[0001] 本发明一般性涉及健康和营养。更特别地，本发明涉及具有乳清蛋白质微胶粒(micelles)和至少一种氨基酸的营养组合物，以及制备和应用该营养组合物以优化组合物的风味特征和物理性质从而改善患者健康的方法。

[0002] 目前在市场上有许多类型的营养组合物。基于营养组合物的特定成分，营养组合物能够针对某些消费者类型，例如青年人、老年人、运动员等。也能够基于营养组合物所要治疗或改善的某些生理条件或者可以基于营养组合物的所需要的物理或感官性质来配制营养组合物。

[0003] 营养支持的一个目标是为了增加营养组合物中所提供的营养素的量从而向消费者提供足够量的营养素以获得特定的生物学结果。然而，为了向消费者提供特定营养益处的营养组合物中所使用的许多营养素却赋予组合物令人不悦的味道或气味，这使其没有食用的吸引力。因此，当因其感官性质差而使消费者拒绝摄入组合物时，就无法获得需要的生物学结果。因此，需要提供具有增加量的营养素、同时又提供可容忍的物理和感官性质的营养组合物。

[0004] 发明概述

[0005] 提供营养组合物以及制备和应用营养组合物的方法。在一般的实施方案中，本发明提供具有乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸的营养组合物。该营养组合物提供足够量的亮氨酸从而改善人体内的蛋白合成，同时也保持低粘度的流体基质和可接受的感官性质。

[0006] 在一种实施方案中，提供营养组合物，并且营养组合物包括含有乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸的乳清蛋白质粉末，其中组合物中的总亮氨酸按干重计占20%-40%之间。

[0007] 在另一种实施方案中，提供营养组合物，并且营养组合物包括含有乳清蛋白质微胶粒和加入的亮氨酸的乳清蛋白质粉末，其中加入的亮氨酸与乳清蛋白质微胶粒的干重比是从约1:2至约1:3。

[0008] 在一种实施方案中，加入的亮氨酸与乳清蛋白质微胶粒的干重比是约1:2.6。

[0009] 在一种实施方案中，乳清蛋白质粉末包括至少约20%乳清蛋白质微胶粒。乳清蛋白质也可以包括至少50%乳清蛋白质微胶粒。乳清蛋白质也可以包括至少80%乳清蛋白质微胶粒。

[0010] 在一种实施方案中，组合物是粉末组合物。

[0011] 在一种实施方案中，通过喷雾干燥或冷冻干燥乳清蛋白质微胶粒浓缩物来得到乳清蛋白质粉末。

[0012] 在一种实施方案中，乳清蛋白质粉末具有至少50%的水结合容量。乳清蛋白质粉末也可以具有至少90%的水结合容量。乳清蛋白质粉末也可以具有至少100%的水结合容量。

[0013] 在一种实施方案中，乳清蛋白质粉末具有至少50%的甘油结合容量。

[0014] 在一种实施方案中，乳清蛋白质粉末具有至少50%的乙醇结合容量。

[0015] 在一种实施方案中，乳清蛋白质粉末具有至少30%的油结合容量。

[0016] 在一种实施方案中，乳清蛋白质粉末用亮氨酸填充。

[0017] 在一种实施方案中，乳清蛋白质粉末包括重量比为约30:1至约1:100的乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸。

[0018] 在一种实施方案中，乳清蛋白质粉末通过与亮氨酸一起进行的喷雾干燥或冷冻干燥而得到。

[0019] 在一种实施方案中，乳清蛋白质粉末具有小于35°的休止角。

[0020] 在一种实施方案中，制备乳清蛋白质粉末以便用作流动剂。

[0021] 在一种实施方案中，乳清蛋白质微胶粒具有小于1微米的尺寸。

[0022] 在一种实施方案中，乳清蛋白质微胶粒用包衣进行包衣。所述包衣可以选自由乳化剂、蛋白质、肽、蛋白水解物、树胶或其组合组成的组。所述蛋白质可以选自由鱼精蛋白、乳铁蛋白、大米蛋白或其组合组成的组。所述蛋白水解物可以是选自由鱼精蛋白,乳铁蛋白、大米、酪蛋白、乳清蛋白、小麦、大豆蛋白或其组合组成的组的水解物。所述乳化剂可以是选自由硫酸化的油酸丁酯、甘油一酯和甘油二酯的二乙酰酒石酸酯、甘油一酯的柠檬酸酯、硬脂酰乳酸盐(stearoyl lactylates)或其组合组成的组。

[0023] 在一种实施方案中，组合物是完全营养的来源。或者，组合物可以是不完全营养的来源。组合物也可以是管饲组合物，或者可以用于短期给药或长期给药。

[0024] 在一种实施方案中，组合物可以包括抗氧化剂，其选自由β-胡萝卜素、维生素C、维生素E、硒或其组合组成的组。

[0025] 在一种实施方案中，组合物可以包括维生素，其选自由维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B7、维生素B9和维生素B12、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、叶酸、生物素或其组合组成的组。

[0026] 在一种实施方案中，组合物可以包括矿物质，其选自由硼、钙、铬、铜、碘、铁、镁、锰、钼、镍、磷、钾、硒、硅、锡、钒、锌或其组合组成的组。

[0027] 在另一种实施方案中，提供营养组合物并且其包括乳清蛋白质微胶粒、亮氨酸和液体，其中组合物中的亮氨酸的总量小于约2.5g/100g液体。

[0028] 在一种实施方案中，亮氨酸的量以从约1g至约2g的量存在。

[0029] 在另一种实施方案中，提供营养组合物并且其包括乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸，其中组合物中的亮氨酸的总量小于约25g/1升液体。

[0030] 在一种实施方案中，所述液体选自由水、基于水的饮料、果汁、乳或其组合组成的组。

[0031] 在一种实施方案中，亮氨酸以约24g的量存在。

[0032] 在一种实施方案中，组合物是管饲组合物。

[0033] 在另一种实施方案中，提供营养组合物并且其包括含有乳清蛋白质微胶粒和加入的亮氨酸的乳清蛋白质粉末，其中加入的亮氨酸的总干重是乳清蛋白质微胶粒的总干重的约30%至约40%。

[0034] 在一种实施方案中，加入的亮氨酸的总干重是乳清蛋白质微胶粒的总干重的约37%。

[0035] 在一种实施方案中，组合物是粉末组合物。

[0036] 在一种实施方案中，乳清蛋白质微胶粒是变性的乳清蛋白质的球形团块。乳清蛋白质可以以这种方式排列：蛋白质的亲水部分朝向团块的外部并且蛋白质的疏水部分朝向所述的微胶粒的内核。

[0037] 在另一种实施方案中，提供制备乳清蛋白质微胶粒浓缩物的方法。该方法包括步骤：(a)调节乳清蛋白质水溶液的pH值至3.0和8.0之间，(b)使水溶液的温度达到70-95℃之间，(c)浓缩步骤(b)中所得到的分散液，(d)向分散液中加入亮氨酸，和(e)对含有亮氨酸的乳清蛋白质微胶粒浓缩物进行喷雾干燥或冷冻干燥。步骤(a)的调节要非常精确地完成，以便将pH调节至±0.05pH单位。

[0038] 在一种实施方案中，乳清蛋白质溶液的矿物质含量低于2.5%。乳清蛋白质也可以进行去矿质化。

[0039] 在一种实施方案中，将乳清蛋白质溶液的pH调节至5.8和6.6之间。也可以将pH调节至3.8和4.5之间。

[0040] 在一种实施方案中，乳清蛋白质水溶液的浓度低于12%。浓度也可以低于4%。

[0041] 在一种实施方案中，所述加热进行10秒至2小时。水溶液也可以加热15分钟。可以用微波进行加热。

[0042] 在一种实施方案中，浓缩前的微胶粒的产率为至少35%。浓缩前的微胶粒的产率也可以为至少50%。浓缩前的微胶粒的产率也可以为至少80%。

[0043] 在一种实施方案中，微胶粒的平均粒径小于1微米。微胶粒的平均粒径可以是100-900nm。平均粒径在100nm和700nm之间的微胶粒的比例可以大于80%。

[0044] 在一种实施方案中，采用选自由蒸发、离心、沉降、超滤、微量过滤或其组合组成的组的方法进行浓缩。可以在酸化至pH4.5之后进行离心。可以在pH4.5进行自然沉降。沉降时间可以大于12小时。

[0045] 在另一种实施方案中，提供制备营养产品的方法。该方法包括步骤：(a)调节乳清蛋白质水溶液的pH值至3.0和8.0之间，(b)使水溶液的温度达到70-95℃之间，(c)浓缩步骤(b)中所得到的分散液，(d)向分散液中加入亮氨酸，和(e)对含有亮氨酸的乳清蛋白质微胶粒浓缩物进行喷雾干燥或冷冻干燥，和(f)将含有亮氨酸的乳清蛋白质微胶粒浓缩物加入到组合物中从而制得产品。

[0046] 在另一种实施方案中，提供可食用的产品的制备方法，其包括混合含有加入的亮氨酸的乳清蛋白质微胶粒、其浓缩物或其粉末从而得到混合物，并且加工该混合物从而形成可食用的产品。可食用的产品中的亮氨酸的总量按干重计在20%-40%之间。加工可以包括使混合物经历加热、压缩、酸性或碱性条件、剪切、冷却、或其组合。

[0047] 在另一种实施方案中，提供可食用的产品的制备方法，其包括将乳清蛋白质微胶粒溶液或浓缩物与加入的亮氨酸进行共干燥从而形成加入的亮氨酸与乳清蛋白质微胶粒的干重比为约1:2至约1:3的粉末，并将粉末加入到产品中。共干燥选自由喷雾干燥、冷冻干燥、或其组合组成的组。

[0048] 在另一种实施方案中，提供掩蔽组合物中的营养素异味的方法。该方法包括步骤：将乳清蛋白质微胶粒粉末和多达2.5g加入的亮氨酸进行混合从而形成混合物，并且将混合物加入到100g液体载体中从而形成组合物。

[0049] 本发明的优点是提供改进的营养组合物。

[0050] 本发明的另一个优点是提供具有增加量的营养素的营养组合物。

[0051] 本发明的另一个优点是提供具有可接受的感官性质的营养组合物。

[0052] 本发明的另一个优点是提供具有可接受的物理性质的营养组合物。

[0053] 本发明的另一个优点是提供具有低粘度的营养组合物。

[0054] 本发明的优点是提供刺激人体内蛋白质合成的营养组合物。

[0055] 本发明的另一个优点是提供促进肌肉生长的营养组合物。

[0056] 本发明的另一个优点是提供掩蔽营养组合物中的营养素异味的营养组合物。

[0057] 本发明的另一个优点是提供制备包含增加量的营养素的组合物的方法。

[0058] 本发明的另一个优点是提供施用营养组合物的方法。

[0059] 本文还记载了其他的特征和优点，这些特征和优点根据以下发明详述将是很明显的。附图说明

[0060] 图1显示根据本发明的实施方案的乳清蛋白质微胶粒的高度示意结构。

[0061] 图2显示根据本发明的实施方案的在不同pH的乳清蛋白质微胶粒的溶解度曲线。

[0062] 发明详述

[0063] 如本文所使用的，“约”优选地理解为数字范围的数字。而且，本文的全部数字范围应当理解为包括范围内的全部整数、整体或分数。

[0064] 如本文所使用的，“有效量”优选是在个体中预防缺陷、治疗疾病或医疗状况或者更普遍是减少症状、控制疾病的进程或为个体提供营养的、生理的或医疗的益处的量。治疗能够是与患者或医生相关的。

[0065] 如本文所使用的，术语“治疗”、“处理”和“缓解”优选地涉及预防性的治疗(预防和／或减慢所针对的病理状况或病症的发展)和治愈性的、治疗性的或缓解疾病的治疗，其包括治愈、减慢、减少诊断的病理状况或病症的症状和／或阻止诊断的病理状况或病症的发展的治疗措施；和治疗有患病风险或怀疑患病的患者以及生病的或已经被诊断为患有疾病或医疗状况的患者。该术语不是必需表示对个体进行治疗直至完全恢复。术语“治疗”和“处理”也指维持和／或促进未患病、但易于发生不健康状况(例如氮不平衡或肌肉流失)的个体的健康。术语“治疗”、“处理”和“缓解”也包括增强或提高一种或多个基本的预防或治疗措施。术语“治疗”、“处理”和“缓解”还包括疾病或病症的饮食管理或者用于预防疾病或病症的饮食管理。

