[0001] 相关的申请

[0002] 本申请要求2012年4月18日提交的EP12425073.9，和2012年7月18日提交的U.S.S.N 61/672,931的优先权，通过引用将前述两个专利文献的全部并入本文。

[0003] 乳糖酶蛋白质是在小肠绒毛尖端表达的二糖(β-半乳糖苷酶)，具有将乳糖水解成半乳糖和葡萄糖的能力。不充足的乳糖酶-根皮苷水解酶类(LPH)活性是负责乳糖不耐受/吸收不良，导致在乳糖摄入之后的腹泻，腹部的疼痛或胃气胀。原发性乳糖酶缺乏(或乳糖酶不持久或低乳糖)是乳糖不耐受的主要原因，由于在小肠中相对或绝对的不存在乳糖酶表达，存在于多种年龄儿童中和在不同种族群体中，约70％的世界的群体具有原发性乳糖酶缺乏。乳糖缺陷百分比根据种族性而变化，并且涉及饮食中乳产品的使用，所述使用达到至多北欧群体的20％，

[0004] 地中海欧洲(Mediterranean European)群体的40％，非洲群体的80％，和亚洲群体的90％。用于乳糖不耐受的通常治疗是乳糖排除(导致营养病损)或扩展方案例如使用乳糖缺乏乳或乳糖酶补充。

[0005] 已有报道2种特定的单多态性(SNP)核苷酸是与成人-类型低乳糖紧密相关的。在乳糖酶基因上游位置_13910(C_13910)的C是100％地与在芬兰群体中乳糖酶非持久性相关的，并且在位置_22018(G_22018)的G是多于95％地与在芬兰群体中乳糖酶非持久性相关的。在具有T_13910和A_22018的个体肠黏膜中LPH mRNA的SNP表达是高于在具有C_13910和G_22018的个体中所发现的，这暗示LPH基因的转录调节。但是，LPH基因的很多的调节保持未知。因此，需要的是有效试剂，其适用于治疗乳糖不耐受和相关障碍。

[0006] 过氧化物酶体增生物激活的受体(PPARs)是细胞核激素受体超家 族的成员，其是配体-激活的转录因子，其调节基因表达。PPARs在高等生物细胞分化的调节，发展和代谢中发挥作用。

[0007] 3类型的PPAR已被鉴定:在肝，肾，心和其它组织和器官中表达的α类型，例如在脑中表达的β/δ类型，和以3种形式：γ1，γ2，和γ3表达的γ类型。PPARγ受体已被认为与刺激角质形成细胞分化相关，和已经作为潜在的药物靶标，所述靶标用于诸多疾病状态，包括皮肤障碍例如银屑病和特应性皮炎。

[0008] 发明概述

[0009] 本文公开内容通常涉及在有需要的患者中治疗，改善或基本上预防乳糖不耐受的方法，包括将组合物给予至有需要的患者，所述组合物包括PPAR调节剂，例如PPARα，δ或γ，例如，PPARγ调节剂、例如，激动剂(诸如例如本文公开的化合物)。本文也提供的是，用于在有需要的患者中刺激乳糖基因表达的方法，包括将PPAR激动剂、例如，PPARα，δ或PPARγ激动剂给予至患者。

[0010] 本文也提供的是，用于在有需要的患者中，在乳糖摄入之后治疗腹泻，腹部的疼痛和/或胃气胀(bloating)的方法，包括给予PPAR激动剂、例如PPARα，PPARδ，PPARγ激动剂。例如，本文提供的是，用于在摄入包括乳糖的组合物的患者中改善乳糖不耐受的方法，包括在所述摄入之前，与所述摄入基本上同时，或在所述摄入之后给予PPAR激动剂。

[0011] 附图简述

[0012] 图1A描述了，在通过化合物34，1mM处理24小时之后，在同步化Caco2细胞中，在qPCR中，评价的基因表达。在微阵列中观察到，12个上调的基因表达的证实。AQP12，OSTα和LZTS1的上调的表达没有被证实。结果是表达为与参照相比的倍数(fold)(参照设定为值1)。

[0013] 图1B描述，在通过化合物34，1mM处理24小时之后，在同步 化Caco2细胞中，在qPCR中，评价的基因表达。在微阵列中观察到，12个上调的基因表达的证实。AQP12，OSTα和LZTS1的上调的表达没有被证实。结果是表达为相对表达。

[0014] 图2A描述，在通过化合物34，1mM处理24小时之后，在同步化Caco2细胞中，在qPCR中，评价的基因表达。在微阵列中观察到，所有15个上调的基因表达的证实。结果是表达为与参照相比的倍数(参照设定为值1)。

[0015] 图2B描述，在通过化合物341mM处理24小时之后，在同步化Caco2细胞中，在qPCR中，评价的基因表达。在微阵列中观察到所有15个上调的基因表达的证实。结果是表达为相对表达。

[0016] 图3描述基因表达表达为刺激2的倍数，其是与刺激1微阵列结果相关的(r＝0.754，p＝0.0046)。

[0017] 图4显示，乳糖酶mRNA表达是由PPAR导致的。Caco-2细胞是被多种PPARγ和PPARα激动剂刺激。采用GraphPad软件，使用非参数Mann-Whitney检验，分析统计学的不同。

[0018] 图5：鉴定人乳糖酶基因启动子(3000pb)的同向重复单位。DR1为粗体，并且DR2为粗体和以“AG”开始。也指明的是TATA盒，和小写字母表示第一外显子的开始。

[0019] 发明详述

[0020] 现在将更具体地描述特征和公开内容的其它细节。在进一步说明书的本发明之前，在说明书，实施例和所附权利要求中采用的某些术语被汇集于此。应根据其他公开内容阅读这些定义，和所述定义应被本领域技术人员所理解。除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含意。

[0021] 定义

[0022] “治疗”包括任何作用，例如，减轻，减少，调节，或消除，其导致病况，疾病，障碍等的改善。

[0023] 如本文使用的术语“烯基”意指不饱和的直链或支链烃，其具有至 少一个碳-碳双键，例如2-12，2-10，或2-6个碳原子的直链或支链基团，其在本文中分别分别意指C2-C12烯基，C2-C10烯基，和C2-C6烯基。示例性烯基基团包括，但是不限于，乙烯基，烯丙基，丁烯基，戊烯基，己烯基，丁二烯基，戊二烯基，己二烯基，2-乙基己烯基，2-丙基-2-丁烯基，4-(2-甲基-3-丁烯)-戊烯基等

[0024] 如本文使用的术语“烷氧基”意指连结至氧的烷基基团(-O-烷基-)。示例性烷氧基基团包括，但是不限于，具有1-12，1-8，或1-6个碳原子的烷基，烯基或炔基的基团，其在本文中分别意指C1-C12烷氧基，C1-C8烷氧基，和C1-C6烷氧基。示例性烷氧基基团包括，但是不限于甲氧基，乙氧基等。同样地，示例性“烯氧基”基团包括，但是不限于乙烯基氧基，烯丙氧基，丁烯氧基等。

