Chemical constructs

【発明の詳細な説明】

【０００１】 発明の分野本発明は固相合成に用いられる化学構築物、該構築物を用いる固相合成産物の検出および／または同定法に関する。

【０００２】 発明の背景固相合成は長年固相合成分野で知られており、またより最近では非ペプチドの合成にもますます用いられて来ている。

【０００３】 固相合成は組合せ化学および薬剤開発の新規なリード化合物の可能性ある供給源としての化学ライブラリーの作出の分野で特定の適用が見出されている（例えば、Anthony W. Czamik, Analytical Chemistry News and Features, June 1, 1
998, pp378A-386AおよびThe Combinatorial Index, Barry A. Bunin, Academic
Press, San Diego 1998参照）。 組合せ化学法の特徴は、比較的少ない反応数で比較的限られた数の分子構成ブロックから極めて多数の異なる化合物を製造できることである。 組合せ化学では「分割とプール」アプローチを用いるが、そこでは固相支持体につなぎ止められた化学出発物質の懸濁物をＮ個の部分に分け、その各々を異なる試薬と反応させる。 次ぎにＮ個の反応の生成物をプールし、十分混合し、得られたプールをＮ'個の部分に分け、再び各部分を異なる試薬と反応させる。 一連の反応に複数のステップがある場合はこの手順を何回も繰り返す。
例えば、３段階の反応については、反応混合物を各段階で１０個に分割する場合、各プールは他の部分と再び組み合わせる前に異なる試薬と反応させるが、このプロセスによって形成される全化合物数は１０ ^３ ＝１０００となる。 従って分割とプール技術を用いることで、最小の反応数（上記の場合では３０）で多数の異なる分子が合成できる。

【０００４】 固相支持体（例えば樹脂ビーズ）の各々はそれにつなぎ止められている単一の生成分子を有するので原則として各反応生成物は、それぞれ単一の固相支持体を単離してその支持体から生成物を開裂させることにより、簡単に分離して分析したり、あるいは生物学的試験を施すことができる。 しかしながら組合せ法によって作製された多数の化合物は、各化合物の同定および特性決定が実行不能であり得ることを意味する。 結局、これらの化合物は通常はまず固相支持体上または支持体から開裂させた後に試験し、いくつかの生物学的活性を示す化合物だけが次ぎに同定される。 行われる生物学的試験を最小限にするには、化合物を所定の化合物数を含むプールで試験して、不活性プールを排除して、活性プールをさらに検討すればよい。 これらの化合物の生物学的活性は、短時間で多数の化合物の分析を可能にする高処理量自動アッセイ法を用いて分析することができる。

【０００５】 組合せライブラリーの合成に典型的に用いられる樹脂ビーズは架橋ポリスチレン樹脂から誘導され、通常９０μｍおよび２５０μｍのオーダーの直径（すなわち、裸眼でようやく見える）を有する。 一定重量または一定容量の樹脂中のビーズの数は平均ビーズ径にもよるが、例えば１５０μｍのビーズ径では樹脂塊１ｍ
ｇにつきおよそ５００個である。 ビーズへの典型的な化合物添加量は０．１〜０
． ４ｍｍｏｌｇ ^−１のオーダーであるので上記に示された寸法のビーズは個々にビーズ当たり化合物約１ナノモルの化合物添加量を有することになる。 従って固相構築物を用いて研究する化学者が直面する問題の１つは、各化合物が極めて少量だけライブラリーに存在するかもしれず、所定の固相に存在する化合物は生物学的試験と同定の双方に割り当てるには必ずしも十分でないので、組合せライブラー中の種々の化合物をいかにして同定および特性決定するかということであることが分かるであろう。

【０００６】 組合せライブラリー中の化合物をいかにして同定するかという問題に対して知られている１つのアプローチとして、化合物の特性が決定できるコードタグを有する各々の支持体を提供することがある。 従って例えば、所望の標的化合物の構築に並行して、固相支持体上の一連のステップでコードタグを構築すればよく、
このコードタグは生成化合物の合成履歴を反映し、各生成化合物に独特なものである。 このコードタグは通常、生成化合物を構築するのに用いられる化学に直交するタイプの化学反応を用いて支持体で構築され、これによりコードユニットと生成化合物が確実に混乱しないようになる。 生成化合物が試験され、その生物学的活性が確認されたら、次いでこのコードタグを解読して化合物を同定することができる。

【０００７】 もう１つのアプローチでは、Geysen et al., Chemistry & Biology, 1996, Vo
l. 3, No. 8, pp679-688およびＷＯ９７／３７９５３に記載のように、同位体標識などのコードタグを特に固相と基質の間のリンカー基に組み込めばよい。 このアプローチは、直交化学を用いる別個のコードタグの形成を必要とせず、それによって関与する全体の合成ステップ数が減るという利点がある。

【０００８】 固相化学者が直面するさらなる問題としては、所定の一連の反応の生成物を定量するのが困難であるということである。 組合せ法の一部であるかどうかにかかわずいずれの固相合成法でも、一連のステップにおいて所定の反応ステップに最適な条件を決定することは困難である。 また反応の進行をモニターして特定の反応が完全に進行したかどうかを決定することも困難である。 これはある段階が完全に進行できないことが副生成物の形成をもたらし、それによりそうでなければ比較的簡単な分離手法になるものを複雑にする、多段階固相合成においては特に重要である。 ある反応ステップまたは一連のステップで複数の生成物が形成される場合、あるいはある反応ステップが完全に進行しなかった場合には、絶対量として、または他の反応生成物に対する相対濃度としてのいずれかで反応生成物を定量する手段ががあることは極めて有効である。 生成物がミリグラム量で生じる場合には定量は種々の機械的方法、例えば核磁気共鳴（ｎｍｒ）分光光度法を用いて行うことができる。 しかしながら分析に利用できる生成物の量が１ナノモルといった少量であり得る場合には定量はずっと困難になる。

【０００９】 固相合成の生成物を測定するには破壊的分析法と非破壊的分析法の双方が知られているが（The Combinatorial Index, 同上参照）、固相合成に伴って認識される問題の１つに、固相支持体で行われる反応をモニターすることは通常の液相反応をモニターすることよりも一般により困難であるということである（例えば、上記のCzamikの論文を参照）。 このことは特に、かかる方法によって作出された多数の化合物を分析するのに迅速高処理量法を用いる必要がある組合せ化学法の生成物ついてはその通りである。 質量分析などの技術は高処理量分析が得られる手段として理想的に適合できる可能性があるが、必ずしも総ての化合物が質量分析条件下で保証された応答を生じるわけではないという本質的な問題がある。
実際、多くの化合物はマトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）およびエレクトロスプレー質量分析法など、分子の著しいフラグメンテーションを引き起こさずに分子イオンを検出しようとするいわゆる「ソフトな」質量分析法にとっては「目に見えない」ものである。 これに関して「ソフト」とは単にフラグメントでない分子イオンを与えるスペクトル法を意味する。 この理由の１つとして、ＭＡＬＤＩおよびエレクトロスプレー条件下では多くの化合物、特にペプチドは検出可能な質量スペクトル応答が得られるほど十分にはイオン化されないということがある。

【００１０】 Geysen et al.（同上）はリンカーにリジンなどの容易にイオン化できる塩基性中心を導入することを示唆してこの問題に取り組んでおり、さらに構築物を質量分析に増感させる荷電基を与えるため、後処理中にアルキル化によってその塩基性中心を定量し得ることを示唆している。 しかしながら、このアプローチの１
つの欠点として、種々の合成ステップ中にアミン基を検出する必要があり、結局分析に先立ちアミン基を脱保護する必要があるということである。

【００１１】 Geysenのアプローチの発展はCarrasco et al. Tetrahedron Letters, 1997, 3
8, No. 36, pp6331-6334に記載されている。 Carrascoの方法は第１のリンカー基を介して筆者が「イオン化タグ」とも呼んでいる基に結合された樹脂ビーズを含んでなる構築物を形成することを含む。 この「イオン化タグ」は次ぎに第２のリンカー基を介して基質と結合される。 第１および第２のリンカー基は直交開裂し、すなわちそれらは異なる化学を用いて選択的に開裂させることができる。

【００１２】 Carrasco et alで開示されている特殊な例では、第１のリンカー基は光化学的に開裂可能であり、一方、第２のリンカー基は化学的に開裂可能である。 Carras
coによって用いられた「イオン化タグ」は配列（Ｃ末端から読むと）Ｇｌｙ−Ｐ
ｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｌａを有し、かつ、リジンに結合したＮ−（２−トリメチルアンモニウム）−アセチル基を有するテトラペプチド鎖である。 イオン化タグの目的は２つある。 １つには、構築物をマトリックス支援レーザー脱離イオン化（Ｍ
ＡＬＤＩ）質量分析によって検出できるようにするすでにイオン化されている「
増感基」を提供することであり、もう１つには、構築物に質量を付加し、それによって質量スペクトルで低分子量ピークによってスワンピング(swamped)またはマスキングされないで基質分子を検出できるようにすることである。

【００１３】 しかしながらCarrascoの構築物を用いる場合、特に構築物において用いられる「イオン化タグ」にはいくつかの重要な潜在的問題がある。 さらに詳しくは、第四級アンモニウム増感基は化学者がその構築物上で行いたい化学種の多くとは適合しないと考えられる。 このように例えばトリメチルアンモニウム基は潜在的に化学的反応性があり、さらにこの陽イオン基はイオン交換中心としても陰イオンとの複合体としても機能し得る。

【００１４】 発明の概要本発明の目的は、公知の方法に固有の問題を避け、かつ、質量分析を用いる固相合成技術の生成物の検出および同定手段を提供する、固相支持体上の化学反応をモニターする手段を提供することにある。

【００１５】 従って第１の態様では、本発明は、固相合成法に用いられる化学構築物であって、基質Ｒを有する固相支持体Ｑを含んでなり、基質Ｒ連結基Ｙを介して固相支持体Ｑに連結され、連結基Ｙは直交かつ選択的に開裂可能な第１および第２の開裂部位を有し、第２の開裂部位は選択的に開裂可能であって基質を遊離し、かつ、第１の開裂部位は第２の開裂部位と固相支持体の間の位置にあり、選択的に開裂可能であって基質と連結基Ｙの少なくとも一部を含んでなるフラグメントＦｒ
を遊離し、第１の開裂部位における開裂が第１の開裂部位における化学フラグメントＦｒに、化学フラグメントＦｒを例えば質量分析などの装置に増感させる増感基Ｇを含んでなる部分を形成または導入することを特徴とする化学構築物を提供する。

【００１６】 本発明の構築物において、増感基Ｇは構築物の「骨格」の開裂によって形成または導入される。 これは、基質の合成を通じて増感基が存在する場合、または側鎖の開裂もしくはペンダント増感基からの保護基の除去によって増感基が明らかになる場合といった公知の構築物（例えばCarrasco et al., 同上参照）とは対照的である。

【００１７】 増感基ＧはフラグメントＦｒ、従って間接的には基質Ｒを所定の分析法、特に質量分析法による分析に対してより高い感受性とする。 従って増感基Ｇは質量分析、特にエレクトロスプレーイオン化質量分析に対応する条件下で容易にイオン化して強いシグナルを与える基であり得る。

【００１８】 固相支持体からの化学フラグメントＦｒの選択的開裂の際に認められたイオン化可能な増感基は、そのフラグメントが質量分析において強い応答を与えるのに確実に十分にイオン化されるように働く。 このことにより、好適なイオン化基が存在せず、高処理量質量スペクトル技術による分析が問題となる固相法によって合成された多くの分子に固有の問題が克服される。

【００１９】 イオン化可能な基としては、例えば塩基性アミノ基またはカルボキシレート基が挙げられるが、特には塩基性アミノ基である。 本明細書において「塩基性アミノ基」とは特に容易にプロトン化するアミノ基をいうことが分かるであろう。

【００２０】 塩基性アミノ基は第一級アミノ基、第二級アミノ基または第三級アミノ基であってよい。 塩基性アミノ基が第三級アミノ基である場合、それは例えばピペリジノ、ピペラジノ、ピロリジノまたはモルホリノなどの環状アミノ基が挙げられ、
現在のところピペリジノまたはピペラジノ（例えばＮ−メチルピペラジノ）が好ましい。

【００２１】 本発明によれば、塩基性アミノ基など増感基Ｇを含む部分は化学フラグメントＦｒ（以降、分析フラグメントともいう）が固相支持体から開裂された際に第１
の開裂部位に形成または導入される。 このようにして増感基Ｇを形成する利点としては、構築物の化学を妨害する既存または予め形成されていた増感基の潜在的な問題を回避できることにある。 さらに独立に保護されている増感基を持つ必要性もなくなり、それにより付加的な脱保護という問題である、第１および第２の開裂部位における開裂のために化学者が利用できる化学現象（化学作用）が限定され得るという必要性がなくなる。 このように例えば、保護されたペンダント増感基が存在しており、例えば脱保護に必要とされる条件がトルフルオロ酢酸などの酸の使用を含んでいた場合、このことにより第２の開裂部位が構築物の残部に基質を結合する際に酸に不安定な開裂部位の使用が有効に避けられる。 本発明の構築物はかかる問題を回避するものである。

【００２２】 増感基Ｇを構成する原子または官能基は樹脂からのフラグメントＦｒの開裂に先立って構築物内にマスキング形態で存在してもよく、この開裂条件は単に増感基Ｇを脱マスキングする働きをするに過ぎない。 あるいは、増感基Ｇを構成するまたは含有する原子または官能基は開裂反応時に開裂部位に導入され得る。 例えば、増感基が塩基性アミノ基であれば、アミノ基の窒素原子は開裂前に構築物内に存在していてもよいし、または開裂反応時に導入されてもよい。

【００２３】 増感基Ｇが開裂反応時に外部の供給源から導入される場合、それはより大きな化学部分の一部を形成していてもよい。 例えばＧ基は基Ｘ−Ｇの一部として導入されてもよく、ここで、Ｘは求核試薬または求電子試薬の残基、例えば窒素または硫黄ベースの求核基、例えば式Ｇ−Ａｌｋ−Ｎｕｃ｛ここで、Ａｌｋは所望により酸素、窒素および硫黄から選択される１以上のヘテロ原子が挿入されていてもよいアルキレン基（例えばＣ _２−２０ 、好ましくはＣ _２−６アルキレン基である）であり、Ｎｕｃはアミン（例えば、ＮＨまたはＮＲ'（ここでＲ'はＣ _{１− ６}アルキル基である））またはチオレート基などの求核試薬であり、かつＮｕｃ
はアミンまたはチオレート基などの求核試薬である｝の基である。

【００２４】 化学フラグメントＦｒはフラグメントの質量スペクトルに特徴的なサインを付与する手段を含むことが好ましい。 このサインは有利には「ピーク分割」同位体標識をフラグメントに組み込むことによって提供され得る。 ピーク分割同位体標識はいくつかの安定な同位体形態で存在する少なくとも１つの原子を含んでなる。 所定の原子が同位体の混合物で標識されるようにフラグメントＦｒの１以上の特定の原子を同位体標識することにより、分子イオンの質量スペクトルが特徴的なパターンとして明らかになるが、その正確なパターンは個々の同位体の相対量によって異なる。 従って例えばフラグメントＦｒの所定の原子が、原子の５０％
が一方の同位体形態となり、５０％がもう一方の同位体形態となるように標識されるとすれば、質量スペクトルはピークがほぼ同じ高さの特徴的な二重線としての分子イオンを示すことになる。

【００２５】 ピーク分割原子の目的は分析フラグメントＦｒに由来する質量スペクトルのいずれかのピークに特徴を与える特徴的なパターンを与え、それにより無関係な物質によるピークからかかるピークを識別することにある。

【００２６】 同位体ピーク分割標識として使用できる原子の例としては、 ^１ Ｈ／ ^２ Ｈ（Ｄ）
、 ^７９ Ｂｒ／ ^８１ Ｂｒ、 ^１２ Ｃ／ ^１３ Ｃ、 ^１４ Ｎ／ ^１５ Ｎおよび^１６ Ｏ／ ^１８ Ｏ
が挙げられる。

【００２７】 フラグメントＦｒは単一のピーク分割同位体標識を含んでもよいし、または１
以上のかかる標識を含んでもよい。 例えば同位体標識は単一の臭素原子であってもよく、この場合には固相支持体からの開裂後に遊離した分析フラグメントＦｒ
の分子イオンが二重線として現れる。 第２の、または二次的なピーク分割標識を導入することにより、分子イオンについてより複雑なピークパターンが作られる。

【００２８】 同位体ピーク分割標識は第１の開裂部位と第２の開裂部位の間に位置することが好ましい。

【００２９】 第１および第２の開裂部位は第１および第２のリンカー基Ｌ ^１およびＬ ^２によって規定される。 「スペーサー基」Ａは２つのリンカー基Ｌ ^１とＬ ^２の間に挿入することができ、スペーサー基Ａは典型的には同位体ピーク分割標識を含む。 従って本発明の１つの好ましい具体例では、以下で定義されるように、連結基Ｙが式Ｌ ^１ −Ａ−Ｌ ^２を有する（ここで、Ｌ ^１は第１の開裂部位を規定する第１のリンカー基であり、Ａはピーク分割同位体標識を含む化学基（スペーサー基）であり、かつ、Ｌ ^２は第２の開裂部位を規定する第２のリンカー部位である）化学構築物が提供される。

【００３０】 第１および第２の開裂部位は直交かつ選択的に開裂可能であり、すなわち開裂部位の一方において開裂を行うのに用いられる条件は他方を開裂しない。 広範な種々のタイプの開裂反応が使用でき、例えば酸により触媒される開裂、塩基により触媒される開裂、金属により触媒される開裂、酸化開裂、還元開裂、求核置換、１，２ビス求核試薬による開裂、求電子置換、ならびに熱、光化学および酵素開裂から選択される反応が挙げられる。

【００３１】 光化学条件下で選択的に開裂されて増感基Ｇ（例えばアミン基）を露出または導入することができるリンカー基の例としては、ο−ニトロベンジルカルバメート基などのカルバメート基が挙げられ、ここでは最初の開裂がベンジルメチレン基とその隣接する酸素原子との間で起こった後、二酸化炭素が失われて塩基性アミノ基が得られる。

【００３２】 求核置換によって開裂し得る（例えば、増感基Ｇの露出または導入を目的とする）リンカー基の例としてはスルホンアミドリンカー基が挙げられ、ここではスルホンアミドのアリール（例えば、フェニル）環が、好ましくはアリール環のオルト位にニトロ基などの電子求引基を含む（例えば、Kay et al. Tetrahedron L
etters- 1997, 38(39)参照）。 アミノ部分とスルホニル部分の間のリンカーの開列は、１，８−ジアゾ二環式［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、モノホリンまたは炭酸ナトリウムなどの塩基の存在下でチオールまたはチオレート求核試薬などの求核試薬によって行うことができる。 求核置換によって開裂し得る基のさらなる例としては、５−カルボキシ−２−メルカプトピリミジンなどのメルカプトピリミジン基づく「セーフティーキャッチ(safety catch)」リンカーが挙げられ、酸化条件下で反応させてスルホキシドまたはスルホン結合を生じた後に求核性アミノ基と反応して２−アミノピリミジンを形成する。 かかるリンカーは例えばピリミジンまたはＮ置換ピペラジン（例えば、Ｎ−メチルピペラジン）などの環状アミン、または酸化剤、好ましくは過酸もしくはペルオキシ一硫酸カリウム（例えば「オキソン」）などの過塩といった比較的穏やかな酸化剤でまず酸化した後のアミノ基含有チオレート求核試薬（例えばジメチルアミノエチルチオレート）と反応させることにより開裂し得る。