[0066] 如本文所使用的术语“患者”优选地理解为包括正在接受治疗、可能受益于治疗或打算接受治疗的动物，特别是哺乳动物，更特别地是人。

[0067] 如本文所使用的，“动物”非限制性地包括哺乳动物，其非限制性地包括啮齿类、水生哺乳动物、驯养动物(例如狗和猫)、农场动物(例如绵羊、猪、牛和马)、和人。其中使用术语动物或哺乳动物或其复数时，其也适用于能够实现由本段内容所展现或意欲展现的效果的任意动物。

[0068] 如本文所使用的，“哺乳动物”非限制性地包括啮齿类、水生哺乳动物、驯养动物(例如狗和猫)、农场动物(例如绵羊、猪、牛和马)、和人。其中使用术语哺乳动物时，其也适用于能够实现由哺乳动物所展现或意欲展现的效果的其他动物。

[0069] 本文所使用的术语“蛋白质”、“肽”、“寡肽”或“多肽”优选地理解为包括由肽键连接的2个或多个氨基酸(二肽、三肽或多肽)、胶原、其前体、同系物、类似物、模拟物、盐、前药、代谢物或片段或组合的任意的组合物。为了清楚起见，除非另有说明，任意以上术语的使用是可互换的。应当理解，多肽(或肽或蛋白质或寡肽)通常含有除通常称为20种天然存在的氨基酸的20种氨基酸之外的氨基酸，和在给定的多肽中的许多氨基酸(包括末端氨基酸)可以通过自然过程(例如糖基化和其他的其他翻译后修饰)或通过本领域熟知的化学修饰技术进行修饰。可以在本发明的多肽中存在的已知的修饰非限制性地包括乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄酮类或血红素部分的共价连接、多核苷酸或多核苷酸衍生物的共价连接、多酚的共价连接、脂类或脂类衍生物的共价连接、磷脂酰肌醇的共价连接、交联、环化、二硫键形成、脱甲基化、共价交联的形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、γ-羧化、糖化、糖基化、糖基磷脂酰肌醇(GPI)膜固着点形成、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、蛋白酶解加工、磷酸化、异戊烯化、外消旋化、硒酰化(selenoylation)、硫酸化、转运RNA介导的氨基酸向多肽的加成，例如精氨酰化和泛素化。术语“蛋白质”也包括“人工蛋白质”，其是指由交替重复的肽组成的线性或非线性的多肽。

[0070] 营养产品和组合物优选地理解为还包括任意数量的任选的添加成分，其包括常规的食品添加剂，例如1种或多种酸化剂、添加的增稠剂、缓冲剂或pH调节剂、螯合剂、着色剂、乳化剂、赋形剂、调味剂、矿物质、等渗剂、可药用的载体、防腐剂、稳定剂、糖、甜味剂、组织形成剂和/或维生素。能够以任意的合适的量加入任选的成分。

[0071] 例如，本发明的组合物和产品也可以包括例如抗氧化剂、维生素和矿物质。如本文所用的术语“抗氧化剂”优选地理解为包括1种或多种抑制氧化或抑制由活性氧类(ROS)和其他的自由基类和非自由基类引发的反应的各种物质(如β-胡萝卜素(维生素A前体)、维生素C、维生素E和硒)。此外，抗氧化剂是能够减缓或防止其他分子的氧化的分子。

[0072] 如本文所用的术语“维生素”优选地理解为包括身体的正常生长和活动所必需的微量的并且从植物和动物食品天然获得的或合成的任意的各种脂溶的或水溶的有机物、维生素原、衍生物、类似物。维生素的非限制性的实例包括维生素A、维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸或烟酰胺)、维生素B5(泛酸)、维生素B6(吡哆醇、吡哆醛或吡哆胺、或盐酸吡哆醇)、维生素B7(生物素)、维生素B9(叶酸)和维生素B12(各种钴胺素；在维生素补充剂中通常是氰钴胺素)、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、叶酸和生物素。

[0073] 如本文所用的术语“矿物质”优选地理解为包括硼、钙、铬、铜、碘、铁、镁、锰、钼、镍、磷、钾、硒、硅、锡、钒、锌及其组合。

[0074] 乳清蛋白质微胶粒是通过天然乳清蛋白质在非常特定的pH下在热处理期间自动组装所得到的球状的(接近于天然的酪蛋白微胶粒的常规形状)单分散的微凝胶。乳清蛋白质微胶粒具有独特的特征和性质，其包括例如直径在100和900nm之间的窄粒径分布和在0.2以下的多分散性指数、在500nm测量的浊度值(对于4%蛋白质溶液在20和50吸光度单位之间)稳定10分钟、和通过TEM显微术所成像的球形。

[0075] 乳清蛋白质微胶粒聚集体的最终结构赋予例如乳化、微胶粒酪蛋白取代、增白、起泡、卷曲变形和／或填充剂的性质。乳清蛋白质微胶粒是具有独特的物理特性(大小、电荷、密度、粒径分布)的30%乳清蛋白质浓度的微凝胶，其赋予的独特物理特性包括例如对加入盐稳定、在高浓度的低粘度、在pH4和5之间胶凝和对用于巴氏杀菌或灭菌的热处理具有高稳定性。

[0076] 通过对调节至特定的和精确的pH的天然乳清蛋白质溶液进行热处理得到乳清蛋白质微胶粒，在该pH下净电荷(负或正)诱导通过自动组装进行的该特定的聚集。这些聚集体处于特定的有组织的状态，这由与疏水性相互作用相关的和与蛋白质表面存在的电荷的不对称分配相关的排斥和吸引的静电力之间的平衡造成。对于纯β-乳球蛋白，该现象发生在等电点以上或以下0.7pH单位(即对于5.1的IEP，pH 4.3和5.8)。

[0077] 胶粒形成在室温下不会发生，这是因为乳清蛋白质疏水性被埋藏在天然蛋白质结构中。为了诱导胶粒形成(通过自动组装形成球形的单分散的蛋白质微凝胶)，需要蛋白质构象改变。该改变由热处理引发；在微胶粒形成的第一早期。该自动组装现象是可逆的，通过在达到最佳温度(即85℃)后在pH2.0进行酸化。该强酸性pH阻断硫醇／二硫化物交换并且不稳定的微胶粒结构被迅速拆开。在正常情况下，没有在pH2.0继续进行酸化，由于硫醇被热处理活化，在孵育期间在恒温下(在85℃15分钟)快速交联使微胶粒稳定，该孵育时间可被延长至45分钟或120分钟。在孵育之后，胶粒形成不是自发可逆的。需要离解剂和还原剂来恢复蛋白质单元。

[0078] 乳清蛋白质是支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)的最丰富的天然来源之一。因为乳清蛋白质的营养特性属于这些氨基酸的最佳来源，所以其非常适合用于营养组合物。更特别地，作为雀巢公司的专利申请中所述的技术的产品，乳清蛋白质微胶粒使乳清蛋白质浓缩超出了使用标准处理方法通常可实现的范围，但仍保持液体形式。记载该乳清蛋白质微胶粒技术的雀巢公司的待决专利申请包括2007年3月26日提交的国际申请PCT/EP2007/052877；2007年3月27日提交的国际申请PCT/EP2007/052900；和2008年8月21日提交的美国系列申请号12／280,244，它们的全部内容引入本文作为参考。由上述的方法中记载的技术制备的微胶粒所提供的一个益处是能够含有高浓度的乳清蛋白质、但仍保持低粘度的液体基质。

[0079] 此外，在上述的申请中所述的制备过程中，也保持了乳清蛋白质源的氨基酸特性，这提供与乳清蛋白相同的营养价值。支链氨基酸是那些具有非线性的脂肪族侧链的氨基酸。这3种必需氨基酸的组合占据了人体内骨骼肌的大约1／3，并且其在蛋白质合成中发挥重要作用。支链氨基酸也可以用于辅助烧伤患者的恢复以及力量性运动员的补充。

[0080] 因为亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸是必需氨基酸，身体不能合成这些氨基酸，所以必需摄入这些氨基酸。作为食品添加物，已经发现在老年大鼠中亮氨酸通过增加肌肉蛋白的合成来减缓肌肉组织的降解。乳清蛋白质是亮氨酸的最丰富的天然来源(按总氨基酸的重量计为12-15%)，在乳清蛋白质中每10g乳清蛋白质微胶粒包括约1g亮氨酸。然而，有报道称显著改善人体内蛋白质合成所需的亮氨酸的量是一份(serving)递送大约3g或更多。因此，为了达到3g亮氨酸，需要提供大于30g的乳清蛋白质。然而，当亮氨酸包含在有效刺激人体内蛋白质合成的剂量中时，亮氨酸的味道通常是令人不愉快的。实际上，亮氨酸的感官性质包括令消费者不愉快的苦味口感。

[0081] 因此，风味特性已经限制了口服营养产品递送有效量的支链氨基酸的能力。此外，乳清蛋白质当在中性pH条件下加热时具有胶凝的性质。因此，极大地限制了支链氨基酸的饮料应用。而且，由于所施用的剂量(一次3+g)，支链氨基酸的片剂和丸剂递送也不方便。

[0082] 申请人令人惊讶地发现可将乳清蛋白质微胶粒与游离氨基酸亮氨酸结合从而得到用于支持肌肉生长的组合物(例如饮料)。特别地，该组合物包括乳清蛋白质微胶粒和大量的亮氨酸，但没有通常有效刺激人体内蛋白质合成的亮氨酸的剂量所带来的苦味或异味。因此，申请人令人惊讶地发现乳清蛋白质微胶粒能够用作掩蔽物来抵消饮料和其他口服营养产品中异味氨基酸的苦味。虽然本发明涉及乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸的使用，但是本领域的技术人员能够马上理解，其他支链氨基酸(例如异亮氨酸和缬氨酸)也可以用于相似的用途。

[0083] 实际上，申请人已经发现能够将乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸的组合加入到营养组合物(例如饮料)中，其浓度为乳清蛋白质和补充的亮氨酸给消费者带来益处但没有之前所遇到的感官限制。例如，现有技术中的饮料因乳清蛋白质或亮氨酸的加入而受到限制，乳清蛋白质的加入提供不可接受的粘度，亮氨酸的加入提供不可接受的感官性质。通过将微胶粒蛋白质与有困难的营养素进行组合至少解决了这两个限制。不希望受限于任何理论，相信蛋白质微胶粒的结构及其与亮氨酸(或其他异味营养素)的相互作用防止消费者感受到令人不愉快的苦味。

[0084] 因此，申请人已经令人惊讶地发现乳清蛋白质微胶粒能够作为掩蔽物质，通过掩蔽舌表面上的苦味受体从而阻止特定的营养素的令人不愉快的苦味感觉。如Noriao Ishibashi模型所展示的，苦味是令人不愉快的味觉感知，其经常引发食物拒绝。作为每一个特定的人的函数，对苦味的敏感度从1至500。参见Ishibashi,N.等人,A Mechanism for Bitter Taste Sensibility in Peptides,Agr.Biol.Chem..52,819-827(1988)。

[0085] 除了乳清蛋白质微胶粒，本领域的技术人员将理解微胶粒酪蛋白以及任意的潜在的植物蛋白质也可以用作掩蔽由亮氨酸或其他类似的营养素为营养组合物带来的苦味或异味的蛋白质组分。

[0086] 在一种实施方案中，乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸可以是完全营养产品的一部分。如本文所用的，“完全营养”产品优选地是含有足以作为施用的动物的唯一营养来源的充足类型和水平的大量营养素(蛋白质、脂肪和碳水化合物)和微量营养素的营养产品。患者能够从该完全营养组合物获取100%的其营养需求。

[0087] 或者，乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸可以是不完全营养产品的一部分。如本文所用的，“不完全营养”产品优选地是不含有足以作为施用的动物的唯一营养来源的充足类型和水平的大量营养素(蛋白质、脂肪和碳水化合物)和微量营养素的营养产品。部分或不完全营养组合物能够用作营养补充剂。

[0088] 类似地，乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸可以包含于管饲组合物中。如本文所用的，“管饲”优选地是向动物的胃肠系统施用、而不是通过口服的完全或不完全营养产品，其非限制性地包括经鼻胃管、经口胃管、胃管、空肠造口术管(J-管)、经皮内镜胃造瘘术(PEG)、开孔，例如提供通向胃、空肠的通道的胸壁孔和其他合适的进入孔。

