Immune or hematological enhancement, inhibition of tumor formation or growth, and, cancer, methods of treatment or prevention of the symptoms of cancer symptoms or cancer treatment

本発明は、免疫又は血液学的増強、腫瘍の形成又は成長の阻害、及び、癌、癌症状又は癌治療の症状の治療又は予防の方法であって、乳脂肪又は乳脂肪類似物を、任意に少なくとも１種の追加の治療剤、例えば抗腫瘍剤等、好ましくはラクトフェリン（鉄ラクトフェリンを含む）から選択されたものと共に投与することによる方法に関する。 本発明の方法及び医薬用途は、食料組成物（食品又は補助食品として）、栄養補助組成物又は医薬組成物によって実施することができる。 本発明の方法の実施に有用な組成物も提供される。

乳は、新生児の急速な成長及び発達の時期に栄養分を提供する、栄養分に富んだ生物学的流体である。 それゆえに、乳は乳児の発達に必要な基質の他にも、多くの成長調節因子を含んでいる。

癌発生リスクの観点における乳摂取の健康上の利益は、研究及び広範な議論の対象となってきた主題である。 高脂肪酪農食品(Larssonら、2005)又は低脂肪乳(Maら、2001、及びGoodmanら、2002)の摂取により、結腸直腸癌及び卵巣癌を含むある種の癌のリスクを低減し得るとの報告がある。 逆に、他の研究によれば、低脂肪乳を大量に摂取すると、ある種の癌のリスクが増大することも報告されている(Larssonら、2006)。 この文献の総説は、乳製品を卵巣癌リスクと関係づける証拠が限定されており、一貫性に欠けると述べている(Schulzら、2004)。 全乳及び低脂肪乳は何れも、乳癌リスクの低下との関連が指摘されているものの(Shinら、2002、並びにBradlow及びSepkovic、2002)、別の研究ではリスク因子として報告されている(Knektら、1996、及びGaardら、1995)。 低脂肪乳は、ラットにおいて発癌物質が誘導した乳腺腫瘍の発生を促進し(Qinら、2004)、かつ低脂肪乳は、前立腺癌のリスク上昇に関連している(Tsengら、2005、及びVeierodら、1997)。 ひとつの大規模プロスペクティブ研究は、成人の乳消費は、乳癌発生率と負の関係の傾向があることを報告した(Hjartakerら、2001)のに対し、最近の総説は、低又は高脂肪酪農製品の高度の消費による乳癌リスクの増減のパターンには一貫性はないと結論付けている(Moorman及びTerry、2004、並びにParodi、2005)。 結論として、癌リスクと乳摂取のベネフィットに関する疫学的証拠は、一貫していない。

乳脂肪は、共役リノール酸（ＣＬＡ）、スフィンゴミエリン、酪酸、バクセン酸、分枝鎖脂肪酸、エーテル型脂質、β−カロテン、並びにビタミンＡ及びＤを含む、いくつかの成分を含有しており、これらはそれらの抗癌可能性を評価するために精査されている(Parodi、1999、及びParodi、1997において検証)。 例えば報告によると、シス９，トランス１１（ｃ９，ｔ１１）−ＣＬＡ異性体、及びその前駆体バクセン酸は、腫瘍細胞株の増殖を阻害する(Millerら、2003、及びO'Sheaら、2000)。 規定食ＣＬＡは、報告によると、１，２−ジメチルヒドラジン処置したラットにおいて、アポトーシスを増大させることにより、結腸腫瘍の発生率を低下する(Kim及びPark、2003)。 他の研究は、規定食ＣＬＡは、７，１２−ジメチル−ベンズ［ａ］アントラセン（ＤＭＢＡ）によるマウス皮膚の発癌を阻害すること(Haら、1987)、及びベンゾ［ａ］ピレンにより誘導されたマウス前胃の新生物形成を阻害すること(Chenら、2003)を報告している。 バター脂肪としてのバクセン酸及びｃ９，ｔ１１ ＣＬＡの給餌は、ラットにおける乳腺癌腫の発達を阻害したことが報告されている(Corlら、2003、Banniら、2001)。 ＣＬＡは血管新生を阻害し、このことは化学的予防薬としてのその有効性に貢献し得ることが報告されている(Masso-Welchら、2002)。

対照的に、別の研究は、規定食ＣＬＡは、単独で又は大豆分離タンパク質との組合せのいずれかで、ラットにおける前立腺腫瘍細胞のインビボにおける成長及び発達を阻害すること(Cohenら、2003)、並びに雄のスプラーグ・ダルウェイラットの結腸におけるアゾキシメタンが誘導した異常な腺窩巣の発達を阻害すること(Ealeyら、2001)に失敗したことを報告している。 更にラット肝癌の重量は、ＣＬＡ食を給餌されたラットにおいて有意に高いことが報告された(Yamasakiら、2001)。 疫学的研究は、ＣＬＡ含有食品群の摂取は、乳癌発生率に関係していないことを報告した(Voorripsら、2002)。 ヒトにおける乳脂肪消費の疫学的研究と同様、このＣＬＡ及び抗腫瘍活性の様々な研究の結果は矛盾している。

腫瘍は、全ての症例において化学療法に良好に反応するものではないことが、先に報告されている。 例えば、癌罹患患者について、化学療法の有効性は、癌型、治療に使用される薬物の性質及び投与量、それらの薬物が作用する機序、並びに投薬計画に応じて変動する。

本技術分野において、癌は、化学療法に対するそれらの感度が異なることはわかっており、完全な臨床治癒が達成される通常かつ頻繁な感受性（例えば、リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ホジキン病、中及び高悪性度非ホジキンリンパ腫、例えばびまん性大細胞型リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、絨毛癌、胎児性腫瘍、骨髄腫症、気管支の燕麦細胞癌、精巣癌、ユーイング肉腫、ウィルムス腫瘍、皮膚癌）から、非常に抵抗性（膀胱癌、食道癌、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎癌、膵癌、頭頚部癌、子宮頸癌、肝臓癌、燕麦細胞でない肺癌）までである。 直径が０．３ｃｍよりも大きいＥＬ−４腫瘍は、免疫療法及び抗血管新生療法に対し(Kanwarら、1999、及びSunら、2001)、並びに化学療法に対し(Kanwarら、WO 2006/054908)、完全に無反応となることが先に報告されている。

更に、放射線療法、手術、化学療法又は他の方法のいずれかによる癌の治療は、随伴症状又は障害を頻繁に引き起こすか又はこれらを増悪することがある。 治療中の癌患者は悪液質であることが多いが、化学療法は、絨毛萎縮が進行している腺窩内に、細胞アポトーシスに関連した小腸粘膜炎を引き起こし得る(Keefeら、2000)。

従って乳脂肪を、任意に１又は２以上の追加の治療剤と共に用い、腫瘍形成又は成長を阻害し、又は癌又は癌治療に関連した障害の症状又は重症度を軽減する改善された方法を提供すること、あるいは少なくとも有用な選択肢を公開する(the public)ことは望ましいであろう。

従って、本発明の一態様は、腫瘍形成を阻害し、腫瘍成長を阻害し、腫瘍転移を阻害し、又は対象における癌を治療又は予防する方法であって、有効量の乳脂肪又は乳脂肪類似物と、１又は２以上の治療剤、例えば１又は２以上の抗腫瘍剤を、それを必要とする対象へ個別に、同時に又は逐次的に投与することを含んでなる方法に関する。 好ましくは、この１又は２以上の抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法薬、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくは、この１又は２以上の治療剤は、ラクトフェリン（Ｌｆ）である。

別の本発明の態様は、対象の免疫系を刺激する方法であって、有効量の乳脂肪又は乳脂肪類似物を、それを必要とする対象へ投与することを含んでなる方法に関する。 一実施態様によれば、免疫系を刺激する方法は、乳脂肪及び１又は２以上の抗腫瘍剤を、対象へ個別に、同時に又は逐次的に投与することを含んでなる。 好ましくは、この１又は２以上の抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法薬、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくは、この１又は２以上の治療剤は、ラクトフェリンである。

一実施態様によれば、本投与は、対象の腫瘍内でＴｈ１及びＴｈ２サイトカインの産生を増大させる。 一実施態様によれば、本投与は、対象の腸内でＴｈ１及びＴｈ２サイトカインの産生を増大させる。 一実施態様によれば、本投与は、対象の全身循環中の、Ｔｈ１及びＴｈ２サイトカインレベルをを上昇させる。 一実施態様によれば、本投与は、対象における抗腫瘍免疫応答を増強する。

別の本発明の態様は、対象においてアポトーシスを誘導する方法であって、有効量の乳脂肪又は乳脂肪類似物のそれを必要とする対象への投与を含んでなる方法に関する。 一実施態様によれば、それを必要とする対象においてアポトーシスを誘導する方法は、乳脂肪及び少なくとも１種の抗腫瘍剤の、対象への個別、同時又は逐次投与を含み、好ましくはこの少なくとも１種の抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法薬、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリンである。 一実施態様によれば、アポトーシスは、腫瘍細胞のものである。

別の本発明の態様は、対象において血管新生を阻害する方法であって、有効量の乳脂肪又は乳脂肪類似物を、それを必要とする対象へ投与することを含んでなる方法に関する。 一実施態様によれば、対象において血管新生を阻害する方法は、乳脂肪及び少なくとも1種の抗腫瘍剤の、対象への個別、同時又は逐次投与を含み、好ましくはこの少なくとも1種の抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法薬、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリンである。 一実施態様によれば、血管新生は、腫瘍血管新生である。

別の本発明の態様は、低ヘモグロビン又は赤血球レベルに起因する貧血、悪液質、粘膜炎又は白血球減少症を治療又は予防し、又は、対象の白血球数、赤血球数、及び骨髄細胞数の１又は２以上を維持又は改善する方法であって、乳脂肪又は乳脂肪類似物の有効量を、それを必要とする対象へ投与することを含んでなる方法に関する。

別の本発明の態様は、対象の白血球数、赤血球数、又は骨髄細胞数の１又は２以上を維持又は改善する方法であって、好ましくは少なくとも１種の抗腫瘍剤の対象への個別、同時又は逐次投与を伴う、乳脂肪又は乳脂肪類似物の対象への投与を含んでなる方法に関する。 好ましくは、この少なくとも１種の抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法薬、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリンである。

別の本発明の態様は、対象における貧血を治療又は予防する方法であって、乳脂肪又は乳脂肪類似物の対象への投与を含んでなるとともに、好ましくは少なくとも１種の抗腫瘍剤の対象への個別、同時又は逐次投与を伴う方法に関する。 好ましくはこの少なくとも１種の抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法薬、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリンである。

別の本発明の態様は、対象における悪液質を治療又は予防する方法であって、乳脂肪又は乳脂肪類似物の対象への投与を含んでなるとともに、好ましくは少なくとも１種の抗腫瘍剤の対象への個別、同時又は逐次投与を伴う方法に関する。 好ましくはこの少なくとも１種の抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法薬、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリンである。

別の本発明の態様は、対象における粘膜炎を治療又は予防する方法であって、乳脂肪又は乳脂肪類似物の対象への投与を含んでなるとともに、好ましくは少なくとも１種の抗腫瘍剤の対象への個別、同時又は逐次投与を伴う方法に関する。 好ましくはこの少なくとも１種の抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法薬、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリンである。

別の本発明の態様は、対象における腫瘍形成を阻害し、腫瘍成長を阻害し、腫瘍転移を阻害し、又は癌を治療又は予防する方法であって、リン脂質画分、硬質乳脂肪画分、軟質乳脂肪画分、スフィンゴ脂質画分、乳脂肪球膜画分、リン脂質画分、又は複合脂質画分等の乳脂肪画分、又はそれらの２種以上の組合せの対象への投与を含んでなるとともに、任意に少なくとも１種の追加の治療剤を伴う方法に関する。 好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、抗腫瘍食品因子、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリン（Ｌｆ）である。

別の本発明の態様は、癌療法に対する対象の反応性を増大させる方法であって、乳脂肪又は乳脂肪類似物の対象への投与を含んでなるととも、好ましくは少なくとも１種の抗腫瘍剤の対象への個別、同時又は逐次投与を伴う方法に関する。 好ましくはこの少なくとも１種の抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法薬、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリンである。

別の本発明の態様は、癌療法に対する対象の腫瘍の感受性を増大させる方法であって、乳脂肪又は乳脂肪類似物の対象への投与を含んでなるとともに、好ましくは少なくとも１種の抗腫瘍剤の対象への個別、同時又は逐次投与を伴う方法に関する。 好ましくはこの少なくとも１種の抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法薬、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリンである。

別の本発明の態様は、癌療法を受けている対象の回復を速める方法であって、乳脂肪又は乳脂肪類似物の対象への投与を含んでなるとともに、好ましくは少なくとも１種の抗腫瘍剤の対象への個別、同時又は逐次投与を伴う方法に関し、好ましくはこの少なくとも１種の抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法薬、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリンである。

別の本発明の態様は、本明細書に記載された目的のための組成物の製造における乳脂肪の使用に関し、好ましくは本組成物は、少なくとも１種の追加の治療剤を含有し、又はこれと個別、同時又は逐次投与され、好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、抗腫瘍剤であり、好ましくはこの抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬から選択され、より好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリンである。

別の本発明の態様は、本明細書に記載された目的のための組成物の製造における乳脂肪の使用であって、任意により少なくとも１種の追加の治療剤との使用に関する。

別の本発明の態様は、本明細書に説明された目的の組成物の製造における、乳脂肪及び少なくとも１種の追加の治療剤の使用に関し、ここで本組成物は、乳脂肪及び少なくとも１種の追加の治療剤の個別、同時又は逐次投与を提供するように製剤される。

別の本発明の態様は、本明細書に説明された目的の組成物の製造における、乳脂肪及び少なくとも１種の追加の治療剤の使用に関し、ここでこの乳脂肪は、追加の治療剤と個別、同時又は逐次投与される。

別の本発明の態様は、本明細書に説明された目的の組成物の製造における、乳脂肪及び少なくとも１種の追加の治療剤の使用に関し、ここでこの乳脂肪は、追加の治療剤と個別、同時又は逐次投与されるように製剤される。

別の本発明の態様は、乳脂肪と、１以上、２以上又は３以上の追加の治療剤とを含んでなり、又はこれらから本質的になり、又はこれらからなる組成物に関する。

別の本発明の態様は、本明細書に記載された目的のための同時、個別又は逐次使用のための組合調製品であって、乳脂肪と、１以上、２以上又は３以上の追加の治療剤とを含んでなり、又はこれらから本質的になり、又はこれらからなる製品に関する。

下記実施態様は、前述の態様のいずれかに関連し得る。

好ましい実施態様によれば、少なくとも１種の治療剤は、抗腫瘍剤である。 好ましい実施態様によれば、抗腫瘍剤は、ラクトフェリンである。

一実施態様によれば、ラクトフェリンは、ラクトフェリンポリペプチド、機能的ラクトフェリン変種、機能的ラクトフェリン断片、金属イオンラクトフェリン、金属イオンラクトフェリン機能変種、及び金属イオンラクトフェリン機能断片、又はそれらの２種以上の混合物からなる群から選択される。 一実施態様によれば、ラクトフェリンは、アポラクトフェリンである。 別の実施態様によれば、ラクトフェリンは、天然に鉄で飽和されている。 別の実施態様によれば、ラクトフェリンは、実質的に完全に鉄で飽和されている。

本明細書に説明された目的は、腫瘍形成の阻害、腫瘍成長の阻害、腫瘍転移の阻害、又はそれを必要とする対象における癌の治療又は予防、それを必要とする対象における免疫系の刺激、それを必要とする対象の腫瘍内のＴｈ１及びＴｈ２サイトカイン産生の増加、それを必要とする対象の腸内のＴｈ１及びＴｈ２サイトカイン産生の増加、それを必要とする対象の全身循環内のＴｈ１及びＴｈ２サイトカインのレベルの上昇、それを必要とする対象における抗腫瘍免疫応答の増強、それを必要とする対象におけるアポトーシスの誘導、それを必要とする対象における腫瘍細胞のアポトーシスの誘導、それを必要とする対象における血管新生の阻害、それを必要とする対象における腫瘍血管新生の阻害、それを必要とする対象における白血球数、赤血球数、又は骨髄細胞数の１又は２以上の維持又は改善、それを必要とする対象における貧血の治療又は予防、それを必要とする対象における悪液質の治療又は予防、それを必要とする対象における粘膜炎の治療又は予防、癌療法に対する対象の反応性の増大、癌療法に対する対象の腫瘍感受性の増大、並びに癌療法を受けている対象の回復の迅速化からなる群から選択される。

一実施態様によれば、少なくとも１種の治療剤又は抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、又は粘膜炎治療薬からなる群から選択される。

一実施態様によれば、抗腫瘍食品因子は、ビタミンＤ及びビタミンＤ類似物（以下に言及されるものを含むが、これらに限定されるものではない）、大豆タンパク質、１又は２以上の大豆成分（以下に言及されるものを含む）、ポリフェノール、リコピン、フスマ、フラボノイド、イノシトール、レスベラトロル、プロポリス、マッシュルーム抽出物、アントシアニン、アーモンド、朝鮮人参、カゼイン加水分解物、及びそれらの組合せから選択される。

一実施態様によれば、抗腫瘍食品因子は、抗腫瘍食品及び抗腫瘍食品成分からなる群から選択される。 好ましくは、１又は２以上、２種以上又は３種以上の抗腫瘍食品因子が投与される。

一実施態様によれば、抗腫瘍食品は、本明細書に説明されたものを含む、抗癌特性を有する機能性食品又はそれらの誘導体であることができる。

一実施態様によれば、抗腫瘍食品成分は、本明細書に説明されたものから選択することができる。

一実施態様によれば、本発明の方法は、乳脂肪及び少なくとも１種の追加の治療剤から本質的になるか、又はからなる組成物の投与を含み、好ましくはこの少なくとも１種の追加の治療剤は、ラクトフェリン、機能的ラクトフェリン変種、機能的ラクトフェリン断片、金属イオンラクトフェリン、金属イオンラクトフェリン機能変種、金属イオンラクトフェリン機能断片、又はそれらの混合物から選択される。 好ましくは本組成物は、１又は２以上、２種以上又は３種以上の抗腫瘍食品因子から本質的になるか、又はからなる。

本発明の使用の一実施態様によれば、組成物は、対象における腫瘍形成の阻害、対象における腫瘍成長の阻害、対象における腫瘍転移の阻害、対象における癌の治療又は予防、対象における免疫系の刺激、対象における腫瘍内のＴｈ１及びＴｈ２サイトカインの産生の増加、対象の腸内のＴｈ１及びＴｈ２サイトカインの産生の増加、対象の全身循環内のＴｈ１及びＴｈ２サイトカインのレベルの上昇、対象における抗腫瘍免疫応答の増強、対象におけるアポトーシスの誘導、対象における腫瘍細胞のアポトーシスの誘導、対象における血管新生の阻害、対象における腫瘍血管新生の阻害、対象の白血球数、赤血球数、又は骨髄細胞数の１又は２以上の維持又は改善、それを必要とする対象における貧血の治療又は予防、それを必要とする対象における悪液質の治療又は予防、それを必要とする対象における粘膜炎の治療又は予防、それを必要とする対象における白血球減少症の治療又は予防、癌療法に対する対象の反応性の増大、癌療法に対する対象の腫瘍の反応性の増大、又は癌療法を受けている対象の回復の迅速化のために製造される。

一実施態様によれば、投与は、経口、局所的又は非経口的投与である。

一実施態様によれば、対象は、癌に罹患しているか又は易罹患性であり；治療を受けたが再発したか又は再発し易く；化学療法薬、放射線療法薬、抗血管新生薬又は免疫療法薬による療法に対して難治性の腫瘍を有し；又は、以前に手術を受け、手術に失敗し、又は化学療法薬、放射線療法薬、抗血管新生薬又は免疫療法薬による療法に失敗した対象である。

一実施態様によれば、乳脂肪は、酪農脂質(dairy lipid)、酪農脂質画分、酪農脂質加水分解物、及び酪農脂質画分加水分解物から選択される。 好ましい乳脂肪は、酪農品脂肪、特に牛乳脂肪である。

その他の実施態様によれば、乳脂肪は、任意の哺乳類の乳脂肪である。 例としては、これらに限定されるものではないが、ヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、水牛、ラクダ、ヤク、ウマ、ロバ、ラマ、ウシ又はヒトの乳脂肪が挙げられる。

一実施態様によれば、ラクトフェリンは、任意の哺乳類のラクトフェリンである。 例としては、これらに限定されるものではないが、ヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、水牛、ラクダ、ヤク、ウマ、ロバ、ラマ又はヒトのラクトフェリンを挙げられる。 好ましくは、ラクトフェリンは、ウシラクトフェリンである。

一実施態様によれば、ラクトフェリンは、アポラクトフェリンである。 一実施態様によれば、ラクトフェリン、機能的ラクトフェリン変種又は機能的ラクトフェリン断片は、金属イオンを含まない。 一実施態様によれば、ラクトフェリン又はそれらの機能変種又は機能断片は、化学量論を基に少なくとも約５、１０、又は２０％金属イオンで飽和されている。

一実施態様によれば、前記金属イオンは、アルミニウム、ビスマス、銅、クロム、コバルト、金、鉄、マンガン、オスミウム、白金、ルテニウム、及び亜鉛のイオン、又はそれらの２種以上の任意の組合せ、又はラクトフェリン金属イオン結合ポケットに特異的に配位するその他のイオンからなる群から選択される。 好ましくは、金属イオンは鉄イオンである。

一実施態様によれば、ラクトフェリン、機能的ラクトフェリン変種又は機能的ラクトフェリン断片は、非特異的イオン結合に関与している。 好ましくは、ラクトフェリン、機能的ラクトフェリン変種又は機能的ラクトフェリン断片に非特異的に結合することができるイオンは、アルミニウム、カルシウム、ビスマス、銅、クロム、コバルト、金、鉄、マンガン、オスミウム、白金、ルテニウム、セレン、及び亜鉛のイオン、又はそれらの２種以上の任意の組合せから選択される。 このイオンは、ラクトフェリン、機能的ラクトフェリン変種又は機能的ラクトフェリン断片に非特異的に結合する任意のイオン又はイオンの混合物であってよく、好ましくはカルシウムイオン及びセレンイオンである。

一実施態様によれば、金属イオンラクトフェリン又はそれらの金属イオン機能変種又は機能断片は、化学量論を基に少なくとも約２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５又は１００％金属イオンで飽和されている。

一実施態様によれば、金属イオンラクトフェリン又はそれらの金属イオン機能変種又は機能断片は、化学量論を基に少なくとも約１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５又は２００％金属イオンで飽和されている。

一実施態様によれば、本明細書において有用な組成物は、乳脂肪又は乳脂肪類似物を約２ｇ〜約２１０ｇ及び１又は２以上の抗腫瘍剤を約０．１ｇ〜約２１０ｇ含有している。 一実施態様によれば、本組成物は、乳脂肪又は乳脂肪類似物を約２、４、６、８、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５又は２１０ｇ含有し、かつ有用な範囲は、これらの値のいずれかの間で選択することができる。 一実施態様によれば、本組成物は、１又は２以上の抗腫瘍剤を約２、４、６、８、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５又は２１０ｇ含有し、かつ有用な範囲は、これらの値のいずれかの間で選択することができる。 好ましくは、１又は２以上の抗腫瘍剤は、ラクトフェリン、アポラクトフェリン、ラクトフェリンポリペプチド、機能的ラクトフェリン変種、機能的ラクトフェリン断片、金属イオンラクトフェリン、天然の鉄飽和型ラクトフェリン、実質的に完全な鉄飽和型ラクトフェリン、金属イオンラクトフェリン機能変種、金属イオンラクトフェリン機能断片、又はそれらの混合物を含んでなる群から選択される。 様々な実施態様によれば、本組成物は、以下を含有する：
（ａ）乳脂肪又は乳脂肪類似物約２ｇ〜約２１０ｇ及び１又は２以上の抗腫瘍剤約０．７ｇ〜約７０ｇ；
（ｂ）乳脂肪又は乳脂肪類似物約３５ｇ〜約２１０ｇ及び１又は２以上の抗腫瘍剤約０．３５ｇ〜約２１０ｇ；
（ｃ）乳脂肪又は乳脂肪類似物約１０ｇ〜約２００ｇ及び１又は２以上の抗腫瘍剤約２．５ｇ〜約７０ｇ；
（ｄ）乳脂肪又は乳脂肪類似物約１０ｇ〜約２００ｇ及び１又は２以上の抗腫瘍剤約０．２５ｇ〜約５ｇ；
（ｅ）乳脂肪又は乳脂肪類似物約１５ｇ〜約３０ｇ及び１又は２以上の抗腫瘍剤約１ｇ〜約６ｇ；又は （ｆ）乳脂肪又は乳脂肪類似物約３ｇ〜約８ｇ及び１又は２以上の抗腫瘍剤約０．１ｇ〜約１ｇ。

一実施態様によれば、本方法は、乳脂肪の、金属イオンラクトフェリン及び少なくとも１種のそれらの金属イオン機能変種又は機能断片との混合物の投与を含む。

一実施態様によれば、乳脂肪及び追加の治療剤、好ましくはラクトフェリンは、いずれか単独の作用よりも大きいか、又はいずれか単独の相加作用よりも大きい、相乗的治療作用を提供する。 例えば、腫瘍形成又は成長の阻害、腫瘍退縮、細胞溶解作用、免疫増強、Ｔｈ１及びＴｈ２サイトカイン産生、白血球数、赤血球数、又は骨髄細胞数の維持又は改善、貧血、悪液質、粘膜炎の治療又は予防、又は本治療法に対する対象又は腫瘍の反応性に対し、より大きい作用がある。 一実施態様によれば、ラクトフェリン及び抗腫瘍食品因子は、適宜、同時投与又は逐次投与される癌療法の実施が、投与量又は投与期間を減少又は増大されることを可能にする。

一実施態様によれば、本発明の方法は、少なくとも１種の癌療法の個別、同時又は逐次投与を更に含む。

一実施態様によれば、癌療法は、抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法である。

一実施態様によれば、乳脂肪は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤、及び少なくとも１種の抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法と共に、個別、同時又は逐次投与される。

一実施態様によれば、本抗腫瘍療法は、非限定的に、手術、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、生物学的療法／免疫療法、細胞療法、抗血管新生療法、細胞毒性療法、ワクチン、核酸ベースのワクチン（例えば、ｐ１８５ワクチンを含むＤＮＡワクチンなどの、癌抗原を発現している核酸）、ウイルスベースの療法（例えば、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス）、遺伝子療法、小型分子阻害剤療法、ヌクレオチドベースの療法（例えば、ＲＮＡｉ、アンチセンス、リボザイムなど）、抗体ベースの療法、酸素及びオゾン治療、塞栓形成、及び／又は化学塞栓形成療法などの療法から選択される。 一実施態様によれば、抗腫瘍剤は、１又は２以上の血管新生阻害剤を含む。

一実施態様によれば、抗腫瘍剤は、化学療法薬又は免疫療法薬である。 一実施態様によれば、抗腫瘍剤の少なくとも１種は、化学療法薬である。 好ましくは化学療法薬は、チューブリン破壊因子、ＤＮＡインターカレート剤、及びそれらの混合物から選択される。 一実施態様によれば、チューブリン破壊因子は、参照により本明細書に組入れられている、公開された国際特許出願WO 2006/054908に列記されたものを含むが、これらに限定されるものではない。 一実施態様によれば、ＤＮＡインターカレート剤は、参照により本明細書に組入れられている、公開された国際特許出願WO 2006/054908に列記されたものを含むが、これらに限定されるものではない。 一実施態様によれば、化学療法薬は、パクリタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、フルオロウラシル、シクロホスファミド又はメトトレキセートである。

一実施態様によれば、抗腫瘍剤は、免疫療法薬である。 好ましくは、免疫療法薬は、Ｔ細胞共刺激因子Ｂ７−１、Ｔ細胞共刺激因子、又は機能的関連分子、例えば可溶性Ｂ７−Ｉｇキメラをコードしている発現プラスミドである。 一実施態様によれば、抗腫瘍剤は、免疫細胞療法を含む。 好ましくは本療法は、樹状細胞療法である。

一実施態様によれば、化学療法薬は、パクリタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、フルオロウラシル、シクロホスファミド又はメトトレキセートである。

一実施態様によれば、抗腫瘍剤は、免疫療法薬である。 好ましくは、免疫療法薬は、Ｔ細胞共刺激因子Ｂ７−１、Ｔ細胞共刺激因子、又は機能的関連分子、例えば可溶性Ｂ７−Ｉｇキメラをコードしている発現プラスミドである。

一実施態様によれば、抗腫瘍剤は、免疫細胞療法を含む。 好ましくは本療法は、樹状細胞療法である。

一実施態様によれば、抗腫瘍剤は、１又は２以上の血管新生阻害剤を含む。

一実施態様によれば、少なくとも１種の抗腫瘍剤は、経口又は非経口的に、好ましくは静脈内、腹腔内又は腫瘍内注射により投与される。

一実施態様によれば、乳脂肪は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の実施前に、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０週間毎日投与される。

一実施態様によれば、乳脂肪は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の実施前に、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１日間、又は少なくとも約１、２、３、４、５、６、７又は８週間、又は少なくとも約１、２、３、４、５又は６ヶ月間投与される。

一実施態様によれば、乳脂肪は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の実施前に、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１日間、又は少なくとも約１、２、３、４、５、６、７又は８週間、又は少なくとも約１、２、３、４、５又は６ヶ月間投与される。

一実施態様によれば、乳脂肪は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、癌療法を伴うか又は伴わずに、１日にわたり連続して経口的に又は非経口点滴により又は投与経路の組合せを含み、少なくとも１日１回投与される。

一実施態様によれば、腫瘍又は癌は、固形腫瘍、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、リンパ系の造血器腫瘍、骨髄細胞系の造血器腫瘍、結腸癌、乳癌、メラノーマ、皮膚癌又は肺癌である。

一実施態様によれば、腫瘍又は癌は、急性白血病、急性リンパ球性白血病、急性顆粒球性白血病、例えば骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性白血病、赤白血病などの急性骨髄性白血病、及び骨髄異形成症候群、例えば非限定的に、慢性骨髄性白血病、慢性顆粒球性白血病、慢性リンパ球性白血病などの慢性白血病、及びヘアリーセル白血病などの白血病であるが、これらに限定されるものではない。

一実施態様によれば、腫瘍又は癌は、非限定的に、ホジキン病及び非ホジキン病などのリンパ腫である。

一実施態様によれば、腫瘍又は癌は、非限定的に、急性及び慢性骨髄性白血病、くすぶり型多発性骨髄腫、非分泌性骨髄腫及び骨硬化性骨髄腫などの、骨髄細胞系の造血器腫瘍を含む。

一実施態様によれば、腫瘍又は癌は、白血病、急性及び慢性リンパ球性白血病、急性及び慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫を含む、リンパ系の造血器腫瘍を含む。

一実施態様によれば、腫瘍又は癌は、Ｂリンパ球系列の造血器腫瘍を含む。

一実施態様によれば、腫瘍又は癌は、Ｔリンパ球系列の造血器腫瘍を含む。

一実施態様によれば、腫瘍は、大型腫瘍である。 一実施態様によれば、腫瘍又は癌は、以下を含む：
（ａ）直径が少なくとも約０．３、０．４又は０．５ｃｍである腫瘍、又は （ｂ）少なくとも１種の免疫療法薬、抗血管新生薬又は化学療法薬による療法に対し難治性である腫瘍。

