乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂 |
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| 申请号 | CN201180050220.X | 申请日 | 2011-08-18 | 公开(公告)号 | CN103189499A | 公开(公告)日 | 2013-07-03 |
| 申请人 | 株式会社明治; | 发明人 | 越智大辅; 木村胜纪; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及以 氨 基酸为有效成分的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能 力 提高剂。根据本发明，可以提高作为 益生菌 的乳酸菌和双歧杆菌在酸性(pH值低)环境中的存活能力。 | ||||||
| 权利要求 | 1.乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂，其以氨基酸为有效成分。 |
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| 说明书全文 | 乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂[0001] 相关申请的参照 [0003] 本发明的背景 [0004] 发明的领域 [0005] 本发明涉及以氨基酸为有效成分的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂。另外本发明涉及包含这样的存活能力提高剂、和乳酸菌和/或双歧杆菌的食品组合物以及食品组合物的制造方法。进而本发明还涉及包括将该存活能力提高剂添加到含有乳酸菌和/或双歧杆菌的食品组合物中的、提高乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力的方法。 [0006] 相关技术 [0008] 如益生菌那样的具有功能性的乳酸菌和/或双歧杆菌，经常以各种食品和/或药品的形态经口被摄取。此时，例如在发酵奶等发酵食品中，在摄取前已经成为低pH值的环境，这样的环境大多数情况下不适合乳酸菌和/或双歧杆菌等的存活(生存)。此外，即使在摄取后，胃内部等pH值低的活体内也成为不适合乳酸菌和/或双歧杆菌的存活的环境。如果食品中和/或活体内的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力被提高，就可以期待伴随着益生菌的功能的效果提高，这一点可以说从预防医学的观点来看也是重要的。 [0009] 到目前为止，对于提高食品中的乳酸菌的存活能力，提出了几种方案。 [0010] 例 如 Int.Dairy Journal7,435-443(1997)、R.I.Dave 等 (Rajiv I.Dave and Negendra P.Shah)(“Effectiveness of Ascorbic Acid as an Oxygen Scavenger in Improving Viability of Probiotic bacteria in Yoghurts Made with Commercial Starter Cultures”)报告了通过添加抗氧化活性物质抗坏血酸(维生素C)可改善发酵奶中的乳酸菌(益生菌)的存活能力。然而，抗氧化活性物质等的添加对酸乳酪和/或发酵奶的风味和/或物性的影响较大，其使用有限制。另外，由于抗氧化活性物质通过自身氧化来发挥作用，因而如果不使用相当量，就无法期待其效果的持续性。 [0011] 日本特开2002-017254号公报中报告了，通过选自半胱氨酸、维生素C、杨梅提取物、芦丁和果汁中的化合物，在过度光照射的条件下保存的发酵奶中的乳酸菌的存活能力提高了。然而，这里关于在酸性这样的低pH值环境中的存活能力的提高没有特别公开。 [0012] 日本特开2010-505390号公报(WO2008/040872)记载了将阿拉伯树胶根据需要与含硫氨基酸(例如，半胱氨酸)组合使用来提高发酵奶制品中的双歧杆菌的存活能力。然而，必须使用阿拉伯树胶，含硫氨基酸只不过被作为附加成分使用。 [0013] 另外，日本特开平10-327751号公报中记载了通过添加规定浓度的规定氨基酸的混合成分(谷氨酸、亮氨酸、丙氨酸、丝氨酸、精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、以及甲硫氨酸)可改善发酵奶的风味。