포유류 아난다미드 운반물질을 억제하는 아민, 및 이의사용 방법

포유류 아난다미드 운반물질을 억제하는 아민, 및 이의 사용 방법 {AMINES THAT INHIBIT A MAMMALIAN ANANDAMIDE TRANSPORTER, AND METHODS OF USE THEREOF}

포유류 내인성 칸나비노이드 시스템

포유류 내인성 칸나비노이드 시스템 (ECS)의 다양한 요소는 일반적으로 칸나비노이드로 명명되는 광범위한 화합물군에 대한 다양한 약리학적 표적을 구성한다. 이들 요소 중에는 두 가지 유형의 G-단백질 결합된 막 수용체인 중추 CB ₁ 수용체 (Matsuda, LA; Lolait, SJ; Brownstein, MJ; Young, AC; Bonner, TI Structure of a Cannabinoid Receptor and Functional Expression of the Cloned cDNA. Nature 1990, 346, 561-564)와 말초 CB ₂ 수용체 (Munro, S.; Thomas, KL; Abu-Shaar, M. Molecular Characterization of a Peripheral Receptor for Cannabinoids. Nature 1993, 365, 61-65)가 포함된다.

또한, ECS의 요소 중에는 내인성 리간드 아난다미드 (Devane, WA; Hanus, L.; Breuer, A.; Pertwee, RG; Stevenson, LA; Griffin, G.; Gibson, D.; Mandelbaum, A.; Etinger, A.; Mechoulam, R. Isolation and Structure of a Brain Constituent That Binds to the Cannabinoid Receptor. Science 1992, 258, 1946-1949), 2-아라키도노일글리세롤 (Sugiura, T.; Kondo, S.; Sukagawa, A.; Nakane, S.; Shinoda, A.; Itoh, K; Yamashita, A.; Waku, K. 2-Arachidonoylglycerol: a Possible Endogenous Cannabinoid Receptor Ligand in Brain. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995, 215, 89-97), 및 최근 보고된 2-아라키도닐 글리세릴 에테르 (Hanus, L.; Abu-Lafi, S.; Fride, E.; Breuer, A.; Vogel, Z.; Shalev, DE; Kustanovich, I.; Mechoulam, R. 2-Arachidonyl Glyceryl Ether, an Endogenous Agonist of the Cannabinoid CBI Receptor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98, 3662-3665)가 포함된다. 캐리어 매개성 운반 시스템 (아난다미드 운반물질 (AT)) 및 지방산 아미드 가수분해효소 (FAAH)라고 명명되는 가수분해 효소로 구성된 내인성 리간드의 생물학적 활성의 종결 메커니즘이 밝혀졌다 [Hillard, CJ; Edgemond, WS; Jarrahian, A; Campbell, WB Accumulation of N-Arachidonoylehanolamine (Anandamide) into Cerebellar Granule Cells Occurs via Facilitated Diffusion. J. Neurochem. 1997, 69, 631-638; Beltramo, M.; Stella, N.; Calignano, A.; Lin, SY; Makriyannis, A.; Piomelli, D. Functional Role of High-Affinity Anandamide Transport, as Revealed by Selective Inhibition. Science 1997, 277, 1094-1097; Hillard, CJ; Jarrahian, A. The Movement of N- arachidonoylethanolamine (Anandamide) across Cellular Membranes. Chem. Phys. Lipids 2000, 108, 123-134; and Ueda, N.; Puffenbarger, RA; Yamamoto, S.; Deutsch, DG The Fatty Acid Amide Hydrolase (FAAH). Chem. Phys. Lipids 2000, 108, 107-121].

중요하게는, ECS는 광범위하게 다양한 중추적 및 말초적 작용의 조절, 예를 들어 항-통각, 뇌 발달, 역행 신경세포 신호전달, 기억, 식욕, 정신운동 조절, 심혈관 및 면역 조절, 및 세포 증식에 관여하는 것으로 여겨진다 [참조: (a) Calignano, A.; La Rana, G.; Giuffrida, A.; Piomelli, D. Control of Paul Initiation by Endogenous Cannabinoids. Nature 1998, 394, 277-281; (b) Walker, JM; Hohmann, AG; Martin, WJ; Strangman, NM; Huang, SM; Tsou, K The Neurobiology of Cannabinoid Analgesia. Life Sci. 1999, 65, 665-673; (c) Fernandez-Ruiz, J.; Berrendero, F.; Hernandez, ML; Ramos, JA The Endogenous Cannabinoid System and Brain Development. Trends Neurosci. 2000, 23, 14-20; (d) Wilson, RI; Nicoll, RA; Endogenous Cannabinoids Mediate Retrograde Signaling at Hippocampal Synapses. Nature 2001, 410, 588-592; (e) Hampson, RE; Deadwyler, SA Cannabinoids, Hippocampal Function and Memory. Life Sci. 1999, 65, 715-723; (f) Di Marzo, V.; Goparaju, S. K; Wang, L.; Liu, J.; Batkai, S.; Jarai, Z.; Fezza, F.; Miura, GI; Palmiter, RD; Sugiura, T.; Kunos, G. Leptin-Regulated Endocannabinoids Are Involved in Maintaining Food Intake. Nature 2001, 410, 822-825; (g) Giuffrida, A.; Piomelli, D. The Endocannabinoid System: a Physiological Perspective on its Role in Psychomotor Control. Chem. Phys. Lipids 2000, 108, 151-158; and (h) De Petrocellis, L.; Melck, D.; Bisogno, T.; Di Marzo, V. Endocannabinoids and Fatty Acid Amides in Cancer, Inflammation and Related Disorders. Chem. Phys. Lipids 2000, 108, 191-209]. 이러한 광범위한 작용 범위는 ECS를 천식, 통증, 다발성 경화증, 악성 신경교종, 및 신경퇴행성 질병을 포함하는 다양한 질병의 치료를 위한 중요한 치료적 표적이 되게 한다 [참조: (a) Calignano, A.; Katona, I.; Desamaud, F.; Giuffrida, A.; La Rana, G.; Mackie, K; Freund, TF; Piomelli, D. Bidirectional Control of Airway Responsiveness by Endogenous Cannabinoids. Nature 2000, 408, 96-101; (b) Baker, D.; Pryce, G.; Croxford, JL; Brown, P.; Pertwee, RG; Huffman, JW; Layward, L. Cannabinoids Control Spasticity and Tremor in a Multiple Sclerosis Model. Nature 2000, 404, 84-87; (c) Galve-Roperh, I.; Sanchez, C.; Cortes, ML; Gomez del Pulgar, T.; Izquierdo, M.; Guzman, M. Antitumoral Action of Cannabinoids: Involvement of Sustained Ceramide Accumulation and Extracellular Signal-Regulated Kinase Activation. Nat. Med. 2000, 6, 313-319; and (d) Pertwee, RG Pharmacology of Cannabinoid Receptor Ligands. Curr. Med. Chem. 1999, 6, 635-664].

더욱이, 포유류 세포에서 엔도칸나비노이드의 증가된 수준은, 이들의 흡수 및/또는 분해를 억제하여 통상적인 효능제를 사용하여 칸나비노이드 수용체를 직접 활성화시키지 않고 국소 칸나비의태 효과를 생성시킬 가능성을 높여서, 이들의 관련된 바람직하지 못한 부작용을 방지함으로써 수득될 수 있다. 따라서, 합성 억제제는 낮은 엔도칸나비노이드 활성을 특징으로 하며 직접 효능제가 효과적인 것으로 판명되었지만 여전히 바람직하지 못한 효과를 생성시키는 질환을 치료하는 데에 잠재적인 치료적 가치를 지닐 수 있다 (Piomelli, D.; Giuffrida, A.; Calignano, A; Rodriguez de Fonseca, F. The Endocannabinoid System as a Target for Therapeutic Drugs. Trends Pharmacol. Sci. 2000, 21, 218-224). 특히, 이러한 흡수 억제제의 치료적 유용성은 헌팅톤 무도병 또는 다발성 경화증과 같은 다양한 질병을 치료하기 위해 고려되었다 ( Baker, D.; Pryce, G.; Croxford, JL; Brown, P.; Pertwee, RG; Makriyannis, A.; Khanolkar, A.; Layward, L.; Fezza, F.; Bisogno, T; Di Marzo, V. Endocannabinoids Control Spasticity in a Multiple Sclerosis Model. FASEB J. 2001, 15, 300-302).

아난다미드

일반적으로, 칸나비노이드 효능제는 외인성 활성 분자 뿐만 아니라 엔도칸나비노이드도 포함한다. 외인성 효능제는 보통 통상적인 칸나비노이드 (칸나비스 사티바 ( Cannabis sativa ) 유래된 화합물, 예를 들어 △ ⁹ -THC 및 이들의 유사체), 비통상적인 칸나비노이드 (통상적인 칸나비노이드의 특징적인 트리시클릭 구조가 없음, 예를 들어 CP55940), 및 아미노알킬인돌 (예를 들어, WIN552122)로 분류되며, 내인성 칸나비노이드는 에이코사노이드 부류에 속한다. 길항제 중에서, 디아릴피라졸이 가장 광범위하게 사용되는 화합물로서 특히 언급된다 (Pertwee, RG Cannabinoid Receptor Ligands: Clinical and Neuropharmacological Considerations, Relevant to Future Drug Discovery and Development. Expert Opin. Invest. Drugs 2000, 9, 1-19).

아난다미드 (아라키도닐에탄올아미드)는 뇌 칸나비노이드 수용체를 활성화시 키고, 하쉬쉬 및 마리화나의 활성 성분인 △ ⁹ -테트라히드로칸나비놀의 약리학적 효과를 의태하는 내인성 지질이다 (WA Devane et at., Science 258, 1946 (1992); and R. Mechoulam, L. Hanus, BR Martin, Biochem. Pharmacol. 48, 1537 (1994)). 인간의 경우, 이러한 효과로는 다행감, 평온함, 몽환 상태 및 나른함이 있다 (WL Dewey, Pharmacol. Rev. 38, 151 (1986)). 탈분극된 신경세포는 신경세포 막에서 인지질 전구체의 칼슘 의존성 분해를 필요로 할 수 있는 메커니즘을 통해 아난다미드를 방출한다 (V. Di Marzo et al., Nature 372, 686 (1994); and H. Cadas, S. GaiUet, M. Bettramo, L. Venance, D. Piomelli, J. Neurosci. 16, 3934 (1996); T. Sugiura et al., Eur. J. Biochem. 240, 53 (1996); and H. Cadas, E. di Tomaso, D. Piomelli, J. Neurosci., 17, 1226 (1997)). 더욱이, 아난다미드는 인식 및 감정의 조절에 관여하는 신규한 시스템의 주요 성분으로서 작용할 수 있다 실제로, 생리학적 실험 결과, 아난다미드가 건강 및 질병에서 인간의 뇌 기능을 조절하는 데에 있어서 도파민 및 세로토닌과 같은 그 밖의 보다 잘 이해된 신경전달물질 만큼 중요할 수 있는 것으로 밝혀졌다.

아난다미드는 수용체 자극에 반응하여 신경세포의 막 구획으로부터 방출된다. 특히, D2 아고니즘(agonism)이 아난다미드 방출을 자극한다. 래트 뇌 신경세포의 연구에서, 아난다미드는 독특한 메커니즘에 의해 방출되는 것으로 단정되었는데, 이는 칼슘- 및 활성-의존성 효소 반응에 의해 분해되는 인지질 전구체의 형태로 세포막에 저장된다. N-아라키도노일 포스파티딜에탄올아민 (NAPE)는 NAPE의 포 스포디에스테라아제 매개성 분해에 의해 형성되는 아난다미드의 전구물질로서 확인되었다. NAPE의 생합성은 N-아실트랜스퍼라아제 효소에 의해 촉매되는데, 이러한 효소는 특징화되어 있고, 래트 뇌 추출물로부터 부분적으로 정제되었다. NAPE의 형성 및 아난다미드를 형성하기 위한 이의 분해는 고도로 조절되는 작용이며, 이는 뇌의 선택 영역에서 일어난다.

그 밖의 조절 물질과 같이, 세포외 아난다미드는 신속하게 비활성화되는 것으로 생각된다. 앞 부분에서 약술한 바와 같이, 이 경로는 래트 뇌 및 간에서 고도로 발현되는 막 결합된 지방산 아미드 가수분해효소 (FAAH)에 의해 촉매되는 아라키돈산 및 에탄올아민으로의 가수분해를 포함한다 (DG Deutsch and S. Chin, Biochem. Pharmacol. 46, 791 (1993); F. Desamaud, H. Cadas, O. Piomelli, J. Biol. Chem. 270, 6030 (1995)). 그럼에도 불구하고, 뇌 혈장 막에서 발견되는 낮은 FAAH 활성은 이러한 효소가 세포내에 있을 수 있음을 나타내며, 이는 래트 FAAH의 서열 분석에 의해 추가로 뒷받침되는 가능성이다 (Cravatt et al., Nature 354, 83 (1996)). 아난다미드가 수동 확산에 의해 FAAH에 접근할 수 있다고 하더라도, 이러한 메커니즘의 전달 속도는 이러한 지질 매개물질의 분자 크기로 인해 느릴 것으로 예측된다 (WD Stein, Channels and Pumps. An Introduction to Membrane Transport, (Academic Press, San Diego, 1990), pp. 53-57). 다가불포화 지방산 및 프로스타글란딘 E ₂ (PGE ₂ )를 포함하는 그 밖의 지질은 캐리어 매개성 운반에 의해 세포에 진입한다 (LZ Bito, Nature 256, 1234 (1975); JE Schaffer and HF Lodish, Cell 79, 427 (1994); IN Bojesen and E. Bojesen, Acta Physiol. Scand. 156, 501 (1996); N. Kanai et al., Science 268, 866 (1995)). 상기 언급된 바와 같이, 아난다미드 운반물질을 통한 신경세포내로의 신속하고 포화성인 아난다미드 축적 작용이 보고되었다 (V. Di Marzo et al., Nature 372, 686 (1994)).

아난다미드의 생물학적 효과를 종결시키는 데에 필요한 이의 비활성화는 두 단계로 일어난다. 먼저, 아난다미드는 이를 세포내로 운반하는 선택적 캐리어 단백질에 의해 세포외 공간으로부터 이동된 후, 효소 아난다미드 아미도가수분해효소에 의해 촉매되는 가수분해에 의해 생물학적 비활성 화합물로 분해된다. 이러한 효소의 효능있는 억제제가 확인되었고 (브로모에놀 락톤, BTNP), 이의 이용가능성은 아난다미드 작용의 약리학적 분석을 용이하게 해준다. 고친화성 아난다미드 운반물질은 래트 피질 신경세포 및 성상세포에서 특징화되었다. 칸나비노이드 수용체에 결합하지 않거나 아난다미드 가수분해에 영향을 미치지 않고 상기 운반을 선택적으로 및 효능있게 억제하는 화합물 (N-(4-히드록시페닐)아라키도닐아미드)이 발견되었다. 이러한 운반 시스템은 프로스타글란딘 흡수 시스템과 유사하지만 이와는 구별되는 신규한 지질 흡수 시스템을 구성하는 것으로 여겨진다. 또한, 이들 억제제를 사용하는 것은 아난다미드 운반이 시험관내 및 생체내 둘 모두에서 아난다미드의 생물학적 비활성화에서 속도 제한 단계를 구성함을 입증할 수 있게 하였다. 아난다미드 수준이 조절되는 방식을 이해하는 것이 중요한데, 이는 조절이상이 뇌 기능부전을 초래할 수 있기 때문이다.

아난다미드 및 도파민은 등쪽 선조체라 명명되는 뇌의 영역에서의 이동을 조절하기 위해 상반된 방식으로 작용하는 것으로 여겨지는데, 도파민은 이러한 영역에서 작용함으로써 이동을 자극하고, 아난다미드는 이러한 도파민의 작용을 명백히 억제한다. 아난다미드가 도파민을 중화시킬 수 있다는 단정은 뇌에서 도파민 불균형을 수반하는 것으로 여겨지는 질병을 치료하기 위한 약제의 개발에 유용한 것으로 판명된다. 특정 질병은 특정한 뇌 영역에서의 너무 많은 도파민, 또는 아마도 도파민에 의해 표적화된 뇌 부위의 과민성에 의해 초래되는 것으로 여겨진다. 이러한 질병들로는 안면 경련, 단어와 어구의 반복 및 조절불가능한 음담의 외침을 특징으로 하는 뚜레 증후군 및 정신분열증이 있다. 아난다미드를 의태하는 약물은 도파민 과다작용을 약화시킴으로써 이들 질병 및 그 밖의 질병의 증상을 감소시킬 수 있다. 또한, 뇌에서 아난다미드 작용을 차단하는 약물은 특정 뇌 영역에서의 너무 적은 도파민, 또는 도파민 표적의 과민성과 관련된 것으로 여겨지는 질병을 치료하는 데에 유용한 것으로 판명될 수 있다. 이들 질병은 약물 중독 및 파킨슨병을 포함한다.

래트의 경우, AT 억제제인 AM404는 뇌에서 방출된 아난다미드의 수명을 연장시키며, 도파민 D2 아고니즘의 정신운동 효과를 감소시킨다. 고통스러운 자극은 래트에서 아난다미드 방출을 초래하며, 이는 CB1 수용체의 아고니즘을 통해 뇌의 배측면 수도관주위 회색 영역에서 천연 진통 반응을 매개한다. 다양한 생체내 모델에서, AM404는 칸나비노이드 CB1 수용체 길항제인 SR-141716A에 의해 가역적인 약하고 서서히 진행하는 운동감소증을 일으켰다. 또한, AM404는 용량 의존적 방식으로 아포몰핀 유도된 하품을 억제하였고, 이러한 효과는 SR-141716A에 의해 마찬가지로 역전되었다. 더욱이, AM404는 선택적 도파민 D2 효능제인 퀸피롤에 의해 유도된 운동 행동 자극을 감소시켰고, ADHD의 래트 모델에서 과잉운동증을 감소시켰다. AM404는 AT를 억제하지만 (IC ₅₀ 약 2μM), 이의 낮은 효능 및 특이성으로 인해 약물 후보체로서 부적합하다. AM404의 낮은 효능 및 특이성은 이의 아라키노닐 부분에 기인하는 것으로 여겨진다. 또한, 시험관내 검정을 이용하여, 연구자들은 페닐메틸설포닐 플루오라이드 (PMSF)가 아난다미드의 분해를 억제할 수 있음을 밝혀내었다. 또한, 아미다아제를 억제하며 PMSF 보다 더 효능있고 선택적인 일련의 지방산 설포닐 플루오라이드가 확인되었다 (Deutsch, DG et al. "Fatty acid sulfonyl fluorides inhibit anandamide metabolism and bind to the cannabinoid receptor" Biochemical and Biophysical Research Communications 1997, 231, 217-221).

흥미롭게도, 아난다미드 및 구조적으로 관련된 지질이 1차 감각 신경에 대한 바닐로이드 수용체의 활성을 조절하는 것으로 보고되었다 (미국 특허 출원 공개 번호 US 2002/0019444A1). 이러한 발견은 의학, 약학 및 학술 분야에서 많은 관련성을 지니며, CB1 수용체 매개성이 아닌 아난다미드의 혈관확장 작용에 대한 분자 메커니즘을 제공한다. 카테리나(Caterina) 등에 의해 최근 클로닝된 바닐로이드 수용체(VR1) (Caterina, MJ et al., The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway., Nature 389, 816-824 (1997))는 캅사이신 감수 성이고, 열 개폐되고, 비선택적인 양이온 채널이다. 카테리나 등의 연구 및 후속 연구는 VR1이 1차 감각 신경세포의 서브셋에서 독특하게 발현됨을 확증하였으며 (Tominaga K, Caterina MJ, Mahnberg AB, Rosen TA, Gilbert H, Skinner K, Raumann BE, Basbaum AI, Julius D., The cloned capsaicin receptor integrates multiple pain-producing stimuli., Neuron 21, 531-543 (1998)), 상기 감각 신경세포는 인간 및 동물에 광범위하게 분포되어 있다 (Holzer P., Capsaicin: cellular targets, mechanisms of action, and selectivity for thin sensory neurons, Pharmacol Rev 43, 143-201 (1991)).

