ＴＡＬＬ - 1 - 결합 조성물

ＴＡＬＬ - 1 - 결합 조성물{TALL - 1 - BINDING COMPOSITION}

본 출원은 본원에서 참고문헌으로 인용한, 2001 년 5 월 11 일자로 제출된 미국 가출원 번호 제 60/290,196 호와 관련되어 있다.

종양 괴사에 관한 수년 동안의 연구로, 종양괴사인자(TNFs) α 및 β 를 마침내 1984 년에 클로닝하였다. 뒤이어, fas 리간드(FasL), CD27 리간드(CD27L), CD30 리간드(CD30L), CD40 리간드(CD40L), TNF - 관련 세포사멸 - 유도 리간드(TRAIL, 또는 AGP - 1 이라고도 함), 오스테오프로테게린 결합 단백질(OPG - BP 또는 OPG 리간드), 4 - 1BB 리간드, LIGHT, APRIL 및 TALL - 1 을 포함하는 TNF 시토킨류 상과(superfamily) 또한 발견하였다. Smith 등의(1994) Cell 76 : 959 - 962 ; Lacey 등의(1998) Cell 93 : 165 - 176 ; Chichepotiche 등의(1997) J. Biol. Chem. 272 : 32401 - 32410 ; Mauri 등의(1998) Immunity 8 : 21 - 30 ; Hahne 등의(1998) J. Exp. Med. 188 : 1185 - 90 ; Shu 등의(1999) J. Leukocyte Biology 65 : 680 - 3 참조하라. 이러한 과(family)는 특히, C - 말단에서 그의 구조에 의해 단일화된다. 게다가, 일부 멤버는 또한 다른 조직이나 기관에서도 발현되지만, 현재까지 공지된 대부분의 멤버는 면역 구획에서 발현된다. Smith 등의(1994) Cell 76 : 959 - 62 참조하라. LT - α 를 제외한 모든 리간드 멤버는 제 Ⅱ 형 트랜스멤브레인 단백질이며 C - 말단의 세포외 도메인내에 150 개의 아미노산 영역이 보존되어 있는 것이 특징이다. 단지 20 - 25 % 의 동일성만으로 제한되지만, 보존된 150 개의 아미노산 도메인은 특징적인 β - 병풍구조 샌드위치로 접히고 삼량체화된다. 이러한 보존된 영역은 단백질가수분해적으로 방출될 수 있고, 따라서 가용성 형태(soluble functional form)가 생성된다. Banner 등의(1993) Cell 73 : 431 - 445 참조하라.

이러한 리간드과내의 대다수 멤버는 림프가 풍부한 조직에서 발현되며 면역계 발생 및 조절에서 중요한 역할을 한다. Smith 등의 상기문헌(1994)을 참조하라. 예를 들어, TNFα 는 주로 대식세포에 의해 합성되고 염증반응 및 면역방어에 대하여 중요한 매개물질이다. Tracey & Cerami(1994), Ann. Rev. Med. 45 : 491 - 503 참조하라. 활성화된 T 세포에서 주로 발현되는 Fas - L 은 흉선세포의 TCR - 매개 세포사멸을 조절한다. Nagata, S. & Suda, T.(1995) Immunology Today 16 : 39 - 43 ; Castrim 등의(1996) Immunity 5 : 617 - 27 참조하라. 활성화된 T 세포에 의해 발현되는 CD40L 또한 B 세포의 생존 증식 및 면역글로불린 이소타입 스위칭에 관한 필수적인 신호를 제공한다. Noelle(1996), Immunity 4 : 415 - 9 참조하라.

TNF 리간드과 멤버 중 대부분의 동원(cognate) 수용체는 확인되었다. 이러한 수용체는 그들의 세포외 도메인내에 특징적인 다중 시스테인이 풍부한 반복체를 공유하고 있으며 세포질 영역내에서 촉매 모티프(catalytic motif)를 소유하고 있지 않다. Smith 등의(1994) 문헌을 참조하라. 수용체는 사멸 도메인 단백질(예를 들어, TRADD, FADD 및 RIP)이나 TRAF 단백질(예를 들어, TRAF 2, TRAF 3, TRAF 5 및 TRAF 6)과의 직접적인 상호작용, 분기(divergent) 유발 및 예를 들어, 세포사멸, NF - kB 활성 또는 JNK 활성과 같은 신호 경로 중복을 통해 신호를 전달한다. Wallach 등의(1999) Annual Review of Immunology 17 : 331 - 67 참조하라. 이러한 신호 전달은 세포사멸, 증식, 활성 또는 분화를 야기한다. 각각의 수용체 멤버의 발현 프로필은 다양하다. 예를 들어, TNFR 1 은 조직과 세포의 광범위한 범위에서 발현되는 반면에, OPGL 의 세포 표면 수용체는 주로 파골세포에 한정되어 있다. Hsu 등의(1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96 : 3540 - 5 참조하라.

많은 연구 그룹들은 최근에 TNF과 리간드와 동일하거나 실질적으로 유사한 서열을 확인하였다. 상기 리간드는 다음과 같이 다양하게 명명된다 : 뉴트로킨(neutrokine)α(1998 년 5 월 7 일자로 공개된 제 WO 98/18921 호), 63954(1998 년 6 월 25 일자로 공개된 제 WO 98/27114 호), TL5(1998 년 10 월 7 일자로 공개된 제 EP 869 180 호), NTN - 2(1998 년 12 월 10 일자로 공개된 제 WO 98/55620 호 및 제 WO 98/55621 호), TNRL1 - α(1999 년 3 월 11 일자로 공개된 제 WO 99/11791 호), kay 리간드(1999 년 3 월 18 일자로 공개된 제 WO 99/12964 호), 및 AGP - 3(1999 년 2 월 12 일 및 1999 년 11 월 18 일자로 각각 공개된 미국 가출원 번호 제 60/119,906 호 및 제 60/166,271 호) ; 및 TALL - 1(2000 년 11 월 16 일자로 공개된 제 WO 00/68378 호). 이러한 각각의 참고문헌은 본원에서 참고문헌으로 인용하였다. 하기에, 본원에서 언급한 리간드는 총체적으로 TALL - 1 이라 명명한다.

TNF 리간드 상과 중 멤버인 TALL - 1 은 기능적으로 B 세포 생존 및 증식에 관련되어 있다. TALL - 1 을 과발현하는 형질전환 마우스는 심한 B 세포 과형성 및 루푸스 - 유사 자가면역질환을 앓고 있다. Khare 등의(2000) PNAS 97(7) : 3370 - 3375 참조하라. TACI 와 BCMA 둘다는 TALL - 1 에 대한 세포 표면 수용체로서 작용한다. Gross 등의(2000) Nature 404 : 995-999 ; Ware (2000), J. Exp. Med. 192(11) : F35 - F37 ; Ware (2000), Nature 404 : 949 - 950 ; Xia 등의(2000) J. Exp. Med. 192(1) : 137 - 143 ; Yu 등의(2000) Nature Immunology 1(3) : 252 - 256 ; Marsters 등의(2000) Current Biology 10 : 785 - 788 ; Hatzoglou 등의(2000) J. of Immunology 165 : 1322 - 1330 ; Shu 등의(2000) PNAS 97(16) : 9156 - 9161 ; Thompson 등의(2000) J. Exp. Med. 192(1) : 129 - 135 ; Mukhopadhyay 등의(1999) J. Biol. Chem. 274(23) : 15978 - 81 ; Shu 등의(1999) J. Leukocyte Biol. 65 : 680 - 683 ; Gruss 등의(1995) Blood 85(12) : 3378 - 3404 ; Smith 등의(1994) Cell 76 : 959 - 962 ; 1999 년 10 월 19 일자로 공고된 미국 특허 번호 제 5,969,102 호 ; 2000 년 11 월 9 일자로 공개된 제 WO 00/67034 호 ; 2000 년 7 월 13 일자로 공개된 제 WO 00/40716 호 ; 1999 년 7 월 15 일자로 공개된 제 WO 99/35170 호 참조하라. 두 수용체는 B 세포 상에서 발현되고 TRAF 와의 상호작용을 통해 신호를 전달한다. 게다가, TACI 와 BCMA 둘다는 또한 다른 TNF 리간드과 멤버인 APRIL 에 결합한다. Yu 등의(2000) Nature Immunology 1(3) : 252 - 256 참조하라. APRIL 또한 B 세포 증식을 유도하는 것으로 입증되었다.

현재까지, TALL - 1 의 펩티드 조절인자를 사용한 재조합 또는 변형된 단백질에 관해서는 어떠한 언급도 없었다. 재조합 및 변형된 단백질은 최근 개발된 부류의 치료제이다. 단백질 치료제의 유용한 변형은 항체의 Fc 도메인과의 조합 및 폴리에틸렌글리콜(PEG) 및 덱스트란과 같은 중합체와의 결합을 포함한다. 상기 변형은 그 전부를 본원에서 참고문헌으로 인용한 제 WO 00/24782 호로 공개된 발명의 명칭이 "치료제로서의 변형된 펩티드" 인 특허 출원서에 상세히 기재되어 있다.

치료제의 발전에 대한 매우 다른 연구법은 펩티드 라이브러리 스크리닝(peptide library screening)이다. 단백질 리간드와 그것의 수용체와의 상호작용은 비교적 광범위한 접촉면에서 종종 발생한다. 그러나, 인체 성장 호르몬과 그것의 수용체에 관하여 증명된 바와 같이, 접촉면의 단지 몇 개의 핵심 잔기(Key residue)만이 대부분의 결합 에너지를 제공한다. Clackson 등의(1995) Science 267 : 383 - 6 참조하라. 단백질 리간드의 대부분은 정상 형태에서 단지 결합 에피토프를 나타낼 뿐이며, 결합과 관련되지 않은 기능을 제공한다. 따라서, 단지 "펩티드" 길이의 분자(2 - 40 개의 아미노산)는 특정 거대 단백질 리간드의 수용체 단백질에 결합할 수 있다. 그러한 펩티드는 거대 단백질 리간드의 생활성(bioactivity)을 모방할 수 있거나("펩티드 작동물질") 또는 경쟁적 결합을 통하여 거대 단백질 리간드의 생활성을 저해할 수 있다( "펩티드 길항물질").

파지 디스플레이 펩티드 라이브러리는 상기 펩티드 작동물질 및 길항물질을 확인하는 강력한 방법으로 알려져 있다. 예를 들어, Scott 등의(1990) Science 249 : 386 ; Devlin 등의(1990) Science 249 : 404 ; 1993 년 6 월 29 일자로 공고된 미국 특허 번호 제 5,223,409 호 ; 1998 년 3 월 31 일자로 공고된 미국 특허 번호 제 5,733,731 호 ; 1996 년 3 월 12 일자로 공고된 미국 특허 번호 제 5,498,530 호 ; 1995 년 7 월 11 일자로 공고된 미국 특허 번호 제 5,432,018 호 ; 1994 년 8 월 16 일자로 공고된 미국 특허 번호 제 5,338,665 호 ; 1999 년 7 월 13 일자로 공고된 미국 특허 번호 제 5,922,545 호 ; 1996 년 12 월 19 일자로 공개된 제 WO 96/40987 호 ; 및 1998 년 4 월 16 일자로 공개된 제 WO 98/15833 호(이들 각각은 전부를 참고문헌으로 인용하였음)를 참조하라. 이러한 라이브러리에서, 무작위 펩티드 서열은 선상 파지의 외피 단백질과 융합함으로써 나타난다. 일반적으로, 나타난 펩티드는 고정화된 표적 단백질에 대하여 친화성 - 용리된다. 보유되는 파지는 친화성 정제와 재증식의 계속되는 순환에 의해 풍부해 질 것이다. 하나 또는 그 이상의 구조적으로 관련된 펩티드과내의 핵심 잔기를 확인하기 위해 최상의 결합 펩티드 서열을 결정할 것이다. 예를 들어, 2 개의 구별되는 과가 확인되어 있는, Cwirla 등의(1997) Science 276 : 1696 - 9 를 참조하라. 펩티드 서열은 또한 알라닌 스캐닝 또는 DNA 수준에서의 돌연변이 유발에 의해 잔기가 안전하게 치환되는 것도 시사할 것이다. 최상의 결합제 서열을 좀 더 최적화하기 위하여 돌연변이 유발 라이브러리를 만들고 스크리닝할 것이다. Lowman(1997), Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26 : 401 - 24 를 참조하라.

또한, 거대 단백질 리간드의 결합 활성을 모방하는 펩티드를 제시하기 위해 단백질 - 단백질간 상호작용의 구조적 분석을 사용할 수도 있다. 이러한 분석에 있어서, 결정 구조는 펩티드를 고안할 수 있는 거대 단백질 리간드의 중요 잔기의 상대적 배향과 동일성을 제시할 것이다. 예를 들어, Takasaki 등의(1997) Nature Biotech. 15 : 1266 - 70 를 참조하라. 이러한 분석적 방법은 또한 수용체 단백질과 파지 디스플레이에 의해 선택된 펩티드 사이의 상호작용을 연구하기 위해 사용될 수도 있는데, 이러한 상호작용은 결합 친화성을 증가시키기 위해 펩티드를 더 변형시킬 수 있음을 시사한다.

다른 방법들도 펩티드를 조사하는 파지 디스플레이(phage display)에 필적한다. 펩티드 라이브러리는 lac 리프레서의 카르복시 말단과 융합될 수 있으며 E. coli 에서 발현될 수 있다. E. coli 를 기초로 하는 또다른 방법은 펩티도글리칸 - 관련 리포단백질(PAL)과 융합하여 세포의 외막에 나타나도록 하는 것이다. 이하에서는, 이러한 방법 및 이와 관련된 방법들을 집합적으로 "E. coli 디스플레이(display)" 라고 명명한다. 다른 방법에 있어서, 무작위 RNA 의 번역은 리보솜 방출 전에 정지되어, 관련된 RNA 가 여전히 부착되어 있는 폴리펩티드의 라이브러리가 된다. 이하에서는, 이러한 방법 및 이와 관련된 방법들을 집합적으로 "리보솜 디스플레이(ribosome display)" 라고 명명한다. 다른 방법에서는 펩티드와 RNA 의 결합을 사용한다 ; 예를 들어, PROfusion technology, Phylos, Inc. 예를 들어, Roberts & Szostak(1997), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94 : 12297 - 303 를 참조하라. 이하에서는, 이러한 방법 및 이와 관련된 방법들을 집합적으로 "RNA - 펩티드 스크리닝" 이라고 명명한다. 화학적으로 유도된 펩티드 라이브러리는 폴리에틸렌 로드 또는 용매 - 투과성 수지와 같이 안정하고 비 - 생물학적인 물질에 고정된 펩티드로 발생되었다. 화학적으로 유도된 또다른 펩티드 라이브러리는 슬라이드 글라스 위에 고정된 펩티드를 스캔하기 위하여 사진평판을 사용한다. 이하에서는, 이러한 방법 및 이와 관련된 방법들을 집합적으로 "화학적 - 펩티드 스크리닝" 이라고 명명한다. 화학적 - 펩티드 스크리닝은 비 - 펩티드 요소 뿐만 아니라 D - 아미노산 및 다른 비자연적 유사체를 사용하게 하는 장점이 있다. 생물학적 방법과 화학적 방법 둘 다는 Wells & Lowman(1992), Curr. Opin. Biotechnol. 3 : 355 - 62 에 리뷰되어 있다. 개념상으로, 파지 디스플레이, RNA - 펩티드 스크리닝 및 상기 언급된 다른 방법들을 사용하여 모든 단백질의 펩티드 유사체를 발견할 수 있다.

발명의 요약

본 발명은 TALL - 1 의 활성도를 조절하는 치료제에 관한 것이다. 본 발명에 따라서, TALL - 1 의 상기 조절인자는 아미노산 서열 Dz ² Lz ⁴ (SEQ ID NO : 108) 을 포함하며, 여기에서 z ² 는 아미노산 잔기이고 z ⁴ 는 트레오닐 또는 이소루이실이다. TALL - 1 의 상기 조절인자는 다음의 화학식을 포함한다.

이 식에서,

a ¹ , a ² , a ³ 은 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이고 ;

a ⁶ 은 아미노산 잔기이고 ;

a ⁹ 는 염기성 또는 소수성 잔기이고 ;

a ⁸ 은 트레오닐 또는 이소루이실이고 ;
a ¹⁰ 은 아미노산 잔기이고 ;

a ¹² 는 중성의 소수성 잔기이며 ; 및

a ¹³ 및 a ¹⁴ 는 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이다.

이 식에서,

b ¹ 및 b ² 는 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이고 ;

b ³ 은 산성 또는 아미드 잔기이고 ;

b ⁵ 는 아미노산 잔기이고 ;

b ⁶ 은 방향족 잔기이고 ;

b ⁸ 은 아미노산 잔기이고 ;

b ¹⁰ 은 T 또는 I 이고 ;

b ¹¹ 은 염기성 잔기이고 ;

b ¹² 및 b ¹³ 은 각각 독립적으로 아미노산 잔기이고 ;

b ¹⁴ 는 중성의 소수성 잔기이며 ; 및

b ¹⁶ , b ¹⁷ 및 b ¹⁸ 은 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이다.

이 식에서,

c ¹ , c ² 및 c ³ 은 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이고 ;

c ⁵ 는 아미노산 잔기이고 ;

c ⁷ 은 아미노산 잔기이고 ;

c ⁹ 는 T 또는 I 이고 ;

c ¹⁰ 은 염기성 잔기이고 ;

c ¹¹ 및 c ¹² 는 각각 독립적으로 아미노산 잔기이고 ;

c ¹³ 은 중성의 소수성 잔기이고 ;

c ¹⁴ 는 아미노산 잔기이고 ;

c ¹⁶ 은 아미노산 잔기이고 ;

c ¹⁷ 은 중성의 소수성 잔기이며 ; 및

c ¹⁸ 은 아미노산 잔기이거나 또는 존재하지 않는다.

이 식에서,

d ¹ , d ² 및 d ³ 은 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이고 ;

d ⁵ , d ⁶ 및 d ⁷ 은 각각 독립적으로 아미노산 잔기이고 ;

d ¹⁰ 은 아미노산 잔기이고 ;

d ¹² 는 T 또는 I 이고 ;
d ¹³ 은 아미노산 잔기이고 ;

d ¹⁴ 는 아미노산 잔기이며 ; 및

d ¹⁶ , d ¹⁷ 및 d ¹⁸ 은 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이다.

이 식에서,

e ¹ , e ² 및 e ³ 은 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이고 ;

e ⁵ , e ⁶ , e ⁷ , e ⁹ 및 e ¹³ 은 각각 독립적으로 아미노산 잔기이고 ;

e ¹¹ 은 T 또는 I 이며 ; 및

e ¹⁵ , e ¹⁶ 및 e ¹⁷ 은 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이다.

이 식에서,

f ¹ , f ² 및 f ³ 중 하나 만이 C 이고 f ¹² , f ¹³ 및 f ¹⁴ 중 하나 만이 C 인 경우에,

f ¹ , f ² 및 f ³ 은 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이고(f ¹² , f ¹³ 및 f ¹⁴ 중 하나가 C 인 경우에, f ¹ , f ² 및 f ³ 중 하나는 C 인 것이 바람직함) ;

f ⁵ 는 W, Y 또는 F(W 가 바람직함)이고 ;

f ⁷ 은 아미노산 잔기(L 이 바람직함)이고 ;

f ⁹ 는 T 또는 I(T 가 바람직함)이고 ;

f ¹⁰ 은 K, R 또는 H(K 가 바람직함)이고 ;

f ¹² 는 C, 중성의 소수성 잔기, 또는 염기성 잔기(W, C 또는 R 이 바람직함)이고 ;

f ¹³ 은 C, 중성의 소수성 잔기이거나 또는 존재하지 않으며(V 가 바람직함) ; 및

f ¹⁴ 는 모든 아미노산 잔기이거나 또는 존재하지 않는다.

상기 화학식 Ia 내지 화학식 If 의 화합물을 하기에 SEQ ID NO : 63 뿐만 아니라 Dz ² Lz ⁴ 에 통합하였다. 화학식 If 의 서열은 하기의 실시예 1 에 기재되어 있는 칸센서스 서열로 유도된 것이다. 화학식 If 내의 화합물 중에서도 다음의 화학식 If' 가 바람직하다 :

화학식 If'

화학식 If' 내에 포함되는 화합물은 SEQ ID NOS :32, 58, 60, 62, 63, 66, 67, 69, 70, 114, 115, 122, 123, 124, 147 - 150, 152 - 177, 179, 180, 187 을 포함한다.

또한 본 발명에 따라, 화합물은 다음의 칸센서스 모티프

PEPWE(SEQ ID NO : 110) 를 가지며 TALL - 1 과 또한 결합한다.

또한 본 발명에 따라, 다음 화학식 Ig 의 화합물을 포함한다 :

이 식에서,

g ¹ , g ² 및 g ³ 은 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이고 ;

g ⁵ 는 중성의 소수성 잔기이고 ;

g ⁸ 은 중성의 소수성 잔기이고 ;

g ¹⁰ 은 산성 잔기이고 ;

g ¹² 및 g ¹³ 은 각각 독립적으로 아미노산 잔기이며 ; 및

g ¹⁴ 는 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이다.

이 식에서,

h ¹ , h ² 및 h ³ 은 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이고 ;

h ⁶ 은 소수성 잔기이고 ;

h ⁷ 은 소수성 잔기이고 ;

h ¹⁰ 은 산성 또는 극성의 소수성 잔기이며 ; 및

h ¹² , h ¹³ 및 h ¹⁴ 는 각각 독립적으로 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이다.

이 식에서,

i ¹ 은 존재하지 않거나 또는 아미노산 잔기이고 ;

i ² 는 중성의 소수성 잔기이고 ;

i ³ 는 아미노산 잔기이고 ;

i ⁵ , i ⁶ , i ⁷ 및 i ⁸ 은 각각 독립적으로 아미노산 잔기이고 ;

i ⁹ 는 산성 잔기이고 ;

i ¹⁰ 은 아미노산 잔기이고 ;

i ¹² 및 i ¹³ 은 각각 독립적으로 아미노산 잔기이며 ; 및

i ¹⁴ 는 중성의 소수성 잔기이다.

화학식 Ig 내지 Ii 로 정의된 화합물도 TALL - 1 에 결합한다.

본 발명에 따른 TALL - 1 의 조절인자는 다음을 포함한다 :

a) TALL - 1 조절 도메인(예를 들어, 화학식 Ia 내지 Ii 를 갖는 아미노산 서열), 바람직하게 아미노산 서열 Dz ² Lz ⁴ 또는 파지 디스플레이, RNA - 펩티드 스크리닝이나 상기 기재한 다른 기술에 의해 상기 서열로부터 유도되는 서열 ; 및

b) 바람직하게 중합체(예를 들어, PEG 또는 덱스트란) 또는 Fc 도메인과 같은 매개체 ;

여기에서, 매개체는 TALL - 1 조절 도메인과 공유 결합한다. 매개체 및 TALL - 1 조절 도메인은 하기에 설명한 바와 같이 TALL - 1 조절 도메인의 N - 또는 C - 말단을 통해 연결될 수 있다. 매개체는 Fc 도메인이 바람직하고 Fc 도메인은 IgG Fc 도메인이 바람직하다. 이러한 Fc - 연결 펩티드를 본원에서는 "펩티바디(peptibody)" 라고 명명한다. 바람직한 TALL - 1 조절 도메인은 하기의 표 1 및 표 2 에 기재되어 있는 아미노산 서열을 포함한다. 다른 TALL - 1 조절 도메인은 파지 디스플레이, RNA - 펩티드 스크리닝 및 본원에 기재한 다른 기술에 의해 생성될 수 있다.

본 발명에 따른 TALL - 1 조절인자의 제조 과정은 다음 단계를 포함한다 :

(a) TALL - 1 에 결합하는 적어도 하나의 펩티드를 선택하는 단계 ; 및

(b) 매개체에 상기 펩티드를 공유 결합시키는 단계.

바람직한 매개체는 Fc 도메인이다. 단계 (a) 는 하기의 표 2 에 기재되어 있는 펩티드 서열 또는 파지 디스플레이, RNA - 펩티드 스크리닝이나 본원에 기재되어 있는 다른 기술 중에서 선택하여 실행하는 것이 바람직하다.

본 발명의 화합물은 표준 합성 방법, 재조합 DNA 기술 또는 펩티드와 융합 단백질을 제조하는 다른 방법으로 제조할 수 있다. 비 - 펩티드 부분을 포함하는 본 발명의 화합물을 사용할 경우에, 표준 펩티드 화학 반응 이외에도 표준 유기화학 반응으로 상기 화합물을 합성할 수 있다.

본 발명의 화합물의 예상되는 제 1 의 용도는 치료제 또는 예방제이다. 매개체 - 연결 펩티드는 펩티드에 의해 모방된 천연 리간드에 필적하는(또는 보다 뛰어난) 활성을 가질 수 있다.

본 발명의 화합물은 적절한 약학적 담체 물질과 함께 제형화하고 그것을 필요로 하는 인체(또는 다른 포유동물)와 같은 환자에게 유효량을 투여함으로써 치료나 예방을 목적으로 사용할 수 있다. 이외의 관련된 양상도 본 발명에 포함된다.

다수의 부가적인 양상들과 본 발명의 이점들은 도면과 발명의 상세한 설명을 고려하여 명백하게 나타날 것이다.

도 1 은 IgG1 항체에서 유도될 수 있는 전형적인 Fc 이량체를 나타낸다. 도면의 "Fc" 는 본원의 "Fc 도메인" 을 지칭하는 의미 내에서 Fc 변이체를 의미한다. "X ¹ " 및 "X ² " 는 하기에 정의된 바와 같은 펩티드 또는 링커 - 펩티드 조합을 의미한다. 구체적인 이량체는 다음과 같다 :

A, D : 단일 이황화물 - 결합 이량체. IgG1 항체는 일반적으로 항체의 힌즈 영역에 두 개의 이황화물 결합을 갖는다. 도 1A 및 도 1D 의 Fc 도메인은 두 개의 이황화물 결합 부위를 절단하거나 시스테이닐 잔기를 비반응성 잔기(예를 들어, 알라닐)로 치환하여 형성할 수 있다. 도 1A 에서, Fc 도메인은 펩티드의 아미노 말단에 연결되고 ; 도 1D 에서는, 카르복시 말단에 연결된다.

