扁平上皮癌预防剂、以及扁平上皮癌模型动物及其制作方法 |
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| 申请号 | CN201280064271.2 | 申请日 | 2012-12-26 | 公开(公告)号 | CN104023546A | 公开(公告)日 | 2014-09-03 |
| 申请人 | 株式会社明治; 学校法人常翔学园; | 发明人 | 尾崎清和; 内田胜幸; 松浦哲郎; | ||||
| 摘要 | 本 发明 提供一种对由念珠菌感染引起而发展的扁平上皮癌的 预防 有效的 发酵 物。本发明提供一种由念珠菌感染引起的扁平上皮癌模型动物及其制作方法，与以往的模型动物相比 波动 少，能更适当地进行药效评价。一种由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂，其以用保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和格氏乳杆菌将奶进行发酵而得的发酵物作为有效成分。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂，其特征在于，以用保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和格氏乳杆菌将奶进行发酵而得的发酵物作为有效成分。 |
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| 说明书全文 | 扁平上皮癌预防剂、以及扁平上皮癌模型动物及其制作方法 技术领域[0001] 本发明涉及由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂、以及扁平上皮癌模型动物的制作方法、该扁平上皮癌模型动物及利用该模型动物的筛选方法。 背景技术[0002] 口腔癌、食道癌是源自复层扁平上皮的癌，特别地食道癌是难治性的癌，其死亡率高。另一方面，已知人白色念珠菌(C.albicans)是从健康人的口腔内被检测出的常见菌，但是其在脏器移植或大手术后的患者、肝硬化症或糖尿病患者这样的免疫机能衰退的患者中，常常会引起严重的口腔念珠菌病、食道念珠菌病。此外，伴随卧床不起的老年人增加，陷于低营养状态，免疫机能降低的同时感染的机会出现增加也成为问题。因此，在免疫机能降低的患者、老年人中，由于易于感染人白色念珠菌，会招致深部真菌症，进而发展为恶性肿瘤的严重结果，其成为重大的问题。 [0003] 因此，期望提供抑制从念珠菌病向扁平上皮癌的发展，预防扁平上皮癌发病的医药品、食品。 [0004] 另一方面，已知含有格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)的发酵乳具有对幽门螺杆菌的除菌效果，具有基于此的胃炎、胃溃疡的预防效果(专利文献2和3)。但是，关于对念珠菌感染的效果完全不知道。 [0005] 此外，通常在对疾病有效的医药品、食品的筛选中，制作疾病模型是有效的，关于扁平上皮癌的模型动物，报告了在Aldh2缺失哺乳动物(人除外)的皮内或皮下给予乙醇和/或乙醛而制成的扁平上皮癌模型动物(专利文献1)。但是，该扁平上皮癌模型动物，是以在与醇代谢相关的ALDH2基因为非活性型的人中高频率发病的扁平上皮癌的发病机制的阐明、治疗方法的开发为目的的动物模型，其与伴随念珠菌感染的扁平上皮癌的发病是不同的动物模型。 [0006] 本发明人等发现在通过给予阿脲诱发糖尿病的WBN/Kob大鼠的前胃中发生了伴随重度感染性慢性炎症的扁平上皮癌(非专利文献1)。但是该模型中，对于阿脲诱发糖尿病大鼠的前胃增殖性病变的程度、发病率而言个体差异大，为了适当地进行抑制从念珠菌病向扁平上皮癌的发展的医药品、食品的筛选，需要确立波动更少的疾病模型。 [0007] 现有技术文献 [0008] 专利文献 [0009] 专利文献1:日本特开2005-110601号公报 [0010] 专利文献2:日本专利第4509250号 [0011] 专利文献3:日本专利第3046303号 [0012] 非专利文献 [0013] 非专利文献1:Sano T，Ozaki K，Kodama Y，Matsuura T，Narama I.