人乳渗透物组合物及其制备和使用方法

申请号 CN200980155914.2 申请日 2009-12-02 公开(公告)号 CN102300575A 公开(公告)日 2011-12-28
申请人 普罗莱克塔生物科学公司; 发明人 J.福尔尼尔; S.埃克; S.埃尔斯特; D.J.雷克特曼;
摘要 本公开内容的特征在于自分级的人全乳获得的人乳渗透物和含有该人乳渗透物的组合物。本 发明 的富含寡糖的渗透物和渗透物组合物作为早产和足月婴儿的 营养补充剂 可用于建立或维持肠道菌群及用于 治疗 炎性肠病的症状。
权利要求

1.一种营养组合物,其包含乳和人乳渗透物。
2.权利要求1的营养组合物,其中所述乳是人乳。
3.权利要求1的营养组合物,其中所述乳是非人乳。
4.权利要求3的营养组合物,其中所述非人乳是乳。
5.权利要求1的组合物,其中所述渗透物是通过从人乳过滤液体获得的。
6.权利要求5的方法,其中所述人乳是人脱脂乳。
7.权利要求1的组合物,其进一步包含维生素和矿物。
8.一种营养组合物,其包含浓缩的或稀释的人乳渗透物。
9.权利要求8的组合物,其中所述渗透物是通过从人乳过滤液体获得的。
10.权利要求8的组合物,其中所述渗透物是通过从人脱脂乳过滤液体获得的。
11.权利要求8的组合物,其进一步包含维生素和矿物。
12.一种制备浓缩的或稀释的人乳渗透物的方法,该方法包括:
(a)获得人乳;
(b)将所述乳分成乳脂和脱脂乳;
(c)过滤所述脱脂乳以获得渗透物;
(d)保留所述渗透物;并
(e)稀释、浓缩、或干燥所述渗透物。
13.权利要求12的方法,其中(e)中的稀释步骤包括将非人乳组合物添加至所述渗透物。
14.权利要求12的方法,其中所述非人乳组合物是牛乳。
15.权利要求12的方法,其中(e)中的稀释步骤包括将或缓冲液添加至所述渗透物。
16.权利要求12的方法,其中(e)中的浓缩步骤包括反渗透
17.权利要求12的方法,其进一步包括将维生素和矿物添加至步骤(d)后的所述渗透物。
18.权利要求12的方法,其中所述过滤包括超滤
19.权利要求12的方法,其进一步包括(f)降低生物负荷。
20.权利要求19的方法,其中降低生物负荷包括巴氏消毒或无菌过滤。
21.一种对受试者施用包含人乳寡糖的渗透物组合物的方法,该方法包括:
(a)获得人乳;
(b)将所述乳分成乳脂和脱脂乳;
(c)过滤所述脱脂乳以获得渗透物;
(d)保留所述渗透物;并
(e)对所述受试者施用所述渗透物。
22.权利要求21的方法,其中所述受试者是人早产婴儿或人足月婴儿。
23.权利要求22的方法,其中口服或表面施用所述组合物。
24.权利要求23的方法,其中经由饲管口服施用所述组合物。
25.一种在受试者中建立有益的肠道菌群的方法,该方法包括对所述受试者施用包含来自人乳的寡糖的渗透物组合物。
26.权利要求25的方法,其中所述受试者是人。
27.权利要求25的方法,其中所述受试者是人早产婴儿或人足月婴儿。
28.权利要求25的方法,其中所述受试者是出生后喂养配方食品的人早产婴儿或出生后喂养配方食品的足月婴儿。
29.权利要求25的方法,其中在可用于建立有益的肠道菌群的其它组合物之前、同时、或之后施用所述组合物。
30.权利要求29的方法,其中其它组合物是益生细菌或植物多糖。
31.权利要求25的方法,其中与非人乳配制剂一起施用所述组合物。
32.权利要求25的方法,其中所述组合物在与非人乳配制剂的混合物中。
33.权利要求25的方法,其中所述组合物是人乳超滤渗透物。
34.权利要求32的方法,其中所述渗透物是通过过滤人乳获得的。
35.权利要求32的方法,其中所述渗透物是通过过滤人脱脂乳获得的。
36.权利要求25的方法,其中建立有益的肠道菌群包括使双歧杆菌或乳杆菌或两者在肠道建群。
37.一种治疗具有感染或有险形成感染的受试者的方法,该方法包括对所述受试者施用包含来自人乳的寡糖的渗透物组合物。
38.权利要求37的方法,其中所述感染的症状是由细菌、细菌毒素、或病毒引起的。
39.权利要求37的方法,其中所述受试者是人。
40.权利要求37的方法,其中所述受试者是人新生儿、婴儿、儿童、或成人。
41.权利要求37的方法,其中所述治疗包括改善所述感染的至少一种症状。
42.权利要求37的方法,其中所述治疗包括促进有益的肠道细菌的形成。
43.权利要求42的方法,其中所述有益的肠道细菌是双歧杆菌或乳杆菌或两者。
44.一种治疗患有炎性肠病的受试者的方法,该方法包括对所述受试者施用包含来自人乳的寡糖的渗透物组合物。
45.权利要求44的方法,其中所述炎性肠病是下列中的一种或多种:克罗恩氏病、刺激性肠病、溃疡性结肠炎(UC)、未确定型结肠炎、显微镜下结肠炎、胶原性结肠炎和伪膜性结肠炎。
46.权利要求44的方法,其中所述受试者是人。
47.权利要求44的方法,其中所述受试者是人新生儿、婴儿、儿童、或成人。
48.权利要求44的方法,其中所述治疗包括改善所述炎性肠病的至少一种症状。
49.权利要求44的方法,其中所述治疗包括促进有益的肠道细菌的形成。
50.权利要求49的方法,其中所述有益的肠道细菌是双歧杆菌或乳杆菌或两者。
51.一种制备营养补充剂的方法,该方法包括获得包含来自人乳的寡糖的渗透物组合物,并用所述组合物补充非人乳配制剂。
52.权利要求51的方法,其中所述组合物是浓缩的或稀释的人乳渗透物组合物。
53.权利要求51的方法,其中所述渗透物组合物是通过从人乳过滤液体获得的。
54.权利要求51的方法,其中所述渗透物组合物是通过从人乳的脱脂乳部分过滤液体获得的。
55.一种制备浓缩的或稀释的人乳渗透物的方法,该方法包括:
(a)获得人乳;
(b)将所述乳分成乳脂和脱脂乳;
(c)过滤所述脱脂乳以获得渗透物;
(d)保留所述渗透物;并
(e)稀释、浓缩、或干燥所述渗透物。
56.权利要求55的方法,其中(e)中的稀释步骤包括将非人乳组合物添加至所述渗透物。
57.权利要求56的方法,其中所述非人乳组合物是牛乳。
58.权利要求55的方法,其中(e)中的稀释步骤包括添加去离子水或缓冲液。
59.权利要求55的方法,其中(e)中的浓缩步骤包括反渗透。
60.权利要求55的方法,其进一步包括将维生素和矿物添加至步骤(d)后的所述渗透物。
61.权利要求55的方法,其中所述过滤包括超滤。
62.权利要求55的方法,其进一步包括(f)降低生物负荷。
63.权利要求62的方法,其中降低生物负荷包括巴氏消毒或无菌过滤。