B, E : 이중 이황화물 - 결합 이량체. Fc 도메인은 Fc 도메인 사슬 내에 두 개의 시스테이닐 잔기를 유지하기 위해 모항체(parent antibody)를 절단하거나 또는 Fc 도메인을 코드하는 서열을 포함하는 구조물을 발현시켜 형성할 수 있다. 도 1B 에서, Fc 도메인은 펩티드의 아미노 말단에 연결되고 ; 도 1E 에서는, 카르복시 말단에 연결된다.

C, F : 비공유 결합 이량체. 이 Fc 도메인은 절단이나 치환에 의해 시스테이닐 잔기를 제거하여 형성할 수 있다. 숙주세포 내에 존재하는 다른 단백질의 시스테이닐 잔기와 시스테이닐 잔기와의 반응에 의해 불순물이 형성되지 않도록 하기 위해 시스테이닐 잔기를 제거하는 것이 바람직할 것이다. Fc 도메인의 비공유 결합은 이량체를 유지하기에 충분하다.

다른 이량체는 다양한 형태의 항체(예를 들어, IgG2, IgM)에서 유도되는 Fc 도메인을 사용하여 형성할 수 있다.

도 2 는 약리학적으로 활성인 펩티드의 직렬 반복체(tandem repeat)를 특징으로 하는 본 발명의 바람직한 화합물의 구조를 나타낸다. 도 2A 는 단일 사슬 분자를 나타내며 분자의 DNA 구조물을 나타낼 수도 있다. 도 2B 는 링커 - 펩티드 부분이 이량체의 한 사슬에만 존재하는 이량체를 나타낸다. 도 2C 는 두 개의 사슬에 펩티드 부분을 갖는 이량체를 나타낸다. 도 2C 의 이량체는 도 3A 에 나타낸 단일 사슬을 코드하는 DNA 구조물의 발현에 대하여 특정 숙주세포 내에서 자연발생적으로 형성될 수 있다. 다른 숙주세포에서, 세포를 이량체 형성에 유리한 조건에 두거나 이량체를 생체외에서 형성할 수 있다.

도 3 은 본 발명에 사용할 수 있는 인체 IgG1 Fc 의 전형적인 핵산 서열 및 아미노산 서열(각각, SEQ ID NOS : 1 및 2)을 나타낸다.

도 4A 내지 도 4F 는 펩티드 및 링커를 코드하는 SalI 단편에 대한 NdeI 의 누클레오티드 서열 및 아미노산 서열(SEQ ID NOS : 3 - 27)을 나타낸다.

도 5A 내지 도 5M 은 본 발명의 Fc - 연결 분자를 구성하는데 사용하는 pAMG21 - RANK - Fc 벡터의 누클레오티드 서열(SEQ ID NO : 28)을 나타낸다. 이 도면으로 다음을 포함하는, 핵산의 다수의 특징을 확인하였다 :

ㆍ 프로모터 영역 PcopB , PrepA , RNAI , APHⅡ, luxPR 및 luxPL ;

ㆍ APHⅡ 및 luxR 에 대한 mRNA ;

ㆍ 단백질 copB, copT, repAI, repA4, APHⅡ, luxR, RANK 및 Fc 에 대한 코딩 서열 및 아미노산 서열 ;

ㆍ 단백질 copB 및 CRP 에 대한 결합 부위 ;

ㆍ 헤어핀 T ₁ , T ₂ , T ₇ 및 toop ;

ㆍ lux 단백질에 대한 작동인자 부위 ; 및

ㆍ Pflll08 I, Bgl Ⅱ, Sca I, Bmn I, Drd Ⅱ, Dra Ⅲ, BstB I, Ace Ⅲ, Afl Ⅱ, PflM I, Bgl I, Sfi I, BstE Ⅱ, BspLull I, Nsp V, Bpl I, Eag I, Bcg I, Nsi I, Bsa I, Pspl406 I, Aat Ⅱ, Bsm I, Nru I, Nde I, ApaL I, Acc65 I, Kpn I, Sal I, Acc I, BspE I, Ahd I, BspH I, Econ I, BsrG I, Bma I, Sma I, SexA I, BamH I 및 Blp I 에 대한 제한효소 부위.

도 6A 및 도 6B 는 발현 플라스미드 pAMG21(ATCC 기탁번호 제 98113 호)를 형성하는, pCFM1656 에서 유일한 Aat Ⅱ(pCFM1656 내 위치 #4364) 및 Sac Ⅱ(pCFM1656 내 위치 #4585) 사이에 삽입된 DNA 서열(SEQ ID NO : 97)을 나타낸다.

도 7 은 TALL - 1 펩티바디(SEQ ID NO : 70)가 TALL - 1 - 매개 B 세포 증식을 저해함을 나타낸다. B6 마우스의 정제된 B 세포(10 ⁵ )는 10 ng/ml TALL - 1 과 함께 2 ㎍/ml 항 - IgM 항체 존재시 지시량의 TALL - 1 칸센서스 펩티바디로 평판된 96 - 웰에서 3 배로 배양하였다. 펄스(pulse)의 최종 18h 에 방사성 [ ³ H]티미딘을 이용하여 증식을 측정하였다. 나타낸 데이터는 평균 ±SD 삼중 웰을 의미한다.

도 8 은 TALL - 1 N - 말단의 직렬 이량체 펩티바디(하기의 표 5B 에 기재되어 있는 SEQ ID NO : 123 및 124)가 바람직하게 TALL - 1 - 매개 B 세포 증식을 저해함을 나타낸다. B6 마우스의 정제된 B 세포(10 ⁵ )는 10 ng/ml TALL - 1 과 함께 2 ㎍/ml 항 - IgM 항체 존재시 지시량의 TALL - 1 12 - 3 펩티바디 및 TALL - 1 칸센서스 펩티바디(표 5B 에 기재되어 있는 SEQ ID NO : 115 및 122)나 TALL - 1 칸센서스 펩티바디(SEQ ID NO : 123 및 124)로 평판된 96 - 웰에서 3 배로 배양하였다. 펄스의 최종 18h 에 방사성 [ ³ H]티미딘을 이용하여 증식을 측정하였다. 나타낸 데이터는 평균 ±SD 삼중 웰을 의미한다.

도 9 는 높은 친화력으로 AGP3 에 결합하는 AGP3 펩티바디를 나타낸다. 이중 - 커브 단 - 부위 동종 결합 모델(dual-curve one-site homogeneous binding model, KinEx™ 소프트웨어)을 사용하여 비선형의 경쟁적 회귀곡선에서 해리 평형 상수(K _D )를 수득하였다. 인체 AGP3 가 결합된 AGP3 펩티바디에 대한 K _D 는 약 4 pM 이다(SEQ ID NO : 123).

도 10A 및 도 10B 는 비아코레(Biacore) 경쟁적 검정시 AGP3 펩티바디가 인체 및 마우스 AGP3 둘 다를 차단함을 나타낸다. 수용성 인체 TACI 단백질을 B1 칩에 고정시켰다. 1 nM 의 재조합 인체 AGP3 단백질 또는 5 nM 의 재조합 마우스 AGP3 단백질을 수용체의 표면 상에 주사하기 전에 지시량의 AGP3 펩티바디와 항온시켰다. 인체 AGP3 및 마우스 AGP3 의 상대적인 결합 반응을 나타내었다(SEQ ID NO : 123).

도 11A 및 도 11B 는 비아코레 경쟁적 검정시 AGP3 펩티바디가 세 수용체 TACI, BCMA 및 BAFFR 모두에 결합하는 AGP3 를 차단함을 나타낸다. 수용성 재조합 수용체 TACI, BCMA 및 BAFFR 단백질을 CM5 칩에 고정시켰다. 1 nM 의 재조합 인체 AGP3 는 각각의 수용체 표면 상에 주사하기 전에 지시량의 AGP3 펩티바디와 항온시켰다. AGP3 의 상대적인 결합을 측정하였다. 유사하게, 1 nM 의 재조합 APRIL 단백질은 각각의 수용체 표면 상에 주사하기 전에 지시량의 AGP3 펩티바디와 항온시켰다. AGP3 펩티바디는 세 개의 수용체에 대한 APRIL 결합을 저해하지 않는다(SEQ ID NO : 123).

도 12A 및 도 12B 는 AGP3 펩티바디가 인체 AGP3 항원투여로 유도되는 마우스 혈청 면역글로불린 수준 증가를 저해함을 나타낸다. Balb/c 마우스는 지시된 투여량으로 식염수, 인체 Fc 또는 AGP3 펩티바디와 함께 1 ㎎/㎏ 의 인체 AGP3 를 7 일 동안 복강내로 주사한 다음 8 일에 채혈하였다. 혈청 내 IgM 및 IgA 의 총 수준은 ELISA 로 측정하였다(SEQ ID NO : 123).

도 13 은 AGP3 펩티바디 처리로 마우스 CIA 모델에서 관절염의 심각성이 완화됨을 나타낸다. 생후 8 내지 12 주의 DBA/1 수컷 마우스에게 프로인트 완전 보조액으로 유화시킨 제 Ⅱ 형 소 콜라겐(bCⅡ)을 꼬리 끝 부분에 피내로 주입하여 면역시킨 다음 초기 면역시킨지 3 주 후에 프로인트 불완전 보조액으로 유화시킨 bCⅡ 로 추가항원자극하였다. 추가항원자극을 한 날부터 4 주 동안 지시량의 AGP3 펩티바디를 처리하였다. 상기(Khare 등의 J. Immunol ., 155 : 3653 - 9, 1995 참조)에 설명한 바와 같이, 네 발 모두 개별적으로 관절염의 심각성에 대해 0 - 3 으로 수치화하였다(SEQ ID NO : 123).

도 14 는 마우스 CIA 모델에서 항 - 콜라겐 항체 생성을 AGP3 펩티바디 처리로 저해함을 나타낸다. 혈청 시료는 상기에 설명한 바와 같이 최종 처리(35 일)한 지 1 주 후에 채취하였다. 혈청 항 - 콜라겐 Ⅱ 항체 수준은 ELISA 분석으로 측정하였다(SEQ ID NO : 123).

도 15A 및 도 15B 는 NZB/NZW 루푸스 마우스에서 AGP3 펩티바디 처리로 단백뇨증의 발병이 지연되고 생존이 향상됨을 나타낸다. 루푸스의 경향이 있는 생후 5 개월의 NZBx NZBWF1 마우스에 PBS 또는 지시된 투여량의 AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123)나 인체 Fc 단백질을 8 주 동안 3X/주로 복강내 처리하였다. 쥐의 생존 기간 동안 소변 내의 단백질 을 알부스틱스(Albustix) 시약 스트립(바이엘 악티엔게젤샤프트에서 입수)으로 실험하여 매달 측정하였다.

도 16A 및 도 16B 는 바람직한 TALL - 1 - 결합 펩티바디의 핵산 서열 및 아미노산 서열을 나타낸다(SEQ ID NOS : 189 및 123).

용어의 정의

본 명세서에 걸쳐 사용되는 용어는 특정 예로서 달리 한정하지 않는 한, 하기와 같이 정의된다.

일반적인 정의

"포함하는" 이란 용어는, 화합물이 주어진 서열의 N - 말단이나 C - 말단에 또는 둘 다에 부가적인 아미노산을 포함할 수 있음을 의미한다. 물론, 이러한 부가적인 아미노산은 화합물의 활성도를 심각하게 방해하지 않아야 한다.

또한, 본 발명의 약학적으로 용인가능한 염도 본원에 포함된다. "약학적으로 용인가능한 염" 이란 용어는 공지되었거나 후에 약학적으로 용인가능한 것으로 밝혀진 모든 염을 의미한다. 몇몇의 특정 예로는 아세트산염 ; 트리플루오로아세트산염 ; 염화수소산염 및 브롬화수소산염과 같은 할로겐화수소산염 ; 황산염 ; 시트르산염 ; 글리콜산염 ; 및 수산염이 있다.

아미노산

"산성 잔기" 란 용어는 산성기를 포함하는 곁사슬을 갖는 D - 또는 L - 형 내의 아미노산 잔기를 의미한다. 전형적인 산성 잔기는 D 및 E 를 포함한다.

"아미드 잔기" 란 용어는 산성기의 아미드 유도체를 포함하는 곁사슬을 갖는 D - 또는 L - 형 내의 아미노산을 의미한다. 전형적인 잔기는 N 및 Q 를 포함한다.

"방향족 잔기" 란 용어는 방향족기를 포함하는 곁사슬을 갖는 D - 또는 L - 형 내의 아미노산 잔기를 의미한다. 전형적인 방향족 잔기는 F, Y 및 W 를 포함한다.

"염기성 잔기" 란 용어는 염기성기를 포함하는 곁사슬을 갖는 D - 또는 L - 형 내의 아미노산 잔기를 의미한다. 전형적인 염기성 잔기는 H, K 및 R 을 포함한다.

"친수성 잔기" 란 용어는 극성기를 포함하는 곁사슬을 갖는 D - 또는 L - 형 내의 아미노산 잔기를 의미한다. 전형적인 친수성 잔기는 C, S, T, N 및 Q 를 포함한다.

"비작용성(nonfunctional) 잔기" 란 용어는 산성기, 염기성기 또는 방향족기가 결여된 곁사슬을 갖는 D - 또는 L - 형 내의 아미노산 잔기를 의미한다. 전형적인 비작용성 아미노산 잔기는 M, G, A, V, I, L 및 노르루이신(Nle)을 포함한다.

"중성의 소수성 잔기" 란 용어는 염기성기, 산성기 또는 극성기가 결여된 곁사슬을 갖는 D - 또는 L - 형 내의 아미노산 잔기를 의미한다. 전형적인 중성의 소수성 아미노산 잔기는 A, V, L, I, P, W, M 및 F 를 포함한다.

"극성의 소수성 잔기" 란 용어는 극성기를 포함하는 곁사슬을 갖는 D - 또는 L - 형 내의 아미노산 잔기를 의미한다. 전형적인 극성의 소수성 아미노산 잔기는 T, G, S, Y, C, Q 및 N 을 포함한다.

"소수성 잔기" 란 용어는 염기성기 또는 산성기가 결여된 곁사슬을 갖는 D - 또는 L - 형 내의 아미노산 잔기를 의미한다. 전형적인 소수성의 아미노산 잔기는 A, V, L, I, P, W, M, F, T, G, S, Y, C, Q 및 N 을 포함한다.

펩티드

"펩티드" 란 용어는 1 내지 40 개의 아미노산으로 이루어진 분자를 의미하는 것으로, 5 내지 20 개의 아미노산으로 이루어진 분자가 바람직하다. 전형적인 펩티드는 자연적으로 발생하는 분자의 TALL - 1 조절 도메인 및 무작위로 생성되는 서열을 포함할 수 있다.

펩티드 서열을 지칭하는데 사용하는 "무작위화된(randomized)" 이란 용어는 자연적으로 발생하는 분자의 하나 또는 그 이상의 잔기가 자연적으로 발생하는 분자 내의 그 위치에 나타나지 않는 아미노산 잔기로 치환된 서열 및 완전한 무작위 서열(예를 들어, 파지 디스플레이 방법 또는 RNA - 펩티드 스크리닝에 의해 선택)을 의미한다. 펩티드 서열을 확인하는 전형적인 방법은 파지 디스플레이, E. coli 디스플레이, 리보솜 디스플레이, RNA - 펩티드 스크리닝, 화학적 스크리닝 등을 포함한다.

"TALL - 1 조절 도메인" 이란 용어는 TALL - 1 에 결합하는 아미노산 서열을 의미하며 자연적으로 발생하는 서열이나 무작위화된 서열을 포함한다. 전형적인 TALL - 1 조절 도메인은 파지 디스플레이 또는 본원 에 기재되어 있는 다른 방법으로 확인하거나 유도할 수 있다.

"TALL - 1 길항물질" 이란 용어는 TALL - 1 에 결합하는 분자를 의미하며 전장의 천연 TALL - 1 에 의한 파라미터의 효과와 상반되는 하나 또는 그 이상의 검정 파라미터를 증가시키거나 감소시킨다. 이러한 활성도는 예를 들어, 2000 년 8 월 17 일자로 공개된 제 WO 00/47740 호인 "TNF - 관련 단백질" 로 명명된 특허 출원의 재료 및 방법 부분 중 "AGP - 3 의 생물학적 활성도" 라 명명된 부분에 기재되어 있는 바와 같은 검정으로 측정할 수 있다.

매개체 및 펩티바디

"매개체" 란 용어는 분해를 예방하고/예방하거나 반감기를 증가시키고 독성을 감소시키며 면역원성을 감소시키거나 치료 단백질의 생물학적 활성도를 증가시키는 분자를 의미한다. 전형적인 매개체로는 선형 중합체[예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리리신, 덱스트란 등] 뿐만 아니라 Fc 도메인(바람직함) ; 가지난 사슬 중합체(예를 들어, 1981 년 9 월 15 일자로 공고된 Denkenwalter 등의 미국 특허 번호 제 4,289,872 호 ; 1993 년 7 월 20 일자로 공고된 Tam 의 제 5,229,490 호 ; 1993 년 10 월 28 일자로 공개된 Frechet 등의 제 WO 93/21259 호를 참조하라) ; 지질 ; 콜레스테롤군(예를 들어, 스테로이드) ; 탄수화물 또는 올리고당(예를 들어, 덱 스트란) ; 샐비지(salvage) 수용체에 결합하는 천연 또는 합성 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드 ; 인체 혈청 알부민(HSA), 루이신 지퍼 도메인 및 다른 단백질과 단백질 단편을 포함하는 알부민이 있다. 매개체에 대해 하기에 더 기재하였다.

"천연 Fc" 란 용어는 단량체 형태이거나 다량체 형태인 전 항체의 절단에 의한 비 - 항원 - 결합 단편의 서열을 포함하는 분자 또는 서열을 의미한다. 천연 Fc 의 본래의 면역글로불린 원은 인체 기원이 바람직하고 IgG1 및 IgG2 가 바람직하지만 모든 면역글로불린일 수 있다. 천연 Fc's 는 공유 결합(즉, 이황화물 결합) 및 비 - 공유 결합에 의해 이량체 또는 다량체 형태에 연결될 수 있는 단량체 폴리펩티드로 구성되어 있다. 천연 Fc 분자의 단량체 아단위 사이의 분자간 이황화물 결합의 수는 예를 들어, IgG, IgA, IgE 류 또는 IgG1, IgG2, IgG3, IgA1, IgGA2 와 같은 아부류에 따라 1 내지 4 일 것이다. 천연 Fc 의 예로는 IgG 의 파파인 절단에 의한 이황화물 결합된 이량체가 있다[Ellison 등의(1982) Nucleic Acids Res. 10 : 4071 - 9 를 참조하라]. 본원에서 사용된 "천연 Fc" 란 용어는 일반적인 단량체, 이량체 및 다량체 형태를 의미한다.

"Fc 변이체" 란 용어는 샐비지 수용체 FcRn 에 대한 결합 부위를 포함하나 천연 Fc 로부터 변형된 분자나 서열을 의미한다. 국제 출원 제 WO 97/34631 호(1997 년 9 월 25 일자로 공개) 및 제 WO 96/32478 호에는 샐비지 수용체와의 상호작용 뿐만 아니라 전형적인 Fc 변이체가 기재되어 있으며 그 전부를 본원에서 참고문헌으로 인용하였다. 따라서, "Fc 변이체" 란 용어는 비 - 인체의 천연 Fc 로부터 인체화된 분자나 서열을 의미한다. 또한, 천연 Fc 는 본 발명의 융합분자에 대해 불필요한 구조적 특징이나 생물학적 활성도를 제공하기 때문에 제거할 수 있는 부위를 포함한다. 따라서, "Fc 변이체" 란 용어는 하기에 기재한 사항과 관련되어 있거나 영향을 미치는 하나 또는 그 이상의 천연 Fc 부위나 잔기가 결여된 분자 또는 서열을 포함한다 : (1) 이황화물 결합 형성, (2) 선택한 숙주세포와의 부적합성, (3) 선택한 숙주세포에서의 발현에 의한 N - 말단 이질성, (4) 글리코실화, (5) 보체와의 상호작용, (6) 샐비지 수용체 이외의 Fc 수용체에 결합 또는 (7) 항체 - 의존성 세포의 세포독성(ADCC). Fc 변이체는 하기에 더 상세하게 기재하였다.

"Fc 도메인" 이란 용어는 상기에 정의한 바와 같은 천연 Fc 및 Fc 변이체 분자 및 서열을 포함한다. Fc 변이체 및 천연 Fc's 와 함께, "Fc 도메인" 이란 용어는 전 항체로부터 절단되었거나 다른 방법으로 생성된 단량체 또는 다량체 형태의 분자를 포함한다.

Fc 도메인을 포함하는 Fc 도메인 또는 분자에 적용하는 "다량체" 란 용어는 공유 결합, 비공유 결합 또는 공유 및 비 - 공유 상호작용과 관련된 둘 또는 그 이상의 폴리펩티드 사슬을 갖는 분자를 의미한다. IgG 분자는 전형적으로 이량체 ; IgM, 오량체 ; IgD, 이량체 ; 및 IgA, 단량체, 이량체, 삼량체 또는 사량체를 형성한다. 다량체는 Fc 의 천연 Ig 원의 최종 활성도 및 서열을 이용하거나 천연 Fc 를 유도(하기에 정의하였음)함으로써 형성할 수 있다.

Fc 도메인을 포함하는 Fc 도메인 또는 분자에 적용하는 "이량체" 란 용어는 공유 또는 비 - 공유적으로 관련된 두 개의 폴리펩티드 사슬을 갖는 분자를 의미한다. 본 발명의 범주 내의 전형적인 이량체를 도 1 에 나타내었다.

"유도체화(derivatizing)" 및 "유도체" 또는 "유도체화된(derivatized)" 이란 용어는 각각 화합물의 제조방법 및 결과적으로 생성된 하기와 같은 화합물을 포함한다 : (1) 고리형 부분을 갖는 화합물 ; 예를 들어, 화합물 내의 시스테이닐 잔기 간의 교차결합 ; (2) 교차결합되거나 교차결합 부위를 갖는 화합물 ; 예를 들어, 시스테이닐 잔기를 가지므로 배양액 또는 생체 내에서 교차 - 결합된 이량체를 형성하는 화합물 ; (3) 비 - 펩티딜 결합으로 치환되는 하나 또는 그 이상의 펩티딜 결합 ; (4) -NRR ¹ , NRC(O)R ¹ , -NRC(O)OR ¹ , -NRS(O) ₂ R ¹ , NHC(O)NHR, 숙신이미드기 또는 치환되거나 비치환된 벤질옥시카르보닐 - NH - 로 치환된 화합물(여기에서, R 과 R ¹ 및 고리 치환기는 하기에 정의하였음) ; (5) -C(O)R ² 또는 -NR ³ R ⁴ 로 치환된 C - 말단(여기에서, R ² , R ³ 및 R ⁴ 는 하기에 정의하였음) ; 및 (6) 각각의 아미노산 부분이 선택한 곁사슬 또는 말단 잔기와 반응할 수 있는 제제로 처리하여 변형된 화합물. 유도체에 대해 하기에 더 기재하였다.

"펩티바디" 및 "펩티바디류" 란 용어는 Fc 도메인 및 적어도 하나의 펩티드를 포함하는 분자를 의미한다. 이러한 펩티바디는 다량체나 이량체 또는 이의 단편일 수 있으며 유도체화될 수 있다. 본 발명에서, V ¹ 이 Fc 도메인일 경우에 본원의 화학식 Ⅱ 내지 Ⅵ 를 갖는 분자는 펩티바디이다.

화합물의 구조

일반 구조. 본 발명자는 TALL - 1 에 결합하고 TALL - 1 의 생물학적 활성도를 조절할 수 있는 서열을 확인하였다. 이러한 서 열은 펩티드의 결합활성을 유지하거나 증진시키면서 하나 또는 그 이상의 아미노산을 변화시킬 수 있는 상기에 기재한 기술로 변형시킬 수 있다.

본 발명에 따라 제조한 물질로 이루어진 조성물에서, 펩티드(류)는 펩티드의 N - 말단 또는 C - 말단을 통해 매개체와 결합할 수 있다. 모든 펩티드는 링커가 존재하거나 존재하지 않아도 직렬(즉, 순서대로)로 연결될 수 있다. 따라서, 본 발명의 매개체 - 펩티드 분자는 다음 화학식 Ⅱ 로 설명할 수 있다 :

이 식에서,

V ¹ 은 매개체(바람직하게 Fc 도메인)이고 ;

X ¹ 및 X ² 는 각각 독립적으로 -(L ¹ ) _c -P ¹ , -(L ¹ ) _c -P ¹ -(L ² ) _d -P ² , -(L ¹ ) _c -P ¹ -(L ² ) _d -P ² -(L ³ ) _e -P ³ 및 -(L ¹ ) _c -P ¹ -(L ² ) _d -P ² -(L ³ ) _e -(L ⁴ ) _f -P ⁴ 중에서 선택한 것이고 ;

P ¹ , P ² , P ³ 및 P ⁴ 는 각각 독립적으로 화학식 Ia 내지 Ii 를 갖는 서열과 같은 TALL - 1 조절 도메인의 서열이고 ;

L ¹ , L ² , L ³ 및 L ⁴ 는 각각 독립적으로 링커이며 ; 및

a 및 b 중 적어도 하나가 1 인 경우에, a, b, c, d, e 및 f 는 각각 독립적으로 0 또는 1 이다.

따라서, 화합물 Ⅱ 는 다음 화학식 Ⅲ 내지 Ⅵ 를 갖는 바람직한 화합물 및 이들의 다량체를 포함한다 :

이 식에서, V ¹ 은 Fc 도메인이고 A ¹ 의 C - 말단에 결합하며 ;

이 식에서, V ¹ 은 Fc 도메인이고 A ² 의 N - 말단에 결합하며 ;

이 식에서, V ¹ 은 Fc 도메인이고 -(L ¹ ) _c -P ¹ 의 N - 말단에 결합하며 ; 및

이 식에서, V ¹ 은 Fc 도메인이고 -L ¹ -P ¹ -L ² -P ² 의 N - 말단에 결합한다.

