好。大豆蛋白质的氨基酸组成和动物蛋白相似,其中氨基酸比较接近人体需要的比例,所以容易消化吸收。此外大豆中含有大豆异黄酮,大豆异黄酮是黄酮类化合物,是大豆生长中形成的一类次级代谢产物,是一种生物活性物质。是植物性化合物的其中一种形式,是从非转基因大豆精制而成的生物活性物质,是一种具有多种重要生理活性的天然营养因子,是纯天然的植物雌激素,容易被人体吸收,能迅速补充营养。其分子量及结构都与人体女性荷尔蒙相似,所以也称为植物性雌激素。对于女性荷尔蒙过高者,具有降低危害之影响;对于女性荷尔蒙不足者,又能补充以缓和女性荷尔蒙不足之现象。依据临床研究显示,大豆异黄酮具有多重的健康益处,包括改善更年期症状、改善更年期骨质疏松、降低心血管疾病以及抗化等功能。
[0030] 木瓜别名番木瓜、万寿果,属蔷薇科,是我国南方热带水果之一。木瓜具有很好的保健作用,是抗病保健佳果,它的营养丰富,含有较多的糖分、有机酸、矿物质如K、Ca、P、Mg等和多种维生素,其中含有胡萝卜素高达20mg/100g,为热带水果之首。此外,木瓜还有很多要用价值,有健脾消食、通乳、杀虫抗痨等功效。此外,它独有番木瓜碱具有抗肿瘤功效,对淋巴性白血病细胞具有强烈的抗癌活性。
[0031] 紫薯富含蛋白质、淀粉、果胶、纤维素、氨基酸、维生素及多种矿物质,同时还富含硒元素和花青素。紫薯营养丰富具特殊保健功能,其中的蛋白质氨基酸都是极易被人体消化和吸收的。其中富含的维生素A可以改善视力和皮肤的粘膜上皮细胞,维生素C可使胶元蛋白正常合成,防治坏血病的发生,花青素是天然强效自由基清除剂。
[0032] 胡萝卜含有丰富的维生素,尤其含有大量的类胡萝卜素,且类胡萝卜素中以β-胡萝卜为主,能提供丰富的维生素A,具有促进机体正常生长和繁殖、维持上皮组织、防止呼吸道感染与保持视力正常等功能;胡萝卜含琥珀酸钾,有助于防止血管硬化,降低胆固醇,对防治高血压有一定效果。还含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、钙、磷、铁等。能预防维生素A缺乏症,增强夜间视力,提高人体免疫力,有研究表明胡萝卜具有防癌,抗癌的作用。
[0033] 黄芪具有增强免疫力,增强能量,抗疲劳,抗突变,保肝,抑制破骨细胞的作用。黄芪多糖具有降血脂,即降低胆固醇和甘油三酯、升高高密度脂蛋白的作用;能够预防和治疗心脑血管疾病;黄芪甲苷具有显著降低血糖、糖化血红蛋白和尿蛋白的作用,可降低肾皮质和血清中的AGEs,显示黄芪甲苷具有抗氧化作用,并对糖还原酶有抑制作用,还有抑制细胞增生、减轻肾脏肥大的作用。
[0034] 国内外大量研究说明番红花主要成份为水溶性胡萝卜素,亦称番红花总苷、番红花素、西红花总苷、西红花素或桅子黄素,大量的动物实验研究证明,番红素能降低胆固醇、甘油三醋、防治动脉粥样硬化,冠心病、治疗脑水肿、骨髓损伤,乳头瘤、关节炎及高血压等。此外,番红花素最初在欧洲用来治疗头痛、抑郁症。番红花素在栀子中含量较高,最近大量新的科学研究发现水溶性的番红花素能够有效地清除老年痴呆脑细胞纤维缠结、Ab沉积,对于模拟老年痴呆的小鼠有恢复记忆的显著疗效。并且对于多种癌细胞都有很显著的杀伤作用。番红花素对于保护大脑及中枢神经的包膜有显著的作用。因此番红花素对于老年保健有着极其重要的作用。中药栀子里面还还有大量的栀子苷,栀子苷有多种用途,不同条件的发酵,可以制成天然食用着色剂栀子蓝和栀子红,也是用于治疗神经系统、心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病的原料药物。栀子苷对缺血性脑神经损伤中的自由基损伤具有很好的拮抗作用。
[0035] 1994年日本科学家就首次从生姜中分离出的双萜类成分(环氧烯二醇、没食子内酯)除抗乙酰胆碱血清作用外,还具有比较明显的降胆碱作用。生姜提取物还具有健胃抗胃溃疡、利胆、保肝、强心、抑制血小板聚集、防晕、抗肿瘤、中枢抑制、增强免疫力、抗菌、杀虫、消炎之作用,还具有很强的抗氧化能力。
[0036] 橄榄叶提取物是内服的广谱抗菌成分。目前为止在橄榄叶中鉴定出最具活性的物质是橄榄苦甙,油橄榄苦甙是一种活性成份,具有强力的抗细菌和抗病毒特性、还有极强的抗氧化能力。它可以阻止细胞和病毒的生长,并刺激免疫系中重要细胞的活性,以抵抗感染。对皰疹、膀胱和微菌感染也极为有效。它有抗氧化能力,能减轻低密度脂蛋白的氧化程度,预防冠心病,动脉粥样硬化的发生。有舒缓血管平滑肌,降低血压的能力。
[0037] 葡萄籽提取物具有“原花青素OPC”的抗氧化效果,是维生素C和维生素E的50-70倍。超强的抗氧化效率具有清除自由基、提高人体免疫力的强力效果。葡萄籽精华含丰富生物类黄酮、是强力的精华分子,用于对抗自由基(游离基)与维护微丝血管的健康。自由基是造成老化及诸多疾病的重要原因之一,具估计大约80%-90%的老化性、退化性疾病都与自由基有关,所以,葡萄籽提取物对人体抗氧化,提高免疫力有极佳的效果。
[0038] 锯叶棕,原产于美国,又名锯棕叶或锯棕榈,学名为“沙巴棕”,属于棕榈科灌木植物,通常生长在南北美洲气候炎热的地区,其果实为锯叶棕果,可供药用,是美洲印第安人的民间传统药物,1908年锯叶棕就被收载美国药典。锯叶棕提取物富含各种脂肪酸和挥发油,主要有油酸、亚油酸、月桂酸、棕榈酸、亚麻油酸、菜油甾醇、豆甾醇等。国外药理资料表明,“二氢睾酮”是刺激前列腺炎和前列腺增生产生肥大症的主要因素,锯叶棕果实提取物能有效抑制人体内“5a-还原酶活性”,可防止睾酮被还原成“二氢睾酮”,减轻前列腺组织的增生,减少肥大症的发生;锯叶棕提取物通过抑制环氧合酶与脂氧化酶的活性,减少白三烯,前列腺素等炎症介质的生成,从而起到非特异性抗炎作用;具有肾上腺素拮抗作用和钙阻断作用,从而达到解痉作用。国内外临床试验也证明,锯叶棕果实提取物还能激活免疫,在尿路粘膜分别产生IgA,IgG,IgC三种免疫抗体,形成三层防护膜,对良性前列腺增生(BPH)疗效确切,起效快,而且不影响患者雌雄激素水平,不损害患者的性生活,没有明显毒副作用。
[0039] 肉苁蓉:素有“沙漠人参”之美誉,具有极高的药用价值,是中国传统的名贵中药材。肉苁蓉味甘、性温,具有补肾壮阳、填精补髓、养血润燥、悦色延年等功效。肉苁蓉药食两用,长期食用可增加体力、增强耐力以及抵抗疲劳,同时又可以增强人类及动物的性能力及生育力。比较适合体虚便秘、产后便秘、病后便秘及老年便秘等人群食用。