但是，这里关于通过氨基酸可以提高发酵奶中的乳酸菌等的存活能力没有任何记载或启示。 发明内容[0014] 本发明者们如今通过对处于酸性(pH值低)环境的作为益生菌的乳酸菌和双歧杆菌使用氨基酸，而成功地大幅改善了这些益生菌在保存中的存活能力(生存能力)。另外，本发明者们对于Zn、叶酸、MgCO3等无机盐类也同样地进行了研究，结果这些物质也和氨基酸一样，可以通过对作为益生菌的乳酸菌和双歧杆菌的使用而改善它们的存活能力。本发明是基于这些见解而做出的。 [0015] 所以，本发明的目的是提供能够提高处于酸性(pH值低)环境中的作为益生菌的乳酸菌和双歧杆菌的存活能力的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂、使用该乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂的食品组合物及其制造方法。 [0016] 根据本发明，提供以下发明。 [0017] (1)乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂，其以氨基酸为有效成分； [0018] (2)根据上述(1)所述的存活能力提高剂，其中，氨基酸是选自酪氨酸、色氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、丙氨酸和它们的混合物中的氨基酸； [0019] (3)根据上述(1)或(2)所述的存活能力提高剂，其中，乳酸菌和双歧杆菌是益生菌； [0020] (4)根据上述(1)～(3)的任一项所述的存活能力提高剂，其提高pH值为2.0～6.5的范围的低pH值环境下的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力； [0021] (5)根据上述(1)～(4)的任一项所述的存活能力提高剂，其提高酸乳酪或发酵奶中的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力； [0022] (6)根据上述(1)～(5)的任一项所述的存活能力提高剂，其中，乳酸菌是乳杆菌属乳酸菌； [0023] (7)根据上述(1)～(6)的任一项所述的存活能力提高剂，其中，进一步包含选自Zn、叶酸、MgCO3和它们的混合物中的无机盐类； [0024] (8)组合物，其包含上述(1)～(7)的任一项所述的存活能力提高剂、以及乳酸菌和/或双歧杆菌； [0025] (9)根据上述(8)所述的食品组合物，其是酸乳酪或发酵奶； [0026] (10)根据上述(8)或(9)所述的食品组合物，其中，以相对于组合物100g为50mg以上含有作为存活能力提高剂而被加入的氨基酸； [0027] (11)食品组合物的制造方法，其包括将氨基酸添加到pH值为2.0～6.5的范围的低pH值环境下的含有乳酸菌和/或双歧杆菌的组合物中； [0028] (12)根据上述(11)所述的方法，其进一步包括在向上述组合物中添加氨基酸之后，进行组合物的发酵； [0029] (13)根据上述(11)或(12)所述的方法，其中，氨基酸是选自酪氨酸、色氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、丙氨酸和它们的混合物中的氨基酸； [0030] (14)根据上述(11)～(13)的任一项所述的方法，其中，乳酸菌和双歧杆菌是益生菌； [0031] (15)根据上述(11)～(14)的任一项所述的方法，其中，食品组合物是酸乳酪或发酵奶； [0032] (16)根据上述(11)～(15)的任一项所述的方法，其中，乳酸菌是乳杆菌属乳酸菌； [0033] (17)根据上述(11)～(16)的任一项所述的方法，其进一步包括将选自Zn、叶酸、MgCO3和它们的混合物中的无机盐类与氨基酸一起添加； [0034] (18)根据上述(11)～(17)的任一项所述的方法，其中，氨基酸的添加量相对于组合物100g为50mg以上； [0035] (19)提高食品组合物中的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力的方法，其包括将氨基酸添加到含有乳酸菌和/或双歧杆菌的组合物中。 [0036] (20)根据上述(19)所述的方法，其中，添加氨基酸的组合物处于pH值为2.0～6.5的范围的低pH值环境下； [0037] (21)根据上述(19)或(20)所述的方法，其包括在所述组合物的发酵之前，将所述氨基酸添加到所述组合物中； [0038] (22)根据上述(19)～(21)的任一项所述的方法，其中，氨基酸是选自酪氨酸、色氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、丙氨酸和它们的混合物中的氨基酸； [0039] (23)氨基酸的用途，用于提高pH值为2.0～6.5的范围的低pH值环境下的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力； [0040] (24)根据上述(23)所述的用途，其中，氨基酸是选自酪氨酸、色氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、丙氨酸和它们的混合物中的氨基酸。 [0041] 根据本发明，可以大幅提高酸性环境中的作为益生菌的乳酸菌和/或双歧杆菌在(冷藏)保存中的存活能力。因此，可以使这些菌体的活性长时间持续。通过在食品组合物中使用本发明的存活能力提高剂，可以在不影响食品组合物的风味和/或物性的条件下提高菌体的存活能力。进而根据本发明，可以使菌体的活性长期且较高地持续，因而可以减少使用的菌体的使用量(向发酵奶等食品组合物中的添加量)，其结果是，除了成本降低之外，还可以期待发酵奶等食品组合物的风味和/或物性的改善(或品质下降抑制)。 [0042] 已知乳酸菌在发酵奶中的存活能力，根据每种菌株针对溶存氧、过氧化氢、低pH值等的耐受力不同而有较大差异。如果能够通过本发明来提高益生菌乳酸菌在制品中的存活能力，则可以减少虽然生理效果优异但由于在发酵乳中的存活能力较低而不能使用菌株的情况，还可期待益生菌商品的保质期(保鲜期)的延长。 具体实施方式[0043] 存活能力提高剂 [0044] 本发明的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂以氨基酸为有效成分。 [0045] 这里，“乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂”是指提高乳酸菌和双歧杆菌两者或者至少任一者的存活能力的药剂(包含食品添加剂等)的含义。此外在该含义下，存活能力提高剂也可以替代地表述成存活能力提高用组合物或者存活能力提高用添加剂。 [0046] 另外，这里“存活能力提高”是指乳酸菌和/或双歧杆菌处于它们的菌体能够成长或维持的环境中时，通过作用于菌体而抑制其死亡，维持、增加残存菌体的数量。因此，存活能力提高这样的表达，典型地是抑制菌体数减少的含义，此外也可以以包含菌体数的维持、增殖促进的概念使用。 [0047] 在本发明中，存活能力提高剂是能够提高乳酸菌和/或双歧杆菌在酸性(低pH值)环境下保存中的存活能力的药剂。在以发酵奶等为代表的含有乳酸菌和/或双歧杆菌的食品组合物中，通常形成酸性(低pH值)环境，大多不适合的乳酸菌的增殖或生存。本发明的存活能力提高剂即使在这样的酸性(低pH值)环境里也能发挥提高菌体的存活能力的功能，因此在提高像发酵奶等这样的食品组合物中的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力方面是有用的。因此，本发明的存活能力提高剂，在酸性(低pH值)环境里能更加有效地发挥功能。 [0048] 这里所说的酸性(低pH值)环境，用pH值表示，典型地pH值为2.0～6.5的范围，优选pH值为2.5～6.0的范围，更优选pH值为3.0～5.5的范围，进一步优选pH值为3.5～5.0的范围，进一步更优选pH值为3.8～4.8的范围。或者，如果将酸性(低pH值)的环境用酸度表示，则在食品组合物为发酵奶等的情况下，作为乳酸的酸度，例如为0.1～ 1.3的范围，优选为0.3～1.2的范围，更优选为0.5～1.1的范围，进一步优选为0.7～ 1.1的范围。此外，这样的酸度可以通过已知公开的方法对食品组合物中的乳酸进行定量，从而求得。 [0049] 另外，本发明的存活能力提高剂如上所述，可以提高在酸性(低pH值)环境中保存的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力。这里，“保存”是指在适于乳酸菌和/或双歧杆菌生长或维持的温度条件下保存。作为保存条件，优选为冷藏保存条件，如果列举具体例，则在1～10℃、优选为1～5℃、更优选为约4℃左右的温度条件下保存。