펩티드 . 본 발명의 펩티드는 화학식 Ⅱ 내지 Ⅵ 을 갖는 분자에서 TALL - 1 조절 펩티드 또는 TALL - 1 조절 도메인으로 유용하다. 이러한 펩티드 서열을 포함하는 본 발명의 분자는 본 분야에 공지되어 있는 방법들로 제조할 수 있다.

바람직한 펩티드 서열은 하기에서 확인되는 치환을 갖는 상기의 화학식 Ia 을 갖는 서열이다.

바람직한 펩티드 서열은 하기의 표 2 에 나타내었다.

TALL - 1 에 대한 공지된 수용체들이 바람직한 펩티드와 상동성을 갖는 몇몇의 서열을 산출함이 기재되어 있다 :

시스테이닐 잔기를 포함하는 모든 펩티드는 다른 Cys - 포함 펩티드와 교차결합할 수 있으며, 둘 중 하나 또는 둘 다 매개체와 결합할 수 있다. 하나보다 많은 Cys 잔기를 갖는 모든 펩티드는 또한 펩티드 간에 이황화물 결합을 형성할 수 있다. 이러한 펩티드는 하기에 기재된 바와 같이 유도체화될 수 있다.

부가적인 유용한 펩티드 서열은 표 2 에 기재되어 있는 서열 중 아미노산 서열의 보존적 및/또는 비 - 보존적 변형으로 생성할 수 있다.

보존적 변형이 일어날 수 있는 펩티드와 유사한 기능적 및 화학적 특성을 갖는 펩티드를 이러한 변형으로 제조할 수 있을 것이다. 반대로, 펩티드의 기능적 및/또는 화학적 특성의 실질적인 변형을 실시하기 위해 (a) 예를 들어, 쉬트 형태나 나선 형태와 같은 치환 영역 내의 분자 골격 구조, (b) 표적 부위 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 분자의 크기를 유지시키는 효과를 상당히 변화시키는 아미노산 서열을 선택하여 치환한다.

예를 들어, "보존적 아미노산 치환" 은 위치 내 아미노산 잔기의 극성 또는 전하에 거의 또는 전혀 영향을 끼치지 않는 비천연 잔기로 천연 아미노산 잔기를 치환함을 포함한다. 또한, 폴리펩티드 내의 모든 천연 잔기는 "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발" 에 대하여 이미 기재되어 있는 바와 같이, 알라닌으로 치환될 수 있다(예를 들어, 알라닌 스캐닝 돌연변이에 관하여 기술한, MacLennan 등의, 1998, Acta Physiol. Scand. Suppl. 643 : 55 - 67 ; Sasaki 등의, 1998, Adv. Biophys. 35 : 1 - 24 을 참조하라).

바람직한 아미노산 치환(보존적 치환이든 비 - 보존적 치환이든 간에)은 치환이 필요한 경우에 본 분야의 숙련자들이 결정할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 치환은 펩티드 서열 내 주요 잔기를 확인하거나 또는 본원에 기재된 펩티드 또는 매개체 - 펩티드 분자(전술한 화학식 참조)의 친화성을 증가시키거나 감소시키는데 사용할 수 있다. 전형적인 아미노산 치환은 표 3 에 나타내었다.

특정 실시형태에 있어서, 보존적 아미노산 치환은 생물계에서의 합성에 의해서라기 보다는 화학적인 펩티드 합성에 의해 일반적으로 결합되는 비 - 자연발생적인 아미노산 잔기도 포함한다.

상기 "용어의 정의" 부분에 기재한 바와 같이, 자연발생적인 잔기는 서열 변형에 유용한 곁사슬의 공통적인 특성을 기준으로 분류할 수 있다. 예를 들어, 비 - 보존적 치환은 이러한 부류의 멤버를 다른 부류에 속하는 멤버로 치환함을 포함한다. 이렇게 치환된 잔기는 비 - 인체 오르토로그(ortholog)와 상동인 펩티드 영역 또는 분자의 비 - 상동 영역에 도입될 수 있다. 또한 사슬 배향에 영향을 끼치기 위해 P 또는 G 를 사용하여 변형시킬 수도 있다.

이렇게 변형시키기 위해서는, 아미노산의 수치료 지수가 고려될 수 있다. 각각의 아미노산의 소수성과 전하적인 특성을 근거로 수치료 지수를 다음과 같이 정하였다 : 이소루이신(+ 4.5) ; 발린(+ 4.2) ; 루이신(+ 3.8) ; 페닐알라닌(+ 2.8) ; 시스테인/시스틴(+ 2.5) ; 메티오닌(+ 1.9) ; 알라닌(+ 1.8) ; 글리신(- 0.4) ; 트레오닌(- 0.7) ; 세린(- 0.8) ; 트립토판(- 0.9) ; 티로신(- 1.3) ; 프롤린(- 1.6) ; 히스티딘(- 3.2) ; 글루탐산염(- 3.5) ; 글루타민(- 3.5) ; 아스파라긴산염(- 3.5) ; 아스파라긴(- 3.5) ; 리신(- 3.9) ; 및 아르기닌(- 4.5).

단백질에 대한 생물학적 상호작용을 부여하는데 있어서 아미노산 수치료 지수의 중요성은 본 분야에서 인지되는 것이다[Kyte 등의, J.Mol. Biol., 157 : 105 - 131(1982) 참조]. 특정 아미노산이 유사한 수치료 지수를 갖는 다른 아미노산으로 치환되면 유사한 생물학적 활성도를 가질 수 있음이 공지되어 있다. 수치료 지수를 근거로 치환하는 데 있어서, 수치료 지수가 ± 2 이내인 아미노산의 치환이 바람직하고, ± 1 이내가 특히 바람직하며 ± 0.5 이내가 보다 더 바람직하다.

유사 아미노산의 치환이 친수성을 근거로 하여 효과적으로 이루어질 수 있음이 본 분야에서 이해되었다. 인접 아미노산의 친수성에 의해 결정된 바와 같이 단백질의 최대 국소 평균 친수성은 면역원성 및 항원성, 즉 단백질의 생물학적 특성과 관계가 있다.

아미노산 잔기에 대한 친수성 수치가 다음과 같이 정해졌다 : 아르기닌(+ 3.0) ; 리신(+ 3.0) ; 아스파라긴산염(+ 3.0 ± 1) ; 글루탐산염(+ 3.0 ± 1) ; 세린(+ 0.3) ; 아스파라긴(+ 0.2) ; 글루타민(+ 0.2) ; 글리신(0) ; 트레오닌(- 0.4) ; 프롤린(- 0.5 ± 1) ; 알라닌(- 0.5) ; 히스티딘(- 0.5) ; 시스테인(- 1.0) ; 메티오닌(- 1.3) ; 발린(- 1.5) ; 루이신(- 1.8) ; 이소루이신(- 1.8) ; 티로신(- 2.3) ; 페닐알라닌(- 2.5) ; 트립토판(- 3.4). 유사한 친수성 값을 근거로 치환시키는 데 있어서, 친수성 수치가 ± 2 이내인 아미노산 의 치환이 바람직하고, ± 1 이내가 특히 바람직하며 ± 0.5 이내가 보다 더 바람직하다. 이러한 영역은 "에피토프 중심 영역(epitopic core region)" 이라고도 한다.

숙련자들은 널리 공지된 기술을 이용하여 전술한 서열에 나타나 있는 폴리펩티드의 적당한 변이체를 결정할 수 있을 것이다. 활성도를 저해하지 않으면서 변이시킬 수 있는 분자의 적당한 영역을 확인하기 위해서, 본 분야의 숙련자들은 활성도에 영향을 미치지 않는다고 여겨지는 부분을 표적으로 삼을 수 있다. 예를 들어, 동일한 종이나 다른 종 간에 유사한 활성을 갖는 유사한 폴리펩티드가 공지된 경우, 본 분야의 숙련자들은 펩티드의 아미노산 서열과 유사한 펩티드를 비교할 수 있다. 이러한 비교를 통해, 숙련자들은 유사한 폴리펩티드 중에 보존된 분자의 잔기 및 부분을 확인할 수 있다. 유사한 펩티드에 대해 상대적으로 보존되지 않은 펩티드의 영역 내 변이가 펩티드의 생물학적 활성도 및/또는 구조에 불리한 영향을 끼치지 않음이 인지될 것이다. 상대적으로 보존된 영역에서도 활성을 유지시키면서 화학적으로 유사한 아미노산이 자연발생적인 잔기로 치환될 수 있음이 본 분야의 숙련자들에게 공지되어 있다(보존적인 아미노산 잔기 치환). 그러므로, 생물학적 활성도나 구조에 중요한 영역도 생물학적 활성도를 저해하지 않거나 펩티드 구조에 불리한 영향을 끼치지 않으면서 보존적 아미노산 치환을 실시할 수 있다.

또한, 본 분야의 숙련자들은 활성도나 구조에 중요한 유사 펩티드 내의 잔기를 확인하는 구조 - 작용 연구를 검토할 수 있다. 이와 같은 비교를 통해, 숙련자들은 유사 펩티드의 활성도나 구조에 중요한 아미노산 잔기에 해당하는 펩티드 내 아미노산 잔기의 중요성을 예측할 수 있다. 본 분야의 숙련자들은 펩티드의 중요한 잔기로 예측된 아미노산 잔기를 화학적으로 유사한 아미노산을 선택하여 치환할 수 있다.

본 분야의 숙련자들은 또한 유사한 폴리펩티드의 구조에 관한 3 - 차 구조 및 아미노산 서열을 분석할 수 있다. 이러한 정보를 통해, 본 분야의 숙련자들은 펩티드의 3 차 구조에 관한 펩티드의 아미노산 잔기의 정렬을 예측할 수 있다. 본 분야의 숙련자들은 이러한 잔기가 다른 분자와의 중요한 상호작용에 관계되어 있으므로, 단백질의 표면상에서 예측되는 아미노산 잔기에 대한 라디칼 변화를 나타내지 않도록 선택할 수 있다. 또한, 본 분야의 숙련자들은 각각의 바람직한 아미노산 잔기에 단일 아미노산 치환을 포함하는 실험 변이체를 생성할 수 있다. 본 분야의 숙련자들에게 공지된 활성도 검정을 이용하여 변이체를 스크리닝할 수 있다. 이러한 데이터는 적당한 변이체에 관한 정보를 수집하는데 이용할 수 있다. 예를 들어, 특정 아미 노산 잔기에 대한 변화로 활성도가 저해되거나 부적절하게 감소되거나 부적당하게 된다면, 이러한 변이를 갖는 변이체는 피해야 한다. 즉, 이러한 일상적인 실험을 통해 수집된 정보를 근거로, 본 분야의 숙련자들은 단독으로 또는 다른 돌연변이와의 조합을 피해야 하는 치환이 일어날 수 있는 아미노산을 용이하게 결정할 수 있다.

수 많은 과학적 공개 문헌들이 단백질의 2 차 구조를 예견하는데 공헌하여 왔다. Moult J., Curr. Op. in Biotech., 7(4) : 422 - 427 (1996), Chou 등의 Biochemistry, 13(2) : 222 - 245 (1974) ; Chou 등의 Biochemistry, 113(2) : 211-222(1974) ; Chou 등의 Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol., 47 : 45 - 148 (1978) ; Chou 등의 Ann. Rev. Biochem., 47 : 251 - 276 및 Chou 등의 Biophys. J., 26 : 367 - 384 (1979)를 참조하라. 더욱이, 2 차 구조를 예견하는데 도움이 되는 컴퓨터 프로그램을 일반적으로 이용할 수 있게 되었다. 2 차 구조를 예견하는 한 방법은 상동성 모델링에 근거한 방법이다. 예를 들어, 서열의 유사성이 30 % 이상이거나 또는 40 % 이상인 2 개의 폴리펩티드 또는 단백질은 종종 구조적 위상이 유사하다. 최근 단백질 구조 데이터 베이스(PDB : protein data base)의 성장은 폴리펩티드의 구조 또는 단백질의 구조 내의 잠재적인 접힘 수를 포함한 2 차 구조의 예상가능성을 증가시켰다. Holm 등의 Nucl. Acid. Res., 27(1) : 244 - 247 (1999)를 참조하라. 주어진 폴리펩티드 또는 단백질에서 접힘 수가 제한되고 구조의 임계수(critical number)가 일단 결정되면 구조적 예견의 정확도가 현저히 증가됨을 제시하고 있다[Brenner 등의 Curr. Op. Struct. Biol., 7(3) : 369 - 376 (1997)을 참조].

2 차 구조를 예견하는 부가적인 방법은 "트레딩(threading)" [Johnes, D., Curr. Opin. Struct. Biol., 7(3) : 377 - 87 (1997) ; Sippl 등의 Structure, 4(1) : 15 - 9 (1996)를 참조], "윤곽 분석" [Bowie 등의 Science 253 : 164 - 170 (1991) ; Gribskov 등의 Meth. Enzym., 183 : 146 - 159 (1990) ; Gribskov 등의 Proc. Nat. Acad. Sci., 84(13) : 4355 - 8 (1987)], 및 "진화론적 연관"(상기 문헌 Home 및 상기 문헌 Brenner 참조)을 포함한다.

매개체. 본 발명은 N - 말단, C - 말단 또는 아미노산 잔기 중 하나의 곁사슬을 통해 펩티드에 부착된 적어도 하나의 매개체(V ¹ )를 필요로 한다. 다중 매개체(예를 들어, 각 말단에서의 Fc 와 말단에서의 Fc 및 다른 말단에서의 PEG 기 또는 곁사슬) 또한 사용할 수 있다. 대표적인 매개체로 다음을 포함한다 :

ㆍ Fc 도메인 ;

ㆍ 다른 단백질, 폴리펩티드 또는 샐비지 수용체에 결합할 수 있는

펩티드 ;

ㆍ 사람 혈청 알부민 (HSA : human serum albumin) ;

ㆍ 루이신 지퍼(LZ : leucine zipper) 도메인 ;

ㆍ 다른 중합체 뿐만 아니라 5kD, 20kD 및 30kD 의 PEG 을 포함한

폴리에틸렌 글리콜(PEG : polyethylene glycol) ;

ㆍ 덱스트란 ; 및

ㆍ 연장된 반감기 및/또는 단백질분해 변성 또는 단백질분해 제거로

부터 보호하기 위해 본 분야에서 제공하는 다른 분자.

Fc 도메인은 바람직한 매개체이다. Fc 도메인은 펩티드의 N 또는 C 말단 또는 N 및 C 말단 둘 다에 융합할 것이다. N 말단에 융합하는 것이 바람직하다.

상기 언급한 바와 같이, Fc 변이체는 본 발명의 범주 내에 적합한 매개체이다. 천연 Fc 는 본 발명에 따라 Fc 변이체를 형성하기 위해 폭넓게 변형될 수 있으며 샐비지 수용체로의 결합을 유지한다 ; 예를 들어 제 WO 97/34631 호 및 제 WO 96/32478 호를 참조하라. 이러한 Fc 변이체는 본 발명의 융합 분자에서는 필요하지 않은 구조적 특징 또는 기능적 활성을 제공하는 하나 또는 그 이상의 천연 Fc 부위를 제거할 것이다. 이러한 부위는 예를 들어, 잔기를 치환하거나 또는 삭제함으로써 제거할 수 있으며, 그 부위 내로 잔기들을 삽입함으로써 제거하거나 또는 그 부위를 포함하는 부분을 잘라 냄으로써 제거할 수 있다. 삽입되거나 치환된 잔기 또한 펩티드유사체 또는 D - 아미노산과 같은 아미노산으로 바꿀 수 있다. 하기 기술된 각각의 많은 이유로 Fc 변이체가 바람직할 것이다. 전형적인 Fc 변이체들은 다음의 분자 및 서열을 포함한다 :

1. 이황화물 결합 형성에 관련된 부위를 제거한다. 이런 부위를 제거함으로써, 본 발명의 분자를 생산하는데 사용되는 숙주 세포에 존재하는 다른 시스테인 - 함유 단백질과의 반응을 피할 수 있다. 이런 목적으로, N - 말단의 시스테인 - 함유 세그먼트를 잘라내거나 또는 시스테인 잔기를 삭제하거나 또는 다른 아미노산 (예를 들어, 알라닐, 세릴)으로 치환할 수 있다. 특히, SEQ ID NO : 2 의 N - 말단 20 - 아미노산 세그먼트를 잘라내거나 또는 삭제하거나 또는 SEQ ID NO : 2 의 7 내지 10 의 위치에서 시스테인 잔기를 치환할 수 있다. 심지어 시스테인 잔기가 제거된 경우에도 단일 사슬 Fc 도메인은 여전히 비 - 공유 결합으로 함께 유지되는 이량체 Fc 도메인을 형성할 수 있다.

2. 선택된 숙주 세포와 좀 더 적합하게 만들기 위해서 천연 Fc 를 변형할 수 있다. 예를 들어, 프롤린 이미노펩티다제와 같은 E. coli 의 소화 효소에 의해 인지되는 전형적인 천연 Fc 의 N - 말단 부근 의 PA 서열을 제거할 것이다. 특히 분자가 E. coli 와 같은 세균성 세포에서 재조합되어 발현될 경우, N - 말단 메티오닌 잔기가 또한 첨가될 것이다. SEQ ID NO : 2 의 Fc 도메인은 이러한 Fc 변이체 중 하나이다.

3. 천연 Fc 의 N - 말단 부분이 선택된 숙주 세포에서 발현할 경우, N - 말단의 이질성을 막기 위해서 이 부분을 제거한다. 이런 목적으로, N - 말단의 처음 20 개 아미노산 중 어떤 것, 특히 위치 1, 2, 3, 4 및 5 를 삭제할 것이다.

4. 하나 또는 그 이상의 글리코실화된 부위를 제거한다. 일반적으로 글리코실화된 잔기(예를 들어, 아스파라긴)는 세포융해 반응을 일으킬 것이다. 이러한 잔기를 삭제하거나 또는 비글리코실화된 잔기(예를 들어, 알라닌)로 치환할 것이다.

5. C1q 결합 부위와 같은 보체와 상호작용하는 관련 부위를 제거한다. 예를 들어, 인체 IgG1 의 EKK 서열로 치환하거나 또는 삭제할 것이다. 보체 보충은 본 발명의 분자에 이득이 없으므로 Fc 변이체에서는 피한다.

6. 샐비지 수용체보다는 다른 Fc 수용체에 결합하는데 영향을 미치는 부위를 제거한다. 천연 Fc 는 본 발명의 융합 분자를 필요로 하지 않는 특정 백혈구 세포와 상호작용하는 부위를 갖기 때문에 이 부위를 제거할 것이다.

7. ADCC 부위를 제거한다. ADCC 부위는 본 분야에 공지되어 있다 : 예를 들어, IgG1 의 ADCC 부위에 관한 Molec. Immunol. 29(5) : 633 - 9 (1992)를 참조하라. 또한 이러한 부위들은 본 발명의 융합 분자에서 필요로하지 않기 때문에 제거될 것이다.

8. 비 - 인체 항체에서 천연 Fc 를 유도하였을 경우, 이 천연 Fc 를 인체화할 수 있다. 대표적으로, 천연 Fc 를 인체화하기 위해, 인체 천연 Fc 에서 일반적으로 발견되는 잔기로 비 - 인체 천연 Fc 에서 선택된 잔기를 치환할 것이다. 항체를 인체화하는 기술은 본 분야에 잘 공지되어 있다.

바람직한 Fc 변이체는 다음을 포함한다. SEQ ID NO : 2 (도 3)에서, 위치 15 의 루이신을 글루탐산으로 치환 ; 위치 99 의 글루탐산을 알라닌으로 치환 ; 및 위치 101 및 103 의 리신을 알라닌으로 치환할 것이다. 더욱이, 하나 또는 그 이상의 티로신 잔기를 페닐알라닌 잔기로 치환할 수 있다.

선택적인 매개체는 샐비지 수용체에 결합할 수 있는 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 항체, 항체 단편 또는 소분자(예를 들어, 펩티드유사체 화합물)이다. 이것은 예를 들어, Presta 등에 의해 1998 년도 4 월 14 일에 공고된 미국 특허번호 제 5,739,277 호에 기재된 폴리펩티드 매개체로서 사용할 수 있다. 펩티드를 FcRn 샐비지 수용체에 결합시키기 위해 파지 디스플레이 또는 RNA - 펩티드 스크리닝으로 또한 선택할 수 있다. 이러한 샐비지 수용체 - 결합 화합물은 "매개체" 의 의미 내에 또한 포함되며 본 발명의 범주 내에 있다. 이러한 매개체는 증가된 반감기(예를 들어, 단백질가수분해효소에 의해 인지되는 서열을 피함으로써) 및 감소된 면역원성(예를 들어, 항체 인체화에서 발견된 바와 같이, 비 - 면역원성 서열을 선호함으로써)으로 인해 선택될 것이다.

상기 언급한 바와 같이, 중합체 매개체는 V ¹ 을 또한 사용할 것이다. 매개체로서 유용한 화학 성분을 부착하기 위한 다양한 방법들이 일반적으로 이용가능하다. 예를 들어, 본원에서 참고 문헌으로 인용된, 제목이 "N - 말단이 화학적으로 변형된 단백질 조성물 및 방법" 인 특허 협력 조약("PCT") 국제 공개 번호 제 WO 96/11953 호를 참조하라. 본 PCT 공개는, 다른 것들 중에서도, 단백질의 N - 말단으로의 수용성 중합체의 선택적인 부착을 나타낸다.

바람직한 중합체 매개체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다. 사용하기 알맞은 분자량의 PEG 기는 선형이거나 또는 가지난 형태일 것이다. PEG 의 평균 분자량 범위는 약 2 킬로달톤("kD") 내지 약 100 kD 이 바람직하며, 좀 더 바람직하게는 약 5 kD 내지 약 50 kD 이며, 가장 바람직하게는 약 5 kD 내지 약 10 kD 이다. 본 발명의 화합물에 반응하는 기(예를 들어, 알데하이드기, 아미노기 또는 에스테르기)에 대한 PEG 부분의 반응기(예를 들어, 알데하이드기, 아미노기, 티올기 또는 에스테르기)를 아크릴화 또는 환원성 알킬화시켜 PEG 기를 일반적으로 본 발명의 화합물에 부착할 것이다.

합성 펩티드를 폴리에틸렌 글리코실화하기 위한 유용한 전략은 용액에서 접합 결합 형성을 통하여 서로를 향해 상호반응하는 각기 특별한 기능성을 갖는 펩티드 및 PEG 부분의 결합으로 이루어진다. 펩티드를 통상적인 고체상 합성으로 쉽게 제조할 수 있다. 펩티드를 특정 부위에 적합한 기능성기로 "예비활성화" 하였다. 전구체를 정제하여 PEG 부분과 반응시키기 이전에 완전히 특성화하였다. 펩티드와 PEG 의 결찰은 일반적으로 수성상에서 발생하며 역상 분석 HPLC 로 측정할 수 있다. 폴리에틸렌 글리코실화 펩티드를 예비 HPLC 로 쉽게 정제할 수 있으며 분석 HPLC, 아미노산 분석 및 레이저 탈착 질량분석법으로 특성화할 수 있다.

다당류 중합체는 단백질 변형에 사용할 수 있는 또 다른 종류의 수용성 단백질이다. 덱스트란은 α1 - 6 결합에 의해 우세하게 결합된 클루코스의 각 소단위로 구성된 다당류 중합체이다. 덱스트란 그 자체는 많은 분자량 범위 내에서 이용할 수 있으며 약 1 kD 내지 약 70 kD 의 분자량으로 쉽게 이용할 수 있다. 덱스트란은 그 자체를 매개체로서 본 발명에 사용할 수 있거나 또는 다른 매개체(예를 들어, Fc)와 결합하여 본 발명에 사용할 수 있는 적절한 수용성 중합체이다. 예를 들어, 제 WO 96/11953 호 및 제 WO 96/05309 호를 참조하라. 치료 또는 진단 면역글로불린에 접합된 덱스트란의 용도는 본 발명에서 참고 문헌으로 인용한 예를 들어, 유럽 특허 공개 번호 제 0315 456 호를 참조하라. 덱스트란을 본 발명에 따른 매개체로서 사용할 경우 약 1 kD 내지 약 20 kD 의 덱스트란이 바람직하다.

링커. 어떤 "링커" 군은 선택적이다. 링커가 존재할 경우에는 주로 스페이서로 공급된 것이므로 링커의 화학적 구조는 중요하지 않다. 링커는 바람직하게 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 아 미노산으로 구성된다. 그러므로, 바람직한 실시형태에 있어서, 링커는 펩티드 결합으로 연결된 1 내지 30 개의 아미노산으로 구성되는데, 여기서 아미노산은 자연적으로 발생한 20 개의 아미노산으로부터 선택한 것이다. 본 분야에서 널리 인지된 바와 같이 이들 아미노산 중 일부를 글시코실화할 것이다. 좀 더 바람직한 실시형태에 있어서, 1 내지 20 개의 아미노산을 글리신, 알라닌, 프롤린, 아스파라긴, 글루타민 및 리신으로부터 선택한다. 심지어 좀 더 바람직하게, 링커를 글리신 및 알라닌과 같은 입체적으로 제약을 받지 않는 다수의 아미노산으로 구성한다. 따라서, 바람직한 링커는 폴리글리신 [특히(Gly) ₄ , (Gly) ₅ ], 폴리(Gly - Ala) 및 폴리알라닌이다. 링커의 다른 특정 실시예는 다음과 같다 :

상기 명명법을 설명하기 위해서, 예를 들면, (Gly) ₃ Lys(Gly) ₄ 는 Gly - Gly - Gly - Lys - Gly - Gly - Gly - Gly (SEQ ID NO : 40)을 의미한다. Gly 및 Ala 의 조합 또한 바람직하다. 여기에 나타낸 링커는 좋은 예이다 ; 본 발명의 범주 내에 존재하는 링커는 좀 더 길며 다른 잔기를 포함할 것이다.

