与TALL－1结合的肽和相关分子

发明背景

在对肿瘤坏死进行若干年的研究之后，最终在1984年克隆了肿瘤 坏死因子(TNFs)α和β。在随后的几年中，发现了TNF细胞因子超家 族，包括fas配体(FasL)、CD27配体(CD27L)、CD30配体(CD30L)、CD40 配体(CD40L)、TNF-相关的细胞程序死亡诱导配体(TRAIL，又被称为 AGP-1)，骨保护素(osteoprotegerin)结合蛋白(OPG-BP或OPG配体)， 4-1BB配体，LIGHT，APRIL，和TALL-1。Smith等(1994)，Cell 76： 959-962；Lacey等(1998)，Cell 93：165-176；Chichepotiche等(1997)，J. Biol.Chem.272：32401-32410；Mauri等(1998)，Immunity 8：21-30；Hahne 等(1998)，J.Exp.Med.188：1185-90；Shu等(1999)，J.Leukocyte Biology 65：680-3。该家族是通过它的结构，特别是C-末端而统一化的。另外， 迄今为止，已知的大多数成员是在免疫区室(compartment)中表达的， 不过，某些成员也可以在其他组织或器官中表达。Smith等(1994)，Cell 76：959-62。除了LT-α以外的所有配体都是II型跨膜蛋白，以在C-末 端细胞外结构域中的保守的150个氨基酸区域为特征。尽管局限于仅有 20-25％的相同性，所述保守的150个氨基酸结构域折叠成特有的β-折 叠片夹层，并且三聚体化。所述保守片段可以通过蛋白水解释放，从 而产生可溶性功能形式。Banner等(1993)，Cell 73：431-445。

该配体家族的很多成员都是在富含淋巴的组织中表达的，并且在 免疫系统发育和调节中发挥重要作用。Smith等(1994)。例如，TNFα 主要是由巨噬细胞合成的，并且是炎性反应和免疫防御的重要介体。 Tracey&Cerami(1994)，Ann.Rev.Med.45：491-503。Fas-L主要在激活 的T细胞中表达，调节胸腺细胞的TCR介导的细胞程序死亡。Nagata， S.&Suda，T.(1995)Immunology Today 16：39-43；Castrim等(1996)， Immunity 5：617-27。CD40L也能通过激活的T细胞表达，提供了B细 胞存活、增殖和免疫球蛋白同种型转变的重要信号。Noelle(1996)， Immunity4：415-9。

业已鉴定了大多数TNF配体家族成员的关联受体。所述受体在它 们的细胞外结构域内拥有特有的多个富含半胱氨酸的重复序列，并且 在细胞质区内不具有催化性基序。Smith等(1994)。所述受体信号通过 直接与死亡结构域蛋白(例如TRADD，FADD，和RIP)或TRAF蛋 白(例如TRAF2，TRAF3，TRAF5，和TRAF6)相互作用，启动多样 的和重叠的信号传导途径，例如，细胞程序死亡，NF-κB激活，或JNK 激活。Wallach等(1999)，Annual Review of Immunology 17：331-67。所 述信号传导事件导致细胞死亡、增殖、激活或分化。每一个受体成员 的表达方式是不同的。例如，TNFR1是在多种组织和细胞中表达的， 而OPGL的细胞表面受体主要局限于破骨细胞。Hsu等(1999)Proc.Natl. Acad.Sci.USA 96：3540-5。

最近，多个研究小组业已证实TNF家族配体具有相同的或大体上 相似的序列。所述配体拥有各种不同的名称：neutrokineα(WO 98/18921，公开日为1998年5月7日)，63954(WO98/27114，公开日 为1998年6月25日)，TL5(EP869 180，公开日为1998年10月7日)， NTN-2(WO 98/55620和WO98/55621，公开日为1998年12月10日)， TNRL1-α(WO9911791，公开日为1999年3月11日)，kay配体 (W099/12964，公开日为1999年3月18日)，和AGP-3(1999年2月12 日提交的美国临时申请60/119,906和1999年11月18日提交的 60/166,271)；和TALL-1(WO 00/68378，公开日为2000年11月16日)。 以上每一份文献都被引入本文作为参考。在下文中，上面所报导的配 体被统称为TALL-1。

TALL-1是TNF配体超家族的一个成员，它在功能上与B细胞存 活和增殖相关。超量表达TALL-1的转基因小鼠，具有严重的B细胞增 殖过度和狼疮样自身免疫疾病。Khare等(2000)PNAS 97(7)：3370- 3375)。TACI和BCMA都起着TALL-1细胞表面受体的作用。Gross等 (2000)，Nature 404：995-999；Ware(2000)，J.Exp.Med.192(11)：F35- F37；Ware(2000)，Nature 404：949-950；Xia等(2000)，J.Exp.Med. 192(1)：137-143；Yu等(2000)，Nature Immunology 1(3)：252-256； Marsters等(2000)，Current Biology 10：785-788；Hatzoglou等(2000)J. of Immunology 165：1322-1330；Shu等(2000)PNAS 97(16)：9156-9161； Thompson等(2000)J.Exp.Med.192(1)：129-135；Mukhopadhyay等 (1999)J.Biol.Chem.274(23)：15978-81；Shu等(1999)J.Leukocyte Biol. 65：680-683；Gruss等(1995)Blood 85(12)：3378-3404；Smith等(1994)， Cell 76：959-962；美国专利5,969,102，于1999年10月19日授权；WO 00/67034，公开日为2000年11月9日；WO 00/40716，公开日为2000 年7月13日；WO 99/35170，公开日为1999年7月15日。以上两种 受体都是在B细胞上表达的，并且通过与TRAF蛋白相互作用传导信 号。另外，TACI和BCMA还能结合TNF配体家族的另一个成员 APRIL。Yu等(2000)，Nature Immunology 1(3)：252-256。还证实了APRIL 能诱导B细胞增殖。

迄今为止，尚未披露采用TALL-1的肽调节剂的重组或修饰蛋白。 重组和修饰蛋白是一类新兴的治疗剂。蛋白治疗剂的有用的修饰包括 与一种抗体的“Fc”结构域结合，以及与诸如聚乙二醇(PEG)和葡聚糖的 聚合物连接。所述修饰在题为“作为治疗剂的修饰肽”的公开号为WO 00/24782专利申请中有详细说明，该专利申请被以全文形式引入本文 参考。

一种开发治疗剂的非常不同的方法是肽文库筛选。蛋白配体与它 的受体的相互作用，通常是在较大的界面上进行的。不过，正如在人 类生长激素及其受体上所证实的，在所述界面上仅有少数的关键残基 提供了大部分的结合能量。Clackson等(1995)，Science 267：383-6。所 述蛋白配体总体上在正确拓扑学上仅仅发挥结合表位的作用，或发挥 与结合无关的功能。因此，仅为“肽”长度(2-40个氨基酸)的分子 能够结合在特定大型蛋白配体的受体蛋白上。所述肽可以模拟所述大 型蛋白配体的生物活性(“肽刺激剂”)或通过竞争结合，抑制所述大 型蛋白配体的生物活性(“肽拮抗剂”)。

噬菌体展示肽文库业已作为鉴定所述肽刺激剂和拮抗剂的有效方 法出现。例如，参见Scott等(1990)，Science 249：386；Devlin等(1990)， Science 249：404；美国专利5,223,409，于1993年6月29日授权；美 国专利5,733,731，于1998年5月31日授权；美国专利5,498,530，于 1996年3月12日授权；美国专利5,432,018，于1995年7月11日授权； 美国专利5,338,665，于1994年8月16日授权；美国专利5,922,545， 于1999年7月13日授权；WO 96/40987，于1996年12月19日公开； 和WO 98/15833，公开日为1998年4月16日(以上每一份文献都被以 全文形式引入本文作为参考)。在所述文库中，通过与丝状噬菌体的 外被蛋白融合展示随机的肽序列。通常，所展示的肽是针对固定的靶 蛋白亲和洗脱的。所保留的噬菌体可以通过连续循环的亲和纯化和再 繁殖富集。可以对最佳结合肽进行测序，以便确定在一个或多个结构 上相关的肽家族内的关键残基。例如，参见Cwirla等(1997)，Science 276： 1696-9，其中，鉴定了两个不同的家族。所述肽序列还可能暗示哪些残 基可以通过丙氨酸扫描或通过在DNA水平上的诱变被安全地取代。可 以制备并且筛选诱变文库，以便进一步优化所述最佳结合物的序列。 Lowman(1997)，Ann.Rev.Biophys.Biomol.Struct.26：401-24。

还可利用蛋白-蛋白相互作用的结构分析揭示能模拟大型蛋白配 体的结合活性的肽。在所述分析中，晶体结构可以揭示所述大型蛋白 配体的关键残基的身份和相对取向，通过它可以设计一种肽。例如， 参见Takasaki等(1997)，Nature Biotech.15：1266-70。所述分析方法还 可用于研究受体蛋白和通过噬菌体展示筛选的肽之间的相互作用，这 种研究可以揭示所述肽的其他修饰，以便提高结合亲和力。

其他方法与肽研究中的噬菌体展示进行竞争。可以将一种肽文库 融合在lac抑制子的羧基末端，并且在大肠杆菌中表达。另一种基于大 肠杆菌的方法可以通过与肽聚糖-结合的脂蛋白(PAL)融合展示在细胞 外膜上。在以下说明中，上述和其他方法被统称为“大肠杆菌展示”。 在另一种方法中，在核糖体释放之前终止随机RNA翻译，得到了仍然 与相关的RNA结合的多肽文库。在以下说明中，上述及相关的方法被 统称为“核糖体展示”。其他方法采用与RNA连接的肽；例如，PRO 融合技术，Phylos，Inc.。例如，参见Roberts&Szostak(1997)，Proc.Natl. Acad.Sci.USA，94：12297-303。在以下说明中，该方法以及相关方法 被统称为“RNA-肽筛选”。业已开发出了化学衍生的肽文库，其中， 将肽固定在诸如聚乙烯棒或溶剂可渗透的树脂上的稳定的、非生物学 材料上。另一种化学衍生的肽文库利用照相平板印刷技术扫描固定在 玻璃载玻片上的肽。在以下说明中，上述和相关方法被统称为“化学- 肽筛选”。化学-肽筛选的优点可能是，它可以使用D-氨基酸或其他非 天然类似物，以及非肽因子。生物学和化学方法在以下文献中进行过 综述：Wells&Lowman(1992)，Curr.Opin.Biotechnol.3：355-62。从理 论上讲，人们可以通过噬菌体展示、RNA-肽筛选和上面提到的其他方 法发现任何蛋白的肽模拟物。

发明概述

本发明涉及能调节TALL-1活性的治疗剂。根据本发明，TALL-1 的调节剂可以包括一种氨基酸序列Dz2Lz4(SEQ ID NO：108)，其中，z2 是氨基酸残基，而z4是苏氨酰或异亮氨酰。TALL-1的所述调节剂包括 具有下式的分子：

I(a)  a1a2a3CDa6La8a9a10Ca12a13a14

(SEQ.ID.NO：100)

其中：

a1，a2，a3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

a6是氨基酸残基；

a9是碱性或疏水性残基；

a8是苏氨酰或异亮氨酰；

a10是氨基酸残基；

a12是中性疏水残基；

a13和a14各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基。

I(b)b1b2b3Cb5b6Db8Lb10b11b12b13b14Cb16b17b18

(SEQ.ID.NO：104)

其中：

b1和b2各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

b3是酸性或酰胺残基；

b5是氨基酸残基；

b6是芳族残基；

b8是氨基酸残基；

b10是T或I；

b11是碱性残基；

b12和b13各自独立地是氨基酸残基；

b14是中性疏水残基；和

b16，b17和b18各自独立地是缺失的或是氨基酸残基。

I(c)c1c2c3Cc5Dc7Lc9c10c11c12c13c14Cc16c17c18

(SEQ.ID.NO：105)

其中：

c1，c2和c3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

c5是氨基酸残基；

c7是氨基酸残基；

c9是T或I；

c10是碱性残基；

c11和c12各自独立地是氨基酸残基；

c13是中性疏水残基；

c14是氨基酸残基；

c16是氨基酸残基；

c17是中性疏水残基；和

c18是氨基酸残基或者是缺失的。

I(d)d1d2d3Cd5d6d7WDd10Ld12d13d14Cd15d16d17

(SEQ.ID.NO：106)

其中：

d1，d2和d3各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

d5，d6和d7各自独立地是氨基酸残基；

d10是氨基酸残基；

d12是T或I；

d13是氨基酸残基；

d14是氨基酸残基；而

d16，d17和d18各自独立地是缺失的或是氨基酸残基。

I(e)e1e2e3Ce5e6e7De9Le11Ke13Ce15e16e17e18

(SEQ.ID.NO：107)

其中：

e1，e2和e3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

e5，e6，e7，e9和e13各自独立地是氨基酸残基；

e11是T或I；和

e15，e16和e17各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基。

I(f)f1f2f3Kf5Df7Lf9f10Qf12f13f14

(SEQ.ID NO：109)

其中：

f1，f2和f3是缺失的或者是氨基酸残基(当f12，f13，f14之一是C 时，f1，f2和f3中的一个优选是C)；

f5是W，Y或F(优选W)；

f7是氨基酸残基(优选L)；

f9是T或I(优选T)；

f10是K，R或H(优选K)；

f12是C，中性疏水残基，或者碱性残基(优选W，C或R)；

f13是C，中性疏水残基或者是缺失的(优选V)；和

f14是任何氨基酸残基或者是缺失的；

其前提是，f1，f2和f3中只有一个可以是C，并且f12，f13和f14中 只有一个可以是C。

上面的式I(a)至I(f)的化合物整合了Dz2Lz4以及下面的SEQ ID NO：63。正如在下面的实施例1中所披露的，I(f)的序列是作为共有序 列衍生的。在式I(f)的化合物中，优选下式

I(f)f1f2f3KWDf7Lf9KQf12f13f14

(SEQ.ID NO：125)

属于式I(f)的化合物包括SEQ ID NOS：32，58，60，62，63，66， 67，69，70，114，115，122，123，124，147-150，152-177，179，180， 187。

同样符合本发明的是具有以下共有基序的化合物：

PFPWE

(SEQ ID NO：110)

它也能结合TALL-1。

另外，符合本发明的化合物是具有下式的化合物：

I(g)g1g2g3Cg5PFg8Wg10Cg11g12g13

(SEQ.ID.NO.101)

其中：

g1，g2和g3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

g5是中性疏水残基；

g8是中性疏水残基；

g10是酸性残基；

g12和g13各自独立地是氨基酸残基；和

g14是缺失的或者是氨基酸残基。

I(h)h1h2h3CWh6h7WGh10Ch12h13h14

(SEQ.ID.NO：102)

其中：

h1，h2和h3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

h6是疏水性残基；

h7是疏水性残基；

h10是酸性或极性疏水性残基；和

h12，h13和h14各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基。

I(i)i1i2i3Ci5i6i7i8i9i10Ci12i13i14

(SEQ.ID.NO：103)

其中：

i1是缺失的或者是氨基酸残基；

i2是中性疏水残基；

i3是氨基酸残基；

i5，i6，i7和i8各自独立地是氨基酸残基；

i9是酸性残基；

i10是氨基酸残基；

i12和i13各自独立地是氨基酸残基；和

i14是中性疏水残基。

由式I(g)-I(i)所定义的化合物也能结合TALL-1。

另外，根据本发明，TALL-1的调节剂包括：

a)TALL-1调节结构域(例如，式I(a)-I(i)的氨基酸序列)，优选 氨基酸序列Dz2Lz4，或者通过噬菌体展示、RNA-肽筛选或上面提到的 其他技术由它所衍生的序列；和

b)一种媒介物(vehicle)，如聚合物(例如，PEG或葡聚糖)或Fc 结构域，它是优选的；

其中，所述媒介物是与TALL-1调节结构域共价连接的。正如下 文所披露的，所述媒介物和TALL-1调节结构域可以通过TALL-1调节 结构域的N-或C-末端连接。优选的是媒介物是Fc结构域，而优选的 Fc结构域是IgG Fc结构域。在本文中，所述Fc-连接的肽被称为“肽体 (peptibodies)”。优选的TALL-1调节结构域包括在下面的表1和2中 所披露的氨基酸序列。其他TALL-1调节结构域，可以通过本文所提到 的噬菌体展示，RNA-肽筛选和其他技术制备。

另外，本发明涉及一种用于生产TALL-1调节剂的方法，该方法 包括：

a.筛选至少一种能结合TALL-1的肽；和

b.让所述肽与一种媒介物共价连接。

优选的媒介物是Fc结构域。步骤(a)优选是通过选自下面的表2 中的肽序列或选自本文所提到的噬菌体展示、RNA-肽筛选或其他技术 完成的。

本发明的化合物可以通过标准合成方法、重组DNA技术或制备肽 和融合蛋白的任何其他方法制备。包括非肽部分的本发明的化合物， 可以通过标准有机化学反应合成，另外，在需要时还可以采用标准肽 化学反应。

与本发明的化合物相关的主要用途是作为治疗剂或预防剂。所述 与媒介物连接的肽，可能具有与所述肽所模拟的天然配体相当-或者甚 至更高-的活性。

通过将本发明的化合物与合适的药用载体材料配制在一起，并且 给需要它的诸如人(或其他哺乳动物)的患者施用有效量，本发明的 化合物可用于治疗和预防目的。本发明还包括其他相关的方面。

通过阅读附图和本发明的详细说明，可以了解本发明的很多其他 特征和优点。

附图的简要说明

图1表示典型Fc双体，它可能源于IgG1抗体。附图中的“Fc” 表示本发明“Fc结构域”含义内的任何Fc变体。“X1”和“X2”表示 如下文所定义的肽或接头肽组合。具体的双体如下：

A，D：单一二硫键结合的双体。IgG1抗体在该抗体的铰链区通常 具有两个二硫键。图1A和1D中的Fc结构域可以通过在两个二硫键位 点之间截断或通过用非活性残基(例如，丙氨酰)取代半胱氨酰残基。 在图1A中，Fc结构域连接在所述肽的氨基末端；在图1D中，连接在 羧基末端。

B，E：双二硫键双体。该Fc结构域可以通过截短亲代抗体以便保 留Fc结构域链上的两个半胱氨酰残基而形成或者通过用包括编码所述 Fc结构域的序列的构建体表达。在图1B中，Fc结构域连接在所述肽 的氨基末端；在图1E中，连接在羧基末端。

C，F：非共价双体。该Fc结构域可以通过截短或取代消除半胱氨 酰残基而形成。人们可能需要消除半胱氨酰残基，以便避免通过该半 胱氨酰残基与存在于其他宿主细胞中的蛋白的半胱氨酰残基起反应所 形成的杂质。所述Fc结构域的非共价结合由于将所述双体保持在一 起。其他双体可以通过使用源于不同类型抗体(例如，IgG2，IgM)的 Fc结构域形成。

图2表示本发明优选化合物的结构，它以药理学活性肽的串联重 复为特征。图2A表示单链分子，并且还可以表示该分子的第一构建体。 图2B表示一种双体，其中，所述接头肽部分仅存在于该双体的一条链 上。图2C表示在两条链上都具有肽部分的双体。图2C所示的双体是 在某些宿主细胞中表达编码图3A所示的单链的DNA构建体时能自主 形成。在其他宿主细胞中，将所述细胞放置在有利于双体形成的条件 下，或者所述双体可以在体外形成。

图3表示可用于本发明中的人IgG1 Fc的典型核酸和氨基酸序列 (分别为SEQ ID NOS：1和2)。

图4A-4F表示编码肽和接头的NdeI-SalI片段的核苷酸和氨基酸序 列(SEQ ID NOS：3-27)。

图5A-5M表示pAMG21-RANK-Fc载体的核苷酸序列(SEQ ID NO： 28)，它被用于构建本发明的Fc-连接的分子。以上附图确定了有关核酸 的多种特征，包括：

·启动子区PcopB，PrepA，RNAI，APHII，luxPR，和luxPL；

·编码APHII，luxR的mRNA；

·copB蛋白，copT，repAI，repA4，APHII，luxR，RANK，和Fc 蛋白的编码序列和氨基酸序列；

·蛋白copB，CRP的结合位点；

·发卡T1，T2，T7，和toop；

·lux蛋白的操纵子位点；

·Pflll08I，BglII，ScaI，BmnI，DrdII，DraIII，BstBI，AceIII， AflII，PflMI，BglI，SfiI，BstEII，BspLullI，NspV，BplI，EagI，BcgI， NsiI，BsaI，Pspl406I，AatII，BsmI，NruI，NdeI，ApaLI，Acc65I，KpnI， SalI，AccI，BspEI，AhdI，BspHI，EconI，BsrGI，BmaI，SmaI，SexAI， BamHI和BlpI的酶限制位点。

图6A和6B表示插入pCFM1656的单一的AatII(pCFM1656上 4364号位置)和SacII(pCFM1656的4585号位置)限制位点之间的DNA 序列(SEQ ID NO：97)，以便形成表达质粒pAMG21(ATCC保藏号 98113)。

图7表示能抑制TALL-1介导的B细胞增殖的TALL-1肽体(SEQ ID NO：70)。在存在10纳克/毫升TALL-1+2微克/毫升抗IgM抗体 的条件下，将来自B6小鼠的纯化B细胞(105)与标明数量的TALL-1共 有肽体一起在96孔平板上培养，重复3次。培养18小时之后，通过放 射性[3H]胸苷吸收测定增殖。所示出的数据表示平均值±SD三个重复 的孔。

图8表示TALL-1N-末端串联双体肽体(参见表5B中的SEQ ID NO： 123，124)优选被用于抑制TALL介导的B细胞增殖。在存在10纳克/ 毫升TALL-1+2微克/毫升抗IgM抗体的条件下，将来自B6小鼠的纯 化B细胞(105)与标明数量的TALL-112-3肽体和TALL共有肽体(表 5B中的SEQ ID NOS：115和122)或相关的双体肽体(SEQ ID NOS： 123，124)一起在96孔平板上培养，重复3次。培养18小时之后，通 过放射性[3H]胸苷吸收测定增殖。所示出的数据表示平均值±SD三个 重复的孔。

图9表示以高亲和力与AGP3结合的AGP3肽体。使用双曲线单 位点均匀结合模型由非线性回归的竞争曲线获得了解离平衡常数(KD) (KinExTM软件)。对于与人AGP3(SEQ ID NO：123)结合的AGP3肽体来 说，KD大约为4pM。

图10A和10B。在Biacore竞争测定中，AGP3肽体能抑制人类和 鼠类AGP3。将可溶性人TACI蛋白固定在B1芯片上。将1nM重组人 AGP3蛋白(上图)或5nM重组鼠类AGP3蛋白(下图)与标明数量 的AGP3肽体一起培养，然后加注到受体表面上。示出了相对的人AGP3 和鼠AGP3结合反应(SEQ ID NO：123)。

图11A和11B。在Biacore竞争测定中，AGP3肽体抑制了AGP3 与所有三种受体TACI，BCMA和BAFFR的结合。将重组可溶性受体 TACI，BCMA和BAFFR蛋白固定在CM5芯片上。将1nM重组人AGP3 (上图)与标明数量的AGP3肽体一起培养，然后加注到每一种受体表面 上。测定AGP3的相对结合。类似地，将1nM重组APRIL蛋白与标明 数量的AGP3肽体一起培养，然后加注到每一种受体表面上。AGP3肽 不能抑制APRIL与所有三种受体的结合(SEQ ID NO：123)。

图12A和12B。AGP3能抑制通过人AGP3刺激诱导的小鼠血清免 疫球蛋白含量的提高。每天1次，连续7天给Balb/c小鼠腹膜内注射1 mg/Kg人AGP3蛋白，同时注射标明剂量的盐水、人Fc或AGP3肽体， 并且在第8天放血。通过ELISA测定血清总IgM和IgA含量(SEQ ID NO： 123)。

图13.AGP3肽体治疗减轻了小鼠CIA模型的关节炎严重程度。通 过在尾巴根处经皮注射用完全弗氏佐剂乳化的牛II型胶原(bCII)，对 8-12周大的DBA/1雄性小鼠进行免疫，并且在首次免疫之后三周，通 过用不完全弗氏佐剂乳化的bCII进行强化免疫。从强化免疫当天开始 用标明剂量的AGP3肽体治疗4周时间。正如以前所披露的(Khare等， J.Immunol..155：3653-9，1995)，采用0-3的评分等级，分别对所有4 只爪子进行关节炎严重性评分(SEQ ID NO：123)。

图14.AGP3肽体治疗抑制了抗胶原抗体在小鼠CIA模型中的产 生。如上文所述，在最后一次处理之后1周(35天)采集血清样品。 通过ELISA分析，测定血清抗胶原II抗体含量(SEQ ID NO：123)。

图15A和15B。AGP3肽体治疗延缓了蛋白尿的发作，并且改善 了NZB/NZW狼疮小鼠的存活。用PBS或标明剂量的AGP3肽体(SEQ ID NO：123)或人Fc蛋白对易感狼疮的5个月大小的NZB×NZBW F1小鼠 进行腹膜内注射治疗，每周3次，共8周时间。在整个实验期间，用 Albustix试剂条(Bayer AG)每月评估尿液中的蛋白。

图16A和16B表示优选的TALL-1结合肽体的核酸和氨基酸序列 (SEQ ID NOS：189和123)。

发明详述

术语的定义

除非在特定情况中另有限定，在本说明书中所使用的术语定义如 下：

一般定义

术语“包括(comprising)”表示化合物在特定序列的N-或C-末端中 的一个或两个上可以包括其他氨基酸。当然，所述其他氨基酸不应当 明显干扰该化合物的活性。

另外，本发明还包括本发明化合物的可以药用的盐。术语“生理 学可接受的盐”表示已知的或者后来发现的在药理学上可接受的任何 盐。某些具体例子是：乙酸盐；三氟乙酸盐；氢卤酸盐，如氢氯酸盐 和氢溴酸盐；硫酸盐；柠檬酸盐；酒石酸盐；乙醇酸盐；和草酸盐。

氨基酸

术语“酸性残基”表示具有包括酸性基团的侧链的D-或L-形式的 具有包括酸性基团的侧链的氨基酸残基。典型的酸性残基包括D和E。

术语“酰胺残基”表示具有包括酸性基团的酰胺衍生物的侧链的 D-或L-形式的氨基酸。典型的残基包括N和Q。

术语“芳族残基”表示具有芳族基团的侧链的D-或L-形式的氨基 酸残基。典型的芳族残基包括F，Y，和W。

术语“碱性残基”表示具有碱性基团的侧链的D-或L-形式的氨基 酸残基。典型的碱性残基包括H，K，和R。

术语“亲水性残基”表示包括极性基团侧链的D-或L-形式的氨基 酸残基。典型的亲水性残基包括C，S，T，N，和Q。

术语“非功能残基”表示具有缺少酸性、碱性或芳族基团的侧链 的D-或L-形式的氨基酸残基。典型的非功能性氨基酸残基包括M，G， A，V，I，L和正亮氨酸(Nle)。

术语“中性疏水残基”表示具有缺少碱性、酸性或极性基团的侧 链的D-或L-形式的氨基酸残基。典型的中性疏水氨基酸残基包括A， V，L，I，P，W，M，和F。

术语“极性疏水性残基”表示具有包括极性基团的侧链的D-或L- 形式的氨基酸残基。典型的极性疏水性氨基酸残基包括T，G，S，Y， C，Q，和N。

术语“疏水性残基”表示具有缺少碱性或酸性基团的侧链的D-或 L-形式的氨基酸残基。典型的疏水性氨基酸残基包括A，V，L，I，P， W，M，F，T，G，S，Y，C，Q，和N。

肽

术语“肽”表示具有1-40个氨基酸的分子，优选具有5-20个氨基 酸的分子。典型的肽可以包括天然存在分子的TALL-1调节结构域或随 机化的序列。

术语“随机化的”在用于表示肽序列时，是指完全随机的序列(例 如，通过噬菌体展示方法或RNA-肽筛选方法选择的)和天然存在的分 子上的一个或多个残基，被天然存在的分子上的某个位置上不存在的 氨基酸残基所取代的序列。用于鉴定肽序列的典型方法，包括噬菌体 展示，大肠杆菌展示，核糖体展示，RNA-肽筛选，和化学筛选等。

术语“TALL-1调节结构域”表示能结合TALL-1的任何氨基酸序 列，并且包括天然存在的序列或随机化的序列。典型的TALL-1调节结 构域可以通过噬菌体展示或本文提到过的其他方法鉴定或衍生。

术语“TALL-1拮抗剂”表示能与TALL-1结合，并且增强或减弱 一种或多种特定参数的分子，所述增强或减弱与完整长度天然TALL-1 对所述参数的影响相反。例如，所述活性可以通过披露于以下文献中 的测定方法测定：题为“TNF-相关蛋白”的公开日为2000年8月17 日的WO 00/47740的专利申请的材料和方法部分的标题为“AGP-3的 生物学活性”的小部分。

媒介物和肽体

术语“媒介物(vehicle)”表示能抑制治疗性蛋白降解和/或延长半 衰期，减弱毒性，减弱免疫原性或提高其生物学活性的分子。典型的 媒介物包括Fc结构域(它是优选的)以及线性聚合物(例如聚乙二醇 (PEG)，聚赖氨酸，葡聚糖等)；支链聚合物(例如，参见于1981年9 月15日授予Denkenwalter等的美国专利4289872；于1993年7月20 日授予Tam的5229490；于1993年10月28日公开的Frechet等的WO 93/21259)；脂类；胆甾醇类(如类固醇)；糖类或寡聚糖(例如葡聚 糖)；能与挽救受体结合的任何天然或合成蛋白、多肽或肽；白蛋白， 包括人血清白蛋白(HSA)，亮氨酸拉链结构域，和其他诸如此类的蛋 白和蛋白片段。下面将对媒介物作进一步说明。

术语“天然Fc”表示包括通过消化完整抗体而产生的序列的单体 或多聚体形式的分子或序列。天然Fc的原始免疫球蛋白来源优选人类 来源，并且可以是任何免疫球蛋白，不过优选IgG1和IgG2。天然Fc’s 由单聚体多肽组成，所述单聚体多肽可以通过共价(二硫键)和非共 价结合，连接成双体或多聚体形式。天然Fc分子的单体亚基之间的分 子间二硫键的数量，根据类型(例如IgG，IgA，IgE)或亚型(例如IgG1， IgG2，IgG3，IgA1，IgGA2)在1-4之间变化。天然Fc的一种例子是通 过木瓜蛋白酶消化IgG所产生的二硫键连接的双体(参见Ellison等 (1982)，Nucleic Acids Res.10：4071-9)。本文所使用的术语“天然Fc” 是对单体、双体和多聚体形式的统称。

术语“Fc变体”表示由天然Fc修饰而来的分子或序列，不过，它 仍然包括对挽救受体的结合位点FcRn。国际申请WO 97/34631(公开日 为1997年9月25日)和WO 96/32478披露了典型的Fc变体，以及与所 述挽救受体的相互作用，以上申请被以全文形式引入本文作为参考。 因此，术语“Fc变体”包括来自非人天然Fc的人源化分子或序列。另 外，天然Fc包括可以除去的位点，因为它们提供了本发明融合分子所 不需要的结构特征或生物学活性。因此，术语“Fc变体”包括缺少一 个或多个天然Fc位点或残基的分子或序列，所述位点或残基影响或与 (1)二硫键形成，(2)与选择的宿主细胞的不兼容性，(3)在选择 的宿主细胞中表达时N-末端的不一致性，(4)糖基化，(5)与补体 的相互作用，(6)与Fc受体而不是挽救受体结合，或(7)抗体决定 型细胞细胞毒性(ADCC)相关。下面将对Fc变体作更详细地说明。

术语“Fc结构域”包括如上文所定义的天然Fc和Fc变体分子和 序列。对于Fc变体和天然Fc’s来说，术语“Fc结构域”包括单体或多 聚体形式，无论是通过消化完整抗体而形成的还是通过其他方式形成 的。

用于表示Fc结构域或分子的术语“多聚体(multimer)”包括表示 具有两个或两个以上共价、非共价或同时通过共价和非共价相互作用 结合的多肽链的分子的Fc结构域。IgG分子典型地形成双体；IgM，五 聚体；IgD，双体；和IgA，单体，双体，三体，或四聚体。多聚体可 以通过采用Fc的天然Ig来源的序列和所产生的活性或通过衍生(如下 文所定义的)所述天然Fc而形成。

用于Fc结构域或分子上的术语“双体(dimer)”包括表示具有两个 共价或非共价结合的多肽链的分子的Fc结构域。因此，在图1中示出 了本发明范围内的典型的双体。

术语“衍生化”和“衍生物”或“衍生化的”包括有关过程和所 得到的相应的化合物，其中(1)所述化合物具有一个环状部分，例如， 在所述化合物内半胱氨酰残基之间的交联；(2)所述化合物是交联的 或具有交联位点；例如，所述化合物具有一个半胱氨酸残基，因此在 培养中或在体内形成交联的双体；(3)一个或多个肽键被非肽键所取 代；(4)N-末端被-NRR1，NRC(O)R1，-NRC(O)OR1，-NRS(O)2R1， -NHC(O)NHR琥珀亚胺基或取代过的或未取代过的苄氧基羰基-NH- 所取代，其中R和R1和环状取代基如下文所定义；(5)C-末端被-C(O)R2 或-NR3R4所取代，其中，R2，R3和R4如下文所定义；和(6)其中的 单个氨基酸组份通过用能够与特定侧链或末端残基起反应的试剂处理 修饰过的化合物。在下文中将对衍生物作进一步说明。