발명의 요약

본 발명의 한 가지 양태는 아민에 관한 것이다. 본 발명의 두 번째 양태는 포유류 아난다미드 운반물질의 억제제로서의 아민의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 천식, 신경병적 통증, 지속통, 염증성 통증, 과잉운동증, 고혈압, 뇌허혈, 파킨슨병, 근긴장, 뚜레 증후군, 정신분열증, 출혈성 쇼크, 패혈성 쇼크, 심장 쇼크, 편두통, 집락성 두통, 다발성 경화증, 식욕결핍증, AIDS 소모성 증후군, 장기 거부반응, 자가면역 질병, 알레르기, 관절염, 크론병, 악성 신경교종, 신경퇴행성 질병, 헌팅턴 무도병, 녹내장, 메스꺼움, 불안증, 정신병, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 조루증 또는 뇌졸중을 포함하지만 이들에 제한되지 않는, 포유류에 고통을 주는 다수의 병, 질환 및 질병을 치료하는 데에 또한 사용된다. 본 발명의 또 다른 양태는 아민의 조합 라이브러리, 및 이러한 라이브러리를 제조하는 방법에 관한 것이다.

도 1은 신나밀 부분을 포함하는 아난다미드 운반물질 억제제의 조합 라이브러리의 합성 및 96개의 구성원을 개략적으로 도시한다.

도 2는 4-알릴옥시벤질 부분을 포함하는 아난다미드 운반물질 억제제의 조합 라이브러리의 합성 및 96개의 구성원을 개략적으로 도시한다.

도 3은 실시예 5에 기재된 검정을 이용하여 결정된, 본 발명의 특정 화합물들 및 포유류 아난다미드 운반물질에 대한 이들의 IC ₅₀ 값을 도시한다.

도 4는 실시예 5에 기재된 검정을 이용하여 결정된, 본 발명의 특정 화합물들 및 포유류 아난다미드 운반물질에 대한 이들의 IC ₅₀ 값을 도시한다.

도 5는 실시예 5에 기재된 검정을 이용하여 결정된, 본 발명의 특정 화합물들 및 포유류 아난다미드 운반물질에 대한 이들의 IC ₅₀ 값을 도시한다.

도 6은 아난다미드 및 본 발명의 특정 화합물의 생체내에서의 항-외상수용 효과를 개별적으로 및 조합하여 그래프식으로 도시한다. 실시예 7 참조.

발명의 상세한 설명

본 발명자들은 칸나비노이드 아고니즘의 치료적 이점이 방출된 아난다미드의 신경세포외(extraneuronal) 수명을 연장시킴으로써 장기화될 수 있음을 발견하였다. D2 수용체의 기능항진을 특징으로 하는 정신병은 아난다미드 방출에 의한 네거티브 피드백에 의해 약화되며, 아난다미드의 신경세포외 수명을 연장시킴으로써 예방될 수 있다.

본 발명의 한 가지 양태는 신규한 아민에 관한 것이다. 본 발명의 두 번째 양태는 포유류 아난다미드 운반물질의 억제제로서의 이러한 신규한 아민의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 천식, 신경병적 통증, 지속통, 염증성 통증, 과잉운동증, 고혈압, 뇌허혈, 파킨슨병, 근긴장, 뚜레 증후군, 정신분열증, 출혈성 쇼크, 패혈성 쇼크, 심장 쇼크, 편두통, 집락성 두통, 다발성 경화증, 식욕결핍증, AIDS 소모성 증후군, 장기 거부반응, 자가면역 질병, 알레르기, 관절염, 크론병, 악성 신경교종, 신경퇴행성 질병, 헌팅턴 무도병, 녹내장, 메스꺼움, 불안증, 정신병, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 조루증 또는 뇌졸중을 포함하지만 이들에 제한되지 않는, 포유류에 고통을 주는 다수의 병, 질환 및 질병을 치료하는 데에 또한 사용된다. 본 발명의 또 다른 양태는 이러한 신규한 아민의 조합 라이브러리, 및 이러한 라이브러리를 제조하는 방법에 관한 것이다.

정의

편의상, 상세한 설명, 실시예 및 첨부된 청구의 범위에 사용되는 특정 용어들을 여기서 설명한다.

"아난다미드"란 용어는 하기 구조식을 지니는 N-(2-히드록시에틸)아라키돈아미드를 의미한다:

"AM404" 및 "AM-404"란 용어는 하기 구조식을 지니는 N-(4-히드록시페닐)아 라키돈아미드를 의미한다:

"세포 표면 단백질"이란 용어는 세포의 표면상에 존재하고, 세포외 환경과 상호작용하며, 환경에 대한 정보를 세포내적으로 전달하거나 도입시키는 분자를 포함한다.

"세포외 신호"란 용어는 신호와 직접 또는 간접 상호작용하는 세포 표면 단백질을 통해 세포내적으로 도입되는 환경내의 변화 또는 분자를 포함한다. 세포외 신호는 일정한 방식으로 특히 세포 표면 단백질의 활성을 변경시키는 임의의 화합물 또는 물질이다. 이러한 신호의 예로는, 세포 표면 수용체 및 이온 채널에 결합하여 이러한 수용체 및 채널의 활성을 조절하는, 아세틸콜린, 성장 인자, 호르몬 및 포르볼 미스트릭 아세테이트 (PMA)와 같은 그 밖의 유사분열촉진 물질과 같은 분자가 있다. 또한, 세포외 신호는 세포 표면 단백질의 활성을 조절하여 세포내 기능에 영향을 미치며, 특정한 세포 표면 수용체의 활성을 조절함으로써 특정 질병을 치료하는 데에 사용될 수 있는 잠재적 약리학적 작용제인 아직 미확인된 물질을 포함한다.

"ED ₅₀ "이란 용어는 최대 반응 또는 효과의 50%를 나타내는 약물의 용량을 의미한다. 또한, 이는 시험 피검체 또는 제제(preparation)의 50%에서 소정의 반응 을 나타내는 용량이다.

"LD ₅₀ "이란 용어는 시험 피검체의 50%를 치사시키는 약물의 용량을 의미한다.

"치료 지수"란 용어는 LD ₅₀ /ED ₅₀ 으로서 정의되는 약물의 치료 지수를 의미한다.

"구조-활성 관계 (SAR)"란 용어는 약물의 분자 구조를 변경시켜서 이러한 약물과 수용체, 효소 등과의 상호작용을 변경시키는 방법을 의미한다.

"효능제"란 용어는 천연 전달물질의 작용을 의태하거나, 천연 전달물질이 알려지지 않은 경우에 그 밖의 수용체 리간드의 부재하에서 수용체 복합체에서 변화를 일으키는 화합물을 의미한다.

"길항제"란 용어는 수용체 부위에 결합하지만, 또 다른 수용체 리간드가 존재하지 않는 경우에 임의의 생리학적 변화를 일으키지 않는 화합물을 의미한다.

"경합적 길항제"란 용어는 수용체 부위에 결합하는 화합물로서, 이의 효과가 효능제의 농도 증가에 의해 압도될 수 있는 화합물을 의미한다.

"부분적 효능제"란 용어는 수용체 부위에 결합하지만 이의 농도와 무관하게 최대 효과를 나타내지 못하는 화합물을 의미한다.

"인버스(inverse) 효능제"란 용어는 구성적으로 활성인 수용체 부위에 결합하여 이의 생리학적 기능을 감소시키는 화합물을 의미한다.

"리간드"란 용어는 수용체 부위에서 결합하는 화합물을 의미한다.

본원에 사용된 "헤테로원자"란 용어는 탄소 또는 수소 이외의 임의의 원소의 원자를 의미한다. 바람직한 헤테로원자는 붕소, 질소, 산소, 인, 황 및 셀레늄이다.

용어 "전자 끄는 기"는 본 기술 분야에 인식되어 있으며, 이웃하는 원자로부터 원자가 전자를 끌어 당기는 치환체의 경향을 의미한다. 즉, 치환체는 이웃하는 원자에 대해 전자적으로 음성이다. 전자 끄는 용량 수준의 정량화는 하메트 시그마(σ)상수에 의해서 주어진다. 이러한 공지된 상수는 많은 참조문헌, 예를 들어, 문헌[J. March, Advanced Organic Chemistry , McGraw Hill Book Company, New York, (1997 edition) pp. 251-259]에 기재되어 있다. 하메트 상수값은 전자 주는 기의 경우 일반적으로 음성(NH ₂ 의 경우 σ[P] = -0.66)이고, 전자 끄는 기의 경우 양성(니트로기의 경우 σ[P] = 0.78)이며, σ[P]는 파라치환을 나타낸다. 예시적인 전자 끄는 기에는 니트로, 아실, 포르밀, 설포닐, 트리플루오로메틸, 시아노, 및 클로라이드 등이 포함된다. 예시적인 전자 주는 기에는 아미노, 및 메톡시 등이 포함된다.

용어 "알킬"은 직쇄 알킬기, 분지쇄 알킬기, 시클로알킬(지환족)기, 알킬 치환된 시클로알킬기 및 시클로알킬 치환된 알킬기를 포함한 포화된 지방족 그룹의 라디칼을 의미한다. 바람직한 양태에서, 직쇄 또는 분지쇄 알킬은 이의 골격에 30개 이하의 탄소원자(예를 들어, 직쇄의 경우 C ₁ 내지 C ₃₀ , 분지쇄의 경우 C ₃ 내지 C ₃₀ )를 지니며, 더욱 바람직하게는 20개 이하의 탄소원자를 지닌다. 유사하게, 바람직한 시클로알킬은 이의 고리 구조에 3 내지 10 개의 탄소원자를 지니며, 더욱 바람직하게는 고리 구조에 5, 6 또는 7 개의 탄소를 지닌다.

탄소원자 수가 달리 명시되지 않으면, 본원에 사용된 용어 "저급 알킬"은 상기된 바와 같은 알킬기를 의미하지만, 이의 골격 구조에 1 내지 10개의 탄소원자, 더욱 바람직하게는 1 내지 6 개의 탄소원자를 지닌다. 유사하게, "저급 알케닐 및 저급 알키닐"은 유사한 탄소 길이를 지닌다. 바람직한 알킬기는 저급 알킬기이다. 바람직한 양태에서, 알킬기로 본원에서 명명된 치환체는 저급 알킬이다.

본원에 사용된 용어 "아르알킬"은 아릴기(예를 들어, 방향족 또는 헤테로방향족 기)로 치환된 알킬기를 의미한다.

용어 "알케닐" 및 "알키닐"은 길이 및 가능한 치환에 있어서 상기된 알킬과 유사한 불포화된 지방족을 의미하지만, 각각 하나 이상의 이중 및 삼중 결합을 함유한다.

본원에 사용된 용어 "아릴"은 0 내지 4 개의 헤테로원자를 함유할 수 있는 5-, 6- 및 7-원 단일 고리 방향족기, 예를 들어, 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 피렌, 피롤, 푸란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진 및 피리미딘 등이 있다. 고리 구조에 헤테로원자를 지니는 이들 아릴기는 "아릴 헤테로사이클" 또는 "헤테로방향족"이라 칭할 수 있다. 방향족 고리는 하나 이상의 고리 위치에서 상기된 바와 같은 치환체, 예를 들어, 할로겐, 아지드, 알킬, 아르알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 히드록시, 알콕실, 아미노, 니트로, 설프히드릴, 이미노, 아미도, 포스포네이트, 포스피네이트, 카르보닐, 카르복실, 실릴, 에테르, 알킬티오, 설포닐, 설폰아미도, 케톤, 알데히드, 에스테르, 헤테로시클릴, 방향족 또는 헤테로방향족 부분, -CF ₃ , 또는 -CN 등으로 치환될 수 있다. 용어 "아릴"은 또한 둘 이상의 시클릭 고리를 지니는 폴리시클릭 고리 시스템을 포함하며, 이러한 고리 시스템에서는 둘 이상의 탄소가 두 개의 인접한 고리에서 공통(고리가 "융합된 고리"이다)이며, 여기에서, 하나 이상의 고리가 방향족이며, 예를 들어, 다른 시클릭 고리는 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알키닐, 아릴 및/또는 헤테로시클릴일 수 있다.

용어 "오르토", "메타", 및 "파라"는 각각 1,2-, 1,3- 및 1,4-이치환된 벤젠이다. 예를 들어, 즉, 1,2-디메틸벤젠과 오르토-디메틸벤젠은 동의어이다.

용어 "헤테로시클릴" 또는 "헤테로시클릭기"는 3- 내지 10-원 고리 구조, 더욱 바람직하게는 3- 내지 7-원 고리이며, 이들의 고리 구조는 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함한다. 헤테로사이클은 또한 폴리사이클일 수 있다. 헤테로시클릴기는 예를 들어, 아제티딘, 아제핀, 티오펜, 티안트렌, 푸란, 피란, 이소벤조푸란, 크로멘, 크산텐, 페녹사티인, 피롤, 이미다졸, 피라졸, 이소티아졸, 이속사졸, 피리딘, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 인돌리진, 이소인돌, 인돌, 인다졸, 푸린, 퀴놀리진, 이소퀴놀린, 퀴놀린, 프탈라진, 나프티리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 시놀린, 프테리딘, 카르바졸, 카르볼린, 페난트리딘, 아크리딘, 피리미딘, 페난트롤린, 페나진, 페날사진, 페노티아진, 푸라잔, 페녹사진, 피롤리딘, 옥솔란, 티올란, 옥사졸, 피페리딘, 피페라진, 모르폴린, 락톤, 락탐, 예컨대, 아제티디논 및 피롤리디논, 설 탐, 및 설톤등을 포함한다. 헤테로시클릭 고리는 하나 이상의 위치에서 상기된 바와 같은 치환체, 예를 들어, 할로겐, 알킬, 아르알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 히드록실, 아미노, 니트로, 설프히드릴, 이미노, 아미도, 포스포네이트, 포스피네이트, 카르보닐, 카르복실, 실릴, 에테르, 알킬티오, 설포닐, 케톤, 알데히드, 에스테르, 헤테로시클릴, 방향족 또는 헤테로방향족 부분, -CF ₃ , 또는 -CN 등으로 치환될 수 있다.

용어 "폴리시클릴" 또는 "폴리시클릭기"는 둘 이상의 고리(예를 들어, 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알키닐, 아릴 및/또는 헤테로시클릴)를 의미하며, 이러한 고리에서, 둘 이상의 탄소가 두 개의 인접한 고리에서 공통으로서, 예를 들어, 고리는 "융합된 고리"이다. 인접되지 않은 원자를 통해서 결합된 고리는 "브릿지된" 고리라 칭한다. 폴리사이클의 각각의 고리는 상기된 바와 같은 치환체, 예를 들어, 할로겐, 알킬, 아르알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 히드록실, 아미노, 니트로, 설프히드릴, 이미노, 아미도, 포스포네이트, 포스피네이트, 카르보닐, 카르복실, 실릴, 에테르, 알킬티오, 설포닐, 케톤, 알데히드, 에스테르, 헤테로시클릴, 방향족 또는 헤테로방향족 부분, -CF ₃ , 또는 -CN 등으로 치환될 수 있다.

본원에서 사용된 용어 "카르보사이클"은 고리의 각각의 원자가 탄소인 방향족 또는 비방향족 고리를 의미한다.

본원에서 사용된 용어 "니트로"는 -NO ₂ 이며; 용어 "할로겐"은 -F, -Cl, -Br, 또는 -I이고; 용어 "설프히드릴"은 -SH이며; 용어 "히드록실"은 -OH이고; 용어 "설 포닐"은 -SO ₂ -이다.

용어 "아민" 및 "아미노"는 본 기술 분야에서는 인식되고 있으며, 둘 모두 비치환된 및 치환된 아민, 예를 들어, 하기 화학식으로 나타낼 수 있는 부분을 의미한다:

상기 식에서, R ₉ , R ₁₀ 및 R' ₁₀ 은 각각 독립적으로 원자가 규칙에 의해서 허용되는 기를 나타낸다.

용어 "아실아미노"는 본 기술 분야에서 인식되고 있으며, 하기 화학식으로 나타낼 수 있는 부분을 의미한다:

상기 식에서, R ₉ 는 상기된 바와 같으며, R' ₁₁ 은 수소, 알킬, 알케닐, 또는 -(CH ₂ ) _m -R ₈ 이고, 여기서 m 및 R ₈ 은 상기 정의된 바와 같다.

용어 "아미도"는 본 기술 분야에서 아미노-치환된 카르보닐로 인식되고 있으 며, 하기 화학식으로 나타낼 수 있는 부분을 포함한다:

상기 식에서, R ₉ , R ₁₀ 은 상기된 바와 같다. 바람직한 양태의 아미드는 불안정할 수 있는 아미드를 포함하지 않을 것이다.

용어 "알킬티오"는 황 라디칼이 결합된 상기된 바와 같은 알킬기를 의미한다. 바람직한 양태에서, "알킬티오" 부분은 -S-알킬, -S-알케닐, -S-알키닐, 및 -S-(CH ₂ ) _m -R ₈ 중 하나를 의미하며, 여기에서, m 및 R ₈ 은 상기 정의된 바와 같다. 대표적인 알킬티오기는 메틸티오, 및 에틸티오 등을 포함한다.

용어 "카르보닐"은 본 기술 분야에서 인식되고 있으며, 하기 화학식으로 나타낼 수 있는 바와 같은 부분을 포함한다:

상기 식에서, X는 결합이거나, 산소 또는 황을 나타내며, R ₁₁ 은 수소, 알킬, 알케닐, -(CH ₂ ) _m -R ₈ 또는 약제학적으로 허용되는 염을 나타내며, R' ₁₁ 은 수소, 알킬, 알케닐, -(CH ₂ ) _m -R ₈ 을 나타내고, 여기서, m 및 R ₈ 은 상기 정의된 바와 같다. X가 산 소이고 R ₁₁ 또는 R' ₁₁ 이 수소가 아니면, 상기 화학식은 "에스테르"를 나타낸다. X가 산소이고, R ₁₁ 이 상기 정의된 바와 같으면, 부분은 본원에서 카르복실기로 명명되며, 특히, R ₁₁ 이 수소이면, 상기 화학식은 "카르복실산"을 의미한다. X가 산소이고, R' ₁₁ 이 수소이면, 상기 화학식은 "포르메이트"를 의미한다. 일반적으로, 상기 화학식의 산소원자가 황으로 치환되면, 상기 화학식은 "티오카르보닐"기를 의미한다. X가 황이고 R ₁₁ 또는 R' ₁₁ 이 수소가 아니면, 상기 화학식은 "티오에스테르"이다. X가 황이고 R ₁₁ 이 수소이면, 상기 화학식은 "티오카르복실산"이다. X가 황이고 R' ₁₁ 이 수소이면, 상기 화학식은 "티오포르메이트"이다. 다른 한편으로, X가 결합이고, R ₁₁ 이 수소가 아니면, 상기 화학식은 "케톤"기를 의미한다. X가 결합이고, R ₁₁ 이 수소이면, 상기 화학식은 "알데히드"기를 의미한다.

본원에서 사용된 용어 "알콕실" 또는 "알콕시"는 산소 라디칼이 결합된 상기 정의된 바와 같은 알킬기를 의미한다. 대표적인 알콕실기는 메톡시, 에톡시, 프로필옥시, t-부톡시 등을 포함한다. "에테르"는 산소에 의해서 공유 결합된 두 개의 탄화수소이다. 따라서, 알킬에 에테르를 부여하는 알킬의 치환체는 알콕실이거나 이와 유사하여, -O-알킬, -O-알케닐, -O-알키닐, -O-(CH ₂ ) _m -R ₈ 중 하나 일 수 있으며, 여기서, m 및 R ₈ 은 상기된 바와 같다.

용어 "설포네이트"는 본 기술 분야에서 인식되어 있으며, 하기 화학식으로 나타낼 수 있는 부분을 포함한다:

상기 식에서, R ₄₁ 은 전자쌍, 수소, 알킬, 시클로알킬, 또는 아릴이다.

트리플릴, 토실, 메실, 및 노나플릴이라는 용어는 본 기술 분야에서 인식되고 있으며, 각각 트리플루오로메탄설포닐, p-톨루엔설포닐, 메탄설포닐, 및 노나플루오로부탄설포닐기를 의미한다. 트리플레이트, 토실레이트, 메실레이트, 및 노나플레이트라는 용어는 본 기술 분야에서 인식되어 있으며, 각각 트리플루오로메탄설포네이트 에스테르, p-톨루엔설포네이트 에스테르, 메탄설포네이트 에스테르, 및 노나플루오로부탄설포네이트 에스테르 작용기 및 상기 기를 함유하는 분자를 의미한다.

약자, Me, Et, Ph, Tf, Nf, Ts, Ms는 각각 메틸, 에틸, 페닐, 트리플루오로메탄설포닐, 노나플루오로부탄설포닐, p-톨루엔설포닐 및 메탄설포닐을 의미한다. 본 기술 분야의 유기 화학자에 의해서 이용되는 약어의 보다 포괄적인 목록은 저널[ Journal of Organic Chemistry ]의 각각의 볼륨의 첫 번째 이슈에 있으며; 이러한 목록은 전형적으로 표준약어 목록( Standard List of Abbreviations) 이라 칭하는 표에 있다. 상기 목록에 있는 약어 및 본 기술 분야에서 통상의 지식을 지니는 유기 화학자에 의해서 사용되는 모든 약어는 본원에서 참조로 통합된다.