[0040] 南瓜籽油含有丰富的锌及其他营养物质,是目前世界公认的最优秀的药食两用植物油,由于对男性具有多方面的保健作用,被人们誉为“男性的守护神”。研究证实,微量元素锌与慢性前列腺炎的发生和发展有着密切的关系,经研究证实锌是前列腺液中强力抗菌因子(PAF)的主要成分,参与前列腺的抗菌防御机制。对于40岁以上的中年人而言,经常食用南瓜籽对确保整体健康非常重要。南瓜籽含丰富的脂肪酸,含量达19.3%,主要为亚麻酸、油酸、硬脂酸及甘油酸等人体必需脂肪酸,蛋白质及维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素C及胡萝卜素等物质的含量也很高,含有丰富的锌,可补充人体不足,防治前列腺肥大;南瓜瓤可清热利湿、解毒拔弹。
[0041] 北美升麻:也叫黑升麻,是一种灌木,主要生长在在北美洲等地区,含升麻素,於黄酮素等。从野地上收割时,根为黑色,而其根茎可用于药物上。十九世纪的美国科学家将黑升麻用于发烧、经痛、关节炎及不眠症的治疗上。北美印地安人利用这种药草来治疗风湿症肿痛发炎,以及各种妇科毛病;而以前的人一向用它来催经、舒缓经痛,并帮助生产顺利。
[0042] 红花苜蓿在医学上被用来治疗很多疾病,包括癌症、乳腺炎(乳房发炎)、关节不适、黄疸、支气管炎、间歇性咳嗽、哮喘和皮肤发。红花苜蓿能通过促进小便和黏液分泌来“净化”血液,改善身体循环和刺激胆汁的分泌。最近,红花苜蓿中的特殊物质:异黄酮,已经被分离并证实其对于一系列疾病的治疗功效。红花苜蓿是很多有价值的营养素的来源,包括钙、铬、镁、烟碱酸、磷、钾、硫胺素和维生素C。同时被认为是异黄酮的最丰富来源之一。红花苜蓿异黄酮的专提取物的一些研究证实它可能有效地减少更年期妇女的潮热症状。
更年期使妇女更容易患上骨质疏松症。一些研究发现红花苜蓿异黄酮的专门提取物可以减缓绝经前和绝经后妇女的骨骼损失甚至增加她们的骨骼矿物的密度。
[0043] 作为更加优选的技术方案之一,每2g该组合物中含有:发酵果蔬粉0.1-1g,发酵或未发酵的锯叶棕提取物0.15-1.2g、南瓜籽提取物0.15-1.2g,发酵完全后,将发酵液经喷雾干燥设备干燥成粉后,添加低聚异麦芽糖0.1-1g、低聚果糖0.1-1g、低聚木糖0.1-1g、6
低聚半乳糖0.1-1g,添加活菌数≥10的保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的冷冻干燥菌粉,混合脱脂奶粉、麦芽糊精及其他辅料,复配成组合物。该组合物能有效调节肠道菌群,治疗前列腺炎,增强前列腺免疫力。
[0044] 作为更加优选的技术方案之二,每2g该组合物中含有:发酵果蔬粉0.1-1g,发酵或未发酵的黄芪提取物0.05-1g、橄榄叶提取物0.05-1g、葡萄籽提取物0.05-1g,添加精氨酸0.04-0.5g、维生素B20.002-0.01g,发酵完全后,将发酵液经喷雾干燥设备干燥成粉后,添加低聚异麦芽糖0.1-1g、低聚果糖0.1-1g、低聚木糖0.1-1g、低聚半乳糖0.1-1g,添加活6
菌数≥10罗伊氏乳杆菌的冷冻干燥菌粉,混合脱脂奶粉、麦芽糊精及其他辅料,复配成组合物。该组合物能有效调节肠道菌群,增强免疫力,抗衰老。
[0045] 作为更加优选的技术方案之三,每2g该组合物中含有:发酵果蔬粉0.1-1g,发酵或未发酵的栀子提取物0.15-1.2g、生姜提取物0.15-1.2g。发酵完全后,将发酵液经喷雾干燥设备干燥成粉后,添加低聚异麦芽糖0.1-1g、低聚果糖0.1-1g、低聚木糖0.1-1g、低聚6
半乳糖0.1-1g,添加活菌数≥10的鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌的冷冻干燥菌粉,混合脱脂奶粉、麦芽糊精及其他辅料,复配成组合物。该组合物能维持和恢复胃肠道微生物平衡,调节机体代谢水平。有效地清除老年痴呆脑细胞纤维缠结、Ab沉积块,对老年痴呆症的解决提出了科学的解决方案。
[0046] 作为更加优选的技术方案之四,每2g该组合物中含有:发酵果蔬粉0.1-1g,发酵或未发酵的北美升麻提取物0.1-0.8g、红花苜蓿提取物0.16-0.9g。发酵完全后,将发酵液经喷雾干燥设备干燥成粉后,添加低聚异麦芽糖0.1-1g、低聚果糖0.1-1g、低聚木糖6
0.1-1g、低聚半乳糖0.1-1g,添加活菌数≥10的植物乳杆菌、干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌的冷冻干燥混合菌粉,混合脱脂奶粉、麦芽糊精及其他辅料,复配成组合物。该组合物能有效缓解女性更年期潮热、多汗、失眠、健忘等症状。
[0047] 作为更加优选的技术方案之五,每2g该组合物中含有:发酵果蔬粉0.1-1g,发酵或未发酵的肉苁蓉提取物0.2-1g。发酵完全后,将发酵液经喷雾干燥设备干燥成粉后,添加低聚异麦芽糖0.1-1g、低聚果糖0.1-1g、低聚木糖0.1-1g、低聚半乳糖0.1-1g,添加活菌6
数≥10的青春双歧杆菌和干酪乳杆菌的冷冻干燥菌粉,混合脱脂奶粉、麦芽糊精及其他辅料,复配成组合物。该组合物能有润肠通便,维持肠道菌群系统平衡,恢复肠道正常的生理运行,对习惯性、顽固性便秘有疗效。
[0048] 所述组合物按照制药方法与一种或多种医药上可接受的载体或赋形剂或稀释剂按照适当的比例混合,并按照已知的方法除杂灭菌后,制成制剂。所述制剂可以是冲剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、乳剂或混悬剂,还可以添加适量甜味剂,蜂蜜,花粉等制成饼干等方便、快速食品。
[0049] 为解决上述第二个技术问题,本发明的技术方案是:
[0050] 一种含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物的制备方法,包含以下步骤:
[0051] A)菌种活化培养:将活化好的益生菌菌种接种到液体培养基中,40~44℃静置培养22~28h,备用,所述益生菌菌种包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的一种或几种。
[0052] B)发酵:将辅料溶于水中,82~86℃剪切15~20min,然后将果蔬和中药或者中药提取物加入,混合均匀,调节pH值为6.3~6.8,在胶体磨内58~62℃、18~20MPa匀质10~15min;然后100~105℃灭菌15~20min,灭菌完成后冷却至42~45℃,接种步骤(A)的活化菌液,于40~44℃发酵4~7h,至pH降低到4.3~4.6时结束发酵,得到发酵液。
[0053] C)喷雾干燥:将所述发酵液经喷雾干燥设备进行喷雾干燥,得到发酵粉;所述喷雾干燥设备的进口温度为170~200℃,出口温度为85~95℃。
[0054] D)制备益生菌冷冻干燥粉:将所述益生菌菌种分别经多层微囊包埋处理,然后经冷冻干燥,分别干燥成冷冻干燥粉,所述益生菌菌种包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的一种或几种。
