已有报导，血脂，特别是胆甾醇和甘油三酯与各种疾病如冠状 心循环性疾病，如动脉硬化和高胆甾醇血症以及脂肪肝密切相关。胆 甾醇，一种脂肪甾醇，是在肝脏中从饱和脂肪产生的血脂。甘油三酯 是另一类血脂，已知其会增加各种疾病的危险。也已有报导，血液或 血浆胆甾醇水平升高引起脂肪、巨噬细胞和泡沫细胞在血管壁上的沉 积，这种沉积导致形成斑块，然后导致动脉硬化(参见Ross,R., Nature,362,801-809(1993))。降低血浆胆甾醇水平的方法之一 是营养疗法，以降低胆甾醇和脂质的摄取。另一种方法是通过抑制胆 甾醇的吸收所涉及的酶来抑制胆甾醇的吸收。
酰基CoA-胆甾醇-o-酰基转移酶(ACAT)促进血液中胆甾醇的 酯化作用。泡沫细胞是通过ACAT的作用形成的，其含有大量的由 血液中的低密度脂蛋白(LDL)携带的胆甾醇酯。在动脉壁上泡沫细 胞的形成随ACAT活性而增加，因而ACAT的抑制剂也可以是预防 动脉硬化的试剂。另外，已有报导，通过抑制ACAT活性可以降低 血液LDL-胆甾醇的水平(参见Witiak,D.T.和D.R.Feller(eds.), Ant1-Lipidemic Drugs:Medicinal Chemical and Biochemical Aspects, Elsevier,pp159-195(1991))。
此外，已有报导，通过抑制介导脂蛋白间胆甾醇的转移的胆甾 醇酯转移蛋白(CETP)或抑制介导甲羟戊酸，一种生物合成甾醇或 类异戊二烯的中间体的合成的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG- CoA)还原酶，而降低胆甾醇的生物合成速率，可有效地治疗高胆甾 醇血症(参见Cardiovascular Pharmacology,William W.Parmley和 Kanu Chatterjee Ed.,Wolfe Publishing,pages 8.6-8.7,1994)。
因而，人们进行了许多努力以开发抑制HMG-CoA还原酶的药 物；结果，已有从青霉属和曲霉属衍生而来的几种化合物被商品化。 具体说来，由美国的Merck公司开发的洛伐他汀和辛伐他汀，以 及由日本的Sankyo公司开发的普伐他汀已被商品化(参见C.D.R. Dunn,Stroke:Trends.Treatment and Markets,SCRIPT Report,PJB Publications Ltd.,1995)。
但是，这些药物非常昂贵，且其长期给予已知在中枢神经系统 引起不利的副作用。此外，虽然洛伐他汀和辛伐他汀可通过增强 肝中LDL受体的活性来降低血浆LDL胆甾醇水平，但它们引起诸如 肝中肌酸激酶增加和横纺肌溶解症等副作用(参见Farmer,J.A.，等， Baillers-clin.Endocrinol.Metal.,9,825-847(1995))。因而，仍需 要开发便宜且无毒的HMG-CoA还原酶抑制剂。
与血脂水平升高相关的疾病的另一个例子是脂肪肝，它是由于 过度摄取含脂肪的食物和醇类引起的。当患有脂肪肝时，大量的脂质 沉积于肝组织中，血清GOT(谷氨酸草酰乙酸转氨酶)、GPT(谷 氨酸-丙酮酸转氨酶)和γ-GTP(γ-谷氨酰基转肽酶)水平升高(参见 T.Banciu等，MedInterne.,20,69-71(1982)和A.Par等，Acta.Med Acad.Sci.Hung.,33,309-319(1976))。在脂肪肝的发展过程中， 脂肪主要以甘油三酯和脂肪酸的形式积聚在肝脏中，同时少量地以胆 甾醇的形式积聚。另外，已有报导，脂肪肝的主要迹象之一是高血胆 甾醇和/或甘油三酯含量。因而，脂肪肝与血液中胆甾醇和/或甘油三 酯含量密切相关。
Hayashi等已报导，来自绿茶的提取物可通过预防血清GOT和 GPT的升高来改善大鼠的肝功能(M.Hayashi等，Nippon Yakuri gaku Zasshi,100,391-399(1992))。