바람직한 링커는 글리신, 알라닌, 프롤린, 아스파라긴, 글루타민, 라이신, 트레오닌 세린 또는 아스파르트산에서 선택한 최대 약 500 개의 아미노산을 갖는 적절한 링커로 5 개 이상의 아미노산을 포함하는 아미노산 링커이다. 약 20 내지 50 개의 아미노산을 갖는 링커가 가장 바람직하다. 바람직한 링커군 중 하나는 다음 식과 같다 :

및

여기서 X ¹ 및 X ³ 는 각각 독립적으로 염기성 및 소수성 잔기이며 X ² 및 X ⁴ 는 각각 독립적으로 소수성 잔기이다. 바람직한 특정 링커는 다음과 같다 :

비 - 펩티드 링커 또한 가능하다. 예를 들어, -NH-(CH ₂ ) _s -C(O)-(여기서 S=2-20 임)와 같은 알킬 링커를 사용할 수 있다. 더욱이, 이러한 알킬 링커를 저급 알킬(예를 들어, C ₁ - C ₆ ), 저급 아크릴, 할로겐(예를 들어, Cl, Br), CN, NH ₂ , 페닐 등과 같이 특정 입체적 장애를 일으키지 않는 기로 치환할 것이다. 비 - 펩티드 링커의 예로는 PEG 링커가 있으며 화학식은 다음과 같다 :

여기서, n 은 링커가 100 kD 내지 5000 kD 의 분자량을 갖는 것과 같으며, 바람직하게는 100 kD 내지 500 kD 의 분자량을 갖는 것과 같다. 펩티드 링커를 상기 기술한 것과 동일한 방법으로 유도체를 형성하기 위해 변경할 수 있다.

유도체. 본 발명자는 또한 화합물의 펩티드 및/또는 매개체 부분을 유도하는 것을 관찰하였다. 이러한 유도체는 화합물의 가용성, 흡수성, 생물학적 반감기를 향상시킬 것이다. 이 성분은 화합물등의 바람직하지 않은 부작용을 선택적으로 제거하거나 또는 감쇄시킬 것이다. 전형적인 유도체는 다음 화합물을 포함한다 :

1. 화합물 또는 이것의 일부분은 고리형태이다. 예를 들어, 펩티드 부분을 이황화물 결합 형성으로 고리화할 수 있는 둘 또는 그 이상의 Cys 잔기(예를 들어, 링커에서)를 함유하도록 변형할 것이다.

2. 화합물을 교차 - 결합하거나 또는 분자 사이에서 교차 - 결합할 수 있도록 만들 수 있다. 예를 들어, 펩티드 부분은 하나의 Cys 잔기를 포함하도록 변형되어 유사 분자와 분자간 이황화물 결합을 형성할 수 있다. 화합물은 또한 하기 나타낸 분자처럼 화합물의 C - 말단을 통해 교차 - 결합할 것이다.

화학식 Ⅷ 에서, 각 "V ¹ " 은 일반적으로 Fc 도메인 한 가닥을 나타낸다.

3. 하나 또는 그 이상의 펩티딜[-C(O)NR-] 결합을 비 - 펠티딜 결합으로 대체한다. 비 - 펩티딜 결합의 예로는 -CH ₂ -카르밤산염[-CH ₂ -OC(O)NR-], 인산염, -CH ₂ -설폰아미드[-CH ₂ -S(O) ₂ NR-], 우레아[-NHC(O)NH-], -CH ₂ - 2차 아민 및 알킬화 펩티드[-C(O)NR ⁶ - 여기서 R ⁶ 는 저급알킬]가 있다.

4. N - 말단을 유도한다. 일반적으로, N - 말단을 알크릴화하거나 치환된 아민으로 변형할 것이다. N - 말단 유도기의 예로는 -NRR ¹ (-NH ₂ 보다는 다른 것), -NRC(O)R ¹ , -NRC(O)OR ¹ , -NRS(O) ₂ R ¹ , -NHC(O)NHR ¹ , 숙신이미드 또는 벤질옥실카르보닐-NH-(CBZ-NH-)을 포함하며, 여기서 R 및 R ¹ 은 각각 독립적으로 수소 또는 저급 알킬이며, 여기서 페닐 고리를 C ₁ -C ₄ 알킬, C ₁ -C ₄ 알콕시, 클로로 및 브롬으로 이루어진 기로부터 선택된 1 내지 3 의 치환기로 치환할 수 있다.

5. 유리 C - 말단을 유도한다. 전형적으로, C - 말단을 에스데르화하거나 아미드화하였다. C - 말단 유도기는 예를 들어, -C(O)R ² 을 포함하는데, 여기서 R ² 는 저급 알콕시이거나 또는 -NR ³ R ⁴ 이고 R ³ 및 R ⁴ 는 각각 독립적으로 수소이거나 C ₁ -C ₈ 알킬이다(바람직하게는 C ₁ -C ₄ 알킬).

6. 이황화물 결합을 좀 더 안정한 교차 - 결합 성분(예를 들어, 알킬렌)의 어떤 것으로 바꾸는 것이 바람직하다. 예를 들어, Bhatnagar 등의(1996) J. Med. Chem. 39 : 3814-9 ; Alberts 등의(1993) Thirteenth Am. Pep. Symp. 357-9를 참조하라.

7. 하나 또는 그 이상의 각 아미노산 잔기를 변형한다. 하기 상세히 기재한 바와 같이, 다양한 유도제는 특히 선택된 곁사슬 또는 말단 잔기와 상호작용하는 것으로 알려져 있다.

리시닐 잔기 및 아미노 말단 잔기는 리시닐 잔기의 전하를 전환하는 숙신산 또는 다른 카르복시산 무수물과 상호작용할 것이다. 알파 - 아미노 - 함유 잔기를 유도하는 다른 적합한 시약은 다음을 포함한다 : 메틸피콜린이미테이트와 같은 이미도에스테르, 피리독살 인산염, 피리독살, 클로로보로히드라이드, 트리니트로벤젠술폰산, O - 메틸이소우레아, 2, 4 펜탄디온 및 글리옥실산염에 의한 트랜스아미나제 - 촉매반응.

아르기닐 잔기를 페닐글리옥살, 2, 3 - 부탄디온, 1, 2 - 시클로헥산디온 및 닌히드린을 포함하는 몇몇의 통상적인 시약 중 어느 하나 또는 그것과 결합하여 반응함으로써 변형시킬 수 있다. 아르기닐 잔기의 유도체화는 구아니딘 기능성기의 높은 pKa 로 인해 알칼리 조건에서 반응 을 수행할 필요가 있다. 더욱이, 이러한 시약은 엡실론 - 아미노기 뿐만 아니라 리신기와도 반응할 것이다.

티로실 잔기의 특정 실시형태는 방향족 디아조늄 화합물 또는 테트라니트로메탄과 반응시켜 스펙트랄 표지를 티로실 잔기로 도입하는데 특히 관심을 두고 폭넓게 연구하여 왔다. 가장 일반적으로, N - 아세틸이미디졸 및 테트라니트로메탄을 각각 O - 아세틸 티로실 종류 및 3 - 니트로 유도체를 형성하기 위해 사용하였다.

1 - 시클로헥실 - 3 - (2 - 모르폴리닐 - (4 - 에틸) 카르보디이미드 또는 1 - 에틸 - 3- (4 - 아조니아 -4, 4 - 디메틸펜틸) 카르보디이미드와 같은 카르보디이미드(R′- N = C = N - R′)와 반응시켜 카르보닐 곁사슬기(아스파틸 또는 글루타밀)을 선택적으로 변형할 것이다. 더욱이, 아스파틸 및 글루타밀 잔기를 암모니윰 이온과 반응시켜 아스파라기닐 및 글루타미닐 잔기로 전환할 것이다.

글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기를 글루타밀 및 아스파틸 잔기에 상응하도록 탈아미드화할 것이다. 대안적으로, 약산 조건 하에서 이러한 잔기를 결정하였다. 이러한 잔기의 양쪽 형태는 본 발명의 범주 내에 있다.

이황화물 결합을 제거하기 위해서 또는 반대로 교차 - 결합을 안정시키기 위해서 시스데닐 잔기를 아미노산 잔기 또는 다른 성분으로 바꿀 수 있다. 예를 들어, Bhatnagar 등의(1996) J. Med. Chem. 39 : 3814 - 9 를 참조하라.

이작용기성 제제에 의한 유도체화는 불용성 지지 매트릭스 또는 다른 거대분자 매개체에 대한 교차 - 결합 펩티드로 유용하거나 또는 이것의 기능성 유도체로 유용하다. 일반적으로 사용되는 교차 - 결합제는 다음을 포함한다 : 예를 들어, 1, 1 - 비스(디아조아세틸) - 2- 페닐에탄, 글루타르알데히드, N - 히드록시숙신이미드 에스테르(예를 들어, 4 - 아지도살리실산을 수반한 에스테르), 3, 3' - 디티오비스(숙신이미딜프로피온산염)와 같은 디숙신이미딜 에스테르를 포함하는 호모이작용기성 이미도에스테르 및 비스 - N - 말레이미도 - 1, 8 - 옥탄과 같은 이작용기성 말레이미드. 메틸 - 3 - [(P - 아지도페닐)디티오] 프로피오이미드산염과 같은 유도제는 빛이 존재할 경우 교차 - 결합을 형성할 수 있으며 광활성할 수 있는 중간체를 생산한다. 대안적으로 미국 특허 번호 제 3,969,287 호 ; 제 3,691,016 호 ; 제 4,195,128 호 ; 제 4,247,642 호 ; 제 4,229,537 호 ; 및 제 4,330,440 호에 기재된 시아노겐 브로마이드 - 활성 탄수화물과 같은 반응적 불용성 매트리스 및 반응성 기질을 단백질 고정화에 사용하였다.

탄수화물(올리고당)기를 단백질의 글리코실화 부위로 알려진 부위에 쉽게 부착할 수 있다. 일반적으로, O - 결합 올리고당은 세린(Ser) 또는 트레오닌(Thr) 잔기에 부착하는 반면 N - 결합 올리고당이 아스파라긴(Asn) 잔기 부착할 경우 이들은 서열 Asn - X- Ser/Thr(여기서 X 는 프롤린을 제외한 모든 아미노산 일 수 있음)의 부분이다. X 는 바람직하게 프롤린보다는 자연적으로 발생하는 다른 19 개의 아미노산 중 하나이다. N - 결합 올리고당과 O - 결합 올리고당 및 각 타입에서 발견되는 당 잔기의 구조는 상이하다. 둘 중에서 일반적으로 발견되는 당의 형태는 N - 아세틸노이라민산(시알산으로 언급했음)이다. 시알산은 보통 N - 결합 올리고당 및 O - 결합 올리고당 둘 다의 말단 잔기이며 이것의 음성 전하에 의해서 글리코실화된 화합물에 대해 산성 특성을 부여할 것이다. 이러한 부위는 본 발명의 화합물의 링커에 통합될 수 있으며 폴리펩티드 화합물의 재조합 생산 동안에 세포(예를 들어, CHO, BHK, COS 와 같은 포유동물 세포)에 의해 바람직하게 글리코실화된다. 그러나, 이러한 부위는 본 분야에 공지된 합성물질 또는 반 - 합성 과정에 의해 추가로 글리코실화될 것이다.

다른 가능한 변형은 프롤린 및 리신의 수산화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 히드록시기의 인산화, Cys 의 황 원자 산화, 리신, 아르기닌 및 히스티딘 곁사슬의 알파 - 아미노기의 메틸화를 포함한다. Creighton, Proteins : Structure 및 Molecule Properties(미국 샌프란시스코에 소재하는 더블유. 에이치. 프리맨 앤드 컴파니), pp. 79 - 86(1983)을 참조하라.

본 발명의 화합물을 또한 DNA 수준에서 변경할 것이다. 화합물의 어떤 부분의 서열을 선택된 숙주 세포와 좀 더 적합한 코돈으로 변경할 것이다. 바람직한 숙주 세포인 E. coli 에 대해 최적화된 코돈이 본 분야에 공지되어 있다. 제한 부위를 제거하거나 또는 잠재성 제한 부위를 포함하도록 코돈을 치환할 수 있으며 이는 선택된 숙주 세포의 DNA 프로세싱에 도움이 된다. 매개체, 링커 및 펩티드 DNA 서열은 상기 기재한 서열 변화 중 어느것이든지 포함하도록 변형될 수 있다.

제조 방법

본 발명의 화합물은 대부분 재조합 DNA 기술을 사용하여 형질전환된 숙주 세포에서 만들 수 있다. 그렇게 하기 위해서, 펩티드를 코드하는 재조합 DNA 분자를 제조한다. 이러한 DNA 분자의 제조 방법은 본 분야에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 펩티드를 코드하는 서열을 적절한 제한 효소를 사용하여 DNA 로부터 절제할 수 있다. 대안적으로, DNA 분자를 포스포아미데이트 방법과 같은 화학적 합성 기술을 사용하여 합성할 수 있다. 또한, 이러한 기술들을 조합하여 사용할 수 있다.

본 발명은 적절한 숙주에서 펩티드를 발현시킬 수 있는 벡터를 또한 포함한다. 벡터는 적절한 발현 조절 서열에 효과적으로 연결되는 펩티드를 코드하는 DNA 분자를 포함한다. DNA 분자를 벡터에 삽입하기 전 또는 후에, 이것을 효과적으로 연결시키는 방법은 잘 공지되어 있다. 발현 조절 서열은 전사조절 또는 변역조절에 관련된 프로모터, 활성제, 인헨서, 작동인자, 리보솜 결합 부위, 개시 시그날, 종결 시그날, 캡 시그날, 폴리아데닐화 시그날 및 다른 시그날을 포함한다.

DNA 분자를 포함하는 결과적으로 생성된 벡터는 적절한 숙주를 형질전환시키는데 사용한다. 형질전환을 본 분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 실행한다.

많은 수의 이용가능하며 잘 공지된 숙주 세포를 본 발명을 실행하는 데 사용할 것이다. 특정 숙주를 본 분야에 의해 인지되는 많은 요소를 통해 선택한다. 이것은 예를 들어, 선택된 발현 벡터와의 상용성, DNA 분자에 의해 코드화된 펩티드의 독성, 형질전환 비율, 펩티드의 회복용이, 발현 특성, 생 - 안전성 및 비용을 포함한다. 이러한 요소들의 균형은 특정 DNA 서열의 발현에 대해 모든 숙주가 동등하게 효과적이지 않음을 이해함으로써 얻을 수 있다. 이러한 일반적인 지표내에서, 유용한 미생물성 숙주는 배지내 박테리아(E. coli sp), 효모(사카로마이세스 sp ; Saccharomyces sp) 및 다른 곰팡이, 곤충, 식물, 포유동물(인체 포함) 세포를 포함하거나 또는 본 분야에 공지된 다른 숙주를 포함한다.

다음으로, 형질전환된 숙주를 배양하여 정제한다. 숙주 세포를 바람직한 화합물이 발현되도록 하기 위해서 통상적인 발효 조건 하에서 배양할 것이다. 이러한 발효 조건은 본 분야에 잘 공지되어 있다. 마지막으로, 본 분야에 잘 공지된 방법으로 펩티드를 배지로부터 정제한다.

본 화합물은 또한 합성 방법으로 만들 수 있다. 예를 들어, 고체상 합성 기술을 사용할 것이다. 적합한 기술은 본 분야에 잘 공지되어 있으며, 다음 문헌에서 기술하고 있다 : Merrifeld(1973), Chem. Polypeptides, PP. 335-61(Katsoyannis 및 Panayotis eds.) ; Merrifield(1963), J. Am. Chem. Soc. 85 : 2149 ; Davis 등의(1985) Biochem. Intl. 10 : 394-414 ; Stewart 및 Young(1969), Solid Phase Peptide Synthesis ; 미국 특허 번호 제 3,941,763 호 ; Fnn 등의(1973) The Proteins(3rd ed). 2 : 105-253 ; 및 Erickson 등의(1976) The Proteins(3rd ed.) 2 : 257-527 을 참조. 고체상 합성은 작은 펩티드를 만드는 가장 경제적인 방법이기 때문에 각 펩티드를 만드는 바람직한 기술이다.

유도된 펩티드를 포함하는 화합물 또는 비 - 펩티드기를 함유하는 화합물을 널리 공지된 유기화학 기술로 합성할 것이다.

화합물의 용도

본 발명의 화합물은 특히 B-세포 매개 자가면역질환 치료에 유용할 것이다. 특히, 본 발명의 화합물은 전신성홍반성루푸스(SLE : systemic lupus erythematosus)을 포함한 루푸스, 루푸스 관련 질환 및 증상을 치료, 예방, 회복, 진단 또는 예후하는데 유용할 것이다. 다른 바람직한 징후로는 B - 세포 림프종을 포함한 B - 세포 매개 암을 포함한다.

또한 만성관절질환을 치료하는데 있어 본 발명의 화합물을 사용할 수 있다. 관절의 염증 질환은 전세계에 걸쳐 수만명의 사람들에게 괴로움을 주고 장애를 일으키는 만성관절질환이다. 류마티스성 관절 염은 활액막으로부터 유래된 판누스라고 불리는 증식적이고 침습성의 결합조직에 의해 연골 및 뼈를 서서히 감퇴시키는 관절 질환이다. 이 질환은 피하조직, 심맥관계, 폐, 비장, 림프절, 골격근, 신경계(중추 및 말초) 및 눈과 같은 관절외 조직 뿐만 아니라 활액낭, 건초 및 건과 같은 관절 주위의 구조도 포함할 것이다[Silberberg(1985), Anderson's Pathology, Kissane(ed.), Ⅱ : 1828 참조]. 골관절염은 관절 연골에서의 변질적 변화 및 관절 주변의 뼈 및 연골의 반발적 증식에 의해 특성화된 일반적인 관절 질환이다. 골관절염은 이화자극 및 동화자극에 대한 연골세포의 부적절한 반응으로 인해 발생할 수 있는 세포 - 매개 활성 과정이다. 보고된 바에 의하면, 관절 연골의 일부 매트릭스 분자의 변화는 초기 골관절염에서 발생한다[Thonar 등의(1993) Rheumatic disease clinics of North America, Moskowitz(ed.), 19 : 635 - 657 및 Shinmei 등의(1992) Arthritis Rheum., 35 : 1304 - 1308 참조]. TALL - 1, TALL - 1R 및 이의 조절체는 이러한 질환 및 이와 관련된 증상을 치료하는데 유용할 것으로 생각된다.

또한 본 발명의 화합물은 다음을 포함한 많은 추가 질환 및 장애를 치료하는데 유용할 것이다 :

ㆍ 급성췌장염 ;

ㆍ 항림프구혈청(ALS) ;

ㆍ 알쯔하이머 질환 ;

ㆍ 천식 ;

ㆍ 죽상동맥경화증 ;

ㆍ 자가면역용혈성빈혈 ;

ㆍ 암, 특히 B - 세포와 관련된 암 ;

ㆍ 악액질 / 식욕감퇴 ;

ㆍ 만성피로 증후군 ;

ㆍ 경변증(예를 들어, 원발담즙성간경변) ;

ㆍ 당뇨병(예를 들어, 인슐린당뇨병) ;

ㆍ 열 ;

ㆍ IgA 사구체신염 및 원발성 사구체신염을 포함하는 사구체신염 ;

ㆍ 굿파스튜어 증후군 ;

ㆍ 귈랑 - 바레 증후군 ;

ㆍ 이식편대숙주질환 ;

ㆍ 하시모도 갑산성염 ;

ㆍ 출혈성쇽 ;

ㆍ 통각과민 ;

ㆍ 염증성장질환 ;

ㆍ 골관절염, 건선성관절염 및 류마티스성 관절염을 포함하는 관절염

증 증상 ;

ㆍ 과로, 염좌, 연골손상, 외상, 정형수술, 감염 또는 다른 질환

과정으로 인해 발생하는 염증 증상 ;

ㆍ 인슐린 - 의존성 진성당뇨병 ;

ㆍ 뇌성국소빈혈(예를 들어, 신경변성을 일으킬 수 있는 외상, 간질,

출혈 또는 발작에 의한 뇌손상)을 포함하는 허혈성손상 ;

ㆍ 학습장애 ;

ㆍ 폐질환(예를 들어, 성인성호흡곤란 증후군) ;

ㆍ 다발성골수종 ;

ㆍ 다발성경화증 ;

ㆍ 중중근무력증 ;

ㆍ 골수성 백혈병[예를 들어, 급성골수아구성백혈병(AML) 및 만성골수성백혈병(CML)] 및

다른 백혈병 ;

ㆍ 근증[예를 들어, 근육단백질대사, 패혈증의 초감각저지각(esp)] ;

ㆍ 신경독성[예를 들어, 사람면역결핍바이러스(HIV)에 의해 유도됨] ;

ㆍ 골다공증 ;

ㆍ 통증 ;

ㆍ 파킨슨병 ;

ㆍ 펨피구스 ;

ㆍ 다발성근염 / 피부근염 ;

ㆍ 자가면역폐염증을 포함하는 폐염증 ;

ㆍ 조기분만 ;

ㆍ 건선 ;

ㆍ 라이터 질환 ;

ㆍ 재관류 손상 ;

ㆍ 패혈증성쇽 ;

ㆍ 방사선 치료의 부작용 ;

ㆍ 쇼그렌 증후군 ;

ㆍ 수면장애 ;

ㆍ 측두 하악골 관절 질환 ;

ㆍ 특발성 혈소판감소증 및 자가면역 신생아 혈소판감소증을 포함하는

혈소판감소증 ;

ㆍ 종양전이 ;

ㆍ 포도막염 ; 및

ㆍ 맥관염.

본 발명의 화합물을 단독으로 투여하거나 또는 다음을 포함하는 치료학적으로 유효한 양의 다른 약물과 결합하여 투여할 것이다 ; 진통제, 질환 - 변형 항 - 류마티스성 약물(DMARDs : disease - modifying anti - rheumatic drugs), 비 - 스테로이드성 항 - 염증 약물(NSAIDs : non - steroidal anti - inflammatory drugs) 및 어떤 면역 및/또는 염증 조절인 자. 따라서, 본 발명의 화합물을 다음과 함께 투여할 것이다 :

ㆍ 에타너셉트(etanercept, Enbrel ^TM ), sTNF - RI, 오너셉트(onercept),

D2E7 및 Remicade ^TM 과 같은 TNF 길항물질을 포함하는 TNF/TNF

수용체 과의 다른 멤버의 조절인자 ;

ㆍ 신경성장인자(NGF : nerve growth factor) 조절인자 ;

ㆍ 아나킨라 및 IL-1Hy1 및 IL-1Hy2 와 같은 좀 더 최근에 발견

된 IL-lra-유사 분자 ; 1998 년 12 월 1 일에 공고된 미국 특허

번호 제 5,844,099 호에 기재된 IL-1 "트랩(trap)" 분자 ; IL-1

항체 ; 가용화된 IL-1 수용체 및 이와 유사한 것을 포함하는

IL - 1 저해제 ;

ㆍ IL-6 저해제(예를 들어, IL-6 에 대한 항체) ;

ㆍ IL-8 저해제(예를 들어, IL-8 에 대한 항체) ;

ㆍ IL-18 저해제(예를 들어, IL-18 결합 단백질, 가용화된 IL-18 수

용체 또는 IL-18 에 대한 항체) ;

ㆍ 인터루킨 - 1 전환 효소(ICE : interleukin - 1 converting enzyme)

조절인자 ;

ㆍ 인슐린 - 유사 성장 인자(Insuline growth factor : IGF - 1, IGF -

2) 및 이의 조절인자 ;

ㆍ 형질전환 성장 인자 - β(TGF - β: transforming growth factor -

β), TGF - β과 멤버 및 TGF - β 조절인자 ;

ㆍ 섬유아세포 성장 인자(FGF : fibroblast growth factor) FGF - 1 내

지 FGF - 10 및 FGF 조절인자 ;

ㆍ 오스테오프로테제린(OPG : osteoprotegerin), OPG 유사체, 골보호제

및 OPG - 리간드(OPG - L)에 대한 항체 ;

ㆍ 부갑상선호르몬(PTH : parathyroid hormone), PTH 단편 및 PTH 단편

과 통합하는 분자(예를 들어, PTH(1-34)-Fc)와 같은 뼈 동화작용

제 ;

ㆍ PAF 길항물질 ;

ㆍ 케라티노사이트 성장 인자(KGF : keratinocyte growth factor), KGF -

관련 분자(예를 들어, KGF - 2) 및 KGF 조절인자 ;

ㆍ Celebrex ^TM 및 Vioxx ^TM 과 같은 COX - 2 저해제 ;

ㆍ 프로스타글란딘 유사체(예를 들어, E 계열 프로스타글란딘) ;

ㆍ 매트릭스 메탈로프로테이나아제(MMP : matrix metalloproteinase) 조절

인자 ;

ㆍ NOS(Nitric oxide synthase) 를 유도할 수 있는 조절인자를 포함하

는 산화질소합성효소(NOS) 조절인자 ;

ㆍ 당질코르티코이드 수용체의 조절인자 ;

ㆍ 글루탐산염 수용체의 조절인자 ;

ㆍ 리포다당류(LPS : lipopolysaccharide) 수준의 조절인자 ;

ㆍ 종양유전자(예를 들어, fos, Jun)의 저해제 및 인터페론을 포함하

는 항암제 ;

ㆍ 노르아드레날린 및 조절인자 및 이의 유사체.