용어 "설페이트"는 본 기술 분야에서 인식되어 있으며, 하기 화학식으로 나 타낼 수 있는 부분을 포함한다:

상기 식에서, R ₄₁ 은 상기된 바와 같다.

용어 "설포닐아미노"는 본 기술 분야에서 인식되어 있으며, 하기 화학식으로 나타낼 수 있는 부분을 포함한다:

용어 "설파모일"은 본 기술 분야에서 인식되어 있으며, 하기 화학식으로 나타낼 수 있는 부분을 포함한다:

본원에서 사용된 용어 "설포닐"은 하기 화학식으로 나타낼 수 있는 부분을 포함한다:

상기 식에서, R ₄₄ 는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택된다.

본원에서 사용된 용어 "설폭시도"는 하기 화학식으로 나타낼 수 있는 부분을 의미한다.

상기 식에서, R ₄₄ 는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아르알킬, 또는 아릴로 구성된 군으로부터 선택된다.

용어 "셀레노알킬"은 치환된 셀레노기가 결합된 알킬기를 의미한다. 알킬상에서 치환될 수 있는 예시적인 "셀레노에테르"는 -Se-알킬, -Se-알케닐, -Se-알키닐, 및 Se-(CH ₂ ) _m -R ₇ 중 하나로부터 선택되며, 여기에서, m 및 R ₇ 은 상기 정의된 바와 같다.

유사한 치환이 알케닐 및 알키닐기에서 이루어져서, 예를 들어, 아미노알케닐, 아미노알키닐, 아미도알케닐, 아미도알키닐, 이미노알케닐, 이미노알키닐, 티 오알케닐, 티오알키닐, 카르보닐-치환된 알케닐, 또는 알키닐을 생성시킬 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 각각의 표현의 정의, 예를 들어, 알킬, m, n, 등은, 이러한 정의가 어떠한 구조에서 한번 이상 있는 경우, 동일한 구조의 어느 곳에서 이 정의가 독립적임을 의미한다.

"치환" 또는 "로 치환된"은 그러한 치환이 치환된 원자 및 치환체의 허용되는 원자가를 따른다는 암시를 포함하며, 그러한 치환이 안정한 화합물, 예를 들어, 자리옮김, 사이클화, 제거, 등에 의한 바와 같이 자발적으로 변화되지 않는 안정한 화합물을 생성한다는 것을 이해해야 할 것이다.

본원에서 사용된 용어, "치환된"은 유기 화합물의 모든 허용되는 치환체를 포함하는 것을 의미한다. 광범위한 일면에서, 허용되는 치환체는 유기 화합물의 비시클릭 및 시클릭, 분지형 및 비분지형, 카르보시클릭 및 헤테로시클릭, 방향족 및 비방향족 치환체를 포함한다. 대표적인 치환체는, 예를 들어, 상기 정의된 바와 같은 치환체를 포함한다. 허용 가능한 치환체는 적절한 유기 화합물에 대해서 하나 이상이며 동일하거나 상이할 수 있다. 본 발명의 목적을 위해서, 질소와 같은 헤테로원자는 수소치환체 및/또는 헤테로원자의 원자가를 만족시키는 본원에 기재된 유기 화합물의 어떠한 허용 가능한 치환체를 지닐 수 있다. 본 발명은 어떠한 방법으로도 유기 화합물의 허용 가능한 치환체로 한정되는 것이 아니다.

본원에서 사용된 용어 "보호기"는 바람직하지 않는 화학적 전환으로부터 잠재적인 반응성 작용기를 보호하는 일시적인 치환체를 의미한다. 이러한 보호기의 예는 카르복실산의 에스테르, 알콜의 실릴 에테르, 및 각각 알데히드와 케톤의 아 세탈 및 케탈를 포함한다. 보호기 화학분야가 검토되었다[문헌: Greene, TW; Wuts, PGM Protective Groups in Organic Synthesis , 2 ^nd ed.; Wiley: New York, 1991].

본 발명의 특정 화합물은 특정의 기하학적 형태 또는 입체 이성체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 시스- 및 트랜스-이성체, R- 및 S-거울상이성체, 부분입체이성체, (D)-이성체, (L)-이성체, 이의 라세미 혼합물 및 이의 그 밖의 혼합물을 포함한 모든 그러한 화합물을 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 한다. 추가의 비대칭 탄소원자가 알킬기와 같은 치환체에 존재할 수 있다. 모든 그러한 이성체, 뿐만 아니라, 이의 혼합물이 본 발명에 포함되는 것으로 여겨진다.

예를 들어, 본 발명의 화합물의 특정의 거울상이성체가 요구되는 경우, 비대칭 합성법에 의해서 제조되거나, 키랄 크로마토그래피 방법에 의해서 분리되거나, 키랄 보조물에 의한 유도에 의해서 제조될 수 있는데, 여기서, 생성되는 부분입체이성체 혼합물은 분리되고, 보조 그룹은 분해되어 순수한 목적 거울상이성체가 생성된다. 또한, 분자가 염기성 작용기, 예컨대, 아미노, 또는 산성 작용기, 예컨대, 카르복실을 함유하는 경우, 부분입체이성체 염을 적절한 광 활성 산 또는 염기에 의해서 형성시킨 후에, 본 기술 분야에 공지된 분별 결정화 또는 크로마토그래피 수단에 의해서 형성된 부분입체이성체를 분할하고, 이어서, 순수한 거울상이성체를 회수한다.

본원에 기재된 화합물의 고려되는 균등물은 이에 상응하는 화합물, 이의 일 반적인 특성과 동일한 일반적인 특성(예, 진통제와 같은 작용)을 지니는 화합물을 포함하며, 그러한 화합물에서, 치환체중 하나 이상이 간단하게 변화되는데, 그러한 변화는 오피오이드(opioid) 수용체에 결합하는 화합물의 효능에 부작용을 주지 않는 것을 전제로 한다. 일반적으로, 본 발명의 화합물은 용이하게 이용할 수 있는 출발물질, 시약 및 통상의 합성 과정을 이용하는, 예를 들어, 이하 기재된 바와 같은 일반적인 반응 도식으로 예시된 방법, 또는 이의 변화된 방법에 의해서 제조될 수 있다. 이러한 반응에서, 공지되어 있기는 하지만 본원에서는 언급되지 않은 변화가 또한 가능하다.

본 발명의 목적을 위해서, 화학적 원소는 문헌[CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 67th Ed., 1986-87, inside cover]의 원소주기율표를 따르고 있다.

본 발명의 화합물

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 A의 화합물이다:

상기 식에서,

Z는 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 히드록시알킬, 알콕시알킬, 헤테로시클릴, -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ , 또는 고체 지지체에 대한 공유결합이고;

Ar은 아릴 또는 헤테로아릴이며;

R은 부재하거나 1, 2, 3, 4, 또는 5개이고;

R은 각각의 경우에 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 할로겐, 헤테로아르알킬, 히드록실, 알콕실, 아미노, 알킬아미노, 카르복실레이트, 카르복스아미드, 니트로소, 니트로, 설프히드릴, 알킬티오, 티오알킬, 실릴, 알킬설포닐, 아릴설포닐, 포르밀, 아실, 아실옥시, 아실아미노, 알킬옥시카르보닐, 알케닐옥시카르보닐, 아릴옥시카르보닐, 또는 -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ 이며;

R'는 각각의 경우에 독립적으로, H, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 또는 -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ 이고;

R ₈₀ 은 각각의 경우에 독립적으로 시클로알킬, 알케닐, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴이며;

n은 각각의 경우에 독립적으로 0 내지 8로부터 선택되는 정수이고;

화학식 A의 화합물내의 입체 중심에서의 절대 입체 화학구조는 R, S, 또는 이의 혼합형태이며;

화학식 A의 화합물내의 알케닐 부분의 형태는 E, Z 또는 이의 혼합 형태이다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 Z가 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 시클로프로필, 시클로프로필메틸, 2-메틸프로 필, 부틸, 알릴, 4-히드록시부틸, 2-히드록시프로필, (테트라히드로푸란-2-일)메틸, 2-(피리드-4-일)에틸, 또는 2-(2-플루오로페닐)에틸인 화학식 A 및 그에 수반된 정의로 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 Ar이 4-알릴옥시페닐, 4-프로필옥시페닐, 2-알릴옥시페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, 4-(트리플루오로메톡시)페닐, 4-메틸페닐, 4-메톡시페닐, 4-카르복시페닐, 또는 4-플로오로페닐인 화학식 A 및 그에 수반된 정의로 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 R이 부재하는 화학식 A 및 그에 수반된 정의에 의해서 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 R'는 H인 화학식 A 및 그에 수반된 정의에 의해서 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 Z가 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 시클로프로필, 시클로프로필메틸, 2-메틸프로필, 부틸, 알릴, 4-히드록시부틸, 2-히드록시프로필, (테트라히드로푸란-2-일)메틸, 2-(피리드-4-일)에틸, 또는 2-(2-플루오로페닐)에틸이고; Ar이 4-알릴옥시페닐, 4-프로필옥시페닐, 2-알릴옥시페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, 4-(트리플루오로메톡시)페닐, 4-메틸페닐, 4-메톡시페닐, 4-카르복시페닐, 또는 4-플로오로페닐인 화학식 A 및 그에 수반된 정의에 의해서 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 Z가 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 시클로프로필, 시클로프로필메틸, 2-메틸프로 필, 부틸, 알릴, 4-히드록시부틸, 2-히드록시프로필, (테트라히드로푸란-2-일)메틸, 2-(피리드-4-일)에틸, 또는 2-(2-플루오로페닐)에틸이고; Ar이 4-알릴옥시페닐, 4-프로필옥시페닐, 2-알릴옥시페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, 4-(트리플루오로메톡시)페닐, 4-메틸페닐, 4-메톡시페닐, 4-카르복시페닐, 또는 4-플로오로페닐이며; R이 부재하는 화학식 A 및 그에 수반된 정의에 의해서 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 Z가 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 시클로프로필, 시클로프로필메틸, 2-메틸프로필, 부틸, 알릴, 4-히드록시부틸, 2-히드록시프로필, (테트라히드로푸란-2-일)메틸, 2-(피리드-4-일)에틸, 또는 2-(2-플루오로페닐)에틸이고; Ar이 4-알릴옥시페닐, 4-프로필옥시페닐, 2-알릴옥시페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, 4-(트리플루오로메톡시)페닐, 4-메틸페닐, 4-메톡시페닐, 4-카르복시페닐, 또는 4-플로오로페닐이며; R이 부재하고; R'가 H인 화학식 A 및 그에 수반된 정의에 의해서 나타낸다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 A에 따른 특정의 화합물은 1μM 미만, 더욱 바람직하게는, 100nM 미만, 가장 바람직하게는 10nM 미만의 IC ₅₀ 값을 지닌다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 A에 따른 특정의 화합물은 1μM 미만, 더욱 바람직하게는, 100nM 미만, 가장 바람직하게는 10nM 미만의 EC ₅₀ 값을 지닌다.

특정의 양태에서 본 발명의 화합물은 하기 화학식 B에 의해서 나타낸다:

상기 식에서,

Z는 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 히드록시알킬, 알콕시알킬, 헤테로시클릴, -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ , 또는 고체 지지체에 대한 공유결합이고;

X은 아릴, 헤테로아릴, (아릴)알케닐, (헤테로아릴)알케닐, 또는 -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ 이며;

R은 부재하거나 1, 2, 3, 또는 4개이고;

R은 각각의 경우에 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 할로겐, 헤테로아르알킬, 히드록실, 알콕실, 아미노, 알킬아미노, 카르복실레이트, 카르복스아미드, 니트로소, 니트로, 설프히드릴, 알킬티오, 티오알킬, 실릴, 알킬설포닐, 아릴설포닐, 포르밀, 아실, 아실옥시, 아실아미노, 알킬옥시카르보닐, 알케닐옥시카르보닐, 아릴옥시카르보닐, 또는 -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ 이며;

R'는 각각의 경우에 독립적으로, H, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 또는 -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ 이고;

R ₈₀ 은 각각의 경우에 독립적으로 시클로알킬, 알케닐, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴이며;

n은 각각의 경우에 독립적으로 0 내지 8로부터 선택되는 정수이고;

화학식 B의 화합물내의 입체 중심에서의 절대 입체 화학구조는 R, S , 또는 이의 혼합형태이며;

화학식 B의 화합물내의 알케닐 부분의 형태는 E, Z 또는 이의 혼합 형태이다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 Z가 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 시클로프로필, 시클로프로필메틸, 에틸, 알릴, 4-히드록시부틸, 2-히드록시프로필, (테트라히드로푸란-2-일)메틸, 또는 2-(2-플루오로페닐)에틸인 화학식 B 및 그에 수반된 정의로 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 X가 2-페닐에틸, (E)-(2-메톡시페닐)CH=CH-, 4-알릴옥시페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, (E)-(4-메톡시페닐)CH=CH-, 4-플루오로페닐, 3,4-디플로오로페닐, 또는 4-(트리플루오로메톡시)페닐인 화학식 B 및 그에 수반된 정의로 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 R이 부재하는 화학식 B 및 그에 수반된 정의에 의해서 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 R'이 H인 화학식 B 및 그에 수반된 정의에 의해서 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 Z가 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 시클로프로필, 시클로프로필메틸, 에틸, 알릴, 4-히드록시부틸, 2-히드록시프로필, (테트라히드로푸란-2-일)메틸, 또는 2-(2-플루오로페닐)에틸이고; X가 2-페닐에틸, (E)-(2-메톡시페닐)CH=CH-, 4-알릴옥시페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, (E)-(4-메톡시페닐)CH=CH-, 4-플루오로페닐, 3,4-디플로오로페닐, 또는 4-(트리플루오로메톡시)페닐인 화학식 B 및 그에 수반된 정의에 의해서 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 Z가 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 시클로프로필, 시클로프로필메틸, 에틸, 알릴, 4-히드록시부틸, 2-히드록시프로필, (테트라히드로푸란-2-일)메틸, 또는 2-(2-플루오로페닐)에틸이고; X가 2-페닐에틸, (E)-(2-메톡시페닐)CH=CH-, 4-알릴옥시페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, (E)-(4-메톡시페닐)CH=CH-, 4-플루오로페닐, 3,4-디플로오로페닐, 또는 4-(트리플루오로메톡시)페닐이며; R이 부재하는 화학식 B 및 그에 수반된 정의에 의해서 나타낸다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 Z가 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 시클로프로필, 시클로프로필메틸, 에틸, 알릴, 4-히드록시부틸, 2-히드록시프로필, (테트라히드로푸란-2-일)메틸, 또는 2-(2-플루오로페닐)에틸이고; X가 2-페닐에틸, (E)-(2-메톡시페닐)CH=CH-, 4-알릴옥시페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, (E)-(4-메톡시페닐)CH=CH-, 4-플루오로페닐, 3,4-디플로오로페닐, 또는 4-(트리플루오로메톡시)페닐이며; R이 부재하고; R'가 H인 화학식 B 및 그에 수반된 정의에 의해서 나타낸다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 B에 따른 특정의 화합물은 1μM 미만, 더욱 바람직하게는, 100nM 미만, 가장 바람직하게는 10nM 미만의 IC ₅₀ 값을 지닌다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 B에 따른 특정의 화합물은 1μM 미만, 더욱 바람직하게는, 100nM 미만, 가장 바람직하게는 10nM 미만의 EC ₅₀ 값을 지닌다.

특정의 양태에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 C에 의해서 나타낸다:

상기 식에서,

X는 C(R') ₂ 또는 O이고;

Ar은 아릴 또는 헤테로아릴이며;

R은 부재하거나 1, 2, 3 또는 4개이고;

R은 각각의 경우에 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 할로겐, 헤테로아르알킬, 히드록실, 알콕실, 아미노, 알킬아미노, 카르복실레이트, 카르복스아미드, 니트로소, 니트로, 설프히드릴, 알킬티오, 티오알킬, 실릴, 알킬설포닐, 아릴설포닐, 포르밀, 아실, 아실옥시, 아실아미노, 알킬옥시카르보닐, 알케닐옥시카르보닐, 아릴옥시카르보닐, 또는 -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ 이며;

R'는 각각의 경우에 독립적으로, H, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 또는 -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ 이고;

R ₈₀ 은 각각의 경우에 있어서 독립적으로 시클로알킬, 알케닐, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴을 나타내며;

f는 1, 2, 또는 3을 나타내며;

n은 각각의 경우에 있어서 독립적으로 0 내지 8로부터 선택된 정수이며;

z는 0, 1, 또는 2이며; 단 z가 0이면, X는 C(R') ₂ 이며;

화학식 C의 화합물의 입체중심에서 절대 입체 화학구조는 R, S, 또는 이의 혼합 형태이고;

화학식 C의 화합물에서 알케닐 부분의 형태는 E, Z, 또는 이의 혼합 형태이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 C 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R은 존재하지 않는다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 C 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R'은 H이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 C 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R은 존재하지 않으며, R'는 H이다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 C에 따른 특정 화합물의 IC ₅₀ 값은 1μM 미만이며, 더욱 바람직하게는, 100 nM 미만이며, 가장 바람직하게는, 10 nM 미만이다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 C에 따른 특정 화합물의 EC ₅₀ 값은 1μM 미만이며, 더욱 바람직하게는, 100 nM 미만이며, 가장 바람직하게는, 10 nM 미만이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 D에 의해 나타내어 진다:

상기 식에서,

X는 C(R') ₂ 또는 O를 나타내며;

R은 각각의 경우에 있어서 독립적으로 존재하지 않거나, 1, 2, 3, 또는 4개로 존재하며;

R은 각각의 경우에 있어서 독립적으로, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 할로겐, 헤테로아르알킬, 히드록실, 알콕실, 아미노, 알킬아미노, 카르복실레이트, 카르복사미드, 니트로소, 니트로, 설프히드릴, 알킬티오, 티오알킬, 실릴, 알킬설포닐, 아릴설포닐, 포르밀, 아실, 아실옥시, 아실아미노, 알킬옥시카르보닐, 알케닐옥시카르보닐, 아릴옥시카르보닐, 또는 -(CH ₂ )-R ₈₀ 을 나타내며;

R'는 각각의 경우에 있어서 독립적으로, H, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 또는 -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ 을 나타내며;

R ₈₀ 은 각각의 경우에 있어서 독립적으로, 시클로알킬, 알케닐, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴을 나타내며;

f는 1, 2, 또는 3을 나타내며;

n은 각각의 경우에 있어서 0 내지 8로부터 독립적으로 선택된 정수이며;

z는 0, 1, 또는 2을 나타내며; 단 z가 0이면, X는 C(R') ₂ 이며;

화학식 D의 화합물의 입체중심에서 절대 입체 화학구조는 R, S, 또는 이의 혼합 형태를 띠며;

화학식 D의 화합물에서 알케닐 부분의 형태는 E, Z, 또는 이의 혼합 형태이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 D 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R은 존재하지 않는다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 D 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R'은 H이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 D 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R은 존재하지 않으며, R'는 H이다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 D에 따른 특정 화합물의 IC ₅₀ 값은 1μM 미만이며, 더욱 바람직하게는, 100 nM 미만이며, 가장 바람직하게는, 10 nM 미만이다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 D에 따른 특정 화합물의 EC ₅₀ 값은 1μM 미만이며, 더욱 바람직하게는, 100 nM 미만이며, 가장 바람직하게는, 10 nM 미만이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 E에 의해 나타내어 진다:

상기 식에서,

X는 C(R') ₂ 또는 O를 나타내며;

R은 각각의 경우에 있어서 독립적으로 존재하지 않거나, 1, 2, 3, 또는 4개로 존재하며;

R은 각각의 경우에 있어서 독립적으로, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 할로겐, 헤테로아르알킬, 히드록실, 알콕실, 아미노, 알킬아미노, 카르복실레이트, 카르복사미드, 니트로소, 니트로, 설프히드릴, 알킬티오, 티오알킬, 실릴, 알킬설포닐, 아릴설포닐, 포르밀, 아실, 아실옥시, 아실아미노, 알킬옥시카르보닐, 알케닐옥시카르보닐, 아릴옥시카르보닐, 또는 -(CH ₂ )-R ₈₀ 을 나타내며;

R'는 각각의 경우에 있어서 독립적으로, H, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 또는 -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ 을 나타내며;

R ₈₀ 은 각각의 경우에 있어서 독립적으로, 시클로알킬, 알케닐, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴을 나타내며;

f는 0 또는 1이며;

n은 각각의 경우에 있어서 0 내지 8로부터 독립적으로 선택된 정수이며;

z는 0, 1, 또는 2을 나타내며; 단 z가 0이면, X는 C(R') ₂ 이며;