一実施態様によれば、対象の白血球数、赤血球数、又は骨髄細胞数の１又は２以上が、維持されるか又は改善される。

一実施態様によれば、腫瘍は、サイズが縮小されるか、又は実質的に根絶される。

一実施態様によれば、ラクトフェリンは、投与される場合には、可消化タンパク質、好ましくはカゼイン又は他のタンパク質、例えば他の可食性タンパク質を含有する剤形において投与される。

一実施態様によれば、本組成物は、食品、飲料品、食品添加物、飲料品添加物、ダイエタリーサプリメント、栄養製品、医療食、栄養補助食品、薬剤又は医薬品である。 好ましくは、本組成物は、経口又は局所投与のために製剤される。 好ましくは、本組成物は、経口又は非経口投与のために製剤される。 一実施態様によれば、本組成物は、乳脂肪及び乳タンパク質画分を含有する。

一実施態様によれば、本組成物は、新鮮又は還元全乳、還元又は新鮮脱脂乳、再構成された全乳粉又は脱脂乳粉、脱脂乳濃縮物、脱脂粉乳、脱脂乳残留物(retentate)、濃縮乳、バターミルク、限外濾過乳残留物、乳タンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、乳分離タンパク質（ＭＰＩ）、カルシウム枯渇した乳タンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、低脂肪乳、低脂肪乳タンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、初乳、初乳画分、初乳タンパク質濃縮物（ＣＰＣ）、初乳ホエー、初乳由来の免疫グロブリン画分、ホエー、ホエー分離タンパク質（ＷＰＩ）、ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）、スイートホエー、乳酸ホエー、鉱酸ホエー、又は再構成された(reconstituted)ホエー粉末から選択された乳組成物を含む。

一実施態様によれば、乳脂肪は、少なくとも１種の追加の治療剤との同時投与のために製剤される。 一実施態様によれば、乳脂肪は、少なくとも１種の追加因子との逐次投与のために製剤される。

一実施態様によれば、本発明の組成物又は本発明の方法において使用される組成物がラクトフェリンを含有する場合、この組成物は、その集団の利用可能な金属イオン結合ポケットの少なくとも約２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５又は１００％は、金属イオン、好ましくは鉄イオンに結合されている、ラクトフェリンポリペプチド又はそれらの機能変種又は断片の集団を提供する。

一実施態様によれば、本発明の組成物又は本発明の方法において使用される組成物がラクトフェリンを含有する場合、この組成物は、その集団内の利用可能な金属イオン結合ポケットの約１００％は、金属イオン、好ましくは鉄イオンに結合されている、ラクトフェリンポリペプチド又はそれらの機能変種又は断片の集団を提供し、並びに追加の金属イオンが、非特異的結合部位でラクトフェリン分子に結合されており、その結果このラクトフェリンは、化学量論を基に少なくとも約１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５又は２００％金属イオンで飽和されている。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、以下を含有している：
（ａ）パルミチン酸約２３重量％〜約３２重量％；
（ｂ）オレイン酸約１５重量％〜約２２重量％；
（ｃ）ステアリン酸約１０重量％〜約１５重量％；
（ｄ）ミリスチン酸約９重量％〜約１２重量％；
（ｅ）酪酸約３重量％〜約５重量％；
（ｆ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）のいずれか２つ；
（ｇ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）のいずれか３つ；
（ｈ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）のいずれか４つ；又は （ｉ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）の各々。

本明細書に開示された数値範囲（例えば１〜１０）の記載は、その範囲内の全ての有理数（例えば１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９及び１０等）の記載、また、その範囲内の有理数の任意の範囲（例えば２〜８、１．５〜５．５及び３．１〜４．７等）の記載をも包含する意図である。 従って、本明細書に明示された全ての範囲に含まれる全ての部分範囲も明示されている。 これらは具体的に意図されるものの単なる例示であり、列記された最低値と最高値との間の数値の全ての可能な組合せが、同様に本出願に明示されていると解すべきである。

本明細書において特許明細書や他の外部文書、又は他の情報源に言及する場合、これは通常、本発明の特徴について議論するための背景を提供することを目的とする。 特に断らない限り、かかる外部文書等に言及したからと言って、かかる文書又は情報源が、いかなる管轄下でも、当該技術分野の先行技術であるか、又は技術常識を形成することを承認するものと解釈すべきではない。

概略的に言えば、本発明は、本明細書において開示又は示唆される部分、要素及び特徴の各々、或いはそれらのうち任意の２種以上又は全ての組合からなると解することもできる。 本明細書で言及する具体的な完全体が、本発明の属する技術分野において既知の同等物を有する場合、かかる既知の同等物は、個々に言及したのと同様に本明細書に組込れていると解すべきである。

図１は、乳脂肪がリンパ腫の成長を阻害し、かつ腫瘍発生を阻害することを示すグラフである。 マウスには、ＡＩＮ９３Ｇ対照食又はある割合の脂肪を乳脂肪又は強化乳脂肪のいずれかで置換した同一食を給餌した。 これらの食餌で２週間経過後、ＥＬ−４細胞２×１０

⁵個を、マウス側腹部へ注射した。 直交するふたつの直径（ｃｍ）により測定した腫瘍サイズを、９１日目まで、又は腫瘍が直径１ｃｍに達するまでモニタリングした。 各ポイントは、６匹のマウス又は示されたマウス数のいずれかに関する、平均腫瘍サイズと９５％信頼区間を表している。

図２は、乳脂肪が、腫瘍を根絶するためのＢ７−１免疫遺伝子治療を増強することを示すグラフである。 マウスには、ＡＩＮ９３Ｇ対照食、又はある割合の脂肪を乳脂肪又は強化乳脂肪のいずれかで置換した同一食を給餌した。 これらの食餌で２週間経過後、ＥＬ−４細胞２×１０

⁵個を、マウス側腹部へ注射した。 直交するふたつの直径（ｃｍ）により測定した腫瘍サイズを、モニタリングした。 腫瘍が直径〜０．４ｃｍに到達した時点で、これらの腫瘍に、Ｂ７−１発現プラスミド６０μｇを含有するＤＮＡ−リポソーム複合体を注射した。 本プラスミドの投与のタイミングは、矢印で示している。 直交するふたつの直径（ｃｍ）により測定した腫瘍サイズを、９１日目まで、又は腫瘍が直径１ｃｍに達するまでモニタリングした。 各ポイントは、６匹のマウス又は示されたマウス数のいずれかに関する、平均腫瘍サイズと９５％信頼区間を表している。

図３は、乳脂肪が、腫瘍発生を完全に防止するよう、鉄飽和型ラクトフェリン（Ｌｆ＋）と相乗作用することを示す４つのグラフである。 （Ａ）腫瘍発生に対する作用。 マウスには、ＡＩＮ９３Ｇ対照食又はある割合の脂肪及びタンパク質をＬｆ＋、乳脂肪、又はＬｆ＋と乳脂肪の組合せのいずれかで置換した同一食を給餌した。 ０日目は、マウスをそれらの食餌に配置した日をいう。 これらの食餌で２週間経過後、ＥＬ−４細胞２×１０

⁵個を、マウス側腹部へ注射した。 直交するふたつの直径（ｃｍ）により測定した腫瘍サイズを、５６日目までモニタリングした。 各ポイントは、６匹のマウス又は示されたマウス数のいずれかに関する、平均腫瘍サイズと９５％信頼区間を表している。

（Ｂ）抗腫瘍細胞溶解活性に対する作用。 脾細胞を、（Ａ）のマウスから５６日目に採取し、ＥＬ−４標的細胞に対するそれらの細胞溶解活性について試験した。 細胞傷害率（％）を、様々なエフェクター−対−標的細胞比（Ｅ：Ｔ比）に対してプロットした。 各ポイントは、６匹のマウス又は示されたマウス数から得られた平均細胞傷害率（％）を表している。 エラーバーは、９５％信頼区間を表す。 （Ｃ）腫瘍細胞アポトーシスに対する作用。 切片を、（Ａ）の腫瘍から５６日目に調製し、かつ末端デオキシヌクレオチジル転移酵素仲介性デオキシウリジン三リン酸−ジゴキシゲニンニック末端標識（ＴＵＮＥＬ）法により、及び同じくアネキシン−Ｖ−フルオレセイン(fluos)法により染色した。 腫瘍切片のＴＵＮＥＬ又はアネキシン−Ｖ−フルオレセイン染色により検出されたアポトーシス細胞の数を、×４０倍の観察で１０の無作為に選択された視野について決定した。 アポトーシス指数（Ａ／Ｉ）は、アポトーシス（ＴＵＮＥＬ又はアネキシン−Ｖ−フルオレセイン陽性）細胞の数×（１００／細胞総数）である。 バーは、９５％信頼区間を示す。 （Ｄ）腫瘍血管新生に対する作用。 切片は、（Ａ）のマウスから５６日目に調製し、抗ＣＤ３１ ｍＡｂ ＭＥＣ１３．３又は抗ＣＤ１０５ ｍＡｂのいずれかで染色し、血管を可視化するか、あるいは、血流を可視化するために、組織採取の１分前に、ＤｉＯ７を尾静脈に注射した。 染色した血管は、６つの盲検的に選択したランダム視野において、６匹のマウスからカウントした。

図４は、α脂質粉末(Phospholac 600(商標))及びスフィンゴミエリンは、腫瘍の成長を阻害することを示す、６つのグラフである。 マウスには、ＡＩＮ９３Ｇ対照食（Ａ）、又はある割合の脂肪又はタンパク質を、Ｌｆ＋（Ｂ）、Phospholac 600(商標)（Ｃ）、スフィンゴミエリン（Ｄ）のいずれかで置換した同一食を給餌した。 直交するふたつの直径（ｃｍ）により測定した腫瘍サイズを、各個別のマウスについて、時間に対してプロットしている。 ｘ−軸上の時間スケールは、線形ではない。

図４は、α脂質粉末(Phospholac 600(商標))及びスフィンゴミエリンは、腫瘍の成長を阻害することを示す、６つのグラフである。 マウスには、ある割合の脂肪又はタンパク質を、Ｌｆ＋とPhospholac 600(商標)の組合せ（Ｅ）、又はＬｆ＋とスフィンゴミエリンの組合せ（Ｆ）のいずれかで置換した同一食を給餌した。 直交するふたつの直径（ｃｍ）により測定した腫瘍サイズを、各個別のマウスについて、時間に対してプロットしている。 ｘ−軸上の時間スケールは、線形ではない。

図５は、乳脂肪は、原発性乳癌腫瘍の成長を抑制することを示すグラフである。 Ｂａｌｂ／ｃマウスを、乳脂肪食又は対応する対照食に配置した。 ２週間後、４Ｔ１腫瘍細胞２×１０

⁴個のマウスの右側腹部への皮下注射により、腫瘍が確立された。 腫瘍が直径０．５ｃｍに達した時点で、パクリタキセルを腹腔内投与した。 マウスは、腫瘍成長についてモニタリングし、腫瘍サイズを３日毎に測定した。 ＊対照食を給餌したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。 ＃対照食を給餌しパクリタキセルで処置したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。

図６は、乳脂肪は、肺に転移する乳癌腫瘍の成長を抑制し、パクリタキセルの作用を増強することを示すグラフである。 図５のマウスを、３５日目に安楽死させ、それらの肺を摘出した。 対照食、対照食とパクリタキセル処置、乳脂肪食、又は乳脂肪食とパクリタキセル処置のいずれかを給餌したマウスからの肺の表面上の転移性腫瘍の数をカウントし、かつ平均数±ＳＥＭとして表した。 ＊対照食を給餌したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。 ＃対照食を給餌しパクリタキセルで処置したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。

図７は、乳脂肪は、肝臓に転移する乳癌腫瘍の成長を抑制し、パクリタキセルの作用を増強することを示すグラフである。 図５のマウスを、３５日目に安楽死させ、それらの肝臓を摘出し、切片とし、ヘマトキシリン／エオシンで染色した。 対照食、対照食とパクリタキセル処置、乳脂肪食、又は乳脂肪食とパクリタキセル処置のいずれかを給餌したマウスからの肝臓内側の転移性腫瘍の数を、カウントし、かつ平均数±ＳＥＭとして表した。 ＊対照食を給餌したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。 ＃対照食を給餌しパクリタキセルで処置したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。

図８は、乳脂肪は、腫瘍血管新生を阻害することを示す２つのグラフである。 図５のマウスから４Ｔ１腫瘍を摘出し、切片とし、抗ＣＤ３１ ｍＡｂにより染色し、血管内皮細胞を同定した。 抗ＣＤ３１ ｍＡｂ染色血管を、盲検的に選択したランダム視野でカウントし、平均血管密度（Ａ）、又はアレイポイントから最も近いＣＤ３１ ｍＡｂ標識血管の距離の中央値（Ｂ）を記録した。 エラーバーは、±ＳＥＭを表す。 ＊対照食を給餌したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。 ＃対照食を給餌しパクリタキセルで処置したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。

図９は、乳脂肪は、化学療法が誘導した腸管損傷に対し保護することを示す２つのグラフである。 図５のマウスを、３５日目に安楽死させ、それらの空腸を摘出し、切片とし、ヘマトキシリン／エオシンで染色した。 （Ａ）空腸絨毛の長さの平均（±ＳＥＭ）。 （Ｂ）γ−ＧＧＴ活性の平均（±ＳＥＭ）。 ＊対照食を給餌したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。 ＃対照食を給餌しパクリタキセルで処置したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。

図１０は、乳脂肪は、腸管細胞の化学療法が誘導したアポトーシスを防止することを示すグラフである。 図９のように空腸を、ＴＵＮＥＬ法により染色した。 アポトーシス体を、１０のランダムに選択した腺窩からカウントし、１腺窩あたりのアポトーシス体（平均±ＳＥＭ）として表した。 ＊対照食を給餌したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。 ＃対照食を給餌しパクリタキセルで処置したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。

図１１は、実施例１４に説明されたように、乳脂肪は、化学療法に起因した体重減少を阻害することを示す３つのグラフである。 （Ａ）食餌中の乳脂肪は、健常マウスにおいて体重を有意に増加しない。 マウスは、ＡＩＮ９３Ｇ対照食、又はある割合の脂肪を７０％、２５％、又は５％乳脂肪のいずれかで置換した同一食を、化学療法前に４週間給餌した。 この４週間の最後に、マウスの平均体重を記録した（実際の数字は、バーの上に示した）。 （Ｂ、Ｃ）食餌中の乳脂肪は、化学療法に起因した体重減少を防止し、体重増加を加速する。 前記食餌で４週間経過後、（Ａ）のマウスに、シクロホスファミド３００ｍｇ／ｋｇを注射した。 体重の変化率（％）を、４日後（Ｂ）及び１２日後（Ｃ）に記録し、最初の体重と比較した。 対照食と比較し、＊＊＊Ｐ＜０．００１及び＊＊Ｐ＜０．０１。

図１２は、実施例１５に説明されたように、高投与量の乳脂肪は、化学療法に起因した末梢ＷＢＣの喪失を阻害することを示すグラフである。 末梢ＷＢＣカウントは、図１１のマウスについて、シクロホスファミドの注射日、並びに４、８及び１２日後に、記録した。

図１３は、実施例１５に説明されたように、乳脂肪は、化学療法に起因した脾細胞充実性の喪失を阻害し、かつ脾細胞充実性の再生を加速させることを示すふたつのグラフである。 （Ａ）乳脂肪は、脾細胞充実性の喪失を防止する。 乳脂肪は、化学療法前に４週間マウスに給餌した場合、脾細胞充実性に対し作用を有さなかった。 対照食と比べ、脾細胞充実性喪失の有意な阻害は、３種全ての乳脂肪食により化学療法後４日目に、７０％及び２５％乳脂肪食により８日目に、並びに７０％乳脂肪食により１２日目に達成された。 （Ｂ）乳脂肪は、脾臓コロニー形成単位の形成を刺激する。 対照食と比べ、脾臓コロニー形成単位の形成の有意な刺激は、３種全ての乳脂肪食により化学療法後８日目に達成されたのに対し、１２日目までに、乳脂肪食により形成された前駆細胞は最早必要でないので、この状況は逆転した。 ＊対照食を給餌したマウスに対する有意差（Ｐ＜０．０５）。

図１４は、実施例１６に説明されたように、乳脂肪食は、貧血の局面を軽減することを示す３つのグラフである。 心臓試料中のＲＢＣカウント、ＨＣＴレベル、及びヘモグロビンレベルを、図１１のマウスについて、シクロホスファミドの注射日、並びに４、８及び１２日後に記録した。 （Ａ）乳脂肪食は、ＲＢＣカウントを増加したが、この結果は有意ではない。 （Ｂ）乳脂肪食は、ＨＣＴレベル（ＲＢＣ量）を増加した。 ふたつの乳脂肪最高投与量は、ＨＣＴレベルを８及び１２日目に有意に増加した。 （Ｃ）乳脂肪食は、ヘモグロビンレベルを増加した。 ふたつの乳脂肪最高投与量は、ヘモグロビンレベルを１２日目に有意に増加し、２５％乳脂肪食も、ヘモグロビンレベルを８日目に増加した。

図１５は、実施例１７に説明されたように、乳脂肪食は、小腸への損傷を防ぐことを示すグラフである。 空腸の絨毛の長さを、図１１のマウスについて、シクロホスファミドの注射日、並びに４、８及び１２日後に記録した。

図１６は、小腸に対するシクロホスファミドが媒介した損傷に続く、小腸絨毛の回復を示すグラフである。 マウスには、４種の食餌（対照食、並びに０．０２５％Ｌｆ＋、乳脂肪、及び０．０２５％Ｌｆ＋と乳脂肪の組合せで置換した食餌）のひとつを給餌し、空腸絨毛の長さを、シクロホスファミドの注射日、並びに４、８及び１２日後に記録した。 ８日目に、乳脂肪と０．０２５％Ｌｆ＋の組合せに関する平均絨毛長は、乳脂肪単独又は０．０２５％Ｌｆ＋単独のものよりも有意に大きく、相乗作用の証拠を提供している。

図１７は、ＷＢＣカウントは、乳脂肪、０．０２５％Ｌｆ＋、又はそれらの組合せを含有する食餌を給餌したマウスの方が、対照食を給餌したマウスよりも、シクロホスファミド化学療法後により迅速に回復したことを示すグラフである。 ＷＢＣカウントは、図１６のマウスからの心臓血液試料について、シクロホスファミドの注射日、並びに４、８及び１２日後に記録した。 乳脂肪と０．０２５％Ｌｆ＋の組合せに関する４日目から８日目の間のＷＢＣカウントの増加は、乳脂肪単独又は０．０２５％Ｌｆ＋単独よりも有意に大きく、相乗作用の証拠を提供している。

図１８は、ＲＢＣカウントは、乳脂肪、０．２５％Ｌｆ＋、又はそれらの組合せを含有する食餌を給餌したマウスの方が、対照食を給餌したマウスよりも、シクロホスファミド化学療法後により迅速に回復したことを示すグラフである。 ＲＢＣカウントは、図１６のマウスからの心臓血液試料について、シクロホスファミドの注射日、並びに４、８及び１２日後に記録した。 １２日目に、乳脂肪と０．２５％Ｌｆ＋の組合せに関するＲＢＣカウントは、乳脂肪単独又は０．２５％Ｌｆ＋単独よりも有意に大きく、相乗作用の証拠を提供している。

図１９は、ＨＣＴは、乳脂肪、０．２５％Ｌｆ＋、又はそれらの組合せを含有する食餌を給餌したマウスの方が、対照食を給餌したマウスよりも、シクロホスファミド化学療法後により迅速に回復したことを示すグラフである。 ＨＣＴ（ＲＢＣ量）は、図１６のマウスからの心臓血液試料について、シクロホスファミドの注射日、並びに４、８及び１２日後に記録した。 １２日目に、乳脂肪と０．２５％Ｌｆ＋の組合せに関するＨＣＴは、乳脂肪単独又は０．２５％Ｌｆ＋単独よりも有意に大きく、相乗作用の証拠を提供している。

図２０は、ヘモグロビンは、乳脂肪、０．２５％Ｌｆ＋、又はそれらの組合せを含有する食餌を給餌したマウスの方が、対照食を給餌したマウスよりも、シクロホスファミド化学療法後により迅速に回復したことを示すグラフである。 ヘモグロビンは、図１６のマウスからの心臓血液試料について、シクロホスファミドの注射日、並びに４、８及び１２日後に記録した。 １２日目に、乳脂肪と０．２５％Ｌｆ＋の組合せに関するヘモグロビンは、乳脂肪単独又は０．２５％Ｌｆ＋単独よりも大きい。 ０．２５％Ｌｆ単独との比較は、有意であった。

図２１は、乳脂肪は、Ｌｆ＋を伴う又は伴わない乳脂肪を含有する食餌を給餌したマウスについて、シクロホスファミド化学療法後に、体重が増加することを示すグラフである。 体重は、図１６のマウスにおいて、シクロホスファミドの注射日、並びに４、８及び１２日後に記録した。 全ての日の記録が集められた時点で、乳脂肪を補給した任意のマウスの体重は、乳脂肪を補給しなかった群よりも有意に大きかった。

１． 定義
用語「無水乳脂肪」及び「ＡＭＦ」は、本明細書において互換的に使用され、クリームの転相によるか、又は溶融バターから作成された乳脂肪画分をいう。 乳脂肪は、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、水牛、ラクダ、ヤク、ウマ、ロバ、ラマ又はヒト乳脂肪を含むが、これらに限定されるものではない、任意の哺乳類の乳脂肪であることができ、牛乳脂肪が好ましい給源である。 ＡＭＦの調製に使用される一般的方法は、Bylundの文献(編集, 1995)において明らかにされており、その全体は本明細書に組入れられている。 好ましいＡＭＦは、典型的には脂肪が約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９５％より多い、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約９９．５％、又は１００％であり、脂肪約９９％、脂肪９９．５％以上であるＡＭＦが、より好ましい。 ＡＭＦは、「硬質」（Ｈ）画分及び「軟質」（Ｓ）画分に更に分画されることが多く、「軟質」画分は更に、「軟硬質」（ＳＨ）画分及び「軟軟質」（ＳＳ）画分に分画され、「軟軟質」画分は、「軟軟硬質」（ＳＳＨ）画分及び「軟軟軟質」（ＳＳＳ）画分に更に分画することができる。 理解されるように、各画分は、脂肪酸組成が異なる。 ＡＭＦ及び誘導画分の脂肪酸組成の非限定的例は、下記表１から５に示されている。

用語「抗腫瘍食品因子」、「抗腫瘍食品」及び「抗腫瘍食品成分」は、腫瘍形成又は成長を阻害することが可能であり、かつ好ましくは腫瘍形成又は成長を阻害する乳脂肪及び／又はラクトフェリンの能力を増強することが可能である、食品及び食品成分をいう。

用語「抗腫瘍因子」は、少なくともアポトーシス誘導因子をいい、かつ抗腫瘍細胞溶解抗体及び殺腫瘍性サイトカイン、例えばＴＮＦ−αを含むことができる。

用語「抗腫瘍免疫応答」は、乳脂肪又はラクトフェリンの、抗原−特異的細胞溶解活性（免疫細胞、特に細胞傷害性Ｔリンパ球の活性）及び／又はＮＫ細胞活性の生成を刺激し、抗原に対する細胞性免疫応答改善し（少なくとも細胞傷害性Ｔリンパ球の活性を通じて）、免疫防御を改善し（少なくとも細胞傷害性Ｔリンパ球及び／又はＮＫ細胞の活性の回復、並びにサイトカイン産生の増強により）、免疫防御を回復し（少なくとも細胞傷害性Ｔリンパ球の活性及び／又はＮＫ細胞活性の回復又は刺激、並びにサイトカイン産生の増強により）、前炎症メディエーター及び免疫調節メディエーター（Ｔｈ１及びＴｈ２サイトカイン）の産生、並びに／又は抗腫瘍細胞溶解抗体及び殺腫瘍サイトカイン、例えばＴＮＦ−αの産生の能力をいう。

用語「悪液質治療薬」及びその文法上の変形の悪液質治療薬は、悪液質を逆行、遅延又は停止し、又は対象における進行性の体重減少（脂肪分解に起因した体重減少及び筋変性に起因した体重減少を含む）、貧血、浮腫、及び食欲不振を含む、悪液質の症状の１又は２以上を軽減する活性を有することが可能である物質を意味する。 悪液質治療薬は、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（例えばインドメタシン）、例えばプレドニソロン、メチルプレドニゾロン、及びデキサメタゾンなどのコルチコステロイド及び糖質コルチコイド、例えば酢酸メゲストロール、酢酸メドロキシプロゲステロンなどの黄体ホルモン薬、例えばテトラヒドロカンナビノール及びドロナビノールなどのカンナビノイド、例えばシプロヘプタジンなどのセロトニンアンタゴニスト、例えばメトクロプラミド及びシサプリドなどの運動促進薬、例えばデカン酸ナンドロロン及びフルオキシメステロンなどのアナボリックステロイド、例えば硫酸ヒドラジンなどのホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼの阻害薬、例えばペントキシフィリン及びリソフィリンなどのメチルキサンチン類似物、サリドマイド、例えば抗ＩＬ−６抗体、ＩＬ−１２などのサイトカイン及び抗サイトカイン、分枝鎖アミノ酸、例えばエイコサペンタン酸などの脂質代謝改善薬、例えばインドメタシン及びイブプロフェンなどのプロスタグランジン合成の阻害薬、例えばメラトニンなどのホルモン、例えばクレンブテロール、メトクロプラミドなどのβ２−アドレナリン受容体遮断薬、成長ホルモン、ＩＧＦ−１、並びに悪液質誘導因子であるＴＮＦ−α、ＬＩＦ、ＩＬ−６、及びオンコスタチンＭに対する抗体を含む。

用語「粘膜炎治療薬」は、裂創(alcelation)のような腸の損傷を改善し、又は粘膜炎を逆行、遅延又は停止し、又は粘膜炎の症状を緩和する活性を有することが可能である作用物質を意味する。

本明細書において使用される用語「含んでなる」は、「少なくとも一部がなる」ことを意味する。 この用語を含む本明細書における陳述を解釈する場合、各陳述においてこの用語により始められた特徴は、全て存在することが必要であるが、他の特徴も存在することができる。 「含む」及び「含まれる」などの関連する用語も、同じように解釈されるべきである。

「有効量」は、治療効果をもたらすのに必要な量である。 動物及びヒトに関する用量相関（体表１ｍ ²あたりのｍｇ数を基にした）は、Freireichらの論文(1966)により説明されている。 体表面積は、対象の身長及び体重からおおよそ決定することができる。 例えば、「Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals」、Ardley、ニューヨーク、1970, 537を参照のこと。 有効量は、当業者により認められるように、投与経路、使用される賦形剤などによっても変動する。

用語「免疫系を増強する」及び「免疫系を刺激する」(及びこれらの用語の様々な時制)は、乳脂肪の、抗原特異的細胞溶解活性（免疫細胞、特に細胞傷害性Ｔリンパ球の活性）及び／又はＮＫ細胞活性の発生を刺激するか、抗原に対する細胞性免疫応答を改善するか（少なくとも細胞傷害性Ｔリンパ球の活性を通じて）、免疫防御を改善するか（少なくとも細胞傷害性Ｔリンパ球及び／又はＮＫ細胞の活性の回復、並びにサイトカイン産生の増強により）、免疫防御を回復するか（少なくとも細胞傷害性Ｔリンパ球の活性及び／又はＮＫ細胞活性の回復又は刺激、並びにサイトカイン産生の増強により）、又は前炎症メディエーター及び免疫調節メディエーター（Ｔｈ１及びＴｈ２サイトカイン）を生成する、能力をいう。

用語「機能的ラクトフェリン断片」は、下記実施例に従いアッセイされた場合に活性を有し、かつ金属イオン機能断片を含む、ラクトフェリンポリペプチドの天然又は非天然の一部分を意味することが意図されている。 有用なラクトフェリン断片は、切断型ラクトフェリンポリペプチド、ラクトフェリンの金属イオン結合している加水分解物、Ｎローブ金属イオン結合ポケットを含む断片、Ｃローブ金属イオン結合ポケットを含む断片、及び（人工又は天然のプロセスにより）作製されかつ以下に考察されるような公知の技術により同定された金属イオン結合断片を含む。 公開された国際特許出願WO 2006/054908及びWO 2007/043900は、ラクトフェリン断片の調製及び使用を開示しており、これらは参照により本明細書に組入れられている。

用語「機能的ラクトフェリン変種」は、下記実施例に従いアッセイされた場合に活性を有し、かつ金属イオン機能変種を含む、ラクトフェリンポリペプチドの変種を意味することが意図されている。

用語「グリコシル化された」は、ラクトフェリンポリペプチド、機能変種又は機能断片に関連して使用される場合、ラクトフェリンは、天然又は非天然のヒト又はウシのグリコシル基により完全に又は部分的にグリコシル化されていることを意味することが意図されている。 ラクトフェリンのグリコシル化型及び無グリコシル(aglycosyl)型が公知である(Pierceら、(1991)；Metz-Boutigueら、(1984)；van Veenら、(2004)を参照のこと)。

用語「造血薬」は、血液生成及び／又はリンパ球生成を調節すること、好ましくは刺激することが可能である作用物質を意味し、かつ赤血球、リンパ球又は骨髄細胞などの血液細胞の数を増加することによるか、又はヘモグロビンのレベルを増加することによるかのいずれかにより、血液の質を改善する作用物質を含む。 好ましい造血薬は、貧血の治療において有用である。 造血薬の例は、造血因子、リンパ球形成因子、及び骨髄増殖因子並びに組換え同等物、例えばエポエチンαを含むエリスロポエチン、トロンボポエチン、ＩＬ−１−１２、ＩＬ−２０サルグラモスチム(LEUKINE)を含む顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、単球／マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ又はＣＳＦ−１）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、フィルグラスチム(NEUPOGEN)を含む顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＦＴＬ−３リガンド（ＦＬ）、鉄及び鉄塩、例えば硫酸鉄、フマル酸第一鉄、グルコン酸第一鉄、エデト酸第二鉄、鉄デキストラン、ナトリウムグルコン酸第二鉄錯体(FERRLECIT)など、ピリドキシン、リボフラビン、Ｂ１２、及び葉酸を含むビタミンを含む。 同じく「Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics」第10版、Harman JG及びLimbird LE編集、McGraw-Hill、ニューヨーク、第54章「Hematopoietic Agents: Growth Factors, Minerals, and Vitamins」pp1487-1517も参照のこと。

用語「対象の反応性を増大させる」は、対象が、腫瘍成長の速度、腫瘍サイズ、又は疾患の臨床症状において、本発明の方法が施されない対象よりも、より大きい低下を示すことを意味することが意図されている。 一実施態様によれば、治療された対象は、回復されたビタミン状態、短縮された化学療法の時間、減量された化学療法の実施量、増大された免疫体力、増加された栄養上の健康、軽減された悪液質、軽減された粘膜炎、軽減された貧血、軽減された血液学的抑制、又は増大された造血の１又は２以上からの恩恵もある。

用語「腫瘍の感受性の増大」は、本発明の方法が施されていない腫瘍は作用を示さないのに対し、腫瘍が、腫瘍成長の速度、腫瘍サイズにおけるより大きい低下を示すか、又は根絶されていることを意味することが意図されている。

用語「免疫療法薬」は、抗腫瘍免疫学的活性を刺激する作用物質を意味することが意図されており、同じく本願明細書において、抗腫瘍免疫及び抗腫瘍免疫応答（類）とも称す。 抗腫瘍免疫学的活性を刺激する作用物質は、好ましくはＴ細胞及び／又はＮＫ細胞を腫瘍細胞を殺傷するように直接的又は間接的に刺激するものである。 選択された作用物質が抗腫瘍免疫学的活性を刺激するかどうかを評価するインビトロアッセイの例は、以下に説明されるＣＴＬアッセイである。