说明书全文

人乳渗透物组合物及其制备和使用方法

[0001] 发明人:Joseph Fournell,Scott Eaker,Scott Elster,David J.Rechtman
[0002] 本申请要求2008年12月5日提交的美国临时申请No.61/193,546和2008年12月2日提交的美国临时申请No.61/119,176的优先权,将这两篇完整收入本文。

技术领域

[0003] 本公开内容涉及人乳渗透物组合物,例如包含人乳寡糖的组合物,及制备和使用此类组合物的方法。
[0004] 发明背景
[0005] 由于人乳的营养组成和免疫学益处,其一般是为早产和足月婴儿选择的食物。人乳的来源可以是例如供体或婴儿的母亲。然而,原料或经常规加工的供体乳的营养价值存
在变化,而且在大多数情况中不足以满足早产婴儿的需要。另外,存在对供体原料乳的细
菌、病毒和其它污染的可能性。即使母亲自身的奶对于早产婴儿常常在营养上也是不足
够的。经常期望喂养用多种补充剂(例如寡糖)强化的早产婴儿乳。含有人乳寡糖的组合
物也可以作为补充剂用于患有或有险形成多种病症和疾病,例如感染或免疫缺陷,且需
要形成和/或维持适当的肠道菌群的婴儿、儿童和成人。
[0006] 发明概述
[0007] 本公开内容的特征在于人乳渗透物组合物,例如包含人寡糖、肽、和其它小分子的组合物,及制备和使用此类组合物的方法。渗透物组合物可以含有各种水平的营养组分,而
且可以在喂养早产和足月婴儿,及患有多种病症和/或疾病的儿童和成人中使用。组合物
自人乳的过滤部分等生成。本发明人已经发现了,令人惊讶地,渗透物(其已经被认为是缺
乏重要营养价值的废产物)含有较高生物学活性内容物,包括人寡糖。发现了与母乳相比,
申请U.S.S.N.11/947,580(2008/0124430)中所描述的渗透物和人乳产物(天然的和浓缩
的两者)的寡糖内容物在大小和组成方面基本上没有差异。因为获得渗透物的起始材料是
合并的人乳,所以渗透物和其它经加工的人乳产物(例如那些在申请U.S.S.N.11/947,580
中所描述的)可以含有与个体母乳相比种类更多的寡糖。因此,渗透物可以添加到非人(例
)和/或人乳以提高其营养和/或免疫学价值。还可以使用渗透物来对抗感染,治疗
炎性肠病并帮助形成和维持适当的肠道菌群。所述渗透物还可以进行稀释或浓缩,并以诸
营养补充剂等形式使用。可以自渗透物获得相似的益处,其通过加工合并的人乳,并将其
对婴儿,例如早产婴儿施用(例如申请U.S.S.N.11/947,580中所描述的合并的人乳)来获
得。
[0008] 使用本文中作为特征的方法来加工大体积的供体乳,例如约75-2,000升/批起始材料。
[0009] 在第一个方面,本发明提供了一种组合物,其包含乳和人乳渗透物。在一个实施方案中,所述乳是人乳。在另一个实施方案中,所述乳是非人乳。在一些实施方案中,所述非
人乳是牛乳。在一些实施方案中,所述组合物的渗透物是通过从人乳过滤液体获得的。在
一些实施方案中,所述组合物是通过从人脱脂乳过滤液体获得的。在一些实施方案中,所述
组合物进一步包含维生素和矿物。
[0010] 在第二个方面,本发明提供了一种营养组合物,其包含浓缩的或稀释的人乳渗透物。在一个实施方案中,所述渗透物是通过从人乳过滤液体获得的。在其它实施方案中,所
述渗透物是通过从人脱脂乳过滤液体获得的。在一些实施方案中,所述组合物进一步包含
维生素和矿物。
[0011] 在第三个方面,本发明提供了一种制备浓缩的或稀释的人乳渗透物的方法,包括(a)获得人乳;(b)将所述乳分成乳脂和脱脂乳;(c)过滤所述脱脂乳以获得渗透物;(d)保
留所述渗透物;并(e)稀释、浓缩、或干燥所述渗透物。在一些实施方案中,(e)中的稀释步
骤包含将非人乳添加至所述渗透物。在一些实施方案中,所述非人乳是牛乳。在本发明的其
它方面,(e)中的稀释步骤包括将水或缓冲液添加至所述渗透物。在一些实施方案中,(e)
中的浓缩步骤包括反渗透。在一些实施方案中,制备浓缩的或稀释的人乳渗透物的方法进
一步包括将维生素和矿物添加至步骤(d)后的渗透物。在一些实施方案中,步骤(c)中的
过滤包括超滤。在一些实施方案中,制备浓缩的或稀释的人乳渗透物的方法进一步包括(f)
降低生物负荷(bioburden)。在一些实施方案中,降低生物负荷包括巴氏消毒或无菌过滤。
[0012] 在第四个方面,本发明提供了一种对受试者施用包含人乳寡糖的渗透物组合物的方法,包括(a)获得人乳;(b)将所述乳分成乳脂和脱脂乳;(c)过滤所述脱脂乳以获得渗
透物;(d)保留所述渗透物;并(e)对所述受试者施用所述渗透物。在一些实施方案中,所
述受试者是人早产或足月婴儿。在一些实施方案中,口服或表面(topically)施用所述组
合物。在一些实施方案中,经由饲管口服施用所述组合物。
[0013] 在第五个方面,本发明提供了一种在受试者中建立有益的肠道菌群的方法,包括对受试者施用包含来自人乳的寡糖的渗透物组合物。在一些实施方案中,所述受试者是人。
在一些实施方案中,所述受试者是人早产或足月婴儿。在一些实施方案中,所述人早产或足
月婴儿在出生后喂养配方食品(formula)。在一些实施方案中,在可用于建立有益的肠道菌
群的其它组合物之前、同时、或之后施用所述组合物。在一些实施方案中,可用于建立有益
的肠道菌群的其它组合物是益生细菌或植物多糖。在一些实施方案中,与非人乳配制剂一
起施用所述组合物。在一些实施方案中,所述组合物在与非人乳配制剂的混合物中。在一
些实施方案中,所述组合物是人乳超滤渗透物。在一些实施方案中,所述渗透物是通过过滤