[0055] E)组合物制备:将所述发酵液喷雾干燥成粉,加入步骤D)的益生菌冷冻干燥粉,然后添加益生元和辅料得到所述发酵果蔬组合物。
[0056] 为解决上述第二个技术问题,本发明还可以采用以下技术方案:
[0057] 一种含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物的制备方法,包含以下步骤:
[0058] A)菌种活化培养:将活化好的益生菌菌种接种到液体培养基中,40~44℃静置培养22~28h,备用,所述益生菌菌种包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的一种或几种。
[0059] B)发酵:将和辅料溶于水中,82~86℃剪切15~20min,然后将果蔬加入,混合均匀,调节pH值为6.3~6.8,在胶体磨内58~62℃、18~20MPa匀质10~15min;然后100~105℃灭菌15~20min,灭菌完成后冷却至42~45℃,接种步骤(A)的活化菌液,于
40~44℃发酵4~7h,至pH降低到4.3~4.6时结束发酵,得到发酵液。
[0060] C)喷雾干燥:将所述发酵液经喷雾干燥设备进行喷雾干燥,得到果蔬发酵粉;所述喷雾干燥设备的进口温度为170~200℃,出口温度为85~95℃。
[0061] D)制备益生菌冷冻干燥粉:将所述益生菌菌种分别经多层微囊包埋处理,然后经冷冻干燥,分别干燥成冷冻干燥粉,所述益生菌菌种包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的一种或几种。
[0062] E)组合物制备:将所述发酵液喷雾干燥成粉,加入步骤D)的益生菌冷冻干燥粉,然后添加中药或者中药提取物、益生元和辅料得到所述发酵果蔬组合物。
[0063] 由于采用了上述技术方案,本发明的有益效果是:
[0064] 本发明的含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,包含发酵果蔬、发酵或者未发酵的中药或中药提取物、由一种或多种低聚糖组成的益生元、益生菌菌种和辅料,通过益生菌发酵将果蔬与中药完美结合,将食补与药补有机结合,以调理为先导,预防和治疗为途径,在传统中药炮制方法的基础上,利用微生物炮制中药的方法,是对传统中药的重大创新,真正实现了中药疗效提速、减毒增效,改善口感,是对传统中药产业的革命,开创了中药的新时代。以益生菌为先锋,促进益生菌的增殖,调节肠道微生态平衡,促进微量元素的吸收,增强脾胃运动功能,提高果蔬营养和中药药效的吸收;并可以根据不同人的体质特征,合理搭配不同功效的组合物。益生菌发酵天然、原生态的果蔬、中药材,富含多种活性因子和生物免疫因子以及多种维生素,同时复配外源性益生菌以及能有效促进内源性益生菌生长的益生元,更好的实现益生菌与发酵果蔬、中药成分的协同作用,具有集食疗、预防治疗、调理三重功效于一体的独特优势。本发明中使用的益生菌包括乳杆菌属、双歧杆菌、链球菌属,双歧杆菌是人和哺乳动物内最重要的生理性细菌,主要分布于小肠下部和结肠内。乳杆菌是人体内分布最为广泛的益生菌。这些益生菌产出的乳酸、醋酸等酸性物质能刺激肠道分泌大量肠液,对粪便起到乳化作用。益生菌作用所形成的酸性环境能使结肠蠕动增强,有利于粪便排泄。
[0065] 基于益生菌在人或动物肠道内分布的总体广泛性,以及它们生理学活性的互补性,本发明选用德式乳杆菌,嗜热链球菌,植物乳杆菌,罗伊氏乳杆菌,鼠李糖乳杆菌等常见益生菌菌株。
[0066] 本发明针对因肠道菌群和免疫功能失调、内分泌失调以及睡眠障碍等引发的亚健康问题,通过体外补充益生菌、体内增殖肠道有益菌,改善消化道系统和免疫系统健康,复配以发酵果蔬、中草药以及益生元,开发出具有调节肠道菌群、增强免疫力和改善睡眠功能等特殊功效的食品或药物或保健品,具有重要的社会效益和经济效益。

具体实施方式

[0067] 下面结合具体的实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解,在阅读了本发明讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0068] 实施例1
[0069] 含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,每2g组合物中含有:发酵后的木瓜粉0.1g、板栗粉0.15g和山药粉0.3g,发酵或未发酵的黄芪提取物0.2g、橄榄叶提取物0.15g、葡萄籽提取物0.25g,添加精氨酸0.05g、维生素B20.1g,发酵完全后,将发酵液经喷雾干燥设备干燥成粉后,添加低聚异麦芽糖0.15g、低聚果糖0.1g、低聚木糖0.1g、低聚半
6
乳糖0.15g,添加活菌数≥10罗伊氏乳杆菌的冷冻干燥菌粉,混合脱脂奶粉、麦芽糊精及其他辅料,复配成组合物。
[0070] 实施例2
[0071] 含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,每2g组合物中含有:发酵后的冬瓜粉0.1g、胡萝卜粉0.2g和茯苓粉0.15g,发酵或未发酵的栀子提取物0.3g、生姜提取物0.35g。发酵完全后,将发酵液经喷雾干燥设备干燥成粉后,添加低聚异麦芽糖0.25g、低聚
6
果糖0.1g、低聚木糖0.2g、低聚半乳糖0.15g,添加活菌数≥10的鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌的冷冻干燥菌粉,混合脱脂奶粉、麦芽糊精及其他辅料,复配成组合物。
[0072] 实施例3
[0073] 含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,每2g组合物中含有:发酵后的南瓜粉0.3g、莲子粉0.1g和当归粉0.1g,发酵或未发酵的北美升麻提取物0.2g、红花苜蓿提取物0.4g。发酵完全后,将发酵液经喷雾干燥设备干燥成粉后,添加低聚异麦芽糖0.2g、低聚6
果糖0.1g、低聚木糖0.35g、低聚半乳糖0.1g,添加活菌数≥10的植物乳杆菌、干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌的冷冻干燥混合菌粉,混合脱脂奶粉、麦芽糊精及其他辅料,复配成组合物。
[0074] 实施例4
[0075] 含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,每2g组合物中含有:发酵后的南瓜粉0.15g、猕猴桃粉0.6g和大豆粉0.10g,发酵或未发酵的肉苁蓉提取物0.3g。发酵完全后,将发酵液经喷雾干燥设备干燥成粉后,添加低聚异麦芽糖0.2g、低聚果糖0.3g、低聚木6