【００３３】 第１または第２の開裂部位／リンカーのいずれか、または双方、好ましくは第１のもの「セーフティーキャッチ」種のものであってよく、すなわちこの開裂部位またはリンカー基は第２のステップにおいて開裂を受け得る前に第１のステップで化学修飾されなければならない（例えば、増感基Ｇを露出または導入することを目的として）。 かかる組合せ方の利点は偶然に起こる開裂の可能性を避けるまたは著しく少なくすることである。 「セーフティーキャッチ」メカニズムの一例は、第１のステップにおける官能基（例えば上記のメルカプトピリミジン基づく「セーフティーキャッチ」リンカー）の酸化を含み、この酸化は官能基を次の開裂ステップにおける求核試薬による置換をより受けやすくする働きをする。 求核試薬は構造においてかなり違っている。 例えば１つの具体例では、求核試薬はアミノ含有求核試薬であってもよく、このアミノ基は求核置換作用に寄与してアミノ基（増感基Ｇ）が直接開裂部位に結合するようにする。 あるいはもう１つの具体例では、アミノ基（すなわちその他の増感基）は硫黄求核試薬など、開裂部位に結合するようになる別の求核試薬を含有する基（例えば、ジアルキルアミノアルキル−チオレートアニオン）に存在してもよい。

【００３４】 本発明の構築物に用いるのに好適な別のクラスのリンカー基としては、ヒドラジンおよびヒドロキシルアミンなどの１，２ビス求核試薬によって開裂可能なリンカー基クラスがある。 あるエナミン系、例えばエナミンがカルボニル基に共役しているエナミン系において、かかるビス求核試薬を用いて窒素原子と隣接する炭素原子の間の結合を開裂することができる。 かかる基の例としては、アミノ窒素原子と結合した１−［４，４−ジメチル−２，６−ジオキソ−シクロヘキシリデン］−エチル（ｄｄｅ）基などのオキソ置換シクロアルキリデン環に基づく基がある。 これらの構築物は好ましくはエナミン系が第１の開裂部位を規定し、上記のように窒素原子と隣接する炭素原子の間の結合の破断が質量分析増感剤として機能するアミン基を露出するように設定される。

【００３５】 第１または第２のいずれか、好ましくは第１の開裂部位は遷移金属、好ましくはパラジウム（０）の作用下で開裂可能なリンカー基によって規定され得る。 かかるリンカー基の例としては、開裂時に質量分析増感剤として作用し得るアミン基を遊離するアリルオキシカルボニルアミノ基が挙げられる。

【００３６】 酸性条件下で選択的に開裂し得るリンカーの例としては適宜置換されたベンジルオキシカルボニル基および適宜置換されたジフェニル−メチルアミノ基が挙げられ、双方ともトリフルオロ酢酸の作用によって開裂し得る。

【００３７】 酸開裂性リンカー基の特定の例はThe Combinatorial Index, Barry A. Bunin,
Aademic Press, San Diego 1998に示されている。 なお、この開示は参照することにより本明細書の一部とされる。 「Ｒｉｎｋ」または「Ｋｎｏｒｒ」種のリンカーは典型的にはＮ−保護１−アミノ−１，１−ジフェニルメタン部分を含み、
このアミノ基は脱保護されると基質に結合可能となり、そのフェニル環の１つは例えばジメトキシ基および第２の結合点を提供するカルボキシアルキルオキシ置換基を有するその他のもので置換されている。 ＴＦＡによる開裂では末端カルボキシアミド基を有する基質化合物が生じる。 「Ｗａｎｇ」種のリンカーは典型的には置換フェノキシアセチル基を含み、このアセチル基は１つの結合点を提供し、フェニル環のベンジルヒドロキシル基は第２の結合点を形成する。 基質のカルボキシル基とベンジルヒドロキシル基の間にはエステルが形成されてもよく、このエステル基は次ぎにＴＦＡによって開裂して末端カルボキシレート基を有する基質化合物を遊離する。

【００３８】 塩基性条件下で選択的に開裂し得るリンカーの例としてはエステル結合含有基が挙げられる。

【００３９】 １つの具体例では以降に定義される化学構築物が提供され、ここでは第１の開裂部位が選択的に開裂可能であって増感基Ｇ（特にアミノ基）を形成または導入し、この開裂は酸性条件下での開裂、塩基により触媒される開裂、パラジウム（
０）により触媒される開裂、酸化開裂、酸化後の求核置換、還元開裂、求核置換、１，２−ビス求核試薬による開裂、求電子置換、ならびに熱、光化学および酵素開裂からなる化学現象から選択される１つの化学現象によって達成され、かつ、第２の開裂部位は上記の群から選択される異なる化学現象によって選択的に開裂可能である。

【００４０】 酸性条件下で開裂可能な基を用いて第１の開裂部位を形成することができるが、現在のところ第１の開裂部位は酸性条件に安定であることが好ましい。

【００４１】 好ましい具体例では、第１の開裂部位は開裂可能であって増感基Ｇを形成または導入し、この開裂は （ｉ）光化学開裂、例えばニトロベンジルカルバメート基などのカルバメート基の光化学開裂； （ii）酸化後の求核置換による開裂、例えば、チオピリミジンの酸化後のアミン（例えば、Ｎ−メチルピペラジンなどの第二級アミン）による求核置換； （iii）求核置換、例えばチオレート求核試薬（例えば、ＤＢＵなどの強塩基の存在下でのメルカプトエタノール）によるスルホンアミドの開裂； （iv）ヒドラジンもしくはヒドロキシルアミンまたはその誘導体などの１，２
−ビス求核試薬による、エナミン基（特にカルボニル基に共役したエナミン基を含有するもの、例えば、１−［４，４−ジメチル−２，６−ジオキソ−シクロヘキシリデン］エチルアミノ）の開裂；および （V）遷移金属により触媒されるアリルオキシカルボニルアミノ基の開裂、例えばパラジウム（０）により触媒されるアリルオキシカルボニルアミノ基の開裂から選択される１つの化学現象によって達成される。

【００４２】 上記の好ましい具体例では、第２の開裂部位は例えば酸性条件下または光分解によって開裂し得る。

【００４３】 １つの好ましい具体例では、第１の開裂部位はスルホンアミドリンカー基によって規定され、かつ、第２の開裂部位は所望によりＲｉｎｋリンカーなどの酸性条件下で開裂可能な基によって規定される。

【００４４】 もう１つの好ましい具体例では、第１の開裂部位は酸化後の求核置換による開裂を受けやすいチオピリミジンリンカーによって規定され、かつ、第２の開裂部位は所望により酸性条件下で開裂可能なＲｉｎｋリンカーなどの基によって規定される。

【００４５】 さらなる好ましい具体例では、第１の開裂部位は上記のようなｄｄｅ基によって規定され、かつ、第２の開裂部位は所望により酸性条件下で開裂可能なＲｉｎ
ｋリンカーなどの基によって規定される。

【００４６】 より一層好ましい具体例では、第１の開裂部位は上記のような光化学的に開裂可能なカルバメート基によって規定され、かつ、第２の開裂部位は所望により酸性条件下で開裂可能なＲｉｎｋリンカーなどの基によって規定される。

【００４７】 もう１つの好ましい具体例では、第１の開裂部位はパラジウム（０）などの遷移金属によって開裂し得るアリルオキシカルボニルアミノなどの基によって規定され、かつ、第２の開裂部位は所望により酸性条件下で開裂可能なＲｉｎｋリンカーなどの基によって規定される。

【００４８】 例えば直交開裂可能な第１および第２のリンカー基Ｌ ^１およびＬ ^２によって規定されるものなど、第１および第２の開裂部位を作ることで、単純に異なる開裂条件によって化学フラグメントＦｒまたは基質Ｒのいずれかを構築物から選択的に分離することができる。 このことは特定の反応ステップに関して条件を至適化するよう設計された実験で、化学者は構築物を、分析フラグメントＦｒを開裂させるのに好適な条件に曝し、それにより分析を行って残りの各反応の結果を測定することが可能となる。 同様に予備反応（例えば組合せライブラリーまたはスケールアップ反応または商業生産などの次ぎに続く予備反応など）の際、品質管理（ＱＣ）は、反応槽から１以上の固相支持体を取り出し、第１の開裂部位で構築物を開裂し、さらに得られたフラグメントＦｒを分析して特定の反応ステップが完了したかどうかを知ることによって行うことができる。 一方、第１の開裂部位ではなく、例えば第２のリンカー基上の第２の開裂部位における開裂によって、
反応生成物Ｒが固相支持体から遊離する。 このように本発明の構築物の利点は、
特定の処理ステップを至適化するための実験的レベル、また予備的なレベルの双方でリンカー基を改変することなくそれらを使用できることである。

【００４９】 本発明の１つの具体例では、フラグメントＦｒ、より好ましくはスペーサー基Ａはアルキレンジアミン基またはアミノアルコキシ基を含む。 アルキレン基の正確な大きさとその置換度はこれまでのところ重要ではないと思われるが、例示すればその鎖は炭素原子２〜３０個の長さ、例えば炭素原子２０個まで、より典型的には炭素原子１０個未満であってよく、特に例示すれば置換されていても置換されていなくてもよいエチレンまたはプロピレンジアミンまたはアミノアルコール基が挙げられる。 アルキレンジアミン基またはアミノアルコールは典型的には上記で定義されたようなピーク分割同位体標識を含む。 ２つのアミノ基は各々第１および第２のリンカー基それぞれ結合させることができる。 スペーサー基Ａの質量を増すためには、アルキレンジアミン基をアリール基、すなわち例としてはＮ−ベンジル基などのＮ−アリールで置換すればよい。 Ｎ−アリール基は所望により１以上の置換基で置換されていてもよい。

【００５０】 好ましい場合であるがスペーサー基が１以上の質量スペクトルピーク分割同位体標識を含むとき、それらはアルキレン鎖かまたはアルキレン鎖と結合している置換基のいずれかに位置していてよい。 従って例えば、アルキレンジアミン中の２個のアミノ基のうちの一方と結合しているＮ−ベンジル基はピーク分割原子である重水素で置換されているメチレン基を有していてよい。 あるいは、アルキレンジアミン上の置換基に存在するアリール環（例えば、Ｎ−ベンジル基）はピーク分割ブロミン原子で置換されていてよく、アリール基の１つの特定の例としてはＮ−ο−ブロモベンジル基がある。

【００５１】 アルキレンジアミンおよびアミノアルコール基はスペーサー基の特殊な例として示されているが、代わりのスペーサー基を使用することもできる。 例えばスペーサー基は、所望により酸素、窒素または硫黄などの１以上のヘテロ原子がされていてもよい鎖内に３０までまたはそれ以上の炭素原子を含有する炭化水素鎖から形成されていてもよい。 さらに別の代替のスペーサーとしては、例えば１以上のアミノ酸を含有するペプチド鎖が挙げられる。 スペーサーの正確な性質および長さは、そのスペーサーが構築物の化学を妨害しない限り、これまでのところ重要であるとは思われない。

【００５２】 化学フラグメントＦｒ、特にスペーサー基Ａ、ならびに質量分析を用いる同定の手段の提供はまた、他の分析技術による同定を可能にするさらなる１以上の増感剤によっても提供できる。 例えば、スペーサー基は紫外線（Ｕ．Ｖ．）または蛍光分光光度法による同定を可能とする発色団を含み得る。

【００５３】 さらに詳しくは、反応混合物中に存在する基質の相対量（例えば別の基質Ｒに対するもの）または絶対量のいずれかを測定するために行われる定量分析を考慮するため、連結基ＹおよびフラグメントＦｒは、紫外線、可視光または蛍光分光光度法、特には紫外線分光光度法によってフラグメントＦｒの分析を助ける発色団Ｃ ^uを含んでもよい。

【００５４】 従ってもう１つの態様では、本発明は固相構築物の分析方法を提供し、その方法は、 （ｉ）連結基Ｙを介して固相支持体Ｑに結合された基質Ｒを有する固相支持体Ｑを含んでなり（ここで、Ｑ、ＹおよびＲは上記の定義に同じ）、連結基Ｙは上記で定義されたように直交かつ選択的に開裂可能な第１および第２の開裂部位を有し、第２の開裂部位は選択的に開裂可能であって基質を遊離し、かつ、第１の開裂部位は第２の開裂部位と固相支持体の間の位置にあり、選択的に開裂可能であって基質と連結基Ｙの少なくとも一部を含んでなるフラグメントＦｒを遊離し、該部分が、紫外線、可視光または蛍光分光光度法（好ましくは紫外線分光光度法）によるフラグメントＦｒ ^uの分析を補助する発色団Ｃ ^uを含む、化学構築物を準備し、 （ii）第１の開裂部位で連結基を開裂させてフラグメントＦｒを遊離し、さらに （iii）フラグメントＦｒを紫外線、可視光または蛍光分光光度分析に付して基質Ｒを定量する ことを含んでなる。

【００５５】 本発明の上記方法の態様によれば、分光光度分析を用いて与えられたサンプル中に存在する基質Ｒの絶対量を測定してもよいし、またはこれを用いてサンプル中の別の成分（例えば１を超える基質Ｒが存在する場合）に対して存在する基質Ｒの相対量（例えばモル比に関する）を測定してもよい。 本願において基質Ｒの定量方法という場合には、特に断りのない限り、絶対量測定と相対量測定の双方が含まれる。

【００５６】 基質Ｒに存在する発色団のいずれかが分析を妨害しないようにするためには、
発色団は典型的にはそれを基質から識別する実質的な吸収バンドを持つように選択する。 従って例えばこのような吸収バンドは、基質の重要な吸収バンドのいずれとも離れていればよい。 あるいは、発色団の吸収バンドは基質の重複バンドをいずれも効果的にスワンピングするような強度のものであってもよい。 発色団Ｃ ^uは主要ｌｏｇＥ _ｍａｘ値が少なくとも２．５であることが好ましい。 この主要ｌｏｇＥ _ｍａｘ値は基質Ｒの主要ｌｏｇＥ _ｍａｘ値の少なくとも１．５倍であることがさらに好ましい。

【００５７】 溶液中の化合物によるＵＶ照射の吸収と化合物濃度との間の関係は、式Ｅ＝ａ
／ｃｌ（ここで、Ａはサンプル溶液の吸光度または光学密度であり、ｃはモル濃度であり、ｌはサンプルの光路長であり、かつ、Ｅはモル吸光率である）で表すことができるＢｅｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔの法則によって定義される。 モル吸光率Ｅは所定の化合物について所定の波長で一定であり、通常、Ｅ _ｍａｘ −最大吸収バンドでのモル吸光率で表される。 ＥまたはＥ _ｍａｘ値は特に断りのない限り典型的には１０ ^−２ ｍ ^２ ｍｏｌ ^−１の単位で表され、本明細書でＥまたはＥ _ｍａｘ値という場合かかる単位をさす。 ＥまたはＥ _ｍａｘ値は非常に大きいことがあるので、ｌｏｇ当量がしばしば用いられ、かかるｌｏｇ当量は本明細書ではｌｏｇ
Ｅ _ｍａｘ値で表される。

【００５８】 所定の化合物はしばしばいくつかの異なる波長に主要吸収ピークまたはバンドを持つので、これはよくいくつかのＥ _ｍａｘ値で定義することができる。 本発明に関しては「主要Ｅ _ｍａｘ値」という表記を用いて最大吸収を生じる波長におけるＥ _ｍａｘを表す。 このように本発明の構築物では発色団Ｃ ^uは好ましくは主要ｌｏｇＥ _ｍａｘ値が少なくとも２．５であり、典型的には基質Ｒの主要Ｅ _ｍａｘの少なくとも１．５の主要ｌｏｇＥ _ｍａｘ値を有する。 しかしながらさらに典型的には、発色団Ｃ ^uは基質Ｒの主要ｌｏｇＥ _ｍａｘの少なくとも２倍、より通常には２．５倍、特には３倍の主要ｌｏｇＥ _ｍａｘ値を有する。

【００５９】 化合物の分析は主要な極大値の吸光度を測定することによって行えるが、存在する化合物の量を測定する代わりに二次的なバンドまたはより小さな極大値の測定を用いてもよい。 一般に、測定が行われる波長は基質Ｒおよび発色団Ｃ ^ｕの正確な吸収特性によって異なり、その場合ごとに測定できる。

【００６０】 発色団Ｃ ^ｕは、それがいずれの主要な吸収バンドからも離れた吸収バンドを有している限り、基質Ｒのいずれの発色団からも識別できる。 このことは、発色団の吸収バンドが基質Ｒによる主要な吸収のいずれとも離れた、またはいずれとも有意な程度（例えば、個々の吸収ピークの曲線下面積（ａ．ｕ．ｃ）に対して５
％未満の重複）では重複しないことを意味する。 本明細書において主要な吸収とは、１以上のｌｏｇＥ値を有する吸収を意味する。

【００６１】 本発明の１つの好ましい具体例では、固相合成に用いられる化学構築物であって、連結基Ｙを介してそこに結合された基質Ｒを有する固相支持体Ｑを含んでなり（ここで、Ｑ、ＹおよびＲは上記の定義に同じ）、連結基Ｙは上記で定義されたように直交かつ選択的に開裂可能であり、フラグメントＦｒは基質と連結基Ｙ
の少なくとも一部を含んでなり、かつ該部分は紫外線、可視光または蛍光分光光度法によるフラグメントＦｒ ^ｕの分析を補助する発色団Ｃ ^ｕを含み、発色団Ｃ ^ｕは少なくとも２．５の主要ｌｏｇＥ _ｍａｘ値を有し、ここで、（i）この主要ｌ
ｏｇＥ _ｍａｘ値は基質Ｒの主要ｌｏｇＥ _ｍａｘの少なくとも１．５倍であるか、
または（ii）発色団Ｃ ^ｕが基質Ｒによる吸収から離れた波長に吸収ピークを有する化学構築物が提供される。

【００６２】 構築物にＵＶ発色団がすれば合成の生成物の定量が行えるようになる。 かかる定量は（ｉ）絶対的定量または（ii）相対的定量、あるいはその双方であってよい。 「絶対的定量」とは基質分子または基質分子を含有するフラグメントもしくは構築物の絶対量が測定できることを意味し、一方、「相対的定量」とは本明細書においては反応混合物中のある基質（または基質を含有するフラグメントもしくは構築物）の別の成分（副生成物または出発物質または別の基質）に対する量の測定を意味する。