人乳获得的。在一些实施方案中,所述渗透物是通过过滤人脱脂乳获得的。在一些实施方
案中,建立有益的肠道菌群包括使双歧杆菌或乳杆菌或两者在肠道建群。
[0014] 在第六个方面,本发明提供了一种治疗具有感染或有风险形成感染的受试者的方法,包括对所述受试者施用包含来自人乳的寡糖的渗透物组合物。在一些实施方案中,所述
感染的症状是由细菌、细菌毒素、或病毒引起的。在一些实施方案中,所述受试者是人。在
一些实施方案中,所述受试者是人新生儿、婴儿、儿童、或成人。在一些实施方案中,治疗包
括改善所述感染的至少一种症状。在一些实施方案中,治疗包括促进有益的肠细菌的形成。
在一些实施方案中,所述有益的肠细菌是双歧杆菌或乳杆菌或两者。
[0015] 在第七个方面,本发明提供了一种治疗患有炎性肠病的受试者的方法,该方法包括对所述受试者施用包含来自人乳的寡糖的渗透物组合物。在一些实施方案中,所述炎
性肠病是下列中的一种或多种:克罗恩氏病(Crohn’sdisease)、刺激性肠病(irritable
bowel disease)、溃疡性结肠炎(UC)、未确定型结肠炎(indeterminate colitis)、显微
镜下结肠炎(microscopic colitis)、胶原性结肠炎和伪膜性结肠炎(pseudomembrenous
colitis)。在一些实施方案中,所述受试者是人。在一些实施方案中,所述受试者是人新生
儿、婴儿、儿童、或成人。在一些实施方案中,治疗包括改善炎性肠病的至少一种症状。在一
些实施方案中,治疗包括促进有益的肠细菌的形成。在一些实施方案中,所述有益的肠细菌
是双歧杆菌或乳杆菌或两者。
[0016] 在第八个方面,本发明提供了一种制备营养补充剂的方法,包括获得包含来自人乳的寡糖的渗透物组合物,并用所述组合物补充非人乳配制剂。在一些实施方案中,所述组
合物是浓缩的或稀释的人乳渗透物组合物。在一些实施方案中,所述渗透物组合物是通过
从人乳过滤液体获得的。在一些实施方案中,所述渗透物组合物是通过从人乳的脱脂乳部
分过滤液体获得的。
[0017] 在第九个方面,本发明提供了一种制备浓缩的或稀释的人乳渗透物的方法,包括(a)获得人乳;(b)将所述乳分成乳脂和脱脂乳;(c)过滤所述脱脂乳以获得渗透物;(d)保
留所述渗透物;并(e)稀释、浓缩、或干燥所述渗透物。在一些实施方案中,(e)中的稀释步
骤包括将非人乳组合物添加至所述渗透物。在一些实施方案中,所述非人乳组合物是牛乳。
在一些实施方案中,(e)中的稀释步骤包括添加去离子水或缓冲液。在一些实施方案中,(e)
中的浓缩步骤包括反渗透。在一些实施方案中,所述方法进一步包括将维生素和矿物添加
至步骤(d)后的所述渗透物。在一些实施方案中,步骤(c)中的过滤包括超滤。在一些实
施方案中,方法进一步包括(f)降低生物负荷。在一些实施方案中,降低生物负荷包括巴氏
消毒或无菌过滤。
[0018] 通过提及而将本文中所提及的所有专利、专利申请、和参考文献完整收录。
[0019] 附图简述
[0020] 图1是制备人乳渗透物的方法的实施方案的图。
[0021] 图2是显示样品42、48、49、53、和54的寡糖组成的概要的图。
[0022] 图3是人乳和样品42、48、54(均为成批终产物(bulk final product))、53(超滤渗透物)、和49(供体乳的初始集合)中找到的共同的人乳寡糖的柱状图。
[0023] 图4是显示人乳中的游离寡糖的典型质谱概况的图。圆点表示人乳寡糖。
[0024] 图5是显示对样品42(PROLACT+TMH2MFTM)(参见U.S.S.N.11/947,580)获得的质谱图概况的图。圆点表示人乳寡糖。
[0025] 图6是显示对样品53(PROLACT+TMH2MFTM方法副产物或渗透物)(参见U.S.S.N.11/947,580)获得的质谱图概况的图。圆点表示人乳寡糖。
[0026] 图7是自所收集的人全乳分离渗透物的方法的图示。
[0027] 发明详述
[0028] 本公开内容的特征在于人乳渗透物组合物,例如包含人寡糖、肽、和其它小分子的组合物及制备和使用此类组合物的方法。所述组合物含有各种水平的营养组分,而且可以
在喂养或施用于早产和足月婴儿,及患有多种病症和/或疾病的儿童和成人中使用。所述
组合物自人脱脂乳的过滤部分等生成。本发明人已经发现了,令人惊讶地,渗透物(其已经
被认为是缺乏重要营养价值的废产物)含有高生物学活性内容物,包括人寡糖。因为获得
渗透物的起始材料是合并的人乳,所以渗透物可以含有比个体母乳更离散的分子形式或类
型的寡糖。
[0029] 渗透物可以添加到非人或人乳以提高其营养价值。例如,渗透物可以添加到人乳强化剂(fortifier)和标准化的乳组合物,其记载于2007年11月29日提交的申请
U.S.S.N.11/947,580,通过提及而将其内容完整收入本文。渗透物还可以添加到非人乳配
方食品,例如牛乳配制剂或人和非人乳配制剂的混合物。不限于理论,本发明人认为可以使
用包含人乳寡糖、肽、和其它小分子的渗透物组合物来促进早产婴儿或新生儿中的有益肠
道菌群的形成,并维持儿童和成人中的适当的肠道菌落。渗透物也可以作为补充剂用于患
有或有风险形成多种病症和疾病,例如感染或免疫缺陷的婴儿、儿童和成人。渗透物可以进
行稀释或浓缩和/或用维生素和矿物强化,并且以诸如营养补充剂等形式使用。
[0030] 使用本文中作为特征的方法来加工大体积的供体乳,例如约75-2,000升/批起始材料。本公开内容的组合物自人供体乳,例如合并的乳(其经历严格的遗传筛选和加工(例
如以降低生物负荷))生成。