糖0.1g、低聚半乳糖0.1g,添加活菌数≥10的青春双歧杆菌和干酪乳杆菌的冷冻干燥菌粉,混合脱脂奶粉、麦芽糊精及其他辅料,复配成组合物。
[0076] 实施例5
[0077] 含有益生菌和中药提取物的发酵果蔬组合物,每2g组合物中含有:发酵后的冬瓜粉0.5g、紫薯粉0.1g和薏米粉0.15g,发酵或未发酵的锯叶棕提取物0.45g、南瓜籽提取物0.2g,发酵完全后,将发酵液经喷雾干燥设备干燥成粉后,添加低聚异麦芽糖0.1g、低聚果
6
糖0.1g、低聚木糖0.1g、低聚半乳糖0.1g,添加活菌数≥10的保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的冷冻干燥菌粉,混合脱脂奶粉、麦芽糊精及其他辅料,复配成组合物。
[0078] 实施例6
[0079] 南瓜粉77.4g、白糖57g、海藻酸钠2.28g、食用盐2.28g、食用碱0.456g、食用小苏打0.118g、脱脂奶粉8.75g、黄芪提取物14.02g、橄榄叶提取物14.02g、葡萄籽提取物14.02g、维生素B22.81g、精氨酸0.14g和麦芽糊精52.59g。
[0080] 制备方法为:
[0081] A)将活化好的罗伊氏乳杆菌菌种接种到液体培养基中,43℃静置培养25h,备用。
[0082] B)将辅料麦芽糊精52.59g,食用盐2.28g、食用碱0.456g、食用小苏打0.118g溶于1L水中,84℃剪切15min,然后将果蔬南瓜粉77.4g和中药提取物黄芪提取物14.02g、橄榄叶提取物14.02g、葡萄籽提取物14.02g加入,混合均匀,调节pH值为6.5,在胶体磨内60℃、18MPa匀质10min;然后100℃灭菌15min,灭菌完成后冷却至44℃,接种步骤(A)的活化菌液,于42℃发酵5h,至pH降低到4.5时结束发酵,得到发酵液。
[0083] C)将所述发酵液经喷雾干燥设备进行喷雾干燥,得到果蔬发酵粉;所述喷雾干燥设备的进口温度为185℃,出口温度为92℃。
[0084] D)将罗伊氏乳杆菌经多层微囊包埋处理,然后经冷冻干燥,干燥成冷冻干燥粉。
[0085] E)将所述发酵液喷雾干燥成粉,加入活菌总数≥106cfu/g的罗伊氏乳杆菌冷冻干燥菌粉,然后添加低聚异麦芽糖105.45g,低聚木糖28.05g,低聚果糖28.05g,低聚半乳糖28.05g,然后添加84.14g脱脂奶粉,112.18g麦芽糊精,混匀得到所述发酵果蔬组合物散剂。
[0086] 实施例7
[0087] 南瓜粉57.75g,白糖57g,海藻酸钠2.28g,食用盐2.28g,食用碱0.456g,食用小苏打0.118g,脱脂奶粉8.75g,黄芪提取物9.00g,橄榄叶提取物18.00g,葡萄籽提取物24.00g,维生素B23.60g,精氨酸0.15g,麦芽糊精52.50g。
[0088] 制备方法为:
[0089] A)将活化好的罗伊氏乳杆菌和长双歧乳杆菌菌种分别接种到液体培养基中,42℃分别静置培养24h,备用。
[0090] B)将辅料麦芽糊精52.50g,食用盐2.28g、食用碱0.456g、食用小苏打0.118g、维生素B23.60g溶于1L水中,85℃剪切18min,然后将果蔬南瓜粉57.75g和中药提取物黄芪提取物9.00g、橄榄叶提取物18.00g、葡萄籽提取物24.00g加入,混合均匀,调节pH值为6.5,在胶体磨内60℃、18MPa匀质10min;然后100℃灭菌15min,灭菌完成后冷却至43℃,接种步骤(A)的活化菌液,于42℃发酵5h,至pH降低到4.5时结束发酵,得到发酵液。
[0091] C)将所述发酵液经喷雾干燥设备进行喷雾干燥,得到果蔬发酵粉;所述喷雾干燥设备的进口温度为180℃,出口温度为90℃。
[0092] D)将罗伊氏乳杆菌和长双歧乳杆菌分别经多层微囊包埋处理,然后经冷冻干燥,分别干燥成冷冻干燥粉。
[0093] E)将所述发酵液喷雾干燥成粉,加入活菌总数≥106cfu/g的罗伊氏乳杆菌和长双歧乳杆菌比例为1:2的混合冷冻干燥菌粉,然后添加低聚异麦芽糖135g,低聚木糖75g,低聚果糖30g,低聚半乳糖45g,再添加60g脱脂奶粉,90g麦芽糊精,得到组合物,混匀用胶囊机灌装得到所述发酵果蔬组合物胶囊剂。
[0094] 实施例8
[0095] 南瓜粉65g,白糖60.75g,海藻酸钠2.43g,食用盐2.43g,食用碱0.486g,食用小苏打0.243g,南瓜籽提取物55g,锯叶棕提取物55g。
[0096] 制备方法为:
[0097] A)将活化好的保加利亚乳杆菌接种到MRS液体培养基中,42℃静置培养26h,备用。MRS液体培养基的配方为:葡萄糖20g,胰蛋白胨10g,肉膏10g,酵母提取物5g,柠檬酸二氨2g,MgSO4·7H2O0.58g,MnSO4·4H2O0.25g,吐温801mL,蒸馏水1L,琼脂20g,于121℃灭菌20min备用。
[0098] 将活化好嗜热链球菌接种到改良M17培养基中,42℃静置培养28h,备用。改良M17培养基的配方为:胰蛋白胨5g,鱼蛋白胨5g,牛肉膏5g,酵母浸膏5g,抗坏血酸0.5g,硫酸镁0.25g,甘油10g,乳糖3g,磷酸氢二钾5g,琼脂11g,蒸馏水1L,用NaOH调节pH为6.9左右,于121℃灭菌20min备用。
[0099] B)将白糖60.75g,海藻酸钠2.43g,食用盐2.43g,食用碱0.486g,食用小苏打0.243g溶于水中,85℃剪切15min,然后将果蔬南瓜粉65g加入,混合均匀,调节pH值为
6.6,在胶体磨内59℃、20MPa匀质15min;然后100℃灭菌15min,灭菌完成后冷却至43℃,接种步骤(A)的活化菌液(1:1.5比例混合),于42℃发酵6h,至pH降低到4.4时结束发酵,得到发酵液;
[0100] C)将所述发酵液经喷雾干燥设备进行喷雾干燥,得到果蔬发酵粉;所述喷雾干燥设备的进口温度为190℃,出口温度为90℃;
[0101] D)将所述益生菌菌种保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌分别经多层微囊包埋处理,然后经冷冻干燥,分别干燥成冷冻干燥粉;
[0102] E)将所述发酵液喷雾干燥成粉,加入活菌总数≥106cfu/g的保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌冷冻干燥菌粉(1:1.5比例混合),然后添加南瓜籽提取物55g,锯叶棕提取物55g、低聚异麦芽糖75g,低聚木糖25g,低聚果糖25g,低聚半乳糖25g,添加75g脱脂奶粉,加适量淀粉、糊精、蔗糖混匀得到组合物,然后制成颗粒,60℃以下干燥,制得颗粒剂。
[0103] 实施例9
