新的乳酸细菌 |
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| 申请号 | CN200580007044.6 | 申请日 | 2005-03-04 | 公开(公告)号 | CN1930282B | 公开(公告)日 | 2011-04-20 |
| 申请人 | 株式会社生物平衡; | 发明人 | 宫本拓; 内藤善夫; | ||||
| 摘要 | 本 发明 意图提供具有抗 真菌 活性的德氏乳杆菌作为具有抗真菌活性的新型乳酸细菌。此德氏乳杆菌是德氏乳杆菌ANTI MUFFA FERMBP-10663。德氏乳杆菌具有抗青霉菌属真菌的抗真菌活性并且即使在单独使用的情况下也显现出极好的 益生菌 活性。 | ||||||
| 权利要求 | 1.德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)ANTI MUFFA FERMBP-10663。 |
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| 说明书全文 | 新的乳酸细菌技术领域[0002] 已知乳酸细菌产生多种抗微生物的物质(抗细菌物质)，诸如乳酸、有机酸、挥发性脂肪酸、过氧化氢、苯甲酸、细菌素(烟酸、大肠杆菌素等等)等。 乳酸细菌不仅用作乳制品的发酵剂，而且还因其抗菌活性而用于食品保存(生物制品保存)。 不过，不仅细菌会作为病原菌或腐败细菌而自身繁殖，霉菌也会在食品保存期间自身繁殖。 因而，大部分乳酸细菌不能有效抵抗霉菌的繁殖。 尤其是，霉菌往往在动物饲料上进行自身繁殖。 因此，有时会由于霉菌繁殖所引起的产热或饲料腐臭气味造成动物的饲料摄入率降低。 此外，进料器的漏斗开口有时会因霉菌繁殖而堵塞，从而阻断了饲料的投放。另一方面，为了预防和消除真菌的繁殖，有时会在动物饲料中添加具有抗真菌活性的抗生素物质或诸如甲酸等抗真菌剂。 不过，其中存在一些问题，即抗真菌剂引起腐蚀作用以及抗生素物质造成动物腹泻或消化不良或者造成出现抗药细菌或对动物而言反常的肠菌群等等。 传统上，除了Lactobacillus sanfranciscencis(参阅专利公开1)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantrum)(参阅非专利公开1)之外，对具有抗真菌活性的乳酸细菌所知甚少。 [0003] 通常乳酸细菌也用作益生菌。 对于这一点，有许多提案：包含唾液乳杆菌(lactobacillus salivarius)的治疗牲畜的药物(参阅专利公开2)；含有至少0.1％的混合微6 生物的除臭饲料，其中的混合微生物主要由超过N×10 个乳酸球菌和产芽孢菌组成(参阅专利公开3)； 在高品质有机物中添加了抗氧化物质和活的微生物制剂的饲料添加剂，将它们放入密封容器中并在25℃(摄氏温度)至37℃(摄氏温度)的温度下发酵(参阅专利公开4)，等等。 “益生菌”又称为活的微生物制剂。 依照最通常的定义，它是“通过改善肠道微生物平衡而有利地作用于宿主动物的活的微生物添加剂”(Fuller，R.： Probioticsin man and animals.，J.Appl.Bacteriol.，66，365-378(1989))。 不过，日前，广义上它也可作为“有益于宿主保持健康的微生物”使用(Lee，Y.K.和Salminen，S.：The coming of age of probiotics.，Trends Food Sci.Technol.6，241-245(1995))。 