[0089] 在一种实施方案中，乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸可以用于短期施用的组合物。如本文所用的，“短期施用”优选地是连续施用少于6周。或者，乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸可以用于长期施用的组合物。如本文所用的，“长期施用”优选地是连续施用超过6周。

[0090] 图1表示本发明中所用的微胶粒的图示，其中乳清蛋白质以这种方式排列：蛋白质的亲水部分朝向聚集体的外部并且蛋白质的疏水部分朝向微胶粒的内“核”。名称“乳清蛋白质微胶粒”表示基于以下标准的与酪蛋白微胶粒同源的现象：形状、大小和增白性，并且乳清蛋白质微胶粒是变性的乳清蛋白质的球形乳清蛋白质微凝胶。乳清蛋白质微凝胶或乳清蛋白质微胶粒涉及物理和化学的相互作用。在图1中，S*表示来自半胱氨酸的可接近的硫醇/活化的硫醇，S-S表示使乳清蛋白质微胶粒稳定的二硫桥键。在亲水环境中，这种在能量方面有利的构型为这些结构提供了良好的稳定性。就其本身而言，微胶粒基本上由变性的乳清蛋白质的球形聚集体组成。微胶粒的特征特别是在于其规则的球形形状。

[0091] 由于其双重性(亲水和疏水)，蛋白质的这种变性状态似乎导致与疏水相(例如脂肪滴或空气)和亲水相的相互作用。因此，乳清蛋白质微胶粒具有完美的乳化性和起泡性。

[0092] 本发明的微胶粒可能具有极其狭窄的粒径分布，以致于超过80%的所产生的微胶粒的粒径小于1微米，优选在100nm和900nm之间，更优选在100-770nm，最优选在200和400nm之间。不希望受限于任何理论，认为在微胶粒形成期间，微胶粒达到“最大”粒径，这是由于微胶粒的总静电荷排斥任何附加的蛋白质分子，以致微胶粒的粒径不能再增大。这解释了目前观察到的狭窄的粒径分布。

[0093] 如上所述，通过2007年3月26日提交的国际申请

[0094] PCT/EP2007/052877；2007年3月27日提交的国际申请

[0095] PCT/EP2007/052900；和2008年8月21日提交的美国系列申请号

[0096] 12／280,244中所述的方法可以制备本发明的乳清蛋白质微胶粒，其全部内容引入本文作为参考。与本领域中已知的常规方法不同，使用这些申请中所述的方法的优点是相应地制得的乳清蛋白质微胶粒在形成期间未承受任何导致粒径降低的机械应力。实际上，这些方法在热处理期间在不存在剪切力的情况下诱发乳清蛋白质的自发的胶粒化。然而，技术人员能够理解，可以通过除上述的申请中所述方法之外的其他方法制备微胶粒。

[0097] 任何商业购买的乳清蛋白质分离物或浓缩物都可以用于本发明。例如，通过本领域中已知的乳清蛋白质的制备方法所获得的乳清蛋白质，以及由其制得的乳清蛋白质部分(fractions)或蛋白质如β-乳球蛋白、α-乳白蛋白和血清白蛋白。特别地，作为奶酪制造中的副产物而获得的甜乳清、作为酸酪蛋白制造中的副产物而获得的酸乳清、通过乳微量过滤而获得的天然乳清蛋白、或者作为为凝乳酶酪蛋白制造中的副产物而获得的凝乳酶乳清可以用作乳清蛋白质。乳清蛋白质可以是单一来源的或者来自任意来源的混合物。优选乳清蛋白质在微胶粒形成之前未经历任何水解步骤。因此，乳清蛋白质在胶粒化之前未经历任何的酶处理。然而，根据本发明，重要的是乳清蛋白质而不是其水解产物用于微胶粒形成过程。

[0098] 本发明不限于来源于牛的乳清蛋白质分离物，而且涉及来自所有哺乳动物种类的乳清蛋白质分离物，例如来自于绵羊、山羊、马和骆驼。此外，根据本发明的方法适用于矿物质化的、去矿质化的或轻微矿物质化的乳清蛋白质制备物。“轻微矿物质化的”是指，例如在除去可透析的游离矿物质之后，但是在乳清蛋白质浓缩物或分离物的制备之后仍保留通过天然矿物质化与之结合的矿物质的任何乳清蛋白质制备物。这些“轻微矿物质化的”乳清蛋白质制备物不具有特定的矿物质富集。

[0099] 乳清蛋白质是必需氨基酸的良好来源(例如按重量计约45%)。例如，与酪蛋白(含有0.3g半胱氨酸/100g蛋白质)相比，甜乳清含有多7倍的半胱氨酸，酸乳清含有多10倍的半胱氨酸。半胱氨酸是谷胱甘肽合成的限速氨基酸，由谷氨酸半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽，其在应激情况下身体的防卫中发挥主要作用。在应激情况下和在年长的人群中，对这些氨基酸的需求可能增加。此外，已经表明使用乳清蛋白质的谷胱甘肽口服补充提高了HIV感染患者的血浆谷胱甘肽水平。参见Eur.J.Clin.Invest.31,171-178(2001)。

[0100] 由乳清蛋白质所提供的其他的健康益处包括增强儿童、成人或年长人群的肌肉发育和构建以及肌肉维持，提高免疫功能，改善认知功能，控制血糖以致其适合于糖尿病人，体重管理和饱腹感，抗炎作用，伤口愈合和皮肤修复，降低血压等。

[0101] 此外，例如与酪蛋白(PER=100)相比，乳清蛋白质具有较好的蛋白效率比(PER=118)。PER是通过测定该蛋白质支持体重增加情况来评价蛋白质质量的指标。其能够由下式计算得到：

[0102] PER=体重增加(g)／蛋白质摄入重量(g)

[0103]

[0104] 为了按照上述的雀巢公司专利申请中所公开的方法制备乳清蛋白质微胶粒，水溶液中乳清蛋白质的量可以是基于溶液的总重的0.1重量%-12.0重量%、优选0.1重量%-8重量%、更优选0.2重量%-7.0重量%、甚至更优选0.5重量%-6.0重量%、最优选1.0重量%-4.0重量%。

[0105] 在胶粒化步骤之前出现的乳清蛋白质制剂的水溶液也可以包含其它的化合物，例如各乳清蛋白制备过程的副产物、其他蛋白质、树胶或碳水化合物。溶液也可以含有其他的食物成分(脂肪、碳水化合物、植物提取物等)。这些其它的化合物的量优选不超过溶液的总重的50重量%、优选20重量%和更优选不超过溶液的总重的10重量%。

[0106] 可以使用纯化形式或粗产品形式的乳清蛋白质。根据实施方案，用于制备乳清蛋白质微胶粒浓缩物的乳清蛋白质中二价阳离子的含量可以低于2.5%、更优选低于2%、甚至更优选低于0.2%。在一种实施方案中，乳清蛋白质是完全去矿质化的。

[0107] 根据本发明，pH和离子强度是很重要的。因此，对于经过彻底透析的样本，其理论上没有或者已耗尽了游离阳离子(例如Ca、K、Na、Mg)，已经发现当在5.4以下的pH在10秒至2小时的时间期限内进行热处理时，得到凝乳，而在超过6.8的pH得到可溶的乳清蛋白质。因此，只有在该狭小的pH窗内才能得到直径小于1μm的乳清蛋白质微胶粒。这些微胶粒将具有总负电荷。对称地，在等电pH以下(即3.5-5.0、更优选3.8-4.5)也能够得到相同的微胶粒形式，导致微胶粒带正电荷。

[0108] 因此，根据实施方案，为了得到带正电荷的微胶粒，乳清蛋白质的胶粒化可以在根据蛋白质源的矿物质含量而调整至3.8-4.5之间的pH值的无盐溶液中完成。

[0109] 在一种实施方案中，所得到的微胶粒将具有总负电荷。因此，在一种实施方案中，对于在乳清蛋白质粉末中所包含的二价阳离子含量在0.2%和2.5%之间，将pH调节至6.3-9.0的范围。

[0110] 更特别地，为了获得带负电荷的微胶粒，对于低二价阳离子浓度(例如低于初始乳清蛋白质粉末的0.2%)，将pH调节至5.6-6.4的范围、更优选5.8-6.0。根据乳清蛋白质源(浓缩物或分离物)的矿物质含量可以将pH增至8.4。特别地，存在大量游离矿物质时为了获得带负电荷的微胶粒pH可以在7.5-8.4、优选7.6-8.0，存在中等量的游离矿物质时为了获得带负电荷的微胶粒pH可以在6.4-7.4、优选6.6-7.2。通常，初始乳清蛋白质粉末的钙和／或镁含量越高，胶粒化的pH越高。

[0111] 为了使乳清蛋白质微胶粒的形成条件标准化，最优选通过任何已知的去矿质化技术(透析、超滤、反渗透、离子交换色谱等)使蛋白质含量范围为从甜乳清、乳的微量过滤透过物或酸乳清的浓度(0.9%蛋白质含量)到30%蛋白质含量的浓缩物浓度的任意来源的液体天然乳清蛋白质去矿质化。能够用水(蒸馏水、去离子水或软化水)进行透析，但是由于这仅仅能够除去微弱地连接于乳清蛋白质上的离子，所以更优选用4.0以下的pH的酸(有机酸或无机酸)进行透析，从而更好地控制乳清蛋白质的离子组成。通过这样处理，形成乳清蛋白质微胶粒的pH将在pH 7.0以下，更优选地包括5.8-6.6。

[0112] 在加热乳清蛋白质水溶液之前，通常通过加入酸来调节pH，所述的酸优选是食品级，例如盐酸、磷酸、醋酸、柠檬酸、葡糖酸或乳酸。当矿物质含量高时，通常通过加入碱性溶液来调节pH，所述的碱性溶液优选是食品级，例如氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化铵。

[0113] 或者，如果不需要pH调节步骤，可能在保持pH不变的同时调节乳清蛋白质制备物的离子强度。因此可以用有机或无机离子以这种方式调节离子强度：使pH值在恒定为7下胶粒化。在一种实施方案中，在离子强度随着加入70-80mM的精氨酸HCl而变化的同时，可以在恒定的pH值7.0下形成微胶粒。

[0114] 还可以将缓冲液加入到乳清蛋白质的水溶液中，从而避免在乳清蛋白质的热处理期间pH值的实质性改变。通常，缓冲液可以选自任意的食品级缓冲系统，即醋酸及其盐(例如醋酸钠或醋酸钾)、磷酸及其盐(例如NaH2PO4、Na2HPO4、KH2PO4、K2HPO4)或柠檬酸及其盐等。

[0115] 根据本发明，调节水溶液的pH和／或离子强度导致产生具有100nm-900nm、优选100nm-700nm、最优选200nm-400nm的粒径的微胶粒的可控过程。优选地，当实施本发明的方法时，具有100-700nm的平均粒径的微胶粒的比例大于80%。

[0116] 为了获得规则形状的微胶粒，在微胶粒形成之前乳清蛋白质不经历任何水解步骤也是重要的。

[0117] 在该方法的第二步中，使初始的乳清蛋白质水溶液经受热处理。在这方面，已经发现为了获得乳清蛋白质微胶粒，温度在从约70℃至95℃以下、优选从80℃至约90℃、更优选从约82℃至约89℃、甚至更优选从约84℃至约87℃、最优选在约85℃是重要的。也已发现在工业规模生产中温度优选低于95℃、更优选在80℃和90℃之间、最优选约85℃。

[0118] 一旦已经达到需要的温度，在该温度保持至少10秒和至多2小时。优选地，乳清蛋白质水溶液在所需温度下保持的时间范围是从12至25分钟、更优选从12至20分钟、或最优选约15分钟。

[0119] 也可以在微波炉或任何类似的微波加热设备中完成热处理，所述设备采用对于在1500W装置中加热至沸点温度(在海拔833m处为98℃)的4重量%的蛋白质溶液具有10s/10mL的时间／数量比。通过在被支持管延长的玻璃管周围加上8个或更多个磁控管，也可以使用连续过程从而增加孵育时间。

[0120] 浊度测量是微胶粒形成的指征。根据本发明，对于1%蛋白质溶液，在500nm的吸光度测量的浊度至少是3个吸光度单位，但当胶粒化率超过80%时浊度能达到16个吸光度单位。