术语“肽体”表示包括Fc结构域和至少一种肽的分子。所述肽体 可以是多聚体或它的双体或片段，并且它们可以是衍生化的。在本发 明中，当V1是Fc结构域时，下面的式II-VI的分子是肽体。

化合物的结构

一般说明。本发明人鉴定了能够与TALL-1结合并且调节其生物 学活性的序列。可以通过上面所提到的方法对所述序列进行修饰，通 过所述修饰可以改变一个或多个氨基酸，同时保持或者甚至提高所述 肽的结合亲和力。

在根据本发明制备的物质的组合物中，可以通过肽的N-末端或C- 末端将所述肽与媒介物连接。所述任何肽都可以串联连接(即顺序连 接)，有或没有接头。因此，本发明的媒介物-肽分子可以通过下式表 示：

II

(X1)a-V1-(X2)b

其中：V1是媒介物(优选是Fc结构域)；

X1和X2各自独立地选自-(L1)c-P1，-(L1)c-P1-(L2)d-P2，-(L1)c-P1- (L2)d-P2-(L3)e-P3，和-(L1)c-P1-(L2)d-P2-(L3)e-P3-(L4)f-P4；

p1，p2，p3和P4各自独立地是TALL-1调节结构域的序列，如式I(a) -I(i)的序列；

L1，L2，L3和L4各自独立地是接头；和

a，b，c，d，e和f各自独立地是0或1，其前提是，a和b中的 至少一个是1。

因此，化合物II包括下式的优选化合物

III

X1-V1

和它的多聚体，其中，V1是Fc结构域，并且连接在A1的C-末 端；

IV

V1-X2

以及它的多聚体，其中，V1是Fc结构域，并且与A2的N-末端连 接；

V

V1-(L1)c-P1

和它的多聚体，其中，V1是Fc结构域，并且与-(L1)c-P1的N-末 端连接；和

VI

V1-(L1)c-P1-(L2)d-P2

和它的多聚体，其中，V1是Fc结构域，并且与-L1-P1-L2-P2的N- 末端连接。

肽。本发明的肽可以用作TALL-1调节肽或用作式II-VI分子中的 TALL-1调节结构域。本发明的分子包括可以通过本领域已知方法制备 的肽序列。

优选的肽序列是具有下文所述取代基的上面的式I(a)的序列。

表1--优选的肽取代基

  式I(a)   a8是T；   a9是碱性残基(最优选K)；   a12是中性疏水残基(最优选F)   式I(b)   b3是D、Q或E；   b6是W或Y；   b10是T；   b11是K或R；   b14是V或L   式I(c)   c9是T；   c10是K或R；   c13是I、L或V；   c17是A或L   式I(d)   d12是T   式I(e)   e11是T   式I(f)   f9是T；   f10是K；   f13是V   式I(g)   g5是W；   g8是P；   g10是E；   g13是碱性残基   式I(h)   h1是G；

  h6是A；   h7是中性疏水残基；   h10是酸性残基   式I(i)   i2是W；   i14是W

优选的肽序列如下面的表2所示

表2--优选的TALL-1调节结构域

  序列   SEQ   ID NO：   PGTCFPFPWECTHA   29   WGACWPFPWECFKE   30   VPFCDLLTKHCFEA   31   GSRCKYKWDVLTKQCFHH   32   LPGCKWDLLIKQWVCDPL   33   SADCYFDILTKSDVCTSS   34   SDDCMYDQLTRMFICSNL   35   DLNCKYDELTYKEWCQFN   36   FHDCKYDLLTRQMVCHGL   37   RNHCFWDHLLKQDICPSP   38   ANQCWWDSLTKKNVCEFF   39   YKGRQMWDILTRSWVVSL   126   QDVGLWWDILTRAWMPNI   127   QNAQRVWDLLIRTWVYPQ   128   GWNEAWWDELTKIWVLEQ   129   RITCDTWDSLIKKCVPQS   130   GAIMQFWDSLTKTWLRQS   131   WLHSGWWDPLTKHWLQKV   132   SEWFFWFDPLTRAQLKFR   133   GVWFWWFDPLTKQWTQAG   134   MQCKGYYDILTKWCVTNG   135   LWSKEVWDILTKSWVSQA   136   KAAGWWFDWLTKVWVPAP   137   AYQTWFWDSLTRLWLSTT   138   SGQHFWWDLLTRSWTPST   139   LGVGQKWDPLTKQWVSRG   140   VGKMCQWDPLIKRTVCVG   141   CRQGAKFDLLTKQCLLGR   142   GQAIRHWDVLTKQWVDSQ   143   RGPCGSWDLLTKHCLDSQ   144   WQWKQQWDLLTKQMVWVG   145   PITICRKDLLTKQVVCLD   146   KTCNGKWDLLTKQCLQQA   147   KCLKGKWDLLTKQCVTEV   148   RCWNGKWDLLTKQCIHPW   149   NRDMRKWDPLIKQWIVRP   150   QAAAATWDLLTKQWLVPP   151   PEGGPKWDPLTKQFLPPV   152   QTPQKKWDLLTKQWFTRN   153   IGSPCKWDLLTKQMICQT   154   CTAAGKWDLLTKQCIQEK   155   VSQCMKWDLLTKQCLQGW   156   VWGTWKWDLLTKQYLPPQ   157   GWWEMKWDLLTKQWYRPQ   158   TAQVSKWDLLTKQWLPLA   159   QLWGTKWDLLTKQYIQIM   160   WATSQKWDLLTKQWVQNM   161   QRQCAKWDLLTKQCVLFY   162

  KTTDCKWDLLTKQRICQV   163   LLCQGKWDLLTKQCLKLR   164   LMWFWKWDLLTKQLVPTF   165   QTWAWKWDLLTKQWIGPM   166   NKELLKWDLLTKQCRGRS   167   GQKDLKWDLLTKQYVRQS   168   PKPCQKWDLLTKQCLGSV   169   GQIGWKWDLLTKQWIQTR   170   VWLDWKWDLLTKQWIHPQ   171   QEWEYKWDLLTKQWGWLR   172   HWDSWKWDLLTKQWVVQA   173   TRPLQKWDLLTKQWLRVG   174   SDQWQKWDLLTKQWFWDV   175   QQTFMKWDLLTKQWIRRH   176   QGECRKWDLLTKQCFPGQ   177   GQMGWRWDPLIKMCLGPS   178   QLDGCKWDLLTKQKVCIP   179   HGYWQKWDLLTKQWVSSE   180   HQGQCGWDLLTRIYLPCH   181   LHKACKWDLLTKQCWPMQ   182   GPPGSVWDLLTKIWIQTG   183   ITQDWRFDTLTRLWLPLR   184   QGGFAAWDVLTKMWITVP   185   GHGTPWWDALTRIWILGV   186   VWPWQKWDLLTKQFVFQD   187   WQWSWKWDLLTRQYISSS   188   NQTLWKWDLLTKQFITYM   60   PVYQGWWDTLTKLYIWDG   61   WLDGGWRDPLIKRSVQLG   62   GHQQFKWDLLTKQWVQSN   63   QRVGQFWDVLTKMFITGS   64   QAQGWSYDALIKTWIRWP   65   GWMHWKWDPLTKQALPWM   66   GHPTYKWDLLTKQWILQM   67   WNNWSLWDPLTKLWLQQN   68   WQWGWKWDLLTKQWVQQQ   69   GQMGWRWDPLTKMWLGTS   70

应当指出的是，TALL-1的已知受体与优选的肽具有某些序列同源 性：

12-3    LPGCKWDLLIKQWVCDPL

EAFFR   MRRGPRSLRGRDAPVPTPCVPTECYDLLVBKCVDCRLL

TACI    TICNHQSQRTCAAFCRSLSCRKEQGKFYDHLLBDCISCASI

BCMA    FVSPSQEIRGRFRRMLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRC

(分别为序列SEQ ID NOS：33，195，196和197)。

任何含有半胱氨酸残基的肽都可以与另一种含有Cys的肽交联， 它们中的一个或两个可以与媒介物连接。任何具有一个以上Cys残基 的肽也都可以形成肽内二硫键。上述任何肽都可以按下文所述方法衍 生化。

其他有用的肽序列可以通过对表2中的氨基酸序列进行保守性和/ 或非保守性修饰而形成。

保守性修饰能产生具有类似于对它进行所述修饰的肽的功能和化 学特征的肽。相反，通过在氨基酸序列上进行选择性取代可以获得对 所述肽的功能和/或化学特征的实质性修饰，所述修饰在以下方面的作 用显著不同：维持(a)取代部位的分子主链的结构，例如，作为折叠 或螺旋构象，(b)所述分子对于靶位点的电荷或疏水性；或(c)所述 分子的大小。

例如，“保守性氨基酸取代”可能包括非天然残基对天然氨基酸 残基的取代，以便对该位点上的氨基酸残基的极性或电荷少有或没有 影响。另外，正如以前说明“丙氨酸扫描诱变时”所披露的，所述多肽 上的任何天然残基都可以用丙氨酸取代(例如，参见MacLennan等， 1998，Acta Physiol.Scand.Suppl.643：55-67；Sasaki等，1998，Adv. Biophys.35：1-24，以上文献讨论了丙氨酸扫描诱变)。

理想的氨基酸取代(无论是保守性或非保守性取代)可以由本领 域技术人员在需要进行所述取代时确定。例如，可以用氨基酸取代鉴 定所述肽序列的重要残基，或用于提高或减弱本文所披露的肽或媒介 物-肽分子(参见上式)的亲和力。典型的氨基酸取代如表3所示。

表3-氨基酸取代

  原残基   例示取代   优选取代   Ala(A)  Val，Leu，Ile   Val   Arg(R)  Lys，Gln，Asn   Lys   Asn(N)  Gln   Gln   Asp(D)  Glu   Glu   Cys(C)  Ser，Ala   Ser   Gln(Q)  Asn   Asn   Glu(E)  Asp   Asp   Gly(G)  Pro，Ala   Ala

  His(H)   Asn，Gln，Lys，Arg   Arg   Ile(I)   Leu，Val，Met，Ala，   Phe，正亮氨酸   Leu   Leu(L)   正亮氨酸，Ile，Val，   Met，Ala，Phe   Ile   Lys(K)   Arg，1，4-二氨基丁   酸，Gln，Asn   Arg   Met(M)   Leu，Phe，Ile   Leu   Phe(F)   Leu，Val，Ile，Ala，   Tyr   Leu   Pro(P)   Ala   Gly   Ser(S)   Thr，Ala，Cys   Thr   Thr(T)   Ser   Ser   Trp(W)   Tyr，Phe   Tyr   Tyr(Y)   Trp，Phe，Thr，Ser   Phe   Val(V)   Ile，Met，Leu，Phe，   Ala，正亮氨酸   Leu

在某些实施方案中，保守性氨基酸取代还包括非天然存在的氨基 酸残基，这些残基是通过化学肽合成整合的，而不是通过在生物学系 统中合成整合的。

正如在上面的“术语的定义”部分所指出的，天然存在的残基可 以根据可用于序列修饰的共同的侧链特性进行分类。例如，非保守性 取代可能涉及一种类型的成员对另一种类型的成员的取代。可以将所 述取代残基导入所述肽的与非人直向同源基因同源的区域，或导入所 述分子的非同源区。另外，人们还可以用P或G进行修饰，以便影响 侧链的方向。

在进行所述修饰时，可以考虑氨基酸的亲水性指数。根据其疏水 性和电荷特征，为每一种氨基酸确定一个亲水指数，所述亲水指数为： 异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱 氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏 氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)； 组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬 酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。

亲水性氨基酸指数在赋予蛋白的相互作用生物学功能方面的重要 性为本领域所公知。Kyte等，J.Mol.Biol.，157：105-131(1982)。已知， 某些氨基酸可以取代具有类似亲水指数或得分的其他氨基酸，并且仍 然保留类似的生物学活性。在进行基于亲水性指数的改变时，优选取 代其亲水指数在±2以内的氨基酸，特别优选在±1范围内的氨基酸， 更优选±0.5范围内的氨基酸。

本领域还可以理解的是，类似氨基酸的取代还可以根据亲水性有 效进行。一种蛋白的最大局部平均亲水性，是由其相邻氨基酸的亲水 性决定的，这种亲水性与它的免疫原性和抗原性相关，即与该蛋白的 生物学特性相关。

业已为氨基酸确定了以下亲水性值：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)； 天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)； 谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(- 0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮 氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。 在基于类似的亲水性值进行取代时，优选取代其疏水性值在±2以内的 氨基酸，特别优选在±1范围内的氨基酸，更优选±0.5范围内的氨基 酸。人们还可以根据亲水性从一级氨基酸序列上确定表位。所述区域 又被称作“表位核心区”。

本领域技术人员可以用众所周知的技术确定在上述序列中所提供 的多肽的合适的变体。为了确定所述分子的可以改变而又不破坏活性 的合适部位，本领域技术人员可以针对被认为是对活性不重要的区进 行。例如，当来自相同物种或来自其他物种的具有相似活性的相似的 多肽是已知的时，本领域技术人员可以将一种肽的氨基酸序列与类似 肽的序列进行比较。通过这种比较，人们可以确定在类似多肽之间保 守的所述分子的残基和部分。还可以理解的是，在一种肽的相对所述 类似肽而言不保守的部位上进行的改变，不大可能对所述肽的活性和/ 或结构造成负面影响。本领域技术人员还可以理解的是，即使是在相 对保守的区域，人们也可以用化学上类似的氨基酸取代天然存在的氨 基酸，同时又保留了其活性(保守性氨基酸残基取代)。因此，即使 是对生物学活性或结构重要的部位也可以进行保守性氨基酸取代，而 又不破坏其生物学活性或不会对所述肽的结构产生负面影响。

另外，本领域技术人员可以进行结构-功能研究，以便确定类似肽 上的对活性或结构重要的残基。就所述比较而言，人们可以预测一种 肽上的氨基酸残基的重要性，所述残基相当于对类似肽的活性或结构 重要的氨基酸残基。本领域技术人员可以用化学上类似的氨基酸取代 所述肽的推测的重要氨基酸残基。

人们还可以相对类似多肽的结构，分析三维结构和氨基酸序列。 根据所述信息，本领域技术人员可以推测一种肽的氨基酸残基相对其 三维结构的排列。本领域技术人员可以选择不对推测存在于所述蛋白 表面上的氨基酸残基进行基团改变，因为所述残基可能参与和其他分 子的重要的相互作用。另外，本领域技术人员可以制备在每一个需要 的氨基酸残基上包括单一的氨基酸取代的测验变体。然后，可以用本 领域技术人员所公知的活性测定方法筛选所述变体。可以利用所述数 据收集有关合适变体的信息。例如，如果人们发现对一个特定氨基酸 残基的取代会导致受到破坏的、不希望的减弱的或不合适的活性的 话，具有这种取代的变体就应当避免。换句话说，根据从所述常规实 验所收集到信息，本领域技术人员可以方便地确定应当避免单独的或 与其他突变组合的进一步取代的氨基酸。

大量的科技文献业已披露了对二级结构的预测。参见Moult J.， Curr.Op.in Biotech.，7(4)：422-427(1996)，Chou等，Biochemistry， 13(2)：222-245(1974)；Chou等，Biochemistry，113(2)：211-222(1974)； Chou等，Adv.Enzymol.Relat.Areas Mol.Biol.，47：45-148(1978)；Chou 等，Ann.Rev.Biochem.，47：251-276和Chou等，Biophys.J.，26：367-384 (1979)。另外，目前可以获得用于协助预测二级结构的计算机程序。预 测二级结构的一种方法是基于同源性模拟。例如，具有超过30％的序 列相同性，或超过40％的相似性的两种多肽或蛋白通常具有类似的结 构拓扑关系。蛋白结构数据库(PDB)的最近的增长，业已提供了增强了 的二级结构的可预测性，包括在一种多肽或蛋白结构内的折叠的潜在 数量。参见Holm等，Nucl.Acid.Res.，27(1)：244-247(1999)。有人业 已提出(Brenner等Curr.Op.Struc.Biol.，7(3)：369-376(1997))，在特 定多肽或蛋白内存在有限数量的折叠，并且一旦分析了关键数量的结 构，结构预测将获得极高的精确性。

预测二级结构的其他方法包括“threading”(Jones，D.，Curr.Opin. Struct.Biol.，7(3)：377-87(1997)；Sippl等，Structure，4(1)：15-9 (1996))，“分布分析”(Bowie等，Science，253：164-170(1991)；Gribskov 等，Meth.Enzym.，183：146-159(1990)；Gribskov等，Proc.Nat. Acad.Sci.，84(13)：4355-8(1987))，和“进化连锁”(参见Home，同上， 和Brenner，同上)。

媒介物。本发明需要通过N-末端、C-末端或一个氨基酸残基的侧 链与一种肽连接的至少一个媒介物(V1)的存在。还可以使用多个媒介 物，例如，位于每一个末端的Fc′s，或位于一个末端的Fc或位于另一 个末端或侧链上的PEG基团。典型的媒介物包括：

·Fc结构域；

·能够与挽救受体结合的其他蛋白、多肽、或肽；

·人血清白蛋白(HSA)；

·亮氨酸拉链(LZ)结构域；

·聚乙二醇(PEG)，包括5kD，20kD，和30kD PEG，以及其他 聚合物；

·葡聚糖；

以及本领域已知的其他分子，以便提供延长了的半衰期和/或对蛋 白水解降解作用或清除作用的保护作用。

优选的媒介物是Fc结构域。所述Fc结构域可以与所述肽的N或 C末端或同时与N和C末端融合。优选与N末端融合。

正如上文所提到的，在本发明范围内，Fc变体是合适的媒介物。 可以对天然Fc进行深入修饰，以便形成本发明的Fc变体，其前提是保 留了与挽救受体的结合。例如，参见WO97/34631和WO 96/32478。在 所述Fc变体中，人们可以去掉天然Fc的一个或多个位点，这些位点所 提供的结构特征或功能活性是本发明的融合分子所不需要的。例如， 人们还可以通过取代或缺失残基，将残基插入所述位点，或截短含有 所述位点的部分除去所述位点。所述插入或取代的残基还可以是改变 了的氨基酸，例如肽模拟物或D-氨基酸。因为多种原因，需要Fc变体， 其中的某些原因将在下面披露。典型的Fc变体包括这样的分子和序 列，其中：

1.消除了参与二硫键形成的位点。所述位点的消除可以避免与存 在于被用来生产本发明分子的宿主细胞中的其他含有半胱氨酸的蛋白 的反应。为此，位于N-末端的含有半胱氨酸的片段可以截短或可以将 半胱氨酸残基缺失或用其他氨基酸(例如丙氨酰、丝氨酰)取代。具 体地讲，人们可以截去SEQ ID NO：2的N-末端20个氨基酸的片段或 缺失或取代位于SEQ ID NO：2的7和10号位置上的半胱氨酸残基。即 使是消除了半胱氨酸残基，单链Fc结构域仍然能形成非共价结合在一 起的双体Fc结构域。

2.对天然Fc进行修饰，以便使它与特定宿主细胞的兼容性提高。 例如，人们可以消除靠近典型的天然Fc的N-末端的PA序列，该序列 可以被大肠杆菌中的消化酶，如脯氨酸亚氨基肽酶识别。人们还可以 增加一个N-末端甲硫氨酸残基，特别是当所述分子是在诸如大肠杆菌 的细菌细胞中重组表达时。SEQ ID NO：2的Fc结构域就是这样一种Fc 变体。

3.去掉天然Fc的N-末端的一部分，以便避免在特定宿主细胞中表 达时N-末端的不一致性。为此，人们可以去掉位于N-末端的前20个 氨基酸残基中的任一个，特别是1，2，3，4和5号位置上的氨基酸残 基。

4.去掉一个或多个糖基化位点。通常被糖基化的残基(例如天冬 酰胺)可以赋予细胞裂解反应。可以去掉所述残基，或者用非糖基化 残基(例如丙氨酸)取代。

5.去掉参与和补体的相互作用的位点，如Clq结合位点。例如，人 们可以去掉或取代人IgG1的EKK序列。对于本发明的分子来说，补体 恢复可能不是有利的，因此，可以避免这种Fc变体。

6.去掉影响与除了挽救受体以外的Fc受体结合的位点。天然Fc 可能具有与某些白血细胞相互作用的位点，这些位点对本发明的融合 分子来说是不需要的，因此可能去掉。

7.去掉了ADCC位点。ADCC位点是本领域所公知的。例如，有 关IgG1的ADCC位点参见Molec.Immunol.29(5)：633-9(1992)。这些 位点同样是本发明的融合分子所不需要的，因此可以去掉。

8.当天然Fc源于非人抗体时，所述天然Fc可以是人源化的。通 常，为了将天然Fc人源化，人们可以用正常情况下存在于人类天然Fc 上的残基取代非人天然Fc上的特定残基。用于抗体人源化的技术为本 领域所熟知。

优选的Fc变体包括以下变体。在SEQ ID NO：2(图3)中，15号位 置上的亮氨酸可以用谷氨酸取代；99号位置上的谷氨酸可以用丙氨酸 取代；而101和103号位置上的赖氨酸可以用丙氨酸取代。另外，一个 或多个酪氨酸残基可以用苯丙氨酸残基取代。

其他媒介物可以是能够与挽救受体结合的蛋白、多肽、肽、抗体、 抗体片段、或小分子(例如，肽模拟化合物)。例如，人们可以将披 露于以下美国专利中的多肽用作媒介物：美国专利5,739,277，于1998 年4月14日授予Presta等。还可以通过噬菌体展示或对与FcRn挽救 受体的结合的RNA-肽筛选选择肽。所述挽救受体-结合化合物也包括在 “媒介物”的含义范围内，并且属于本发明的范围。可以筛选所述媒介 物的延长了的半衰期(例如，通过避免由蛋白酶识别的序列)和降低 了的免疫原性(通过有利于非免疫原性的序列，如在抗体人源化中所 发现的)。

正如上文所指出的，还可将聚合物媒介物用于V1。用于连接被用 作媒介物的化学部分的各种方法目前都可以获得，例如，参见专利合 作条约(PCT)国际公开号WO 96/11953，题为“N-末端化学修饰的蛋 白组合物和方法”，以它的全文形式引入本文作为参考。在该PCT公 开文本中披露了水溶性聚合物与蛋白N-末端的选择性连接。

一种优选的聚合物媒介物是聚乙二醇(PEG)。PEG基团可以具有任 何常见的分子量，并且可以是线性的或分支的。PEG的平均分子量优 选在大约2千道尔顿(″kD″)-大约100kD，更优选大约5kD-大约50kD， 最优选大约5kD-大约10kD。通过可以通过乙酰化或还原性烷基化连接 在本发明的化合物上，通过PEG部分上的活性基团(例如，醛基、氨 基、硫醇基、或酯基)连接在本发明化合物的活性基团上(例如，醛 基、氨基、或酯基)。

用于合成肽的PEG化的有用方法，包括通过在溶液中形成缀合键 (conjugate linkage)结合一个肽和一个PEG部分，它们各自具有能彼此 相互起反应的特殊的官能团。所述肽可以通过常规固相合成方便地制 备。通过位于特定位点上的一个合适的官能团将所述肽“预活化”在与 所述PEG部分反应之前，对所述前体进行纯化和全面表征。所述肽与 PEG的连接通常是在水相中进行的，并且可以通过反相分析HPLC方 便地监测。可以通过制备HPLC，方便地纯化PEG化的肽，并且通过 分析HPLC、氨基酸顺序和激光解吸质谱分析表征。

多糖聚合物是可用于蛋白修饰的另一种类型的水溶性聚合物。葡 聚糖是由主要通过α1-6连键连接的单个葡萄糖亚基组成的多糖聚合 物。葡聚糖本身能够以多种分子量存在，并且可以方便地获得大约1kD -大约70kD的分子量。葡聚糖是可以单独作为媒介物或与另一种媒介 物(例如Fc)组合用于本发明中的合适的水溶性聚合物，例如，参见 WO 96/11953和WO 96/05309。业已报道了与治疗性或诊断免疫球蛋白 缀合的葡聚糖。例如，参见欧洲专利公开号0315456，该专利以其全 文形式引入本文作为参考。当葡聚糖被用作本发明的媒介物时，优选 大约1kD-大约20kD的葡聚糖。

接头。可以选择任何“接头”基团。在存在接头时，其化学结构 并不重要，因为它主要起着间隔基团的作用。所述接头优选是由通过 肽键连接在一起的氨基酸形成。因此，在优选实施方案中，所述接头 是由通过肽键连接的1-30个氨基酸组成，其中，所述氨基酸是从20种 天然存在的氨基酸中选择的。正如本领域技术人员所了解的，其中的 某些氨基酸可以是糖基化的。在一种更优选的实施方案中，所述1-20 个氨基酸是从甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、和赖 氨酸中筛选的。更优选的是，主要由空间上非位阻的氨基酸，如甘氨 酸和丙氨酸组成的接头。因此，优选的接头是与甘氨酸(特别是(Gly)4， (Gly)5)，聚(Gly-Ala)，和聚丙氨酸。接头的其他特定例子有：

(Gly)3Lys(Gly)4(SEQ ID NO：40)；

(Gly)3AsnGlySer(Gly)2(SEQ ID NO：41)；

(Gly)3Cys(Gly)4(SEQ ID NO：42)；和

GlyProAsnGlyGly(SEQ ID NO：43)。

为了解释上述命名方法，例如，(Gly)3Lys(Gly)4表示Gly-Gly- Gly-Lys-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO：40)。Gly和Ala的组合同样是优 选的。这里所提供的接头是举例性的；本发明范围内的接头可以更长， 并且可以包括其他残基。

优选的接头是包括超过5个氨基酸的氨基酸接头，合适的接头具 有高达大约500个选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、 赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸或天冬氨酸的氨基酸。最优选的是大约20-50 个氨基酸的接头。一类优选的接头是具有下式的接头

GSGSATGGSGSTASSGSGSATx1x2

(SEQ ID NO：193)

和

GSGSATGGSGSTASSGSGSATx1x2GSGSATGGSGSTASSGSGSATx3x4

(SEQ ID NO：194)

其中，x1和x3各自独立地是碱性或疏水性残基，而x2和x4各自 独立地是疏水性残基。特别优选的接头是：

GSGSATGGSGSTASSGSGSATHM

(SEQ ID NO：59)

GSGSATGGSGSTASSGSGSATGM

(SEQ ID NO：190)

GSGSATGGSGSTASSGSGSATGS

(SEQ ID NO：191)，和

GSGSATGGSGSTASSGSGSATHMGSGSATGGSGSTASSGSGSATHM

(SEQ ID NO：192)。

非肽接头也是可行的。例如，可以使用烷基接头，如-NH-(CH2)s- C(O)-，其中s＝2-20。所述烷基接头还可以通过诸如低级烷基(例如 C1-C6)低级酰基，卤基(例如，Cl，Br)，CN，NH2，苯基等的非空 间位阻基团所取代。一种代表性的非肽接头是PEG接头，

其中，n是这样的，它使得该接头的分子量为100-5000kD，优选 100-500kD。还可以改变所述肽接头，以便形成与上文所述相同形式 的衍生物。

衍生物。本发明人还披露了所述化合物的肽和/或媒介物部分的衍 生化。所述衍生物可以提高所述化合物的溶解度、吸收性、生物学半 衰期等。所述部分还可以消除或减弱所述化合物的任何不希望的副作 用等。代表性衍生物包括以下化合物，其中：

1.所述化合物或它的某些部分是环状的，例如，可以将所述肽部 分修饰成包括两个或两个以上Cys残基(例如在所述接头上)，它可 以通过形成二硫键而环化。

2.将所述化合物交联或者使得它能够在分子间交联。例如，可以 将所述肽部分修饰成包括一个Cys残基，并且因此能够与一种类似分 子形成分子间二硫键。所述化合物还可以通过其C-末端交联，如下面 的分子所示。

VIII

在式VIII中，每一个“V1”通常可以表示Fc结构域的一条链。

3.一个或多个肽基[-C(O)NR-]连接(键)被非肽基连接所取代。 典型的非肽基连接是-CH2-氨甲酸[-CH2-OC(O)NR-]，磷酸根，-CH2- 磺酰胺[-CH2-S(O)2NR-]，脲[-NHC(O)NH-]，-CH2-仲胺，和烷基化肽[-C (O)NR6-其中，R6是低级烷基]。

4.N-末端是衍生化的。通常，N-末端可以酰化或者修饰成取代胺。 典型的N-末端衍生基团包括-NRR1(而不是NH2)，-NRC(O)R1，- NRC(O)OR1，-NRS(O)2R1，-NHC(O)NHR1，琥珀酰亚胺，或苄氧基羰 基-NH-(CBZ-NH-)，其中R和R1分别是氢或低级烷基，并且，其中所 述苯环可以用1-3个选自C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，氯和溴的取代基 取代。

5.游离的C-末端是衍生化的。通常，C-末端是酯化或酰胺化的。 举例来说，典型的C-末端衍生基团包括例如-C(O)R2，其中，R2是低 级烷氧基，或-NR3R4，其中R3和R4独立地是氢或C1-C8烷基(C1-C4 烷基)。

6.二硫键被另一种键，优选更稳定的交联部分(例如亚烷基)所 取代。例如，参见Bhatnagar等(1996)，J.Med.Chem.39：3814-9；Alberts 等(1993)Thirteenth Am.Pep.Symp.，357-9。

7.一种或多个独立的氨基酸残基是修饰过的。正如在下面详细披 露的，已知各种衍生剂能够与各种特定的侧链或末端残基专一性起反 应。

赖氨酰残基和氨基末端残基可以与琥珀酸或其他羧酸酸酐起反 应，它能颠倒赖氨酰残基的电荷。适合衍生含有α氨基的残基的其他合 适的试剂包括亚胺基酯，如甲基吡啶亚胺(picolinimidate)；磷酸吡多 醛；吡多醛；氯溴氢酸；三硝基苯磺酸；O-甲基异脲；2，4-戊二酮； 和转氨酶催化的与乙醛酸的反应。

精氨酰残基可以通过与任一种常规试剂或若干种常规试剂的组合 起反应进行修饰，所述试剂包括苯基吡多醛，2，3-丁二酮，1，2-环己 二酮，和茚三酮。精氨酰残基的衍生化，需要该反应在碱性条件下进 行，因为胍官能团具有高的pKa。另外，所述试剂还可以与赖氨酸的基 团和精氨酰胺ε-氨基起反应。

业已对酪氨酰残基的特殊修饰进行过深入研究，特别感兴趣的是 通过与芳族重氮化合物或四硝基甲烷起反应将光谱标记导入酪氨酰残 基。最常见的是，利用N-酰基咪唑和四硝基甲烷分别形成o-乙酰酪氨 酰类和3-硝基衍生物。

可以通过与碳二亚胺(R′-N＝C＝N-R’)起反应，选择性地修饰羧基 侧链基团(天冬氨酰和谷氨酰)，如1-环己基-3-(2-吗啉基-(4-乙基)碳 二亚胺或1-乙基-3-(4-氮翁-4，4-二甲基戊基)碳二亚胺。另外，可以通 过与铵离子起反应，将天冬氨酰和谷氨酰残基转化成天冬酰胺和谷安 酰胺残基。

可以对谷氨酰胺和天冬酰胺残基进行脱酰胺化，形成相应的谷氨 酰和天冬氨酰残基，另外，所述残基是在温和的酸性条件下脱酰氨化 的。所述残基的任一种形式都属于本发明的范围。

半胱酰胺残基可以被氨基酸残基或其他部分所取代，以便消除二 硫键，或者相反，使交联稳定。例如，参见Bhatnagar等(1996)，J.Med. Chem.39：3814-9。

通过双功能试剂的衍生化，可用于将肽或它们的功能衍生物交联 在水不溶性支持基质上或交联在其他大分子媒介物上。常用的交联剂 包括，例如，1，2-二(重氮乙酰)-2-苯基乙烷，戊二醛，N-羟基琥珀 酰亚氨酯，例如，与4-重氮水杨酸形成的酯，高双功能亚胺酸酯，包 括二琥珀酰亚胺酯，包括3，3′-二硫二(琥珀酰亚胺丙酸)，和双功能 马来酰胺，如2-N-马来酰-1，8-辛烷。诸如甲基-3-[(p-重氮苯基)二 硫]丙酸亚胺酸酯的衍生剂能产生可以光活化的中间物，所述中间物能 够在存在光线的条件下形成交联键。另外，将披露于美国专利 3,969,287；3,691,016；4,195,128；4,247,642；4,229,537；和4,330,440 中的诸如氰溴酸活化的碳水化合物和活性底物的活性水不溶性基质用 于蛋白固定化。