用語「腫瘍形成を阻害する」は、腫瘍は形成されないこと、又は腫瘍は形成されるが確立又は成長しないこと、又は腫瘍は形成されるが依然小さく、良性であり、癌とならないか又は転移しないこと、又は腫瘍がより緩徐に成長することを意味することが意図されている。 腫瘍形成は、ＣＴスキャン及び入手可能な場合は腫瘍マーカーによりモニタリングされてよい。

用語「腫瘍成長の阻害」は、腫瘍が本発明に従い治療された対象において形成されないこと、又は本発明に従い治療された対象において存在し得る１又は２以上の腫瘍が、サイズが成長しないか又は癌とならないか又は転移しないこと、又は本発明に従い治療された対象において存在する１又は２以上の腫瘍のサイズが縮小する（好ましくは少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又は１００容量％まで）こと、又は本発明に従い治療された対象において存在する１又は２以上の腫瘍が根絶されることを意味することが意図されている。 腫瘍サイズは、ＣＴスキャン及び入手可能な場合は腫瘍マーカーによりモニタリングされてよい。

本明細書において使用される用語「鉄ラクトフェリン」及び「鉄飽和型ラクトフェリン」は、その集団に存在する金属イオン結合ポケットの少なくとも約２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５、９９．９又は１００％が結合した鉄イオンを有している鉄−結合ポケットの集団を提供する、ラクトフェリンポリペプチドの集団をいうことが意図されている。

用語「ラクトフェリンポリペプチド」は、グリコシル化されない又はグリコシル化された野生型ラクトフェリンアミノ酸配列、又は以下に説明されるもののような他の種由来の相同のラクトフェリン配列をいう。 ラクトフェリンポリペプチドは、ふたつの金属イオンが結合しているポケットを有し、そのため１ラクトフェリン分子につき２金属イオンの化学量論的な比で金属イオンに結合することができる。 一方の金属イオン結合ポケットは、ラクトフェリンのＮ末端ローブ（Ｎローブ）に存在し、他方のポケットは、Ｃ末端ローブ（Ｃローブ）に存在する(Mooreら、1997)。 ウシ及びヒトのラクトトランスフェリン（ラクトフェリン前駆体）、ラクトフェリン及びそれらのペプチドの証明された配列は、Swiss-Prot (http://au.expasy.org/cgi-bin/sprot-search-ful)において認めることができる。 指標となるラクトフェリンポリペプチドは、寄託番号P24627のウシラクトトランスフェリン前駆体、ウシラクトフェリン、寄託番号P02788のヒトラクトトランスフェリン前駆体、及びヒトラクトフェリンである。 公開された国際特許出願WO 2006/054908及びWO 2007/043900は、ラクトフェリンポリペプチドの調製及び使用並びにそれらのアミノ酸配列を開示しており、各出願は参照により本明細書に組入れられている。 ラクトフェリンポリペプチドは、「自然」レベルで金属イオン、典型的には鉄イオンに結合することができる。 例えばウシラクトフェリンは、天然に約１０％〜２０％（好ましくは１５％）鉄飽和されている。 少なくとも１％金属イオン飽和のアポラクトフェリン及びラクトフェリンが、本明細書において有用である。

用語「大型腫瘍」は、少なくとも１種の免疫療法薬、抗血管新生薬又は化学療法薬のひとつによる療法に対し難治性であるか、好ましくは少なくとも１種の免疫療法薬又は化学療法薬の少なくとも１種による療法に対し難治性である腫瘍を意味することが意図されている。 一実施態様によれば、大型腫瘍は、直径が少なくとも約０．３、０．４、０．５、０．６、０．７又は０．８ｃｍである腫瘍である。 一実施態様によれば、大型腫瘍は、直径が約０．３〜約０．８、約０．４〜約０．８、約０．５〜約０．８、約０．６〜約０．８、又は約０．７〜約０．８ｃｍである腫瘍である。 一実施態様によれば、大型腫瘍は、免疫療法又は抗血管新生療法又は化学療法による療法に対し難治性である腫瘍である。

用語「金属イオン結合している」は、ラクトフェリンポリペプチドの鉄結合ポケット中の、又は依然鉄結合ポケットを形成することができるラクトフェリンポリペプチドの断片の鉄結合ポケット中の、金属イオンの結合をいうことが意図されている。

用語「金属イオンラクトフェリン」及び「金属イオン飽和型ラクトフェリン」は、その集団に存在する金属イオン結合ポケットの少なくとも約２５％が結合された金属イオンを有するような金属イオン結合ポケットの集団を提供するラクトフェリンポリペプチドの集団をいうことが意図されている。 この集団は、例えば、一部の分子はイオンに結合せず、かつ他のものは各々１個又は２個のイオンに結合している、異なる種類のポリペプチドを含むことができることは理解されなければならない。 異なる金属イオンが使用される場合、一部の分子は、例えば、アルミニウム、ビスマス、銅、クロム、コバルト、金、鉄、マンガン、オスミウム、白金、ルテニウム、亜鉛イオン、又はラクトフェリン金属イオン結合ポケット中に特異的に配位する他のイオンを含んでなる群から選択された金属イオンに結合することができ、その他の分子は、異なるイオンに結合することができる。 場合によっては、この集団は、非特異的イオン結合に関与しているポリペプチドを含むことができ、ここで１又は２以上のイオン、好ましくは金属イオンは、非特異的に結合され、すなわち金属イオン結合ポケットにおいて、このポリペプチドには結合されていない。 ラクトフェリンポリペプチドに非特異的に結合されることができるイオンの非限定的例は、カルシウム及びセレンである。

同様に、用語「金属イオンラクトフェリン断片」及び「金属イオン飽和型ラクトフェリン断片」は、その集団に存在する金属イオン結合ポケットの少なくとも約２５％が結合された金属イオンを有するような金属イオン結合ポケットの集団を提供するラクトフェリンポリペプチド断片の集団をいうことが意図されている。

本発明は、ラクトフェリンポリペプチド及びラクトフェリン断片の混合物を利用することができる。 そのような実施態様によれば、金属イオン結合ポケットの集団は、ラクトフェリンポリペプチド毎に２個のポケット、及びラクトフェリン断片毎に断片の性質に応じて１又は２個のポケットで作製される。

飽和度は、分光光度分析により決定することができる(Brock及びArzabe、1976；Batesら、1967；Batesら、1973)。 ラクトフェリンポリペプチド間で金属イオン交換が存在し得ることは理解されなければならない。 一実施態様において鉄飽和型ラクトフェリンは、Lawらの論文(1977)の方法により調製することができる。 別の実施態様によれば、鉄飽和型ラクトフェリンは、Kawakamiらの論文(1993)の方法により調製することができる。 金属イオン飽和型ラクトフェリンは、Ｆｅ結合ポケットのような金属イオン結合ポケットを含むラクトフェリン中の金属イオン結合部位、及びラクトフェリン分子又はラクトフェリン断片上の他の非特異的結合部位への、金属イオンの結合により調製することができる。

一実施態様によれば、ラクトフェリン分子の集団中に存在する金属イオン結合ポケットの少なくとも約２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５、９９．９又は１００％は、結合された金属イオンを有し、かつ有用な範囲は、前述の値のいずれかの間から選択されてよい（例えば、約２５〜約１００％、約３０〜約１００％、約３５〜約１００％、約４０〜約１００％、約４５〜約１００％、約５０〜約１００％、約５５〜約１００％、約６０〜約１００％、約６５〜約１００％、約７０〜約１００％、約７５〜約１００％、約８０〜約１００％、約８５〜約１００％、約９０〜約１００％、約９５〜約１００％、及び約９９〜約１００％）。 一実施態様によれば、金属イオンラクトフェリンは、過飽和されたラクトフェリンである。

用語「金属イオンラクトフェリン機能断片」は、１又は２個の金属イオン結合ポケットを有し、かつ下記実施例に従いアッセイされた場合に活性を有する、ラクトフェリンポリペプチドの天然又は非天然の部分を意味することが意図されている。 有用なラクトフェリン断片は、切断型ラクトフェリンポリペプチド、ラクトフェリンの金属イオン結合している加水分解物、Ｎローブ金属イオン結合ポケットを含む断片、Ｃローブ金属イオン結合ポケットを含む断片、及び（人工の又は天然のプロセスにより）作製されかつ以下に考察されるような公知の技術により同定された金属イオン結合断片を含む。

用語「乳脂肪」は、哺乳類の脂質及び脂質画分、脂質加水分解物、及び脂質画分加水分解物を含む。 好ましい乳脂肪は、酪農品脂肪、特に牛乳脂肪である。 好ましい乳脂肪は、最も豊富に存在する脂肪酸（類）として、パルミチン酸、オレイン酸、ステアリン酸、又はミリスチン酸の１又は２以上を有し、好ましくはパルミチン酸、オレイン酸、ステアリン酸及びミリスチン酸が最も豊富に存在する脂肪酸である。 特に好ましい実施態様によれば、乳脂肪は、ａ）通常の牛乳脂肪と実質的に同じ重量％のパルミチン酸（約２３重量％〜約３２重量％、典型的には約２８重量％−表１．２、PF Fox及びPLH McSweeney編集の著書参照、「Advanced Dairy Chemistry Volume 2-Lipids」第3版、Springer NY, NY (2006) ISBN-10:0-387-26364-0)；ｂ）通常の牛乳脂肪と実質的に同じ重量％のオレイン酸（約１５重量％〜約２２重量％、典型的には約１７重量％−Fox及びMcSweenyの前掲書参照)；ｃ）通常の牛乳脂肪と実質的に同じ重量％のステアリン酸（約１０重量％〜約１５重量％、典型的には約１２重量％−Fox及びMcSweenyの前掲書参照)；ｄ）通常の牛乳脂肪と実質的に同じ重量％のミリスチン酸（約９重量％〜約１２重量％、典型的には約１１重量％−Fox及びMcSweenyの前掲書参照)；ｅ）通常の牛乳脂肪と実質的に同じ重量％の酪酸（約３重量％〜約５重量％、典型的には約４重量％−Fox及びMcSweenyの前掲書参照)；ｆ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）のいずれか２つ；ｇ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）のいずれか３つ；ｈ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）のいずれか４つ；ｉ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）の各々を有する。 無水乳脂肪（ＡＭＦ）が好ましく、特に通常の牛乳脂肪と実質的に同じ重量％のパルミチン酸、オレイン酸及びステアリン酸組成を有するＡＭＦが好ましく、普通の牛乳脂肪と実質的に同じ脂肪酸組成であるものがより好ましい(Fox及びMcSweenyの前掲書参照)。

用語「乳脂肪類似物」は、最も豊富に存在する脂肪酸（類）としてパルミチン酸、オレイン酸、ステアリン酸、又はミリスチン酸の１又は２以上を提供するように配合されている、植物油、動物油又は海洋生物油の任意の組合せを含み、好ましくはパルミチン酸、オレイン酸、ステアリン酸及びミリスチン酸が最も豊富に存在する脂肪酸であり、その結果この乳脂肪類似物は、ａ）通常の牛乳脂肪と実質的に同じ重量％のパルミチン酸（約２３重量％〜約３２重量％、典型的には約２８重量％−Fox及びMcSweenyの前掲書参照)；ｂ）通常の牛乳脂肪と実質的に同じ重量％のオレイン酸（約１５重量％〜約２２重量％、典型的には約１７重量％−Fox及びMcSweenyの前掲書参照)；ｃ）通常の牛乳脂肪と実質的に同じ重量％のステアリン酸（約１０重量％〜約１５重量％、典型的には約１２重量％−Fox及びMcSweenyの前掲書参照)；ｄ）通常の牛乳脂肪と実質的に同じ重量％のミリスチン酸（約９重量％〜約１２重量％、典型的には約１１重量％−Fox及びMcSweenyの前掲書参照)；ｅ）通常の牛乳脂肪と実質的に同じ重量％の酪酸（約３重量％〜約５重量％、典型的には約４重量％−Fox及びMcSweenyの前掲書参照)；ｆ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）のいずれか２つ；ｇ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）のいずれか３つ；ｈ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）のいずれか４つ；ｉ）前記ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）の各々を有する有する。 好適な油分は、食用油又は料理用油を含むことができ、これはパーム油、オリーブ油、大豆油、キャノーラ油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、ピーナツ油、グレープシード油、ゴマ油、堅果油、アーモンド油、カシューナッツ油、ヘーゼルナッツ油、マカダミアナッツ油、ピーカン油、ピスタチオ油、及びクルミ油、その他の食用油で、アサイー油、アマランス油、アプリコット油、アルガン油、アーティチョーク油、アボカド油、ババス油、ベン油、カシス種子油、ルリジサ種子油、ボルネオタローナッツ(borneo tallow nut)油、ヒョウタン油、バッファローゴーアド油、イナゴマメ(アルガローバ)油、コフネヤシ油、コリアンダー種子油、月見草油、アマナズナ油、ヘンプ油、カポック種子油、ラレマンティア油、メドウフォームシード油、マスタード油、オクラ種子(ハイビスカス種子)油、エゴマ種子油、ペキ油、松の実油、ケシ種子油、プルーンカーネル油、カボチャ種子油、キヌア油、ニガー種子油、米糠油、茶(ツバキ)油、アザミ油、スイカ種子油、及びコムギ胚芽油を含むもの、海洋生物油で、甲殻類、魚類、アンチョビー、バイカル(baikal)、ブローター、クジラ(cacha)、コイ、ウナギ、ユーラカン、ニシン、ホキ、ヒルサ、ギンガメアジ、カトラ、キッパー(kipper)、サバ、オレンジラッフィー、パンガス、ピルチャード、ギンダラ、サケ、イワシ、サメ、スプラット、マス、マグロ、シラス、及びメカジキの油を含むもの、並びにそれらのいずれか２種以上の組合せを含む。

用語「経口投与」は、経口、口腔内、腸内及び胃内の投与を含む。

用語「経口的投与」は、局所（真皮、表皮又は粘膜表面のいずれかへの投与を含む）、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内及び腫瘍内（腫瘍への直接投与を含む）投与を含むが、これらに限定されるものではない。

用語「医薬として許容し得る担体」は、本発明の組成物の成分として対象に投与することができる賦形剤、希釈剤又は助剤を含むが、これらに限定されるものではない担体をいうことが意図されている。 好ましい担体は、本組成物の活性を低下することなく、かつ乳脂肪、乳脂肪誘導体又は例えばシス−９，トランス−１１ ＣＬＡ及びＴＶＡを含むそれらの成分の有効量を送達するのに十分な投与量で投与される場合に、又はラクトフェリンポリペプチド又はそれらの機能変種又は機能断片を投与する場合に、無毒である。 これらの製剤は、経口、経鼻又は非経口投与することができる。

用語「対象」は、動物、好ましくは哺乳類、より好ましくは哺乳類の伴侶動物又はヒトをいうことが意図されている。 好ましい伴侶動物は、ネコ、イヌ及びウマを含む。

用語「過飽和されたラクトフェリン」は、結合ポケットの１００％を満たすのに十分な金属イオンが利用可能である金属イオン結合ポケットの集団を提供し、並びに追加の金属イオンが存在しかつラクトフェリンポリペプチド又はラクトフェリン断片上の非特異的結合部位により結合されている、ラクトフェリンポリペプチド又は機能断片の集団をいう。 別の表現をすると、化学量論的に過剰な金属イオンが提供される。 好ましくは過飽和されたラクトフェリンを含有している本発明の組成物中に遊離の金属イオンは存在しないが、結合ポケット間、非特異的結合部位間、及び結合ポケットと非特異的結合部位の間の金属イオンの交換は起こり得る。 好ましくは過飽和されたラクトフェリンは、不溶性の凝集体を形成しない。 一実施態様によれば、過飽和されたラクトフェリンは、少なくとも約１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５又は２００％金属イオン飽和され、好ましくは鉄飽和されている。 有用な飽和範囲は、約２５〜約２００％、約３０〜約２００％、約３５〜約２００％、約４０〜約２００％、約４５〜約２００％、約５０〜約２００％、約５５〜約２００％、約６０〜約２００％、約６５〜約２００％、約７０〜約２００％、約７５〜約２００％、約８０〜約２００％、約８５〜約２００％、約９０〜約２００％、約９５〜約２００％、及び約１００〜約２００％金属イオン飽和である。

用語「治療する」及びその派生語は、それらの最も広範な可能な文脈で解釈されるべきである。 この用語は、対象は総体的に回復するまで治療されることを暗示すると解釈されてはならない。 従って「治療する」は広範に、対象の疾患進行又は症状を実質的に静的レベルで維持すること、対象の回復速度を速めること、症状の発生又は特定の状態の重症度の改善及び／又は予防すること、又は患者の生活の質を拡大することを含む。 用語「治療する」は広範に、感受性のある個人について良好な健康状態を維持すること及び疾患を予防する体力を構築することも含む。

用語「変種」は、１個以上のアミノ酸の付加、欠失又は置換により、所与の種のラクトフェリンポリペプチド（以下に列記されたようなもの）又はそれらの断片の支配的な野生型アミノ酸配列から変動する、天然の（例えばアレル変種）又は非天然の（例えば、人工的に作出された変異体）ラクトフェリンポリペプチド又はラクトフェリン断片をいう。

一般に、ポリペプチド配列変種は、下記実施例に従いアッセイした場合に、共通の定性的生物活性を有する。 更にこれらのポリペプチド配列変種は、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を共有することができる。 用語「変種」の意味には、ラクトフェリンポリペプチドの相同体も含まれる。 相同体は典型的には、異なる種に由来するが、本明細書に開示された対応するポリペプチドと同じ生物学的機能又は活性を実質的に共有しているポリペプチドである。

好ましい変種ポリペプチドは、参照により本明細書に組入れられている公開された国際特許出願WO 2006/054908及びWO 2007/043900に開示されたそれらの配列を含む、本明細書に説明されたラクトフェリン配列と、好ましくは少なくとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５又は９９％の同一性を有し、好ましくは少なくとも約９０、９５又は９９％の同一性を有する。 変種断片は、公開された国際特許出願WO 2006/054908及びWO 2007/043900に開示されたそれらの配列を含む、本明細書に説明された断片と、好ましくは少なくとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５又は９９％の同一性を有し、好ましくは少なくとも約９０、９５又は９９％の同一性を有する。 同一性は、ＮＣＢＩから公に入手可能(ftp://ftp.ncbi.nih.gov/blast/)であるBLAST suiteプログラム(バージョン2.2.12；2005年8月28日)を使用し、候補アミノ酸配列を、ラクトフェリンポリペプチド又はそれらの断片のような、本明細書に説明された配列と比較することにより決定することができる。

その生物活性に著しい変更を伴わないラクトフェリンポリペプチド配列の１個又は数個のアミノ酸の保存的置換も有用である。 当業者は、フェノタイピング的にサイレントのアミノ酸置換を作製する方法を知っているであろう(例えば、Bowieら、(1990)参照)。

用語「ビタミンＤ」は、ビタミンＤ１［ルミステロール］、ビタミンＤ２［カルシフェロール又はエルゴカルシフェロール］、ビタミンＤ３［コレカルシフェロール］、ビタミンＤ４［２２−ジヒドロエルゴカルシフェロール］及びビタミンＤ５［シトカルシフェロール］、並びにそれらのいずれか２種以上の混合物を含んでなる群から選択される１又は２以上のビタミンＤ化合物をいう。 用語「ビタミンＤ類似物」は、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）と結合しかつ活性化する任意の化合物をいう。 ＶＤＲは、転写因子として作用するリガンドで活性化された細胞内受容体であり、かつこれは、細胞周期のＧ０／Ｇ１期における停止を引き起こすことにより腫瘍細胞に対する抗増殖作用を発揮する遺伝子、ＩＧＦ−１のような成長促進因子をダウンレギュレーションする遺伝子、トランスフォーミング増殖因子βのような負の成長レギュレーターをアップレギュレーションする遺伝子、腫瘍アポトーシスを引き起こす遺伝子、腫瘍血管新生を阻害する遺伝子及び転移を阻害する遺伝子を含むが、これらに限定されるものではない遺伝子のプロモーター領域／エンハンサー領域においてビタミンＤ反応エレメント（ＶＤＲＥ）に結合する。 ＶＤＲ結合を評価するためのアッセイは公知であり；例えば、ビタミンＤにより調節された遺伝子の発現を測定する免疫学的検定である。 従って候補ビタミンＤ類似物は、本発明に従う使用に関して、過度の実験を伴うことなく、容易に評価することができる。

２． 酪農脂質及び脂質画分
酪農脂質は、Fox及びMcSweeneyの論文(2006)により包括的に考察されており、これは参照により本明細書に組入れられている。 酪農脂質の画分は、「Dairy Processing Handbook」(1995)、及びIllingworthの論文(2002)、及びRombautらの論文(2006)において考察されており、これらは全て参照により本明細書に組入れられている。

本発明に有用な酪農脂質画分の例は、クリーム、バター、無水乳脂肪（ＡＭＦ）（典型的にはクリーム又はバターの転相により作製される）、バターミルク、バター漿液、硬質乳脂肪画分、軟質乳脂肪画分、スフィンゴミエリン画分、乳脂肪球膜画分、リン脂質画分、及び複合脂質画分、並びにそれらの組合せ、及びそれらの加水分解物を含む。

乳脂肪の多段階分画は、分別結晶により実行することができる。 乳脂肪画分は、設定温度に加熱され、結晶化又は固形画分（「ステアリン」）及び液体画分（「オレイン」）は分離される。 多段階分画は、先行する分画工程の生成物の引き続きの工程における再分画をいう。

他の分画方法は、転相、エステル交換、グリセロール分解、溶媒分画、超臨界分画、亜臨界分画、蒸留、遠心分離分画、懸濁液結晶化、乾燥結晶化、修飾剤（例えばセッケン又は乳化剤）による分画、及びこれらの方法の組合せを含む。

本発明の組成物中に存在する脂質は、天然に、化学的に、酵素的に、又は例えばグリコシル化、シアル化、エステル化、リン酸化又は加水分解を含む、当該技術分野において公知の他の方法によるかのいずれかにより、完全に又は部分的に修飾され得る。

脂質加水分解物は、非限定的に、酸加水分解、塩基加水分解、例えばFox及びMcSweeneyの論文((2006), 第15章、HC Deeth and CH Fitz-Gerald)に説明されたようなリパーゼを使用する酵素的加水分解、及び微生物発酵を含む、公知の技術を用い、調製することができる。 塩基加水分解のひとつの方法は、１％ＫＯＨ（エタノール中）を添加し、１０分間加熱することを含む。 加水分解された材料は、酢酸又は塩酸により中和することができる。

乳脂肪球膜材料は、Kanno及びDong-Hyunの論文(1990)の酸性化法に従い単離され、Kannoらの論文(1975)により説明されたように、更にメタノールの添加により、複合脂質画分とリポタンパク画分に分画される。 リン脂質画分は、Purthiら(1970)の手順に従い、脂質混合物のアセトンによる抽出により単離することができる。 脂質残渣は、単純脂質のペンタンによる選択的抽出により、複合脂質中で更に濃厚化され得る。

一実施態様によれば、乳脂肪は、任意にヒドロキシル、メチル、エチル及びプロピル基から選択された１又は２以上基により置換された、酪酸（Ｃ４：０）、カプロン酸（Ｃ６：０）、カプリル酸（Ｃ８：０）、カプリン酸（Ｃ１０：０）、ラウリン酸（Ｃ１２：０）、ミリスチン酸（Ｃ１４：０）、パルミチン酸（Ｃ１６：０）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）、オレイン酸（Ｃ１８：１シス−９；シス−９−オクタデセン酸）、エライジン酸（Ｃ１８：１トランス−９；トランス−９−オクタデセン酸）、バクセン酸（Ｃ１８：１トランス−１１；トランス−１１−オクタデセン酸）、シス−バクセン酸（Ｃ１８：１シス−１１；シス−１１−オクタデセン酸）、アラキジン酸（Ｃ２０：０）、及びベヘン酸（Ｃ２２：０）、及びそれらの塩、エステル及びアミド、及びそれらの組合せから選択された脂肪酸を１又は２以上含有する。 任意の置換基（類）は、炭素鎖に沿ったいずれかの位置に存在してよい。 好ましい乳脂肪は、脂肪酸類である酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、及びエライジン酸、及びそれらの塩、エステル及びアミド、及びそれらの組合せを含む。 これらの脂肪酸は、牛乳脂肪の主成分である。

一実施態様によれば、本組成物は、新鮮な、還元又は粉末化された全乳又は乳誘導体、好ましくは乳脂肪を少なくとも約０．１、０．２、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、９９．５、９９．８又は９９．９重量％を含んでなるか、本質的になるか、又はこれらからなり、かつ有用な範囲は、これら前記値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約０．１〜約５０％、約０．２〜約５０％、約０．５〜約５０％、約１〜約５０％、約５〜約５０％、約１０〜約５０％、約１５〜約５０％、約２０〜約５０％、約２５〜約５０％、約３０〜約５０％、約３５〜約５０％、約４０〜約５０％、約４５〜約５０％、約０．１〜約６０％、約０．２〜約６０％、約０．５〜約６０％、約１〜約６０％、約５〜約６０％、約１０〜約６０％、約１５〜約６０％、約２０〜約６０％、約２５〜約６０％、約３０〜約６０％、約３５〜約６０％、約４０〜約６０％、約４５〜約６０％、約０．１〜約７０％、約０．２〜約７０％、約０．５〜約７０％、約１〜約７０％、約５〜約７０％、約１０〜約７０％、約１５〜約７０％、約２０〜約７０％、約２５〜約７０％、約３０〜約７０％、約３５〜約７０％、約４０〜約７０％、約４５〜約７０％、約０．１〜約８０％、約０．２〜約８０％、約０．５〜約８０％、約１〜約８０％、約５〜約８０％、約１０〜約８０％、約１５〜約８０％、約２０〜約８０％、約２５〜約８０％、約３０〜約８０％、約３５〜約８０％、約４０〜約８０％、約４５〜約８０％、約０．１〜約９０％、約０．２〜約９０％、約０．５〜約９０％、約１〜約９０％、約５〜約９０％、約１０〜約９０％、約１５〜約９０％、約２０〜約９０％、約２５〜約９０％、約３０〜約９０％、約３５〜約９０％、約４０〜約９０％、約４５〜約９０％、約０．１〜約９９％、約０．２〜約９９％、約０．５〜約９９％、約１〜約９９％、約５〜約９９％、約１０〜約９９％、約１５〜約９９％、約２０〜約９９％、約２５〜約９９％、約３０〜約９９％、約３５〜約９９％、約４０〜約９９％、及び約４５〜約９９％）。

一実施態様によれば、本組成物は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の新鮮な、還元又は粉末化された全乳又は乳誘導体、好ましくは乳脂肪を少なくとも約０．００１、０．０１、０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８又は１９ｇ含有し、かつ有用な範囲は、これら前記値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約０．０１〜約１ｇ、約０．０１〜約１０ｇ、約０．０１〜約１９ｇ、約０．１〜約１ｇ、約０．１〜約１０ｇ、約０．１〜約１９ｇ、約１〜約５ｇ、約１〜約１０ｇ、約１〜約１９ｇ、約５〜約１０ｇ、及び約５〜約１９ｇ）。

一実施態様によれば、本組成物は、ラクトフェリンポリペプチド、機能的ラクトフェリン変種、機能的ラクトフェリン断片、金属イオンラクトフェリン、金属イオンラクトフェリン機能変種、又は金属イオンラクトフェリン機能断片、又はそれらのいずれか２種以上の混合物を約０．１、０．２、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、９９．５、９９．８又は９９．９重量％を含んでなるか、本質的になるか、又はこれらからなり、かつ有用な範囲は、これら前記値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約０．１〜約５０％、約０．２〜約５０％、約０．５〜約５０％、約１〜約５０％、約５〜約５０％、約１０〜約５０％、約１５〜約５０％、約２０〜約５０％、約２５〜約５０％、約３０〜約５０％、約３５〜約５０％、約４０〜約５０％、約４５〜約５０％、約０．１〜約６０％、約０．２〜約６０％、約０．５〜約６０％、約１〜約６０％、約５〜約６０％、約１０〜約６０％、約１５〜約６０％、約２０〜約６０％、約２５〜約６０％、約３０〜約６０％、約３５〜約６０％、約４０〜約６０％、約４５〜約６０％、約０．１〜約７０％、約０．２〜約７０％、約０．５〜約７０％、約１〜約７０％、約５〜約７０％、約１０〜約７０％、約１５〜約７０％、約２０〜約７０％、約２５〜約７０％、約３０〜約７０％、約３５〜約７０％、約４０〜約７０％、約４５〜約７０％、約０．１〜約８０％、約０．２〜約８０％、約０．５〜約８０％、約１〜約８０％、約５〜約８０％、約１０〜約８０％、約１５〜約８０％、約２０〜約８０％、約２５〜約８０％、約３０〜約８０％、約３５〜約８０％、約４０〜約８０％、約４５〜約８０％、約０．１〜約９０％、約０．２〜約９０％、約０．５〜約９０％、約１〜約９０％、約５〜約９０％、約１０〜約９０％、約１５〜約９０％、約２０〜約９０％、約２５〜約９０％、約３０〜約９０％、約３５〜約９０％、約４０〜約９０％、約４５〜約９０％、約０．１〜約９９％、約０．２〜約９９％、約０．５〜約９９％、約１〜約９９％、約５〜約９９％、約１０〜約９９％、約１５〜約９９％、約２０〜約９９％、約２５〜約９９％、約３０〜約９９％、約３５〜約９９％、約４０〜約９９％、及び約４５〜約９９％）。

３． 本発明に有用な組成物
本明細書において有用な組成物は、食品、飲料品、食品添加物、飲料品添加物、ダイエタリーサプリメント、栄養製品、医療食、栄養補助食品、薬剤又は医薬品として製剤することができる。 好適な製剤は、当業者の技術及び本明細書の内容に関して、当業者により調製されることができる。

一実施態様によれば、本発明は、食品、飲料品、食品添加物、飲料品添加物、ダイエタリーサプリメント、栄養製品、医療食、栄養補助食品、薬剤又は医薬品の製造において、乳脂肪又は乳脂肪類似物の、任意に少なくとも１種の抗腫瘍剤、好ましくはラクトフェリンと一緒の使用に関する。 好ましくは本組成物は、経口又は局所投与のために製剤される。 好ましくは本組成物は、経口又は非経口的投与のために製剤される。 好ましくは本組成物は、先に説明されたように、腫瘍成長の阻害、腫瘍転移の阻害、アポトーシスの誘導、腫瘍細胞のアポトーシスの誘導、癌の治療又は予防、療法に対する対象の反応性又は腫瘍の感受性の増大、対象の白血球数、赤血球数、又は骨髄細胞数の１又は２以上の維持又は改善、対象の腸又は腫瘍内のＴｈ１及びＴｈ２サイトカイン産生の増加、それを必要とする対象における貧血、悪液質、粘膜炎の治療又は予防、又は他の使用のためである。 好ましくは、本乳脂肪又は乳脂肪類似物及び少なくとも１種の追加の治療剤、例えばラクトフェリンのような１又は２以上の抗腫瘍剤などは、本明細書に説明されている。 好ましくは、抗腫瘍因子は、本明細書に説明されたものである。