因而，还有一种理解认为甚至被杀死的细菌也包括在益生菌的范围内(Salminen，S.等：probiotics： how should they be defined？，Trends FoodSci.Technol.，10，107-110(1999))。 典型的作为益生菌的微生物是包括双歧杆菌在内的乳酸细菌。 此外，枯草芽孢杆菌、丁酸细菌、丙酸细菌、酵母等也可用作益生菌。 [0004] 专利公开1：日本公开专利号2002-291466。 [0005] 非专利公开1：Paola Lavermicocca等，Applied andEnvironmental Microbiology，2000年9月，p4084-p4090，vol.66，No 9)。 [0006] 专利公开2：日本公开专利申请S50-132115。 [0007] 专利公开3：日本公开专利申请H9-322714。 [0008] 专利公开4：日本公开专利申请2001-299230。 发明内容[0009] 本发明要解决的问题 [0010] 不过，迄今为止未有关于具抗真菌活性的德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)的报导。 如专利公开2所述，曾有单独使用乳酸细菌作为常规益生菌的提议。 但是仍未获得充足的效果。 因此，如上所提及的，大部分情况是将乳酸细菌与其它微生物组合或联合其它有用的物质一起使用。 最近很少有关于单独使用乳酸细菌能获得足够的益生菌的提议。 [0011] 鉴于上述情况，本发明的一个目标是提供具有抗真菌活性并且即使在单独使用时仍具有极好的益生菌活性的新型乳酸细菌。 [0012] 解决问题的方法 [0013] 为了解决上述问题，依照本发明第一方面的新型乳酸细菌就是具有抗真菌活性的德氏乳杆菌。 [0014] 德氏乳杆菌ANTI MUFFA FERM BP-10663优选作为该德氏乳杆菌。 [0015] 德氏乳杆菌优选由具有针对青霉菌属真菌的抗真菌活性的德氏乳杆菌组成。 [0016] 依照本发明第二方面的动物饲料中添加了上述的德氏乳杆菌。 [0017] 依照本发明第三方面的动物饮料中添加了上述的德氏乳杆菌。 [0018] 依照本发明第四方面的的活的乳酸细菌剂含有上述德氏乳杆菌作为活性成分。 [0019] 依照本发明第五方面的动物饲料添加剂含有上述德氏乳杆菌作为活性成分。 [0020] 依照本发明第六方面的动物饲养改良方法使用了上述德氏乳杆菌。 [0021] 动物饲养的改进优选以下改进之一：有关动物排泄物除臭的改进、提高动物的存活率、为收集蛋而提高母鸡的产蛋率以及改进奶牛的牛奶质量。 不过，动物饲养质量的提高广泛地包含和包括了利用本发明乳酸细菌的益生菌活性获得的效果。 [0022] 依照本发明第七方面的发酵食品是利用上述德氏乳杆菌制备的。 [0023] 依照本发明第八方面的发酵食品制备方法使用了上述德氏乳杆菌。 [0024] 依照本发明第九方面的发酵食品的保存方法使用了上述德氏乳杆菌。 [0025] 依照本发明第十方面的牲口棚(stable)的清洁方法是将上述德氏乳杆菌散布在牲口棚的地板或地面上。 [0026] 依照本发明第十一方面的水的清洁方法是将上述德氏乳杆菌直接散布到水中或者将它们放在可渗透的容器中以便将其浸泡和沉放在水中。 [0027] 本发明的效果 [0028] 由于本发明的新型乳酸细菌具有抗真菌活性，这种新的乳酸细菌可有效的用于在食品保存期间控制真菌、控制动物饲料中的真菌，等等。 从而有可能减少由于添加抗生素物质或抗真菌制剂所引起的问题。 此外，由于本发明的新型乳酸细菌具有极好的益生菌活性，这种乳酸细菌可以改善肠内菌群。 由此它们可以提高诸如家禽或家畜等宿主的饲养质量。 