[0025] 如本文使用的术语“烷基”意指饱和的直链或支链烃，例如1-12，1-10，或1-6个碳原子的直链或支链基团，其在本文中分别意指C1-C12烷基，C1-C10烷基，和C1-C6烷基。示例性烷基基团包括，但是不限于，甲基，乙基，丙基、异丙基，2-甲基-1-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丁基，3-甲基-1-丁基，2-甲基-3-丁基，2，2-二甲基-1-丙基，2-甲基-1-戊基，3-甲基-1-戊基，4-甲基-1-戊基，2-甲基-2-戊基，3-甲基-2-戊基，4-甲基-2-戊基，2，2-二甲基-1-丁基，3，3-二甲基-1-丁基，2-乙基-1-丁基，丁基、异丁基，叔-丁基，戊基、异戊基，新戊基，己基，庚基，辛基，等。在某些实施方案中，烷基意指C1-C6烷基。在某些实施方案中，环烷基意指C3-C6环烷基。

[0026] 烷基，烯基和炔基基团可以，在某些实施方案中，是任选地被至少一个基团取代或间隔，所述基团选自烷酰基，烷氧基，烷基，烯基，炔基，酰氨基，脒基，氨基，芳基，芳基烷基，叠氮基，氨基甲酸酯，氨基甲酸根，氨基甲酸盐，碳酸、碳酸根、碳酸酯、碳酸盐、羧基，氰基，环烷基，酯，醚，甲酰基，卤素，卤代烷基，杂芳基，杂环基，羟基，亚氨基，酮，硝基，磷酸、磷酸根、磷酸酯、磷酸盐、膦酸酯、膦酸根、膦酸盐、次膦酸、次膦酸酯、次膦酸根、次膦酸盐、硫酸、硫酸根、硫酸酯、硫酸盐、硫化物、硫醚、磺酰氨基，磺酰基和硫代 羰基。

[0027] 如本文使用的术语“炔基”意指不饱和的直链或支链烃，其具有至少一个碳-碳三键，例如直2-12，2-8，或2-6个碳原子的链或支链基团，其在本文中分别意指C2-C12炔基，C2-C8炔基，和C2-C6炔基。示例性炔基基团包括，但是不限于，乙炔基，丙炔基，丁炔基，戊炔基，己炔基，甲基丙炔基，4-甲基-1-丁炔基，4-丙基-2-戊炔基，和4-丁基-2-己炔基等[0028] 如本文使用的术语“芳基”意指意指单-，二-，或其它多-碳环，芳族的环系统。在某些实施方案中，芳基意指单环和/或双环的，5至6元环。芳族的环可以是在一个或多个环位置采用取代基被取代的，所述取代基选自烷酰基，烷氧基，烷基，烯基，炔基，酰氨基，脒基，氨基，芳基，芳基烷基，叠氮基，氨基甲酸酯，氨基甲酸根，氨基甲酸盐，碳酸、碳酸根、碳酸酯、碳酸盐、羧基，氰基，环烷基，酯，醚，甲酰基，卤素，卤代烷基，杂芳基，杂环基，羟基，亚氨基，酮，硝基磷酸、磷酸根、磷酸酯、磷酸盐、膦酸酯、膦酸根、膦酸盐、次膦酸、次膦酸酯、次膦酸根、次膦酸盐、硫酸、硫酸根、硫酸酯、硫酸盐、硫化物、硫醚、磺酰氨基，磺酰基和硫代羰基。术语“芳基”也包括具有2个或更多个环状环的多环环系统，其中两种邻近环共有的2个或更多个碳(所述环是“稠合的环”)，其中至少1个所述环是芳族的，例如，所述其它环状环可以是环烷基，环烯基，环炔基，和/或芳基。示例性芳基基团包括，但是不限于，苯基，甲苯基，蒽基，芴基，茚基，环戊并环庚五烯基(azulenyl)，和萘基，以及苯并-稠合的碳环部分例如5，6，7，8-四氢萘基。

[0029] 如本文使用的术语“羧基”意指残基-COOH或它的相应的盐，例如–COONa等。

[0030] 如本文使用的术语“环烷基”意指3-12，3-8，4-8，或4-6个碳的单价饱和的或不饱和的环的，双环的，或桥连的双环的烃基团，例如，本文提及为"C4-8环烷基，"，前述烃基团衍生自环烷烃。示例性环烷基基团包括，但是不限于，环己烷，环己烯，环戊烷，环戊烯，环丁 烷和环丙烷。环烷基基团可以是被以下基团取代：烷酰基，烷氧基，烷基，烯基，炔基，酰氨基，脒基，氨基，芳基，芳基烷基，叠氮基，氨基甲酸酯，氨基甲酸根，氨基甲酸盐，碳酸、碳酸根、碳酸酯、碳酸盐、羧基，氰基，环烷基，酯，醚，甲酰基，卤素，卤代烷基，杂芳基，杂环基，羟基，亚氨基，酮，硝基磷酸、磷酸根、磷酸酯、磷酸盐、膦酸酯、膦酸根、膦酸盐、次膦酸、次膦酸酯、次膦酸根、次膦酸盐、硫酸、硫酸根、硫酸酯、硫酸盐、硫化物、硫醚、磺酰氨基，磺酰基和硫代羰基。环烷基基团可以稠合至其它环烷基，芳基，或杂环基基团。在某些实施方案中，环烷基意指C3-C6烷基。

[0031] 如本文使用的术语“卤”或“卤素”或“Hal”意指F，Cl，Br，或I。

[0032] 如本文使用的术语“卤代烷基”意指被一个或多个卤素原子取代的烷基基团。

[0033] 如本文使用的术语“苯基”意指6-元碳环芳族的环。苯基基团也可以是稠合至环己烷或环戊烷环。苯基可以是被一个或多个取代基取代，所述取代基包括烷酰基，烷氧基，烷基，烯基，炔基，酰氨基，脒基，氨基，芳基，芳基烷基，叠氮基，氨基甲酸酯，氨基甲酸根，氨基甲酸盐，碳酸、碳酸根、碳酸酯、碳酸盐、羧基，氰基，环烷基，酯，醚，甲酰基，卤素，卤代烷基，杂芳基，杂环基，羟基，亚氨基，酮，硝基，磷酸、磷酸根、磷酸酯、磷酸盐、膦酸酯、膦酸根、膦酸盐、次膦酸、次膦酸酯、次膦酸根、次膦酸盐、硫酸、硫酸根、硫酸酯、硫酸盐、硫化物、硫醚、磺酰氨基，磺酰基和硫代羰基。

[0034] 如本文使用的术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”意指任何和所有溶剂、分散介质，包衣、等渗的和吸收延迟试剂等，其是与药物施用相容的。将这类介质和试剂用于药学活性物质是本领域熟知的。组合物也可以含有其它活性化合物，所述其它活性化合物提供补充的，附加的，或增强治疗功能。

