国际专利申请WO88/00050描述了一系列3′-氟核苷，包括化合物 2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(FLG)和3′-氟胸苷(FLT)的抗逆转录病毒 和抗-HBV的活性。作为抗-HIV剂，对后一化合物进行了临床鉴定， 尽管其抗病毒活性和药物动力学良好，但它显示了意想不到的毒性 (Flexner等，J Inf Dis 170(6)1394-403(1994))。前一化合物 FLG在体外具有良好的活性，但是本发明人已经检测到其生物可利用 率非常低，约4％，致使该化合物在活体内的用途至今仍限于腹膜内 或皮下用药的动物模型中。
美国专利4,963,662公开了一系列3′-氟核苷类及相应的三磷酸盐 化合物，并具体描述了FLT的5′-O-棕榈酰衍生物，但没有报导生物 可利用率的任何改进。国际专利申请WO 93 13778描述了在基质的6 位上改性的FLG衍生物，特别是用正丙氧基、环丁氧基、环丙基氨基、 哌啶基或吡咯烷基改性。国际专利申请93 14103描述了在鸟嘌呤6 位上的氧被氨基、醚、卤素或磺酸酯取代的FLG衍生物。
发明简述
本发明一方面提供了式I所示的化合物： 其中： R1选自羟基、氨基或羧基；任选在其上酯化/酰胺化的饱和或不饱和的 C4-C22的、任选取代的脂肪酸或醇，或脂族L-氨基酸； R2为脂族L-氨基酸的残基； L1为三官能连接基团； L2为不存在或双官能连接基团； 及其药学上可接受的盐。
本发明还提供了含有式I化合物或其盐的药物组合物及药学上可 接受的载体或稀释剂。本发明另一方面提供了抑制HBV和逆转录病毒 如HIV的方法，包括将式I化合物或盐与逆转录病毒或HBV接触，例 如将有效量的化合物或盐注入受逆转录病毒或HBV感染的人中。本发 明也提供了式I化合物或盐的用途，例如用于制备治疗逆转录病毒或 HBV感染的药物。
在治疗由逆转录病毒如HIV或HBV引起的病症中，式I化合物或 盐优选每天以50～1500毫克的量一次、两次或三次给药，优选每天二 到三次以100～700毫克的量给药。希望活性代谢物的血清浓度达到 0.01～100微克/毫升的，优选0.1～5微克/毫升。
当R1为脂肪酸残基，优选总共具有偶数个碳原子，有利的是癸酰 (C10)、月桂酰(C12)、肉豆蔻酰(C14)、棕榈酰(C16)、
硬脂酰(C18)、二十烷酰(C20)或山嵛酰(C22)。脂肪酸优选总 共具有10～22个碳原子，更优选16～20个碳原子，特别是18个碳 原子。脂肪酸可以为不饱和并具有一个至三个双键，特别是一个双键。 不饱和脂肪酸优选属于n-3或n-6系列。常用的不饱和R1基团包括衍 生自一元不饱和羧酸肉豆蔻脑酸、肉豆蔻反油酸(myristelaidic)、 棕榈油酸、棕榈反油酸(palmiteladic)、n6-十八碳烯酸、油酸、 反油酸、gandoic、芥酸、巴西烯酸或衍生自多元不饱和脂肪酸如亚 油酸、γ-亚麻酸、花生四烯酸和α-亚麻酸。但是，当这些化合物要具 有更强的稳定性和适用期时，作为脂肪酸的R1优选为饱和的。
作为脂肪醇的R1残基优选对应于上述脂肪酸。脂肪醇也可含有短 链醇，如甲醇、乙醇或丙醇的残基。
R1为饱和或不饱和脂肪酸或醇时，可任选被至多五个相同或不同 的取代基取代，取代基分别选自羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6 烷氧基C1-C6烷基、C1-C6烷基酰基、氨基、卤素、氰基、叠氮基、氧 代、巯基和硝基等。
适于R2和R1(如果存在R1的话)的脂族氨基酸包括L-丙氨酸、L- 亮氨酸、L-异亮氨酸，最优选L-缬氨酸。为便于合成，优选R2和R1 均为脂族氨基酸残基，优选为相同的残基。
第一个连接基团L1所表述的三官能是指连接基团具有至少三个官 能团，包括至少两个衍生自相应的羟基、氨基或羧基。其中氨基和羟 基官能团是用于与R1和R2的羧基官能团酯化/酰胺化；连接基团中的 羧基官能团是用于与R2中游离的α-氨基，或视情况而定与R1中游离 的α-氨基酰胺化；或R1为脂肪醇时，与R1发生酯化。当R1本身定义 为羟基、氨基或羧基时，其中羟基为三者中最适宜的，这时三官能连 接基上某个官能团就是该羟基、氨基或羧基。
三官能连接基还含有第三个官能团，该官能团与下面将详述的任 选的第二个连接基团L2相连或母体核苷的5′位上的羟基相连，如2′，3′- 双脱氧-3′-氟鸟苷。合适的第三个官能团取决于任选的连接基团L2(如 果存在的话)上相连官能团的性质，且可包括氨基、羟基、羰基、磺 酰基、磷酰基、膦酰基、氨基甲酰基等。如果没有L2，第一个连接基 团L1上的第三个官能团一般含有可与核苷类似物的5′-O基团酯化的羧 基。
与R1和R2相连的三官能连接基上的官能团优选为羟基官能团，并 且该连接是与R1脂肪酸(如果是的话)和R2的羧基官能团的酯连接。 进一步优选的实施方案是连接基上有一个游离的羟基作为R1，以及一 个与R2的羧基酯化的羟基官能团。另一个实施方案是连接基上含有一 个(任选被保护)的羧基R1，以及一个与R2的羧基酯化的羟基官能团。
有用的三官能L1基团，特别是能直接与核苷酯化的基团，包括式 IIa或IIb所示的连接基： 其中，A和A′定义为在连接基上的羟基与R1或R2的羧基之间不同的酯 连接，或为在连接基上的羧基与脂肪醇R1的羟基之间的酯连接，或为 在连接基上的氨基和在R1或R2的羧基之间的酰胺连接，或为在连接基 的羧基与R1或R2的氨基之间的酰胺连接，或当R1本身为游离的羟基、 氨基或羧基时，A和A′之一如上定义，另一为羟基、氨基或羧基， Rx为H或C1-C3烷基， T为键、-O-或-NH-； Alk为不存在、C1-C4烷基或C2-C4链烯基，任选如上所述是被取代的； 以及 m和n独立地为0、1或2。
在本发明该方面的一个优选的实施方案中，R1或R2基团分别与式 IIa最左边的不同的功能性羟基酯化(通过A和A′)，同时右边的羰 基部分任选通过第二个连接基团L2，与核苷的5′-O-基酯化。
L1基团也可含有式IIb所示的连接基：
其中Ar为饱和或不饱和，优选5或6个环原子的单碳环或杂环； A、A′、T、Alk、m和n如上定义。
式IIb中，Ar优选为芳基，如吡啶或特别为苯基，作为芳基部分 其中带R1和R2的臂，相对于连接基的剩余部分分别为对和邻、间和邻、 都为邻、或优选对和间、均为对或均为间位。
式IIa和IIb中，下列m、n和Alk的组合是有利的：
     m             n                Alk
     1             0               亚甲基
     1             0               1，2-亚乙基
     1             1               不存在
     1             1               亚甲基
     1             1               1，2-亚乙基
     1             1               1，2-亚丙基
     1             2               不存在
     1             2               亚甲基
     1             1               1，2-亚乙基
     1             1               1，2-亚丙基
由于R1和R2具有不同的结构，很明显许多L1基团，特别是式IIa 的基团，将定义为手性结构。因此本发明包括所有的对映体，如消旋 体或＞80％对映纯，优选＞95％对映纯的化合物制剂。
特别优选的三官能连接基含有式IIc所示的甘油衍生物 其中，A为氢、脂族L-氨基酸酯的酰基残基、或脂肪酸酯的酰基残基， A′为脂族氨基酸残基的酰基残基，D为饱和或不饱和C2-C6二元羧酸残 基。式IIc所示的三官能连接在活体内水解或分解以释放性能不变的 化合物如甘油、L-氨基酸、脂肪酸(如果是的话)和二元羧酸，每一 种通常均在身体安全地新陈代谢和/或排泄。A和A′优选均为脂族氨基 酸残基，最优选为相同的残基，特别是L-缬氨酸或L-异亮氨酸的残基。
当式IIc衍生物的二元羧酸部分直接与核苷的5′羟基官能团(或 等同物)酯化时，可解析地将甘油部分定义为三官能连接L1，二元羧 酸部分定义为二官能连接L2。
特别优选的二元羧酸残基包括从草酸、丙二酸、丙醇二酸、琥珀 酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、戊二酸、戊烯二酸、柠康酸、 衣康酸、亚乙基丙二酸、中康酸、己二酸、烯丙基丙二酸、亚丙基丙 二酸、氢化粘康酸、焦辛可酸和粘康酸等衍生的。二元羧酸残基可任 选被取代，例如被上述关于脂肪酸R1所列的取代基取代。羟基取代基 可进一步与另一个L-氨基酸或脂肪酸残基酯化。
一些上述二元羧酸本身可定义为三官能连接基。例如，羟基取代 的二元羧酸如酒石酸或马来酸提供了在本发明范围内的许多构型。以 酒石酸为例，羧基官能团可与核苷的5′-羟基官能团酯化(任选通过双 官能连接基L2)。羟基官能团可与R2和R1脂肪酸或氨基酸上不同的羧 基进行酯化，同时剩余的羧基可为游离或任选被保护，例如用常用的 药学上可接受的酯如甲酯或乙酯进行保护。可选的游离羧酸官能团的 保护是与R1脂肪醇形成的酯，该酯含有一个或两个与R2酯化的羟基官 能团： 上述酒石酸系列中有利的连接基通常如式IIe所述： 以及其中R1和R2互换的异构体，其中R1和R2如上所示，p、q和r分 别为0～5，优选0或1，且Ry是游离酸，R1酯或常用的药学上可接受 的羧基保护基，如甲酯、苄酯或特别是乙酯。 马来酸系列的有利的连接具有式IIf： 其中，Ry、p、q和R2如上定义，优选p和q为零。
本发明该方面优选的化合物包括： 5′-O-[3-甲氧基羰基-2-缬氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷， 5′-O-[3-苄氧基羰基-2-缬氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷， 5′-O-[3-甲氧基羰基-2-异亮氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟 苷， 5′-O-[3-苄氧基羰基-2-异亮氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-双脱氧-3 ′-氟鸟 苷， 5′-O-[4-甲氧基羰基-2，3-二缬氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟 苷， 5′-O-[4-苄氧基羰基-2，3-二缬氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟 苷， 5′-O-[4-甲氧基羰基-2，3-二异亮氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-双脱氧-3′-氟 鸟苷， 5′-O-[4-苄氧基羰基-2，3-二异亮氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-双脱氧-3′-氟 鸟苷，
特别优选衍生自L-马来酸和L-酒石酸的化合物；以及相应地能在 末端羧基官能团上构成常用的药学上可接受的酯的衍生物。
特别有利的化合物包括： 5′-O-[3-乙氧基羰基-2-缬氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷， 5′-O-[3-乙氧基羰基-2-异亮氨酰氧基-丙酰]-2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟 苷， 5′-O-[4-乙氧基羰基-2，3-二缬氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟 苷， 5′-O-[4-乙氧基羰基-2，3-二异亮氨酰氧基-丁酰]-2′，3′-双脱氧-3′-氟 鸟苷， 特别是衍生自L-马来酸和L-酒石酸的异构体。
在本发明另一相关方面中，R1和R2的一个可被删除。
本发明该方面典型的化合物包括式Ia： 其中Alk为任选取代的C1-C4烷基或C2-C4链烯基，R2为上述R1和R2定 义的脂族L-氨基酸的酯残基或脂肪酸的酯残基。本发明该方面中的连 接基可从α-羟基ω-羧酸如碳酸、乙醇酸、羟丙酸、羟丁酸、羟戊酸或 羟己酸方便地制备。
式Ia的典型化合物包括： 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5-O-[3-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-缬氨酰氧基)-戊酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[6-(L-缬氨酰氧基)-己酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5-O-[3-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-异亮氨酰氧基)-戊酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[6-(L-异亮氨酰氧基)-己酰]鸟苷， 及其药学上可接受的盐。
特别有利的式Ia化合物包括： 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[4-(L-缬氨酰氧基)-丁酰]鸟苷，和 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5-O-[4-(L-异亮氨酰氧基)-丁酰]鸟苷，及其药学 上可接受的盐。在活体内这些化合物中R2基团水解及脱除，遗留下活 性端基，该端基能环化并促进母体核苷的有效释放。
在本发明涉及的一方面中，脂肪酸残基R1本身能用作连接基，将R2 的脂族L-氨基酸残基相连在脂肪酸烷基链的氨基、羟基或羧基上进行 酯化/酰胺化，例如在β碳上。在该实施方案中，R1脂肪酸直接与核苷 的5′-羟基(或等同物)酯化，通常此核苷具有已经酯化/酰胺化的R2 基团。官能化的脂肪酸(羧基/羟基/氨基官能团被适当地保护)也可 首先酯化到核苷上，然后在与R2偶联前脱保护。根据该方面优选的实 施方案中的连接基具有式IId所示结构： 其中R2为脂族L-氨基酸残基，p为0，1或2-20(任选包括双键)，q 为0-5，优选为0。典型的化合物包括： 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-丁酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-己酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-辛酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-癸酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-十二烷酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-十四烷酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-十六烷酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-十八烷酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-二十烷酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-二十二烷酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-丁酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-己酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-辛酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-癸酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-十二烷酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-十四烷酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-十六烷酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-十八烷酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-二十烷酰]鸟苷， 2′，3′-双脱氧-3′-5-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-二十二烷酰]鸟苷， 以及相应的n-3和n-6一元不饱和类似物，如6或9-十八烯酰基衍生 物。
在式IId中，p和q优选为0，因此定义为乳酸衍生物，优选L- 乳酸衍生物，如 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]鸟苷；和 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]鸟苷及其药学上 可接受的盐，其分解产物，乳酸和氨基酸均为生理上可很好接受的。
在第二连接基团L2所表述的双官能是指具有两个官能团的连接 基，使得其在第一个连接基团L1和核苷的5′-O-基团之间作为间隔区 或桥。例如任选的基团L2可含有式IIIa所示的连接基： 其中R4和R4′为氢或C1-C4烷基。式IIIa中，R4优选氢、甲基、乙基 或异丙基，R4′为氢。由于多种核苷类，如FLG母体化合物在其抑制病 毒聚合酶之前，必须首先通过细胞酶磷酰化，式IIIa的连接基是有利 的。本发明化合物的初级或其后的水解可在活体内释放出一元磷酰化 核苷，其能迅速转化为二和三磷酸盐。
任选的双官能连接基团L2也可含有式IIIb所示的结构： 其中R4和R4′分别为H或C1-C4烷基。
双官能连接基的另一个基团具有式IIIc所示的结构：
如上所述，优选的双官能连接的基团含有α，ω-二羧酸C2-C6烷基 衍生物，如琥珀酸，它们是任选取代的(例如用上述为脂肪酸R1定义 的取代基)和/或为任选一元或多元不饱和，如n-3或n-6一元不饱 和的。此类优选的基团如上所述。
尽管上述公开的内容集中在与二元羧酸L2基团相连的甘油L1基 团，不难理解，大量的三官能连接基适用于和二羧酸L2基团一起，例 如上述没有最右端羰基的式IIa和IIb所示的结构。
本发明还包括含有常用的FLG前药的R1(R2)L1L2-衍生物的双重前 药，该常用的前药可在活体内释放FLG，如在FLG鸟苷基质的2和6 位上的前药衍生物。这种常用的FLG前药的例子包括式IV所示的化合 物： 其中R1、R2、L1和L2如上定义；和 R3为H、N3、NH2或OH或其药学上可接受的醚或酯；和 R3′为芳键或氢。
R3中有可能的药学上可接受的酯包括上述R1相关的脂肪酸，如硬 脂酰酯或油酰酯等或更短的酯，如乙酰酯或丁酰酯。其它有可能的酯 包括R2的氨基酸衍生物或磷酸酯，如一磷酸酯。酯也可包括相应的脂 肪酸或烷基芳基碳酸酯、氨基甲酸酯或磺酸酯。
R3中合适的药学上可接受的醚包括C1-C6烷基、环烷基、C6-C12烷 基芳基如苄基或甲基吡啶基，任何这些醚可被上述R1所述的取代基取 代。有利的醚包括在上述WO93 13778中提及的醚，如正丙氧基、环 丁氧基、环丙基氨基、哌啶子基或吡咯烷基等。
本发明主要参照一羟基化核苷FLG来描述，但是，很显然相应的 衍生物可从其它一羟基化核苷类似物制备，特别是该羟基对应于核苷 的5′羟基官能团的情形。因此本发明的另一方面提供了式Ic化合物： 其中，R1、R2、L1和L2如上定义，-O-nuc为带D-或L-核苷类似物的 -羟基的残基。根据本发明这方面典型的核苷类包括无环核苷类似物 如无环鸟苷，和环核苷类似物如ddI(2′，3′-双脱氧肌苷)、ddC(2′，3′- 双脱氧胞苷)、d4T(2′，3′-双脱氧胸苷)、FTC、拉米夫定，2′-脱氧 -3′-硫代胞苷(-)对映体(3TC)、1592U89(4-[2-氨基-6-(环丙 基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-环戊烯-1-甲醇)、AZT(叠氮胸苷)、DAPD (D-2，6-二氨基嘌呤二氧戊环)、F-ddA等，每一种均是核苷领域已 知的。大量的一羟基L-核苷类正处于发展中，本发明也发现了这些化 合物的用途。本发明这方面的化合物将具有母体化合物所显示的相应 用途，例如疱疹病毒感染对应于无环鸟苷衍生物，HIV对应于ddI、双 脱氧胸苷、ddC、拉米夫定、AZT&1592U89，HBV对应于拉米夫定、FTC 等。