[0031] “渗透物”(在本文中又称为“渗透物组合物”或“乳加工副产物”或“乳副产物”)意为已经通过过滤(例如超滤)人乳(例如脱脂乳)来加工的乳部分。通常,超滤中所使
用的筛号的大小是1Kda-1,000Kda。通过过滤的液体含有显著量的寡糖,并且称为渗透物。
[0032] “全乳”意为尚未除去脂肪的乳。
[0033] “脱脂乳”意为已经除去至少75%的脂肪的乳。
[0034] 术语“未成熟的”、“早产的”和“低出生重量(LBW)”婴儿可互换使用,指小于37周孕龄出生和/或具有小于2500gm出生重量的婴儿。
[0035] 术语“足月”婴儿用于指在37周孕龄后出生和/或具有大于2500gm的出生重量的婴儿。
[0036] “生物负荷(bioburden)”意为可能存在于乳中的微生物学污染物和病原体(一般为活的),例如病毒、细菌、霉菌、真菌等。
[0037] 渗透物组合物和获得所述组合物的方法
[0038] 本文中作为特征的渗透物组合物自人乳,例如合并的供体乳获得。获得和筛选人供体乳(包括证明供体合格)的方法记载于申请U.S.S.N.11/947,580和U.S.S.N.11/526
,127(2007/0098863),通过提及而将其内容完整收入本文。
[0039] 图1显示了获得人乳渗透物的方法的一个实施方案。如上文所讨论的,为了这两个鉴定目的并避免污染,对供体乳仔细地分析。将供体乳冷冻,并在期望时融化,并合并。然
后,对其进行筛选(图1的步骤1),例如遗传筛选,例如通过聚合酶链式反应(PCR)进行。
完成遗传筛选以鉴定任何污染物,例如病毒,例如HIV-1、HBV、和/或HCV。然后,乳经历过
滤,例如通过约200微米滤器(步骤2),和热处理(步骤3)。例如,可以于约63℃或更高处
理所述组合物达约30分钟或更久。在步骤4中,将乳转移到分离器,例如离心机,以分开乳
脂与脱脂乳。可以将脱脂乳转移到第二加工罐中,在那里它保持于约2至8℃,直至过滤步
骤(步骤5)。任选地,在步骤4中与脱脂乳分开的乳脂可以再次经历分离以产生更多脱脂
乳。
[0040] 在分开乳脂和脱脂乳(步骤4)后,可以将期望量的乳脂添加至脱脂乳,并且组合物经历进一步过滤(步骤5),例如超滤,例如用1-1000Kda之间的孔径。此方法通过滤出先
前认为一般是水或称为渗透物的东西来浓缩脱脂乳中的营养物。然而,本发明人已经发现
了渗透物保留显著量的寡糖,而且自身可以用作例如营养补充剂或以本文中所描述的其它
方式使用。
[0041] 脱脂乳可以经历进一步加工,用于人乳强化剂或标准化的人乳组合物,如记载于例如U.S.S.N.11/947,580的。例如,可以将脱脂乳与乳脂混合以获得成批终产物,对于生
物负荷进行巴氏消毒并加工。保留渗透物(步骤6),并可以用作营养补充剂。图7还描绘
了“渗透物”和“第二渗透物”的生成,后一种是通过再次过滤“渗透物”生成的。
[0042] 可以将渗透物进一步加工,例如浓缩或稀释和/或巴氏消毒。可以将渗透物冷冻,并贮存,供未来使用。可以通过反渗透来浓缩或者使用本领域技术人员熟悉的技术来干燥
渗透物。然后,可以对所得的液体产物进行巴氏消毒,无菌过滤,或者进行其它生物负荷降
低步骤。然后,会将产物装到终产物容器中。
[0043] 还可以给渗透物补充维生素和/或矿物,例如,、氯化物、锌、、锰、镁、磷、、钠、硒、铬、钼、碘、牛磺酸、肉、胆碱、维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素
B12、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、生物素、叶酸、泛酸、烟酸、和肌醇。维生素和矿
物对于例如婴儿的适当营养和发育是重要的。痕量矿物与细胞分裂、免疫功能和生长有关。
一些关键的痕量矿物包括铜、镁、和铁(其对于例如合成血红蛋白、肌红蛋白和含铁的酶是
重要的)。锌是例如生长、许多酶的活性、和DNA、RNA和蛋白质合成所需要的。铜是例如数
种酶的活性所必需的。锰是例如骨和软骨的发育所需要的,而且在多糖和糖蛋白的合成中
是重要的。维生素A是一种对于例如生长、细胞分化、视和免疫系统的适当运行至关重要
的脂溶性维生素。维生素D对于例如钙和(程度较低)磷的吸收,及对于骨的发育是重要
的。维生素E(生育酚)阻止细胞中的多不饱和脂肪酸的过化,如此阻止组织损伤。叶酸
在例如基酸和核苷酸代谢中发挥作用。如此,可以根据需要给渗透物组合物补充各种矿
物和/或维生素。
[0044] 应用
[0045] 本公开内容的特征在于包含人乳渗透物的组合物和使用此类组合物的方法。可以例如如上文所描述通过从过滤脱脂乳过滤液体来获得渗透物组合物。所述组合物含有显著
数量的如下文实施例1中所描述的那样岩藻糖基化和/或唾液酸化的人寡糖。人乳还含
有肽和其它小分子,其也可以存在于渗透物中,例如可以通过在超滤过程中改变孔径来获
得。因为渗透物源自合并的人乳,所以它可以含有比在个体母乳中找到的形式更多形式的
寡糖。所述渗透物组合物可以单独使用或者与其它乳组合物,例如U.S.S.N.11/947,580中
所描述的人乳组合物和非人乳配方食品一起使用。可以对早产或足月婴儿施用渗透物或补
充有渗透物的人和非人乳配方食品,以例如促进适当肠道菌群的形成,治疗以免疫缺陷为
特征的状况,并治疗或预防感染。还可以对儿童和成人单独地或与益生菌剂一起施用渗透
物以促进有益的肠道菌落,治疗以免疫缺陷为特征的状况,并治疗或预防感染。可以例如口
服或表面施用渗透物组合物以治疗皮肤状况。
[0046] 人乳寡糖