[0121] 为了进一步从物理化学角度说明微胶粒形成的效果， 的1重量%的分散液在MiIIiQ水中在pH6.0和6.8在85℃加热15分钟。借助动态光散射测量在热处理之后所获得的聚集体的流体动力学直径。使用所谓的Debye绘图，借助静态光散射测量聚集体的表观分子量。使用疏水性ANS探针探测表面疏水性，以半胱氨酸为标准氨基酸使用DTNB法探测游离的可接近的硫醇基。最后，借助负染色TEM研究聚集体的形态。结果呈现于表1。

[0122] 表1

[0123] 通过在pH 6.0或6.8下1重量%蛋白质分散液的热处理(85℃,15min)所获得的乳清蛋白质聚集体的物理化学性质

[0124]

[0125] 根据表1，可知：与在pH6.8在相同条件下加热的非胶粒化的乳清蛋白质相比，在pH6.0形成的乳清蛋白质微胶粒使蛋白质降低其特异的ANS表面疏水性达2倍因子。与非胶-1 -1粒化的蛋白质的0.64X106g.mol 相比，根据27x106g.mol 的极高的分子量也能够看到微胶粒形成，这表明微胶粒内物质的高度凝聚态(少量的水)。令人感兴趣地，微胶粒的ζ-电位比非胶粒化的蛋白质更大的负电量，即使后者是在比微胶粒更偏碱性的pH下形成。这是暴露于溶剂的微胶粒的亲水性表面更多的结果。最后，应该注意到微胶粒的硫醇反应性远低于非胶粒化的蛋白质的硫醇反应性，这是因为热处理的pH不同。

[0126] 已经发现，当在pH调节和热处理之前增加初始蛋白质浓度时，天然乳清蛋白质向微胶粒的转化率降低。例如当以乳清蛋白质分离物 90(批次673，来自Lactalis)开始时，乳清蛋白质微胶粒的形成率从85%(当以4%蛋白质开始时)降至50%(当以12%的蛋白质开始时)。为了使乳清蛋白质微胶粒的形成最大化(>初始蛋白质含量的
85%)，以蛋白质浓度低于12%、优选低于6%的乳清蛋白质水溶液开始更佳。根据预期的最终用途，在热处理之前调节蛋白质浓度从而控制最佳的乳清蛋白质微胶粒产率。

[0127] 根据上述的雀巢公司专利申请的方法所获得的乳清蛋白质微胶粒的平均粒径应小于lμm、优选100nm-900nm、更优选100nm-700nm、最优选200nm-400nm。

[0128] 根据所需的应用，在浓缩之前微胶粒的产率是至少35%、优选至少50%、更优选至少80%，并且残留的可溶的聚集体或可溶的蛋白质含量优选在20%以下。平均微胶粒粒径以0.200以下的多分散性指数为特征。已经发现乳清蛋白质微胶粒可以在pH4.5附近形成聚集体，然而在4℃下至少12小时后没有肉眼可见的相分离的迹象。

[0129] 通过测定残留的可溶的蛋白质的量能够得到根据上述的雀巢公司专利申请的方法所制备的乳清蛋白质微胶粒的纯度。通过在20℃和26900g离心15分钟清除微胶粒。上清液用于在石英杯中在280nm(1cm光径长度)测定蛋白质量。值表达为在热处理前初始值的百分比。

[0130] 微胶粒的比例=(初始蛋白质的量–可溶的蛋白质的量)／初始蛋白质的量[0131] 与常规的方法不同，本文所述的方法的优点是相应制备的乳清蛋白质微胶粒在形成期间未承受任何导致粒径减小的机械应力。该方法在热处理期间在不存在剪切力的情况下诱发乳清蛋白质的自发的胶粒化。

[0132] 乳清蛋白质微胶粒本身可以用于任意的组合物中，例如营养组合物、化妆品组合物、药物组合物等。根据本发明，乳清蛋白质微胶粒用于可食用的产品。而且，乳清蛋白质微胶粒可以填充活性组分。所述的组分可以选自咖啡、咖啡因、绿茶提取物、植物提取物、维生素、矿物质、生物活性剂、盐、糖、甜味剂、香料、脂肪酸、油类、蛋白质水解物、肽、氨基酸等或其组合。

[0133] 进一步地，为了调节乳清蛋白质微胶粒的功能和味道，本发明的乳清蛋白质微胶粒(纯的或填充活性组分的)可以用乳化剂(例如磷脂)或其他包衣剂(例如蛋白质、肽、蛋白质水解物或树胶如阿拉伯胶)包衣。当蛋白质被用作包衣剂时，其可以选自等电点显著高于或低于乳清蛋白的任意蛋白质。例如鱼精蛋白、乳铁蛋白和某些大米蛋白。当蛋白质水解物被用作包衣剂时，其优选是来自例如鱼精蛋白、乳铁蛋白、大米、酪蛋白、乳清蛋白、小麦、大豆蛋白或其组合的蛋白质的水解物。在一种实施方案中，包衣是选自硫酸化的油酸丁酯、甘油一酯和甘油二酯的二乙酰酒石酸酯、甘油一酯的柠檬酸酯、硬脂酰乳酸盐或其组合的乳化剂。在一种实施方案中，包衣是硫酸化的油酸丁酯。可以用本领域中已知的任意方法进行包衣。而且，如本文所进一步记载的，共喷雾干燥也可以得到乳清蛋白质微胶粒的包衣。

[0134] 乳清蛋白质微胶粒已经表现出理想地适合于用作乳化剂、脂肪替代物、微胶粒酪蛋白的替代物或起泡剂，因其能够在延长的时期内使水性系统中的脂肪和／或空气稳定。实际上，乳清蛋白质微胶粒可以用作乳化剂，该材料理想地适合于乳化剂，因其具有中性味道并且使用该材料没有产生异味。其也可以用作微胶粒酪蛋白替代物。

[0135] 此外，本发明的乳清蛋白质微胶粒可以用作增白剂，以致于使用一种化合物可以完成多项任务。由于乳清蛋白是可广泛地获得的材料，所以其应用降低了需要乳化剂、填充剂、增白剂或起泡剂的产品的成本，同时增加了其营养价值。

[0136] 因此，由本文所述的方法得到的乳清蛋白质微胶粒能够用于制备任意种类的需要稳定乳剂或泡沫的可食用的产品，例如用于奶油冻或冰淇淋、用于咖啡脂末(creamers)、或者也用于低脂或基本无脂的乳制品、或者也作为微胶粒酪蛋白替代物进行应用。

[0137] “可食用的”是指能够被人或动物消费的任意形式的任意食品，其包括饮料、汤、半固体食物等。可应用本发明的乳清蛋白质微胶粒的产品实例是例如乳制品、蛋黄酱、沙拉调料、杀菌的UHT乳、加糖炼乳、酸奶、发酵乳、调味汁、减脂调味汁(例如贝夏梅尔(bechamel)型调味汁)、基于乳的发酵产品、牛奶巧克力、白巧克力、黑巧克力、奶油冻、泡沫、乳剂、冰淇淋、基于发酵的谷物的产品、基于乳的粉末、婴儿配方食品、膳食强化剂、宠物食品、片剂、液体细菌悬液、干燥的口服补充剂、湿的口服补充剂、功能营养棒、涂味品(spreads)、果汁饮料、咖啡混合物等。

[0138] 本发明的营养组合物和产品可以是粉末或者液体组合物。当组合物是液体时，可以将乳清蛋白质微胶粒和其他粉末成分(例如活性成分、功能成分、亮氨酸等)加入重构液体中，从而形成液体营养组合物或产品。重构液体可以是任意的可食用的液体，其非限制性地包括水、去离子水、碳酸水、果汁、乳、糖浆和其他基于水的饮料例如茶。在一种实施方案中，也可以将粉末乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸加入到食物例如蛋中从而形成乳剂。本领域的技术人员能够理解，任意类型的食物和／或液体都可以用作乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸的基质或载体。

[0139] 因此，如上所述，包含乳清蛋白质微胶粒的可食用的产品是本发明的一部分。“乳清蛋白质微胶粒”是指变性的乳清蛋白质的球形的聚集体。优选地，乳清蛋白质在微胶粒形成之前未水解，以便得到规则形状的球形的微胶粒。在微胶粒中，乳清蛋白质以这种方式排列：蛋白质的亲水部分朝向聚集体的外部，蛋白质的疏水部分朝向所述的微胶粒的内核。通常，乳清蛋白质微胶粒的粒径小于1微米。

[0140] 根据实施方案和如上所述，可食用的产品包含乳清蛋白质微胶粒和其它的营养素，例如氨基酸。氨基酸的非限制性实例包括异亮氨酸、丙氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、赖氨酸、天冬氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、瓜氨酸、甘氨酸、缬氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸、精氨酸、组氨酸或其组合.

[0141] 在一种实施方案中，可食用的产品包含足以刺激人体内蛋白质合成的量的乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸，同时避免因乳清蛋白质带来的粘度增加或因组合物中大量的亮氨酸带来的差的感官性质。通常，营养组合物或产品中所存在的亮氨酸的量将取决于组合物或产品的最终体积、以及在25℃亮氨酸溶解度的极限是2.426g/100g液体的事实、和10g乳清蛋白质微胶粒本身包括约1g亮氨酸的事实。基于该信息，可在营养组合物中实现大量的亮氨酸而没有感受到差的感官性质。

[0142] 例如，本发明的组合物中所加入的亮氨酸与乳清蛋白质微胶粒的干重比可以是从约1:2至约1:3。在一种实施方案中，所加入的亮氨酸与乳清蛋白质微胶粒的干重比是约1:2.6。或者，1升的营养组合物可以含有多达约25g的总亮氨酸。在一种实施方案中，1升的营养组合物可以含有约24g亮氨酸。在另一个实例中，100g的液体可以含有多达约2.5g亮氨酸。在一种实施方案中，100g的液体可以含有约1至约2g亮氨酸、或约1g至约3g亮氨酸、或约2.462g亮氨酸。在组合物是粉末组合物的实例中，组合物可以包括占总干重百分比在约20%和约40%之间的亮氨酸。在一种实施方案中，粉末组合物中亮氨酸的总干重百分比是约37%。此外，所加入的亮氨酸的总干重可以是乳清蛋白质微胶粒的总干重的约
30%至约40%。在一种实施方案中，所加入的亮氨酸的总干重可以是乳清蛋白质微胶粒的总干重的约37%。技术人员将能够基于营养组合物或产品的一份的量调节亮氨酸的这些量。

[0143] 例如，也可以以各种不同的一份的量提供营养组合物和产品，只要对乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸的量相应进行换算。例如，并且如上所述，在25℃亮氨酸溶解度的限度是约2.426g/100g液体。使用该信息，可以改变含有按干重计约3-6g亮氨酸或亮氨酸与乳清蛋白质微胶粒的比例为约1-2.6的250ml的一份的量，从而增加或减少为患者提供的组合物或产品的量。例如，一份的量也可以是一剂(shot)(例如80-100ml)、一听(例如120或250或375ml)、一袋(例如1升或1.5-2升)，或一包(module)中的粉末,从而补充常规的膳食或肠内产品。

[0144] 在特定的实例中，250ml一份的量的营养组合物可以包括按干重计为10.1g的乳清蛋白质微胶粒、3.8g的所加入的亮氨酸和55.6g的其他成分，从而产生约69.5g的干物质组合物。在该实例中，产品中亮氨酸的总量是约4.8g(1g来自乳清蛋白质微胶粒和3.8g的所加入的亮氨酸)，乳清蛋白质微胶粒是总的干体积的约14.5%，所加入的亮氨酸是总的干体积的约5.5%。在该实例中亮氨酸的总干重百分比是6.9%(4.8g的总亮氨酸/69.5g的总干物质)。

[0145] 如上所述，乳清蛋白质微胶粒可以用于营养组合物之中从而掩蔽营养素的异味，掩蔽舌苦味受体。实际上，认为蛋白质微胶粒的结构及其与亮氨酸(或其他异味营养素)的相互作用阻止消费者感知到令人不愉快的苦味。因此，除了含有乳清蛋白质微胶粒的组合物，本发明也包括掩蔽和使用这些组合物的方法。