有利的式Ic子群含有式Ic′所示的一羟基核苷类的衍生物： 其中A、A′、Alk和O-nuc如上定义。上述式Ic′描述了A和A′在甘油 部分的1和3位上，且L2在甘油的2位的化合物。可能的异构体为A 和A′分别在甘油1和2位上或2和3位上，L2分别为3或2位上。
本发明这方面典型的化合物包括： 4′-O-[3-((2，3-二-L-缬氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]无环鸟苷 (acyclovir)， 4′-O-[3-((2-羟基-3-L-缬氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]无环鸟苷， 4′-O-[3-((2，3-二-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]无环鸟苷， 4′-O-[3-((2-羟基-3-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]无环鸟苷， 4′-O-[3-((1，3-二-L-缬氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]无环鸟苷， 4′-O-[3-((1-羟基-3-L-缬氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]无环鸟苷， 4′-O-[3-((1，3-二-L-异亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]无环鸟苷， 4′-O-[3-((1-羟基-3-L-异亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]无环鸟苷， 5′-O-[3-((2，3-二-L-缬氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定， 5′-O-[3-((2-羟基-3-L-缬氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定， 5′-O-[3-((2，3-二-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定， 5′-O-[3-((2-羟基-3-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定， 5′-O-[3-((1，3-二-L-缬氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定， 5′-O-[3-((1-羟基-3-L-缬氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定， 5′-O-[3-((1，3-二-L-异亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定， 5′-O-[3-((1-羟基-3-L-异亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]拉米夫定， 5′-O-[3-((2，3-二-L-缬氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]DAPD， 5′-O-[3-((2-羟基-3-L-缬氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]DAPD， 5′-O-[3-((2，3-二-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]DAPD， 5′-O-[3-((2-羟基-3-L-缬氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]DAPD， 5′-O-[3-((1，3-二-L-缬氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]DAPD， 5′-O-[3-((1羟基-3-L-缬氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]DAPD， 5′-O-[3-((1，3-二-L-异亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]DAPD， 5′-O-[3-((1-羟基-3-L-异亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]DAPD， 5′-O-[3-((2，3-二-L-缬氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-双脱氧肌 苷， 5′-O-[3-((2-羟基-3-L-缬氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-双脱氧 肌苷， 5′-O-[3-((2，3-二-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-双脱氧 肌苷， 5′-O-[3-((2-羟基-3-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-双脱 氧肌苷， 5′-O-[3-((1，3-二-L-缬氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-双脱氧肌 苷， 5′-O-[3-((1-羟基-3-L-缬氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-双脱氧 肌苷， 5′-O-[3-((1，3-二-L-异亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-双脱氧 肌苷， 5′-O-[3-((1-羟基-3-L-异亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]-2′，3′-双脱 氧肌苷， 5′-O-[3-((2，3-二-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[3-((2-羟基-3-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]双脱氧胸 苷， 5′-O-[3-((2，3-二-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[3-((2-羟基-3-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]双脱氧胸 苷， 5′-O-[3-((1，3-二-L-缬氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[3-((1-羟基-3-L-缬氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[3-((1，3-二-L-异亮氨酰氧基)-2-丙氧羰基)丙酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[3-((1-羟基-3-L-异亮氨酰氧基)-1-丙氧羰基)丙酰]双脱氧胸 苷， 4-[2-氨基-6-(环丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-环戊烯-1-甲醇相应的 衍生物及其药学上可接受的盐。
本发明这方面化合物的子集也可含有式Id所示的化合物： 其中R2和Alk如式Ia中所定义的，O-nuc如上定义。 式Id典型的化合物包括： 4′-O-[4-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]无环鸟苷， 4′-O-[5-(L-缬氨酰氧基)-戊酰]无环鸟苷， 4′-O-[6-(L-缬氨酰氧基)-己酰]无环鸟苷， 4′-O-[4-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]无环鸟苷， 4′-O-[5-(L-异亮氨酰氧基)-戊酰]无环鸟苷， 4′-O-[6-(L-异亮氨酰氧基)-己酰]无环鸟苷， 5′-O-[4-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]ddI， 5′-O-[5-(L-缬氨酰氧基)-戊酰]ddI， 5′-O-[6-(L-缬氨酰氧基)-己酰]ddI， 5′-O-[4-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]ddI， 5′-O-[5-(L-异亮氨酰氧基)-戊酰]ddI， 5′-O-[6-(L-异亮氨酰氧基)-己酰]ddI， 5′-O-[4-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[5-(L-缬氨酰氧基)-戊酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[6-(L-缬氨酰氧基)-己酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[4-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[5-(L-异亮氨酰氧基)-戊酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[6-(L-异亮氨酰氧基)-己酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[4-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]DAPD， 5′-O-[5-(L-缬氨酰氧基)-戊酰]DAPD， 5′-O-[6-(L-缬氨酰氧基)-己酰]DAPD， 5′-O-[4-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]DAPD， 5′-O-[5-(L-异亮氨酰氧基)-戊酰]DAPD， 5′-O-[6-(L-异亮氨酰氧基)-己酰]DAPD， 5′-O-[4-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]拉米夫定， 5′-O-[5-(L-缬氨酰氧基)-戊酰]拉米夫定， 5′-O-[6-(L-缬氨酰氧基)-己酰]拉米夫定， 5′-O-[4-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]拉米夫定， 5′-O-[5-(L-异亮氨酰氧基)-戊酰]拉米夫定， 5′-O-[6-(L-异亮氨酰氧基)-己酰]拉米夫定， 以及4-[2-氨基-6-(环丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-环戊烯-1-甲醇相 应的衍生物。 式Id特别优选的化合物包括： 4′-O-[4-(L-缬氨酰氧基)-丁酰]无环鸟核， 4′-O-[3-(L-异亮氨酰氧基)-丁酰]无环鸟核， 5′-O-[4-(L-缬氨酰氧基)-丁酰]ddI， 5′-O-[3-(L-异亮氨酰氧基)-丁酰]ddI， 5′-O)-[4-(L-缬氨酰氧基)-丁酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[3-(L-异亮氨酰氧基)-丁酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[4-(L-缬氨酰氧基)-丁酰]DAPD， 5′-O-[3-(L-异亮氨酰氧基)-丁酰]DAPD， 5′-O-[4-(L-缬氨酰氧基)-丁酰]拉米夫定， 5′-O-[3-(L-异亮氨酰氧基)-丁酰]拉米夫定， 以及4-[2-氨基-6-(环丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-环戊烯-1-甲醇相 应的衍生物，及其药学上可接受的盐。
这些化合物中R2基团在活体内水解并脱除后，遗留下的活性端基 可环化并促进母体核苷的有效释放。
同样本发明提供式If所示的化合物： 其中R1、R2、Ry、p、q、r和o-nuc如上定义。
本发明这方面有利的化合物包括： 5′-O-[3-乙氧羰基-2-缬氨酰氧基-丙酰]-ddI， 5′-O-[3-乙氧羰基-2-异亮氨酰氧基-丙酰]-ddI， 5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二缬氨酰氧基-丁酰]-ddI， 5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二异亮氨酰氧基-丁酰]-ddI， 4′-O-[3-乙氧羰基-2-缬氨酰氧基-丙酰]-无环鸟苷， 4′-O-[3-乙氧羰基-2-异亮氨酰氧基-丙酰]-无环鸟苷， 4′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二缬氨酰氧基-丁酰]-无环鸟苷， 4′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二异亮氨酰氧基-丁酰]-无环鸟苷， 5′-O-[3-乙氧羰基-2-缬氨酰氧基-丙酰]-DAPD， 5′-O-[3-乙氧羰基-2-异亮氨酰氧基-丙酰]-DAPD， 5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二缬氨酰氧基-丁酰]-DAPD， 5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二异亮氨酰氧基-丁酰]-DAPD， 5′-O-[3-乙氧羰基-2-缬氨酰氧基-丙酰]-双脱氧胸苷， 5′-O-[3-乙氧羰基-2-异亮氨酰氧基-丙酰]-双脱氧胸苷， 5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二缬氨酰氧基-丁酰]-双脱氧胸苷， 5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二异亮氨酰氧基-丁酰]-双脱氧胸苷， 5′-O-[3-乙氧羰基-2-缬氨酰氧基-丙酰]-拉米夫定， 5′-O-[3-乙氧羰基-2-异亮氨酰氧基-丙酰]-拉米夫定， 5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二缬氨酰氧基-丁酰]-拉米夫定， 5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二异亮氨酰氧基-丁酰]-拉米夫定， 以及4-[2-氨基-6-(环丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-环戊烯-1-甲醇相 应的苹果酸和酒石酸衍生物，及其药学上可接受的盐；在每种情况下， 衍生自L-酒石酸和L-苹果酸的异构体是优选的。
本发明提供了式Ig所示的化合物： 其中R2、p、q和O-nuc如上定义。
优选的式Ig化合物包括： 4′-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]无环鸟苷， 4′-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]无环鸟苷， 5′-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]ddI， 5′-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]ddI， 5′-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]双脱氧胸苷， 5′-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]拉米夫定， 5′-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]拉米夫定， 5′-O-[2-(L-缬氨酰氧基)-丙酰]DAPD， 5′-O-[2-(L-异亮氨酰氧基)-丙酰]DAPD， 以及4-[2-氨基-6-(环丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-环戊烯-1-甲醇相 应的衍生物，及其药学上可接受的盐。这些化合物分解产物，乳酸和 氨基酸，均为生理上可良好接受的。
本发明的化合物可形成盐，从而构成本发明的另一方面。合适的 式I化合物的药学上可接受的盐包括有机酸盐，特别是羧酸盐，包括 但不限于乙酸盐、三氟乙酸盐、乳酸盐、葡萄糖酸盐、柠檬酸盐、酒 石酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、泛酸盐、羟乙基磺酸盐、己二酸盐、 藻酸盐、门冬酸盐、苯甲酸盐、丁酸盐、二葡萄糖酸盐、环戊酸盐、 葡萄庚糖酸盐、磷酸甘油盐、草酸盐、庚酸盐、己酸盐、延胡索酸盐、 烟酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、 丙酸盐、酒石酸盐、乳糖酸盐、pivolate、樟脑酸盐、十一烷酸盐和 琥珀酸盐，有机磺酸盐如甲磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟乙基磺酸盐、樟 脑磺酸盐、2-萘磺酸盐、苯磺酸盐、对氯苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐； 以及无机酸盐如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、 半硫酸盐、硫氰酸盐、过硫酸盐、磷酸盐和磺酸盐。有时，式I化合 物可以水合物分离。
此处所用的术语“N保护基团”或“N保护”是指那些用来保护氨 基酸或肽的N-末端，或是在合成过程中，保护氨基不发生不希望的 反应的基团。常用的N保护基团公开在Greene，“有机合成中的保护 基”(John Wiley & Sons，纽约，1981)，在此引作参考。N保护 基团包括酰基如甲酰基、乙酰基、丙酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、 2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、邻苯二甲酰基、 邻硝基苯氧基乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-溴 苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基等；磺酰基如苯磺酰基、对甲苯磺酰基等， 形成氨基甲酸酯的基团如苄氧基羰基、对氯苯氧基羰基、对甲氧基苄 氧基羰基、对硝基苄氧基羰基、2-硝基苄氧基羰基、对溴苄氧基羰基、 3，4-二甲氧基苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、2-硝基-4，5-二甲 氧基苄氧基羰基、3，4，5-三甲氧基苄氧基羰基、1-(对联苯基)-1-甲 基乙氧基羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧基羰基、二苯甲基氧 基羰基、叔丁氧基羰基、二异丙基甲氧基羰基、异丙氧基羰基、乙氧 基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、苯氧 基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴基-9-甲氧基羰基、环戊氧基羰基、金 刚烷氧基羰基、环已氧基羰基、苯基硫羰基等；烷基如苄基、三苯基 甲基、苄氧基甲基等；以及甲硅烷基如三甲基甲硅烷基等。较好的N 保护基团包括甲酰基、乙酰基、烯丙基、F-moc、苯甲酰基、新戊酰基、 叔丁基乙酰基、苯磺酰基，苄基、叔丁氧基羰基(BOC)和苄氧基羰基 (Cbz)。