【００６３】 ＵＶ発色団は典型的には、典型的な基質分子の最大吸収が認められる波長から通常離れている、固有または特徴的な波長において極めて強い吸収を持つように選択される。 しかしながら発色団の吸収が基質または基質Ｒに対して非常に大きい場合には、基質および発色団による吸収の重複が基質量の測定精度に対して最小限の影響しか及ぼさない。 一般に重複する吸収バンドは、導入される重複誤差が１０％以下、好ましくは約５％以下である限り、有意な分析が行われるのを阻むことはないはずである。 従って相対存在量および絶対モル吸収値に関して発色団を規定する代替のものとしては、発色団Ｃおよび基質による吸収との関係は、
基質Ｒと発色団の吸収バンド間の重複のいずれに起因する誤差の程度に関して定義できる。

【００６４】 このようにさらなる具体例では、本発明は、固相合成に用いられる化学構築物でえあって、連結基Ｙを介してそこに結合された基質Ｒを有する固相支持体Ｑを含んでなり（ここで、Ｑ、ＹおよびＲは上記の定義に同じ）、上記で定義されたように連結基Ｙは直交かつ選択的に開裂可能であり、フラグメントＦｒは基質と連結基Ｙの少なくとも一部を含んでなり、かつ該部分は紫外線、可視光または蛍光分光光度法によるフラグメントＦｒ ^ｕの分析を補助する発色団Ｃ ^ｕを含み、ここで発色団Ｃ ^ｕと基質Ｒの吸収特性が、所定の測定波長において、発色団による吸収バンドと基質Ｒによる吸収バンドのいずれかの重複から生じる基質Ｒ（またはいずれかのフラグメントもしくはフラグメントを含む構築物）の定量における誤差が１０％未満、好ましくは５％未満であるような化学構築物を提供する。

【００６５】 発色団の例としてはアリール基を含有する基、好ましくは縮合多環式アリール基、例えば１以上（例えば、１個、２個または３個）の環状炭素原子が所望によって窒素、硫黄または酸素などのヘテロ原子で置換されていてもよいＣ _６ 〜Ｃ _{３ ０}多環式アリール基がある。 多環式アリール基の例としては、ナフチル、フェナントレニルおよびアントラセニル基などの多環式炭化水素、ならびにアクリジンまたはフェナントロリンなどの多環式ヘテロアリール基が挙げられる。 かかるアリール基または多環式基は所望により好ましくは所定の反応スキームに用いられる反応条件に関して不活性かつ／または非阻害性の置換基で置換されていてもよい。

【００６６】 かかる置換基の例としてはアルキルおよびアルコキシ（例えば、炭素原子１〜
２０個、好ましくは炭素原子１〜６個のアルキルおよびアルコキシ）が挙げられ、各々所望により１以上の不飽和結合を含んでいてもよく、また所望により酸素、窒素および硫黄から選択される１以上のヘテロ原子；アミノ（好ましくは保護されたアミノ、または一もしくは二置換アミノ、例えばジメチルアミノ）；フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードなどのハロゲン；アルキルチオ（例えばＣ _{１ −３０}アルキルチオ、好ましくはＣ _１−６ ）、ヒドロキシ、保護された（例えばアシル化）ヒドロキシ、チオ、保護された（例えばアシル化）チオ、トリフルオロメチル、ニトロ、アルキルスルホニル、アリール（例えば所望により置換されていてもよいフェニル、チエニル、フラニル）およびアリールアルキル（例えばベンジルおよびフェネチル）が挿入されていてもよい。

【００６７】 その他の発色団の例としては高度に共役したアリールまたは非アリール構造が挙げられる。 ただし、かかる化合物は固相化学、いわゆるＧ−Ｊ−Ｍ｛ここでＧ
は電子供与基（例えばアミノまたはアルコキシ）であり、Ｊは複数の共役アレイ、例えば二重結合であり、かつ、Ｍは電子求引基（例えばニトロまたはスルホニル）であり、ＧおよびＡ基は共役した多重結合アレイを介して電気的に結合している｝型の「プッシュプル」系で用いられる合成条件下では不活性である。 発色団の一例としてはダンシル（１−ジメチルアミノ−５−ナフチルスルホニル）基がある。

【００６８】 発色団の厳密な性質、その化学特性およびその吸光度特性は、所定の合成に用いられる化学現象種にもよるが、その場合ごとに測定できる。 しかしながら発色団は合成に用いられる反応物および反応条件に対して不活性であるのが最も好ましい。

【００６９】 現在のところ好ましい発色団としては、アントラセニルおよびダンシル（５−
ジメチルアミノ−１−ナフチルスルホニル）基が挙げられ、アントラセニルが特に好ましい。

【００７０】 基質Ｒの定量は絶対的定量、または合成混合物中の基質Ｒと別の成分の相対量（例えば別の基質、または出発物質、または副生成物）が測定される相対的定量のいずれかであり得る。 相対的定量は、発色団Ｃ ^ｕが各基質に分光光度分析の基礎として使用できる共通の特徴的な吸光度セットを付与するということを使用するものである。

【００７１】 本発明の１つの具体例では、本発明の構築物の同定および／または分析は１個のビーズ、または少数のビーズ、例えば１〜２０個のビーズ、より通常には１０
個未満のビーズで行われる。 かかるビーズは典型的には９０μｍ〜２５０μｍの範囲の平均径を有し、化合物添加量は０．１ｍｍｏｌｇ ^−１ 〜０．４ｍｍｏｌｇ ^−１であり、個々のビーズの平均添加量は１０ナノモル未満、しばしば５ナノモル未満、例えばおよそ１ナノモルである。

【００７２】 従って１つの特定の具体例では、本発明は固相構築物の分析方法を提供し、その方法は、 （ｉ）連結基Ｙを介してそこに結合された基質Ｒを有する固相支持体Ｑ（例えば、平均径が９０μｍ〜２５０μｍの範囲である樹脂ビーズ）を含んでなり（ここで、Ｑ、ＹおよびＲは上記の定義に同じ）、各固相支持体に基質Ｒが１０ナノモル以下、好ましくは５ナノモル未満、より好ましくは２ナノモル未満の量で存在し、連結基Ｙは上記で定義されたように直交かつ選択的に開裂可能な第１および第２の開裂部位を有し、第２の開裂部位は選択的に開裂可能であって基質を遊離し、かつ、第１の開裂部位は第２の開裂部位と固相支持体の間の位置にあり、
選択的に開裂可能であって基質と連結基Ｙの少なくとも一部を含んでなるフラグメントＦｒを遊離し、該部分が、紫外線、可視光または蛍光分光光度法によるフラグメントＦｒの分析を補助する発色団Ｃ ^ｕを含む、化学構築物を準備し、 （ii）固相支持体、または２０個を超えない複数の固相支持体（好ましくは１
０未満、より好ましくは５未満、例えば１個の固相支持体）を単離し、 （iii）第１の開裂部位で連結基が開裂して基質Ｒを含むフラグメントＦｒ ^ｕ
が遊離するように固相支持体を処理し、さらに （iv）フラグメントＦｒ ^ｕを紫外線、可視光または蛍光分光光度分析に付して基質Ｒを定量する ことを含んでなる。

【００７３】 本発明のＵＶ発色団含有構築物の使用の重要な利点は、極めて少量の基質化合物、例えば分割・混合組合せ法で用いられる大きさの単一の樹脂ビーズから典型的に得ることができる１ナノモルオーダーの量に対する量的情報を得るのに使用できるということである。 分割・混合法によって形成される組合せライブラリーでは、各ビーズは典型的にはただ１つの基質化合物だけを含むが、ライブラリーとしては種々の基質を有する複数のビーズを含む。 種々の基質を含むビーズの混合物の分析には問題があるので、通常、１つのビーズについて分析を行う必要がある。 本発明の構築物により、単一のビーズのレベルで、特に０．１〜０．４ｍ
ｍｏｌｇ ^−１の添加量で、直径９０μｍ〜２５０μｍのオーダーの大きさのビーズで効率的かつ正確に分析を行うことができるようになる。

【００７４】 第１および第２の開裂部位が第１および第２のリンカー基Ｌ ^１およびＬ ^２によって規定される構築物では、「スペーサー基」Ａは２つのリンカー基Ｌ ^１およびＬ ^２の間に挿入され、このスペーサー基Ａはそこに結合されたＵＶ発色団^ｕを含み得る、または持ち得る。 このように本発明の１つの具体例では、上記で定義されたような、連結基Ｙが式Ｌ ^１ −Ａ−Ｌ ^２ ｛ここで、Ｌ ^１は第１の開裂部位を規定する第１のリンカー基であり、Ａはそこに結合されたＵＶ発色団を含むまたは有し、かつ所望によりピーク分割同位体標識を含むＣ ^ｕ化学基（スペーサー基）
であり、かつ、Ｌ ^２は第２の開裂部位を規定する第２のリンカー基である｝を有する化学構築物が提供される。

【００７５】 発色団Ｃ ^ｕはフラグメントＦｒ ^ｕの主鎖または骨格の必須部分として（例えば、スペーサー基Ａの一部として）形成されてもよいし、あるいはペンダント基であってもよい。 このように例えばそれがペンダント基である場合にはそれは直接、または所望により１以上の酸素、窒素もしくは硫黄原子が挿入されていてもよいアルキレン鎖（例えば炭素原子１〜６個）を介して、またはエーテル、チオエーテル、アミド、スルホンアミドもしくはエステル結合によってＡと結合し得る。 スペーサー基Ａがアルキレンジアミン基またはアミノアルコキシ基を含む場合、発色団Ｃ ^ｕは例えば（直接、または上記に定義されたように所望により挿入されていてもよいアルキレン鎖を介して）アミノ基またはアミノ基の１つの窒素原子と結合していてもよい。 例えば、発色団Ｃ ^ｕはエチレンもしくはプロピレン鎖によって、またはスルホニル基によって窒素原子に結合していてもよい。

【００７６】 ベンジル基のような置換基がアルキレンジアミンスペーサー基Ａのアミノ基の１つに結合している化合物では、発色団Ｃ ^ｕはその他のアミノ基と直接または間接的に結合し得る。 現在のところ好ましい１つの具体例では、発色団Ｃ ^ｕはポリエチレン鎖を介してジアミンスペーサー基の一方の末端で窒素原子と結合したアントラセニルまたはフェナントレニル基などの多環式アリール基である。

【００７７】 固相支持体Ｑは固相合成、特に組合せ化学で用いるのに好適ないずれのタイプの固相支持体であってもよい。 従って単に例示であるが、固相支持体はビーズ、
固相面、固相基質、粒子、ペレット、ディスク、キャピラリー、中空ファイバー、ニードル、充実ファイバー、またはシリカゲルなどの有機もしくは無機ゲル、
およびフラーレンから形成された粒子などの不溶性有機粒子の形態をとってもよい。

【００７８】 ビーズの例としては、セルロースビーズなどの高分子ビーズまたは樹脂ビーズがあり、特に例示すれば、ポリスチレン樹脂、ポリアクリルアミド樹脂およびジメチルアクリルアミド樹脂などの官能基化ポリマーをはじめとする、樹脂ビーズが製造可能な物質が挙げられる。 好適な支持体の例としては上記のBanin A.によるThe Combinatoial Indexに挙げられている。 官能基化樹脂の例としては、その表面にアミノ基または水酸基を提供するよう修飾された架橋ポリスチレンが挙げられる（例えば、Nicholas K. TerrettによるCombinatorial Chemistry, Oxford
University Press, 1988参照）。

【００７９】 固相支持体の合成履歴の決定を容易し、分割・プール組合せ合成において固相支持体の混合を制御する手段を提供するには、固相支持体（例えばビーズの類）
を反応シーケンス中、透過性標識容器に制限することができ、それにより容器内の透過を通じて流れる反応物と溶媒の結果として合成が起こる。 所定の反応混合物は複数の容器を含んでもよく、各反応ステップの終了時に容器を取り出すことができ、例えば高周波標識であり得る標識によって同定することができる。 かかる容器の例としては、小型高周波タグを含んだLa Jolla, California, USAのIro
riから入手可能なポリスチレンメッシュ「Ｋａｎ」（商標）容器がある。

【００８０】 もう１つの態様では、本発明は上記で定義されたような構築物を分析する方法を提供し、その方法は構築物を第１の開裂部位で開裂させて化学フラグメントＦ
ｒを遊離し、この開裂反応で化学フラグメントＦｒ上に質量スペクトル増感基（
例えば質量分析条件下でイオン化可能な基）が形成され、次ぎにこの化学フラグメントを質量分析、例えばエレクトロスプレー質量分析に付すことを含んでなる。

【００８１】 フラグメントＦｒの分析で構築物の反応履歴に関する情報が得られる。 このように質量分析により、所定の反応シーケンスで所望の基質が形成されたかどうかが容易に決定できる。 従ってフラグメントＦｒの分析を用いて、固相反応シーケンスの基質または生成物を同定するだけでなく、反応の進行を追跡することもできる。

【００８２】 本発明はまた、上記で定義されたような構築物を分析する方法であって、構築物を第１の開裂部位で開裂させて化学フラグメントＦｒ ^ｕを遊離し、さらにそのフラグメントを紫外線、可視光または蛍光分光光度分析、例えば定量的紫外線分析に付すことを含んでなる方法を提供する。

【００８３】 開裂生成物は、クロマトグラフィーカラムから溶出した種々の化合物の濃度を測定する手段を提供するよう設置可能なＵＶ検出器を用い、クロマトグラフィー、好ましくはＨＰＬＣなどの液体クロマトグラフィーに付すことができる。 クロマトグラフィーカラムは次ぎに基質の同定を目的とする別の分析手段に接続することができる。 好ましい分析手段は質量分析であり、従って本発明の方法および構築物は連結された単一の一連の分析手順で基質の同定と定量の双方を達成する手段を提供する。

【００８４】 さらなる態様では、本発明は上記で定義されたような化学構築物の製造に用いられる中間化学構築物を提供し、この中間化学構築物は式Ｑ−Ｙ'（式中、Ｙ'
はＹ基の反応性形態または保護形態であり、かつ、ＱおよびＹは上記の定義に同じ）を有する。

【００８５】 なおさらなる態様では、本発明は式Ｑ−Ｌ ^１ −Ａ ^Ｐ （式中、ＱおよびＬ１は上記の定義に同じであり、かつ、Ａ ^Ｐは分割同位体標識および所望により発色団Ｃ ^ｕを含むスペーサー基Ａの反応性形態または保護形態である）の中間構築物を提供する。 特定の具体例では、中間構築物は一般式Ｑ−Ｌ ^１ −Ｎ（Ａｌｋ−Ｃ ^ｕ ）
−Ａｌｋ−ＮＨ−Ｘ ^１ （式中、Ａｌｋはアルキレン基であり、かつ、Ｘ ^１は水素または」アラルキル基である）を有する。 中間構築物は好ましくは^１ Ｈ／ ^２ Ｈ（
Ｄ）、 ^７９ Ｂｒ／ ^８１ Ｂｒ、 ^１２ Ｃ／ ^１３ Ｃ、 ^１４ Ｎ／ ^１５ Ｎおよび^１６ Ｏ／ ^{１ ８} Ｏなど、ピークを分割する原子の組合せで同位体標識される。

【００８６】 本発明はさらに、医薬上有用な基質の同定方法であって、上記で定義されたよな複数の化学構築物を含むライブラリーを作製し、そのライブラリーを生物学的試験に付して生物学的に活性な基質を同定する方法を提供する。 この方法はこのようにして同定された生物学的に活性な基質を医薬上許容される担体とともに配合して医薬組成物を形成するさらなるステップを含んでもよい。

【００８７】 例示的具体例の説明以下、限定されるものではないが実施例により本発明を説明する。

【００８８】 実施例では以下の略号を用いる。 略号 ＡｃＯＨ 酢酸 ＤＭＦ ジメチルホルムアミド ＤＣＭ ジクロロメタン ＤＭＡＰ ４−ジメチルアミノピリジン ＤＩＣ ジイソプロピルカルボジイミド ＴＦＡ トリフルオロ酢酸 ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン ＨＡＴＵ ２−（１Ｈ−９−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１
，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド ＰｙＢＯＰ（登録商標） ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート ＨＯＢＴ Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＡＡ アミノ酸

【００８９】 実施例１ 光分解性開裂可能な第１開裂部位を含有する構築物の製造光分解可能な構築物をスキーム１に示される反応スキームに従って製造した。
この実施例では、エチレンジアミン鎖の１個のアミノ基に結合した置換ニトロベンジルオキシカルボニルリンカー基の光分解性開裂が遊離アミノ基を遊離させ、
その結果、質量分析計におけるイオン化を受けることが可能となり、それにより特徴的な分子イオンが形成されるのが可能となる。 この実施例では、エチレンジアミン連結基はその他のアミノ基に結合した同位体標識されたベンジル基を有するが、その作用は開裂産物の質量スペクトル中に特徴的な分割ピークを提供し同定を補助することである。

【００９０】 実施例１の実験に用いられた化合物番号はスキーム１の化合物番号に該当する。

【化１】

【００９１】 スキーム１の実験ビーズ径が１３０μｍ〜１６０μｍの範囲で０．４ｍｍｏｌｇ ^−１で充填されたテンタゲルＮＨ _２ （Rapp Polymere)（樹脂１）（３０ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）
をＤＭＦで膨潤させ、これにＤＭＦ（４２０ｍｌ）中のＨＯＢＴ（９．３ｇ、６
９．０ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（６．４８ｍｌ、４１．４ｍｍｏｌ）および４-［４
−（１−ヒドロキシエチル）−２メトキシ−５−ニトロフェノキシ］ブタン酸（
１１．８ｇ、３９．４ｍｍｏｌ）の溶液を加え、混合物を１６時間振盪した。 次いで、この樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、次いでＭｅＯＨさらにＤＣＭおよび最終的にＭｅＯＨで洗浄した。 次いで、これを真空乾燥させて樹脂２を得た。

【００９２】 樹脂２（３ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）をＤＣＮ（４００ｍｌ）中のカルボニルジイミダゾール（１９．３ｇ、１１９ｍｍｏｌ）の溶液で処理し、全体をゆっくりと攪拌しながら５０℃で５時間加熱した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＣＭ、
次いでＥｔ _２ Ｏ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏで洗浄し、真空乾燥させて樹脂３を得た。

【００９３】 樹脂３（１５ｇ、４．３５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２００ｍｌ）で膨潤させ、これにＤＭＦ（２０ｍｌ）中の１−ベンジル−１−ｔ−ブトキシカルボニル−１，
２−ジアミノエタン（１７）（２．７１ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）および１−（ジジュウテロベンジル）−１−ｔ−ブトキシカルボニル（１６）（２．７１ｇ、１
０．９ｍｍｏｌ）の溶液を加え、全体をゆっくりと攪拌しながら５０℃で１６時間加熱した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、次いでＥｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらにＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂を真空乾燥させた。 次いで、樹脂をＴＦＡ（９５％
）水溶液とＤＣＭの１：４溶液で処理し、３０分間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＣＭと、次いでＥｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらにＥｔ _２ Ｏで洗浄し、樹脂を真空乾燥させた。 次いで、樹脂をＤＭＦ中のＤＩＰＥＡの１０％溶液とともに１
時間振盪し、水を抜き、さらに洗浄を前記のように反復し、樹脂４を得た。