[0146] 根据另一个实施方案，可食用的产品包含可溶于产品的乳清蛋白质微胶粒，并且具有4以下的pH。图2提供乳清蛋白质微胶粒的溶解度曲线。如图2所示，在pH4.0以下和pH 5.5以上，乳清蛋白质微胶粒是更易溶的和稳定的。此外，对于凝胶或有延展性的蛋白质结构，乳清蛋白质微胶粒可以用于临界溶解度区，即pH 4.5至pH 5.0。“可溶的”是指微胶粒不聚集或凝结形成不可溶的乳清蛋白质微胶粒的聚集体。换句话说，乳清蛋白质微胶粒分散于产品之中。这带来的优点是酸性产品可以包含根据本发明的乳清蛋白质微胶粒、而没有任何稳定性问题。

[0147] 类似地，具有0.01%以上、甚至0.1%以上、甚至1%以上的盐含量并且包含可溶的乳清蛋白质微胶粒的产品也是本发明的一部分。在含盐或酸性食品基质中乳清蛋白质微胶粒稳定性是相当有优势的。

[0148] 例如，可以制备包含乳清蛋白质微胶粒的可食用的产品，例如蛋黄酱、低脂或无脂蛋黄酱、调味汁、例如贝夏梅尔型调味汁、荷兰型(Hollandaise)调味汁、塔塔酱、意大利面酱、白调味汁、胡椒调味汁、肉酱(sauce with pieces)、用于烤制的酱(sauce for oven dishes)例如用于奶油口蘑烤鲑鱼(salmon cream gratin)的酱、汤、奶油汤、例如香菇奶油汤、芦笋奶油汤、绿花椰菜奶油汤、泰式汤、蔬菜汤、沙拉奶油、调料、蛋羹、涂味品、蘸料、沙拉等。乳清蛋白质微胶粒的存在赋予了产品本申请所述的全部优点，例如蛋白质富集、增白/乳浊作用、脂肪减少、增强的奶油质感和口感等。

[0149] 包含可溶的乳清蛋白质微胶粒的酸性蛋黄酱型产品是根据本发明的产品。蛋黄酱型产品可以理解为具有蛋黄酱的质感和外观的任意调味汁。其可以是标准蛋黄酱、沙拉蛋黄酱、沙拉奶油、调料、涂味品、蘸料等。通常，本发明的蛋黄酱型产品的pH在2和6之间，优选在2.5和4.5之间。该产品也可以包含其量为0-3%、优选0.1-2.5%、最优选0.1-1.5%的盐。该产品可以包含低于50%的、50-70%的或70%以上的脂肪。优选地，该产品不含脂肪。该产品可以基于或可以不基于乳剂。

[0150] 本发明的蛋黄酱型产品中存在的其他成分可以包括蛋产品(例如蛋黄、鸡蛋白、基于鸡蛋的产品等)、糖、调味品、香料调味品、芳香草药、水果和蔬菜(包括水果和蔬菜汁)、芥末、乳制品、水、乳化剂、增稠剂等。

[0151] 根据另一个实施方案，还提供了包含可溶的乳清蛋白质微胶粒并且盐含量为0.01-3%、优选为0.1-2.5%的汤或调味汁产品。汤或调味汁产品也可以是酸性的，例如番茄汤或调味汁等。通常，汤或调味汁产品是咸的，尽管其在某些情况下可以是甜的(例如波兰汤)。通常，本发明的汤或调味汁产品包含风味基质和增稠剂。风味基质可以包含盐、调味剂、增味剂、香料等或其组合。增稠剂可以选自淀粉、树胶、面粉等或其组合。而且，汤或调味汁产品可以包含选自脂肪、奶油、脂末、油、乳化剂、蔬菜、荚果、盖浇菜、面糊、肉、面团、乳制品或其组合的其他成分。优选地，汤或调味汁产品是无脂肪的或低脂肪的。这些调味汁产品的实例是贝夏梅尔型调味汁、荷兰型调味汁、白调味汁、意大利面酱、肉酱、用于烤制的酱例如用于奶油口蘑烤鲑鱼的酱、胡椒调味汁、塔塔酱等。汤产品可以包括奶油汤，例如芦笋、绿花椰菜、香菇奶油汤、泰式汤、蔬菜汤等。

[0152] 上述的产品可以以“即食”产品提供，即，其本身可以食用而不需加入另外的成分(例如水)。或者，其可以是来自脱水混合物的重构产品。

[0153] 本文所述的产品可以通过将乳清蛋白质微胶粒、其浓缩物或其粉末与另外的成分混合并且加工该混合物来制得。该加工过程可以包括本领域中已知的食品加工所用的任何加工步骤。可以使混合物经历加热、加压、酸性或碱性条件、冷冻等。

[0154] 在另一个方面，本发明也提供脱水产品，例如速食汤、调味汁、调料、制好的汤等，其能够容易地用水或其他液体重新配制从而使其适于食用。

[0155] 通常，本发明的脱水的产品包含乳清蛋白质微胶粒粉末和干燥的食物成分。乳清蛋白质微胶粒粉末如本申请所述。其可以由喷雾干燥的乳清蛋白质微胶粒组成。或者，乳清蛋白质微胶粒粉末包含其他的成分，所述的其他的成分可以选自可溶的或不可溶的盐、益生菌、着色剂、糖、麦芽糊精、脂肪、油、脂肪酸、乳化剂、甜味剂、香料、植物提取物、配体、生物活性剂、咖啡因、维生素、矿物质、药物、乳、乳蛋白、脱脂奶粉、微胶粒酪蛋白、酪蛋白酸盐、植物蛋白、蛋白质水解物(例如谷蛋白水解物)、肽、氨基酸、多酚、色素、酵母提取物、谷氨酸单钠等或其组合。

[0156] 当乳清蛋白质微胶粒粉末包含另外的组分时，乳清蛋白质微胶粒与其他成分的比例优选为1:1-1:100。

[0157] 本发明的脱水的产品中所存在的干燥的食物成分选自碳水化合物、蛋白质源、淀粉、纤维、脂肪、调味剂、香料、盐等或其组合。

[0158] 乳清蛋白质微胶粒粉末与另外的干燥的成分的比例范围通常是1:1-1:10、优选1:1-1:5、最优选1:3。

[0159] 该脱水的产物可以通过将乳清蛋白质微胶粒粉末与另外的干燥的成分进行混合或者将乳清蛋白质微胶粒溶液或浓缩物与另外的成分进行共干燥来制备。通常，其通过共喷雾干燥来完成。而且，本发明的乳清蛋白质微胶粒可以单独使用或与其他活性材料(例如多糖(例如阿拉伯胶或角叉菜胶))共同使用，从而使基质和例如乳泡沫基质稳定。由于其中性口味、其增白粉末和其热处理后的稳定性，本发明的乳清蛋白质微胶粒可以用于提升脱脂奶粉的白度和口感。

[0160] 除了使相同总蛋白质含量的乳制品系统粉末增白，还可以减少食物基质中脂肪含量。该特征代表本发明的乳清蛋白质微胶粒的特殊的优点，这是因为其允许生产低脂产品，例如加入乳脂末而不加入其他的来源于乳制品的脂肪。

[0161] 在一种实施方案中，在热处理之后所得到的乳清蛋白质微胶粒分散液进行浓缩从而得到乳清蛋白质微胶粒浓缩物。该浓缩步骤可以通过蒸发、离心、沉降、超滤和／或通过微量过滤来进行。通过将其加入温度在50℃和85℃之间的真空蒸发器，可以对微胶粒分散液进行蒸发。在低于5、优选4.5的pH下使乳清蛋白质微胶粒分散液酸化之后，可以用高加速速率(大于2000g)或低加速(小于500g)速率进行离心。通过酸化也可以对乳清蛋白质微胶粒分散液进行自然沉降。优选地，pH是4.5并且沉降时间超过12小时。

[0162] 在一种实施方案中，可以通过微胶粒分散液的微量过滤来实现乳清蛋白质微胶粒的浓缩。该浓缩技术不仅能够通过除去溶剂来浓缩乳清蛋白质微胶粒，而且能够除去非胶粒化的蛋白质(例如天然蛋白质或可溶的聚集体)。因此，如通过透射电子显微术所证实的，最终产品仅由微胶粒组成。在这种情况下，在透过膜的初始流速降至其初始值的20%之后，获得可能达到的浓缩倍数。

[0163] 乳清蛋白质浓缩物将具有至少12%的蛋白质浓度。而且，浓缩物将含有至少50%的微胶粒形式的蛋白质。

[0164] 令人感兴趣地发现，如果调节至10%的蛋白质含量，浓缩物能够承受随后的在85℃、pH 7.0、在例如多达0.15M的氯化钠存在的情况下15分钟的热处理。作为对比，天然乳清蛋白质分散液( 90,批次500658，来自Lactalis)在存在0.1M的氯
化钠的情况下仅在蛋白质浓度为4%时就形成凝胶。

[0165] 本发明中所用的微胶粒也表现出在浓缩步骤中保持微胶粒结构的高稳定性的益处。而且，根据本发明的微胶粒具有相对于初始乳清蛋白质至少100、优选至少110的蛋白效率比(PER)，这使其成为重要的营养成分。

[0166] 乳清蛋白质微胶粒的浓缩提供了独特的优点：可以在先前不可达到的浓度上获得蛋白质富集的产品。而且，由于浓缩物可以用作脂肪替代物而同时保持需要的结构、质感和感官性质，所以可以获得更多种低脂产品。

[0167] 此外，其表现出成本优势：只需较少量的浓缩物来获得所需要的效果。

[0168] 乳清蛋白质微胶粒浓缩物(来自蒸发或微量过滤)能够以作为分散液的液体形式或以半固体形式、或以干燥的形式使用。其可以用于各种用途，例如上述的与乳清蛋白质微胶粒用途相关的那些。例如，通过蒸发所获得的20%蛋白质浓缩物具有似奶油的、半固体的质感，并且通过使用乳酸酸化能够以可延展的结构卷曲变形。该液态的、似奶油的、糊状的质感能够用于制备酸的、甜的、咸的、芳香的、富含蛋白质的消费品。

[0169] 为了获得稳定的富含乳清蛋白质的酸性果汁饮料，任意形式的乳清蛋白质微胶粒浓缩物可以与5%的酸性水果基质和5%的蔗糖混合。其也可以用于制造乳制品、冰淇淋或用作咖啡增白剂等。

[0170] 其它的应用包括皮肤护理和口腔护理，例如牙膏、口香糖或例如牙龈清洁剂。

[0171] 与非浓缩的微胶粒或与天然蛋白质粉相比，极大地增加了任意形式的浓缩物的增白能力。例如，4mL的15%乳清蛋白质微胶粒浓缩物的增白能力相当于100mL 2%可溶咖啡杯中的0.3%二氧化钛。令人感兴趣的是，可能将可溶咖啡和蔗糖分散于乳清蛋白质微胶粒浓缩物中，以便得到具有60%的总固体浓度的无脂肪的3合1浓缩物。

[0172] 根据用途，浓缩物可以原样或稀释后使用。例如，在甜的和浓缩的乳制品中，可以将液体或干燥形式的乳清蛋白质浓缩物稀释至9%的蛋白质含量。能够加入乳矿物质、乳糖和蔗糖，以便最终产品将具有与乳相似的营养特性、但仅以乳清蛋白质作为蛋白质源。当在98℃(在833m海拔处沸水的温度)孵育2小时时，这种基于乳清蛋白质的混合物对于美拉德反应(基于褐色的发展速度)比加糖炼乳更稳定。

[0173] 由本文所述的方法得到的乳清蛋白质浓缩物的干燥的形式可以通过任何已知的技术获得，例如喷雾干燥、冷冻干燥、滚筒干燥等。因此，本发明的乳清蛋白质浓缩物可以在加入或不加入另外的成分的情况下进行喷雾干燥，并且可以用作很多方法中的递送系统或结构单元，例如消费品生产、化妆品应用等。

[0174] 在一种实施方案中，粉末由喷雾干燥获得而不加入任何另外的成分，并且因在喷雾干燥期间发生微胶粒聚集而具有大于1微米的平均颗粒直径。本发明的粉末的典型的平均体积中位直径(D43)在45和55微米之间、优选51微米。本发明的粉末的表面中位直径(D32)优选在3和4微米之间、更优选是3.8微米。喷雾干燥后所获得的粉末的含水量优选小于10%、更优选小于4%。