[0104] 南瓜粉92.14g,白糖60.75g,海藻酸钠2.43g,食用盐2.43g,食用碱0.486g,食用小苏打0.243g,南瓜籽提取物61.43g,锯叶棕提取物61.43g。
[0105] 制备方法为:
[0106] A)分别将活化好的嗜酸乳杆菌、两双歧杆菌、植物乳杆菌接种到液体培养基中,42℃分别静置培养24h,备用。
[0107] B)将白糖60.75g,海藻酸钠2.43g,食用盐2.43g,食用碱0.486g,食用小苏打0.243g溶于1L水中,84℃剪切20min,然后将南瓜粉92.14g和南瓜籽提取物61.43g,锯叶棕提取物61.43g加入,混合均匀,调节pH值为6.5,在胶体磨内60℃、19MPa匀质12min;然后100℃灭菌15min,灭菌完成后冷却至44℃,步骤(A)中的活化菌液按照2:1:1比例混合后接种,于43℃发酵6h,至pH降低到4.5时结束发酵,得到发酵液。
[0108] C)将所述发酵液经喷雾干燥设备进行喷雾干燥,得到果蔬发酵粉;所述喷雾干燥设备的进口温度为190℃,出口温度为90℃。
[0109] D)将嗜酸乳杆菌、两双歧杆菌、植物乳杆菌分别经多层微囊包埋处理,然后经冷冻干燥,分别干燥成冷冻干燥粉。
[0110] E)将所述发酵液喷雾干燥成粉,添加活菌总数≥106cfu/g的嗜酸乳杆菌、两双歧杆菌、植物乳杆菌混合菌种(2:1:1比例混合),添加低聚异麦芽糖153.57g,低聚木糖46.07g,低聚果糖30.71g,低聚半乳糖46.07g,添加61.43g脱脂奶粉,61.43g麦芽糊精混合均匀,加入适量淀粉、糊精、蔗糖混匀制成颗粒,60℃以下干燥,然后添加滑石粉,硬脂酸镁混匀,研制成片,包糖衣或薄膜衣,即得片剂。
[0111] 实施例10
[0112] 南瓜粉100g,白糖72g,海藻酸钠2.28g,食用盐2.28g,食用碱0.456g,食用小苏打0.118g,脱脂奶粉10g,栀子提取物50g,生姜提取物50g。
[0113] 制备方法为:
[0114] A)分别将活化好的嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、植物乳杆菌接种到液体培养基中,42℃分别静置培养24h,备用。
[0115] B)将白糖72g,海藻酸钠2.28g,食用盐2.28g,食用碱0.456g,食用小苏打0.118g,脱脂奶粉10g溶于1L水中,84℃剪切20min,然后将南瓜粉100g和栀子提取物50g,生姜提取物50g加入,混合均匀,调节pH值为6.5,在胶体磨内60℃、19MPa匀质12min;然后100℃灭菌15min,灭菌完成后冷却至44℃,步骤(A)中的活化菌液按照1:0.5:0.8比例混合后接种,于43℃发酵6h,至pH降低到4.5时结束发酵,得到发酵液。
[0116] C)将所述发酵液经喷雾干燥设备进行喷雾干燥,得到果蔬发酵粉;所述喷雾干燥设备的进口温度为190℃,出口温度为90℃。
[0117] D)将嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、植物乳杆菌分别经多层微囊包埋处理,然后经冷冻干燥,分别干燥成冷冻干燥粉。
[0118] E)将所述发酵液喷雾干燥成粉,添加活菌总数≥106cfu/g的嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、植物乳杆菌混合菌种(1:0.5:0.8比例混合),发酵后,添加低聚异麦芽糖75g,低聚木糖37.5g,低聚果糖37.5g,低聚半乳糖25g,添加75g脱脂奶粉,50g麦芽糊精,加入阿拉伯明胶细粉末,混合均匀,然后按照两相交替法每次少量胶体地加入水或者油,边加边搅拌,即可形成乳剂。
[0119] 实施例11
[0120] 南瓜粉50g,白糖72g,海藻酸钠2.28g,食用盐2.28g,食用碱0.456g,食用小苏打0.118g,脱脂奶粉10g,栀子提取物50g,生姜提取物50g。
[0121] 将上述配料混合均匀,溶于1L水中,PH调节到6.5,灭菌,接种活菌总数≥106cfu/ml的鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌的混合菌种(1:1比例混合),发酵后,添加低聚异麦芽糖75g,低聚木糖25g,低聚果糖25g,低聚半乳糖25g,添加75g脱脂奶粉,100g麦芽糊精,混合均匀,添加阿拉伯胶细粉适量,甘油适量,泊洛沙姆适量,于乳钵中研匀,加蒸馏水至全量,即得悬浊剂。
[0122] 实施例12
[0123] 南瓜粉90.53g,大豆粉29.33g,白糖72.6g,海藻酸钠2.42g,食用盐2.42g,食用碱0.242g,食用小苏打0.12g,脱脂奶粉10.5g,北美升麻提取物37.33g,红花苜蓿提取物51.81g。
[0124] 将上述配料混合均匀,溶于1L水中,PH调节到6.5,灭菌,接种(1:1:1混合比例)植物乳杆菌、干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌的混合菌种,发酵后,喷雾干燥成粉,添加低聚异麦芽糖93.30g,低聚木糖46.70g,低聚果糖23.30g,低聚半乳糖23.30g,添加活菌总数6
≥10cfu/g的植物乳杆菌、干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌的冷冻干燥菌粉(1:1:1比例混合),混合均匀,用胶囊灌装胶囊。
[0125] 实施例13
[0126] 南瓜粉43.9g,大豆粉26.50g,当归粉25.3g白糖72.6g,海藻酸钠2.42g,食用盐2.42g,食用碱0.242g,食用小苏打0.12g,脱脂奶粉10.5g,北美升麻提取物55g,红花苜蓿提取物69.3g。
[0127] 制法:将上述配料混合均匀,溶于1L水中,PH调节到6.5,灭菌,接种(1:1:1混合比例)青春双歧杆菌、干酪乳杆菌和动物双歧杆菌的混合菌种,发酵后,喷雾干燥成粉,添加低聚异麦芽糖110g,低聚木糖82.5g,水苏糖27.5g,菊粉27.5g,添加脱脂奶粉27.5g,麦6
芽糊精55g和活菌总数≥10cfu/g的青春双歧杆菌、干酪乳杆菌和动物双歧杆菌的冷冻干燥菌粉(1:1:1比例混合),混匀,分装即得散剂。
[0128] 实施例14
[0129] 猕猴桃粉127g,白糖58.66g,海藻酸钠2.35g,食用盐2.35g,食用碱0.47g,食用小苏打0.12g,脱脂奶粉8.65g,肉苁蓉提取物46.18g。
[0130] 制备方法为:
[0131] A)将活化好的的青春双歧杆菌和干酪乳杆菌的菌种接种到液体培养基中,42℃分别静置培养25h后,备用。