【００９４】 樹脂４（３ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（３０ｍｌ）中のＨＡＴＵ（０．
９６ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．８９ｍｌ、５．０４ｍｍｏｌ）
およびｐ−［（Ｒ，Ｓ）−α−［１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メトキシホルムアミド］−２，４−ジメトキシ−ベンジル］フェノキシ−ブタン酸（１
． ４２ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）の溶液を加え、全体を１６時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、およびＤＣＭで洗浄した。 樹脂にＤＭＦ（３０ｍ
ｌ）中の２０％ピペリジンの溶液を加え、全体を１時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、次いでＥｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらにＥｔ _２ Ｏで洗浄し、樹脂を真空乾燥させた。

【００９５】 樹脂５（２０ｍｇ，０．００４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍｌ）中のＨＡＴＵ（
１５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１４μｌ、０．０８ｍｍｏｌ）および安息香酸（５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の溶液で処理し、全体を６時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらにＥ
ｔ _２ Ｏで洗浄し、真空乾燥させて樹脂６を得た。 光開裂とそれに続くＭＳ分析によるこの樹脂の構築物分析は図Ｉに示されている（一般開裂条件参照）。

【００９６】 図１から分かるように、樹脂から開裂した分析フラグメント中の増感アミン基のおよびピーク分割基の存在は２つの特徴的な二重線パターンを有する強い分子イオンを示す。

【００９７】 光分解性リンカーを介する樹脂の構築物分析の一般法樹脂の小量のサンプル（約０．５ｍｇ）をＤＭＳＯ（５０μｌ）に懸濁し、Ｕ
Ｖ光に３０分間曝す。 次いで、溶液を質量分析で分析する。 （あるいは、０．２
％ヒドラジン水和物含有ＤＭＳＯを溶媒として用いることもできる）。 正のエレクトロスプレーモードで作動させてフィニガンＭＡＴ ＬＣＱイオントラップ質量分析計で質量スペクトルを得た。 スキャン幅１００−１５００ｓ．
ｍ． ｕ。 スキャンサイクル時間１．４秒；イオン時間２００マイクロ秒。

【００９８】 実施例２ 第１開裂部位に「セーフティーキャッチ」チオピリニジンリンカー基を含む構築 物の製造第１開裂部位にチオピリニジン「セーフティーキャッチ」リンカーを含む構築物を以下のスキーム２に示される反応スキームに従って製造した。 以下の実験の記載において用いられる構築物番号はスキーム２の番号に該当する。

【００９９】

【化２】

【０１００】 スキーム２の実験 ＤＭＦ（８ｍｌ）中の４−（クロロメチル）安息香酸（０．２７ｇ、１．６ｍ
ｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（登録商標）（０．８３ｇ、１．６ｍｍｏｌ）およびＤＩ
ＰＥＡ（０．５６ｍｌ、３．２ｍｍｏｌ）の溶液を２０分間振盪し、次いで、ビーズ径が１３０μｍ〜１６０μｍの範囲で０．３２ｍｍｏｌｇ ^−１で充填されたテンタゲルＮＨ２(Rapp Polymere)樹脂１（１ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）にこの溶液を加え、全体を５時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ
、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂（８）を真空乾燥させた。

【０１０１】 樹脂８（１ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）にジオキサン（４ｍｌ）およびエタノール（１ｍｌ）中のチオ尿素（０．５８ｇ、７．７ｍｍｏｌ）のスラリーを加え、全体を８０℃で１６時間加熱した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ（×５）、ＤＣＭ（
×５）、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄して樹脂９を得た。 次いで、樹脂を真空乾燥させた。

【０１０２】 樹脂９（１ｇ、０，３１ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（１０ｍｌ）中のメチル−２−（
ジメチルアミノメチレン）−３−オキソブタノエート（０．１７ｇ、０．９６ｍ
ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６５μｌ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液を加え、全体を８０℃で１６時間加熱した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 樹脂（１０）を真空乾燥させた。 次いで、樹脂１０（０．５ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をＴＨＦと２ＮのＮａＯＨ
水溶液１：１混合物（４ｍｌ）で処理し、２時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＴＨＦ／Ｈ _２ Ｏ、１０％ＡｃＯＨ／ＴＨＦ、ＴＨＦ／Ｈ _２ Ｏ _２ 、ＴＨＦ
、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏで洗浄し、真空乾燥させて樹脂１１を得た。

【０１０３】 樹脂１１（５０ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（１ｍｌ）中のＰｙＢＯ
Ｐ（登録商標）（２４ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１６μｌ
、０．０９ｍｍｏｌ）の溶液、次いで、ＤＭＦ（１ｍｌ）中の１−ｔ−ブトキシカルボニル−１−（ｏ−ブロモベンジル）−ジアミノエタン（１８）（１５ｍｇ
、０．０４５ｍｍｏｌ）の溶液を加え、全体を３時間振盪した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂にＤＣＭ（２０％、１ｍｌ）中の９５％ＴＦＡ水溶液の溶液を加えて２時間振盪した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭで洗浄し、ＤＭＦ中の１０％ＤＩＰＥＡとともに１０分間振盪した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 樹脂（１２）を真空乾燥させた。

【０１０４】 樹脂１２（５０ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（２ｍｌ）中の４−［４
−（１−（Ｆｍｏｃ−アミノ）エチル）−２−メトキシ−５−ニトロフェノキシ
]ブタン酸（２３ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１６μｌ、０．０
９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１７ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）の溶液を加え、
全体を３時間振盪した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭ
さらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂をＤＭＦ（３ｍｌ）中の２０
％ピペリジンで処理し、全体を１時間振盪した。 次いで、樹脂（１３）から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄し真空乾燥させた。

【０１０５】 樹脂１３にＤＭＦ（２ｍｌ）中の安息香酸（１１ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、
ＤＩＰＥＡ（１６μｌ、０．０９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１７ｍｇ、０．０
４５ｍｍｏｌ）の溶液を加え、全体を２時間振盪した。 次いで、樹脂（１４）から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 ピリミジン開裂条件（以下に記載）とそれに続くＭＳ分析によるこの樹脂の構築物分析が図２に示されている。

【０１０６】 ピリミジンリンカーを介する樹脂の構築物分析の一般法樹脂の少量のサンプル（０．５ｍｇ）を０．０１Ｍのｍ−クロロペル安息香酸（０．５ｍｌ）で２時間処理する。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭで洗浄しする。 樹脂をＤＭＦ（５０μｌ）中の０．０２ＭのＮ−メチルピペラゾンで処理し、次いで、加え１２時間振盪する。 次いで溶液を除去し、
質量分析によって分析する。

【０１０７】 実施例３ 種々のピーク分割基を含む構築物の製造種々の質量分析ピーク分割基が製造されており、これらは以下の表１に例示されている。

【０１０８】

【化３】

【０１０９】

【表１】

【０１１０】 実施例１では、ピーク分割基を表１の重水素標識化合物と非標識化合物１６／
１７の混合物によって導入し（樹脂４の参照文献参照）、他方、実施例２ではピーク分割基をブロモベンジル化合物１８によって導入した（樹脂１２の参照文献参照）。

【０１１１】 別のピーク分割基を含む樹脂を以下に記載の化合物１９／２０および２１／２
２を用いて製造した。

【０１１２】 アミン１９／２０の使用樹脂３（０．６ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）にＤＭＦ中の１−ｔ−ブトキシカルボニル−１，２−ジアミノエタン（２０）（１１０ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）と二重^１５ Ｎ標識１−ｔ−ブトキシカルボニル−１，２−ジ（ ^１５ Ｎ）アミノエタン（１９）（１１２ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の溶液を加え、全体を５０℃で３時間加熱した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂を真空乾燥させた。

【０１１３】 アミン２１／２２の使用樹脂３（１．６６ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）にＤＭＦ中の１−ｔ−ブトキシカルボニル−１，５−ジアミノペンタン（２１）（２９５ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）
と二重^１５ Ｎ標識１−ｔ−ブトキシカルボニル−１，２−ジ（ ^１５ Ｎ）アミノペンタン（２２）（２９５ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）の溶液を加え、全体を５０℃で４時間加熱した。 次いで樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭ
さらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂にＤＣＭ（２０％、１ｍｌ）
中の９５％ＴＦＡ水溶液の溶液を加え、２時間振盪した。 樹脂から水を抜き、Ｄ
ＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦ中の１０％ＤＩＰＥ
Ａとともに１０分間振盪した。 次いで、樹脂（２３）を真空乾燥した。

【０１１４】 実施例４ ジペプチド基質を含む構築物の製造実施例１および２では、各場合における基質または標的化合物はモデル化合物ベンズアミドである。 以下の実施例では、基質として、第２リンカー基としてのＲｉｎｋリンカーまたはＷａｎｇリンカーのいずれかに結合したジペプチドを含む構築物を製造した。 各場合において、光分解性第１リンカー基を用いた。 この構築物を製造するために用いた反応スキームは以下のスキーム３および４に示されている。

【０１１５】

【化４】

【０１１６】

【化５】

【０１１７】 アミノ酸例の実験 Ｒｉｎｋ樹脂２４の製造樹脂２３（１００ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（１ｍｌ）中のｐ−［
（Ｒ，Ｓ）−α−［１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メトキシホルムアミド］−２，４−ジメトキシ−ベンジル］−フェノキシブタン酸（２４０ｍｇ、０
． ４２ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（６５μｌ、０．４２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（５
７ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）の溶液を加え、全体を４時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂をＤＭＦ（２ｍｌ）中の２０％ピペリジンで処理し、３
０分間振盪した。 次いで、樹脂（２４）から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂を真空乾燥させた。

【０１１８】 Ｗａｎｇ樹脂２７の製造樹脂２３（１００ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（１ｍｌ）中の４−ホルミルフェノキシ酢酸（２３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（２０μｌ、０
． １３ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（１７ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の溶液を加え、全体を４時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂を真空乾燥させた。 次いで、樹脂をＤＣＭ中のテトラブチルアンモニウムボロヒドリドの溶液で処理し、１６時間振盪した。 次いで、樹脂（２７）から水を抜き、ＤＣＭ、ＤＭＦ
、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂を真空乾燥させた。

【０１１９】 樹脂上のアシル化ジペプチド配列の製造

【表２】

【０１２０】 樹脂２５および２８はそれぞれ樹脂２４および２７を所望のＦｍｏｃ保護したアミノ酸と反応させ、次いで脱保護し、さらに第２のアミノ酸へのカップリングと脱保護を反復することによって製造した（一般法参照）。 次いで、無水酢酸を用いて末端アミノ基をアシル化した（以下の方法参照）。

【０１２１】 光開裂とそれに続くＭＳ分析によるこれらの樹脂の構築物分析から表３の図に示される質量スペクトルが得られた。

【０１２２】

【表３】

【０１２３】 アミノ酸をリンカーにカップリングする一般的な／典型的な方法所望の樹脂２４および２７（３０ｍｇ、約０．０１４ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（１
ｍｌ）中のＦｍｏｃ保護したアミノ酸（０．１４ｍｍｏｌ、１０Ｅｑ）、ＤＩＣ
（２２μｌ、０．１４ｍｍｏｌ、１０Ｅｑ）およびＨＯＢＴ（１９ｍｇ、０．１
４ｍｍｏｌ、１０Ｅｑ）の溶液を加えた。 次いで、全体を５時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂をＤＭＦ（２ｍｌ）中の２０％ピペリジン溶液での処理によってＦｍｏｃ保護基を除去し、３０分振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥ
ｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂を真空乾燥させた。

【０１２４】 ジペプチドのアセチル化樹脂（３０ｍｇ、約０．０１４ｍｍｏｌ）にＤＣＭ（１ｍｌ）中の無水酢酸（
１５ｍｌ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液、次いで、ＤＭＡＰ（１ｍｇ、０．００８
ｍｍｏｌ）を加え、全体を２時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＣＭ
、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂を真空乾燥させた。

【０１２５】 前記の実施例から分かるように、本発明の構築物によれば、固相法によって形成される小分子が質量分析によって迅速、かつ、容易に分析できるようになる。
質量スペクトル増感剤としてイオン化できる基およびピーク分割同位体を提供することによって、各場合の結果が、分子イオンが特徴的な二重線として現れ、かつ、フラグメントまたは無関係の物質によるピークが無視でき、容易に解釈される質量スペクトルとなっていた。

【０１２６】 実施例５ 第１開裂部位にスルホンアミドリンカーを含む構築物の製造酸不安定性「Ｒｉｎｋ」型リンカーを介してエチレンジアミン質量スペクトルピーク分割基に連結され、次に、スルホンアミドリンカーを介して樹脂に連結されたモデル基質として安息香酸を含む構築物を以下のスキーム５に示されるように製造した。 この実施例では、強力な塩基の存在下でのスルホンアミドのメルカプトエタノールでの開裂により質量分析の増感アミノ基を有する分析フラグメントが遊離する。

【０１２７】

【化６】

【０１２８】 化合物３ａの製造

【化７】

【０１２９】 乾燥ジクロロメタン（４０ｍｌ）中の２−ニトロ−４−メチルベンゾエートスルホニルクロリド１（１．１０ｇ、３．９０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０
． ３９ｇ、３．９０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に乾燥ジクロロメタン（２０ｍｌ）中のアミン２ａ（１．００ｇ、３．９ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって０℃で加えた。 反応混合物をさらに２時間室温で攪拌し、次いで、真空濃縮して黄色の油状物質を得た。 溶出剤として［ＭＴＢＥ：ヘキサン（１：１）］を用いるクロマトグラフィーとそれに続くＭＴＢＥ（５ｍｌ）とヘキサン（２ｍｌ）からの再結晶化による精製により白色フレークとしてスルホンアミド３ａ（１．５３ｇ、７９
％）を得た；融点１２９〜１３０℃；Ｒ _ｆ ０．３１［ＭＴＢＥ：ヘキサン（１：
１）］。 ；（実測：C,53.2;H,5.6;N,8.5;S,6.4．C _２２ H _２５ D _２ N _３ O _８ SはC,53.3
;H,5.5;N,8.5;S,6.5%を必要とする）δ _H (DMSO-d ⁶ ) 1.40 (9H, s, H-l8), 3.05
(2H, m, H-9), 3.20 (2H, dt, J3 and l3, H-l0), 3.9 (3H, s, O-Me), 7.10-7.
35 (5H, m, H-13, 14 and l5), 8.09 (lH, d, J8, H-6), 8.35 (1H, d, J8, H-5
), 8.40(1H, m, H-8), 8.45 (1H, s, H-3),; δ _C (DMSO-d ⁶ ) 27.8 (C-l8), 40.9
(C-9 および 10), 45.9 (C-11), 53.0 (O-Me), 79.1 (C-17), 124.8 (C-13), l
27.0 (C-l4 および l5), 128.3 (C-6), 130.0 (C-13), l32.9 (C-5), 134.2 (C-
12), 136.4 (C-1), 147.5 (C-4), 154.7 (C-2), 163.5 (C-16 およびC=0); MS (
エレクトロスプレー +ve)m/z 496 (MH) ⁺ ; HPLC, R, 6.07分

【０１３０】 化合物４ａの製造

【化８】

【０１３１】 メタノール（２ｍｌ）中のエステル３ａ（０．４０ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（１．６０ｍｌ、１．６０ｍｍｏｌ）で処理し、
室温で１時間攪拌した。 次いで、反応物を真空濃縮し、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、次いで、０℃にて１Ｍの塩酸（１．８０ｍｌ、１．８０ｍｍｏｌ）で酸性化した。 得られた白色沈殿をジクロロメタン（３×１０ｍｌ）で抽出した。 合した有機抽出液をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ _２ ＳＯ _４ ）、減圧下で蒸発させて白色の固体として酸４ａを得た（０．３４ｇ、８８％）；融点１４３〜１
４５℃；Ｒ _ｆ ０．５８［ＭＴＢＥ：ヘキサン（１：１）］。 δ _H (DMSO-d ⁶ ) 1.29
(9H, s, H-l8), 3.02 (2H, m, H-9), 3.20 (2H, dt, J3 および l3, H-10), 7.
10-7.40 (5H, m, H-13,14 および 15), 8.06 (1H, d, J8, H-6), 8.28 (lH, s,
H-3), 8.30 (lH, d, J8, H-3); δ _C (DMSO-d ⁶ ) 27.9 (C-18), 40.9 (C-9 および
l0), 45.9 (C-11), 79.1 (C-17), 124.5 (C-13), 127.1 (C-l4 および 15), 12
8.4 (C-6), 129.5 (C-13), 132.5 (C-5), l39.2 (C-12), 147.3 (C-1), 155.1 (
C4), 164.8 (C-l6 および C=0); (実測: MH ⁺ , 482.l56364 C ₂₁ H ₂₃ D ₂ N ₃ O ₈ S はMH+
, 482.l56615を必要とする); HPLC, R _t 5.65 分

【０１３２】 化合物３ｂの製造

【化９】

【０１３３】 乾燥ジクロロメタン（４０ｍｌ）中の２−ニトロ−４−メチルベンゾエートスルホニルクロリド１（１．１０ｇ、３．９０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０
． ３９ｇ、３．９０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に乾燥ジクロロメタン（２０ｍｌ）中のアミン２ｂ（０．９５ｇ、３．９ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって０℃で加えた。 反応混合物をさらに３時間室温で攪拌し、次いで、真空濃縮して黄色の油状物質を得た。 溶出剤として［ＭＴＢＥ：ヘキサン（１：１）］を用いるクロマトグラフィーとそれに続くＭＴＢＥ（５ｍｌ）とヘキサン（２ｍｌ）からの再結晶化による精製により白色フレークとしてスルホンアミド３ｂ（１．５１ｇ、７９
％）を得た；融点１３１〜１３２℃；Ｒ _ｆ ０．２８［ＭＴＢＥ：ヘキサン（１：
１）］；（実測：C,53.7;H,5.4;N,8.4;S,6.5。C _２２ H _２７ N _３ O _８ SはC,53.5;H,5.
5;N,8.5;S,6.5%を必要とする）δ _H (DMSO-d ⁶ ) 1.38 (9H, s, H-l8), 3.l0 (2H,
t,J8, H-9), 3.24 (2H, t, J8, H-l0), 3.95 (3H, s, O-Me), 4.32 (2H, s, H11
), 7.l3-7.32 (5H, m, H-13, 14 および 15), 8.09 (1H, d, J8, H-6), 8.29 (1
H, s, H-3), 8.32 (1H, d, J8, H-3); δ _C (DMSO-d ⁶ ) 28.3 (C-l8), 40.2 (C-9
および 10), 46.2 (C-11), 53.2 (O-Me), 79.3 (C-17), 125.1 (C-13), 127.2 (
C-14 および 15), 128.6 (C-6), 130.3 (C-13), l33.1 (C-5), 134.4 (C-12), 1
36.6 (C-1), 147.6 (C-4), l63.7 (C-16 および C=0); MS (エレクトロスプレー
-ve) m/z 492 (MH) ^- ; HPLC, R _t 5.99 分