화학식 E의 화합물의 입체중심에서 절대 입체 화학구조는 R, S, 또는 이의 혼합 형태를 띠며;

화학식 E의 화합물에서 알케닐 부분의 형태는 E, Z, 또는 이의 혼합 형태이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 E 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R은 존재하지 않는다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 E 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R'은 H이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 E 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R은 존재하지 않으며, R'는 H이다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 E에 따른 특정 화합물의 IC ₅₀ 값은 1μM 미만이며, 더욱 바람직하게는, 100 nM 미만이며, 가장 바람직하게는, 10 nM 미만이다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 E에 따른 특정 화합물의 EC ₅₀ 값은 1μM 미만이며, 더욱 바람직하게는, 100 nM 미만이며, 가장 바람직하게는, 10 nM 미만이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 F에 의해 나타내어 진다:

상기 식에서,

X는 C(R') ₂ 또는 O를 나타내며;

R은 각각의 경우에 있어서 독립적으로 존재하지 않거나, 1, 2, 3, 또는 4개로 존재하며;

R은 각각의 경우에 있어서 독립적으로, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 할로겐, 헤테로아르알킬, 히드록실, 알콕실, 아미노, 알킬아미노, 카르복실레이트, 카르복사미드, 니트로소, 니트로, 설프히드릴, 알킬티오, 티오알킬, 실릴, 알킬설포닐, 아릴설포닐, 포르밀, 아실, 아실옥시, 아실아미노, 알킬옥시카르보닐, 알케닐옥시카르보닐, 아릴옥시카르보닐, 또는 -(CH ₂ )-R ₈₀ 을 나타내며;

R'는 각각의 경우에 있어서 독립적으로, H, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 또는 -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ 을 나타내며;

R ₈₀ 은 각각의 경우에 있어서 독립적으로, 시클로알킬, 알케닐, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴을 나타내며;

f는 1, 2, 또는 3을 나타내며;

n은 각각의 경우에 있어서 0 내지 8로부터 독립적으로 선택된 정수이며;

z는 0, 1, 또는 2을 나타내며; 단 z가 0이면, X는 C(R') ₂ 이며;

화학식 F의 화합물의 입체중심에서 절대 입체 화학구조는 R, S, 또는 이의 혼합 형태를 띠며;

화학식 F의 화합물에서 알케닐 부분의 형태는 E, Z, 또는 이의 혼합 형태이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 F 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R은 존재하지 않는다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 F 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R'은 H이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 F 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R은 존재하지 않으며, R'는 H이다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 F에 따른 특정 화합물의 IC ₅₀ 값은 1μM 미만이며, 더욱 바람직하게는, 100 nM 미만이며, 가장 바람직하게는, 10 nM 미만이다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 F에 따른 특정 화합물의 EC ₅₀ 값은 1μM 미만이며, 더욱 바람직하게는, 100 nM 미만이며, 가장 바람직하게는, 10 nM 미만이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 G에 의해 나타내어 진다:

상기 식에서,

X는 C(R') ₂ 또는 O를 나타내며;

R은 각각의 경우에 있어서 독립적으로 존재하지 않거나, 1, 2, 3, 또는 4개로 존재하며;

R은 각각의 경우에 있어서 독립적으로, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 할로겐, 헤테로아르알킬, 히드록실, 알콕실, 아미노, 알킬아미노, 카르복실레이트, 카르복사미드, 니트로소, 니트로, 설프히드릴, 알킬티오, 티오알킬, 실릴, 알킬설포닐, 아릴설포닐, 포르밀, 아실, 아실옥시, 아실아미노, 알킬옥시카르보닐, 알케닐옥시카르보닐, 아릴옥시카르보닐, 또는 -(CH ₂ )-R ₈₀ 을 나타내며;

R'는 각각의 경우에 있어서 독립적으로, H, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 또는 -(CH ₂ ) _n -R ₈₀ 을 나타내며;

R ₈₀ 은 각각의 경우에 있어서 독립적으로, 시클로알킬, 알케닐, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴을 나타내며;

f는 0 또는 1이며;

n은 각각의 경우에 있어서 0 내지 8로부터 독립적으로 선택된 정수이며;

z는 0, 1, 또는 2을 나타내며; 단 z가 0이면, X는 C(R') ₂ 이며;

화학식 G의 화합물의 입체중심에서 절대 입체 화학구조는 R, S, 또는 이의 혼합 형태를 띠며;

화학식 G의 화합물에서 알케닐 부분의 형태는 E, Z, 또는 이의 혼합 형태이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 G 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R은 존재하지 않는다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 G 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R'은 H이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 G 및 이에 따른 정의부분에 의해 나타내어지며, 여기서 R은 존재하지 않으며, R'는 H이다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 G에 따른 특정 화합물의 IC ₅₀ 값은 1μM 미만이며, 더욱 바람직하게는, 100 nM 미만이며, 가장 바람직하게는, 10 nM 미만이다.

포유류 아난다미드 운반물질을 기준으로 한 검정에서, 화학식 G에 따른 특정 화합물의 EC ₅₀ 값은 1μM 미만이며, 더욱 바람직하게는, 100 nM 미만이며, 가장 바람직하게는, 10 nM 미만이다.

특정 구체예에서, 본 발명은 상기 기술된 구조에 의해 대표되는 화합물에 관한 것이며, 여기서 상기 화합물은 단일 입체이성체이다.

특정 구체예에서, 본 발명은 상기 기술된 구조에 의해 대표되는 화합물 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제형에 관한 것이다.

특정 구체예에서, 본 발명은 포유류 아난다미드 운반물질에 대한 리간드에 관한 것이며, 여기서 리간드는 상기 기술된 구조, 및 이들 구조중 하나와 관련된 정의 부분에 의해 대표된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 포유류 아난다미드 운반물질의 길항제 또는 효능제이다. 모든 경우에, 본 발명의 화합물은 바람직하게는, 약 1 마이크로몰 미만, 더욱 바람직하게는 약 100 나노몰 미만, 및 가장 바람직하게는 10 나노몰 미만의 농도에서 포유류 아난다미드 운반물질에 대해 효과를 발휘한다.

본 발명은 본 발명의 화합물을 포함하는 약제학적 제형에 관한 것이다. 특정 구체예에서, 약제학적 제형은 포유류 아난다미드 운반물질에 선택적으로 작용하여, 포유류 아난다미드 운반물질와 관련된 생화학적 또는 생리학적 작용에 적어도 부분적으로 기인되는 급성 또는 만성 병, 질환 또는 질병에 대한 치료 효과를 갖는 본 발명의 화합물을 포함할 것이다. 예를 들어, 발명의 배경기술(상기 참조)에는 포유류 아난다미드 운반물질와 관련된 생화학적 또는 생리학적 작용에 의해 기인되거나 악화되는 급성 또는 만성 병, 질환 또는 질병의 예가 교시되어 있다. 당업자는 과학 문헌을 참조로 하여 포유류 아난다미드 운반물질와 관련된 생화학적 또는 생리학적 작용에 의해 기인되거나 악화되는 급성 또는 만성 병, 질환 또는 질병의 더욱 포괄적인 리스트를 만들수 있을 것이다. 본 발명은 본 발명의 화합물을 포함하는 약제학적 제형이 상기 언급된 만성 또는 급성 병, 질환 또는 질병에 대해 의학적 가치가 있을 것으로 여기고 있다.

특정 구체예에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 본 발명의 화합물을 천식, 신경병적 통증, 지속통, 염증성 통증, 과잉운동증, 고혈압, 뇌허혈, 파킨슨병, 근긴장, 뚜레 증후군, 정신분열증, 출혈성 쇼크, 패혈성 쇼크, 심장 쇼크, 편두통, 집락성 두통, 다발성 경화증, 식욕결핍증, AIDS 소모성 증후군, 장기이식 거부, 자가면역 질환, 알레르기, 관절염, 크론씨병, 악성신경교종, 신경퇴행성 질환, 헌팅턴 무도병, 녹내장, 메스꺼움, 불안증, 정신병, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 조루증 또는 뇌졸증으로 고통받는 포유류에 투여하는 것을 포함하여, 상기 포유류를 치 료하기 위한 방법에 관한 것이다.

치료 방법은 예방, 치료(therapeutic) 또는 완화(curative)를 위한 것일 수 있다. 치료 방법이 개체가 질환 또는 질병의 임상적 징후 또는 증상을 나타내기 전에 실시될 경우, 이들 방법은 예방을 위한 것이다. 예방적 치료는 예를 들어, 질환 또는 질병을 가진 것으로 예상되는 개체, 또는 질환 또는 질병이 발병할 위험이 높은 것으로 예상되는 개체에 실시될 수 있다. 구체예에서, 예방적 방법은 바람직하지 않은 혈관수축을 특징으로 하는 질환 또는 질병이 발병할 위험을 감소시키거나 제거한다. 한 구체예에서, 예방적 방법은 바람직하지 않은 염증을 특징으로 하는 질환 또는 질병이 발병할 위험을 감소시키거나 제거한다. 한 구체예에서, 예방적 방법은 바람직하지 않은 통증을 특징으로 하는 질환 또는 질병이 발병할 위험을 감소시키거나 제거한다. 구체예에서, 예방적 방법은 바람직하지 않은 기관 장애를 특징으로 하는 질환 또는 질병이 발병할 위험을 감소시키거나 제거한다.

치료 방법이 질환 또는 질병의 최소한의 임상적 징후 또는 증상을 이미 나타내는 개체에 실시될 경우, 이러한 방법은 치료 또는 치유를 위한 것일 수 있다. 치료적 방법은 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 검출가능할만큼 변화시키는 방법이다. 바람직하게는, 검출가능한 변화는 증상의 개선이다. 구체예에서, 치료적 방법은 바람직하지 않은 혈관수축을 감소시키거나 제거한다. 구체예에서, 치료적 방법은 바람직하지 않은 염증을 감소시키거나 제거한다. 구체예에서, 치료적 방법은 바람직하지 않은 통증을 감소시키거나 제거한다. 구체예에서, 치료적 방법은 바람직하지 않은 기관 장애를 감소시키거나 제거한다.

완화적 방법은 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 제거하는 치료학적 방법이다. 바람직하게는, 완화적 방법은 질환 또는 질병의 원인을 제거한다. 구체예에서, 완화적 방법은 바람직하지 않은 혈관수축을 제거한다. 구체예에서, 완화적 방법은 바람직하지 않은 염증을 제거한다. 구체예에서, 완화적 방법은 바람직하지 않은 통증을 제거한다. 구체예에서, 완화적 방법은 바람직하지 않은 기관 장애를 제거한다.

구체예에서, 치료 방법은 본 발명의 화합물을 의도된 결과를 유도하기에 충분한 양으로 개체에 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 구체예에서, 본 발명의 화합물은 혈관긴장도를 조절하기에 충분한 양; 염증을 조절하기에 충분한 양; 감각신경 활성을 조절하기에 충분한 양; 무통을 달성하기에 충분한 양; 및/또는 기관 기능을 조절하기에 충분한 양으로 투여된다. 구체예에서, 본 발명의 화합물은 치료될 질환, 질병 또는 증상이 검출가능할 정도로 변화되기에 충분한 양으로 개체에 투여된다. 이러한 변화는 치료될 개체의 신체 전반에 걸친 변화 또는 치료될 개체의 표면내 또는 표면상의 특정 부위의 변화일 수 있다. 이와 같이, 치료 방법은 전신 치료 및 국소 치료를 포함한다.

치료 방법은 개체로의 단일 투여를 포함하거나, 다중 투여를 포함할 수 있다. 치료 및 투여 요법은 당해분야에 널리 공지되고 실시되는 방법에 따라 고안되고 실행된다. 각각의 요법은 치료될 개체, 및 관련 질환(들), 질병(들) 및/또는 증상(들)에 맞춰질 것으로 여겨진다. 그러나, 이러한 개체 맞춤은 당해분야의 기술범위내에 있으며, 과도하거나 무리한 실험이 요망되지 않는다.

본 발명은 또한, 포유류 아난다미드 운반물질의 활성에 작용하는 본 발명의 화합물을 함유하는 키트를 제공한다. 구체예에서, 본 발명의 화합물은 키트의 단독 성분으로서 키트내에 제공된다. 구체예에서, 이는 조성물의 일부로서 존재한다. 구체예에서, 이는 키트에 함유된 화합물 및/또는 조성물의 사용에 필요하거나 요망되는 기타 화합물, 용액 또는 기기와 함께 제공된다. 이와 같이, 본 발명의 키트는 화합물, 용액 및 키트에 함유된 화합물 및 조성물을 개체에 투여하기 위한 필요한 기구 모두를 함유할 수 있거나, 키트는 본 발명의 화합물의 실험관내 사용을 위해 고안될 수 있다.

세포 수용체에 대한 생화학 활성 및 이러한 활성의 검출하기 위한 검정

시약을 샘플에 첨가하고, 시약에 의해 자극된 샘플 특성을 확인하기 위해 샘플과 시약을 측정하는 검정 공정은 당해분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 이러한 검정 공정은 생물학적 샘플 또는 용액에 존재하는 효소의 양을 크로모젠 검정으로 측정하는 것에 관한 것이다. 이러한 검정은 반응 용액중의 발색된 생성물의 현상을 기초로 한다. 반응은 효소가 무색 크로모젠 기질의 발색 생성물로의 전환을 촉매함에 따라 전개된다.

본 발명에 유용한 또 다른 검정은 방사성리간드 결합 검정으로서 당해분야에 널리 알려진 기법을 사용하여 생물학적 수용체에 결합하는 리간드의 능력을 측정하는 것에 관한 것이다. 이러한 검정은 방사성리간드의 표적화된 수용체로의 특이적 결합을 전체 결합성분 및 비특이적 결합 성분의 설명을 통해서 정확하게 측정한다. 전체 결합은 수용체 제조물(세포 동종물 또는 재조합 수용체)에 결합된 방사성리간드를 결합되지 않은 방사성리간드로부터 신속하게 분리한 후 잔존하는 방사성리간드의 양으로서 규정된다. 비특이적 결합 성분은 수용체, 방사성리간드 및 과량의 비라벨링된 리간드로 구성된 반응 혼합물을 분리한 후 잔존하는 방사성리간드의 양으로서 규정된다. 이러한 조건하에, 잔존하는 방사성리간드만이 수용체 이외의 성분에 결합된 방사성리간드를 나타낸다. 특이적 방사성리간드 결합은 전체 방사성활성 결합으로부터 비특이적 결합을 감하므로써 결정된다. μ-오피오이드 수용체에 대한 방사성리간드 결합 검정의 특정 예는 문헌[Wang,JB et al. FEBS Letters 1994, 338, 217]을 참조할 수 있다.

본 발명에 유용한 검정은 수용체의 활성을 측정하는 것으로서, 수용체의 활성화는 칼슘 이온의 세포내 저장물이 2차 메신저로서 사용되기 위해 방출되는 후속의 세포내 반응을 개시한다. 일부 G-단백질 결합된 수용체의 활성화는 포스파티딜리노시톨(Berridge and Irvine (1984). Nature 312:315-21)의 포스포리파아제 C-매개된 가수분해를 통한 이노시톨 트리포스페이트(IP3, G-단백질-결합된 수용체 2차 메신저)의 형성을 자극한다. 이어서 IP3은 세포내 칼슘 이온 저장물의 방출을 자극한다.

세포내 저장물로부터 칼슘 이온의 방출에 의해 초래된 세포질 칼슘 이온 수준의 변화는 G-단백질 결합된 수용체 작용을 측정하는데 이용된다. 이는 또 다른 유형의 간접 검정이다. G-단백질 결합된 수용체로는 무스카린 아세틸콜린 수용체(mAChR), 아드레날린 수용체, 시그마 수용체, 세로토닌 수용체, 도파민 수용체, 안지오텐신 수용체, 아데노신 수용체, 브라디키닌 수용체, 메타보트로픽 여기 아미노산 수용체(metabotropic excitatory amino acid receptors) 등이 있다. 이러한 G- 단백질 결합된 수용체를 발현하는 세포는 세포내 저장물 및 이온 채널의 활성화에 의한 결과로서 증가된 세포질 칼슘 수준을 나타내며, 이런 경우에, 킬레이트화제 예컨대, EGTA가 선택적으로 보충된 칼슘 비함유 완충액중에서 이러한 검정을 반드시 수행할 필요는 없지만, 내부 저장물로부터 칼슘 방출을 초래하는 형광반응을 구별하는 것이 바람직할 수 있다. 간접 검정의 또 다른 유형은 수용체의 활성을 측정하는 것을 포함하는데, 여기서 수용체가 활성화될 경우, 세포내 시클릭 누클레오티드 예를 들어, cAMP, cGMP의 수준을 변화시킨다. 예를 들어, 일부 도파민, 세로토닌, 메타보트로픽 글루타메이트 수용체 및 무스카린 아세틸콜린 수용체의 활성화는 세포질의 cAMP 또는 cGMP 수준을 감소시킨다.

또한, 시클릭 누클레오티드-게이팅된(gated) 이온 채널 예를 들어, 로드 광수용체 세포 채널 및 후각신경원 채널(Altenhofen,W. et al. (1991) Proc.Natl.Acad.Sci USA 88:9868-9872 and Dhallan et al. (1990) Nature 347:184-187)은 cAMP 또는 cGMP의 결합에 의해 활성화될 경우 양이온에 투과성이다. 광수용체 또는 후각신경원 채널의 시클릭 누클레오티드 활성량을 변화시키므로써 초래된 세포질 이온 수준의 변화는, 활성화될 경우 cAMP 또는 cGMP 수준의 변화를 초래하는 수용체의 작용을 측정하는데 사용된다. 수용체의 활성화가 시클릭 누클레오티드 수준을 감소시키는 경우, 검정시 세포에 수용체-활성화 화합물을 첨가하기 전에, 세포내 시클릭 누클레오티드 수준을 증가시키는 제제 예를 들어, 포르스콜린에 세포를 노출시키는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 유형의 검정을 위한 세포는 시클릭 누클레오티드-게이팅된 이온 채널을 코드화하는 DNA 및 수용체(활성화될 경우, 세포질내의 시클릭 누클레오티드 수준을 변화시키는 예를 들어, 특정 메타보트로픽 글루타메이트 수용체, 무스카린 아세틸콜린 수용체, 도파민 수용체, 세로토닌 수용체 등)를 코드화하는 DNA로 숙주 세포를 코-트랜스펙션하므로써 제조될 수 있다.

활성시, 예를 들어, 게이팅된 칼슘 채널을 개방하므로써 세포내 칼슘 농도를 직접적으로 증가시킬 수 있거나, 2차 메신저(예를 들어, G-단백질 결합된 수용체)로서 Ca<2+>를 사용하는 반응의 개시를 유도하므로써 세포내 칼슘 농도에 간접적으로 영향을 미치는 수용체 단백질을 발현하는 세포가 검정의 기초를 형성할 수 있다. 이러한 수용체 또는 이온 채널을 내생적으로 발현하는 세포 및 하나 이상의 이러한 세포 표면 단백질을 코드화하는 적합한 벡터로 트랜스펙팅될 수 있는 세포는 당해분야에 공지되어 있거나, 당업자에 의해 확인될 수 있다. 내생적 이온 채널 및/또는 수용체 활성을 나타내는 세포가 본질적으로 사용될 수 있지만, 이러한 이온 채널 및/또는 수용체를 코드화하는 이종성 DNA로 형질변환되거나 트랜스펙팅되어, 단일 유형의 이온 채널 또는 수용체를 우세하게 발현할 수 있는 세포를 사용하는 것이 바람직하다. 이종성 세포 표면 단백질을 발현하도록 유전공학적으로 조작될 수 있는 많은 세포가 공지되어 있다. 이러한 세포로는 베이비 햄스터 신장(BHK) 세포(ATCC No. CCL10), 마우스 L 세포(ATCC No. CCLI3), DG44 세포(문헌 [Chasin (1986) Cell. Molec. Genet, 12:555] 참조), 사람 배아 신장(HEK) 세포(ATCC No. CRL1573), 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포(ATCC Nos. CRL9618, CCL61, CRL9096), PC12 세포(ATCC No. CRL1721) 및 COS-7 세포(ATCC No. CRL1651)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 이종성 세포 표면 단백질 발현에 바람직한 세포는 용이하고 효과적으로 트랜스펙팅될 수 있는 세포이다. 바람직한 세포는 HEK 293 세포 예컨대, US 특허 제5,024,939호에 기술된 세포를 포함한다.