在Green上述文献中也广泛论述了羟基和/或羧基保护基，包括醚 如甲基醚，取代甲醚基如甲氧基甲醚、甲硫基甲醚、苄氧基甲醚、叔 丁氧基甲醚、2-甲氧基乙氧基甲醚等，硅醚如三甲基硅醚(TMS)、叔 丁基二甲基硅醚(TBDMS)、三苄基硅醚、三苯基硅醚、叔丁基二苯基 硅醚、三异丙基硅醚等，取代乙基醚如1-乙氧基甲乙醚、1-甲基-1- 甲氧基乙醚、叔丁基乙醚、烯丙基乙醚、苄乙醚、对甲氧基苯甲基乙 醚、二苯基甲乙醚、三苯基甲乙醚等，芳烷基如三苯甲基和pixyl(9- 羟基-9-苯基呫吨衍生物，特别是氯化物)。酯羟基保护基包括甲酸酯、 甲酸苄酯、氯乙酸酯、甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、新戊酸酯、金 刚烷羧酸酯、酮酸酯、苯甲酸酯等。碳酸酯羟基保护基包括甲基酯、 乙烯基酯、烯丙基酯、肉桂基酯、苄基酯等。
为了与逆转录病毒和HBV抑制剂的常规用法保持一致，同时服用 一至三种或更多的抗病毒素是有利的，如在HIV情况下服用AZT、ddI、 ddC、d4T、3TC、H2G、膦甲酸、ritonavir、indinavir、沙硅那韦、 奈韦拉平、delaviridine、Vertex VA478或Agouron AG1343等，或 在HBV情况下服用拉米夫定、干扰素、泛昔洛韦等。这些额外的抗病 毒素将以大致能反映它们各自的治疗价值的剂量给药。相对于式I化 合物或盐，摩尔比通常为100∶1～1∶100，特别是25∶1～1∶25较为有 利。对于治疗疱疹感染的抗病毒核苷类，同时使用其它抗病毒素并不 常见。
尽管活性剂可以单独给药，优选作为药物制剂中的组分。这种制 剂包括上述定义的活性剂以及一种或多种可接受的载体/赋形剂，以及 任选的其它治疗成分。载体必须与制剂中其它成分相容并对受体无害。
制剂包括那些适于直肠、鼻、局部(包括口和舌下)、鞘或肠胃 外(包括皮下、肌肉内、静脉内和表皮内)给药的制剂，但优选口服 制剂。制剂通常以单位剂量形式存在，如片剂和缓释胶囊，并可通过 药学领域任何已知的方法制备。
这些方法包括将上述定义的活性剂与载体结合，通常制备制剂的 方法是，首先均匀紧密地将活性剂与液态载体或细碎的固态载体或两 者结合，然后，如果需要的话，定型产物。本发明提供了制备药学组 合物的方法，包括将式I化合物或其药学可接受的盐与药学可接受的 载体或赋形剂结合或混合。如果制剂的制造涉及盐式活性组分与药物 赋形剂的密切混合，则常优选使用非碱性赋形剂，即酸性或中性赋形 剂。
本发明中的口服制剂可以离散的单元存在，如胶囊、扁囊剂或片 剂，每一种均含有预定量的活性剂；可以粉剂或颗粒剂存在；可以活 性剂在水或非水液体中的溶液或悬浮液形式存在；或以水包油乳液或 油包水乳液及丸剂等形式存在。
对于口服组合物(如片剂和胶囊)，合适的术语“载体”包括载 体如普通的赋形剂，如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、 黄蓍胶、聚乙烯吡咯烷酮(Povidone)、甲基纤维素、乙基纤维素、 羧甲基纤维素钠盐、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和淀粉；填料和载体， 如玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露糖醇、 磷酸二钙、氯化钠和藻酸；以及润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸钠和其它 硬脂酸金属盐，硬脂酸甘油酯、硬脂酸、聚硅氧烷流体、滑石、石蜡、 油和胶态硅石，调味剂如薄荷、冬青油、樱桃调味剂等也可采用。需 要的话，或加入一种使制剂易于辨认的着色剂。片剂也可通过本领域 已知方法包衣。
片剂可以通过压制或模塑法制备，任选带有一种或多种辅助组份。 压片可通过在合适的机器中，压制以任意流动形式(如粉末或粒状) 存在的活化剂来制备，任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、 表面活性剂或分散剂混合。塑片可通过在合适的机器中，将惰性液体 稀释剂润化的粉状混合物成型来制备。片剂可任选被包衣或标记，且 配成后能达到缓慢释放或受控释放活性剂。
其它适用口服的制剂包括：含有在调味基质中的活性剂的锭剂， 调味基质通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；含有在惰性基质中的活化 剂的软锭剂，惰性基质如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶，以及含有 在合适液体载体中的活性剂的漱口药。
本发明另一方面提供了一种制备式I或Ic化合物的方法，该方法 包括核苷的酰化，此处为分子式V所示的FLG，一般在5′羟基 其中，R1(R2)L1X代表活化酸，如式IIa或IIb所示的羧酸衍生物，其 中R1、R2和L1如上定义或其被保护的衍生物。另外，活化酸也可包括 式R1(R2)甘油-D-X的化合物，其中R1，R2和D如式IIc定义，或者在 制备Ia化合物的情况下，活化酸包括活化的Rz-O-Alk-C(＝O)X衍生物。 在后者中，连接基可通过下述方法依次构建：首先将适度保护的D或 ω-羟基羧酸酯化至核苷上，将末端羧基或羟基脱保护，然后酯化其上 适度保护的甘油或Rz部分。
酰化反应中所用的活化衍生物含有例如酰卤、酸酐、活化酸酯或 以偶联剂存在的酸，例如二环己基碳化二亚胺。典型的活化酸衍生物 包括酰卤，烷氧基羰基卤化物衍生的酐，如异丁氧基羰基氯化物等，N- 羟基琥珀酰胺衍生的酯，N-羟基酞酰亚胺衍生的酯，N-羟基-5-降冰 片烯-2，3-二酰亚胺衍生的酯，2，4，5-三氯苯酚衍生的酯等。活化酸 还可包括分子式为RX的化合物，其中X代表OR′部分，其中R如R2所 定义，R′为例如COCH3、COCH2CH3或COCF3，或者X为苯并三唑。
当本发明用于其它一元羟基化核苷类时，可应用相应的方法，即 活化衍生物相应地酯化至一元羟基核苷类的游离5′羟基上(或等同 物)，一元羟基核苷类如无环鸟苷、ddI、FTC、拉米夫定、1592U89、 DAPD、F-ddA等。
上述方法中所用的中间体本身定义了新的化合物，特别是那些式 IIc′所示的化合物： 其中A、A′和Alk如上定义(A和A′优选用常用的保护基保护)，X代 表游离酸或上述活化酸。
式IIc′的典型化合物包括： 丙二酸2，3-二-(L-缬氨酰氧基)-丙基酯 丙二酸2，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-丙基酯 丙二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-缬氨酰氧基)-丙基酯 丙二酸2，3-二-(N-Boc-L-缬氨酰氧基)-丙基酯 丙二酸2，3-二-(L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 丙二酸2，3-二-(N-CBZ-L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 丙二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 丙二酸2，3-二-(N-Boc-L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 丁二酸2，3-二-(L-缬氨酰氧基)-丙基酯 丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-丙基酯 丁二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-缬氨酰氧基)-丙基酯 丁二酸2，3-二-(N-Boc-L-缬氨酰氧基)-丙基酯 丁二酸2，3-二-(L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 丁二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 丁二酸2，3-二-(N-Boc-L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 戊二酸2，3-二-(L-缬氨酰氧基)-丙基酯 戊二酸2，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-丙基酯 戊二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-缬氨酰氧基)-丙基酯 戊二酸2，3-二-(N-Boc-L-缬氨酰氧基)-丙基酯 戊二酸2，3-二-(L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 戊二酸2，3-二-(N-CBZ-L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 戊二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 戊二酸2，3-二-(N-Boc-L-异亮氨酰氧基)-丙基酯 及其相应的酰卤，特别是酰氯、酸酐和上述各化合物的二酯，例如 丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-丙基酯，4-甲氧基苄酯 丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-丙基酯，1，1-二甲基乙酯，
中间体优选的基团还含有式IIa′基团： 其中Rx、Alk、m、n和T如上所述，A和A′代表与连接基上羟基酯化 的L′-脂族氨基酸(如果需要，保护N)的酰基残基，或者A和A′之一 为酰基残基，另一为游离羟基，X代表上述的游离酸或活化酸，A和A′ 优选为相同的氨基酸残基。
其它新的中间体包括式Ia所示化合物的游离或活化酸前体，如：
3-N-Boc-L-缬氨酰氧基丙酸、3-N-Fmoc-L-缬氨酰氧基丙酸、3- N-CBZ-L-缬氨酰氧基丙酸、3-N-Boc-L-异亮氨酰氧基丙酸、3-N- Fmoc-L-异亮氨酰氧基丙酸、3-N-CBZ-L-异亮氨酰氧基丙酸、4-N- Boc-L-缬氨酰氧基丁酸、3-N-Fmoc-L-缬氨酰氧基丁酸、4-N-CBZ-L- 缬氨酰氧基丁酸、4-N-Boc-L-异亮氨酰氧基丁酸、3-N-Fmoc-L-异亮 氨酰氧基丁酸、3-N-CBZ-L-异亮氨酰氧基丁酸等，以及活化衍生物， 如酰卤。
新的中间体还包括上述式IIe和IIf所示化合物的前体，特别是 那些从“天然”构型(如L-苹果酸和L-酒石酸)衍生的化合物，例 如： 3-乙氧基羰基-2-缬氨酰氧基-丙酸 3-乙氧基羰基-2-异亮氨酰氧基-丙酸 4-乙氧基羰基-2，3-二-缬氨酰氧基-丁酸 4-乙氧基羰基-2，3-二-异亮氨酰氧基-丁酸 3-苄氧基羰基-2-缬氨酰氧基-丙酸 3-苄氧基羰基-2-异亮氨酰氧基-丙酸 4-苄氧基羰基-2，3-二-缬氨酰氧基-丁酸 4-苄氧基羰基-2，3-二-异亮氨酰氧基-丁酸等； 和相应的活化衍生物，如酸酐。
新的中间体还包括对应于式IId所示结构的前体，如： 2-(L-缬氨酰氧基)丙酸、2-(N-Boc-L-缬氨酰氧基)丙酸、2-(N-Fmoc- L-缬氨酰氧基)丙酸、2-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)丙酸、2-(L-异亮氨酰 氧基)丙酸、2-(N-Boc-L-异亮氨酰氧基)丙酸、2-(N-Fmoc-L-异亮氨 酰氧基)丙酸、N-(CBZ-L-异亮氨酰氧基)丙酸、2-(L-缬氨酰氧基)丁 酸、2-(N-Boc-L-缬氨酰氧基)丁酸、2-(N-Fmoc-L-缬氨酰氧基)丁酸、 2-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)丁酸、2-(L-异亮氨酰氧基)丁酸、2-(N- Boc-L-异亮氨酰氧基)丁酸、2-(N-Fmoc-L-异亮氨酰氧基)丁酸、N- (CBZ-L-异亮氨酰氧基)丁酸等；及其活化衍生物，如酰卤。
3′氟核苷如式V化合物的制备方法已经由Herdiwijn等在《核苷 和核苷酸》8(1)，65-96(1989)详细论述，该文献在此引作参考。其 它一元羟基核苷如无环鸟苷、ddI(2′，3′-双脱氧肌苷)、ddC(2′，3′-双 脱氧胞苷)、d4T(2′3′-双脱氧胸苷)、FTC、拉米夫定(3TC)、1592U89 (4-[2-氨基-6-(环丙氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-环戊烯-1-甲醇)、 AZT(叠氮胸苷)、DAPD(D-2，6-二氨基嘌呤二氧戊环)、F-ddA等是已知 的，并在该文献中详细论述。
R1(R2)L1L2X基团的活性衍生物可以预先制备或通过用试剂如二环 己基碳化二亚胺(DDDC)或O-(1H-苯并三唑-1-基)N，N，N′，N′四甲基脲 四氟硼酸盐(TBTU)在原位生成。当使用酰卤，如酰氯时，叔胺催化 剂，如三乙胺、N，N′-二甲基苯胺、吡啶或二甲氨基吡啶可加到反应混 合物中，与释放出的氢卤酸结合。
反应优选在非反应性溶剂如N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二噁 烷、乙腈或卤代烃如二氯甲烷中进行，如果需要的话，上述提及的任 何一种叔胺催化剂均可作为溶剂，只需注意保持适当的过量。反应温 度一般在0～60℃内变化，但优选保持在5～50℃。1～60小时后，反 应通常基本上完成，然后用薄层色谱(TLC)和合适的溶剂体系跟踪反 应过程，通常当用TLC确定反应完成时，用有机溶剂萃取产物并用色 谱纯化和/或用合适的溶剂体系重结晶。
核苷基质上发生酰化反应所产生的副产物可用色谱法分离，但是 这种错位的酰化作用可通过控制反应条件而使之最小。例如通过控制 试剂浓度或加料速率，特别是酰化剂；通过降低温度或通过选择溶剂 可达到控制条件。用TLC跟踪反应以监测控制条件。用常用的保护基 保护基质上的6-氧基，特别是2-氨基，可以防止错位的酰化作用。
R3为氢时，式IV所示的化合物可按下述方法制备：用一种活化基 如卤素将式I所示相应的鸟嘌呤化合物在6位活化(其中R2氨基酸残 基中裸露的氨基官能团任选用常用的N保护基团保护)。得到的活化 6-嘌呤随后还原为嘌呤，例如用钯催化剂，然后脱去保护得到所需的 式IV或式V化合物。
R3为R1或其它的酯的化合物可通过相应的式I或式IV羟基化合 物的酯化(类似于上述的酯化反应)来制备，任选在R2和/或R3氨基 酸残基中裸露的氨基官能团被N保护之后。R3为醚时的化合物可通过 类似于上述WO9313778公开的方法制备，同样任选裸露氨基的N保护。 当R3为叠氮化物时，如WO9709052所述的方法制备。
式IId所示的中间体可使用适当活化的及N保护的R2衍生物，如 N-CBZ缬氨酰基或异亮氨酰基衍生物结合常用偶联剂如DMAP/DCC；或 者使用氨基酸酰氯，将羧基一保护的羟基链烷酸酰化，一般是2-羟基 -1-链烷酸来制备。然后除去羧基保护基，例如通过酸解。得到的中间 体按上述方法活化，或者游离酸和偶联剂一起在常用的酯化条件下酯 化核苷。
式Ia化合物通常可用前一段所述的方法制备，即羧基保护的α- 羟基、ω-羧酸如乙醇酸、乳酸、羟基丁酸等和合适的N保护的R2衍生 物酯化。也可用游离酸和偶联剂一起或活化的酸，如相应的酰卤。除 去羧基保护基，将得到的中间体用上述方法和核苷进行酯化。
含有式IIe或IIf结构的化合物可通过一般的羧基保护基团如苯 甲酰基，对不同的二元羧酸，如L-酒石酸或L-苹果酸，的末端羧基进 行羧基保护来制备。然后游离的羟基用普通的酯化技术来酯化，如在 DMF中DMAP & DCC，用适当的N保护的R2氨基酸，如N-Boc-L-缬氨 酰或N-Boc-L-异亮氨酰酯化。除去苯甲酰基羧基保护基，并用常规的 方法，如实施例中的方法，将得到的产物与一羟基核苷的5′-羟基官能 团酯化。最后，游离的羧基官能团与R1基团酯化，或更优选酯化为常 用的药学上可接受的酯-如乙酯。
含有磷酰化部分III的化合物可通过2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟嘌呤- 5-一磷酸盐与式VIa化合物反应制备， 其中Ha为卤素，如氯、碘或溴，条件类似于那些在US 4 337 201、US5 227 506、WO 94/13682 & WO94/13324，Starret等在J Med Chem 37 1857-1864(1994)和Iyer等在Tetrahedron Lett 30 7141-7144(1989) 所描述的条件，这些文献在此引作参考。一磷酸盐可通过常用的FLG 的磷酸化作用制备，例如，在Herdwyn等上述文献所述的。相应的技 术将用于其它一元羟基核苷的一磷酸盐。
另一种得到磷酸酯的酯化反应也可分两个步骤进行，包括第一步 在FLG-一磷酸酯与式VII化合物之间的反应 其中R4和R4′如上定义，PG为如上所述的常规羧基保护基，然后脱保 护并与第三个，最右端官能团为羟基的连接基L1酯化。这种连接基团 的两个例子如下线路图1(每系列中倒数第二个化合物)所述。在该 实施方案中，式Va最左边的羰基与式IIa连接的连接基的羰基相同。
含有任选连接基L2的化合物也可通过两步法制备。特别是式 ClC(＝O)OC(R4)(R4′)Cl的化合物可与FLG的5′羟基(任选在基质上用 常用保护基保护)发生反应，这在头孢菌素领域是已知的。得到的 FLG-5′-O-C(＝O)OC(R4)(R4′)盐酸盐随后与R1以及带三官能团连接基的 R2进行反应，其中第三个官能团含有羧基官能团，如钾盐。
应当理解，式IIa的三官能L1基团，其中n和m为1，Alk为不 存在时，可如下线路图1所示，参见硬脂酰/L-缬氨酰基的组合，径区 域选择性酯化反应从甘油制备。简而言之，R1和R2选择性与甘油的1 和3位酯化，然后2位转化为合适的-T-C(＝O)-基团，该基团随后与 氟核苷的5′位酯化，或与L2(未标出)的协同基团酯化。甘油衍生物 的2位上的羟基也可以与在其左手端含协同羰基官能团的L2基团进行 酯化。
式IIa的L1基团，其中m为1，n为0，Alk为亚甲基时，也可以 通过区域选择性地将R1和R2酯化至甘油的1和2位上而制备，如下线 路图1所示，然后3位的羟基转化为合适的-T-C(＝O)-基团。线路图1 中最右端的一系列的反应显示了R1与甘油的1位酯化以及R2与2位酯 化的情况。其中R1与2位酯化，R2与1位酯化的相应排列可通过下述 方法得到：首先用CBz-L-缬氨酸/DCC/DMAP/DMF处理甘油，然后在脂 肪酸R1与甘油的2位酯化前，用pixyl氯化物保护3位，最后脱保护， 如果需要的话，转化3位。
尽管线路1已经通过参考R1为硬脂酰，R2为L-缬氨酰基的组合而 进行阐明，可认为这种基本的框图也可适用于其它氨基酸，其中可使 用其它脂肪酸；或采用常规保护基团，也适用于R2为氨基酸衍生物， R1为羟基的组合。当T含有一个-NH-基团时，连接基可通过类似的区 域选择性酯化反应进行制备，然后将游离的羟基转化为氨基，再还原 为叠氮化物，最后与光气反应以生成相应的氨基甲酰氯。
改变线路图I可制备式IIc所示的连接基。在这种改动中，上述 光气反应步骤用与活化二元羧酸如琥珀酸酐进行的反应来代替。这样 得到甘油三酯(含(任选保护的)R1酯，保护的R2酯和二元羧酸的酯)， 然后将二元羧酸上的游离羧基活化并按常用方式酯化到核苷上。式IIc 所示的连接基也可在核苷原位生成，在这种改动中，二元羧酸酯化到 被适当保护的甘油衍生物上。这种琥珀酸单酯随后按常用的方式酯化 到核苷的5′-羟基官能团上。最终甘油部分中一个或二个保护基被L- 氨基酸酯代替。另外，如果存在的话，剩余的保护基被脂肪酸酯所代 替，或被除去而余下游离羟基。线路图IA所示说明了一个实施例，其 中核苷是环鸟苷(虚影表示FLG)，二元羧酸为琥珀酸，R1和R2都为 CBZ-保护的缬氨酰基，当然它也可应用到式Ic的其它变化。在每一种 情况下，偶联条件是指常规酯化条件，如偶联剂DMAP、DCC等或把相 关的羧基官能团转化为活性衍生物如酰氯，或者活化的琥珀酸部分中 含有酸酐。
在线路图IA的一种改动，是将琥珀酸酐直接与核苷反应，从而避 免了第一步保护和脱保护过程。另一种方法是用N保护的氨基酸部分 来区域选择性地酯化甘油部分，一般同时将偶联到核苷的羟基予以保 护，然后将该羟基脱保护并和核苷偶联。