此外，可期待存活能力的提高的保存时间例如为一个月以内，优选为1～4周，更优选为1～3周，进一步优选为2～3周的时间。 [0050] 这里，氨基酸只要是可作为使用摄取、且可以改善乳酸菌或双歧杆菌的存活能力即可，并没有特别限制，作为可以使用的氨基酸的优选例，可列举酪氨酸、色氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、丙氨酸，也可使用将它们两种以上组合而得的混合物。更优选氨基酸为酪氨酸、色氨酸、组氨酸、半胱氨酸或它们的混合物。进一步优选氨基酸为酪氨酸、色氨酸、组氨酸或它们的混合物。此外，使用半胱氨酸时，虽然提高乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力的效果高，但有时可能对食品的风味影响较大。另一方面，作为可以使用的氨基酸，优选ORAC值(Oxygen Radical Absorpotion Capacity(活性氧清除能力))值大的氨基酸。 [0051] 在将本发明的存活能力提高剂向食品组合物中添加时，如果作为有效成分的氨基酸难溶于食品组合物，则可以根据需要预先单独或多种组合使用水和/或食物领域所常用的溶剂例如醇类、烃类、有机酸、有机碱、无机酸、无机碱、超临界流体等，使其溶解而使用。即，可列举氨基酸为疏水性、食物组合物为亲水性的情况等。 [0052] 本发明的存活能力提高剂优选应用于作为益生菌的乳酸菌和/或双歧杆菌。即，在发酵奶等食品组合物中，作为乳酸菌和/或双歧杆菌，有：用作发酵剂(starter)的、和用作赋予食品组合物以功能性的益生菌的，本发明的存活能力提高剂主要是以提高后者的益生菌的存活能力为目的的。这里，双歧杆菌和/或乳酸菌可以使用市售品，还可以从普通的或者公共的菌的保藏机构获得，也可使用培养从肠内等得到的样品而得的菌。 [0053] 可以应用本发明的存活能力提高剂的乳酸菌优选为乳杆菌属(Lactobacillus)的乳酸菌，如果列举更具体的例子，可列举加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、噬淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、乳酸乳球菌(Lactobacillus lactis)，粘膜乳杆菌(Lactobacillus mucosae)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、高加索乳杆菌(Lactobacillus caucasicus)、嗜热乳杆菌(Lactobacillus themophilus)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、詹氏乳杆菌(Lactobacillus jensenii)、口乳 杆菌(Lactobacillus oris)、植物 乳杆 菌(Lactobacillus plantarum)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、瘤胃乳杆菌(Lactobacillus ruminis)、戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)等。其中，作为优选的例子，可列举加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、噬淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)等。 [0054] 此外，作为除乳杆菌属以外的乳酸菌，包含属于链球菌属(Streptococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、片球菌属(Pediococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、和乳球菌属(Lactococcus)的乳酸菌，作为这些乳酸菌的具体例，可列举嗜热链球菌(Streptococcus themophilus)、肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、乳明串珠菌(Leuconostoc lactis)、乳脂乳球菌(Lactococcus cremoris)等。 [0055] 可以应用本发明的存活能力提高剂的双歧杆菌是指属于双歧杆菌属(Bifidobacterium)的菌，如果列举具体例，则可列举乳双岐杆菌(Bifidobacterium lactis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、青春双岐杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、长 双 岐 杆 菌 (Bifidobacterium longum)、动 物 双 歧 杆 菌(Bifidobacterium animalis)、链状双歧杆菌(Bifidobacterium catenulatum)、齿双岐杆菌(Bifidobacterium dentium)等。其中，作为优选的例子，可列举乳双岐杆菌(Bifidobacterium lactis)。 [0056] 根据本发明的优选方式，可提供乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂，其中，除了作为有效成分的氨基酸，还进一步含有选自Zn、叶酸、MgCO3和它们的混合物中的无机盐类。作为这样的添加成分，进一步可列举抗坏血酸。 [0057] 根据本发明的其他方式，可提供以选自Zn、叶酸、MgCO3和它们的混合物中的无机盐类为有效成分的、乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂。 [0058] 一般认为乳酸菌具有对酸和/或氧气的防御机制，根据其强弱不同而存在对酸和/或氧气耐受性强的菌、耐受性弱的菌株。认为通过能够辅助细胞内的酶反应那样的无机盐类，细胞活性增加，从而存活能力提高。当然，这些是理论，并不限定本发明。这样，可以说在氨基酸中进一步添加这些无机盐类，在提高存活能力方面是更加有益的。 [0059] 食品组合物、和提高存活能力的方法 [0060] 根据本发明的另外其他方式，可提供含有本发明的存活能力提高剂、以及乳酸菌和/或双歧杆菌的组合物。这些组合物优选为食品组合物，作为具体例，可列举清凉饮料、乳饮料、发酵奶、酸乳酪、乳酸菌饮料等。 [0061] 含有本发明的存活能力提高剂、以及乳酸菌和/或双歧杆菌的组合物可以直接使用，也可以进一步与其他食品和/或其他成分混合，像普通的食品组合物那样按照常规处理方法使用。此外，对于其性状，也可以是通常使用的饮食品的状态和/或形态，例如固体(粉末、颗粒、其他)、糊状、液体或悬浮液的任一种。 [0062] 根据本发明的一个优选方式，可提供制造食品组合物的制造方法，其包括将氨基酸添加到pH值为2.0～6.5的范围的低pH值环境下的含有乳酸菌和/或双歧杆菌的组合物中。所得的食品组合物具有本发明中的存活能力提高功能。 [0063] 这里，关于添加氨基酸的时间和食品组合物的发酵时间之间的关系，可以将氨基酸添加在该组合物的发酵之前、发酵之中、发酵之后的任一时间进行，从容易在制品整体中均匀地管理效果和/或作用等的方面出发，优选为该组合物的发酵之前，从容易卫生地管理添加的氨基酸等的方面出发，更优选为该组合物的灭菌之前。 [0064] 即，根据本发明的更优选的方式，食品组合物的制造方法进一步包括在向上述组合物中添加氨基酸之后，进行组合物的发酵。 [0065] 根据本发明的进一步优选的方式，食品组合物的制造方法进一步包括将选自Zn、叶酸、MgCO3和它们的混合物中的无机盐类与氨基酸一起添加。 [0066] 作为可以在本发明的组合物中加入的其他成分，可以列举例如，水、蛋白质、糖质、脂质、维生素类、矿物类、有机酸、有机碱、果汁和香料等。此外，还可列举胶凝剂、稳定剂等添加成分。这些成分也可以两种以上组合使用。 [0067] 在本发明的组合物中，如下使用存活能力提高剂：作为存活能力提高剂加入的氨基酸，优选以相对于组合物100g为50mg以上含有，更优选以相对于组合物100g为50mg～300mg含有，进一步优选以相对于组合物100g为50mg～200mg含有。该组合物中的氨基酸含量在上述范围内，在充分发挥氨基酸的存活能力提高效果的方面是有益的，并且在避免氨基酸的大量使用对组合物的风味和/或物性带来不良影响的方面是有效的。 [0068] 在本发明的组合物(优选为食品组合物)中，乳酸菌优选以105CFU/g以上、更优选6 9 7 8 以10 ～10CFU/g的范围、进一步优选以10 ～10CFU/g的范围含有，此外双歧杆菌优选以 5 6 9 7 8 10CFU/g以上、更优选以10 ～10CFU/g的范围、更优选以10 ～10CFU/g的范围含有。 [0069] 根据本发明的其他方式，可提供提高食品组合物中的乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力的方法，其包括将本发明的存活能力提高剂添加到含有乳酸菌和/或双歧杆菌的组合物中。这里，存活能力提高剂的添加时间可以是该组合物的发酵之前、发酵之中、发酵之后的任一时间，从容易在制品整体中均匀地管理效果和/或作用等的方面出发，优选为该组合物的发酵之前，从容易卫生地管理添加的氨基酸等的方面出发，更优选为该组合物的灭菌之前。 [0071] 实施例 [0072] 通过以下的例子详细说明本发明，但本发明并不限于这些。 [0073] (1)供试菌株和培养方法 [0074] 作为乳酸菌，使用低pH值环境下(例如，发酵奶中)的存活能力不同的菌株：加氏乳杆菌OLL203195(L.gasseri OLL203195)(FERM BP-11005)、加氏乳杆菌MEP22040001(L.gasseri MEP22040001)、加氏乳杆菌MEP22040002(L.gasseri MEP22040002)、加氏乳杆菌JCM1131T(L.gasseri JCM1131T)和噬淀粉乳杆菌OLL2880(L.amylovorus OLL2880)(FERM BP-11006)。此时，使用L.gasseri OLL203195作为低pH值环境下的存活能力较低的菌体的代表，使用L.gasseri MEP22040001作为低pH值环境下的存活能力中等程度的菌体的代表，使用L.gasseri MEP22040002作为低pH值环境下的存活能力较高的菌体的代表，使用L.gasseri JCM1131T作为乳杆菌属(Lactobacillus)的乳酸菌的代表或者加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)的代表。 [0075] 此外，L.gasseri OLL203195(Lactobacillus gasseri OLL203195)于2008年9月2日委托独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心保藏，本微生物以保藏号FERM BP-11005被保藏。 [0076] 此外，L.amylovorus OLL2880(Lactobacillus amylovorus OLL2880)于2008年9月2日委托独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心保藏，本微生物以保藏号FERM BP-11006被保藏。 [0077] 而且，JCM是指理化学研究所微生物系统保存设施(Japan Collection of Microorganisms)，现在成为独立行政法人理化学研究所生物资源中心(RIKEN BRC)微生物材料开发室。 [0078] 将各菌株在MRS培养基中使用厌氧培养系统(アネロパツク(商品名、三菱ガス化学株式会社制)进行厌氧培养(37℃、24小时)。之后将所得的培养液浓缩至10倍，使用10 0.85%的生理盐水悬浮，制成菌体浓缩液(菌体浓度：约10 CFU/g)。 [0079] (2)工作发酵剂的制备 [0080] 将脱脂奶粉的10重量%水溶液在95℃灭菌10分钟，然后向其中接种0.15重量%的发酵剂(从明治十胜酸乳酪中分离出的混合发酵剂)，在37℃下发酵至其酸度达到0.75后，冷却至4℃，作为工作发酵剂(bulk starter)。 [0081] (3)发酵奶中的存活能力的测定 [0082] 将酸乳酪混合物(yogurt mix)(原料奶)(表1)在95℃的最高温度条件下灭菌后，在其中接种上述工作发酵剂3重量%和各乳酸菌1重量%，在43℃发酵至酸度达到0.75。 [0083] 作为存活能力提高剂或其比较例，分别使用氨基酸(酪氨酸、色氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、丙氨酸)(各100mg/100g)、维生素C(100mg/100g)、MgCO3(200mg/100g)、叶酸(200μg/100g)、锌(Zn)(1mg/100g)。原则上，这些存活能力提高剂和比较例在上述发酵之前且灭菌之前以规定量加入(其中，维生素C和叶酸因为对热耐受力差，因而在灭菌后添加)。