已有报导，存在于自然界中，特别是存在于蔬菜和水果中的酚 类化合物显示出各种有用的抗癌、抗病毒和抗脂质氧化的药理学活 性，并且也有助于预防循环性疾病。
本发明的发明者致力于开发酚类化合物的新的药理学用途，这 种化合物在蔬菜和水果中含量丰富。结果发现，单宁、没食子酸和鞣 花酸在治疗或预防与血脂水平升高相关的疾病中有效。具体而言，其 可大大降低血浆胆甾醇水平；抑制HMG-CoA还原酶和ACAT的活 性；抑制巨噬细胞-脂质复合物在动脉的内皮壁上的积聚；预防哺乳 动物肝功能不良。
发明概述
因而，本发明的目的是提供一种用于治疗或预防与血脂水平升 高相关的疾病的含有单宁、没食子酸或鞣花酸的药物组合物。
本发明的另一个目的是提供一种用于治疗或预防与血脂水平升 高相关的疾病的含有单宁、没食子酸或鞣花酸的食品或饮料组合物。
根据本发明的一个方面，提供了一种用于治疗或预防与血脂水 平升高相关的疾病的药物组合物，该组合物包括作为活性组分的单 宁、没食子酸或鞣花酸以及药学可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
附图简述
结合附图，通过以下本发明的说明将更为明了本发明的以上和 其它的目的和特征，其中：
图1A、1B和1C显示了分别给予1％胆甾醇，1％胆甾醇加1mg/kg 洛伐他汀，和1％胆甾醇加0.1％鞣花酸的兔的动脉内皮；以及
图2A、2B和2C给出了分别给予1％胆甾醇，1％胆甾醇加1mg/kg 洛伐他汀，和1％胆甾醇加0.1％鞣花酸的兔的肝脏的显微特征。
发明详述
在整个说明书中，术语“血脂”指存在于血液中的脂质。血脂 以血液中的胆甾醇和甘油三酯为代表。
术语血脂“高或升高的水平”指高于正常水平，正常水平随患 者的具体情况如年龄、性别和体重而改变。高血脂水平通常被认为是 有害于健康的。
术语“与血脂水平升高相关的疾病”指由于血脂水平高或升高 而引起的疾病，和/或其症状包括血脂水平高或升高的疾病。这些疾 病的实例包括高血脂症、动脉硬化、心绞痛、中风、肝病如脂肪肝等。
单宁(C76H52O46)可以从植物如橡实、柿子和胡桃壳中容易地 提取，而没食子酸(C7H6O5)和鞣花酸(C14H6O8)可根据已知方法 从单宁合成。
单宁、没食子酸和鞣花酸对与血脂水平升高相关的疾病发挥抑 制及治疗作用，这些疾病例如，高血脂症、动脉硬化、心绞痛、中风、 肝病。另外，尽管它们的功效有力，当以5000mg/kg的剂量口服给 予于小鼠单宁、没食子酸和鞣花酸时，它们未显示毒性。此外，它们 对肝功能没有不利影响。
本发明提供一种用于治疗或预防与血脂水平升高相关的疾病的 药物组合物，该组合物包括有效量的单宁、没食子酸或鞣花酸以及药 学可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
药物配方可根据常规过程制备。在制备配方时，活性组分优选 与载体混合或用载体稀释，或包封在载体内，载体可为胶囊、小药囊 (sachet)或其它容器的形式。当载体用作稀释剂时，其可为固体、 半固体或液体物质，作为活性组分的载色剂、赋形剂或介质。因此， 配方可为片剂、丸剂、粉剂、小药囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液 剂、糖浆剂、气雾剂、软和硬明胶胶囊、无菌注射溶液、无菌小包装 (packaged)粉剂等。
适宜的载体、赋形剂和稀释剂的实例为乳糖、葡萄糖、蔗糖、 山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸 钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基 苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。配方还可 另外包括填充剂、抗凝剂、润滑剂、润湿剂、矫味剂、乳化剂、防腐 剂等。可采用任何本领域熟知的过程将本发明的组合物配方使其在给 予哺乳动物后提供活性组分的速释、缓释或延迟释放。