약학적 조성물

일반 형태. 본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 약학적 조성물을 사용하는 방법을 제공한다. 이러한 약학적 조성물은 주사로 투여하거나 경구, 호흡기, 비강, 경피로 또는 다른 형태로 투여할 것이다. 일반적으로, 본 발명은 약학적으로 용인가능한 희석제, 방부제, 가용화제, 유화제, 보조제 및/또는 담체와 함께 본 발명의 화합물의 유효량을 함유하는 약학적 조성물을 포함한다. 이러한 조성물은 다양한 완충용액 함량(예를 들어, 트리스-HCl, 아세트산염, 인산염), pH 및 이온 강도를 가지는 희석제 ; 계면활성제 및 용해제[예를 들어, 트윈 80(Tween 80), 폴리소르베이트 80(Polysorbate 80)], 산화방지제(예를 들어, 아스코르빈산, 메타중아황산나트륨), 방부제(예를 들어, 치메로살, 벤질알콜) 및 증량제(예를 들어, 락토스, 만니톨)과 같은 첨가제 ; 폴리락트산, 폴리글리콜산 등과 같은 중합체 화합물의 미립자 제제로의 물질 삽입 또는 리포솜으로의 삽입을 포함한다. 히알루론산 또한 사용할 수 있으며 순환시 지속 기간을 촉진시키는 효과가 있다. 이러한 조성물은 신체 상태, 안정성, 생체내 방출속도 및 존재하는 단백질 또는 유도체의 생체내 제거율에 영향을 미친다. 본원에 참고문헌으로 인용된 Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed.(1990, 펜실베이니아 18042 이스톤에 소재하는 맥 퍼블리싱 컴파니) 1435 - 1712 페이지를 참조하라. 조성물을 액체 형태로 제조하거나 또는 동결건조된 형태와 같은 건조 분말로 제조할 것이다. 체내로 삽입할 수 있는 서방성 제형 또한 고려할 수 있으며 경피성 제형도 고려할 수 있다.

경구 투여용 약제학적 제형. 본원에서는 고형의 경구 투여용 약제학적 제형이 사용되었으며 이는 본원에 참고문헌으로 인용된 Remington's Pharmaceutical Sciences (1990), 18th Ed. (펜실베이니아 18042 이스톤에 소재하는 맥 퍼블리싱 컴파니)의 89 장에 일반적으로 기술되어 있다. 고형의 약제학적 제형은 정제, 캡술, 알약, 구내정 또는 구중정, 카세제 또는 펠렛을 포함한다. 또한, 본 조성물을 제형화하는데 리포솜 또는 프로테노이드 캡술화를 사용할 것이다(예를 들어, 프로테노이드 입자는 미국 특허 번호 제 4,925,673 호에 나타나있다). 리포솜 캡슐화를 사용할 수 있으며 리포솜은 다양한 중합체에서 유도될 것이다(예를 들어, 미국 특허 번호 제 5,013,556 호 참조). 치료시 사용할 수 있는 고형의 약제학적 제형은 본원에 참고문헌으로 인용된 Marshall, K., Modern Pharmaceutics (1979)(GS Banker 및 CT Rhodes 에 의해 발행됨)의 10 장에 나타나있다. 일반적으로, 제형은 위장내 환경서 보호되며 장에서 생물학적 활성 물질을 방출하는 본 발명의 화합물 및 불활성 성분을 포함할 것이다.

또한 보다 명확하게 상기 본 발명의 화합물의 경구 투여용 약제학적 제형이 예상된다. 만일 필요하다면, 화합물의 경구 투여가 효과적이도록 화합물을 화학적으로 변형시킬 것이다. 일반적으로, 화학적 변형은 화합물 분자 자체로 적어도 하나의 성분이 결합한다고 예상되며 상기 성분은 (a) 단백질분해의 저해제 ; 및 (b) 위장 또는 장에서 혈류로의 유입을 가능하게한다. 또한 화합물의 총 안정성이 증가하고 체내에서의 순환 시간이 증가하는 것이 바람직하다. 본 발명의 매개체에 공유적으로 결합하는 유용한 성분 또한 본 목적에 사용할 수 있다. 이러한 성분의 예는 다음을 포함한다 : PEG, 에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸 셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리딘 및 폴리프로린. 예를 들어, Abuchowski 및 Davis, Soluble Polymer-Enzyme Adducts, Enzymes as Drugs(1981), Hocenberg 및 Roberts, eds., Wiley-Interscience, New York, NY, pp.367 - 83 ; Newmark 등의(1982) J. Appl. Biochem. 4 : 185 - 9 를 참조하라. 사용할 수 있는 다른 중합체는 폴리-1.3-디옥솔레인 및 폴리-1,3,6-티옥소 칸이다. 상기 기재된 바와 같이, 약학적으로 사용하기 위해서는 PEG 성분이 바람직하다.

경구 투여용 약제학적 제형에서는 본 발명의 치료학적 화합물의 흡수를 향상시키기 위해 담체로서 소듐 N-(8-[2-히드록시벤조일]아미노) 카프릴에이트(SNAC)와 같은 변형 지방족 아미노산의 염을 사용하는 것이 또한 가능하다. SNAC 를 사용하는 헤파린 제형의 임상학적 효능은 에미스피어 테크놀로지(Emisphere Technologies)에 의해 수행하는 단계 Ⅱ 실험에서 증명되었다. 미국 특허 번호 제 5,792,451 호 "경구 투여용 조성물 및 방법" 을 참조하라.

본 발명의 화합물은 과립 또는 약 1 ㎜ 크기 조각의 펠릿 형태인 정제된 다중미립자와 같은 제형에 포함된다. 캡슐 투여를 위한 물질의 제형은 또한 분말, 경미하게 압축시킨 플러그 또는 정제이다. 치료제는 압축함으로써 제조할 수 있다.

색소 및 향미료 모두 포함될 수 있다. 예를 들어, 단백질(또는 유도체)은 제형화(리포솜 또는 마이크로스피어 캡슐화에 의한 것과 같이)된 후 색소 및 향미료를 포함하는 냉장 음료와 같은 식용 제품내에 포함된다.

불활성 물질을 갖는 본 발명의 화합물의 부피를 희석시키거나 또는 증가시킬 수 있다. 이러한 희석제는 탄수화물, 특히 만니톨, α- 락토오스, 무수락토오스, 셀룰로오스, 수크로오스, 변형 덱스트란류 및 녹말을 포함할 수 있다. 어떤 무기염은 또한 삼인산칼슘, 탄산마그네슘 및 염화나트륨을 포함하는 충전제로서 사용할 수 있다. 몇몇 통상적으로 입수가능한 희석제는 패스트 - 플로(Fast - Flo), 엠덱스(Emdex), STA-Rx 1500, 엠콤프레스(Emcompress) 및 아비셀(Avicell)이다.

붕해제를 고형의 약제학적 제형으로 치료학적 제형에 포함할 수 있다. 붕해제로 사용하는 물질은 녹말, 엑스플로탭(Explotab)에 근거하여 통상적인 붕해제를 포함하는 녹말을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 소듐 녹말 글리콜레이트, 암버라이트(Amberlite), 카르복시메틸셀룰로스나트륨, 울트라아밀로펙틴, 알긴산나트륨, 젤라틴, 오렌지 껍질, 카르복시메틸셀룰로스산, 천연 스폰지 및 벤토나이트는 모두 사용할 수 있다. 붕해제의 다른 형태는 불용성 양이온 교환 수지이다. 분말 고무는 붕해제 및 접합제로서 사용될 수 있으며 아가, 카라야 또는 트라가칸트와 같은 분말 고무를 포함할 수 있다. 알긴산 및 이의 나트륨염도 또한 유용한 붕해제이다.

접합제는 단단한 정제를 형성하여 치료제를 유지하는데 사용할 수 있으며 아카시아, 트라가칸트, 녹말 및 젤라틴과 같은 천연물로부터 수득한 물질을 포함한다. 다른 것으로는 메틸 셀룰로스(MC : methyl cellulose), 에틸 셀룰로스(EC : ethyl cellulose) 및 카르복시메틸 셀룰로스(CMC : carboxymethyl cellulose)를 포함한다. 폴리비닐 피롤리돈(PVP : polyvinyl pyrrolidone) 및 히드록시프로필메틸 셀룰로스(HPMC : hydroxypropylmethyl cellulose)는 둘 다 치료제를 과립화하기 위해 알콜 용액에서 사용될 수 있다.

제형화 과정 중에 달라붙는 것을 막기 위해 항마찰제를 치료학적 제형내에 포함할 수 있다. 윤활제는 치료제 및 다이(die) 벽 사이의 막으로서 사용될 수 있으며, 이의 마그네슘염 및 칼슘염을 포함하는 스테아르산, 폴리테트라폴로로에틸렌(PTFE : Polytetrafluoroethylene), 액체 파라핀, 식물성 기름 및 왁스를 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 또한 수용성 윤활제로 라우릴 황산나트륨, 라우릴 황산마그네슘, 다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜, 카보왁스(Carbowax) 4000 및 6000 을 사용할 수 있다.

제형화하는 동안 약제의 유동성을 향상시키고 압축하는 동안 재배열을 촉진하는 활택제가 첨가될 수 있다. 활택제는 녹말, 활석, 발 열규소 및 수화실리코알루미늄산염을 포함한다.

본 발명의 화합물이 수성 상태로 용해되는 것을 촉진시키기 위해 계면활성제는 습윤제로서 첨가될 수 있다. 계면활성제는 라우릴 황산나트륨, 디옥틸 소듐 술포석시네이트 및 디옥틸 소듐 술포네이트와 같은 음이온성 계면활성제를 포함한다. 양이온성 계면활성제도 사용될 수 있으며 이는 염화벤잘코늄 또는 염화벤제토늄을 포함한다. 계면활성제로서 제형내에 포함될 수 있는 잠재적인 비이온성 계면활성제의 예로는 라우로마크로골 400, 폴리옥실 40 스테아르산염, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유 10, 50 및 60, 모노스테아르산글리세롤, 폴리소르베이트 40, 60, 65 및 80, 수크로오스지방산에스테르, 메틸 셀룰로스 및 카르복시메틸 셀룰로스가 있다. 계면활성제는 단독 또는 다른 비율의 혼합물로서 단백질 또는 유도체의 제형내에 존재할 수 있다.

또한 화합물의 흡수를 향상시키기 위해 첨가제를 제형에 포함할 수 있다. 잠재적으로 이러한 특성을 갖는 첨가제의 예로는 지방산류 올레산, 리놀레산 및 리놀렌산이 있다.

조절 방출 제형이 바람직하다. 본 발명의 화합물은 확산 또는 예를 들어, 고무와 같은 침출 메카니즘에 의해 방출되도록 불활성 매 트릭스로 통합할 수 있다. 서서히 퇴화하는 매트릭스를 예를 들어, 알긴산염, 다당류와 같은 제형에 또한 통합할 수 있다. 본 발명의 조절 방출 화합물의 다른 형태는 오로스(Oros) 치료 시스템[알자 코포레이션에서 입수]에 근거한 방법으로 즉, 삼투압에 의해 약물이 단일 작은 구멍을 통해 출입할 수 있는 반투과성 막으로 둘러싸여 있는 약물이다. 몇몇 장용성제피는 또한 서방성 효과를 갖는다.

다른 제피를 제형에 사용할 수 있다. 이는 제피기에 적용시킬 수 있는 다양한 당을 포함한다. 치료제는 또한 얇은 코팅 정제로 주어지며, 이 예로 사용되는 물질은 2 군으로 나누어질 수 있다. 첫째는 비장용성 물질이며 메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 히드록시에틸 셀룰로스, 메틸히드록시-에틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필-메틸 셀룰로스, 소듐 카르복시-메틸 셀룰로스, 프로비돈 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 두 번째 군은 일반적으로 프탈산의 에스테르인 장용성 물질로 이루어져 있다.

물질의 혼합은 최적의 얇은 제피를 제공하는데 사용한다. 얇은 제피는 팬 제피기 또는 유동층 내에서 수행되거나 제피를 압축함으로써 이루어진다.

호흡기 투여 형태. 또한 본원에서는 본 단백질(또는 그의 유도체)을 호흡기 투여한다. 단백질(또는 유도체)은 흡입하는 동안 포유동물의 호흡기로 투여하면 혈류로 폐 상피조직 내층을 통해 관통한다. 다른 문헌으로는 Adjei 등의 Pharma. Res (1990) 7 : 565 - 9 ; Adjei 등의 (1990) Internatl. J. Pharmaceutics 63 : 135 - 44 (루프로라이드 아세테이트) ; Braquet 등의(1989) J. Cardiovasc. Pharmacol. 13 (suppl. 5) : s.143 - 146 (엔도테린-1; endothelin-1) ; Hubbard 등의(1989) Annals Int. Med. 3 : 206 - 12 (α1-안티트립신) ; Smith 등의(1989) J. Clin. Invest. 84 : 1145 - 6(α1-프로테이나아제) ; Oswein 등의(1990년 3월) "Aerosolization of Proteins", Proc. Symp. Resp. Drug Delivery Ⅱ, Keystone, Colorado (재조합 인체 성장 호르몬) ; Debs 등의(1988) J. Immunol. 140 : 3482 - 8 (인터페론-γ 및 종양 괴사 인자 α) 및 Platz 등의 미국 특허 번호 제 5,284,656 호(과립성백혈구 콜로니 자극 인자)이 포함된다.

본 발명의 실험에서 사용하는 것은 분무기, 정량식 흡입기 및 분말 흡입기를 포함하나 이에 국한되지 않는 치료학적 제품의 호흡기 투여를 위해 고안된 기계적 장치의 넓은 범위이며, 이는 본 분야의 숙련자들에게 공지되어 있다. 본 발명의 실험에 적절한 통상적으로 입수가능한 장치의 몇몇 특정한 예는 미국 미주리 세인트 루이스에 소재하는 마린크로드트 인코포레이티드(Mallinckrodt, Inc.)에서 생산하는 울트라벤트(Ultravent) 분무기 ; 미국 콜로라도 잉글우드에 소재하는 말퀘스트 메디칼 프로덕츠(Marquest Medical Products)에서 생산하는 아콘(Acorn) Ⅱ 분무기 ; 미국 노스케롤라이나 리서치 트라이앵글 파그에 소재하는 그락소 인코포레이티드(Glaxo Inc.)에서 생산하는 벤톨린(Ventolin) 정량식 흡입기 ; 및 미국 매사추세츠 베드퍼드에 소재하는 피손스 코포레이션(Fisons Corp.)에서 생산하는 스핀헬러(Spinhaler) 분말 흡입기이다.

이같은 모든 장치는 본 발명의 화합물을 제조하기 위해 적당한 제형의 사용이 요구된다. 전형적으로, 각각의 제형은 사용하는 장치의 유형에 있어 특정하고, 적절한 추진제 물질, 게다가 치료에 유용한 희석제, 보조제 및/또는 담체의 사용을 포함한다.

원위성 폐에 가장 효과적으로 투여하기 위해서, 발명의 화합물은 10㎛(또는 마이크론)이하, 바람직하게 0.5 내지 5 ㎛ 평균 조각 크기의 형태가 특히 바람직하다.

약학적으로 용인가능한 담체는 트리할로스, 만니톨, 크실리톨, 수크로오스, 락토오스 및 소르비탈과 같은 탄수화물을 포함한다. 제형내에서 사용하는 다른 성분은 DPPC, DOPE, DSPC 및 DOPC 이다. 천연 계면활성제 또는 합성 계면활성제를 사용할 수 있다. PEG 를 사용 할 수 있다(단백질 또는 유사체에서 유리된 용도와는 별도이다). 시클로텍스트란과 같은 덱스트란류를 사용할 수 있다. 담즙염 및 다른 관련 증강제를 사용할 수 있다. 셀룰로스 및 셀룰로스 유도체를 사용할 수 있다. 완충용액 제형내에서의 용도와 같이, 아미노산도 사용할 수 있다.

또한, 리포솜, 복합체를 포함하는 마이크로캡슐이나 미소립자 또는 담체의 다른 형태를 사용할 수 있다.

분무기, 제트 또는 초음파 중 하나와 함께 사용하기에 적절한 제형은 전형적으로 용액 ㎖ 당 약 0.1 내지 25 ㎎ 의 생물학적인 활성 단백질의 농도로 물에 용해되는 본 발명의 화합물을 함유한다. 제형은 또한 완충용액 및 단일 당(예를 들어, 단백질 안정성 및 삼투압 조절을 위해)을 포함한다. 분무기 제형은 에어로졸을 형성하여 용액을 미립화함으로써 야기되는 단백질의 집성체를 일으키는 표면을 감소시키거나 방지하기 위한 계면활성제를 포함한다.

정량식 흡입기에 사용하는 제형은 일반적으로 계면활성제의 도움으로 추진제로 현탁된 본 발명의 화합물을 포함하는 잘 분리된 분말을 함유한다. 추진제는 트리클로로플루오르메탄, 디클로로디플루오르메탄, 디클 로로테트라플루오르에탄올 및 1,1,1,2-테트라플루오르에탄을 포함한 클로로플루오르카본, 히드로클로로플루오르카본, 히드로플루오르카본이나 히드로카본 또는 그의 배합물과 같은, 이 목적을 위해 사용하는 통상적인 물질이다. 적절한 계면활성제는 소르비탄 트리올이에트 및 소야 레시틴을 포함한다. 또한 올레산도 유용한 계면활성제이다.

분말 흡입기로부터 제조되는 제형은 본 발명의 화합물을 포함하는 잘 분리된 건조 분말을 함유하며, 또한 장치로부터 분말의 분산을 촉진시키는, 양으로 말하면 예를 들어, 제형의 50 내지 90 중량 % 의 락토오스, 소르비톨, 수크로오스, 만니톨, 트리할로스 또는 크실리톨과 같은 증량제를 포함한다.

비강 투여 형태. 본 발명의 화합물을 또한 비강 투여한다. 비강 투여는 폐내에서 제품의 침전없이 비강으로 치료학적 제품을 투여한 후에 직접 혈류로 단백질이 이동하도록 한다. 비강 투여를 하기 위한 제형은 덱스트란 또는 시클로 덱스트란을 포함한다. 다른 점막을 통과하는 수송을 통한 투여도 또한 가능하다.

투여량 결정 방법. 상기 설명한 증상을 치료하기 위한 방법에 포함된 투여량 양생법은 약물의 활동을 변형시키는 여러 요인 예를 들어, 환자의 연령, 증상, 체중, 성별과 식이요법, 감염 정도, 투여시간 및 다른 임상학적 요인을 고려하여 주치의에 의해 결정될 것이다. 일반적으로 일일 양생법은 체중의 kg 당 본 발명 화합물의 0.1 - 1000 ㎍, 바람직하게 kg 당 0.1 - 150 ㎍ 의 범위이다.

바람직한 특정 실시형태

본 발명은 하기 표 4에 바람직한 펩티드의 바람직한 구조를 나타내었다. 기호 "Λ" 는 본 명세서에서 기재하고 있는 링커 중 어떤 것이거나 또는 간단히 보통의 펩티드 결합을 나타낸다(즉, 링커는 존재하지 않음). 종열 반복 및 링커를 명확하게 하기 위해 "-" 로 분리하여 나타내었다.

"V ¹ " 은 상기에서 정의된 것처럼 Fc 도메인이다. 표 4 에 나타낸 것에 더하여, 본 발명자는 추가로 다른 펩티드 서열에 연결된 Fc 이량체의 각 가닥에서 이형이량체를 관찰했다 ; 예를 들어, 여기서 각 Fc 를 표 2 에서 선택한 다른 서열에 연결하였다.

본 발명의 화합물 모두를 PCT 출원번호 제 WO 99/25044 호에 기재된 방법에 의해 제조할 수 있다.

지금부터 본 발명은 다음 실시예를 통해 수행한 것을 설명할 것이나 이에 국한되지는 않는다.

실시예 1

펩티드

펩티드 파지 디스플레이

1. 마그네틱 비드 제조

A. 마그네틱 비드 상의 Fc - TALL - 1 고정화

재조합 Fc - TALL -1 단백질을 제조업자로부터 수득한 비드 원액 100 ㎕ 당 Fc - TALL - 1 8 ㎍ 의 농도로 단백질 A 다이나비드(다이날에서 입수)상에 고정화시켰다. 자석을 이용하여 비드를 튜브의 한쪽 면으로 끌어내고 액체로부터 파이펫팅하여 비드를 인산완충식염수(PBS)로 2 회 세척한 후 PBS 에 재현탁하였다. Fc - TALL - 1 단백질을 세척된 비드에 상기 농도로 첨가하고 실온에서 1 시간 동안 회전시키며 항온하였다. 그런 다음 1 % 의 최종 농도가 될 때까지 우혈청 알부민(BSA)을 첨가하고 4 ℃ 에서 밤새도록 회전시키면서 항온하여 Fc - TALL - 1 코팅 비드를 차단하였다. 그런 다음 결과적으로 생성된 Fc - TALL - 1 코팅 비드를 선별 과정을 거치기 전에 PBS(0.05 % 트윈 - 20 을 함유하는 PBS)로 2 회 세척하였다.

B. 음성 선별 비드 제조

음성 선별을 위해 추가적인 비드를 또한 제조하였다. 각각의 작동 조건에서, 제조업자로부터 수득한 비드 원액 250 ㎕ 를 Fc - TALL - 1 의 항온 단계를 생략하는 것을 제외하고는 상기 과정(1A 부분)에 따라 처리하였다. 마지막 세척 단계에서, 비드를 5 개의 50 ㎕ 분활량으로 나누었다.

2. TALL - 1 결합 파지의 선별

A. 총괄적 방법

2 개의 섬유상 파지 라이브러리 TN8 - IX(5 × 10 ⁹ 독립 형질전환체) 및 TN12 - I(1.4 × 10 ⁹ 독립 형질전환체)(다이악스 코포레이션에서 입수)을 TALL - 1 결합 파지의 선별에 사용하였다. 각 라이브러리를 pH 2 용출 또는 '비드 용출'(2E 부분)하였다. 그러므로, 4 개의 상이한 작동 조건에서 TALL - 1 프로젝트(pH 2 용출 방법을 사용한 TN8 - IX, 비드 용출 방법을 사용한 TN8 - IX, pH 2 용출 방법을 사용한 TN12 - I 및 비드 용출 방법을 사용한 TN12 - I)를 수행하였다. 각 조건에서 선별을 3 회 실시하였다.

B. 음성 선별

각 작동 조건에서, 약 100 개의 무작위 라이브러리 등가물(TN8 - IX 에서 5 × 10 ¹¹ pfu 및 TN12 - Ⅰ 에서 1.4 × 10 ¹¹ pfu)을 라이브러리 원액으로부터 나누어 300 ㎕ 의 PBST 에 희석시켰다. 마지막 세척 후에 음성 선별(1B 부분)에서 생성된 비드의 50 ㎕ 의 첫 번째 분할량에서 액체를 따라내었으며 300 ㎕ 로 희석된 라이브러리 원액을 비드에 첨가하였다. 결과적으로 생성된 혼합물을 실온에서 10 분간 회전시키면서 항온하였다. 파지 상층액을 자석을 사용하여 따라낸 후 다른 음성 선별 단계에서 50 ㎕ 의 두 번째 분할량에 첨가하였다. 이러한 방법으로 5 회의 음성 선별 단계를 수행하였다.

C. Fc - TALL - 1 단백질 코팅 비드를 이용한 선별

마지막 음성 선별 단계(1B 부분) 후의 파지 상층액을 마지막 세척 단계(1A 부분) 후에 Fc - TALL - 1 코팅 비드에 첨가하였다. 표적 단백질에 특정 파지가 결합하도록 이 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 회전시키면서 항온하였다. 상층액을 버린 후에, 비드를 PBST 로 7 회 세척하였다.

D. 결합된 파지의 pH 2 용출

마지막 세척 단계(2C 부분) 후에, 결합된 파지를 200 ㎕ 의 CBST(50 mM 시트르산나트륨, 150 mM 염화나트륨, 0.05 % 트윈 - 20, pH 2)를 첨가하여 마그네틱 비드로부터 용출하였다. 실온에서 5 분간 항온한 후, 용출된 파지를 함유한 액체를 따라내어 다른 튜브로 옮겼다. 200 ㎕ 의 CBST 를 첨가하고 5 분간 항온하는 용출 단계를 다시 반복하였다. 2 번의 용출 단계로부터 수득한 액체들을 함께 첨가하였으며 100 ㎕ 의 2 M 트리스 용액(pH 8)을 첨가하여 pH 가 중성이 되게 하였다. 500 ㎕ 의 Min A 염 용액[60 mM K ₂ HPO ₄ , 33 mM KH ₂ PO ₄ , 7.6 mM(NH ₄ )SO ₄ 및 1.7 mM 시트르산나트륨]을 가하여 최종 부피가 1 ㎖ 가 되도록 하였다.

E. '비드 용출'

최종 세척액을 따라낸 후(2C 부분), 1 ㎖ 의 Min A 염 용액을 비드에 첨가하였다. 비드 혼합물을 감염을 위한 농축된 박테리아 시료에 직접 첨가하였다(3A 및 3B 부분).

3. 증폭

A. 평판 세포의 제조

신선한 E. Coli.(XL - 1 블루 MRF') 배양균을 12.5 ㎍/㎖ 의 테트라사 이클린을 함유하는 LB 배지에 OD ₆₀₀ = 0.5 가 될 때까지 배양하였다. 각 작동 조건에서, 20 ㎖ 의 상기 배양액을 얼음으로 식힌 후 원심분리하였다. 박테리아 펠렛을 1 ㎖ 의 Min A 염 용액에 재현탁하였다.

B. 형질도입

상이한 용출 방법(2D 및 2E 부분)으로 수득한 각 혼합물을 농축된 박테리아 시료(3A 부분)에 첨가하고 37 ℃ 에서 15 분간 항온하였다. 2 ㎖ 의 NZCYM 배지(2 X NZCYM, 50 ㎍/㎖ 암피실린)을 각 혼합물에 가하고 실온에서 15 분간 항온하였다. 결과적으로 생성된 4 ㎖ 용액을 50 ㎍/㎖ 의 암피실린을 함유하는 대형 NZCYM 아가 플레이트에 평판하고 37 ℃ 에서 밤새 항온하였다.