관심을 끄는 이온 채널 또는 수용체를 활성화시키는 것으로 공지된 화합물은 검정을 개시시키는데 사용될 수 있다. 관심있는 이온 채널 또는 수용체에 따라 적합한 이온 채널- 또는 수용체-활성화 시약을 선택하는 것은 당해기술분야에 속한다. 칼슘 채널 활성화를 측정하기 위한 세포막의 직접적인 분극화는, 세포 함유 웰중의 최종 칼륨 이온 농도가 약 50-150mM(예를 들어, 50mM KCl)이 되게 하는 칼륨 이온 농도를 갖는 칼륨 염 용액을 첨가하므로써 달성될 수 있다. 리간드-게이팅된 수용체 및 리간드-게이팅된 이온 채널에 있어서, 리간드는 이러한 수용체에 대해 친화적이고 이를 활성화시키는 것으로 공지되어 있다. 예를 들어, 니코틴 아세틸콜린 수용체는 니코틴 또는 아세틸콜린에 의해 활성화되고; 유사하게 무스카린 및 아세틸콜린 수용체는 무스카린 또는 카르바밀콜린의 첨가에 의해 활성화될 수 있는 것으로 공지되어 있다.

효능제 검정은 관심있는 이온 채널 또는 수용체를 활성화시키거나 효력증가시키는데 있어서 화합물이, 존재한다면, 어떠한 효과를 나타내는지를 검출하기 위한 이온 채널 및/또는 수용체를 갖는 것으로 공지된 세포에서 수행될 수 있다. 효능제 검정은 또한, 세포가 관심있는 각각의 작용성 이온 채널 또는 수용체를 발현시키는지의 여부를 검정하기 위한 이온 채널- 또는 수용체-활성화 능력을 갖는 것으로 공지된 시약을 사용하여 수행될 수 있다.

작용성 수용체 또는 이온 채널을 효능제와 접촉시키면 전형적으로 일시적인 반응을 활성화시키고; 효능제에 대한 연장된 노출은 후속 활성화에 대한 수용체 또는 이온 채널의 민감도를 감소시킬 수 있다. 따라서, 일반적으로, 이온 채널 또는 수용체 기능을 결정하기 위한 검정은 효능제의 첨가(즉, 반응을 개시시키기 위해 사용된 시약 용액 중에서)에 의해 개시되어야 한다. 효능제 활성을 갖는 화합물의 효능은, 세포 내에서의 일부 관찰가능한 검출된 변화(특정 수용체의 활성화가 감소를 초래한다 하더라도 통상적으로는 증가함)에 의해 결정되며, 이것을, 동일한 세포, 또는 효능제가 결핍된 시약(즉, 대조군)을 웰에 첨가하는 것을 제외하고는 실질적으로 동일하게 처리되는 사실상 동일한 세포 중 어느 하나에서 확인가능한 수준과 비교한다. 효능제 검정이 주목되는 기능적 수용체 또는 이온 채널을 발현하는 세포인지 아닌지를 시험하도록 실시되는 경우에, 공지된 효능제를 시험 세포 함유 웰 및 대조군 세포(특이적인 수용체 또는 이온 채널이 결핍된 사실상 동일한 세포) 함유 웰에 첨가하고, 확인가능한 수준을 비교한다. 검정에 따라 달라지나, 주목되는 이온 채널 및/또는 수용체가 결핍된 세포는 공지된 효능제에 대한 반응에서 확인가능한 정도의 증가를 사실상 나타내지 않아야 한다. 사실상 동일한 세포는 동일 세포로부터 유래할 수 있으며, 이로부터 재조합 세포가 제조되나, 이것은 이종 DNA의 도입에 의해 변형된 것은 아니었다. 대안적으로, 이것은 특이적인 수용체 또는 이온 채널이 제거되는 세포일 수 있다. 임의의 통계적이거나 그렇지 않으면 현저한 확인가능한 수준에서의 차로부터, 시험 화합물이 몇몇 방식으로 특이적인 수용체 또는 이온 채널의 활성을 변화시켰으나, 시험 세포가 특이적인 기능 수 용체 또는 이온 채널을 보유함을 알 수 있다.

주목되는 이온 채널 또는 수용체를 조절하는 능력을 갖는 화합물을 동정하는 약물 스크리닝 검정에 대한 일예에서, 개별 웰(또는 복수 웰, 등)은 별개의 세포 유형, 또는 주목되는 수용체 또는 이온 채널의 동종 집단을 발현하는 별개의 재조합 세포주를 함유하여, 결과적으로 동정되지 않은 활성을 갖는 화합물을, 이것이 하나 이상의 다양한 기능성 이온 채널 또는 수용체에 대한 조절 활성을 갖는지 어떤지를 결정하기 위해 스크리닝시킬 수 있다. 또한, 개별 웰 각각이 동일한 세포 유형을 함유하여, 복수개의 화합물(장치내의 상이한 시약 공급원으로부터 얻어지거나, 상이한 웰 내에 함유된)을 스크리닝하고, 이것을 특정 수용체 또는 이온 채널 유형에 대한 활성을 조절하기 위해 비교할 수 있다.

약물 스크리닝 검정을 포함하는 길항제 검정은, 화합물(들)이 수용체 및/또는 이온 채널에 결합하기에 충분한 시간 동안 (화합물이 주목되는 이온 채널 및/또는 수용체에 대한 친화성을 갖는 정도로) 미량역가판의 각 웰 내에서 세포를 세척하는 용액에 첨가된, 기능성 이온 채널 및/또는 수용체를 갖는 세포를 하나 이상의 화합물의 존재 또는 부재하에서 배양시킨 다음, 공지된 효능제를 첨가함으로써 상기 이온 채널 또는 수용체를 활성화시키고, 세포 내에서 확인가능한 수준을 측정하고 이것을 추정되는 길항제의 부재하에서 동일 세포 또는 사실상 동일한 세포 중 어느 하나에서 확인가능한 수준과 비교함으로써, 실시될 수 있다.

따라서, 상기 검정은 세포 내에서 임의의 수용체 또는 이온 채널을 조절하는 화합물을 확인하기 위해서 화합물을 신속하게 스크리닝하는데 유용하다. 구체적으로, 상기 검정은 기능성 리간드-수용체, 또는 리간드 관문(ligand-gated) 이온 채널, 전압 관문 이온 채널, G-단백질 결합된 수용체 및 성장 인자 수용체를 포함하는 세포 수용체에 대한 리간드-이온 채널의 상호작용을 시험하는데 사용될 수 있다.

당업자는, 검정에, 상이한 특성을 나타낼 수 있는 화합물이 세포 이벤트(cellular event)에 대한 반응으로 이의 특성을 변화시킬 수 있도록 하는 세포 이벤트의 결과로서, 용액의 검출가능한 변화를 측정하는 것이 포함될 수 있음을 인지할 것이다. 세포 이벤트의 발생 직후에 상이한 특성을 나타낼 수 있는 특정 화합물을 선택함으로써, 다양한 검정이 실시될 수 있다. 예를 들어, 세포 손상 또는 세포사를 유도하는 화합물의 능력을 결정하기 위한 검정은, 상기 세포를 pH에 반응하는 형광성 표지자, 예컨대 BCECF[참고: Molecular Probes, Inc., Eugene, Oreg. 97402, Catalog #B1150]로 상기 세포를 로딩시키고, 세포 손상 또는 세포사를 시간에 따른 형광성 변화의 함수로서 측정함으로써 수행될 수 있다.

유용한 검정에 대한 추가 예로서, 활성화에 의해 세포질의 고리형 누클레오티드 수준을 변화시키는 수용체 기능이, cAMP의 결합시에 형광성을 변화시키는 형광성 화합물과 함께 주입된 그러한 수용체를 발현시키는 세포의 검정으로 직접 결정될 수 있다. 이러한 형광성 화합물은, 촉매적 및 조절 서브유닛이 상이한 형광성 염료로 각각 표지되는 cAMP-의존성 단백질 키나아제를 포함한다 [참고: Adams et al. (1991) Nature 349: 694-697]. cAMP가 조절성 서브유닛에 결합되는 경우, 형광 발광 스펙트럼 변화와 같은 변화가 cAMP 농도 변화의 표지로서 사용될 수 있다.

2개의 뉴런 사이의 접점에서의 시냅스 틈새에 존재하는 특정 신경전달물질 운반물질의 기능은, 아미노산과 형광성 표지자의 컨쥬게이트[여기에서, 컨쥬게이트의 형광성 표지자는 아세톡시메틸 에스테르 유도체, 예를 들어 5-(아미노아세트아미드)플루오레세인; Molecular Probes, Catalog #A1363]가 신경전달물질 운반물질에 의해, 에스테르기가 에스테라아제의 활성에 의해 분해되고 컨쥬게이트가 형광성이 되는 세포의 세포질 내로 운반되는 경우에, 그러한 뉴런의 세포질 내에서 형광성을 전개시킴으로써 결정될 수 있다.

이러한 유형의 검정을 실시하는 경우에, 리포터 유전자 작제물이 진핵 세포 내로 삽입되어, 표면 상에 특이적인 유형의 세포 표면 단백질을 갖는 재조합 세포를 생성한다. 이러한 세포 표면 수용체는 내인적으로 발현될 수 있거나, 세포 내로 도입된 이종 유전자로부터 발현될 수 있다. 진핵 세포 내로 이종 DNA를 도입시키기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 그러한 임의의 방법이 사용될 수 있다. 또한, 다양한 세포 표면 단백질을 엔코딩하는 DNA도 당업자에게 공지되어 있거나, 이는 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 클로닝될 수 있다.

재조합 세포를 시험 화합물과 접촉시켜, 리포터 유전자 발현 수준을 측정한다. 이러한 접촉은 임의의 비히클 내에서 실시될 수 있으며, 시험은 당업자에게 공지된 특이적인 분자간 상호작용을 평가하기 위한, 연속적 희석법과 같은 임의의 프로토콜을 사용하는 임의의 수단에 의해 이루어질 수 있다. 임의의 상호작용을 수행하기 위한 충분한 시간 동안 재조합 세포를 접촉시킨 후에, 유전자 발현 수준을 측정한다. 그러한 상호작용을 수행하기 위한 시간은, 예컨대 시간 과정을 작동시키고, 시간의 함수로서 전사의 수준을 측정함으로써 경험적으로 결정될 수 있다. 전사량은 적합한 것으로 간주되는 당업자에게 공지된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 특이적인 mRNA의 발현은 노던 블롯(Northern Blot)을 사용하여 검출될 수 있거나, 특이적인 단백질 생성물은 특징적인 균주에 의해 동정될 수 있다. 이후, 전사량을 시험 화합물의 부재하에서 동일 세포에서의 전사량와 비교하거나, 특이적인 수용체가 결핍된 사실상 동일한 세포 내에서의 전사량과 비교할 수 있다. 사실상 동일한 세포는 동일 세포로부터 유래할 수 있으며, 이로부터 재조합 세포는 제조되었으나 이종 DNA의 도입에 의해서는 변형되지 않았다. 대안적으로, 이것은 특이적인 수용체가 제거되는 세포일 수 있다. 임의의 통계적이거나 그렇지 않으면 현저한 전사량에 있어서의 차로부터, 시험 화합물이 몇몇 방식으로 특이적인 수용체의 활성을 변경시켰음을 알 수 있다.

시험 화합물이 세포 표면 단백질의 활성을 증진시키거나 활성화시키거나 유도하는 것으로 보이지 않는 경우, 먼저 재조합 세포를, 전사가 유도되는 경우 전사를 활성화시키는 특이적인 수용체의 활성화제 또는 공지된 효능제의 능력에 대해서 시험한 다음, 시험 화합물을 효능제의 활성을 억제, 방해 또는 그렇지 않으면 영향을 미치는 이의 능력에 대해 검정하는 단계를 도입시킴으로써, 검정을 반복하고 변형시킬 수 있다.

전사에 기초한 검정은, 활성이 유전자 발현을 궁극적으로 변경시키는 임의의 세포 표면 단백질과 상호작용하는 화합물을 동정하는데 유용하다. 특히, 상기 검정은, 기능성 리간드 수용체, 또는 리간드 관문 이온 채널 및 전압 관문 이온 채널, 및 G 단백질 결합된 수용체를 포함하는, 세포 표면이 국재화된 수용체의 다수의 카테고리에 대한 리간드 이온 채널의 상호작용을 시험하는데 사용될 수 있다.

단백질 기능이 세포내적으로 세포외적 신호를 변환시키도록 하는 방식으로 목적하는 세포 표면 단백질을 발현할 수 있는 임의의 트랜스펙팅가능한 세포를 사용할 수 있다. 이러한 세포는, 이들이 세포 표면 단백질을 내인적으로 발현하도록 선택되거나, 그렇게 하도록 유전자적으로 조작(engineering)될 수 있다. 이러한 다수의 세포가 당업자에게 공지되어 있으며, 이러한 세포에는 Ltk ＜-＞ 세포, PC12 세포 및 COS-7세포가 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

수용체 또는 이온 채널 및 리포터 유전자 발현 작제물을 발현하며, 이들의 활성을 평가하기 위해 화합물을 시험하는데 유용한 세포의 제조가 포유류의 Ltk ＜-＞ 및 COS-7 세포주를 참조로 본원에 제공된 실시예에서 예시되어 있으며, 이들은 제 I 유형의 사람 무스카린성 (HM1) 수용체를 발현시키며, c-fos 프로모터-CAT 리포터 유전자 발현 작제물 또는 c-fos 프로모터-루시퍼라아제 리포터 유전자 발현 작제물중 어느 하나에 의해서 변형된다.

당업자에게 공지되거나 당업자에 의해 동정될 수 있는 임의의 세포 표면 단백질이 검정에 사용될 수 있다. 세포 표면 단백질은 선택된 세포 상에서 내인적으로 발현되거나, 클로닝된 DNA로부터 발현될 수 있다. 세포 표면 단백질의 예로는 세포 표면 수용체 및 이온 채널이 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 세포 표면 수용체에는 하기 것들이 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다: 무스카린성 수용체 (예를 들어, 사람 M2 (GenBank accession #M 16404); 랫트 M3 (GenBank accession #M 16407); 사람 M4 등 (GenBank accession #M 16405); 사람 M5 ((Bonner et al. (1988) Neuron 1: 403-410) 등); 뉴런 니코틴성 아세틸콜린 수용체 (예를 들어, 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제 504,455호 (1990년 4월 3일 출원)에 개시된 알파 2, 알파 3 및 베타 2 서브타입); 랫트 알파 2 서브유닛 (Wada et al. (1988) Science 240: 330-334); 랫트 알파 3 서브유닛 (Boulter et al. (1986) Nature 319: 368-374); 랫트 알파 4 서브유닛 (Goldman et al. (1987) cell 48: 965-973); 랫트 알파 5 서브 유닛 (Boulter et al. (1990) J. Biol. Chem. 265: 4472-4482); 랫트 베타 2 서브유닛 (Deneris et al. (1988) Neuron 1: 45-54); 랫트 베타 3 서브유닛 (Deneris et al. (1989) J. Biol. Chem. 264: 6268-6272); 랫트 베타 4 서브유닛 (Duvoisin et al. (1989) Neuron 3: 487-496); 랫트 알파 서브유닛, 베타 서브유닛, 및 알파 및 베타 서브유닛의 조합물; GABA 수용체 (예를 들어, 소 알파 1 및 베타 1 서브유닛 (Schofield et al. (1987) Nature 328: 221-227); 소 알파 2 및 알파 3 서브유닛 (Levitan et al. (1988) Nature 335: 76-79); 감마 서브유닛 (Pritchett et al. (1989) Nature 338: 582-585); 베타 2 및 베타 3 서브유닛 (Ymer et al (1989) EMBO J. 8: 1665-1670); 델타 서브유닛 등 ((Shivers, BD (1989) Neuron 3: 327-337) 등); 글루타메이트 수용체 (예를 들어, 랫트 뇌로부터 단리된 수용체 (Hollmann et al. (1989) Nature 342: 643-648) 등); 아드레날린성 수용체 (예를 들어, 사람 베타 1 (Frielle et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. 84: 7920-7924); 사람 알파 2 (Kobilka et al. (1987) Science 238: 650-656); 햄스터 베타 2 등 ((Dixon et al. (1986) Nature 321: 75-79) 등); 도파민 수용체 (예를 들어, 사람 D2 (Stormann et al. (1990) Molec. Pharm. 37: 1-6); 랫트 ((Bunzow et al. (1988) Nature 336: 783-787) 등); NGF 수용체 (예를 들어, 사람 NGF 수용체 ((Johnson et al. (1986) Cell 47: 545-554) 등); 세로토닌 수용체 (예를 들어, 사람 5HT1a (Kobilka et al. (1987) Nature 329: 75-79); 랫트 5HT2 (Julius et al. (1990) PNAS 87: 928-932); 랫트 5HTlc 등 ((Julius et al. (1988) Science 241: 558-564) 등).

리포터 유전자 작제물은, 리포터 유전자와 하나 이상의 전사 조절성 엘리먼트를 작동적으로 연결시킴으로써 제조된다. 단 하나의 전사 조절성 엘리먼트가 포함되는 경우, 이것은 조절가능한 프로모터이어야 한다. 선택된 전사 조절성 엘리먼트중 하나 이상은 선택된 세포 표면 수용체의 활성에 의해 직 또는 간접적으로 조절됨으로써, 수용체의 활성이 리포터 유전자의 전사를 통해 모니터링될 수 있어야 한다.

상기 작제물은, 세포 표면 단백질에 의해 반드시 조절되지는 않으나, 백그라운드 수준의 전사를 감소시키거나 변환된 신호를 증폭시켜서 검정의 감도 및 신뢰성을 증가시키는 이의 능력에 대해 선택되는 FIRE 서열 또는 그 밖의 서열과 같은 추가의 전사 조절성 엘리먼트를 함유할 수 있다.

다수의 리포터 유전자 및 전사 조절성 엘리먼트가 당업자에게 공지되어 있으며, 나머지들은 당업자에게 공지된 방법에 의해 동정되거나 합성될 수 있다.

리포터 유전자는 검출가능한 유전자 생성물을 발현하는 임의의 유전자를 포함하는데, 이는 RNA 또는 단백질일 수 있다. 바람직한 리포터 유전자는 용이하게 검출될 수 있는 것들이다. 이러한 리포터 유전자는 또한 목적하는 전사 조절성 서 열을 포함하거나 다른 바람직한 특성을 나타내는 유전자와 함께 융합 유전자의 형태로 작제물 내에 포함될 수 있다.

리포터 유전자의 예로는 하기 것들이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다: CAT (클로르암페니콜 아세틸 트랜스퍼라아제)(Alton and Vapnek (1979), Nature 282: 864-869) 루시퍼라아제, 및 그 밖의 효소 검출 시스템, 예컨대 베타-갈락토시다아제; 개똥벌레 루시퍼라아제 (deWet et al. (1987), Mol. Cell. Biol. 7: 725-737); 세균성 루시퍼라아제 (Engebrecht and Silverman (1984), PNAS 1: 4154-4158; Baldwin et al. (1984), Biochemistry 23: 3663-3667); 알칼리성 포스포타아제 (Toh et al. (1989) Eur. J. Biochem. 182: 231-238, Hall et al. (1983) J. Mol. Appl. Gen. 2: 101).

전사 조절성 엘리먼트에는 프로모터, 인핸서, 및 리프레서와 활성화제 결합 부위가 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 적합한 전사 조절성 엘리먼트는, 발현이 일반적으로 수분 내에 신속하게 일어나는 유전자의 전사 조절성 영역으로부터 유래할 수 있으며, 여기에서 세포 표면 단백질과 이펙터 단백질 사이의 접촉이 세포 표면 단백질의 활성을 조절한다. 그러한 유전자의 예로는, c-fos와 같은 극초기 유전자 (참조: Sheng et al. (1990) Neuron 4: 477-485)가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 극초기 유전자는, 리간드가 세포 표면 단백질에 결합되자 마자 신속하게 유도되는 유전자를 의미한다. 유전자 작제물 내에 사용하기에 바람직한 전사 조절성 엘리먼트에는, 극초기 유전자로부터의 전사 조절성 엘리먼트, 일부 또는 전부의 극초기 유전자 특성을 나타내는 그 밖의 유전자로부터 유래하는 유전자, 또는 내부에서의 조작적 연결에서의 유전자가 그러한 특성을 나타내도록 작제되는 합성 엘리먼트가 포함되나, 이에 한정되는 것은 아니다. 전사 조절성 엘리먼트가 유래되는 바람직한 유전자의 특성에는, 무활동 세포 내에서의 적거나 검출불가능한 정도의 발현, 세포외 자극의 분 내에서의 전사 수준에서의 신속한 유도, 신규 단백질의 합성과는 무관하며 일시적인 유도, 신규한 단백질 합성을 요하는 전사의 후속적인 셧-오프(shut-off), 및 짧은 반감기를 갖는 이들 유전자로부터 전사된 mRNAs가 포함되나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이들 특성 모두가 반드시 존재해야 하는 것은 아니다.