另外，本发明的药物组合物可经各种途径给予，包括口服、经 皮、皮下、静脉内和肌内引入。对于人，单宁、没食子酸或鞣花酸的 每日剂量一般为约0.1-500mg/kg体重，优选为I-100mg/kg体重，可 以单次剂量给予或分多次剂量给予。
但是，应该理解，活性组分的实际给予量应根据各种因素确定， 包括治疗的症状、选择的给予途径、各患者的年龄、性别和体重以及 患者症状的严重程度；因而，上述剂量不应看作是对本发明范围的限 定。
另外，单宁、没食子酸或鞣花酸可有利地掺入食品或饮料中用 于治疗或预防与血脂水平升高相关的疾病。食品或饮料可包括：肉； 汁如蔬菜汁(例如，胡萝卜汁和番茄汁)和果汁(如橙汁、葡萄汁、 菠萝汁、苹果汁和香蕉汁)；巧克力；小吃；糖果；比萨；由谷粉制 备的食品，如面包、蛋糕、薄脆饼干、曲奇、饼干、面条等；胶质软 糖；乳制品，如牛奶、干酪、酸奶和冰淇淋；汤；肉汤；酱、蕃茄酱 和沙司；茶；酒精饮料；碳酸饮料；维生素复合物；和各种保健食品。
单宁、没食子酸和鞣花酸在食品或饮料中的含量可为0.01-20 wt％，优选为0.1-5wt％。
如上所述，单宁、没食子酸和鞣花酸可用作有效且无毒的药物， 用于治疗或预防与血脂水平升高相关的疾病，如高血脂症、动脉硬化 和肝病。
下述实施例用于进一步说明本发明，但它们并非对本发明范围 的限制。
另外，以下给出的固体混合物中固体的百分比，液体中液体的 百分比，以及液体中固体的百分比分别基于wt/wt、vol/vol和wt/vol， 除非另有说明，所有的反应均在室温下进行。 实施例1：口服给予单宁、没食子酸或鞣花酸的毒性
将36只7周大的无特殊病原体的ICR雌性小鼠、18只每只体 重为约25-29g的雌性小鼠和18只体重为约34-38g的雄性小鼠保持 在环境温度22±1℃，相对湿度55±5％及光周期12L/12D的环境中。 将饲料(Cheiljedang Co.，小鼠和大鼠饲料)和水消毒并喂给小鼠。
将购自Aldrich-Sigma Chemical Co.(St.Louis,MO,U.S.A)的 单宁、没食子酸或鞣花酸溶解于0.5％吐温80中至浓度为500 mg/ml，将溶液口服给予小鼠，用量为0.2ml/20 g小鼠体重。将溶液 给予小鼠一次，按照以下时间表观察不利影响或死亡的信号10天： 给予后1、4、8和12小时，此后每隔12小时，记录小鼠重量的变化 以检查单宁、没食子酸或鞣花酸的作用。另外，在第10天时，将小 鼠处死，目视观察内部器官。
所有的小鼠在第10天均存活，在剂量为5000mg/kg下，单宁、 没食子酸或鞣花酸均无毒。尸体解剖表明，小鼠并未产生任何病理学 异常，在10天的试验期内，未观察到体重减少。因而，可以得出结 论，当口服给予动物时，单宁、没食子酸或鞣花酸无毒。 实施例2：单宁、没食子酸或鞣花酸对血浆胆甾醇、HDL-胆甾醇和 中性脂质水平的影响 (步骤1)将单宁或没食子酸给予大鼠
将30只3周大的白色Sprague-Dawley大鼠(Taihan laboratory animal center，韩国)，每只体重大约为90-110g，通过随机区组设 计平均分成三组。三组大鼠分别用三种不同的高胆甾醇食物饲养， 即，含有1％胆甾醇(对照组)，1％胆甾醇加0.1％单宁(单宁组) 和1％胆甾醇加0.1％没食子酸的AIN-76实验室动物食物(ICN Biochemicals,Cleveland,OH，美国)。