[0035] 如本文使用的术语“药物组合物”意指组合物包含至少一个如本文公开的化合物，所述化合物与一个或多个药学上可接受的载体一同配制。

[0036] “个体，”“患者，”或“受试者”可以互换使用，并且包括任何动物，包括哺乳动物、优选地包括小鼠，大鼠，其它啮齿类，兔子，狗，猫，猪，牛，绵羊，马，或灵长目动物，和最优选地包括人类。本发明的化合物可以被施用于哺乳动物、例如人，但是也可以被施用于其它哺乳动物例如需要兽医的治疗的动物，例如，家畜(例如，狗，猫等)，耕作动物(例如，牛，母牛，绵羊，猪，马等)和实验动物(例如，大鼠，小鼠，豚鼠等)。所述在本发明方法中治疗的哺乳动物理想地是哺乳动物，其中调节的PPAR受体是被需要的。“调节”包括拮抗(例如，抑制)，激动，部分拮抗和/或部分激动。

[0037] 在本说明书中，术语“治疗有效量”意指主题化合物的量，所述量将引发组织，系统，动物或人的生物学或医药上的反应，所述反应是由研究人员，兽医，医学博士，医生或其它临床医师寻求的。本发明的化合物以治疗有效量被施用以治疗疾病。或者，治疗有效量的化合物是实现所需的治疗和/或预防性作用所需要的量，例如导致预防或减少与疾病相关的症状的量，所述疾病与PPAR受体相关。

[0038] 如本文使用的术语"药学上可接受的盐"意指酸性或碱性基团的盐，所述基团可以存在于用于本发明组合物的化合物中。本质是碱性的包括在本发明组合物中的化合物，能够与多种无机的和有机酸形成多种的盐。可以用于制备这类碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸，是那些形成非毒性酸加成盐的酸，即，含有药理学可接受的阴离子的盐，包括而不限于苹果酸盐，草酸盐，氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐，磷酸盐，酸式磷酸盐、异烟酸盐，乙酸盐，乳酸盐，水杨酸盐，柠檬酸酯，酒石酸盐，油酸盐，单宁酸盐，泛酸盐，酒石酸氢盐，抗坏血酸盐，琥珀酸盐，马来酸盐，龙胆酸盐，富马酸盐，葡萄糖酸盐，葡糖醛酸盐，糖质酸盐，甲酸盐，苯甲酸盐，谷氨酸盐，甲磺酸盐，乙磺酸盐，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即，1，1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。包括氨基部分的包括在本发明组合物中的化合物，可以与除了上文提及的酸的多种氨基酸形成药学上可接受的盐。本质是酸性的包括在本发明组 合物中的化合物，能够与不同药学可接受的阳离子形成碱盐。这类盐的实施例包括碱金属或碱土金属盐和，具体地包括，钙，镁，钠，锂，锌，钾，和铁盐。

[0039] 公开内容的化合物可以包含一个或多个手性中心和/或双键，并且，因此，作为立体异构体，例如几何异构体，对映异构体或非对映异构体而存在。术语“立体异构体”当在本文中使用时，由所有几何异构体，对映异构体或非对映异构体组成。这些化合物可以通过符号“R”或“S，”被命名，这取决于可产生立体异构的碳原子周围的取代基构型。本发明包括这些化合物的多种立体异构体和其混合物。立体异构体包括对映异构体和非对映异构体。对映异构体或非对映异构体的混合物可以在命名法中被命名“(±)”，但是技术人员技术人员将认识，结构可以隐含地表示手性中心。

[0040] 本发明化合物的单独的立体异构体可以是从含有不对称的或可产生立体异构的中心的市售的原料合成地制备，或如下制备：通过制备外消旋混合物，接着进行本领域普通技术人员熟知的拆分方法。这些拆分的方法是通过如下被举例说明：(1)使对映异构体的混合物与手性助剂结合、通过重结晶或色谱法分离所得的混合物非对映异构体，和从助剂释放光学纯的产物，(2)采用光学活性拆分试剂形成盐，或(3)采用手性色谱柱直接分离所述光学的对映异构体混合物。立体异构体的混合物也可以通过熟知的方法被拆分为它们的成分立体异构体，所述熟知的方法例如手性-相气相色谱，手性-相高效液相色谱法，将化合物结晶为手性盐络合物，或在手性溶剂中结晶化合物。立体异构体也可以通过熟知的不对称的合成方法，从立体异构-纯的中间体，试剂，和催化剂而得到。

[0041] 几何异构体也可以存在于本发明化合物中。符号 表示键，其可以是如本文所描述的单键，双键或三键。本发明包括多种几何异构体和其混合物，所述几何异构体由碳-碳双键周围的取代基的排列或碳环状环周围的取代基的排列而产生。取代基周围的碳-碳双键被命名为“Z”或“E”构型，其中按照IUPAC标准使用术语“Z”和“E”。除非另有 说明，描述双键的结构包括“E”和“Z”异构体两者。

[0042] 碳-碳双键周围的取代基可以交替地被称为“顺式”或“反式”，其中“顺式”表示取代基在双键同侧，和“反式”表示取代基在双键的对侧。碳环状环周围的取代基的排列被命名为“顺式”或“反式”。术语“顺式”表示取代基在所述环的平面的同侧，和术语“反式”表示取代基在所述环的平面的对侧。化合物的混合物(其中取代基被排列在所述环的平面相同侧和对侧)被命名“顺式/反式”。

[0043] 本文公开的化合物可以存在于之中溶剂化的以及不溶剂化的形式，所述溶剂化的形式采用药学上可接受的溶剂例如水，乙醇等溶剂化，和本发明意欲包括溶剂化以及不溶剂化的形式。在一个实施方案中，化合物是无定形的。在一个实施方案中，化合物是多晶型。在另一个实施方案中，化合物是晶型。

[0044] 发明也包括同位素标记的本发明化合物，其是与本文描述的那些化合物相同的，除了一个或多个原子被具有不同于通常在自然中发现的原子质量或质量数的原子质量或质量数的原子所代替。可以并入入本发明化合物的同位素的实施例，包括氢，碳，氮，氧，磷，氟和氯的同位素、分别例如2H，3H，13C，14C，15N，18O，17O，31P，32P，35S， 18F和36Cl。

[0045] 某些同位素-标记的公开的化合物(例如，那些采用3H和14C标记的)适用于化合物和/或底物组织分布测试。氚化的(即，3H)和碳-14(即， 14C)同位素是具体地优选的，因为它们易于制备和可检测性。另外，采用较重同位素例如氘(即，2H)取代，可以提供由更大代谢稳定性(例如，增加的体内半衰期或减少剂量需要)产生的某些治疗优势，和因此在某些情况下可以是优选的。通常通过按照类似于在所述例如，本文实施例中公开的那些方法的方法，通过采用同位素标记的试剂替换非同位素标记的试剂，可以制备同位素标记的本发明化合物。