一実施態様によれば、本組成物は、錠剤、カプレット剤、丸剤、硬又は軟カプセル剤、又は舐剤の形である。

一実施態様によれば、本組成物は、カシェ剤、分散性散剤、顆粒剤、懸濁剤、エリキシル剤、液剤、飲料品の形、又は例えば水又は果実ジュースを含む食品又は飲料品に添加することができる任意の他の形である。 一実施態様によれば、本組成物は、経腸製品、固形経腸製品又は液体経腸製品である。

一実施態様によれば、本組成物は更に、貯蔵又は投与後の本組成物の分解を防止又は低下する構成要素（抗酸化剤など）を１又は２以上含有する。

一実施態様によれば、本明細書において有用な組成物は、脂肪、脂肪酸又は脂質を運搬することができる任意の可食性消費製品を含む。 本組成物が、少なくとも１種の追加の治療剤として、ラクトフェリンのようなタンパク質因子を含有する場合、可食性消費製品は、タンパク質を運搬することができるものである。 好適な可食性消費製品の例は、焼成品、粉末、液体、菓子製品、再構成果実製品(reconstituted fruit product)、スナックバー、フードバー(food bard)、ミューズリーバー、スプレッド、ソース、ディップ、アイスクリーム、ヨーグルト及びチーズを含む酪農製品、酪農品及び非酪農品ベースの飲料品を含む飲料品(例えばミルクシェーキを含むミルク飲料品、ヨーグルト飲料品)、粉ミルク、酪農品及び非酪農品ベースのスポーツ栄養補助食品を含むスポーツ栄養補助食品、タンパク質製スプリンクルなどの食品添加物、及びデイリーサプリメント錠を含むダイエタリーサプリメント製品である。 この実施態様によれば、本明細書において有用な組成物は、粉末又は液体の形状の乳児用調合乳であってもよい。 好適な本明細書において有用な栄養組成物は、同様の形状で提供され得る。

本明細書において有用な組成物は、更に他の因子、例えばカルシウム、亜鉛、マグネシウム、セレン、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ２、複合糖質、食用油又は料理用油を含むことができ、油はパーム油、オリーブ油、大豆油、キャノーラ油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、ピーナツ油、グレープシード油、ゴマ油、堅果油、アーモンド油、カシューナッツ油、ヘーゼルナッツ油、マカダミアナッツ油、ピーカン油、ピスタチオ油、及びクルミ油などを含み、並びにその他の食用油は、アサイー油、アマランス油、アプリコット油、アルガン油、アーティチョーク油、アボカド油、ババス油、ベン油、カシス種子油、ルリジサ種子油、ボルネオタローナッツ油、ヒョウタン油、バッファローゴーアド油、イナゴマメ(アルガローバ)油、コフネヤシ油、コリアンダー種子油、月見草油、アマナズナ油、ヘンプ油、カポック種子油、ラレマンティア油、メドウフォームシード油、マスタード油、オクラ種子(ハイビスカス種子)油、エゴマ種子油、ペキ油、松の実油、ケシ種子油、プルーンカーネル油、カボチャ種子油、キヌア油、ニガー種子油、米糠油、茶(ツバキ)油、アザミ油、スイカ種子油、及びコムギ胚芽油、又はそれらの組合せを含む。

本明細書において有用な組成物は、経口又は非経口(局所、皮下、筋肉内及び静脈内を含む)投与を含むが、これらに限定されるものではない選択された任意の経路により、対象へ投与することができるように製剤されてもよい。

一般に、経口投与のための、本明細書において有用な規定食（例えば、食品、食品添加物又は補助食品）、栄養組成物又は医薬組成物は、公知の製剤技術に従い、熟練技術者により製剤されてよい。

従って、本発明に有用な医薬組成物は、意図された投与経路及び標準の医薬実践に関して選択された好適な医薬として許容し得る担体（賦形剤、希釈剤、補助剤及びそれらの組合せを含む）と共に製剤されてよい。 例えば、「Remington's Pharmaceutical Sciences」第16版、Osol, A.編集、Mack Publishing Co.、1980年を参照のこと。

好ましい投与経路は経口であるが、異なる作用物質に関する異なる経路を含む、複数の経路による投与を含む、任意の投与様式が、任意の本発明の組成物に適し得ることは理解されなければならない。 従って、本発明の任意の組成物の吸入（鼻腔内又は口腔内吸入）並びに経膣及び経直腸投与も企図される。 本発明の任意の組成物の髄内、硬膜外、及び関節内投与も企図される。 第二の投与経路による他の作用物質の個別、同時又は逐次の投与を伴った、第一の投与経路による乳脂肪又は乳脂肪類似物の、任意に少なくとも１種の追加因子と一緒の投与も企図され；例えば、少なくとも１種の追加の治療剤の外用投与を伴う乳脂肪の経口投与である。

本明細書において有用な剤形は、散剤、液剤、錠剤又はカプセル剤として経口投与されてよい。 好適な剤形は、乳化剤、抗酸化剤、矯味矯臭剤又は着色剤を含む追加の作用物質を必要に応じて含有し、又は腸溶性コーティングを有してよい。 好適な腸溶性コーティングは公知である。 腸溶性コーティングは、活性成分を取り囲み、胃内での活性成分の放出は防止するが、その剤形が胃を出た後の放出を可能にする。 本明細書において有用な剤形は、活性成分の即時放出、遅延放出、修飾された放出、持続放出、パルス型放出又は制御放出に適合されてよい。 好適な製剤は、乳化剤、抗酸化剤、矯味矯臭剤又は着色剤を含む追加の作用物質を必要に応じて含有してよい。

カプセル剤は、ゼラチン又はセルロースのような、任意の標準の医薬として許容し得る材料を含有することができる。 錠剤は、活性成分の固形担体及び滑沢剤との混合物を圧縮することにより、通常の手順に従い製剤することができる。 固形担体の例は、デンプン及び糖、ベントナイトを含む。 活性成分は、結合剤、例えば乳糖又はマンニトール、通常の充填剤、及び打錠用物質(tabletting agent)を含有する、硬シェル錠又はカプセルの形状で投与することもできる。 医薬組成物は、非経口経路を介して投与することもできる。 非経口剤形の例は、活性物質の水溶液、等張食塩水又は５％グルコース液、又は他の周知の医薬として許容し得る賦形剤を含む。 シクロデキストリン、又は当業者に周知の他の可溶性物質は、治療剤の送達のための医薬賦形剤として利用することができる。

注射剤形は、液体の溶液又は懸濁液として製剤されてよい。 注射前に液体中で溶液又は懸濁液とするのに適した固形形状も調製されてよい。 この剤形は、乳化されてもよい。 乳脂肪又は乳脂肪類似物、並びに存在する場合には少なくとも１種の追加因子は、例えば水、食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど及びそれらの組合せなどの担体と混合されてよい。

持続放出型調製品は、乳脂肪を、任意に少なくとも１種の追加因子と共に混入し調製することができる。 持続放出型調製品の好適な例は、乳脂肪、及び存在する場合には少なくとも１種の追加の治療剤、例えばラクトフェリン又はそれらの機能変種又は機能断片を含有する、固形の疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含む。 このマトリクスは、例えばフィルムのような成形品、又はマイクロカプセルの形状であってよい。 持続放出型マトリクスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド(US 3,773,919参照)、Ｌ−グルタミン酸とＬ−グルタミン酸エチルのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、及び分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばLUPRON DEPOT(商標)（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドで構成された注射用ミクロスフェア）を含む。

乳脂肪又は乳脂肪類似物、及び存在する場合には少なくとも１種の追加の治療剤を含有する局所用製剤は、ローション剤、クリーム剤、軟膏剤、泥膏剤又はサルバ剤として、そのような塗布のための公知の担体を使用し、調製されてよい。

本発明は、乳脂肪を、任意に少なくとも１種の追加の治療剤、及び少なくとも１種の抗腫瘍剤と共に含有する、非経口単位剤形にも関する。 好ましくは少なくとも１種の抗腫瘍剤は、パクリタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、フルオロウラシル、シクロホスファミド、メトトレキセート、Ｔ細胞共−刺激因子Ｂ７−１をコードしている発現プラスミド及び樹状細胞療法から選択される。 あるいはこの作用物質は、本明細書に説明されたもののいずれかから選択される。 好ましくは乳脂肪又は乳脂肪類似物は先に説明されている。

本発明において有用な組成物の有効性は、インビトロ及びインビボの両方において評価することができる。 例えば下記例を参照のこと。 簡単に述べると、一実施態様によれば、本組成物は、例えば、インビトロにおいて腫瘍形成又は腫瘍成長を阻害するその能力について試験することができる。 インビボ試験について、本組成物は、動物（例えばマウス）へ給餌されるか又は注射されてよく、その後腫瘍サイズ又は形態に対するその作用が評価される。 これらの結果を基に、適量範囲及び好適な投与経路を決定することができる。

本明細書において有用な組成物は、単独で、又は１又は２以上の他の治療剤と組合せて使用することができる。 この治療剤は、食品、飲料品、食品添加物、飲料品添加物、食品成分、飲料品成分、ダイエタリーサプリメント、栄養製品、医療食、栄養補助食品、薬剤又は医薬品であってよい。 この治療剤は、癌に関連した状態、又は貧血（大赤血球性及び小赤血球性貧血を含む）、血液学的抑制、粘膜炎、又は悪液質に関連した又はこれらを引き起こす状態に関連した１又は２以上の症状を軽減するために有効であることが好ましい。 好ましい治療剤は、抗腫瘍食品因子、免疫療法薬、造血薬、悪液質治療薬、及び粘膜炎治療薬であり、ラクトフェリンが特に好ましい治療剤である。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、本明細書に説明された抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の少なくとも１種との、個別、同時又は逐次投与のために製剤される。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、本明細書に説明された抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の少なくとも１種との、同時投与のために製剤される。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、本明細書に説明された抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の少なくとも１種との、逐次投与のために製剤される。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、乳脂肪又は乳脂肪類似物が、抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の作用を増強又は強化する抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法のためのアジュバントとして、含まれるか、又は送達される。 少なくとも１種の追加の治療剤は、個別に送達されてよい。

別の治療剤と組合せて使用される場合、本明細書において有用な組成物及び他の治療剤の投与は、同時又は逐次であってよい。 同時投与は、全ての成分を含有する単位剤形の投与、又は実質的に同一時点での個別の剤形の投与を含む。 逐次投与は、好ましくは本明細書において有用な組成物及び他の治療剤が提供される期間が重複しているような、異なるスケジュールに従う投与を含む。

本発明の組成物との同時投与に適している作用物質は、化学療法薬、免疫療法薬、悪液質治療薬、粘膜炎治療薬、造血薬、及び他の当該技術分野において公知の好適な作用物質を含む。 そのような作用物質は、経口、吸入、経膣及び経直腸投与に加え、好ましくは静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、髄内、硬膜外、皮内、経真皮（局所）、経粘膜的、関節内、及び胸膜内により非経口的に投与されることが好ましい。

加えて、本発明の組成物は、特定の状況の対象に恩恵があり得る追加の活性成分と共に製剤されてよいことが企図されている。 例えば、疾患過程の同じ又は異なる局面を標的とする治療剤が使用されてよい。

本明細書において有用な組成物と同時投与することができる好適な作用物質は、αｖβ３インテグリン受容体アンタゴニスト、抗エストロゲン薬又はＳＥＲＭ（選択的エストロゲン受容体モジュレーター）（非限定的に、タモキシフェン、ラロキシフェン、ラソフォキシフェン、トレミフェン、アゾルキシフェン、クロミフェン、ドロロキシフェン、イドキシフェン、レボルメロキシフェン、ズクロミフェン、エンクロミフェン、ナフォキシデン、及びそれらの塩を含む）、再吸収阻害薬、ビスホスホネート（非限定的に、アレンドロネート、クロドロネート、エチドロネート、イバンドロネート、インカドロネート、ミノドロネート、ネリドロネート、オルパドロネート、パミドロネート、ピリドロネート、リセドロネート、チルドロナート、ゾレドロネート、及びそれらの医薬として許容し得る塩を含む）、カルシウム受容体アンタゴニスト、カルシウム補充剤、カテプシンＫ阻害剤、二重効果骨作用薬(Dual Action Bond Agents(DABA))（非限定的に、ラネリック酸ストロンチウムを含む）、エストロゲン及びエストロゲン誘導体（非限定的に、１７β−エストラジオール、エストロン、結合型エストロゲン、ウマエストロゲン、及び１７β−エチニルエストラジオールを含む）、フラボノイド、葉酸、骨同化物質、オステオプロテジェリン、プロゲスチン及びプロゲスチン誘導体（非限定的に、ノルエチンドロン及び酢酸メドロキシ−プロゲステロンを含む）、液胞型ＡＴＰアーゼ阻害剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト、チアゾリジンジオン、カルシトニン、プロテインキナーゼ阻害剤、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、ＰＴＨ類似物、組換え副甲状腺ホルモン、成長ホルモン分泌促進因子、成長ホルモン放出ホルモン、インスリン−様増殖因子、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、ＢＭＰ拮抗作用の阻害剤、プロスタグランジン誘導体、線維芽細胞増殖因子、ビタミンＢ６、ビタミンＤ、ビタミンＤ誘導体（非限定的に、１，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールを含む）、ビタミンＫ、ビタミンＫ誘導体、大豆イソフラボン、カルシウム塩、フッ化塩、スタチン（非限定的に、ロバスタチン、シムバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、ロスバスタチン、及びピタバスタチンを含む）、及びそれらの組合せ、並びに当該技術分野において公知の他の好適な作用物質を含む。

一実施態様によれば、本明細書において有用な組成物は、ホエータンパク質、ホエータンパク質画分（酸性又は塩基性ホエータンパク質画分又はそれらの組合せ）、グリコマクロペプチド、ラクトフェリン、ビタミンＤ又はカルシウム、又はそれらの組合せなどの他の乳成分を含有し、又はこれと同時に又は逐次投与される。 有用な乳成分−含有組成物は、食品、飲料品、食品添加物、飲料品添加物、ダイエタリーサプリメント、栄養製品、医療食又は栄養補助食品などの組成物を含む。 これらの成分に関して強化された乳画分も、利用することができる。

先に列記された追加の治療剤（食品ベースの物質及び薬剤の両方）も、それらが本明細書において有用な組成物と個別に、同時に又は逐次投与される場合、本発明の方法において利用することができることは理解されなければならない。

理解されるように、投与される組成物の投与量、投与期間、及び全般的投薬計画は、対象の症状の重症度、治療される障害の種類、選択された投与様式、並びに対象の年齢、性別及び／又は全身の健康などの変数に応じて、対象間で異なることができる。 しかし一般的例として、本発明者らは、１日につき本明細書において有用な組成物約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約５０〜約５００ｍｇ／ｋｇ／日の投与を企図している。 一実施態様によれば、本発明者らは、本明細書において有用な医薬組成物の約０．０５ｍｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇ体重の投与を企図している。

投与は、１日１回投与量、又は好適であるならば複数の個別の分割量の投与を含んでよいことは理解されなければならない。 当業者は、その技術及び本開示に関連し、過度の実験をすることなく、所定の状態に関して有効な投薬計画（１日投与量及び投与時期を含む）を決定することができることは理解されるべきである。

本発明は、ラクトフェリン、カゼイン、又は他の保護タンパク質と組合せて、乳脂肪又は乳脂肪類似物を含んでなる、本質的になる、又はからなる、食餌組成物、栄養組成物又は経口医薬組成物にも関連している。 好ましくは、本組成物は、約０．１〜９９重量％の乳脂肪又は乳脂肪類似物、及び約０．１〜９９重量％のラクトフェリン、カゼイン又は他の保護的タンパク質から本質的になる。 より好ましくは、本組成物は、約０．５〜１０重量％の乳脂肪及び約１０〜９９重量％のラクトフェリン、カゼイン、又は他の保護的タンパク質から本質的になる。 最も好ましくは、本組成物は、約１重量％の乳脂肪及び約２０重量％のラクトフェリン、カゼイン、又は他の保護的タンパク質から本質的になる。 好ましくはこの乳脂肪又は乳脂肪類似物は、先に説明されている。

一実施態様によれば、本発明の組成物は、乳画分、好ましくは乳脂肪画分である。 一実施態様によれば、この乳画分は、少なくとも約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５又は９９重量％の乳脂肪を含有し、有用な範囲は、これらの値のいずれかから選択され得る（例えば、約１〜約９９重量％、約５〜約９９重量％、約１０〜約９９重量％、約１５〜約９９重量％、約２０〜約９９重量％、約２５〜約９９重量％、約３０〜約９９重量％、約３５〜約９９重量％、約４０〜約９９重量％、約４５〜約９９重量％、約５０〜約９９重量％、約５５〜約９９重量％、約６０〜約９９重量％、約６５〜約９９重量％、約７０〜約９９重量％、約７５〜約９９重量％、約８０〜約９９重量％、約８５〜約９９重量％、約９０〜約９９重量％、又は約９５〜約９９重量％）。 好ましくは、本組成物が少なくとも１種の追加の治療剤を含有する場合、この組成物は追加的に乳タンパク質画分を含んでよい。

一実施態様によれば、本乳脂肪は、乳脂肪画分として投与される。 好ましい乳脂肪画分は、クリーム、バター、無水乳脂肪（ＡＭＦ）（典型的にはクリーム又はバターの転相により製造）、バターミルク、バター漿液、硬質乳脂肪画分、軟質乳脂肪画分、スフィンゴ脂質画分、乳脂肪球膜画分、リン脂質画分、及び複合脂質画分、及びそれらの組合せ、並びにそれらの加水分解物、加水分解物の画分、並びに加水分解画分及び／又は非加水分解画分の組合せを含む。

好ましいリン脂質画分は、無水乳脂肪(Fonterra Co-operative Group Limited(ニュージーランド)から入手可能なものなど)から、薄層クロマトグラフィー及び／又は液体クロマトグラフィーによる分離により、調製することができる。 所望のリン脂質画分は、そのような分離技術を用い調製することができる。 例えば、３種のスフィンゴミエリンピーク全てを含有する画分、ホスファチジルコリンとホスファチジルイノシトールを類似量で、少量のホスファチジルセリン、及び３種のスフィンゴミエリンピークの一番目を含有する画分、又は大量のホスファチジルエタノールアミンとセラミドとリゾリン脂質を含有する画分は、慣習的に液体クロマトグラフィーにより調製される。 これらの画分の加水分解された形状は、例えば１％ＫＯＨ（エタノール中）の添加、並びにｐＨ９．５〜１０．０での攪拌及び１０分間の加熱により、調製することができる。 一般に加水分解された試料は好ましくは、更なる使用前に、例えば酢酸又は塩酸によりｐＨ７．０に中和され、加熱されたマントル内で窒素下でフラッシュ乾燥される。

市販のリン脂質画分も、本発明における使用に適している。 リン脂質濃縮物PC600(商標)リン脂質画分及びガングリオシドG600(商標)画分(両方ともFonterra Co-operative Group Limited(ニュージーランド)から入手可能)が、非加水分解型又は加水分解型のいずれに関わらず、好ましい。 再度これらの画分も、前述のように加水分解することができる。

一実施態様によれば、本組成物は、約０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０重量％の新鮮な、還元又は粉末状の全乳又は乳誘導体、好ましくは乳脂肪を含んでなるか、本質的になるか、又はからなり、有用な範囲は、これら前述の値のいずれかの間で選択されてよい（例えば、約０．１〜約５０％、約０．２〜約５０％、約０．５〜約５０％、約１〜約５０％、約５〜約５０％、約１０〜約５０％、約１５〜約５０％、約２０〜約５０％、約２５〜約５０％、約３０〜約５０％、約３５〜約５０％、約４０〜約５０％、及び約４５〜約５０％）。 乳誘導体は好ましくは、還元された、粉末状又は新鮮な乳、再構成された全乳粉、乳濃縮物、乳残留物、濃縮乳、限外濾過乳残留物、乳タンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、乳分離タンパク質（ＭＰＩ）、カルシウム枯渇した乳タンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、カゼイン、カゼイネート、乳脂肪、クリーム、バター、無水乳脂肪（ＡＭＦ）、バターミルク、バター漿液、硬質乳脂肪画分、軟質乳脂肪画分、スフィンゴ脂質画分、乳脂肪球膜画分、リン脂質画分、複合脂質画分、初乳、初乳画分、初乳タンパク質濃縮物（ＣＰＣ）、初乳ホエー、初乳由来の免疫グロブリン画分、ホエー、ホエー分離タンパク質（ＷＰＩ）、ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）、スイートホエー、乳酸ホエー、鉱酸ホエー、又は再構成されたホエー粉末、任意の乳又は初乳処理流れに由来する組成物、任意の乳又は初乳処理流れに由来する限外濾過又はマイクロ濾過により得られた残留物又は透過物に由来する組成物、又は任意の乳又は初乳処理流れのクロマトグラフィー（非限定的に、イオン及びゲル透過クロマトグラフィーを含む）分離により得られた漏出又は吸着画分に由来する組成物、及びそれらの組合せ、並びにそれらの加水分解物、及び加水分解物の画分、及び加水分解画分及び／又は非加水分解画分の組合せから選択される。

一実施態様によれば、本発明の方法は、以下に説明されるように、乳脂肪又は乳脂肪類似物及びラクトフェリン又はラクトフェリンの機能変種又は機能断片の少なくとも１種の混合物の投与を含む。 従って一実施態様によれば、組成物は、乳脂肪又は乳脂肪類似物及びラクトフェリン又はラクトフェリンの機能変種又は機能断片の少なくとも１種の混合物を含有する。 別の実施態様によれば、組成物は、乳脂肪又は乳脂肪類似物及びラクトフェリンの少なくとも１種の機能断片の混合物を含有する。

ラクトフェリン又はそれらの機能変種又は機能断片の少なくとも１種を含有する本発明の組成物は、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内及び腫瘍内投与を含むが、これらに限定されるものではない、非経口経路により投与されてもよい。 好ましくは、ラクトフェリンは、注射により非経口的に投与される。 本乳脂肪又は乳脂肪類似物は、個別の経路により投与されてよく、好ましくは経口的に投与される。 当業者は、過度の実験を行うことなく、非経口的投与に適した製剤を調製することができるであろう。

一実施態様によれば、この１日量範囲（任意の経路により）は、１日につき乳脂肪約０．００１〜２５０ｇ、好ましくは７０ｋｇの成人について１日につき０．００１〜１００ｇ、０．１〜３０ｇ、０．１〜４０ｇ、０．１〜５０ｇ、０．１〜６０ｇ、０．１〜７０ｇ、０．１〜８０ｇ、０．１〜１００ｇ、０．１〜１１０ｇ、０．１〜１２０ｇ、０．１〜１３０ｇ、０．１〜１４０ｇ、０．１〜１５０ｇ、０．１〜１６０ｇ、０．１〜１７０ｇ、０．１〜１８０ｇ、０．１〜１９０ｇ、０．１〜２００ｇ、０．１〜２１０ｇ、０．１〜２２０ｇ、０．１〜２３０ｇ、０．１〜２４０ｇ、又は０．１〜２５０ｇであり、好ましくは１０ｍｇ〜１．５ｇ／ｋｇ／日、好ましくは５０ｍｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ／日である。 より高い投与量が、短期の治療及び予防について好ましく、かつより低い投与量が、長期の治療及び予防について好ましい。

４． ラクトフェリンポリペプチド
ウシラクトフェリン（ｂＬｆ）は、牛乳中に存在する、７８ｋＤａの単鎖鉄結合糖タンパク質である。 これは、乳、初乳、涙液、鼻汁、唾液、胆汁、膵液、小腸粘膜、及び性器分泌液を含む、正常な細菌叢(flora)に通常に曝露されたほとんどの分泌物中に存在する天然の防御タンパク質である。 これは、好中球により分泌され、かつ細菌感染部位に高レベルで存在する。 これは、腸内の鉄吸収を調節し、腸の細胞成長を促進し、微生物感染に対し保護し、骨髄造血を調節し、全身の免疫応答を調節し、かつ癌の発達を防止することができる多機能的タンパク質である(Wardら、2002；Brock, JH、2002；Weinburg, ED、2001；Conneely, OM、2001；Tomitaら、2002、及びTsudaら、2002において検証)。

先に列記された有用なラクトフェリンポリペプチド及び断片に加え、既報の本発明の方法において有用であるラクトフェリンアミノ酸配列及びｍＲＮＡ配列の例は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：ヒトラクトフェリンのアミノ酸配列(寄託番号NP 002334)及びｍＲＮＡ配列(寄託番号NM 002343)；ウシラクトフェリンのアミノ酸配列(寄託番号NP 851341及びCAA38572)及びｍＲＮＡ配列(寄託番号X54801及びNM 180998)；ヤギラクトフェリンのアミノ酸配列(寄託番号JC2323、CAA55517及びAAA97958)及びｍＲＮＡ配列(寄託番号U53857)；ウマラクトフェリンのアミノ酸配列(寄託番号CAA09407)及びｍＲＮＡ配列(寄託番号AJ010930)；ブタラクトフェリンのアミノ酸配列(寄託番号NP 999527、AAL40161及びAAP70487)及びｍＲＮＡ配列(寄託番号NM 214362)；マウスラクトフェリンのアミノ酸配列(寄託番号NP 032548)及びｍＲＮＡ配列(寄託番号NM 008522)；水牛ラクトフェリンのアミノ酸配列(寄託番号CAA06441)及びｍＲＮＡ配列(寄託番号AJ005203)；並びに、ラクダラクトフェリンのアミノ酸配列(寄託番号CAB53387)及びｍＲＮＡ配列(寄託番号AJ131674)。 これらの配列は、野生型又は変種型で本発明に従い使用することができる。 これらの配列によりコードされたポリペプチドは、公知の技術を用い、天然の給源から単離されるか、組換えタンパク質として作製されるか、又は有機合成により作製されてよい。

有用なポリペプチド及び変種を作製する方法は、当該技術分野において公知でありかつ以下に考察されている。 有用な組換えラクトフェリンポリペプチド及び断片並びにそれらを作製する方法は、米国特許明細書US 5,571,691、US 5,571,697、US 5,571,896、US 5,766,939、US 5,849,881、US 5,849,885、US 5,861,491、US 5,919,913、US 5,955,316、US 6,066,469、US 6,080,599、US 6,100,054、US 6,111,081、US 6,228,614、US 6,277,817、US 6,333,311、US 6,455,687、US 6,569,831、US 6,635,447、US 2005-0064546及びUS 2005-0114911に開示されている。

有用な変種は、ウシラクトフェリン変種ｂＬｆ−ａ及びｂＬｆ−ｂも含む(Tsujiら、(1989)；Yoshidaら、(1991))。 更なる有用な変種は、グリコシル化されたラクトフェリン及びラクトフェリン無グリコシル型(Pierceら、(1991)；Metz-Boutigueら、(1984)；van Veenら、(2004))、並びにグリコシル化変異体（グリコシル化の変異点又は変種グリコシル側鎖を有する）を含む。

有用な断片は、Ｎローブ断片及びＣローブ断片(Bakerら、2002)及びラクトフェリン結合ポケットを保持するいずれか他のラクトフェリンポリペプチド、例えば切断型ラクトフェリンポリペプチドなどを含む。 他のラクトフェリン断片は、公開された国際特許出願WO2007/043900に開示されており、これは参照により本明細書に組入れられている。

有用な切断型ラクトフェリンポリペプチドは、約１〜約３００個のアミノ酸、好ましくは約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５又は３００個又はそれよりも多いアミノ酸により切断されたポリペプチドを含み、但し切断型ポリペプチドが、Ｎローブ又はＣローブ金属イオン結合ポケットの少なくとも１つを保持していることを条件として、Ｎ末端で、Ｃ末端で、又はＮ末端及びＣ末端の両方で切断されたポリペプチドを含む。 ウシラクトフェリン（シグナル配列を含まず）の残基Ａｓｐ６０、Ｔｙｒ９２、Ｔｙｒ１９２、及びＨｉｓ２５３は、Ｎローブにおけるアミノ酸金属イオンリガンドであることが報告されている。 ウシラクトフェリン（シグナル配列を含まず）の残基Ａｓｐ３９５、Ｔｙｒ４３３、Ｔｙｒ５２６、及びＨｉｓ５９５は、Ｃローブにおけるアミノ酸金属イオンリガンドであることが報告されている(Karthikeyanら、1999)。

本発明での使用のためのラクトフェリンの変種又は断片の候補は、以下を含むが、これらに限定されるものではない技術により作製することができる：野生型タンパク質を変異する技術(Sambrookら、(1989)及びそのような技術の別所での考察を参照のこと)であり、例えば非限定的に、野生型ラクトフェリンの部位特異的変異誘発、及び得られるポリヌクレオチドの発現など；発現可能なポリヌクレオチド断片を作製する技術、例えば、ランダムプライマー又は選択されたプライマーのプールを使用するＰＣＲなど；野生型又は変種ラクトフェリンポリペプチドの完全又は部分的タンパク質分解又は加水分解の技術；並びに、ポリペプチドの化学合成の技術。 ラクトフェリンの変種又は断片は、ラクトフェリンＤＮＡ又はＲＮＡ、又はそれらの変種又は断片からの、組換え分子としての発現により調製することができる。 ラクトフェリンの変種又は断片をコードしている核酸配列は、非限定的にアスペルギルス属(Aspergillus)などの真核細胞又は非限定的に大腸菌(E. coli)などの細菌細胞を含む細胞における発現に適したベクターに挿入することができる。 ラクトフェリン変種又は断片は、非限定的にエラープローンＰＣＲ及びＤＮＡシャッフリングを含む公知のＰＣＲ技術を用いて調製することができる。 エラープローンＰＣＲは、ＤＮＡポリメラーゼのコピーの忠実性が低い条件下で、ＰＣＲを実行し、その結果ＰＣＲ産物の全長にわたり高い割合で点変異が得られる方法である(Leungら、(1989)；Cadwellら、(1992))。 ＤＮＡシャッフリングは、配列相同性を基にしたＤＮＡ分子のランダム断片化、それに続くＰＣＲ反応におけるプライマー伸長による交差の固定に起因する、インビトロにおける異なるが高度に関連したＤＮＡ配列のＤＮＡ分子間の強制された相同組換えをいう(Stemmer、(1994))。 そのような方法における使用に適したラクトフェリン核酸配列は、先に列記されたものを含むか、又は例えば組織ＲＮＡ単離体の逆転写−ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）などを含む公知の方法により作製されたものを含む。 ＲＴ−ＰＣＲに適したプライマーは、先に列記されたｍＲＮＡ配列を参照し、デザインすることができる。 ＲＴ−ＰＣＲの市販のキットが利用可能である(例えば、Cells-to-cDNA(商標)キット、Ambion、USA)。

ラクトフェリンの変種又は断片は、公知の合成方法により作製することもできる(例えばKimmerlinら、2005を参照のこと)。

金属イオン結合しているラクトフェリンの変種又は断片は、例えば、非限定的に金属親和性クロマトグラフィーを含む、金属結合しているポリペプチドを単離するための公知の技術により得ることができる。 候補ラクトフェリン変種又は断片は、Ｆｅ ³⁺のような遊離の又は固定された金属イオンに接触され、好適な様式で精製されてよい。 例えば候補変種又は断片は、イミノ二酢酸又はトリス（カルボキシメチル）エチレンジアミンリガンドを含むクロマトグラフィーマトリクスにキレートすることにより固定された金属イオンと、中性ｐＨで接触されてよい。 結合された変種又は断片は、使用された緩衝液のｐＨ及びイオン強度を低下することにより、支持マトリクスから溶出され、かつ収集されてよい。 金属結合した変種又は断片は、先に及び以下に説明された方法並びに下記実施例に説明された方法により調製されてよい。

ラクトフェリンの機能変種、断片及び加水分解物は、以下に説明された実施例において示された方法論を使用することによる、ラクトフェリンの変種、断片及び加水分解物の選択、並びに本発明の方法におけるそれらの有効性の評価により、得ることができる。