给三组大鼠进食的食物的组 成如表1所示：                                               表1     食物组 组分     对照组     (n=10)     单宁组     (N=10) 没食子酸组     (n=10) 酪蛋白     20     20     20 D,L-蛋氨酸     0.3     0.3     0.3 玉米淀粉     15     15     15 蔗糖     49     48.9     48.9 纤维素粉末*1     5     5     5 矿物质混合物*1     3.5     3.5     3.5 维生素混合物*1     1     1     1 柠檬酸胆碱     0.2     0.2     0.2 玉米油     5     5     5 胆甾醇     1     1     1 单宁*2     -     0.1     - 没食子酸*2     -      -     0.1 总计     100     100     100 *1购自TEKLAD premier Co.(Madison,WI，美国) *2购自Sigma Chemical Co.(St.Louis,MO，美国)
在6周内，用指定的食物及水自由饲养大鼠，每日记录摄取量， 每7天对大鼠称重，然后对记录进行分析。所有的大鼠均显示出正常 的生长速度，在食物摄取量和体重增加方面三组间没有显著差异。 (步骤2)测定血液中的总胆甾醇、HDL-胆甾醇和中性脂质含量
如下测定给予大鼠单宁或没食子酸对血浆胆甾醇和中性脂质含 量的作用。
将在步骤1中得到的三组食物组的大鼠处死，从其取血样。将 血液放置2小时，在3000rpm下离心15分钟，分离出上清液，在使 用前贮藏于深冷冷冻机中。采用血液化学分析仪(CIBA Coming 550 Express，美国)对血液进行化学分析，测定总胆甾醇、HDL-胆甾醇 和甘油三酯水平的变化。结果如表2所示。                                                 表2     组 脂质浓度   对照组   单宁组  没食子酸组 总-C(mg/d1)     135±6     88±4     93±5 HDL-C(mg/dl)     38±2     37±2     32±3 TG(mg/dl )     98±5     76±3     77±4 HDL-C/总-C(％)     28     43     34 *总-C：总-胆甾醇 *HDL-C:HDL-胆甾醇 *TG：甘油三酯
从表2可以看出，总血浆胆甾醇水平单宁和没食子酸组分别比 对照组低35％和31％。而HDL-C/总-C比值单宁和没食子酸组分别比 对照组高54％和21％。另外，中性脂质含量单宁和没食子酸组分别 比对照组低21％和22％。 实施例3：单宁或没食子酸在抑制ACAT中的活性 (步骤1)制备微粒体
为测定进食单宁或没食子酸给大鼠对ACAT活性的影响，从准 备使用的肝组织中分离出微粒体作为酶源。
将来自实施例2每一组大鼠的各1g肝在5ml的均化介质(0.1M KH2PO4,pH7.4,0.1mMEDTA和10mMβ-巯基乙醇)中均化。将 匀浆在3000xg及4℃下离心15分钟，将这样得到的上清液在15000 xg及4℃下离心15分钟，得到上清液。将该上清液放入超离心管 (Beckman)中，并在100000xg及4℃下离心1小时以得到微粒体 小丸，然后，将其悬浮于3ml均化介质中并在100000xg及4℃下离 心1小时。将所得到的小丸悬浮于1ml的匀浆介质中。用Lowry法 测定形成的悬浮液中蛋白质的浓度，然后调节至4-8mg/ml。将形成 的悬浮液在深冷冷冻机(Biofreezer,Forma Scientific Inc.)中贮藏。 (步骤2)ACAT测定
将6.67μl的1mg/ml胆甾醇的丙酮溶液与6μl的10％Triton WR-1339(Sigma Co.)的丙酮溶液混合，然后，通过在氮气氛下进 行蒸发，从混合物中除去丙酮。向形成的混合物中加入蒸馏水，调节 胆甾醇的浓度为30mg/ml。
向10μl形成的胆甾醇水溶液中加入10μl的1MKH2PO4(pH 7.4)、5μl的0.6mM牛血清白蛋白(BSA)、10μl上述步骤1得到 的微粒体溶液和55μl蒸馏水(总共90μl)。将混合物在37℃的水 浴中预保温30分钟。