[0046] 术语“前药”意指化合物，所述化合物是在体内转化的，产生公开的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐，水合物或溶剂化物。转化可以通过多种原理而发生，所述原理例如通过在血中水解。例如， 如果本发明化合物或所述化合物的药学上可接受的盐，水合物或溶剂化物包含羧酸官能团，前药可以含有酯，通过采用基团代替酸基团的氢原子，形成所述酯，所述基团例如(C1-C8)烷基，(C2-C12)烷酰基氧基甲基，具有4至9个碳原子的1-(烷酰氧基)乙基，具有5至10个碳原子的1-甲基-1-(烷酰氧基)-乙基，具有3至6个碳原子的烷氧基羰基氧基甲基，具有4至7个碳原子的1-(烷氧基羰基氧基)乙基，具有5至8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰基氧基)乙基，具有3至9个碳原子的N-(烷氧羰基)氨基甲基，具有4至10个碳原子的1-(N-(烷氧羰基)氨基)乙基，3-酞基，4-2(5H)-呋喃酮基(crotonolactonyl)，γ-丁内酯-4-基，二-N，N-(C1-C2)烷基氨基(C2-C3)烷基(例如β-二甲基氨基乙基)，氨基甲酰基-(C1-C2)烷基，N，N-二(C1-C2)烷基氨基甲酰基-(C1-C2)烷基和哌啶基-，1-哌啶基-，吡咯烷基，1-吡咯烷基-或吗啉代(C2-C3)烷基。

[0047] 同样地，如果本发明化合物包含醇官能团，可以通过采用基团代替醇基团的氢原子，形成前药，所述基团例如(C1-C6)烷酰基氧基甲基，1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基，1-甲基-1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基(C1-C6)烷氧基羰基氧基甲基，N-(C1-C6)烷氧基羰基氨基甲基，琥珀酰基，(C1-C6)烷酰基，α-氨基(C1-C4)烷酰基，芳基酰基和α-氨基酰基，或α-氨基酰基-α-氨基酰基，其中各α-氨基酰基基团独立选自天然存在的L-氨基酸，P(O)(OH)2，-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(由移除半缩醛形式的碳水化合物的羟基基团而产生的残基)。

[0048] 如果本发明化合物并入胺官能团，通过采用基团代替胺基团中的氢原子，可以形成前药，所述基团例如R-羰基，RO-羰基，NRR′-羰基，其中R和R′各自独立地是(C1-C10)烷基，(C3-C7)环烷基，苄基，或R-羰基是天然α-氨基酰基或天然α-氨基酰基-天然α-氨基酰基，—C(OH)C(O)OY1其中Y1是H，(C1-C6)烷基或苄基，-C(OY2)Y3其中Y2是(C1-C4)烷基和Y3是(C1-C6)烷基，羧基(C1-C6)烷基，氨基(C1-C4)烷基或单-N—或二-N，N—(C1-C6)烷基氨基烷基，—C(Y4)Y5其中Y4是H或甲基和Y5是单-N—或二-N，N—(C1-C6)烷基氨基，吗啉代， 哌啶-1-基或吡咯烷-1-基。

[0049] PPAR调节剂

[0050] 公开内容至少部分地，提供了，具有PPAR调节活性，例如，PPARγ调节活性的化合物。这类化合物可以，例如，是由下文描述的式表示的。本文也考虑的是组合物，所述组合物包括由公开的式表示的化合物和例如，药学上或美容(cosmetically)可接受的载体或赋形剂。

[0051] 例如，在一个实施方案中，考虑的PPAR调节化合物(例如具有PPAR活性的化合物)可以是由以下表示的:

[0052]

[0053] 和其药学上可接受的盐，立体异构体，前药，其中:

[0054] R1和R2，各自独立地选自H和C1-6烷基；或R1和R2与它们键合的氮原子一同形成具有5或6原子的芳族的或脂族的环，所述环可以是任选地被取代的；

[0055] Y和Z各自独立地选自H，OH，COOH，-OR3，-CH(OR3)COOH；和

[0056] R3选自H，苯基，苄基，乙烯基，烯丙基，C1-6烷基或被一个，两个，三个或更多个卤素取代的C1-6烷基。

[0057] 在实施方案中，Y可以是H或COOH。例如，Y可以是H和Z可以是CH(OR3)COOH，或Y可以是COOH和Z可以是–OR3。在某些实施方案中，R3可以是甲基，乙基，正丙基，或异丙基。

[0058] 在其它实施方案中，NR1R2部分可以是在4’位或可以是在3’位。在某些实施方案中，R1和R2是H。

[0059] 示例性化合物也包括那些由式IIa或IIb表示的化合物或其药学上可接受的盐，对映体或立体异构体:

[0060]

[0061] 其中:

[0062] R1和R2各自独立地选自H和C1-6烷基；或R1和R2与它们键合的氮原子一同形成具有5或6原子的芳族的或脂族的环；

[0063] R6选自:–NHOH，OH，和–OR9；

[0064] R9是C1-6烷基；

[0065] R4选自H，苯基，苄基，乙烯基，烯丙基，C1-6烷基或采用一个或多个卤素取代的C1-6烷基；

[0066] R5和R7各自独立地是氢或卤代，或；

[0067] 或

[0068] R4和R5，或R4和R6共同形成具有5或6个原子的稠合的杂环环，其任选地被卤素或C1-6烷基取代；和A是稠合的杂环环；或其药学上可接受的盐。

[0069] 在某些实施方案中，式IIa的NR1R2部分可以是在4’位或可以是在3’位。在某些实施方案中，R1和R2是H。

[0070] R9，在某些实施方案中，可以是甲基，乙基，正丙基，或异丙基。

[0071] 在某些实施方案中化合物可以是由以下表示的

[0072]

[0073] 其中p是1或2，R6是OH或–OR9，其中R9是如上述所定义的，和独立每次出现的R10，选自H，卤代，或C1-6烷基，例如甲基或乙 基。

[0074] 本文考虑的示例性化合物包括:

[0075](IX)，或其药学上可接受的盐。

[0076] 在某些实施方案中，考虑的化合物包括：4-氨基-N-羟基-2-甲氧基苯甲酰胺(化合物13)；6-甲氧基喹啉-5-羧酸(化合物36)；6-甲氧基-1，2，3，4-四氢喹啉-5-羧酸(化合物37)；5-二异丙基氨基水杨酸(化合物38)。

[0077] 其它示例性化合物包括那些由以下表示的:

[0078]

[0079]

[0080] 本文考虑的化合物包括化合物的外消旋混合物和对映异构体，例如：(±)-2-羟基-3-(3’-氨基苯基)丙酸(化合物20)；(±)-2-甲氧基-2-(4’-氨基苯基)乙酸(化合物23)；(±)-2-乙氧基-2-(3’-氨基苯基)乙酸(化合物32)；(±)-2-乙氧基-2-(4’-氨基苯基)乙酸(化合物33)；(±)-2-甲氧基-3-(4’-氨基苯基)丙酸(化合物34)“±34”(外消旋的形式)；
(±)-2-乙氧基-3-(4’-氨基苯基)丙酸(化合物39)；(±)-2-乙氧基-3-(3’-氨基苯基)丙酸(化合物40)。

[0081] 例如，用于本发明方法的化合物可以是下列外消旋混合物的对映异构体：(R，S)-2-羟基-2-(3-氨基苯基)乙酸(化合物10)；(R，S)-2-羟基-2-(4-氨基苯基)乙酸(化合物
11)；(R，S)-2-羟基-3-(4’-氨基苯基)丙酸(化合物21)；(R，S)-2-甲氧基-2-(3’-氨基苯基)乙酸(化合物22)；(R，S)-2-甲氧基-3-(3’-氨基苯基)丙酸(化合物35)；(R，S)-2-甲氧基-3-(4-氨基苯基)丙酸(化合物34)，以及对映异构体，例如：(+)2-S-甲氧基-3-(4-氨基苯基)丙酸(化合物34)；(-)2-R-甲氧基-3-(4-氨基苯基)丙酸(化合物34)。