一実施態様によれば、本ラクトフェリンは、ヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、水牛、ラクダ、ヤク、ウマ、ロバ、ラマ、ウシ又はヒトラクトフェリンを含むが、これらに限定されるものではない、任意の哺乳類ラクトフェリンであってよい。 好ましくは、本ラクトフェリンは、ウシラクトフェリンである。

別の実施態様によれば、本ラクトフェリンは、組換えヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、水牛、ラクダ、ヤク、ウマ、ロバ、ラマ、ウシ又はヒトラクトフェリンを含むが、これらに限定されるものではない、任意の組換え哺乳類のラクトフェリンである。 好ましくは本ラクトフェリンは、組換えウシラクトフェリンである。 組換えラクトフェリンは、無細胞発現系において、又はトランスジェニック動物、植物、真菌又は細菌、又は他の有用な種における発現により作出することができる。

更に別の実施態様によれば、本ラクトフェリンは、乳、好ましくはヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、水牛、ラクダ、ヤク、ウマ、ロバ、ラマ、ウシ又はヒトの乳から単離される。 好ましくは本ラクトフェリンは、陽イオン交換クロマトグラフィー、それに続く限外濾過及びダイアフィルトレーションにより、乳から単離される。

５． 乳からのラクトフェリンの単離
以下は、牛乳からのラクトフェリン単離の例証的手順である。 新鮮な脱脂乳（７Ｌ、ｐＨ６．５）は、ミリＱ水中で平衡化されたＳセファロースファストフロー３００ｍｌカラムを、流量５ｍｌ／分及び４℃で通過される。 未結合のタンパク質は、２．５床量の水により通り抜け洗浄され、かつ結合したタンパク質は、各々およそ２．５床量の０．１Ｍ、０．３５Ｍ、及び１．０Ｍ塩化ナトリウムにより、段階的に溶出される。 １Ｍ塩化ナトリウム中に淡いピンク色のバンドとして溶出するラクトフェリンは、単独の画分として収集され、ミリＱ水に対し透析され、その後凍結乾燥される。 凍結乾燥された粉末は、２５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）中に溶解され、Ｓセファロースファストフロー上で、前記緩衝液中１Ｍまでの塩化ナトリウム勾配により、流量３ｍｌ／分で再クロマトグラフィーが施される。 ゲル電気泳動及び逆相ＨＰＬＣにより決定された十分な純度のラクトフェリンを含有する画分は、一緒にされ、透析され、かつ凍結乾燥される。 ラクトフェリンの最終精製は、０．１５Ｍ塩化カリウムを含有する８０ｍＭリン酸二カリウム（ｐＨ８．６）中の、セファクリル３００上のゲル濾過により実現される。 選択された画分は一緒にされ、ミリＱ水に対し透析され、凍結乾燥される。 この調製品の純度は、ＨＰＬＣ分析により同定されたように９５％よりも大きく、及びラクトフェリンの鉄飽和型に関するスペクトル比の値（２８０ｎｍ／４６５ｎｍ）で１９以下である。

ラクトフェリンを含む有用な乳画分の単離のその他の例証的方法は、Katoらの米国特許第5,932,259号、及びTakadaらの米国特許第5,976,597号に開示されている。

６． ラクトフェリンの金属イオン飽和又は枯渇
鉄飽和は、２：１モル過剰量の５ｍＭ鉄（ＩＩ）ニトリロ三酢酸(Foley及びBates、(1987))の、１０ｍＭ炭酸水素ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ｐＨ７．８）中の精製ラクトフェリンの１％溶液への添加により実現される。 過剰な鉄（ＩＩ）ニトリロ三酢酸は、ミリＱ水１００容量（２回交換）に対する、４℃で合計２０時間の透析により除去される。 その後鉄負荷された（ホロ−）ラクトフェリンが、凍結乾燥され得る。 下記実施例において説明されるように、少ない金属イオンドナーを提供することにより、変動する程度の鉄飽和が得られる。 金属イオンラクトフェリンを調製する別法は、公開された国際特許出願WO 2006/132553に開示されており、これは参照により本明細書に組入れられている。 金属イオンラクトフェリン組成物の品質保持を維持又は改善する方法は、国際特許出願WO 2006/096073に開示されており、これは参照により本明細書に組入れられている。

鉄枯渇された（アポ−）ラクトフェリンは、水中高度に精製されたラクトフェリン試料の１％溶液の、ＥＤＴＡ二ナトリウム５００ｍｇ／Ｌ含有する０．１Ｍクエン酸（ｐＨ２．３）３０容量に対する、４℃で３０時間の透析により調製される(Masson及びHeremans、(1966))。 その後クエン酸及びＥＤＴＡは、３０容量のミリＱ水（１回交換）に対する透析により除去され、得られる無色の溶液は、凍結乾燥される。

ラクトフェリンポリペプチドは、鉄イオン（天然のラクトフェリンポリペプチド中として）又は非−鉄金属イオン（例えば、銅イオン、クロムイオン、コバルトイオン、マンガンイオン、又は亜鉛イオン）を含むことができる。 例えば牛乳から単離されたラクトフェリンは、鉄を枯渇し、その後別の種類の金属イオンを負荷することができる。 例えば、銅負荷は、先に説明された鉄負荷と同じ方法に従い実現することができる。 ラクトフェリンの他の金属イオンの負荷に関しては、Ainscoughらの論文(1979)の方法を使用することができる。

一実施態様によれば、この金属イオンは、アルミニウム、ビスマス、銅、クロム、コバルト、金、鉄、マンガン、オスミウム、白金、ルテニウム、亜鉛、又はラクトフェリン金属イオン結合ポケット内に特異的に配位する他のイオン類からなる群から選択されるイオンである。 この金属イオンは、鉄イオンが好ましい。

本発明において使用するための組成物の調製において、ラクトフェリンポリペプチド又は金属イオン-結合しているラクトフェリン断片は、単独の種類の、又は異なる種類のものであることができる。 例えばこのポリペプチド又は断片は、各々、異なる数の金属イオン又は異なる種類の金属イオンを含むことができるか；又は、このポリペプチドの長さは、変動することができ、例えば一部は完全長ポリペプチドであり、かつ一部は断片であり、並びにこれらの断片は各々、完全長ポリペプチドの特定の部分を表すことができる。 このような調製品は、天然の給源から、又は異なるラクトフェリンポリペプチド種の混合により得ることができる。 例えば、異なる長さのラクトフェリンポリペプチドの混合物は、完全長ラクトフェリンポリペプチドのプロテイナーゼ消化(完全な又は部分的)により調製することができる。 消化の程度は、当該技術分野において周知の方法に従い、例えば以下に説明されているような、プロテイナーゼの量及びインキュベーション時間を操作することにより制御することができる。 完全な消化は、完全長ラクトフェリンポリペプチドの様々な断片の混合物を生じ；部分消化は、完全長ラクトフェリンポリペプチドと様々な断片の混合物を生じる。

７． ラクトフェリン断片又はラクトフェリン加水分解物の調製
有用なラクトフェリン断片は、公開された国際特許出願WO 2006/054908及びWO 2007/043900に開示されており、各々その全体が参照により本明細書に組入れられている。 候補の機能断片を含む加水分解物は、トリプシン又はキモトリプシンのような、公知の切断特異性のある好適な酵素の選択、並びにインキュベーションのｐＨ、温度、時間及び酵素対基質比によるタンパク質分解の制御／制限により、調製することができる。 このような単離されたペプチドの純化は、特異的エンドペプチダーゼの使用により行うことができる。 例として、ウシラクトフェリンは、ウシラクトフェリンのペプシンによる、３７℃、ｐＨ２．０で４５分間の切断(Facon及びSkura、1996)によるか、又は３％（基質の重量％）酵素を使用する、３７℃、ｐＨ２．５で、４時間の切断(Tomitaら、1994)により作製することができる。 その後このペプチドは、逆相ＨＰＬＣ(Tomitaら、1994)、又は疎水性相互作用クロマトグラフィー(Tomitaら、2002)により単離される。

あるいは、ラクトフェリンペプチドは、Viejo-Diazらの論文(2003)において説明された、ヒトカリオシン-1(NH2-FFSASCVPGADKGQFPNLCRLCAGTGENKCA-COOH)及びラクトフェリン由来のペプチド(NH2-TKCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR-COOH)；並びに、Nguyenらの論文(2005)において説明された、ウシラクトフェリンペプチド(NH2-RRWQWRMKKLG-COOH)；並びに、van der Kraanらの論文(2004)において説明された、ラクトフェランピン(NH2-WKLLSKAQEKFGKNKSR-COOH)及びより短い断片：について、よく確立された合成Ｆｍｏｃ化学により作製することができる。

概して、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用し、加水分解物を分子量標準と比較することにより、加水分解の程度を推定することができる。 サイズ排除クロマトグラフィーを使用し、加水分解物内の様々な種を分離し、かつ分子量分布プロファイルを推定することができる。

好ましい加水分解法において、ウシラクトフェリンは、５０ｍＭトリス（ｐＨ８．０）、５ｍＭ ＣａＣｌ ₂中に２０ｍｇ／ｍＬとなるよう溶解された。 トリプシン(Sigma T8642、ＴＰＣＫ処理、ウシ膵臓由来のＸＩＩ型、１１７００Ｕ／ｍｇタンパク質）は、酵素基質重量比１：５０で添加され、この混合物は、２５℃で３時間インキュベーションされた。 この反応は、ＰＭＳＦの最終濃度１ｍＭの添加により停止され、消化の程度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりモニタリングされた。 このトリプシン消化物（４ｍＬ）を、５０ｍＭトリス、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ８．０中で、セファクリルS300(Amersham GE)（９０ｃｍ×２．６ｃｍカラム）上のゲル濾過に適用した。 次にウシラクトフェリンの大きい断片(Legrandら、1984)を含有する好適な画分は、Ｓセファロースファストフロー(Amersham GE)（１５ｃｍ×１．６ｃｍカラム）上で、リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）及び１Ｍ ＮａＣｌまでの塩勾配を使用する、陽イオン交換クロマトグラフィーに供された。 ＣローブとＮ＋Ｃローブの最終分離は、前述のセファクリルS300上の、しかし溶離液として１０容量％酢酸を使用する、更なるゲル濾過により実現された(Mataら、1994)。 透析され（ミリＱ水に対し）かつ凍結乾燥された断片の同一性は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＥｄｍａｎ Ｎ末端配列決定により確認された。

別法において、前述のようなトリプシン消化物は、Supertiらの論文(2001)のように、Vydac C18カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣにより分離され、Ｃローブ及びＮローブ断片に相当する高質量断片が記録された。 同一性は、ＭＡＬＤＩ ＭＳにより確認された。

一実施態様によれば、本明細書において有用な加水分解物は、１又は２以上の機能断片を含む。

８． 抗腫瘍食品因子
抗腫瘍食品成分は、Parkらの論文(2002)及びKris-Ethertonの論文(2002)において検証されている。

一実施態様によれば、抗腫瘍食品因子は、ビタミンＤ（ビタミンＤ１［ルミステロール］、ビタミンＤ２［カルシフェロール又はエルゴカルシフェロール］、ビタミンＤ３［コレカルシフェロール］、ビタミンＤ４［２２−ジヒドロエルゴカルシフェロール］及びビタミンＤ５［シトカルシフェロール］及びビタミンＤ５［７−デヒドロシトステロール］を含む）、ビタミンＤ類似物（非限定的に、以下に言及されるものを含む）、大豆タンパク質、１又は２以上の大豆成分（非限定的に、大豆由来のω−３脂肪酸、大豆由来のイソフラボン（例えばゲニステイン及び／又はダイゼイン）、及びルナシンペプチド(米国特許US 6,107,287及びUS 6,544,956に開示されたものなどで、これらの特許は参照により本明細書に組み入れられており、これらは寄託番号AAE49016、AAE49017、AAP62458及びAAP62459を有する)を含んでなる群から選択されるものを含む）、ポリフェノール（例えば、緑茶又は紅茶由来）、リコピン（又は、例えばトマトジュース）、フスマ、フラボノイド（又は、例えばリンゴジュース）、イノシトール、レスベラトロル（又は、例えばブドウジュース）、プロポリス、マッシュルーム抽出物、アントシアニン（又は、例えばベリージュース）、アーモンド、朝鮮人参、カゼイン加水分解物、及びそれらの組合せから選択される。

本明細書において有用なビタミンＤ化合物の例は、カルシトリオール（１−α，２５−ジヒドロキシ［１，２５（ＯＨ）２Ｄ３］；１，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロール）、１，２５−ジヒドロキシエルゴカルシフェロール、カルシフェジオール（２５−ヒドロキシコレカルシフェロール）、２５−ヒドロキシエルゴカルシフェロール、エルゴカルシフェロール（及びその前駆体エルゴステロール）、コレカルシフェロール（及びその前駆体７−デヒドロコレステロール）、ドキセルカルシフェロール、ジヒドロタキステロール、パラカルシトール、セオカルシトール［ＥＢ １０８９；１（Ｓ），３（Ｒ）−ジヒドロキシ−２０（Ｒ）−（５'−エチル−５'−ヒドロキシヘプタ−１'（Ｅ），３'（Ｅ）−−ジエン−１'−イル）−９，１０−セコプレグナ−５（Ｚ），７（Ｅ），１０（１９）−トリエン）］に加え、それらの誘導体、類似物、ホモログ、前駆体及び代謝産物を含むが、これらに限定されるものではない。

一実施態様によれば、抗腫瘍食品因子は、抗腫瘍食品及び抗腫瘍食品成分からなる群から選択される。

一実施態様によれば、抗腫瘍食品は、果実、野菜、マメ(legume)、堅果、種子、穀物、香辛料、香草、キノコ(fungi)、プロバイオティックス、リンゴ、アプリコット、豆(例えば、緑豆、黒豆)、ヒヨコ豆、ベリー類(例えばブルーベリー、ラズベリー)、アブラナ科野菜(例えば、ブロッコリー、芽キャベツ、キャベツ、カリフラワー、コラード、ケール、コールラビ、チンゲン菜、ダイコン、カラシ菜、及びカブ)、ニンジン、チーズ、トウモロコシ製品、クランベリー、ナス、亜麻仁、アリウム属野菜[例えば、ニンニク、タマネギ、ネギ(スカリオン)、チャイブ、リーキ、シャロット]、ショウガ(ショウガ成分ジンゲロール、パラドール、及びβ-エレメネ)、朝鮮人参、ブドウ果実、ブドウ、ブドウジュース、緑茶又は紅茶、ホースラディッシュ、キウイフルーツ、クマラ、リーキ、レモン、ライム、ノニ果実、タマネギ、オレンジ、ピーナツ、コショウ、ライムギ製品、サケ、豆乳製品、ソイナッツ、大豆、スカッシュ、タンジェリン、トマト、フスマ製品、米、パパイヤ、ポポー、モモ、柿、イチゴ、タロイモ葉、グリーンバナナ、マンゴー、クレソン、ヤムイモ、アーモンド、及びそれらの組合せを含む、抗癌特性を有する機能食品又はそれらの誘導体であってよい。

一実施態様によれば、抗腫瘍食品成分は、大豆タンパク質、１又は２以上の大豆成分（非限定的に、大豆由来のω−３脂肪酸、大豆由来のイソフラボン（例えばゲニステイン及び／又はダイゼイン）、及びルナシンペプチド(米国特許US 6,107,287及びUS 6,544,956に開示されたものなどで、これらの特許は参照により本明細書に組み入れられており、これらは寄託番号AAE49016、AAE49017、AAP62458及びAAP62459を有する)を含んでなる群から選択されるものを含む)、サメ軟骨、ニンニク抽出物、セレン補給、茶抽出物(例えば、緑茶又は紅茶のポリフェノール／カテキン／エピガロカテキン没食子酸エステル）、クルクミノイド、カフェイン、カルノシン酸、カプサイシン、セスキテルペンラクトン（例えばパルテノライド、コスツノライド、ヨモギン）、コチレニンＡ、フムロン、アルギニン、グルタミン、緑黄色野菜由来のレチノイド、カカオ粉末、リコピン、アブラナ科野菜由来のグルコシノレート、有機硫黄化合物（アリシン、ジアリルスルフィド、ジアリルジスルフィド、アリルメルカプタン）、Ｎ−アセチルシステイン、アリウム化合物、カロテノイド（非限定的にβ−カロテンを含む）、クマリン、食物繊維、ジチオールチオン、フラボノイド（例えばミリセチン、ケルセチン、ルチン）、インドール、イノシトール、ヘキサリン酸イノシトール、イソフラボン（ゲニステイン、ダイゼイン）、イソチオシアネート、モノテルペン（例えば、リモネン、ペリリル酸、メトール、カルベオール）、フスマ、ジテルペンエステル、ポリフェノール、リボフラビン５'−リン酸、シンナムアルデヒド、バニリン、ウンベリフェロン、フェノール（例えばケイヒ酸）、ポリフェノール、植物ステロール（例えばシトスタノール、スチグマステロール、カンペステロール）、アシルグリコシルステロール、植物ステロイド、プロテアーゼ阻害剤、サポニン、イソプレノイド、テルペノイド、トコトリエノール、レチノイド、エラグ酸、ポリアミン、レスベラトロル、ヒドロキシケイヒ酸［例えば、（Ｅ）−フェルラ酸及び（Ｅ）−ｐ−クマリン酸］、クロロフィリン、プロポリス及びその成分の一部（例えば、カフェー酸、フェニルエステル、アルテリピンＣ）、赤ワイン、タンニン酸、マッシュルーム抽出物、アントシアニン（例えばシアニジン）、マッシュルームβ−グルカン（例えばレンチナン）、ホウレンソウ葉抽出物、ホウレンソウ葉由来の天然の抗酸化物の混合物、ノニジュース、ビタミンＡ、Ｂ６、Ｃ及びＥ、タガヤサン抽出物、サトウダイコン抽出物、レモングラス及びササ抽出物、カルノシン酸、カプサイシン、セスキテルペンラクトン（例えば、パルテノライド、コスツノライド、ヨモギン）、コチレニンＡ、フムロン、及びω−３脂肪酸（エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含む）、並びにそれらの組合せからなる群から選択することができる。

一実施態様によれば、抗腫瘍食品成分は、ビタミンＤ、ビタミンＢ６、タウリン、アルギニン、グルタミン、α−ラクトアルブミン、初乳ホエー、完全又は部分カゼイン加水分解物、免疫刺激因子であることがわかっているカゼインペプチド（類）（例えば、イムノカソキニン、カゼイノホスホペプチド、カソモルフィン、カソキニン）、コロストリニンペプチド、初乳、リン酸カルシウム及びリン酸カルシウム、葉酸エステル、システイン強化乳タンパク質、ラクトペルオキシダーゼ、ＨＡＭＬＥＴ（α−ラクトアルブミン−オレイン酸複合体）、プラスミノーゲンの断片、プロサポシン、サポシン、カタラーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、脂肪酸結合型タンパク質、リボヌクレアーゼ、β−グルクロニダーゼ阻害剤、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤ３６、インターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン２（ＩＬ−２）、キニノーゲン及び断片、キニノスタチン、シスタチン、フェツイン、好中球ディフェンシン、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、キチナーゼ−様タンパク質、ジストログリカン、プロスタシン、ＳＰＡＲＣ−様タンパク質、及びトロンボスポンジン、又はそれらの組合せからなる群から選択される。

大豆タンパク質
大豆は、心臓の健康及び健康な骨を助け、癌を予防し、かつ閉経後症状を緩和する作用物質として普及されている(Kerwin、2004)。 大豆の抗癌作用は、含硫アミノ酸含量が動物タンパク質よりも低い大豆タンパク質それ自身に起因し、かつ動物における発癌物質が誘導した腫瘍の発達を阻害することが示されている。 抗癌活性を伴う他の大豆成分は、プロテアーゼ阻害剤、例えば抗癌作用又はプロ-癌作用を有することができるゲニステインのようなイソフラボン、及びサポニンを含む。

ビタミンＤ及びビタミンＤ受容体リガンド
ビタミンＤは、抗癌特性を有することが広く報告されている(Harrisら、2004)。 加えてビタミンＤは、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、心血管疾患、及び骨粗鬆症を含む、癌とは別の多くの一般的かつ重篤な疾患の発生のリスクを低減すると考えられている(Holick、2004)。 酪農製品は、乳及び他の酪農製品がビタミンＤにより強化されているニュージーランドのような国々における、ビタミンＤの主な食事による供給源である。 ビタミンＤ３は、肝臓において２５−ヒドロキシル化され、かつ腎臓及び末梢器官において活性ホルモン型１−α，２５−ジヒドロキシ［１，２５（ＯＨ）２Ｄ３］（カルシトリオール）へ転換され、これは細胞の成長及び発達に関連した複数のプロセスに影響を及ぼす。 これは、細胞周期のＧ０／Ｇ１期での停止を引き起こし、このことはＩＧＦ−１のような成長促進因子のダウンレギュレーション、及びトランスフォーミング増殖因子βのような負の成長レギュレーターのアップレギュレーションにつながることにより、腫瘍細胞に対し抗増殖作用を示す。 これは、腫瘍アポトーシスを引き起こし、かつ腫瘍血管新生及び転移の阻害剤である(Nakagawaら、2005)。 活性１，２５（ＯＨ）２Ｄ３代謝産物の腫瘍成長を阻害するために必要な投与量での投与には、高カルシウム血症毒性が随伴している。 高カルシウム血症を誘導しない１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の合成構造類似物は、動物モデルにおいて腫瘍成長を阻害し、かつ腫瘍の退縮を誘導することが報告されている(Colstonら、2003；Nolanら、1998；van Weeldenら、1998)。 ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）リガンドの抗癌活性は、膀胱、乳房、結腸、子宮内膜、腎臓、肺、膵臓、前立腺の癌腫、軟組織及び骨の肉腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、メラノーマ、扁平上皮癌(SCC)、及びその他のモデルにおいて明らかにされている(Beerら、2004)。

第Ｉ相試験は、間欠的な弱い投薬は、実質的用量漸増を可能にし、かつカルシトリオール濃度の潜在的治療ピークを生じたことを明らかにした(Beerら、2001)。 第ＩＩ相試験は、アンドロゲン依存型前立腺癌の患者において週１回のスケジュールで投与された高用量１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ及びドセタキセルの併用は、抗腫瘍活性のレベルを増強することを報告した(Beerら、2003)。

多くの研究が、ヒトにおける１日摂取量１０，０００ＩＵ（太陽光の非存在下）は安全であることを示している。 ビタミンＤ毒性のほとんどの症例は、数年間にわたる１日に５０，０００ＩＵ以上の摂取後に生じることが報告されている。 ビタミンＤは、特に毒性はないことについては一部異論がある(Saul、2003)。

ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）リガンドとして作用しかつ本明細書において有用である化合物は、概して以下の３群に分けられる：（１）セコステロイド足場を有する、「デルタノイド」、（２）ビタミンＤのＡ環は有するが、Ｃ環又はＤ環の一方は破壊されている、「シュード−セコステロイド」、及び、（３）セコステロイドとは構造的に異なる、「非−セコステロイド」。 有用なビタミンＤ類似物の総説については、Guytonら、2003；Guytonら、2001；Pelegら、2003；及び、Yeeら、2005を参照のこと。

有用なビタミンＤ類似物は、その全体が引用により本明細書中に組み込まれている国際出願PCT/NZ2007/000389(及びこの出願に列記された参考文献)に開示されている。

本発明の方法におけるこれらの類似物の評価は、下記実施例に説明されたプロトコールに従い実行されてよい。

９． 免疫増強
本発明者らは、乳脂肪は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、免疫系を刺激しかつ増強することができることを認めた。 特に下記実施例において示されるように、乳脂肪は、任意に少なくとも１種の追加因子と共に、抗原特異性細胞溶解活性（免疫細胞、特に細胞傷害性Ｔリンパ球の活性）及び／又はＮＫ細胞活性の発生を刺激し、抗原に対する細胞性免疫応答を改善し（少なくとも細胞傷害性Ｔリンパ球の活性を通じて）、免疫防御を改善し（少なくとも細胞傷害性Ｔリンパ球及び／又はＮＫ細胞の活性を回復し、かつサイトカイン産生を増強することにより）、免疫防御を回復し（少なくとも細胞傷害性Ｔリンパ球の活性及び／又はＮＫ細胞活性を回復又は刺激し、かつサイトカイン産生を増強することにより）、並びにプロ炎症性及び免疫刺激性メディエーター（Ｔｈ１及びＴｈ２サイトカイン）を作製することができる。 乳脂肪画分などを含む、乳脂肪の任意の機能変種は、少なくとも１種の追加の治療剤と組合せるかどうかに関わらず、乳脂肪と同様の活性を示すであろうと考えられている。 同様に、ラクトフェリンが投与される場合には、ラクトフェリンの機能変種又は機能断片は、ラクトフェリンと類似した活性を示すであろうと考えられている。

下記実施例に示されるように、乳脂肪は、抗原特異性細胞溶解活性及び／又はＮＫ細胞活性の発生を改善し、抗原に対する細胞性免疫応答を改善し、免疫防御を改善し、並びに免疫防御を回復することにおいて有効である。

従って本発明は、乳脂肪又は乳脂肪類似物を、任意に１又は２以上の抗腫瘍剤のような、少なくとも１種の追加の治療剤と共に、対象へ投与することを含む、対象の免疫系を刺激する方法に関する。 本発明は、対象の腫瘍内でＴｈ１及びＴｈ２サイトカインの産生を増大させる方法、対象の腸内でＴｈ１及びＴｈ２サイトカインの産生を増大させる方法、対象の全身循環内のＴｈ１及びＴｈ２サイトカインのレベルをを上昇させる方法、並びに対象の抗腫瘍免疫応答を増強する方法にも関する。

本発明のこれらの方法の一実施態様によれば、本対象は、先に説明されたような癌療法を受けているか、又は受ける予定である。

一実施態様によれば、本対象は、療法を受けているが、再発しているか又は再発し易い。 一実施態様によれば、本対象は、化学療法薬、抗血管新生薬又は免疫療法薬による療法に対し難治性である腫瘍を有する。 一実施態様によれば、本対象は、化学療法薬、抗血管新生薬又は免疫療法薬による過去の療法では成功していない。

一実施態様によれば、Ｔｈ１サイトカインは、ＩＬ−１８、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γから選択される。 一実施態様によれば、Ｔｈ２サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６及びＩＬ−１０から選択される。 一実施態様によれば、Ｔｈ１又はＴｈ２サイトカイン又はサイトカイン類のレベルは、少なくとも約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０又は８００％増大する。

好適であるならば、これらの方法は、任意の１又は２以上の抗腫瘍剤（化学療法薬又は免疫療法薬を含む）使用する治療又は以下に説明された抗腫瘍療法と組合せられてよい。

１０． 癌予防
本発明者らは、乳脂肪は、単独で又は少なくとも１種の追加の治療剤との組合せのいずれかで、腫瘍形成を阻害し、かつ腫瘍成長を阻害し、かつ腫瘍転移を阻害することができることを認めた。 乳脂肪は、単独で又はラクトフェリン及び特に金属イオンラクトフェリンと組合せて、Ｔ細胞及び／又はＮＫ（ナチュラルキラー）細胞のような抗腫瘍因子並びにアポトーシス−誘導因子を、全身循環に放出するか又は放出を刺激し、抗腫瘍免疫学的活性を刺激し、かつ免疫増強活性、抗血管新生活性及び直接の腫瘍細胞傷害性を示し、かつ下記実施例において示されるように腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することができる。 任意の乳脂肪の機能変種、又は乳脂肪画分、又は乳脂肪類似物は、乳脂肪と同様の活性を示すと考えられている。

本発明は、癌を予防すること、特にしばしば続発性腫瘍の成長及び増殖から生じる術後の再発(腫瘍成長)を予防すること、診断後に播種した腫瘍を防止すること、及び対象に抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の実施の準備をすることにおいて有用である。

固形腫瘍は、あるサイズを超えて成長することができるようになる前に、これらは新たに血管を形成しなければならない。 従って血管新生、特に腫瘍血管新生(腫瘍に供給するための血管の形成)の阻害は、明らかに癌治療の適用である(Dass、2004)。 下記実施例に示されたように、経口投与された乳脂肪は、単独又はラクトフェリン及び特に金属イオンラクトフェリンとの組合せに関わらず、腫瘍中の血管の数を有意に減少し、かつ血流を有意に減少することができる。

血管新生の阻害は、心血管疾患(例えばアテローム性動脈硬化症及び再狭窄)、慢性炎症(例えば関節リウマチ、変形性関節症、及びクローン病)、糖尿病(糖尿病性網膜症)、乾癬、子宮内膜症、黄斑変性及び脂肪症を含むが、これらに限定されるものではない、他の障害における適用も含む。 従って乳脂肪又は乳脂肪類似物は、好ましくは少なくとも1種の追加の治療剤と、より好ましくはラクトフェリン又はそれらの機能変種又は機能断片と、特に金属イオンラクトフェリンと組合せて、癌の治療及び予防以外の適用を有する。

同様に、経口投与された乳脂肪又は乳脂肪類似物は、単独で又は少なくとも1種の追加の治療剤、例えばラクトフェリン、特に金属イオンラクトフェリンとの組合せのいずれかで、下記実施例に示されたように、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することができる。 本実施例は、アポトーシス因子は、金属イオンラクトフェリンを給餌したマウスの血清中に存在することも示している。

従って本発明は、ラクトフェリン又はそれらの金属イオン機能変種又は機能断片を対象へ投与することを含む、対象において腫瘍形成を阻害する方法、対象においてアポトーシスを誘導する方法、対象の腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導する方法、対象において血管新生を阻害する方法、及び対象において腫瘍血管新生を阻害する方法にも関する。

本発明は、全身循環中の抗腫瘍因子を維持又は増加する方法にも関する。

一実施態様によれば、本対象は、癌に罹患し易い。 一実施態様によれば、本対象は、化学療法薬、抗血管新生薬又は免疫療法薬による療法に対し難治性の腫瘍を有する。 一実施態様によれば、本対象は、化学療法薬、抗血管新生薬又は免疫療法薬による過去の療法では成功していない。

好適であるならば、これらの方法は、１又は２以上の抗腫瘍剤（化学療法薬又は免疫療法薬を含む）のいずれかを利用する治療又は以下に説明される抗腫瘍療法と組合せることができる。

１１． 併用療法による癌の治療及び予防
本発明者らは、乳脂肪は、腫瘍成長を阻害し、かつ腫瘍転移を阻害することができることを認めた。 乳脂肪は、免疫療法（Ｂ７−１の腫瘍内遺伝子導入により媒介されたものを含む）、化学療法（パクリタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン又はフルオロウラシルを含む）、又は腫瘍を実質的に根絶するための樹状細胞療法と相乗作用する。 乳脂肪は、腫瘍成長及び腫瘍転移を阻害するために、化学療法（パクリタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、フルオロウラシル、シクロホスファミド又はメトトレキセートを含む）と相乗作用することができる。 乳脂肪画分などを含む、乳脂肪の任意の機能変種、又は乳脂肪類似物は、少なくとも１種の追加の治療剤と組合せるかどうかに関わらず、乳脂肪と同様の活性を示すであろうと考えられている。 同様に、ラクトフェリンが投与される場合には、任意のラクトフェリンの機能変種又は機能断片は、ラクトフェリンと類似した活性を示すであろうと考えられている。 乳脂肪単独又は他の療法との組合せは、肺及び肝臓へ播種する４Ｔ１乳癌腫瘍の外側への成長(outgrowth)を抑制することができ、そのため腫瘍転移を阻害することができる。