可以将碳水化合物(寡糖)基团方便地连接在蛋白上的已知是糖 基化位点的位点上。一般，当它们是Asn-X-Ser/Thr序列的一部分时， o-连接的寡糖连接在丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)残基上，而N-连接的寡 糖连接在天冬酰胺(Asn)残基上，其中，X可以是除了脯氨酸以外的任 何氨基酸。X是除了脯氨酸以外的19种天然存在的氨基酸中的一种。 出现在每一种类型中的N-连接的和O-连接的寡糖和糖残基的结构是不 同的。通常在两种类型上常见的一类糖是N-乙酰神经氨酸(被称为唾 液酸)。唾液酸通常是N-连接的和O-连接的寡糖的末端残基，并且通 过它的负电荷，可赋予所述糖基化化合物酸性特性。所述位点可以整 合到本发明化合物的接头上，并且优选是在所述多肽化合物的重组生 产期间由细胞糖基化的(例如，在哺乳动物细胞内，如CHO，BHK， COS)。不过，所述位点还可以通过本领域已知的合成或半合成方法糖 基化。

其他可行的修饰包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酰和苏氨酰 残基的羟基基团的磷酸化，Cys中的硫原子的氧化，赖氨酸、精氨酸和 组氨酸侧链的α氨基的甲基化。Creighton，Proteins：Structure and Molecule Properties(W.H.Freeman & Co.，San Francisco)，pp.79- 86(1983)。

本发明的化合物还可以在DNA水平上改变。所述化合物的任何部 分的DNA序列都可以改变成与所选择的宿主细胞更兼容的密码子。对 于大肠杆菌(它是优选的宿主细胞)来说，优化密码子在本领域是公 知的。可以取代密码子，以便消除限制位点或包括沉默的限制位点， 这将有助于在特定的宿主细胞中加工所述DNA。可以将所述媒介物、 接头和肽DNA序列修饰成包括上述任何序列变化。

生产方法

本发明的化合物在很大程度上可以通过重组DNA技术在转化过 的宿主细胞中生产。为此，制备了编码所述肽的重组DNA分子。制备 所述DNA分子的方法为本领域所熟知。例如，可以利用合适的限制酶 将编码所述肽的序列从DNA上切除。另外，可以通过化学合成技术合 成所述DNA分子，如氨基磷酸酯方法。另外，还可以使用所述技术的 组合。

本发明还包括能够在合适的宿主中表达所述肽的载体。所述载体 包括可操作地与合适的表达控制序列连接的编码所述肽的DNA分子。 在将DNA分子插入所述载体之前或之后，进行该操作性连接的方法是 众所周知的。表达控制序列包括启动子、激活子、增强子、操纵子、 核糖体结合位点、起始信号、终止信号、加帽信号、聚腺苷酸化信号、 和与转录或翻译控制相关的其他信号。

将所得到的在它上面具有所述DNA分子的载体用于转化合适的 宿主。该转化可以通过本领域众所周知的方法进行。

大量现有的和众所周知的宿主细胞中的任一种，都可用于实施本 发明。特定宿主的选择取决于本领域所认可的多种因素。其中包括， 例如，与所选择的表达载体的兼容性，由所述DNA分子所编码的肽的 毒性，转化速度，肽回收的难易程度，表达特征，生物安全性和成本。 所述因素的平衡必须符合以下理解，即并非所有的宿主在表达特定 DNA序列时都同样有效。在这种一般性指导下，有用的微生物宿主包 括细菌(如大肠杆菌)，酵母(如酵母菌)和其他培养中的真菌，昆 虫，植物，哺乳动物(包括人类)细胞，或本领域已知的其他宿主。

然后，培养并且纯化转化过的宿主，宿主细胞可以在常规发酵条 件下培养，以便表达所需要的化合物。所述发酵条件是本领域所熟知 的。最后，通过本领域所熟知的方法从培养物中纯化所述肽。

所述化合物还可以通过合成方法制备。例如，可以使用固相合成 技术。合适的技术为本领域所熟知，并且包括披露于以下文献中的技 术：Merrifield(1973)，Chem.Polypeptides，pp.335-61(Katsoyannis和 Panayotis eds.)；Merrifield(1963)，J.Am.Chem.Soc.85：2149；Davis 等(1985)，Biochem.Intl.10：394-414；Stewart和Young(1969)，Solid Phase Peptide Synthesis；美国专利3,941,763；Finn等(1976)，The Proteins(3rd ed.)2：105-253；和Erickson等(1976)，The Proteins(3rd ed.) 2：257-527。固相合成是生产单一肽的优选技术，因为它是生产小型肽 的最经济的方法。

可以通过众所周知的有机化学技术合成含有衍生化的肽或含有非 肽基团的化合物。

化合物的用途

本发明的化合物特别适用于治疗B-细胞介导的自身免疫病。具体 地讲，本发明的化合物可用于治疗、预防、缓解、诊断或预测狼疮， 包括系统性红斑狼疮(SLE)，和狼疮相关的疾病和症状。其他优选的 疾病包括B-细胞介导的癌症，包括B-细胞淋巴瘤。

本发明的化合物还可用于治疗关节的炎性症状。关节的炎性症状 包括能以不同程度使世界范围内的数百万人痛苦和致残的慢性关节疾 病。类风湿关节炎是一种关节疾病，其中，软骨和骨骼被称为血管翳 的增殖的、侵入性结缔组织缓慢侵蚀，所述组织来自关节滑液膜。所 述疾病可能涉及外周关节疾病，如滑囊，腱鞘和腱，以及关节外组织， 如皮下组织，心血管系统，肺，脾，淋巴结，骨骼肌，神经系统(中 枢和外周神经)和眼睛(Silberberg(1985)，Anderson′s Pathology，Kissane (ed.)，II：1828)。骨关节炎是一种常见的关节疾病，其特征是关节软骨 的退化改变和关节周围的骨头和软骨的活跃增殖。骨关节炎是一种细 胞介导的活性过程，它有可能是因为软骨细胞对代谢和合成刺激作出 的不适当的反应所导致的。据报导，关节软骨的某些基质分子的改变 出现在早期骨关节炎中(Thonar等(1993)，Rheumatic disease clinics of North America，Moskowitz(ed.)，19：635-657和Shinmei等(1992)， Arthritis Rheum.，35：1304-1308)。TALL-1，TALL-1R和它的调节剂被 认为可用于治疗所述症状和相关的症状。

本发明的化合物还可用于治疗多种其他疾病和失调，包括：

·急性胰腺炎；

·ALS；

·Alzheimer′s病

·哮喘

·动脉硬化；

·自身免疫溶血性贫血；

·癌症，特别是与B细胞相关的癌症；

·恶病质/厌食；

·慢性疲劳综合症；

·硬变(例如，原发性胆汁肝硬变)

·糖尿病(例如，胰岛素糖尿病)；

·发热；

·肾小球肾炎，包括IgA肾小球肾炎和原发性肾小球肾炎；

·Goodpasture′s综合症；

·Guillain-Barre综合症；

·移植物抗宿主病；

·Hashimoto′s甲状腺炎；

·出血性休克；

·痛觉过敏；

·炎性肠炎；

·关节的炎性症状，包括骨关节炎，牛皮癣关节炎和类风湿关节 炎；

·由拉伤，扭伤，软骨损伤，创伤，整形手术，感染或其他病变 过程导致的炎性症状；

·胰岛素依赖型糖尿病；

·缺血性损伤，包括大脑缺血(例如，由创伤、癫痫、出血或中 风所导致的大脑损伤，上述每一种疾病都可能导致神经变性)；

·认知障碍；

·肺病(例如，ARDS)；

·多发性骨髓瘤；

·多发性硬化；

·重症肌无力；

·骨髓性(例如，AML和CML)和其他白血病；

·肌病(例如，肌肉蛋白代谢，特别是败血症)；

·神经毒性(例如，通过HIV诱导的神经毒性)；

·骨质疏松；

·疼痛；

·帕金森病；

·天疱疮；

·多发性肌炎/皮肤肌炎；

·肺炎，包括自身免疫肺炎；

·pre-term labor；

·牛皮癣

·Reiter′s病

·再灌注损伤；

·脓毒性休克；

·由放射治疗产生的副作用；

·Sjogren′s综合症；

·睡眠紊乱；

·临时性下颌骨关节病；

·血小板减少症，包括特发性血小板减少症和自身免疫新生儿血 小板减少症；

·肿瘤转移；

·眼色素层炎；和

·脉管炎。

本发明的化合物可以单独施用，或者与治疗有效量的其他药物组 合施用，包括止痛剂，疾病修饰抗风湿病药物(DMARDs)，非甾醇抗炎 性药物(NSAIDs)，和任何免疫和/或炎症调节剂。因此，本发明的化合 物还可以与以下药物一起施用；

·TNF/TNF受体家族其他成员的调节剂，包括TNF拮抗剂，如 etanercept(EnbrelTM)，sTNF-RI，onercept，D2E7，和RemicadeTM。

·神经生长因子(NGF)调节剂。

·IL-1抑制剂，包括IL-lra分子，如anakinra和最近发现的IL-lra- 样分子，如IL-1Hy1和IL-1Hy2；披露于1998年12月1日授权的美国专 利5,844,099中的IL-1 IL-1“trap”；IL-1抗体，溶解的IL-1受体等。

·IL-6抑制剂(例如，IL-6的抗体)。

·IL-8抑制剂(例如，IL-8的抗体)。

·IL-18抑制剂(例如，IL-18结合蛋白，溶解的IL-18受体，或IL-18 抗体。

·白介素-1转化酶(ICE)调节剂。

·胰岛素样生长因子(IGF-1，IGF-2)和它的调节剂。

·转化生长因子-β(TGF-β)，TGF-β家族成员，和TGF-β调 节剂。

·成纤维细胞生长因子FGF-1-FGF-10，和FGF调节剂。

·骨保护素(OPG)，OPG类似物，骨保护剂，和OPG配体的抗 体(OPG-L)。

·骨合成剂，如甲状旁腺素(PTH)，PTH片段，和结合了PTH片 段的分子(例如，PTH(1-34)-Fc)。

·PAF拮抗剂。

·角质形成细胞生长因子(KGF)，KGF-相关分子(例如KGF-2)， 和KGF调节剂。

·COX-2抑制剂，如CelebrexTM和VioxxTM。

·前列腺素类似物(例如，E系列前列腺素)。

·基质金属蛋白酶(MMP)调节剂。

·氧化氮合成酶(NOS)调节剂，包括诱导型NOS的调节剂。

·糖皮质素受体的调节剂。

·谷氨酸受体的调节剂。

·脂多糖(LPS)含量的调节剂。

·抗癌制剂，包括致癌基因(例如，fos，jun)的抑制剂和干扰素。

·去甲肾上腺素和它的调节剂和模拟物。

药用组合物

一般说明。本发明还提供了使用本发明化合物的药用组合物的方 法。所述药用组合物可以注射施用，或口服，经肺、鼻腔、经皮施用， 或以其他形式施用。一般，本发明包括含有有效数量的本发明化合物 的药用组合物，同时还含有可以药用的稀释剂，防腐剂，稳定剂，乳 化剂，佐剂和/或载体。所述组合物包括各种缓冲成分的稀释剂(例如， Tris-HCl，乙酸，磷酸)，pH和离子强度；添加剂，如洗涤剂和稳定 剂(例如，Tween 80，Polysorbate 80)，抗氧化剂(例如，抗坏血酸， 偏亚硫酸氢钠)，防腐剂(例如，Thimersol，苄醇)和填充物质(例 如，乳糖，甘露糖醇)；将所述材料结合到诸如聚乳酸，聚乙醇酸的 聚合物的颗粒状制剂中的材料，或结合到脂质体。还可以使用透明质 酸，并且这种材料具有改善在循环系统中的持续时间的作用。所述组 合物可以影响本发明蛋白和衍生物的物理状态，稳定性，体内释放速 度和体内清除速度。例如，参见Remington′s Pharmaceutical Sciences， 18th Ed.(1990，Mack Publishing Co.，Easton，PA18042)pages 1435- 1712，该文献被以全文形式引入本文作为参考。所述组合物可以以液 体形式制备，或者以干燥粉末形式制备，如冷冻干燥形式。置入式缓 释制剂也是可行的，如经皮制剂。

口服剂型。本发明涉及口服固体剂型，这种剂型一般披露于 Remington′s Pharmaceutical Sciences(1990)，18th Ed.，Mack Publishing Co.Easton PA18042的第89章，该文献以全文形式引入本文作为参考。 固定剂型包括片剂、胶囊、丸剂、药片或锭剂、扁胶囊或小药丸。还 可将脂质体或蛋白类胶囊用于制备本发明组合物(例如，在美国专利 4,925,673中所报导的蛋白类微球)。还可以使用脂质体胶囊化，并 且可以用各种聚合物对脂质体进行衍生化(例如美国专利5,013, 556)。在以下文献的第10章披露了用于治疗的可行的固体剂型： Marshall，K.，Modern Pharmaceutics(1979)，edited by G.S.Banker and C.T.Rhodes，第10章，该文献被以全文形式引入本文作为参考。一般， 所述制剂可以包括本发明的化合物，和惰性成分，这些惰性成分可以 对抗肠胃环境，并且在小肠中释放生物学活性材料。

另外，还具体涉及上述本发明化合物的口服剂型。如果必要的话， 可以对所述化合物进行化学修饰，以便口服输送更为有效。一般，所 涉及到的化学修饰是将至少一种成分连接在化合物分子本身上，其 中，所述部分可以(a)抑制蛋白水解作用；和(b)从胃或小肠中吸收到血 液中。另外还希望所述化合物的总体稳定性提高，以及在体内的循环 时间延长。可用作本发明的共价连接媒介物的部分也可用于这一目 的。所述分子的例子包括：PEG，乙二醇和丙二醇的共聚物，羧甲基纤 维素，葡聚糖，聚乙烯基醇，聚乙烯吡咯烷酮和聚脯氨酸。例如，参 见Abuchowski和Davis，Soluble Polymer-Enzyme Adducts，Enzymes as Drugs(1981)，Hocenberg和Roberts，eds.，Wiley-Interscience，New York， NY，pp.36783；Newmark，等(1982)，J.Appl.Biochem.4：185-9。可以 使用的其他聚合物是聚-1，3-二氧戊环和聚1，3，6-tioxocane。优选的用于 药物用途的，如上文所述，是PEG成分。

对于口服输送剂型来说，还可以使用修饰过的脂族氨基酸的盐， 如N-(8-[2-羟基苯甲酰基]氨基)辛酸钠(SNAC)，作为一种载体以便增强 本发明治疗性化合物的吸收。业已在通过Emisphere Technologies进行 的II期实验中，证实了使用SNAC的肝素制剂的临床效力。参见美国 专利5,792,451，“口服药物输送组合物和方法”。

本发明的化合物可以作为粒度为大约1毫米的颗粒小团形式的细 的多颗粒添加在所述制剂中。用于胶囊施用的所述材料的制剂还可以 作为粉末、略微压缩的栓剂，甚至是作为片剂。所述治疗剂可以通过 压缩制备。

还可以添加着色剂和香味剂。例如，可以制备所述蛋白(或衍生 物)(如通过脂质体或小球胶囊)，然后，进一步包含在食品中，如 含有着色剂和香味剂的冰镇饮料。

人们可以用一种惰性材料稀释或增加本发明化合物的体积。所述 稀释剂可以包括碳水化合物，特别是甘露糖醇，α-乳糖，无水乳糖， 纤维素，蔗糖，改性葡聚糖和淀粉。某些无机盐也可用作填充材料， 包括三磷酸钙，碳酸镁和氯化钠。某些可以从商业渠道获得的稀释剂 包括Fast-Flo，Emdex，STA-Rx 1500，Emcompress和Avicell。

在所述治疗剂的制剂中还可以添加分散剂，以便制成固体剂型。 用作分散剂的材料包括，但不局限于淀粉，包括基于淀粉的商业化分 散剂，Explotab。淀粉乙醇酸钠，Amberlite，羧甲基纤维素钠，超级支 链淀粉，藻酸钠，明胶，橙皮，酸性羧甲基纤维素，天然海绵和膨润 土都可以使用。另一种形式的分散剂是不溶性阳离子交换树脂。粉末 状的树胶可以用作分散剂以及用作粘接剂，并且所述树胶可以包括粉 状树胶，如琼脂，Karaya或黄耆胶。

可以使用粘接剂将所述治疗剂保持在一起，以便形成硬的片剂， 并且包括来自天然产品的材料，如合欢胶，黄耆胶，淀粉和明胶。其 他材料包括甲基纤维素(MC)，乙基纤维素(EC)和羧甲基纤维素 (CMC)。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)都可用于醇 溶液中，以便使所述治疗剂颗粒化。

在所述治疗剂的配方中还可以添加抗摩擦剂，以便防止在制备过 程发生粘连。可以将润滑剂用作治疗剂和模具壁之间的一个层，所述 润滑剂可以包括，但不局限于硬脂酸，包括它的镁和钙盐，聚四氟乙 烯(PTFE)，液体石蜡，植物油和蜡。还可以使用可溶性润滑剂，如十二 烷基硫酸钠，十二烷基硫酸镁，各种分子量的聚乙二醇，Carbowax 4000 和6000。

可以添加能够在制备期间改善药物的流动特性，并且在压缩期间 有助于重新排列的滑动剂。所述滑动剂包括淀粉、滑石、火成硅和水 合硅铝酸盐。

为了帮助将本发明的化合物溶解在含水环境中，可以添加作为湿 润剂的表面活性剂。表面活性剂可以包括阴离子洗涤剂，如十二烷基 硫酸钠，二辛基硫代琥珀酸钠，和二辛基磺酸钠。可以使用阳离子洗 涤剂，并且包括benzalkonium chloride或benzethonium chloride。在所 述制剂中可以作为表面活性剂使用的非离子洗涤剂包括lauromacrogol 400，polyoxyl 40硬脂酸，聚氧乙烯氢化蓖麻油10，50和60，硬脂酸 单甘油酯，polysorbate 40，60，65和80，蔗糖脂肪酸酯，甲基纤维素 和羧甲基纤维素。所述表面活性剂可以单独或作为不同比例的混合物 存在于所述蛋白或衍生物的制剂中。

在所述制剂中还可以添加增强所述化合物吸收的添加剂。例如， 可能具有这种特性的添加剂有脂肪酸油酸，亚油酸和亚麻酸。

可能需要控制释放制剂。可以将本发明的化合物结合在惰性基质 中。该基质可以通过扩散或溶出机制释放；例如，树胶。还可以将缓 慢降解的基质整合在所述制剂中，例如，藻酸，多糖。本发明化合物 的另一种形式的控制释放是一种基于Oros治疗系统的方法(Alza Corp.)，即，将所述药物包在半透膜中，由于渗透作用，这种膜使得水 能够进入并且通过单一的小孔将药物从里面推出。某些肠包衣也具有 缓释效果。

可以将其他包衣剂用于所述制剂。其中包括多种可用于包衣锅 (pan)的多种糖类。所述治疗剂还能够以薄膜包衣的片剂形式提供，并 且用于这种场合的材料被分成两类。第一类是非肠衣材料，并且包括 甲基纤维素，乙基纤维素，羟乙基纤维素，甲基羟基-乙基纤维素，羟 丙基纤维素，羟丙基-甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，providone和聚乙 二醇。第二类包括糖衣材料，它通常是苯二甲酸的酯。

可以将材料的混合物用于提供最佳膜包衣。膜包衣可以在锅包衣 器或流化床或通过压缩包衣进行。

肺输送形式。本发明还涉及本发明蛋白(或其衍生物的肺输送)。 所述蛋白(或衍生物)是通过吸入输送到哺乳动物肺中的，并且通过 肺上皮衬里细胞到达血液系统(包括这一方面内容的其他报导包括 Adjei等，Pharma.Res.(1990)7：565-9；Adjei等(1990)，Internatl.J. Pharmaceutics 63：135-44(leuprolide acetate)；Braquet等(1989)，J. Cardiovasc.Pharmacol.13(suppl.5)：s.143-146(内皮肽1)；Hubbard等 (1989)，Annals Int.Med.3：206-12(α1-抗胰蛋白酶)；Smith等(1989)， J.Clin.Invest.84：1145-6(α1-蛋白酶)；Oswein等(March 1990)，“蛋 白的气溶胶化”，Proc.Symp.Resp.Drug Delivery II，Keystone，Colorado (重组人生长激素)；Debs等(1988)，J.Immunol.140：3482-8(干扰素γ 和肿瘤坏死因子α)和Platz等，美国专利5,284,656(粒细胞集落刺激因 子)。

在实施本发明时，可以使用多种为了肺输送治疗制品而设计的机 械装置，包括，但不局限于雾化器，计量剂量的吸入器，和粉末吸入 器，所有这些装置都是本领域技术人员所熟悉的。适用于实施本发明 的市售装置的某些具体例子包括Ultravent雾化器，由Mallinckrodt，Inc. 生产，St.Louis，Missouri；Acorn II喷雾器，由Marquest Medical Products 生产，Englewood，Colorado；Ventolin计量剂量吸入器，由Glaxo Inc. 生产，Research Triangle Park，North Carolina；和Spinhaler粉末吸入器， 由Fisons Corp.生产，Bedford，Massachusetts。

所有上述装置都需要使用适合分配本发明化合物的制剂。通常， 每一种制剂对所使用的装置的类型是专一的，并且除了用于治疗的稀 释剂、佐剂和/或载体之外可以使用合适的推进剂材料。

本发明的化合物最优选以颗粒形式制备，平均粒度小于10微米， 最优选0.5-5微米，以便最有效地输送到肺的远端。

可以药用的载体包括碳水化合物，如海藻糖，甘露糖醇，木糖醇， 蔗糖，乳糖和山梨糖醇。用于制剂中的其他成分可以包括DPPC， DOPE，DSPC和DOPC。可以使用天然或表面合成表面活性剂。可以 使用PEG(可以不是用于对所述蛋白或类似物进行衍生化)。可以使 用葡聚糖，如环葡聚糖。可以使用胆酸盐和其他相关的强化剂。可以 使用纤维素和纤维素衍生物。可以使用氨基酸，如用于缓冲液制备。

另外，还可以使用脂质体，微胶囊或微球体，包含体复合物或其 他类型的载体。

适用于喷射型或超声波型的喷雾器的制剂通常包括溶解在水中的 本发明的化合物，每毫升溶液中生物学活性蛋白的浓度大约0.1-25毫 克。所述制剂还可以含有缓冲剂和一种简单的糖(例如，用于蛋白稳 定和调节渗透压)。喷雾器制剂还可以包括表面活性剂，以便降低或 防止由表面诱导的形成气溶胶的溶液的雾化所导致的蛋白的聚集。

用于计量剂量吸入器装置的制剂通常包括细碎的粉末，它含有借 助于表面活性剂而悬浮在推进剂中的本发明的化合物。所述推进剂可 以是任何用于这一目的的常规材料，如氯氟烃、氢氯氟烃、氢氟烃、 或烃，包括三氯氟甲烷，二氯二氟甲烷，二氯四氟乙醇，和1，1，1， 2-四氟乙烷，或它们的组合。合适的表面活性剂包括山梨聚糖三油酸酯 和大豆卵磷脂。还可以将油酸用作表面活性剂。

用于从粉末吸入器中分配的制剂可以包括含有本发明化合物的细 碎的干燥粉末并且还可以包括填充剂，如乳糖、山梨糖醇，蔗糖，甘 露糖醇，海藻糖，或木糖醇，其用量有利于所述粉末从该装置中分散， 例如占该制剂重量的50-90％。

鼻腔输送形式。还涉及本发明化合物的鼻腔输送。鼻腔输送可以 使在将所述治疗产品施用到鼻腔之后使所述蛋白直接输送到血液中， 而不需要使所述产品沉积在肺里。适合鼻腔输送的制剂包括含有葡聚 糖或环葡聚糖的制剂。通过其他黏膜的输送也是可行的。

剂量。与用于治疗上述症状的方法相关的剂量方案可以由主治医 生确定，要考虑多种可能改变药物作用的因素，例如患者的年龄、症 状、体重、性别和饮食，任何感染的严重程度、施用时间和其他临床 因素。一般，每天的方案应当在每千克体重0.1-1000微克本发明化合 物的范围内，优选每千克体重0.1-150微克。

特别优选的实施方案

本发明人业已确定了在下面的表4中列举的优选肽的优选结构。 符号“A”可以是本文所披露的任何接头，或者可能简单地表示一种普 通的肽键(即不存在接头)。为了清楚起见，串联重复和接头是分开 示出的。

表4-优选实施方案

  序列/结构   SEQ ID   NO：   LPGCKWDLLIKQWVCDPL-Λ-V1   44   V1-Λ-LPGCKWDLLIKQWVCDPL   45   LPGCKWDLLIKQWVCDPL-Λ-   LPGCKWDLLIKQWVCDPL-Λ-V1   46   V1-Λ-LPGCKWDLLIKQWVCDPL-Λ-   LPGCKWDLLIKQWVCDPL   47   SADCYFDILTKSDVCTSS-Λ-V1   48   V1-Λ-SADCYFDILTKSDVCTSS   49   SADCYFDILTKSDVTSS-Λ-SADCYFDILTKSDVTSS   -Λ-V1   50   V1-Λ-SADCYFDILTKSDVTSS-Λ-   SADCYFDILTKSDVTSS   51   FHDCKWDLLTKQWVCHGL-Λ-V1   52   V1-Λ-FHDCKWDLLTKQWVCHGL   53   FHDCKWDLLTKQWVCHGL-Λ-   FHDCKWDLLTKQWVCHGL-Λ-V1   54   V1-Λ-FHDCKWDLLTKQWVCHGL-Λ-   FHDCKWDLLTKQWVCHGL   55

“V1”是如本文前面所定义的Fc结构域。除了在表4中所列举 的之外，本发明人还提出了异源双体，其中，Fc双体的每一条链与一 种不同的肽序列连接；例如，其中每一种Fc与选自表2的一种不同的 序列连接。

本发明的所有化合物都可以通过在PCT申请WO 99/25044中所披 露的方法制备。

下面将通过实际例子对本发明作进一步说明，这些例子是说明性 的而不是限制性的。

实施例1

肽

肽噬菌体展示

1.磁性珠制备

A.固定在磁性珠上的Fc-TALL-1

将重组Fc-TALL-1蛋白固定在蛋白A Dynabeads(Dynal)上，浓度 为每100微升从生产商那里购买的磁性珠原料中使用8微克的Fc- TALL-1。通过使用磁铁将所述珠吸到试管的一侧，并且将液体移出， 用磷酸缓冲的盐溶液(PBS)洗涤所述珠两次，并且重新悬浮在PBS 中。以上述浓度将Fc-TALL-1蛋白添加到洗涤过的磁性珠中，并且在 室温下旋转培养1小时。然后通过以1％的最终浓度添加牛血清白蛋白 (BSA)并且在4℃下旋转培养过夜，对Fc-TALL-1包衣的珠进行封闭。 然后用PBST(含有0.05％Tween-20)的PBS洗涤所得到的Fc-TALL- 1包衣的珠，然后进行所述筛选方法。

B.阴性筛选珠制备

为了进行阴性筛选，还制备了另外的珠。对每一种淘选条件来说， 对从生产商那里购买的250微升的珠原料进行上述方法的处理(1A部 分)，所不同的是，去掉了用FTALL-1培养的步骤。在最后的洗涤步 骤中，将所述珠分成5个50微升的等份。

2.TALL-1结合噬菌体的筛选

A.总体方法

将两种丝状噬菌体文库TN8-IX(5×109独立转化体)和TN12-I (1.4×109独立转化体)(Dyax Corp.)用于筛选TALL-1结合噬菌体。对每 一个文库进行pH2洗脱或‘珠洗脱’(2E部分)。因此，对于TALL-1 项目来说，采用了四种不同的淘选条件(TN8-IX使用pH2洗脱方法， TN8-IX使用珠洗脱方法，TN12-I使用pH2洗脱方法，而TN12-I使用 珠洗脱方法)。对每一种条件来说进行三轮选择。

B.阴性筛选

对每一种淘选条件来说，从所述文库母液中等分出大约100个随 机的文库等分体(对于TN8-IX来说为5×1011pfu，而对于TN12-I来说 为1.4×1011pfu)，并且用PBST稀释到300微升。在最后一次洗涤之 后，将液体从为了进行阴性筛选而制备的珠的第一个50微升等份样品 中吸出(1B部分)。将300微升稀释过的文库的母液添加所述珠中。所 得到的混合物在室温下旋转培养10分钟。利用磁力将噬菌体上清液吸 出，并且添加到第二个50微升的等份样品中，进行另一个阴性筛选步 骤。通过这种方式，进行了5个阴性筛选步骤。

C.利用Fc-TALL-1蛋白包衣的珠进行筛选

在最后的阴性筛选步骤之后(1A部分)将噬菌体上清液添加到最 后的洗涤步骤之后的Fc-TALL-1包衣的珠中。在室温下旋转培养该混 合物2小时，使特定噬菌体与所述靶蛋白结合。在将上清液去掉之后， 用PBST洗涤所述珠7次。

D.结合噬菌体的pH2洗脱

在最后的洗涤步骤之后(2C部分)。通过添加200微升的CBST(50 mM柠檬酸钠，150mM氯化钠，0.05％Tween-20，pH2)将结合的噬菌 体从磁性珠上洗脱。在室温下培养5分钟之后，将含有洗脱的噬菌体的 液体吸出，并且转移到另一只试管中。通过添加200微升CBST并且培 养5分钟再次重复所述洗脱步骤。将来自两个洗涤步骤的液体混合在一 起，并且添加100微升2M Tris溶液(pH 8)，以便中和pH。添加500 微升Min A Salts溶液(60mM K2HPO4，33mM KH2PO4，7.6mM (NH4)SO4，和1.7mM柠檬酸钠)，将最终体积调整为1毫升。

E.‘珠洗脱’

在最后的洗涤之后，将液体吸出(2C部分)，将1ml Min A盐溶 液添加到所述珠中。将该珠混合物直接添加到浓缩细菌样品中进行感 染(3A和3B部分)。

3.扩增

A.铺平板细胞的制备

在含有12.5μg/ml四环素的LB培养基中，将新鲜大肠杆菌(XL-1 Blue MRF′)培养物生长到OD600＝0.5。对每一种淘选(panning)条件来 说，在冰上冷却20毫升的该培养物，并且离心。将细菌沉淀物重新悬 浮在1毫升的Min A盐溶液中。

B.转导

将来自不同洗脱方法的每一种混合物(2D和2E部分)添加到浓 缩细菌样品(3A部分)中，并且在37℃下培养15分钟。将2毫升NZCYM 培养基(2×NZCYM，50μg/ml氨苄青霉素)添加到每一种混合物中，并 且在室温下培养15分钟。将所得到的4毫升溶液铺在50μg/ml氨苄青 霉素的大型NZCYM琼脂平板上，并且在37℃下培养过夜。

C.噬菌体收获

将在大型NZCYM琼脂平板(3B部分)上生长过夜的每一种细菌 /噬菌体混合物刮取到35毫升LB培养基中，并且再用35毫升的LB培 养基进一步漂洗所述琼脂平板。对所得到的存在于LB培养基中的细菌 /噬菌体混合物进行离心，以便使细菌沉淀。将50毫升的噬菌体上清液 转移到新的试管中，并且添加12.5毫升的PEG溶液(20％PEG8000， 3.5M乙酸铵)，并且在冰上培养2小时，以便使噬菌体沉淀。通过离心 使沉淀的噬菌体下落，并且重新悬浮在6毫升的噬菌体再悬浮缓冲液中 (250mM NaCl，100mM Tris，pH8，1mM EDTA)。通过离心再次纯化 该噬菌体溶液，除去其余的细菌，并且通过添加1.5毫升PEG溶液再 次沉淀噬菌体。在离心步骤之后，将噬菌体沉淀重新悬浮在400微升 PBS中。对该溶液进行最后的离心，以便消除其余的细菌碎片。通过标 准噬斑形成测定对所得到的噬菌体制剂进行滴定(Molecular Cloning， Maniatis等3rd Edition)。

4.另两轮筛选和扩增

在第二轮中，将来自第一轮(3C部分)的扩增噬菌体(1010pfu)用 作输入噬菌体，进行筛选和扩增步骤(2和3部分)。将来自第二轮的 扩增噬菌体(1010pfu)再用作输入噬菌体进行第三轮筛选和扩增(2和3 部分)。在第三轮的洗脱步骤之后(2D和2E部分)，向在噬菌体形 成测定(3C部分)那样对少量的洗脱噬菌体进行铺平板。挑选单独的 噬斑，并且放入在每一个孔中含有100微升TE缓冲液的96孔微量滴 定板上。将所述主平板放入37℃的培养箱中培养1小时，以便将噬菌 体洗脱到TE缓冲液中。

5.克隆分析(噬菌体ELISA和测序)

通过噬菌体ELISA和测序方法分析噬菌体克隆。根据来自这两种 分析的组合结果对序列进行分级。

A.噬菌体ELISA

将XL-1BlueMRF′培养物生长到OD600达到0.5。将30微升的该 培养物等分到96孔微量滴定板的每一个孔中。将10微升洗脱噬菌体 (第四部分)添加到每一个孔中，并且在室温下感染细菌15分钟。向 每一个孔中添加130微升含有12.5μg/ml四环素和50μg/ml氨苄青霉 素的LB培养基。然后在37℃下培养所述微量滴定板过夜。在4℃下， 让重组TALL-1蛋白(1μg/ml，溶解在PBS中)对96孔Maxisorp平板 (NUNC)进行包衣过夜。作为对照，以与TALL-1蛋白相同的摩尔浓度 将重组Fc-Trail蛋白包衣在另一个Maxisorp平板上。