再向预保温的混合物中加入10μl的(1-14C)油酰基-CoA溶液 (0.05μCi，终浓度：10μM)，将形成的混合物在37℃的水浴中保 温30分钟。向混合物中加入500μl的异丙醇∶庚烷混合物(4∶1(v/v))、 300μl的庚烷和200μl的0.1 M KH2PO4(pH 7.4)，将混合物用涡旋 混合机剧烈混合，然后，使其在室温下放置2小时。
将200μl形成的上清液放置在闪烁瓶中，并向其中加入4ml的 闪烁液体(Lumac)。采用1450 Microbeta液体闪烁计数器(Wallacoy， 芬兰)进行放射活性分析。以每分钟每mg的蛋白质合成的胆甾醇油 酸酯的皮摩尔数(pmols/min/mg蛋白质)来计算ACAT活性。结果 如表3所示。                                           表3     组     对ACAT活性的抑制％     对照     0     单宁组     41.7     没食子酸组     42.1
从表3可以看出，在单宁和没食子酸组中观察到的ACAT活性 分别比在对照组中观察到的ACAT活性低41.7％和42.1％。 实施例4：单宁或没食子酸在HMG-CoA还原酶抑制中的活性
为了测定HMG-CoA还原酶的活性，采用Hulcher法但进行了一 些改进(参见J.Lipid Res 14,625-641(1973))。在该方法中，通 过光谱测定辅酶-A(CoA-SH)的浓度，辅酶-A(CoA-SH)是在 HMG-CoA还原酶作用下，当HMG-CoA还原成甲羟戊酸盐时产生 的，从而计算出HMG-CoA还原酶的活性。 (步骤1)制备微粒体
将取自实施例2每一组大鼠的肝组织3g依次用100ml的冷盐 水(0.15 M NaCl)和100ml的冷缓冲液A(0.1M三乙醇胺，HCl/0.2 M EDTA/2mM二硫苏糖醇(DTT))洗涤。向肝组织中加入冷的缓 冲液，用量为2ml/1g肝组织，将混合物用均化器均化。将匀浆在15000 xg下离心15分钟，然后，将上清液在100000xg下超离心60分钟， 得到微粒体沉淀。将这样得到的沉淀用冷的缓冲液A洗涤，并将其 保持在-70℃下的1.5ml管中。 (步骤2)HMG-CoA还原酶活性测定
用于HMG-CoA还原酶活性测定的反应底物如下：ⅰ)缓冲液 B:0.1M三乙醇胺，HCl/0.02 M EDTA(pH7.4),ⅱ)HMG-CoA 溶液：150μmmol/培养介质，以及ⅲ)NADPH溶液：2μmol/培养 介质。
将悬浮液(微粒体)与反应底物混合，将混合物放置在离心管 中，在37℃下反应30分钟。将反应混合物用20μl的0.01 M亚砷酸 钠(sodium arsenous)处理，使其放置1分钟，然后使其与100μl的 柠檬酸盐缓冲液(2M柠檬酸盐/3％钨酸钠，pH3.5)在37℃下反应 10分钟，随后在25000xg下离心15分钟以除去蛋白质。将这样得到 的1ml的上清液转移至带盖的管中，向其中加入0.1ml的2M tris-HCl溶液(pH10.6)和0.1ml的2Mtris-HCl溶液(pH8.0)以调节 反应物的pH值至8.0。
然后，将反应物与20μl的DTNB缓冲液(3mM DTNB/0.1M三 乙醇胺/0.2M EDTA,pH7.4)混合，测定在412nm处混合物的吸光 度以计算CoA-SH的量(HMG-CoA还原酶的活性)。
基于上述结果计算单宁和没食子酸对HMG-CoA还原酶活性的 抑制程度。结果如表4所示。
                                             表4 组 HMG-CoA还原酶的抑制(％) 对照组     0 单宁组     23.5 没食子酸组     6.0
从表4中可以看出，在单宁和没食子酸组中观察到的HMG-CoA 还原酶的活性比在对照组中的活性分别低23.5％和6.0％。 实施例5：单宁、没食子酸或鞣花酸在动物中的作用 (步骤1)将单宁、没食子酸或鞣花酸给予兔