，Toxicol.Pathol.，vol.37，p.790-798(2009). 发明内容[0014] 本发明的课题在于提供对由念珠菌感染引起而发展的扁平上皮癌的预防有效的发酵物。进而本发明的课题在于提供由念珠菌感染引起的扁平上皮癌模型动物及其制作方法，与以往的模型动物相比波动少，能更适当地进行药效评价。 [0015] 本发明人等为了解决上述课题进行了认真深入研究，结果发现，通过对大鼠给予阿脲诱发糖尿病之后，立即强制经口给予人白色念珠菌，从而在大鼠的前胃中，能够在早期诱发由念珠菌感染引起的伴随慢性炎症的增殖性病变，制成该病变的个体差异小的扁平上皮癌模型动物。此外，发现用保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)、嗜热链球菌(S.thermophilus)和格氏乳杆菌(L.gasseri)将奶进行发酵的发酵物在抑制由人白色念珠菌感染引起的炎症的同时，抑制增殖性病变的发展，对于由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防是有用的。 [0016] 即，本发明包含以下内容。 [0017] [1]一种由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂，其特征在于，以用保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和格氏乳杆菌将奶进行发酵而得的发酵物作为有效成分。 [0018] [2]根据上述[1]记载的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂，其中，发酵物是将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌与奶配合进行发酵之后配合格氏乳杆菌而得的发酵乳。 [0019] [3]根据上述[1]或[2]记载的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂，其中，格氏乳杆菌是格氏乳杆菌OLL2716株(FERM BP-6999)。 [0020] [4]根据上述[1]～[3]中任一项记载的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂，其中，扁平上皮是口腔和/或食道的扁平上皮。 [0021] [5]用保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和格氏乳杆菌将奶进行发酵而得到的发酵物在制造由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂中的应用。 [0022] [6]一种发酵物，其用于预防由念珠菌感染引起的扁平上皮癌，是用保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和格氏乳杆菌将奶进行发酵而得到的。 [0023] [7]一种由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防方法，其特征在于，给予或摄取用保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和格氏乳杆菌将奶进行发酵而得的发酵物。 [0024] [8]一种扁平上皮癌模型动物的制作方法，其特征在于，包含对糖尿病发病模型动物强制经口给予人白色念珠菌的工序，所述糖尿病发病模型动物是通过给予糖尿病诱发物质而诱发糖尿病的。 [0025] [9]根据上述[8]记载的制作方法，其中，动物是大鼠。 [0026] [10]通过上述[8]或[9]记载的方法而制作的扁平上皮癌模型动物。 [0027] [11]一种扁平上皮癌的预防剂和/或治疗剂的筛选方法，其特征在于，包含对上述[10]记载的扁平上皮癌模型动物给予被检物质，观察扁平上皮癌病变部位的变化的工序。 [0028] 根据本发明的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂，能够有效抑制念珠菌病和从念珠菌病向扁平上皮癌的发展。