[0082] 考虑的化合物的其它消旋类型的混合物包括:例如(±)-2-羟基-2-(3’-氨基苯基)乙酸(化合物10)；(±)-2-羟基-2-(4’-氨基苯基)乙酸(化合物11)；(±)-2-羟基-3-(4’-氨基苯基)丙酸(化合物21)和(±)-2-甲氧基-2-(3’-氨基苯基)乙酸(化合物22)。

[0083] 考虑用于在公开的方法中使用的其它化合物：5-氨基水杨酰基-异羟肟酸(化合物5)；3-二甲基氨基水杨酸(化合物6)；2-甲氧基-4-氨基苯甲酸(化合物7)；2-甲氧基-5-氨基苯甲酸(化合物8)；5-甲基氨基水 杨酸(化合物9)；4-甲基氨基水杨酸(化合物12)；4-乙酰基氨基水杨酸(化合物16)；2-乙氧基-4-氨基苯甲酸(化合物18)；2-乙氧基-5-氨基苯甲酸(化合物19)；4-二甲基氨基水杨酸(化合物24)；2-乙氧基-4-氨基苯甲酰基异羟肟酸(化合物25)；6-羟基喹啉-5-羧酸(化合物27)；2-(2-丙基)氧基-4-氨基苯甲酸(化合物30)；4-(1-哌嗪基)水杨酸(化合物41)；(R，S)5-氧杂-喹啉-6-羧酸(化合物15)；6-甲氧基喹啉-5-羧酸(化合物36)；6-甲氧基-1，2，3，4-四氢喹啉-5-羧酸(化合物37)；5-二异丙基氨基水杨酸(化合物38)；和4-二异丙基氨基水杨酸(化合物42)。

[0084] 用于制备考虑的化合物的方法可以是发现于例如WO2007/010516和WO2007/010514，各自通过引用完整地并入本文。

[0085] 本文也提供的是由以下表示的化合物:

[0086]

[0087] 其中X是C1-C3亚烷基，任选地被1个，2个或3个取代基取代，所述取代基选自卤素或羟基；

[0088] R1选自C1-C6烷基，C3-C6环烷基，C2-C6烯基，和C2-C6炔基；

[0089] R2选自氢和C1-C6烷基；

[0090] 每次出现的R3独立选自氢，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基，氰基，C3-C6环烷基，卤素，羟基，和硝基；

[0091] R4选自氢和C1-C6烷基；

[0092] R5是C1-C6烷基；

[0093] 或其药学上可接受的盐或N-氧化物。

[0094] 在一个实施方案中，R1可以是C1-C6烷基，例如甲基。在一个实 施方案中，R2可以是氢。在另一个实施方案中，R3可以选自氢，C1-C6烷基，卤素，和羟基。在又一实施方案中，R3可以是氢。在一个实施方案中，R4和R5可以各自是C1-C6烷基。在另一个实施方案中，R4可以是氢和R5可以是甲基。在一个实施方案中，X可以是(CH2)n，其中n是1或2，例如1。

[0095] 在另一个实施方案中，-NR2-COR1可以是在相对于X的间位，如在式III’中所显示。

[0096]

[0097] 在另一个实施方案中，-NR2-COR1可以是在相对于X的对位，如在式IV’中所显示。

[0098]

[0099] 公开内容至少部分地提供，由式II’表示的化合物，如下文所描述的。本文也考虑的是组合物，所述组合物包括由式II表示的化合物和例如，药学上可接受的载体。

[0100]

[0101] 其中R1选自C1-C6烷基，C3-C6环烷基，C2-C6烯基，和C2-C6炔基；

[0102] R2选自氢和C1-C6烷基；

[0103] 每次出现的R3独立选自氢，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基，氰基，C3-C6环烷基，卤素，羟基，和硝基；

[0104] R5为氢或C1-C6烷基；

[0105] 或其药学上可接受的盐或N-氧化物。

[0106] 也考虑的是，如下文所显示的式II’化合物，以及包括由式II’表示的化合物和例如，药学上可接受的载体的组合物。考虑的化合物可以包括:

[0107]

[0108] 其中R1选自C1-C6烷基，C3-C6环烷基，C2-C6烯基，和C2-C6炔基；

[0109] 每次出现的R3独立选自氢，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基，氰基，C3-C6环烷基，卤素，羟基，和硝基；

[0110] R4选自氢和C1-C6烷基；

[0111] R5为氢或C1-C6烷基；和

[0112] A是稠合的5或6元杂环；

[0113] 或其药学上可接受的盐或N-氧化物。

[0114] 在一个实施方案中，R1可以是C1-C6烷基，例如甲基。在另一个实施方案中，R1和R3可以各自是C1-C6烷基，例如甲基。在一个实施方案中，R2可以是氢。

[0115] 在某些实施方案中，化合物可以是由以下表示的

[0116]

[0117] 其中p是1或2；

[0118] R1选自C1-C6烷基，C3-C6环烷基，C2-C6烯基，和C2-C6炔基；

[0119] R4和R8各自独立地选自氢和C1-C6烷基；

[0120] 或其药学上可接受的盐或N-氧化物。

[0121] 考虑的化合物和包括至少一种化合物的药物组合物，所述化合物可以选自：N-乙酰基-(R)-(-)-3-(4-氨基苯基)-2-甲氧基丙酸(化合物A)，N-乙酰基-(S)-(-)-3-(4-氨基苯基)-2-甲氧基丙酸(化合物B)，消旋的N-乙酰基-(S)-(-)-3-(4-氨基苯基)-2-甲氧基丙酸(化合物AB)；

[0122]

[0123]

[0124] 4-乙酰氨基-N-羟基-2-甲氧基苯甲酰胺；1-乙酰基-6-甲氧基-1，2，3，4-四氢喹啉-5-羧酸，5-乙酰氨基-2羟基苯甲酸(例如，缩醛化的(acetalyated)5-氨基-水杨酸)或其药学上可接受的盐或N-氧化物。

[0125] 本文也提供的是，其它PPAR调节剂或激动剂，包括5-氨基水杨酸(美沙拉秦)，柳氮磺吡啶，吡格列酮，罗格列酮，石榴花提取物、非甾族抗炎剂包括布洛芬，和Ψ-膺靛素。

[0126] 本公开内容也提供药物组合物，所述药物组合物包含如本文公开的化合物，所述化合物与一个或多个药学或美容(cosmetically)可接受的载体一同配制。这些制剂包括，那些适用于口服，直肠，局部的，口腔的和胃肠外的(例如，皮下，肌内，皮内，或静脉内)施用的制剂，或适用于局部使用的制剂，例如作为美容产物。尽管在任何给定的情况下最适宜的施用形式将取决于被治疗的病况的程度和严重性，和取决于使用的特定化合物的性质。