【０１３４】 化合物４ｂの製造

【化１０】

【０１３５】 メタノール（２ｍｌ）中のエステル３ｂ（０．４０ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（１．６０ｍｌ、１．６０ｍｍｏｌ）で処理し、
室温で１時間攪拌した。 次いで、反応物を真空濃縮し、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、次いで、０℃にて１Ｍの塩酸（１．８０ｍｌ、１．８０ｍｍｏｌ）で酸性化した。 得られた白色沈殿をジクロロメタン（３×１０ｍｌ）で抽出した。 合した有機抽出液をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ _２ ＳＯ _４ ）、減圧下で蒸発させて白色の固体として酸４ｂを得た（０．３６ｇ、９３％）；融点１２３．７
〜１２４．８℃；Ｒ _ｆ ０．５９［ＭＴＢＥ：ヘキサン（１：１）］。 δ _H (DMSO-
d ⁶ ) 1.42 (9H, s, H-18), 3.12 (2H, m, H-9), 3.22 (2H, m, H-10), 4.38 (2H,
s, H11), 7.18-7.42 (5H, m, H-l3, l4 および 15), 8.11 (1H, d, J8, H-6),
8.39 (1H, d, J8, H-3); 8.45 (1H, s, H-3); δ _C (DMSO-d ⁶ ) 27.8 (C-18), 40.
1 (C-9 および 10), 45.9 (C-11), 79.1 (C-17), 124.8 (C-13), 126.9 (C-14
および 15), 128.4 (C-6), 129.9 (C-13), 132.9 (C-5), 135.8 (C-12), 137.9
(C-1), 147.5 (C-4), l53.9 (C-2), 163.7 (C-16 および C=0); MS (エレクトロスプレー -ve) m/z 478 (MH) ^- ; HPLC, R _t 5.56 分

【０１３６】 化合物５の製造

【化１１】

【０１３７】 ＤＭＦ（４ｍｌ）とジクロロメタン（２ｍｌ）中の、平均ビーズ径が１５０μ
ｍで０．４ｍｍｏｌｇ ^−１で充填されたアミン樹脂（アルゴゲル−ＮＨ _２ ）（０
． ３７ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の懸濁液に安息香酸（４ａ）（０．２２ｇ、０．
４５ｍｍｏｌ）および安息香酸（４ｂ）（０．２２ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、次いでＰｙＢＯＰ（０．４７ｇ、０．９ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（０．１２ｇ、
０．９０ｍｍｏｌ）、４分後ヒューニッヒ塩基（０．２１ｇ、１．８０ｍｍｏｌ
）を加えた。 反応物を窒素とともに１８時間攪拌し、次いで、樹脂をジクロロメタン（６×１０ｍｌ）、ＤＭＦ（６×１０ｍｌ）、ジクロロメタン（６×１０ｍ
ｌ）、エーテル（２×１０ｍｌ）で洗浄し、真空乾燥させて黄色の固体としてスルホンアミド樹脂５を得た（０．４３ｇ、９７％）；カイザーテストは陰性であった；ブロモフェノールブルーテストは陰性であった。

【０１３８】 化合物６の製造

【化１２】

【０１３９】 ジクロロメタン（２ｍｌ）に保護樹脂（０．３９ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を懸濁し、トリフルオロ酢酸（２×４ｍｌ）で５分間処理した。 溶媒を濾去し、樹脂をＤＭＦ中の１０％ＤＩＰＥＡ溶液（３×５ｍｌ）、ジクロロメタン（６×５ｍ
ｌ）、ＤＭＦ（６×５ｍｌ）、ジクロロメタン（６×５ｍｌ）、エーテル（２×
５ｍｌ）で洗浄した。 次いで、ＤＭＦ（４ｍｌ）とジクロロメタン（２ｍｌ）にアミン樹脂を懸濁し、Ｒｉｎｋ酸（０．５１ｇ、０．９０ｍｍｏｌ）、次いで、
ＰｙＢＯＰ（０．４７ｇ、０．９ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（０．１２ｇ、０．
９０ｍｍｏｌ）を加えた。 ４分後、ヒューニッヒ塩基（０．２１ｇ、１．８０ｍ
ｍｏｌ）を加えた。 反応物を窒素とともに１８時間攪拌し、次いで、樹脂をジクロロメタン（６×１０ｍｌ）、ＤＭＦ（６×１０ｍｌ）、ジクロロメタン（６×
１０ｍｌ）、エーテル（２×１０ｍｌ）で洗浄し、真空乾燥させて黄色の固体としてスルホンアミド樹脂６を得た（０．４３ｇ、１００％）；カイザーテストでは陰性であった；ブロモフェノールブルーテスでトは陰性であった；樹脂充填は定量的Ｆｍｏｃ基開裂から推定して９８％。

【０１４０】 化合物７の製造

【化１３】

【０１４１】 樹脂（６）（０．２０ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中の２０％ピペリジン溶液（２×３ｍｌ）で１０分間処理した。 溶媒を濾去し、樹脂をＤＭＦ（６×３
ｍｌ）、ジクロロメタン（６×３ｍｌ）、エーテル（２×３ｍｌ）で洗浄した。
この樹脂をＤＭＦ（１ｍｌ）とジクロロメタン（１ｍｌ）に懸濁し、安息香酸（
１２ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）、次いで、ＰｙＢＯＰ（５２ｍｇ、０．１ｍｍｏ
ｌ）およびＨＯＢＴ（１３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加えた。 ４分後、ヒューニッヒ塩基（２６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。 反応物を窒素とともに３時間攪拌し、次いで、樹脂をジクロロメタン（６×１ｍｌ）、ＤＭＦ（６×１ｍｌ）
、ジクロロメタン（６×１ｍｌ）、エーテル（２×１ｍｌ）で洗浄し、真空乾燥させて黄色の固体としてスルホンアミド樹脂７を得た（５１ｍｇ、１００％）；
カイザーテストでは陰性であった；ブロモフェノールブルーテストでは陰性であった。

【０１４２】 化合物８の製造

【化１４】

【０１４３】 少量の樹脂（７）を脱保護溶液Ａ（０．５ｍｌ）で１時間処理した。 樹脂を濾過し、次いで、得られた溶液をエレクトロスプレー質量分析で分析した；ＭＳ（
エレクトロスプレー −ｖｅ）ｍ／ｚ ５８２／５８４（Ｍ−Ｈ）；ＨＰＬＣ、
Ｒ，４．４９分。 溶液Ａ；ＭｅＣＮ（３ｍｌ）中のメルカプトエタノール（０．２３ｍｌ、３．０
ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（０．６７ｍｌ、４．５ｍｍｏｌ）

【０１４４】 実施例５ 第１開裂部位にｄｄｅリンカーを含む構築物の製造 Ｒｉｎｋ型リンカーを介してエチレンジアミン質量スペクトルピーク分割物に、従って「ｄｄｅ」リンカーを介して樹脂に連結された安息香酸モデル基質を含む構築物を以下のスキーム６に示される反応スキームに従って製造した。 ヒドラジンを用いるｄｄｅ基によって規定される第１開裂部位での構築物の開裂により質量分析の増感基として遊離アミノ基を有する分析フラグメントが生じる。

【０１４５】

【化１５】

【０１４６】 一般法 ＨＰＬＣはＣ _１８逆相カラム（Supelco、Supelcosil ＡＢＺ＋、３．３ｍｍ。
４．６ｍｍΦ）を用いてHewlett Packard１０５０計測器で実施した。 方法Ａ：
移動相として１０〜９５％溶媒Ｂ勾配（１ｍｌ／分）。 ［溶媒Ａ：水中の１％Ｔ
ＦＡ、溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ：水（１０：１）中の０．５％ＴＦＡ、８分勾配時間］
または方法Ｂ：移動相として１０〜９５％溶媒Ｂ勾配（１ｍｌ／分）を用いるＣ _１８逆相カラム（Dynamax ６０Ａ、２５ｍｍ、６ｍｍΦ）［溶媒Ａ：水中の１％
ＴＦＡ；溶媒Ｂ；ＭｅＣＮ：水（１０：１）中の０．５％ＴＦＡ、１０分勾配時間］。 融点は５０℃から２℃分^−１で開口管を加熱する際にMettler FP5自動融点装置で実施し、補正はしなかった。

【０１４７】 化合物１０の製造

【化１６】

【０１４８】 ジメチルホルムアミド（５０ｍｌ）中のアジピン酸一エチルエステル（５．３
３ｍｌ、３０ｍｍｏｌ）の溶液に４−ジメチルアミノピリジン（４．０３ｇ、３
３ｍｍｏｌ）、次いで、ジイソプロピルカルボジイミド（５．１７ｍｌ、３３ｍ
ｍｏｌ）を加えた。 ２５分後、ジメチルホルムアミド（２５ｍｌ）中のジメドン（４．６３ｇ、３３ｍｍｏｌ）の溶液を加え、４８時間攪拌を続けた。 反応混合物を酢酸エチル（３００ｍｌ）で希釈し、０．５ＭのＫＨＳＯ _４ （２×１００ｍ
ｌ）、水（１００ｍｌ）、飽和ブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、次いで乾燥させて（ＭｇＳＯ _４ ）、濾過して蒸発させた。 得られたスラリーを酢酸エチル（２５
０ｍｌ）でトリチュレートし、濾過して残渣を酢酸エチルで洗浄した。 合した濾液を蒸発させて黄色のゴム質を得、これを固相抽出によって精製し（１．５”×
４”カラム、溶出剤：ジクロロメタン）、黄色の油状物質として化合物１０を得た（７．４３ｇ、８４％）。δ _H (CDCl ₃ , 400MHz): 4.04 (q, 2H, H ₂ , 7 Hz), 2
.97 (t, 2H, H ₄ , 7.5 Hz), 2.46 (s, 2H, H ₁₃ ), 2.28 (s, 2H, H ₁₄ ), 2.26 (d,
2H, H ₇ , 7.5 Hz), 1.60 (m, 4H, H _5,6 ), 1.00 (s, 6H, H ₁₆ ). δ _C (CDCl ₃ , 400
MHz): 205.l5 (C-12), 197.58 (C-11), l95.08 (C-3), 173.47 (C-8), 112.02 (
C-10), 60.27 (C-2), 52.67 (C-4), 46.80 (C-l3), 40.04 (C-14), 34.15 (C-7)
, 30.72 (C-15), 28.23 (C-l6), 24.64 (C-5), 24.01 (C-6), 14.31 (C-1). ν _{m ax} (cm ^-1 ): 2960 (OH), 1734 (C=0 エステル), 1665 (C=0 ketone), l564, 1445
, 1143. MS: (エレクトロスプレー +ve) m/z 297 (MH) ⁺ (エレクトロスプレー -
ve), 295 (MH) ^- . HP LC 法A: 5.31 分, 97%. 254nm

【０１４９】 化合物１１の製造

【化１７】

【０１５０】 テトラヒドロフラン（５ｍｌ）中の化合物１０の溶液に２Ｍの水酸化ナトリウム溶液（２ｍｌ、４ｍｍｏｌ）を加えた。 ３時間後、反応混合物を１０％塩酸水溶液（５０ｍｌ）の上に注ぎ、酢酸エチル（２×５０ｍｌ）で抽出した。 合した有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ _４ ）、濾過して蒸発させて、灰白色の固体として化合物１１を得た。 δ _H (CDCl ₃ , 400MHz): 2.99 (dd, 2H, H ₂ , 5 Hz), 2.47 (s, 2
H, H ₁₀ ), 2.34 (dd, 2H, H ₅ , 5Hz), 2.29 (s, 2H, H ₁₁ ), 1.63 (m, 4H, H _3,4 ),
1.00 (s, 6H, H _13,14 ). δ _C (CDCl ₃ , 400 MHz): 205.l5 (C-9), 197.58 (C-8),
195.08 (C-1), l73.47 (C-6), 112.02 (C-7), 52.96 (C-2), 47.11 (C-10), 40.
40 (C-l1), 33.92 (C-5), 30.72 (C-12), 28.23 (C-13,l4), 24.64 (C-3), 24.0
1 (C-4). ν _max (cm ^-1 ): 3030 (酸 OH), 1702 (酸C=0), 1646 (ケトンC=0). 融点
: 58.2℃. MS:(エレクトロスプレー +ve) m/z 269 (MH) ⁺ (エレクトロスプレー
-ve), 267 (MH) ⁺ . HPLC 方法 A: 4.15 分,97%.， 254nm.

【０１５１】 化合物１２の製造

【化１８】

【０１５２】 ジクロロメタン（２ｍｌ）中の化合物１１（２６８．４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液にジクロロメタン（３ｍｌ）中のＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−ジアミノエタン（１８７．３ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）とＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−(α−ジジュウテロ）ベンジルジアミノエタン（１８９．３、ｇ
、０．７５ｍｍｏｌ）の溶液と、次いでジイソプロピルエチルアミン（３４８．
４μｌ、２ｍｍｏｌ）を加えた。 ２０時間攪拌した後、反応混合物を蒸発させ、
酢酸エチル（２５ｍｌ）に再溶解し、１０％クエン酸溶液（３×１０ｍｌ）、水（１０ｍｌ）、および飽和ブライン（１０ｍｌ）で洗浄した。 有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ _４ ）、濾過して蒸発させ、次いで、フラッシュクロマトグラフィー（
クロロホルム中の１〜３％メタノール）によって精製して黄色のゴム質として化合物１２を得た。 （４７４．５ｍｇ、９５％）。 δ _H (CDCl ₃ , 400MHz): l3.50 (
bs, 1H, H ₂₀ ), 7.30 (m, 5H, H _l7 ), 4.45 (bd, 1H, H ₁₈ ), 3.47 (bd, 4H, H _{15,1 6} ), 2.90 (m, 2H, H ₂ ), 2.40 (t, 2H, H ₅ , 7.4Hz), 2.30 (s, 4H, H _10,11 ), 1.7
5 (m, 2H, H ₄ ), 1.45 (m, 11H, H _3,l9 ). ν _max (cm ^-1 ): 3030 (酸 OH), 1730 (C
=0, Boc, 酸), 1690 (ケトンC=0), 1570 (共役エナミン). MS: (エレクトロスプレー +ve) m/z: 503, 501 (MH) ⁺ (エレクトロスプレー -ve), 502, 499 (MH) ^- .
HPLC 法 A: 5.35 分,>97%. 230, 254nm.

【０１５３】 化合物１３の製造

【化１９】

【０１５４】 ジクロロメタン（６ｍｌ）中の化合物１２（３１０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）
の溶液に１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１１０．８ｍｇ、０．８２ｍｍｏ
ｌ）およびＰｙＢＯＰ（４２６．６ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を加えた。 ５分後、ジクロロメタン（１ｍｌ）中の平均ビーズ径が１５０μｍのアミノメチルアルゴゲル（登録商標）（５００ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ、０．４１ｍｍｏｌ／ｇ
充填物）の懸濁液にこの溶液を加えた。 反応混合物を５分間攪拌し、次いで、ジイソプロピルエチルアミン（２８５．７μｌ、１．６４ｍｍｏｌ）を加えて、１
６時間攪拌を続けた。 樹脂をＤＭＦ（５×）およびＤＣＭ（５×）で洗浄し、次いで真空乾燥させて樹脂１３を得た（５７３．５ｍｇ）樹脂はブロモフェノールブルーテスト陰性であった。

【０１５５】 化合物１４の製造

【化２０】

【０１５６】 樹脂１３（４７５．５ｍｇ）をジクロロメタンで膨潤させ、次いで、ジクロロメタン（１ｍｌ）中のフェノール（６０ｍｇ）の溶液、次いで、トリフルオロ酢酸（３ｍｌ）で処理した。 反応混合物を１０分間攪拌し、次いで、水分を除き、
ジクロロメタン（２×）で洗浄した。 反応を反復し、次いで、樹脂をジクロロメタン（１×）、ジメチルホルムアミド中の２０％ジイソプロピルエチルアミン（
３×）、ジメチルホルムアミド（５×）およびジクロロメタン（５×）で洗浄してアミノ樹脂中間体を得た（これはブロモフェノールブルーでは陽性であった）
。 ジクロロメタン（２ｍｌ）にこの樹脂を懸濁し、ジメチルホルムアミド（２ｍ
ｌ）中のＣ−４リンク酸（３５１．５ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１１０．８ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ
（４２６．６ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）からなる予備形成溶液で処理した。 ５分後、ジイソプロピルエチルアミン（２８５．７μｌ、１．６４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３時間攪拌し、その後、樹脂はブロモフェノールブルーテストでは陰性であった。 樹脂をＤＭＦ（５×）およびＤＣＭ（５×）で洗浄し、次いで真空乾燥させて樹脂１４を得た（５００．９ｍｇ）。

【０１５７】 樹脂１４の少量のサンプル（約０．５ｍｇ）をジメチルホルムアミド中の２％
ヒドラジンで３０分間処理した。 次いで、溶液をエレクトロスプレー質量分析で分析し、イオン７００／７０２を得た。

【０１５８】 化合物１５の製造

【化２１】

【０１５９】 樹脂１４（６５ｍｇ）をジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２×３
ｍｌ×１０分）で処理し、次いで、ジメチルホルムアミド（５×）およびジクロロメタン（５×）で洗浄した。 樹脂はカイザーテストでは陽性であり、ジクロロメタン（１ｍｌ）に懸濁し、次いで、ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）中の安息香酸（１２７ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（
１４０ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（５４１ｍｇ、１．０４ｍｍ
ｏｌ）からなる予備形成溶液で処理した。 ５分後、ジイソプロピルエチルアミン（５４１ｍｇμｌ、２．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を７２時間攪拌し、
その後樹脂はカイザーテストでは陰性であった。 樹脂をＤＭＦ（５×）およびＤ
ＣＭ（５×）で洗浄し、次いで、真空乾燥させて樹脂１５を得た（６０ｍｇ）。

【０１６０】 樹脂の少量のサンプル（約０．５ｍｇ）をジメチルホルムアミド中の２％ヒドラジンで３０分間処理した。 次いで、溶液をエレクトロスプレー質量分析で分析し、イオン５８２／５８４を得た。