약제 조성물

또 다른 양태에서, 본 발명은, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 (첨가제) 및/또는 희석제와 함께 제형화된, 치료적 유효량의 하나 이상의 상기 화합물을 포함하는 약제학적으로 허용되는 조성물을 제공한다. 하기 상세하게 기술한 바와 같이, 본 발명의 약제 조성물은, 하기에 맞게 조절된 것들을 포함하여, 고체 또는 액체 형태로 투여하도록 특이적으로 제형화될 수 있다: (1) 경구 투여, 예를 들어, 드렌치(수성 또는 비수성 용액, 또는 현탁액), 정제, 예를 들어 협측, 설하 및 전신 흡수를 위해 표적화된 것들, 식괴(bolus), 분말, 과립, 혀에 도포하기 위한 페이스트; (2) 비경구 투여, 예컨대 멸균 용액 또는 현탁액, 또는 지효성 제형으로서의 예를 들어 피하, 근육내, 정맥내 또는 경막외 주사; (3) 국소 도포, 예를 들어, 크림, 연고 또는 조절방출성 패치 또는 피부로 도포된 스프레이; (4) 질내 또는 직장내 투여, 예를 들어, 페서리, 크림 또는 포말; (5) 설하 투여; (6) 접안 투여; (7) 경피 투여; 또는 (8) 경비 투여.

본원에 사용된 "치료적 유효량"은, 임의의 의료적 치료에 적용가능한 합리적인 효과/위험 비에서 동물내 세포의 적어도 하나의 서브 집단에서 약간의 목적하는 치료적 효과를 나타내는데 효과적인, 본 발명의 화합물을 포함하는 화합물, 물질 또는 조성물의 양을 의미한다.

본원에 사용된 "약제학적으로 허용되는"은, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 그 밖의 문제 또는 합병증 없이, 안전한 의학적 판단의 범주 내에서, 상당한 효과/위험 비에서 균형잡힌 사람 및 동물의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합한 그러한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 의미한다.

본원에 사용된 "약제학적으로 허용되는 담체"는 하나의 기관 또는 신체 일부로부터 또 다른 기관 또는 신체 일부로 대상 화합물을 운반하거나 수송하는 것에 관련된, 액체 또는 고체의 충전제, 희석제, 부형제, 합성 산(예를 들어, 윤활제, 탤크 마그네슘, 스테아린산 칼슘, 스테아린산 아연 또는 스테아린산) 또는 용매로 캡슐화된 물질과 같은 약제학적으로 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클을 의미한다. 각각의 담체는 제형의 다른 성분과의 상용성의 측면에서 "허용가능"해야 하며, 환자에게 유해하지 않아야 한다. 약제학적으로 허용되는 담체로서 작용할 수 있는 그러한 물질의 예로는, (1) 락토오스, 글루코오스 및 수크로오스와 같은 설탕; (2) 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분; (3) 셀룰로오스, 및 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 셀룰로오스 아세테이트와 같은 이의 유도체; (4) 분말화된 트라가간트; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 탤크; (8) 코코아 버터 및 좌제용 왁스와 같은 부형제; (9) 땅콩유, 면실유, 잇꽃유, 참깨유, 올리브유, 옥수수유 및 대두유와 같은 유지; (10) 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜; (11) 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리올; (12) 에틸 올레이트 및 에틸 라우레이트와 같은 에스테르; (13) 한천; (14) 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄과 같은 완충제; (15) 알긴산; (16) 피로젠 무함유 수; (17) 등장성 식염수; (18) 링거액; (19) 에틸 알코올; (20) pH 완충된 용액; (21) 폴리에스테르, 폴리카보네이트 및/또는 폴리무수물; 및 (22) 약제학적 제형 내에 사용된 그 밖의 비독성의 상용성 물질.

상기한 바와 같이, 본 화합물에 대한 특정 구체예는 아미노 또는 알킬아미노와 같은 염기성 작용기를 함유할 수 있으므로, 약제학적으로 허용되는 산과 함께 약제학적으로 허용되는 염을 형성할 수 있다. 이러한 측면에서의 "약제학적으로 허용되는 염"이란 상대적으로 비독성의, 본 발명의 무기 및 유기산 부가염을 의미한다. 이들 염은 동일 반응계 내의 투여 비히클 내에서 또는 투여 형태 제조 공정에서 제조될 수 있거나, 유리 염기 형태의 본 발명의 정제된 화합물을 적당한 유기 또는 무기산과 개별적으로 반응시키고 이렇게 형성된 염을 후속적인 정제로 분리시킴으로써 제조될 수 있다. 대표적인 염에는, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 설페이트, 비설페이트, 포스페이트, 니트레이트, 아세테이트, 발레레이트, 올레이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 라우레이트, 벤조에이트, 락테이트, 포스페이트, 토실레이트, 시트레이트, 말레이트, 푸마레이트, 숙시네이트, 타르타레이트, 나프탈레이트, 메실레이트, 글르코헵토네이트, 락토비오네이트 및 라우릴설포네이트 염 등이 포함된다 [참조: Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66: 1-19].

본 발명의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염에는, 예를 들어 비독성의 유기 또는 무기산으로부터의 화합물의 통상적인 비독성염 또는 4차 암모늄염이 포함된다. 예를 들어, 이러한 통상적인 비독성의 염에는, 염산, 염화브롬산, 황산, 설팜산, 인산, 질산 등과 같은 무기산으로부터 유래한 것; 및 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르빈산, 팔미트산, 말레인산, 히드록시말레인산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 설파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔설폰산, 메탄설폰산, 에탄디설폰산, 옥살산, 이소티온산 등과 같은 유기산으로부터 제조된 염이 포함된다.

그 밖의 경우에, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 산성 작용기를 함유할 수 있으므로, 약제학적으로 허용되는 염기와 함께 약제학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있다. 이러한 경우에서 "약제학적으로 허용되는 염"이란, 본 발명의 화합물의 상대적으로 비독성의, 무기 및 유기성 염기 부가염을 의미한다. 마찬가지로 이들 염은 동일 반응계 내의 투여 비히클 내에서 또는 단위 형태 제조 공정에서, 또는 암모니아 또는 약제학적으로 허용되는 유기성의 1차, 2차 또는 3차 아민을 사용하여 유리 산 형태의 정제된 화합물을, 탄산수소화물 또는 약제학적으로 허용되는 금속 양이온의 탄산염과 같은 적합한 염기와 개별적으로 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토류 염에는 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그 네슘, 및 알루미늄 염 등이 포함된다. 염기 부가염을 형성하는데 유용한 대표적인 유기성 아민에는 에틸아민, 디에틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진 등이 포함된다 [참조: 예를 들어, Berge et al., supra].

습윤화제, 나트륨 라우릴 설페이트 및 마그네슘 스테아레이트와 같은 에멀젼화제 및 윤활제, 뿐만 아니라 착색제, 이형제, 코팅제, 감미제, 향미제 및 방향제, 방부제 및 항산화제가 또한 본 조성물 내에 존재할 수 있다.

약제학적으로 허용되는 항산화제의 예로는, (1) 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르빈산, 시스테인 히드로클로라이드, 나트륨 비설페이트, 나트륨 메타비설파이트, 나트륨 설파이트 등; (2) 지용성(oil-soluble) 항산화제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화된 히드록시아니솔(BHA), 부틸화된 히드록시톨루엔(BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속 킬레이트화제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등.

본 발명의 제형에는, 경구, 경비, 국소 (협측 및 설하를 포함하는), 직장, 질 및/또는 비경구 투여에 적합한 것들이 포함된다. 이러한 제형은 통상적으로 단위 투여 형태로 존재할 수 있으며, 약업계에 공지된 임의의 방법으로 제조될 수 있다. 담체 물질과 조합되어 단일 투여 형태를 생성할 수 있는 활성 성분의 양은 치료할 숙주, 특정 투여 형태에 따라 달라질 것이다. 담체 물질과 조합되어 단일 투여 형태를 생성할 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로 치료 효과를 나타내는 화합물의 양일 것이다. 일반적으로, 100%를 기준으로, 이러한 양은 0.1 내지 약 99%의 활성 성분, 바람직하게는 약 5 내지 약 70%, 가장 바람직하게는 약 10 내지 약 30%의 활성 성분의 범위일 것이다.

특정 구체예에서, 본 발명의 제형은, 시클로덱스트린, 리포솜, 미셀 형성제, 예를 들어 담즙산, 및 중합성 담체, 예를 들어 폴리에스테르 및 폴리무수물로 구성되는 군으로부터 선택된 부형제; 및 본 발명의 화합물을 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 제형은 본 발명의 화합물을 경구적으로 생체내에서 이용되게 한다.

이들 제형 또는 조성물을 제조하는 방법에는, 본 발명의 화합물을 담체, 및 선택적으로는 하나 이상의 보조 성분을 결합시키도록 하는 단계가 포함된다. 일반적으로, 상기 제형은 균일하고 친밀하게 본 발명의 화합물과 액체 담체, 또는 미세하게 분할된 고체 담체, 또는 이둘 모두를 결합시킨 다음, 필요에 따라 이들 생성물을 성형함으로써 제조된다.

경구 투여에 적합한 본 발명의 제형은 캡슐, 샤셰, 필, 정제, 로젠지 (일반적으로 수크로오스 및 아카시아 또는 트라가칸트와 같은 향미를 갖는 기재를 사용하는), 분말, 과립의 형태로, 또는 수성 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액으로서, 또는 수중유 또는 유중수형 액체 에멀젼으로서, 또는 엘릭서 또는 시럽으로서, 또는 파스틸레 (젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로오스 및 아카시아와 같은 불활성 기재를 사용하는)로서 및/또는 구강 세척제 등으로서 존재할 수 있으며, 각각은 소정량의 본 발명의 화합물을 활성 성분으로서 함유한다. 본 발명의 화합물은 또한 식괴, 연약 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.

경구 투여용의 본 발명의 고체 투여 형태 (캡슐, 정제, 필, 당의정, 분말, 과립 등)에서, 활성 성분은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체, 예컨대 시트 르산나트륨, 인산디칼슘 및/또는 하기한 것 중 임의의 것과 혼합된다: (1) 충전제 또는 증량제, 예컨대 전분, 락토오스, 수크로오스, 글루코오스, 만니톨 및/또는 규산; (2) 결합제, 예컨대 카르복시메틸셀룰로오스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 수크로오스 및/또는 아카시아; (3) 흡습제, 예컨대 글리세롤; (4) 붕해제, 예컨대 한천-한천, 탄산칼슘, 감자 전분 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 규산염, 및 탄산나트륨; (5) 용해 억제제, 예컨대 파라핀; (6) 흡착 촉진제, 예컨대 4차 암모늄 화합물; (7) 습윤화제, 예컨대 세틸 알코올, 글리세롤 모노스테아레이트 및 비이온성 계면활성제; (8) 흡수제, 예컨대 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예컨대 탤크, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트, 및 이의 혼합물; 및 (10) 착색제. 캠슐, 정제 및 필의 경우에, 약제 조성물은 완충제를 포함할 수도 있다. 유사 유형의 고체 조성물은 연질 및 경질 외피의 젤라틴 캡슐에서의 충전제로서 락토오스 또는 유당과 같은 부형제 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용할 수도 있다.

정제는 선택적으로 하나 이상의 보조 성분을 사용하여 압축되거나 몰딩에 의해 제조될 수 있다. 압축된 정제는, 결합제 (예를 들어, 젤라틴 또는 히드록시프로필메틸 셀룰로오스), 윤활제, 불활성 희석제, 방부제, 붕해제 (예를 들어, 나트륨 전분 글리콜레이트 또는 가교된 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스), 계면 활성 또는 분산제를 사용하여 제조될 수 있다. 몰딩된 정제는, 적당한 기계 내에서 불활성 액체 희석제로 적셔진 분말화된 화합물의 혼합물을 몰딩시킴으로써 제조될 수 있다.

본 발명의 약제 조성물의 정제, 및 그 밖의 고체 투여 형태, 예컨대 당의정, 캡슐, 필 및 과립은, 장용성 코팅 및 약제 제형 분야에 공지된 그 밖의 코팅과 같은 코팅 및 외피를 사용하여 선택적으로 스코어링되거나 제조될 수 있다. 이들은 또한, 예를 들어 다양한 비율의 히드록시프로필메틸 세룰로오스를 사용하여 내부에 함유된 활성 성분의 느린 또는 조절된 방출을 제공함으로써 목적하는 방출 프로파일, 기타 중합체 매트릭스, 리포솜 및/또는 미소구체를 생성하도록 제형화될 수 있다. 이들은 신속한 방출을 위해 제형화될 수, 예를 들어 동결 건조될 수 있다. 이들은, 예를 들어 박테리아 함유 필터를 통해 여과되거나, 멸균수 또는 사용 직전에 그 밖의 일부 멸균성 주사가능한 매질 내에 용해될 수 있는 멸균성 고체 조성물 형태의 멸균화제를 혼입시킴으로써 멸균화될 수 있다. 이들 조성물은 선택적으로 유백화제를 함유할 수 있으며, 이는 활성 성분(들)만을, 또는 우선적으로는 위장관의 특정 부분으로, 선택적으로는 지연된 방식으로 방출시키는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 함유된 조성물의 예로는 중합성 물질 및 왁스가 있다. 상기 활성 성분은 또한 적합하게는 하나 이상의 상기 기술된 부형제와 함께 미소캡슐화된 형태로 존재할 수 있다.

본 발명의 화합물의 경구 투여를 위한 액체 투여 형태에는 약제학적으로 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭서가 포함된다. 활성 성분 이외에도, 상기 액체 투여 형태는 당업계에 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예컨대 물 또는 기타 용매, 가용화제 및 에멀젼화제, 예컨대 에틸 알코올, 이소프로필알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이 트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (특히, 면실유, 땅콩유, 옥수수유, 배종유, 올리브유, 피마자유 및 참깨유), 글리세롤, 테트라히드로푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 이의 혼합물을 함유할 수 있다.

불활성 희석제 이외에도, 경구 조성물은 습윤화제, 에멀젼화제 및 현탁제, 감미제, 향미제, 착색제, 방향제 및 방부제와 같은 보조제를 포함할 수도 있다.

현탁액은 상기 활성 화합물 이외에도, 예를 들어 에톡시화된 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미세결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 한천-한천 및 트라가칸트, 및 이의 혼합물과 같은 현탁제를 함유할 수 있다.

직장 또는 질내 투여용의 본 발명의 약제학적 조성물의 제형은 좌제로서 제공될 수 있으며, 이는 본 발명의 하나 이상의 화합물을, 실온에서 고체이나 체온에서 액체가 됨으로써 직장 또는 질 공동에서 용해되어 활성 화합물을 방출시키는, 예를 들어 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜, 좌제 왁스 또는 살리실레이트를 포함하는 하나 이상의 적합한 비자극성 부형제 또는 담체와 함께 혼합함에 의해 제조될 수 있다.

또한 질내 투여용으로 적합한 본 발명의 제형으로는 당 분야에 적합한 것으로 공지된 상기 담체를 함유하는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 포움 또는 스프레이 제형이 있다.

본 발명의 화합물의 국소 또는 경피 투여용 용량 형태로는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입기가 있다. 활성 화합물은 무균 조건하에 약제학적으로 허용되는 담체, 및 임의의 방부제, 완충제 또는 요구될 수 있는 추진체와 함께 혼합될 수 있다.

연고, 페이스트, 크림 및 겔은 본 발명의 활성 화합물에 추가하여, 동물성 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 탤크 및 산화 아연, 또는 이의 혼합물과 같은 부형제를 함유할 수 있다.

분말 및 스프레이는 본 발명의 화합물에 추가하여, 락토오스, 탤크, 규산, 수산화 알루미늄, 규산 칼슘 및 폴리아미드 분말, 또는 이러한 물질의 혼합물과 같은 부형제를 함유할 수 있다. 추가로 스프레이는 클로로플루오로히드로카본과 같은 통상의 추진체 및 부탄 및 프로판과 같은 휘발성 비치환된 탄화수소를 함유할 수 있다.

경피 패치는 신체에 본 발명의 화합물의 제어된 전달을 제공하는 추가의 이점을 지닌다. 이러한 용량 형태는 적합한 매질에 화합물을 용해시키거나 분산시킴에 의해 제조될 수 있다. 피부를 가로지르는 화합물의 흐름을 증가시키기 위해 흡수 향상제를 사용할 수도 있다. 이러한 흐름 속도는 속도 조절용 막을 제공하거나 중합체 매트릭스 또는 겔 중에 화합물을 분산시킴에 의해 조절될 수 있다.

안과용 제형, 안연고, 분말, 용액 등이 또한 본 발명의 범위내에 있는 것으로 고려된다.

비경구 투여에 적합한 본 발명의 약제학적 조성물은 본 발명의 하나 이상의 화합물을, 사용 직전에 무균의 주사가능한 용액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 무균 등장성 수용액 또는 비수용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀젼, 또는 무균 분말로서, 제형이 의도하는 수용체의 혈액 또는 현탁제 또는 농축제와 등장성이 되게 하는 당류, 알코올, 산화방지제, 완충제, 세균발육 저지제, 용질을 함유할 수 있는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 무균 등장성 수용액 또는 비수용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀젼, 또는 무균 분말과 함께 포함한다.

본 발명의 약제학적 조성물에 적용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예로는 물, 에탄올, 폴리올(예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 적합한 이의 혼합물, 올리브유와 같은 식물성 오일 및 에틸 올레에이트와 같은 주사가능한 유기 에스테르가 있다. 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅용 재료에 의해서, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해서, 그리고 계면활성제의 사용에 의해서 적합한 유동성을 유지할 수 있다.

또한, 이러한 조성물은 방부제, 습윤제, 에멀젼화제 및 분산제와 같은 보조제를 함유할 수 있다. 본 화합물에 대한 미생물의 작용은 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등을 포함시킴에 의해 억제될 수 있다. 또한 당류, 염화나트륨 등과 같은 등장제를 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 수 있다. 또한, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같이 흡수를 지연시키는 제제를 포함시킴에 의해 주사가능한 약제학적 형태의 연장된 흡수를 초래할 수 있다.

몇몇 경우, 약물의 효과를 연장시키기 위하여, 피하 또는 근내 주사로부터의 약물의 흡수를 느리게 하는 것이 바람직하다. 이것은 수가용성이 낮은 결정질 또는 비결정질 재료의 액체 현탁액을 사용함에 의해 달성될 수 있다. 이후 약물의 흡수 속도는 이의 용해 속도에 의존적이고, 바꾸어 말해 결정 크기 및 결정질 형태에 의해 좌우될 수 있다. 대안적으로, 비경구적으로 투여되는 약물 형태의 지연된 흡수는 약물을 오일 비히클에 용해시키거나 현탁시킴에 의해 달성된다.

주사가능한 데포 형태는 폴리락티드-폴리글리콜리드와 같은 생분해가능한 중합체에서 본 화합물의 미세캡슐 매트릭스를 형성함에 의해 제조된다. 약물 대 중합체의 비와, 적용되는 특정 중합체의 특성에 따라서, 약물 방출의 속도가 조절될 수 있다. 생분해가능한 중합체의 구체예로는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(안히드라이드)가 있다. 데포 주사가능한 제형은 또한 약물을 신체 조직에 적합한 리포좀 또는 미세에멀젼에 포획함에 의해 제조된다.

본 발명의 화합물이 제약으로서 사람 및 동물에 투여되는 경우, 이들은 그 자체로 또는, 예를 들어 0.1 내지 99.5%(보다 바람직하게는 0.5 내지 90%)의 활성 성분을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 함유하는 약제학적 조성물로서 제공될 수 있다.

본 발명의 제제는 경구, 비경구, 국소 또는 직장으로 제공될 수 있다. 이들은 물론 각 투여 경로에 적합한 형태로 제공된다. 에를 들어, 이들은 정제 또는 캡슐 형태로 주사, 흡입, 눈 로션, 연고, 좌제 등에 의해 투여되고, 주사, 주입 또는 흡입에 의해 투여되고; 로션 또는 연고에 의해 국소적으로; 좌제에 의해 직장으 로 투여된다. 경구 투여가 바람직하다.

본원에 사용된 "비경구 투여" 및 "비경구적으로 투여된"이란 장관 및 국소 투여를 제외한 투여로서, 일반적으로 주사에 의한 투여 방법을 의미하고, 비제한적으로 정맥내, 근내, 동맥내, 경막내, 피막내, 안와내, 심장내, 진피내, 복막내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 거미막하, 척추관내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.