在次日，将蛋白包衣的Maxisorp平板中的液体倒掉，并且每一个 孔用300微升的2％BSA溶液在37℃下封闭1小时。倒掉BSA溶液， 并且用PBST溶液洗涤所述孔3次。在最后的洗涤步骤之后，将50微 升PBST添加到蛋白包衣的Maxisorp平板的每一个孔中。将96孔微量 滴定板上的每一种50微升的过夜培养物转移到TALL-1包衣的平板以 及对照Fc-Trail包衣平板的相应的孔中。在室温下培养这两种类型平板 上的100微升混合物1小时。将液体从Maxisorp平板上倒掉，并且用 PBST洗涤孔5次。将HRP-缀合的抗-M13抗体(Pharmacia)稀释1∶7500 倍，并且将100微升稀释液添加到Maxisorp平板上的每一个孔中，在 室温下培养1小时。再次倒掉液体，并且用PBST洗涤所述孔7次。将 100微升四甲基联苯胺(TMB)底物(Sigma)添加到每一个孔中，以便进行 显色反应，并且用50微升的5N H2SO4溶液终止该反应。在平板读数 器(Molecular Devices)上读出OD450。

B.噬菌体克隆的测序

对每一种噬菌体克隆来说，测序模板是通过PCR方法制备的。利 用以下寡核苷酸的扩增大约500个核苷酸片段：

引物1(5′-CGGCGCAACTATCGGTATCAAGCTG-3′)(SEQ ID NO： 56)和

引物2(5′-CATGTACCGTAACACTGAGTTTCGTC-3′(SEQ ID NO： 57)。

为每一种克隆制备以下混合物

  试剂   体积(μL)/管   dH2O   26.25   50％甘油   10   10B PCR缓冲液(w/o MgCl2)   5   25mM MgCl2   4   10mM dNTP混合物   1   100μM引物1   0.25   100μM引物2   0.25   Taq聚合酶   0.25

 TE中的噬菌体(第4部分)   3  最终反应体积   50

用热循环仪(GeneAmp PCR System 9700，Applied Biosystems)执行 以下程序：94℃，5分钟；[94℃，30秒，55℃，30秒，72℃，45秒]×30 轮；72℃，7分钟；冷却到4℃。通过将每一个PCR反应的5微升样品 在1％琼脂糖凝胶上电泳，检查所述PCR产物。使用QIAquick Multiwell PCR纯化试剂盒(Qiagen)，按照生产商的方法对来自每一种反应的45 微升的PCR产物进行纯化。然后用ABI 377测序仪(Perkin-Elmer)，按 照生产商推荐的方法对所得到的产物进行测序。

6.序列分级和共有序列测定

A.序列分级

将由可变核苷酸序列(5B部分)翻译的肽序列与ELISA数据相关 联。将与TALL-1包衣的孔中表现出高的OD450，并且在Fc-Trail包衣 的孔中表现出低的OD450的克隆被认为更重要一些。多次出现的序列 也被认为是重要的。根据以上标准选择候选序列作为肽或肽体进行进 一步分析。分别从TN8-IX和TN12-I文库中选择5个和9个候选肽序 列。

B.共有序列确定

从TN12-I文库中选择的大部分序列包括一个非常保守的DBL基 序。该基序在从TN8-IB文库中选择的序列中同样是保守的。在从 TN8-IB文库中获得的序列中也观察到了另一种基序PFPWE(SEQ ID NO：110)。

根据DBL基序确定了一种共有肽FHDCKWDLLTKQWVCHGL (SEQID NO：58)。由于来自TN12-I文库的肽是活性最高的肽，通过DBL 基序对基于上述分类标准(5A部分)上面26种肽序列进行排比。通过 确定在每一个位置上出现次数最多的氨基酸获得了加下划线的“核心 氨基酸序列”。靠近所述核心序列的两个半胱氨酸是TN12-I文库中的 固定氨基酸。所有共有肽上的其余的氨基酸序列来自候选肽之一 TALL-1-12-10(表2，SEQID NO：37)。在B细胞增殖测定中，来自该共 有序列的肽和肽体是最活跃的。

实施例2

肽体

构建一套12TALL-1抑制肽体(表5)，其中，将每一种肽的一 个单体融合在人IgG1的Fc区的框内。每一种TALL-1抑制肽体是通过 以下方法构建的，对表6所示的寡核苷酸对进行退火，以便产生编码所 述肽和接头的双链体，它包括5个甘氨酸残基和一个缬氨酸残基，是作 为NdeI-SalI片段形式出现的。将该双链分子连接到同样用NdeI和 SalI消化过的含有人Fc基因的载体上(pAMG21RANK-Fc，如本文所披 露的)。通过电穿孔将所得到的连接混合物转入大肠杆菌菌株2596细胞 中(GM221，如本文所披露的)。筛选克隆产生重组蛋白产物和拥有 具备正确核苷酸序列的基因融合体的能力。对每一种肽体选择一个这 样的克隆。所述融合蛋白的核苷酸和氨基酸序列如图4A-4F所示。

表5.用于制备TALL-1抑制肽体的肽序列和寡核苷酸

  肽体   肽体   SEQ   ID NO   肽序列   正义寡   核苷酸   反义寡   核苷酸   TALL-1-8-1-a   29   PGTCFPFPWECTHA   2517-24   2517-25   TALL-1-8-2-a   30   WGACWPFPWECFKE   2517-26   2517-27   TALL-1-8-4-a   31   VPFCDLLTKHCFEA   2517-28   2517-29   TALL-1-12-4-a   32   GSRCKYKWDVLTKQCFHH   2517-30   2517-31   TALL-1-12-3-a   33   LPGCKWDLLIKQWVCDPL   2517-32   2517-33   TALL-1-12-5-a   34   SADCYFDILTKSDVCTSS   2517-34   2517-35   TALL-1-12-8-a   35   SDDCMYDQLTRMFICSNL   2517-36   2517-37   TALL-1-12-9-a   36   DLNCKYDELTYKEWCQFN   2521-92   2521-93   TALL-1-12-10-a   37   FHDCKYDLLTRQMVCHGL   2521-94   2521-95   TALL-1-12-11-a   38   RNHCFWDHLLKQDICPSP   2521-96   2521-97   TALL-1-12-14-a   39   ANQCWWDSLTKKNVCEFF   2521-98   2521-99   TALL-1共有序列   58   FHDCKWDLLTKQWVCHGL   2551-48   2551-49

表5B TALL-1抑制性肽体

  肽体   肽体   SEQ ID   NO   肽序列   TALL-1-8-   1-a   111   MPGTCFPFPW ECTHAGGGGG VDKTHTCPPC PAPELLGGPS   VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV   DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY   KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT   KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD   SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK   SLSLSPGK   TALL-1-8-   2-a   112   MWGACWPFPW ECFKEGGGGG VDKTHTCPPC PAPELLGGPS   VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV   DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY   KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT   KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD   SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK   SLSLSPGK   TALL-1-8-   4-a   113   MVPFCDLLTK HCFEAGGGGG VDKTHTCPPC PAPELLGGPS   VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV   DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY   KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT   KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD   SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK   SLSLSPGK   TALL-1-12-   4-a   114   MGSRCKYKWD VLTKQCFHHG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP   PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK   TALL-1-12-   3-a   115   MLPGCKWDLL IKQWVCDPLG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP   PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK   TALL-1-12-   5-a   116   MSADCYFDIL TKSDVCTSSG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKP   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP   PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK   TALL-1-12-   8-a   117   MSDDCMYDQL TRMFICSNLG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP

  PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK   TALL-1-12-   9-a   118   MDLNCKYDEL TYKEWCQFNG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP   PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK   TALL-1-12-   10-a   119   MFHDCKYDLL TRQMVCHGLG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP   PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK   TALL-1-12-   11-a   120   MRNHCFWDHL LKQDICPSPG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP   PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK   TALL-1-12-   14-a   121   MANQCWWDSL TKKNVCEFFG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP   PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK   TALL-1-   共有序列   122   MFHDCKWDLL TKQWVCHGLG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP   PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK   TALL-112-   3   串联双体   123   MLPGCKWDLL IKQWVCDPLG SGSATGGSGS TASSGSGSAT   HMLPGCKWDL LIKQWVCDPL GGGGGVDKTH TCPPCPAPEL   LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK   FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL   NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS   RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT   PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN   HYTQKSLSLS PGK   TALL-1   共有串联   双体   124   MFHDCKWDLL TKQWVCHGLG SGSATGGSGS TASSGSGSAT   HMFHDCKWDL LTKQWVCHGL GGGGGVDKTH TCPPCPAPEL   LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK   FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL   NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS   RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT   PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN   HYTQKSLSLS PGK

表6用于肽体构建的寡核苷酸

  寡核苷酸   识别号   SEQ   ID NO   序列   2517-24   71   TAT GCC GGG TAC TTG TTT CCC GTT CCC GTG GGA ATG CAC   TCA CGC TGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-25   72   TCG ACC CCA CCG CCT CCT GGA GCG TGA GTG CAT TCC CAC   GGG AAG CCG AAA CAA GTA CCC GGC A   2517-26   73   TAT GTG GGG TGC TTG TTG GCC GTT CCC GTG GGA ATG TTT   CAA AGA AGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-27   74   TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCT TCT TTG AAA CAT TCC   CACGGG AAC GGC CAA CAAGCA CCC CAC A   2517-28   75   TAT GGT TCC GTT CTG TGA CCT GCT GAC TAA ACA CTG TTT   CGA AGC TGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-29   76   TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCA GCT TCG AAA CAG TGT TTA   GTC AGC AGG TCA CAGAAC GGA ACC A   2517-30   77   TAT GGG TTC TCG TTG TAA ATA CAA ATG GGA CGT TCT GAC   TAA ACA GTG TTT CCA CCA CGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-31   78   TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCG TGG TGG AAA CAC TGT TTA   GTC AGA ACG TCC CAT TTG TAT TTA CAA CGA GAA CCC A   2517-32   79   TAT GCT GCC GGG TTG TAA ATG GGA CCT GCT GAT CAA ACA   GTG GGT TTG TGA CCC GCT GGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-33   80   TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCC AGC GGG TCA CAA ACC CAC   TGT TTG ATC AGC AGG TCC CAT TTA CAA CCC GGC AGC A   2517-34   81   TAT GTC TGC TGA CTG TTA CTT CGA CAT CCT GAC TAA ATC   TGA CGT TTG TAC TTC TTC TGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-35   82   TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCA GAA GAA GTA CAA ACG TCA   GAT TTA GTC AGG ATG TCG AAG TAA CAG TCA GCA GAC A   2517-36   83   TAT GTC TGA CGA CTG TAT GTA CGA CCA GCT GAC TCG TAT   GTT CAT CTG TTC TAA CCT GGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-37   84   TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCC AGG TTA GAA CAG ATG AAC   ATA CGA GTC AGC TGG TCG TAC ATA CAG TCG TCA GAC A   2521-92   85   TAT GGA CCT GAA CTG TAA ATA CGA CGA ACT GAC TTA CAA   AGA ATG GTG TCA GTT CAA CGG TGG AGG CGG TGG GG   25221-93   86   TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCG TTG AAC TCA CAC CAT TCT   TTG TAA GTC AGTTCG TCG TAT TTA CAG TTC AGG TCC A   2521-94   87   TAT GTT CCA CGA CTG TAA ATA CGA CCT GCT GAC TCG TCA   GAT GGT TTG TCA CGG TCT GGG TGG AGG CGG TGG GG   2521-95   88   TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCC AGA CCG TGA CAA ACC ATC   TGA CGA GTC AGC AGG TCG TAT TTA CAG TCG TGG AAC A   2521-96   89   TAT GCG TAA CCA CTG TTT CTG GGA CCA CCT GCT GAA ACA

  GGA CAT CTG TCC GTC TCC GGG TGG AGG CGG TGG GG   2521-97   90   TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCC GGA GAC GGA CAG ATG TCC   TGT TTC AGC AGG TGG TCC CAG AAA CAG TGG TTA CGC A   2521-98   91   TAT GGC TAA CCA GTG TTG GTG GGA CTC TCT GCT GAA AAA   AAA CGT TTG TGA ATT CTT CGG TGG AGG CGG TGG GG   2521-99   92   TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCG AAG AAT TCA CAA ACG TTT   TTT TTC AGC AGA GAG TCC CAC CAA CAC TGG TTA GCC A   2551-48   93   TAT GTT CCA CGA CTG CAA ATG GGA CCT GCT GAC CAA ACA   GTG GGT TTG CCA CGG TCT GGG TGG AGG CGG TGG GG   2551-49   94   TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCC AGA CCG TGG CAA ACC CAC   TGT TTG GTC AGC AGG TCC CAT TTG CAG TCG TGG AAC A

pAMG21-RANK-Fc载体

pAMG21。表达质粒pAMG21(ATCC保藏号98113)可源于Amgen 表达载体pCFM1656(ATCC保藏号69576)，而后者又源于在美国专利 4,710,473中所披露的Amgen表达载体系统。pCFM1656质粒pCFM836 质粒通过以下方式源于(美国专利4,710,473)：

·通过用T4聚合物补平末端，随后进行平端连接破坏两个内源 NdeI限制位点；

·用从pCFM636(专利号4,710,473)中获得的含有PL启动子(参 见下面的SEQ ID NO：95)的类似片段取代单一的AatII和Clal限制位 点之间的含有合成PL启动子的DNA序列；和

·用具有SEQ ID NO：96序列的寡核苷酸取代位于单一Clal和Kpnl 限制位点之间的小DNA序列。

SEQ ID NO：95：

AatII

5’CTAATTCCGCTCTCACCTACCAAACAATGCCCCCCTGCAAAAAATAAATTCATAT-

3’TGCAGATTAAGGCGAGAGTGGATGGTTTGTTACGGGGGGACGTTTTTTATTTAAGTATA-

-AAAAAACATACAGATAACCATCTGCGGTGATAAATTATCTCTGGCGGTGTTGACATAAA-

-TTTTTTGTATCTCTATTGGTAGACGCCACTATTTAATAGAGACCGCCACAACTGTATTT-

-TACCACTGGCGGTGATACTGAGCACAT 3’

-ATGGTGACCGCCACTATGACTCGTGTAGC    5’

ClaI

SEQ ID NO：96：

5’CGATTTGATTCTAGAAGGAGGAATAACATATGGTTAACGCGTTGGAATTCGGTAC

3’

3’TAAACTAAGATCTTCCTCCTTATTGTATACCAATTGCGCAACCTTAAGC 5’

ClaI                                            KpnI

然后可以通过PCR重叠寡核苷酸诱变和DNA序列取代进行一系 列的定点碱基改变由CFM1656制备表达质量pAMG21。从紧靠质粒复 制启动子PcopB的5’末端的BglII位点(质粒bp 180)开始，并且向质 粒复制基因方向进行，进行下面的表7中所示出的碱基对改变。

表7-产生pAMG21的碱基对改变

用下面的DNA序列(SEQ ID NO：97)取代位于单一AatII (pCFM1656上的4364号位置)和SacII(pCFM1656上的4585号位置) 限制位点之间的DNA序列。

[AatII粘性末端]                     5′GCGTAACGTATGCATGGTCTCC-

(pAMG21中的4358号位置)          3′TGCACGCATTGCATACGTACCAGAGG-

-CCATGCGAGAGTAGGGAACTGCCAGGCATCAAATAAAACGAAAGGCTCAGTCGAAAGACT-

-GGTACGCTCTCATCCCTTGACGGTCCGTAGTTTATTTTGCTTTCCGAGTCAGCTTTCTGA-

-GGGCCTTTCGTTTTATCTGTTGTTTGTCGGTGAACGCTCTCCTGAGTAGGACAAATCCGC-

-CCCGGAAAGCAAAATAGACAACAAACAGCCACTTGCGAGAGGACTCATCCTGTTTAGGCG-

-CGGGAGCGGATTTGAACGTTGCGAAGCAACGGCCCGGAGGGTGGCGGGCAGGACGCCCGC-

-GCCCTCGCCTAAACTTGCAACGCTTCGTTGCCGGGCCTCCCACCGCCCGTCCTGCGGGCG-

-CATAAACTGCCAGGCATCAAATTAAGCAGAAGGCCATCCTGACGGATGGCCTTTTTGCGT-

-GTATTTGACGGTCCGTAGTTTAATTCGTCTTCCGGTAGGACTGCCTACCGGAAAAACGCA-

                                              AatII

-TTCTACAAACTCTTTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGGACGTCGTACTTAAC-

-AAGATGTTTGAGAAAACAAATAAAAAGATTTATGTAAGTTTATACCTGCAGCATGAATTG-

-TTTTAAAGTATGGGCAATCAATTGCTCCTGTTAAAATTGCTTTAGAAATACTTTGGCAGC-

-AAAATTTCATACCCGTTAGTTAACGAGGACAATTTTAACGAAATCTTTATGAAACCGTCG-

-GGTTTGTTGTATTGAGTTTCATTTGCGCATTGGTTAAATGGAAAGTGACCGTGCGCTTAC-

-CCAAACAACATAACTCAAAGTAAACGCGTAACCAATTTACCTTTCACTGGCACGCGAATG-

-TACAGCCTAATATTTTTGAAATATCCCAAGAGCTTTTTCCTTCGCATGCCCACGCTAAAC-

-ATGTCGGATTATAAAAACTTTATAGGGTTCTCGAAAAAGGAAGCGTACGGGTGCGATTTG-

-ATTCTTTTTCTCTTTTGGTTAAATCGTTGTTTGATTTATTATTTGCTATATTTATTTTTC-

-TAAGAAAAAGAGAAAACCAATTTAGCAACAAACTAAATAATAAACGATATAAATAAAAAG-

-GATAATTATCAACTAGAGAAGGAACAATTAATGGTATGTTCATACACGCATGTAAAAATA-

-CTATTAATAGTTGATCTCTTCCTTGTTAATTACCATACAAGTATGTGCGTACATTTTTAT-

-AACTATCTATATAGTTGTCTTTCTCTGAATGTGCAAAACTAAGCATTCCGAAGCCATTAT-

-TTGATAGATATATCAACAGAAAGAGACTTACACGTTTTGATTCGTAAGGCTTCGGTAATA-

-TAGCAGTATGAATAGGGAAACTAAACCCAGTGATAAGACCTGATGATTTCGCTTCTTTAA-

-ATCGTCATACTTATCCCTTTGATTTGGGTCACTATTCTGGACTACTAAAGCGAAGAAATT-

-TTACATTTGGAGATTTTTTATTTACAGCATTGTTTTCAAATATATTCCAATTAATCGGTG-

-AATGTAAACCTCTAAAAAATAAATGTCGTAACAAAAGTTTATATAAGGTTAATTAGCCAC-

-AATGATTGGAGTTAGAATAATCTACTATAGGATCATATTTTATTAAATTAGCGTCATCAT-

-TTACTAACCTCAATCTTATTAGATGATATCCTAGTATAAAATAATTTAATCGCAGTAGTA-

-AATATTGCCTCCATTTTTTAGGGTAATTATCCAGAATTGAAATATCAGATTTAACCATAG-

-TTATAACGGAGGTAAAAAATCCCATTAATAGGTCTTAACTTTATAGTCTAAATTGGTATC-

-AATGAGGATAAATGATCGCGAGTAAATAATATTCACAATGTACCATTTTAGTCATATCAG-

-TTACTCCTATTTACTAGCGCTCATTTATTATAAGTGTTACATGGTAAAATCAGTATAGTC-

-ATAAGCATTGATTAATATCATTATTGCTTCTACAGGCTTTAATTTTATTAATTATTCTGT-

-TATTCGTAACTAATTATAGTAATAACGAAGATGTCCGAAATTAAAATAATTAATAAGACA-

-AAGTGTCGTCGGCATTTATGTCTTTCATACCCATCTCTTTATCCTTACCTATTGTTTGTC-

-TTCACAGCAGCCGTAAATACAGAAAGTATGGGTAGAGAAATAGGAATGGATAACAAACAG-

-GCAAGTTTTGCGTGTTATATATCATTAAAACGGTAATAGATTGACATTTGATTCTAATAA-

-CGTTCAAAACGCACAATATATAGTAATTTTGCCATTATCTAACTGTAAACTAAGATTATT-

-ATTGGATTTTTGTCACACTATTATATCGCTTGAAATACAATTGTTTAACATAAGTACCTG-

-TAACCTAAAAACAGTGTGATAATATAGCGAACTTTATGTTAACAAATTGTATTCATGGAC-

-TAGGATCGTACAGGTTTACGCAAGAAAATGGTTTGTTATAGTCGATTAATCGATTTGATT-

-ATCCTAGCATGTCCAAATGCGTTCTTTTACCAAACAATATCAGCTAATTAGCTAAACTAA-

-CTAGATTTGTTTTAACTAATTAAAGGAGGAATAACATATGGTTAACGCGTTGGAATTCGA-

-GATCTAAACAAAATTGATTAATTTCCTCCTTATTGTATACCAATTGCGCAACCTTAAGCT-

                                                 SacII

-GCTCACTAGTGTCGACCTGCAGGGTACCATGGAAGCTTACTCGAGGATCCGCGGAAAGAA-

-CGAGTGATCACAGCTGGACGTCCCATGGTACCTTCGAATGAGCTCCTAGGCGCCTTTCTT-

-GAAGAAGAAGAAGAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATA-

-CTTCTTCTTCTTCTTTCGGGCTTTCCTTCGACTCAACCGACGACGGTGGCGACTCGTTAT-

-ACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCTGAAAGGAGG-

-TGATCGTATTGGGGAACCCCGGAGATTTGCCCAGAACTCCCCAAAAAACGACTTTCCTCC-

-AACCGCTCTTCACGCTCTTCACGC 3′[SacII粘性末端]

-TTGGCGAGAAGTGCGAGAAGTG   5′(pAMG21中的5904号位置)

在连接该取代DNA序列的粘性末端之间，破坏了外侧的AatII和 SacII位点。在取代的DNA上具有单一的AatII和SacII位点。

将编码与Fc的N-末端融合的人RANK的基因以NdeI-BamHI片段 形式连接在pAMG21上，以便制备Amgen菌株#4125。对该构建体进 行修饰，以便在RANK和Fc的结合部分插入一个缬氨酸密码子。相邻 的缬氨酸和天冬氨酸密码子形成了一个单一的SalI位点。这使得所述 肽可以融合在Fc3的N-末端的NdeI和SalI位点之间。在插入一个新的 NdeI和SalI片段之后，破坏了RANK序列。在图5A-5M中提供了所述 载体的序列。

GM221(Amgen#2596)。Amgen宿主菌株#2596是源于Amgen 菌株#393的大肠杆菌K-12菌株，后者是大肠杆菌W1485的衍生物， 它是从耶鲁大学的大肠杆菌遗传学资源中心获得的，New Haver， Connecticut(CGSC菌株6159)。业已将它修饰在早期ebg区含有温度 敏感型λ抑制子cI857s7，在晚期ebg区含有lacIQ抑制子(68分钟)。 这两个抑制基因的存在，使得该宿主能够使用多种表达系统，不过， 这两种抑制子与luxPR的表达无关。未转化过的宿主没有抗生素抗性。

业已对cI857s7基因的核糖体结合位点进行了修饰，以便包括强化 的RBS。业已将它插入1170和1411号核苷酸位置之间的ebg操纵子， 所述编号是按照Genbank保藏号M64441Gb_Ba进行的，缺失了插入的 ebg序列。下面示出了插入片段的序列，用小写字母表示位于下面所示 插入序列旁侧的ebg序列(SEQ ID NO：98)：

ttattttcgtGCGGCCGCACCATTATCACCGCCAGAGGTAAACTAGTCAACACGCACGGTGTTAGATAT

TTATCCCTTGCGGTGATAGATTGAGCACATCGATTTGATTCTAGAAGGAGGGATAATATATGAG

CACAAAAAAGAAACCATTAACACAAGAGCAGCTTGAGGACGCACGTCGCCTTAAAGCAATTTA

TGAAAAAAAGAAAAATGAACTTGGCTTATCCCAGGAATCTGTCGCAGACAAGATGGGGATGGG

GCAGTCAGGCGTTGGTGCTTTATTTAATGGCATCAATGCATTAAATGCTTATAACGCCGCATTGC

TTACAAAAATTCTCAAAGTTAGCGTTGAAGAATTTAGCCCTTCAATCGCCAGAGAATCTACGAG

ATGTATGAAGCGGTTAGTATGCAGCCGTCACTTAGAAGTGAGTATGAGTACCCTGTTTTTTCTCA

TGTTCAGGCAGGGATGTTCTCACCTAAGCTTAGAACCTTTACCAAAGGTGATGCGGAGAGATGG

GTAAGCACAACCAAAAAAGCCAGTGATTCTGCATTCTGGCTTGAGGTTGAAGGTAATTCCATGA

CCGCACCAACAGGCTCCAAGCCAAGCTTTCCTGACGGAATGTTAATTCTCGTTGACCCTGAGCA

GGCTGTTGAGCCAGGTGATTTCTGCATAGCCAGACTTGGGGGTGATGAGTTTACCTTCAAGAAA

CTGATCAGGGATAGCGGTCAGGTGTTTTTACAACCACTAAACCCACAGTACCCAATGATCCCAT

GCAATGAGAGTTGTTCCGTTGTGGGGAAAGTTATCGCTAGTCAGTGGCCTGAAGAGACGTTTGG

CTGATAGACTAGTGGATCCACTAGTgtttctgccc

利用被称为Mmebg-cI857s7基因强化RBS#4的重组噬菌体将所述 构建体输送到F’tet/393的染色体中。在重组和分离之后，只有上述染 色体插入片段还保留在所述细胞内。将它重新命名为F’tet/GM101。然 后通过将lacIQ构建体输送到2493和2937号核苷酸之间的ebg操纵子 上将F’tet/GM101进行修饰，所述编号是按照Genbank保藏号 M64441Gb_Ba进行的，缺失了插入的ebg列。下面示出了插入片段 的序列，用小写字母表示位于下面所示插入序列旁侧的ebg序列(SEQ ID NO：99)：

AGGGCAATCAGCTGTTGCCCGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCA

AACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGG

AAAGCGGACAGTAAGGTACCATAGGATCCaggcacagga

用被称为AGebg-LacIQ#5的重组噬菌体将所述构建体输送到F’tet/ GM101的染色体中。在重组和分离之后，只有上述染色体插入片段还 保留在所述细胞内。将它重新命名为F’tet/GM221。在LB中使用浓度 为25微克/毫升的吖啶橙将F’tet附加体从所述菌株中清除。所述清除 后的菌株被确定为四环素敏感性，并且作为GM221保存。

在大肠杆菌中的表达。在37℃下在LB培养基中生长存在于大肠 杆菌GM221中的每一种pAMG21-Fc-融合构建体的培养物。通过以20 纳克/毫升的最终浓度向培养基中添加合成的自身诱导剂N-(3-羟基叠 烷酰)-DL-高丝氨酸内酯实现了来自luxPR启动子的基因产物表达的诱 导。在37℃下再培养3小时。3小时之后，通过显微技术检查包含体的 存在，然后通过离心收集。在诱导过的培养物中观察到了折射包含体 的存在，这表明Fc融合体最有可能以不可溶的级份在大肠杆菌中产生 的。通过重新悬浮在含有10％β-巯基乙醇的Laemmli样品缓冲液中直 接裂解细胞沉淀，并且通过SDS-PAGE分析。在每一种场合下，在 SDS-PAGE凝胶上都观察到了分子量大致相当的强的考马斯染色带。

实施例3

TALL-1肽体能抑制TALL-1介导的B细胞增殖。

通过阴性选择从C57BL/6脾中分离小鼠B淋巴细胞(MACS CD43(Ly-48)Microbeads，Miltenyi Biotech，Auburn，CA)。在MEM (10％热失活FCS，5×10-5M 2-巯基乙醇，100U/ml青霉素，100微克/ 毫升链霉素)中培养纯化的(105)B细胞，培养是在96孔平底组织培 养平板上进行的，重复3次，在37℃，5％二氧化碳的条件下用2微克 /毫升山羊F(ab’)2抗小鼠IgM(Jackson ImmunoResearch Laboratory，West Grove，Pennsylvania)和标明数量的重组TALL-1肽体培养4天时间。在 经过18小时的培养时间之后，根据放射性3[H]胸苷的吸收测定增殖。

实施例4

TALL-1肽体能抑制TALL-1与它的受体结合

用AGP3(又被称为TALL-1，Khare等，Proc.Natl.Acad.Sci. 97：3370-3375，2000)对Reacti-Gel 6x(Pierce)进行预先包衣，并且用 BSA封闭。在室温下将100皮摩尔和40皮摩尔的AGP3肽体样品与标 明的各种浓度的人AGP3一起培养8小时，然后通过人AGP3-包衣的 珠。通过荧光(Cy5)标记的山羊的抗人Fc抗体(Jackson ImmunoResearch)定量珠结合的肽体的数量。结合信号与在结合平衡 时游离肽体的浓度成正比。解离平衡常数(KD)是利用双曲线单一位 点同源结合模型(KinExTM软件)从竞争曲线的非线性回归获得的。对 于与人AGP3结合的AGP3肽体(SEQ ID NO：123)来说，KD大约为 4皮摩尔(图9)。

为了确定AGP3肽体是否能中和鼠AGP3结合和人AGP3结合， 采用了BIAcore中和测定。所有实验都是在室温下在BIAcore 3000上 进行的。用10mM乙酸pH4.0将人TACI-Fc蛋白(Xia等，J.Exp.Med. 192，137-144，2000)固定在B1芯片上，达到2900RU的水平。将空白 流式细胞用作背景对照。使用含有0.005％P20的流动PBS缓冲液(不 含钙或镁)，在没有和有所标明的各种数量的AGP3肽体(x轴)的条 件下培养1nM重组人AGP3(在添加了0.1毫克/毫升BSA的流动缓冲 液中)，然后加注到所述受体表面上。再生是通过以下方式进行的： 使用8mM甘氨酸pH1.5，1分钟，25mM 3-[环己基氨基]-1-丙磺酸 (CAPS)pH10.5，1mM氯化钠，1分钟。为了测定鼠AGP3结合，在 上述缓冲液中将人his-标记的TACI固定到1000RU上。在有和没有图 11中所标明的各种量的AGP3肽体(x轴)的条件下，培养5nM重组 鼠AGP3(在添加了0.1毫克/毫升BSA的流动缓冲液中)，然后加注 到受体表面上。再生是按照以下方式进行的：10mM氯化氢pH2，2次， 30秒，测定了在有和没有AGP3肽体(SEQ ID NO：123)的条件下人 和鼠AGP3的相对结合(y轴)。相对结合反应是作为(RU-RU空白 /Ruo-RU空白)测定的。AGP3肽体(SEQ ID NO：123)能抑制人和鼠 AGP3与它的受体ACTI的结合(图10A和10B)。

为了检验这种AGP3肽体是否能抑制AGP3与所有三种受体 (TACI，BCMA和BAFFR)的结合，将重组可溶性受体TACI，BCMA 和BAFFR蛋白固定在CM5芯片上。使用10mM乙酸，pH4，将人TACI-Fc 蛋白固定在6300RU上，将BCMA-Fc固定在5000RU上，而将BAFR- Fc固定在6000RU上。将1nM重组人AGP3(在含有0.1毫克/毫升BSA 和0.1毫克/毫升肝素的流动缓冲液中)或1nM重组APRIL蛋白(Yu 等，Nat.Immunol.，1：252-256，2000)与标明数量的AGP3肽体一起培养， 然后加注到每一种受体表面上。AGP3实验的再生是这样进行的：8mM 甘氨酸pH1.5，1分钟，然后使用25mM CAPS，pH10.5，1mM氯化钠， 1分钟。APRIL实验的再生是这样进行的：8mM甘氨酸pH2，1分钟， 然后使用25mM CAPS，pH4.5，1mM氯化钠，1分钟。测定了AGP3 和APRIL的相对结合。AGP3肽体(SEQ ID NO：123)能抑制AGP3 与所有三种受体的结合(图11A)。AGP3肽体不会影响APRIL与所述 受体的结合(图11B)。

实施例5

AGP3肽体能抑制AGP3介导的B细胞增殖

通过阴性筛选从C57BL/6脾中分离小鼠B淋巴细胞(MACS CD43(Ly-48)Microbeads，Miltenyi Biotech，Auburn，CA)。基本必需 培养基(MEM)，10％热失活胎牛血清(FCS)，5×10-5M 2-巯基乙醇， 100U/ml青霉素，100微克/毫升链霉素)中培养纯化的(105)B细胞， 培养是在96孔平底组织培养平板上进行的，重复3次，在37℃，5％ 二氧化碳的条件下用10纳克/毫升AGP3(TALL-1)蛋白和2微克/毫升 山羊F(ab’)2抗小鼠IgM(Jackson ImmunoResearch Laboratory，West Grove，Pennsylvania)和标明数量AGP3肽体(SEQ ID NO：123)一起 培养4天时间。在经过18小时的培养时间之后，根据放射性3[H]胸苷 的吸收测定增殖。