[0127] 治疗应用

[0128] 公开内容少部分地涉及，使用PPAR调节剂、例如，PPARγ调节剂、例如公开的化合物治疗或改善乳糖不耐受。例如，提供的是，在乳糖摄入之后治疗腹泻，腹部的疼痛和/或胃气胀的方法，其中公开的化合物(或例如，包括公开的化合物的组合物)被施用于需要其的受试者，例如被口服施用。

[0129] 例如，本文提供的是，用于在摄入包括乳糖的组合物的患者中改善乳糖不耐受的方法，包括在所述摄入之前，与所述摄入基本上同时，或在所述摄入之后，给予PPAR激动剂、例如，PPARα，PPARδ，和/或PPARγ激动剂。

[0130] 可以以提供最佳药物功效的剂量，将本发明的化合物施用于需要这类治疗的受试者(动物和/或人类)。可以理解，在任何具体的应用中使用需要的剂量将随患者的不同而变化，不仅仅随着选择的特定的化合物或组合物而变化，而且还随着施用的途径，被治疗的病况的性质，患者的年龄和状况，然后患者采用的并行药物治疗或特定饮食，和本领域的技术人员将认识的其它因素而变化，最终由巡诊医师慎重确定适当的剂量。为了治疗上述的临床病症和疾病，本发明化合物可以以单位剂型(剂量单位形式)制剂，被口服，局部地，胃肠外，通过吸入喷雾或经直肠施用，所述制剂含有常规非毒性药学上可接受的载体，助剂和赋形剂。如本文使用的术语“胃肠外的”包括皮下注射剂、静脉内，肌内，胸骨内注射或灌注技术。

[0131] 通常，治疗有效量的活性成分将是在从约0.1mg/kg至约100mg/kg，任选地从约1mg/kg至约100mg/kg，任选地从约1mg/kg至10mg/kg的范围中。施用的量将取决于变量，例如被治疗的疾病或适应证类型和程度，特定的患者总体健康状态，化合物的相对生物学的功效、化合物的制剂、赋形剂在制剂中的存在和类型和施用的途径。施用的初始剂量可以被增加得超越较高的水平，从而快速地实现所需的血-水平或组织水平，或初始剂量可以是小于最佳剂量，和每日给药 可以是在治疗过程期间进行性地增加的，这取决于特定的情形。
人给药可以被最佳化，例如，在常规I期剂量按比例上升研究中，被设计为以0.5mg/kg至
20mg/kg操作。给药频率可以变化，这取决于因素例如施用的途径，剂量量和被治疗的疾病状况。示例性给药频率是每天一次，每周一次和每两周一次。

[0132] 考虑的制剂或组合物含有公开的化合物和典型地也可以包括药学上可接受的载体或赋形剂。

[0133] 考虑的组合物可以通过多种手段被施用，这取决于它们的意欲的使用，如是本领域熟知的。例如，如果本发明的组合物是被口服施用，它们可以是配制为片剂、胶囊，颗粒，粉剂或糖浆剂。或者，本发明制剂可以作为注射剂(静脉内，肌内或皮下)，滴注剂或灌肠剂或栓剂被胃肠外施用。为了通过眼的粘膜途径应用，本发明的组合物可以被配制为滴眼剂或眼膏剂。这些制剂可以是通过常规手段制备，和，如果需要，组合物可以是与任何常规添加剂混合，所述添加剂例如赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂，增溶剂试剂、悬浮助剂，乳化剂或包衣剂。

[0134] 在本发明制剂中，润湿剂、乳化剂和润滑剂、例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂，释放试剂，包衣剂，甜味剂、矫味剂和芳香剂，防腐剂和抗氧化剂可以存在于配制的试剂中。

[0135] 本发明组合物可以是适用于口服，鼻，局部的(包括口腔的和舌下)，直肠，阴道，气溶胶和/或胃肠外的施用。制剂可以方便地存在于单位剂型中，和可以是通过药学领域熟知的任何方法而制备。可以与载体物质组合以制备单一剂量的组分的量变化，这取决于被治疗的受试者，和施用的具体方式。

[0136] 适用于口服施用的制剂可以是以下的形式：胶囊，扁囊剂，丸剂、片剂、锭剂(使用矫味的基质，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)，粉剂、颗粒，或在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液，或水包油或油包水液体乳液，或酏剂或糖浆剂或软锭剂(使用惰性的基质，例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)，各自含有预定的量的本发明组合物作为 活性成分。本发明的组合物也可以作为大丸剂(bolus)，药糖剂或糊剂被施用。

[0137] 在用于口服施用的固体剂型(胶囊，片剂、丸剂、膜-包衣的片剂、糖-包衣的片剂、粉剂、颗粒等)中，本发明组合物是与一种或多种药学上可接受的载体混合的，所述载体例如柠檬酸钠或磷酸氢钙，和/或下列的任何载体：(1)填充剂或增量剂、例如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露醇，和/或硅酸；(2)粘合剂、例如，例如，羧甲纤维素，海藻酸盐或酯，明胶，聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂、例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂-琼脂，碳酸钙，马铃薯或木薯淀粉，海藻酸，某些硅酸盐，和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂、例如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季铵类化合物；(7)润湿剂、例如，例如，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂、这类滑石粉，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚乙烯二醇，月桂基硫酸钠，和其混合物；和(10)着色剂。就胶囊，片剂和丸剂而言，组合物也可以含有缓冲试剂。类似类型的固体组合物也可以在软和硬填充胶囊胶囊中被用作填充剂，所述胶囊使用赋形剂，例如乳糖或奶糖，以及高分子量聚乙烯二醇等。

[0138] 用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳液，微乳液，溶液，混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了本发明组合物，液体剂型可以含有通常用于本领域的惰性稀释剂，例如，例如，水或其它溶剂、增溶剂试剂和乳化剂、例如乙醇、异丙基醇，乙基碳酸酯，乙酸乙基酯，苄基醇，苯甲酸苄基酯，丙二醇，1，3-丁烯乙二醇，油(具体的是，棉籽油、花生油、玉米油、胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氢呋喃基醇，聚乙烯二醇和失水山梨糖醇的脂肪酸酯类，环糊精和其混合物。

[0139] 混悬剂，除了本发明组合物，可以含有悬浮剂，例如，乙氧基化的异硬脂醇，聚氧乙烯山梨醇和失水山梨糖醇酯类，微晶纤维素，间位氢氧化铝(aluminum metahydroxide)，膨润土，琼脂-琼脂和黄蓍胶，和其混合物。

[0140] 在说明书通篇，当组合物被描述为具有，包括，或包括特定成分时，考虑的是，所述组合物也基本上由描述的成分组成，或由描述的成分组成。同样地，当过程描述为具有，包括，或包括特定方法步骤时，过程也基本上由描述的操作步骤组成，或由描述的操作步骤组成。除了另有说明，步骤的顺序或用于实施某些作用的顺序是不重要的，只要本发明保持可操作。此外，除了另有说明，2个或更多个步骤或作用可以是同时实施。实施例