본원에 사용된 "전신적 투여", "전신적으로 투여된", "말초 투여" 및 "말초적으로 투여된"이란 화합물, 약물 또는 다른 물질이 직접 중추신경계로 투여되지 않고 환자의 전신으로 들어감으로써 대사작용 및 그밖의 유사 프로세스에 영향을 미치는 투여를 의미하고, 예를 들어 피하 투여가 있다.

상기 화합물은, 예를 들어 스프레이에 의해 경구, 비내를 포함하는 임의의 적합한 투여 경로에 의해서, 분말, 연고 또는 점적제에 의해 협측 및 설하를 포함하는 직장, 질내, 비경구, 수조내 및 국소적으로 사람 및 기타 동물을 치료하기 위해 투여될 수 있다.

선택된 투여 경로와 무관하게, 적합한 수화된 형태로 사용될 수 있는 본 발명의 화합물 및/또는 본 발명의 약제학적 조성물은 당업자에게 공지된 통상의 방법에 의해 약제학적으로 허용되는 용량 형태로 제형화된다.

본 발명의 약제학적 조성물에서 활성 성분의 실제의 용량 수준은 다양할 수 있어서 특정 환자, 조성물 및 투여 방법에 대하여 환자에게 독성을 나타내지 않으면서 요망되는 치료적 반응을 달성하기에 효과적인 활성 성분의 양이 수득된다.

선택되는 용량 수준은 적용되는 본 발명의 특정 화합물, 또는 이의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 적용되는 특정 화합물의 배설 또는 대사작용 속도, 치료 지속기간, 기타 약물, 적용되는 특정 화합물과 함꼐 사용된 화합물 및/또는 물질, 연령, 성별, 체중, 질병, 일반적인 건강 상태 및 치료 환자의 이전의 병력을 포함하는 다양한 인자들, 및 의학 분야에 널리 공지된 비슷한 인자들에 따라 달라질 것이다.

당 분야에서 통상의 지식을 지닌 의사 및 수의사는 요구되는 약제학적 조성물의 유효량을 용이하게 결정할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 본 발명의 화합물의 개시 용량을 요망되는 치료적 효과를 달성하기 위해 요구되는 것보다 낮은 수준으로 약제학적 조성물에 적용하고 점차로 요망되는 효과가 달성될 때까지 용량을 증가시킬 수 있었다.

일반적으로, 본 발명의 화합물의 적합한 매일의 용량은 치료적 효과를 제공하기에 효과적인 가장 낮은 용량으로서의 화합물의 양일 것이다. 이러한 유효 용량은 일반적으로 상기 언급한 인자들에 의해 달라질 것이다. 일반적으로, 지시된 요망되는 효과를 위해 사용되는 경우, 환자용의 본 발명의 화합물의 정맥내, 대뇌실내 및 피하 용량은 하루에 체중 킬로그램 당 약 0.0001 내지 약 100mg의 범위일 것이다.

필요하다면 활성 화합물의 매일의 유효량은 임의의 단위 용량 형태로서 하루 동안 적합한 간격으로 2회, 3회, 4회, 5회, 6회 이상의 부용량으로 개별적으로 투될 수 있다. 그러나, 바람직한 투여는 일당으로 이루어진다.

본 발명의 화합물은 단독으로 투여될 수 있으나, 약제학적 제형(조성물)으로서 화합물을 투여하는 것이 바람직하다.

다른 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체(첨가제) 및/또는 희석제와 함께 제형화된, 상기 기술된 치료적 유효량의 하나 이상의 본 화합물을 포함하는 약제학적으로 허용되는 조성물을 제공한다. 아래에 상세하게 기술되는 대로, 본 발명의 약제학적 조성물은 하기에 적합한 것들을 포함하여, 고체 또는 액체 형태로 투여되기 위해 특히 제형화될 수 있다: (1) 경구 투여, 예를 들어 물약(수성 또는 비수성 용액 또는 현탁액), 정제, 식괴, 분말, 과립, 혀에 적용되는 페이스트; (2) 예를 들어 무균 용액 또는 현탁액으로서 피하, 근내 또는 정맥내 주사되는 비경구 투여; (3) 피부, 폐 또는 구강에 적용되는, 예를 들어 크림, 연고 또는 스프레이로서의 국소 투여; 또는 (4) 예를 들어 페서리, 크림 또는 포움으로서의 질내 또는 인트라벡터내(intravectally); (5) 설하; (6) 안내; (7) 경피; 또는 (8)비내 투여.

본 발명에 따른 화합물은 다른 제약과의 유사성에 의해, 사람 또는 수의용 의약에 사용되는 임의의 편리한 방법으로 투여되도록 제형화될 수 있다.

또한 용어 "치료(treatment)"는 예방, 치료법(therapy) 및 치유(cure)를 포함하도록 의도된다.

이러한 치료를 받는 환자는 이를 필요로 하는 영장류를 포함하는 임의의 동물이고, 특히 사람, 및 말, 소, 돼지 및 양과 같은 다른 포유류; 및 일반적으로 가금류 및 애완 동물이다.

본 발명의 화합물은 그 자체로 또는 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 투여될 수 있고, 또한 페니실린, 세팔로스포린, 아미노글리코시드 및 글리코펩티드와 같은 항균제와 함께 투여될 수 있다. 따라서, 병용 치료는 처음 투여된 것의 치료적 효과가 완전히 사라지지 않았을 때 후속 투여가 이루어지는 방식으로 활성 화합물을 연속하여, 동시에 그리고 개별적으로 투여하는 것을 포함한다.

동물 사료에 본 발명의 활성 화합물을 첨가하는 것은 활성 화합물을 유효량으로 함유하는 적합한 사료 예비혼합물을 제조하고 이 예비혼합물을 최종 사료에 혼입시킴에 의해 바람직하게 수행된다.

대안적으로, 활성 성분을 함유하는 중간체 농축물 또는 사료 보충물을 사료에 혼합할 수 있다. 상기 사료 예비혼합물 및 최종 사료가 제조되고 투여될 수 있는 방법이 참조 문헌에 개시되어 있다 (예컨대, "Applied Animal Nutrition", WH Freedman and CO., San Francisco, USA, 1969 또는 "Livestock Feeds and Feeding" O and B books, Corvallis, Ore., USA, 1977).

조합 라이브러리

본 화합물은 그 자체로서 약제학적, 농약적 또는 그밖의 생물적 또는 의학 관련 활성 또는 물질 관련 특성을 스크리닝하기 위한 조합 라이브러리를 용이하게 생성한다. 도 1 및 2 참조, 본 발명의 목적을 위한 조합 라이브러리는 요망되는 특성을 위해 함께 스크리닝될 수 있는 화학적으로 관련된 화합물의 혼합물이고; 상기 라이브러리는 용액이거나 고체 지지체에 공유적으로 결합될 수 있다. 단일 반응에서의 많은 관련 화합물들의 제조는 수행될 필요가 있는 스크리닝 프로세스의 수를 상당히 감소시키고 단순화한다. 적합한 생물적, 약제학적, 농약적 또는 물질적 특성에 대한 스크리닝이 통상의 방법에 의해 수행될 수 있다.

라이브러리의 다양성은 다양한 상이한 수준으로 생성될 수 있다. 예를 들어, 조합 접근법에 사용된 기질 아릴기는 고리 구조의 다양성과 같은 코어 아릴 부분의 관점에서 다양할 수 있고/거나 다른 치환기와 관련하여 달라질 수 있다.

기술의 다양성은 당 분야에서 유기 소분자의 조합 라이브러리를 생성하기 위해 유용하다. 참조, 예를 들어 Blondelle 등 (1995) Trends Anal. Chem . 14:83; the Affymax US Patents 5,359,115 and 5,362,899: the Ellman US Patent 5,288,514; the Still 등 PCT publication WO 94/08051; Chen 등 (1994) JACS 116:2661: Kerr 등 (1993) JACS 115:252; PCT publications WO 92/10092, WO 93/09668 and WO 92/07087; and the Lerner 등 PCT publication WO 93/20242). 따라서, 약 16 내지 1,000,000개 이상의 디버소머(diversomer)에 대한 다양한 라이브러리가 합성되고 특정 활성 및 특성에 대해 스크리닝될 수 있다.

예시적인 구체예에서, 치환된 디버소머의 라이브러리가 스틸(Still) 등 PCT publication WO 94/08051에 개시된 기술에 적합한 해당 반응을 사용하여 합성될 수 있는데, 예컨대 기질의 한 위치에 정위된, 가수분해가능하거나 광용해가능한 그룹에 의해 중합체 비드에 결합된다. 스틸 등의 기술에 따라, 라이브러리는 일련의 비드상에서 합성되는데, 각 비드는 비드상에 특정 디버소머를 동정하는 일련의 태그를 포함한다. 효소 억제제를 발견하기에 특히 적합한 한 구체예에서, 비드는 투과가능한 막의 표면 상에서 분산될 수 있고, 디버소머는 비드 링커의 용해에 의해 비드로부터 방출될 수 있다. 각 비드로부터의 디버소머는 막을 가로질러 분석 구역으로 확산될 것이고, 여기에서 효소 분석물과 상호작용할 것이다. 수많은 조합 방법론의 상세한 설명이 하기에서 제공된다.

A) 직접 특성화

질량 분광계(MS)와 같이 기술의 민감도를 개발하려는 경향이 조합 화학 분야에서 증가하고 있는데, 이는 예컨대 화합물의 서브펨토몰 양을 특성화하고, 조합 라이브러리로부터 선택된 화합물의 화학적 구성을 직접 밝히는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 라이브러리가 불용성 지지 매트릭스상에 제공되면, 분리된 화합물 집단이 먼저 지지체로부터 방출되어 MS에 의해 특성화될 수 있다. 다른 구체예에서, MS 샘플 제조 기술의 일부로서, MALDI와 같은 상기 MS 기술을 사용하여 매트릭스로부터 화합물을 방출시킬 수 있으며, 특히 이 경우 불안정한 결합이 화합물을 매트릭스에 결합시키기 위해 처음부터 사용된다. 예를 들어, 라이브러리로부터 선택된 비드는 매트릭스로부터 디버소머를 방출시키고 MS 분석에 대해 디버소머를 이온화하기 위해 MALDI 단게에서 조사될 수 있다.

B) 다중핀 합성

본 방법의 라이브러리는 다중핀 라이브러리 포맷을 취할 수 있다. 간단하게, 게이센(Geysen) 및 이의 공동 연구자들은 (Geysen 등 (1984) PNAS 81:3998-4002) 마이크로역가 플레이트 포맷에 정렬된 폴리아크릴산 그레이팅된 폴리에틸렌 핀 상에서의 병렬 합성에 의해 화합물 라이브러리를 생성하는 방법을 도입하였다. 게이센 기술은 다중핀 방법을 사용하여 1주일 당 수천개의 화합물을 합성하고 스크 리닝하는데 사용될 수 있고, 결합된 화합물은 많은 분석에 재사용될 수 있다. 적합한 링커 부분이 또한 핀에 부가될 수 있어서 화합물은 순도 측정을 위한 합성 및 추가의 평가 이후에 지지체로부터 절단될 수 있다 (cf, Bray 등 (1990) Tetrahedron Lett 31:5811-5814; Valerio 등 (1991) Anal Biochem 197:168-177; Bray 등 (1991) Tetrahedron Lett 32:6163-6166).

C) 분할-커플-재조합

또 다른 구체예에서, 화합물의 다양한 라이브러리는 분할-커플-재조합의 방법을 사용하는 일련의 비드 상에 제공될 수 있다 (참조, 예컨대 Houghten (1985) PNAS 82:5131-5135; and US Patents 4,631,211; 5,440,016; 5,480,971). 간단히 말해, 상기 명칭은 라이브러리에 퇴화가 도입되는 각 합성 단계에서, 비드가 라이브러리의 특정 위치에 첨가되는 상이한 치환기의 수와 동등한 별개의 기로 분할되는 것을 포함하기 때문에, 상이한 치환기는 별개의 반응에서 커플링되고 비드는 다음 반복을 위한 하나의 푸울(pool)로 재조합된다.

한 구체예에서, 분할-커플-재조합 방법은 호프텐에 의해 처음 개발된 소위 "티 백(tea bag)" 방법과 유사한 접근법을 사용하여 수행될 수 있는데, 여기에서 화합물의 합성은 다공성 폴리프로필렌 백내애 밀봉된 수지상에서 발생한다 (Houghten 등 (1986) PNAS 82:5131-5135). 치환기는 적합한 반응 용액에 백을 정위시킴에 의해 화합물을 포함하는 수지에 커플링되는 한편, 수지를 세척하고 탈보호시키는 것과 같은 모든 공통의 단계는 한 반응 용기에서 동시에 수행된다. 합성 종료시에, 각 백은 단일 화합물을 함유한다.

D) 광-유도된, 공간적으로 주소화가능한 병렬 화학 합성에 의한 조합 라이브러리

합성 기질상의 위치에 의해 화합물의 동정이 이루어지는 조합 합성의 설계를 공간적으로 주소화가능한 합성이라 명명한다. 한 구체예에서, 조합 프로세스는 고체 지지체상의 특이적인 위치에 대한 화학적 시약의 첨가를 조절함에 의해 수행된다 (Dower 등 (1991) Annu Rep Med Chem 26:271-280; Fodor, SPA (1991) Science 251:767; Pirrung 등 (1991) US Patent No. 5,143,854; Jacobs 등 (1994) Trends Biotechnol 12:19-26). 포토리소그래피의 공간적 해상도는 소형화를 제공한다. 이러한 기술은 광불안정한 보호기를 이용한 보호/탈보호 반응을 이용하여 수행될 수 있다.

이 기술의 요점은 갤롭(Gallop) 등 (1994) J Med Chem 37:1233-1251에 개시된다. 합성 기질은 광불안정한 니트로베라트릴옥시카르보닐(NVOC) 보호된 아미노 링커 또는 다른 광불안정한 링커의 공유 결합에 의해 커플링용으로 제조된다. 빛을 사용하여 커플링용의 합성 지지체의 특정된 영역을 선택적으로 활성화한다. 빛에 의해 광불안정한 보호기의 제거(탈보호)는 선택된 영역의 활성화를 초래한다. 활성화 후에, 각각 아미노 말단상에 광불안정한 보호기를 포함하는 제 1 세트의 아미노산 유사체는 전체 표면에 노출된다. 커플링은 선행 단계에서 빛에 의해 처리된 영역에서만 발생한다. 반응을 중단하고, 플레이트를 세척하고, 기질을 다시 제 2 마스크를 통해 일루미네이션하여, 제 2의 보호된 빌딩 블록과의 반응에 대한 상이한 영역을 활성화한다. 마스크의 패턴 및 반응물의 서열은 생성물 및 이의 위치 를 규정한다. 이 프로세스가 포토리소그래피 기술을 사용하기 때문에, 합성될 수 있는 화합물의 수가 적합한 해상도로 처리될 수 있는 합성 부위의 수에 의해서만 제한된다. 각 화합물의 위치가 정확히 공지된다; 따라서, 다른 분자와의 상호작용이 직접 평가될 수 있다.

광-유도된 화학 합성에서, 생성물은 일루미네이션의 패턴 및 반응물의 첨가 순서에 의해 좌우된다. 리소그래피 패턴을 다양하게 함으로써, 수많은 상이한 세트의 시험 화합물이 동시에 합성될 수 있다; 이러한 특성이 많은 상이한 마스킹 방법을 발생시킨다.

E) 엔코딩된 조합 라이브러리

또 다른 구체예에서, 본 방법은 엔코딩된 태깅 시스템으로 제공된 화합물 라이브러리를 사용한다. 조합 라이브러리로부터 활성 화합물의 동정에 있어서의 최근의 개선은 주어진 비드가 수행한 반응 단계 및, 추론에 의해 이것이 운반하는 구조물을 독특하게 엔코딩하는 태그를 사용하는 화학적 지수 시스템을 적용하는 것이다. 개념적으로, 이러한 접근법은 파지 디스플레이 라이브러리를 모방하는데, 이 때 활성은 발현된 펩티드로부터 유도되나 활성 펩티드의 구조는 상응하는 게놈 DNA 서열로부터 추론된다. 합성 조합 라이브러리의 제 1 엔코딩은 코드로서 DNA를 적용하였다. 서열화가능한 바이오-올리고머(예컨대, 올리고누클레오티드 및 펩티드)를 사용한 엔코딩, 및 추가의 비서열화가능한 태그를 사용한 이원성 엔코딩을 포함하는 다른 형태의 다양한 엔코딩이 보고되었다.

1) 서열화가능한 바이오-올리고머를 사용한 태깅

조합 합성 라이브러리를 엔코딩하기 위해 올리고누클레오티드를 사용하는 원리는 1992년에 기술되었고 (Brenner 등 (1992) PNAS 89:5381-5383), 이러한 라이브러리의 실례는 다음해에 나타났다 (Needles 등 (1993) PNAS 90:10700-10704). 각각이 특이적인 디누클레오티드(각각 TA, TC, CT, AT, TT, CA 및 AC)에 의해 엔코딩되는 Arg, Gln, Phe, Lys, Val, D-Val 및 Thr(세분자 아미노산 코드)의 모든 조합으로 구성된 명목상 7 ⁷ (=823,543) 펩티드의 조합 라이브러리는 고체 지지체상에서 펩티드 및 올리고누클레오티드의 일련의 교대 라운드에 의해 제조되었다. 이 연구에서, 비드상의 아민 결합 기능성은 비드를 올리고누클레오티드 합성에 대한 보호된 OH기 및 펩티드 합성에 대한 보호된 NH ₂ 기(이 때, 1:20의 비로)를 생성시키는 시약과 동시에 예비인큐베이션함에 의해 펩티드 또는 올리고누클레오티드 합성에 대해 특이적으로 구별되었다. 완료시, 태그는 각각 69량체로 구성되었고, 이의 14 유닛이 코드를 운반하였다. 비드 결합된 라이브러리를 형광 표지된 항체와 함께 인큐베이션하고, 강하게 형광을 발하는 결합 항체를 함유하는 비드를 형광 활성화된 세포 분류(FACS)에 의해 회수하였다. DNA 태그는 PCR에 의해 증폭되고 서열화되었으며, 예정된 펩티드가 합성되었다. 상기 기술에 따라서, 화합물 라이브러리가 본 방법에 사용되기 위해 유도될 수 있고, 이 때 태그의 올리고누클레오티드 서열은 특정 비드가 수행하는 순차적 조합 반응을 동정함으로써 비드상에서 화합물의 동정을 제공한다.

올리고누클레오티드 태그의 사용으로 매우 민감한 태그 분석이 가능하다. 심지어, 이 방법은 태그와 라이브러리 구성원의 공동 합성을 교대시키기 위해 요구되는 보호기의 직교 세트의 신중한 선택을 요구한다. 더욱이, 태그, 특히 포스페이트 및 당 아노머 결합의 화학적 불안정성은 비올리고머 라이브러리의 합성에 적용될 수 있는 시약 및 조건의 선택을 제한할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 라이브러리는 분석용의 라이브러리 구성원의 선택적인 분리를 가능하게 하는 링커를 적용한다.

펩티드는 또한 조합 라이브러리의 태깅 분자로서 사용되어 왔다. 당 분야에서 두 가지의 예시적인 접근법이 개시되는데, 둘 모두는 코딩 및 리간드 가닥이 교대로 생산될 때 고체상에 분지된 링커를 적용한다. 제 1 접근법 (Kerr JM 등 (1993) J Am Chem Soc 115:2529-2531)에서, 합성에서의 직교성은 코딩 가닥에 대해서는 산-불안정한 보호 및 화합물 가닥에 대해서는 염기-불안정한 보호를 적용시킴으로써 달성된다.

대안적인 접근법 (Nikolaiev 등 (1993) Pept Res 6:161-170)에서, 분지된 링커를 적용하여 코딩 유닛 및 시험 화합물 둘 모두가 수지상의 동일한 작용기에 부착될 수 있다. 한 구체예에서, 절단가능한 링커는 분지점 및 비드 사이에 위치할 수 있어서 절단이 코드 및 화합물 둘 모두를 함유하는 분자를 방출시킨다 (Ptek 등 (1991) Tetrahedron Lett 32:3891-3894). 또 다른 구체예에서, 절단가능한 링커는, 시험 화합물이 뒤에 코드를 남기면서 비드로부터 선택적으로 분리될 수 있도록 정위될 수 있다. 이러한 최종 구성물은 특히 가치가 있는데, 그 이유는 코딩 그룹의 잠재적인 간섭없이 시험 화합물을 스크리닝할 수 있기 때문이다. 당 분야에서 독립적인 절단의 구체예 및 펩티드 라이브러리 구성원 및 이의 상응하는 태그의 서열화로부터 태그가 펩티드 구조를 정확히 예견할 수 있음이 확인되었다.