此外，根据本发明，能够制成扁平上皮癌模型动物，该模型动物能够在病变的程度、发生率方面个体差异小地再现向由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的发展，通过使用该模型，能够筛选对扁平上皮癌的治疗有用的物质、由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂，此外，能够用于由人白色念珠菌感染引起的扁平上皮癌发病机制的阐明、新的扁平上皮癌的治疗和预防方法的研究。附图说明 [0029] 图1(a)是C组(对无处置大鼠给予人白色念珠菌的组)的前胃，和(b)是AC组(对阿脲诱发糖尿病大鼠给予人白色念珠菌的组)的前胃。对于扁平上皮增生而言AC组比C组高。在AC组的上皮表层部，发现伴随人白色念珠菌感染的高度的化脓性炎症。 [0030] 图2是确认了最初期的扁平上皮癌的一个个体的病变部位。图上方是增生部，从该部份的底部开始不规则的扁平上皮细胞索向下方扩张。用虚线包围有箭头的部位是浸润到粘膜肌层的癌细胞的呈现部分(先進部分)。 [0031] 图3(a)是DC组(对阿脲诱发糖尿病大鼠给予人白色念珠菌的组)的前胃病变部位，和(b)是DC+LG21组(对阿脲诱发糖尿病大鼠给予人白色念珠菌和LG21的组)的前胃病变部位。对于扁平上皮增生而言，DC+LG21组比DC组轻。在DC组的上皮表层部发现伴随人白色念珠菌感染的高度的化脓性炎症，而在DC+LG21组中是轻度的。 [0032] 图4(a)是DC组的细胞增殖标记物Ki-67的免疫染色图像，和(b)是DC+LG21组的细胞增殖标记物Ki-67的免疫染色图像。Ki-67在增殖的扁平上皮细胞的核内是阳性，与DC组相比DC+LG21组的阳性率低。 具体实施方式[0033] 以下，具体说明本发明，但本发明不局限于以下叙述的各个方式。 [0034] (由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂) [0035] 作为本发明的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂的有效成分的发酵物是用保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和格氏乳杆菌将奶进行发酵而得的发酵物。 [0036] 该发酵物除了将保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和格氏乳杆菌配合(添加)到奶进行发酵之外，也可以是将保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌配合(添加)到奶进行发酵之后配合(添加)格氏乳杆菌进一步发酵而得的发酵物。 [0037] 其中，作为发酵原料的奶，没有特别限制，通常可使用动物奶(源自牛奶、羊奶、山羊奶、水牛奶等哺乳类的奶)等。应予说明，该奶并非仅由生奶、杀菌奶构成，在不阻碍发酵的范围内，也可以配合(添加)还原奶原料(黄油、奶油、脱脂奶、全脂浓缩奶、脱脂浓缩奶、全脂奶粉、脱脂奶粉、炼乳等)、根据需要使用的其它食品、食品添加剂。 [0038] 作为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，可优选使用发酵乳制造中通常使用的、以用CODEX标准将酸奶发酵剂标准化的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的混合发酵剂为基础的发T酵剂。例如，可举出德氏乳杆菌保加利亚种(L.delbrueckii subsp.Bulgaricus)JCM1002和嗜热链球菌ATCC19258等。此外，也可以添加链球菌属(Streptococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、片球菌属(Pediococcus)等乳酸菌、双歧杆菌、酵母等。 [0039] 此外，作为格氏乳杆菌，没有特别限制，例如可举出格氏乳杆菌OLL2716株。