[0132] B)将白糖58.66g,海藻酸钠2.35g,食用盐2.35g,食用碱0.47g,食用小苏打0.12g,脱脂奶粉8.65g溶于1L水中,83℃剪切20min,然后将果蔬猕猴桃粉127g,南瓜粉
37.11g和肉苁蓉提取物46.18g加入,混合均匀,调节pH值为6.4,在胶体磨内60℃、19MPa匀质12min;然后100℃灭菌15min,灭菌完成后冷却至44℃,接种步骤(A)的活化菌液,于
44℃发酵5h,至pH降低到4.6时结束发酵,得到发酵液。
[0133] C)将所述发酵液经喷雾干燥设备进行喷雾干燥,得到果蔬发酵粉;所述喷雾干燥设备的进口温度为200℃,出口温度为95℃。
[0134] D)将青春双歧杆菌和干酪乳杆菌菌种分别经多层微囊包埋处理,然后经冷冻干燥,分别干燥成冷冻干燥粉。
[0135] E)将所述发酵液喷雾干燥成粉,添加低聚异麦芽糖49.48g,低聚木糖24.74g低聚6
果糖24.74g,低聚半乳糖24.74g,添加活菌总数≥10cfu/g的青春双歧杆菌和干酪乳杆菌的冷冻干燥菌粉(1:1比例混合),混匀即得散剂。
[0136] 实施例15
[0137] 猕猴桃粉120.13g,南瓜粉37.11g,白糖59.5g,海藻酸钠2.38g,食用盐2.38g,食用碱0.238g,食用小苏打0.12g,脱脂奶粉9.5g,肉苁蓉提取物32.76g。
[0138] 制备方法为:
[0139] A)将活化好的青春双歧杆菌和罗伊氏乳杆菌的菌种接种到液体培养基中,42℃分别静置培养26h,备用。
[0140] B)将白糖59.5g,海藻酸钠2.38g,食用盐2.38g,食用碱0.238g,食用小苏打0.12g,脱脂奶粉9.5g溶于1L水中,83℃剪切20min,然后将猕猴桃粉120.13g,南瓜粉
37.11g和肉苁蓉提取物32.76g加入,混合均匀,调节pH值为6.4,在胶体磨内60℃、19MPa匀质12min;然后100℃灭菌15min,灭菌完成后冷却至44℃,接种步骤(A)的活化菌液(1:1的比例混合),于42℃发酵5h,至pH降低到4.6时结束发酵,得到发酵液。
[0141] C)将所述发酵液经喷雾干燥设备进行喷雾干燥,得到果蔬发酵粉;所述喷雾干燥设备的进口温度为200℃,出口温度为95℃。
[0142] D)将青春双歧杆菌和罗伊氏乳杆菌菌种分别经多层微囊包埋处理,然后经冷冻干燥,分别干燥成冷冻干燥粉。
[0143] E)将所述发酵液喷雾干燥成粉,添加低聚异麦芽糖67.85g,低聚木糖40.71g,菊6
粉40.71g,添加活菌总数≥10cfu/g的青春双歧杆菌和罗伊氏乳杆菌的冷冻干燥混合菌粉(1:1比例混合)的混合物,再加适量淀粉、糊精、蔗糖混匀得到组合物,制成颗粒,60℃以下干燥,制得颗粒剂。
[0144] 实验例1调节肠道菌群功能动物实验
[0145] 将实施例4制备得到的发酵果蔬组合物对小鼠做调节肠道菌群功能实验,该组合物人体推荐剂量为每日2g/60kg。本次试验48只正常小鼠,分成4组,设立低、中、高三个剂量组,用量每日分别为0.33、0.67、1g/kg,分别相当于人体推荐量的10、20和30倍,另设蒸馏水空白对照组。每日给予小鼠灌胃给药,给药量根据每周体重增减调整,连续灌胃15天。在给药前和末次给药后24h,每组动物无菌采取12只小鼠的粪便,称重后,用灭菌的生理盐水10倍梯度稀释,然后接种到各增殖培养基上培养。培养完成后,计算每克湿便中的活菌总数,取对数后统计处理。比较各组自身实验前后双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌的变化情况,如表1所示。
[0146] 表1
[0147]
[0148] 由上表数据可知,将组合物不同剂量的溶液给小鼠灌胃后,各剂量组肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌的活菌总数变化值差异均无显著性(P>0.05);双歧杆菌和乳杆菌的数量增加,差异有显著性(P<0.05),依据《保健食品检验与评价技术规范-2003》中调节肠道菌群功能-动物实验结果的评价标准判断,该组合物具有良好的调节肠道菌群的功能。
[0149] 实验例2增强免疫力动物实验
[0150] 将实施例1制备得到的发酵果蔬组合物对小鼠做增强免疫力功能实验,该组合物人体推荐剂量为每日2g/60kg。本次试验48只正常小鼠,分成4组,设立低、中、高三个剂量组,用量每日分别为0.33、0.67、1g/kg,分别相当于人体推荐量的10、20和30倍,另设蒸馏水空白对照组。每日给予小鼠灌胃给药,给药量根据每周体重增减调整,连续灌胃30天。检测试验结束后小鼠胸腺指数、脾指数、溶血空斑数、抗体积数、淋巴细胞转化率、NK细胞活性、吞噬%、DTH值,应用统计软件SPSS10.0进行t检验及相关分析分别见表2-表7。
[0151] 表2血清溶血素、抗体生成检测试验
[0152]组别 动物数(只) 抗体积数 溶血空斑数
空白对照组 12 55.3±10.9 10.5±2.39
低剂量组 12 63.4±11.8 11.2±2.12
中剂量组 12 73.8±9.2 14.8±1.92*
高剂量组 12 127.6±34.6* 21.3±3.15*
[0153] *:P<0.05分别与各自的空白对照组相比。
[0154] 表3胸腺指数、脾指数
[0155]组别 动物数(只) 胸腺指数(%) 脾指数(%)
空白对照组 12 0.25±0.02 0.51±0.01
低剂量组 12 0.25±0.02 0.50±0.02
中剂量组 12 0.26±0.01 0.51±0.02
高剂量组 12 0.26±0.02 0.51±0.03
[0156] *:P<0.05与空白对照组相比。
[0157] 表4小鼠淋巴细胞转化率试验
[0158]组别 动物数(只) 转化率(%)
空白对照组 12 49.74±2.08
低剂量组 12 50.98±2.37
中剂量组 12 55.83±1.56*
高剂量组 12 56.92±3.04*
[0159] *:P<0.05与空白对照组相比。
[0160] 表5DTH测定结果
[0161]组别 动物数(只) 肿胀度(mg)
空白对照组 12 13.7±2.8
低剂量组 12 14.9±3.8
中剂量组 12 16.6±3.2*
高剂量组 12 16.9±2.9*
[0162] *:P<0.05与空白对照组相比。
[0163] 表6NK细胞活性测定
[0164]组别 动物数(只) NK细胞活性
空白 12 25.02±1.04
低剂量组 12 25.09±1.21
中剂量组 12 27.10±2.09
高剂量组 12 31.08±2.9*
[0165] *:P<0.05与空白对照组相比。
[0166] 表7巨噬细胞吞噬试验
[0167]组别 动物数(只) 吞噬百分率(%)