先に説明されたように、乳脂肪は、Ｔ細胞及び／又はＮＫ（ナチュラルキラー）細胞などの抗腫瘍因子並びにアポトーシス誘導因子を、全身循環へ又は循環内に放出するか又は刺激し、免疫増強活性、抗血管新生活性及び直接の腫瘍細胞傷害性を示し、並びに下記実施例に示されたように腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する能力を示すことがわかっている。

一実施態様によれば、化学療法薬は、パクリタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、フルオロウラシル、シクロホスファミド又はメトトレキセートである。

先に説明された方法に加え、本発明は：
（ａ）乳脂肪の、任意に少なくとも１種の追加の治療剤を伴う投与、及び（ｂ）少なくとも１種の抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の個別、同時又は逐次投与：
を含む、対象において腫瘍成長を阻害又は腫瘍転移を阻害する方法、及び対象における癌を治療又は予防する方法に関する。

一実施態様によれば、本対象は、癌に罹患しているか、又は癌に罹患し易い。 一実施態様によれば、本対象は、化学療法薬、抗血管新生薬又は免疫療法薬による療法に対し難治性の腫瘍を有する。 一実施態様によれば、本対象は、化学療法薬、抗血管新生薬又は免疫療法薬による過去の療法では成功していない。

一実施態様によれば、少なくとも１種の抗腫瘍剤は、経口又は非経口的に投与されるが、好ましい経路は、選択された抗腫瘍剤によって決まる。 好ましくは、少なくとも１種の抗腫瘍剤は、経口又は静脈内、腹腔内又は腫瘍内注射により投与される。 好ましくはパクリタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、フルオロウラシル、シクロホスファミド及びメトトレキセートは、静脈内又は腹腔内注射により投与される。 好ましくはＢ７−１をコードしている発現プラスミドは、腫瘍内注射により投与される。 あるいは、腫瘍細胞は、患者から収集され、エクスビボでＢ７−１発現プラスミドによりトランスフェクションされ、かつトランスフェクションされた細胞が患者へ注射される。 あるいは、可溶性Ｂ７−Ｉｇ融合タンパク質は、非経口的に送達することができる。 好ましくは樹状細胞療法は、静脈内、腹腔内又は腫瘍内注射により投与される。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、経口又は非経口的に投与される。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の実施前に、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０週間毎日投与される。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の実施前に、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１日間、又は少なくとも約１、２、３、４、５、６、７又は８週間、又は少なくとも約１、２、３、４、５又は６ヶ月間投与される。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の実施の開始後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１日間、又は少なくとも約１、２、３、４、５、６、７又は８週間、又は少なくとも約１、２、３、４、５又は６ヶ月間投与される。

好ましくは乳脂肪又は乳脂肪類似物は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、連続して１日にわたる経口、非経口点滴による又は投与経路の組合せによる（例えば経口及び非経口）を含み、少なくとも１日１回投与される。

本発明の方法の一実施態様によれば、腫瘍は、先に説明されたように大型腫瘍である。

本発明の方法の一実施態様によれば、対象の白血球数、赤血球数、又は骨髄細胞数の１又は２以上が、維持されるか又は改善される。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物、及び投与される場合少なくとも１種の追加の治療剤は、可消化脂肪、より好ましくは可消化脂肪及び可消化タンパク質、好ましくはラクトフェリン、カゼイン又は他の可食性タンパク質のような他のタンパク質を含有する剤形において投与される。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物及び少なくとも１種の追加の治療剤は、いずれか単独の作用よりも優れた、好ましくはいずれか単独の相加作用よりも優れた、相乗的治療効果を提供する。 例えば好ましくは、腫瘍形成又は成長の阻害、腫瘍退縮、細胞溶解作用、免疫増強、Ｔｈ１及びＴｈ２サイトカインの産生、白血球数、赤血球数又は骨髄細胞数の維持又は改善、貧血、悪液質、粘膜炎の治療又は予防、又は対象又は腫瘍の治療法に対する反応性に対するより良い作用が存在する。

これらの方法は、以下に説明された抗腫瘍剤（化学療法薬、免疫療法薬、悪液質治療薬、粘膜炎治療薬、又は造血薬を含む）又は抗腫瘍療法のいずれか１又は２以上を利用する治療と組合せることができる。

一実施態様によれば、本抗腫瘍療法は、非限定的に、手術、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、生物学的療法／免疫療法、抗血管新生療法、細胞毒性療法、ワクチン、核酸ベースのワクチン（例えば、癌抗原を発現している核酸、例としてｐ１８５ワクチンを含むＤＮＡワクチン）、ウイルスベースの療法（例えば、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス）、遺伝子療法、小型分子阻害剤療法、ヌクレオチドベースの療法（例えば、ＲＮＡｉ、アンチセンス、リボザイムなど）、抗体ベースの療法、酸素及びオゾン治療、塞栓形成、及び／又は化学塞栓形成療法などの療法から選択される。

一実施態様によれば、抗腫瘍療法又は抗腫瘍剤は、非限定的に、公開された国際特許出願WO 2006/054908に列記されたものを含む、化学療法薬から選択され、この出願はその全体が参照により本明細書に組入れられている。

ひとつの好ましい実施態様によれば、化学療法薬は、パクリタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、フルオロウラシル、シクロホスファミド及びメトトレキセートから選択される。

一実施態様によれば、本抗腫瘍剤は、免疫療法薬である。 好ましくは本免疫療法薬は、Ｔ細胞共刺激因子Ｂ７−１、Ｔ細胞共刺激因子、又は機能的に関連した分子、例えばＢ７−Ｉｇキメラをコードしている発現プラスミドである。

一実施態様によれば、本抗腫瘍剤又は療法は、樹状細胞療法を含む。

一実施態様によれば、本放射線治療は、外部ビーム放射線治療（γ線及びｘ線療法を含む）、及び放射性同位元素を使用する内部放射線治療を含む。 放射性同位元素は、本発明に従い抗腫瘍剤としても使用することができる。

１２． 療法に対する腫瘍反応性の増大法
本発明者らは、下記実施例において、経口投与された乳脂肪は、単独で又はラクトフェリン及び特に金属イオンラクトフェリンなどの少なくとも１種の追加の治療剤との組合せに関わらず、対象の反応性を増大し、かつ腫瘍の抗腫瘍剤に対する感度を増大させることができることを示している。 ラクトフェリンが乳脂肪と組合せて投与される場合、任意のラクトフェリンの機能変種、機能断片、金属イオン機能変種又は金属イオン機能断片は、乳脂肪と組合せた金属イオンラクトフェリンと同様の活性を示すと考えられる。

従って本発明は、乳脂肪又は乳脂肪類似物を、任意に少なくとも１種の追加の治療剤、好ましくはラクトフェリンと共に、それを必要とする対象へ、この療法と個別に、同時に又は逐次投与することを含む、手術、化学療法、放射線療法、ホルモン療法（例えば、タモキシフェン、アロマターゼ阻害剤）、生物学的療法／免疫療法、抗血管新生療法、細胞毒性療法、ワクチン、核酸ベースのワクチン（例えば、癌抗原を発現している核酸、例えばｐ１８５ワクチンを含む、ＤＮＡワクチンなど）、ウイルスベースの療法（例えば、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス）、遺伝子療法、小型分子阻害剤療法、ヌクレオチドベースの療法（例えば、ＲＮＡｉ、アンチセンス、リボザイムなど）、抗体ベースの療法、酸素及びオゾン治療、塞栓形成、及び／又は化学塞栓形成療法、並びにそれらの組合せを含んでなる群から選択される抗癌療法などの療法に対する、対象の反応性を増大させる方法にも関する。

本発明は、乳脂肪又は乳脂肪類似物を、任意に少なくとも１種の追加の治療剤、好ましくはラクトフェリンと共に、それを必要とする対象へ、この療法の実施と個別に、同時に又は逐次に経口又は非経口的投与することを含む、癌療法に対する対象の腫瘍の感度を増大させる方法にも関する。 好ましくは、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、先に説明されたものである。 好ましくは、少なくとも１種の追加の治療剤は、先に説明されたものである。 好ましくは、ラクトフェリンは、先に説明されたものである。 好ましくは、本療法は、先に説明されたものである。

同様に本発明は、乳脂肪又は乳脂肪類似物を、任意に少なくとも１種の追加の治療剤、好ましくはラクトフェリンと共に、それを必要とする対象へ、この療法の実施と個別に、同時に又は逐次的に投与することを含む、癌療法を受けている対象の回復を速める方法にも関する。 この本発明の実施態様によれば、この対象は、癌又は癌療法の作用から、本発明に従い治療されない対象よりもより迅速に回復する。 好ましくは、この対象は、癌療法を受ける投与量又は費やす時間を減少することができる。

これらの方法は、先に説明された抗腫瘍剤（化学療法薬又は免疫療法薬）又は抗腫瘍療法のいずれか１又は２以上を使用する治療と組合せることができる。

一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の実施前に少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０週間、毎日投与される。 一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の実施前に少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１日間、又は少なくとも約１、２、３、４、５、６、７又は８週間、又は少なくとも約１、２、３、４、５又は６ヶ月間投与される。 一実施態様によれば、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、抗腫瘍剤又は抗腫瘍療法の実施開始後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１日間、又は少なくとも約１、２、３、４、５、６、７又は８週間、又は少なくとも約１、２、３、４、５又は６ヶ月間投与される。

１３． 腫瘍の種類
一実施態様によれば、前述の腫瘍、腫瘍細胞、又は癌は、白血病、結腸癌、乳癌、メラノーマ、皮膚又は肺癌である。 本発明が関連する腫瘍の種類は、公開された国際特許出願WO 2006/054908において列記されており、この出願は参照により本明細書に組入れられている。

一実施態様によれば、前述の腫瘍、腫瘍細胞、又は癌は、急性白血病、急性リンパ球性白血病、急性顆粒球性白血病、急性骨髄性白血病、例えば骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単核球性、単球性、赤白血病などの白血病、並びに骨髄異形成症候群、慢性白血病、例えば非限定的に、慢性骨髄性白血病、慢性顆粒球性白血病、慢性リンパ球性白血病、及びヘアリーセル白血病などであるが、これらに限定されるものではない白血病である。

一実施態様によれば、前述の腫瘍、腫瘍細胞、又は癌は、非限定的に、ホジキン病及び非ホジキン病などのリンパ腫である。 一実施態様によれば、前述の腫瘍、腫瘍細胞は、骨髄細胞系の造血器腫瘍、例えば非限定的に、急性及び慢性骨髄性白血病、くすぶり型多発性骨髄腫、非分泌性骨髄腫及び骨硬化性骨髄腫などに由来し、又は前述の癌はこれらを含む。 一実施態様によれば、前述の腫瘍、腫瘍細胞は、白血病、急性及び慢性リンパ球性白血病、急性及び慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫を含むリンパ系列の造血器腫瘍に由来し、又は前述の癌はこれらを含む。 一実施態様によれば、前述の腫瘍、腫瘍細胞は、Ｂリンパ系列の造血器腫瘍に由来し、又は前述の癌はこれらを含む。 一実施態様によれば、前述の腫瘍、腫瘍細胞は、Ｔリンパ系列の造血器腫瘍に由来し、又は前述の癌はこれらを含む。

本発明の方法及び組成物により治療又は予防され得る追加の癌及び関連障害は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：白血病；リンパ腫；多発性骨髄腫；ヴァルデンストロームマクログロブリン血症；深刻さが不明のモノクローナルガンマグロブリン異常症；良性単クローン性高ガンマグロブリン血症；重鎖病；骨肉腫及び結合組織肉腫；脳腫瘍；乳癌；副腎癌；甲状腺癌；膵臓癌；下垂体癌；眼癌；膣癌；外陰癌；子宮頸癌；子宮癌；卵巣癌；食道癌；胃癌；結腸癌；直腸癌；肝臓癌；胆嚢癌；胆管癌；肺癌；睾丸癌；前立腺癌；陰茎癌；口腔癌；基底細胞癌(basal 癌)；唾液腺癌；咽頭癌；皮膚癌；腎臓癌；ウィルムス腫瘍；及び、膀胱癌。 そのような障害の総説に関しては、Fishmanらの著書(1985、Medicine、第2版、JB Lippincott Co.、フィラデルフィア)、及びMurphyらの著書(1997、「Informed Decisions: The Complete Book of Cancer Diagnosis, Treatment, and Recovery」, Viking Penguin, Penguin Books USA,Inc., 米国)を参照のこと。

本発明に従い治療又は予防され得る追加の癌又は他の異常な増殖性疾患は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：肝臓、脾臓、心臓、肺、小腸、大腸、直腸、腎臓、脳、膀胱、乳房、結腸、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、頸部、甲状腺及び皮膚の癌腫を含む、癌腫；扁平上皮癌；白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫を含む、リンパ系列の造血器腫瘍；急性及び慢性骨髄性白血病並びに前骨髄性白血病を含む、骨髄細胞系の造血器腫瘍；線維肉腫及び横紋筋肉腫を含む、間葉起源の腫瘍；メラノーマ、精上皮腫、奇形癌、神経芽細胞腫及び神経膠腫を含む、他の腫瘍；星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、及び神経鞘腫を含む、中枢及び末梢神経系の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫、及び骨肉腫を含む、間葉起源の腫瘍；並びに、メラノーマ、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、甲状腺濾胞癌及び奇形癌を含む、他の腫瘍。

具体的実施態様によれば、卵巣、膀胱、乳房、結腸、肝臓、肺、皮膚、膵臓、又は子宮の悪性腫瘍又は異常増殖性の変化（例えば化生及び異形成症）、又は過増殖性疾患は、治療又は予防される。 他の具体的実施態様によれば、肉腫、メラノーマ、又は白血病は、治療又は予防される。

１４． 皮膚癌の治療又は予防
本発明の更なる実施態様は、乳脂肪又は乳脂肪類似物を、任意に少なくとも１種の追加の治療剤、好ましくはラクトフェリンと共に、皮膚内又は皮膚上に、及び／又は腫瘍近傍内に塗布する工程を含む、皮膚癌を治療又は予防する方法である。

好ましい実施態様によれば、皮膚は、太陽光曝露に起因し、皮膚癌になる素因がある。

好ましい実施態様によれば、癌は、基底細胞癌、扁平上皮癌、又はメラノーマである。

好ましくは、乳脂肪又は乳脂肪類似物は、単独で又は標準の抗癌投薬計画と組合せて、局所投与される。 腫瘍近傍内の投与は、腫瘍の周縁の近傍又は隣接部へ、又は腫瘍の周縁領域内に直接の投与を含む。 乳脂肪は、発癌を阻害し、局部組織内の抗腫瘍免疫を刺激し、腫瘍血管新生を阻害し、及び／又は直接殺腫瘍する（腫瘍成長を阻害することができる）ことが想起されている。 簡単に述べると、乳脂肪は、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、好適な担体内、強度０．１％、１％、５％、又は１０％で、リスクのある皮膚又は癌性皮膚病巣に１日２回塗布される。 腫瘍サイズの進展は、ＣＴスキャン及び利用可能である場合は腫瘍マーカーでモニタリングされる。

投与量及び治療投薬計画は、好適な皮膚癌動物モデルにおける前臨床試験に着手することにより、情報を得ることができる。 マウスの皮膚領域は、剃毛され、発癌物質（例えば、７，１２−ジメチルベンズ（ａ）−アントラセン（ＤＭＢＡ））の外用塗布、それに続くＵＶ−Ｂの照射により処置される(Bestakら、1996)。 ラクトフェリンは、発癌物質処置又は一旦癌性病巣が形成された後２日間、好ましくは皮膚透過性を増大させることができる皮膚浸透増強剤（例えば７０％ラウレス硫酸エステル及び３０％フェニルピペラジン）の存在下で、塗布されてよい。 ラクトフェリンは、１日２回、又はそうでなければ必要に応じて、皮膚又は癌性病巣へ塗布され、かつ腫瘍成長は、数週間から数ヶ月にわたりモニタリングされる。

適当である場合は、これらの方法は、任意の先に説明された抗腫瘍剤（化学療法薬又は免疫療法薬を含む）又は抗腫瘍療法の１又は２以上を利用する治療と組合せられてよい。

１５． 貧血
下記実施例に示されるように、乳脂肪の経口投与は、対象の血液学的抑制の低下、及び対象の貧血の治療又は予防に有効である。

貧血（時には貧血症）は、赤血球（ＲＢＣ）及び／又はヘモグロビンの欠乏症をいう。 これは、酸素を組織へ運搬する血液の能力の低下を生じ、低酸素症を引き起こす。 従って変動する貧血の程度は、広範な臨床の転帰を有し得る。

形態学的アプローチを使用し、貧血は、赤血球のサイズにより分類することができる。 このサイズは、典型的にはフェムトリットル（ｆｌ）で測定される、平均赤血球容積（ＭＣＶ）により反映される。 これらの細胞が、普通よりも小さい（８０ｆｌ以下）場合、貧血は小球性と称され；これらが普通サイズである（８０〜１００ｆｌ）場合、正球性と；及び、これらが普通よりも大きい（１００ｆｌ以上）場合、貧血は大球性と分類される。

小球性貧血は主に、ヘモグロビン合成の不全又は不充分さの結果であり、ヘム合成の欠損、鉄欠乏症、慢性障害の貧血、グロビン合成の欠損、α−及びβ−サラセミア、ＨｂＥ症候群、ＨｂＣ症候群、及び他の不安定なヘモグロビン疾患、遺伝性の鉄芽球性貧血、鉛毒性を含む後天性鉄芽球性貧血、及び可逆性鉄芽球性貧血を含む、鉄芽球性欠損を含む、いくつかの病因により引き起こされ得る。 鉄欠乏性貧血は、貧血全体の最も一般的型であり、これは多くの原因がある。 ＲＢＣは、顕微鏡で観察した場合に、低色素性（通常よりも淡色）及び小球性（通常よりも小さい）ように見えることが多い。 鉄欠乏性貧血は概して、不充分な食事による摂取又は鉄吸収により引き起こされる。 鉄欠乏性貧血は、胃腸管の病巣の出血によっても引き起こされ得る。 鎌状赤血球症及びサラセミアのような異常血色素症は通常、小球性貧血として分類される。

正球性貧血症は、全体のＨｂレベルが低下しているが、赤血球サイズ（ＭＣＶ）は正常を維持する場合である。 原因は、急激な失血、慢性疾患の貧血、再生不良性貧血（骨髄不全）、及び溶血性貧血を含む。 溶血性貧血は、多くの潜在的原因を伴う症状（黄疸及び上昇したＬＤＨレベルも特徴とする）の個別の集まりを引き起こす。 これは、自己免疫、免疫、遺伝性又は機械的（例えば心臓手術）であることができる。 これは頻繁には正球性であるが、小球性貧血における細胞断片化が原因で、又は骨髄からの未熟な赤血球の早期放出が原因で、大球性貧血を生じ得る。

大球性貧血は、「巨赤芽球性貧血」又は「非巨赤芽球性大球性貧血」に更に分けることができる。 巨赤芽球性貧血の原因は主に、前駆細胞の制限された細胞分裂を生じる、保存されたＲＮＡ合成によるＤＮＡ合成の失敗である。 巨赤芽球性貧血は、好中球過分葉（６〜１０ローブ）と共に存在することが多い。 巨赤芽球性貧血は、大球性貧血の最も一般的な原因である。 巨赤芽球性貧血は、一般にビタミンＢ１２又は葉酸のいずれか（又は両方）の欠乏症に起因し、次に通常不適切な摂取又は不充分な吸収のいずれかに起因している。 葉酸欠乏症は通常、神経学的症状を生じないのに対し、Ｂ１２欠乏症は生じる。 悪性貧血は、胃の壁細胞に対して示された自己免疫状態である。 壁細胞は、食品からのビタミンＢ１２の吸収に必要な、固有の因子を産生する。 従って壁細胞の破壊は、固有の因子の欠損を引き起こし、これはビタミンＢ１２の吸収不良につながる。 巨赤芽球性貧血は、メトトレキセート、ジドブジン、及びＤＮＡ複製を阻害する他の薬物への曝露からも生じることがある。 非−巨赤芽球性大球性貧血は、例えばアルコール依存症を生じるような、様々な病因（すなわち、ＤＮＡ合成は損なわれていない）を有する。

２〜６週齢で未熟児において生じ、かつヘマトクリットレベルの漸減に対する減少したエリスロポエチンの結果である未熟児貧血；再生不良性貧血及び様々な他の異常を特徴とする遺伝性の障害又は欠損である、ファンコニー貧血；赤血球（ＲＢＣ）膜の欠損を生じる遺伝性の欠損であり、赤血球の脾臓による封鎖及び破壊を引き起こす、遺伝性の球状赤血球症：を含む、様々な特異的貧血が存在する。 これは、循環ＲＢＣの数の減少につながり、結果的に貧血；変異ヘモグロビンＳ遺伝子の存在に起因する遺伝性の障害である、鎌状赤血球貧血；主にＩｇＧによる、赤血球に対する自己免疫攻撃に起因する貧血である、温式自己免疫性溶血性貧血；並びに、主にＩｇＭにより媒介される、寒冷凝集素溶血性貧血につながる。

従って本発明は、乳脂肪又は乳脂肪類似物を、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、対象へ投与することを含む、対象における貧血を治療又は予防する方法に関する。 本発明は、対象における血液学的抑制を低下又は阻害する方法にも関する。

血液学的抑制を低下又は阻害することは、単に癌療法を受けている対象又は癌療法を受けた対象の治療のみではなく、非限定的に先に説明された貧血を含む他の障害においても、適応を有する。 従って乳脂肪又は乳脂肪類似物は、好ましくは少なくとも１種の追加の治療剤、より好ましくはラクトフェリン又はそれらの機能変種又は機能断片、特に金属イオンラクトフェリンと共に、癌治療及び予防以外の適用を有する。

１６． 悪液質
下記実施例に示されたように、乳脂肪の経口投与は、対象の悪液質状態の改善、及び対象の悪液質の治療又は予防において有効である。

悪液質は、積極的に減量を試みていないヒトにおける、体重減少、筋萎縮、疲労、虚弱及び食欲不振（著しい食欲喪失）の１又は２以上である。 これは、通常癌、ある種の感染症（例えば結核、ＡＩＤＳ）及び一部の自己免疫疾患などの、基礎障害に関連している。 悪液質は、食欲不振、無力症、及び貧血から始まる不動状態へ、患者を生理的に衰弱させ、かつ標準治療に対する反応は、通常不良である。

悪液質を伴う癌患者は、低下した生理活性、随伴する感染症、又は化学療法及び放射線治療からの消化管への毒性に起因するかどうかに関わらず、概して、栄養状態及び生活の質の維持に関して症候性に管理される。 このような管理は、胃炎のための含嗽剤の使用、少量頻回の摂食、制吐薬、抗生物質、成分輸血、並びに経口及び非経口栄養分補給を含む。 補助食品は、追加のカロリー、タンパク質、脂肪、ビタミン、及びミネラルを提供する点で有効であることができる。 膵臓癌に続発する吸収不良症候群のような特定の症例において、脂肪及びタンパク質の吸収を改善するために、外来性膵臓抽出物が使用される(Perez MMら、「Assessment of weight loss, food intake, fat metabolism, malabsorption, and treatment of pancreatic insufficiency in pancreatic 癌」、Cancer 1983；52:346-52)。

癌患者における悪液質の進行を逆転、遅延又は停止する試みで、様々な薬理学的作用物質が投与されている。 これらは、プレドニソロン、メチルプレドニゾロン、及びデキサメタゾンなどのコルチコステロイド、酢酸メゲストロール、酢酸メドロキシプロゲステロンなどの黄体ホルモン薬、ドロナビノールなどのカンナビノイド、シプロヘプタジンなどのセロトニンアンタゴニスト、メトクロプラミド及びシサプリドなどの運動促進薬、デカン酸ナンドロロン及びフルオキシメステロンなどのアナボリックステロイド、硫酸ヒドラジンなどのホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼの阻害剤、ペントキシフィリン及びリソフィリンなどのメチルキサンチン類似物、サリドマイド、サイトカイン及び抗−ＩＬ−６ 抗体などの抗サイトカイン、ＩＬ−１２、分枝鎖アミノ酸、エイコサペンタエン酸、インドメタシン及びイブプロフェンなどのプロスタグランジン合成の阻害剤、メラトニンなどのホルモン、並びにクレンブテロールなどのβ２−アドレナリン受容体アゴニストを含む。

従って本発明は、乳脂肪又は乳脂肪類似物を、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、対象へ投与することを含む、対象において悪液質を治療又は予防する方法に関する。 本発明は、対象の悪液質状態を改善する方法にも関する。

悪液質の治療又は予防は、単に癌療法を受けている対象又は癌療法を受けた対象の治療のみではなく、非限定的に先に説明された障害を含む体重減少又は疲労に関連した他の障害においても、適応を有する。 従って乳脂肪又は乳脂肪類似物は、好ましくは少なくとも１種の追加の治療剤、より好ましくはラクトフェリン又はそれらの機能変種又は機能断片、特に金属イオンラクトフェリンと共に、癌の治療及び予防以外の適用を有する。

１７． 粘膜炎
下記実施例に示されたように、乳脂肪の経口投与は、潰瘍などの腸管の損傷の改善、及び粘膜炎の治療又は予防において有効である。

粘膜炎は、口腔−咽頭腔及び胃腸（ＧＩ）管の上皮の損傷、その結果のこれらの粘膜の炎症及び潰瘍を特徴とする状態である。 口腔及び食道において、粘膜炎は、有痛性の潰瘍を特徴とする。 更に消化管を下ると、粘膜炎は下痢を引き起こし、これは重症で衰弱することが多い。 粘膜炎は通常、放射線療法及び／又は化学療法の結果であり、癌化学療法を受ける患者の約４０％においてある程度生じる。 上皮細胞は、他の臓器の細胞と比べ、それらの比較的高い代謝回転率のために、放射線療法及び化学療法の細胞毒性作用をより受け易い。 ほとんどの場合において、粘膜の上皮細胞は、治療される癌よりもより迅速な代謝回転を有し、かつ細胞毒性物質及び放射線による損傷に対し脆弱である。 粘膜炎の診断及び経過観察は、患者への問診（疼痛質問票など）、口腔試験及び内視鏡検査により実現される。 ショ糖呼気検査、シトルリンアッセイ及びトランスグルタミナーゼアッセイを含むいくつかのアッセイも、診断のための決定要因であることが示唆されている。

粘膜炎の治療は、主に対症療法である。 口腔衛生が現在治療の中心であり、典型的には頻繁な洗口により達成される。 水溶性ゼリーを使用し、口を滑らかにすることができる。 様々な外用緩和剤が、粘膜炎に関連した疼痛及び感受性を管理するために存在している。 塩含嗽剤は、疼痛を和らげかつ感染を避けるために食物粒子を清潔に保つことができる。 薬用物質は、グルコン酸クロルヘキシジン、リドカイン（キシロカイン）、塩酸ジクロニン(Dyclone)、及びオラベース(Orabase)中のベンゾカインを含む。 加えて外用麻酔活性を有する塩酸ジフェンヒドラミン(Benadryl)を、同等量のKaopectate又はマグネシウム乳剤のいずれかのとの懸濁液として混合することができる。 塩酸ベンジダミン（ＨＣｌ）は、抗炎症特性、鎮痛特性、及び麻酔特性を伴う非ステロイド系リンス液である。 放射線療法及び化学療法が誘導した粘膜炎の治療におけるリンス液としての、胃潰瘍の治療で広範に投与されるスクラルファートの使用は、多数の研究者により報告されている。

グルコン酸クロルヘキシジン、ポリミキシンＥ、トブラマイシン、及びアンホテリシンなどの殺微生物薬は、ある程度の臨床的価値があることが報告されている。 ベタメタゾン及びインドメタシンなどの抗炎症薬は、放射線が誘導した粘膜炎の予防又は重症度の軽減に潜在的価値があることが報告されている。 ヒトケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）であるパリフェルミン（ＫＥＰＩＶＡＮＣＥ）は、上皮細胞の増殖、分化、及び遊走を増強することが報告されている。 他の報告された療法は、サイトカイン及び他の炎症修飾因子（ＩＬ−１、ＩＬ−１１、ＴＧＦ−β３など）、アミノ酸補給（例えばグルタミンによる）、ビタミン、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子、凍結療法、及びレーザー療法に頼っている。

従って本発明は、乳脂肪又は乳脂肪類似物を、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、対象へ投与することを含む、対象において悪液質を治療又は予防する方法に関する。 本発明は同じく、対象の悪液質状態を改善する方法にも関する。

粘膜炎の治療又は予防及び腸管の損傷の軽減又は改善は、単に癌療法を受けている対象又は癌療法を受けた対象の治療のみではなく、非限定的に先に説明された障害を含む腸管上皮の損傷に関連した他の障害においても、適応を有する。 従って乳脂肪又は乳脂肪類似物は、好ましくは少なくとも１種の追加の治療剤、より好ましくはラクトフェリン又はそれらの機能変種又は機能断片、特に金属イオンラクトフェリンと共に、癌の治療及び予防以外の適用を有する。

１８． 白血球減少症
下記実施例に示されたように、乳脂肪の経口投与は、対象における血液学的抑制の低下、並びに対象における白血球減少症の治療及び予防において有効である。

白血球減少症(leukocytopenia)(白血球減少(leukopenia)としても公知、時にはリンパ球減少又はリンパ球減少症と称される状態を含む)は、個体における白血球（ＷＢＣ）の減少をいう。 これは、体が感染症と闘う能力の低下を生じ、体を非常に衰弱した状態とする。 従って白血球減少症の程度の変動は、広範な臨床の結果と等しい。

成人の平均ＷＢＣカウントは、４５００〜１００００個細胞／ｍｍ ³である（男女及び個人間で異なる）。 白血球減少は一般に、４０００個細胞／ｍｍ ³未満のＷＢＣカウントとみなされる（同じく男女及び個人間で異なる）。 ふたつの主要な白血球減少症の型は、好中球減少症及び顆粒球減少症である。

好中球減少症は、白血球減少症の主要な型であり、好中球減少を特徴とする。 癌以外の、多くの症候群は、好中球減少症に関連し、その大半は、事実上遺伝性である。 コストマン好中球減少症、シュバックマン症候群、無ガンマグロブリン血症、ガンマグロブリン異常症、先天性造血障害、軟骨毛髪形成不全症候群、及び先天性角化異常症は、好中球減少症に関連した障害のほんの数例である。 好中球減少症は、ビタミンB12の欠乏、葉酸又は銅欠乏症のような、栄養欠乏症にも関連している。

顆粒球減少症は、時には好中球減少症と互換的に使用されるが、より正確には、これは好中球に加え、好酸球及び好塩基球の抑制である。

白血球減少症は、個体が化学療法又は放射線治療を受けた場合にも、引き起こされ得る。 これは、非常に一般的な副作用であり、患者は通常療法が継続される前に、WBCを回復しかつより多く産生するために時間がかけられる。 一般に、白血球減少症は通常、より多くのＷＢＣを産生するように骨髄を刺激するために、ステロイド又はビタミンにより治療される。

従って本発明は、乳脂肪又は乳脂肪類似物を、任意に少なくとも１種の追加の治療剤と共に、対象へ投与することを含む、対象の白血球減少症を治療又は予防する方法に関する。 本発明は、対象における血液学的抑制を低下又は阻害する方法にも関する。