[0047] 许多因素可以影响新生的,例如过早出生的婴儿的临床结果。早产婴儿具有脆弱的免疫系统、不成熟的消化系统、和增加的总热量和特定营养需要(在与足月婴儿在大体
上比较时)。如此,向此类婴儿提供的营养在其生长和发育中是一项重要的因素。人乳由于
其营养组成和免疫学益处而一直被公认为早产和足月婴儿的理想食物。然而,不是每位母
亲都能或会母乳喂养她的婴儿(或者使用吸奶器,并贮存她的奶水)。例如,患有某些疾病,
例如活动性结核,或者正在接受放射性同位素、抗代谢物、或化学疗法施用的母亲不可母乳
喂养其婴儿。另外,母亲自身的奶水可能不含足以维持早产婴儿的营养含量。供体乳的使
用也可以是有问题的,因为此类乳可能不含对于早产婴儿足够的营养。
[0048] 本公开内容的特征在于包含来自合并的人乳的寡糖的渗透物组合物,和使用此类组合物以有益于例如未成熟人婴儿、足月婴儿、儿童、和成人的用途。
[0049] 人乳寡糖是含有在还原端的乳糖和通常在非还原端的岩藻糖或唾液酸的水化合物。(Morrow等,J.Nutrit.135:1304-07,2005)。这些末端糖是最强烈影响细菌的选择
性生长和寡糖与其它分子或细胞,包括肠腔中的细菌病原体的相互作用的残基。例如,唾液
酸是脑神经节苷脂的结构和功能组分,而且已经牵涉婴儿的神经发育。寡糖可以是游离的
或者以糖蛋白、糖脂等形式缀合,并且分类为聚糖。它们在乳糖和脂质之后构成人乳的第三
多的固体组分(Morrow等)。然而,大多数这些乳寡糖不是婴儿可以消化的,而且可以在婴
粪便中基本上完整发现。本公开内容描述了人乳渗透物(其实际上含有极其多种寡糖,
因为其源自捐赠乳的集合)中存在的这些寡糖的各种用途,所述人乳渗透物先前被认为是
加工人乳的废产物。可以使用渗透物或自渗透物获得的组合物(单独地或与人和非人乳配
制剂组合或与药物或益生菌剂组合),例如以促进有益的肠道菌群,对抗感染,改善以免疫
缺陷为特征的状况的症状,并提供额外的营养。这些组合物对于各个年龄的接受者:从早产
婴儿到儿童至成人可以是有益的。
[0050] 肠道菌群
[0051] 人肠道菌群,即肠道中存在的细菌执行多种功能,包括某些多糖的消化和肠粘膜免疫系统的形成。肠道细菌可以刺激与肠粘膜有关的淋巴样组织以生成针对病原体的抗
体,仅留下有用的物种,在婴儿期中形成耐受性。
[0052] 正常胎儿的胃肠道是无菌的。在出生期间及此后不久,婴儿的肠道被多种细菌定殖。细菌的来源可以是母体和/或环境。出生后,多种细菌可以经由哺乳和接触从母亲转
移到婴儿。大多数婴儿GI道最初被大量的大肠杆菌(E.coli)和链球菌(Streptococci)
定殖。最后,母乳喂养的婴儿变成由双歧杆菌支配,而配方食品喂养的婴儿在肠道中具有多
种细菌,包括肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、肠球菌(Enterococci)、双歧杆菌、拟杆菌
(Bacteroides)、和梭菌(Clostridia)。在引入固体食物和断奶后,母乳喂养的婴儿的微生
物区系变得与喂养配方食品的婴儿的微生物区系相似。经过约2年,儿童的粪便微生物区
系与成人的微生物区系相似。
[0053] 鉴于肠道菌群的重要性,在出生时形成有益的细菌群并使其在整个儿童和成年期得到维持是至关重要的。本文中作为特征的组合物和方法可以有助于建立并维持此类有益
的肠道菌群。
[0054] 可以对早产婴儿、足月婴儿、儿童、和成人施用包含人乳寡糖的组合物,例如人乳渗透物或源自人乳渗透物的组合物。它们可以单独地或与其它有助于建立有益肠道菌群的
组合物,例如益生细菌或益生性植物多糖组合施用,以形成共生组合物。它们可以作为人乳
配制剂(例如申请U.S.S.N.11/947,580中所描述的组合物)或非人乳婴儿配方食品的一
部分施用。不限于理论,认为目前的渗透物组合物可以促进乳杆菌和/或双歧杆菌定殖于
肠道。乳杆菌和双歧杆菌两者都认为是益生菌剂,即保护其宿主并预防疾病的细菌。双歧
杆菌是有助于消化,而且与变态反应的发生率降低和癌症预防有关的厌氧细菌。乳杆菌是
将乳糖和其它糖转化成乳酸,而且可以拥有消炎和抗癌特性的细菌。
[0055] 另外,可以对儿童或成人施用含有人乳寡糖的本发明的人乳渗透物或源自人乳渗透物的组合物以治疗炎性肠病。炎性肠病是一个集合性术语,其涵盖相关的,但独特的慢
性胃肠道炎性病症,诸如克罗恩氏病、刺激性肠病、溃疡性结肠炎、未确定型结肠炎、显微镜
下结肠炎和胶原性结肠炎。已经发现了与健康个体相比,活动性克罗恩氏病患者在其粪便
中具有显著更少的可回收的双歧杆菌。观察到双歧杆菌数目的这种降低与β-D半乳糖苷
酶生成和活性水平降低呈正相关(Favier,C.等,Dig.Dis.Sci.1997;42:817-822)。β-D
半乳糖苷酶是一种由双歧杆菌生成的酶。这些结果支持其它研究中提出的建议,即双歧杆
菌菌株可以在维持平衡的健康的肠微生物区系中发挥重要的作用。因此,依照本发明,本
发明的富含寡糖的渗透物对双歧杆菌定殖于肠道中的菌落促进作用可用于改善炎性肠病
的症状。类似地,本发明的组合物可用于治疗伪膜性结肠炎(又称为艰难梭菌相关结肠炎
(C.difficile-related colitis)),即由于产毒素的艰难梭菌菌株比正常菌群过度生长所
致的广谱抗生素治疗延长的一种常见并发症。本发明的渗透物组合物可以在炎性肠病的任
何其它治疗,包括益生性配制剂、抗炎药或免疫调节剂之前、期间或之后施用。
[0056] 感染
[0057] 认为人乳寡糖执行多种抗感染功能,例如抑制病原体结合。如此,可以使用本文中作为特征的且含有极其多种人乳寡糖(因为它们源自合并的人乳)的渗透物组合物来保护