实施例6

在小鼠中AGP3肽体对AGP3-刺激Ig产生的影响

对从Charles River Laboratory，Wilmington，MA.购买的小鼠(Balb/c 雌性9-14周大的体重为19-21克)的小鼠进行处理。每天用1毫克/千 克人AGP3i.p.处理小鼠(n＝10)1次，连续进行5天，然后用5毫克/ 千克或0.5毫克/千克AGP3肽体(SEQ ID NO：123)或用盐水或5毫 克/千克人Fc处理。其他小鼠不进行处理。在第6天宰杀小鼠，以便测 定血清IgM和IgA，是通过ELISA测定的。简单地讲，用对IgM或IgA 专一的捕捉抗体(Southern Biotechmology Associates，Birmingham，AL) 对平板进行包衣，封闭，并且添加标准稀释液(IgM购自Calbiochem，San Diego，CA，而IgA购自Southern Biotechmology Associates)或测试样品。 使用对IgM或IgA专一的生物素化的抗体(Southern Biotechmology Associates)，neutravidin-缀合的过氧化物酶(Pierce，Rockford，IL)和 四甲基联苯胺(TMB)微孔过氧化物酶底物(KPL，Gaithersburg，MD) 观察捕捉的Ig。在Thermomax ELISA读数器(Molecular Devices，Menlo Park，CA)上对光学密度进行定量。

通过5毫克/千克的抗AGP3肽体(SEQ ID NO：123)而不是通过 0.5毫克/千克抑制由人AGP3-刺激的IgM和IgA的血清含量的提高(图 12A和12B)。

实施例7

AGP3肽体降低小鼠体内脾B细胞数量

用5毫克/千克1/5毫克/千克或0.5毫克/千克的AGP3肽体(SEQ ID NO：123)或用盐水或用5毫克/千克的人Fc连续i.p.处理小鼠(如 上文所述，n＝7)7天时间。在第8天宰杀小鼠，以便统计脾B细胞数 量。将脾脏收集到盐水，并通过手工匀浆融合破碎，以便得到细胞悬 浮液。总的细胞数量是通过H1E计数器(Techincon，Tarrytowu，NY) 获得的。B细胞的百分比是通过免疫荧光双染色和流式细胞测定获得 的，分别使用了荧光素异硫氰酸酯(FITC)缀合的和藻红素(PE)-缀 合的Ab抗AD3和B220抗体(PharMingen，San Diego，CA)和FACScan 分析仪(Becton and Dickinson，Mountain View，CA)。确定B细胞是 CD3-B220+。在所有剂量下，AGP3肽体(SEQ ID NO：123)能以剂量 响应形式减少脾B细胞数量(图12A和12B)(SEQ ID NO：123)。

表8

AGP3Pb能减少正常小鼠的B细胞数量

  n＝7   剂量(1/天×7)   脾B细胞   (1×10e6)   SD   t测验   盐水   51.3   9.6   Fc   5毫克/千克   45.5   7.1   肽体   5毫克/千克   20.1   3.8   1.37856E-05   1.5毫克/千克   22.6   6.9   5.10194E-05   0.5毫克/千克   25.8   3.6   0.000111409

实施例8

AGP3肽体能减轻小鼠CIA模型的关节炎严重程度

用乳化在完全弗氏佐剂(Difco)中的牛II型胶原(bCII)(从由 他大学购买)通过在尾巴根处经皮注射对8-12周大的DBA/1小鼠(获 自Jackson Laboratories，Bar Harbor，ME)进行免疫。每次注射100微升 含有100微克的bCII。在首次免疫之后3周，用乳化在不完全弗氏佐 剂中的bCII进行加强免疫。从加强免疫当天开始进行治疗4周时间。 检查小鼠关节炎的发展。正如以前所披露的(Khare等，J.Immunol. 155：3653-9，1995)，对所有四只爪子分别进行0-3的评分。因此，对每 一只动物来说，关节炎严重程度可以在0-12之间变化。AGP3(SEQ ID NO：123)肽体治疗显著减轻了关节炎评分的严重程度(图13)。

在最后治疗(第35天)之后1周采集血清样品，分析抗胶原抗体 含量。用溶解在碳酸缓冲液中的50微升4微克/毫升的牛CII溶液对高 结合ELISA平板(Immulon，Nunc)进行包衣，并且在冰箱中冷藏保持 平板过夜。用冰镇水洗涤平板3次。用75微升的由 PBS/.05％tween20/1％BSA组成的封闭溶液封闭非专一性结合1小时。 以1∶25，1∶100，1∶400，和1∶1600的比例在稀释平板上稀释样品 (用封闭缓冲液稀释)，并且将25微升所述样品添加到ELISA平板的 每一个孔中，使最终稀释倍数为100，400，1600和6400，最终体积为 100微升/孔。在室温下培养3小时之后，再次洗涤平板3次。将100 微升用封闭缓冲液稀释的二级抗体(大鼠抗小鼠IgM，IgG2a，IgG2b， IgG1，IgG3-HRP)添加到每一个孔中，并且培养平板至少2小时。洗涤 平板4次。将100微升TMB溶液(Sigma)添加到每一个孔中，并且 用50微升的25％硫酸终止反应。用ELISA平板读数器在450nm波长 下对所述平板进行读数。将OD与单位/毫升表示的标准库进行比较。 与PBS或Fc对照处理组相比，AGP3肽体(SEQ ID NO：123)降低了 血清抗胶原II IgG1，IgG3，IgG2a和IgG2b水平(图14)。

实施例9

AGP3肽体治疗NZB/NZW狼疮小鼠

用PBS或标明剂量的AGP3肽体或人Fc蛋白通过i.p.治疗5周大 的易感狼疮的NZB×NZBWF1小鼠，每周3次，共8周时间。在治疗 之前用Albustix试剂条(Bayer AG)对尿液中的蛋白进行预筛选。在本 研究中不包括尿液中超过100毫克/dl蛋白的小鼠。在该实验的整个过 程中，每月评估尿液中的蛋白。AGP3肽体(SEQ ID NO：123)治疗 导致了蛋白尿发作的推迟，并且提高了成活率(图15A和15B)。

AGP3肽体治疗降低了小鼠的B细胞数量。Balb/c小鼠接受了7 次每天1次的腹膜内注射标明数量的AGP3肽体(SEQ ID NO：123) 或人Fc蛋白。在第8天，收集脾，并且对B220+B细胞进行FACS分 析，如表8所示。

现在对本发明进行了全面说明，本领域技术人员可以理解的是， 在不超出所提出的本发明构思和范围的前提下，可以对它进行多种改 变和改进。

本发明涉及2001年5月11日提交的美国临时申请60/290,196， 该申请被引入本文作为参考。

序列表

<110>AMGEN INC.

<120>与TALL-1结合的肽和相关分子

<130>A-743(PCT)

<140>PCT/US 02/15273

<141>2002-05-13

<150>US 60/290,196

<151>2001-05-11

<160>197

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>684

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(684)

<400>1

atg gac aaa act cac aca tgt cca cct tgt cca gct ccg gaa ctc ctg     48

Met Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

1               5                   10                  15

ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc     96

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

            20                  25                  30

atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc    144

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

        35                  40                  45

cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag    192

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

    50                  55                   60

gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg    240

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

65                  70                  75                  80

tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat    288

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

                85                  90                  95

ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc    336

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

            100                 105                 110

atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag    384

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

        115                 120                 125

gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc    432

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

    130                 135                 140

agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg    480

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145                 150                 155                 160

gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct    528

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

                165                 170                 175

ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc    576

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

            180                 185                 190

gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg    624

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

        195                 200                 205

atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg    672

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

    210                 215                 220

tct ccg ggt aaa                                                    684

Ser Pro Gly Lys

225

<210>2

<211>228

<212>PRT

<213>人

<400>2

Met Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys  Pro Ala Pro Glu Leu Leu

 1              5                   10                   15

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

            20                  25                  30

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

        35                  40                  45

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

    50                  55                  60

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

65                  70                  75                  80

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

                85                  90                  95

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

            100                 105                 110

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

        115                 120                 125

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

    130                 135                 140

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145                 150                 155                 160

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

                165                 170                 175

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

            180                 185                 190

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

        195                 200                 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

    210                 215                 220

Ser Pro Gly Lys

225

<210>3

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(61)

<400>3

t atg ccg ggt act tgt ttc ccg ttc ccg tgg gaa tgc act cac gct ggt 49

  Met Pro Gly Thr Cys Phe Pro Phe Pro Trp Glu Cys Thr His Ala Gly

  1               5                   10                  15

gga ggc ggt ggg g                                                 62

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>4

<211>20

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>4

Met Pro Gly Thr Cys Phe Pro Phe Pro Trp Glu Cys Thr His Ala Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>5

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(61)

<400>5

t atg tgg ggt gct tgt tgg ccg ttc ccg tgg gaa tgt ttc aaa gaa ggt 49

  Met Trp Gly Ala Cys Trp Pro Phe Pro Trp Glu Cys Phe Lys Glu Gly

  1               5                   10                  15

gga ggc ggt ggg g                                                 62

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>6

<211>20

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>6

Met Trp Gly Ala Cys Trp Pro Phe Pro Trp Glu Cys Phe Lys Glu Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>7

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(61)

<400>7

t atg gtt ccg ttc tgt gac ctg ctg act aaa cac tgt ttc gaa gct ggt 49

  Met Val Pro Phe Cys Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Phe Glu Ala Gly

  1               5                   10                  15

gga ggc ggt ggg g                                                62

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>8

<211>20

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>8

Met Val Pro Phe Cys Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Phe Glu Ala Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>9

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>9

t atg ggt tct cgt tgt aaa tac aaa tgg gac gtt ctg act aaa cag tgt 49

  Met Gly Ser Arg Cys Lys Tyr Lys Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Cys

  1               5                   10                  15

ttc cac cac ggt gga ggc ggt ggg g                                 74

Phe His His Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>10

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>10

Met Gly Ser Arg Cys Lys Tyr Lys Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Cys

1               5                   10                  15

Phe His His Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>11

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>11    t atg ctg ccg ggt tgt aaa tgg gac ctg ctg atc aaa cag tgg gtt tgt 49

 Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

 1               5                   10                  15

gac ccg ctg ggt gga ggc ggt ggg g                                74

Asp Pro Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>12

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>12

Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

Asp Pro Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>13

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>13

t atg tct gct gac tgt tac ttc gac atc ctg act aaa tct gac gtt tgt   49

  Met Ser Ala Asp Gys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys

  1               5                   10                  15

act tct tct ggt gga ggc ggt ggg g                                   74

Thr Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>14

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>14

Met Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys

1               5                   10                  15

Thr Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>15

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>15

t atg tct gac gac tgt atg tac gac cag ctg act cgt atg ttc atc tgt    49

  Met Ser Asp Asp Cys Met Tyr Asp Gln Leu Thr Arg Met Phe Ile Cys

  1               5                   10                  15

tct aac ctg ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

Ser Asn Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>16

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>16

Met Ser Asp Asp Cys Met Tyr Asp Gln Leu Thr Arg Met Phe Ile Cys

1               5                   10                  15

Ser Asn Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>17

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>17

t atg gac ctg aac tgt aaa tac gac gaa ctg act tac aaa gaa tgg tgt    49

  Met Asp Leu Asn Cys Lys Tyr Asp Glu Leu Thr Tyr Lys Glu Trp Cys

  1               5               10               15

cag ttc aac ggg gtg gag gcg gtg ggg                                  76

Gln Phe Asn Gly Val Glu Ala Val

            20

<210>18

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>18

Met Asp Leu Asn Cys Lys Tyr Asp Glu Leu Thr Tyr Lys Glu Trp Cys

1               5                   10                  15

Gln Phe Asn Gly Val Glu Ala Val

            20

<210>19

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>19

t atg ttc cac gac tgt aaa tac gac ctg ctg act cgt cag atg gtt tgt    49

  Met Phe His Asp Cys Lys Tyr Asp Leu Leu Thr Arg Gln Met Val Cys

  1               5                   10                  15

cac ggt ctg ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>20

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>20

Met Phe His Asp Cys Lys Tyr Asp Leu Leu Thr Arg Gln Met Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>21

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>21

t atg cgt aac cac tgt ttc tgg gac cac ctg ctg aaa cag gac atc tgt    49

  Met Arg Asn His Cys Phe Trp Asp His Leu Leu Lys Gln Asp Ile Cys

  1               5                       10              15

ccg tct ccg ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

Pro Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>22

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>22

Met Arg Asn His Cys Phe Trp Asp His Leu Leu Lys Gln Asp Ile Cys

1               5                   10                  15

Pro Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>23

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>23

t atg gct aac cag tgt tgg tgg gac tct ctg ctg aaa aaa aac gtt tgt    49

  Met Ala Asn Gln Cys Trp Trp Asp Ser Leu Leu Lys Lys Asn Val Cys

  1               5                   10                  15

gaa ttc ttc ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

Glu Phe Phe Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>24

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>24

Met Ala Asn Gln Cys Trp Trp Asp Ser Leu Leu Lys Lys Asn Val Cys

1               5                   10                  15

Glu Phe Phe Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>25

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>25

t atg ttc cac gac tgc aaa tgg gac ctg ctg acc aaa cag tgg gtt tgc    49

  Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

  1               5                   10                  15

cac ggt ctg ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>26

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>26

Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>27

<211>7285

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>pAMG21-RANK-Fc载体

<400>27

gatcagcagt ccccggaaca tcgtagctga cgccttcgcg ttgctcagtt gtccaacccc     60

ggaaacggga aaaagcaagt tttccccgct cccggcgttt caataactga aaaccatact    120

atttcacagt ttaaatcaca ttaaacgaca gtaatccccg ttgatttgtg cgccaacaca    180

gatcttcgtc acaattctca agtcgctgat ttcaaaaaac tgtagtatcc tctgcgaaac     240

gatccctgtt tgagtattga ggaggcgaga tgtcgcagac agaaaatgca gtgacttcct     300

cattgagtca aaagcggttt gtgcgcagag gtaagcctat gactgactct gagaaacaaa     360

tggccgttgt tgcaagaaaa cgtcttacac acaaagagat aaaagttttt gtcaaaaatc     420

ctctgaagga tctcatggtt gagtactgcg agagagaggg gataacacag gctcagttcg     480

ttgagaaaat catcaaagat gaactgcaaa gactggatat actaaagtaa agactttact     540

ttgtggcgta gcatgctaga ttactgatcg tttaaggaat tttgtggctg gccacgccgt     600

aaggtggcaa ggaactggtt ctgatgtgga tttacaggag ccagaaaagc aaaaaccccg     660

ataatcttct tcaacttttg cgagtacgaa aagattaccg gggcccactt aaaccgtata     720

gccaacaatt cagctatgcg gggagtatag ttatatgccc ggaaaagttc aagacttctt     780

tctgtgctcg ctccttctgc gcattgtaag tgcaggatgg tgtgactgat cttcaccaaa     840

cgtattaccg ccaggtaaag aacccgaatc cggtgtttac accccgtgaa ggtgcaggaa     900

cgctgaagtt ctgcgaaaaa ctgatggaaa aggcggtggg cttcacttcc cgttttgatt     960

tcgccattca tgtggcgcac gcccgttcgc gtgatctgcg tcgccgtatg ccaccagtgc    1020

tgcgtcgtcg ggctattgat gcgctcttgc aggggctgtg tttccactat gacccgctgg    1080

ccaaccgcgt ccagtgctcc atcaccacgc tggccattga gtgcggactg gcgacggagt    1140

ctgctgccgg aaaactctcc atcacccgtg ccacccgtgc cctgacgttc ctgtcagagc    1200

tgggactgat tacctaccag acggaatatg acccgcttat cgggtgctac attccgaccg    1260

atatcacgtt cacatctgca ctgtttgctg ccctcgatgt atcagaggag gcagtggccg    1320

ccgcgcgccg cagccgtgtg gtatgggaaa acaaacaacg caaaaagcag gggctggata    1380

ccctgggcat ggatgaactg atagcgaaag cctggcgttt tgttcgtgag cgttttcgca    1440

gttatcagac agagcttaag tcccgtggaa taaagcgtgc ccgtgcgcgt cgtgatgcgg    1500

acagggaacg tcaggatatt gtcaccctgg tgaaacggca gctgacgcgc gaaatcgcgg    1560

aagggcgctt cactgccaat cgtgaggcgg taaaacgcga agttgagcgt cgtgtgaagg    1620

agcgcatgat tctgtcacgt aaccgtaatt acagccggct ggccacagct tccccctgaa    1680

agtgacctcc tctgaataat ccggcctgcg ccggaggctt ccgcacgtct gaagcccgac    1740

agcgcacaaa aaatcagcac cacatacaaa aaacaacctc atcatccagc ttctggtgca    1800

tccggccccc cctgttttcg atacaaaaca cgcctcacag acggggaatt ttgcttatcc    1860

acattaaact gcaagggact tccccataag gttacaaccg ttcatgtcat aaagcgccat    1920

ccgccagcgt tacagggtgc aatgtatctt ttaaacacct gtttatatct cctttaaact    1980

acttaattac attcatttaa aaagaaaacc tattcactgc ctgtccttgg acagacagat    2040

atgcacctcc caccgcaagc ggcgggcccc taccggagcc gctttagtta caacactcag    2100

acacaaccac cagaaaaacc ccggtccagc gcagaactga aaccacaaag cccctccctc    2160

ataactgaaa agcggccccg ccccggtccg aagggccgga acagagtcgc ttttaattat    2220

gaatgttgta actacttcat catcgctgtc agtcttctcg ctggaagttc tcagtacacg    2280

ctcgtaagcg gccctgacgg cccgctaacg cggagatacg ccccgacttc gggtaaaccc    2340

tcgtcgggac cactccgacc gcgcacagaa gctctctcat ggctgaaagc gggtatggtc    2400

tggcagggct ggggatgggt aaggtgaaat ctatcaatca gtaccggctt acgccgggct    2460

tcggcggttt tactcctgtt tcatatatga aacaacaggt caccgccttc catgccgctg    2520

atgcggcata tcctggtaac gatatctgaa ttgttataca tgtgtatata cgtggtaatg    2580

acaaaaatag gacaagttaa aaatttacag gcgatgcaat gattcaaaca cgtaatcaat    2640

atcgggggtg ggcgaagaac tccagcatga gatccccgcg ctggaggatc atccagccgg    2700

cgtcccggaa aacgattccg aagcccaacc tttcatagaa ggcggcggtg gaatcgaaat    2760

ctcgtgatgg caggttgggc gtcgcttggt cggtcatttc gaaccccaga gtcccgctca    2820

gaagaactcg tcaagaaggc gatagaaggc gatgcgctgc gaatcgggag cggcgatacc    2880

gtaaagcacg aggaagcggt cagcccattc gccgccaagc tcttcagcaa tatcacgggt    2940

agccaacgct atgtcctgat agcggtccgc cacacccagc cggccacagt cgatgaatcc    3000

agaaaagcgg ccattttcca ccatgatatt cggcaagcag gcatcgccat gagtcacgac    3060

gagatcctcg ccgtcgggca tgcgcgcctt gagcctggcg aacagttcgg ctggcgcgag    3120

cccctgatgc tcttcgtcca gatcatcctg atcgacaaga ccggcttcca tccgagtacg    3180

tgctcgctcg atgcgatgtt tcgcttggtg gtcgaatggg caggtagccg gatcaagcgt    3240

atgcagccgc cgcattgcat cagccatgat ggatactttc tcggcaggag caaggtgaga    3300

tgacaggaga tcctgccccg gcacttcgcc caatagcagc cagtcccttc ccgcttcagt    3360

gacaacgtcg agcacagctg cgcaaggaac gcccgtcgtg gccagccacg atagccgcgc    3420

tgcctcgtcc tgcaattcat tcaggacacc ggacaggtcg gtcttgacaa aaagaaccgg    3480

gcgcccctgc gctgacagcc ggaacacggc ggcatcagag cagccgattg tctgttgtgc    3540

ccagtcatag ccgaatagcc tctccaccca agcggccgga gaacctgcgt gcaatccatc    3600

ttgttcaatc atgcgaaacg atcctcatcc tgtctcttga tctgatcttg atcccctgcg    3660

ccatcagatc cttggcggca agaaagccat ccagtttact ttgcagggct tcccaacctt    3720

accagagggc gccccagctg gcaattccgg ttcgcttgct gtccataaaa ccgcccagtc    3780

tagctatcgc catgtaagcc cactgcaagc tacctgcttt ctctttgcgc ttgcgttttc    3840

ccttgtccag atagcccagt agctgacatt catccggggt cagcaccgtt tctgcggact    3900

ggctttctac gtgttccgct tcctttagca gcccttgcgc cctgagtgct tgcggcagcg    3960

tgaagctaca tatatgtgat ccgggcaaat cgctgaatat tccttttgtc tccgaccatc    4020

aggcacctga gtcgctgtct ttttcgtgac attcagttcg ctgcgctcac ggctctggca    4080

gtgaatgggg gtaaatggca ctacaggcgc cttttatgga ttcatgcaag gaaactaccc    4140

ataatacaag aaaagcccgt cacgggcttc tcagggcgtt ttatggcggg tctgctatgt    4200

ggtgctatct gactttttgc tgttcagcag ttcctgccct ctgattttcc agtctgacca    4260

cttcggatta tcccgtgaca ggtcattcag actggctaat gcacccagta aggcagcggt    4320

atcatcaaca ggcttacccg tcttactgtc gaagacgtgc gtaacgtatg catggtctcc    4380

ccatgcgaga gtagggaact gccaggcatc aaataaaacg aaaggctcag tcgaaagact    4440

gggcctttcg ttttatctgt tgtttgtcgg tgaacgctct cctgagtagg acaaatccgc    4500

cgggagcgga tttgaacgtt gcgaagcaac ggcccggagg gtggcgggca ggacgcccgc    4560

cataaactgc caggcatcaa attaagcaga aggccatcct gacggatggc ctttttgcgt    4620

ttctacaaac tcttttgttt atttttctaa atacattcaa atatggacgt cgtacttaac    4680

ttttaaagta tgggcaatca attgctcctg ttaaaattgc tttagaaata ctttggcagc    4740

ggtttgttgt attgagtttc atttgcgcat tggttaaatg gaaagtgacc gtgcgcttac    4800

tacagcctaa tatttttgaa atatcccaag agctttttcc ttcgcatgcc cacgctaaac    4860

attctttttc tcttttggtt aaatcgttgt ttgatttatt atttgctata tttatttttc    4920

gataattatc aactagagaa ggaacaatta atggtatgtt catacacgca tgtaaaaata    4980

aactatctat atagttgtct ttctctgaat gtgcaaaact aagcattccg aagccattat    5040

tagcagtatg aatagggaaa ctaaacccag tgataagacc tgatgatttc gcttctttaa    5100

ttacatttgg agatttttta tttacagcat tgttttcaaa tatattccaa ttaatcggtg    5160

aatgattgga gttagaataa tctactatag gatcatattt tattaaatta gcgtcatcat    5220

aatattgcct ccatttttta gggtaattat ccagaattga aatatcagat ttaaccatag    5280

aatgaggata aatgatcgcg agtaaataat attcacaatg taccatttta gtcatatcag    5340

ataagcattg attaatatca ttattgcttc tacaggcttt aattttatta attattctgt    5400

aagtgtcgtc ggcatttatg tctttcatac ccatctcttt atccttacct attgtttgtc    5460

gcaagttttg cgtgttatat atcattaaaa cggtaataga ttgacatttg attctaataa    5520

attggatttt tgtcacacta ttatatcgct tgaaatacaa ttgtttaaca taagtacctg    5580

taggatcgta caggtttacg caagaaaatg gtttgttata gtcgattaat cgatttgatt    5640

ctagatttgt tttaactaat taaaggagga ataacatatg atcgctccac catgcaccag    5700

tgagaagcat tatgagcatc tgggacggtg ctgtaacaaa tgtgaaccag gaaagtacat    5760

gtcttctaaa tgcactacta cctctgacag tgtatgtctg ccctgtggcc cggatgaata    5820

cttggatagc tggaatgaag aagataaatg cttgctgcat aaagtttgtg atacaggcaa    5880

ggccctggtg gccgtggtcg ccggcaacag tacgaccccc cggcgctgcg cgtgcacggc    5940

tgggtaccac tggagccagg actgcgagtg ctgccgccgc aacaccgagt gcgcgccggg    6000

cctgggcgcc cagcacccgt tgcagctcaa caaggacaca gtgtgcaaac cttgccttgc    6060

aggctacttc tctgatgcct tttcctccac ggacaaatgc agaccctgga ccaactgtac    6120

cttccttgga aagagagtag aacatcatgg gacagagaaa tccgatgtgg tttgcagttc    6180

ttctctgcca gctagaaaac caccaaatga accccatgtt tacgtcgaca aaactcacac    6240

atgtccacct tgtccagctc cggaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc    6300

aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga  6360

cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca  6420

taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc acgtaccgtg tggtcagcgt  6480

cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa  6540

caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga  6600

accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg accaagaacc aggtcagcct  6660

gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg  6720

gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt  6780

cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg  6840

ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc  6900

gggtaaataa tggatccgcg gaaagaagaa gaagaagaag aaagcccgaa aggaagctga  6960

gttggctgct gccaccgctg agcaataact agcataaccc cttggggcct ctaaacgggt  7020

cttgaggggt tttttgctga aaggaggaac cgctcttcac gctcttcacg cggataaata  7080

agtaacgatc cggtccagta atgacctcag aactccatct ggatttgttc agaacgctcg  7140

gttgccgccg ggcgtttttt attggtgaga atcgcagcaa cttgtcgcgc caatcgagcc  7200

atgtcgtcgt caacgacccc ccattcaaga acagcaagca gcattgagaa ctttggaatc  7260

cagtccctct tccacctgct gaccg                                        7285

<210>28

<211>7285

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>pAMG21-RANK-Fc载体

<220>

<221>misc_特征

<223>Xaa(Pos1，2，3，15，16，17)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

     Xaa(Pos5，6，7，9，13)各自独立地是氨基酸残基。

<400>28

Gly Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Thr Cys Cys Cys Cys Gly Gly

1               5                   10                  15

Ala Ala Cys Ala Thr Cys Gly Thr Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Gly

            20                  25                  30

Cys Cys Thr Thr Cys Gly Cys Gly Thr Thr Gly Cys Thr Cys Ala Gly

        35                  40                  45

Thr Thr Gly Thr Cys Cys Ala Ala Cys Cys Cys Cys Gly Gly Ala Ala

    50                  55                  60

Ala Cys Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Cys Ala Ala Gly Thr

65                  70                  75                  80

Thr Thr Thr Cys Cys Cys Cys Gly Cys Thr Cys Cys Cys Gly Gly Cys

                85                  90                  95

Gly Thr Thr Thr Cys Ala Ala Thr Ala Ala Cys Thr Gly Ala Ala Ala

            100                 105                 110

Ala Cys Cys Ala Thr Ala Cys Thr Ala Thr Thr Thr Cys Ala Cys Ala

        115                 120                 125

Gly Thr Thr Thr Ala Ala Ala Thr Cys Ala Cys Ala Thr Thr Ala Ala

    130                 135                 140

Ala Cys Gly Ala Cys Ala Gly Thr Ala Ala Thr Cys Cys Cys Cys Gly

145                 150                 155                 160

Thr Thr Gly Ala Thr Thr Thr Gly Thr Gly Cys Gly Cys Cys Ala Ala

                165                 170                 175

Cys Ala Cys Ala Gly Ala Thr Cys Thr Thr Cys Gly Thr Cys Ala Cys

            180                 185                 190

Ala Ala Thr Thr Cys Thr Cys Ala Ala Gly Thr Cys Gly Cys Thr Gly

        195                 200                 205

Ala Thr Thr Thr Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Cys Thr Gly Thr Ala

    210                 215                 220

Gly Thr Ala Thr Cys Cys Thr Cys Thr Gly Cys Gly Ala Ala Ala Cys

225                 230                 235                 240

Gly Ala Thr Cys Cys Cys Thr Gly Thr Thr Thr Gly Ala Gly Thr Ala

                245                 250                 255

Thr Thr Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Cys Gly Ala Gly Ala Thr Gly

            260                 265                 270

Thr Cys Gly Cys Ala Gly Ala Cys Ala Gly Ala Ala Ala Ala Thr Gly

        275                 280                 285

Cys Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Ala Thr Thr

    290                 295                 300

Gly Ala Gly Thr Cys Ala Ala Ala Ala Gly Cys Gly Gly Thr Thr Thr

305                 310                 315                 320

Gly Thr Gly Cys Gly Cys Ala Gly Ala Gly Gly Thr Ala Ala Gly Cys

                325                 330                 335

Cys Thr Ala Thr Gly Ala Cys Thr Gly Ala Cys Thr Cys Thr Gly Ala

            340                 345                 350

Gly Ala Ala Ala Cys Ala Ala Ala Thr Gly Gly Cys Cys Gly Thr Thr

        355                 360                 365

Gly Thr Thr Gly Cys Ala Ala Gly Ala Ala Ala Ala Cys Gly Thr Cys

    370                 375                 380

Thr Thr Ala Cys Ala Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Gly Ala Thr

385                 390                 395                 400

Ala Ala Ala Ala Gly Thr Thr Thr Thr Thr Gly Thr Cys Ala Ala Ala

                405                 410                 415

Ala Ala Thr Cys Cys Thr Cys Thr Gly Ala Ala Gly Gly Ala Thr Cys

            420                 425                 430

Thr Cys Ala Thr Gly Gly Thr Thr Gly Ala Gly Thr Ala Cys Thr Gly

        435                 440                 445

Cys Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Thr Ala

    450                 455                 460

Ala Cys Ala Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Ala Gly Thr Thr Cys Gly

465                 470                 475                 480

Thr Thr Gly Ala Gly Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Thr Cys Ala Ala

                485                 490                 495

Ala Gly Ala Thr Gly Ala Ala Cys Thr Gly Cys Ala Ala Ala Gly Ala

            500                 505                 510

Cys Thr Gly Gly Ala Thr Ala Thr Ala Cys Thr Ala Ala Ala Gly Thr

        515                 520                 525

Ala Ala Ala Gly Ala Cys Thr Thr Thr Ala Cys Thr Thr Thr Gly Thr

    530                 535                 540

Gly Gly Cys Gly Thr Ala Gly Cys Ala Thr Gly Cys Thr Ala Gly Ala

545                 550                 555                 560

Thr Thr Ala Cys Thr Gly Ala Thr Cys Gly Thr Thr Thr Ala Ala Gly

                565                 570                 575

Gly Ala Ala Thr Thr Thr Thr Gly Thr Gly Gly Cys Thr Gly Gly Cys

            580                 585                 590

Cys Ala Cys Gly Cys Cys Gly Thr Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Cys

        595                 600                 605

Ala Ala Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly Gly Thr Thr Cys Thr Gly Ala

    610                 615                 620

Thr Gly Thr Gly Gly Ala Thr Thr Thr Ala Cys Ala Gly Gly Ala Gly

625                 630                 635                 640

Cys Cys Ala Gly Ala Ala Ala Ala Gly Cys Ala Ala Ala Ala Ala Cys

                645                 650                 655

Cys Cys Cys Gly Ala Thr Ala Ala Thr Cys Thr Thr Cys Thr Thr Cys

            660                 665                 670

Ala Ala Cys Thr Thr Thr Thr Gly Cys Gly Ala Gly Thr Ala Cys Gly

        675                 680                 685

Ala Ala Ala Ala Gly Ala Thr Thr Ala Cys Cys Gly Gly Gly Gly Cys

    690                 695                 700

Cys Cys Ala Cys Thr Thr Ala Ala Ala Cys Cys Gly Thr Ala Thr Ala

705                 710                 715                 720

Gly Cys Cys Ala Ala Cys Ala Ala Thr Thr Cys Ala Gly Cys Thr Ala

                725                 730                 735

Thr Gly Cys Gly Gly Gly Gly Ala Gly Thr Ala Thr Ala Gly Thr Thr

            740                 745                 750

Ala Thr Ala Thr Gly Cys Cys Cys Gly Gly Ala Ala Ala Ala Gly Thr

        755                 760                 765

Thr Cys Ala Ala Gly Ala Cys Thr Thr Cys Thr Thr Thr Cys Thr Gly

    770                 775                 780

Thr Gly Cys Thr Cys Gly Cys Thr Cys Cys Thr Thr Cys Thr Gly Cys

785                 790                 795                 800

Gly Cys Ala Thr Thr Gly Thr Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ala Gly Gly

                805                 810                 815

Ala Thr Gly Gly Thr Gly Thr Gly Ala Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr

            820                 825                 830

Thr Cys Ala Cys Cys Ala Ala Ala Cys Gly Thr Ala Thr Thr Ala Cys

        835                 840                 845

Cys Gly Cys Cys Ala Gly Gly Thr Ala Ala Ala Gly Ala Ala Cys Cys

    850                 855                 860

Cys Gly Ala Ala Thr Cys Cys Gly Gly Thr Gly Thr Thr Thr Ala Cys

865                 870                 875                 880

Ala Cys Cys Cys Cys Gly Thr Gly Ala Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala

                885                 890                 895

Gly Gly Ala Ala Cys Gly Cys Thr Gly Ala Ala Gly Thr Thr Cys Thr

            900                 905                 910

Gly Cys Gly Ala Ala Ala Ala Ala Cys Thr Gly Ala Thr Gly Gly Ala

        915                 920                 925

Ala Ala Ala Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly Gly Gly Cys Thr Thr Cys