发酵结束后，将各样品放入半阻杯挡容器，冷却至4℃，然后使用热封机盖上铝盖。 [0084] 将得到的盖有铝盖的各样品的发酵奶在4℃下保存。 [0085] 在保存开始1天后和16天后分别通过BL(+)培养基需氧培养(在添加了5%的脱纤维马血的BL培养基中，在需氧条件下培养)、和LBS厌氧培养(在LBS培养基中，使用厌氧培养系统(アネロパツク(商品名、三菱ガス化学株式会社制)在厌氧条件下培养)，以72小时确认发酵奶中的存活能力(保存温度：4℃)。 [0086] 具体地，求出各样品中的活菌数，存活率用16天后的菌数除以1天的菌数，以％换算求得。这里的菌数，使用所使用的培养基中菌数最高的培养基中的平均值。 [0087] 表1.酸乳酪混合物的简易配合(不需要均质化处理) [0088] [0089] 实验结果如下述表2和表3所示。 [0090] 此外，表2和表3中，因为生产日期不同，对照组中的存活率差异由于每天的实验误差。 [0091] 表2.4℃保存中各乳酸菌在发酵乳中的存活率(%：16天/1天) [0092] [0093] 表3.4℃保存中各乳酸菌在发酵乳中的存活率(%：16天/1天) [0094] [0095] 此外，对于维生素C、MgCO3、叶酸和锌(Zn)的各情况，实验结果如下述表4和表5所示。 [0096] 表4.4℃保存中L.gasseri MEP22040001在发酵乳中的存活率(%：8或16天/1天) [0097]1天 8天 16天 对照组 100 2.0 0.3 Zn添加组 100 26.5 0.2 叶酸添加组 100 23.8 0.5 MgCO3添加组 100 27.5 3.0 [0098] 表5.4℃保存中L.gasseri OLL203195在发酵乳中的存活率(%：8或16天/1天)[0099]1天 8天 16天 对照组 100 5.7 0.7 Zn添加组 100 10.4 0.5 叶酸添加组 100 6.6 0.6 MgCO3添加组 100 14.7 3.1 [0100] (4)存活能力的测定(由氨基酸量的差异造成的影响) [0101] 作为乳酸菌使用L.gasseri OLL2680，并且作为存活能力提高剂的氨基酸的种类和添加量如下述表，除此以外，与上述(3)的实验同样地求出存活能力(存活率)。 [0102] 结果如下述表6所示。 [0103] 表6.4℃保存中L.gasseri JCM1131T在发酵乳中的存活率(%：16天/1天)[0104] [0105] (5)存活能力的测定(由氨基酸量的差异造成的影响) [0106] 作为乳酸菌使用L.gasseri OLL2802和L.gasseri OLL2680，并且作为存活能力提高剂使用氨基酸(色氨酸)，其添加量为1、10、50和100mg/100g，除此以外，与上述(3)的实验同样地求出存活率。 [0107] 实验结果如下述表7所示。 [0108] 表7.4℃保存中各乳酸菌在发酵乳中的存活率(%：16天/1天) [0109] [0110] 根据上述结果，当添加色氨酸浓度(氨基酸)超过50mg/100g时，确认了乳酸菌的存活能力提高效果。 [0111] (6)存活能力测定(使用氨基酸的混合物的情况) [0112] 作为乳酸菌使用L.gasseri OLL2802和L.gasseri OLL2680，并且作为存活能力提高剂使用如下2种氨基酸的组合(混合物)，除此以外，与上述(3)的实验同样地求出存活率。 [0113] 实验的氨基酸组合如下。 [0114] (a)色氨酸：50mg/100g+组氨酸：50mg/100g [0115] (b)色氨酸：50mg/100g+酪氨酸：50mg/100g [0116] (c)色氨酸：50mg/100g+半胱氨酸：50mg/100g [0117] 实验结果如下述表8所示。 [0118] 表8.4℃保存中各乳酸菌在发酵乳中的存活率(%：16天/1天) [0119] [0120] (7)存活能力的测定(使用双歧杆菌的情况) [0121] 使用双歧杆菌B.animalis subsp.lactis JCM10602T(动物双歧杆菌乳酸亚种JCM10602T)代替乳酸菌，并且作为存活能力提高剂使用氨基酸(色氨酸)，其添加量为50、100和200mg/100g，除此以外，与上述(3)的实验同样地求出存活率。 [0122] 实验结果如下述表9所示。 [0123] 表9.4℃保存中双歧杆菌在发酵乳中的存活率(%：16天/1天) |
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