【０１６１】 実施例６ ４×４×４組合せ合成による６４メンバーのライブラリーの製造 ４×４×４組合せ合成手順を用いる、種々のジアミド基質を含む６４メンバーのライブラリーの構築物を製造することによって、組合せライブラリーの作製における本発明の構築物の有用性が証明されている。 ビーズの合成履歴を決定する手段を提供するために、また明確に制御されるビーズの分類および混合を可能にし（単に単純な統計的な分布によってのみ決定されるではなく）、その結果ライブラリーの６４メンバー総てが形成されるために、多量の樹脂ビーズを６４個の高周波標識したＩｒｏｒｉI ＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器に充填した。 Irori
, of La Jolla, California, USAから入手できるＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器はポリプロピレンメッシュ側壁、３０ｍｇまでの樹脂収容力および３３０μｌの内容積を有するポリプロピレン容器である。 ＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器の使用は、分割・プール組合せ合成の合成される化合物数に関して利益をもたらすが、ＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器は高周波タグをつけて提供され、これが各容器が同定され、従って反応シーケンスを通してモニターされるのを可能にするので、樹脂ビーズ上にコード構築物を構築する必要がない。 従って、各容器は反応シーケンスの最後で唯一の基質を含むので、容器の合成履歴がたどられ、各容器における基質の同一性を決定し、各反応工程が計画に従って進んだという経過を仮定することができる。

【０１６２】 ジアミド基質を第１開裂部位にチオピリミジンセーフティーキャッチリンカー、Ｎ−ベンジルピーク分割基を有するジアミノエタン連結基、基質をジアミノエタン連結基に結合する第２開裂部位に感光性リンカーを含む足場上に構築した。

【０１６３】 Ｎ−ベンジルジアミノエタンピーク分割基および感光性ピリミジンリンカー基を含む中間体構築物を以下のスキーム７に示される反応シーケンスによって製造し、その後の合成工程および組合せライブラリーの製造はスキーム８に示されている。 各スキームの実験の詳細は以下に示されており、実験に用いられた化合物および構築物番号は２つのスキーム中の構築物／化合物番号に該当する。

【０１６４】

【化２２】

【０１６５】 ピリミジン構築物の実験 ＤＭＦ（４０ｍｌ）中の４−（クロロメチル）安息香酸（３．９１ｇ、２３ｍ
ｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（８．７４ｇ、２３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（７．９５
ｍｌ、４６ｍｍｏｌ）の溶液を２０分間振盪し、次いで、平均ビーズ径が１５０
μｍで０．４６ｍｍｏｌｇ ^−１で充填されたアルゴゲル樹脂１（１ｇ、０．４６
ｍｍｏｌ）にこの溶液を加え、全体を５時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂（２）を真空乾燥させた。

【０１６６】 樹脂２にジオキサン（８０ｍｌ）とエタノール（２０ｍｌ）中のチオ尿素（８
． ４ｍｇ、１１０ｍｍｏｌ）のスラリーを加え、全体を８０℃１６時間で加熱した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ（×５）、ＤＣＭ（×５）、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄して樹脂３を得た。 次いで、樹脂を真空乾燥させた。

【０１６７】 樹脂３にＤＭＦ（１００ｍｌ）中のメチル−２−（ジメチルアミノメチレン）
−３−オキソブタノエート（２．４ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．９６ｍｌ、６．９ｍｍｏｌ）の溶液を加え、全体を８０℃で１６時間加熱した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂（４）を真空乾燥させた。 次いで、樹脂４
をＴＨＦと２ＮのＮａＯＨ水溶液の１：１混合物（１００ｍｌ）で処理し、２時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、ＴＨＦ／Ｈ _２ Ｏ、１０％ＡｃＯＨ／Ｔ
ＨＦ、ＴＨＦ／Ｈ _２ Ｏ、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄し、次いで、真空乾燥させて樹脂５を得た。

【０１６８】 樹脂５（５ｇ、２．３ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（３０ｍｌ）中のＰｙＢＯＰ（登録商標）（３．６ｇ、６．９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２．４ｍｌ、２５ｍｍ
ｏｌ）の溶液、次いで、ＤＭＦ（１ｍｌ）中の１−ベンジル−１−ｔ−ブトキシカルボニル−１，２−ジアミノエタン（０．８６ｇ、３．５ｍｍｏｌ）および１
−（ジジュウテロベンジル）−１−ｔ−ブトキシカルボニル−１，２−ジアミノエタン（０．８６ｇ、３．５ｍｍｏｌ）の溶液を加え、全体を４時間振盪した。
樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏ
で洗浄した。 次いで、樹脂にＤＣＭ（２０％、３０ｍｌ）中の２０％ＴＨＦ水溶液の溶液を加え、２時間振盪した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭで洗浄し、ＤＭＦ中の１０％ＤＩＰＥＡとともに１０分間振盪した。
樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏ
で洗浄した。 次いで、樹脂（６）を真空乾燥させた。

【０１６９】

【化２３】

【０１７０】 スキーム８の実験 ＤＭＦ（１０ｍｌ）にフォトリンカー酸１１（０．４１６ｇ、１．４７ｍｍｏ
ｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．５１ｍｌ、２．９４ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（０．
７６５ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を溶解し、１０分間静置した。 次いで、樹脂６（
０．７ｇ、０．２９４ｍｍｏｌ）にこれを加え、４時間振盪した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＭＦ中の１０％
ＤＩＰＥＡとともに１０分間振盪した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅ
ｔ _２ Ｏ、ＤＣＭさらに最終的にＥｔ _２ Ｏで洗浄した。 次いで、樹脂（７）を真空乾燥させた。

【０１７１】 還元アミノ化工程の一般手順 ＤＣＭ（３０ｍｌ）中に１６個のirori ＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器（各々１０ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ樹脂７を含む）を含む容器に予備混合したＤＣＭ
（２ｍｌ）中のアミン（量に関しては以下の表を参照）および酢酸（４６μｌ、
０．７６８ｍｍｏｌ）の溶液を加え、２０分間振盪した。 次いで、容器にＤＣＭ
（５ｍｌ）中のテトラメチルアンモニウムボロヒドリド（０．４０４ｍｇ、１．
５４ｍｍｏｌ）と酢酸（４６μｌ、０．７６８ｍｍｏｌ）の混合物を加え、容器を１６時間振盪した。 次いで、容器から水を抜き、ＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器をＤＣＭ、ＤＭＦ、ＤＣＭおよびＥｔ _２ Ｏで洗浄した（各３回）。

【０１７２】

【化２４】

【０１７３】 アミノ酸を用いるアシル化工程の一般手順 ＤＭＦ（３０ｍｌ）中に１６個のIrori ＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器を含む４個の容器（各容器は１０ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌの樹脂８を含む）の各々にＤＭＦ（５ｍｌ）中のＰｙＢＯＰ（３３３ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥ
Ａ（２２４μｌ、１．２８ｍｍｏｌ）および１種のアミノ酸（量については以下の表参照）の溶液を加え、混合物を１６時間振盪した。 次いで、容器から水を除き、ＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器をＤＭＦ、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＤＣＭおよびＥ
ｔ _２ Ｏで洗浄した（各３回）。 次いで、６４個のＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器総てを含む容器にＤＭＦ中のピペリジン（２０％）の溶液を加え、３時間振盪した。 次いで、容器から水を抜き、ＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器をＤＭＦ、ＤＣ
Ｍ、ＤＭＦ、ＤＣＭおよびＥｔ _２ Ｏで洗浄した（各３回）。

【０１７４】

【化２５】

【化２６】

【０１７５】 酸を用いるアシル化工程の一般手順 ＤＭＦ（３０ｍｌ）中に１６個のIrori ＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器（各容器は１０ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌの樹脂９を含む）を含む４個の容器の各々にＤＭＦ（５ｍｌ）中のＰｙＢＯＰ（３３３ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥ
Ａ（２２４μｌ、１．２８ｍｍｏｌ）および１種の酸（量については表３参照）
の溶液を加え、混合物を１６時間振盪した。 次いで、容器から水を除き、Ｍｉｃ
ｒｏＫａｎ（商標）容器をＤＭＦ、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＤＣＭおよびＥｔ _２ Ｏで洗浄した（各３回）。

【０１７６】

【化２７】

【化２８】

【０１７７】 樹脂１０の分析的開裂の一般手順樹脂１０をＤＣＭ中のメタ−クロロ−ペル安息香酸（ｍｃｐｂａ）の１０％溶液で４時間処理する。 次いで、溶液を濾去し、ビーズをＤＣＭで洗浄する。 次いで、６４個のＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器各々からの１個のビーズをＤＭＳＯ
中の１−メチルピペラジンの１０％溶液で処理し、１６時間静置する。 次いで、
得られる開裂した溶液をエレクトロスプレー質量分析による分析に付す。 開裂した分析構築物の質量スペクトルは以下の表で列の最初のものが「構築物開裂」において同定されるスペクトルに示されている。 最初の４個の単量体の組合せの質量スペクトルが図１１〜１４に示されている。

【０１７８】 樹脂１０の光分解の一般手順 ６４個のＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）容器各々からの１個のビーズをＤＭＳＯ（
０．２％Ｈ _２ ＮＮＨ _２を含む）中で膨潤させ、次いで、光分解に４時間付し、溶液をエレクトロスプレー質量分析による分析に付す。 ライブラリーの光分解開裂産物の質量スペクトルは以下の表で列の最初のものが「ＵＶ開裂」において同定されるスペクトルに示されている。 最初の４個の単量体の組合せの質量スペクトルが図１５〜１８に示されている。

【０１７９】

【表４】

【表５】

【０１８０】 図の質量スペクトルから分かるように、構築物が第２開裂部位で光分解的に開裂され、基質を遊離する場合には、基質上にいずれかの容易にイオン化できる基がないということは質量スペクトルが強い分子イオンを示さず、従って、基質の同定が困難であるということを意味する。 しかしながら、ビーズへの構築物が第１開裂部位で開裂されて基質ならびに増感およびピーク分割基を含む分析フラグメントを遊離する場合には、強く、特徴的で、かつ、容易に同定可能な分割分子イオンが生じ、それによって基質が同定されるのが可能となる。 ほとんどの場合では、質量スペクトルの分子イオンからの基質の同定は各ＭｉｃｒｏＫａｎ（商標）中の樹脂ビーズの既知の合成履歴から予測される同一性と関連していた。 しかしながら、ある反応では、基質は用いられた開裂条件下で酸化産物を形成し、
セーフティーキャッチリンカーを開けたが、かかる酸化産物は質量スペクトルのＭ＋１６イオンのように容易に同定できる。 従って、本発明の構築物のさらなる利点は、計画に従って特定の反応が進行しなかった場合に測定する手段を提供することである。

【０１８１】 本発明の二重リンカー構築物は開裂により質量分析増感基を含む分析構築物が遊離されるか、または基質が放出されるのいずれかを可能にする。 従って、構築物は１個のビーズレベルで構築物が１個のリンカーしか含まず、かつ、質量分析増感基を含まなかった場合には可能でなかったであろう方法でＱＣ手順が実施されるのを可能にする。

【０１８２】 実施例７ 第１開裂部位にＡｌｌｏｃリンカーを含む構築物の製造第１開裂部位にアリルオキシカルボニル（「Ａｌｌｏｃ」）リンカーおよび第２開裂部位に酸不安定性Ｒｉｎｋリンカーを含む構築物の例をスキーム９に示される反応スキームに従って製造した。 この実施例では、パラジウム（０）を用いてアリルオキシカルボニル基をジアミノエタン基のアミノ基から開裂し、遊離アミノ基を放出し、これは次いで質量分析増感基として機能し得る。

【０１８３】

【化２９】

【０１８４】 スキーム９の実験 一般法この節では、化合物番号はスキーム９の化合物番号に該当する。 総ての洗浄は記載された溶媒で５倍量で実施した。 標準洗浄手順Ａ：ＤＭＦ、
ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＤＣＭ、Ｅｔ _２ Ｏ、ＤＣＭおよびＥｔ _２ Ｏ、総て各５倍量。

【０１８５】 ＤＭＦ（０．５ｍｌ）に市販の酸２（６５ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）（Neos
ystems）を溶解し、これにＤＩＰＥＡ（４０μｌ、０．２３ｍｍｏｌ）、次いでＨＡＴＵ（４４ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を加えた。 この混合物を５分間静置し、次いで、市販の平均ビーズ径が１５０μｍで０．４６ｍｍｏｌｇ ^−１で充填されたアルゴゲルＮＨ２（樹脂１）（５０ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）に加え、
２時間振盪した。 次いで、樹脂から水を抜き、標準洗浄手順Ａに従って洗浄し、
次いで、真空乾燥させた。 次いで、樹脂をＤＣＭ、ＴＦＡおよびＴＥＳの溶液（
１ｍｌ、それぞれ９５：２：５）で２時間処理し、次いで、前記のように洗浄して水を抜き、次いで、このＤＣＭ、ＴＦＡ、およびＴＥＳでの処理を１時間反復した。 樹脂を標準洗浄手順Ａに従って洗浄して水を抜き、樹脂３を得た。

【０１８６】 次いで、樹脂３（５０ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１ｍｌ）中の４
−ニトロフェニルクロロホルメート（２３ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）の溶液で処理し、１６時間振盪した。 次いで、樹脂から迅速に水を抜き、ＤＣＭおよびＥ
ｔ _２ Ｏで洗浄して樹脂４を得た。 これにＤＣＭ（１ｍｌ）中のアミン７（５０ｍ
ｇ、０．２ｍｍｏｌ）および８（５０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ
（７０□ｌ、０．４ｍｍｏｌ）の溶液を直接加え、１６時間振盪した。 次いで、
樹脂から水を抜き、標準洗浄手順Ａに従って洗浄し、次いで真空乾燥させた。 次いで、この樹脂をＤＣＭ（１ｍｌ）中の２０％ＴＦＡの溶液で処理し、２時間振盪した。 樹脂から水を抜き、ＤＭＦ（２ｍｌ）中の１０％ＤＩＰＥＡの溶液で洗浄し、次いで、水を抜き、標準洗浄手順Ａに従って洗浄し、次いで、真空乾燥させて樹脂５を得た。

【０１８７】 ＤＭＦ（０．５ｍｌ）にＲｉｎｋ酸９（６５ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を溶解し、ＤＩＰＥＡ（４０□ｌ、０．２３ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４４ｍｇ、
０．１１５ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を５分間静置した。 次いで、樹脂５（
２５ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）にこの溶液を加え、２時間振盪した。 標準洗浄手順Ａに従って樹脂を洗浄し、水を抜き、真空乾燥させた。 次いで、樹脂をＤＭ
Ｆ（１ｍｌ）中のピペリジンの２０％溶液で１時間処理した。 標準洗浄手順Ａに従って樹脂を洗浄し、水を抜き、真空乾燥させた。 ＤＭＦ（０．５ｍｌ）に安息香酸（１４ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を溶解し、ＤＩＰＥＡ（４０□ｌ、０．
２３ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４４ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を５分間静置した。 次いで、樹脂にこの溶液を加え、２時間振盪した。 標準洗浄手順Ａに従って樹脂を洗浄し、水を抜き、真空乾燥させて樹脂６を得た。

【０１８８】 樹脂６の開裂：方法１樹脂６（０．５ｍｇ）をＤＣＭ中で膨潤させ、次いで、（Ｐｈ _３ Ｐ） _４ Ｐｄ（
０）（２．７ｍｇ、２．３Ｅ ^−３ ｍｍｏｌ）、次いでモルホリン（１０ｍｌ、０
． １１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１時間振盪した。 液体のサンプルを取り、エレクトロスプレー質量分析によって分析して図１７に示されるような分析を得た。 これまでの実施例に関するように、質量分析増感基およびピーク分割基の存在が強い分子イオンが形成され、容易に同定されるのを可能にする。

【０１８９】 樹脂６の開裂：方法２樹脂６（０．５ｍｇ）をＤＭＳＯ、ＴＨＦおよび０．５ＭのＨＣｌの混合物（
０．５ｍｌ、それぞれ２：２：１）中で膨潤させ、次いで、（Ｐｈ _３ Ｐ） _４ Ｐｄ
（０）（２．７ｍｇ、２．３Ｅ ^−３ ｍｍｏｌ）、次いで、モルホリン（１０ｍｌ
、０．１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１時間振盪した。 液体のサンプルを取り、エレクトロスプレー質量分析によって分析して図１８に示されるような分析を得た。

【０１９０】 実施例８ アントラセニルＵＶ発色団を含む構築物の製造 ＵＶスペクトロメトリーを用いて固相反応の産物に関する正確な定量情報を提供することができるということを証明するために、アントラセニルＵＶ発色団を含む構築物を以下のスキーム１０、１１および１２に示される合成経路に従って製造した。 構築物は第１開裂部位にスルホンアミドリンカー、第２開裂部位にＲ
ｉｎｋリンカーをともなって、エチレンジアミン鎖が２つのリンカーを連結し、
ジアミン鎖の２個の窒素原子がＵＶ発色団の接着点として働き、ピーク分割重水素標識ベンジル基または非標識ベンジル基をともなって提供される。

【０１９１】 以下のスキーム１０は非樹脂結合型中間体構築物の合成を例示し、スキーム１
１はスキーム１０の構築物の樹脂支持体への接着と、その後の樹脂に対する反応を例示し、スキーム１２は種々の基質基の構築物への接着とそれに続く開裂実験を例示する。 以下の実験節では、用いられる化合物番号はスキーム１０、１１および１２において同定される化合物に該当する。

【０１９２】

【化３０】

【０１９３】 スキーム１０の実験

【化３１】

【０１９４】 化合物１２（ｘ＝ ^１ Ｈ、 ^１ Ｈ）の製造乾燥ジクロロメタン（１ｍｌ）中のアミン（ ｘ＝Ｈ、Ｈ ）（１１）（０．０５
ｍｍｏｌ）の溶液に乾燥トリエチルアミン（２５μｌ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。 次いで、乾燥ジクロロメタン（０．５ｍｌ）中の２−ニトロ−４−メチルベンゾエートスルホニルクロリド（１０）（２５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の溶液を滴下し、混合物を１５分間攪拌した。 溶媒を真空蒸発させて、残渣を溶出剤として２：１ヘキサン／酢酸エチルを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、無色の油状物質としてスルホンアミド（１２）（２３．３ｍｇ、９５％
）を得た、Ｒ _ｆ １７／５０［ヘキサン−酢酸エチル（２：１）］；（実測：C,53
.7;H,5.4;N,8.4;;S,6.5。 C _２２ H _２７ N _５ O _８ SはD,53.3;H,5.5;N,8.5;S,6.5%を必要とする）; δ _H (DMSO-d ⁶ ) 1.38 (9H, s, H-18), 3.lO (2H, t, J8, H-9), 3.2
4 (2H, t, J8, H-lO), 3.95 (3H, s, O-Me), 4.32 (2H, s, H11), 7.13-7.32 (5
H, m, H-13, 14 およびl5), 8.09 (1H, d,J8, H-6), 8.29 (1H, s, H-3), 8.32
(1H, d, J8, H-3); δ _C (DMSO-d ⁶ ) 28.3 (C-l8), 40.2 (C-9 および10), 46.2 (
C-1l), 53.2 (O-Me), 79.3 (C-17), 125.1 (C-13), l27.2 (C-14 および15), l2
8.6 (C-6), l30.3 (C-13), 133.1 (C-5), l34.4 (C-12), 136.6 (C-1), l47.6 (
C-4), 163.7 (C-16 およびC=0); MS (エレクトロスプレー -ve) m/z 494 (MH)-
; HPLC, Rt 6.8 分