血液学的抑制の低下又は阻害は、単に癌療法を受けている対象又は癌療法を受けた対象の治療のみではなく、非限定的に先に説明された白血球減少症を含む他の障害においても、適応を有する。 従って乳脂肪又は乳脂肪類似物は、好ましくは少なくとも1種の追加の治療剤、より好ましくはラクトフェリン又はそれらの機能変種又は機能断片、特に金属イオンラクトフェリンと共に、癌の治療及び予防以外の適用を有する。

ここで本発明の様々な態様は、下記実施例を参照し、非限定的様式で例示される。

マウス及び試薬
６〜９週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６及びＢａｌｂ／ｃマウス（オークランド大学、ニュージーランド）を使用し、別に指定しない限りは、各食餌群は５又は６匹のマウスを含んだ。 マウスは、空調の効いた室内で、管理された湿度、温度、及び１２時間の明暗周期で飼育した。 Ｃ５７ＢＬ／６起源の胸腺リンパ腫マウスＥＬ−４ Ｔ細胞、及びＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ−２ｂ）起源の４Ｔ１乳癌細胞株は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)(ロックビル, MD, 米国)から購入した。 ＥＬ−４細胞は、ＤＭＥＭ培地(Gibco BRL, グランドアイランド, NY, 米国)において37℃で培養したのに対し、4T1細胞は、RPMI 1640培地(Gibco BRL, グランドアイランド, NY, 米国)中で３７℃で単層培養物として維持した。 これらの培地には、１０％ウシ胎仔血清、５０Ｕ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、及び１ｍＭピルビン酸エステルを補充した。 パクリタキセルは、Bristol-Meyers Squibb(WA, 米国)から入手した。 全ての実験は、オークランド大学の動物倫理委員会(Animal Ethics Committee)により承認されたプロトコールに従い実行した。

乳脂肪調製
共役リノール酸及びバクセン酸で強化された乳脂肪は、Harfootらの方法(58に従い、遊離脂肪酸補充した牧草餌を給餌したウシにより調製した。通常の無水乳脂肪は、Fonterra Co-operative Group Limited, NZから入手した。処置食において使用した乳脂肪及び強化乳脂肪の組成は、表６ａ及び６ｂにまとめている。表６ａ及び６ｂのデータは、当該技術分野において公知の脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥＳ）、延長ＦＡＭＥＳ、ＣＬＡ及び乳脂肪分析を用いて得た。

ＦＡＭＥ分析により決定された脂肪酸。 増加倍率は、強化乳脂肪、対、乳脂肪中の脂質レベルの増加をいう。 ｃ１８：１ ｎ−７は、ｃ１８：１トランス脂肪酸含量の推定値を提供する。

ラクトフェリン調製
ウシラクトフェリンは、脱脂乳(Fonterra Co-Operative Group Limited, ニュージーランド)から、Norrisらの方法(Norris, GEら、1989)を使用し調製した。 SP Big Beadsイオン交換装置に、脱脂乳を装加し、水で洗浄した。 カラムを、０〜０．５Ｍ ＮａＣｌ溶液で溶出し、溶出液を廃棄した。 次にカラムを、０．５〜１．０Ｍ ＮａＣｌで溶出し、溶出液を回収した。 塩類及び低分子量成分を減少するために、回収された溶出液に、３０ｋＤａメンブレンを用い、ＵＦ／ＤＦを施した。 残留物が９０〜９３％ウシラクトフェリンとなるまで、濾過を継続した。 得られたラクトフェリン抽出物は、天然の鉄飽和レベル約１５％を有し、下記実施例においてはｂＬｆと称す。 鉄飽和型ウシラクトフェリン抽出物（１００％飽和）は、天然ｂＬｆから、Lawらの方法(Law及びReiter, 1977)により調製し、下記実施例においてはＬｆ＋と称す。

食餌
被験食は、粉末化されたＡＩＮ９３Ｇ配合物を主材料として使用し、Crop & Food Research(パルマーストンノース, ニュージーランド)により調製した。 ＡＩＮ９３Ｇ食において、カゼインは、タンパク質給源として、及びダイズ油は脂質給源として使用し、ラクトフェリンは含まなかった。 被験食において、カゼインは、先に説明されたように調製された天然ｂＬｆ又はＬｆ＋と置換し、その結果食餌の総タンパク質含量は不変であった。 本食餌は、餌２．４ｋｇにつき、鉄飽和型ｂＬｆ ２８ｇ又は天然ｂＬｆ抽出物２８ｇを含有した。 被験食において、ダイズ油は、前述のように調製した強化乳脂肪又は普通の無水乳脂肪のいずれかと置換し、その結果餌の総脂肪含量は不変であった。 新鮮な餌を週２回提供し、マウスは学習により食物及び水は自在摂取した。 リン脂質濃縮物Phospholac 600(商標)(PC600(商標))リン脂質画分は、Fonterra Co-operative Group Limited(ニュージーランド)から供給された。

実験用腫瘍モデル及び療法
腫瘍は、２×１０ ⁵個ＥＬ−４細胞又は２×１０ ⁴個４Ｔ１細胞のマウスの左側腹部への皮下注射により確立し、ふたつの直交する直径を測定することにより腫瘍成長を決定した。 腫瘍が直径１．０ｃｍ以上に達した時点で、動物倫理委員会の承認（オークランド大学）に従い、動物を安楽死させた。 別に指定しない限りは、全ての実験は、１処置群につき５又は６匹のマウスを含んだ。 パクリタキセル(Cremophor（登録商標）EL及び無水アルコール５ｍｌ中に溶解した３０ｍｇ）を、０．９％ＮａＣｌに希釈し、３０ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。 乳癌の４Ｔ１転移モデルの場合、実験の最後にマウスを安楽死させた後、肺、肝臓及び脾臓を含む臓器を摘出し、秤量した。 肺表面の転移の数をカウントした。 肝臓は、４％パラホルムアルデヒドで固定し、横１０μｍ切片を、肝臓全体を対象とするように、５つの異なるレベルで作製した。 これらの切片を、ヘマトキシリン・エオシンで染色した。 ６個よりも多い癌細胞を含む転移性小結節をカウントし、その平均は、転移の数を表すとみなした。 血液を、剖検時の心穿刺により採取し、血液細胞を、血球計でカウントした。

抗腫瘍細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）産生の測定
脾細胞を、腫瘍細胞注射後、指定された日に採取した。 これらは、９６−ウェル丸底プレートにおいて等級化されたＥ：Ｔ比で、ＥＬ−４標的細胞と共に、３７℃でインキュベーションした。 ４時間インキュベーションした後、上清５０μｌを収集し、Cyto Tox 96アッセイキット(Promega, マジソン, WI, 米国)を用い、溶解を測定した。 非特異的標的細胞及びエフェクター細胞の溶解に関するバックグラウンド対照が含まれた。 バックグラウンドを減算した後、細胞溶解の割合を、下記式を用いて算出した：１００×（実験用自発エフェクター−自発標的／最大標的−自発標的）。

アポトーシスの測定
腫瘍を摘出し、直ちにドライアイス中で凍結し、後の腫瘍中のアポトーシス細胞のインサイチュ検出のために、−７０℃で貯蔵した。 厚さ６μｍの凍結連続切片を、パラホルムアルデヒド溶液（ＰＢＳ中４％、ｐＨ７．４）中で固定し、０．１％Triton X-100及び０．１％クエン酸ナトリウムを含有する溶液で透過性とした。 これらを、TUNEL試薬２０μｌ(Boehringer Mannheim(独国)のインサイチュアポトーシス検出キット)と共に、３７℃で６０分間インキュベーションし、蛍光顕微鏡により検査した。 隣接切片を、ヘマトキシリンにより対抗染色し、１０の無作為に選択した視野（倍率×４０）の細胞総数、又はアポトーシス細胞の数をカウントした。 アポトーシス指数（ＡＩ）は、アポトーシス細胞の数×１００／有核細胞総数として算出した。 インビトロにおけるアポトーシス細胞の検出のために、アポトーシス細胞及び壊死腫瘍細胞の数を、アネキシン−Ｖ−フルオレセイン、ＴＵＮＥＬ、及びトリパンブルーでの染色により測定した。 腸管アポトーシスの測定のために、空腸切片を、DeadEnd(商標)蛍光測定ＴＵＮＥＬシステム(Promega, マジソン, WI, 米国)を用い、ＴＵＮＥＬ法により染色した。 １０の無作為に選択した腺窩中のアポトーシス細胞をカウントし、データは１腺窩あたりのアポトーシス体として表した。

血管分布の評価
腫瘍血管分布を決定するために、１０μｍの凍結腫瘍切片を、アセトンで固定し、ＰＢＳですすぎ、２％ＢＳＡで２時間ブロックし、抗ＣＤ３１抗体ＭＥＣ１３．３、又は抗ＣＤ１０５ｍＡｂと共に一晩インキュベーションした。 これらは引き続き、VECTASTAIN Universal Quickキット(Vector Laboratories, バーリンゲーム, CA, 米国)を用い、二次抗体と共に３０分間インキュベーションし；かつ、Sigma FAST DAB(3,3'-ジアミノベンジジン四塩酸塩)及びCoCl2エンハンサー錠(Sigma)により発色し、ヘマトキシリンにより対抗染色した。 染色された血管を、５又は６の盲検的に選択したランダム視野（０．１５５ｍｍ ² ）中で倍率×４０でカウントし、最も高い３つのカウント数の平均を算出した。 流れに開放されている血管を可視化するために、先に説明されたように(Dingら、2001)、DiO7(Molecular Probes, ユージーン, OR)を、濃度１．０ｍｇ／ｋｇで、尾静脈に注射し、１分後に組織を収集した。 血管分布を評価するために、同心円法も使用した。

悪液質の分析
マウスを、実験開始時及び終了時に秤量した。 これらのマウスを安楽死させた後、腫瘍を摘出し、秤量した。 脂肪組織及び筋肉消耗の程度を決定するために、副睾丸脂肪組織及び左腓腹筋を解離し、秤量した。 カーカス重量を、全身重量と腫瘍重量の間の差異として計算した。

腸管損傷の測定
マウスから得た空腸を、４％パラホルムアルデヒド中に固定し、パラフィンに包埋し、４μｍの切片とし、切片をヘマトキシリン・エオシンにより染色した。 各標本において、２０種のよく保存された絨毛を無作為に選択し、それらの長さを対物ミクロメーターを用い顕微鏡により測定した。

空腸γ−グルタミルトランスペプチダーゼ（γ−ＧＧＴ）の活性は、先にZiotnikら(2005)に説明されたように、腸管損傷の個別の測定として記録した。 空腸断片（約５ｃｍ）を、摘出し、ＰＢＳ １０ｍｌをフラッシュし、ふたつの２ｃｍ ²断片に切断し、これを１．０％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍＭトリス（ｐＨ８．０）（トリス緩衝液）１．０ｍｌ中に配置した。 １００ｍＭグリシル−グリシン（ｐＨ８．０）０．３ｍｌ、トリス緩衝液０．０８ｍｌ、５ｍＭγ−グルタミル−ｐ−ニトロアニリド０．５ｍｌを含有する溶液２０μｌを添加し、最終容積０．９ｍｌとした。 これらの腸管のスライスを、３７℃の水浴中で振盪しながら、１０分間インキュベーションし、γ−ＧＧＴ活性を４０５ｎｍで測定した。 結果は、γ−ＧＧＴ活性単位／ｃｍ空腸として表し、ここで１単位は、１時間にｐ−ニトロアニリン１．０モルを放出するγ−ＧＧＴ活性として規定した。

統計解析
結果は、平均値±ＳＥＭ又は±９５％信頼区間として表し、統計学的有意性は、スチューデントのｔ検定（実施例１から１７）、又は分散分析又は共分散分析、それに続くテューキーの多重比較検定又は片側ダネット検定（実施例１８から２１）を用い評価した。 Ｐ値＜０．０５は、統計学的有意性を意味するのに対し、Ｐ＜０．００１は、高度に有意性がある結果を意味する。

実施例１
純度９０％以上のウシラクトフェリンは、Fonterra Co-operative Groupから供給された。 アポ−Ｌｆの調製のために、ミリＱ水中の約８０ｍｇ／ｍＬのＬｆ溶液（ｐＨ〜５．７）を、６Ｍ ＨＣｌの慎重な添加により、ｐＨ２．０８に調節した。 この溶液を室温で１時間攪拌し、その後名目カットオフ分子量３．５ｋＤａのSpectraPorチューブ(Spectrum Companies, ランコドミンゲス, CA, 米国)を用い、１０倍量の０．１Ｍクエン酸に対し４℃で一晩透析した。 透析液は、２４時間かけて２回交換し、このＬｆ溶液は凍結乾燥し、白色の半結晶性粉末とした。 ５０％Ｆｅ−飽和型ラクトフェリンの調製のために、０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム中のラクトフェリン８％溶液を、６Ｍ ＮａＯＨの慎重な添加により、ｐＨ８．２に調節した。 適量の５０ｍＭ鉄ニトリロ三酢酸（Ｆｅ−ＮＴＡ）(Batesら、1967；Brock及びArzabe、1976)を添加し、ラクトフェリンの〜５０％飽和を得た（Ｌｆの純度及びその未変性のＦｅ飽和〜１２％をもたらした）。 室温で１時間攪拌した後、この溶液（ｐＨ８．０１）を、前記SpectraPorチューブを使用し、１０倍量のミリＱ水に対し４℃で一晩透析した。 透析液は、２４時間かけて２回交換し、このＬｆ溶液は凍結乾燥し、サーモンレッド色の半結晶性粉末とした。 〜１００％Ｆｅ飽和型ラクトフェリンは、Ｆｅ−ＮＴＡ量を状況に応じて調節し、引き続きＦｅ−ＮＴＡを添加し、そのｐＨを６Ｍ ＮａＯＨの慎重な添加により、ｐＨ８．０に再度調節したこと以外は、本質的に５０％Ｆｅ−飽和型材料のように調製した。 最終生成物は、深いサーモンレッド色の半結晶性粉末であった。 最終生成物のＦｅ飽和レベルは、分光光度的滴定により証明された(Batesら、1967；Brock及びArzabe、1976)。 アポラクトフェリンは、約５％Ｆｅ飽和されていた。

実施例２
本実施例は、乳脂肪は、ＥＬ−４腫瘍の成長を抑制するのに対し、共役リノール酸及びバクセン酸強化乳脂肪は、無効であることを示す。

６匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの群には、基本のＡＩＮ−９３食、又はこの食餌の脂肪成分の〜７１％を表している、食餌２．４ｋｇ当たり乳脂肪又は強化乳脂肪のいずれか１２０ｇで置換された同一食を給餌した。 マウスは、それらの食餌に配置して２週間後に、２×１０ ⁵個ＥＬ−４腫瘍細胞により皮下チャレンジした。 直交するふたつの直径（ｃｍ）により測定した腫瘍サイズを、９１日目まで、又は腫瘍が直径１ｃｍに達するまでモニタリングした。 各ポイントは、６匹のマウス、又は示されたマウス数のいずれかに関する、平均腫瘍サイズと９５％信頼区間を表している。

強化乳脂肪は、対照食と比べ、４９日目に２５％だけ腫瘍成長が遅くなったが、この作用は有意ではなかった（図１）。 際だった対照において、乳脂肪は、６匹中２匹のマウスにおいて腫瘍の発達を完全に妨げた。 乳脂肪食を給餌した他の４匹のマウスにおける腫瘍の成長は、強化乳脂肪を給餌したマウスに関する成長と類似していた。

実施例３
本実施例は、乳脂肪は、免疫療法と相乗作用し、ＥＬ−４腫瘍を根絶することを示す。

腫瘍は、先の実施例２に説明したような、強化乳脂肪、乳脂肪、又は対照食のいずれかを給餌した５匹のマウス群において確立した。 直交するふたつの直径（ｃｍ）により測定した腫瘍サイズを、モニタリングした。 腫瘍が直径〜０．４ｃｍに到達した時点で、これらの腫瘍に、Ｂ７−１発現プラスミド６０μｇを含有するＤＮＡ−リポソーム複合体を注射した。 本プラスミドの投与のタイミングは、矢印で示している。 直交するふたつの直径（ｃｍ）により測定した腫瘍サイズを、９１日目まで、又は腫瘍が直径１ｃｍに達するまでモニタリングした。 ４匹のマウスの対照腫瘍は、１週間ゆっくり退縮するが、その後再度成長するという事実により証明されるように、この特定サイズの腫瘍は、Ｂ７−１免疫遺伝子治療に部分的に影響されやすい状態である。 しかし１匹のマウスの腫瘍は退縮し、Ｂ７−１プラスミドの注射後４週間かけて完全に消失した（図２）。

乳脂肪を給餌したマウスの腫瘍は、対照のものよりもより迅速に退縮し、Ｂ７−１プラスミドの注射後消失するまでにわずか２週間を要した。 対照的に、強化乳脂肪を給餌したマウスの腫瘍は、Ｂ７−１免疫遺伝子治療に抵抗し、対照食を給餌したマウスの腫瘍と類似した速度で成長した。 従って乳脂肪は癌の免疫療法を増強するのに対し、強化乳脂肪は効果がより少ない。

実施例４
本実施例は、乳脂肪は、鉄飽和型ラクトフェリンと相乗作用し、腫瘍発生を完全に阻害することを示す。

本出願人らの先行する研究は、鉄飽和型Ｌｆ（Ｌｆ＋）は、腫瘍成長を阻害することができることを示した(WO/2006/054908)。 この実験は、乳脂肪とＬｆ＋の同時投与の作用を調べる。 本発明者らは、乳脂肪は、リンパ腫との戦いにおいてＬｆ＋と相乗作用するかどうかを決定しようとした。

６匹のマウスの群には、ＡＩＮ９３Ｇ対照食、食餌２．４ｋｇにつきＬｆ＋ ２８ｇ又は乳脂肪（ＡＭＦ）１２０ｇのいずれかを含有する食餌、又はＬｆ及び乳脂肪の両方の組合せを含有する食餌を給餌した。 ０日目は、マウスをそれらの食餌に配置した日をいう。 これらの食餌で２週間経過後、ＥＬ−４細胞２×１０ ⁵個を、マウス側腹部へ注射した。 直交するふたつの直径（ｃｍ）により測定した腫瘍サイズを、５６日目までモニタリングした。 各ポイントは、６匹のマウス、又は示されたマウス数のいずれかに関する、平均腫瘍サイズと９５％信頼区間を表している。

腫瘍の消失は、Ｌｆ＋を給餌したマウス６匹中５匹で、及び乳脂肪食を給餌したマウス６匹全てで、１週間だけ遅延した（図３Ａ）。 Ｌｆ＋を給餌したマウス６匹中１匹は、腫瘍チャレンジを完全に拒絶した。 対照的に、Ｌｆ＋及び乳脂肪の組合せを給餌したマウス６匹は全て、腫瘍チャレンジを完全に拒絶し、このことは乳脂肪はＬｆ＋と相乗作用し、リンパ腫を根絶することを示している。

実施例５
本実施例は、乳脂肪は、Ｌｆ＋の抗腫瘍白血球細胞傷害性及び腫瘍アポトーシスを増強する能力を増大させることを示す。

脾細胞を、実施例４のマウスから５６日目に採取し、ＥＬ−４標的細胞に対するそれらの細胞溶解活性について試験した。 Ｌｆ＋又は乳脂肪のいずれかを給餌したマウスから得られた脾細胞の抗腫瘍細胞溶解活性は、対照食を給餌したマウスのそれと比べ、各々、６６％（Ｐ＜０．００１）及び６１％（Ｐ＜０．０１）有意に増加した（図３Ｂ）。 抗腫瘍細胞溶解活性は更に、Ｌｆ＋と乳脂肪の組合せを給餌したマウスについて、対照と比べ、８６％（Ｐ＜０．００１）増大した。

切片を、実施例４に説明されたマウスの腫瘍から５６日目に調製し、かつ末端デオキシヌクレオチジル転移酵素仲介性デオキシウリジン三リン酸−ジゴキシゲニンニック末端標識（ＴＵＮＥＬ）法により、及び同じくアネキシン−Ｖ−フルオレセイン法により染色した。 腫瘍切片のＴＵＮＥＬ又はアネキシン−Ｖ−フルオレセイン染色により検出されたアポトーシス細胞の数を、×４０倍の観察で１０の無作為に選択された視野について決定した。 アポトーシス指数（Ａ／Ｉ）は、アポトーシス（ＴＵＮＥＬ又はアネキシン−Ｖ−フルオレセイン陽性）細胞の数×（１００／細胞総数）である。 乳脂肪及びＬｆ＋は、対照食と比べ腫瘍アポトーシスを、各々、７３％及び６８％増大した（図３Ｃ）。 その増大した抗腫瘍細胞溶解活性に従い、乳脂肪とＬｆ＋の組合せは、腫瘍アポトーシスを８４％増大した。

実施例６
本実施例は、乳脂肪は、腫瘍血管新生を阻害することを示す。

Ｌｆ＋及び乳脂肪の腫瘍血流及び血管分布に対する作用を、抗ＣＤ３１及び抗ＣＤ１０５ ｍＡｂによる実施例５に説明したように調製した腫瘍切片の染色により、及びＤｉＯ７の潅流により、各々、分析した。 腫瘍切片は、実施例４に説明したように処置したマウスから５６日目に調製し、抗ＣＤ３１ ｍＡｂ ＭＥＣ１３．３又は抗ＣＤ１０５ ｍＡｂのいずれかで染色し、血管を可視化するか、あるいは、血流を可視化するために、組織採取の１分前に、ＤｉＯ７を尾静脈に注射した。 染色した血管は、６つの盲検的に選択したランダム視野において、６匹のマウスから、カウントした。

図３Ｄに示したように、対照食で維持したマウスのものと比べ、Ｌｆ＋、乳脂肪、又は乳脂肪とＬｆ＋の組合せを給餌したマウスの腫瘍のＣＤ３１＋血管の数は、各々、８４％（Ｐ＜０．００１）、７２％（Ｐ＜０．００１）、及び８４％（Ｐ＜０．０１）だけ有意に低下し、かつ血流は、各々、８４％（Ｐ＜０．００１）、６８％（Ｐ＜０．００１）、及び８４％（Ｐ＜０．００１）だけ低下した。 同様の結果が、他の腫瘍血管分布のマーカーとしての、ＣＤ１０５＋血管の染色及びＤｉＯ７の潅流から得られた。 これらの結果は、乳脂肪は、血管新生を阻害することを示している。

実施例７
本実施例は、α脂質粉末（Phospholac 600(商標))、スフィンゴミエリン、及び９，１１ ＣＬＡ異性体は、腫瘍の成長を阻害するが、Ｌｆ＋とは腫瘍を根絶するように効果的に相乗作用しないことを示す。

Ｃ５７ＢＬ／６マウス５匹の群には、基本ＡＩＮ−９３食（図４Ａ）、又は食餌２．４ｋｇにつき、Ｌｆ＋ ２８ｇ（図４Ｂ）、Phospholac 600(商標)１２０ｇ（図４Ｃ）、又はスフィンゴミエリン１．２ｇ（図４Ｄ）で置換された同一食を給餌した（各々、食餌の脂肪成分の〜７１及び０．７１％を表す）。 マウスは、食餌に配置した２週間後に、ＥＬ−４腫瘍細胞で皮下チャレンジした。 腫瘍サイズは再度、直交するふたつの直径（ｃｍ）により測定した。

Ｌｆ＋は、腫瘍成長を遅延し、ふたつの腫瘍の成長は、２週間遅延され、かつひとつは少なくとも１週間遅延された。 Phospholac 600(商標)は、対照食を給餌したマウスと比べ、１匹のマウスにおける腫瘍発生を完全に阻害し、かつ別のマウスにおいて２４日間腫瘍発生を遅延したのに対し、残りの３匹のマウスにおいて腫瘍の成長に対する影響は明らかではなかった。 スフィンゴミエリンは、２匹のマウスにおいて〜１週まで、及び２匹の別のマウスにおいて〜２週まで腫瘍成長を遅延した点においてＬｆ＋と同等に有効であったが、これは残りのマウスの腫瘍成長に対しては明らかな影響を有さなかった。 ５匹のマウスの追加群は、Ｌｆ＋（２８ｇ／２．４ｋｇ食餌）とPhospholac 600(商標)（１２０ｇ／２．４ｋｇ食餌）（図４Ｅ）又はスフィンゴミエリン（１．２ｇ／２．４ｋｇ食餌）（図４Ｆ）のいずれかの組合せを給餌した。 Phospholac 600(商標)と組合せたＬｆ＋は、完全な腫瘍根絶（ここでＬｆ＋と乳脂肪の組合せにより認められたような）には繋がらなかった。 むしろ全般的作用は、Phospholac 600(商標)単剤療法で認められるものに類似していた。

Ｌｆ＋とスフィンゴミエリンの組合せは、各々の単剤療法よりも作用が少なく、その結果腫瘍成長は対照マウスに類似しており、このことはこれらふたつの生体活性は互いに拮抗することを示唆している（図４Ｆ）。

マウス食餌中のｃ−９、ｔ−１１ ＣＬＡ異性体の食餌２．４ｋｇにつき５ｇの含有は、食餌の脂肪成分３％を表し、これは４Ｔ１腫瘍の成長を弱く阻害したのみであり、Ｌｆ＋との相乗作用を示さなかった。

実施例８
本実施例は、乳脂肪は、単独で、又は化学療法との組合せのいずれかで、４Ｔ１乳癌腫瘍の成長を遅延することを示している。

Ｂａｌｂ／ｃマウス６匹の群には、基本ＡＩＮ−９３食、又は食餌の脂肪成分の〜７１％を表している、５％乳脂肪で置換した同一食を給餌した。 マウスは、食餌に配置した２週間後に、２×１０ ⁴個の４Ｔ１腫瘍細胞で皮下チャレンジした。 マウスは腫瘍成長についてモニタリングし、腫瘍サイズは、３日毎に測定した。

腫瘍は、３日後に、乳脂肪食を給餌したマウスにおいて、対照食を給餌したマウスと比べ触知可能であり、かつチャレンジ後３５日目にマウスを安楽死させた場合、形成された腫瘍は、平均２１％より小さかった（Ｐ＜０．０５）（図５）。 一旦腫瘍が直径〜０．５ｃｍに達した時点で、化学療法薬パクリタキセルを、腹腔内投与し（３０ｍｇ／ｋｇ体重）、対照食を給餌した腫瘍サイズにおいて３１％（Ｐ＜０．０５）の減少を生じた（３５日目）。 ３５日目に、パクリタキセル処置は、乳脂肪を給餌したマウスの腫瘍のサイズを、対照食を給餌したパクリタキセル処置マウス及び対照食を給餌した未処置マウスのものと比べ、各々、３５％（Ｐ＜０．０５）及び４９％（Ｐ＜０．０１）減少した。

実施例９
本実施例は、乳脂肪は、肺及び肝臓に播種する４Ｔ１乳癌腫瘍の外側への成長を抑制することを示す。

肺転移の抑制 ：４Ｔ１乳癌細胞株は、高度に転移性であり、かつ肺及び肝臓へ播種する。 実施例８（３５日目）のマウスの肺を、腫瘍及び微小転移について調べた。 対照食を給餌した未処置のマウス、対照食を給餌したパクリタキセル処置マウス、乳脂肪を給餌した未処置のマウス、及び乳脂肪を給餌したパクリタキセル処置マウスの肺表面上の腫瘍の平均数は、各々、３２、１８、２２、及び１０であった（図６）。

パクリタキセル療法及び高投与量の乳脂肪の給餌は、対照食を給餌した未処置マウスと比べ、肺表面上の腫瘍の数を、各々、４４％及び３１％有意に（Ｐ＜０．０１）低下した。

パクリタキセル療法と組合せた乳脂肪食は、対照食を給餌した未処置のマウス、及び対照食を給餌したパクリタキセル処置したマウスと比べ、各々、腫瘍数の６３％（Ｐ＜０．００１）及び４４％（Ｐ＜０．０５）の更により大きい低下を生じた。 従って対照食を給餌したパクリタキセル処置マウス、乳脂肪を給餌した未処置のマウス、及び乳脂肪を給餌したパクリタキセル処置マウスの肺重量は、対照食を給餌した未処置のマウスと比べ、３０、２２、及び４０％だけ有意に低下した（表７）。

¹データは、平均±ＳＥＭとして表している。 統計学的有意性は、スチューデントｔ検定により決定した。 ² Ｐ＜０．０５は、対照食を給餌した腫瘍を有さないマウスの体重と比較した。 ^3,4 Ｐ＜０．０５は、対照食を給餌した腫瘍を有するマウスの体重と比較した。 ⁵ Ｐ＜０．０５は、対照食を給餌し、パクリタキセルで処置した腫瘍を有するマウスの体重と比較した。

肝臓転移の抑制 ：同様に、先のマウスの肝臓を、腫瘍及び微小転移について調べた。 肝臓は、摘出し、切片化し、ヘマトキシリン／エオシンで染色し、肝臓の内側の転移性小結節の数をカウントした。 対照食を給餌した未処置のマウス、対照食を給餌したパクリタキセル処置マウス、乳脂肪を給餌した未処置のマウス、及び乳脂肪を給餌したパクリタキセル処置マウスに関する転移の数は、各々、１０８、５９、７４、及び３６であった（図７）。 同じく、パクリタキセル療法及び高投与量の乳脂肪の給餌は、対照食を給餌したマウスと比べ、肝臓の腫瘍の数を、各々、４５％及び３２％有意に（Ｐ＜０．０１）低下した。

パクリタキセル療法と組合せた乳脂肪食は、対照食を給餌した未処置のマウス、及び対照食を給餌したパクリタキセル処置したマウスと比べ、各々、腫瘍数の６７％（Ｐ＜０．００１）及び３９％（Ｐ＜０．０５）の更により大きい低下を生じた。

実施例１０
本実施例は、乳脂肪は、腫瘍血管新生を阻害することを示す。

腫瘍血管新生を測定するために、対照食を給餌した未処置のマウス、対照食を給餌したパクリタキセル処置マウス、乳脂肪を給餌した未処置のマウス、及び乳脂肪を給餌したパクリタキセル処置マウスの前記４Ｔ１原発性腫瘍（実施例８；３５日目）を摘出し、切片とし、抗ＣＤ３１抗体により染色し、血管内皮細胞を同定した。 抗ＣＤ３１ ｍＡｂ染色血管を、盲検的に選択したランダム視野でカウントし、平均血管密度（８Ａ）、又はアレイポイントから最も近いＣＤ３１ ｍＡｂ標識血管の距離の中央値（８Ｂ）を記録した。

パクリタキセル療法及び高投与量の乳脂肪の給餌は、対照食を給餌した未処置のマウスと比べ、微細血管密度（ＣＤ３１＋血管）を、各々、３７％及び３１％だけ有意に（Ｐ＜０．０５）低下した（図８Ａ）。 同じくこれらは、最も近いＣＤ３１＋血管への距離の中央値を、各々、７１及び５９％だけ有意に（Ｐ＜０．０５）増加した（図８Ｂ）。

パクリタキセル療法と組合せた乳脂肪食は、対照食を給餌した未処置のマウス、対照食を給餌したパクリタキセル処置マウスと比べ、微細血管密度の、各々、５２％（Ｐ＜０．００１）及び２２％（Ｐ＜０．０５）の更により大きい低下を生じた。 同じく、パクリタキセル療法と組合せた乳脂肪食は、対照食を給餌した未処置のマウス、対照食を給餌したパクリタキセル処置マウスと比べ、最も近いＣＤ３１＋血管への距離の中央値の、各々、１２５％（Ｐ＜０．００１）及び３１％（Ｐ＜０．０５）の更により大きい増加を生じた。