C. 파지 회수

대형 NZCYM 아가 플레이트에서 밤새 배양한(3B 부분) 각 박테리아/파지 혼합물을 35 ㎖ 의 LB 배지에서 긁어낸 후 새로운 35 ㎖ 의 LB 배지에 이 아가 플레이트를 추가로 흘려넣었다. 결과적으로 생성된 LB 배지내 박테리아/파지 혼합물을 박테리아가 펠렛을 이루도록 원심분리하였다. 50 ㎖ 의 파지 상층액을 새로운 튜브로 옮긴 후 12.5 ㎖ 의 PEG 용액(20 % PEG 8000, 3.5 M 아세트산암모늄)을 가하고 파지가 침전되도록 2 시간 동안 얼음에서 항온하였다. 침전된 파지를 원심분리하여 가라앉히고 6 ㎖ 의 파지 재현탁 완충용액(250 mM Nacl, 100 mM 트리스 pH 8, 1 mM EDTA)에 재현탁하였다. 원심분리하여 남아있는 박테리아를 제거하고 1.5 ㎖ 의 PEG 용액을 가하여 파지를 2 번 침전시켜 상기 파지 용액을 추가로 정제하였다. 원심분리 단계 후, 파지 펠렛을 400 ㎕ 의 PBS 에 재현탁하였다. 이 용액을 최종적으로 원심분리하여 남아있는 박테리아의 잔해를 제거하였다. 결과적으로 생성된 파지 표본을 표준 플라크 형성 검정(분자 클로닝, Maniatis 등의 3 ^rd Edition)을 통해 역가를 측정하였다.

4. 2 회 이상의 선별 및 증식

두 번째 선별 및 증식 단계에서, 첫 번째 단계(3C 부분)로부터 수득한 증식 파지(10 ¹⁰ pfu)를 선별 및 증식 단계(2 및 3 부분)를 수행하기 위한 투입 파지(input phage)로서 사용하였다. 두 번째 단계로부터 수득한 증식 파지(10 ¹⁰ pfu)를 세 번째 선별 및 증식(2 및 3 부분)을 수행하기 위한 투입 파지로서 사용하였다. 세 번째 단계의 용출 단계(2D 및 2E 부분) 후에, 용출된 파지의 작은 분획을 플라크 형성 검정(3C 부분)을 위해 평판하였다. 개별적인 플라크를 수집하여 각 웰에 100 ㎕ 의 TE 완충용액을 포함하는 96 웰 마이크로타이터 플레이트(96 well microtiter plate)에 평판하였다. TE 완충용액으로 파지가 용출되도록 이 마스터 플레이트를 1 시간 동안 37 ℃ 의 항온기에서 항온하였다.

5. 클론 분석(파지 ELISA 및 서열결정)

파지 클론을 파지 ELISA 및 서열결정 방법에 의해 분석하였다. 이러한 2 가지 검정으로부터의 결과에 기초하여 서열을 정렬하였다.

A. 파지 ELISA

XL - 1 블루 MRF' 배양균을 OD ₆₀₀ 이 0.5 가 될 때까지 배양하였다. 30 ㎕ 의 배양액을 96 웰 마이크로타이터 플레이트의 각 웰에 나누어 넣었다. 10 ㎕ 의 용출된 파지(4 부분)를 각 웰에 첨가하고 실온에서 15 분간 박테리아를 감염시키도록 두었다. 12.5 ㎍/㎖ 의 테트라사이클린 및 50 ㎍/㎖ 의 암피실린을 함유하는 LB 배지 130 ㎕ 를 각 웰에 첨가하였다. 그런 다음 마이크로타이터 플레이트를 37 ℃ 에서 밤새 항온하였다. 재조합 TALL - 1 단백질(PBS 에 용해된 1 ㎍/㎖)을 4 ℃ 에서 밤새 96 - 웰 맥시소프 플레이트(96 - well Maxisorp plate, 눈크에서 입수)위에 코팅되도록 두었다. 대조군으로 재조합 Fc-Trail 단백질을 TALL - 1 단백질과 같은 분자 농도로 다른 맥시소프 플레이트 위 에 코팅하였다.

다음날, 단백질로 코팅된 맥시소프 플레이트에 생긴 액체를 버리고 37 ℃ 에서 1 시간 동안 300 ㎕ 의 2 % BSA 용액으로 각 웰을 차단하였다. BSA 용액을 버리고 각 웰을 PBST 용액으로 3 회 세척하였다. 마지막 세척 단계 후, 50 ㎕ 의 PBST 를 단백질로 코팅된 맥시소프 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 96 웰 마이크로타이터에서 밤새 배양한 50 ㎕ 의 배양액 각각을 대조 Fc - Trail 로 코팅된 플레이트 뿐만 아니라 TALL - 1 로 코팅된 플레이트의 상응하는 웰로 옮겼다. 2 종류의 플레이트 내의 혼합물 100 ㎕ 를 실온에서 1 시간 동안 항온하였다. 맥시소프 플레이트로부터 액체를 제거하고 웰을 PBST 로 5 회 세척하였다. HRP - 결합 항 - M13 항체(파마시아에서 입수)를 1:7,500 으로 희석시킨 후 100 ㎕ 의 희석된 용액을 맥시소프 플레이트의 각 웰에 첨가하고 실온에서 1 시간 동안 항온하였다. 액체를 다시 제거하고 웰을 PBST 로 7 회 세척하였다. 테트라메틸벤지딘(TMB) 기질(시그마에서 입수) 100 ㎕ 를 각 웰에 첨가하여 발색 반응이 일어나게 하였으며 50 ㎕ 의 5 NH ₂ SO ₄ 용액을 가하여 반응을 멈추게 했다. OD ₄₅₀ 은 플레이트 판독기(모리큘라 디바이스에서 입수)로 판독했다.

B. 파지 클론의 서열결정

각 파지 클론에서, 서열결정 주형을 PCR 방법으로 제조하였다. 다음의 올리고누클레오티드 쌍을 약 500 누클레오티드 단편을 증폭시키는데 사용하였다 :

각 클론에 대하여 다음의 혼합물이 제조되었다.

열순환기(thermocycler : GeneAmp PCR 시스템 9700, 어플라이드 바이오시스템즈에서 입수)를 다음의 프로그램을 작동하는데 사용하였다 : 5 분 동안 94 ℃ ; [30 초 동안 94 ℃, 30 초 동안 55 ℃, 45 초 동안 72 ℃] × 30 회 ; 7 분 동안 72 ℃ ; 4 ℃ 까지 냉각. 1 % 아가로스 겔 상에 각 PCR 반응물 5 ㎕ 를 로딩하여 PCR 산물을 확인하였다. 각 PCR 반응으로부터 나머지 45 ㎕ 내의 PCR 산물을 제조업자의 프로토콜 에 따라 QIAquick 멀티웰 PCR 정제 키트(퀴아젠에서 입수)를 사용하여 정제하였다. 그런 다음 결과적으로 생성된 산물을 제조업자의 추천 프로토콜에 따라 ABI 377 서열분석기(퍼킨 - 엘머에서 입수)를 사용하여 서열결정하였다.

6. 서열 배열 및 칸센서스 서열 결정

A. 서열 배열

다양한 누클레오티드 서열(5B 부분)로부터 번역된 펩티드 서열은 ELISA 데이터와 관련이 있다. TALL - 1 로 코팅된 웰에서 높은 OD ₄₅₀ 및 Fc - Trail 로 코팅된 웰에서 낮은 OD ₄₅₀ 을 보이는 클론은 좀 더 중요하게 간주되었다. 여러번 나타난 서열도 좀 더 중요하게 간주되었다. 펩티드 또는 펩티바디로서 추가적인 분석을 위해 이러한 기준에 근거하여 후보 서열을 선택하였다. 5 개 및 9 개의 후보 서열이 TN8 - IX 및 TN12 - I 라이브러리로부터 각각 선택되었다.

B. 칸센서스 서열 결정

TN12 - I 라이브러리로부터 선택된 서열의 대부분은 매우 보존적인 DBL 모티프를 포함하고 있다. 이 모티프는 또한 TN8 - IB 라이브러리로부터 선택된 서열에서도 발견된다. 다른 모티프인 PFPWE(SEQ ID NO : 110) 또한 TN8 - IB 라이브러리로부터 수득한 서열에서 발견된다.

칸센서스 펩티드인 FHDC KWDLLTKQWV CHGL(SEQ ID NO : 58)을 DBL 모티프를 기초로 하여 제조하였다. TN12 - I 라이브러리로부터 유도된 펩티드가 가장 활성인 것이므로, 상기 배열 기준(5A 부분)에 기초한 상위 26 개의 펩티드 서열은 DBL 모티프에 의해 정렬되었다. 밑줄이 쳐진 "코어 아미노산 서열"은 각 위치에서 가장 잘 발생하는 아미노산을 결정함에 의해 수득된다. 코어 서열에 인접한 두 시스테인은 TN12 - I 라이브러리에서 고정된 아미노산이다. 칸센서스 펩티드의 나머지 아미노산 서열은 후보 펩티드 중 하나인 TALL - 1 - 12 - 10(표 2, SEQ ID NO : 37)로부터 얻어진 것이다. 이러한 칸센서스 서열로부터 유도된 펩티드 및 펩티바디는 B 세포 증식반응 측정법에서 가장 활성적이다.

실시예 2

펩티바디

12 개의 TALL - 1 저해 펩티바디 세트(표 5)는 인체 IgG1 의 Fc 영역으로 프레임 내에서 융합된 각 펩티드의 단량체로 구성되어 있다. 각 TALL - 1 저해 펩티바디는 펩티드를 코드하는 이중 분자 및 Nde I 로부터 Sal I 까지의 단편으로서 5 개의 글리신 잔기 및 1 개의 발린 잔기를 포함하는 링커를 생성하기 위해 표 6 에 보여지는 올리고누클레오티드의 쌍을 어닐링하여 구성하였다. 이러한 이중 분자를 인체 Fc 유전자를 포함하는 벡터(pAMG21 - RANK - Fc, 본원에 기재됨)에 결합시켰으며 또한 Nde I 및 Sal I 로 절단하였다. 결과적으로 생성된 결합 혼합물을 E. coli 균주 2596 세포(본원에서는 GM221 로도 기재되어 있음, ATCC 기탁 번호 제 98957 호)로 전기천공법에 의해 형질전환시켰다. 재조합 단백질 산물을 생성하고 올바른 누클레오티드 서열을 갖는 유전자 융합을 지니는 능력에 대하여 클론을 스크리닝하였다. 이러한 단일 클론은 각각의 펩티바디에 대해 선택되었다. 융합 단백질의 누클레오티드 및 아미노산 서열은 도 4A 내지 4F 에 나타나있다.

pAMG21 - RANK - Fc 벡터

pAMG21. 발현 플라스미드 pAMG21(ATCC 기탁 번호 제 98113 호)은 미국 특허 번호 제 4,710,473 호에 기재된 암젠 발현 벡터 시스템으로부터 유도된 암젠 발현 벡터 pCFM1656(ATCC 기탁 번호 제 69576 호)로부터 유도할 수 있다. pCFM1656 플라스미드는 기재된 pCFM836 플라스미드(미국 특허 번호 제 4,710,473 호)로부터 다음과 같은 단계를 통해 유도할 수 있다 :

·T4 폴리머라제 효소로 말단을 채운 후 평활 말단 결합에 의해 2 군데의 내재성 Nde I 제한 부위를 없애는 단계 ;

·합성 P _L 프로모터를 포함하는 유일한 Aat Ⅱ 및 Cla I 제한 부위 사이의 DNA 서열을 P _L 프로모터(하기의 SEQ ID NO : 95 참조)를 포함하는 pCFM636(미국 특허 번호 제 4,710,473 호)로부터 수득한 유사 단편으로 치 환하는 단계 ; 및

·유일한 Cla I 및 Kpn I 제한 부위 사이의 작은 DNA 서열을 SEQ ID NO : 96 의 서열을 갖는 올리고누클레오티드로 치환하는 단계.

발현 플라스미드 pAMG21 은 PCR 중복 올리고누클레오티드 돌연변이 유발 및 DNA 서열 치환에 의한 부위 - 특이 염기 변화를 연속으로 일으켜서 pCFM1656 으로부터 유도될 수 있다. 플라스미드 복제 프로모터 P copB 에 대한 5' 인접 Bgl Ⅱ 부위에서 시작하여 플라스미드 복제 유전자를 향해 진행되는 염기쌍 변화를 하기 표 7 에 나타냈다.

유일한 Aat Ⅱ(pCFM1656 에서 위치 # 4364) 및 Sac Ⅱ(pCFM1656 에서 위치 # 4585) 제한 부위 사이의 DNA 서열을 다음의 DNA 서열(SEQ ID NO : 97)로 치환하였다 :

이러한 치환 DNA 서열의 점착 말단이 결합하는 동안, 외부 Aat Ⅱ 및 Sac Ⅱ 부위가 파괴되었다. 치환된 DNA 내에 유일하게 Aat Ⅱ 및 Sac Ⅱ 부위가 존재하였다.

암젠 균주 # 4125(암젠에서 입수)를 생성하기 위해 Fc 의 N - 말단에 융합된 인체 RANK 를 코드하는 유전자를 Nde I 로부터 BamH I 까지의 단편으로서 pAMG21에 결합시켰다. 이 구성물을 RANK 및 Fc 의 접합에 발린 코돈을 삽입하여 변형시켰다. 인접한 발린 및 아스파라긴산 코돈은 유일한 Sal Ⅰ 부위를 생성한다. 이는 유일한 Nde Ⅰ 및 Sal Ⅰ 부위 사이의 Fc3 의 N - 말단에서 펩티드의 융합을 허용한다. RANK 서열은 새로운 Nde Ⅰ - Sal Ⅰ 단편의 삽입에 의해 삭제된다. 벡터의 서열은 도 5A 내지 도 5M 에 나타나 있다.

GM221 (암젠 # 2596). 암젠 숙주 균주 # 2596 (GM221, ATCC 기탁 번호 제 98957 호)은 E.coli W1485 의 유도체이며 코네티컷 뉴 헤븐에 소재하는 예일 유니버시티의 E.coli 지네틱 스톡 센터(CGSC 균주 6159)로부터 입수한 암젠 균주 # 393 에서 유도된 E.coil K - 12 균주이다. 전기 ebg 영역의 온도민감성 람다 리프레서 cI857s7 및 후기 ebg 영역(68 분)의 lacI ^Q 리프레서 둘 다를 포함하도록 변이시켰다. 이들 두 리프레서 유전자가 존재함으로써 이 숙주를 다양한 발현계로 이용할 수 있으나 이들 리프레서는 luxP _R 의 발현과는 무관하다. 형질전환되지 않은 숙주는 항생제 내성을 갖지 않는다.

cI857s7 유전자의 리보솜 결합 부위는 증진된 RBS 를 포함하도록 변형시켰다. 이 결합 부위를 ebg 개재 서열을 결실시킨 채로 진뱅크 기탁 번호 M64441Gb _ Ba 에서 번호매긴 바에 따른 누클레오티드 위치 1170 내지 1411 사이의 ebg 오페론 내로 삽입하였다. 삽입물의 서열은 하기에 나타나 있는 ebg 측면 서열(SEQ ID NO : 98)을 나타내는 소문자로 나타나 있다 :

구성물은 MMebg-cI857s7 증진 RBS #4 로 명명된 재조합 파지를 이용하여 F'tet/393 내 염색체로 운반되었다. 재조합 및 분해 후에, 상기 염색체 삽입물만이 세포에 남아 있었다. 이것을 다시 F'tet/GM101 이라 명명하였다. 진뱅크 기탁 번호 M64441Gb _ Ba 에서 번호매긴 바에 따른 누클레오티드 위치 2493 및 2937 사이의 ebg 오페론 내로 ebg 개재 서열을 결실시킨 채로 lacI ^Q 구성물을 운반함으로써 F'tet/GM101 을 변형시켰다. 삽입물의 서열은 하기에 나타나 있는 ebg 측면 서열(SEQ ID NO : 99)을 나타내는 소문자로 나타나 있다 :

구성물은 AGebg - LacIQ#5 로 명명된 재조합 파지를 이용하여 F'tet/GM101 내 염색체로 운반되었다. 재조합 및 분해 후에, 상기 염색체 삽입물만이 세포에 남아 있었다. 이것을 다시 F'tet/GM221 이라 명명하였다. 25 ㎍/㎖ 농도의 LB 에서 아크리딘 오렌지를 이용하여 균주로부터 F'tet 에피좀을 처리하였다. 처리된 균주를 테트라사이클린 민감성으로 확인한 다음 GM221 로서 보관하였다.

E.coli 에서의 발현. E. coli GM221 내 pAMG21 - Fc - 융합 구성물의 각 배양균을 37 ℃ 에서 루리아 육즙 배지에 배양하였다. 배양 배지에 최종 농도가 20 ng/㎖ 가 되도록 합성 자가유도제 N -(3 - 옥소헥사노일)- DL - 호모세린 락톤을 첨가한 후 luxPR 프로모터로부터 발현되는 유전자 산물을 유도하였다. 이 배양액을 37 ℃ 에서 3 시간 더 항온하였다. 3 시간 후, 현미경으로 박테리아 배양액 내에 봉입체가 존재하는지를 검사한 다음 원심분리를 통해 수확하였다. 유도 배양액에서 광굴절 봉입체가 관찰되었으며, 이는 Fc - Fc - 융합체 가 E.coli 의 불용성 분획에서 생산되는 것이 가장 적당함을 나타내는 것이다. 세포 펠렛을 10 % β - 머캅토에탄올을 함유하는 라엠리 시료 완충용액에 재현탁시켜 직접 용균시키고 SDS - PAGE 에 의해 분석하였다. 각각의 경우에, 적절한 분자량의 진한 쿠마지 - 염색 밴드가 SDS - PAGE 겔에서 관찰되었다.

실시예 3

TALL - 1 펩티바디는 TALL - 1 매개 B 세포 증식을 저해한다

마우스 B 림프구를 음성 선별에 의해 C57BL/6 비장에서 분리하였다. [캘리포니아 어번 소재의 밀텐니 바이오테크에서 입수한 MACS CD43(Ly - 48) 마이크로비드]. 정제된 (10 ⁵ ) B 세포를 10 ng/㎖ 의 TALL - 1 단백질 및 2 ㎍/㎖ 의 염소 F(ab') ₂ 항 - 마우스 IgM(펜실베니아 웨스트 그로브 소재의 잭슨 이뮤노리서치 라보라토리에서 입수)과 지시량의 재조합 TALL - 1 펩티바디와 함께 96 - 웰 평평한 바닥(flat bottom)의 조직 배양 플레이트 상에서 MEM(10 % 열 불활성 FCS, 5 × 10 ^-5 M 2 - 머캅토에탄올, 100 U/㎖ 페니실린, 100 ㎕/㎖ 스트렙토마이신)에 5 % CO ₂ , 37 ℃ 의 조건에서 4 일간 3 배로 배양하였다. 18 시간 항온 기간 후에 방사성 ³ [H] 티미딘을 이용하여 증식 정도를 측정하였다.

실시예 4

TALL - 1 펩티바디는 TALL - 1 이 그것의 수용체에 결합하는 것을

차단한다

리액티 - 겔 6x(피어스에서 입수)을 인체 AGP3(또한 TALL - 1 로 공지됨, Khare 등의 Proc. Natl. Acad. Sci. 97 : 3370 - 3375, 2000 참조)로 예비 - 코팅하였으며 BSA 로 고정시켰다. 100 pM 및 40 pM 의 AGP3 펩티바디 시료를 인체 AGP3 - 코팅 비드를 통해 전개시키기 전에 실온에서 8 시간 동안 지시되는 다양한 농도의 인체 AGP3 와 함께 항온하였다. 비드 - 결합 펩티바디의 양을 형광(Cy5) 표지된 염소 항 - 인체 - Fc 항체(잭슨 이뮤노 리서치에서 입수)로 정량하였다. 결합 신호는 결합 평형에서의 유리 펩티바디 농도에 비례한다. 이중 - 커브 단 - 부위 동종 결합 모델(KinEx™ 소프트웨어)을 사용하여 비선형의 경쟁적 회귀곡선에서 해리 평형 상수(K _D )를 수득하였다. 인체 AGP3 와 결합한 AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123)에 대한 K _D 는 약 4 pM 이다(도 9 참조).

이 AGP3 펩티바디가 인체 AGP3 뿐만 아니라 마우스 AGP3 결합을 중화시킬 수 있는지를 측정하기 위해, BIAcore 중화 검정을 사용하였다. 모든 실험은 실온에서 BIAcore 3000 상에서 실행하였다. 인체 TACI - Fc 단백질(Xia 등의 J.Exp.Med.192,137-144,2000)을 10 mM 아세트산염(pH 4.0)을 사용하여 2900 RU 수준으로 B1 칩에 고정시켰다. 블랭크 유동 세포(blank flow cell)를 배경 대조군으로 사용하였다. 0.005 % P20 을 함유하는 PBS(칼슘이나 마그네슘은 없음)의 전개 완충용액(running buffer)을 사용하여 1 nM 재조합 인체 AGP3(0.1 ㎎/㎖ BSA 와 전개 완충용액에 용해된)를 수용체의 표면에 대해 주사하기 전에 지시된 다양한 양의 AGP3 펩티바디(x 축) 없이 및 함께 항온하였다. 1 분간 pH 1.5 의 8 mM 글리신을 사용하고 1 분간 pH 10.5 의 25 mM 3-[시클로헥실아미노]-1-프로판술폰산(CAPS), 1 M NaCl 을 사용하여 재생하였다. 마우스 AGP3 결합을 측정하기 위해, 인체 his - 표식 TACI 를 상기 완충용액에 1000 RU 로 고정하였다. 5 nM 재조합 마우스 AGP3(0.1 ㎎/㎖ BSA 와 전개 완충용액에 용해된)를 수용체의 표면에 주사하기 전에 도 11 에 나타낸 다양한 양의 AGP3 펩티바디(x 축) 없이 및 함께 항온하였다. pH 2 의 10 mM HCl 을 30 초간 2 번 사용하여 재생하였다. AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123)의 존재 대 결여시의 인체 및 마우스 AGP3 둘 다의 상대적인 결합을 측정하였다(y 축). 상대적인 결합 반응을 (RU - RU 블랭크/RU _O - RU 블랭크)로서 결정하였다. AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123)은 인체 및 마우스 AGP3 가 그것의 수용체 TACI 에 결합하는 것을 저해한다(도 10A 및 도 10B 참조).

AGP3 가 3 개의 모든 수용체(TACI, BCMA 및 BAFFR)에 결합하는 것을 AGP3 펩티바디가 차단하는지를 조사하기 위해, 수용성 재조합 수용체 TACI, BCMA 및 BAFFR 단백질을 CM5 칩에 고정하였다. pH 4 의 10 mM 아세트산염을 사용하여 인체 TACI - Fc 를 6300 RU 로, BCMA - Fc 를 5000 RU 로 및 FAFFR - Fc 를 6000 RU 로 고정시켰다. 1 nM 의 재조합 인체 AGP3(0.1 ㎎/㎖ BSA 및 0.1 ㎎/㎖ 헤파린을 함유하는 전개 완충용액에 용해된) 또는 1 nM 의 재조합 APRIL 단백질(Yu 등의 Nat.Immunol., 1:252-256, 2000)을 각 수용체 표면에 주사하기 전에 지시량의 AGP3 펩티바디와 함께 항온하였다. AGP3 실험에서의 재생은 1 분간 pH 1.5 인 8 mM 글리신을 사용한 후 1 분간 pH 10.5 인 25 mM CAPS, 1 M NaCl 을 사용하여 실시하였다. APRIL 실험에서의 재생은 1 분간 pH 2 인 8 mM 글리신을 사용한 후 1 분간 pH 10.5 인 25 mM CAPS, 1 M NaCl 을 사용하여 실시하였다. AGP3 또는 APRIL 의 상대적인 결합을 측정하였다. AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123)는 AGP3 가 3 개의 모든 수용체에 결합하는 것을 방해한다(도 11A 참조). AGP3 펩티바디는 APRIL 이 수용체에 결합하는 것에 영향을 미치지 못한다(도 11B 참조).

실시예 5

AGP3 펩티바디는 AGP3 매개 B 세포 증식을 차단한다

마우스 B 림프구를 음성 선별을 통해 C57BL/6 비장으로부터 분리하였다. [MACS CD43 (Ly - 48) 마이크로비드, 캘리포니아 아우번 소재의 밀텐니 바이오테크에서 입수]. 정제된 (10 ⁵ ) B 세포를 10 ng/㎖ AGP3(TALL - 1) 단백질과 2 ㎍/㎖ 염소 F(ab') ₂ 항 - 마우스 IgM(펜실베니아 웨스트 그로브 소재의 잭슨 이뮤노리서치 라보라토리에서 입수) 및 지시량의 재조합 AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123)와 함께 96 - 웰 평평한 바닥의 조직 배양 플레이트 상의 최소 필수 배지[MEM : 10 % 열 불활성 우태아 혈청(FCS), 5 × 10 ^-5 M 2-머캅토에탄올, 100 U/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신]에서 5 % CO ₂ , 37 ℃ 의 조건으로 4 일 동안 배양하였다. 18 시간 동안 항온한 후에 방사성 ³ [H] 티미딘을 이용하여 증식 정도를 측정하였다.

실시예 6

마우스의 AGP3 - 자극 Ig 생성에서의 AGP3 펩티바디

마우스(9 - 14 주된 19 - 21 g 의 Balb/c 암컷)를 메사츄세츠 월밍턴 소재의 찰스 리버 라보라토리스에서 구입하였다. 5 일 연속으로 하루에 1 번 마우스(n=10)에게 1 ㎎/㎏ 의 인체 AGP3 를 복강내 투여한 후 5 ㎎/㎏ 또는 0.5 ㎎/㎏ 의 AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123) 또는 식염수 또는 5 ㎎/㎏ 의 인체 Fc 를 투여하였다. 다른 마우스는 투여하지 않은 채로 두었다. ELISA 로 혈청 IgM 및 IgA 를 측정하기 위해 마우스를 6 일째 되는 날에 희생시켰다. 간단히, 플레이트를 IgM 또는 IgA 에 특이적인 포획 항체(앨라배마 버밍엄 소재의 사우턴 바이오테크놀로지 어소시에이츠에서 입수)로 코팅하였고 차단하였으며 표준 시료(캘리포니아 샌디에고 소재의 칼바이오켐에서 입수한 IgM 및 사우턴 바이오테크놀로지 어소시에이트에서 입수한 IgA) 또는 시험 시료의 희석에 첨가하였다. 포획된 Ig 를 IgM 또는 IgA 에 특이적인 비오틴화 항체(사우턴 바이오테크놀로지 어소시에이트에서 입수), 뉴트라비딘(neut ravidin) - 결합 퍼옥시다제(앨라배마 록포드 소재의 피어스에서 입수) 및 테트라메틸벤지딘(TMB) 미량웰 퍼옥시다제 기질(매릴랜드 게이터스버그 소재의 KPL 에서 입수)를 사용하여 확인하였다. 이상적인 밀도를 터모맥스 ELISA 판독기(Thermomax ELISA reader, 캘리포니아 멘로 파크 소재의 모리큘라 디바이스에서 입수)로 정량하였다.