应予说明，格氏乳杆菌OLL2716株，如上述专利文献3记载所示，在1999年5月24日(原保藏日)以保藏编号FERM BP-6999基于布达佩斯条约国际保藏于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(日本国茨城县筑波市东1-1-1筑波中心中央第6)。该保藏株由1999年5月24日的微工研菌寄第P-17399号的国内保藏(原保藏)，于2000年1月14日移管为基于布达佩斯条约的国际保藏。 [0040] 本发明的发酵物，如后文实施例所示，抑制由人白色念珠菌感染引起的炎症，有意义地抑制扁平上皮细胞的癌化。因此，本发明的发酵物能够作为由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂使用。 [0041] 应予说明，该使用是在人或者非人动物中的使用，此外可以是治疗性使用也可以是非治疗性使用。其中，“非治疗性”是指不包括医疗行为的概念，即不包括对人进行手术、治疗或诊断的方法的概念，更具体的，是指不包括医师或接受医师指示的人对人实施手术、治疗或诊断的方法的概念。 [0042] 本发明中，“由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防”是指，抑制由感染念珠菌优选人白色念珠菌的扁平上皮细胞构成的组织的癌化而预防扁平上皮癌的发病，即抑制从念珠菌病向扁平上皮癌的发展，而且是指抑制(预防)或治疗扁平上皮细胞癌化之前的前癌病变、即由念珠菌感染引起的炎症(念珠菌病)。其中，由扁平上皮细胞构成的组织可举出口腔、食道、咽喉、喉头、肛门、皮肤等，本发明中优选举出作为上部消化道的口腔、食道、咽喉、喉头。 [0043] 应予说明，本发明中“扁平上皮癌”除形态学上能够识别的典型的扁平上皮癌之外，还包括扁平上皮的增生病变。 [0044] 因此，本发明的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防中，例如除了口腔癌、咽喉癌、喉头癌、食道癌的预防之外，还包含急性口腔念珠菌病、急性假膜性念珠菌病、鹅口疮、急性萎缩性念珠菌病、慢性口腔念珠菌病、慢性萎缩性口内炎、慢性肥厚性念珠菌病、慢性粘膜皮肤念珠菌病、正中菱形舌炎等口腔内真菌病、食道念珠菌病等的抑制(预防)或治疗。 [0045] 本发明的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防剂，可以是将其自身对包括人的动物进行摄取或给予时发挥抑制感染念珠菌的扁平上皮细胞的癌化、抑制从念珠菌病向扁平上皮癌的发展的效果的人或者动物用的医药品、食品，或者也可以是与该医药品或食品配合而使用的材料或制剂。其中，该食品中包含以由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的预防、念珠菌病的预防或治疗为宗旨、根据需要表示其主旨的功能性食品、患者用食品、特定保健用食品。 [0046] 作为含有本发明的发酵物的上述医药品的给予形式，可以根据预防目的、改善目的、给予途径等选择剂型，例如可举出片剂、包衣片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、注射剂、栓剂、浸膏剂、煎剂、酊剂等。这些各种制剂，可按照常规方法根据需要对主药使用填充剂、增量剂、赋形剂、粘合剂、保湿剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、着色剂、矫味矫臭剂、溶解辅助剂、混悬剂、包衣剂等医药制剂技术领域通常使用的已知的辅料进行制剂化。此外，该医药制剂中也可以含有着色剂、保藏剂、香料、风味剂、甜味剂等、其它医药品。 [0047] 作为含有本发明的发酵物的上述食品的形式可以是牛奶、清凉饮料、发酵乳、酸奶、奶酪、面包、饼干、薄脆饼干、匹萨、调制奶粉、流食、患者用食品、幼儿用奶粉等食品、哺乳女性用奶粉等食品、营养食品等任一形式，关于其性状，可以是通常使用的饮料食品的状态例如固体状(粉末、颗粒状或其它)、糊状、液状或混悬状的任一种。 [0048] 上述食品，可以直接使用本发明的发酵物，或者与其它食品或食品成分混合等按照通常的饮料食品组合物的常规方法制造。 [0049] 作为其它食品成分，没有特别是限制，例如可举出水、蛋白质、糖质、脂质、维生素类、矿物质类、有机酸、有机碱、果汁、调味剂类等。