[0141] 本文公开的化合物可以是通过有机合成领域技术人员熟知的诸多方法而制备。

[0142] 实施例A材料和方法

[0143] 细胞培养

[0144] Caco-2结肠腺癌细胞系被使用。Caco-2细胞在Dulbecco改良Eagle’s培养基(DMEM，Invitrogen，Cergy-Pontoise，France)中生长，所述培养基补充有20％胎小牛血清(FCS，Dutscher，Brumath，France)，1％青霉素-链霉素(5ml/l)(Invitrogen)和1％非必需的氨基酸(5ml/l)(Invitrogen)。

[0145] 在控制的，5％CO2气氛中，在37℃所有细胞系被培养为汇合的单层。各周，汇合的单层是用胰蛋白酶处理的(Invitrogen)，和然后在1:10稀释之后重新铺板。为了刺激试验，6
细胞以1x10 细胞/孔的密度被放置在6-孔板中。在刺激之前16小时使用血清缺失，以使所述细胞同步。

[0146] 所述细胞的处理

[0147] 所述细胞是用化合物34(1mM和30mM)，5-ASA(30mM)，或吡格列酮(1μM)处理。当必需时，赋形剂DMSO(Sigma)被用作对照(Ctrl)。在刺激之后24小时，在4℃，采用无菌PBS，漂洗孔3次。 然后采用含有1％β-巯基乙醇的溶胞缓冲剂(RA1，Macherey-Nagel)，溶解所述细胞。所述板是在-80℃冷冻，用于接下来的RNA提取。由在6小时和12小时期间通过化合物34，1mM刺激Caco-2细胞组成的时间进程试验，也被完成，以比较根据处理持续时间的基因表达。

[0148] RNA萃取

[0149] 用Nucleospin RNA试剂盒(Macherey-Nagel，Hoerdt，France)萃取总RNA。在RNAse失活之后，通过DNAse处理从总RNA清洁掉痕量基因组DNA，和将其在不含RNAse的，不含DEPC的水中洗脱。采用Nanodrop系统，以220至350nm，通过UV光谱学，评价RN A的纯度。在微阵列试验之前，也采用Agilent 2100生物分析仪，评论RNAs。一μg的总RNA用于微阵列分析(最小浓度：50ng/μl)。

[0150] 微阵列

[0151] 双色基因表达(Dual-colour gene expression)微阵列用于比较来自样品(用DMSO(Ctrl)处理的细胞与用激动剂(Ago)处理的细胞)的cRNA。简而言之，来自样品的RNA首先被逆转录为cDNA(Affinity-Script RT，Agilent)，其是然后用作底物，用于cRNA的通过T7 RNA聚合酶的合成和扩增，对于Ctrl样品(绿色荧光)，所述合成和扩增在cyanine 3-CTP的存在下进行，和对于Ago样品(红色荧光)，所述合成和扩增在cyanine 5-CTP的存在下进行。两种标记的cRNAs然后被混合，和用相同的列阵杂交采(G4851A Agilent 8x44K)，其然后被扫描(具有Agilent G2505B扫描仪)。在激光激发之后显影荧光，和两种荧光基团的相对强度将被表达为比率，为了产生各基因的过表达或低表达状态(使用GeneSpring软件(Agilent))。针对各激动剂，这种分析被实施。针对各激动剂得到了转录组学特征，然后将其进行比较。感兴趣的基因的表达是通过定量PCR而定量的，为了证实微阵列结果。

[0152] 定量PCR

[0153] 基因的转录物是通过定量PCR(qPCR)估计的，为了证实微阵列结果。使用高容量cDNA Achive试剂盒(Applied biosystems)，将1μg 的总RNA逆转录为cDNA。使用ABI PRISM 7000序列测定系统(Applied biosystems)，实施qPCR。采用qPrimer depot软件，选择用于各转录物的引物对。使用ΔCt相对定量方法，使用GAPDH作为参考基因，实施qPCR信号的定量。在mRNA水平变化的相对量或与参照条件相比的倍数增加方面，表示所述值。

[0154] PPARγ敲低细胞的生成

[0155] 使用pSUPER.retro系统(OligoEngine)，得到PPARγ敲低IECs。所述人PPARg mRNA(5′-GCCCTTCACTACTGTTGAC-3′)的对应于核苷酸105-123的正向和逆向靶标序列被克隆入pSUPERretro载体(pRS)的BglII/XhoI限制性位点，得到ShPPAR构建体(construct)。也产生的是，含有靶向萤光素酶基因的序列5’-ACGCTGAGTACTTCGAAAT-3’的阴性对照pRS质粒(ShLuc构建体)。使用来自Amaxa Biosystems的Nucleofector技术，根据制造商方案，将两种构建体转染入Caco-2细胞。采用完全培养培养基转染24h后，选择稳定地转染的克隆，所述培养基补充有嘌罗霉素(5μg/ml)。通过定量RT-PCR和蛋白质印迹分析，检验PPARg表达的沉默。一旦建立，ShPPAR和ShLuc细胞系被保持在完全培养基中，所述培养基补充有2.5μg/ml嘌罗霉素。

[0156] 实施例1微阵列

[0157] 为了评价肠上皮细胞的转录组学的分析可行性，采用PPAR激动剂化合物34刺激所述细胞，被比较的是，在1mM的浓度仅仅采用化合物34刺激的Caco-2细胞的基因表达特征。采用一式4份完成细胞刺激，和筛选共44000个基因。与对照相比，52个基因在化合物34，1mM条件中显示显著不同表达(p<0.05)(表1)。与对照相比，49个基因在化合物34，1mM条件中是上调的(一个基因(LCT 1)，其具有5的优良的倍数变化，4个基因具有在3和5之间的倍数变化，和13个基因具有在2和3之间的倍数变化(表1)。与对照相比，3个基因在化合物34，1mM条件中是下调的(MYB，OXA13和ANKRD1)。

[0158]

[0159]

[0160]

[0161] 表1.比较在通过化合物341mM与对照处理的上皮细胞中的转录组学特征。结果是表达为倍数。

[0162] 通过qPCR证实

[0163] 申请人使用定量PCR，以证实微阵列结果。申请人通过定量PCR定量了15个最上调的基因的表达，其在于相同的条件中培养的Cacao2细胞中通过微阵列评价(SGK2α，SGK2β，GPA33，CKT 20，LCT1，AADAC，DMBT1，ACSL5，MMP19，SLC28A4，AQP12，MBL2，OSTα，HMGCoAS2，LZTS1)。通过定量PCR得到的和在图1a-b中所示的数据证实了，12/15个上调的基因的微阵列结果，除了AQP12，OSTα和LZTS1。

[0164] 在刺激的Caco-2细胞中采用第二和独立试验，评价基因变体。使用相同的刺激方案(化合物341mM与对照)，和使用qRT-PCR研究基因表达。申请人证实了，由化合物34导致的所有选择的基因的上调(包括AQP12，OSTa和LZTS1，其被弱表达，但是通过化合物34上调的)，除了GPA33(图2A和2B)。

[0165] 有趣的是，在这个试验中，在化合物34处理之后，PPARγmRNA表达是不被修饰的，支持了，化合物34介导的靶标基因的上调主要是由于通过化合物34的PPARγ活性的调节，不是受体表达的增加。