IgM 및 IgA 의 혈청 농도상의 인체 AGP3 - 자극 증가는 5 ㎎/㎏ 의 항 - AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123)에 의해 차단되나 0.5 ㎎/㎏ 에 의해서는 차단되지 않았다(도 12A 및 12B 참조).

실시예 7

AGP3 펩티바디는 쥐의 비장 B 세포수를 감소시킨다

7 일 연속으로 5 ㎎/㎏, 1.5 ㎎/㎏ 또는 0.5 ㎎/㎏ 의 AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123) 또는 식염수 또는 5 ㎎/㎏ 의 인체 Fc 를 마우스에게 복강내 투여하였다. 비장 B 세포수를 계산하기 위해 8 일째 되는 날 마우스를 희생시켰다. 비장을 식염수내로 수집하고 수동 균질화를 통해 서서히 분쇄하여 세포 현택액을 만들었다. H1E 카운터(뉴욕 테리타운 소재의 테크니콘에서 입수)로 총 세포수를 알 수 있다. CD3 및 B220 각각에 대한 플루오레세인 이소치오사이아네이트(FITC) - 결합 및 피코에이트린(PE) -결합 Ab(캘리포니아 샌디에고 소재의 파민젠에서 입수)를 사용하는 면역형광 이중 염색과 유동 세포계수법 및 FACScan 분석기(캘리포니아 마운틴 뷰 소재의 벡톤 앤드 딕킨슨에서 입수)로부터 B 세포의 백분율을 유도하였다. B 세포가 CD3 - B220+ 임을 확인하였다. 모든 투여량에서, AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123)는 투여 - 반응 양식에서 비장 B 세포수를 감소시킨다(도 12A 및 12B 참조)(SEQ ID NO : 123).

실시예 8

AGP3 펩티바디는 마우스 CIA 모델의 관절염 심각성을 감소시킨다

12 주된 8 마리의 DBA/1 마우스(메인 바 하버 소재의 잭슨 라보라토리스에서 구입함)에게 프로인트 완전 보조액(디프코에서 입수)으로 유화시킨 제 Ⅱ 형 소 콜라겐(bCⅡ, 유니버시티 오브 유타에서 구입)을 꼬리 끝부분에 피내로 주입하여 면역시켰다. 각 주입액은 100 ㎍ 의 bCⅡ 를 함유하였다. 초기 면역화한지 3 주 후에 프로인트 불완전 보조액으로 유화시킨 bCⅡ 로 마우스에게 추가항원자극하였다. 추가항원자극 면역화를 실시한 날로부터 4 주 동안 처리하였다. 마우스의 관절염 발병여부를 검사하였다. 이전에 기재된 바와 같이(Khare 등의 J.Immunol.155: 3653-9,1995), 모든 4 개의 발을 0 - 3 으로 각각 수치화하였다. 그러므로 관절염 심각성은 각 동물에서 0 내지 12 로 다양할 것이다. AGP3(SEQ ID NO : 123) 펩티바디 처리는 관절염 심각성의 수치를 상당히 감소시켰다(도 13 참조).

항 - 콜라겐 항체 수준의 분석을 위해 최종 처리일(35 일)로부터 일주일 후에 혈청 시료를 수득하였다. 고 결합 ELISA 플레이트(이뮤론, 눈크에서 입수)를 탄산염 완충용액에 용해된 4 ㎍/㎖ 의 소 CⅡ 용액 50 ㎕ 로 코팅하였으며 플레이트를 냉동기내에서 밤새 냉각시켰다. 플레이트를 찬물로 3 회 세척하였다. PBS/.05 % 트윈 20/1 % BSA 로 만들어진 차단 용액 75 ㎕ 를 1 시간 동안 비 - 특이 결합을 차단하는데 사용하였다. 시료를 1 : 25, 1 : 100, 1 : 400 및 1 : 1600 으로 희석 플레이트에서(차단 완충용액상에) 희석시키고 이 시료 25 ㎕ 를 최종 부피가 100 ㎕/웰이 되도록 100, 400, 1600 및 6400 으로 최종 희석하여 ELISA 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 실온에서 3 시간 동안 항온한 뒤 플레이트를 다시 3 회 세척하였다. 차단 완충용액으로 희석시킨 100 ㎕ 의 이차 항원(랫 항 - 마우스 IgM, IgG2a, IgG2b, IgG1, IgG3 - HRP)을 각 웰에 첨가하고 플레이트를 적어도 2 시간 동안 항온하였다. 플레이트를 4 회 세척하였다. TMB 용액(시그마에서 입수) 100 ㎕ 를 각 웰에 첨가하고 25 % 황산 50 ㎕ 를 사용하여 반응을 멈추게 했다. ELISA 플레이트 판독기를 사용하여 450 nm 에서 플레이트를 판독하였다. OD 를 표준 풀 대표 유닛/㎖ 와 비교하였다. AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123) 처리는 PBS 또는 Fc 대조 치료군에 비해 혈청 항 - 콜라겐 Ⅱ IgG1, IgG3, IgG2a 및 IgG2b 수준을 감소시켰다(도 14 참조).

실시예 9

NZB/NZW 루푸스 마우스의 AGP3 펩티바디 처리

5 달된 루푸스 경향이 있는 NZBx NZBWF1 마우스에게 PBS 또는 지시된 투여량의 AGP3 펩티바디나 인체 Fc 단백질을 8 주간 3×/주로 복강내 처리하였다. 처리 전에, 알부스틱스 시약 스트립(바이엘 악티엔게젤사프트에서 입수)으로 동물의 소변 내의 단백질을 예비 - 스크리닝하였다. 소변 내에 100 ㎎/dl 보다 많은 양의 단백질을 갖는 마우스는 연구에서 배제시켰다. AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123) 처리는 단백뇨의 발병을 지연시키고 생존률을 높아지게 하였다(도 15A 및 15B 참조).

AGP3 펩티바디 처리로 마우스의 B 세포수가 감소되었다. Balb/c 마우스에게 지시량의 AGP3 펩티바디(SEQ ID NO : 123) 또는 인체 Fc 단백질을 7 일간 복강내 주사하였다. 8 일째에, 비장을 수득하여 B220+ B 세포에 대해 FACS 분석을 실시하여 표 8 에 나타내었다.