其中，作为蛋白质，例如可举出全脂奶粉、脱脂奶粉、部分脱脂奶粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白质、乳清蛋白质浓缩物、乳清蛋白质分离物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳清蛋白、乳铁蛋白、大豆蛋白质、鸡蛋蛋白质、肉蛋白质等动植物性蛋白质、它们的水解物；黄油、乳清矿物质、奶油、乳清、非蛋白态氮、唾液酸、磷脂类、乳糖等各种源自奶的成分等。作为糖质，可举出糖类、加工淀粉(除了糊精之外，可溶性淀粉、英国淀粉、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等)、食物纤维等。作为脂质，例如可举出猪油、鱼油等、它们的分提油、氢化油、酯交换油等动物性油脂；棕榈油、红花油、玉米油、菜籽油、椰子油、它们的分提油、氢化油、酯交换油等植物性油脂等。作为维生素类，例如可列举出维生素A、胡萝卜素类、维生素B群、维生素C、维生素D群、维生素E、维生素K群、维生素P、维生素Q、烟酸(niacin)、烟酸(nicotinic acid)、泛酸、生物素、肌醇、胆碱、叶酸等，作为矿物质类，例如可举出钙、钾、镁、钠、铜、铁、锰、锌、硒、乳清矿物质等。作为有机酸，例如可举出苹果酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸等。可以将这些成分组合2种以上进行使用，也可以使用合成品和/或大量含有它们的食品。 [0050] 上述医药品或食品中本发明的发酵物的含量，根据其目的、用途可以任意确定。例如，以干燥品换算，相对于总量通常以0.001～100重量％的含量配合，优选以0.01～100重量％、进一步优选以0.1～100重量％的含量配合。此外，作为发酵物中的保加利亚乳杆7 菌和嗜热链球菌的菌数，优选二者的乳酸菌数总计为每1mL是1000万(1×10 个)以上。 6 此外，优选格氏乳杆菌为每1mL是100万(1×10 个)以上，更优选格氏乳杆菌为每1mL是 7 1000万(1×10 个)以上。 [0051] 上述医药品或食品的给予或摄取量因被检样本的生物种类、年龄、体重、给予或摄取次数等不同而不同，通过本领域技术人员的裁量可在大范围内进行变更。例如，作为本发明的发酵物(干燥物换算)，可以是0.01～10000mg/kg体重/day，优选为0.05～6000mg/kg体重/day，进一步优选为0.3～5000mg/kg体重/day。此外，给予或摄取次数可以是单次也可以是反复，优选反复给予或摄取。 [0052] 此外，作为给予或摄取对象，只要是需要其的人即可，没有特别限制，例如可举出口腔念珠菌病、食道念珠菌病等患者、或其后备军等。 [0053] (扁平上皮癌模型动物) [0054] 本发明的扁平上皮癌模型动物的制作中使用的“动物”是指，例如小鼠、大鼠，关于动物的性别、周龄、体重等，只要能够应用于作为目的的筛选则可没有特别限制。已知人的口腔、舌、食道由复层扁平上皮覆盖，人·猴·狗中仅有一部分发生角质化，但小鼠·大鼠中直至前胃的全部区域内完全角质化(日药理志，131，373-377，2008)。本发明的特征在于在小鼠、大鼠的前胃形成病变。作为该“动物”，例如可举出WBN/Kob大鼠、F344大鼠等。 [0055] 本发明的扁平上皮癌模型动物的制作，其特征在于对糖尿病动物强制经口给予人白色念珠菌。作为糖尿病动物，例如除了对大鼠(正常大鼠)、小鼠(正常小鼠)给予阿脲、链脲佐菌素等药物诱发糖尿病的动物以外，也可以使用遗传性糖尿病动物，但由于给予糖尿病诱发物质而发病的能够将发病时期、重症度均一化，因此优选，由于使用利用作为糖尿病诱发物质的阿脲而发病的糖尿病大鼠不是遗传毒性致癌物质，因此优选。糖尿病是否发病的确认，可用测定动物的血糖、尿糖等通常的方法进行确认。 [0056] 本发明其特征在于，诱发糖尿病之后，强制经口给予人白色念珠菌。优选将人白色念珠菌的样品混悬于生理食盐水进行经口给予。本发明中对于强制经口给予的人白色念珠菌的菌数、给予频率、给予间隔而言只要是人白色念珠菌固定于动物的扁平上皮细胞即可，因使用的动物的生物种类、年龄、体重、给予途径、给予次数等不同而不同，通过本领域技术6 人员的裁量能够大范围进行变更。