空白 12 10.42±1.44
低剂量组 12 10.59±2.01
中剂量组 12 14.09±2.27*
高剂量组 12 18.63±2.81*
[0168] *:P<0.05与空白对照组相比。
[0169] 表2-7结果经统计学分析可知,样品中剂量组和高剂量组的小鼠溶血空斑数、吞噬%、淋巴细胞转化率、DTH与空白对照组相比,均有显著性差异;样品高剂量组的小鼠抗体积数和NK细胞活性与空白对照组相比,均有显著性差异;样品各剂量组的小鼠胸腺指数、脾指数与对照组相比,均无显著性差异。这说明该组合物具有增强免疫力功能。
[0170] 实验例3改善睡眠功能动物实验
[0171] 将实施例2制备得到的发酵果蔬组合物对小鼠做改善睡眠功能实验,该组合物人体推荐剂量为每日2g/60kg。本次试验48只正常小鼠,分成4组,设立低、中、高三个剂量组,用量每日分别为0.33、0.67、1g/kg,分别相当于人体推荐量的10、20和30倍,另设蒸馏水空白对照组。
[0172] 按剂量给予样品,测定样品对动物直接睡眠时间、延长戊巴比妥钠睡眠时间、戊巴比妥钠下剂量催眠及戊巴比妥钠睡眠潜伏期的变化情况,应用统计软件SPSS10.0进行t检验及相关分析见表8-表11。
[0173] 表8动物直接睡眠时间的影响
[0174]组别 动物数(只) 睡眠时间(秒)入睡动物数
空白 12 0±0 0
低剂量组 12 0±0 0
中剂量组 12 0±0 0
高剂量组 12 0±0 0
[0175] 从上表中可以看出,说明本发明组合物对动物没有直接催眠的功能。
[0176] 表9阀下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响
[0177]组别 动物数(只)睡眠时间(秒)
空白 12 2098±412
低剂量组 12 2024±658
中剂量组 12 2110±736
[0178]高剂量组 12 3241±803*
[0179] *:P<0.05与空白对照组相比。
[0180] 表10阀下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠发生率的影响
[0181]组别 动物数(只) 入睡动物数(只) 入睡率(%)
空白 12 0 0
低剂量组 12 2 16.7
中剂量组 12 4 33.3
高剂量组 12 10* 83.3*
[0182] *:P<0.05与空白对照组相比。
[0183] 表11戊巴比妥钠对小鼠睡眠潜伏期的影响
[0184]组别 动物数(只) 睡眠潜伏期(秒)
空白 12 1801±351
低剂量组 12 1756±176
中剂量组 12 1726±426
高剂量组 12 1001±298*
[0185] *:P<0.05与空白对照组相比。
[0186] 从表8-11中可见,本发明组合物对动物直接睡眠时间没有影响,样品高剂量组的小鼠阀下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠下的睡眠时间、睡眠发生率及睡眠潜伏期与对照组相比,均有显著性差异。表明,本发明组合物具有改善睡眠功能的作用。
[0187] 结论:上述实验结果表明,本发明组合物样品具有调节肠道菌群、增强免疫力及改善睡眠功能。
[0188] 实验例4通便、润肠功能试验
[0189] 小肠运动试验:将实施例4制备得到的发酵果蔬组合物对小鼠做小肠运动功能实验,取小鼠60只,随机分成5组,每组12只,设立低、中、高三个剂量组,以及模型对照组和空白对照组。用量每日分别为0.33、0.67、1g/kg,分别相当于人体推荐量的10、20和30倍,加蒸馏水配成溶液,经口灌胃给予,灌胃体积为20ml/kg,另设空白对照组和模型对照组给予等量蒸馏水,连续8天。各组小鼠禁食不禁水16h后,模型组和3个剂量组给予复方地芬诺酯(5mg/kg),空白对照组给予蒸馏水。给予复方地芬诺酯0.5h后,3个剂量组分别给予含受试样品的墨汁(含5%活性碳粉、10%阿拉伯胶),空白对照组和模型对照组给予墨汁灌胃。25min后立即脱颈椎处死动物,打开腹腔分离肠系膜,剪去上端自幽门、下端至回盲部的肠管,置于托盘上,轻轻将小肠拉成直线,测量肠管长度为“小肠总长度”,从幽门只墨汁前沿为“墨汁推进长度”,按下式计算墨汁推进率:墨汁推进率(%)=墨汁推进长度(cm)/小肠总长度(cm)×100%。
[0190] 试剂和仪器:CP214电子天平、JY10002电子天平、直尺、活性炭粉、阿拉伯胶、复方地芬诺酯。
[0191] 排便时间、粪便粒数和粪便重量的测定:将实施例4制备得到的发酵果蔬组合物对小鼠做小肠运动功能实验,取小鼠60只,随机分成5组,每组12只,设立低、中、高三个剂量组,以及模型对照组和空白对照组。用量每日分别为0.33、0.67、1g/kg,分别相当于人体推荐量的10、20和30倍。加蒸馏水配成溶液,经口灌胃给予,灌胃体积为20ml/kg,另设空白对照组和模型对照组给予等量蒸馏水,连续9天。各组小鼠禁食不禁水16h后,模型对照组和3个剂量组给予复方地芬诺酯(10mg/kg),空白对照组给予蒸馏水。给予复方地芬诺酯0.5h后,3个剂量组分别给予含受试样品的墨汁(含5%活性碳粉、10%阿拉伯胶),空白对照组和模型对照组给予墨汁灌胃。动物单笼饲养,正常饮水进食。从灌墨汁开始,记录每只动物首粒排黑便时间、5h内排黑便粒数及重量。
[0192] 实验结果见表12-表14。
[0193] 对小鼠体重的影响:
[0194] 表12各剂量组对实验前后对小鼠体重的影响
[0195]
[0196]
[0197] *:P<0.05与模型对照组相比。
[0198] 由表12可知,小肠运动试验和排便实验中,空白剂量组,各剂量组小鼠初始、结束时的体重分别与模型对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)
[0199] 对小肠运动的影响:
[0200] 表13各剂量组对小鼠小肠运动的影响
[0201]
[0202] 注:*与模型对照组比较,P<0.05
[0203] 由表13可见,模型对照组小鼠墨汁推进率与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),说明模型成立。中、高剂量组小鼠墨汁推进率与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
[0204] 对排便时间、粪便粒数和粪便重量的影响:
[0205] 表14各剂量组对5h内小鼠首粒黑便排便时间、粪便粒数和粪便重量的影响[0206]
[0207]
[0208] 注:*与模型对照组比较,P<0.05