m和n为1，Alk为亚烷基或亚烯基，T为单键时，连接基可如上 线路图II所示的方法制备。式IIa的三官能连接基团L1中的m、n、Alk 和各种官能团的其它组合方式可用相应的原料，通过类似于上述的方 法制备。原料如1，2，4-三羟基丁烷(CA登记号3968-00-6)、3，4-二 羟基丁酸(1518-61-2&22329-74-4)、(S)-3，4-二羟基丁酸 (51267-44-8)、(R)-3，4-二羟基丁酸(158800-76-1)、1，2，5-戊 三醇(51064-73-4&14697-46-2)、(S)-1，2，5-戊三醇(13942-73-9)、 (R)-1，2，5-戊三醇(171335-70-9)、4，5-二羟基戊酸(66679-29- 6&129725-14-0)、1，3，5-戊三醇(4328-94-3)和3-(2-羟乙基)-1，5- 戊二醇(53378-75-9)。每一种原料的制备方法参照各自的登记号。 Ohsawa等在Chem.Pharm.Bull.41(11)1906-1909(1993)中和Terao 等在Chem.Pharm.Bull.39(3)823-825(1991)中描述了用脂肪酶P控 制三官能连接基的立体化学。
R2的氨基酸衍生物和R1(如果存在的话)也可以通过2-氧杂-4- 氮杂-环烷-1，3-二酮法酯化到连接基上，该方法在国际专利申请WO 94/29311中描述，该文献在此引作参考。
通过常用的肽化学，将R1和/或R2的羧基官能团连接到连接基衍 生的氨基上，一般同时用常用的N保护基保护α-氨基。在连接基的羧 基和R2的α-氨基之间，通过常用的肽化学形成酰胺键，一般同时进行 α-羧基官能团的保护。脂肪醇R1酯化到连接基上的羧基官能团的类似 于上述R1为脂肪酸的的酯化方法，但是酯化是反方向的。
附图说明
现在举例说明本发明的各个方面，以下实施例及其附图仅作为参 考，其中：
图1所示为经过治疗和未经治疗的血清病毒-DNA浓度，感染DHBV 的鸭子作为时间函数，如生物实施例3所示；
图2所示为经过治疗的体重增值，感染DHBV的鸭子作为时间函数， 如生物实施例3所示。
实施例1
2-(硬脂酰氧基甲基)-2-(N-(芴基甲氧基羰基)-L-缬氨酰氧基甲 基)-丙酸
向2，2-二(羟甲基)丙酸(28.16克，210毫摩尔)的水(50毫升) 溶液中加入氢氧化钾(11.78克，210毫摩尔)。5分钟后，在真空中 蒸发溶液，并用无水DMF共蒸发残余物三次。然后将残余物溶解在DMF (500毫升)中，向该溶液中加入苯甲酰溴(3.57毫升，30毫升)。 搅拌30分钟后，通过Celite过滤反应混合物，倒入碳酸氢钠水溶液 中，并用二氯甲烷萃取。收集有机相，然后用碳酸氢钠的水溶液洗涤。 随后在真空中蒸发得到2，2-二(羟甲基)丙酸苄酯(4.37克)， 1H-NMR(CDCl3)：7.35(s，5H)，5.20(d，2H)，3.91-3.71(m，4H)， 1.10(s，3H)。
在40分钟时间，向2，2-二(羟甲基)丙酸苄酯(4.37克，19.5毫 摩尔)的吡啶(50毫升)溶液中滴加硬脂酰氯(4.13克，13.6毫摩 尔)的二氯甲烷溶液。然后反应保持16小时，并倒入碳酸氢钠水溶液 中，用二氯甲烷萃取。收集有机相并在真空中蒸发。通过硅胶柱色谱 分离产物2-(羟乙基)-2-(硬脂酰氧基甲基)丙酸苄酯(1.97克)， 1H-NMR(CDCl3)：7.34(s，5H)，5.17(d，2H)，4.28(dd，2H)，3.69(dd，2H)， 2.24(t，2H)，1.57(m，2H)，1.25(s，28H)，1.22(s，3H)，0.87(t，3H)。
将2-(羟乙基)-2-(硬脂酰氧基甲基)丙酸苄酯(1.86克，3.8毫 摩尔)溶解在吡啶(30毫升)中。向溶液中加入甲苯磺酸(73毫克， 0.39毫摩尔)、N-芴基甲氧基羰基-L-缬氨酸(3.94克，11.6毫摩尔) 和DCC(3.58克，17.4毫摩尔)。反应在4℃保持16小时，然后通 过Celite(硅藻土)过滤。将滤液倒入碳酸氢钠水溶液中，并用二氯 甲烷萃取。收集有机相并在真空中蒸发。通过硅胶柱色谱分离产物2- (N-芴基-甲氧基羰基)-L-缬氨酰氧基甲基)-2-(硬脂酰氧基甲基)丙酸 苄酯，产量2.38克， 1H-NMR(CDCl3)：7.78-7.25(m，13H)，5.29(m，1H)，5.15(d，2H)，4.38- 4.23(m，7H)，2.19(t，2H)，2.10(m，1H)，1.55(m，2H)，1.24(m，31H)，0.9 4-0.83(m，9H)。
向THF/甲醇(16毫升/8毫升)混合溶剂中的2-(N-芴基-甲氧基 羰基)-L-缬氨酰氧基甲基)-2-(硬脂酰氧基甲基)丙酸苄酯(1.86克， 3.8毫摩尔)溶液中加入甲酸铵(376毫克，6毫摩尔)、甲酸(1.87 毫升)和钯黑(40毫克)。反应在室温中保持16小时，然后通过Celite 过滤。蒸发后，通过硅胶柱色谱分离产物，产量1.05克。 实施例2 1-O-硬脂酰-2-O-(N-CBz-L-缬氨酰)甘油 a)制备1-O-硬脂酰甘油
向溶解在DMF(300毫升)中的甘油(30克，326毫摩尔)和吡啶 (25毫升)混合物中滴加溶解在DMF(100毫升)中的硬脂酰氯(10 克，33毫摩尔)。混合物在冰浴上冷却直至滴加完成。反应在N2气氛 下保持过夜。15小时后加入CH2Cl2(300毫升)和饱和的NaHCO3(水 溶液)。分相并用水(50毫升)洗涤有机相，Na2SO4干燥并在真空下 蒸发溶剂和吡啶，在二氧化硅柱上进行色谱分离(CH2Cl2-MeOH，20∶1) 粗产物并重结晶(CH2Cl2-乙醚)，产量约7克。 b)制备pixyl氯化物
将乙酰氯(150毫升，2.1摩尔)加入到磁力搅拌下的9-羟基-9- 苯基呫吨(20克，72毫摩尔)的苯悬浮液中。得到均匀的深红色溶液， 该溶液在20℃搅拌30分钟。在减压下除去挥发性物质。仔细加入乙 醇，中和过量的AcCl。残余物和甲苯(2×30毫升)及环己烷(2×30 毫升)共蒸发，得到结晶残余物，该残余物密闭保存。也可从Aldrich 买到Pixyl氯化物。 c)制备1-O-硬脂酰，3-O-pixyl甘油
混合从上述a)得到的产物(2.28克)和吡啶(25毫升)，并加 热直至溶解。在冰浴中冷却后加入从步骤b)中得到的pixyl氯化物 (1.92克)。搅拌下，氩气气氛下在冰浴中保持混合物半小时，然后 在室温下保持1.5小时。在真空下蒸发吡啶，残余物溶解在CH2Cl2(70 毫升)中并用0.5M柠檬酸洗涤以除去剩余吡啶。用Na2SO4干燥残余 物，蒸发并色谱分离(乙醚-己烷1∶3)，得到1.25克纯产物，TLC Rf 约0.2。 d)制备1-O-硬脂酰，2-O-(N-CBz-L-缬氨酰)，3-O-pixyl甘油
步骤c)的产物(237毫克，0.39毫摩尔)、CBz-L-缬氨酸(116 毫克，0.46毫摩尔)、DCC(96毫克，0.46毫摩尔)和DMAP(4.7毫 克，0.04毫摩尔)溶解在CH2Cl2(4毫升)中。在搅拌下，氮气气氛 中混合物保持过夜。18小时后用玻璃过滤器过滤混合物，通过硅胶柱 (乙醚-己烷1∶4)色谱分离得到产率为230毫克，TLC Rf为0.2。 e)制备1-O-硬脂酰-2-O(N-CBz-L-缬氨酰)甘油
用实施例3描述的方法，通过选择性脱保护除去步骤d)的产物中 的pixyl基团得到标题化合物， 1H-NMR(CDCl3)：δ7.35(m，5H)，5.3-4.9(m，4H)，4.35-4.25(m，3H)，3.8- 3.6(m，2H)，2.31-2.25(m，2H)，2.20-2.10(m，1H)，1.60(m，2H)，1.02- 0.86(m，9H)。 实施例3 1-O-(N-CBz-L-缬氨酰)-2-O-硬脂酰甘油 a)制备1-O-(N-CBz-L缬氨酰)甘油
在室温下，将CBz-L-缬氨酸(4.35克，17.3毫摩尔)、二环己 基碳化二亚胺(4.29克，20.8毫摩尔)和4-二甲基氨基吡啶(0.212 克)一起加入到五倍过量的甘油中(8毫升，86.9毫摩尔)。搅拌过 夜后，过滤悬浮液，在真空中从滤液中除去DMF。将残余物溶解在CH2Cl2中，连续用饱和NaHCO3、盐水和水洗涤，然后干燥。粗产物在硅胶上 以4/1EtOAc-己烷作为洗脱液进行色谱纯化，产量为2.465克，Rf (4/1EtOAc-己烷)0.17，(20/1 CH2Cl2-甲醇)0.12。 b)制备1-O-(N-CBz-L-缬氨酰)-3-O-pixyl甘油
在氮气下，将步骤a)的产物(0.672克，20.1毫摩尔)溶解在干 的吡啶(3.5毫升)中。加入9-氯-9-苯基呫吨(如上制备的pixyl 氯化物，0.65克，22.0毫摩尔，1.1当量)，混合物在室温下搅拌1.5 小时。加入MeOH(1.5毫升)，将混合物在10毫升Et2O和10毫升饱 和NaHCO3之间分配。水层用更多的乙醚萃取，合并有机层，干燥并用 甲苯浓缩数次，得到白色固体。粗产物在硅胶上以3/1己烷-EtOAc作 为洗脱液进行色谱纯化，得到0.681克。
pixyl基团也可通过Gaffney等，在Tetrahedron Lett 1997，38， 2539-2542描述的步骤用PxOH和乙酸载上。 c)制备1-O-(N-CBz-L-缬氨酰)-2-O-硬脂酰-3-O-pixyl甘油
在冰浴，氮气中，搅拌下向步骤b)的产物(0.658克，1.13毫摩 尔)的11毫升吡啶溶液中滴加在1.5毫升CH2Cl2中的硬脂酰氯(496 毫升，1.3当量)。15分钟后，混合物在室温下搅拌过夜。混合物用 20毫升Et2O稀释，并用10毫升饱和NaHCO3洗涤。用更多的Et2O萃 取水层，合并有机层，用盐水(20毫升)洗涤，Na2SO4干燥，并用甲 苯浓缩数次、粗产物(1.37克)在130克硅胶上以6/1己烷-EtOAc 进行色谱纯化。第一段取500毫升，随后各取100毫升，所需的物质 在2-5段中洗脱，产量0.748克。 d)制备1-O-(N-CBz-L-缬氨酰)-2-O-硬脂酰甘油
在室温下，向溶解在35毫升中的CH2Cl2的步骤c)的产物(0.748 克，872毫摩尔)的0.025M溶液中加入吡咯(16.5摩尔当量)和二 氯乙酸(5.5摩尔当量)。5分钟后TLC显示反应完成。混合物用300 毫升CH2Cl2稀释，并用30毫升饱和NaHCO3洗涤。水层用更多的CH2Cl2萃取。合并有机相，用盐水(30毫升)洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。粗 产物用硅胶以2/1己烷-EtOAc(含0.3％乙酸)作为洗脱液进行色谱 纯化，产量0.363克，Rf(2/1己烷-EtOAc)0.21， 1H NMR(CDCl3)δppm 0.86-0.99(m，9H)，1.25(s，28H)，1.61(m，2H)， 2.16(m，1H)，2.32(m，2H)，3.74(br s，2H)，4.28-4.44(m，3H)， 5.09(m，1H)，5.11(s，2H)，5.22(d，1H)，7.36(m，5H)。 实施例4 1-O-硬脂酰-3-O-(N-CBz-L-缬氨酰)甘油
实施例2部分a)的产物(2.86克，7.99毫摩尔)、DCC(0.9克， 4.36毫摩尔)、4-(N，N-二甲基)氨基吡啶(DMAP)(0.048克，0.39 毫摩尔)和N-CBz-L-缬氨酸(1克，3.98毫摩尔)溶解在CH2Cl2(60 毫升)和DMF(6毫升)中。反应在环境温度下放置18小时，然后过 滤，在减压下蒸发溶剂，残余物溶解在CH2Cl2(100毫升)中并过滤。 粗标题化合物用色谱[SiO2，乙醚/己烷(1∶2)]纯化，得到1.3克所需 产物。未反应的1-硬脂酰甘油可用CH2Cl2/MeOH(20∶1)洗脱回收， 1H-NMR(CDCl3)：δ5.25(d，1H)，5.11(s，2H)，4.30-4.05(m，6H)， 2.65(d，1H)，2.35(t，2H)，2.06(m，1H)，1.62(m，2H)，1.26(s，28H)， 1.00-0.84(m，9H)。 实施例5
向冰冷却的氯甲酸1-氯乙基酯(1.89克，13.2毫摩尔)的无水 CH2Cl2(5毫升)的溶液中加入在CH2Cl2(20毫升)中的实施例4化 合物，然后加入无水吡啶(1.2毫升，29.6毫摩尔)。在氩气气氛中 冷却下搅拌反应混合物，直至TLC(乙醚/己烷1∶2)表明原料耗尽。 1.5小时后，混合物用水(3×5毫升)、饱和NaHCO3(5毫升)洗涤并 干燥(Na2SO4)。用色谱[SiO2，乙醚/己烷(1∶2)]纯化，得到标题化合 物(4.0克)， 1H-NMR(CDCl3)：δ7.36-7.32(m，5H)，6.40(m，1H)，5.24(m，1H)， 5.11(s，2H)，4.30(m，6H)，2.32(m，2H)，2.15(m，1H)，1.82(m，3H)， 1.60(m，2H)，1.25(br s，28H)，0.97(m，3H)，0.86(m，6H)。 实施例6
向实施例5的化合物(3.4克，4.87毫摩尔)的无水乙腈(47毫 升)溶液中加入碘化钠(3.65克，24.3毫摩尔)。得到的溶液在氩 气气氛下回流直至NMR表明原料耗尽。4.5小时后，加入乙醚(50毫 升)并过滤混合物。蒸发除去溶剂，粗产物溶解在乙醚(50毫升)中。 乙醚溶液用水(2×10毫升)洗涤并干燥(Na2SO4)，在减压下蒸发。 用色谱[SiO2，乙醚/己烷(1∶2)]纯化，得到标题化合物(2.15克)， 1H-NMR(CDCl3)：δ7.37(m，5H)，6.75(m，1H)，5.22(m，1H)，5.15(s，1H)， 4.3(m，6H)，2.32(m，1H)，2.22(m，2H)，1.6(m，2H)，1.25(s，28H)， 0.95(m，9H)。 实施例7
在冰浴，氩气中，搅拌下冷却实施例3化合物(810毫克，1.37 毫摩尔)的2.2毫升无水二氯甲烷溶液。加入氯甲酸1-氯乙基酯(298 微升，2.74毫摩尔)，再滴加2.5毫升二氯甲烷中的吡啶(665微升， 8.22毫摩尔)。2.5小时后，混合物用25毫升二氯甲烷稀释，并连 续用10毫升水和10毫升盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥并用甲 苯浓缩数次得到黄色油。用闪蒸塔色谱在硅胶上以40/1二氯甲烷-二 乙醚纯化得到油状标题化合物(96毫克，定量收率)。 1H-NMR(CDCl3)：δppm 0.85-0.98(m，9H)，1.25(s，28H)，1.60(m，2H)， 1.83(d，3H，J＝5.8Hz)，2.17(m，1H)，2.31(t，2H)，4.19-4.48(m，5H)， 5.11(s，2H)，5.22(d，1H)，5.27(m，1H)，6.38-6.43(m，1H)， 7.36(m，5H)。 实施例8
在氮气下，实施例7的化合物(1.896克，2.71毫摩尔)和碘化 钠(1.80克，12.0毫摩尔)的乙腈溶液(27毫升)在80℃回流。4.5 小时后，反应混合物用100毫升1/1己烷-二乙醚稀释，并用25毫升 水洗涤。水相用更多溶剂(25毫升)萃取，合并有机相，连续用5％ 硫代硫酸钠水溶液(25毫升)和盐水(25毫升)洗涤，用无水硫酸钠 干燥，并在真空下浓缩。用闪蒸塔色谱在硅胶上以80/1二氯甲烷-甲 醇作为洗脱液纯化得到含有90％标题化合物和10％实施例7化合物的 油(1.45克)， 1H-NMR(CDCl3)：δppm 0.85-0.99(m，9H)，1.25(s，28H)，1.60(m，2H)， 2.17(m，1H)，2.23(d，3H，J＝6Hz)，2.31(t，2H)，4.16-4.49(m，5H)， 5.10(s，2H)，5.20-5.29(m，2H)，6.69-6.79(m，1H)，7.36(m，5H)。 实施例9 4-苄氧基-2-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-1-硬脂酰氧基丁烷 a)合成二乙基-2-(2-苄氧基乙基)丙二酸酯
向新制备的钠(0.95克，41.4毫摩尔)的50毫升乙醇溶液中加 入丙二酸二乙酯(6.4克，40毫摩尔)的10毫升乙醇溶液，混合物 搅拌15分钟。然后滴加入2-苄氧基-1-碘乙烷(11.5克，41.35毫摩 尔)溶液。混合物回流4小时，在真空中蒸发。加入100毫升的水， 混合物用50毫升的二乙醚萃取三次，有机相用硫酸钠干燥，并在真空 中蒸发，用硅胶柱色谱分离产物，产率：8.6克， 1H-NMR(CDCl3)：1.26(m，6H)2.26(m，2H)3.54(m，3H)4.16(m，4H) 4.57(s，2H)7.32(m，5H)。 b)合成4-苄氧基-2-羟甲基-丁醇-1。
在约15℃，向搅拌的氢化铝锂(3.0克，80毫摩尔)的100毫升 二乙醚的悬浮液中滴加二乙基-2-(2-苄氧基乙基)丙二酸酯(8.5克， 28.8毫摩尔)的20毫升二乙醚溶液。混合物回流2小时，冷却下滴 加约4毫升水，过滤混合物并用二噁烷洗涤。在减压下蒸发滤液，用 硅胶柱色谱分离产物，产量3.4克， 1H-NMR(CDCl3)：1.60(m，2H)1.82(m，1H)3.00(m，2H)3.56(t，2H) 3.69(m，4H)4.50(s，2H)7.32(m，5H)。 c)合成4-苄氧基-2-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-丁醇-1
向N-三苯甲基-L-缬氨酸(4.66克，13毫摩尔)和4-苄氧基-2- 羟甲基-丁醇-1(3.3克，15.6毫摩尔)的50毫升二氯甲烷溶液中加 入DCC(3.0克，14.5毫摩尔)和DMAP(0.18克，1.45毫摩尔)。 混合物搅拌三天，混合物冷却至5℃，过滤尿烷。溶液在减压下蒸发， 用硅胶柱色谱分离产物，产量2.5克， 1H-NMR(CDCl3)：1.00(m，6H)1.55(m，4H)1.72(m，1H)2.18(m，1H) 2.70(m，1H)3.27(m，2H)3.43(m，3H)4.50(s，2H)7.26(m，20H)。 d)合成4-苄氧基-2-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-1-硬脂酰氧基 丁烷
向4-苄氧基-2-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-丁醇-1(2.4 克，4.35毫摩尔)的50毫升二氯甲烷溶液中加入吡啶(1.72克，21.7 毫摩尔)。溶液冷却至10℃，在10～15℃之间滴加硬脂酰氯(2.64 克，8.7毫摩尔)的10毫升二氯甲烷溶液。在室温下混合物搅拌过夜。 加入100毫升5％碳酸氢钠溶液，混合物搅拌30分钟。分离有机相， 用二氯甲烷萃取水相两次。合并的有机相用硫酸钠干燥，并在真空中 浓缩。用硅胶柱色谱分离产物，产量3.0克， 1H-NMR(CDCl3)：0.98(m，9H)1.26(m，28H)1.54(m，2H)1.94(m，1H) 2.25(m，2H)3.23(m，2H)3.44(m，2H)3.58(m，1H)3.91(m，2H)4.10(m，1H) 4.47(s，2H)7.28(m，20H)。 实施例10 5-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-6-硬脂酰氧基己酸 a制备2-烯丙基1，3-丙二醇
在0℃将在无水乙醚(100毫升)中的烯丙基丙二酸二乙酯(20 毫升，101毫摩尔)滴加至搅拌的氢化铝锂(9.6克，253毫摩尔)溶 液中。反应加热至室温，并保持5小时。冷却至0℃，仔细滴加水(12 毫升)。搅拌30分钟后，通过Celite过滤混合物，然后用乙醇(2×500 毫升)洗涤，在真空下干燥溶液得到9.5克产物， 1H-NMR(CDCl3)：5.78(m，1H)，5.03(m，2H)，3.78(m，2H)，3.69(m，2H)， 2.06(t，2H)，1.87(m，1H)。 b)制备1-O-(N-三苯甲基-L-缬氨酰)-2-烯丙基-1，3-丙二醇
向N-三苯甲基-L-缬氨酸(5.5克，15.2毫摩尔)、2-烯丙基-1，3 丙二醇(4.4克，38毫摩尔)、N，N-二甲基氨基吡啶(183毫克，1.5 毫摩尔)的二氯甲烷(120毫升)溶液中加入DCC(3.5克，16.7毫 摩尔)。反应在回流下保持过夜。用Celite过滤后，有机相用碳酸氢 钠水溶液洗涤并干燥。硅胶柱色谱得到4.6克中间体1-O-(N-三苯甲 基-L-缬氨酰)-2-烯丙基-1，3-丙二醇。 c)制备1-O-(N-三苯甲基-L-缬氨酰)-2-烯丙基-3-硬脂酰-1，3-丙二醇
在0℃，向1-O-(N-三苯甲基-L-缬氨酰)-2-烯丙基-1，3-丙二醇 (1.83克，4毫摩尔)的二氯甲烷(40毫升)和吡啶(3.2毫升，40 毫摩尔)溶液中滴加在二氯甲烷中的硬脂酰氯(3.62克，12毫摩尔)。 溶液加热至室温并保持3小时，用碳酸氢钠水溶液洗涤并干燥，用硅 胶柱色谱分离产物1.9克， 1H-NMR(CDCl3)：7.30(m，15H)，5.70(m，1H)，4.99(m，2H)，3.93(m，2H)， 3.55(m，1H)，3.27(m，2H)，2.68(m，1H)，2.30(m，2H)，2.33(m，1H)，2.01 (m，2H)，1.85(m，1H)，1.62(m，2H)，1.3(m，28H)，0.98(dd，6H)，0.91(t， 3H)。 d)制备3-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁醛
将1-O-(N-三苯甲基-L-缬氨酰)-2-烯丙基-3-硬脂酰-1，3-丙二醇 (580毫克，0.8毫摩尔)溶解在二噁烷(5毫升)中。向溶液中加入 四氧化锇(20毫克，0.08毫摩尔)和吡啶(0.05毫升，0.64毫摩尔)。 将过碘酸钠的水(3.5毫升)溶液加入至反应混合物中。反应保持过 夜，然后冷却至0℃。加入亚硫酸酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取混 合物。干燥有机相并用硅胶柱色谱纯化，产率250毫克， 1H-NMR(CDCl3)：9，68(s，1H)，7.25(m，15H)，3.92(m，2H)，3.58(m，1H)， 2.32(m，2H)，2.68(m，1H)，2.34(m，7H)，1.58(m，2H)，1.53(m，28H)，0.9 6(dd，6H)，0.86(t，3H)。 f)制备3-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基己烯-2-酸 苄酯
向3-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁醛(15.8 克，21.8毫摩尔)的二氯甲烷溶液中加入(苄氧基羰基甲基)三苯基 溴化磷(10.7克，21.8毫摩尔)和三乙胺(2.21克，21.8毫摩尔)。 反应在室温下保持过夜并蒸发混合物。向残余物中加入二乙醚(200 毫升)，并在4℃保持两小时。然后过滤，蒸发滤液，产物用硅胶柱 色谱纯化，产量10克， 1H-NMR(CDCl3)：7.30(m，20H)，6.89(m，1H)，5.88(d，1H)，5.19(d，2H)， 3.95(m，2H)，3.57(m，1H)，3.29(2H)，2.68(m，1H)，2.23(m，5H)，1.93(m， 1H)，1.60(m，2H)，1.32(m，28H)，0.95(dd，6H)，0.89(t，3H)。 g)制备3-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基己酸酯
向3-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基己烯-2-酸 苄酯(70毫克，0.08毫摩尔)的甲醇(3毫升)和乙酸乙酯(1毫升) 溶液中加入碳酸氢钠(10毫克)和钯黑(20毫克)。反应在氢气，大 气压下保持2小时。过滤混合物并蒸发。将残余物溶解在二氯甲烷中 并连续用EDTA水溶液和冷的2％柠檬水溶液洗涤，蒸发有机相得到61 毫克产物， 1H-NMR(CDCl3)：7.30(m，15H)，3.93(m，2H)，3.57(m，1H)，3.25(m，2H)， 2.30(dt，4H)，2.20(m，1H)，1.70(m，1H)，1.62(m，4H)，1.30(m，28H)，0. 95(dd，6H)，0.87(t，3H)。 实施例11 3-(N-苄氧基羰基-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁酸 a)制备1-O-(N-苄氧基羰基-L-缬氨酰)-2-烯丙基-1，3-丙二醇
向2-烯丙基-1，3-丙二醇(4.6克，40毫摩尔)和N-苄氧基羰基 -L-缬氨酸(5.02克，20毫摩尔)的二氯甲烷溶液中加入二甲基氨基 吡啶(244毫克，2毫摩尔)和DCC(4.5克，22毫摩尔)。两小时后， 用Celite过滤混合物，蒸发，分离产物1-O-(N-苄氧基羰基-L-缬氨 酰)-2-烯丙基-1，3-丙二醇，产量5.01克。 1H-NMR(CDCl3)：7.36(m，5H)，5.78(m，1H)，5.26(d，1H)，5.11(s，2H)， 5.06(d，2H)，4.22(m，3H)，3.59(m，2H)，2.13(m，3H)，1.98(m，2H)，0.94 (dd，6H)。 b)制备1-O-(N-苄氧基羰基-L-缬氨酰)-2-烯丙基-3-O-硬脂酰-1，3-丙 二醇
在冰浴中，向1-O-(N-苄氧基羰基-L-缬氨酰)-2-烯丙基-1，3-丙 二醇(4.46克，12.7毫摩尔)的二氯甲烷(70毫升)和吡啶(6.1 毫升，76毫摩尔)溶液中加入硬脂酰氯(7.8克，26毫摩尔)。反应 混合物加热至室温并保持一小时。然后倒入碳酸氢钠水溶液中，干燥 有机相，用硅胶柱色谱纯化产物1-O-(N-苄氧基羰基-L-缬氨酰)-2-烯 丙基-3-O-硬脂酰-1，3-丙二醇6.7克， 1H-NMR(CDCl3)：7.34(m，5H)，5.77(m，1H)，5.30(d，1H)，5.11(s，2H)， 5.08(d，2H)，4.32(m，1H)，4.10(m，4H)，2.29(t，2H)，2.13(m，4H)，1.62 (m，3H)，1.25(m，28H)，0.90(m，9H)。 c)制备3-(N-苄氧基羰基-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁酸
将高锰酸钾(756毫克，4.8毫摩尔)溶解在水(7.5毫升)中。 该溶液在剧烈搅拌下保持10分钟。加入在苯(5毫升)中的1-O-(N- 苄氧基羰基-L-缬氨酰)-2-烯丙基-3-O-硬脂酰-1，3-丙二醇(1克，1.6 毫摩尔)和溴化四丁铵(77毫克，0.24毫摩尔)溶液。浆液搅拌1.5 小时，加入二氯甲烷。将酸式亚硫酸钠水溶液加入到浆液中直至混合 物褪色。有机相用乙酸酸化，并用水洗涤。蒸发后，用硅胶柱色谱分 离产物3-(N-苄氧基羰基-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁酸 (390毫克)， 1H-NMR(CDCl3)：7.33(m，5H)，5.38(d，1H)，5.11(s，2H)，4.14(m，5H)， 2.60(m，1H)，2.45(m，2H)，2.29(t，2H)，2.18(m，1H)，1.58(m，2H)，1.25 (m，28H)，0.90(m，9H)。 实施例12 2′3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-缬氨酰氧基甲基)-6-硬脂酰氧基己酰 基]鸟苷 a)制备2′3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[5-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)- 6-硬脂酰氧基己酰基]鸟苷
向5-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-6-硬脂酰氧基己酸(462 毫克，0.6毫摩尔)和2′3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(340毫克，1.25毫摩 尔)的DMF(3毫升)溶液中加入二甲基氨基吡啶(7毫克，0.06毫 摩尔)和DCC(136毫克，0.66毫摩尔)。反应在室温下保持过夜， 然后在40℃保持2小时。用Celite过滤反应混合物，并倒入二氯甲 烷中，用碳酸氢钠水溶液洗涤。通过硅胶柱色谱分离产物2′3′-双脱氧 -3′-氟-5′-O-[5-(N-三苯甲基-L-缬氨酰氧基甲基)-6-硬脂酰氧基己酰 基]鸟苷(93毫克)， 1H-NMR(DMSO d-6)：7.88(s，1H)，7.29(m，15H)，6.52(s，2H)， 6.17(dd，1H)，5.45(m，1H)，4.35(m，1H)，4.20(m，2H)，3.82(m，2H)，3.5 02.60(m，5H)，2.30(m，4H)，2.10(m，1H)，1.70(m，1H)，1.50(m，4H)，1.2 2(m，28H)，0.85(m，9H)。 b)制备2′3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-缬氨酰氧基甲基)-6-硬脂酰氧 基己酰基]鸟苷
在室温下，通过用80％乙酸(5毫升)处理30分钟，以脱去步骤 b)的化合物(90毫克，0.088毫摩尔)的N保护。蒸发，产物用硅胶 柱色谱纯化，得到标题化合物72毫克， 1H-NMR(DMSO d-6)：7.88(s，1H)，6.54(s，2H)，6.18(dd，1H)， 5.48(dd，1H)，4.27(dt，1H)，4.19(m，2H)，3.98(m，4H)，3.17- 2.55(m，4H)，2.29(m，4H)，1.95(m，1H)，1.75(m，1H)，1.50(m，4H)，1.21 (m，28H)，0.84(m，9H)。 实施例13 2′3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基丁酰 基]鸟苷 a)制备2′3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-苄氧基羰基-L-缬氨酰氧基)-4- 硬脂酰氧基丁酰]鸟苷
向2′3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(113毫克，0.42毫摩尔)和3-(N-苄 氧基羰基-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁酸(140毫克，0.21 毫摩尔)的DMF(2毫升)溶液中加入二甲基氨基吡啶(3毫克，0.02 毫摩尔)和DCC(52毫克，0.25毫摩尔)。两天后，加入二氯甲烷(10 毫升)和数滴乙酸，用Celite过滤有机相。滤液用碳酸氢钠水溶液洗 涤，用硅胶柱色谱分离产物2′3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-苄氧基羰 基-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁酰]鸟苷，产量51毫克， 1H-NMR(CDCl3)：7.79(d，1H)，7.26(m，5H)，6.38(s，2H)，6.23(t，1H)， 5.44(m，2H)，5.08(s，2H)，4.50-4.10(m，8H)，3.15-2.40(m，5H)， 2.30(t，2H)，2.14(m，1H)，1.58(m，2H)，1.24(m，28H)，0.87(m，9H)。 b)制备2′3′-双脱氧-3′-氟-5 ′-O-[3-(L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧 基丁酰]鸟苷
步骤a)的产物(76毫克，0.084毫摩尔)溶解在甲醇(3毫升)、 乙酸乙酯(0.5毫升)和乙酸(0.01毫升)的混合溶剂中。向该溶液 中加入钯黑(10毫克)，2小时后，再加入10毫克钯黑。3小时后， 过滤混合物并蒸发，将残余物溶解在二氯甲烷中并用EDTA水溶液洗 涤。干燥有机相并和甲苯共蒸发得到标题化合物的乙酸盐，产量65毫 克， 1H-NMR(DMSO d-6+D2O)：7.87(s，1H)5.16(dd，1H)，5.37(dd，1H)， 4.24(m，3H)，4.01(m，4H)，3.10-2.60(m，3H)，2.40(m，2H)， 2.24(t，2H)，1.70(m，1H)，1.48(m，2H)，1.25(m，28H)，0.82(m，9H)。 实施例14 氯甲酸3-[1-(N-CBz-L-缬氨酰)-2-硬脂酰]丙基酯
1-(N-CBz-L-缬氨酰)-2-硬脂酰甘油(300毫克，0.5毫摩尔)溶 解在20％光气的甲苯(15毫升)中。18小时后，蒸发溶液，残余物 和甲苯共蒸发数次，定量得到了标题产物。该产物和目标核苷用常规 方法生成碳酸酯，例如在0℃，10：1 DMF/吡啶溶液中反应3-24小时， 注入至NaHCO3溶液中，用二氯甲烷萃取。氨基酸脱保护，例如用钯黑 的甲醇、乙酸乙酯、乙酸溶液，以得到核苷-O-[1-(L-缬氨酰)-2-硬 脂酰-3-丙氧基羰基]， 1H-NMR(CDCl3)：7.40(m，5H)，5.28(m，2H)5.10(s，2H)，4.35(m，5H)， 2.35(m，2H)，2.17(m，1H)，1.56(m，2H)，1.30(m，28H)，0.95(m，9H)。 实施例15 5-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酸 a)4，5-二羟基-2-戊烯酸苄酯
DL-甘油醛(4.5克，50毫摩尔)和(苄氧基羰基甲基)-三苯基- 溴化磷(24.57克，50毫摩尔)的100毫升1，2-环氧丁烷的混合物回 流过夜。在真空下蒸发混合物，用硅胶柱色谱分离产物，产率8克＝71 ％， 1H-NMR(CDCl3)：2.50(s，1H)2.96(s，1H)3.54(m，1H)3.70(m，1H) 4.38(m，1H)5.12(s，2H)6.14(m，1H)6.90(m，1H)7.30(m，5H)。 b)5-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-4-羟基-2-戊烯酸苄酯
4，5-二羟基-2-戊烯酸苄酯(4.4克，20毫摩尔)、N-FMOC-L-缬 氨酸(5.8克，17毫摩尔)和DMAP(0.21克，1.7毫摩尔)的100毫 升二氯甲烷混合物冷却至约10℃。在相同温度下滴加DCC(4.2克，20 毫摩尔)的25毫升二氯甲烷溶液，混合物在室温下搅拌过夜。将混合 物冷却至5℃，过滤尿烷。在减压下蒸发滤液，用硅胶柱色谱分离产 物，产率：6.6克＝71％， 1H-NMR(CDCl3)：0.91(m，6H)2.12(m，1H)4.38(m，5H)，5.14(s，2H) 5.24(m，1H)6.20(m，1H)6.92(m，1H)7.30(m，13H)。 c)5-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-2-戊烯酸苄酯
在10℃，向5-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-4-羟基-2-戊烯酸苄酯 (6.5克，12毫摩尔)和吡啶(2.0克，25毫摩尔)的100毫升二氯 甲烷溶液中滴加硬脂酰氯(4.55克，15毫摩尔)的25毫升二氯甲烷 溶液，混合物搅拌过夜。加入100毫升5％碳酸氢钠溶液，混合物搅 拌30分钟。分离有机相，用二氯甲烷两次萃取水相。用硫酸钠干燥合 并的有机相，并在真空下浓缩。用硅胶柱色谱分离产物。 产率：7.8克＝80％， 1H-NMR(CDCl3)：0.88(m，9H)1.25(m，28H)1.58(m，2H)2.14(m，1H) 2.32(m，2H)4.22(m，5H)5.19(s，2H)5.25(m，1H)6.12(m，1H)6.85(m，1H) 7.35(m，13H)。 d)5-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酸
室温，常压下，5-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-2-戊 烯酸苄酯(3.8克，4.69毫摩尔)的50毫升乙酸乙酯溶液用10％钯 炭(0.5克)氢化5小时。过滤催化剂，用乙酸乙酯和1，4-二噁烷洗 涤，在减压下蒸发溶液，产率3.3克＝99％ 1H-NMR(CDCl3)：0.92(m，9H)1.25(m，28H)1.54(m，2H)1.98(m，2H) 2.18(m，1H)2.28(m，2H)2.41(m，2H)4.32(m，5H)5.13(m，1H)5.33(m，1H) 7.50(m，8H)。 实施例16 3-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基丙酸 a)2，3-二羟基丙酸苄酯
D，L-甘油酸钙盐二水合物(2.9克，10毫摩尔)和苄基溴(3.8 克，22毫摩尔)的25毫升DMF混合物在60℃搅拌过夜。在减压下蒸 发混合物，用硅胶柱色谱分离产物，产率4克＝100％， 1H-NMR(CDCl3)：3.26(s，1H)3.90(m，2H)4.32(m，1H)5.25(s，2H) 7.28(m，5H)。 b)3-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-2-羟基丙酸苄酯
2，3-二羟基丙酸苄酯(4.0克，20毫摩尔)、N-FMOC-L-缬氨酸 (5.4克，16毫摩尔)和DMAP(0.2克，1.6毫摩尔)的80毫升二氯 甲烷溶液冷却至约10℃。在相同温度下滴加DCC(4.12克，20毫摩 尔)的25毫升二氯甲烷溶液，混合物在室温下搅拌过夜。将混合物冷 却至5℃，过滤尿烷。在减压下蒸发溶液，用硅胶柱色谱分离产物。 产率4.7克＝45％ 1H-NMR(CDCl3)：0.88(m，6H)2.05(m，1H)4.40(m，6H)5.23(m，3H) 7.50(m，13H) c)3-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基丙酸苄酯
向搅拌的3-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-2-羟基丙酸苄酯(4.6克， 8.89毫摩尔)和吡啶(1.41克，17.8毫摩尔)的80毫升二氯甲烷溶 液中滴加硬脂酰氯(3.64克，12毫摩尔)的20毫升二氯甲烷溶液， 混合物在室温下搅拌过夜。加入100毫升5％碳酸氢钠溶液，混合物 搅拌30分钟。分离有机相，用二氯甲烷两次萃取水相。用硫酸钠干燥 合并的有机相，并在真空在浓缩。用硅胶柱色谱分离产物，产率6.1 克＝87％， 1H-NMR(CDCl3)：0.88(m，9H)1.26(m，28H)1.56(m，2H)2.06(m，1H) 2.34(m，2H)4.36(m，6H)5.19(s，2H)5.32(m，1H)7.50(m，13H) d)3-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基丙酸
室温，常压下，3-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基丙酸苄 酯(0.78克，1毫摩尔)的20毫升乙酸乙酯溶液用10％钯炭(0.2 克)氢化3小时。过滤催化剂，用乙酸乙酯和1，4-二噁烷洗涤。在减 压下蒸发溶液，产率0.63克＝90％， 1H-NMR(CDCl3)：0.88(m，9H)1.24(m，28H)1.40(m，2H)2.12(m，3H) 4.30(m，5H)5.16(m，1H)5.60(m，1H)7.40(m，8H)。 实施例17 1-(N-苄氧基羰基-L-缬氨酰氧基甲基)-2-硬脂酰氧基乙氧基羰基氯化 物
室温，搅拌下将碳酸二(三氯甲基)酯(160毫克，0.54毫摩尔) 加入至1-(N-苄氧基羰基-L-缬氨酰)-3-硬脂酰甘油/1-(N-苄氧基羰基 -L-缬氨酰氧基)-3-硬脂酰氧基-2-丙醇/实施例4制备的(660毫克， 1.12毫摩尔)和三乙胺(200毫克，2.0毫摩尔)的二氯甲烷(5毫 升)溶液中。1小时后，加入正己烷(10毫升)，经短硅胶柱滤掉沉 淀的盐酸三乙胺，产物再用正己烷洗脱，在真空中蒸发溶剂，得到650 毫克(89％)的标题化合物， 13C NMR(CDCl3，62.975MHz)：δ172.8(stea-COO)，171.2(Val-COO)， 155.9(CONH)，154.1(COCl)，136.0(Ph-Cl-Val)，128.1-127.7(Ph)， 67.2(CHOH)，66.7(PH CH2)，63.1(ValCOOCH2)，61.8(stea-COOCH2)， 58.7(Val-αC)，33.7(stea-C2)，31.6(stea-C16)，31.0(Val-βC)， 29.3-28.8(stea-C4-15)，24.5(stea-C3)，18.6和17.1(Val2 CH3)， 13.8(stea-C18)。 实施例18 氯甲酸3-(N-CBz-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基丁基酯 a)3-(N-CBz-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基丁醇
在10℃下，向搅拌的4-硬脂酰氧基-3-(N-CBz-L-缬氨酰氧基甲 基丁醛(按类似于实施例6的方法制备，步骤d用CBz保护缬氨酸) (2.0克，3.2毫摩尔)的25毫升甲醇溶液中少量分次地加入硼氢化 钠(0.6克，16毫摩尔)。混合物搅拌30分钟，然后用乙酸酸化。 混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取三次。用硫酸钠干燥有机相并在真 空中浓缩。产物用硅胶柱色谱分离。产率1.5克＝75％， 1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.25(m，28H)1.52(m，4H)2.24(m，3H) 3.68(m，2H)4.12(m，1H)4.24(m，1H)5.08(s，2H)5.22(m，1H)7.36(m，5H ) b)氯甲酸3-(N-CBz-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基丁基酯