2) 비서열화가능한 태깅: 이원성 엔코딩

시험 화합물 라이브러리를 엔코딩하는 대안적인 형태는 이원성 코드로서 사용되는 일련의 비서열화가능한 일렉트로포릭 태깅 분자를 적용하는 것이다 (Ohlmeyer 등 (1993) PNAS 90:10922-10926). 예시적인 태그는 전자 포획 기체 크로마토그래피(ECGC)에 의해 펨토몰 수준 미만으로 이의 트리메틸실릴 에테르로서 검출가능한 할로방향족 알킬 에테르이다. 알킬 사슬의 길이에서의 다양성 뿐 아니라 방향족 할라이드 치환기의 특성 및 위치가 40개 이상의 이러한 태그의 합성을 가능하게 하고, 이것은 대체로 2 ⁴⁰ (예컨대, 10 ¹² 이상)개의 상이한 분자를 엔코딩할 수 있다. 최초의 보고(Ohlmeyer 등, 상술함)에서, 태그는 광절단가능한 o -니트로벤질 링커에 의해 펩티드 라이브러리의 유용한 아민기의 약 1%에 결합되었다. 이러한 접근법은 펩티드-유사 또는 다른 아민-함유 분자의 조합 라이브러리를 제조할 때 편리하다. 그러나 보다 다용도의 시스템이 개발되었는데, 이는 필수적으로 임의의 조합 라이브러리의 엔코딩이 가능하다. 이 때, 화합물은 광절단가능한 링커에 의해 고체 지지체에 부착될 것이고, 태그는 카테콜 에테르 링커를 통해 카르벤 삽입에 의하여 비드 매트릭스에 부착된다 (Nestler 등 (1994) J Org Chem 59:4723-4724). 이러한 직교성 부착 방법은 용액에서의 분석을 위한 라이브러리 구성원의 선택적인 분리 및 태크 세트의 산화성 분리 이후 ECGC에 의한 후속적인 디코딩을 가능하게 한다.

비록 수 개의 아미드 결합된 라이브러리가 당 분야에서 아민기에 부착된 일렉트로포릭 태그를 사용한 이원성 엔코딩을 적용하지만, 이러한 태그의 비드 매트릭스로의 직접 부착은 엔코딩된 조합 라이브러리에서 제조될 수 있는 구조에서 훨씬 큰 융통성을 제공한다. 이러한 방식으로 부착되면, 태그 및 이의 링커는 비드 매트릭스 자체만큼 거의 비반응성이 된다. 두 개의 이원성 엔코딩된 조합 라이브러리가 보고되었는데, 이 때 일렉트로포릭 태그는 고체상에 직접 부착되어 (Ohlmeyer 등 (1995) PNAS 92:6027-6031) 본 화합물 라이브러리를 생성하기 위한 지침을 제공한다. 둘 모두의 라이브러리는 라이브러리 구성원이 광불안정한 링커에 의해 고체 지지체에 결합되고 태그가 강한 산화에 의해서만 절단가능한 링커를 통해 부착되는 직교성 부착 방법을 사용하여 구성되었다. 라이브러리 구성원이 경쟁적으로 고체 지지체로부터 부분적으로 광용리될 수 있기 때문에, 라이브러리 구성원을 다중 분석에 사용할 수 있다. 또한 연속적인 광용리는 매우 높은 처리량 반복적 스크리닝 방법을 가능하게 한다: 먼저, 다중 비드를 96-웰 마이크로역가 플레이트에 놓고; 둘째로, 화합물을 부분적으로 분리시켜 분석 플레이트로 옮기고; 셋째로, 금속 결합 분석으로 활성 웰을 동정하고; 넷째로, 상응하는 비드를 단독으로 새로운 마이크로역가 플레이트에 재정렬하고; 다섯째로, 단일 활성 화합물을 동정하고; 여섯째로, 구조물을 디코딩한다.

이제부터 일반적으로 기술되는 본 발명은 하기 실시예를 참조로 보다 용이하 게 이해될 것인데, 이는 단지 본 발명의 특정 양태 및 구체예를 설명하기 위하여 제시되는 것이며 본 발명을 제한하려는 의도가 아니다.

실시예 1

N-(4-알릴옥시벤질)-N-(2-메톡시에틸)-N-(3-페닐-알릴)아민 (4)의 고체상 합성

폴리에틸렌 프릿이 구비된 3mL 폴리프로필렌 여과 튜브 중의 REM 수지(0.10g, 1.06mmol/g)에 DMF(1mL)를 첨가한 후, 2-메톡시에틸아민(92㎕, 1.06mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 24시간 동안 실온에서 진탕하였다. 형성된 수지(1)를 DMF(3 x 1mL), MeOH(4 x 1mL), 및 CH ₂ Cl ₂ (4 x 1ml)로 세척한 후, 진공 하에서 건조시켰다. 상기 수지(1)에 DMF(1mL) 중의 4-알릴옥시벤즈알데히드(153㎕, 1.06mmol) 및 NaCNBH ₃ (133mg, 2.12mmol)을 첨가한 후, 아세트산(10㎕)을 첨가하였다. 실온에서 밤새 진탕시킨 후, 형성된 수지(2)를 DMF(3 x 1mL), MeOH(4 x 1mL), 및 CH ₂ Cl ₂ (4 x 1ml)로 세척한 후, 진공 하에서 건조시켰다. 건조된 수지(2)를 DMF(1mL) 중의 신나밀 브로마이드(209mg, 1.06mmol)의 용액에 현탁시키고, 24시간 동안 실온에서 교반하여 수지(3)를 수득하였다. 여과 후, DMF(3 x 1mL), MeOH(4 x 1mL), 및 CH ₂ Cl ₂ (4 x 1ml)로 헹구고, 수지를 진공 하에 건조시켰다. 건조된 수지(3)에 폴리아민 수지(0.10g, 2.43mmol/g) 및 CH ₂ Cl ₂ (2mL)을 첨가하였다. 이 혼합물을 24시간 동안 실온에서 교반한 후, 여과하고, CH ₂ Cl ₂ (2 x 1.5ml)로 세척하였다. 여액을 수거하여 증발시켜 무색 오일로서 화합물 4(15mg, 42% 수율, HPLC에 의해 95% 순도 초과, LRMS m/z 338)를 수득하였다.

실시예 2

3차 아민(5-12)의 고체상 합성

화합물 4의 합성을 위해 실시예 1에 기술된 바와 같은 일반적인 절차를 사용하여 하기 각각의 화합물 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12를 제조하였다. 이들 화합물 각각의 전반적인 수율은 35% 내지 45%였으며, 각각의 화합물의 순도는 95% 초과 였다.

실시예 3

신나밀 부분을 포함하는 아난다미드 운반물질 억제제의 조합 라이브러리의 고체상 합성(도 1 참조)

REM 수지(1.06mmol/g)를 12개의 12mL 여과 튜브(0.80g/튜브, 0.848mmol)에 분배하고 8mL/튜브로 DMF를 분배하였다. 12개의 아민을 각각 8.48mmol/튜브로 12개의 반응 튜브에 첨가하였다. 실온에서 24시간 동안 진탕시킨 후, 형성된 수지(13)를 DMF(3 x 8mL), MeOH(4 x 8mL), 및 CH ₂ Cl ₂ (4 x 8ml)로 세척한 후, 진공 하에서 건조시켰다. 12개의 수지를 각각 0.10g(0.106mmol)/웰로 96웰 반응 블럭에 칼럼 1에서 칼럼 12까지 분배하였다. DMF 중의 8개의 알데히드(A 내지 H)를 각각 8개의 열, 즉 A 열 내지 H열에 1.0mL/웰(1.06mmol 알데히드 함유)로 분배한 후, NaCNBH ₃ 를 96웰에 133mg/웰로 분배한 후, 아세트산을 10㎕/웰로 첨가하였다. 실온에서 밤새 진탕시킨 후, 반응 혼합물을 여과하고, 수지를 DMF(3 x 1mL/웰), MeOH(4 x 1mL/웰), 및 CH ₂ Cl ₂ (4 x 1ml/웰)로 세척한 후, 진공 하에서 건조시켰다. DMF(96mL) 중의 신나밀 브로마이드(20g, 102mmol)를 96웰에 1.0mL/웰로 분배시켰다. 실온에서 24시간 동안 진탕시킨 후, 반응 혼합물을 여과하고, 수지를 DMF(3 x 1mL/웰), MeOH(4 x 1mL/웰), 및 CH ₂ Cl ₂ (4 x 1ml/웰)로 세척한 후, 진공 하에서 건조시켰다. 폴리아민 수지(2.43mmol/g)를 96웰에 0.10g/웰로 분배시킨 후, CH ₂ Cl을 2mL/웰로 분배시켰다. 이 혼합물을 24시간 동안 교반시킨 후, 여과하고, CH ₂ Cl ₂ (2 x 1.5mL/웰)로 세척하였다. 여액을 수거하고 증발시켜 96개의 최종 화합물을 수득하였으며, 이는 구조식 16으로 표현된다. 이에 대해 HPLC 및 질량 스펙트럼 분석을 수행하였다.

LRMS 실험에서 관찰된 분자 이온(M + H ⁺ ) 및 각각의 라이브러리 구성원에 대해 수득된 수율이 하기 표에 기재된다. 라이브러리의 각각의 구성원의 구조식은 본 실시예 및 도 1의 반응식을 참조하여 추정될 수 있다.

실시예 5에 기술된 아난다미드 기능 검정법을 사용하여 측정된, 상기 라이브러의 구성원의 포유류 아난다미드 운반물질에 대한 IC ₅₀ 값(μM)을 하기 표에 기재하였다. 본 검정에서 AM-404의 IC ₅₀ 는 2.0μM이었다. 상기 라이브러리의 개개의 구성원에 대한 구조식은 본 실시예 및 도 1의 반응식을 참조하여 추정될 수 있다.

실시예 4

4-알릴옥시벤질 부분을 포함하는 아난다미드 운반물질 억제제의 조합 라이브러리의 고체상 합성(도 2 참조)

도 2에 개략적으로 도시된 조합 라이브러리를 실시예 3에서 개요된 일반적인 프로토콜을 사용하여 상기 반응식에 따라 제조하였다. 이에 따라, 구조식(20)의 96개의 화합물이 제조되었다.

LRMS 실험에서 관찰된 분자 이온(M + H ⁺ ) 및 각각의 라이브러리 구성원에 대해 수득된 수율이 하기 표에 기재된다. 라이브러리의 각각의 구성원의 구조식은 본 실시예 및 도 2의 반응식을 참조하여 추정될 수 있다.

실시예 5에 기술된 아난다미드 작용성 검정법을 사용하여 측정된, 상기 라이브러의 구성원의 포유류 아난다미드 운반물질에 대한 IC ₅₀ 값(μM)을 하기 표에 기재하였다. 본 검정에서 AM-404의 IC ₅₀ 는 2.0μM이었다. 상기 라이브러리의 개개의 구성원에 대한 구조식은 본 실시예 및 도 2의 반응식을 참조하여 추정될 수 있다.

실시예 5

3-(4-{[(2-메톡시-에틸)-(3-페닐-알릴)-아미노]-메틸}-페닐)-아크릴산(21)의 고체상 합성

폴리에틸렌 프릿을 구비한 폴리프로필렌 여과 튜브 중의 Wang 수지(1.1mmol/g, 1.00g)에 DMF(5mL), 및 CH ₂ Cl ₂ (5mL)을 첨가하고, 4-포르밀신남산(5.5mmol, 969mg), DMAP(1.08mmol, 132mg) 및 디이소프로필카르보디이미드(5.5mmol, 861㎕)를 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 24시간 동안 진탕시켰다. 형성된 수지를 DMF(3 x 5mL), MeOH(3 x 5mL), 및 CH ₂ Cl ₂ (4 x 5ml)로 세척한 후, 진공 하에서 건조시켰다. 수지(100mg)에, DMF(1mL) 중의 2-메톡시에틸아민(1.1mmol, 96㎕), Na(OAc) ₃ BH(2.2mmol, 466mg) 및 아세트산(25㎕)을 첨가하였다. 실온에서 밤새 진탕시킨 후, 형성된 수지를 DMF(3 x 1mL), MeOH(3 x 1mL), 및 CH ₂ Cl ₂ (4 x 1ml)로 세척한 후, 진공 하에서 건조시켰다. 형성된 수지를, DMF(1mL) 중의 트랜스-신남알데히드(1.1mmol, 139㎕), Na(OAc) ₃ BH(2.2mmol, 466mg) 및 아세트산(10㎕)의 용액에 현탁시켰다. 이 혼합물을 실온에서 24시간 동안 진탕시켰다. 형성된 수지를 DMF(3 x 1mL), MeOH(3 x 1mL), 및 CH ₂ Cl ₂ (4 x 1ml)로 세척한 후, 진공 하에서 건조시켰다. 건조된 수지에 폴리아민 수지 및 CH ₂ Cl ₂ 을 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반한 후, 여과하고 CH ₂ Cl ₂ (2 x 1.5mL)로 세척하였다. 여액을 수거하고 증발시켜 무색 오일로서 화합물(21)을 수득하였다(LRMS m/z 351).

실시예 6

아난다미드 흡수 기능 검정

아난다미드 흡수 특징을, 96웰 포맷(반응물 용량 500㎕)을 사용하여, 사람 단핵구(U-937 세포)로 수행하였다. U-937 세포(400㎕ 중 10 ⁵ 세포)에 의한 방사선표지된 아난다미드의 흡수가, 50㎕의 용액으로 첨가되는 시험 화합물 및 50㎕의 [ ³ H]-AEA(2nM)/AEA(98nM)의 존재하에 37℃에서 15분 인큐베이션하는 동안에 발생하였다.

U-937 세포 및 [ ³ H]-AEA/AEA를 25mM NaHCO ₃ , 11mM 글루코오스, 50μM 아스코르브산 및 1% BSA를 함유하는 크렙스(Kreps) 완충액 pH 7.4 중에 준비하였다. 이러한 인큐베이션 완충액을 5분 동안 산소화시킨 후에 인큐베이션시켰다. 기준 대조군을 흡수를 방지하는 임의의 시험 또는 기준 화합물의 부재 하에 15분 동안 4℃에서 인큐베이션시켰다.

인큐베이션 후에, 25mM NaHCO ₃ 를 함유하는 크렙스 완충액으로 세척된 "유니필터 96-웰 GFB 플레이트"(Packard)를 통한 여과에 의해 흡수를 중단시켜 유리 [ ³ H]-AEA를 제거하였다. 흡수에 상응하는 U-937 세포와 관련된 방사선활성이 유니필터 상에서 보유되었고, 이를 마이크로신트 0 신틸레이션 리퀴드(Microscint 0 scintillation liquid)(Packard)를 사용하여 탑카운트 마이크로플레이트 신틸레이션 카운터(Topcount Microplate Scintillation Counter)로 측정하였다.

도 3 내지 도 5는 본 발명의 특정 화합물 및 이러한 검정에서 측정된 이들의 IC ₅₀ 값을 도시한 것이다. 기준물질로서 사용된 기준 화합물 AM404를 10 ^-9 M 내지 10 ^-4 M에 이르는 10가지 농도로 시험하여 IC ₅₀ 값을 얻었다[참조: Maccarrone, M. et al. "Anandamide hydrolysis by human cells in culture and brain", J. Biol. Chem. 1998, 273: 32332-32339; and Muthian, S. et al. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2000, 293, 289-295].

실시예 7

아난다미드 및 화합물 4의 단독 및 조합시의 생체내 항침해수용성 효과(도 6 참조)

개요

본 실험은 마우스의 핫 플레이트 시험으로 아난다미드, 화합물 4, 아난다미드와 화합물 4의 조합의 진통 효과를 평가하였다.

시험 시스템

체중이 17g 내지 23g인 100마리의 수컷 스위스 마우스 ICO:OF1(IOPS Caw)(Iffa Credo, France)를 본 연구에 사용하였다. 마우스를, 12시간 명암 사이클의 19.5 내지 24.5℃의 온도 및 45 내지 65%의 상대 습도로 조절되는 룸에 수용하고, 본 연구내내 여과된 수돗물 및 표준 펠릿화된 실험실 음식물(UAR, France)에 마음대로 접근하게 하였다. 동물용 설비에의 수용시, 동물들을 한 우리에 20마리씩 수용하고, 적어도 5일의 순응기간을 준수하였다. 동물들은 꼬리에 개별 표시하였다.

사용된 물질

아난다미드

화합물 4

비히클 = 20% DMSO와 함께 0.9% NaCl

장비 = 핫 플레이트(Socrel model DS37; Ugo Basile, Italy)

주요 데이타 처리 시스템 = SigmaStat ^® v. 2.0.3(SPSS Science Software, Erkrath GmbH)

연구 설계

각각 10마리 동물로 된 10개의 그룹을 이용하였다. 개개의 그룹을 하기와 같이 처리하였다. 사용된 용량은 자유 활성 물질에 대해 표현된 것이다. 시험 물질 및 기준 물질, 및 비히클을 5ml/kg의 용량으로 무작위 순서로 정맥내 경로(iv)에 의해 투여하였다. 아난다미드 및 화합물 4를 혼합물로서 10mg/kg의 용량으로 정맥내 경로에 의해 동시에 투여하였다(그룹 3, 7, 및 10).

그룹 1 : 비히클(t = 20분)

그룹 2 : 아난다미드 (20mg/kg)(t = 20분)

그룹 3 : 아난다미드 (20mg/kg) + 화합물 4 (10mg/kg) (t = 20분)

그룹 4 : 비히클 (t = 30분)

그룹 5 : 아난다미드 (20mg/kg) (t = 30분)

그룹 6 : 화합물 4 (10mg/kg) (t = 30분)

그룹 7 : 아난다미드 (20mg/kg) + 화합물 4 (10mg/kg) (t = 30분)

그룹 8 : 비히클(t = 60분)

그룹 9 : 아난다미드 (20mg/kg)(t = 60분)

그룹 10 : 아난다미드 (20mg/kg) + 화합물 4 (10mg/kg) (t = 60분)

실험 프로토콜

투여 후 20분, 30분, 및 60분에, 시험 마우스를 56 ±0.2℃로 유지된 금속재 핫 플레이트 상에 두었다. 핫 플레이트에서 앞발을 핥거나 핫 플레이에서 점프하는 것에 의해 특징되는 침해수용성 반응 잠복기를 기록하였다. 컷오프 시간을 30초로 설정하였다[참조: Eddy NB, Touchberry CF, Lieberman JE., Synthetic analgesics. 1-Methadone isomers and derivatives" J. Pharmacol. Exp. Ther. 1950; 98; 121-137 and Beltramo M, Stella N, Calignano A, Lin SY, Makriyannis A, Piomelli d. "Fuctional role of high-affinity anadamid transport, as revealed by selective inhibition" Science 1997; 277: 1094-1097].

결과

가공되지 않은 데이타가 하기에 제시된다. 상기 실험으로부터의 평균치가 도 6에 그래프로 제시되어 있다. 도 6에 표식화된 결과는 평균 ±표준편차(sem)로서 표현된다. ANOVA(2 방식): 비히클, 아난다미드 및 이의 결합 그룹에 대한 시간/처리 효과 뿐만 아니라 둘 간의 상호작용. 듀넷 시험(Dunnett's test): *는 P가 0.05 미만인 경우에 대해 비히클 처리된 그룹과 비교한 유의차를 나타낸다. 듀넷 시험: †는 P가 0.05 미만인 경우에 대해 t-60에서 동일하게 처리된 그룹과 비교한 유의차를 나타낸다. AVOVA(1 방식): 비히클, 아난다미드 및 이의 결합 그룹에 대한 t-30에서의 경우. 듀넷 시험: °는 P가 0.05 미만인 경우에 대해 비히클 처리된 그룹과 비교한 유의차를 나타낸다. 비히클: 염수 + 20% DMSO; n = 그룹 당 10마리 마우스

침해수용성 반응 잠복기(초)

시간 = 투여 후 20분(각각 도 6의 칼럼, 1, 2 및 3)

시간 = 투여 후 30분(각각 도 6의 칼럼, 4, 5, 6 및 7)

시간 = 투여 후 60분(각각 도 6의 칼럼, 8, 9 및 10)

참고문헌 인용

본원에서 인용된 모든 특허 및 문헌은 본원에 참고문헌으로 인용된다.

등가물

당업자들은 통상적인 실험 만으로도 본원에 기술된 본 발명의 특정 구체예에 대한 다수의 등가물을 인지하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 하기청구의범위에 의해 포함되는 것으로 의도된다.