将30只3个月大的每只重约2.5-2.6kg的雄性新西兰白兔 (Yeonam Horticulture和Animal Husbandry College，韩国)在下述条 件下饲养：温度20±2℃，相对湿度55±5％和光周期12 L/12 D。将兔 分成五个组，五组兔用不同的食物饲养，即，含有1％胆甾醇(对照 组，1),1％胆甾醇加1mg/kg洛伐他汀(Merck，美国)(洛伐 他汀组，2),1％胆甾醇加0.1％单宁(3),1％胆甾醇加0.1％没食 子酸(4)和1％胆甾醇加0.1％鞣花酸(5)的RC4食物(Oriental Yeast Co.，日本)。RC4食物包括7.6％的水分，22.8％的粗蛋白，2.8％的 粗脂肪，8.8％的粗灰分，14.4％粗纤维素和43.6％的可溶性无氮物质。 单宁、没食子酸和鞣花酸均购自Sigma Chemical Co.(St.Louis， MO)。
将兔饲养6周，期间使其自由进食食物和水。 (步骤2)血液的化学分析
在6周后，在股骨区肌内注射氯胺酮(50mg/kg)将兔麻醉并处 死。从每只兔的心脏取得血样，使其放置2小时，在3000rpm下离 心15分钟，分离出上清液血清，使用前将其贮藏于冰箱内。
采用血液化学分析仪(CIBA Coming 550 Express，美国)对血 液进行化学分析，测定GOT、GPT、γGTP、总胆甾醇、HDL-胆甾醇 和甘油三酯水平的变化。结果如表5所示。 (步骤3)对在主动脉中脂肪条纹的分析
将步骤2处死的每只兔的胸部切开。将主动脉瓣膜上方1cm位 置处的主动脉向下部分切开，长度为约5cm，将主动脉周围的脂肪 除去。沿纵轴在中部将主动脉切开，用针别在盘中。将湿的动脉进行 照相，然后根据Esper,E.，等(J.Lab.Clin.Med 121,103-110(1993)) 的方法如下进行脂肪条纹的染色。
将一部分切下的主动脉用无水丙二醇在2分钟内洗涤3次，用 油性红O在丙二醇中的饱和溶液(ORO,Sigma Co.)染色30分钟。 此后，将动脉用85％的丙二醇在3分钟内洗涤两次，以除去残余的染 色溶液，然后用生理盐水洗涤。对动脉照相，追踪照片。采用图像分 析仪(LEICA,Q-600，德国)测定染色区(脂肪条纺区)的面积， 计算其占总动脉面积的比(％)。结果如表5所示。
图1A、1B和1C显示了分别给予1％的胆甾醇(对照组)，1％ 的胆甾醇加1mg/kg的洛伐他汀(洛伐他汀组)，和1％胆甾醇加 0.1％鞣花酸的兔的动脉内皮。如图1A、1B和1C所示，在对照组的 兔的动脉内皮上观察到一厚层的巨噬细胞-脂质复合物，而在洛伐他 汀组和鞣花酸组的兔的动脉内皮上未观察到或只有非常薄的巨噬 细胞-脂质复合物层。
因而，可以得出结论，即使当血胆甾醇水平较高时，单宁、没 食子酸和鞣花酸可强烈地抑制巨噬细胞在动脉内皮上的沉积。 (步骤4)器官的组织学观察
从每只步骤2中处死的兔取出一部分主动脉、心脏、肺、肝、 肾和肌肉，目视检测以确认未发现致病性异常。将这种器官每部分的 一半进行深冷冻，而另一半固定于10％中性缓冲福尔马林中超过24 小时。将固定的器官片段用自来水充分洗涤，逐步用70％、80％、90％ 和100％的乙醇脱水，然后采用SHANDONHistocentre 2(美国)将 其包埋于石蜡中。将包埋的器官片段用切片机(LSICA,RM2045， 德国)切成4μm厚度，并用苏木精和曙红进行染色。将染色后的器 官样本用二甲苯制成透明的，用permount进行封固，然后在显微镜 下进行观察以寻找存在的损害。在任一种器官样本中未观察到损害。 (步骤5)预防肝病
为了评价进食含单宁、没食子酸或鞣花酸的高胆甾醇食物对肝 组织的影响，从步骤2处死的兔取得的肝样本按照下述文献所述方法 进行处理：Fogt F.和Nanji A.，毒理学和应用药理学，136,87-93, 1996；Keegan A.等，Journal of Hepatology 23:591-600,1995，并在 显微镜下观察，基于肝腺泡中央静脉周围的异常含脂肪细胞的比例分 类成四个等级，即1+(0-25％)、2+(26-50％)、3+(51-75％)、 4+(76-100％)。结果如表5所示。