婴儿、儿童、和成人免于多种类型的感染。例如,可以保护接受本组合物施用的早产和足月
婴儿免于感染性腹泻、坏死性小肠结肠炎(NEC)、呼吸道感染、菌血症、脑膜炎等。儿童和成
人可以同样受益于组合物的施用。可以在感染发作后(以改善和/或消除其症状),或者在
感染前(对于认为有风险的个体)施用所述组合物。可以经由多种手段,包括口服或表面
(例如以治疗皮肤感染和其它皮肤状况)施用组合物。
[0058] 一般地,对于通过应用源自人乳的寡糖、肽、或其它小分子会得到改善或消除的任何状况或病症,可以对受试者,例如各个年龄的人受试者施用本文中作为特征的渗透物组
合物。
[0059] 试剂
[0060] 本公开内容的特征还在于包含本文中所描述的人乳渗透物组合物的试剂盒和用于混合组合物与人原料乳或非人原料乳的容器。容器可以包括瓶,例如刻度瓶以帮助适当
稀释,注射器,罐,和本领域已知的其它容器。
[0061] 本公开内容的实施方案可以在不偏离本公开内容的精神和范围的前提下以与本文中所列的方式不同的方式实施。因此,应当在所有方面中认为实施方案是例示性的,而非
限制性的。
[0062] 实施例1:人乳渗透物的收集和分析
[0063] 从遍及美国的筛选出的供体收集母乳,并将其于-20℃贮存多达12个月。加工合并的供体人乳,并对多个样品分析其寡糖组成。使用来自20-50名供体的合并物来生成申
请U.S.S.N.11/947,580中所描述的人乳强化剂组合物。
[0064] 加工前,留出初始合并的供体乳的样品,用于分析(表III中的样品49)。将合并的乳筛选,过滤,热处理,分成脱脂乳和乳脂,并将脱脂乳超滤。留出滤出组合物,即渗透物
的一部分,用于分析(表IV中的样品53)。将脱脂乳与乳脂混合,并巴氏消毒。留出成批终
产物的一部分,用于分析(分别为表I、II和V中的样品42、48、和54)。
[0065] 将留出用于分析的每份乳样品(0.5mL)用0.5mL纯水稀释,并于4℃以4000rpm离心30分钟以分离脂肪。分析未稀释的渗透物。用4个体积(2∶1)的氯仿-甲醇溶液(v/
v)处理无脂肪的级分。于4℃以3500rpm将乳状液离心30分钟,并弃去下方的氯仿层和变
性的蛋白质。收集上层,添加2个体积的纯乙醇,并让蛋白质级分于4℃过夜沉淀。
[0066] 通过于4℃以3500rpm离心30分钟来进行蛋白质分离后,将清澈的上部溶液收集并冷冻干燥。使用所得的粉末(冷冻干燥的富含寡糖的级分)来进行寡糖分析。使用去离
子水中1.0M氢化钠来将寡糖还原成糖醇形式,并于42℃温育过夜。反应后,使用无孔石
墨化碳筒(GCC-SPE)通过固相提取自污染物纯化寡糖。供脱盐用的无孔石墨化碳筒(150mg
床重量,4mL柱大小)购自Alltech(Deerfield,IL,USA)。使用speedvac离心机来实施溶
剂的蒸发
[0067] 固相提取。使用前,用3倍柱体积的在0.05%三氟乙酸(TFA)中的80%乙腈(v/v),接着用3倍柱体积的去离子水来清洗每个GCC-SPE筒。将寡糖混合物加载到筒上后,通
过用8个筒体积的去离子水清洗来除去盐和残留的肽。然后,使用水中的10%乙腈(v/v)
和水中的20%乙腈(v/v)自柱洗脱寡糖。收集每个级分(6mL),并在真空中蒸发,之后是MS
分析。
[0068] 质谱分析。在HiResMALDI(IonSpec Corp.,Irvine,CA)上实施基质辅助激光解吸/离子化(MALDI)傅里叶变换-离子回旋共振质谱术(FT ICR MS),所述
HiResMALDI(IonSpec Corp.,Irvine,CA)装备有外部MALDI源、7.0特斯拉超导磁体和脉冲
Nd:YAG激光(355nm)。使用2,5-二氢苯甲酸(DHB)作为基质(50%乙腈/50%水(v/v)溶
液中5mg/100μL)。将寡糖溶液(1μL)应用于MALDI探头,接着添加0.01M NaCl(0.5μL)
和基质溶液(1μL)。在气流下干燥样品,并将其进行质谱术。
[0069] 表I-IV中呈现了上文所讨论的多个样品的组成,并在图2中显示了汇总。对于人乳中已知的寡糖,将实验的质量:电荷比率(m/z expe)与计算的质量:电荷比率(m/z cal)
匹配。表III-V中显示了特定样品的质谱概况(表III中的人乳样品,表IV中的成批产物,
和表V中的渗透物)。对5种样品的质谱分析揭示人乳典型的且在大小、组成、和丰度上有
所变化的寡糖的高度复杂混合物。
[0070] 所鉴定的寡糖来自两个主要种类:(1)含有半乳糖、N-乙酰葡糖胺、乳糖、和果糖(Hex、HexNAc和Fuc)的中性寡糖;和(2)含有相同寡糖组成且添加有N-乙酰神经氨
酸(NeuAC)的阴离子寡糖。先前的调查(Ninonuevo等,J.Agric.Food Chem.2008,54:
7471-7480)鉴定出个体间在未过滤乳中的特定寡糖的总数和相对丰度上的多样性。如此,
所分析的乳样品(天然的或浓缩的)确认所有样品在表面上显示先前发现在来自不同供体
的人乳中所共有的大多数寡糖。
[0071] 表I
[0072] 样品42(成批终产物)寡糖
[0073]度丰 001 23.97 63.63 4.22 22.81 4.71 47.51 84.41 20.31 88.6 92.4 84.3 27.2 42.2
式 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇
形 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖

式模 aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN1 aN aN
差误 6420.0- 9320.0- 8220.0- 310.0- 5900.0- 4410.0- 8900.0- 6710.0- 2800.0- 3800.0- 1400.0- 1200.0- 6510.0 4510.0 la 105 344 336 675 196 955 111 583 235 963 815 125 667 947
c z/ .983 .342 .457 .806 .009 .535 3.87 .790 2.23 .420 .264 .655 .911 .640
m 1 1 1 1 1 1 8 1 7 1 1 1 2 2
C
AueN 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0
cuF 2 2 3 3 3 2 1 2 1 1 3 2 4 3
cAN
xeH 2 1 2 1 3 3 1 0 0 2 0 1 2 4

x
eH 4 4 5 5 5 4 3 4 3 3 5 4 6 5
epxe z/m 774.9831 914.3421 116.4571 365.8061 286.0091 545.5351 3103.878 863.7901 542.237 163.4201 415.2641 915.6551 187.9112 567.6402
1
2.2




a
N1
86
10.0
-
145
.755
1
0

2

3

4
425
.755
1
[0074] 表II
[0075] 样品48(成批终产物)寡糖
[0076]度丰 001 36.51 72.1 48.37 54.1 23.01 52.32 58.11 97.6 58.41 50.42 82.1 27.41 72.1
式 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇
形 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖


模 aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN
差误 4720.0- 3420.0- 9320.0- 2120.0- 2020.0- 8910.0- 6910.0- 9210.0- 9800.0- 7400.0- 6300.0- 1300.0- 4000.0 2100.0 la 105 336 345 344 694 196 955 583 675 963 111 947 235 815
c z/ .983 .457 .264 .342 .504 .009 .535 .790 .806 .420 3.87 .640 2.23 .264
m 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 8 2 7 1
C
AueN 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
cuF 2 3 1 2 2 3 2 2 3 1 1 3 1 3
cAN
xeH 2 2 5 1 1 3 3 0 1 2 1 4 0 0

x
eH 4 5 3 4 5 5 4 4 5 3 3 5 3 5
epxe z/m 474.9831 906.4571 915.2641 224.3421 674.5041 276.0091 45.5351 373.7901 765.8061 463.4201 5703.878 647.6402 6352.237 915.2641
99.1 91.9 62.1 80.1
醇 醇 醇 醇
糖 糖 糖 糖

aN aN aN aN
5100.0 9200.0 8300.0 9300.0
193 987 623 863
.180 1.31 3.53 2.95
1 5 9 6
0 0 0 0

2 0 2 0
1 1 0 2

3 2 3 2
293.1801 8181.315 4633.539 7042.956
[0077] 表III
[0078] 样品49(供体乳的初始集合)寡糖
[0079]度丰 001 1.5 1.4 84.1 9.5 6.3 5.01 7.41 2.1 62 2.41 9.8 66.1
式 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇
形 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖


模 aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN
差误 2020.0- 8520.0- 7020.0- 2020.0- 9610.0- 9310.0- 4800.0- 4500.0- 2400.0- 8300.0- 3000.0 7300.0 2400.0 la 99 336 344 196 955 675 583 963 815 111 235 987 863
c z/ .883 .457 .342 .009 .535 .806 .790 .420 .264 3.87 2.23 1.31 2.95
m 1 1 1 1 1 1 1 1 1 8 7 5 6
C
AueN 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
cuF 3 3 2 3 2 3 2 1 3 1 1 0 0
cAN
xeH 3 2 1 3 3 1 0 2 0 1 0 1 2

x
eH 4 5 4 5 4 5 4 3 5 3 3 2 2
epxe z/m 279.8831 806.4571 324.3421 176.0091 245.5351 265.8061 773.7901 463.4201 315.2641 3703.878 5352.237 6281.315 142.956 [0080] 表IV
[0081] 样品53(渗透物)寡糖
[0082]度丰 001 8.98 33.96 88.45 62.14 5.43 10.82 61.51 21.51 2.41 93.31 14.11 73.8 58.4
式 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇
形 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖


模 aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN
差误 9220.0- 2510.0- 6110.0- 7700.0- 9000.0 9110.0 2200.0 7710.0 4330.0 820.0 9300.0 9600.0 7000.0 2970.0 la 807 667 675 336 56 428 815 196 898 48 344 105 235 659
c z/ .379 .911 .806 .457 .728 .562 .264 .009 .484 .833 .342 .983 2.23 .036
m 1 2 1 1 1 2 1 1 2 2 1 1 7 2
C
AueN 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
cuF 4 4 3 3 4 4 3 3 5 5 2 2 1 5
cAN
xeH 1 2 1 2 0 3 0 3 2 1 1 2 0 3

x
eH 6 6 5 5 6 6 5 5 7 7 4 4 3 7
epxe z/m 586.3791 57.9112 465.8061 626.4571 156.7281 538.5622 25.2641 907.0091 139.4842 868.8332 744.3421 805.9831 9352.237 530.1362
28.4 93.3 58.2 76.2 61.2 49.1 28.1 82.1 91.1 61.1 10.1
醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇
糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖

aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN
7440.0 4050.0 7960.0 7220.0 8090.0 8000.0 3600.0 9370.0 110.0 5100.0 3100.0
287 188 279 125 30 400 583 419 564 863 987
.291 .114 .307 .655 .058 2.07 .790 .755 .003 2.95 1.31
2 2 2 1 2 5 1 2 1 6 5
0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0
5 4 6 2 6 1 2 6 3 0 0
0 4 1 1 2 0 0 0 0 2 1

7 6 8 4 8 2 4 8 4 2 2
728.2912 239.1142 240.4072 345.6551 121.0582 2102.075 293.7901 889.7552 674.0031 3832.956 2081.315
[0083]
[0084] 表V:
[0085] 样品54(成批终产物)寡糖
[0086]度丰 28.21 83.1 42.4 79.02 28.8 61 61.1 27.67 001 2.91 68.41 68.91 7.63 23.42
式 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇 醇
形 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖


模 aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN aN
差误 3120.0- 1320.0- 1220.0- 9230.0- 9030.0- 7820.0- 3320.0- 6350.0- 7650.0- 8430.0- 1150.0- 920.0- 6140.0- 5220.0- la 987 863 400 111 963 235 623 344 105 955 583 675 336 196
c z/ 1.31 2.95 2.07 3.87 .420 2.23 3.53 .342 .983 .535 .790 .806 .457 .009
m 5 6 5 8 1 7 9 1 1 1 1 1 1 1
C
AueN 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
cuF 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 2 3 3 3
cAN
xeH 1 2 0 1 2 0 0 1 2 3 0 1 2 3

x
eH 2 2 2 3 3 3 3 4 4 4 4 5 5 5
epxe z/m 6751.315 7312.956 3871.075 2872.878 833.4201 5422.237 3903.539 93.3421 544.9831 425.5351 433.7901 745.8061 295.4571 966.0091
23.4 8.3 66.1 51.4 54.4 3.1
醇 醇 醇 醇 醇 醇
糖 糖 糖 糖 糖 糖

aN aN aN aN aN aN
6320.0 4020.0- 3120.0 1620.0 4130.0 6950.0
947 815 807 667 428 188
.640 .264 .379 .911 .562 .114
2 1 1 2 2 2
0 0 0 0 0 0
3 3 4 4 4 4
4 0 1 2 3 4

5 5 6 6 6 6
377.6402 794.2641 927.3791 297.9112 558.5622 149.1142
[0087] m/z expe:质量/电荷实验值,m/z cal:质量/电荷计算值,Hex:己糖;HexNAc:N-乙酰氨基己糖;Fuc:岩藻糖;NeuAc:N-乙酰-神经氨酸或唾液酸;
[0088] 表现为经加工的人乳产物(强化剂或样品42、48、和54)和渗透物(样品53)含有人乳中常见的整个范围的寡糖。这些样品中存在的个体寡糖的选择和量反映达到个体供体
间变化的平均数的供体集合的相对量。
[0089] 如此,依照本发明,渗透物是人乳寡糖的一种有价值的来源,其可以作为早产婴儿、婴儿、儿童、和成人的营养或免疫学补充剂使用。
[0090] 实施例2:合并的渗透物样品的寡糖谱
[0091] 对6份合并的渗透物样品分析具体的寡糖含量(表VI)。每份合并的渗透物样品源自通过上文实施例1中所讨论的方法自多名供体接收的合并的乳。通过上文实施例1中所
描述的方法通过质谱术来分析渗透物的收集的样品,以检测所指明的具体寡糖的存在(1)
或缺失(0)。表VI中按其质量/电荷比率表示寡糖。
[0092] 表VI
[0093]
[0094] 1=样品中存在的寡糖
[0095] 0=样品中检测不到的寡糖
[0096] 似乎表现为虽然样品间关于某些寡糖有重叠(即寡糖732、878、1097、1243和1389存在于所有六种样品中),但是还有存在于某些样品中而不存在于其它样品中的许多寡糖
(即,寡糖935存在于渗透物23和53号,但不在渗透物5、11、28或47号中)。因此,合并
的渗透物样品的再次合并可以是必要的,以获得具有基本上所有或所有代表的寡糖种类的
组合物。
[0097] 实施例3:渗透物组合物的施用
[0098] 如上文所讨论的,发明人认为来自合并的乳的人乳渗透物组合物可以提供极其多种营养和免疫学益处,因为它们是比个体母乳中找到的寡糖更多种类的寡糖的来源。它们
还可以含有多种类型的肽和其它有益的小分子。
[0099] 会对婴儿(早产和足月婴儿两者)施用分离的人乳渗透物组合物以促进其合适的肠道菌群的形成,改善和/或消除感染。研究会调查分成5组(arm)的婴儿,各组包括接受
下列各项的婴儿:
[0100] 1.母乳加强化剂
[0101] 2.牛奶加渗透物
[0102] 3.牛奶加双歧杆菌菌株1
[0103] 4.牛奶加双歧杆菌菌株2
[0104] 5.牛奶加非乳来源的果糖寡糖
[0105] 会监测婴儿粪便的组成以确定其肠道菌群的含量。患有由病原体,例如细菌、细菌毒素、和病毒引起的感染的婴儿会特别受益于渗透物组合物的口服施用。预期来自接受牛
奶加渗透物的婴儿的肠道菌群会最接近地模拟来自接受母乳和强化剂的婴儿的肠道菌群。
[0106] 现在,本文中所描述的本发明的其它变型和实施方案在不背离本发明范围或所附权利要求书的精神的前提下对于本领域技术人员会是显而易见的。
QQ群二维码
意见反馈