    930                 935                 940

Ala Cys Thr Thr Cys Cys Cys Gly Thr Thr Thr Thr Gly Ala Thr Thr

945                 950                 955                 960

Thr Cys Gly Cys Cys Ala Thr Thr Cys Ala Thr Gly Thr Gly Gly Cys

                965                 970                 975

Gly Cys Ala Cys Gly Cys Cys Cys Gly Thr Thr Cys Gly Cys Gly Thr

            980                 985                 990

Gly Ala Thr Cys Thr Gly Cys Gly  Thr Cys Gly Cys Cys  Gly Thr Ala

        995                 1000                 1005

Thr Gly  Cys Cys Ala Cys Cys  Ala Gly Thr Gly Cys  Thr Gly Cys

    1010                 1015                 1020

Gly Thr  Cys Gly Thr Cys Gly  Gly Gly Cys Thr Ala  Thr Thr Gly

    1025                 1030                 1035

Ala Thr  Gly Cys Gly Cys Thr  Cys Thr Thr Gly Cys  Ala Gly Gly

    1040                 1045                 1050

Gly Gly  Cys Thr Gly Thr Gly  Thr Thr Thr Cys Cys  Ala Cys Thr

    1055                 1060                 1065

Ala Thr  Gly Ala Cys Cys Cys  Gly Cys Thr Gly Gly  Cys Cys Ala

    1070                 1075                 1080

Ala Cys  Cys Gly Cys Gly Thr  Cys Cys Ala Gly Thr  Gly Cys Thr

    1085                 1090                 1095

Cys Cys  Ala Thr Cys Ala Cys  Cys Ala Cys Gly Cys  Thr Gly Gly

    1100                 1105                 1110

Cys Cys  Ala Thr Thr Gly Ala  Gly Thr Gly Cys Gly  Gly Ala Cys

    1115                 1120                 1125

Thr Gly  Gly Cys Gly Ala Cys  Gly Gly Ala Gly Thr  Cys Thr Gly

    1130                 1135                 1140

Cys Thr  Gly Cys Cys Gly Gly  Ala Ala Ala Ala Cys  Thr Cys Thr

    1145                 1150                 1155

Cys Cys  Ala Thr Cys Ala Cys  Cys Cys Gly Thr Gly  Cys Cys Ala

    1160                 1165                 1170

Cys Cys  Cys Gly Thr Gly Cys  Cys Cys Thr Gly Ala  Cys Gly Thr

    1175                 1180                 1185

Thr Cys  Cys Thr Gly Thr Cys  Ala Gly Ala Gly Cys  Thr Gly Gly

    1190                 1195                 1200

Gly Ala  Cys Thr Gly Ala Thr  Thr Ala Cys Cys Thr  Ala Cys Cys

    1205                 1210                 1215

Ala Gly  Ala Cys Gly Gly Ala  Ala Thr Ala Thr Gly  Ala Cys Cys

    1220                 1225                 1230

Cys Gly  Cys Thr Thr Ala Thr  Cys Gly Gly Gly Thr  Gly Cys Thr

    1235                 1240                 1245

Ala Cys  Ala Thr Thr Cys Cys  Gly Ala Cys Cys Gly  Ala Thr Ala

    1250                 1255                 1260

Thr Cys  Ala Cys Gly Thr Thr  Cys Ala Cys Ala Thr  Cys Thr Gly

    1265                 1270                 1275

Cys Ala  Cys Thr Gly Thr Thr  Thr Gly Cys Thr Gly  Cys Cys Cys

    1280                 1285                 1290

Thr Cys  Gly Ala Thr Gly Thr  Ala Thr Cys Ala Gly  Ala Gly Gly

    1295                 1300                 1305

Ala Gly  Gly Cys Ala Gly Thr  Gly Gly Cys Cys Gly  Cys Cys Gly

    1310                 1315                 1320

Cys Gly  Cys Gly Cys Cys Gly  Cys Ala Gly Cys Cys  Gly Thr Gly

    1325                 1330                 1335

Thr Gly  Gly Thr Ala Thr Gly  Gly Gly Ala Ala Ala  Ala Cys Ala

    1340                 1345                 1350

Ala Ala  Cys Ala Ala Cys Gly  Cys Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Cys

    1355                 1360                 1365

Ala Gly  Gly Gly Gly Cys Thr  Gly Gly Ala Thr Ala  Cys Cys Cys

    1370                 1375                 1380

Thr Gly  Gly Gly Cys Ala Thr  Gly Gly Ala Thr Gly  Ala Ala Cys

    1385                 1390                 1395

Thr Gly  Ala Thr Ala Gly Cys  Gly Ala Ala Ala Gly  Cys Cys Thr

    1400                 1405                 1410

Gly Gly  Cys Gly Thr Thr Thr  Thr Gly Thr Thr Cys  Gly Thr Gly

    1415                 1420                 1425

Ala Gly  Cys Gly Thr Thr Thr  Thr Cys Gly Cys Ala  Gly Thr Thr

    1430                 1435                 1440

Ala Thr  Cys Ala Gly Ala Cys  Ala Gly Ala Gly Cys  Thr Thr Ala

    1445                 1450                 1455

Ala Gly  Thr Cys Cys Cys Gly  Thr Gly Gly Ala Ala  Thr Ala Ala

    1460                 1465                 1470

Ala Gly  Cys Gly Thr Gly Cys  Cys Cys Gly Thr Gly  Cys Gly Cys

    1475                 1480                 1485

Gly Thr  Cys Gly Thr Gly Ala  Thr Gly Cys Gly Gly  Ala Cys Ala

    1490                 1495                 1500

Gly Gly  Gly Ala Ala Cys Gly  Thr Cys Ala Gly Gly  Ala Thr Ala

    1505                 1510                 1515

Thr Thr  Gly Thr Cys Ala Cys  Cys Cys Thr Gly Gly  Thr Gly Ala

    1520                 1525                 1530

Ala Ala  Cys Gly Gly Cys Ala  Gly Cys Thr Gly Ala  Cys Gly Cys

    1535                 1540                 1545

Gly Cys  Gly Ala Ala Ala Thr  Cys Gly Cys Gly Gly  Ala Ala Gly

    1550                 1555                 1560

Gly Gly  Cys Gly Cys Thr Thr  Cys Ala Cys Thr Gly  Cys Cys Ala

    1565                 1570                 1575

Ala Thr  Cys Gly Thr Gly Ala  Gly Gly Cys Gly Gly  Thr Ala Ala

    1580                 1585                 1590

Ala Ala  Cys Gly Cys Gly Ala  Ala Gly Thr Thr Gly  Ala Gly Cys

    1595                 1600                 1605

Gly Thr  Cys Gly Thr Gly Thr  Gly Ala Ala Gly Gly  Ala Gly Cys

    1610                 1615                 1620

Gly Cys  Ala Thr Gly Ala Thr  Thr Cys Thr Gly Thr  Cys Ala Cys

    1625                 1630                 1635

Gly Thr  Ala Ala Cys Cys Gly  Thr Ala Ala Thr Thr  Ala Cys Ala

    1640                 1645                 1650

Gly Cys  Cys Gly Gly Cys Thr  Gly Gly Cys Cys Ala  Cys Ala Gly

    1655                 1660                 1665

Cys Thr  Thr Cys Cys Cys Cys  Cys Thr Gly Ala Ala  Ala Gly Thr

    1670                 1675                 1680

Gly Ala  Cys Cys Thr Cys Cys  Thr Cys Thr Gly Ala  Ala Thr Ala

    1685                 1690                 1695

Ala Thr  Cys Cys Gly Gly Cys  Cys Thr Gly Cys Gly  Cys Cys Gly

    1700                 1705                 1710

Gly Ala  Gly Gly Cys Thr Thr  Cys Cys Gly Cys Ala  Cys Gly Thr

    1715                 1720                 1725

Cys Thr  Gly Ala Ala Gly Cys  Cys Cys Gly Ala Cys  Ala Gly Cys

    1730                 1735                 1740

Gly Cys  Ala Cys Ala Ala Ala  Ala Ala Ala Thr Cys  Ala Gly Cys

    1745                 1750                 1755

Ala Cys  Cys Ala Cys Ala Thr  Ala Cys Ala Ala Ala  Ala Ala Ala

    1760                 1765                 1770

Cys Ala  Ala Cys Cys Thr Cys  Ala Thr Cys Ala Thr  Cys Cys Ala

    1775                 1780                 1785

Gly Cys  Thr Thr Cys Thr Gly  Gly Thr Gly Cys Ala  Thr Cys Cys

    1790                 1795                 1800

Gly Gly  Cys Cys Cys Cys Cys  Cys Cys Thr Gly Thr  Thr Thr Thr

    1805                 1810                 1815

Cys Gly  Ala Thr Ala Cys Ala  Ala Ala Ala Cys Ala  Cys Gly Cys

    1820                 1825                 1830

Cys Thr  Cys Ala Cys Ala Gly  Ala Cys Gly Gly Gly  Gly Ala Ala

    1835                 1840                 1845

Thr Thr  Thr Thr Gly Cys Thr  Thr Ala Thr Cys Cys  Ala Cys Ala

    1850                 1855                 1860

Thr Thr  Ala Ala Ala Cys Thr  Gly Cys Ala Ala Gly  Gly Gly Ala

    1865                 1870                 1875

Cys Thr  Thr Cys Cys Cys Cys  Ala Thr Ala Ala Gly  Gly Thr Thr

    1880                 1885                 1890

Ala Cys  Ala Ala Cys Cys Gly  Thr Thr Cys Ala Thr  Gly Thr Cys

    1895                 1900                 1905

Ala Thr  Ala Ala Ala Gly Cys  Gly Cys Cys Ala Thr  Cys Cys Gly

    1910                 1915                 1920

Cys Cys  Ala Gly Cys Gly Thr  Thr Ala Cys Ala Gly  Gly Gly Thr

    1925                 1930                 1935

Gly Cys  Ala Ala Thr Gly Thr  Ala Thr Cys Thr Thr  Thr Thr Ala

    1940                 1945                 1950

Ala Ala  Cys Ala Cys Cys Thr  Gly Thr Thr Thr Ala  Thr Ala Thr

    1955                 1960                 1965

Cys Thr  Cys Cys Thr Thr Thr  Ala Ala Ala Cys Thr  Ala Cys Thr

    1970                 1975                 1980

Thr Ala  Ala Thr Thr Ala Cys  Ala Thr Thr Cys Ala  Thr Thr Thr

    1985                 1990                 1995

Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Ala  Ala Ala Ala Cys Cys  Thr Ala Thr

    2000                 2005                 2010

Thr Cys  Ala Cys Thr Gly Cys  Cys Thr Gly Thr Cys  Cys Thr Thr

    2015                 2020                 2025

Gly Gly  Ala Cys Ala Gly Ala  Cys Ala Gly Ala Thr  Ala Thr Gly

    2030                 2035                 2040

Cys Ala  Cys Cys Thr Cys Cys  Cys Ala Cys Cys Gly  Cys Ala Ala

    2045                 2050                 2055

Gly Cys  Gly Gly Cys Gly Gly  Gly Cys Cys Cys Cys  Thr Ala Cys

    2060                 2065                 2070

Cys Gly  Gly Ala Gly Cys Cys  Gly Cys Thr Thr Thr  Ala Gly Thr

    2075                 2080                 2085

Thr Ala  Cys Ala Ala Cys Ala  Cys Thr Cys Ala Gly  Ala Cys Ala

    2090                 2095                 2100

Cys Ala  Ala Cys Cys Ala Cys  Cys Ala Gly Ala Ala  Ala Ala Ala

    2105                 2110                 2115

Cys Cys  Cys Cys Gly Gly Thr  Cys Cys Ala Gly Cys  Gly Cys Ala

    2120                 2125                 2130

Gly Ala  Ala Cys Thr Gly Ala  Ala Ala Cys Cys Ala  Cys Ala Ala

    2135                 2140                 2145

Ala Gly  Cys Cys Cys Cys Thr  Cys Cys Cys Thr Cys  Ala Thr Ala

    2150                 2155                 2160

Ala Cys  Thr Gly Ala Ala Ala  Ala Gly Cys Gly Gly  Cys Cys Cys

    2165                 2170                 2175

Cys Gly  Cys Cys Cys Cys Gly  Gly Thr Cys Cys Gly  Ala Ala Gly

    2180                 2185                 2190

Gly Gly  Cys Cys Gly Gly Ala  Ala Cys Ala Gly Ala  Gly Thr Cys

    2195                 2200                 2205

Gly Cys  Thr Thr Thr Thr Ala  Ala Thr Thr Ala Thr  Gly Ala Ala

    2210                 2215                 2220

Thr Gly  Thr Thr Gly Thr Ala  Ala Cys Thr Ala Cys  Thr Thr Cys

    2225                 2230                 2235

Ala Thr  Cys Ala Thr Cys Gly  Cys Thr Gly Thr Cys  Ala Gly Thr

    2240                 2245                 2250

Cys Thr  Thr Cys Thr Cys Gly  Cys Thr Gly Gly Ala  Ala Gly Thr

    2255                 2260                 2265

Thr Cys  Thr Cys Ala Gly Thr  Ala Cys Ala Cys Gly  Cys Thr Cys

    2270                 2275                 2280

Gly Thr  Ala Ala Gly Cys Gly  Gly Cys Cys Cys Thr  Gly Ala Cys

    2285                 2290                 2295

Gly Gly  Cys Cys Cys Gly Cys  Thr Ala Ala Cys Gly  Cys Gly Gly

    2300                 2305                 2310

Ala Gly  Ala Thr Ala Cys Gly  Cys Cys Cys Cys Gly  Ala Cys Thr

    2315                 2320                 2325

Thr Cys  Gly Gly Gly Thr Ala  Ala Ala Cys Cys Cys  Thr Cys Gly

    2330                 2335                 2340

Thr Cys  Gly Gly Gly Ala Cys  Cys Ala Cys Thr Cys  Cys Gly Ala

    2345                 2350                 2355

Cys Cys  Gly Cys Gly Cys Ala  Cys Ala Gly Ala Ala  Gly Cys Thr

    2360                 2365                 2370

Cys Thr  Cys Thr Cys Ala Thr  Gly Gly Cys Thr Gly  Ala Ala Ala

    2375                 2380                 2385

Gly Cys  Gly Gly Gly Thr Ala  Thr Gly Gly Thr Cys  Thr Gly Gly

    2390                 2395                 2400

Cys Ala  Gly Gly Gly Cys Thr  Gly Gly Gly Gly Ala  Thr Gly Gly

    2405                 2410                 2415

Gly Thr  Ala Ala Gly Gly Thr  Gly Ala Ala Ala Thr  Cys Thr Ala

    2420                 2425                 2430

Thr Cys  Ala Ala Thr Cys Ala  Gly Thr Ala Cys Cys  Gly Gly Cys

    2435                 2440                 2445

Thr Thr  Ala Cys Gly Cys Cys  Gly Gly Gly Cys Thr  Thr Cys Gly

    2450                 2455                 2460

Gly Cys  Gly Gly Thr Thr Thr  Thr Ala Cys Thr Cys  Cys Thr Gly

    2465                 2470                 2475

Thr Thr  Thr Cys Ala Thr Ala  Thr Ala Thr Gly Ala  Ala Ala Cys

    2480                 2485                 2490

Ala Ala  Cys Ala Gly Gly Thr  Cys Ala Cys Cys Gly  Cys Cys Thr

    2495                 2500                 2505

Thr Cys  Cys Ala Thr Gly Cys  Cys Gly Cys Thr Gly  Ala Thr Gly

    2510                 2515                 2520

Cys Gly  Gly Cys Ala Thr Ala  Thr Cys Cys Thr Gly  Gly Thr Ala

    2525                 2530                 2535

Ala Cys  Gly Ala Thr Ala Thr  Cys Thr Gly Ala Ala  Thr Thr Gly

    2540                 2545                 2550

Thr Thr  Ala Thr Ala Cys Ala  Thr Gly Thr Gly Thr  Ala Thr Ala

    2555                 2560                 2565

Thr Ala  Cys Gly Thr Gly Gly  Thr Ala Ala Thr Gly  Ala Cys Ala

    2570                 2575                 2580

Ala Ala  Ala Ala Thr Ala Gly  Gly Ala Cys Ala Ala  Gly Thr Thr

    2585                 2590                 2595

Ala Ala  Ala Ala Ala Thr Thr  Thr Ala Cys Ala Gly  Gly Cys Gly

    2600                 2605                 2610

Ala Thr  Gly Cys Ala Ala Thr  Gly Ala Thr Thr Cys  Ala Ala Ala

    2615                 2620                 2625

Cys Ala  Cys Gly Thr Ala Ala  Thr Cys Ala Ala Thr  Ala Thr Cys

    2630                 2635                 2640

Gly Gly  Gly Gly Gly Thr Gly  Gly Gly Cys Gly Ala  Ala Gly Ala

    2645                 2650                 2655

Ala Cys  Thr Cys Cys Ala Gly  Cys Ala Thr Gly Ala  Gly Ala Thr

    2660                 2665                 2670

Cys Cys  Cys Cys Gly Cys Gly  Cys Thr Gly Gly Ala  Gly Gly Ala

    2675                 2680                 2685

Thr Cys  Ala Thr Cys Cys Ala  Gly Cys Cys Gly Gly  Cys Gly Thr

    2690                 2695                 2700

Cys Cys  Cys Gly Gly Ala Ala  Ala Ala Cys Gly Ala  Thr Thr Cys

    2705                 2710                 2715

Cys Gly  Ala Ala Gly Cys Cys  Cys Ala Ala Cys Cys  Thr Thr Thr

    2720                 2725                 2730

Cys Ala  Thr Ala Gly Ala Ala  Gly Gly Cys Gly Gly  Cys Gly Gly

    2735                 2740                 2745

Thr Gly  Gly Ala Ala Thr Cys  Gly Ala Ala Ala Thr  Cys Thr Cys

    2750                 2755                 2760

Gly Thr  Gly Ala Thr Gly Gly  Cys Ala Gly Gly Thr  Thr Gly Gly

    2765                 2770                 2775

Gly Cys  Gly Thr Cys Gly Cys  Thr Thr Gly Gly Thr  Cys Gly Gly

    2780                 2785                 2790

Thr Cys  Ala Thr Thr Thr Cys  Gly Ala Ala Cys Cys  Cys Cys Ala

    2795                 2800                 2805

Gly Ala  Gly Thr Cys Cys Cys  Gly Cys Thr Cys Ala  Gly Ala Ala

    2810                 2815                 2820

Gly Ala  Ala Cys Thr Cys Gly  Thr Cys Ala Ala Gly  Ala Ala Gly

    2825                 2830                 2835

Gly Cys  Gly Ala Thr Ala Gly  Ala Ala Gly Gly Cys  Gly Ala Thr

    2840                 2845                 2850

Gly Cys  Gly Cys Thr Gly Cys  Gly Ala Ala Thr Cys  Gly Gly Gly

    2855                 2860                 2865

Ala Gly  Cys Gly Gly Cys Gly  Ala Thr Ala Cys Cys  Gly Thr Ala

    2870                 2875                 2880

Ala Ala  Gly Cys Ala Cys Gly  Ala Gly Gly Ala Ala  Gly Cys Gly

    2885                 2890                 2895

Gly Thr  Cys Ala Gly Cys Cys  Cys Ala Thr Thr Cys  Gly Cys Cys

    2900                 2905                 2910

Gly Cys  Cys Ala Ala Gly Cys  Thr Cys Thr Thr Cys  Ala Gly Cys

    2915                 2920                 2925

Ala Ala  Thr Ala Thr Cys Ala  Cys Gly Gly Gly Thr  Ala Gly Cys

    2930                 2935                 2940

Cys Ala  Ala Cys Gly Cys Thr  Ala Thr Gly Thr Cys  Cys Thr Gly

    2945                 2950                 2955

Ala Thr  Ala Gly Cys Gly Gly  Thr Cys Cys Gly Cys  Cys Ala Cys

    2960                 2965                 2970

Ala Cys  Cys Cys Ala Gly Cys  Cys Gly Gly Cys Cys  Ala Cys Ala

    2975                 2980                 2985

Gly Thr  Cys Gly Ala Thr Gly  Ala Ala Thr Cys Cys  Ala Gly Ala

    2990                 2995                 3000

Ala Ala  Ala Gly Cys Gly Gly  Cys Cys Ala Thr Thr  Thr Thr Cys

    3005                 3010                 3015

Cys Ala  Cys Cys Ala Thr Gly  Ala Thr Ala Thr Thr  Cys Gly Gly

    3020                 3025                 3030

Cys Ala  Ala Gly Cys Ala Gly  Gly Cys Ala Thr Cys  Gly Cys Cys

    3035                 3040                 3045

Ala Thr  Gly Ala Gly Thr Cys  Ala Cys Gly Ala Cys  Gly Ala Gly

    3050                 3055                 3060

Ala Thr  Cys Cys Thr Cys Gly  Cys Cys Gly Thr Cys  Gly Gly Gly

    3065                 3070                 3075

Cys Ala  Thr Gly Cys Gly Cys  Gly Cys Cys Thr Thr  Gly Ala Gly

    3080                 3085                 3090

Cys Cys  Thr Gly Gly Cys Gly  Ala Ala Cys Ala Gly  Thr Thr Cys

    3095                 3100                 3105

Gly Gly  Cys Thr Gly Gly Cys  Gly Cys Gly Ala Gly  Cys Cys Cys

    3110                 3115                 3120

Cys Thr  Gly Ala Thr Gly Cys  Thr Cys Thr Thr Cys  Gly Thr Cys

    3125                 3130                 3135

Cys Ala  Gly Ala Thr Cys Ala  Thr Cys Cys Thr Gly  Ala Thr Cys

    3140                 3145                 3150

Gly Ala  Cys Ala Ala Gly Ala  Cys Cys Gly Gly Cys  Thr Thr Cys

    3155                 3160                 3165

Cys Ala  Thr Cys Cys Gly Ala  Gly Thr Ala Cys Gly  Thr Gly Cys

    3170                 3175                 3180

Thr Cys  Gly Cys Thr Cys Gly  Ala Thr Gly Cys Gly  Ala Thr Gly

    3185                 3190                 3195

Thr Thr  Thr Cys Gly Cys Thr  Thr Gly Gly Thr Gly  Gly Thr Cys

    3200                 3205                 3210

Gly Ala  Ala Thr Gly Gly Gly  Cys Ala Gly Gly Thr  Ala Gly Cys

    3215                 3220                 3225

Cys Gly  Gly Ala Thr Cys Ala  Ala Gly Cys Gly Thr  Ala Thr Gly

    3230                 3235                 3240

Cys Ala  Gly Cys Cys Gly Cys  Cys Gly Cys Ala Thr  Thr Gly Cys

    3245                 3250                 3255

Ala Thr  Cys Ala Gly Cys Cys  Ala Thr Gly Ala Thr  Gly Gly Ala

    3260                 3265                 3270

Thr Ala  Cys Thr Thr Thr Cys  Thr Cys Gly Gly Cys  Ala Gly Gly

    3275                 3280                 3285

Ala Gly  Cys Ala Ala Gly Gly  Thr Gly Ala Gly Ala  Thr Gly Ala

    3290                 3295                 3300

Cys Ala  Gly Gly Ala Gly Ala  Thr Cys Cys Thr Gly  Cys Cys Cys

    3305                 3310                 3315

Cys Gly  Gly Cys Ala Cys Thr  Thr Cys Gly Cys Cys  Cys Ala Ala

    3320                 3325                 3330

Thr Ala  Gly Cys Ala Gly Cys  Cys Ala Gly Thr Cys  Cys Cys Thr

    3335                 3340                 3345

Thr Cys  Cys Cys Gly Cys Thr  Thr Cys Ala Gly Thr  Gly Ala Cys

    3350                 3355                 3360

Ala Ala  Cys Gly Thr Cys Gly  Ala Gly Cys Ala Cys  Ala Gly Cys

    3365                 3370                 3375

Thr Gly  Cys Gly Cys Ala Ala  Gly Gly Ala Ala Cys  Gly Cys Cys

    3380                 3385                 3390

Cys Gly  Thr Cys Gly Thr Gly  Gly Cys Cys Ala Gly  Cys Cys Ala

    3395                 3400                 3405

Cys Gly  Ala Thr Ala Gly Cys  Cys Gly Cys Gly Cys  Thr Gly Cys

    3410                 3415                 3420

Cys Thr  Cys Gly Thr Cys Cys  Thr Gly Cys Ala Ala  Thr Thr Cys

    3425                 3430                 3435

Ala Thr  Thr Cys Ala Gly Gly  Ala Cys Ala Cys Cys  Gly Gly Ala

    3440                 3445                 3450

Cys Ala  Gly Gly Thr Cys Gly  Gly Thr Cys Thr Thr  Gly Ala Cys

    3455                 3460                 3465

Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Ala  Ala Cys Cys Gly Gly  Gly Cys Gly