[0166] 在微阵列和qPCR中表达为倍数的基因表达之间的相关性

[0167] 为了更确定地评价申请人的微阵列数据的重现性，申请人评价在定量PCR评价和微阵列分析之间的相关性。申请人证实了在微阵列(刺激1)和表达为倍数变化的qPCR(刺激2)结果(r＝0.754，p＝0.0046)之间的显著强相关性(图3)。

[0168] 实施例2乳糖酶基因作为(PPAR)靶标基因

[0169] 在化合物34的通过上皮细胞表达的新的15个新靶标基因中，编码乳糖酶的基因是具有最强感应一个基因(倍数变化5.29)。这个感应在第二刺激中得以证实，其暗示乳糖酶基因是在申请人的分析中最PPARg-敏感基因之一(图2a)。由于在乳糖缺陷中乳糖酶基因异常的功能结果，在20％的欧洲群体中发现常见障碍，申请人决定进一步表征这个结果。不充足的乳糖酶-根皮苷水解酶类(LPH)活性是负责乳糖不耐受/吸收不良，所述乳糖不耐受/吸收不良导致在乳糖摄入之后的腹泻，腹部的疼痛或胃气胀。

[0170] 图4显示，在Caco-2细胞的不同试验中乳糖酶转录表达的结果，采用多种激动剂的PPAR刺激所述细胞。各试验已经完成至少两次。乳糖酶基因表达首先被证实是被化合物34刺激的，所述化合物在两种不同浓度(1mM，倍数增加4.78，p＝0.0002；30mM，倍数增加7.9，p＝0.0006)(图4A)。时间进程试验显示，通过化合物341mM的6小时的刺激足以显著增加乳糖酶mRNA表达(p<0.05)，和在处理12小时达到最大表达(p<0.0001)(图4A)。与化合物34类似地，5ASA 30mM和吡格列酮1μM，同样地显著增加了乳糖酶mRNA表达(图4B)(分别是12.69倍数增加，p＝0.0006，11.76倍数增加，p＝0.0006)。非诺贝特，PPARα激动剂，微弱和没有显著性地导致在Caco-2细胞中的乳糖酶基因表达(图4C)。在Caco2 ShPPAR细胞系中，细胞系稳定地表达针 对PPAR的短发夹反义RNA，导致特异性PPARg表达的70％低表达，和与ShLuc对照细胞相比，乳糖酶mRNA表达显著减少63％(p＝0.0012)(图4D)。综合来看，这些数据显示了，所述人乳糖酶基因在Caco-2细胞中是通过PPAR激动剂可诱导的，和在肠的上皮细胞中乳糖酶基因可以是新的PPAR靶标基因。

[0171] 在LCT基因3000bp上游出现PPRE序列

[0172] PPARγ能够结合DNA作为异二聚体，其具有另一个细胞核受体RXR。异二聚体PPARγ-RXR识别短二聚复发的序列(共有AGGTCA或TGACCT)，其被一个或两个核苷酸间隔，得到DR1(同向重复1)或DR2(同向重复2)，由此限定PPARγ反应元件(PPRE)。为了更好地评价所述通过PPAR的LCT基因的潜在调节，申请人考察了，LCT基因上游PPRE序列的潜在出现。生物信息学工具被使用，以发现在人乳糖酶基因中PPRE。3种不同程序被使用：NUBIScan，PPRESearch和MatInspector。图5表示经由电脑模拟的分析结果，所述分析结果是在所述人乳糖酶基因转录起点的上游的3000个碱对的分析结果。指明的仅仅是，同向重复单位，其是通过至少两种不同程序预见的。这个分析揭示了转录起始位置上游的3000bp含有若干PPRE，其可以被PPAR使用以调节乳糖酶表达。

[0173] 使用微阵列，肠的上皮细胞转录组学的分析已经发现，所述细胞被化合物341mM刺激，显示52个基因的显著修饰。使用定量RT-PCR，在不同和独立的试验中，证实了这些结果。在这些52个基因中，申请人主要感兴趣的是，用于编码乳糖酶的基因，和证实了上调LCT基因表达5.29。5-ASA和吡格列酮也能够在Caco2细胞中增强LCT基因表达，与参照上皮细胞相比，LCT基因表达的自发的水平在PPARγ缺乏上皮细胞中显著减少70％，5ASA和吡格列酮在PPAR半缺乏上皮细胞中保持它们对LCT基因表达的上调节效果，其暗示LCT基因的损伤的表达可以通过PPAR激动剂而恢复。综上考虑，这些数据显示，PPAR可以是新的LCT基因表达调节剂，和暗示PPAR激动剂和具体的靶向肠的新类型PPARg激动剂可以是治疗乳 糖酶缺陷患者的新策略。

[0174] 实施例3报道基因基因测试和染色质免疫沉淀试验

[0175] 在pGL4-Luc报道基因载体中3000bp的乳糖酶基因启动因子被克隆。这个构建(和对照空载体)被瞬时转染入Caco-2细胞。然后用多种PPAR激动剂处理所述细胞，和萤光素酶活性被测量，以评价通过PPAR调节剂的乳糖酶启动因子活性调节。通过在pGL4-Luc报道基因载体中克隆的启动因子区域的连续缺失，实现PPAR反应元件的鉴定和定位。通过Caco-2细胞ChIP试验(采用PPAR激动剂刺激所述细胞，或不采用PPAR激动剂刺激所述细胞)，研究PPARg对启动因子的乳糖酶基因的物理结合。

[0176] 实施例4-PPARγ激动剂调节(以增加)乳糖酶活性的能力

[0177] Caco-2细胞的刺激和小鼠肠的小片的离体刺激被用于测定PPARγ激动剂是否能够增加乳糖酶活性。采用邻硝基苯基-β-D半乳糖苷(ONPG)作为底物，评价乳糖酶活性(二糖酶活性)。通过水解的β-半乳糖苷键，ONPG产生半乳糖和邻硝基苯酚，黄色化合物，其可以是通过光谱光度测量的方法测定的(吸收最大＝450nm)。或者，在小鼠肠中乳糖酶基因表达水平被评价，所述小鼠经口接受化合物34或5-ASA。

[0178] 文献

[0179] 本文提及的所有出版物和专利，包括其下列举的那些项目，是通过引用完整地并入本文，如同各单独的公开文本或专利被通过引用具体地和单独地并入。如果存在矛盾，以本申请，包括本文任何定义为准。

[0180] 等效物

[0181] 尽管本发明的特定实施方案已被讨论，所述上述申请文件是阐述性的而非限制性的。在通读本说明书之后，对于本领域的技术人员而言，本发明的很多变体将变得明显。本发明全部范围应是通过参考权 利要求，以及它们的等效物的完全范围，和申请文件，以及这类变体而确定。

[0182] 除非另有说明，用于申请文件和权利要求的表达成分量的所有数量，反应条件等应理解为，在所有情况下被术语“约”修饰。因此，除非相反地指明，在本说明书中和所附的权利要求举出的数字参数是近似值，其可以变化，这取决于通过本发明要得到的所需的性质。