【０１９５】 化合物１２（ｘ＝ ^２ Ｈ、 ^２ Ｈ）の製造乾燥ジクロロメタン（１ｍｌ）中のアミン（ ｘ＝ ^２ Ｈ、 ^２ Ｈ ）（１１）（０．
０５ｍｍｏｌ）の溶液に乾燥トリエチルアミン（２５μｌ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。 次いで、乾燥ジクロロメタン（０．５ｍｌ）中の２−ニトロ−４−メチルベンゾエートスルホニルクロリド（１０）（２５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の溶液を滴下し、混合物を１５分間攪拌した。 溶媒を真空蒸発させて、残渣を溶出剤として２：１ヘキサン／酢酸エチルを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、無色の油状物質としてスルホンアミド（１２）（２３．５ｍｇ、９
４％）を得た、Ｒ _ｆ １７／５０［ヘキサン−酢酸エチル（２：１）］；（実測：
C,53.2;H,5.6;N,8.5;;S,6.4。 C _２２ H _２５ D _２ N _３ O _８ SはD,53.3;H,5.5;N,8.5;S,6.
5%を必要とする）; δ _H (DMSO-d ⁶ ) 1.40 (9H, s, H-18), 3.05 (2H, m, H-9), 3
.20 (2H, dt, J3 および13, H10), 3.9 (3H, s, O-Me), 7.lO-7.35 (5H,m, H-l3
, l4 and l5), 8.09 (lH, d,J8, H-6), 8.35 (1H, d,J8, H-5), 8.40 (1H, m, H
-8), 8.45 (1H, s, H-3),; δc (DMSO-d ⁶ ) 27.8 (C-18), 40.9 (C-9 および10), 45.9 (C-1
1), 53.0 (0-Me), 79.1 (C-l7), 124.8 (C-l3), 127.0 (C-14 およびl5), 128.3
(C-6), l30.0 (C-13), 132.9 (C-5), 134.2 (C-12), l36.4 (C-1), l47.5 (C-4
), l54.7 (C-2), 163.5 (C-16 and C=0); MS(エレクトロスプレー +vc) m/z 496
(MH) ⁺ ; HPLC, R _t . 6.8 分

【０１９６】 化合物１３および１の製造

【化３２】

１４２μｍｏｌ）、３−（９−アントラセン）プロパノール（１７．６ｍｇ、７

４μｍｏｌ）およびスルホンアミド１２（Ｘ＝Ｈ、Ｈおよび

^２ Ｈ、

^２ Ｈ（３５ｍ

ｇ、７１μｍｏｌ）の攪拌溶液に滴下した。 １時間後にはｔｌｃにより反応が完了したと思われ、この溶液をほぼ乾固した。

【０１９７】

【化３３】

【０１９８】 残渣を１０％トリエチルアミンを含有する２：１ヘキサン／酢酸エチルを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して無色の油状物質としてスルホンアミド１３を得た（４５ｍｇ、９０％）。 R _ｆ 15/38 (ヘキサン/酢酸エチル(2:1))
; MS(エレクトロスプレー+ve) m/z 612, 614 (MH-Boc) ^＋ , MS(エレクトロスプレー-ve) m/z 756, 758 (M-H+蟻酸塩) HPLC, R _ｔ 6.9分. ２Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（０．３５ｍｌ、０．７ｍｍｏｌ）をメタノール−１，４−ジオキサン（
４：１）（２ｍｌ）中のエステル１３（０．２５ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）の溶液に滴下した。 室温で１時間攪拌した後（単相を確保する必要に応じてメタノール−ジオキサン（約１ｍｌ）をさらに加える）、溶液を弱酸性にするのに十分な２
ＭのＨＣｌを加えた。 この溶液を酢酸エチル（５０ｍｌ）と水（１０ｍｌ）の入った分液フラスコに移し、分離後、水相をさらに酢酸エチル（２５ｍｌ）で抽出した。 合した有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ _４ ）、減圧下で蒸発させて無色の油状物質として酸１を得た（０．２３ｇ、９４％）; R _ｆ 2/40 [ヘキサン/酢酸エチル(2:1)];δ _H (CDCl ₃ ) 1.40 (9H, br. d, tBu), 1,90 (2H, br. m, CH ₂ ), 3
.3-3.7 (8H, br. m, 4xCH ₂ ),7.lO-8.30 (l7H, br. m, Arom. H); MS (エレクトロスプレー +ve) m/z: 697, 699 HPLC, R _t . 7.2 分

【０１９９】

【化３４】

【０２００】

【化３５】

【０２０１】 スキーム１１および１２の実験

【化３６】

^−１で充填）を乾燥ジクロロメタン（５ｍｌ）で膨潤させた。 窒素でフラッシュした分液フラスコにおいて安息香酸（１）（０．６７ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（０．７

２８ｇ、１．４ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（０．１

９ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を乾燥ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）に溶解し、得られた溶液を２分攪拌した後、カニューレにより樹脂の懸濁液に移した。 ゆっくりとした窒素流を溶液に通し、５分間吸引させて確実に混合した後、ジイソプロピルエチルアミン（０．４９ｍｌ、２．８ｍｍｏｌ）を加えた。 攪拌を１８時間続けた後、樹脂（２）から水を抜き、洗浄（ジクロロメタン（３×７ｍｌ）、ジメチルホルムアミド（３×７ｍｌ）次いでジクロロメタン（３×７ｍｌ））し、真空乾燥させた。 ２の分析サンプルによるカイザーテストは陰性であった。

【０２０２】

【化３７】

【０２０３】 樹脂２（０．３５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍｌ）で膨潤させ、フェノール（６６ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）、次いでトリフルオロ酢酸（４．５ｍｌ）を加えた。 樹脂を窒素流を用いて５分間ゆっくりと攪拌し、次いで樹脂から水を抜き、ジクロロメタン（２×５ｍｌ）で洗浄した。 この工程を繰り返し、水抜き後に樹脂を洗浄（ジクロロメタン（３×８ｍｌ）、ジクロロメタン中１０％ジイソプロピルアミン（２×６ｍｌ）、次いでジクロロメタン（４×８ｍｌ））し、真空乾燥させた。 分析サンプルによるカイザーテストは陽性であった。 窒素でフラッシュした反応器に入れた樹脂を乾燥ジクロロメタン（５ｍｌ）で膨潤させた。 窒素でフラッシュした分液フラスコにおいてＣ−４ＲＩＮＫ酸（０
． ７９５ｇ、１．４ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（１．４６ｇ、２．８ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．３７８ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を乾燥ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）に溶解し、得られた溶液をカニューレにより樹脂の懸濁液に移した。 この混合物を、窒素流を溶液に通して吸引させることにより、ゆっくりと攪拌し、５分後に乾燥ジイソプロピルエチルアミン（０．９８
ｍｌ、５．６ｍｍｏｌ）を加えた。 攪拌を機械的振盪機で１８時間続けた後、樹脂（３）から水を抜き、洗浄（ジクロロメタン（３×８ｍｌ）、ジメチルホルムアミド（３×５ｍｌ）次いでジクロロメタン（３×５ｍｌ））し、真空乾燥させた。 分析サンプルによるカイザーテストは陰性であった。

【０２０４】

【化３８】

【０２０５】 樹脂３のサンプル（５０ｍｇ、１４μｍｏｌ）を１：１ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）中の２０％ｖ／ｖピペリジンで１５分間処理した。
樹脂から水を抜き、洗浄（ジクロロメタン（３×２ｍｌ）、ジメチルホルムアミド（３×２ｍｌ）次いでジクロロメタン（３×２ｍｌ））し、次いで真空乾燥させ、分析サンプルによるブロモフェノールブルーテストは陽性であった。 樹脂の入った反応器を窒素でフラッシュし、乾燥１：１ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）を加えた。 窒素でフラッシュした分液フラスコにおいてＰｙＢＯＰ（５７ｍｇ、１１０μｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１５ｍｇ、１１０μｍｏｌ）および好適な酸（４ａ〜ｄ）（５５μｍｏｌ）を乾燥１：１ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）に溶解し、この溶液を樹脂の懸濁液に少量ずつ加え、窒素流を溶液に通して吸引させて確実に均質混合した。 １８時間攪拌した後、樹脂から水を抜き、洗浄（ジクロロメタン（３×２ｍｌ）、ジメチルホルムアミド（４×２ｍｌ）次いでジクロロメタン（
３×２ｍｌ））し、真空乾燥させて樹脂５ａ〜ｄを得た。 各々の分析サンプルによるカイザーテストは陰性であった。

【０２０６】 ４つの樹脂それぞれの少量のサンプルをアセトニトリル中のＤＢＵ／メルカプトエタノールで処理して６ａ〜ｄを得た。 これらをＨＰＬＣおよび低解像度質量スペクトルにより分析した： 6a(R=3-ジメチルアミノベンゾイル) HPLC R _ｔ 4.51分, MS(エレクトロスプレー+
ve) m/z 843.7および845.7; 6b(R=2-ナフチルアセトイル) HPLC R _ｔ 5.41分, MS(エレクトロスプレー+ve) m/
z 863.4および865.4; 6c(R=4-ペンテノイル) HPLC R _ｔ 4.98分, MS(エレクトロスプレー+ve) m/z 778.
7および780.7; 6d(R=t-ブチルアセトイル) HPLC R _ｔ 5.18分, MS(エレクトロスプレー+ve) m/z
795.0および797.0.

【０２０７】 相対的定量ほぼ同量（約５０ｍｇ）の樹脂５ａおよび５ｂを合し、ジクロロメタン（２ｍ
ｌ）中の４−メルカプト安息香酸（４３ｍｇ、２０μｍｏｌ）およびモルホリン（４９μｍｏｌ）で処理した。 １時間後、溶液を流し、樹脂をジクロロメタン（
２×１ｍｌ）で洗浄した。 これらの合した洗液を酢酸エチル（１０ｍｌ）で希釈し、まず５０％重炭酸ナトリウム飽和水溶液（３ｍｌ）、水（３ｍｌ）次いでブライン（２ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。 濾液を蒸発させて６ａおよび６ｂの混合物約５ｍｇを得た。 この混合物の成分比をまずＨＰＬＣにより調べ、２５４ｎｍおよび３８６ｎｍにおけるピーク面積を比較した。 これは ^１ Ｈ ＮＭＲスペクトルの特徴的な共鳴の積分の大きさから決定される比と相関した。

【０２０８】

【表６】

【０２０９】

【表７】

【０２１０】 同様に、樹脂５ｃおよび５ｄの混合物から６ｃおよび６ｄの混合物を得、その比をさらにＨＰＬＣにより調べた。 これは^１ Ｈ ｎｍｒスペクトルを用いて求めた比と相関した。

【０２１１】

【表８】

【０２１２】

【表９】

^１ Ｈ ｎｍｒを用いて前の通り分析した：

【０２１３】

【表１０】

【０２１４】

【表１１】

【０２１５】 樹脂３（２１４ｍｇ、５９μｍｏｌ）を１：１ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）中の２０％ｖ／ｖピペリジンで６０分間処理した。 樹脂から水を抜き、洗浄（ジクロロメタン（３×３ｍｌ）、ジメチルホルムアミド（３×
３ｍｌ）次いでジクロロメタン（３×３ｍｌ））し、次いで真空乾燥させ、分析サンプルによるブロモフェノールブルーテストは陽性であった。 次いで反応器を窒素でフラッシュし、樹脂を乾燥１：１ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）を膨潤させた。

【０２１６】 窒素でフラッシュした分液フラスコにおいてＰｙＢＯＰ（２４５ｍｇ、４７０
μｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（６４ｍｇ、４７０μｍｏｌ）
および４−ペンテン酸（６．０μｌ、５９μｍｏｌ）、３−ジメチルアミノ安息香酸（１９．５ｍｇ、１２０μｍｏｌ）とｔ−ブチル酢酸（２３μｌ、１８０μ
ｍｏｌ）の混合物を乾燥１：１ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（１ｍｌ
）に溶解し、この溶液を樹脂の懸濁液に少量ずつ加えた。 ゆっくりとした窒素流を混合物に通し、５分後にジイソプロピルアミン（１６５μｌ、９４０μｍｏｌ
）を加えた。 １８時間攪拌した後、樹脂（７）から水を抜き、洗浄（ジクロロメタン（３×４ｍｌ）、ジメチルホルムアミド（４×４ｍｌ）次いでジクロロメタン（３×４ｍｌ））し、真空乾燥させた。 ７の分析サンプルによるカイザーテストは陰性であった。

【０２１７】 樹脂７の少量のサンプルをアセトニトリル中のＤＢＵ／メルカプトエタノールで処理して６ａ、６ｃおよび６ｄの混合物を得、これらの成分の相対量をＨＰＬ
Ｃにより調べ、２５４および３８６ｎｍにおけるピーク面積を比較した（表）。

【０２１８】 次いで７の１個のビーズを選択して同様に開裂した。 成分比をさらにＨＰＬＣ
を用いて求めた。

【０２１９】 約２００ｍｇの樹脂７（０．０５６μｍｏｌ）をジクロロメタンで膨潤させ、
過剰な溶媒を流し去った。 フェノール（１０．５ｍｇ、０．１１２μｍｏｌ）、
次いで、この添加量が全体の３分の１となるようジクロロメタン中の８０％トリフルオロ酢酸を加えた。 ２時間攪拌した後、淡赤色の溶媒を丸底フラスコに流し入れ、樹脂を蒸留ジクロロメタン（３×３ｍｌ）で洗浄した。 合した有機物を乾固して第一級アミド８ａ、８ｃおよび８ｄの混合物を得た。 これらの成分比を^１ Ｈ ｎｍｒスペクトルの特徴的な共鳴の積分の大きさを求めて調べた。

【０２２０】

【表１２】

【０２２１】

【表１３】

【０２２２】

【表１４】

【０２２３】 上記の表にある結果は、ＵＶ法により得られた比と十分に確立されかつ証明されたｎｍｒ分析法により得られた比との間に極めて優れた相関があることを示している。 よって固相合成の反応生成物についての定量情報を与える非常に厳密な手段がＵＶ検出と分析を用いて得られることがデータにより示される。 特に重要なのは、ＵＶ分析により分析に利用できる化合物量がわずか１ナノモルのオーダーであるといった１ビーズレベルであっても定量的データが得られる厳密な手段が提供されることがわかったことである。

【０２２４】 実施例９ ＵＶ発色団としてダンシル基を含有する構築物の製造第２のＵＶ発色団含有構築物を製造したが、今回はアントラセニル基ではなくダンシル基をＵＶ発色団として含有した。 構築物に導く一連の工程が下記スキーム１３に示されている。 スキーム１３よりわかるように、構築物はスルホンアミドリンカー基が第１開裂部位を与えて分析フラグメントの解離を可能にし、さらにＲｉｎｋリンカーが第２開裂部位を与えて基質の解離を可能にするという実施例８の構築物に類似している。 しかしながら、本実施例ではスルホンアミド窒素と結合させるよりも、発色団とエチレンジアミン鎖とＲｉｎｋリンカーとの間に位置するリジン基とを結合するほうがよい。

【０２２５】

【化３９】

【０２２６】 スキーム１３の実験以下の実験詳細において、化合物または構築物番号とはスキーム１３で確認される化合物または構築物をいう。

【０２２７】 化合物３ａの製造

【化４０】

【０２２８】 乾燥ジクロロメタン（４０ｍｌ）中の２−ニトロ−４−メチルベンゾエートスルホニルクロリド１（１．１０ｇ、３．９０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０
． ３９ｇ、３．９０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に乾燥ジクロロメタン（２０ｍｌ）中のアミン２ａ（１．００ｇ、３．９ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって０℃で加えた。 反応混合物をさらに２時間室温で攪拌し、次いで、真空濃縮して黄色の油状物質を得た。 溶出剤として［ＭＴＢＥ：ヘキサン（１：１）］を用いるクロマトグラフィーとそれに続くＭＴＢＥ（５ｍｌ）とヘキサン（２ｍｌ）からの再結晶化による精製により白色フレークとしてスルホンアミド３ａ（１．５３ｇ、７９
％）を得た; 融点 129-130℃; R _ｆ 0.31 [MTBE:ヘキサン(1:1)]; (実測: C,53.2
; H,5.6; N,8.5; S,6.4. C _２２ H _２５ D _２ N _３ O _８ SはC,53.3; H,5.5; N,8.5; S,6.5
%を必要とする。 );δ _H (DMSO-d ⁶ ) 1.40 (9H, s, H-18), 3.05 (2H, m, H-9), 3.
20 (2H, dt, J3 および 13, H-10), 3.9 (3H, s, O-Me), 7.10-7.35 (5H, m, H-
13, 14 および 15), 8.09 (1H, d, J8, H-6), 8.35 (lH, d, J8, H-5), 8.40 (1
H, m, H-8), 8.45 (1H, s, H-3),; δ _C (DMSO-d ⁶ ) 27.8 (C-l8), 40.9 (C-9 および 10), 45.9 (C-11), 53.0 (O-Me), 79.1 (C-17), 124.8 (C-13), 127.0 (C-
14 および 15), 128.3 (C-6), 130.0 (C-13), 132.9 (C-5), 134.2 (C-l2), 136
.4 (C-1), 147.5 (C-4), 154.7 (C-2), 163.5 (C-l6 および C=0); MS (エレクトロスプレー +ve) m/z 496 (MH) ⁺ ; HPLC (方法 A), R _t 6.07 分

【０２２９】 化合物４ａの製造

【化４１】

【０２３０】 メタノール（２ｍｌ）中のエステル３ａ（０．４０ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（１．６０ｍｌ、１．６０ｍｍｏｌ）で処理し、
室温で１時間攪拌した。 次いで、反応物を真空濃縮し、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、次いで、０℃にて１Ｍの塩酸（１．８０ｍｌ、１．８０ｍｍｏｌ）で酸性化した。 得られた白色沈殿をジクロロメタン（３×１０ｍｌ）で抽出した。 合した有機抽出液をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ _２ ＳＯ _４ ）、減圧下で蒸発させて白色の固体として酸４ａを得た（０．３４ｇ、８８％）; 融点 143-145℃
; R _ｆ 0.58 [MTBE:ヘキサン(1:1)];δ _H (DMSO-d ⁶ ) 1.29 (9H, s, H-18), 3.02 (
2H, m, H-9), 3.20 (2H, dt, J3 および l3, H-10), 7.l0-7.40 (5H, m, H-13,
14 および 15), 8.06 (1H, d, J8, H-6), 8.28 (1H, s, H-3), 8.30 (1H, d, J8
,H-3); δ _C (DMSO-d ⁶ ) 27.9 (C-18), 40.9 (C-9 および 10), 45.9 (C-1l), 79.
1 (C-l7), l24.5 (C-l3), 127.1 (C-l4 および 15), 128.4 (C-6), 129.5 (C-13
), l32.5 (C-5), 139.2 (C-12), 147.3 (C-1), 155.1 (C-4), 164.8 (C-16 および C=0); (実測: MH ⁺ , 482.156364 C ₂₁ H ₂₃ D ₂ N ₃ O ₈ S MH ⁺ , は482.l56615を必要とする); HPLC (方法 A), R _t 5.65 分