    3470                 3475                 3480

Cys Cys  Cys Cys Thr Gly Cys  Gly Cys Thr Gly Ala  Cys Ala Gly

    3485                 3490                 3495

Cys Cys  Gly Gly Ala Ala Cys  Ala Cys Gly Gly Cys  Gly Gly Cys

    3500                 3505                 3510

Ala Thr  Cys Ala Gly Ala Gly  Cys Ala Gly Cys Cys  Gly Ala Thr

    3515                 3520                 3525

Thr Gly  Thr Cys Thr Gly Thr  Thr Gly Thr Gly Cys  Cys Cys Ala

    3530                 3535                 3540

Gly Thr  Cys Ala Thr Ala Gly  Cys Cys Gly Ala Ala  Thr Ala Gly

    3545                 3550                 3555

Cys Cys  Thr Cys Thr Cys Cys  Ala Cys Cys Cys Ala  Ala Gly Cys

    3560                 3565                 3570

Gly Gly  Cys Cys Gly Gly Ala  Gly Ala Ala Cys Cys  Thr Gly Cys

    3575                 3580                 3585

Gly Thr  Gly Cys Ala Ala Thr  Cys Cys Ala Thr Cys  Thr Thr Gly

    3590                 3595                 3600

Thr Thr  Cys Ala Ala Thr Cys  Ala Thr Gly Cys Gly  Ala Ala Ala

    3605                 3610                 3615

Cys Gly  Ala Thr Cys Cys Thr  Cys Ala Thr Cys Cys  Thr Gly Thr

    3620                 3625                 3630

Cys Thr  Cys Thr Thr Gly Ala  Thr Cys Thr Gly Ala  Thr Cys Thr

    3635                 3640                 3645

Thr Gly  Ala Thr Cys Cys Cys  Cys Thr Gly Cys Gly  Cys Cys Ala

    3650                 3655                 3660

Thr Cys  Ala Gly Ala Thr Cys  Cys Thr Thr Gly Gly  Cys Gly Gly

    3665                 3670                 3675

Cys Ala  Ala Gly Ala Ala Ala  Gly Cys Cys Ala Thr  Cys Cys Ala

    3680                 3685                 3690

Gly Thr  Thr Thr Ala Cys Thr  Thr Thr Gly Cys Ala  Gly Gly Gly

    3695                 3700                 3705

Cys Thr  Thr Cys Cys Cys Ala  Ala Cys Cys Thr Thr  Ala Cys Cys

    3710                 3715                 3720

Ala Gly  Ala Gly Gly Gly Cys  Gly Cys Cys Cys Cys  Ala Gly Cys

    3725                 3730                 3735

Thr Gly  Gly Cys Ala Ala Thr  Thr Cys Cys Gly Gly  Thr Thr Cys

    3740                 3745                 3750

Gly Cys  Thr Thr Gly Cys Thr  Gly Thr Cys Cys Ala  Thr Ala Ala

    3755                 3760                 3765

Ala Ala  Cys Cys Gly Cys Cys  Cys Ala Gly Thr Cys  Thr Ala Gly

    3770                 3775                 3780

Cys Thr  Ala Thr Cys Gly Cys  Cys Ala Thr Gly Thr  Ala Ala Gly

    3785                 3790                 3795

Cys Cys  Cys Ala Cys Thr Gly  Cys Ala Ala Gly Cys  Thr Ala Cys

    3800                 3805                 3810

Cys Thr  Gly Cys Thr Thr Thr  Cys Thr Cys Thr Thr  Thr Gly Cys

    3815                 3820                 3825

Gly Cys  Thr Thr Gly Cys Gly  Thr Thr Thr Thr Cys  Cys Cys Thr

    3830                 3835                 3840

Thr Gly  Thr Cys Cys Ala Gly  Ala Thr Ala Gly Cys  Cys Cys Ala

    3845                 3850                 3855

Gly Thr  Ala Gly Cys Thr Gly  Ala Cys Ala Thr Thr  Cys Ala Thr

    3860                 3865                 3870

Cys Cys  Gly Gly Gly Gly Thr  Cys Ala Gly Cys Ala  Cys Cys Gly

    3875                 3880                 3885

Thr Thr  Thr Cys Thr Gly Cys  Gly Gly Ala Cys Thr  Gly Gly Cys

    3890                 3895                 3900

Thr Thr  Thr Cys Thr Ala Cys  Gly Thr Gly Thr Thr  Cys Cys Gly

    3905                 3910                 3915

Cys Thr  Thr Cys Cys Thr Thr  Thr Ala Gly Cys Ala  Gly Cys Cys

    3920                 3925                 3930

Cys Thr  Thr Gly Cys Gly Cys  Cys Cys Thr Gly Ala  Gly Thr Gly

    3935                 3940                 3945

Cys Thr  Thr Gly Cys Gly Gly  Cys Ala Gly Cys Gly  Thr Gly Ala

    3950                 3955                 3960

Ala Gly  Cys Thr Ala Cys Ala  Thr Ala Thr Ala Thr  Gly Thr Gly

    3965                 3970                 3975

Ala Thr  Cys Cys Gly Gly Gly  Cys Ala Ala Ala Thr  Cys Gly Cys

    3980                 3985                 3990

Thr Gly  Ala Ala Thr Ala Thr  Thr Cys Cys Thr Thr  Thr Thr Gly

    3995                 4000                 4005

Thr Cys  Thr Cys Cys Gly Ala  Cys Cys Ala Thr Cys  Ala Gly Gly

    4010                 4015                 4020

Cys Ala  Cys Cys Thr Gly Ala  Gly Thr Cys Gly Cys  Thr Gly Thr

    4025                 4030                 4035

Cys Thr  Thr Thr Thr Thr Cys  Gly Thr Gly Ala Cys  Ala Thr Thr

    4040                 4045                 4050

Cys Ala  Gly Thr Thr Cys Gly  Cys Thr Gly Cys Gly  Cys Thr Cys

    4055                 4060                 4065

Ala Cys  Gly Gly Cys Thr Cys  Thr Gly Gly Cys Ala  Gly Thr Gly

    4070                 4075                 4080                    

Ala Ala  Thr Gly Gly Gly Gly  Gly Thr Ala Ala Ala  Thr Gly Gly

    4085                 4090                 4095

Cys Ala  Cys Thr Ala Cys Ala  Gly Gly Cys Gly Cys  Cys Thr Thr

    4100                 4105                 4110

Thr Thr  Ala Thr Gly Gly Ala  Thr Thr Cys Ala Thr  Gly Cys Ala

    4115                 4120                 4125

Ala Gly  Gly Ala Ala Ala Cys  Thr Ala Cys Cys Cys  Ala Thr Ala

    4130                 4135                 4140

Ala Thr  Ala Cys Ala Ala Gly  Ala Ala Ala Ala Gly  Cys Cys Cys

    4145                 4150                 4155

Gly Thr  Cys Ala Cys Gly Gly  Gly Cys Thr Thr Cys  Thr Cys Ala

    4160                 4165                 4170

Gly Gly  Gly Cys Gly Thr Thr  Thr Thr Ala Thr Gly  Gly Cys Gly

    4175                 4180                 4185

Gly Gly  Thr Cys Thr Gly Cys  Thr Ala Thr Gly Thr  Gly Gly Thr

    4190                 4195                 4200

Gly Cys  Thr Ala Thr Cys Thr  Gly Ala Cys Thr Thr  Thr Thr Thr

    4205                 4210                 4215

Gly Cys  Thr Gly Thr Thr Cys  Ala Gly Cys Ala Gly  Thr Thr Cys

    4220                 4225                 4230

Cys Thr  Gly Cys Cys Cys Thr  Cys Thr Gly Ala Thr  Thr Thr Thr

    4235                 4240                 4245

Cys Cys  Ala Gly Thr Cys Thr  Gly Ala Cys Cys Ala  Cys Thr Thr

    4250                 4255                 4260

Cys Gly  Gly Ala Thr Thr Ala  Thr Cys Cys Cys Gly  Thr Gly Ala

    4265                 4270                 4275

Cys Ala  Gly Gly Thr Cys Ala  Thr Thr Cys Ala Gly  Ala Cys Thr

    4280                 4285                 4290

Gly Gly  Cys Thr Ala Ala Thr  Gly Cys Ala Cys Cys  Cys Ala Gly

    4295                 4300                 4305

Thr Ala  Ala Gly Gly Cys Ala  Gly Cys Gly Gly Thr  Ala Thr Cys

    4310                 4315                 4320

Ala Thr  Cys Ala Ala Cys Ala  Gly Gly Cys Thr Thr  Ala Cys Cys

    4325                 4330                 4335

Cys Gly  Thr Cys Thr Thr Ala  Cys Thr Gly Thr Cys  Gly Ala Ala

    4340                 4345                 4350

Gly Ala  Cys Gly Thr Gly Cys  Gly Thr Ala Ala Cys  Gly Thr Ala

    4355                 4360                 4365

Thr Gly  Cys Ala Thr Gly Gly  Thr Cys Thr Cys Cys  Cys Cys Ala

    4370                 4375                 4380

Thr Gly  Cys Gly Ala Gly Ala  Gly Thr Ala Gly Gly  Gly Ala Ala

    4385                 4390                 4395

Cys Thr  Gly Cys Cys Ala Gly  Gly Cys Ala Thr Cys  Ala Ala Ala

    4400                 4405                 4410

Thr Ala  Ala Ala Ala Cys Gly  Ala Ala Ala Gly Gly  Cys Thr Cys

    4415                 4420                 4425

Ala Gly  Thr Cys Gly Ala Ala  Ala Gly Ala Cys Thr  Gly Gly Gly

    4430                 4435                 4440

Cys Cys  Thr Thr Thr Cys Gly  Thr Thr Thr Thr Ala  Thr Cys Thr

    4445                 4450                 4455

Gly Thr  Thr Gly Thr Thr Thr  Gly Thr Cys Gly Gly  Thr Gly Ala

    4460                 4465                 4470

Ala Cys  Gly Cys Thr Cys Thr  Cys Cys Thr Gly Ala  Gly Thr Ala

    4475                 4480                 4485

Gly Gly  Ala Cys Ala Ala Ala  Thr Cys Cys Gly Cys  Cys Gly Gly

    4490                 4495                 4500

Gly Ala  Gly Cys Gly Gly Ala  Thr Thr Thr Gly Ala  Ala Cys Gly

    4505                 4510                 4515

Thr Thr  Gly Cys Gly Ala Ala  Gly Cys Ala Ala Cys  Gly Gly Cys

    4520                 4525                 4530

Cys Cys  Gly Gly Ala Gly Gly  Gly Thr Gly Gly Cys  Gly Gly Gly

    4535                 4540                 4545

Cys Ala  Gly Gly Ala Cys Gly  Cys Cys Cys Gly Cys  Cys Ala Thr

    4550                 4555                 4560

Ala Ala  Ala Cys Thr Gly Cys  Cys Ala Gly Gly Cys  Ala Thr Cys

    4565                 4570                 4575

Ala Ala  Ala Thr Thr Ala Ala  Gly Cys Ala Gly Ala  Ala Gly Gly

    4580                 4585                 4590

Cys Cys  Ala Thr Cys Cys Thr  Gly Ala Cys Gly Gly  Ala Thr Gly

    4595                 4600                 4605

Gly Cys  Cys Thr Thr Thr Thr  Thr Gly Cys Gly Thr  Thr Thr Cys

    4610                 4615                 4620

Thr Ala  Cys Ala Ala Ala Cys  Thr Cys Thr Thr Thr  Thr Gly Thr

    4625                 4630                 4635

Thr Thr  Ala Thr Thr Thr Thr  Thr Cys Thr Ala Ala  Ala Thr Ala

    4640                 4645                 4650

Cys Ala  Thr Thr Cys Ala Ala  Ala Thr Ala Thr Gly  Gly Ala Cys

    4655                 4660                 4665

Gly Thr  Cys Gly Thr Ala Cys  Thr Thr Ala Ala Cys  Thr Thr Thr

    4670                 4675                 4680

Thr Ala  Ala Ala Gly Thr Ala  Thr Gly Gly Gly Cys  Ala Ala Thr

    4685                 4690                 4695

Cys Ala  Ala Thr Thr Gly Cys  Thr Cys Cys Thr Gly  Thr Thr Ala

    4700                 4705                 4710

Ala Ala  Ala Thr Thr Gly Cys  Thr Thr Thr Ala Gly  Ala Ala Ala

    4715                 4720                 4725

Thr Ala  Cys Thr Thr Thr Gly  Gly Cys Ala Gly Cys  Gly Gly Thr

    4730                 4735                 4740

Thr Thr  Gly Thr Thr Gly Thr  Ala Thr Thr Gly Ala  Gly Thr Thr

    4745                 4750                 4755

Thr Cys  Ala Thr Thr Thr Gly  Cys Gly Cys Ala Thr  Thr Gly Gly

    4760                 4765                 4770

Thr Thr  Ala Ala Ala Thr Gly  Gly Ala Ala Ala Gly  Thr Gly Ala

    4775                 4780                 4785

Cys Cys  Gly Thr Gly Cys Gly  Cys Thr Thr Ala Cys  Thr Ala Cys

    4790                 4795                 4800

Ala Gly  Cys Cys Thr Ala Ala  Thr Ala Thr Thr Thr  Thr Thr Gly

    4805                 4810                 4815

Ala Ala  Ala Thr Ala Thr Cys  Cys Cys Ala Ala Gly  Ala Gly Cys

    4820                 4825                 4830

Thr Thr  Thr Thr Thr Cys Cys  Thr Thr Cys Gly Cys  Ala Thr Gly

    4835                 4840                 4845

Cys Cys  Cys Ala Cys Gly Cys  Thr Ala Ala Ala Cys  Ala Thr Thr

    4850                 4855                 4860

Cys Thr  Thr Thr Thr Thr Cys  Thr Cys Thr Thr Thr  Thr Gly Gly

    4865                 4870                 4875

Thr Thr  Ala Ala Ala Thr Cys  Gly Thr Thr Gly Thr  Thr Thr Gly

    4880                 4885                 4890

Ala Thr  Thr Thr Ala Thr Thr  Ala Thr Thr Thr Gly  Cys Thr Ala

    4895                 4900                 4905

Thr Ala  Thr Thr Thr Ala Thr  Thr Thr Thr Thr Cys  Gly Ala Thr

    4910                 4915                 4920

Ala Ala  Thr Thr Ala Thr Cys  Ala Ala Cys Thr Ala  Gly Ala Gly

    4925                 4930                 4935

Ala Ala  Gly Gly Ala Ala Cys  Ala Ala Thr Thr Ala  Ala Thr Gly

    4940                 4945                 4950

Gly Thr  Ala Thr Gly Thr Thr  Cys Ala Thr Ala Cys  Ala Cys Gly

    4955                 4960                 4965

Cys Ala  Thr Gly Thr Ala Ala  Ala Ala Ala Thr Ala  Ala Ala Cys

    4970                 4975                 4980

Thr Ala  Thr Cys Thr Ala Thr  Ala Thr Ala Gly Thr  Thr Gly Thr

    4985                 4990                 4995

Cys Thr  Thr Thr Cys Thr Cys  Thr Gly Ala Ala Thr  Gly Thr Gly

    5000                 5005                 5010

Cys Ala  Ala Ala Ala Cys Thr  Ala Ala Gly Cys Ala  Thr Thr Cys

    5015                 5020                 5025

Cys Gly  Ala Ala Gly Cys Cys  Ala Thr Thr Ala Thr  Thr Ala Gly

    5030                 5035                 5040

Cys Ala  Gly Thr Ala Thr Gly  Ala Ala Thr Ala Gly  Gly Gly Ala

    5045                 5050                 5055

Ala Ala  Cys Thr Ala Ala Ala  Cys Cys Cys Ala Gly  Thr Gly Ala

    5060                 5065                 5070

Thr Ala  Ala Gly Ala Cys Cys  Thr Gly Ala Thr Gly  Ala Thr Thr

    5075                 5080                 5085

Thr Cys  Gly Cys Thr Thr Cys  Thr Thr Thr Ala Ala  Thr Thr Ala

    5090                 5095                 5100

Cys Ala  Thr Thr Thr Gly Gly  Ala Gly Ala Thr Thr  Thr Thr Thr

    5105                 5110                 5115

Thr Ala  Thr Thr Thr Ala Cys  Ala Gly Cys Ala Thr  Thr Gly Thr

    5120                 5125                 5130

Thr Thr  Thr Cys Ala Ala Ala  Thr Ala Thr Ala Thr  Thr Cys Cys

    5135                 5140                 5145

Ala Ala  Thr Thr Ala Ala Thr  Cys Gly Gly Thr Gly  Ala Ala Thr

    5150                 5155                 5160

Gly Ala  Thr Thr Gly Gly Ala  Gly Thr Thr Ala Gly  Ala Ala Thr

    5165                 5170                 5175

Ala Ala  Thr Cys Thr Ala Cys  Thr Ala Thr Ala Gly  Gly Ala Thr

    5180                 5185                 5190

Cys Ala  Thr Ala Thr Thr Thr  Thr Ala Thr Thr Ala  Ala Ala Thr

    5195                 5200                 5205

Thr Ala  Gly Cys Gly Thr Cys  Ala Thr Cys Ala Thr  Ala Ala Thr

    5210                 5215                 5220

Ala Thr  Thr Gly Cys Cys Thr  Cys Cys Ala Thr Thr  Thr Thr Thr

    5225                 5230                 5235

Thr Ala  Gly Gly Gly Thr Ala  Ala Thr Thr Ala Thr  Cys Cys Ala

    5240                 5245                 5250

Gly Ala  Ala Thr Thr Gly Ala  Ala Ala Thr Ala Thr  Cys Ala Gly

    5255                 5260                 5265

Ala Thr  Thr Thr Ala Ala Cys  Cys Ala Thr Ala Gly  Ala Ala Thr

    5270                 5275                 5280

Gly Ala  Gly Gly Ala Thr Ala  Ala Ala Thr Gly Ala  Thr Cys Gly

    5285                 5290                 5295

Cys Gly  Ala Gly Thr Ala Ala  Ala Thr Ala Ala Thr  Ala Thr Thr

    5300                 5305                 5310

Cys Ala  Cys Ala Ala Thr Gly  Thr Ala Cys Cys Ala  Thr Thr Thr

    5315                 5320                 5325

Thr Ala  Gly Thr Cys Ala Thr  Ala Thr Cys Ala Gly  Ala Thr Ala

    5330                 5335                 5340

Ala Gly  Cys Ala Thr Thr Gly  Ala Thr Thr Ala Ala  Thr Ala Thr

    5345                 5350                 5355

Cys Ala  Thr Thr Ala Thr Thr  Gly Cys Thr Thr Cys  Thr Ala Cys

    5360                 5365                 5370

Ala Gly  Gly Cys Thr Thr Thr  Ala Ala Thr Thr Thr  Thr Ala Thr

    5375                 5380                 5385

Thr Ala  Ala Thr Thr Ala Thr  Thr Cys Thr Gly Thr  Ala Ala Gly

    5390                 5395                 5400

Thr Gly  Thr Cys Gly Thr Cys  Gly Gly Cys Ala Thr  Thr Thr Ala

    5405                 5410                 5415

Thr Gly  Thr Cys Thr Thr Thr  Cys Ala Thr Ala Cys  Cys Cys Ala

    5420                 5425                 5430

Thr Cys  Thr Cys Thr Thr Thr  Ala Thr Cys Cys Thr  Thr Ala Cys

    5435                 5440                 5445

Cys Thr  Ala Thr Thr Gly Thr  Thr Thr Gly Thr Cys  Gly Cys Ala

    5450                 5455                 5460

Ala Gly  Thr Thr Thr Thr Gly  Cys Gly Thr Gly Thr  Thr Ala Thr

    5465                 5470                 5475

Ala Thr  Ala Thr Cys Ala Thr  Thr Ala Ala Ala Ala  Cys Gly Gly

    5480                 5485                 5490

Thr Ala  Ala Thr Ala Gly Ala  Thr Thr Gly Ala Cys  Ala Thr Thr

    5495                 5500                 5505

Thr Gly  Ala Thr Thr Cys Thr  Ala Ala Thr Ala Ala  Ala Thr Thr

    5510                 5515                 5520

Gly Gly  Ala Thr Thr Thr Thr  Thr Gly Thr Cys Ala  Cys Ala Cys

    5525                 5530                 5535

Thr Ala  Thr Thr Ala Thr Ala  Thr Cys Gly Cys Thr  Thr Gly Ala

    5540                 5545                 5550

Ala Ala  Thr Ala Cys Ala Ala  Thr Thr Gly Thr Thr  Thr Ala Ala

    5555                 5560                 5565

Cys Ala  Thr Ala Ala Gly Thr  Ala Cys Cys Thr Gly  Thr Ala Gly

    5570                 5575                 5580

Gly Ala  Thr Cys Gly Thr Ala  Cys Ala Gly Gly Thr  Thr Thr Ala

    5585                 5590                 5595

Cys Gly  Cys Ala Ala Gly Ala  Ala Ala Ala Thr Gly  Gly Thr Thr

    5600                 5605                 5610

Thr Gly  Thr Thr Ala Thr Ala  Gly Thr Cys Gly Ala  Thr Thr Ala

    5615                 5620                 5625

Ala Thr  Cys Gly Ala Thr Thr  Thr Gly Ala Thr Thr  Cys Thr Ala

    5630                 5635                 5640

Gly Ala  Thr Thr Thr Gly Thr  Thr Thr Thr Ala Ala  Cys Thr Ala

    5645                 5650                 5655

Ala Thr  Thr Ala Ala Ala Gly  Gly Ala Gly Gly Ala  Ala Thr Ala

    5660                 5665                 5670

Ala Cys  Ala Thr Ala Thr Gly  Ala Thr Cys Gly Cys  Thr Cys Cys

    5675                 5680                 5685

Ala Cys  Cys Ala Thr Gly Cys  Ala Cys Cys Ala Gly  Thr Gly Ala

    5690                 5695                 5700

Gly Ala  Ala Gly Cys Ala Thr  Thr Ala Thr Gly Ala  Gly Cys Ala

    5705                 5710                 5715

Thr Cys  Thr Gly Gly Gly Ala  Cys Gly Gly Thr Gly  Cys Thr Gly

    5720                 5725                 5730

Thr Ala  Ala Cys Ala Ala Ala  Thr Gly Thr Gly Ala  Ala Cys Cys

    5735                 5740                 5745

Ala Gly  Gly Ala Ala Ala Gly  Thr Ala Cys Ala Thr  Gly Thr Cys

    5750                 5755                 5760

Thr Thr  Cys Thr Ala Ala Ala  Thr Gly Cys Ala Cys  Thr Ala Cys

    5765                 5770                 5775

Thr Ala  Cys Cys Thr Cys Thr  Gly Ala Cys Ala Gly  Thr Gly Thr

    5780                 5785                 5790

Ala Thr  Gly Thr Cys Thr Gly  Cys Cys Cys Thr Gly  Thr Gly Gly

    5795                 5800                 5805

Cys Cys  Cys Gly Gly Ala Thr  Gly Ala Ala Thr Ala  Cys Thr Thr

    5810                 5815                 5820

Gly Gly  Ala Thr Ala Gly Cys  Thr Gly Gly Ala Ala  Thr Gly Ala

    5825                 5830                 5835

Ala Gly  Ala Ala Gly Ala Thr  Ala Ala Ala Thr Gly  Cys Thr Thr

    5840                 5845                 5850

Gly Cys  Thr Gly Cys Ala Thr  Ala Ala Ala Gly Thr  Thr Thr Gly

    5855                 5860                 5865

Thr Gly  Ala Thr Ala Cys Ala  Gly Gly Cys Ala Ala  Gly Gly Cys

    5870                 5875                 5880

Cys Cys  Thr Gly Gly Thr Gly  Gly Cys Cys Gly Thr  Gly Gly Thr

    5885                 5890                 5895

Cys Gly  Cys Cys Gly Gly Cys  Ala Ala Cys Ala Gly  Thr Ala Cys

    5900                 5905                 5910

Gly Ala  Cys Cys Cys Cys Cys  Cys Gly Gly Cys Gly  Cys Thr Gly

    5915                 5920                 5925

Cys Gly  Cys Gly Thr Gly Cys  Ala Cys Gly Gly Cys  Thr Gly Gly

    5930                 5935                 5940

Gly Thr  Ala Cys Cys Ala Cys  Thr Gly Gly Ala Gly  Cys Cys Ala

    5945                 5950                 5955

Gly Gly  Ala Cys Thr Gly Cys  Gly Ala Gly Thr Gly  Cys Thr Gly

    5960                 5965                 5970

Cys Cys  Gly Cys Cys Gly Cys  Ala Ala Cys Ala Cys  Cys Gly Ala

    5975                 5980                 5985

Gly Thr  Gly Cys Gly Cys Gly  Cys Cys Gly Gly Gly  Cys Cys Thr

    5990                 5995                 6000

Gly Gly  Gly Cys Gly Cys Cys  Cys Ala Gly Cys Ala  Cys Cys Cys

    6005                 6010                 6015

Gly Thr  Thr Gly Cys Ala Gly  Cys Thr Cys Ala Ala  Cys Ala Ala

    6020                 6025                 6030

Gly Gly  Ala Cys Ala Cys Ala  Gly Thr Gly Thr Gly  Cys Ala Ala

    6035                 6040                 6045

Ala Cys  Cys Thr Thr Gly Cys  Cys Thr Thr Gly Cys  Ala Gly Gly

    6050                 6055                 6060

Cys Thr  Ala Cys Thr Thr Cys  Thr Cys Thr Gly Ala  Thr Gly Cys

    6065                 6070                 6075

Cys Thr  Thr Thr Thr Cys Cys  Thr Cys Cys Ala Cys  Gly Gly Ala

    6080                 6085                 6090

Cys Ala  Ala Ala Thr Gly Cys  Ala Gly Ala Cys Cys  Cys Thr Gly

    6095                 6100                 6105

Gly Ala  Cys Cys Ala Ala Cys  Thr Gly Thr Ala Cys  Cys Thr Thr

    6110                 6115                 6120

Cys Cys  Thr Thr Gly Gly Ala  Ala Ala Gly Ala Gly  Ala Gly Thr

    6125                 6130                 6135

Ala Gly  Ala Ala Cys Ala Thr  Cys Ala Thr Gly Gly  Gly Ala Cys

    6140                 6145                 6150

Ala Gly  Ala Gly Ala Ala Ala  Thr Cys Cys Gly Ala  Thr Gly Thr

    6155                 6160                 6165

Gly Gly  Thr Thr Thr Gly Cys  Ala Gly Thr Thr Cys  Thr Thr Cys

    6170                 6175                 6180

Thr Cys  Thr Gly Cys Cys Ala  Gly Cys Thr Ala Gly  Ala Ala Ala

    6185                 6190                 6195

Ala Cys  Cys Ala Cys Cys Ala  Ala Ala Thr Gly Ala  Ala Cys Cys

    6200                 6205                 6210

Cys Cys  Ala Thr Gly Thr Thr  Thr Ala Cys Gly Thr  Cys Gly Ala

    6215                 6220                 6225

Cys Ala  Ala Ala Ala Cys Thr  Cys Ala Cys Ala Cys  Ala Thr Gly

    6230                 6235                 6240

Thr Cys  Cys Ala Cys Cys Thr  Thr Gly Thr Cys Cys  Ala Gly Cys

    6245                 6250                 6255

Thr Cys  Cys Gly Gly Ala Ala  Cys Thr Cys Cys Thr  Gly Gly Gly

    6260                 6265                 6270

Gly Gly  Gly Ala Cys Cys Gly  Thr Cys Ala Gly Thr  Cys Thr Thr

    6275                 6280                 6285

Cys Cys  Thr Cys Thr Thr Cys  Cys Cys Cys Cys Cys  Ala Ala Ala

    6290                 6295                 6300

Ala Cys  Cys Cys Ala Ala Gly  Gly Ala Cys Ala Cys  Cys Cys Thr

    6305                 6310                 6315

Cys Ala  Thr Gly Ala Thr Cys  Thr Cys Cys Cys Gly  Gly Ala Cys

    6320                 6325                 6330

Cys Cys  Cys Thr Gly Ala Gly  Gly Thr Cys Ala Cys  Ala Thr Gly

    6335                 6340                 6345

Cys Gly  Thr Gly Gly Thr Gly  Gly Thr Gly Gly Ala  Cys Gly Thr

    6350                 6355                 6360

Gly Ala  Gly Cys Cys Ala Cys  Gly Ala Ala Gly Ala  Cys Cys Cys

    6365                 6370                 6375

Thr Gly  Ala Gly Gly Thr Cys  Ala Ala Gly Thr Thr  Cys Ala Ala

    6380                 6385                 6390

Cys Thr  Gly Gly Thr Ala Cys  Gly Thr Gly Gly Ala  Cys Gly Gly

    6395                 6400                 6405

Cys Gly  Thr Gly Gly Ala Gly  Gly Thr Gly Cys Ala  Thr Ala Ala

    6410                 6415                 6420

Thr Gly  Cys Cys Ala Ala Gly  Ala Cys Ala Ala Ala  Gly Cys Cys

    6425                 6430                 6435

Gly Cys  Gly Gly Gly Ala Gly  Gly Ala Gly Cys Ala  Gly Thr Ala

    6440                 6445                 6450

Cys Ala  Ala Cys Ala Gly Cys  Ala Cys Gly Thr Ala  Cys Cys Gly

    6455                 6460                 6465

Thr Gly  Thr Gly Gly Thr Cys  Ala Gly Cys Gly Thr  Cys Cys Thr

    6470                 6475                 6480

Cys Ala  Cys Cys Gly Thr Cys  Cys Thr Gly Cys Ala  Cys Cys Ala

    6485                 6490                 6495

Gly Gly  Ala Cys Thr Gly Gly  Cys Thr Gly Ala Ala  Thr Gly Gly

    6500                 6505                 6510

Cys Ala  Ala Gly Gly Ala Gly  Thr Ala Cys Ala Ala  Gly Thr Gly

    6515                 6520                 6525

Cys Ala  Ala Gly Gly Thr Cys  Thr Cys Cys Ala Ala  Cys Ala Ala

    6530                 6535                 6540

Ala Gly  Cys Cys Cys Thr Cys  Cys Cys Ala Gly Cys  Cys Cys Cys

    6545                 6550                 6555

Cys Ala  Thr Cys Gly Ala Gly  Ala Ala Ala Ala Cys  Cys Ala Thr

    6560                 6565                 6570

Cys Thr  Cys Cys Ala Ala Ala  Gly Cys Cys Ala Ala  Ala Gly Gly

    6575                 6580                 6585

Gly Cys  Ala Gly Cys Cys Cys  Cys Gly Ala Gly Ala  Ala Cys Cys

    6590                 6595                 6600

Ala Cys  Ala Gly Gly Thr Gly  Thr Ala Cys Ala Cys  Cys Cys Thr

    6605                 6610                 6615

Gly Cys  Cys Cys Cys Cys Ala  Thr Cys Cys Cys Gly  Gly Gly Ala

    6620                 6625                 6630

Thr Gly  Ala Gly Cys Thr Gly  Ala Cys Cys Ala Ala  Gly Ala Ala

    6635                 6640                 6645

Cys Cys  Ala Gly Gly Thr Cys  Ala Gly Cys Cys Thr  Gly Ala Cys

    6650                 6655                 6660

Cys Thr  Gly Cys Cys Thr Gly  Gly Thr Cys Ala Ala  Ala Gly Gly

    6665                 6670                 6675

Cys Thr  Thr Cys Thr Ala Thr  Cys Cys Cys Ala Gly  Cys Gly Ala

    6680                 6685                 6690

Cys Ala  Thr Cys Gly Cys Cys  Gly Thr Gly Gly Ala  Gly Thr Gly

    6695                 6700                 6705

Gly Gly  Ala Gly Ala Gly Cys  Ala Ala Thr Gly Gly  Gly Cys Ala

    6710                 6715                 6720

Gly Cys  Cys Gly Gly Ala Gly  Ala Ala Cys Ala Ala  Cys Thr Ala

    6725                 6730                 6735

Cys Ala  Ala Gly Ala Cys Cys  Ala Cys Gly Cys Cys  Thr Cys Cys

    6740                 6745                 6750

Cys Gly  Thr Gly Cys Thr Gly  Gly Ala Cys Thr Cys  Cys Gly Ala

    6755                 6760                 6765

Cys Gly  Gly Cys Thr Cys Cys  Thr Thr Cys Thr Thr  Cys Cys Thr

    6770                 6775                 6780

Cys Thr  Ala Cys Ala Gly Cys  Ala Ala Gly Cys Thr  Cys Ala Cys

    6785                 6790                 6795

Cys Gly  Thr Gly Gly Ala Cys  Ala Ala Gly Ala Gly  Cys Ala Gly

    6800                 6805                 6810

Gly Thr  Gly Gly Cys Ala Gly  Cys Ala Gly Gly Gly  Gly Ala Ala

    6815                 6820                 6825

Cys Gly  Thr Cys Thr Thr Cys  Thr Cys Ala Thr Gly  Cys Thr Cys

    6830                 6835                 6840

Cys Gly  Thr Gly Ala Thr Gly  Cys Ala Thr Gly Ala  Gly Gly Cys

    6845                 6850                 6855

Thr Cys  Thr Gly Cys Ala Cys  Ala Ala Cys Cys Ala  Cys Thr Ala

    6860                 6865                 6870

Cys Ala  Cys Gly Cys Ala Gly  Ala Ala Gly Ala Gly  Cys Cys Thr

    6875                 6880                 6885

Cys Thr  Cys Cys Cys Thr Gly  Thr Cys Thr Cys Cys  Gly Gly Gly

    6890                 6895                 6900

Thr Ala  Ala Ala Thr Ala Ala  Thr Gly Gly Ala Thr  Cys Cys Gly

    6905                 6910                 6915

Cys Gly  Gly Ala Ala Ala Gly  Ala Ala Gly Ala Ala  Gly Ala Ala

    6920                 6925                 6930

Gly Ala  Ala Gly Ala Ala Gly  Ala Ala Ala Gly Cys  Cys Cys Gly

    6935                 6940                 6945

Ala Ala  Ala Gly Gly Ala Ala  Gly Cys Thr Gly Ala  Gly Thr Thr

    6950                 6955                 6960

Gly Gly  Cys Thr Gly Cys Thr  Gly Cys Cys Ala Cys  Cys Gly Cys

    6965                 6970                 6975

Thr Gly  Ala Gly Cys Ala Ala  Thr Ala Ala Cys Thr  Ala Gly Cys

    6980                 6985                 6990

Ala Thr  Ala Ala Cys Cys Cys  Cys Thr Thr Gly Gly  Gly Gly Cys

    6995                 7000                 7005

Cys Thr  Cys Thr Ala Ala Ala  Cys Gly Gly Gly Thr  Cys Thr Thr

    7010                 7015                 7020

Gly Ala  Gly Gly Gly Gly Thr  Thr Thr Thr Thr Thr  Gly Cys Thr

    7025                 7030                 7035

Gly Ala  Ala Ala Gly Gly Ala  Gly Gly Ala Ala Cys  Cys Gly Cys

    7040                 7045                 7050

Thr Cys  Thr Thr Cys Ala Cys  Gly Cys Thr Cys Thr  Thr Cys Ala

    7055                 7060                 7065

Cys Gly  Cys Gly Gly Ala Thr  Ala Ala Ala Thr Ala  Ala Gly Thr

    7070                 7075                 7080

Ala Ala  Cys Gly Ala Thr Cys  Cys Gly Gly Thr Cys  Cys Ala Gly

    7085                 7090                 7095

Thr Ala  Ala Thr Gly Ala Cys  Cys Thr Cys Ala Gly  Ala Ala Cys

    7100                 7105                 7110

Thr Cys  Cys Ala Thr Cys Thr  Gly Gly Ala Thr Thr  Thr Gly Thr

    7115                 7120                 7125

Thr Cys  Ala Gly Ala Ala Cys  Gly Cys Thr Cys Gly  Gly Thr Thr

    7130                 7135                 7140

Gly Cys  Cys Gly Cys Cys Gly  Gly Gly Cys Gly Thr  Thr Thr Thr

    7145                 7150                 7155

Thr Thr  Ala Thr Thr Gly Gly  Thr Gly Ala Gly Ala  Ala Thr Cys

    7160                 7165                 7170

Gly Cys  Ala Gly Cys Ala Ala  Cys Thr Thr Gly Thr  Cys Gly Cys

    7175                 7180                 7185

Gly Cys  Cys Ala Ala Thr Cys  Gly Ala Gly Cys Cys  Ala Thr Gly

    7190                 7195                 7200

Thr Cys  Gly Thr Cys Gly Thr  Cys Ala Ala Cys Gly  Ala Cys Cys

    7205                 7210                 7215

Cys Cys  Cys Cys Ala Thr Thr  Cys Ala Ala Gly Ala  Ala Cys Ala

    7220                 7225                 7230

Gly Cys  Ala Ala Gly Cys Ala  Gly Cys Ala Thr Thr  Gly Ala Gly

    7235                 7240                 7245

Ala Ala  Cys Thr Thr Thr Gly  Gly Ala Ala Thr Cys  Cys Ala Gly

    7250                 7255                 7260

Thr Cys  Cys Cys Thr Cys Thr  Thr Cys Cys Ala Cys  Cys Thr Gly

    7265                 7270                 7275

Cys Thr  Gly Ala Cys Cys Gly

    7280                 7285

<210>29

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>29

Pro Gly Thr Cys Phe Pro Phe Pro Trp Glu Cys Thr His Ala

1               5                   10

<210>30

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>30

Trp Gly Ala Cys Trp Pro Phe Pro Trp Glu Cys Phe Lys Glu

1               5                   10

<210>31

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>31

Val Pro Phe Cys Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Phe Glu Ala

1               5                   10

<210>32

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>32

Gly Ser Arg Cys Lys Tyr Lys Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Cys Phe

1               5                   10                  15

His His

<210>33

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>33

Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys Asp

1               5                   10                  15

Pro Leu

<210>34

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>34

Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys Thr

1               5                   10                  15

Ser Ser

<210>35

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>35

Ser Asp Asp Cys Met Tyr Asp Gln Leu Thr Arg Met Phe Ile Cys Ser

1               5                   10                  15

Asn Leu

<210>36

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>36

Asp Leu Asn Cys Lys Tyr Asp Glu Leu Thr Tyr Lys Glu Trp Cys Gln

1               5                   10                  15

Phe Asn

<210>37

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>37

Phe His Asp Cys Lys Tyr Asp Leu Leu Thr Arg Gln Met Val Cys His

1               5                   10                  15

Gly Leu

<210>38

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>38

Arg Asn His Cys Phe Trp Asp His Leu Leu Lys Gln Asp Ile Cys Pro

1               5                   10                  15

Ser Pro

<210>39

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>39

Ala Asn Gln Cys Trp Trp Asp Ser Leu Thr Lys Lys Asn Val Cys Glu

1               5                   10                  15

Phe Phe

<210>40

<211>8

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>聚甘氨酸接头

<400>40

gggkgggg                                                    8

<210>41

<211>8

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>聚甘氨酸接头

<220>

<221>misc_特征

<222>(4)..(4)

<223>N是天冬酰胺

<400>41

gggngsgg                                                    8

<210>42

<211>8

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>聚甘氨酸接头

<400>42

gggcgggg                                        8

<210>43

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>聚甘氨酸接头

<400>43

Gly Pro Asn Gly Gly

1               5

<210>44

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第19位与C末端连接

<400>44

Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys Asp

1               5                   10                  15

Pro Leu Xaa

<210>45

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<400>45

Xaa Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

Asp Pro Leu

<210>46

<211>38

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(38)..(38)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第38位与C末端连接

<400>46

Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys Asp

1               5                   10                  15

Pro Leu Xaa Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp

            20                  25                  30

Val Cys Asp Pro Leu Xaa

        35

<210>47

<211>38

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<220>

<221>misc_特征

<222>(20)..(20)

<223>Xaa＝肽键

<400>47

Xaa Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

Asp Pro Leu Xaa Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln

            20                  25                  30

Trp Val Cys Asp Pro Leu

        35

<210>48

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第19位与C末端连接

<400>48

Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys Thr

1               5                   10                  15

Ser Ser Xaa

<210>49

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<400>49

Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys

1               5                   10                  15

Thr Ser Ser

<210>50

<211>36

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(18)..(18)

<223>Xaa＝肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(36)..(36)

<223>Xaa＝肽键

    Fc结构域在第36位与C末端连接

<400>50

Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Thr Ser

1               5                   10                  15

Ser Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val

            20                  25                  30

Thr Ser Ser Xaa

        35

<210>51

<211>36

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

<400>51

Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Thr

1               5                   10                  15

Ser Ser Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp

            20                  25                  30

Val Thr Ser Ser

        35

<210>52

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第19位与C末端连接

<400>52

Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys His

1               5                   10                  15

Gly Leu Xaa

<210>53

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<400>53

Xaa Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu

<210>54

<211>38

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(38)..(38)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第38位与C末端连接

<400>54

Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys His

1               5                   10                  15

Gly Leu Xaa Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp

            20                  25                  30

Val Cys His Gly Leu Xaa

        35

<210>55

<211>38

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<220>

<221>misc_特征

<222>(20)..(20)

<223>Xaa＝肽键

<400>55

Xaa Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu Xaa Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln

            20                  25                  30

Trp Val Cys His Gly Leu

        35

<210>56

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>56

cggcgcaact atcggtatca agctg                                25

<210>57

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>57

catgtaccgt aacactgagt ttcgtc                               26

<210>58

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>共有肽

<400>58

Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys His

1               5                   10                  15

Gly Leu

<210>59

<211>23

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头序列

<400>59

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr His Met

            20

<210>60

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>60

Asn Gln Thr Leu Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Phe Ile Thr

1               5                   10                  15

Tyr Met

<210>61

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>61

Pro Val Tyr Gln Gly Trp Trp Asp Thr Leu Thr Lys Leu Tyr Ile Trp

1               5                   10                  15

Asp Gly

<210>62

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>62

Trp Leu Asp Gly Gly Trp Arg Asp Pro Leu Ile Lys Arg Ser Val Gln

1               5                   10                  15

Leu Gly

<210>63

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>63

Gly His Gln Gln Phe Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Gln

1               5                   10                  15

Ser Asn

<210>64

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>64

Gln Arg Val Gly Gln Phe Trp Asp Val Leu Thr Lys Met Phe Ile Thr

1               5                   10                  15

Gly Ser

<210>65

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>65

Gln Ala Gln Gly Trp Ser Tyr Asp Ala Leu Ile Lys Thr Trp Ile Arg

1               5                   10                  15

Trp Pro

<210>66

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>66

Gly Trp Met His Trp Lys Trp Asp Pro Leu Thr Lys Gln Ala Leu Pro

1               15                  10                  15

Trp Met

<210>67

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>67

Gly His Pro Thr Tyr Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile Leu

1               5                   10                  15

Gln Met

<210>68

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>68

Trp Asn Asn Trp Ser Leu Trp Asp Pro Leu Thr Lys Leu Trp Leu Gln

1               5                   10                  15

Gln Asn

<210>69

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>69

Trp Gln Trp Gly Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Gln

1               5                   10                  15

Gln Gln

<210>70

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>70

Gly Gln Met Gly Trp Arg Trp Asp Pro Leu Thr Lys Met Trp Leu Gly

1               5                   10                  15

Thr Ser

<210>71

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>71

tatgccgggt acttgtttcc cgttcccgtg ggaatgcact cacgctggtg gaggcggtgg    60

gg                                                                   62

<210>72

<211>64

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>72

tcgaccccac cgcctcctgg agcgtgagtg cattcccacg ggaagccgaa acaagtaccc    60

ggca                                                                 64

<210>73

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>73

tatgtggggt gcttgttggc cgttcccgtg ggaatgtttc aaagaaggtg gaggcggtgg    60

gg                                                                   62

<210>74

<211>64

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>74

tcgaccccac cgcctccacc ttctttgaaa cattcccacg ggaacggcca acaagcaccc    60

caca                                                                 64

<210>75

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>75

tatggttccg ttctgtgacc tgctgactaa acactgtttc gaagctggtg gaggcggtgg    60

 gg                                                                  62

<210>76

<211>64

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>76

tcgaccccac cgcctccacc agcttcgaaa cagtgtttag tcagcaggtc acagaacgga    60

acca                                                                 64

<210>77

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>77

tatgggttct cgttgtaaat acaaatggga cgttctgact aaacagtgtt tccaccacgg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>78

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>78

tcgaccccac cgcctccacc gtggtggaaa cactgtttag tcagaacgtc ccatttgtat    60

ttacaacgag aaccca                                                    76

<210>79

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>79

tatgctgccg ggttgtaaat gggacctgct gatcaaacag tgggtttgtg acccgctggg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>80

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>80

tcgaccccac cgcctccacc cagcgggtca caaacccact gtttgatcag caggtcccat    60

ttacaacccg gcagca                                                    76

<210>81

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>81

tatgtctgct gactgttact tcgacatcct gactaaatct gacgtttgta cttcttctgg   60

tggaggcggt gggg                                                     74

<210>82

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>82

tcgaccccac cgcctccacc agaagaagta caaacgtcag atttagtcag gatgtcgaag   60

taacagtcag cagaca                                                   76

<210>83

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>83

tatgtctgac gactgtatgt acgaccagct gactcgtatg ttcatctgtt ctaacctggg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>84

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>84

tcgaccccac cgcctccacc caggttagaa cagatgaaca tacgagtcag ctggtcgtac   60

atacagtcgt cagaca                                                   76

<210>85

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>85

tatggacctg aactgtaaat acgacgaact gacttacaaa gaatggtgtc agttcaacgg  60

tggaggcggt gggg                                                    74

<210>86

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>86

tcgaccccac cgcctccacc gttgaactga caccattctt tgtaagtcag ttcgtcgtat 60

ttacagttca ggtcca                                                 76

<210>87

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>87

tatgttccac gactgtaaat acgacctgct gactcgtcag atggtttgtc acggtctggg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>88

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>88

tcgaccccac cgcctccacc cagaccgtga caaaccatct gacgagtcag caggtcgtat   60

ttacagtcgt ggaaca                                                   76

<210>89

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>89

tatgcgtaac cactgtttct gggaccacct gctgaaacag gacatctgtc cgtctccggg  60

tggaggcggt gggg                                                    74

<210>90

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>90

tcgaccccac cgcctccacc cggagacgga cagatgtcct gtttcagcag gtggtcccag  60

aaacagtggt tacgca                                                  76

<210>91

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>91

tatggctaac cagtgttggt gggactctct gctgaaaaaa aacgtttgtg aattcttcgg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>92

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>92

tcgaccccac cgcctccacc gaagaattca caaacgtttt ttttcagcag agagtcccac   60

caacactggt tagcca                                                   76

<210>93

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>93

tatgttccac gactgcaaat gggacctgct gaccaaacag tgggtttgcc acggtctggg  60

tggaggcggt gggg                                                    74

<210>94

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>94

tcgaccccac cgcctccacc cagaccgtgg caaacccact gtttggtcag caggtcccat    60

ttgcagtcgt ggaaca                                                    76

<210>95

<211>141

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>pAMG21-RANK-Fc载体

<400>95

ctaattccgc tctcacctac caaacaatgc ccccctgcaa aaaataaatt catataaaaa     60

acatacagat aaccatctgc ggtgataaat tatctctggc ggtgttgaca taaataccac    120

tggcggtgat actgagcaca t                                              141

<210>96

<211>55

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>pAMG21-RANK-Fc载体

<400>96

cgatttgatt ctagaaggag gaataacata tggttaacgc gttggaattc ggtac         55

<210>97

<211>1546

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>pAMG21

<400>97

gcgtaacgta tgcatggtct ccccatgcga gagtagggaa ctgccaggca tcaaataaaa     60

cgaaaggctc agtcgaaaga ctgggccttt cgttttatct gttgtttgtc ggtgaacgct    120

ctcctgagta ggacaaatcc gccgggagcg gatttgaacg ttgcgaagca acggcccgga    180

gggtggcggg caggacgccc gccataaact gccaggcatc aaattaagca gaaggccatc    240

ctgacggatg gcctttttgc gtttctacaa actcttttgt ttatttttct aaatacattc    300

aaatatggac gtcgtactta acttttaaag tatgggcaat caattgctcc tgttaaaatt    360

gctttagaaa tactttggca gcggtttgtt gtattgagtt tcatttgcgc attggttaaa    420

tggaaagtga ccgtgcgctt actacagcct aatatttttg aaatatccca agagcttttt    480

ccttcgcatg cccacgctaa acattctttt tctcttttgg ttaaatcgtt gtttgattta    540

ttatttgcta tatttatttt tcgataatta tcaactagag aaggaacaat taatggtatg    600

ttcatacacg catgtaaaaa taaactatct atatagttgt ctttctctga atgtgcaaaa    660

ctaagcattc cgaagccatt attagcagta tgaataggga aactaaaccc agtgataaga    720

cctgatgatt tcgcttcttt aattacattt ggagattttt tatttacagc attgttttca    780

aatatattcc aattaatcgg tgaatgattg gagttagaat aatctactat aggatcatat    840

tttattaaat tagcgtcatc ataatattgc ctccattttt tagggtaatt atccagaatt    900

gaaatatcag atttaaccat agaatgagga taaatgatcg cgagtaaata atattcacaa    960

tgtaccattt tagtcatatc agataagcat tgattaatat cattattgct tctacaggct   1020

ttaattttat taattattct gtaagtgtcg tcggcattta tgtctttcat acccatctct   1080

ttatccttac ctattgtttg tcgcaagttt tgcgtgttat atatcattaa aacggtaata   1140

gattgacatt tgattctaat aaattggatt tttgtcacac tattatatcg cttgaaatac   1200

aattgtttaa cataagtacc tgtaggatcg tacaggttta cgcaagaaaa tggtttgtta   1260

tagtcgatta atcgatttga ttctagattt gttttaacta attaaaggag gaataacata   1320

tggttaacgc gttggaattc gagctcacta gtgtcgacct gcagggtacc atggaagctt   1380

actcgaggat ccgcggaaag aagaagaaga agaagaaagc ccgaaaggaa gctgagttgg   1440

ctgctgccac cgctgagcaa taactagcat aaccccttgg ggcctctaaa cgggtcttga   1500

ggggtttttt gctgaaagga ggaaccgctc ttcacgctct tcacgc                  1546

<210>98

<211>872

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>GM221

<400>98

ttattttcgt gcggccgcac cattatcacc gccagaggta aactagtcaa cacgcacggt   60

gttagatatt tatcccttgc ggtgatagat tgagcacatc gatttgattc tagaaggagg  120

gataatatat gagcacaaaa aagaaaccat taacacaaga gcagcttgag gacgcacgtc  180

gccttaaagc aatttatgaa aaaaagaaaa atgaacttgg cttatcccag gaatctgtcg  240

cagacaagat ggggatgggg cagtcaggcg ttggtgcttt atttaatggc atcaatgcat  300

taaatgctta taacgccgca ttgcttacaa aaattctcaa agttagcgtt gaagaattta  360

gcccttcaat cgccagagaa tctacgagat gtatgaagcg gttagtatgc agccgtcact  420

tagaagtgag tatgagtacc ctgttttttc tcatgttcag gcagggatgt tctcacctaa  480

gcttagaacc tttaccaaag gtgatgcgga gagatgggta agcacaacca aaaaagccag  540

tgattctgca ttctggcttg aggttgaagg taattccatg accgcaccaa caggctccaa  600

gccaagcttt cctgacggaa tgttaattct cgttgaccct gagcaggctg ttgagccagg  660

tgatttctgc atagccagac ttgggggtga tgagtttacc ttcaagaaac tgatcaggga  720

tagcggtcag gtgtttttac aaccactaaa cccacagtac ccaatgatcc catgcaatga  780

gagttgttcc gttgtgggga aagttatcgc tagtcagtgg cctgaagaga cgtttggctg  840

atagactagt ggatccacta gtgtttctgc cc                                872

<210>99

<211>1197

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>GM221

<400>99

ggcggaaac cgacgtccatc gaatggtgca aaacctttcg cggtatggca tgatagcgcc   60

cggaagagag tcaattcagg gtggtgaatg tgaaaccagt aacgttatac gatgtcgcag  120

agtatgccgg tgtctcttat cagaccgttt cccgcgtggt gaaccaggcc agccacgttt  180

ctgcgaaaac gcgggaaaaa gtcgaagcgg cgatggcgga gctgaattac attcccaacc  240

gcgtggcaca acaactggcg ggcaaacagt cgctcctgat tggcgttgcc acctccagtc    300

tggccctgca cgcgccgtcg caaattgtcg cggcgattaa atctcgcgcc gatcaactgg    360

gtgccagcgt ggtggtgtcg atggtagaac gaagcggcgt cgaagcctgt aaagcggcgg    420

tgcacaatct tctcgcgcaa cgcgtcagtg ggctgatcat taactatccg ctggatgacc    480

aggatgccat tgctgtggaa gctgcctgca ctaatgttcc ggcgttattt cttgatgtct    540

ctgaccagac acccatcaac agtattattt tctcccatga agacggtacg cgactgggcg    600

tggagcatct ggtcgcattg ggtcaccagc aaatcgcgct gttagcgggc ccattaagtt    660

ctgtctcggc gcgtctgcgt ctggctggct ggcataaata tctcactcgc aatcaaattc    720

agccgatagc ggaacgggaa ggcgactgga gtgccatgtc cggttttcaa caaaccatgc    780

aaatgctgaa tgagggcatc gttcccactg cgatgctggt tgccaacgat cagatggcgc    840

tgggcgcaat gcgcgccatt accgagtccg ggctgcgcgt tggtgcggat atctcggtag    900

tgggatacga cgataccgaa gacagctcat gttatatccc gccgttaacc accatcaaac    960

aggattttcg cctgctgggg caaaccagcg tggaccgctt gctgcaactc tctcagggcc   1020

aggcggtgaa gggcaatcag ctgttgcccg tctcactggt gaaaagaaaa accaccctgg   1080

cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg cagctggcac   1140

gacaggtttc ccgactggaa agcggacagt aaggtaccat aggatccagg cacagga      1197

<210>100

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，3，13)..(14)

<223>Xaa(Pos1，2，3，13，14)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(6)..(6)

<223>Xaa(Pos6)是氨基酸残基；Xaa(Pos9)是碱性或疏水残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(12)..(12)

<223>Xaa(Pos12)是中性疏水残基

<400>100

Xaa Xaa Xaa Cys Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>101

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，3，12和)..(13)

<223>Xaa(Pos1，2，3，12，13)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5 and)..(8)

<223>Xaa(Pos5，8)是中性疏水残基；Xaa(Pos 10)是酸性残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>Xaa(Pos14)是缺失的或是氨基酸残基.

<400>101

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Pro Phe Xaa Trp Xaa Cys Xaa Xaa Xaa

 1              5                   10

<210>102

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，3，12，13和)..(14)

<223>Xaa(Pos1，2，3，12，13，14)各自独立地是缺失的和是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(6和)..(7)

<223>Xaa(Pos6，7)是疏水残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa(Pos10)是酸性和极性疏水残基.

<400>102

Xaa Xaa Xaa Cys Trp Xaa Xaa Trp Gly Xaa Cys Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>103

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa(Pos1)是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(2和)..(14)

<223>Xaa(Pos2，14)是中性的疏水残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(3和)..(10)

<223>Xaa(Pos3，10)是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5，6，7，8，12和)..(13)

<223>Xaa(Pos5，6，7，8，12，13)各自独立地是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(9)..(9)

<223>Xaa(Pos9)是酸性残基.

<400>103

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>104

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，12，13，16，17和)..(18)

<223>Xaa(Pos1，2，12，13，16，17，18)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(3)..(3)

<223>Xaa(Pos3)是酸性或酰胺残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5 and)..(8)

<223>Xaa(Pos5，8)是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(6)..(6)

<223>Xaa(Pos6)是芳族残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(11)..(11)

<223>Xaa(Pos11)是碱基残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>Xaa(Pos14)是中性疏水残基

<400>104

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa

1               5                   10                  15

Xaa Xaa

<210>105

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2和)..(3)

<223>Xaa(Pos1，2，3)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5，7，14和)..(16)

<223>Xaa(Pos5，7，14，16)是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa(Pos10)是碱性残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(11和)..(12)

<223>Xaa(Pos11，12)各自独立地是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(13和)..(17)

<<223>Xaa(Pos13，17)是中性疏水残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(18)..(18)

<223>Xaa(Pos18)是氨基酸残基和是缺失的.

<400>105

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa

1               5                   10                   15

Xaa Xaa

<210>106

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，3，16，17和)..(18)

<223>Xaa(Pos1，2，3，16，17，18)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5，6，7，10和)..(14)

<223>Xaa(Pos5，6，7，10，14)各自独立地是氨基酸残基.

<400>106

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Trp Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Cys Xaa

1               5                   10                  15

Xaa Xaa

<210>107

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，3，15，16，17)..(18)

<223>Xaa(Pos1，2，3，15，16，17，18)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5，6，7，9和)..(13)

<223>Xaa(Pos 5，6，7，9 13)各自独立地是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(11)..(11)

<223>Xaa(Pos 11)是T或I；和

<400>107

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Leu Xaa Lys Xaa Cys Xaa Xaa

1               5                   10                  15

Xaa Xaa

<210>108

<211>4

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>(Pos 2)的X是氨基酸残基

<220>

<221>misc_特征

<222>(4)..(4)

<223>(Pos 4)的X是苏氨酰或异亮氨酰

<400>108

Asp Xaa Leu Xaa

1

<210>109

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2和)..(3)

<223>X at(Pos 1，2，3)是缺失的或是氨基酸残基(当X12、X13和X14中的一个是C时，X1、 X2和X3中的一个优选是C)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5)..(5)

<223>(Pos 5)的X是W，Y，或F(优选W)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(7)..(7)

<223>(Pos 7)的X是氨基酸残基(优选L)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(9)..(9)

<223>(Pos 9)的X是T或I(优选T)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>(Pos 10)的X是K，R，或H(优选K).

<220>

<221>misc_特征

<222>(12)..(12)

<223>at(Pos 12)的X是C，中性疏水残基或碱基残基(优选W，C，或R)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(13)..(13)

<223>(Post 13)的X是C，中性疏水残基或是缺失的(优选V)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>(Pos 14)是X是任意氨基酸残基或是缺失的.

<400>109

Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Asp Xaa Leu Xaa Xaa Gln Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>110

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<400>110

Pro Phe Pro Trp Glu

1               5

<210>111

<211>248

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>111

Met Pro Gly Thr Cys Phe Pro Phe Pro Trp Glu Cys Thr His Ala Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

            20                  25                  30

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

        35                  40                  45

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

    50                  55                  60

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

65                  70                  75                  80

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu

                85                  90                  95

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

            100                 105                 110

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

        115                 120                 125

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

    130                 135                 140

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr

145                 150                 155                 160

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

                165                 170                 175

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

            180                 185                 190

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

        195                 200                 205

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

    210                 215                 220

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

225                 230                 235                 240

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245

<210>112

<211>248

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>112

Met Trp Gly Ala Cys Trp Pro Phe Pro Trp Glu Cys Phe Lys Glu Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

            20                  25                  30

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

        35                  40                  45

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

    50                  55                  60

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

65                  70                  75                  80

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

                85                  90                  95

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

            100                 105                 110

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

        115                 120                 125

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

    130                 135                 140

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr

145                 150                 155                 160

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

                165                 170                 175

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

            180                 185                 190

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

        195                 200                 205

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

    210                 215                 220

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

225                 230                 235                 240

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245

<210>113

<211>248

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>113

Met Val Pro Phe Cys Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Phe Glu Ala Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

            20                  25                  30

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

        35                  40                  45

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

    50                  55                  60

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

65                  70                  75                  80

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

                85                   90                 95

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

            100                 105                 110

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

        115                 120                 125

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

    130                 135                 140

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr

145                 150                 155                 160

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

                165                 170                 175

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

            180                 185                 190

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

        195                 200                 205

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

    210                 215                 220

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

225                 230                 235                 240

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245

<210>114

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>114

Met Gly Ser Arg Cys Lys Tyr Lys Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Cys

1               5                   10                  15

Phe His His Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>115

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>115

Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

Asp Pro Leu Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>116

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>116

Met Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys

1               5                   10                  15

Thr Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

 225                230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>117

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>117

Met Ser Asp Asp Cys Met Tyr Asp Gln Leu Thr Arg Met Phe Ile Cys

1               5                   10                  15

Ser Asn Leu Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>118

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>118

Met Asp Leu Asn Cys Lys Tyr Asp Glu Leu Thr Tyr Lys Glu Trp Cys

1               5                   10                  15

Gln Phe Asn Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

 65                 70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>119

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>119

Met Phe His Asp Cys Lys Tyr Asp Leu Leu Thr Arg Gln Met Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>120

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>120

Met Arg Asn His Cys Phe Trp Asp His Leu Leu Lys Gln Asp Ile Cys

1               5                   10                  15

Pro Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>121

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>121

Met Ala Asn Gln Cys Trp Trp Asp Ser Leu Thr Lys Lys Asn Val Cys

1               5                   10                  15

Glu Phe Phe Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                  235                240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>122

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>122

Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

 65                 70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>123

<211>293

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>123

Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

Asp Pro Leu Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala

            20                  25                  30

Ser  Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr His Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp

         35                  40                  45

Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys Asp Pro Leu Gly Gly Gly Gly

    50                  55                  60

Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

65                  70                  75                  80

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

                85                  90                  95

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

            100                 105                 110

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

        115                 120                 125

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

    130                 135                 140

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

145                 150                 155                 160

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

                165                 170                 175

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

            180                 185                 190

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

        195                 200                 205

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

    210                 215                 220

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

225                 230                 235                 240

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

                245                 250                 255

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

            260                 265                 270

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

        275                 280                 285

Leu Ser Pro Gly Lys

    290

<210>124

<211>293

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>124

Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala

            20                  25                  30

Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr His Met Phe His Asp Cys Lys Trp

        35                  40                  45

Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys His Gly Leu Gly Gly Gly Gly

    50                  55                  60

Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

65                  70                  75                  80

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

                85                  90                  95

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

            100                 105                 110

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

        115                 120                 125

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

    130                 135                 140

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

145                 150                 155                 160

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

                165                 170                 175

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

            180                 185                 190

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

        195                 200                 205

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

    210                 215                 220

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

225                 230                 235                 240

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

                245                 250                 255

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

            260                 265                 270

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

        275                 280                 285

Leu Ser Pro Gly Lys

    290

<210>125

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>共有序列

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2和)..(3)

<223>(Pos 1，2，3)的X是缺失的或是氨基酸残基(当X12、X13和X14中的一个是C时，X1、X2 和X3中的一个是C)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(7)..(7)

<223>(Pos 7)的X是氨基酸残基(优选L)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(9)..(9)

<223>(Pos 9)的X是T或I(优选T)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(12)..(12)

<223>(Pos 12)的X是C，中性疏水残基，或碱性残基(优选W，C，或R)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(13)..(13)

<223>(Pos 13)的X是C，中性疏水残基或是缺失的(优选V)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>(Pos 14)的X是任意氨基酸残基或是缺失的.

<400>125

Xaa Xaa Xaa Lys Trp Asp Xaa Leu Xaa Lys Gln Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>126

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>126

Tyr Lys Gly Arg Gln Met Trp Asp Ile Leu Thr Arg Ser Trp Val Val

1               5                   10                  15

Ser Leu

<210>127

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>127

Gln Asp Val Gly Leu Trp Trp Asp Ile Leu Thr Arg Ala Trp Met Pro

1               5                   10                  15

Asn Ile

<210>128

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>128

Gln Asn Ala Gln Arg Val Trp Asp Leu Leu Ile Arg Thr Trp Val Tyr

1               5                   10                  15

Pro Gln

<210>129

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>129

Gly Trp Asn Glu Ala Trp Trp Asp Glu Leu Thr Lys Ile Trp Val Leu

1               5                   10                  15

Glu Gln

<210>130

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>130

Arg Ile Thr Cys Asp Thr Trp Asp Ser Leu Ile Lys Lys Cys Val Pro

1               5                   10                  15

Gln Ser

<210>131

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>131

Gly Ala Ile Met Gln Phe Trp Asp Ser Leu Thr Lys Thr Trp Leu Arg

1               5                   10                  15

Gln Ser

<210>132

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>132

Trp Leu His Ser Gly Trp Trp Asp Pro Leu Thr Lys His Trp Leu Gln

1               5                   10                  15

Lys Val

<210>133

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>133

Ser Glu Trp Phe Phe Trp Phe Asp Pro Leu Thr Arg Ala Gln Leu Lys

1               5                   10                  15

Phe Arg

<210>134

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>134

Gly Val Trp Phe Trp Trp Phe Asp Pro Leu Thr Lys Gln Trp Thr Gln

1               5                   10                  15

Ala Gly

<210>135

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>135

Met Gln Cys Lys Gly Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Lys Trp Cys Val Thr

1               5                   10                  15

Asn Gly

<210>136

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>136

Leu Trp Ser Lys Glu Val Trp Asp Ile Leu Thr Lys Ser Trp Val Ser

1               5                   10                  15

Gln Ala

<210>137

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>137

Lys Ala Ala Gly Trp Trp Phe Asp Trp Leu Thr Lys Val Trp Val Pro

1               5                   10                  15

Ala Pro

<210>138

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>138

Ala Tyr Gln Thr Trp Phe Trp Asp Ser Leu Thr Arg Leu Trp Leu Ser

1               5                   10                  15

Thr Thr

<210>139

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>139

Ser Gly Gln His Phe Trp Trp Asp Leu Leu Thr Arg Ser Trp Thr Pro

1               5                   10                  15

Ser Thr

<210>140

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>140

Leu Gly Val Gly Gln Lys Trp Asp Pro Leu Thr Lys Gln Trp Val Ser

1               5                   10                  15

Arg Gly

<210>141

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>141

Val Gly Lys Met Cys Gln Trp Asp Pro Leu Ile Lys Arg Thr Val Cys

1               5                   10                  15

Val Gly

<210>142

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>142

Cys Arg Gln Gly Ala Lys Phe Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Leu

1               5                   10                  15

Gly Arg

<210>143

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>143

Gly Gln Ala Ile Arg His Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Trp Val Asp

1               5                   10                  15

Ser Gln

<210>144

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>144

Arg Gly Pro Cys Gly Ser Trp Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Leu Asp

1               5                   10                  15

Ser Gln

<210>145

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>145

Trp Gln Trp Lys Gln Gln Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Met Val Trp

1               5                   10                  15

Val Gly

<210>146

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>146

Pro Ile Thr Ile Cys Arg Lys Asp Leu Leu Thr Lys Gln Val Val Cys

1               5                   10                  15

Leu Asp

<210>147

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>147

Lys Thr Cys Asn Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Gln

1               5                   10                  15

Gln Ala

<210>148

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>148

Lys Cys Leu Lys Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Val Thr

1               5                   10                  15

Glu Val

<210>149

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>149

Arg Cys Trp Asn Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Ile His

1               5                   10                  15

Pro Trp

<210>150

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>150

Asn Arg Asp Met Arg Lys Trp Asp Pro Leu Ile Lys Gln Trp Ile Val

1               5                   10                  15

Arg Pro

<210>151

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>151

Gln Ala Ala Ala Ala Thr Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Leu Val

1               5                   10                  15

Pro Pro

<210>152

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>152

Pro Glu Gly Gly Pro Lys Trp Asp Pro Leu Thr Lys Gln Phe Leu Pro

1               5                   10                  15

Pro Val

<210>153

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>153

Gln Thr Pro Gln Lys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Phe Thr

1               5                   10                  15

Arg Asn

<210>154

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>154

Ile Gly Ser Pro Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Met Ile Cys

1               5                   10                  15

Gln Thr

<210>155

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>155

Cys Thr Ala Ala Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Ile Gln

1               5                   10                  15

Glu Lys

<210>156

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>156

Val Ser Gln Cys Met Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Gln

1               5                   10                  15

Gly Trp

<210>157

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>157

Val Trp Gly Thr Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Tyr Leu Pro

1               5                   10                  15

Pro Gln

<210>158

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>158

Gly Trp Trp Glu Met Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Tyr Arg

1               5                   10                  15

Pro Gln

<210>159

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>159

Thr Ala Gln Val Ser Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Leu Pro

1               5                   10                  15

Leu Ala

<210>160

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>160

Gln Leu Trp Gly Thr Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Tyr Ile Gln

1                5                  10                  15

Ile Met

<210>161

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>161

Trp Ala Thr Ser Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Gln

1               5                   10                  15

Asn Met

<210>162

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>162

Gln Arg Gln Cys Ala Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Val Leu

1               5                   10                  15

Phe Tyr

<210>163

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>163

Lys Thr Thr Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Arg Ile Cys

1               5                   10                  15

Gln Val

<210>164

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>164

Leu Leu Cys Gln Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Lys

1               5                   10                  15

Leu Arg

<210>165

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>165

Leu Met Trp Phe Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Leu Val Pro

1               5                   10                  15

Thr Phe

<210>166

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>166

Gln Thr Trp Ala Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile Gly

1               5                   10                  15

Pro Met

<210>167

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>167

Asn Lys Glu Leu Leu Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Arg Gly

1               5                   10                  15

Arg Ser

<210>168

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>168

Gly Gln Lys Asp Leu Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Tyr Val Arg

1               5                   10                  15

Gln Ser

<210>169

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>169

Pro Lys Pro Cys Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Gly

1               5                   10                  15

Ser Val

<210>170

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>170

Gly Gln Ile Gly Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile Gln

1               5                   10                  15

Thr Arg

<210>171

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>171

Val Trp Leu Asp Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile His

1               5                   10                  15

Pro Gln

<210>172

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>172

Gln Glu Trp Glu Tyr Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Gly Trp

1               5                   10                  15

Leu Arg

<210>173

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>173

His Trp Asp Ser Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Val

1               5                   10                  15

Gln Ala

<210>174

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>174

Thr Arg Pro Leu Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Leu Arg

1               5                   10                  15

Val Gly

<210>175

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>175

Ser Asp Gln Trp Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Phe Trp

1               5                   10                  15

Asp Val

<210>176

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>176

Gln Gln Thr Phe Met Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile Arg

1               5                   10                  15

Arg His

<210>177

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>177

Gln Gly Glu Cys Arg Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Phe Pro

1               5                   10                  15

Gly Gln

<210>178

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>178

Gly Gln Met Gly Trp Arg Trp Asp Pro Leu Ile Lys Met Cys Leu Gly

1               5                   10                  15

Pro Ser

<210>179

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>179

Gln Leu Asp Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Lys Val Cys

1               5                   10                  15

Ile Pro

<210>180

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>180

His Gly Tyr Trp Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Ser

1               5                   10                  15

Ser Glu

<210>181

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>181

His Gln Gly Gln Cys Gly Trp Asp Leu Leu Thr Arg Ile Tyr Leu Pro

1               5                   10                  15

Cys His

<210>182

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>182

Leu His Lys Ala Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Trp Pro

1               5                   10                  15

Met Gln

<210>183

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>183

Gly Pro Pro Gly Ser Val Trp Asp Leu Leu Thr Lys Ile Trp Ile Gln

1               5                   10                  15

Thr Gly

<210>184

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>184

Ile Thr Gln Asp Trp Arg Phe Asp Thr Leu Thr Arg Leu Trp Leu Pro

1               5                   10                  15

Leu Arg

<210>185

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>185

Gln Gly Gly Phe Ala Ala Trp Asp Val Leu Thr Lys Met Trp Ile Thr

1               5                   10                  15

Val Pro

<210>186

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>186

Gly His Gly Thr Pro Trp Trp Asp Ala Leu Thr Arg Ile Trp Ile Leu

1               5                   10                  15

Gly Val

<210>187

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>187

Val Trp Pro Trp Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Phe Val Phe

1               5                   10                  15

Gln Asp

<210>188

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>188

Trp Gln Gln Trp Ser Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Arg Gln Tyr Ile

1               5                   10                  15

Ser Ser Ser

<210>189

<211>882

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1 12-3串联二聚体

<400>189

atgcttccag gctgcaagtg ggatcttctt attaagcaat gggtatgcga tccacttgga   60

tccggttctg ctactggtgg ttccggctcc accgcaagct ctggttcagg cagtgcgact  120

catatgctgc cgggttgtaa atgggacctg ctgatcaaac agtgggtttg tgacccgctg  180

ggtggaggcg gtggggtcga caaaactcac acatgtccac cttgtccagc tccggaactc  240

ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc  300

cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag  360

ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag  420

cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg  480

aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa  540

accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc  600

cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc  660

agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg  720

cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag  780

agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac  840

cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat aa                     882

<210>190

<211>23

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头

<400>190

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr Gly Met

            20

<210>191

<211>23

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头

<400>191

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr Gly Ser

            20

<210>192

<211>46

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头

<400>192

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr His Met Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser

            20                  25                  30

Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr His Met

        35                  40                  45

<210>193

<211>23

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头

<220>

<221>misc_特征

<222>(22)..(23)

<223>(Pos 22)的X独立地是碱性或疏水残基，

     (Pos 23)的X独立地是疏水残基.

<400>193

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr Xaa Xaa

            20

<210>194

<211>46

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头

<220>

<221>misc_特征

<222>(22，23，45和)..(46)

<223>(Pos 22)和(Pos 45)的X各自独立地是碱性或疏水残基，(Pos 23)和(Pos 46)的X各自 独立地是疏水残基

<400>194

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr Xaa Xaa Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser

            20                  25                  30

Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr Xaa Xaa

        35                  40                  45

<210>195

<211>38

<212>PRT

<213>人

<400>195

Met Arg Arg Gly Pro Arg Ser Leu Arg Gly Arg Asp Ala Pro Val Pro

1               5                   10                  15

Thr Pro Cys Val Pro Thr Glu Cys Tyr Asp Leu Leu Val Arg Lys Cys

            20                  25                  30

Val Asp Cys Arg Leu Leu

        35

<210>196

<211>41

<212>PRT

<213>人

<400>196

Thr Ile Cys Asn His Gln Ser Gln Arg Thr Cys Ala Ala Phe Cys Arg

1               5                   10                  15

Ser Leu Ser Cys Arg Lys Glu Gln Gly Lys Phe Tyr Asp His Leu Leu

            20                  25                  30

Arg Asp Cys Ile Ser Cys Ala Ser Ile

        35                  40

<210>197

<211>42

<212>PRT

<213>人

<400>197

Phe Val Ser Pro Ser Gln Glu Ile Arg Gly Arg Phe Arg Arg Met Leu

1               5                   10                  15

Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu

            20                  25                  30

His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys

        35                  40

1

10

1

139