例如，对10周龄的WBN/Kob大鼠给予时，可举出将1×10 7 个/mL以上、优选1×10 个/mL以上的菌数以每周1次～每周4次的频率进行强制经口给予等。 [0057] 本发明的扁平上皮癌模型动物的制作中，通常从给予开始起3个月，优选6个月左右形成大鼠前胃的扁平上皮增生。本发明中“扁平上皮癌”这一术语除了形态学上可识别的典型的扁平上皮癌之外还包括扁平上皮的增生病变。 [0058] 本发明的模型动物发生病变之后，可采取该病变部位的一部分来判定病理组织学上的前癌病变。例如，如果将组织进行苏木精-伊红染色(HE染色)发现扁平上皮有乳头状增殖的表现，则能够证明在病变部位形成增生。另外，发现从增生向连续性浸润增殖的病变，证明结构异型性或核异型性也能够确认癌细胞的存在。 [0059] 通过本发明的方法制作的载有扁平上皮癌的模型动物可用于扁平上皮癌的治疗药的筛选。对模型动物经口给予或非经口给予被检物质，例如通过观察癌病变部位的缩小、癌的发展抑制等治疗效果，能够筛选对扁平上皮癌的治疗有用的物质。模型动物制作时，可以预先给予被检物质，然后强制经口给予人白色念珠菌，也能够进行扁平上皮癌的预防药的筛选。 [0060] 此外，本发明的模型动物，对于由人白色念珠菌的感染引起的扁平上皮癌发病的机制的阐明、扁平上皮癌的治疗方法和预防方法的研究也是有用的。 [0061] 实施例 [0062] 以下，举出实施例更详细地说明本发明，但本发明并不局限于此。应予说明，实施例中“％”的表示除特别规定的情况外表示重量％。 [0063] [实施例1]疾病模型的确立 [0064] 用阿脲诱发糖尿病之后立即实验性给予人白色念珠菌，尝试早期炎症和增殖性病变的诱发。 [0065] 对10周龄的雌WBN/Kob大鼠，将阿脲(Sigma公司)以40mg/kg的给予量通过尾静脉进行单次给予，经过2周时间确认糖尿病的状态。对没有糖尿病发病的动物，再次给予阿脲，使糖尿病发病。分组构成如表1所示，使用以下分组：诱发糖尿病之后强制经口给予7 人白色念珠菌(6×10 个/mL)的组(AC组、15只)，诱发糖尿病之后没有强制经口给予人白色念珠菌的组(A组、14只)，以及没有给予阿脲仅进行人白色念珠菌的强制经口给予的组 7 (C组、10只)。AC组中，给予阿脲后2周内，将用生理盐水将人白色念珠菌稀释为6×10 个/mL而得的被检测物质以每只1mL、每周3次进行强制经口给予。然后，以每周1次的频率给予8周，总计10周，强制经口给予14次。所有的组均在人白色念珠菌给予后25周实施剖检，对上部消化道进行病理组织学的观察。应予说明，人白色念珠菌使用了从于2008年 2月解剖的F344阿脲雄1896的具有增殖性病变的胃中采取并在摄南大学药学部病理学研究室培养·保管的活菌。 [0066] [表1] [0067] [0068] AC组、A组和C组的病理表现的结果如表2所示。C组(图1)中，没有发现前胃扁平上皮的增生、人白色念珠菌的感染和炎症。A组中，14例中4例(28.6％)发现前胃扁平上皮细胞有从轻度到中度的增生(鳞状上皮增生，Squamous cell hyperplasia),14例中7例(50％)嗜中性粒细胞的积聚(中性粒细胞的积聚，Accumulation of neutrophils)以及14例中9例(64.3％)伴随从粘膜固有层到粘膜下层的由淋巴细胞浆细胞浸润(在粘膜下层淋巴细胞和浆细胞浸润，Lymphocytic and plasmacytic infiltration in submucosa)形成的慢性炎症但病变的程度是轻度～中度，发生率也低。另一方面，AC组中，15只中14例前胃扁平上皮变为从中度到高度的增生，在粘膜表层部发现人白色念珠菌的感染和化脓性炎症，从粘膜固有层到粘膜下层发现由淋巴细胞浆细胞浸润形成的慢性炎症(图1)。其中，有1例发展为最初期的扁平上皮癌(图2)。 [0069] 以上的结果表明，在阿脲诱发糖尿病大鼠的前胃中人白色念珠菌感染在早期诱发伴随慢性炎症的增殖性病变。另外可知该疾病模型的波动非常小，是对药效评价有用的模型。 [0070] [表2] [0071] [0072] hyp：增生(hyperplasia)b* [0073] 与AC有意义的不同(Significantly different from AC)P＜0.01b [0074] 与AC有意义的不同(Significantly different from AC)P＜0.05 [0075] [实施例2] [0076] 根据实施例1的结果，表明通过对阿脲诱发糖尿病大鼠给予人白色念珠菌，会在前胃诱发增殖性和炎症性病变而癌化。 [0077] 使用将以CODEX标准作为酸奶发酵剂而标准化的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的混合发酵剂作为基础的发酵剂进行发酵之后，添加格氏乳杆菌OLL2716进行发酵，利用上述得到的本发明的发酵物，考察人白色念珠菌感染诱发前胃增殖性和炎症病变是否被抑制。 [0078] 本发明的发酵物按照以下方式进行制备。首先，将格氏乳杆菌OLL2716株、德氏乳T杆菌保加利亚亚种(L.delbrueckii subsp.Bulgaricus)JCM1002、嗜热链球菌ATCC19258分别以1％接种于10％脱脂奶粉培养基，在37℃培养15小时制备生产发酵剂。然后，向在 95℃加热处理5分钟的酸奶混合物(SNF:9.5％、FAT:3.0％)接种德氏乳杆菌保加利亚亚T 种JCM1002、嗜热链球菌ATCC19258的发酵剂各1％、格氏乳杆菌OLL2716株的发酵剂5％，在43℃发酵4小时。发酵·刚刚冷却之后的格氏乳杆菌OLL2716株、德氏乳杆菌保加利亚T 7 7 亚种JCM1002、嗜热链球菌ATCC19258各自的活菌数是9.0×10CFU/mL、6.4×10CFU/mL、 8 11.0×10CFU/mL。以下将本发明的发酵物称为LG21。 [0079] 对WBN/Kob大鼠给予阿脲(Sigma公司产)诱发糖尿病之后，以表3所示的分组构成进行试验。具体而言，设置经口给予人白色念珠菌和本发明发酵物(LG21)的DC+LG21组，仅经口给予人白色念珠菌的DC组。DC组中，给予阿脲后3周内，在最初的2周，将用生7 理盐水将人白色念珠菌稀释为6×10 个/mL而得的被检测物质以每只1mL的给予量、每周 3次进行强制经口给予。然后，以每周1次的频率直至给予阿脲后27周强制经口给予人白色念珠菌。DC+LG21组中，在从给予阿脲后2周至给予阿脲后27周的期间，将本发明的发酵物LG21以5mL/kg体重的给予量以1日1次的频率开始强制经口给予，给予阿脲后3周内， 7 在最初的2周，将用生理盐水将人白色念珠菌稀释为6×10 个/mL而得的被检测物质以每只1mL的给予量、每周3次进行强制经口给予。然后，以每周1次的频率直至给予阿脲后27周强制经口给予人白色念珠菌。DC+LG21组、DC组这两组，在给予阿脲27周(35周龄)进行剖检，比较前胃的增殖性病变、人白色念珠菌感染以及炎症性病变。 [0080] [表3] [0081] [0082] DC+LG21组和DC组的病理表现的结果如表4所示。对于前胃扁平上皮增生和炎症而言，两组均是在小弯侧强，大弯侧弱。大弯侧中，DC+LG21组的增生与DC组相比较有意义地弱(图3)，作为细胞的增殖标记物的Ki-67阳性率在DC+LG21组也显示有意义的低值(图4)。此外，人白色念珠菌感染和粘膜的化脓性炎症也是在大弯侧在DC+LG21组中略微轻度。以上结果表明本发明的发酵物能够有意义地抑制扁平上皮细胞的癌化。 [0083] [表4] [0084] [表4] [0085] 大弯 [0086] 表3.在糖尿病大鼠的前胃的病理组织学发现 [0087] [0088] hyp：增生(hyperplasia) [0089] b与LG21+DC有意义的不同 [0090] (Significantly different from LG21+DC)P＜0.05 [0091] 工业上的可利用性 [0092] 根据本发明，能够提供一种由念珠菌感染引起而发展的扁平上皮癌的预防剂。此外，本发明提供一种与以往的模型动物相比其波动更小、能更适当地进行药效评价的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌模型动物及其制作方法，以及利用该模型动物的筛选方法。 |
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