此外，在各自利用了上述新型乳酸细菌的动物饲料、动物饮料、活的乳酸细菌制剂、动物饲料添加剂、动物饲养的改良方法、发酵食品、发酵食品的制备方法、食品的保存方法、牲口棚的清洁方法和水的清洁方法中也发挥相同的效果。 [0029] 附图描述 [0030] 图1显示了通过16S rDNA基因序列分析所作的德氏乳杆菌ANTI MUFFA FERM BP-10663的系统发生体系。 [0031] 图2是显示第一个比较实施例的牲畜饲料的照片图像。 [0032] 图3是显示第一个应用实施例的牲畜饲料的照片图像。 [0033] 图4是显示本发明的德氏乳杆菌ANTI MUFFA FERMBP-10663在10％脱脂牛奶中抗真菌活性和pH的暂时变化以及与比较实施例的数据相比较的图表(检查案例号4)。 [0034] 图5是显示在饲料中添加本发明的德氏乳杆菌ANTIMUFFA(FERM P-19705)后的抗真菌活性与比较实施例的数据相比较而言的照片图像(检查案例号5)。 [0035] 图6是显示从图5的比较实施例的饲料中分离的污染绿色霉菌的显微照片。 [0036] 图7是显示在饲料中添加本发明的德氏乳杆菌ANTIMUFFA FERM BP-10663后的抗真菌活性与比较实施例的数据相比较而 言的照片图像(检查案例号6)。 [0037] 发明的最佳实施方式 [0038] 本发明的德氏乳杆菌优选是德氏乳杆菌ANTI MUFFA，它在下文中可被称为“本发明的细菌”或“本发明的菌株”。 此菌株已保存于国家高等工业科学和技术研究院国际专利生物保藏中心(IPOD)(Central6，1-1-1，Tsukuba，Ibaraki Japan)，保藏号为FERMBP-10663。 [0039] 本发明的细菌是在研究乳酸细菌的抗菌活性中发现的。 如图1所示，由16S rDNA碱基序列分析的谱系分析结果表明，本发明的细菌与德氏乳杆菌乳亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.Lactis)具有99.5％的同源性。 因此，它被认为是属于德氏乳杆菌乳亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.Lactis)的菌株。 下文显示了德氏乳杆菌ANTI MUFFA FERM BP-10663)的真菌特性，它是用适于乳酸细菌传代的液体培养基人工培养的，该培养基是通过在蒸馏水中加入5.0g的葡萄糖、5.0g的乳糖、10.0g的胰蛋白胨、5.0g的酵母提取物、1.0g的Tween 80和9.1g的L-半胱氨酸盐酸盐至总体积达到 1000ml、将pH值调节至pH6.8-pH7.0之间、然后在121℃高压蒸气灭菌15分钟而制得。 至于糖的同化作用，用适于糖可发酵性检测的基本培养基培养细菌，该培养基是通过在蒸馏水中加入10.0g胰蛋白胨、5.0g酵母提取物和0.06g溴甲酚紫至总体积1000ml、将pH值调节至pH6.8、然后在121℃(摄氏温度)高压蒸气灭菌15分钟而制得。 [0040] 细胞形状：杆菌，芽孢形成：Nil，迁移：Nil，革兰氏菌株：+(阳性)，抗氧表现：兼性厌氧，15℃下的生长：-(阴性)，45℃(摄氏温度)下的生长：+(阳性)，乳酸发酵：同型-(阴性)，由葡萄糖产气：-(阴性)，由精氨酸产氨：-(阴性)，马尿酸钠的水解能力：-(阴性)，对4％氯化钠的耐受性：-(阴性)，糖同化作用：阿拉伯糖-(阴性)，木糖-(阴性)，鼠李糖-(阴性)，核糖-(阴性)，葡萄糖+(阳性)，甘露糖+(阳性)，果糖+(阳性)，半乳糖+(阳性)，蔗糖+(阳性)，麦芽糖+(阳性)，纤维二糖+(阳性)，乳糖+(阳性)，海藻糖+(阳性)，蜜二糖-(阴性)，蜜三糖-(阴性)，松三糖-(阴性)，甘露醇-(阴性)，山梨醇-(阴性)，七叶苷+(阳性)，水杨苷+(阳性)，苦杏仁苷-(阴性)，葡糖酸钠-(阴性)，产生的乳酸：D-乳酸，所产生的乳酸的立体异构现象(HPLC，24小时)：D(-)(90.7％)，L(-)(9.3％)，DNA GC含量(HPLC)：48.7％。 [0041] 本发明的细菌可用MRS培养基、TYLG培养基、牛奶培养基等等培养乳酸细菌的常用培养基培养。 培养温度是20℃(摄氏温度)至50℃(摄氏温度)，优选30℃(摄氏温度)至40℃(摄氏温度)。 培养pH是3.5-9.0，优选pH为4.5-7.0。 培养时间优选6至30小时。 本发明的细菌具有抗真菌活性，尤其是针对青霉属真菌的抗真菌活性。本发明细菌对极易在动物饲料中繁殖的奥尔森青霉(Penicilliumolsonii)有阻滞作用。 此外，本发明细菌对具有毒枝菌素(真菌毒素)生产能力的产毒青霉和娄地青霉(Penicillium roquefortii)有阻滞作用。 此外，本发明菌株强烈影响或抑制马克斯克鲁维酵母乳品种(Kluyveromyces marxianus var.lactis 5Y307)的生长。 [0042] 本发明的细菌被添加在用于喂养家禽、牛、猪等牲畜的饲料中；喂养狗、猫等的宠物饲料中；喂养诸如鳗鲡等鱼的水产养殖饲料中，以便通过其抗真菌活性影响或抑制饲料中的霉菌。 此外，本发明的细菌可加入饮料中，诸如喂养家禽、家畜或宠物的饮用水中。 [0043] 本发明的细菌可用于制备活的或可存活的乳酸细菌制剂，其中将本发明的细菌作为活性成分。可存活的乳酸细菌制剂通常可单独利用本发明细菌制备。 或者，可以将其与作为本发明细菌营养来源的物质混合，诸如玉米、麸、米糠等。 此外，活的乳酸细菌可与其它微生物或不会阻碍或干扰本发明细菌生长的其它有用物质联合使用。 活的乳酸细菌可添加于动物饲料或动物饮料中。 [0044] 本发明细菌满足安全性的要求，因此可用作发酵食品的发酵起始剂。 此外，本发明细菌具有抗真菌活性，从而可以将其加入以便控制 和阻碍致病细菌或腐败细菌。 因而，本发明细菌可用于食品保存中。 [0045] 此外，本发明细菌可用作益生菌。 益生菌被定义为通过改善宿主的肠内菌群而对宿主产生有益影响的口服可吸收微生物。 对宿主产生的有益影响意味着通过动物吸收获得的多种效果：促进动物生长、提高饲料的需用率、预防和改善肠道病、对排泄物的除臭作用、提高存活率、增加蛋鸡的产蛋率、改善奶牛的牛奶质量，等等。 在改进动物喂养方面也同样有意义。 本发明细菌由于其益生菌活性而能改善动物的喂养状况，这可通过使动物摄入添加了含有本发明细菌作为活性成分的动物饲料添加剂的动物饲料而实现。 [0046] 第一个应用实施例 [0047] 尽管在展示应用实施例时对本发明进行了详述，但本发明并不局限于以下应用实施例中。 [0048] [制备实施例] [0049] 将本发明细菌接种于MRS培养基中并在30℃(摄氏温度)至40℃(摄氏温度)保温24小时进行原代培养。 然后，将培养液喷在无菌的糠上并在30℃(摄氏温度)至40℃(摄氏温度)保温3天进行继代培养，以便获得活的乳酸细菌制剂。 在所获得的活 9 乳酸细菌制剂中包含的本发明细菌的计数是5.3×10/g。 [0050] [抗真菌活性的检查案例1] [0051] 将表1中试验细菌菌株的真菌孢子涂在脱脂奶琼脂平板上(10ml的无菌10％脱6 脂奶，5ml溶解了BCP(100mg/l)的2％琼脂，150μl(微升)TYLG培养液(含有10/ml 6 的本发明细菌))。 