【０２３１】 化合物３ｂの製造

【化４２】

【０２３２】 乾燥ジクロロメタン（４０ｍｌ）中の２−ニトロ−４−メチルベンゾエートスルホニルクロリド１（１．１０ｇ、３．９０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０
． ３９ｇ、３．９０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に乾燥ジクロロメタン（２０ｍｌ）中のアミン２ｂ（０．９５ｇ、３．９ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって０℃で加えた。 反応混合物をさらに３時間室温で攪拌し、次いで、真空濃縮して黄色の油状物質を得た。 溶出剤として［ＭＴＢＥ：ヘキサン（１：１）］を用いるクロマトグラフィーとそれに続くＭＴＢＥ（５ｍｌ）とヘキサン（２ｍｌ）からの再結晶化による精製により白色フレークとしてスルホンアミド３ｂ（１．５１ｇ、７９
％）を得た; 融点 131-132℃; R _ｆ 0.28 [MTBE:ヘキサン(1:1)]; (実測: C,53.7
; H,5.4; N,8.4; S,6.5. C _２２ H _２７ N _３ O _８ SはC,53.5; H,5.5; N,8.5; S,6.5%を必要とする。 );δ _H (DMSO-d ⁶ ) 1.38 (9H, s, H-l8), 3.10 (2H, t, J8, H-9), 3
.24 (2H, t, J8, H-10), 3.95 (3H, s, O-Me), 4.32 (2H,s, H11), 7.13-7.32 (
5H, m, H-l3, 14 および l5), 8.09 (1H, d, J8, H-6), 8.29 (lH, s, H-3), 8.
32 (lH, d, J8, H-3); δ _C (DMSO-d ⁶ ) 28.3 (C-18), 40.2 (C-9 および l0), 46
.2 (C-11), 53.2 (O-Me), 79.3 (C-l7), l25.1 (C-13), 127.2 (C-14 および 15
), l28.6 (C-6), l30.3 (C-13), 133.1 (C-5), l34.4 (C-12), l36.6 (C-1), l4
7.6 (C-4), 163.7 (C-l6 および C=0); MS (エレクトロスプレー -ve) m/z 492
(MH) ^- ; HPLC (方法A), R _t 5.99 分

【０２３３】 化合物４ｂの製造

【化４３】

【０２３４】 メタノール（２ｍｌ）中のエステル３ｂ（０．４０ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（１．６０ｍｌ、１．６０ｍｍｏｌ）で処理し、
室温で１時間攪拌した。 次いで、反応物を真空濃縮し、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、次いで、０℃にて１Ｍの塩酸（１．８０ｍｌ、１．８０ｍｍｏｌ）で酸性化した。 得られた白色沈殿をジクロロメタン（３×１０ｍｌ）で抽出した。 合した有機抽出液をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ _２ ＳＯ _４ ）、減圧下で蒸発させて白色の固体として酸４ｂを得た（０．３６ｇ、９３％）; 融点 123.7-124
.8℃; R _ｆ 0.59 [MTBE:ヘキサン(1:1)];δ _H (DMSO-d ⁶ ) 1.42 (9H, s, H-18), 3.
l2 (2H, m, H-9), 3.22 (2H, m, H-10), 4.38 (2H, s, H11), 7.18-7.42 (5H, m
, H-13, 14 および l5), 8.11 (1H, d, J8, H-6), 8.39 (lH, d, J8, H-3); 8.4
5 (lH, s, H-3); δ _C DMSO-d ⁶ ) 27.8 (C-18), 40.1 (C-9 および l0), 45.9 (C-
11), 79.1 (C-l7), 124.8 (C-13), 126.9 (C-l4 および 15), 128.4 (C-6), 129
.9 (C-13), 132.9 (C-5), 135.8 (C-12), 137.9 (C-1), l47.5 (C-4), l53.9 (C
-2), l63.7 (C-16 および C=0); MS (エレクトロスプレー -ve) m/z 478 (MH) ^- ; HPLC (方法A), R _t 5.56分

【０２３５】 化合物５の製造

【化４４】

【０２３６】 ＤＭＦ（４ｍｌ）とジクロロメタン（４ｍｌ）中の、平均ビーズ径が１５０μ
ｍで０．４ｍｍｏｌｇ ^−１で充填されたアミン樹脂（アルゴゲル−ＮＨ _２ ）（０
． ８０ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）の懸濁液に安息香酸（４ａ）（０．４６ｇ、０．
９６ｍｍｏｌ）および安息香酸（４ｂ）（０．４６ｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、次いでＰｙＢＯＰ（０．９９ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（０．２６ｇ
、１．９２ｍｍｏｌ）、４分後、ヒューニッヒ塩基（０．４９ｇ、３．８４ｍｍ
ｏｌ）を加えた。 反応物を窒素とともに１８時間攪拌し、次いで、樹脂をジクロロメタン（６×１０ｍｌ）、ＤＭＦ（６×１０ｍｌ）、ジクロロメタン（６×１
０ｍｌ）、エーテル（２×１０ｍｌ）で洗浄し、真空乾燥させて黄色の固体としてスルホンアミド樹脂５を得た（０．９４ｇ、９７％）；カイザーテストは陰性であった；ブロモフェノールブルーテストは陰性であった。

【０２３７】 化合物６の製造

【化４５】

【０２３８】 ジクロロメタン（２ｍｌ）に保護樹脂５（０．８５ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を懸濁し、トリフルオロ酢酸（２×４ｍｌ）で５分間処理した。 溶媒を濾去し、樹脂をＤＭＦ中の１０％ＤＩＰＥＡ溶液（３×５ｍｌ）、ジクロロメタン（６×５
ｍｌ）、ＤＭＦ（６×５ｍｌ）、ジクロロメタン（６×５ｍｌ）、エーテル（２
×５ｍｌ）で洗浄した。 次いで、ＤＭＦ（４ｍｌ）とジクロロメタン（２ｍｌ）
にアミン樹脂を懸濁し、ＦＭｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−ＯＨ（０．８６ｇ、１．
６２ｍｍｏｌ）、次いで、ＰｙＢＯＰ（０．８４ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（０．２２ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を加えた。 ４分後、ヒューニッヒ塩基（０．４２ｇ、３．２４ｍｍｏｌ）を加えた。 反応物を窒素とともに１８時間攪拌し、次いで、樹脂をジクロロメタン（６×１０ｍｌ）、ＤＭＦ（６×１０ｍ
ｌ）、ジクロロメタン（６×１０ｍｌ）、エーテル（２×１０ｍｌ）で洗浄し、
真空乾燥させて黄色の固体としてスルホンアミド樹脂６を得た（０．９６ｇ、１
００％）；カイザーテストは陰性であった；ブロモフェノールブルーテストは陰性であった；樹脂充填は定量的Ｆｍｏｃ基開裂から推定して９９％。

【０２３９】 化合物７の製造

【化４６】

【０２４０】 樹脂（６）（０．９３ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中の２０％ピペリジン溶液（２×５ｍｌ）で１０分間処理した。 溶媒を濾去し、樹脂をＤＭＦ（６×５
ｍｌ）、ジクロロメタン（６×５ｍｌ）、エーテル（２×４ｍｌ）で洗浄した。
この樹脂をＤＭＦ（５ｍｌ）とジクロロメタン（５ｍｌ）に懸濁し、Ｒｉｎｋ酸リンカー（０．９２ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）、次いで、ＰｙＢＯＰ（０．８４ｇ
、１．６２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（０．２２ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を加えた。 ４分後、ヒューニッヒ塩基（０．４２ｇ、３．２４ｍｍｏｌ）を加えた。 反応物を窒素とともに３時間攪拌し、次いで、樹脂をジクロロメタン（６×５ｍｌ
）、ＤＭＦ（６×５ｍｌ）、ジクロロメタン（６×５ｍｌ）、エーテル（２×３
ｍｌ）で洗浄し、真空乾燥させて黄色の固体としてスルホンアミド樹脂７を得た（１．０２ｇ、９８％）；カイザーテストは陰性であった；ブロモフェノールブルーテストは陰性であった。 樹脂充填は定量的Ｆｍｏｃ基開裂から推定して９４
％。

【０２４１】 化合物９ａ〜ｄおよび１０ａ〜ｄの製造

【化４７】

【０２４２】 樹脂（７）（７０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中の２０％ピペリジン溶液（２×１ｍｌ）で１０分間処理した。 溶媒を濾去し、樹脂をＤＭＦ（６×１ｍ
ｌ）、ジクロロメタン（６×１ｍｌ）、エーテル（２×１ｍｌ）で洗浄した。 この樹脂をＤＭＦ（０．５ｍｌ）とジクロロメタン（０．５ｍｌ）に懸濁し、好適な酸（８ａ〜ｄ）（０．１５ｍｍｏｌ）、次いで、ＰｙＢＯＰ（０．０８ｇ、０
． １５ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（０．０２ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。
４分後、ヒューニッヒ塩基（０．０４ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加えた。 反応物を窒素とともに３時間攪拌し、次いで、樹脂をジクロロメタン（６×１ｍｌ）、
ＤＭＦ（６×１ｍｌ）、ジクロロメタン（６×１ｍｌ）、エーテル（２×１ｍｌ
）で洗浄し、真空乾燥させて黄色の固体としてスルホンアミド樹脂９ａ〜ｄを得た；４つのもの全てにおいてカイザーテストおよびブロモフェノールブルーテストは陰性であった。

【０２４３】 ４つの樹脂それぞれの少量のサンプルをアセトニトリル中のＤＢＵ／メルカプトエタノールで処理して１０ａ〜ｄを得た。 これらを低解像度質量スペクトルおよびＲＰ ＨＰＬＣ（方法Ａ）により分析した： 10a(R'=Z-Gly-) MS(エレクトロスプレー+ve) m/z 961および963 (MH) ^＋ ; HPLC,
R _ｔ 4.01分. 10b(R'=Boc-Abu-) MS(エレクトロスプレー+ve) m/z 955および957 (MH) ^＋ ; HPLC
, R _ｔ 4.09分. 10c(R'=1-ナフチルアセトイル-) MS(エレクトロスプレー+ve) m/z 938および939
(MH) ^＋ ; HPLC, R _ｔ 4.28分. 10d(R'=Boc-Phe-) MS(エレクトロスプレー+ve) m/z 1017および1019 (MH) ^＋ ; HP
LC, R _ｔ 4.42分.

【０２４４】 化合物１１ａ〜ｄおよび１２ａ〜ｄの製造

【化４８】

【０２４５】 樹脂（９ａ〜ｄ）（約７０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中の１０％ヒドラジン溶液（３×１ｍｌ）で３０分間処理した。 溶媒を濾去し、それぞれの樹脂をＤＭＦ（６×１ｍｌ）、ジクロロメタン（６×１ｍｌ）、エーテル（２×１ｍ
ｌ）で洗浄した。 次いで、それぞれの樹脂にジクロロメタン（１ｍｌ）中の塩化ダンシル（４０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１５ｍｇ、
０．１５ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。 ４時間の反応時間の後、樹脂をジクロロメタン（６×１ｍｌ）、ＤＭＦ（６×１ｍｌ）、ジクロロメタン（６×１ｍｌ）
、エーテル（２×１ｍｌ）で洗浄し、真空乾燥させて黄色の固体としてスルホンアミド樹脂１１ａ〜ｄを得た；４つのもの全てにおいてカイザーテストおよびブロモフェノールブルーテストは陽性であった。

【０２４６】 ４つの樹脂それぞれの少量のサンプルをアセトニトリル中のＤＢＵ／メルカプトエタノールで処理して１２ａ〜ｄを得た。 これらを低解像度質量スペクトルおよびＲＰ ＨＰＬＣ（方法Ｂ）により分析した： 12a(R'=Z-Gly-) MS(エレクトロスプレー+ve) m/z 1030および1032 (MH) ^＋ ; HPLC
, R _ｔ 4.77分. 12b(R'=Boc-Abu-) MS(エレクトロスプレー+ve) m/z 1024および1026 (MH) ^＋ ; HP
LC, R _ｔ 4.94分. 12c(R'=1-ナフチルアセトイル-) MS(エレクトロスプレー+ve) m/z 1007および10
09 (MH) ^＋ ; HPLC, R _ｔ 5.47分. 12d(R'=Boc-Phe-) MS(エレクトロスプレー+ve) m/z 1086および1089 (MH) ^＋ ; HP
LC, R _ｔ 5.82分.

【０２４７】 構築物にＵＶ発色団および質量分析増感基を含めることで、ＵＶ検出および質量分析法を併用したＨＰＬＣの簡易かつ十分に確立された手順により固相合成生成物の迅速かつ簡易な定性および定量分析が可能になることが上記の実施例からわかる。

【０２４８】 上記実施例は単に本発明を例示することを意図しており、請求の範囲において限定されるものではない。 本発明の原理から逸脱することなく、実施例において例示される構築物に数多くの置換および改変が可能であり、かかる総ての改変および置換は本願に含めるものとされることは容易に理解できよう。

【図面の簡単な説明】

【図１】 実施例１に記載の構築物の光分解生成物の質量スペクトルを示す。

【図２】 実施例１に記載の構築物におけるチオピリミジンリンカー基の開裂により生成されたフラグメントの質量スペクトルを示す。

【図３】 実施例４に記載の構築物の光分解生成物の質量スペクトルを示す。

【図４】 実施例４に記載の構築物の光分解生成物の質量スペクトルを示す。

【図５】 実施例４に記載の構築物の光分解生成物の質量スペクトルを示す。

【図６】 実施例４に記載の構築物の光分解生成物の質量スペクトルを示す。

【図７】 実施例４に記載の構築物の光分解生成物の質量スペクトルを示す。

【図８】 実施例４に記載の構築物の光分解生成物の質量スペクトルを示す。

【図９】 実施例７に記載の構築物を含む、「Ａｌｌｏｃ」−リンカーのパラジウム（０
）開裂によって生成された分析フラグメントの質量スペクトルを示す。

【図１０】 実施例７に記載の構築物を含む、「Ａｌｌｏｃ」−リンカーのパラジウム（０
）開裂によって生成された分析フラグメントの質量スペクトルを示す。

【図１１】 実施例６に記載の組合せライブラリーに属するもののうち４つに関する第１または第２の開裂部位のいずれかでの開裂の後、基質または基質を含む分析フラグメントのいずれかの質量スペクトル比較を示す。

【図１２】 実施例６に記載の組合せライブラリーに属するもののうち４つに関する第１または第２の開裂部位のいずれかでの開裂の後、基質または基質を含む分析フラグメントのいずれかの質量スペクトル比較を示す。

【図１３】 実施例６に記載の組合せライブラリーに属するもののうち４つに関する第１または第２の開裂部位のいずれかでの開裂の後、基質または基質を含む分析フラグメントのいずれかの質量スペクトル比較を示す。

【図１４】 実施例６に記載の組合せライブラリーに属するもののうち４つに関する第１または第２の開裂部位のいずれかでの開裂の後、基質または基質を含む分析フラグメントのいずれかの質量スペクトル比較を示す。

【図１５】 実施例６に記載の組合せライブラリーに属するもののうち４つに関する第１または第２の開裂部位のいずれかでの開裂の後、基質または基質を含む分析フラグメントのいずれかの質量スペクトル比較を示す。

【図１６】 実施例６に記載の組合せライブラリーに属するもののうち４つに関する第１または第２の開裂部位のいずれかでの開裂の後、基質または基質を含む分析フラグメントのいずれかの質量スペクトル比較を示す。

【図１７】 実施例６に記載の組合せライブラリーに属するもののうち４つに関する第１または第２の開裂部位のいずれかでの開裂の後、基質または基質を含む分析フラグメントのいずれかの質量スペクトル比較を示す。

【図１８】 実施例６に記載の組合せライブラリーに属するもののうち４つに関する第１または第２の開裂部位のいずれかでの開裂の後、基質または基質を含む分析フラグメントのいずれかの質量スペクトル比較を示す。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年１１月３０日（２０００．１１．３０）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl. ⁷識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｃ 311/18 Ｃ０７Ｃ 311/18 Ｃ０７Ｄ 239/42 Ｃ０７Ｄ 239/42 Ｚ Ｇ０１Ｎ 27/62 Ｇ０１Ｎ 27/62 Ｖ 30/48 30/48 Ｄ 33/531 33/531 Ｂ // Ｃ０７Ｍ 5:00 Ｃ０７Ｍ 5:00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (71)出願人 Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ Ｈｏｕｓ ｅ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ Ａｖｅｎｕｅ Ｇ ｒｅｅｎｆｏｒｄ，Ｍｉｄｄｌｅｓｅｘ ＵＢ６ ０ＮＮ，Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉｔａ ｉｎ (72)発明者 シルビー、ジェハンヌ イタリー国ベローナ、ビア、アレッサンド ロ、フレミング、２、グラクソ、ウェルカ ム、ソチエタ、ペル、アチオニ内 (72)発明者 コリーヌ、ケイ イギリス国ケンブリッジ、レンズフィール ド、ロード、ザ、ユニバーシティ、オブ、 ケンブリッジ、ユニバーシティ、ケミスト リー、ラボラトリーズ、グラクソ、ウェル カム、ケミストリー、ラボラトリー内 (72)発明者 スティーブン カール、マッキューン イギリス国ハートフォードシャー、スティ ーブネージ、ガネルズ、ウッド、ロード、 グラクソ、ウェルカム、ピーエルシー内 (72)発明者 ピーター、ジョン、マレー イギリス国バーミンガム、アストン、サイ エンス、パーク、ホルト、コート、サウ ス、10、アストン、モレキュルズ、リミテ ッド、オーエスアイ、ファーマスーティカ ルズ内 (72)発明者 アルフレッド、パイオ イタリー国ベローナ、ビア、アレッサンド ロ、フレミング、２、グラクソ、ウェルカ ム、ソチエタ、ペル、アチオニ内 (72)発明者 ジャン、ジョセフ、サイシンスキー イギリス国ケンブリッジ、レンズフィール ド、ロード、ザ、ユニバーシティ、オブ、 ケンブリッジ、ユニバーシティ、ケミスト リー、ラボラトリーズ、グラクソ、ウェル カム、ケミストリー、ラボラトリー内 (72)発明者 スティーブン、ポール、ワトソン イギリス国ハートフォードシャー、スティ ーブネージ、ガネルズ、ウッド、ロード、 グラクソ、ウェルカム、ピーエルシー内 (72)発明者 ジェフリー、マーティン、ウィリアムズ イギリス国ケンブリッジ、レンズフィール ド、ロード、ザ、ユニバーシティ、オブ、 ケンブリッジ、グラクソ、ウェルカム、ケ ミストリー、ラボラトリー内 (72)発明者 アレッシオ、ザラメラ イタリー国ベローナ、ビア、アレッサンド ロ、フレミング、２、グラクソ、ウェルカ ム、ソチエタ、ペル、アチオニ内 Ｆターム(参考） 4C084 AA17 AA27 MA01 4H006 AA01 AA03 AB80 AB84 BJ50 BP30 BR70 BS10 RA10