步骤中间体a)在20毫升20％光气的甲苯溶液中搅拌过夜。混合 物在减压下蒸发得到标题化合物，产率1.5克＝97％， 1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.28(m，28H)1.58(m，2H)1.72(m，2H) 2.15(m，1H)2.31(m，2H)4.08-4.42(m，5H)5.10(s，2H) 5.22(m，1H)7.36(m，5H)。 实施例19 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[1-(L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-3-丙氧 基羰基]鸟苷 a)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[1-(N-CBz-L-缬氨酰氧基)-2-硬脂 酰氧基-3-丙氧基羰基]鸟苷
在0℃，向2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(270毫克，1毫摩尔)的DMF (10毫升)和吡啶(1毫升)溶液中加入氯甲酸3-{1-(N-CBz-L-缬氨 酰)-2-硬脂酰}丙酯(619毫克，0.5毫摩尔)。3小时后，反应混合 物倒入碳酸氢钠溶液中，并用二氯甲烷萃取。有机相在真空中干燥， 用硅胶柱色谱分离2′，3′-双脱氧-3′-氟-5 ′-O-[1-(N-CBz-L-缬氨酰氧 基)-2-硬脂酰氧基-3-丙氧基羰基]鸟苷(195毫克)， 1H-NMR(CDCl3)：7.69(s，1H)，7.31(m，5H)，6.50(m，2H)，6.32(m，1H)， 5.3(m，2H)，5.09(m，2H)，4.35(m，7H)，2.60(m，2H)，2.31(t，2H)，2.20( m，1H)，1.58(m，2H)，1.23(m，28H)，0.92(m，9H)。 b)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[1-(L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基- 3-丙氧基羰基]鸟苷
将2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[N-(N-CBz-L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰 氧基-3-丙氧基羰基]鸟苷(190毫克)溶解在甲醇(6毫升)、乙酸 乙酯(2毫升)和乙酸(1毫升)的混合溶剂中。向该溶液中加入钯黑 (30毫克)，反应混合物在氢气下保持2小时，然后过滤，蒸发滤液， 用硅胶柱色谱分离标题产物110毫克， 1H-NMR(DMSO-δ6)：7.86(ds，1H)，6.51(s，2H)，6.17(dd，1H)， 5.48(m，1H)，5.20(m，1H)，4.25(m，7H)，2.70(m，2H)，2.27(m，2H)， 1.72(m，1H)，1.47(m，2H)，1.22(m，28H)，0.84(m，9H)。 实施例20 2′.3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-缬氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酰基] 鸟苷
向2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(0.27克，1毫摩尔)和5-(N-FMOC-L- 缬氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基戊酸(0.94克，1.3毫摩尔)的30毫升DMF 溶液中加入DMAP(16毫克，0.13毫摩尔)、HOBT(0.176克，1.3毫 摩尔)和DCC(0.248克，1.2毫摩尔)。在室温下搅拌混合物三天。 加入4克硅胶，在真空中蒸发混合物。用硅胶柱色谱分离产物2′，3′- 双脱氧-3′-氟-5′-O-[5-(FMOC-L-缬氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酰基] 鸟苷，产量0.45克， 1H-NMR(DMSO-δ6)：0.88(m，9H)1.20(m，28H)1.45(m，2H)1.78(m，2H) 2.18(m，2H)2.36(m，1H)2.62(m，2H)3.88(m，1H)4.22(m，6H)4.92(m，1H) 5.45(m，1H)6.19(m，1H)6.52(s，2H)7.26-7.88(m，8H)。
被保护的中间体如上述方法脱保护得到标题化合物。 实施例20 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基- 丙酰基]鸟苷
向搅拌的3-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基丙酸(0.61 克，0.88毫摩尔)的5毫升无水二乙醚混合物的加入一滴DMF和亚硫 酰氯(0.52克，4.4毫摩尔)。混合物回流两小时，然后在减压下蒸 发。产物溶解在无水二氯甲烷中并滴加2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(0.215 克，0.8毫摩尔)和吡啶(0.35克，4.4毫摩尔)的20毫升DMF溶液 中。溶液搅拌过夜。加入两克硅胶，混合物在真空中蒸发。用硅胶柱 色谱分离产物，产率0.19克＝25％， 1H-NMR(CDCl3)：0.88(m，9H)1.25(m，28H)1.62(m，2H)2.12(m，1H) 2.38(m，2H)2.58(m，2H)4.12-4.76(m，6H)5.32(m，2H)6.12 (m，1H)6.26(m，1H)6.44(m，1H)7.12-7.78(m，8H)。 实施例21 丁二酸1-(N-CBz-L-缬氨酰)-3-硬脂酰-2-丙基单酯
1-(N-CBz-L-缬氨酰)-3-硬脂酰甘油(886毫克，1.5毫摩尔)和 丁二酸酐(450毫克，4.5毫摩尔)溶解在DMF(15毫升)和吡啶(1 毫升)的混合溶剂中。反应在室温下保持3小时，然后在60℃保持5 小时。反应混合物倒入乙酸和水的溶液中，并用二氯甲烷萃取。用水 洗涤有机相，并蒸发，用硅胶柱色谱分离产物，产量900毫克， 1H-NMR(CDCl3)：7.43(m，5H)，5.27(m，1H)，5.09(m，2H)，4.21(m，5H)， 2.54(m，4H)，2.29(t，2H)，2.13(m，1H)，1.59(m，2H)，1.25(m，28H)，0.9 0(m，9H)。 实施例22 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(L-缬氨酰氧基)-3-硬脂酰氧基-2- 丙氧基羰基]-丙酰基}鸟苷
向2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(351毫克，1.3毫摩尔)和丁二酸1- (N-CBz-L-缬氨酰)-3-硬脂酰-2-丙基单酯(900毫克，1.3毫摩尔) 的DMF(15毫升)溶液中加入二甲基氨基吡啶(24毫克，0.2毫摩尔)、 1-羟基苯并三唑(175毫克，1.3毫摩尔)、DCC(321毫克，1.56毫 摩尔)。48小时后，过滤反应混合物，滤液倒入碳酸氢钠溶液中，并 用二氯甲烷萃取。用硅胶柱色谱分离产物2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O- {3-[1-(N-CBz-L-缬氨酰)-3-硬脂酰-甘油氧基羰基]-丙酰基}鸟苷 780毫克， 1H-NMR(DMSO-d6)：7.89(s，1H)，7.34(m，5H)，6.50(s，2H)， 6.17(dd，1H)，5.46(m，1H)，5.38(m，1H)，5.02(s，2H)，4.22(m，7H)， 3.32(s，4H)，2.80(m，2H)，2.57(m，2H)，2.31(t，2H)，2.05(m，1H)， 1.48(m，2H)，1.21(m，28H)，0.84(m，9H)。
向2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(N-CBz-L-缬氨酰)-3-硬脂酰 -2-丙氧基羰基]-丙酰基}鸟苷(460毫克，0.5毫摩尔)的甲醇(10 毫升)、乙酸乙酯(3毫升)和乙酸(2毫升)的混合溶剂的溶液中加 入钯黑(50毫克)。在氢气气氛下反应2小时后，过滤混合物，干燥 滤液，用硅胶柱色谱分离目标产物360毫克， 1H-NMR(DMSO-d6)：7.89(s，1H)，6.51(s，2H)，6.16(dd，1H)， 5.48(m，1H)，5.17(m，1H)，4.28(m，7H)，2.90(m，2H)，2.58(m，4H)， 2.28(t，2H)，1.85(m，1H)，1.49(m，2H)，1.22(m，28H)，0.85(m，9H). 实施例23
在室温下，将硬脂酰氯(12.1克，40毫摩尔，1.0当量)的CH2Cl2(100毫升)溶液缓慢地(1小时)加入到2，2-二(羟甲基)丙酸(26.8 克，200毫摩尔，5.0当量)的吡啶(400毫升)溶液中。反应混合物 在室温下搅拌过夜，然后在真空下浓缩(100毫升)。反应混合物慢 慢用饱和NaHCO3(400毫升)处理，然后用CH2Cl2(3×300毫升)萃 取。合并有机相，用盐水洗涤，Na2SO4干燥，并在真空中浓缩。粗产 物在硅胶上(500克)以19/1～4/1 CH2Cl2-MeOH作为洗脱剂进行色 谱分离，得到硬脂酸单酯，Rf(9/1 CH2Cl2-MeOH)0.33，产率12.5 克(78％)。
将N-Cbz-L缬氨酸(18.85克，75毫摩尔，2.4当量)和DMAP(855 毫克，7毫摩尔，0.22当量)的CH2Cl2(800毫升)溶液冷却至0℃， 并用DCC(14.4克，70毫摩尔，2.2当量)处理。反应混合物在室温 下搅拌30分钟，然后慢慢地(1小时)用上述硬脂酸单酯(12.5克， 31.2毫摩尔，1当量)的CHCl3(200毫升，不含醇)溶液处理。搅拌 过夜后，过滤悬浮液，用盐水洗涤滤液，Na2SO4干燥，并在真空中浓 缩。粗产物在硅胶上(500克)以19/1～4/1 CH2Cl2-MeOH作为洗脱 剂进行色谱纯化，得到上述二酯，Rf(9/1 CH2Cl2-MeOH)0.46，产 率13.8克(70％)， 1H-NMR(250MHz，CDCl3)：δ7.35-7.3(m，5H，ArH)，5.32(d，1H，CH)， 5.10(s，2H，CH2Ph)，4.33-4.18(m，4H，CH2)，2.28(t，2H，CH2)，2.22- 2.05(m，1H，CH)，1.65-1.50(m，2H，CH2)，1.35-1.15(m，31H)，1.00- 0.82(m，9H，Me)。 实施例24 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-缬氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酰基] 鸟苷 a)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5 ′-O-[5-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)-4-硬脂 酰氧基-戊酰基]鸟苷
2′，3′-双脱氧-3 ′-氟鸟苷(269毫克，1.0毫摩尔)、5-(N-FMOC-L- 缬氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基-戊酸(940毫克，1.3毫摩尔)、DMAP(16 毫克，0.13毫摩尔)和HOBT(176毫克，1.3毫摩尔)和DMF共蒸发 二次，减至30毫升。加入DCC(248毫克，1.2毫摩尔)，混合物在 室温下搅拌过夜。过滤混合物，在减压下蒸发溶液。加入乙酸乙酯(50 毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氢钠和水洗涤两遍。用硫酸钠干燥有机 相并在减压下蒸发。用硅胶柱色谱分离产物。产量450毫克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，9H)1.22(m，28H)1.45(m，2H)1.83(m，2H) 2.21(m，2H)2.37(m，1H)3.90(m，1H)5.36-5.58(m，1H)6.18(m，1H) 6.50(s，2H)7.28-7.91(m，10H)。 b)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-缬氨酰氧基)-4-硬脂酰氧基- 戊酰基]鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[5-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-4-硬脂酰氧 基-戊酰基]鸟苷(300毫克，0.308毫摩尔)的5毫升N，N-二异丙基 乙胺和5毫升DMF的混合物在室温下搅拌三天。加入乙酸(5毫升)， 混合物在减压下蒸发，用硅胶柱色谱以乙酸盐形式分离产物，产量90 毫克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，9H)1.24(m，28H)1.55(m，2H)1.91(m，2H) 2.31(m，2H)2.44(m，1H)2.56-3.08(m，2H)3.15(m，1H)4.00- 4.49(m，5H)5.08(m，1H)5.40-5.62(m，1H)6.24(m，1H) 6.54(s，2H)7.96(s，1H)。 实施例25 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-丙酰基] 鸟苷
a)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-缬氨酰氧基)-2-硬 脂酰氧基-丙酰基]鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(404毫克，1.5毫摩尔)、3-(N-CBZ-L- 缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基-丙酸(1.06克，1.75毫摩尔)、DMAP(24 毫克，0.2毫摩尔)和HOBT(264毫克，1.82毫摩尔)的混合物与DMF 共蒸发二次，减至约30毫升。加入DCC(372毫克，1.8毫摩尔)， 混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物，在减压下蒸发溶液。加入乙 酸乙酯(50毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氢钠和水洗涤有机相两遍， 用硫酸钠干燥有机相并在减压下蒸发，通过用硅胶柱色谱分离产物， 产率0.73克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.82(m，9H)1.22(m，28H)1.48(m，2H)2.31(m，2H) 2.50-3.00(m，2H)3.91(m，1H)4.18-4.52(m，5H)5.00(s，2H)5.30- 5.61(m，2H)6.16(m，1H)6.50(s，2H)7.32(m，5H)7.71(m，1H) 7.92(s，1H)10.18(s，1H)。 b)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧基- 丙酰基]鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-缬氨酰氧基)-2-硬脂酰氧 基-丙酰基]鸟苷(350毫克，0.4毫摩尔)的乙酸乙酯(25毫升)、甲 醇(5毫升)和乙酸(5毫升)的溶液用钯黑(300毫克)在常压下氢 化三小时。滤掉催化剂，用乙酸乙酯和甲醇洗涤。在减压下蒸发溶液， 用硅胶柱色谱以乙酸盐形式分离产物，产量120毫克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.84(m，9H)1.22(m，28H)1.50(m，2H)2.32(m，2H) 2.50-3.00(m，2H)3.07(m，1H)4.21-4.59(m，5H)5.38-5.59(m，2H) 6.17(m，1H)6.0(s，2H)7.90(s，1H)。 实施例26 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(L-缬氨酰氧基甲基)-丙酸]鸟苷 a)合成4，4-二(N-CBZ-L-缬氨酰氧基甲基)丁-1-烯
向2-烯丙基-1，3-丙二醇(2.32克，20毫摩尔)、N-CBZ-L-缬氨 酸(10.06克，40毫摩尔)和DMAP(0.488克，4毫摩尔)的120毫 升二氯甲烷溶液中分批加入DCC(9.08克，44毫摩尔)，混合物在室 温下搅拌过夜，将混合物冷却至5℃，滤掉尿烷。蒸发滤液，用硅胶 柱色谱分离产物，产量9.0克， 1H-NMR(CDCl3)0.89(m，12H)5.11(s，2H)5.73(m，1H) b)合成3，3-二(N-CBZ-L-缬氨酰氧基甲基)丙酸
向冷却的4，4-二(N-CBZ-L-缬氨酰氧基甲基)-丁-1-烯(14.6克， 25毫摩尔)和四丁基溴化铵(1.3克，4毫摩尔)的120毫升苯溶液 中加入100毫升水。剧烈搅拌下分批加入高锰酸钾(15.8克，100毫 摩尔)，混合物在15-20℃间搅拌2小时。向浆液中加入酸式亚硫酸 盐水溶液直至混合物褪色。混合物用2N盐酸酸化，并用乙酸乙酯萃取 四次。用水洗涤有机相两次，碳酸钠干燥并在减压下蒸发。产物用硅 胶柱色谱分离，产量7.5克， 1H-NMR(CDCl3)0.89(m，12H)2.05(m，2H)2.46(m，2H)2.62(m，1H) 4.20(m，6H)5.11(s，4H)5.30(m，2H)7.35(m，10H) c)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(N-CBZ-L-缬氨酰氧基甲基)- 丙酰]鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(1.35克，5毫摩尔)、3，3-二-(N-CBZ- L-缬氨酰氧基甲基)-丙酸(3.6克，6毫摩尔)、DMAP(0.061克，0.5 毫摩尔)和HOBT(0.81克，6毫摩尔)的溶液与DMF共蒸发二次，减 至约120毫升。加入DCC(1.24克，6毫摩尔)，混合物在室温下搅 拌过夜。过滤混合物，在减压下蒸发溶剂。加入乙酸乙酯(200毫升)， 用5％乙酸、5％碳酸氢钠和水洗涤有机相两遍。用硫酸钠干燥有机相 并在减压下蒸发。用硅胶柱色谱分离产物。产量2.7克。 1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.00(m，2H)2.50-3.00(m，2H) 3.90-4.43(m，10H)5.08(s，4H)5.32-5.59(m，1H)6.17(m，1H) 6.50(s，2H)7.28(m，10H)7.72(m，2H)7.90(s，1H) d)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(L-缬氨酰氧基甲基)-丙酸] 鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(N-CBZ-L-缬氨酰氧基甲基)-丙 酰]鸟苷(2.6克，3.1毫摩尔)的80毫升乙酸乙酯、20毫升甲醇和 20毫升乙酸的溶液用钯黑(0.3克)在常压下氢化两小时。滤掉催化 剂，用乙酸乙酯和甲醇洗涤。在减压下蒸发溶液，用硅胶柱色谱以二 乙酸盐形式分离产物，产量1.2克。 1H-NMR(DMSO d-6)0.90(m，12H)1.78(m，2H)2.50-3.00(m，2H) 3.09(m，2H)4.02-4.45(m，8H)5.34-5.59(m，1H)6.17(m，1H) 6.62(s，2H)7.88(s，1H)。 实施例27 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧基-丁 氧基酰基]鸟苷 a)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-缬氨酰氧基甲基)-4- 硬脂酰氧基-丁氧基羰基]鸟苷