然后，将5ml添加了50μl(微升)TYLG(含10/ml本发明细菌)的 0.15％软琼脂铺在上面。 之后，将细菌在30℃(摄氏温度)培养2天。 经过培养后，与无真菌孢子涂在上面的对照进行比较，评估其抗真菌繁殖的抑制作用。 结果如表1所示，表明它对青霉属真菌具有强抑制作用。 [0052] [表1] [0053] [0054] [抗真菌活性的检查案例2(第一个应用实施例)] [0055] 对于添加了本发明细菌的牲畜饲料是否能控制和抑制真菌的繁殖进行了测试。9 将获自前述制备实施例的1克(5.3×10 个)活乳酸细菌制剂加入20克动物饲料中(60wt％的谷类(玉米、黑麦)，26wt％的油籽饼粉，2wt％的谷壳和麸以及12wt％的其它物质(甜点废料、mollasses等等))。 然后，在所述动物饲料中加入20ml蒸馏水并放在杯子中室温放置377天(第一个应用实施例)。 在20克类似的牲畜饲料中只加入20ml蒸馏水并以相同方式放置(第一个比较实施例)。 结果如图2和图3所示。 在第一个比较实施例中，牲畜饲料中污染的奥尔森青霉在饲料上繁殖且饲料颜色变成蓝绿色。 相反，在第一个应用实施方案中，奥尔森青霉的繁殖得到了控制和阻碍。 图2中的第一个比较实施例显示了放置不理会31天后的状态，而图3的第一个应用实施方案则显示了放置不理会377天后的状态。 [0056] [抗真菌活性的检查案例3] [0057] 对用牛奶琼脂平板法筛选的本发明菌株的抗真菌活性进行检查。娄地青霉PR-1菌株，下文也称为“PR-1菌株”，被用作指示性真菌。 首先，将10ml 10％的脱脂牛奶、5ml含BPC(100mg/l)和150μl本发明菌株培养液的2％琼脂溶液混合。待琼脂凝固后，将稀释10倍 的PR-1菌株的真菌孢子涂在上面。制备真菌孢子时，在25℃(摄氏温度)培养了7天的potate葡萄糖琼脂斜面培养基中加入含吐温80(0.1％)的正常盐溶液并搅拌。 然后，通过玻璃丝过滤制备试验用孢子。 [0058] 其次，将添加了50μl(微升)本发明菌株培养液的5ml软琼脂(0.15％)铺到上面并在30℃(摄氏温度)保温2至5天。 结果证实了与单独使用培养真菌(PR-1菌株)的培养基(对照平板)相比，在含有具抗真菌活性的本发明菌株的培养基(测试平板)中真菌(PR-1菌株)的生长被明显抑制。 因此，比较对照平板和测试平板之间真菌(PR-1菌株)的生长情况，从而测量本发明菌株的抗真菌活性。 [0059] 然后，检查本发明菌株对10种真菌菌株的抗真菌活性图谱。在牛奶琼脂平板上30℃(摄氏温度)保温5天后进行该项检查。 结果证实了本发明菌株具有抗三种对饲料有不良影响的青霉属细菌株系的抗真菌活性，即产黄青霉(JCM2056)、奥尔森青霉(野生型)和娄地青霉(PR-1)。 其中，已证实产黄青霉(JCM2056)的生长被完全控制并抑制。 [0060] [抗真菌活性检查案例4] [0061] 通过菌落平板计数法检查本发明菌株在10％脱脂奶中抗真菌活性(检查案例4)和pH的随时间变化情况。图4中的线条图(三条线)显示了脱脂牛奶的pH。 以三角形点表示的第一条线显示了只接种了本发明菌株的脱脂牛奶的pH随时间的变化情况。 以菱形点表示的第二条线(最上面的线)显示只接种了娄地青霉PR-1菌株的脱脂牛奶的pH随时间的变化情况。 以圆点表示的第三条线(线条大致与第一条线重叠)显示既接种了娄地青霉PR-1菌株又接种了本发明菌株的脱脂牛奶的pH随时间变化的情况。 如图4中线条图所示的，在只接种了本发明菌株的脱脂牛奶中以及接种了娄地青霉PR-1菌株和本发明菌株二者的脱脂牛奶中pH下降。 然而，在只接种了娄地青霉PR-1菌株的脱脂牛奶中则未发现有任何pH的降低。 [0062] 图4中的棒状图(三条棒)显示了本发明菌株和PR-1菌株中细菌 的数目。 左侧的棒状图显示了单独培养的本发明菌株的细菌数。中间的棒显示了单独培养的PR-1菌株中细菌的数量。 右侧的棒显示了在添加本发明菌株的条件下PR-1菌株的数量。 如图4中的棒状图所示，在添加本发明菌株的条件下PR-1菌株的繁殖得到了控制和抑制，而且在36小时后就检测不到残余的PR-1菌株细菌计数。 因而，显然本发明菌株可以很好的应用于乳制品(发酵食品)中，例如酸奶等等。 [0063] [抗真菌活性的检查案例5] [0064] 将适于下蛋母鸡并添加了本发明菌株的饲料和适于下蛋母鸡但未添加本发明菌株的饲料分别放置1年。然后，检查真菌的产生情况。在图5中，左侧的照片显示了在适于下蛋母鸡的饲料中未加入本发明菌株的情况下真菌的产生状态。 图5的右侧照片显示了在适于下蛋母鸡的饲料中加入本发明菌株的情况下真菌的产生状态。 如图5所示，未添加本发明菌株的下蛋母鸡适用饲料变得发霉并且完全腐烂了。 不过，在添加了本发明菌株的饲料中则未观察到真菌的产生，而且该饲料也没有腐烂。 此外，如图6所示，当从未加入本发明菌株且变得腐烂的下蛋母鸡适用饲料中分离出污染的真菌进行观察时，可见一个或多个分生孢子相互排成行象四条担孢子柄。 因此，此真菌从其外形、生长于选择培养基中以及分类学特征上被鉴别为奥尔森青霉。 这些结果证实了本发明菌株对奥尔森青霉的生长具有强抑制作用。 [0065] [抗真菌活性检查案例6] [0066] 以与检查案例3同样的方式检测本发明菌株抗娄地青霉PR-1的抗真菌活性。观察测试平板(培养添加了本发明菌株的培养PR-1菌株的培养基)和对照平板(单独培养PR-1菌株的培养基)上PR-1菌株的生长状态。 在30℃(摄氏温度)培养5天。 结果如图7中上方照片(A)所示，在未含本发明菌株的培养基中观察到了许多PR-1菌株的生长。 另一方面，如图7中的下方照片所示，在含有本发明菌株的培养基中只观察到了本发明菌株的生长而未观察到PR-1菌株的生长。 [0067] [对家禽和家畜排泄物除臭作用的检查] [0068] 分别检查猪圈、鸡窝和牛棚中的氨浓度和气味消除情况，以便如 下检查本发明细菌的除臭作用。 [0069] [有关猪饲料的实施例(第二个应用实施例)] [0070] 作为第二个比较实施例，制备添加了0.2wt％的芽孢杆菌natto的猪饲料(60wt％的谷类(玉米、黑麦)、26wt％的油籽饼粉、2wt％的谷壳和12wt％的其它物质(甜点废料、磨拉石、磷酸钙等等)。 然后，分别在适于断奶后小猪的生殖房、饲养房和母猪房中固定时间内对2000只猪供应第二次比较实施例的猪饲料。 之后，在同样的时间段后检查猪圈中的氨浓度。 通过在猪圈中1.5米高度处安置一氨气探测管(由GASTEC CORPORATION制造，3DL)来检测氨浓度。 [0071] 另一方面，在前述猪饲料中加入用上述制备方法获得的活乳酸细菌制剂以使每10 头猪每天摄取4g(2.12×10 )该饲料作为第二个应用实施例。 然后，对经第二个比较实施例的猪饲料喂养的生殖期后的上述2000只猪分别供应第二个应用实施例的猪饲料。之后，分别在经第二个比较实施例的猪饲料喂养的生殖期后20天和40天，以与第二个比较实施例相同的方式检测氨浓度。 换而言之，在完成第二个比较实施例测试后进行第二个应用实施例的测试。 结果如表2所示，与第二个比较实施例相比，第二个应用实施例显示出显著的除臭效果。 尤其是，在40天后几乎没有氨的气味产生。 [0072] [表2] [0073] [0074] [下蛋母鸡适用饲料的应用实施例(第三个应用实施例)] [0075] 作为第三个比较实施例，制备添加了2.0wt％的商品化乳酸细菌材料(由乳酸细菌、酵母、丝状细菌或真菌等等组成，由A Corporation制造)的下蛋母鸡适用饲料(59wt％的玉米、23wt％的油籽饼粉、3wt％的谷壳和麸，1wt％的以动物为基础的饲料(鱼食)和14wt％的其它物质(碳酸钙、动物油和脂肪、玉米浸出液等等)。然后，在固定时间内对12000只下蛋母鸡(ISA Brown)供应第三次比较实施例的下蛋母鸡适用饲料。之后，检查鸡笼中的氨浓度。 [0076] 另一方面，在前文所述类似的下蛋母鸡适用饲料中加入1.0wt％的、用上述制备方法获得的活乳酸细菌制剂作为第三个应用实施例。 然后，对经第三个比较实施例的下蛋母鸡适用饲料喂养的生殖期后的上述12000只母鸡(ISA Brown)分别供应第三个应用实施例的下蛋母鸡适用饲料。 之后，检测鸡笼中的氨浓度。 结果如表3所示。 [0077] 此外，在固定的时间内对经第三个比较实施例的下蛋母鸡适用饲料喂养的生殖期后的上述12000只下蛋母鸡(ISA Brown)供应与第三个实施方案相同的下蛋母鸡适用饲料。在试验开始后检测鸡笼内的氨浓度，即，在加入活乳酸细菌制剂5天、18天、25天和37天后。 结果如表4所示。 在此，在第三个比较实施例和第三个应用实施例中，通过与前述第二个应用实施例相同的检测方法和检测装置进行氨浓度的检测。 此外，在第三个比较实施例测试进行超过15个月且用无添加剂的下蛋母鸡适用饲料喂食下蛋母鸡三个月后，进行第三个应用实施例的测试。 而且，在第三个比较实施例和第三个应用实施例的每个测试中，为了调整比较条件，饲养条件都保持一致。 例如，每只鸡笼的翅膀数目(每只鸡的面积)和鸡笼的环境(设备等等)都保持一致。 另一方面，对饲养期的时间间隔设置为如上所述的前期和后期。表3显示了各15个月的第三个比较实施例和第三个应用实施例检查期之间周期性检测到的结果的平均值。 结果如表3所示，对家禽而言本发明的细菌具有良好的除臭或消除气味的作用。 此外，如表4所示，气味消除作用随时间增加而增强。 而且，与第三个比较实施例相比，用第三个应用实施例的下蛋母鸡适用饲料喂养所获得的存活率(87.39％ 比52.07％，提高了35.32％)和蛋产量(3698683比3389253，增加了309430)的数值更好。 [0078] [表3] [0079] [0080] [表4] [0081] [0082] [适于奶牛饲料的应用实施例(第四个应用实施例)] [0083] 作为第四个比较实施例，制备添加了商品化乳酸细菌材料(由乳酸细菌、酵母、曲霉等组成，由B Corporation制备)的奶牛饲料(5kg玉米、3kg大麦、1.5-2.0kg甜菜、2kg棉花籽、1.2-1.3kg脱脂大豆、0.8kg-1kg大豆、8-10kg干草和150-2001水)，使每头奶牛每天摄取200g。 然后，在固定时间内投放第四个比较实施例的奶牛饲料供130头奶牛(Holstein)摄取。 之后，检测牛棚中的氨浓度。 [0084] 另一方面，在与前述饲料相同的奶牛饲料中添加用前述制备方法获取的活乳酸细菌制剂而制备饲料使得每只奶牛每天可以摄取40g作为第四个应用实施例。 然后，在固定时间内投放第四个应用实施例的奶牛饲料供上述130只奶牛各自摄取。 之后，检测牛棚中的氨浓度。 在完成第四个比较实施例的测试且前述130只奶牛各自摄取一个固定时间段的无添加剂奶牛饲料后进行第四个应用实施例测试。 用与前述第二个应用实施例相同的检测方法和检测装置进行氨浓度的检测。 结果如表5所示，对奶牛而言具有良好的除臭效果。 [0085] [表5] [0086] [0087] [0087] [下蛋母鸡的存活率和产蛋率检查] [0088] 在分别超过15个月、进行除臭效果检查的上述第三个应用实施例测试中，与除臭作用测试一起还检查了存活率和产蛋率。 如上所述，第三个比较实施例3使家禽摄取了添加了商品化乳酸细菌材料的家禽饲料。 另一方面，如上所述，第三个应用实施例使家禽摄取了添加了活乳酸细菌制剂的家禽饲料。 结果如表6所示，摄取了本发明细菌的下蛋母鸡的存活率非常高。 此外，如表7所示，摄取了本发明细菌的下蛋母鸡的产蛋率也很高。 [0089] [表6] [0090] [0091] [表7] [0092] [0093] [提高牛奶质量作用的检测(第五个应用实施例)] [0094] 用与在前述第四个应用实施例除臭作用检测所用的奶牛饲料中添加了商品化乳酸细菌物质的饲料(第四个比较实施例)类似的奶牛饲料(第五个比较实施例)和与在奶牛饲料在添加了前述制备方法获取的活乳酸细菌制剂的饲料(第四个应用实施例)类似的奶牛饲料(第五个应用实施例)分别饲养奶牛。 然后每隔10天对奶牛进行17次挤奶。从而进行所述牛奶中牛奶脂肪含量百分率、牛奶蛋白质含量百分率和脱脂牛奶固体含量百分率的检测。 在第五隔比较实施例中，给130头奶牛(Holstein)喂食添加了商品化乳酸细菌物质的奶牛饲料。 而且，在完成第五个比较实施例测试后使奶牛在固定时间内摄取无添加剂的奶牛饲料以及随后使同样130头奶牛(Holstein)摄取添加了用前述制备方法获取的活乳酸细菌制剂的奶牛饲料(第五个应用实施例的饲料)，进行第五个应用实施例的测试。 用牛奶成分分析装置(MilkoScan FT120，由SUJIHIRA INDUSTRY CO.，LTD制造)检测从所述奶牛 挤出的牛奶中的牛奶脂肪百分率、奶制品蛋白百分率和脱脂奶固体百分率。 表8显示了通过测试的17次检测的平均值。 结果如表8所示，摄取了本发明细菌的奶牛所产生牛奶中的牛奶脂肪百分率、牛奶蛋白质百分率和脱脂牛奶固体含量百分率都比第五个比较实施例中的各项参数要高，因而牛奶质量有所提高。 [0095] [表8] [0096] [0097] 从以上结果中可以认为，本发明细菌可以很好的停留在家禽或牲畜的肠道内以改进消化和吸收，从而即使在单独使用本发明细菌的情况下也具有益生菌的活性。 因此，本发明可具体化为益生菌(活的微生物制剂)并展示出上述作用。此外，如上所述，本发明不仅可加入动物饲料添加剂中，还可体现为添加了本发明菌株的动物饲料或添加了本发明菌株的动物饮料。 在这方面，本发明具有与上文一样的作用。 此外，如上所述，本发明对动物饲养也有改良效果，诸如牲畜或家禽的饲养。 此外，如果将本发明菌株加入食品中，有助于食品保存或控制食品微生物(生物保存)。 在此情况下，本发明菌株具有传统上通过上述特性或特征观察不到的适当效果。 此外，如前述抗真菌活性的检查案例4中所述，本发明菌株可加入发酵食品中以便用于制备发酵食品。 因此，本发明菌株发挥了常规通过上述特性或特征观察不到的适当作用。 此外，添加了本发明菌株的动物饲料等可在喂食动物等的时候有意散布或无意撒在饲养棚的地面、地板、排水沟等处。然后，本发明菌株可控制所述散布区域内微生物的生长。 从而本发明菌株通过上述特性或特征起到了对所散布区的清洁或除臭作用，以致达到了通常观察不到的适当效果。 或者，添加了本发明菌株的动物饲料等可直接散布在水中或装在诸如网状物等可渗透器具中沉淀或存放在水中。 然后，本发明菌株可控制水中的微生物。 从而本发明菌株通过上述特性或特征对水起到了纯化或消毒作用，以致达到了通常观察不到的合适效果。 |
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