图2A、2B和2C给出了对照组、洛伐他汀组和鞣花酸组的兔 肝脏的显微镜特征。在图2A和2B中，在中央静脉周围观察到许多 含过量脂肪的细胞。与此相相反，在图2C中，几乎所有的肝细胞均 具有正常的形状，这提示，鞣花酸能够显著地抑制脂肪肝的形成。
从以上可以看出，给予单宁、没食子酸或鞣花酸可改善兔的脂 质代谢和肝功能，并抑制在主动脉的内皮中斑块的形成和脂肪肝的发 生，如表5所示。结果采用Microsoft excel(7.0版)程序通过斯氏t- 检验进行了检验。
                                         表5 组     TC (mg/dl) TG (mg/dl) GOT (IU/l) GPT (IU/l) γGTP (IU/l) 脂肪条 纹(％)     A 1  1143±260  56±38  77±8  65±9 4.2±0.9  35±14  3.2±0.3 2  1210±263  66±17  125±19  73±9 12.4±0.8  5±4  3.4±0.5 3  1120±211  25±10  65±10  22±8  7.0±3  13±2  2.7±0.4 4  1150±100  27±11  60±9  20±10  7.0±2  10±2  2.7±0.4 5  1000±105  25±10  65±5  19±7  7±4  9±2  2.7±0.4 *TC：总-胆甾醇 *TG：甘油三酯 A：含脂肪的异常肝细胞比例
从表5可以看出，与对照组相比，给予单宁、没食子酸或鞣花 酸可降低血清中甘油三酯水平40-50％。另外，与对照组相比，给予 单宁、没食子酸或鞣花酸可分别降低血清GOT和GPT水平10-25％ 和60-70％。此外，与对照组和洛伐他汀组相比，单宁、没食子酸和 鞣花酸显著地抑制脂肪肝的形成。
因此，单宁、没食子酸和鞣花酸可用作有效的无毒药物，治疗 或预防与血脂水平升高相关的疾病，如高血脂症、动脉硬化和肝病。 配方1：制备药物配方
采用以下组分制备硬明胶胶囊：
                                   数量(mg/胶囊) 活性组分(单宁、没食子酸或鞣花酸)            200 维生素C                                     50 乳糖(载体)                                  150 总计                                        400
将上述组分充分混合，并填充入硬明胶胶囊中。 配方2：含单宁、没食子酸或鞣花酸的食品
如下制备含鞣花酸的食品：
(1)制备蕃茄酱和沙司
将单宁、没食子酸或鞣花酸加至蕃茄酱和沙司中，用量为0.1-5 wt％，得到改善健康的蕃茄酱和沙司。
(2)制备含小麦粉的食品
将单宁、没食子酸或鞣花酸加至小麦粉中，用量为0.1-5wt％， 采用混合物制备面包、蛋糕、曲奇、薄脆饼干和面条，得到改善健康 的食品。
(3)制备汤和勾芡肉汁
将单宁、没食子酸或鞣花酸加至汤和勾芡肉汁中，用量为0.1-5 wt％，得到改善健康的汤和勾芡肉汁。
(4)制备绞细牛肉
将单宁、没食子酸或鞣花酸加至绞细牛肉中，用量为0.1-5wt％， 得到改善健康的绞细牛肉。
(5)制备乳制品
将单宁、没食子酸或鞣花酸加至牛奶中，用量为0.1-5wt％，得 到改善健康的牛奶和各种乳制品，如由其制备的黄油和冰淇淋。
在制备干酪时，将鞣花酸加至凝固乳蛋白中；在制备酸奶时， 将鞣花酸加至发酵后得到的凝固乳蛋白中。 配方3：含有单宁、没食子酸或鞣花酸的饮料
将单宁、没食子酸或鞣花酸加至用于制备蔬菜汁或果汁的原料 中，用量为0.1-5wt％，得到改善健康的汁。
以上本发明由具体的实施方案进行了描述，但应当理解，本领 域的技术人员可以做出各种仍在所附权利要求书定义的本发明范围 内的变化和改进。