向2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(269毫克，1.0毫摩尔)的绝对DMF 溶液中加入吡啶(198毫克，2.5毫摩尔)和3-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基 甲基)-4-硬脂酰氧基-丁氧基羰基氯化物(750毫克，1.1毫摩尔)的 5毫升二氯甲烷溶液。混合物在室温下搅拌三天，在减压下蒸发溶液。 用硅胶柱色谱分离产物，产量120毫克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，9H)1.24(m，28H)5.08(，2H)6.24(m，1H) 8.00(s，1H)。 b)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂酰氧 基-丁氧基羰基]鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-缬氨酰氧基甲基)-4-硬脂 酰氧基-丁氧基羰基]鸟苷的15毫升乙酸乙酯、2毫升甲醇和2毫升乙 酸的混合物用钯黑(40毫克)在常压下氢化两小时。滤掉催化剂，用 乙酸乙酯和甲醇洗涤，在减压下蒸发溶液，产物以乙酸盐形式用硅胶 柱色谱分离，产量78毫克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.87(m，9H)1.22(m，28H)1.48(m，2H)1.68(m，2H) 2.12(m，1H)2.26(m，2H)2.50-3.00(m，2H)4.00-4.42(m，10H) 5.34-5.58(m，1H)6.18(m，1H)6.52(s，2H)7.82(s，1H)。 实施例28 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[2-(L-缬氨酰氧基)硬脂酰]鸟苷 a)合成2-羟基硬脂酸苄酯
向搅拌的DL-2-羟基硬脂酸(3.0克，10毫摩尔)的20毫升无水 DMF溶液中加入叔丁醇钾(1.23克，11毫摩尔)，混合物在60℃搅 拌一小时，加入苄基溴(2.14克，12.5毫摩尔)，混合物在80℃搅 拌六小时，在减压下蒸发混合物并加入100毫升乙酸乙酯。分离有机 相并用水洗涤四次，用硫酸钠干燥有机相并在真空中浓缩，通过硅胶 柱色谱分离产物，产量3.3克， 1H-NMR(CDCl3)0.88(m，3H)1.26(m，28H)1.62(m，2H)4.20(m，1H) 5.20(s，2H)7.36(m，5H)。 b)合成2-(N-FMOC-L-缬酰氨氧基)硬脂酸苄酯
向2-羟基硬脂酸苄酯(3.2克，8.2毫摩尔)、N-FMOC-L-缬氨 酸(3.4克，10毫摩尔)和DMAP(0.12克，1毫摩尔)的80毫升二氯 甲烷溶液中加入DCC(2.5克，12毫摩尔)溶液，混合物在室温下搅 拌过夜，将混合物冷却至5℃，并滤掉尿烷。蒸发滤液，用硅胶柱色 谱分离产物，产量4.5克， 1H-NMR(CDCl3)0.90(m，6H)1.26(m，6H)1.82(m，2H)2.16(m，1H) 4.21(m，1H)4.36(m，2H)5.10(m，1H)5.18(s，2H)5.28(m，1H)7.20- 7.80(m，13H)。 c)合成2-(N-FMOC-L-缬酰氨氧基)硬脂酸
2-(N-FMOC-L-缬酰氨氧基)硬脂酸苄酯(4.4克，6.2毫摩尔)的 50毫升乙酸乙酯溶液用10％的钯炭(0.5克)在常压下氢化两小时。 滤掉催化剂，用乙酸乙酯和1，4-二噁烷洗涤。在减压下蒸发溶液，产 物以乙酸盐形式通过硅胶柱色谱分离，产量3.4克， 1H-NMR(CDCl3)0.88(m，6H)1.26(m，28H)1.82(m，2H)2.28(m，1H) 4.20(m，1H)4.40(m，2H)5.00(m，1H)5.41(m，1H)7.26-7.82(m，8H)。 d)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[2-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)硬脂酰] 鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(404毫克，1.5毫摩尔)、2-(N-FMOC-L- 缬氨酰氧基)-硬脂酸(1.24克，2毫摩尔)、DMAP(24毫克，0.2 毫摩尔)和HOBT(264毫克，1.95毫摩尔)的混合物与DMF共蒸发 二次，减至约30毫升。加入DCC(372毫克，1.8毫摩尔)，混合物 在室温下搅拌过夜。过滤混合物，在减压下蒸发溶液。加入乙酸乙酯 (50毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氢钠和水洗涤有机相两次，用硫酸 钠干燥有机相并在减压下蒸发，产物以乙酸盐形式通过硅胶柱色谱分 离，产量1.2克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.80-0.90(m，9H)1.22(m，28H)2.12(m，1H) 2.50-3.00(m，2H)3.98(m，1H)4.96(m，1H)6.17(m，1H)6.50(s，2H) 7.32-7.95(m，10H) e)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[2-(L-缬氨酰氧基)硬脂酰]鸟苷
向2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[2-(N-FMOC-L-缬氨酰氧基)硬脂酰] 鸟苷(800毫克，0.89毫摩尔)的15毫升DMF溶液中加入DBU(1.35 克，8.9毫摩尔)，混合物在室温下搅拌5分钟。加入乙酸(2毫升)， 混合物在减压下蒸发。加入水(20毫升)，混合物用二氯甲烷萃取三 次。用硫酸钠干燥有机相并在减压下蒸发，通过硅胶柱色谱分离产物， 产量165毫克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.87(m，9H)1.22(m，28H)1.70(m，2H)1.88(m，1H) 2.50-3.00(m，2H)3.20(m，1H)4.32(m，3H)4.94(m，1H)5.32- 5.54(m，1H)6.14(m，1H)6.49(s，2H)7.89(s，1H) 实施例29 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-缬氨酰氧基)-2-丙氧基羰基 丙酰基]鸟苷 a)合成丁二酸1，3-二苄氧基-2-丙基单酯
在60℃下，1，3-二苄氧基丙-2-醇(6.8克，25毫摩尔)和丁二 酸酐(7.5克，75毫摩尔)和DMAP(12.2克，100毫摩尔)搅拌一小 时。混合物在减压下蒸发，用2N HCl酸化并用乙酸乙酯萃取两次。用 水洗涤合并的有机相三次，用硫酸钠干燥有机相并在减压下蒸发，通 过硅胶柱色谱分离产物，产量7.8克， b)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二苄氧基-2-丙氧基羰基)丙 酰基]鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(1.61克，6毫摩尔)、HOBT(0.972克， 7.2毫摩尔)、DMAP(73.3毫克，0.6毫摩尔)和丁二酸单1，3-二苄 氧基-2-丙酯(2.68克，7.2毫摩尔)的混合物与DMF共蒸发二次， 减至约150毫升。加入DCC(1.55克，7.5毫摩尔)，混合物在室温 下搅拌72小时。过滤混合物，在减压下蒸发溶剂。加入乙酸乙酯(200 毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氢钠和水洗涤有机相两遍，硫酸钠干燥 有机相并在减压下蒸发，通过硅胶柱色谱分离产物，产量3.3克。 c)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二羟基-2-丙氧基羰基)丙酰 基]鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二苄氧基-2-丙氧基羰基)丙酰 基]鸟苷(3.2克，5.13毫摩尔)的50毫升乙酸乙酯、50毫升甲醇和 10毫升乙酸溶液用钯黑(0.6克)在40psi压力下氢化过夜。滤掉催 化剂，用甲醇洗涤。在减压下蒸发溶液，用硅胶柱色谱分离产物，产 量1.64克。 d)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)- 2-丙氧基羰基]丙酰基}鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二羟基-2-丙氧基羰基)丙酰基] 鸟苷(1.93克，2.93毫摩尔)、N-CBZ-L-缬氨酸(1.76克，7毫摩 尔)、HOBT(0.95克，7毫摩尔)和DMAP(85.5毫克，0.7毫摩尔)的 混合物与DMF共蒸发二次，减至约60毫升。加入DCC(1.55克，7.5 毫摩尔)，混合物在室温下搅拌过夜，混合物在60℃保温四小时，然 后冷却至10℃。过滤混合物，在减压下蒸发溶剂。加入乙酸乙酯(150 毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氢钠和水洗涤有机相两次，硫酸钠干燥 有机相并在减压下蒸发，通过硅胶柱色谱分离产物，产量1.6克。 e)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二(L-缬氨酰氧基)-2-丙氧 基羰基]丙酰基}鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-2- 丙氧基羰基]丙酰基}鸟苷(1.6克，1.75毫摩尔)的80毫升乙酸乙 酯、20毫升甲醇和20毫升乙酸溶液用钯黑(0.3克)在室温和常压 下氢化两小时。滤掉催化剂，用甲醇洗涤。在减压下蒸发溶液，产物 以二乙酸盐形式用硅胶柱色谱分离，产量1.02克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.84(m，12H)1.85(m，2H)2.58(m，4H)2.60- 3.10(m，2H) 3.11(m，2H)3.61-4.39(m，7H)5.19(m，1H)5.35-5.56(m，1H) 6.16(m，1H)，6.62(s，2H)7.89(s，1H)。 实施例30 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(L-缬氨酰氧基)-3-羟基-2-丙氧基羰 基]丙酰基}鸟苷 a)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-3-羟 基-2-丙氧基羰基]丙酰基}鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟-5 ′-O-[3-(1，3-羟基-2-丙氧基羰基)丙酰基] 鸟苷(1.3克，2.93毫摩尔)、N-CBZ-L-缬氨酸(1.00克，4毫摩尔)、 HOBT(0.54克，4毫摩尔)和DMAP(48.8毫克，0.4毫摩尔)的混合 物与DMF共蒸发两次，减至约60毫升。加入DCC(0.91克，4.4毫摩 尔)，混合物在室温下搅拌72小时。过滤混合物，在减压下蒸发溶液。 加入乙酸乙酯(150毫升)，有机相用5％乙酸、5％碳酸氢钠和水洗 涤两次，硫酸钠干燥有机相并在减压下蒸发。通过硅胶柱色谱分离产 物，产量0.99克。 b)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(L-缬氨酰氧基)-3-羟基-2- 丙氧基羰基]丙酰基}鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[N-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-3-羟基- 2-丙氧基羰基]丙酰基}鸟苷(0.82克，1.21毫摩尔)的30毫升乙酸 乙酯、15毫升甲醇和15毫升乙酸溶液用钯黑(0.15克)在室温和常 压下氢化两小时。滤掉催化剂，用甲醇洗涤。在减压下蒸发溶液，产 物以乙酸盐形式通过硅胶柱色谱分离，产量0.5克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.84(m，6H)1.86(m，1H)2.58(m，4H)2.63-3.02 (m，2H) 3.10-4.38(m，9H)5.34-5.55(m，1H)6.16(m，1H)6.56(s，2H) 7.90(s，1H)。 实施例31 5′-L-缬氨酰-2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷
向2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(810毫克，3毫摩尔)和4-二甲基氨 基吡啶(73毫克，0.6毫摩尔)、N-CBz-L缬氨酸(1.5克，6毫摩尔) 和1-羟基苯并三唑(810毫克，6毫摩尔)的DMF(20毫升)溶液中 加入DCC(1.36克，6.6毫摩尔)。72小时后，过滤反应混合物，在 真空中浓缩。用硅胶柱色谱分离5′-(N-CBz-L-缬氨酰)-2′，3′-双脱氧- 3′-氟鸟苷(1.15克)。
将该中间体(503毫克，1毫摩尔)溶解在乙酸乙酯(10毫升)、 甲醇(20毫升)和乙酸(2毫升)的混合溶剂中。向混合物中加入钯 黑(100毫克)，在氢气中，常压下保持反应混合物3小时。过滤和 浓缩后，用硅胶柱色谱分离目标产物(370毫克)， 1H-NMR(DMSO d-6)7.94(s，1H)，6.52(s，2H)，6.17(dd，1H)， 5.47(dd，1H)，4.15(m，3H)，3.15(d，1H)3.01-2.62(m，2H)1.80(m，1H) 0.82(dd，6H)。 实施例32 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)丙酰基]鸟苷 a)合成2-羟基丙酸4-甲氧基苄酯
向搅拌的DL-2-羟基丙酸(9.0克，100毫摩尔)的100毫升无水 DMF溶液中加入叔丁醇钾(12.34克，110毫摩尔)，在60℃下搅拌 混合物-小时。加入4-甲氧基苯甲酰氯(18.8克，120毫摩尔)，在 60℃下搅拌混合物8小时。混合物在减压下蒸发，加入250毫升乙酸 乙酯。用水洗涤有机相四次，硫酸钠干燥并在真空中浓缩，产量16.8 克， 1H-NMR(CDCl3)1.40(m，3H)3.81(s，3H)4.26(m，1H)5.14(s，2H) 6.90(d，2H)7.28(d，2H)。 b)合成2-(N-CBZ-L缬氨酰氧基)丙酸4-甲氧基苄酯
向2-羟基丙酸4-甲氧基苄酯(4.2克，20毫摩尔)、N-CBZ-L缬 氨酸(5.02克，20毫摩尔)和DMAP(0.24克，2毫摩尔)的100毫 升二氯甲烷溶液中加入DCC(4.54克，22毫摩尔)溶液，混合物在室 温下搅拌过夜，将混合物冷却至5℃，滤掉尿烷。蒸发滤液并用硅胶 柱色谱分离产物，产量7.9克， 1H-NMR(CDCl3)0.88(m，6H)1.50(m，3H)2.26(m，1H)3.81(s，3H) 4.34(m，1H)5.04-5.30(m，6H)6.88(d，2H)7.26(m，7H)。 c)合成2-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-丙酸
向2-(N-CBZ-L缬氨酰氧基)丙酸4-甲氧基苄酯(7.8克，17.5毫 摩尔)的二氯甲烷(100毫升)溶液中加入三氟乙酸(10毫升)，在 室温下搅拌溶液一小时。在减压下蒸发溶液，用硅胶柱色谱分离产物， 产量5.0克， 1H-NMR(CDCl3)0.94(m，6H)1.56(d，3H)2.30(m，1H)4.42(m，1H) 5.12-5.30(m，4H)7.28(m，5H)。 d)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5-O-[2-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)丙酰基] 鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(404毫克，1.5毫摩尔)、2-(N-CBZ-L 缬氨酰氧基)丙酸(0.582克，1.8毫摩尔)、DMAP(22毫克，0.18 毫摩尔)和HOBT(243毫克，1.8毫摩尔)的混合物与DMF共蒸发两 次，减至约30毫升。加入DCC(412毫克，2.0毫摩尔)，混合物在 室温下搅拌过夜。过滤混合物，在减压下蒸发溶液。加入乙酸乙酯100 毫升，有机相用5％乙酸、5％碳酸氢钠和水洗涤两次，硫酸钠干燥有 机相并在减压下蒸发。通过硅胶柱色谱分离产物，产量0.72克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.92(m，6H)1.40(d，3H)2.10(m，1H)2.50-3.06 (m，2H) 4.03(m，1H)4.20-4.44(m，3H)5.04(s，2H)5.12(m，1H)5.44- 5.58(m，1H) 6.18(t，1H)6.52(s，2H)7.36(m，5H)7.70(d，2H)7.92(s，1H) e)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5-O-[2-(L-缬氨酰氧基)丙酰基]鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟-5-O-[2-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)丙酰基]鸟 苷(0.6克，1.04毫摩尔)的20毫升乙酸乙酯、10毫升甲醇和10毫 升乙酸溶液用钯黑(0.1克)在室温和常压下氢化两小时。滤掉催化 剂，用甲醇洗涤，在减压下蒸发溶液，得到乙酸盐形式的标题化合物， 产量0.5克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，6H)1.40(d，3H)1.92(m，4H)2.52-3.04 (m，2H) 3.18(m，1H)4.18-4.42(m，3H)5.06(m，1H)5.32-5.58(m，2H) 6.18(m，1H) 6.52(s，2H)7.90(s，1H)。 实施例33 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-3-[2，3-二-(L-缬氨酰氧基)-1-丙氧基羰基] 丙酰基鸟苷 a)合成丁二酸4-甲氧基苄基单酯
向丁二酸酐(75克，750毫摩尔)和4-甲氧基苄醇(69.1克，500 毫摩尔)的1，4-二噁烷(300毫升)混合物中加入吡啶(79.1克，1000 毫摩尔)，混合物在80℃搅拌5小时。在减压下蒸发混合物，加入600 毫升乙酸乙酯和60毫升乙酸。用水洗涤有机相三次，硫酸钠干燥并在 减压下蒸发。产物用甲苯进行重结晶，产量104克， 1H-NMR(DMSO d-6)2.48(m，4H)3.72(s，3H)5.00(s，2H)6.90(d，2H) 7.28(d，2H)。 b)合成丁二酸2，3-二羟基-丙酯，4-甲氧基苄酯
向甘油(23.0克，250毫摩尔)、丁二酸4-甲氧基苄基单酯(5.96 克，25毫摩尔)和DMAP(0.36克，3毫摩尔)的DMF(200毫升)溶 液中加入DCC(6.2克，30毫摩尔)，混合物在室温下搅拌过夜，在 减压下蒸发混合物，加入150毫升二氯甲烷。过滤混合物，溶液用水 洗涤两次。水相用二氯甲烷萃取两次，合并的有机相用硫酸钠干燥。 溶液在减压下蒸发，用硅胶柱色谱分离产物，产量3.0克， 1H-NMR(CDCl3)2.65(m，4H)3.61(m，2H)3.80(s，3H)3.90(m，1H) 4.18(m，2H)5.05(s，2H)6.89(d，2H)7.26(d，2H)。 c)合成丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-丙酯，4-甲氧基苄酯