実施例１１
悪液質は、患者を生理的に衰弱させ、かつ患者の治療に対する反応を低下するので、これは癌患者にとって重大な問題である。 改善された栄養分は、悪液質を根治するひとつの手法である。 本実験は、乳脂肪の給餌は、乳癌の本出願人のモデルマウスにおける悪液質状態を改善するかどうか、及び高コレステロール血症の飽和脂肪酸(例えばステアリン酸エステル)を含む高投与量乳脂肪の長期給餌は、肝臓及び脾臓のようなある種の臓器に対し有害であるかどうかを調べた。 本実施例は、高投与量乳脂肪食は、明らかな臓器毒性を示さず、進行した癌に起因する悪液質を弱毒化することを示す。

臓器毒性の欠如 。 高投与量乳脂肪を給餌したマウスの脾臓及び肝臓は、対照食を給餌したマウスのものと比べ、明らかな毒性兆候を示さず、有意な変化は存在しなかった（Ｐ＞０．０５）（表７）。

悪液質の低下 。 転移性乳癌の４Ｔ１モデルは、癌悪液質の理想的モデルである。 腫瘍の確立は、同じ対照食を給餌した腫瘍を有さないマウスと比べ、腓腹筋及び副睾丸脂肪組織の、各々、４０％（Ｐ＜０．０５）及び８３％（Ｐ＜０．０１）の重量喪失を反映している、カーカス重量の１２％の有意な（Ｐ＜０．０５）低下を生じた（表７）。 乳脂肪を給餌した未処置マウス、及び乳脂肪を給餌したパクリタキセル処置マウスにおける、各々、対照食を給餌した未処置マウス、及び対照食を給餌したパクリタキセル処置マウスと比較して、カーカス重量（９．２及び１７．６％）、及び腓腹筋重量（３３．４及び２７．６％）、及び副睾丸脂肪組織（１０７及び１４１％）の有意な（Ｐ＜０．０５）増加により証明されたように、悪液質の軽減が、乳脂肪食を給餌したマウスにおいて認められた。 腓腹筋及び副睾丸脂肪組織の重量の増加は、腫瘍を有するマウスに制限されず、健常な腫瘍を有さないマウスへの乳脂肪の給餌は、対照食を給餌した健常な腫瘍を有さないマウスのものと比べ、これらの組織の各重量を８．２及び１２％だけ増加した（Ｐ＜０．０５）。

実施例１２
癌及び化学療法などの癌治療の最も重篤な副作用のひとつは、血液学的抑制であり、これは免疫不適当に繋がり、次に重度の感染症を、更には死亡を引き起こし得る。 本実施例は、乳脂肪食は、癌及び化学療法に起因する血液学的抑制を軽減することを示す。

先の実施例１１の悪液質マウスにおいて、赤血球（ＲＢＣ）及び白血球（ＷＢＣ）のカウントは、同じ対照食を給餌した健常な腫瘍を有さないマウスのものと比べ、各々、２３及び２９％だけ有意に（Ｐ＜０．０５）低下した（表７）ので、造血異常が認められた。 パクリタキセル化学療法は、対照食を給餌した腫瘍を有するマウスと比べ、ＲＢＣ及びＷＢＣカウントの更なる４９及び４４％の低下、並びに脾臓重量の相当する８．５％の低下を引き起こした。

対照的に、乳脂肪を給餌したパクリタキセル処置マウスのＲＢＣ及びＷＢＣカウントは、対照食を給餌した健常な腫瘍を有さないマウスのものと比べ、各々、わずかに１１％及び７％だけ、並びに脾臓重量は３％だけ低下した（表７）。 乳脂肪を給餌した未処置の腫瘍を有するマウスのＷＢＣカウントは、わずかに５％だけ低下したのに対し、ＲＢＣカウントは、９％だけ（Ｐ＜０．０５）わずかに増加し、かつ脾臓重量は完全に回復した。 乳脂肪を給餌したパクリタキセル処置マウスのＲＢＣ及びＷＢＣカウントは、対照食を給餌したパクリタキセル処置マウスのそれと比べ、各々、５６及び５７％だけ（Ｐ＜０．０１）、かつ脾臓重量は１１％だけ（Ｐ＜０．０５）有意に増加した（表７）。 乳脂肪を給餌した未処置の腫瘍を有するマウスのＲＢＣ及びＷＢＣカウントは、対照食を給餌した未処置の腫瘍を有するマウスのそれと比べ、３４及び２７％だけ（Ｐ＜０．０５）増加した。

従って乳脂肪食は、癌により及び化学療法により損なわれた赤血球数及び白血球数を増加又は回復することにより、血液学的抑制を軽減する。

実施例１３
細胞毒性薬は、小腸絨毛を損傷し、それらを扁平化させ始め、これにより腸管の吸収特性を変更する(Melicharら、2005)。 本実施例は、乳脂肪食は、化学療法が誘導した腸管損傷を改善することを示している。

乳脂肪は、パクリタキセルが誘導した損傷に対し腸管を保護するかどうかを決定するために、Ｂａｌｂ／ｃマウス６匹の群を、基本ＡＩＮ−９３食、又は食餌の脂肪性分の〜７１％を表す、５％乳脂肪で置換された同一食を給餌した。 ２週間後、各マウスは、パクリタキセル（３０ｍｇ／ｋｇ体重）の腹腔内注射を受け取った。 １週間後、これらを屠殺し、空腸を摘出した。 対照食、乳脂肪食、対照食とパクリタキセル、及び乳脂肪食とパクリタキセルで処置したマウスの空腸のパラフィン包埋切片を、ヘマトキシリン・エオシンにより染色した。

対照食及び乳脂肪食を給餌した未処置の健常マウスは、予想されたように無傷の小腸絨毛を有した。 対照的に、パクリタキセルで処置されたマウスの切片は、これらのマウスの空腸は、破壊され扁平化された絨毛を含むことを明らかにした。 乳脂肪を給餌したパクリタキセル処置したマウスの絨毛は、ほとんど無傷であり、このことは乳脂肪食は、腸の内層に対し保護的作用を働くことを示唆している。

腸管損傷の程度を定量化するために、絨毛の平均長を測定した。 パクリタキセルは、対照マウスのそれと比べ、絨毛の平均長を６１％だけ有意に低下した（Ｐ＜０．０１）（図９Ａ）。 乳脂肪食を給餌したパクリタキセル処置したマウスの絨毛の平均長は、対照マウスと比べ２９％だけ低下した（Ｐ＜０．０５）ので、乳脂肪食は、パクリタキセルに起因する小腸損傷を保護した。 乳脂肪食を給餌したパクリタキセル処置したマウスの絨毛は、対照食を給餌したパクリタキセル処置したマウスのそれよりも、有意に長かった（４０％、Ｐ＜０．０５）。

小腸の刷子縁上皮のマーカーである空腸γ−グルタミルトランスペプチダーゼ（γ−ＧＧＴ）の活性(Tate及びMeister、1981、並びにFerrarisら、1992)は、腸管損傷の個別の測定として記録した。 パクリタキセル処置は、未処置の対照マウスと比べ、空腸の粘膜内のγ−ＧＧＴのレベルを５６％だけ（Ｐ＜０．０１）顕著に低下した（図９Ｂ）のに対し、乳脂肪食を給餌したパクリタキセル処置したマウスのγ−ＧＧＴ活性は、わずかに２９％だけ低下した（Ｐ＜０．０５）。 空腸のγ−ＧＧＴ活性は、乳脂肪食を給餌したパクリタキセル処置したマウスにおいて、対照食を給餌したパクリタキセル処置したマウスのそれと比べ、有意に増加した（７８％、ｐ＜０．０５）。

化学療法に起因する小腸の粘膜炎は、絨毛萎縮へと進行する、腺窩中の細胞アポトーシスに関連している(Keefeら、2000)。 対照食及び乳脂肪食を給餌した未処置のマウスの腺窩には、ごくわずかなアポトーシス細胞が存在した。 対照的に、対照食を給餌しかつパクリタキセルで処置したマウスの小腸切片は、多数のアポトーシス細胞を含んだ。 乳脂肪食は、アポトーシス体の数を顕著に低下した。 １０のランダムに選択した腺窩中のアポトーシス細胞をカウントし、１腺窩あたりのアポトーシス体として表した（図１０）。 パクリタキセル処置は、アポトーシス体カウントを、未処置マウスと比べ、６倍まで有意に増加した。 乳脂肪食は、パクリタキセル処置したマウスのアポトーシス体カウントを、対照食と比較して、３９％だけ有意に（Ｐ＜０．０５）低下した。

実施例１−１３の考察
前記実験は、普通の無水乳脂肪は、経口投与された場合に、抗腫瘍活性を有することを示している。 乳脂肪の投与は、確立されたリンパ腫の免疫療法を増強し、かつ確立された乳癌腫瘍の化学療法的処置を増強した。

Ｌｆ＋と組合せた乳脂肪は、リンパ腫でチャレンジした全ての対象における腫瘍発生を完全に阻害し、増加した抗腫瘍細胞溶解活性、腫瘍アポトーシス、及び低下した腫瘍血管分布を引き起こした。

化学療法的処置と組合せた乳脂肪の投与は、乳癌腫瘍の成長を遅延したのに対し、乳脂肪は、単独で又は化学療法的処置との組合せのいずれかで、乳癌腫瘍の肺及び肝臓への転移並びにこれらの臓器における外側への成長を有意に抑制した。

抗腫瘍活性は、乳脂肪画分の投与でも認められた。 ここでPhospholac 600(商標)及びスフィンゴミエリンの両方が、腫瘍発生の遅延を引き起こした。

更に、乳脂肪の投与は、乳癌腫瘍及び／又は化学療法から生じる、血液学的抑制、悪液質及び腸管損傷を軽減した。

実施例１４
本実施例は、乳脂肪は、化学療法に起因した体重減少を有意に阻害し、かつ体重増加を促進することができることを示している。

食餌
被験食は、粉末化されたＡＩＮ９３Ｇ配合物を主材料として使用し、Crop & Food Research(パルマーストンノース, ニュージーランド)により調製した。 ＡＩＮ９３Ｇ食において、カゼインは、タンパク質給源として、及びダイズ油は脂質給源として使用した。 被験食において、ダイズ油は、無水乳脂肪（ＡＭＦ）と置換し、その結果食餌の総脂肪含量は不変であった。 この食餌は、食餌２ｋｇにつきＡＭＦの１００、３５．７、又は７．１ｇのいずれかを含有し、これはその食餌の総脂質含量（１４０ｇ脂質／２ｋｇ）の７０、２５、及び５％を表している。 新鮮な食餌を週２回提供し、マウスは学習により食物及び水は自在摂取した。

化学療法の副作用を分析するための実験モデル
シクロホスファミドは、動物倫理委員会の承認（オークランド大学）に従い投与した。 全ての実験は、別に記さない限りは、１処置群当たりマウス６匹を含んだ。 ＰＢＳ中に希釈したシクロホスファミドは、３００ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。 血液を、剖検時に心穿刺により収集した。

Ｃ５７ＢＬ／６マウス６匹の群には、ＡＩＮ９３Ｇ食、又は５％、２５％又は７０％乳脂肪のいずれかで置換した同一食を給餌し、４週間飼養した後、シクロホスファミド（３００ｍｇ／ｋｇ体重）を０日目に腹腔内注射した。 マウスは、４、８、及び１２日後に屠殺し、以下に説明されたように、組織を、薬物処置の副作用について分析した。

図１１Ａに示されたように、０日目（すなわち、化学療法前の４種の異なる食餌で４週間飼養後）には、マウスの体重に有意差は存在しなかった。 対照的に、化学療法後丁度４日目に、対照食を給餌したマウスは、それらの体重が７％減少した（図１１Ｂ）。 ふたつの最高投与量の乳脂肪は、４日目の体重減少の程度が、対照食と比較して、各々、５４％（Ｐ＜０．００１）及び３９％（Ｐ＝０．００１７）だけ有意に低下した。 最低投与量の乳脂肪は、体重減少を、対照と比較して１９％（Ｐ＝０．０６８）と有意には低下しなかった。 対照食のマウスは、化学療法後１２日目に体重増加の改善をほとんど見せないのに対し、対照的に最低投与量の乳脂肪を給餌したマウスの体重は、ほぼ正常に回復し（Ｐ＜０．００１）、ふたつの最高投与量の乳脂肪のマウスは、実際に体重が増加した（図１１Ｃ）。

実施例１５
本実施例は、乳脂肪は、化学療法後の循環及び脾臓の白血球（ＷＢＣ）の回復を促進し、脾臓のコロニー形成単位の発達を刺激し、かつ脾臓の再構成を推進することを示す。

異なる乳脂肪食の４週間の給餌は、化学療法前に末梢ＷＢＣカウントに対し有意な作用を有さなかった。 シクロホスファミドは、実施例１４のマウスにおいて４日目の末梢ＷＢＣカウントを、給餌された食餌に関わらず９０％より多く重度に低下した（図１２）。 ＷＢＣカウントは、４群のマウス全てにおいて８日目までに回復し始めた。 １２日目までのＷＢＣカウントの回復は、最高投与量の乳脂肪を給餌したマウス群において、有意に（Ｐ＝０．００２８）増加した。 これらのマウスに関して、ＷＢＣカウントは、正常にまで回復した。 対照的に、より低い投与量の乳脂肪は、ＷＢＣカウントの回復を有意に促進しなかった。

異なる乳脂肪食の４週間の給餌は、化学療法前の脾細胞充実性に対し有意な作用を有さなかった（図１３Ａ）。 シクロホスファミドは、対照食を給餌したマウスにおいて、４日目に脾細胞を重度に低下した。 ７０％、２５％、及び５％の乳脂肪食は、対照食と比べ、４日目の脾細胞の喪失を、各々、５２％、４１％、及び２５％まで軽減した。 ７０％及び２５％の乳脂肪食は、８日目に、脾細胞の喪失を、各々、３２％及び２７％まで減弱したのに対し、７０％乳脂肪食のみが、１２日目の脾細胞に影響を及ぼした（図１３Ａ）。

脾臓内の細胞の補充は、脾臓コロニー形成単位の発達により、化学療法後４日目に始まった。 ７０％、２５％、及び５％の乳脂肪食は、脾臓コロニー形成単位の形成を、８日目に、各々、２０７％、１３０％、及び８５％まで各々有意に刺激した（図１３Ｂ）。 １２日目までに、７０％及び２５％乳脂肪食を給餌したマウスにおいて、脾細胞はほとんど正常にまで回復し、従ってコロニー形成単位の数は、乳脂肪食において有意に低下したことは驚くべきことではないのに対し、対照食を給餌したマウスの脾臓では依然修復を受けている（図１３Ｂ）。

実施例１６
本実施例は、乳脂肪は、化学療法後の赤血球（ＲＢＣ）のサイズ及びヘモグロビン含量を増加することを示している。

シクロホスファミドは、給餌した食餌とは関わりなく、実施例１４のマウスにおいて８日目に末梢ＲＢＣカウントを低下した（図１４Ａ）。 ＲＢＣの喪失は、４日目に１７％〜２２％であり、これは実施例１５のＷＢＣの喪失の程度よりも少なかった。 ＲＢＣ数は、８日目まで減少し続け、１２日目に完全には回復していなかった。 乳脂肪食は、ＲＢＣカウントのシクロホスファミドが誘導した低下に有意に影響を及ぼさなかった。 より高い投与量の乳脂肪は、ＲＢＣ数の回復を増強するように見えたのに対し、これらの結果は有意ではなかった。

驚くべきことに、ふたつの最高投与量の乳脂肪は、ヘマトクリット（ＨＣＴ）レベルの喪失を防止するか及び／又はこれの回復を促進した（図１４Ｂ）。 ヘマトクリットは、赤血球によって構成された全血の割合であり、ＲＢＣの数及びそれらのサイズの両方の測定値である。 乳脂肪食がＲＢＣ数に有意に影響を及ぼさないならば、ＨＣＴレベルの増加は、ＲＢＣの平均血球容積の増加の結果であると推定することができる。 ７０％乳脂肪食は、８日目のＨＣＴレベルの低下を、有意に（Ｐ＝０．０２３）軽減し（対照食に関する３１％の低下と比べ、１８％の低下）、かつＨＣＴレベルを１２日目までにほぼ正常レベルまで増加した（Ｐ＜０．００１）。 ２５％乳脂肪食は、８日目の１８％の減少が、対照食に関する３１％減少と比べ認められ、並びに１２日目の９％の減少が、対照食に関する２４％減少と比べ認められ、これは８日目（Ｐ＝０．０１７）及び１２日目（Ｐ＝０．００６）にＨＣＴレベルの回復を有意に促進した。 この最低投与量の乳脂肪の作用は、有意性に達していなかった。

重要な問題点は、ＨＣＴレベルの増加も、ヘモグロビンの全体レベルの増加を反映しているかどうかであった。 ７０％乳脂肪食は、対照食に関する３１％減少と比べ２２％減少が認められ、これは８日目のヘモグロビンの低下を軽減したが、この変化は、有意性には達していなかった（図１４Ｃ）。 しかしこれは、対照食を給餌したマウスのそれと比べ、ヘモグロビンレベルを１２日目に１８％だけ有意に増加した（Ｐ＝０．００４８）。 ２５％乳脂肪食は、対照食に関する３１％減少と比べ８日目に２０％減少が、並びに対照食に関する２６％減少と比べ１２日目に１２％減少が認められ、これは８日目（Ｐ＝０．０３０）及び１２日目（Ｐ＝０．０１５）のヘモグロビンレベルの回復を有意に促進した。 この最低投与量の乳脂肪の作用は、有意性に達していなかった。

まとめると、これらの結果は、乳脂肪の摂取は、ＲＢＣ数には有意に影響しないが、これはＲＢＣサイズ及びヘモグロビン量を増大し、かつこれにより貧血に対し有益な作用を有する可能性があることを指摘している。 これらの結果は、異常な小型ＲＢＣにより特徴付けられる小球性貧血の例である、鉄欠乏性貧血の治療に関する重要な暗示である。

実施例１７
先に説明されたように、粘膜炎は、癌化学療法が、胃腸管の内層である迅速に分裂する上皮細胞を破壊する場合に生じ、粘膜組織を潰瘍及び感染症へと開く。 本実施例は、乳脂肪が、化学療法に起因した腸管損傷を軽減することを示している。

乳脂肪は、シクロホスファミドが誘導した損傷に対し腸管を保護したかどうかを決定するために、実施例１４のマウスの空腸を、切片とし、パラフィン包埋し、かつヘマトキシリン・エオシンで染色した。

４週間の異なる乳脂肪食の給餌は、化学療法前に、空腸絨毛に対し識別できる作用は有さなかった（図１５）。 シクロホスファミド単回注射により処置したマウスの切片は、これらのマウスの空腸は、破壊され扁平化された絨毛を含むことを明らかにした。 平均絨毛長を、化学療法が誘導した損傷の測定に使用した。 シクロホスファミドは、健常対照マウスのものと比べ、平均絨毛長を６５％だけ有意に減少した（Ｐ＜０．００１）（図１５）。 ７０％、２５％、及び５％乳脂肪食を給餌したシクロホスファミドで処置したマウスの平均絨毛長は、対照食を給餌したマウスと比べ、４日目に、各々、３６％（Ｐ＜０．０１）、４１％（Ｐ＜０．０１）、及び５２％（Ｐ＜０．００１）低下し、８日目に、各々、２１％（Ｐ＜０．０５）、２４％（Ｐ＜０．０１）、及び３１％（Ｐ＜０．０１）低下したので、これらの乳脂肪食は、シクロホスファミドにより引き起こされる小腸損傷を保護した。 ７０％及び２５％乳脂肪食を給餌したシクロホスファミドで処置したマウスの絨毛は、対照食を給餌したシクロホスファミドで処置したマウスのそれよりも、化学療法後４日間（各々、７１％及び５８％、両方ともＰ＜０．０１）、及び８日間（各々、４４％及び３６％、両方ともＰ＜０．０５）有意に長かった。 １２日目までに、対照食を給餌したマウスの腸は、回復し始め、最高投与量の乳脂肪のみ、有意な作用を維持することが認められた。

これらの結果は、乳脂肪食は、特に化学療法後の治療の作用が最も重症である最初の数日間に、腸の内層に対する保護作用を発揮することを示唆している。 いずれかの理論と結びつけられることを欲するものではないが、乳脂肪食による腸の保護は、少なくとも一部は、化学療法に起因した低下した体重減少及びこれらの食餌を給餌したマウスにおいて観察された増大した体重増加が原因であると考えられる。 乳脂肪食は、食欲の維持、及び腸管の吸収特性を補助するように見える。 これらの食餌は、エネルギー量の釣り合いがとれており、かつ乳脂肪−給餌したマウスは、化学療法前の４週間の給餌期間は太らなかったので、増大した体重増加は、単に乳脂肪のカロリー値がより高いことが原因ではない。

実施例１４−１７の考察
先の実施例１-１３は、腫瘍を有するマウスにおける乳脂肪の化学療法の副作用に対する作用を試験した。 実施例１４-１７においては、そうではない正常な健常マウスにおけるシクロホスファミドが媒介した化学療法の副作用に対する乳脂肪の直接作用を試験した。 シクロホスファミドは、細胞の代謝及び再生を強力に阻害し、その結果副作用として、これは免疫系及び血液系の細胞の成長及び増殖を阻害し、骨髄抑制及び貧血を引き起こす薬物である。 研究は、軽度から中等度の貧血を含む、化学療法が誘導した貧血は、癌患者の生活の質に悪い影響があることを報告している(Groopman JE、Itri LM、「Chemotherapy-induced anemia in adults: incidence and treatment」、J Natl Cancer Inst. 1999 Oct 6；91 (19):1616-34)。 化学療法は、食欲減退、粘膜炎、悪心、腸管損傷、及び脱水症状の結果として、体重減少を引き起こすことによっても、癌患者の生活の質を低下し得る。

本明細書において得られたこれらの結果は、乳脂肪は、化学療法の副作用を防止又は軽減する点で有効であることを指摘している。

実施例１８
本実施例は、乳脂肪は、血液学的抑制、貧血、及び腸管の損傷を含む、対象における複数の化学療法の副作用を軽減するよう、Ｌｆ＋と相乗作用することを示している。

食餌
被験食は、粉末化されたＡＩＮ９３Ｇ配合物を主材料として使用し、Crop & Food Research(パルマーストンノース, ニュージーランド)により調製した。 ＡＩＮ９３Ｇ食において、カゼインは、タンパク質給源として、及びダイズ油は脂質給源として使用した。 被験食において、ダイズ油は、無水乳脂肪（ＡＭＦ）と置換し、その結果食餌の総脂質含量は不変であった。 被験食において、カゼインは、Ｌｆ＋と置換し、その結果食餌の総タンパク質含量は不変であった。 ＡＭＦと置換した食餌は、食餌２ｋｇにつきＡＭＦ ３５ｇを含有し、これは食餌の総脂質含量（１４０ｇ脂質／２ｋｇ）の２５％を表す。 Ｌｆ＋と置換した食餌は、食餌２ｋｇにつきＬｆ＋ ０．１、１、又は１０ｇのいずれかを含有し、これは食餌の総タンパク含量（４００ｇタンパク質／２ｋｇ）の０．０２５、０．２５、及び２．５％を表す。 一部の食餌は、食餌２ｋｇにつきＡＭＦ ３５ｇ及び前述の量のひとつのＬｆ＋の組合せを含有した。 新鮮な食餌を週２回提供し、マウスは学習により食物及び水は自在摂取した。

化学療法の副作用を分析するための実験モデル
シクロホスファミドは、動物倫理委員会の承認（オークランド大学）に従い投与した。 全ての実験は、１処置群当たりマウス２４匹を含んだ。 ＰＢＳ中に希釈したシクロホスファミドは、３００ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。 血液収集に関して、マウスに深麻酔をかけ、心穿刺により放血した。

Ｃ５７ＢＬ／６マウス２４匹の群には、ＡＩＮ９３Ｇ食、又は乳脂肪、Ｌｆ＋、又は乳脂肪とＬｆ＋の組合せのいずれかで置換した同一食を給餌し、４週間飼養した後、シクロホスファミド（３００ｍｇ／ｋｇ体重）を０日目に腹腔内注射した。 マウスは、０日目、並びに４、８、及び１２日後に６匹の群で屠殺し、以下に説明されたように、血液及び腸管組織を、薬物処置の副作用について分析した。

８日目の平均絨毛長を、乳脂肪補充（０対２５％）、Ｌｆ＋補充（０対０．０２５％）の作用及びそれらの相互作用に関して、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて解析した。 個別の群は、テューキーの多重比較検定を用いて比較した。

乳脂肪は、Ｌｆ＋と相乗作用し、化学療法が誘導した腸管損傷を阻害する。 ４週間にわたる異なる乳脂肪食の給餌は、化学療法前に、空腸絨毛長に対し識別できる作用は有さなかった（図１６）。 平均絨毛長を、化学療法が誘導した損傷の測定に使用した。 シクロホスファミドは、４日目までに、全ての群において(al ll groups)平均絨毛長を有意に減少した（図１６）。 ２５％乳脂肪は、シクロホスファミドに起因する腸損傷からの回復を促進した。 ８日目に、乳脂肪群の平均絨毛長は、対照群よりも有意に大きかった（Ｐ＜０．００１）。

乳脂肪とＬｆ＋の組合せは、乳脂肪単独及びＬｆ＋単独と比べ、有意に大きい絨毛長を生じた（Ｐ＜０．０１）。

実施例１９
本実施例は、乳脂肪は、化学療法後の循環白血球（ＷＢＣ）の回復を促進するよう、Ｌｆ＋と相乗作用することを示している。

４日目と８日目の間のＷＢＣカウントの差異を、乳脂肪補充（０対２５％）、Ｌｆ＋補充（０対０．０２５％）の作用及びそれらの相互作用に関して、二元配置共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）を用いて解析した。 化学療法時の体重は、共変量として含んだ。 乳脂肪とＬｆ＋の組合せを、乳脂肪単独及びＬｆ＋単独と、片側ダネット検定を用い比較した。

心穿刺試料中のＷＢＣカウントは、実施例１８に説明したように、化学療法日、並びに４、８、及び１２日後に記録した。 ４週間の乳脂肪食及び０．０２５％Ｌｆ＋食の給餌は、化学療法前の末梢ＷＢＣカウントに対し有意な作用を有さなかった（図１７）。 シクロホスファミドは、実施例１９の全てのマウスにおいて、４日目に末梢ＷＢＣカウントを重度に低下した。 ＷＢＣカウントは、８日目までに、全てのマウス群において回復し始めた。 従って、底値（４日目）、対、ＷＢＣ数が統計学的に回復している場合の８日目のＷＢＣ数の比較を行った。 ＷＢＣカウントの増加は、０．０２５％Ｌｆ＋と乳脂肪の組合せを給餌したマウスにおいて、０．０２５％Ｌｆ＋食（Ｐ＝０．０４９）、及び乳脂肪食（Ｐ＝０．０１２）と比べ、有意に大きかった。

実施例２０
本実施例は、乳脂肪は、化学療法後の赤血球（ＲＢＣ）の数及びサイズを増加するよう、Ｌｆ＋と相乗作用し、ヘモグロビン含量を増加する傾向があることを示している。

ＲＢＣカウント、ＨＣＴ、及びヘモグロビンレベルを、乳脂肪補充（０対２５％）、Ｌｆ＋補充（０対０．０２５％）の作用及びそれらの相互作用に関して、二元配置ＡＮＣＯＶＡを用いて解析した。 化学療法時の体重は、共変量として含んだ。 乳脂肪とＬｆ＋の組合せを、乳脂肪単独及びＬｆ＋単独と、片側ダネット検定を用い比較した。

心穿刺試料中のＲＢＣカウント、ＨＣＴ、及びヘモグロビンは、実施例１８に説明したように、化学療法日、並びに４、８、及び１２日後に記録した。

シクロホスファミドは、給餌した食餌とは無関係に、実施例２０のマウスにおいて、４及び８日目に、ＲＢＣカウントを減少した（図１８）。 ＲＢＣ数は、８日目まで減り続け、その後回復し始めたが、１２日目に完全な回復には到達しなかった。 乳脂肪は、４及び８日目の底値を低下し、かつ１２日目のＲＢＣ数の回復を促進するように０．２５％Ｌｆと相乗作用するように見える。 １２日目のＲＢＣカウントは、０．２５％Ｌｆ＋と乳脂肪の組合せを給餌したマウスでは、０．２５％Ｌｆ＋食（Ｐ＝０．０１８）、及び乳脂肪食（Ｐ＝０．０２４）と比べ、有意に大きかった。

シクロホスファミドは、給餌した食餌とは無関係に、実施例２０のマウスにおいて、４及び８日目に、ＨＣＴを減少した（図１９）。 ＨＣＴは、８日目まで減り続け、その後回復し始めたが、１２日目に完全な回復には到達しなかった。 乳脂肪は、４及び８日目の底値を低下し、かつ１２日目のＨＣＴレベルの回復を促進するように０．２５％Ｌｆと相乗作用するように見える。 １２日目のＨＣＴは、０．２５％Ｌｆ＋と乳脂肪の組合せを給餌したマウスでは、０．２５％Ｌｆ＋食（Ｐ＝０．０４６）、及び乳脂肪食（Ｐ＝０．０４７）と比べ、有意に大きかった。

シクロホスファミドは、給餌した食餌とは無関係に、実施例２０のマウスにおいて、４及び８日目に、ヘモグロビンレベルを減少した（図２０）。 ヘモグロビンは、８日目まで減り続け、その後回復し始めたが、１２日目に完全な回復には到達しなかった。 乳脂肪は、４及び８日目の底値を低下し、かつ１２日目のヘモグロビンの回復を促進するように０．２５％Ｌｆと相乗作用するように見える。 １２日目のヘモグロビンは、０．２５％Ｌｆ＋と乳脂肪の組合せを給餌したマウスでは、０．２５％Ｌｆ＋食と比べ有意に大きかった（Ｐ＝０．０３８）。 これは、乳脂肪食と比べ、より高かったが、有意ではなかった（Ｐ＝０．０９４）。

まとめると、これらの結果は、０．２５％Ｌｆ＋と組合せた乳脂肪の摂取は、ＲＢＣ数、及びＲＢＣサイズを増加し、かつ全般的ヘモグロビン含量を増加する傾向が存在することを指摘している。 これらの結果は、化学療法が誘導した貧血を含む、貧血の治療に関して重要な意味を有する。

実施例２１
本実施例は、乳脂肪は、化学療法が誘導した食欲不振／悪液質を有意に軽減することを示す。 乳脂肪及びＬｆ＋の組合せを含有する食餌も同じく、化学療法が誘導した食欲不振／悪液質を軽減する。

体重は、実施例１８に説明したように、化学療法日、並びにその後４、８、及び１２日目に記録した。 乳脂肪は、性別、Ｌｆ＋補充、及び日数とは無関係に、マウスの体重を有意に（Ｐ＝０．００４）増加し−すなわち、いかなる有意な相互作用も存在しないために、両性の動物、全ての日、及び全てのＬｆ群で、解析不良であった（図２１）。 乳脂肪食も他の食餌も、化学療法前のマウスの体重に対してはいかなる有意な作用も有さないので、この乳脂肪の作用は化学療法に特異的であった。

本発明の方法、医薬用途及び組成物は、腫瘍成長の阻害、白血球数、赤血球数、又は骨髄細胞数の１又は２以上の維持又は改善、免疫系の刺激、又は、癌の治療又は予防に有用である。 かかる方法及び医薬用途は、食料組成物（食品又は補助食品として）、栄養補助組成物又は医薬組成物を用いて実施することができる。

当業者には理解されるように、前記説明は単なる例示目的で供されるものであり、本発明はそれらに限定されるものではない。

参考文献