[0175] 该乳清蛋白质微胶粒粉末可以包含至少90%乳清蛋白质，其中至少20%、优选超过50%、最优选超过80%是微胶粒形式。

[0176] 而且，本发明所使用的乳清蛋白质微胶粒粉末对溶剂(例如水、甘油、乙醇、油、有机溶剂等)具有高结合容量。粉末对水的结合容量是至少50%、优选至少90%、最优选约100%。对于例如甘油和乙醇的溶剂，结合容量是至少50%。对于油，结合容量是至少30%。本发明的乳清蛋白质微胶粒粉末的该性质使其能被喷雾或者用另外的功能成分例如咖啡、咖啡因、绿茶提取物、植物提取物、维生素、矿物质、生物活性剂、盐、糖、甜味剂、香料、脂肪酸、油类、蛋白质水解物、肽、氨基酸等或其组合填充。

[0177] 功能成分可以以0.1-50%的量包括在粉末之中。因此，粉末可以作为那些功能成分的载体。这表现出的优点是：例如当咖啡因被填充入本发明的粉末或例如用于含咖啡因的营养棒时，降低了咖啡因苦味感觉。在喷雾干燥之前可以将其他的成分混入乳清蛋白质微胶粒浓缩物。其他的成分包括可溶的或不可溶的盐、肽、蛋白质水解物(例如麦谷蛋白水解物)、益生菌、着色剂、糖、麦芽糊精、脂肪、乳化剂、甜味剂、香料、植物提取物、配体、生物活性剂、咖啡因、维生素、矿物质、药物、乳、乳蛋白、脱脂奶粉末、微胶粒酪蛋白、酪蛋白酸盐、植物蛋白质、氨基酸、多酚、色素等及其组合。所得到的混合的乳清蛋白质微胶粒粉末包含重量比范围为1:1-1:100的乳清蛋白质微胶粒和至少1种另外的成分。

[0178] 该共喷雾干燥得到由被另外的成分附聚或包衣的乳清蛋白质微胶粒组成的粉末。优选地，乳清蛋白质微胶粒与另外的成分的重量比是1:1。这可以进一步地促进这些粉末的增溶并且可以特别有利于制造包含乳清蛋白质微胶粒的脱水食品(例如汤、调味汁等)。

[0179] 本发明所用的乳清蛋白质微胶粒粉末的特征在于内部结构主要由空心球组成、但也由塌陷的球组成。空心球结构能够容易地由在喷雾干燥期间WPM浓缩物滴中形成蒸汽滴来解释。当蒸汽滴因温度在100℃以上而离开WPM滴时，剩下了空心球。“骨骼形状”是由于水从小滴中蒸发和小滴中的外压力的组合。

[0180] 在将颗粒切片接近其直径之后通过SEM研究球形空心球的内部结构。颗粒的壁厚度在5μm左右并且看起来非常光滑，然而内部结构具有更加粒状的外观。增加放大倍数表明该颗粒状实际上是由于被熔化从而形成粉末颗粒的内部基质的初始WPM的存在。令人感兴趣地，在喷雾干燥期间保持了微胶粒的球形以及均一的粒径分布。

[0181] 因此，根据微观，乳清蛋白质微胶粒粉末的特征在于含有完整的和个体化的乳清蛋白质微胶粒的中空或塌陷的球的独特的颗粒形态。

[0182] 乳清蛋白质微胶粒粉末的特征在于非常高的流动性，这提供了之前未曾获得的优点。例如，这些粉末几乎可以像液体那样运动并且表现出方便的可用性和可转移性的优点。这些粉末的休止角优选在35°以下、更优选在30°以下。例如，这种低休止角使本发明的粉末能够在食品用途中用作流动剂。

[0183] 混合的或“纯的”这些粉末的非常重要的特征是保存了乳清蛋白质的基本微胶粒结构。而且，微胶粒结构能够容易地在溶剂中重构。已经表明，由乳清蛋白质微胶粒浓缩物所获得的粉末在室温或在50℃能够容易地重新分散于水中。与初始的浓缩物相比，乳清蛋白质微胶粒的粒径和结构被完全保存。例如，在一种实施方案中，以20%蛋白质浓度喷雾干燥的乳清蛋白质浓缩物已经在50℃以4%的蛋白质浓度重新分散于去离子水中。微胶粒的结构由TEM探查。通过动态光散射发现微胶粒的直径为315nm，多分散性指数为0.2。

[0184] 在250巴喷雾干燥或冷冻干燥的粉末被重构和匀浆之后，在溶液中观察到乳清蛋白质微胶粒和仅有少量聚集的部分的事实证实了乳清蛋白质微胶粒对喷雾干燥和冷冻干燥是物理稳定的。

[0185] 本发明的粉末可以用于宽范围的用途，例如与乳清蛋白质微胶粒及其浓缩物相关的所有上述用途。例如，通过使用微胶粒浓缩物粉末能够容易地制备富含蛋白质的消费品，例如巧克力、功能营养棒、脱水的烹调产品、口香糖等。由于其较高的加工稳定性，本发明的粉末也可以进一步被例如乳化剂、树胶、蛋白质、肽、蛋白质水解物包衣。这可以有利于调节这些粉末的功能和味道。

[0186] 根据以下详细描述制备本发明所用的微胶粒的实施例来进一步定义本发明。本文所述的和所请求保护的发明不限于本文所公开的特定实施方案的范围，因为这些实施方案是用于对本发明的若干方面举例说明。任何等价的实施方案都涵盖于本发明的范围内。实际上，除了本文所展示和记载的内容，本发明的各种改变对本领域的技术人员而言根据上文所述将是很明显的。这些改变也落入所附的权利要求的范围内。

[0187] 实施例1

[0188] 通过pH调节使β-乳球蛋白胶粒化

[0189] 从 Davisco(Le Sueur,MN,USA) 获 得 β- 乳 球 蛋 白 ( 批 号JE002-8-922,13-12-2000)。从甜乳清通过超滤和离子交换色谱纯化蛋白质。粉末的组成
2+ 2+ + +
是89.7%蛋白质、8.85%水分、1.36%灰分(0.079%Ca ,0.013%Mg ,0.097%K,0.576%Na,0.0-
50%Cl)。所用的全部其他试剂都是分析级(Merck Darmstadt,德国)。

[0190] 通过β-乳球蛋白在 水(Millipore)中溶解并且在20℃搅拌2小时来制备0.2%浓度的蛋白质溶液。然后通过加入HCl将等分试样的pH调节至5.0、5.2、5.4、5.6、
5.8、6.0、6.2、6.4、6.6、6.8、7.0。将溶液填充入20ml玻璃管形瓶(Agilent Technologies)中并且用含有硅／PTFE密封条的铝胶囊密封。溶液在85℃加热15分钟(达到温度的时间为2.30-3.00分钟)。在热处理之后，样品在冰水中冷却至20℃。产品的可见外观表明胶粒化的最佳pH是5.8。

[0191] 实施例2

[0192] 乳清蛋白质分离物的胶粒化

[0193] 从Davisco(Le Sueur,MN,USA)获得乳清蛋白质分离物(WPI)( 批号JE032-1-420)。粉末的组成记载于表2中。

[0194] 通过乳清蛋白质粉末在 水(Millipore)中溶解并且在20℃搅拌2小时来制备3.4%蛋白质的蛋白质溶液。初始pH为7.2。然后通过加入0.1N HCl将等分试样的pH调节至5.6、5.8、6.0、6.2、6.4和6.6。

[0195] 将溶液填入20ml玻璃管形瓶(Agilent Technologies)中并且用含有硅／PTFE密封条的铝胶囊密封。溶液在85℃加热15分钟(达到温度的时间为2.30-2.50分钟)。在热处理之后，样品在冰水中冷却至20℃。

[0196] 在500nm处和25℃已经测定了加热后的乳清蛋白质的浊度，稀释样品从而使量度范围在0.1-3吸光度单位(Spectrophotometer Uvikon 810,Kontron Instrument)。对初始蛋白质浓度3.4%进行数值计算。

[0197] 当对相同的样品以10分钟间隔在500nm处测量的吸光度稳定(小于初始值的5%变化)时，认为达到胶粒化的pH。对于该产品，胶粒化的最佳pH是6.0-6.2。对于所调节的该pH在热处理前稳定的浊度是21并且根据在离心后在280nm处吸光度所估计的残留的可溶的蛋白质占1.9%。我们能够得出结论：在pH6.0，45%的初始蛋白质转化为微胶粒。

[0198] 表2

[0199] 在胶粒化后WPI的组成和样品特征

[0200]

[0201]

[0202] 实施例3

[0203] 微胶粒的微观观察

[0204] 微胶粒的制备：

[0205] 通过乳清蛋白质粉末(WPI 90批次989／2,Lactalis,Retier,法国)在水(Millipore)中溶解来制备2%蛋白质的蛋白质溶液，并且在20℃搅拌2小时。然后使用HCl 0.1N或NaOH 0.1N调节等分试样的pH。

[0206] 将溶液填入20ml玻璃管形瓶(Agilent Technologies)中并且用含有硅／PTFE密封条的铝胶囊密封。溶液在85℃加热15分钟(达到温度的时间为2.30-2.50分钟)。

[0207] 在热处理之后，样品在冰水中冷却至20℃。对于该产品，胶粒化的最佳pH是7.4。

[0208] 微观观察：

[0209] 将液态微胶粒样品装入琼脂凝胶管中。通过浸入2.5%戊二醛在0.1M,pH 7.4的二甲基胂酸盐缓冲液中的溶液中实现固定，并且使用在相同缓冲液中的2%四氧化锇进行后固定，2种溶液都含有0.04%钌红。在分级的乙醇系列(70,80,90,96,100%乙醇)中脱水之后，将样品包埋在Spurr树脂(Spurr/乙醇1:1,2:1,100%)中。在树脂的聚合(70℃,48小时)之后，用Leica ultracut UCT超薄切片机切成半薄和超薄切片。超薄切片用乙酸双氧铀和柠檬酸铅水溶液染色，用透射电子显微镜(Philips CM12,80kV)检查。

[0210] 如TEM所测得的，所得到的微胶粒呈现具有200nm直径的球形。

[0211] 粒径分布

[0212] 对于通过1重量%β-乳球蛋白在pH 4.25(带正电荷，ζ电位在+25mV左右)和在pH 6.0(带负电荷，ζ电位在-30mV左右)下在85℃15分钟的热处理所获得的那些微胶粒，测量微胶粒的基于强度的粒径分布。微胶粒的Z-平均流体动力学直径在pH 4.25是229.3mm，在pH 6.0是227.2。使用动态光散射追踪β-LG和乳清蛋白质聚集体。使用装配有在633nm处发射的激光和4.0mW电源的Nanosizer ZS仪器(Malvern Instruments,UK)。
该仪器用于背散射构型，在173℃的散射角进行检测。这使在浑浊的样品中所发现的多个散射信号极大地减少。将样品置于正方形石英试池(Helima,路径长度1cm)中。根据样品浊度(衰减)，光束的路径长度由仪器自动设置。根据散射强度的波动计算自相关函数。结果表明：平均粒径的特征在于非常狭窄的多分散性指数(<0.200)。

[0213] 实施例4

[0214] 在恒定pH的β-乳球蛋白的胶粒化

[0215] 使用2%β-乳球蛋白的水溶液重复实施例1中所述的方法。在加入精氨酸HCl溶液之后将该溶液的pH调节至7.0，从而得到5到200mM的最终盐浓度范围和1%的最终β-乳球蛋白浓度。随后进行热处理(80℃,10分钟,约2分钟升温)从而产生微胶粒。

[0216] 结果表明：只有离子强度范围在约50-70mM，才能观察到表明乳清蛋白质微胶粒存在的实质性的浊度。

[0217] 实施例5

[0218] 制备增白剂

[0219] 根据实施例2处理天然乳清蛋白质(WPI 95批次848,Lactalis；8重量%水溶液)。使用装备有2mm测量池的MacBeth CE-XTH D65 10°SCE仪器用反式反射模式测量所得到的产品的亮度(L)。所得到的亮度L=74.8，其可以与全脂奶的L=74.5的值相比。

[0220] 实施例6

[0221] 制备咖啡脂末

[0222] 天然乳清蛋白质( 批号JE 032-1-420,0.5重量%水溶液)在50℃与10重量%的部分氢化的棕榈油、14重量%麦芽糊精(DE 21)在调节至该BIPRO的胶粒化pH6.0的50mM磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液存在下混合。在400/50巴使用Rannie匀浆器使混合物匀浆并且随后在85℃热处理15分钟。