[0209] 模型对照组小鼠排便时间、粪便粒数和粪便重量与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),说明模型成立。低、中、高剂量组小鼠首粒排黑便时间、5h内粪便粒数与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);中、高剂量组小鼠5h内粪便重量与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
[0210] 综上所述,将本发明中的组合物给小鼠灌胃后,对小鼠的体重增长无不良影响,能促进便秘小鼠的小肠蠕动;有效缩短便秘小鼠首粒黑便时间,增加所排粪便的粒数,增加所排粪便的总重量。说明本发明中的组合物具有一定的通便,润肠,促进胃肠蠕动的功能。
[0211] 实验例5抗衰老功能实验
[0212] 将实施例1制备得到的发酵果蔬组合物对小鼠做抗衰老功能实验,该组合物人体推荐剂量为每日2g/60kg。本次试验60只正常小鼠,分成5组,设立低、中、高三个剂量组,用量每日分别为0.33、0.67、1g/kg,分别相当于人体推荐量的10、20和30倍,另设空白对照-1 -1组和模型对照组。模型对照组和3个剂量组每日腹腔注射50g.L D-半乳糖500mg·kg .-1
d ,空白对照组给同容积生理盐水,连续60天。
[0213] 实验材料:
[0214] 1、试剂:离心柱法基因组DNA提取试剂盒(天根生化科技公司,批号DP318);荧TM光定量PCR试剂盒SYBR(R)Premix Ex taq (Perfect Real Time)(大连宝生物公司,批号DRR041S)。
[0215] 2、仪器:荧光定量PCR仪,核酸测定仪。
[0216] 实验方法:
[0217] 1、小鼠外周血细胞DNA的提取:连续给药,60天后摘眼球取血约1mL,颈椎脱臼致-1死,取脑组织迅速液氮速冻后-20℃保存(备用)。血样经1000r.min 离心10min,上清弃去,血凝块-20℃保存。冻血凝块溶化后在PE手套内挤碎,加入红细胞裂解液1mL,混匀-1
器混匀15s,10000r·min 离心1min,弃上清,加红细胞裂解液500μL再次处理后按试剂盒操作,得到DNA样品100μL。所得DNA样品-20℃保存待测。
[0218] 2、实时荧光定量PCR测定端粒长度:
[0219] 引物的设计:
[0220] 分别设计端粒上游引物和参比的单拷贝基因的引物,送上海生工合成。
[0221] 引物使用浓度10μmol.L-1。
[0222] 实时荧光定量PCR反应体系和条件:
[0223] 每个PCR反应体系包括:SYBR Premix EX Taq 10μL,ROX Reference Dye0.4μL,上、下游引物各0.4μL,稀释100倍后DNA模板1μL,加灭菌水至20μL。混匀后扩增。端粒扩增条件:94℃10s预变性,然后95℃5s,52℃31s,40个循环。36B4基因扩增条件:94℃10s预变性,然后95℃5s,54℃31s,40个循环。应用实时定量PCR仪进行检测、记录和分析。
[0224] 标准曲线的制备:
[0225] 任意取一份待测样品作为模板,按10倍梯度稀释共5个浓度作标准曲线,以模板样品的稀释倍数的log值对样品达到一定阈值所需的循环数做标准曲线。
[0226] 样品实时荧光定量测定及数据处理方法
[0227] 待测DNA稀释样品取1μl加入到20μL PCR反应体系,每份模板分别测定端粒基因及36B4基因的Ct值,重复测定3次,取平均值进行计算。以T/S ratio计算端粒DNA的Ct(telo) Ct(36B4) -1 -[CT(telo)-CT(36B4)] -ΔCt长度。T/S ratio=[2 /2 ] =2 =2 。为比较观察药物的作
用,再以D-半乳糖衰老模型组的平均ΔCt为对照,求相对T/S ratio,相对T/S ratio=-ΔΔCt
2 。
[0228] 三.实验结果:
[0229] 端粒基因和参比基因的PCR反应Ct值以及T/S ratio值(T/S ratio=Ct(telo) Ct(36B4) -1 -[CT(telo)-CT(36B4)] -ΔCt)
[2 /2 ] =2 =2
[0230] 从表15可以看出,高剂量组的效果最好,端粒DNA的长度比衰老组高,最接近空白组,比阳性对照维生素E的长。
[0231] 表15各剂量组小鼠端粒DNA的长度的比较
[0232]
[0233] 通过以上数据的分析,可知,本发明组合物可以明显的延长衰老模型小鼠染色体末端端粒体长度,高剂量组对衰老模型小鼠染色体末端端粒体长度延长效果最好,端粒体长度明显比阳性对照组长,最接近空白组。说明本组合物能有效的延长衰老模型小鼠染色体末端端粒体长度,具有抗衰老的功效。
[0234] 下面结合临床试验例说明本发明实施例3的组合物防治和辅助治疗更年期综合症的效果,将实施例3的组合物用于防治更年期综合症疗效显著,临床试验,治疗50例,显效48例,治愈32例。具体病例如下。
[0235] 病例1:
[0236] 郭某,52岁,山东省青岛市企业职工,2014年年初出现头痛,失眠,焦虑,烦热盗汗,心悸等更年期症状,休息后,症状不能得到缓解,医院就诊,诊断为更年期神经衰落,药物治疗,效果不佳。2015年年初开始服用本品,每日1次,每次2g,1个月为一个疗程,连续服用三个疗程后,睡眠质量得到很大的改善,烦热盗汗、心悸的症状消失,患者症状基本消失,同时起到了稳定情绪、减轻焦虑及精神紧张的效果,神志清楚,精神良好,疲惫感减轻。
[0237] 病例2:
[0238] 刘某,47岁,山东省潍坊市企业职工,2014年年底出现月经紊乱,潮热出汗,疲倦乏力,头晕,失眠等症状,医院就诊,诊断为内分泌失调,药物治疗后,疗效不佳。2014年12月开始服用本品每日1次,每次2g,1个月为一个疗程,连续服用三个疗程后,睡眠质量得到很大的改善,潮热出汗、疲惫乏力、头晕等症状消失。
[0239] 以下是本发明实施例2制备得到的组合物防治和辅助治疗老年痴呆症的效果,用于防治老年痴呆症疗效显著,临床试验,治疗50例,显效45例,治愈20例。具体病例如下。
[0240] 病例1:
[0241] 李某,68岁,山东省青岛市退休工人,2013年初,医院诊断为老年痴呆症,记忆力,认知能力明显障碍,医院治疗未见好转。2013年底开始服用本品,每日1次,每次2g,3个月为一个疗程,连续服用三个疗程后,此后,病情明显好转,睡眠质量得到很好的改善,记忆力和判断、认知能力明显好转。
[0242] 病例2:
[0243] 刘某,女,75岁,山东省烟台市退休教师,2年前医院诊断为老年痴呆症,记忆力减
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