삭제

본 발명은 충분히 설명되었으며 본 분야의 숙련자에 의해 본원에 나타난 본 발명의 정신 및 범주를 벗어남 없이 본 발명의 변형 및 변이가 일어날 수 있음이 자명할 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> AMGEN INC. <120> PEPTIDES AND RELATED MOLECULES THAT BIND TO TALL-1 <130> A-743 (PCT) <140> PCT/US 02/15273 <141> 2002-05-13 <150> US 60/290,196 <151> 2001-05-11 <160> 197 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 684 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(684) <400> 1 atg gac aaa act cac aca tgt cca cct tgt cca gct ccg gaa ctc ctg 48 Met Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 1 5 10 15 ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc 96 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 20 25 30 atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc 144 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 35 40 45 cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag 192 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 50 55 60 gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg 240 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 65 70 75 80 tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat 288 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 85 90 95 ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc 336 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 100 105 110 atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag 384 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 115 120 125 gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc 432 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 130 135 140 agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg 480 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 145 150 155 160 gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct 528 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 165 170 175 ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc 576 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 180 185 190 gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg 624 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 195 200 205 atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg 672 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 210 215 220 tct ccg ggt aaa 684 Ser Pro Gly Lys 225 <210> 2 <211> 228 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 1 5 10 15 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 20 25 30 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 35 40 45 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 50 55 60 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 65 70 75 80 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 85 90 95 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 100 105 110 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 115 120 125 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 130 135 140 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 145 150 155 160 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 165 170 175 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 180 185 190 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 195 200 205 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 210 215 220 Ser Pro Gly Lys 225 <210> 3 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> NdeI to SalI fragment <220> <221> CDS <222> (2)..(61) <400> 3 t atg ccg ggt act tgt ttc ccg ttc ccg tgg gaa tgc act cac gct ggt 49 Met Pro Gly Thr Cys Phe Pro Phe Pro Trp Glu Cys Thr His Ala Gly 1 5 10 15 gga ggc ggt ggg g 62 Gly Gly Gly Gly 20 <210> 4 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Met Pro Gly Thr Cys Phe Pro Phe Pro Trp Glu Cys Thr His Ala Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly 20 <210> 5 <211> 62 <212> 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aaa aac gtt tgt 49 Met Ala Asn Gln Cys Trp Trp Asp Ser Leu Leu Lys Lys Asn Val Cys 1 5 10 15 gaa ttc ttc ggt gga ggc ggt ggg g 74 Glu Phe Phe Gly Gly Gly Gly Gly 20 <210> 24 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 24 Met Ala Asn Gln Cys Trp Trp Asp Ser Leu Leu Lys Lys Asn Val Cys 1 5 10 15 Glu Phe Phe Gly Gly Gly Gly Gly 20 <210> 25 <211> 74 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> NdeI to SalI fragments <220> <221> CDS <222> (2)..(73) <400> 25 t atg ttc cac gac tgc aaa tgg gac ctg ctg acc aaa cag tgg gtt tgc 49 Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys 1 5 10 15 cac ggt ctg ggt gga ggc ggt ggg g 74 His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly 20 <210> 26 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 26 Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys 1 5 10 15 His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly 20 <210> 27 <211> 7285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pAMG21-RANK-Fc 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cgtattaccg ccaggtaaag aacccgaatc cggtgtttac accccgtgaa ggtgcaggaa 900 cgctgaagtt ctgcgaaaaa ctgatggaaa aggcggtggg cttcacttcc cgttttgatt 960 tcgccattca tgtggcgcac gcccgttcgc gtgatctgcg tcgccgtatg ccaccagtgc 1020 tgcgtcgtcg ggctattgat gcgctcttgc aggggctgtg tttccactat gacccgctgg 1080 ccaaccgcgt ccagtgctcc atcaccacgc tggccattga gtgcggactg gcgacggagt 1140 ctgctgccgg aaaactctcc atcacccgtg ccacccgtgc cctgacgttc ctgtcagagc 1200 tgggactgat tacctaccag acggaatatg acccgcttat cgggtgctac attccgaccg 1260 atatcacgtt cacatctgca ctgtttgctg ccctcgatgt atcagaggag gcagtggccg 1320 ccgcgcgccg cagccgtgtg gtatgggaaa acaaacaacg caaaaagcag gggctggata 1380 ccctgggcat ggatgaactg atagcgaaag cctggcgttt tgttcgtgag cgttttcgca 1440 gttatcagac agagcttaag tcccgtggaa taaagcgtgc ccgtgcgcgt cgtgatgcgg 1500 acagggaacg tcaggatatt gtcaccctgg tgaaacggca gctgacgcgc gaaatcgcgg 1560 aagggcgctt cactgccaat cgtgaggcgg taaaacgcga agttgagcgt cgtgtgaagg 1620 agcgcatgat tctgtcacgt aaccgtaatt acagccggct ggccacagct tccccctgaa 1680 agtgacctcc tctgaataat ccggcctgcg ccggaggctt ccgcacgtct gaagcccgac 1740 agcgcacaaa aaatcagcac cacatacaaa aaacaacctc atcatccagc ttctggtgca 1800 tccggccccc cctgttttcg atacaaaaca cgcctcacag acggggaatt ttgcttatcc 1860 acattaaact gcaagggact tccccataag gttacaaccg ttcatgtcat aaagcgccat 1920 ccgccagcgt tacagggtgc aatgtatctt ttaaacacct gtttatatct cctttaaact 1980 acttaattac attcatttaa aaagaaaacc tattcactgc ctgtccttgg acagacagat 2040 atgcacctcc caccgcaagc ggcgggcccc taccggagcc gctttagtta caacactcag 2100 acacaaccac cagaaaaacc ccggtccagc gcagaactga aaccacaaag cccctccctc 2160 ataactgaaa agcggccccg ccccggtccg aagggccgga acagagtcgc ttttaattat 2220 gaatgttgta actacttcat catcgctgtc agtcttctcg ctggaagttc tcagtacacg 2280 ctcgtaagcg gccctgacgg cccgctaacg cggagatacg ccccgacttc gggtaaaccc 2340 tcgtcgggac cactccgacc gcgcacagaa gctctctcat ggctgaaagc gggtatggtc 2400 tggcagggct ggggatgggt aaggtgaaat ctatcaatca gtaccggctt acgccgggct 2460 tcggcggttt tactcctgtt tcatatatga aacaacaggt caccgccttc catgccgctg 2520 atgcggcata tcctggtaac gatatctgaa ttgttataca tgtgtatata cgtggtaatg 2580 acaaaaatag gacaagttaa aaatttacag gcgatgcaat gattcaaaca cgtaatcaat 2640 atcgggggtg ggcgaagaac tccagcatga gatccccgcg ctggaggatc atccagccgg 2700 cgtcccggaa aacgattccg aagcccaacc tttcatagaa ggcggcggtg gaatcgaaat 2760 ctcgtgatgg caggttgggc gtcgcttggt cggtcatttc gaaccccaga gtcccgctca 2820 gaagaactcg tcaagaaggc gatagaaggc gatgcgctgc gaatcgggag cggcgatacc 2880 gtaaagcacg aggaagcggt cagcccattc gccgccaagc tcttcagcaa tatcacgggt 2940 agccaacgct atgtcctgat agcggtccgc cacacccagc cggccacagt cgatgaatcc 3000 agaaaagcgg ccattttcca ccatgatatt cggcaagcag gcatcgccat gagtcacgac 3060 gagatcctcg ccgtcgggca tgcgcgcctt gagcctggcg aacagttcgg ctggcgcgag 3120 cccctgatgc tcttcgtcca gatcatcctg atcgacaaga ccggcttcca tccgagtacg 3180 tgctcgctcg atgcgatgtt tcgcttggtg gtcgaatggg caggtagccg gatcaagcgt 3240 atgcagccgc cgcattgcat cagccatgat ggatactttc tcggcaggag caaggtgaga 3300 tgacaggaga tcctgccccg gcacttcgcc caatagcagc cagtcccttc ccgcttcagt 3360 gacaacgtcg agcacagctg cgcaaggaac gcccgtcgtg gccagccacg atagccgcgc 3420 tgcctcgtcc tgcaattcat tcaggacacc ggacaggtcg gtcttgacaa aaagaaccgg 3480 gcgcccctgc gctgacagcc ggaacacggc ggcatcagag cagccgattg tctgttgtgc 3540 ccagtcatag ccgaatagcc tctccaccca agcggccgga gaacctgcgt gcaatccatc 3600 ttgttcaatc atgcgaaacg atcctcatcc tgtctcttga tctgatcttg atcccctgcg 3660 ccatcagatc cttggcggca agaaagccat ccagtttact ttgcagggct tcccaacctt 3720 accagagggc gccccagctg gcaattccgg ttcgcttgct gtccataaaa ccgcccagtc 3780 tagctatcgc catgtaagcc cactgcaagc tacctgcttt ctctttgcgc ttgcgttttc 3840 ccttgtccag atagcccagt agctgacatt catccggggt cagcaccgtt tctgcggact 3900 ggctttctac gtgttccgct tcctttagca gcccttgcgc cctgagtgct tgcggcagcg 3960 tgaagctaca tatatgtgat ccgggcaaat cgctgaatat tccttttgtc tccgaccatc 4020 aggcacctga gtcgctgtct ttttcgtgac attcagttcg ctgcgctcac ggctctggca 4080 gtgaatgggg gtaaatggca ctacaggcgc cttttatgga ttcatgcaag gaaactaccc 4140 ataatacaag aaaagcccgt cacgggcttc tcagggcgtt ttatggcggg tctgctatgt 4200 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tagcagtatg aatagggaaa ctaaacccag tgataagacc tgatgatttc gcttctttaa 5100 ttacatttgg agatttttta tttacagcat tgttttcaaa tatattccaa ttaatcggtg 5160 aatgattgga gttagaataa tctactatag gatcatattt tattaaatta gcgtcatcat 5220 aatattgcct ccatttttta gggtaattat ccagaattga aatatcagat ttaaccatag 5280 aatgaggata aatgatcgcg agtaaataat attcacaatg taccatttta gtcatatcag 5340 ataagcattg attaatatca ttattgcttc tacaggcttt aattttatta attattctgt 5400 aagtgtcgtc ggcatttatg tctttcatac ccatctcttt atccttacct attgtttgtc 5460 gcaagttttg cgtgttatat atcattaaaa cggtaataga ttgacatttg attctaataa 5520 attggatttt tgtcacacta ttatatcgct tgaaatacaa ttgtttaaca taagtacctg 5580 taggatcgta caggtttacg caagaaaatg gtttgttata gtcgattaat cgatttgatt 5640 ctagatttgt tttaactaat taaaggagga ataacatatg atcgctccac catgcaccag 5700 tgagaagcat tatgagcatc tgggacggtg ctgtaacaaa tgtgaaccag gaaagtacat 5760 gtcttctaaa tgcactacta cctctgacag tgtatgtctg ccctgtggcc cggatgaata 5820 cttggatagc tggaatgaag aagataaatg cttgctgcat aaagtttgtg atacaggcaa 5880 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gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt 6780 cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg 6840 ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc 6900 gggtaaataa tggatccgcg gaaagaagaa gaagaagaag aaagcccgaa aggaagctga 6960 gttggctgct gccaccgctg agcaataact agcataaccc cttggggcct ctaaacgggt 7020 cttgaggggt tttttgctga aaggaggaac cgctcttcac gctcttcacg cggataaata 7080 agtaacgatc cggtccagta atgacctcag aactccatct ggatttgttc agaacgctcg 7140 gttgccgccg ggcgtttttt attggtgaga atcgcagcaa cttgtcgcgc caatcgagcc 7200 atgtcgtcgt caacgacccc ccattcaaga acagcaagca gcattgagaa ctttggaatc 7260 cagtccctct tccacctgct gaccg 7285 <210> 28 <211> 7285 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pAMG21-RANK-Fc vector <220> <221> misc_feature <223> Xaa (Pos1,2,3,15,16,17) are each independently absent or amino acid residues; Xaa (Pos5,6,7,9,13) are each independently amino acid residues. <400> 28 Gly Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Thr Cys Cys Cys Cys 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= a peptide bond <400> 47 Xaa Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys 1 5 10 15 Asp Pro Leu Xaa Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln 20 25 30 Trp Val Cys Asp Pro Leu 35 <210> 48 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide bond <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa = a peptide bond Fc domain attached at Position 19 to C-terminus <400> 48 Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys Thr 1 5 10 15 Ser Ser Xaa <210> 49 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide bond <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa = a peptide bond Fc domain attached at Position 1 to N-terminus <400> 49 Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys 1 5 10 15 Thr Ser Ser <210> 50 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide bond <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Xaa = a peptide bond <220> <221> misc_feature <222> (36)..(36) <223> Xaa = a peptide bond Fc domain attached at Position 36 to C-terminus <400> 50 Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Thr Ser 1 5 10 15 Ser Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val 20 25 30 Thr Ser Ser Xaa 35 <210> 51 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide bond <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa = a peptide bond Fc domain attached at Position 1 to N-terminus <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa = a peptide bond <400> 51 Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Thr 1 5 10 15 Ser Ser Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp 20 25 30 Val Thr Ser Ser 35 <210> 52 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide bond <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa = a peptide bond Fc domain attached at Position 19 to C-terminus <400> 52 Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys His 1 5 10 15 Gly Leu Xaa <210> 53 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide bond <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa = a peptide bond Fc domain attached at Position 1 to N-terminus <400> 53 Xaa Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys 1 5 10 15 His Gly Leu <210> 54 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide bond <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa = a peptide bond <220> <221> misc_feature <222> (38)..(38) <223> Xaa = a peptide bond Fc domain attached at Position 38 to C-terminus <400> 54 Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys His 1 5 10 15 Gly Leu Xaa Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp 20 25 30 Val Cys His Gly Leu Xaa 35 <210> 55 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide bond <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa = a peptide bond Fc domain attached at Position 1 to N-terminus <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> Xaa = a peptide bond <400> 55 Xaa Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu 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tcgaccccac cgcctccacc cagaccgtga caaaccatct gacgagtcag caggtcgtat 60 ttacagtcgt ggaaca 76 <210> 89 <211> 74 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotides <400> 89 tatgcgtaac cactgtttct gggaccacct gctgaaacag gacatctgtc cgtctccggg 60 tggaggcggt gggg 74 <210> 90 <211> 76 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotides <400> 90 tcgaccccac cgcctccacc cggagacgga cagatgtcct gtttcagcag gtggtcccag 60 aaacagtggt tacgca 76 <210> 91 <211> 74 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotides <400> 91 tatggctaac cagtgttggt gggactctct gctgaaaaaa aacgtttgtg aattcttcgg 60 tggaggcggt gggg 74 <210> 92 <211> 76 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotides <400> 92 tcgaccccac cgcctccacc gaagaattca caaacgtttt ttttcagcag agagtcccac 60 caacactggt tagcca 76 <210> 93 <211> 74 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotides <400> 93 tatgttccac gactgcaaat gggacctgct gaccaaacag tgggtttgcc acggtctggg 60 tggaggcggt gggg 74 <210> 94 <211> 76 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotides <400> 94 tcgaccccac cgcctccacc cagaccgtgg caaacccact gtttggtcag caggtcccat 60 ttgcagtcgt ggaaca 76 <210> 95 <211> 141 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pAMG21-RANK-Fc vector <400> 95 ctaattccgc tctcacctac caaacaatgc ccccctgcaa aaaataaatt catataaaaa 60 acatacagat aaccatctgc ggtgataaat tatctctggc ggtgttgaca taaataccac 120 tggcggtgat actgagcaca t 141 <210> 96 <211> 55 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pAMG21-RANK-Fc vector <400> 96 cgatttgatt ctagaaggag gaataacata tggttaacgc gttggaattc ggtac 55 <210> 97 <211> 1546 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pAMG21 <400> 97 gcgtaacgta tgcatggtct ccccatgcga gagtagggaa ctgccaggca tcaaataaaa 60 cgaaaggctc agtcgaaaga ctgggccttt cgttttatct gttgtttgtc ggtgaacgct 120 ctcctgagta ggacaaatcc gccgggagcg gatttgaacg ttgcgaagca acggcccgga 180 gggtggcggg caggacgccc gccataaact gccaggcatc aaattaagca gaaggccatc 240 ctgacggatg gcctttttgc gtttctacaa actcttttgt ttatttttct aaatacattc 300 aaatatggac gtcgtactta acttttaaag tatgggcaat caattgctcc tgttaaaatt 360 gctttagaaa tactttggca gcggtttgtt gtattgagtt tcatttgcgc attggttaaa 420 tggaaagtga ccgtgcgctt actacagcct aatatttttg aaatatccca agagcttttt 480 ccttcgcatg cccacgctaa acattctttt tctcttttgg ttaaatcgtt gtttgattta 540 ttatttgcta tatttatttt tcgataatta tcaactagag aaggaacaat taatggtatg 600 ttcatacacg catgtaaaaa taaactatct atatagttgt ctttctctga atgtgcaaaa 660 ctaagcattc cgaagccatt attagcagta tgaataggga aactaaaccc agtgataaga 720 cctgatgatt tcgcttcttt aattacattt ggagattttt tatttacagc attgttttca 780 aatatattcc aattaatcgg tgaatgattg gagttagaat aatctactat aggatcatat 840 tttattaaat tagcgtcatc ataatattgc ctccattttt tagggtaatt atccagaatt 900 gaaatatcag atttaaccat agaatgagga taaatgatcg cgagtaaata atattcacaa 960 tgtaccattt tagtcatatc agataagcat tgattaatat cattattgct tctacaggct 1020 ttaattttat taattattct gtaagtgtcg tcggcattta tgtctttcat acccatctct 1080 ttatccttac ctattgtttg tcgcaagttt tgcgtgttat atatcattaa aacggtaata 1140 gattgacatt tgattctaat aaattggatt tttgtcacac tattatatcg cttgaaatac 1200 aattgtttaa cataagtacc tgtaggatcg tacaggttta cgcaagaaaa tggtttgtta 1260 tagtcgatta atcgatttga ttctagattt gttttaacta attaaaggag gaataacata 1320 tggttaacgc gttggaattc gagctcacta gtgtcgacct gcagggtacc atggaagctt 1380 actcgaggat ccgcggaaag aagaagaaga agaagaaagc ccgaaaggaa gctgagttgg 1440 ctgctgccac cgctgagcaa taactagcat aaccccttgg ggcctctaaa cgggtcttga 1500 ggggtttttt gctgaaagga ggaaccgctc ttcacgctct tcacgc 1546 <210> 98 <211> 872 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GM221 <400> 98 ttattttcgt gcggccgcac cattatcacc gccagaggta aactagtcaa cacgcacggt 60 gttagatatt tatcccttgc ggtgatagat tgagcacatc gatttgattc tagaaggagg 120 gataatatat gagcacaaaa aagaaaccat taacacaaga gcagcttgag gacgcacgtc 180 gccttaaagc aatttatgaa aaaaagaaaa atgaacttgg cttatcccag gaatctgtcg 240 cagacaagat ggggatgggg cagtcaggcg ttggtgcttt atttaatggc atcaatgcat 300 taaatgctta taacgccgca ttgcttacaa aaattctcaa agttagcgtt gaagaattta 360 gcccttcaat cgccagagaa tctacgagat gtatgaagcg gttagtatgc agccgtcact 420 tagaagtgag tatgagtacc ctgttttttc tcatgttcag gcagggatgt tctcacctaa 480 gcttagaacc tttaccaaag gtgatgcgga gagatgggta agcacaacca aaaaagccag 540 tgattctgca ttctggcttg aggttgaagg taattccatg accgcaccaa caggctccaa 600 gccaagcttt cctgacggaa tgttaattct cgttgaccct gagcaggctg ttgagccagg 660 tgatttctgc atagccagac ttgggggtga tgagtttacc ttcaagaaac tgatcaggga 720 tagcggtcag gtgtttttac aaccactaaa cccacagtac ccaatgatcc catgcaatga 780 gagttgttcc gttgtgggga aagttatcgc tagtcagtgg cctgaagaga cgtttggctg 840 atagactagt ggatccacta gtgtttctgc cc 872 <210> 99 <211> 1197 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GM221 <400> 99 ggcggaaacc gacgtccatc gaatggtgca aaacctttcg cggtatggca tgatagcgcc 60 cggaagagag tcaattcagg gtggtgaatg tgaaaccagt aacgttatac gatgtcgcag 120 agtatgccgg tgtctcttat cagaccgttt cccgcgtggt gaaccaggcc agccacgttt 180 ctgcgaaaac gcgggaaaaa gtcgaagcgg cgatggcgga gctgaattac attcccaacc 240 gcgtggcaca acaactggcg ggcaaacagt cgctcctgat tggcgttgcc acctccagtc 300 tggccctgca cgcgccgtcg caaattgtcg cggcgattaa atctcgcgcc gatcaactgg 360 gtgccagcgt ggtggtgtcg atggtagaac gaagcggcgt cgaagcctgt aaagcggcgg 420 tgcacaatct tctcgcgcaa cgcgtcagtg ggctgatcat taactatccg ctggatgacc 480 aggatgccat tgctgtggaa gctgcctgca ctaatgttcc ggcgttattt cttgatgtct 540 ctgaccagac acccatcaac agtattattt tctcccatga agacggtacg cgactgggcg 600 tggagcatct ggtcgcattg ggtcaccagc aaatcgcgct gttagcgggc ccattaagtt 660 ctgtctcggc gcgtctgcgt ctggctggct ggcataaata tctcactcgc aatcaaattc 720 agccgatagc ggaacgggaa ggcgactgga gtgccatgtc cggttttcaa caaaccatgc 780 aaatgctgaa tgagggcatc gttcccactg cgatgctggt tgccaacgat cagatggcgc 840 tgggcgcaat gcgcgccatt accgagtccg ggctgcgcgt tggtgcggat atctcggtag 900 tgggatacga cgataccgaa gacagctcat gttatatccc gccgttaacc accatcaaac 960 aggattttcg cctgctgggg caaaccagcg tggaccgctt gctgcaactc tctcagggcc 1020 aggcggtgaa gggcaatcag ctgttgcccg tctcactggt gaaaagaaaa accaccctgg 1080 cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg cagctggcac 1140 gacaggtttc ccgactggaa agcggacagt aaggtaccat aggatccagg cacagga 1197 <210> 100 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modulators of TALL-1 <220> <221> misc_feature <222> (1, 2, 3, 13)..(14) <223> Xaa (Pos1,2,3,13,14) are each independently absent or amino acid residues; <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa (Pos6) is an amino acid residue; <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa (Pos8) is threonyl or isoleucyl; <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa (Pos 9) is a basic or hydrophobic residue; <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa (Pos 10) is an amino acid residue; <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa (Pos12) is a neutral hydrophobic residue. <400> 100 Xaa Xaa Xaa Cys Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 101 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modulators of TALL-1 <220> <221> misc_feature <222> (1, 2, 3, 12 and)..(13) <223> Xaa (Pos1,2,3,12,13) are each independently absent or amino acid residues; <220> <221> misc_feature <222> (5 and)..(8) <223> Xaa (Pos5,8) is a neutral hydrophobic residue; <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa (Pos10) is an acidic residue; <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa (Pos14) is absent or is an amino acid residue. <400> 101 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Pro Phe Xaa Trp Xaa Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 102 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modulator of TALL-1 <220> <221> misc_feature <222> (1, 2, 3, 12, 13 and)..(14) <223> Xaa (Pos1,2,3,12,13,14) are each independently absent or amino acid residues; <220> <221> misc_feature <222> (6 and)..(7) <223> Xaa (Pos6,7) is a hydrophobic residue; <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa (Pos10) is an acidic or polar hydrophobic residue. <400> 102 Xaa Xaa Xaa Cys Trp Xaa Xaa Trp Gly Xaa Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 103 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modulator of TALL-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa (Pos1) is absent or is an amino acid residue; <220> <221> misc_feature <222> (2 and)..(14) <223> Xaa (Pos2,14) is a neutral hydrophobic residue; <220> <221> misc_feature <222> (3 and)..(10) <223> Xaa (Pos3,10) is an amino acid residue; <220> <221> misc_feature <222> (5, 6, 7, 8, 12 and)..(13) <223> Xaa (Pos5,6,7,8,12,13) are each independently amino acid residues; <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa (Pos9) is an acidic residue. <400> 103 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 104 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modulator of TALL-1 <220> <221> misc_feature <222> (1, 2, 12, 13, 16, 17 and)..(18) <223> Xaa (Pos1,2,12,13,16,17,18) are each independently absent or amino acid residues; <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa (Pos3) is an acidic or amide residue; <220> <221> misc_feature <222> (5 and)..(8) <223> Xaa (Pos5,8) is an amino acid residue; <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa (Pos6) is an aromatic residue; <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa (Pos 10) is T or I; <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa (Pos11) is a basic residue; <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa (Pos14) is a neutral hydrophobic residue. <400> 104 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa <210> 105 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modulator of TALL-1 <220> <221> misc_feature <222> (1, 2 and)..(3) <223> Xaa (Pos1,2,3) are each independently absent or amino acid residues; <220> <221> misc_feature <222> (5, 7, 14 and)..(16) <223> Xaa (Pos5,7,14,16) is an amino acid residue; <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa (Pos 9) is T or I; <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa (Pos10) is a basic residue; <220> <221> misc_feature <222> (11 and)..(12) <223> Xaa (Pos11,12) are each independently amino acid residues; <220> <221> misc_feature <222> (13 and)..(17) <223> Xaa (Pos13,17) is a neutral hydrophobic residue; <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Xaa (Pos18) is an amino acid residue or is absent. <400> 105 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa <210> 106 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modulator of TALL-1 <220> <221> misc_feature <222> (1, 2, 3, 16, 17 and)..(18) <223> Xaa (Pos1,2,3,16,17,18) are each independently absent or amino acid residues; <220> <221> misc_feature <222> (5, 6, 7, 10 and)..(14) <223> Xaa (Pos5,6,7,10,14) are each independently amino acid residues. <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa (Pos 12) is T or I; <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa (Pos 13) is an amino acid residue; <400> 106 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Trp Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Cys Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa <210> 107 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modulator of TALL-1 <220> <221> misc_feature <222> (1,2,3,15,16,17)..(18) <223> Xaa (Pos1,2,3,15,16,17,18) are each independently absent or amino acid residues; <220> <221> misc_feature <222> (5, 6, 7, 9 and)..(13) <223> Xaa (Pos 5,6,7,9 13) are each independently amino acid residues; <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa (Pos 11) is T or I; and <400> 107 Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Leu Xaa Lys Xaa Cys Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa <210> 108 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modulator of TALL-1 <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> X at (Pos 2) is an amino acid residue <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> X at (Pos 4) is threonyl or isoleucyl <400> 108 Asp Xaa Leu Xaa 1 <210> 109 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modulator of TALL-1 <220> <221> misc_feature <222> (1, 2 and)..(3) <223> X at (Pos 1, 2, 3) are absent or are amino acid residues (with one of X1, X2, and X3 preferred to be C when one of X12, X13, and X14 is C); <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> X at (Pos 5) is W, Y, or F (W preferred); <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> X at (Pos 7) is an amino acid residue (L preferred); <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> X at (Pos 9) is T or I (T preferred); <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> X at (Pos 10) is K, R, or H ( K preferred). <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> X at (Pos 12) is C, a neutral hydrophobic residue, or a basic residue (W, C, or R preferred); <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> X at (Post 13) is C, a neutral hydrophobic residue or is absent (V preferred); <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> X at (Pos 14) is any amino acid residue or is absent. <400> 109 Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Asp Xaa Leu Xaa Xaa Gln Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 110 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modulator of TALL-1 <400> 110 Pro Phe Pro Trp Glu 1 5 <210> 111 <211> 248 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 inhibitory peptibodies <400> 111 Met Pro Gly Thr Cys Phe Pro Phe Pro Trp Glu Cys Thr His Ala Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 20 25 30 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 35 40 45 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 50 55 60 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 65 70 75 80 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 85 90 95 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 100 105 110 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 115 120 125 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 130 135 140 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 145 150 155 160 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 165 170 175 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 180 185 190 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 195 200 205 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 210 215 220 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 225 230 235 240 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 <210> 112 <211> 248 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 inhibitory peptibodies <400> 112 Met Trp Gly Ala Cys Trp Pro Phe Pro Trp Glu Cys Phe Lys Glu Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 20 25 30 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 35 40 45 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 50 55 60 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 65 70 75 80 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 85 90 95 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 100 105 110 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 115 120 125 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 130 135 140 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 145 150 155 160 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 165 170 175 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 180 185 190 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 195 200 205 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 210 215 220 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 225 230 235 240 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 <210> 113 <211> 248 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 inhibitory peptibodies <400> 113 Met Val Pro Phe Cys Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Phe Glu Ala Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 20 25 30 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 35 40 45 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 50 55 60 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 65 70 75 80 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 85 90 95 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 100 105 110 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 115 120 125 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 130 135 140 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 145 150 155 160 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 165 170 175 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 180 185 190 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 195 200 205 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 210 215 220 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 225 230 235 240 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 <210> 114 <211> 252 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 inhibitory peptibodies <400> 114 Met Gly Ser Arg Cys Lys Tyr Lys Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Cys 1 5 10 15 Phe His His Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 20 25 30 Pro Cys 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Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 180 185 190 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 195 200 205 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 210 215 220 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 225 230 235 240 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 250 <210> 116 <211> 252 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 inhibitory peptibodies <400> 116 Met Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys 1 5 10 15 Thr Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 20 25 30 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 35 40 45 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 50 55 60 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 65 70 75 80 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 85 90 95 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 100 105 110 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 115 120 125 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 130 135 140 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 145 150 155 160 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 165 170 175 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 180 185 190 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 195 200 205 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 210 215 220 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 225 230 235 240 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 250 <210> 117 <211> 252 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 inhibitory peptibodies <400> 117 Met Ser Asp Asp Cys Met Tyr Asp Gln Leu Thr Arg Met Phe Ile Cys 1 5 10 15 Ser Asn Leu Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 20 25 30 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 35 40 45 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 50 55 60 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 65 70 75 80 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 85 90 95 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 100 105 110 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 115 120 125 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 130 135 140 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 145 150 155 160 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 165 170 175 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 180 185 190 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 195 200 205 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 210 215 220 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 225 230 235 240 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 250 <210> 118 <211> 252 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> 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Asp Gly Ser 195 200 205 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 210 215 220 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 225 230 235 240 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 250 <210> 119 <211> 252 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 inhibitory peptibodies <400> 119 Met Phe His Asp Cys Lys Tyr Asp Leu Leu Thr Arg Gln Met Val Cys 1 5 10 15 His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 20 25 30 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 35 40 45 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 50 55 60 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 65 70 75 80 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 85 90 95 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 100 105 110 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 115 120 125 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 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65 70 75 80 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 85 90 95 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 100 105 110 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 115 120 125 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 130 135 140 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 145 150 155 160 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 165 170 175 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 180 185 190 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 195 200 205 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 210 215 220 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 225 230 235 240 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 250 <210> 121 <211> 252 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 inhibitory peptibodies <400> 121 Met Ala Asn Gln Cys Trp Trp Asp Ser Leu Thr Lys Lys Asn Val Cys 1 5 10 15 Glu Phe Phe Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 20 25 30 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 35 40 45 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 50 55 60 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 65 70 75 80 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 85 90 95 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 100 105 110 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 115 120 125 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 130 135 140 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 145 150 155 160 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 165 170 175 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 180 185 190 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 195 200 205 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 210 215 220 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 225 230 235 240 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 250 <210> 122 <211> 252 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 inhibitory peptibodies <400> 122 Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys 1 5 10 15 His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 20 25 30 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 35 40 45 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 50 55 60 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 65 70 75 80 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 85 90 95 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 100 105 110 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 115 120 125 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 130 135 140 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 145 150 155 160 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 165 170 175 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 180 185 190 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 195 200 205 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 210 215 220 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 225 230 235 240 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 250 <210> 123 <211> 293 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 inhibitory peptibodies <400> 123 Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys 1 5 10 15 Asp Pro Leu Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala 20 25 30 Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr His Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp 35 40 45 Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys Asp Pro Leu Gly Gly Gly Gly 50 55 60 Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 65 70 75 80 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 85 90 95 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 100 105 110 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 115 120 125 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 130 135 140 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 145 150 155 160 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 165 170 175 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 180 185 190 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 195 200 205 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 210 215 220 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 225 230 235 240 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 245 250 255 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 260 265 270 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 275 280 285 Leu Ser Pro Gly Lys 290 <210> 124 <211> 293 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 inhibitory peptibodies <400> 124 Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys 1 5 10 15 His Gly Leu Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala 20 25 30 Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr His Met Phe His Asp Cys Lys Trp 35 40 45 Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys His Gly Leu Gly Gly Gly Gly 50 55 60 Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 65 70 75 80 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 85 90 95 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 100 105 110 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 115 120 125 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 130 135 140 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 145 150 155 160 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 165 170 175 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 180 185 190 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 195 200 205 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 210 215 220 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 225 230 235 240 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 245 250 255 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 260 265 270 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 275 280 285 Leu Ser Pro Gly Lys 290 <210> 125 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus Sequence <220> <221> misc_feature <222> (1, 2 and)..(3) <223> X at (Pos 1, 2, 3) are absent or are amino acid residues (with one of X1, X2, and X3 preferred to be C when one of X12, X13, and X14 is C); <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> X at (Pos 7) is an amino acid residue (L preferred); <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> X at (Pos 9) is T or I (T preferred); <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> X at (Pos 12) is C, a neutral hydrophobic residue, or a basic residue (W, C, or R preferred); <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> X at (Pos 13) is C, a neutral hydrophobic residue or is absent (V preferred); <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> X at (Pos 14) is any amino acid residue or is absent. <400> 125 Xaa Xaa Xaa Lys Trp Asp Xaa Leu Xaa Lys Gln Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 126 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 126 Tyr Lys Gly Arg Gln Met Trp Asp Ile Leu Thr Arg Ser Trp Val Val 1 5 10 15 Ser Leu <210> 127 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 127 Gln Asp Val Gly Leu Trp Trp Asp Ile Leu Thr Arg Ala Trp Met Pro 1 5 10 15 Asn Ile <210> 128 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 128 Gln Asn Ala Gln Arg Val Trp Asp Leu Leu Ile Arg Thr Trp Val Tyr 1 5 10 15 Pro Gln <210> 129 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 129 Gly Trp Asn Glu Ala Trp Trp Asp Glu Leu Thr Lys Ile Trp Val Leu 1 5 10 15 Glu Gln <210> 130 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 130 Arg Ile Thr Cys Asp Thr Trp Asp Ser Leu Ile Lys Lys Cys Val Pro 1 5 10 15 Gln Ser <210> 131 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 131 Gly Ala Ile Met Gln Phe Trp Asp Ser Leu Thr Lys Thr Trp Leu Arg 1 5 10 15 Gln Ser <210> 132 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 132 Trp Leu His Ser Gly Trp Trp Asp Pro Leu Thr Lys His Trp Leu Gln 1 5 10 15 Lys Val <210> 133 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 133 Ser Glu Trp Phe Phe Trp Phe Asp Pro Leu Thr Arg Ala Gln Leu Lys 1 5 10 15 Phe Arg <210> 134 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 134 Gly Val Trp Phe Trp Trp Phe Asp Pro Leu Thr Lys Gln Trp Thr Gln 1 5 10 15 Ala Gly <210> 135 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 135 Met Gln Cys Lys Gly Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Lys Trp Cys Val Thr 1 5 10 15 Asn Gly <210> 136 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 136 Leu Trp Ser Lys Glu Val Trp Asp Ile Leu Thr Lys Ser Trp Val Ser 1 5 10 15 Gln Ala <210> 137 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 137 Lys Ala Ala Gly Trp Trp Phe Asp Trp Leu Thr Lys Val Trp Val Pro 1 5 10 15 Ala Pro <210> 138 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 138 Ala Tyr Gln Thr Trp Phe Trp Asp Ser Leu Thr Arg Leu Trp Leu Ser 1 5 10 15 Thr Thr <210> 139 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 139 Ser Gly Gln His Phe Trp Trp Asp Leu Leu Thr Arg Ser Trp Thr Pro 1 5 10 15 Ser Thr <210> 140 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 140 Leu Gly Val Gly Gln Lys Trp Asp Pro Leu Thr Lys Gln Trp Val Ser 1 5 10 15 Arg Gly <210> 141 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 141 Val Gly Lys Met Cys Gln Trp Asp Pro Leu Ile Lys Arg Thr Val Cys 1 5 10 15 Val Gly <210> 142 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 142 Cys Arg Gln Gly Ala Lys Phe Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Leu 1 5 10 15 Gly Arg <210> 143 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 143 Gly Gln Ala Ile Arg His Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Trp Val Asp 1 5 10 15 Ser Gln <210> 144 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 144 Arg Gly Pro Cys Gly Ser Trp Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Leu Asp 1 5 10 15 Ser Gln <210> 145 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 145 Trp Gln Trp Lys Gln Gln Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Met Val Trp 1 5 10 15 Val Gly <210> 146 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 146 Pro Ile Thr Ile Cys Arg Lys Asp Leu Leu Thr Lys Gln Val Val Cys 1 5 10 15 Leu Asp <210> 147 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 147 Lys Thr Cys Asn Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Gln 1 5 10 15 Gln Ala <210> 148 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 148 Lys Cys Leu Lys Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Val Thr 1 5 10 15 Glu Val <210> 149 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 149 Arg Cys Trp Asn Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Ile His 1 5 10 15 Pro Trp <210> 150 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 150 Asn Arg Asp Met Arg Lys Trp Asp Pro Leu Ile Lys Gln Trp Ile Val 1 5 10 15 Arg Pro <210> 151 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 151 Gln Ala Ala Ala Ala Thr Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Leu Val 1 5 10 15 Pro Pro <210> 152 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 152 Pro Glu Gly Gly Pro Lys Trp Asp Pro Leu Thr Lys Gln Phe Leu Pro 1 5 10 15 Pro Val <210> 153 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 153 Gln Thr Pro Gln Lys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Phe Thr 1 5 10 15 Arg Asn <210> 154 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 154 Ile Gly Ser Pro Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Met Ile Cys 1 5 10 15 Gln Thr <210> 155 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 155 Cys Thr Ala Ala Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Ile Gln 1 5 10 15 Glu Lys <210> 156 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 156 Val Ser Gln Cys Met Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Gln 1 5 10 15 Gly Trp <210> 157 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 157 Val Trp Gly Thr Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Tyr Leu Pro 1 5 10 15 Pro Gln <210> 158 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 158 Gly Trp Trp Glu Met Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Tyr Arg 1 5 10 15 Pro Gln <210> 159 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 159 Thr Ala Gln Val Ser Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Leu Pro 1 5 10 15 Leu Ala <210> 160 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 160 Gln Leu Trp Gly Thr Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Tyr Ile Gln 1 5 10 15 Ile Met <210> 161 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 161 Trp Ala Thr Ser Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Gln 1 5 10 15 Asn Met <210> 162 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 162 Gln Arg Gln Cys Ala Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Val Leu 1 5 10 15 Phe Tyr <210> 163 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 163 Lys Thr Thr Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Arg Ile Cys 1 5 10 15 Gln Val <210> 164 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 164 Leu Leu Cys Gln Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Lys 1 5 10 15 Leu Arg <210> 165 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 165 Leu Met Trp Phe Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Leu Val Pro 1 5 10 15 Thr Phe <210> 166 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 166 Gln Thr Trp Ala Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile Gly 1 5 10 15 Pro Met <210> 167 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 167 Asn Lys Glu Leu Leu Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Arg Gly 1 5 10 15 Arg Ser <210> 168 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 168 Gly Gln Lys Asp Leu Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Tyr Val Arg 1 5 10 15 Gln Ser <210> 169 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 169 Pro Lys Pro Cys Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Gly 1 5 10 15 Ser Val <210> 170 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 170 Gly Gln Ile Gly Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile Gln 1 5 10 15 Thr Arg <210> 171 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 171 Val Trp Leu Asp Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile His 1 5 10 15 Pro Gln <210> 172 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 172 Gln Glu Trp Glu Tyr Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Gly Trp 1 5 10 15 Leu Arg <210> 173 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 173 His Trp Asp Ser Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Val 1 5 10 15 Gln Ala <210> 174 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 174 Thr Arg Pro Leu Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Leu Arg 1 5 10 15 Val Gly <210> 175 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 175 Ser Asp Gln Trp Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Phe Trp 1 5 10 15 Asp Val <210> 176 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 176 Gln Gln Thr Phe Met Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile Arg 1 5 10 15 Arg His <210> 177 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 177 Gln Gly Glu Cys Arg Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Phe Pro 1 5 10 15 Gly Gln <210> 178 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 178 Gly Gln Met Gly Trp Arg Trp Asp Pro Leu Ile Lys Met Cys Leu Gly 1 5 10 15 Pro Ser <210> 179 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 179 Gln Leu Asp Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Lys Val Cys 1 5 10 15 Ile Pro <210> 180 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 180 His Gly Tyr Trp Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Ser 1 5 10 15 Ser Glu <210> 181 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 181 His Gln Gly Gln Cys Gly Trp Asp Leu Leu Thr Arg Ile Tyr Leu Pro 1 5 10 15 Cys His <210> 182 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 182 Leu His Lys Ala Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Trp Pro 1 5 10 15 Met Gln <210> 183 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 183 Gly Pro Pro Gly Ser Val Trp Asp Leu Leu Thr Lys Ile Trp Ile Gln 1 5 10 15 Thr Gly <210> 184 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 184 Ile Thr Gln Asp Trp Arg Phe Asp Thr Leu Thr Arg Leu Trp Leu Pro 1 5 10 15 Leu Arg <210> 185 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 185 Gln Gly Gly Phe Ala Ala Trp Asp Val Leu Thr Lys Met Trp Ile Thr 1 5 10 15 Val Pro <210> 186 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 186 Gly His Gly Thr Pro Trp Trp Asp Ala Leu Thr Arg Ile Trp Ile Leu 1 5 10 15 Gly Val <210> 187 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 187 Val Trp Pro Trp Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Phe Val Phe 1 5 10 15 Gln Asp <210> 188 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred TALL-1 modulating domains <400> 188 Trp Gln Gln Trp Ser Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Arg Gln Tyr Ile 1 5 10 15 Ser Ser Ser <210> 189 <211> 882 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TALL-1 12-3 tandem dimer <400> 189 atgcttccag gctgcaagtg ggatcttctt attaagcaat gggtatgcga tccacttgga 60 tccggttctg ctactggtgg ttccggctcc accgcaagct ctggttcagg cagtgcgact 120 catatgctgc cgggttgtaa atgggacctg ctgatcaaac agtgggtttg tgacccgctg 180 ggtggaggcg gtggggtcga caaaactcac acatgtccac cttgtccagc tccggaactc 240 ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 300 cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 360 ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 420 cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 480 aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 540 accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 600 cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 660 agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 720 cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 780 agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 840 cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat aa 882 <210> 190 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred linker <400> 190 Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly 1 5 10 15 Ser Gly Ser Ala Thr Gly Met 20 <210> 191 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred linker <400> 191 Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly 1 5 10 15 Ser Gly Ser Ala Thr Gly Ser 20 <210> 192 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred linker <400> 192 Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly 1 5 10 15 Ser Gly Ser Ala Thr His Met Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser 20 25 30 Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr His Met 35 40 45 <210> 193 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred linker <220> <221> misc_feature <222> (22)..(23) <223> X at (Pos 22) is independently a basic or hydrophobic residue and X at (Pos 23) is independently a hydrophobic residue. <400> 193 Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly 1 5 10 15 Ser Gly Ser Ala Thr Xaa Xaa 20 <210> 194 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred linker <220> <221> misc_feature <222> (22, 23, 45 and)..(46) <223> X at (Pos 22) and (Pos 45) are each independently basic or hydrophobic residues and X at (Pos 23) and (Pos 46) are each independently hydrophobic residues <400> 194 Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly 1 5 10 15 Ser Gly Ser Ala Thr Xaa Xaa Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser 20 25 30 Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr Xaa Xaa 35 40 45 <210> 195 <211> 38 <212> PRT <213> Human <400> 195 Met Arg Arg Gly Pro Arg Ser Leu Arg Gly Arg Asp Ala Pro Val Pro 1 5 10 15 Thr Pro Cys Val Pro Thr Glu Cys Tyr Asp Leu Leu Val Arg Lys Cys 20 25 30 Val Asp Cys Arg Leu Leu 35 <210> 196 <211> 41 <212> PRT <213> Human <400> 196 Thr Ile Cys Asn His Gln Ser Gln Arg Thr Cys Ala Ala Phe Cys Arg 1 5 10 15 Ser Leu Ser Cys Arg Lys Glu Gln Gly Lys Phe Tyr Asp His Leu Leu 20 25 30 Arg Asp Cys Ile Ser Cys Ala Ser Ile 35 40 <210> 197 <211> 42 <212> PRT <213> Human <400> 197 Phe Val Ser Pro Ser Gln Glu Ile Arg Gly Arg Phe Arg Arg Met Leu 1 5 10 15 Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu 20 25 30 His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys 35 40