[0223] 所得到的乳剂在4℃贮藏条件下在至少1个月的时期内表现出高稳定性并且表现出L=78的白度，这可与具有15%的脂肪含量和L=75.9的亮度的参照液体脂末(Creme a Cafe,Emmi,瑞士)相比。

[0224] 实施例7

[0225] 制备水性泡沫

[0226] 天然β-乳球蛋白(Biopure,Davisco,批号JE 002-8-922,2重量%水溶液)与120mM精氨酸HCl溶液混合，以致最终β-乳球蛋白浓度是1重量%和精氨酸HCl是60mM。
然后通过加入1N HCl将pH调节至7.0。然后混合物在80℃热处理10分钟以便90%的初始β-乳球蛋白转化为具有130nm的z-平均直径的微胶粒。在这种情况中，使用Nanosizer ZS仪器(Malvern Instruments,UK)测定微胶粒的直径。将样品倾入石英杯中并且自动记录散射光的变化。使用累积量法拟合所得到的自相关函数，以便能够计算颗粒的扩散系数和随后使用Stokes-Einstein定律计算z-平均流体动力学直径。对于该测量，溶剂的折射TM
率取1.33并且微胶粒的折射率取1.45。然后使用标准化的Foamscan (ITConcept)仪器，通过氮气喷射穿过玻璃釉料产生12-16μm的气泡，使50mL体积的所得的β-乳球蛋白微胶
3
粒分散液起泡，从而产生180cm 体积的泡沫。然后在使用图像分析监视泡沫体积在26℃下随时间的稳定性，并且将其与在相同条件下处理的但没有精氨酸HCl的β-乳球蛋白(其中没有形成微胶粒)所获得的泡沫的稳定性进行比较。的确，β-乳球蛋白微胶粒的存在极大地改善了泡沫体积的稳定性。

[0227] 实施例8

[0228] 基于乳清蛋白质的发酵乳制品-发酵试验

[0229] 材料

[0230] 从Davisco(Le Sueur,MN,USA)获得乳清蛋白质分离物(WPI) (蛋白质浓度92.7%)

[0231] 喷雾干燥的乳清渗透物(Variolac 836)：乳糖浓度：83%-矿物质：8%。

[0232] 乳酸50%

[0233] 食用乳糖(Lactalis)

[0234] 去离子水

[0235] 方法

[0236] 将 粉末溶解于去离子水中从而具有4.6%的蛋白质浓度，即对于3升的溶液为154.5g的WPI粉末和2845.5g的水。水合作用时间是3小时。在水合作用之后，将该溶液分成200ml的样品从而准备不同的试验：

[0237] 表3

[0238]

[0239] 对于每一种溶液，在加热之前已经加入50%的乳酸从而调节pH。

[0240] 样品用双锅炉加热至85℃并且在该温度维持15分钟。在加热后，溶液冷却至40℃并且用保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌接种。样品在被置于6℃冷藏室内之前在蒸汽室内在41℃孵育5小时30分。结果呈现在表4中。

[0241] 表4

[0242]

[0243] 实施例9

[0244] 具有降低的脂肪含量的增加乳清蛋白质的冰淇淋

[0245] 材料

[0246] 具有90%的蛋白质含量的乳清蛋白质分离物(WPI, 90来自Lactalis,Retiers,法国)

[0247] 具有35%的蛋白质含量的脱脂奶粉

[0248] 蔗糖

[0249] 麦芽糊精DE39

[0250] 无水的乳脂

[0251] 乳化剂

[0252] 去离子水

[0253] 可食用的盐酸1M

[0254] 方法

[0255] 使用双套层的80L罐，在避免泡沫形成而温柔搅拌下在50℃以9.67重量%的蛋白质浓度将 90粉末分散于去离子水中，即3.3kg的 90分散于31.05kg的去离子水中。在1小时的分散之后，通过加入HCl将分散液的pH调节至胶粒化pH。将分散液的温度升至85℃并且维持15分钟从而产生乳清蛋白质微胶粒。在15分钟之后，将温度降至50℃并且将另外的成分连续地加入微胶粒分散液(即脱脂奶粉、麦芽糊精DE39、蔗糖、乳化剂和无水的乳脂)中。混合物的最终量是50kg，其具有39.5%的总固体含量和5重量%的脂肪含量。在30分钟的水合作用之后，混合物进行二步匀化(80／
20巴)和杀菌(86℃／30s)，随后老化过夜。第二天，使用Hoyer MF50仪器以100%的超过量对冰淇淋混合物进行冷冻并且在-40℃变硬，在-20℃贮藏。最终的冰淇淋含有占冰淇淋混合物的8重量%的蛋白质(20%酪蛋白，80%乳清蛋白质)和5重量%的脂肪。

[0256] 实施例10

[0257] 通过喷雾干燥所得到的粉末的乳清蛋白质微胶粒

[0258] 材料

[0259] 具有90%的蛋白质含量的乳清蛋白质分离物(WPI, 90，来自Lactalis,Retiers,法国)

[0260] 可食用的乳糖

[0261] 麦芽糊精DE39

[0262] 去离子水

[0263] 可食用的盐酸1M

[0264] 方法

[0265] 使用双套层的100L罐，在避免泡沫形成而温柔搅拌下在50℃以10重量%的蛋白质浓度将 90粉末分散于去离子水中，即，将11kg的 90分散于89kg的去离子水中。在1小时的分散之后，通过加入HCl将分散液的pH调节至胶粒化pH(在该情况下大约6.3)。将分散液的温度升至85℃并且维持15分钟从而产生乳清蛋白质微胶粒。在15分钟之后，将温度降至50℃并且将10重量%乳清蛋白质微胶粒分散液分成50kg的2批。在第一项试验中，在50℃将20kg的乳糖分散于50kg的微胶粒分散液中并且搅拌30分钟。类似地，将20kg的麦芽糊精DE39加入到剩余的50kg的乳清蛋白质微胶粒分散液中。

[0266] 然后将2个混合物以15L/h的流速喷雾干燥到NIRO SD6.3N塔中。进气温度是140℃，出气温度是80℃。所得到的粉末的含水量低于5%。在喷雾干燥之前和之后，在水中存在乳糖和麦芽糊精(DE39)的情况下，使用动态光散射测定乳清蛋白质微胶粒的粒径。为了使乳清蛋白质微胶粒的粘度处于稀释状态，通过在喷雾干燥前稀释分散液或粉末重构将总蛋白质浓度设定为0.4重量%。使用Nanosizer ZS仪器(Malvern Instruments)并且微胶粒直径从20次测量取平均值。

[0267] 在存在乳糖和麦芽糊精(DE39)的情况下，乳清蛋白质微胶粒的所测得的颗粒直径分别是310.4nm和306.6。在粉末的重构之后，发现各自的直径分别为265.3nm和268.5。这些测量证实乳清蛋白质微胶粒对于喷雾干燥是物理稳定的。使用pH7的1%磷钨酸的负染色法，对在水中的0.1重量%乳清蛋白质微胶粒分散液进行TEM显微镜观察证实了该结果。使用在80kV运行的Philips CM12透射电子显微镜。在喷雾干燥之前和在喷雾干燥的粉末的重构之后，在溶液中观察乳清蛋白质微胶粒。未发现形态和结构的不同。

[0268] 实施例11

[0269] 通过蒸发浓缩

[0270] 来自Lactalis的乳清蛋白质分离物 90(批号500648)在15℃在软水中以4%的蛋白质浓度被重构，从而达到2500kg的最终的该批次的量。通过加入1M盐酸来调节pH，使最终的pH值是5.90。乳清蛋白质分散液通过板-板APV-混合热交换器以500l/h的流速被泵出。在60℃预加热，然后在85℃热处理15分钟。通过使用动态光散射的粒径测量以及在500nm的浊度测量来检查乳清蛋白质微胶粒的形成。所获得的4%乳清蛋白质微胶粒分散液的特征在于颗粒的流体动力学半径为250nm、多分散性指数为0.13和浊度为80。乳清蛋白质微胶粒分散液然后用于以500l/h的流速进入Scheffers蒸发器。
调整蒸发器中的温度和真空度以便产生大约500kg具有20%的蛋白质浓度的乳清蛋白质微胶粒浓缩物，并且将其冷却至4℃。

[0271] 实施例12

[0272] 通过微量过滤富集

[0273] 来自Lactalis的乳清蛋白质分离物 90(批号500648)在15℃在软水中以4%的蛋白质浓度被重构，从而达到2500kg的最终的批次的量。通过加入1M盐酸来调节pH，使最终的pH值是5.90。乳清蛋白质分散液通过板-板APV-混合热交换器以
500L/h的流速被泵出。在60℃预加热，然后在85℃热处理15分钟。

[0274] 通过使用动态光散射的粒径测量以及在500nm的浊度测量，检查乳清蛋白质微胶粒的形成。所获得的4%乳清蛋白质微胶粒分散液的特征在于颗粒的流体动力学半径为260nm、多分散性指数为0.07和浊度为80。蛋白质的微胶粒形式也通过TEM检验，并且具有
150-200nm的平均直径的微胶粒结构是清晰可见的。乳清蛋白质微胶粒分散液可以在4℃
2
贮藏或者直接用于以180L/h的流速进入装配有6.8m Carbosep M14膜的过滤单元。在后一种情况下，乳清蛋白质微胶粒的浓缩在10℃进行，直至渗透流速达到70L/h。此时，最终的乳清蛋白质浓缩物含有20%的蛋白质。通过TEM检验浓缩物中微胶粒的结构，并且与微量过滤之前的4%乳清蛋白质分散液相比未见显著的变化。尽管在本实施例中乳清蛋白质微胶粒的浓缩在10℃进行，但是浓缩也可以在55℃、或从约60℃至约63℃进行。

[0275] 实施例13

[0276] 包含至少90%乳清蛋白质的乳清蛋白质微胶粒粉末

[0277] 使用雾化喷嘴(0=0.5mm,喷射角=65°,压力=40巴)以25kg/h的产品流速将200kg的通过微量过滤获得的20%蛋白质的乳清蛋白质微胶粒浓缩物(见以上实施例)注
3
入NIRO SD6.3N塔中。产品的入口温度是150℃，出口温度是75℃。塔中的气流是150m/h。粉末中的含水量低于4%，并且粉末的特征在于非常高的流动性。粉末的扫描电子显微术显示具有10-100μm的表观直径范围的完全球形的颗粒。

[0278] 实施例14

[0279] 混合的乳清蛋白质微胶粒粉末

[0280] 20kg的乳清蛋白质微胶粒浓缩物与1.7kg的DE为39的麦芽糊精进行混合，以便粉末中最终的乳清蛋白质微胶粒与麦芽糊精的比例是70／30。使用雾化喷嘴(0=0.5mm,喷射角=65°,压力=40巴)以25kg/h的产品流速将该混合物注入NIRO SD6.3N塔中。产3
品的入口温度是150℃，出口温度是75℃。塔中的气流是150m/h。粉末中的含水量低于
4%，并且粉末的特征在于非常高的流动性。

[0281] 当实施例13和14的粉末在水中重构时，包含基本上具有与乳清蛋白质微胶粒浓缩物相同的结构和形态的微胶粒。

[0282] 实施例15

[0283] 由冷冻干燥所获得的乳清蛋白质微胶粒粉末

[0284] 材料

[0285] 在实施例12中以20%蛋白质通过微量过滤所产生的具有90%的蛋白质含量的乳清蛋白质微胶粒浓缩物

[0286] 方法

[0287] 将100g的乳清蛋白质微胶粒浓缩物装入塑料烧杯并且在-25℃冷冻1周。然后将该烧杯置于装配有真空泵的实验室用冷冻干燥机Virtis中。样品放置7天直到冷冻干燥机中的压力在大约30毫巴保持不变。回收了大约20g的冷冻干燥的乳清蛋白质微胶粒。

[0288] 实施例16

[0289] 无蔗糖的富含乳清蛋白质的黑巧克力

[0290] 材料

[0291]

[0292] 方法

[0293] 可可汁与可可脂、乳脂、乳清蛋白质微胶粒粉末、三氯蔗糖、香草醛和卵磷脂进行混合。该混合物在65℃进行精压过夜直到获得均匀的糊。然后在巧克力板中对该巧克力团块进行模制并且冷却。黑巧克力的特征在于最终的乳清蛋白质含量为45-50%。

[0294] 实施例17

[0295] 富含乳清蛋白质的白巧克力

[0296] 材料

[0297]