向搅拌的丁二酸2，3-二羟基-丙酯，4-甲氧基苄酯(2.9克，9.28 毫摩尔)、N-CBZ-L-缬氨酸(5.03克，20毫摩尔)和DMAP(0。244 克，2毫摩尔)的二氯甲烷(60毫升)溶液中加入DCC(4.5克，22 毫摩尔)，混合物在室温下搅拌过夜，过滤混合物，溶液在减压下蒸 发，用硅胶柱色谱分离产物，产量2.5克， 1H-NMR(CDCl3)0.90(m，12H)2.16(m，2H)2.62(m，4H)3.80(s，3H) 4.32(m，4H)5.05-5.52(m，9H)6.89(d，2H)7.30(m，12H)。 d)合成丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-丙酯
向上述中间体(2.3克，2.95毫摩尔)的二氯甲烷(25毫升)溶 液中加入三氟乙酸(2.5毫升)，溶液在室温下搅拌两小时。在减压 下蒸发溶液，用硅胶柱色谱分离产物，产量1.8克， 1H-NMR(CDCl3)0.92(m，12H)2.12(m，2H)2.64(m，4H)4.32(m，4H) 5.10(s，4H)5.22-5.50(m，3H)7.34(m，10H)。 e)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[2，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧 基)-1-丙氧基羰基]丙酰基}鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(0.538克，2毫摩尔)、HOBT(0.327 克，2.42毫摩尔)、DMAP(29.3毫克，0.24毫摩尔)和丁二酸2，3- 二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-1-丙酯(1.6克，2.42毫摩尔)的混合物 与DMF共蒸发两次，减至约50毫升。加入DCC(0.536克，2.6毫摩 尔)，混合物在室温下搅拌72小时。过滤混合物，在减压下蒸发溶液。 加入乙酸乙酯100毫升，有机相用5％乙酸、5％碳酸氢钠和水洗涤两 次，硫酸钠干燥有机相并在减压下蒸发。通过硅胶柱色谱分离产物， 产量0.65克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.08(m，2H)2.58-3.04(m，6H) 3.92(m，2H)4.10-4.46(m，7H)5.00(s，4H)5.22(m，1H)5.32- 5.56(m，1H) 6.17(m，1H)6.50(s，2H)7.32(m，10H)7.70(d，2H)7.92(s，1H). f)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[2，3-二-(L-缬氨酰氧基)-1-丙 氧基羰基]丙酰基}鸟苷
上述中间体(0.57克，0.626毫摩尔)的20毫升乙酸乙酯、10 毫升甲醇和10毫升乙酸溶液用钯黑(0.1克)在室温和常压下氢化两 小时。滤掉催化剂，用甲醇洗涤。在减压下蒸发溶液，用硅胶柱色谱 分离产物，产物溶解在二氯甲烷中，并加入1M盐酸的乙醚溶液(1.1 毫升)。混合物在减压下蒸发，在真空中干燥得到二盐酸盐形式的标 题化合物，产量0.37克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.92(m，12H)2.12(m，2H)2.58-3.04(m，6H) 3.75(m，2H)4.16-4.50(m，7H)5.19-5.60(m，2H)6.18(m，1H) 6.76(s，2H)7.92(s，1H)。 实施例34 2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-缬氨酰氧基)-2-丙氧基羰基] 丙酰基鸟苷二盐酸盐 a)合成丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，4-甲氧基苄酯
在约10℃，向1，3-二溴丙-2-醇(21.8克，100毫摩尔)、丁二 酸4-甲氧基苄酯(28.6克，120毫摩尔)和DMAP(1.22克，10毫摩 尔)的二氯甲烷(400毫升)溶液中分批加入DCC(24.8克，120毫 摩尔)。混合物在室温下搅拌过夜，并冷却至约5℃。过滤混合物， 溶液在减压下蒸发。加入600毫升乙酸乙酯，有机相用5％乙酸、5％ 碳酸氢钠和水洗涤两次，硫酸钠干燥溶液，并在减压下蒸发。通过硅 胶柱色谱分离产物，产量34.8克， 1H-NMR(CDCl3)2.69(m，4H)3.57(m，4H)3.81(s，3H)5.07(s，2H) 5.14(m，1H)6.88(d，2H)7.26(d，2H)。 b)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-2-丙酯，4-甲氧基苄酯
向N-CBZ-L-缬氨酸(58.5克，232.8毫摩尔)的无水DMF(300 毫升)溶液中加入叔丁醇钾(24.68克，220毫摩尔)，混合物在室 温下搅拌一小时。加入丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，4-甲氧基苄酯(34 克，77.6毫摩尔)的无水DMF(50毫升)溶液，混合物在60℃搅拌18 小时。滤掉溴化钾，溶液在减压下蒸发。加入600毫升乙酸乙酯，有 机相用5％碳酸氢钠和水洗涤两次，硫酸钠干燥有机相并在减压下蒸 发。通过硅胶柱色谱分离产物，产量45克， 1H-NMR(CDCl3)0.90(m，12H)2.16(m，2H)2.61(m，4H)3.80(s，3H)4.12- 4.42(m，6H)5.02(s，2H)5.10(s，4H)5.43(m，3H)6.88(d，2H)7.32(m，12 H)。 c)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-2-丙酯
在5-10℃，向上述冷却的中间体(44.5克，57.1毫摩尔)的二 氯甲烷(500毫升)的溶液中加入三氟乙酸(50毫升)，该溶液在10 ℃搅拌两小时。在减压下蒸发溶液，和甲苯共蒸发两次。加入400毫 升乙醇，混合物在40℃搅拌30分钟。冷却混合物，滤掉副产物。溶 液在减压下蒸发，用硅胶柱色谱分离产物，产量33克，
1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.04(m，2H)2.46(m，4H)，3.94-4.40
(m，6H)5.02(s，4H)5.18(m，1H)7.32(m，10H)7.74(d，2H)。
d)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧 基)-2-丙氧基羰基]丙酰基}鸟苷
2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷(17.8克，66毫摩尔)、HOBT(10.64 克，78.8毫摩尔)、丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-2-丙酯 (52克，78.8毫摩尔)和DMAP(0.96克，7.88毫摩尔)的混合物与 DMF共蒸发两次，减至约500毫升。加入DCC(17.3克，84毫摩尔)， 混合物在室温下搅拌过夜。混合物在60℃保温6小时，然后冷却到约 10℃。过滤混合物，在减压下蒸发溶液。加入乙酸乙酯1200毫升，有 机相用5％乙酸、5％碳酸氢钠和水洗涤两次，硫酸钠干燥有机相并在 减压下蒸发。通过硅胶柱色谱分离产物，产量42克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.90(m，12H)2.02(m，2H)2.5-3.02(m，6H) 3.94(m，2H)4.22(m，7H)5.02(s，4H)5.18(m，1H)5.22-5.50(m，1H) 6.16(m，1H)6.50(s，2H)7.32(m，1OH)7.72(d，2H)7.92(s，1H)。 e)合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二-(L-缬氨酰氧基)-2- 丙氧基羰基]丙酰基鸟苷二盐酸盐
2′，3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-2- 丙氧基羰基]丙酰基}鸟苷(5.0克，5.9毫摩尔)的75毫升乙酸乙 酯和75毫升甲醇溶液用载在活性碳上的10％钯(1克)在室温和常压 下氢化一小时。滤掉催化剂，用甲醇洗涤。在减压下蒸发溶液，产物 溶解在二氯甲烷中，并在冷却下加入1M盐酸的乙醚溶液(6毫升)。 混合物在减压下蒸发，产量3.5克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.94(m，12H)2.18(m，2H)2.5-3.04(m，6H)4.20-4.54 (m，7H)5.24(m，1H)5.34-5.64(m，1H)6.22(m，1H)6.92(s，2H)8.30 (s，1H)8.62(s，6H)。 实施例35 合成2′，3′-双脱氧-3′-氟-5 ′-O-3-[1，3-二-(L-缬氨酰氧基)-2-丙氧基 羰基]丙酰基鸟苷 a)合成丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，1，1-二甲基乙酯
在约10℃，向1，3-二溴丙-2-醇(10.9克，50毫摩尔)、丁二 酸1，1-二甲基乙酯(J.Org.Chem 59(1994)4864)(10.45克，60毫 摩尔)和DMAP(0.61克，5毫摩尔)的二氯甲烷(180毫升)溶液中 分批加入DCC(12.4克，60毫摩尔)。混合物在室温下搅拌过夜，并 冷却至约5℃。过滤混合物，溶液在减压下蒸发。加入250毫升乙酸 乙酯，有机相用5％柠檬酸、5％碳酸氢钠和水洗涤两次。用硫酸钠干 燥溶液，并在减压下蒸发。在真空中蒸馏产物(沸点0.5135-140℃)， 产量16.8克， 1H-NMR(CDCl3)1.45(s，9H)2.58(m，4H)3.61(m，4H)5.12(m，1H)。 b)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-2-丙酯，1，1-二甲基乙 基酯
向N-CBZ-L-缬氨酸(18.85克，75毫摩尔)的无水DMF(100毫 升)溶液中加入叔丁醇钾(7.85克，70毫摩尔)，混合物在室温下搅 拌一小时。加入丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，1，1-二甲基乙酯(9.35克， 25毫摩尔)的无水DMF(20毫升)溶液，混合物在60℃搅拌18小时。 滤掉溴化钾，溶液在减压下蒸发。加入300毫升乙酸乙酯，有机相用 5％碳酸氢钠和水洗涤两次。用硫酸钠干燥有机相，并在减压下蒸发。 用硅胶柱色谱分离产物，产量14克。 1H-NMR(CDCl3)0.90(m，12H)1.42(s，9H)2.14(m，2H)2.52(m，4H)4.32 (m，6H)5.10(s，4H)5.32(m，3H)7.26(m，10H) c)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-2-丙基单酯
向上述冷却的丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-缬氨酰氧基)-2-丙酯， 1，1-二甲基乙酯(13克，18.18毫摩尔)的二氯甲烷(100毫升)溶 液中加入三氟乙酸(20毫升)，溶液在室温下搅拌六小时。在减压下 蒸发溶液，加入200毫升乙酸乙酯，有机相用5％碳酸氢钠和水洗涤， 溶液在减压下蒸发，产量11.7克， 1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.04(m，2H)2.46(m，4H)，3.94-4.40 (m，6H)5.02(s，4H)5.18(m，1H)7.32(m，10H)7.74(d，2H)。 d)合成2′，3′-双脱氧-3 ′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-缬氨酰氧基)-2-丙 氧基羰基]丙酰基鸟苷
如实施例34步骤b)所示的方法，将步骤c)的中间体酯化到FLG 上，并用常用的技术，如实施例35步骤e)或实施例29步骤e)，除 去缬氨酰部分上的N保护基。 生物学实施例 药动学
在老鼠模型中可以确认本发明口服的前药在活体内释放FLG，该 模型被认为是用于评价核苷类药物的药动学参数的有用模型。口服组 合物可以药学赋形剂给药，赋形剂包括丙二醇，或对于更易溶解的化 合物，如实施例26或实施例34所述的化合物，用水给药，以0.1毫 摩尔/千克的剂量对抗食动物重复实验。为了进行比较，一组老鼠静脉 注射0.01毫摩尔/千克代谢物2′，3′-双脱氧-3′氟鸟苷。给药0.5-12 小时后(对于FLG为5分钟-6小时)，通过不断地从各个动物体内 收集的血清监测血清代谢物的浓度。
按类似于Stahle等1995，J Pharm，Biomed.Anal，13，369-376 的方法，用带254纳米UV检测的HPLC分析代谢物，HPLC体系基于缓 冲值为pH4.5的含1.2％2-丙醇溶剂的0.05M磷酸二氢铵缓冲溶液， 或基于缓冲值为pH7.0的含2％乙腈溶剂的30mM磷酸二氢钠缓冲溶 液。柱子为带7有微米C18防护柱的100×2.1毫米BAS C18 5微米粒 径或150×4.6毫米的Zorbax SB-CN C18，5微米柱。本发明化合物 的蛋白键合力可忽略，同样代谢物的键合力也可被忽略，Amicon或 Microcon 30过滤器的超滤作用对于血清样品是有用的。有利的是主 峰可再进行柱色谱，以更利于提高FLG对低分子量血清组分的分辨率。 将iv值乘以10，以达到能与口服值相比的AUC值，。绝对口服的生 物利用率以在0→∞AUCiv和0→∞AUC口服间的比率测定。
                  表1     6小时后 绝对生物利用率％     12小时后 绝对生物利用率％    FLG 实施例22 实施例13 实施例12 实施例25 实施例28 实施例24 实施例26 实施例29       39％       37％       29％       81.5％       47.5％       60.5％       51％     9％**     ＞80％*     67.5％ *测定值**文献值 因此，相对于代谢物2′3′-双脱氧-3 ′-氟鸟苷，本发明的化合物提 供了明显改进的口服生物利用率。特别是，化合物在血中以相对持续 的方式释放，而不是以间峰(immediate peak)的方式。这意味着活性 代谢物在血中的有效量能持续很多小时，从而有助于每日一次的剂量。 另外，持续释放避免了化合物快速释放时产生的急性毒性问题。
尽管大鼠可认为是一种很好的用于预测人体内核苷的生物利用率 的动物模型，但是本发明化合物(实施例34)的各自的生物利用率的 确定是通过≈11.5千克雄性和雌性警犬进行的，以0.05毫摩尔/千克 (38毫克/千克)化合物水剂口服或以0.005毫摩尔/千克(1.35毫 克/千克)代谢物水剂静脉注射。血浆的收集和分析如上所述。
雄犬    12小时后绝对生物利用率    51％
雌犬    12小时后绝对生物利用率    74％ 生物实施例2 抗病毒活性-逆转录病毒
通过生物实施例1所描述的方法证明本发明的化合物在活体内释 放了代谢物2′3′-双脱氧-3′-氟鸟苷。因此，该代谢物在体外测定的抗 病毒活性将反映本发明化合物的实际活性。
Koshide等在Antimicrob Agents Chemother 33 778-780(1989) 中所述的XTT染料摄入分析中利用了MT4细胞的XYY染料摄入分析，， 上述生物实施例1测定的代谢物显示了下列在体外的抗逆转录病毒活 性。
表2     HIV或逆转录病毒菌株         IC50*     HIV-1IIIB     HIV-12442AZTr     HIV-1IIIBTIB0r     HIV-I29/9     HIV-2SBL6669     SIVSM     1微克/毫升     1微克/毫升     1微克/毫升     0.7微克/毫升     2微克/毫升     1微克/毫升
*引起50％抑制病毒复制的代谢物浓度。
因此很明显，摄入本发明的化合物对抗逆转录病毒HIV-1，HIV-2 和SIV产生了强大的抗病毒活性。同时根据HIV-12441AZTr和HIV- 1IIIBTIBOr的结果，应注意到本发明化合物的抗病毒活性没有显示抗HIV 菌株的交叉阻力，而这些菌株对其它HIV剂如核苷类AZT或非核苷逆 转录酶抑制剂TIBO是抗药性的。 生物实施例3 抗病毒活性-HBV
在鸭子体内对于鸭子的乙型肝炎病毒(DHBV)的抗病毒活性是一 种验证人体内乙型肝炎病毒活性的公认的动物模型。上述生物实施例 2中测定的活体内代谢物的活性已按照Sherker等在(1986) Gastroenterology 91，818-824页所描述的DHBV模型进行了测定。 结果如附图1和2所示，4只对照的鸭子用磷酸盐缓冲生理盐水(PBS) 处理，另4只鸭子以5毫克/千克/天的量摄入活性代谢物，当种入DHBV 后，鸭子能活两天，而得到治疗的鸭子能活18天。十天内每天两次， 早8点和下午4点腹膜内注射代谢物和PBS(对照)。治疗持续33天， 动物在治疗结束后仍活了5周。
用放射性探针，通过DHBV DNA的斑点印迹杂交，进行疗效跟踪， 并以测定的放射性杂交的量作为DHBV的量。附图1绘制了治疗之前， 期间以及之后的不同时间点血清中DHBV DNA的量。
如附图1所示，在用PBS(对照，实线)处理期间DHBV的量没有 降低。给予生物实施例2中测定的代谢物(虚线)的动物显示了在治 疗的前十天内，血清中DHBV量急剧降低，此后，在治疗的剩余时间中， 以5毫克/千克/天给药的DHBV的浓度低于检测限。以30和3毫克/ 千克/天剂量重复实验，在先天感染的鸭子中(未显示)也得到了同样 的结果，即血清中DHBV DNA急剧降至检测限以下。尽管以3毫克/千 克/天的低剂量，代谢物也能在活体内产生了相当大的DHBV抑制作用。 治疗完毕后，病毒在血清中再次出现，如附图1所示，在慢性乙型肝 炎病毒感染的人类和动物中很早就观察到用常用的抗病毒剂短期治疗 后，HBV重新出现。
如附图2所示，鸭子的重量和对照组(用PBS治疗)动物同样增 加。在治疗期间观察到重量从约270克增至约800克，其增重之大， 使人认为，假如存在毒性的话，其生长速率会有显而易见的变化。对 于接受30毫克/千克/天的更高剂量的鸭子也可观察到相同的生长曲 线。因此该代谢物很明显是无毒的。由于本发明的化合物在活体内水 解生成这种代谢物，如上述实施例2所述，以及与性质相同、易于代 谢的脂肪酸，可以推断，给药本发明化合物不会引起长期的毒性问题。
口给药本发明的化合物而不引起急性(短期)毒性在上述生物实 施例2得到证实。 制剂实施例1 片剂制剂
用0.15毫米的筛将下述组分过筛，并干法混合
10克2′3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-缬氨酰氧基)-2丙氧 基羰基丙酰基]鸟苷
40克                 乳糖
49克                 结晶纤维素
1克                  硬脂酸镁
用压片仪将混合物压制成含250毫克活性组分的片剂. 制剂实施例2 肠溶衣片剂
在片剂包衣器中用含下述组分的溶液将制剂实施例1的片剂喷涂 包衣：
120克                乙基纤维素
30克                 丙二醇
10克                 脱水由梨醇一油酸酯
              加入1000毫升蒸馏水 制剂实施例3 控释制剂
50克    2′3′-双脱氧-3′-氟-5′-0-[5-(L-缬氨酰氧基甲基)-6硬 脂酰氧基己酰基]鸟苷
12克  羟丙基甲基纤维素(Methocell K15)
4.5克 乳糖
干法混合，并用聚维酮的水糊成粒。加入硬脂酸镁(O.5克)， 混合物在压片仪中制成含500毫克活性剂的13毫米直径的片剂。 制剂实施例4 软胶囊
50克    2′3′-双脱氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-缬氨酰氧基甲基)- 6硬脂酰氧基己酰基]鸟苷
100克       卵磷脂
100克       花生油
本发明化合物分散在卵磷脂和花生油中，并装入软凝胶的胶囊中。