[0298] 方法1

[0299] 乳清蛋白质微胶粒、乳清粉末、蔗糖和香草醛进行混合并研磨直到获得需要的粒径分布。然后该混合物在65℃与可可脂、无水的乳脂和卵磷脂进行精压直到获得均匀的糊。然后在巧克力板中对该巧克力团块进行模制并且冷却。该白巧克力的特征在于最终的乳清蛋白质含量为20%。

[0300] 方法2

[0301] 乳清蛋白质微胶粒、乳清粉末、蔗糖和香草醛进行混合并研磨直到获得需要的粒径分布。然后该混合物在65℃与可可脂、无水的乳脂和卵磷脂进行精压直到获得均匀的糊。然后在巧克力板中对该巧克力团块进行模制并且冷却。该白巧克力的特征在于最终的乳清蛋白质含量为30%。

[0302] 方法3

[0303] 乳清蛋白质微胶粒、蔗糖和香草醛进行混合并研磨直到获得需要的粒径分布。然后该混合物在65℃与可可脂、无水的乳脂和卵磷脂进行精压直到获得均匀的糊。然后在巧克力板中对该巧克力团块进行模制并且冷却。该白巧克力的特征在于最终的乳清蛋白质含量为30-35%。

[0304] 实施例18

[0305] 用硫酸化的油酸丁酯(SBO)或任何其他的带负电荷的乳化剂包衣的乳清蛋白质微胶粒的水性分散液

[0306] 材料

[0307] 来自实施例13的具有90%的蛋白质含量的乳清蛋白质微胶粒(WPM)粉末

[0308] SBO

[0309] 盐酸(1M)

[0310] 方法

[0311] 将实施例13中所述的WPM粉末分散于MiIIiQ水中从而达到0.1重量%的最终蛋白质浓度。为了除去可能的WPM聚集体，该分散液用0.45μm滤器进行过滤。通过加入1M盐酸使该WPM分散液的pH降至3.0。在pH 3.0制备SBO的1重量%分散液。

[0312] 使用Nanosizer ZS仪器(Malvern Instruments Ltd.)测量这些WPM的流体动力-1 -1学半径和ζ电位。直径是250nm，电泳迁移率为+2.5μm.cm.V .s 。在pH 3.0，SBO分散-1 -1
液的流体动力学半径和电泳迁移率分别是4nm和-1.5／-2.0μm.cm.V .s 。

[0313] 在进行完这些预先的鉴定之后，SBO分散液用于滴定WPM分散液，同时跟踪混合物的流体动力学半径和电泳迁移率的变化。发现流体动力学半径在约250-300nm恒定直到达到5:1的WPM/SBO重量-混合比。在这一点上，流体动力学半径明显地偏离到20000nm并且出现复合物WPMSBO的沉降。当进一步加入SBO时，高于5:1的混合比，流体动力学逐渐降至如最初对WPM所发现的250nm，从4:1的比例开始变平坦。混合物的电泳迁移率表明当加入SBO时其降低，对于5:1的混合比例其达到0值。然后，随着SBO加入其继续降低，从-1 -14:1的比例开始在-3.0μm.cm.V .s 变平坦。

[0314] 对这些结果的解释是：带正电荷的WPM在第一步中被SBO的负电荷头部进行静电包衣直到完成全部的电荷中和(混合比5:1)。在这一点上，来自SBO的疏水性尾部能够自缔合，这导致具有非常大的流体动力学直径的过聚集体和复合物的沉降。当进一步加入SBO时，疏水性尾部进一步缔合从而形成双层包衣，将其带负电荷的头部暴露于溶剂。这导致可与全蛋白质核脂质体相当的带负电荷的具有双层SBO包衣的WPM。

[0315] 使用pH 4.2的水溶液中的其他酸性的食品级乳化剂(其中它们主要以其阴离子形式电离(COO化学官能团))，例如DATEM,CITREM,SSL(来自Danisco)，也已经得到了类似的结构。

[0316] 实施例19

[0317] 富含蛋白质的贝夏梅尔型调味汁

[0318] 材料

[0319] 来自实施例14的具有70%的蛋白质含量的混合的乳清蛋白质微胶粒粉末[0320] 黄油

[0321] 面粉

[0322] 脱脂乳

[0323] 盐

[0324] 方法

[0325] 在加热下，将30g的混合的乳清蛋白质粉末分散于1升的脱脂乳。然后将30g的黄油和80g的面粉与2.85g的盐一起加入。然后将混合物煮沸从而产生具有约3g/100g的乳清蛋白质含量的贝夏梅尔型调味汁。

[0326] 实施例20

[0327] 用于功能棒的富含乳清蛋白质的基质

[0328] 材料

[0329]

[0330]

[0331] 方法

[0332] 将糙米糖浆与麦芽糖醇和甘油在25℃混合。然后加入乳清蛋白质微胶粒粉末并且搅拌10分钟。然后得到用于功能棒的富含乳清蛋白质的基质，并且其能够与其他成分(矿物质、维生素、调味剂)进行混合。该制品含有比乳(38%)更多的蛋白质。

[0333] 实施例21

[0334] 喷雾干燥的乳清蛋白质微胶粒粉末、混合的乳清蛋白质微胶粒粉末、乳清蛋白质分离物粉末和低热脱脂奶粉的休止角的测定

[0335] 材料

[0336] 来自实施例12的具有90%的蛋白质含量的乳清蛋白质微胶粒粉末(水分3.5%)[0337] 来自实施例13的具有90%的蛋白质含量的混合的乳清蛋白质微胶粒粉末(水分3.5%)

[0338] 乳清蛋白质分离物粉末 90(批号500658来自Lactalis,法国；水分4%)

[0339] 低热脱脂奶粉(批号334314来自Emmi,瑞士；水分3.5%)

[0340] 根据ISO标准4324所述的用于测量粉末休止角的测量装置

[0341] 方法

[0342] 将粉末置于具有99mm的柱直径的漏斗中并且用搅拌器使粉末流动。粉末落在具有100mm直径和25mm高的透明的塑料容器上。根据以下方程式测量休止角Φ：

[0343] 休止角Φ=ARCTAN(2h/100)

[0344] 其中，h是所能获得的粉末锥体的最大高度，塑料容器的所有表面都被粉末覆盖。来自休止角试验的结果(值是3次测量的平均值并且标明了标准偏差)。

[0345]

[0346] 休止角结果清楚地表明：纯的或与麦芽糊精混合的乳清蛋白质微胶粒粉末表现出比初始的乳清蛋白质粉末或脱脂奶粉显著更低的角度。低于35°的休止角是有极佳流动性的粉末的特征。

[0347] 实施例22

[0348] 包含乳清蛋白质微胶粒荷兰型调味汁蛋黄酱型调味汁的荷兰型调味汁和蛋黄酱型产品的配方

[0349] 荷兰型调味汁

[0350]成分 %
水 80-90
粘合剂 1-10
酸 0.1-5
乳清蛋白质微胶粒 0.5-5
香料、盐、糖、调味剂、着色剂 5-10

[0351] 蛋黄酱型调味汁

[0352]成分 %
水 75-85
粘合剂 1-10
酸 1-10
乳清蛋白质微胶粒 0.5-5
香料、盐、糖、调味剂、着色剂 5-15

[0353] 使用乳清蛋白质微胶粒，可获得具有高酸和盐含量的无脂肪的产品。含有乳清蛋白质微胶粒的优点是在微胶粒对烹调基质和加工处理是稳定的同时提供增白效果。乳清蛋白质微胶粒通过其乳化性质还能模拟脂肪的存在。

[0354] 实施例23

[0355] WPM与麦谷蛋白水解物(WGH)的共喷雾干燥

[0356] 在25℃将2.2kg的WPM粉末分散于45.8kg的去离子水中。在搅拌15分钟之后，使用NIRO-SOAVI匀浆器以50kg.h-1的流速在250/50巴使WPM分散液均匀。然后将WGH(麦谷蛋白水解物)粉末(2kg)(可商业购买或通过本领域中已知的标准方法得到)分散于WPM分散液(48kg)中，以致分散液的最终的固体含量是8%并且WPM与WGH的重量比为1:1。因此喷雾干燥的粉末的最终WPM含量在50%左右。

[0357] 实施例24

[0358] 富含乳清蛋白质的汤

[0359] 使用根据本发明的乳清蛋白质微胶粒粉末，用以下成分制备干混合物(28g)：

[0360] 绿花椰菜奶油汤

[0361]成分 克
乳清蛋白质微胶粒 10-15
增稠剂 5-10
蔬菜粉末 2-5
脂肪/油 1-5
盐 0.5-3
香料、调味剂、风味增强剂 1-2

[0362] 产品通过将干混合物加入到250mL冷或热水中来重构并且煮沸。所得到的汤具有奶油质感和4-6g/100g的乳清蛋白质含量。

[0363] 实施例25

[0364] 具有降低的脂肪含量的基于乳清蛋白质的奶油汤

[0365] 芦笋奶油汤(29g)

[0366]成分 克
乳清蛋白质微胶粒 3-10
增稠剂 10-20
蔬菜粉末 1-5
脂肪/油 1-3
盐 0.5-5
香料、调味剂、风味增强剂 1-2

[0367] 产品通过将干混合物加入到500mL冷或热水中来重构并且煮沸，从而产生具有奶油质感和外观、并且具有降低的脂肪含量的汤。

[0368] 实施例26

[0369] 乳清蛋白质微胶粒与汤基质的共喷雾干燥

[0370] 乳清蛋白质微胶粒分散液通过将1.6kg的乳清蛋白质微胶粒混入43.7kg去离子-1水中来重构。在搅拌15分钟后，使用NIRO-SOAVI匀浆器以50kg.h 的流速在250/50巴使WPM分散液均匀。然后，将4.7kg的汤基质加入到WPM分散液中。分散液的最终的固体含量是12.6%。分散液进行喷雾干燥。在喷雾干燥器的出口处产品温度是75℃并且最终的含水量是3.5%。粉末中最终的WPM浓度在23%左右。

[0371] 给出了通过上述的方法所获得的典型的脱水汤基质：

[0372]成分 组成(g/100g的WPM-汤基质粉末)
乳清蛋白质微胶粒 20-30
增稠剂 20-40
盐、香料、调味剂、风味增强剂 3-9
奶油 5-15
麦芽糊精 10-20
植物油 3-8

[0373] 实施例27

[0374] 包含乳清蛋白质微胶粒的白汤

[0375] 使用根据本发明的WPM粉末，用以下成分制备干混合物(35g)：

[0376]成分 克
乳清蛋白质微胶粒 3-10
增稠剂 20-40
盐、香料、调味剂、风味增强剂 1-9
脂肪/油 1-4

[0377] 产品通过将干混合物加入到500mL冷水中来重构并且煮沸，从而产生白汤。

[0378] 实施例28

[0379] 各种浓度的亮氨酸包含于不同的组合物之中。申请人进行感觉试验从而确定26名参与者察觉出不同组合物中以不同浓度存在的亮氨酸的能力。最初，申请人发现26名参与者中的23位能够99.9%确信察觉出调味的口服营养产品中2g的补充的亮氨酸。然后参与者用“非常苦”和“比其他样品酸”来描述含有亮氨酸的产品。参与者进一步陈述含有亮氨酸的产品比其他样品“尝起来更老和较不新鲜”，产品“似乎有点灼烧感”和产品“味道差”。

[0380] 然后制备了含有乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸的不同的组合物，并且申请人用乳清蛋白质微胶粒和亮氨酸组合物进一步进行感觉试验。使用由申请人开发的包含乳清蛋白质微胶粒和补充的亮氨酸的新的营养产品进行内部小组参与者感觉评价。所检验的产品中亮氨酸的浓度包括每一份含0.5、1.0、2.0和3.0g L-亮氨酸。该小组的结果表明：在1.0和2.0g亮氨酸的情况下，WPM能够阻断所感知的亮氨酸的苦味，但是0.5和3.0g亮氨酸稍微更容易被小组参与者感知。因此，申请人令人惊讶地发现蛋白质微胶粒能够遮掩为组合物带来苦味的营养素部分(例如亮氨酸)。

[0381] 应当理解，本文所述的目前优选的实施方案的各种改变和修饰对本领域的技术人员而言是很明显的。能够在不偏离本主题的精神和范围并且不减少其预期的优点的情况下完成这些改变和修饰。因此，这些改变和修饰也被所附的权利要求涵盖。