已经有报告指出在工业化国家中高血压(high blood pressure)是对于心 脏病发作非常重要的一个危险因素，高血压通常是使用强效抑制血管紧张素转 变酶(ACE)的药物予以治疗。早期预防高血压发展成为疾病，可以选择药物加 以治疗，现在大量由食物取得的生物活性化合物也被考虑使用，用以促进一般 人的健康状况。
血压的调节中，血管紧张素I-转变酶(ACE)扮演一重要角色，ACE的作用 可以提升血压。在肾激素-血管紧张素系统，ACE将血管紧张素-I转换为血管 紧张素-II，在激肽释放酶-激肽(Kallikrein-kinin)系统中，ACE不活化缓激 肽(bradykinin)，有助于血管舒张作用，因此ACE抑制剂可用于降低血管压力， 现在已有多种ACE抑制剂存在。第一个所报告的ACE抑制剂是在蛇毒中发现的 天然肽，自此以后，有许多其它的ACE抑制剂也陆续被发现。
已知经由乳酸菌(LAB)发酵的牛奶可以产生抗高血压作用，这是由于乳酸 菌的水解作用使得牛奶中的酪蛋白释放出肽，此肽作用如同ACE抑制剂。
Calpis Food Industry公司的发表论文[Yamamoto等人(1994，J.Dairy Sci.，77：917-922)]所述，利用纤维二糖乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)CP790品种发酵牛奶，以产生抗高血压作用，是由于乳酸菌的纤维 二糖乳酸杆菌蛋白分解作用使得牛奶中的酪蛋白释放出肽，此肽作用如同ACE 抑制剂。这种肽的抗高血压作用已经测试于自发性高血压大鼠。利用没有蛋白 分解活性的纤维二糖乳酸杆菌等基因的突变体发酵的牛奶，不能显示出任何抗 高血压作用。
论文[Gobbetti M.等人(2000，Appl Environ Microbiol，66(9)， 3898-3904.)]所述，是使用Lactococcus lactis亚种cremoris FT4或是使用 Lactobacillus delbrueckii亚种bulgaricus SS1来发酵牛奶，以产生包含有 ACE抑制肽的牛奶。
在专利案EP821968(Calpis Food Industry)中所述，是使用寄存编号为 FERM BP-4835的纤维二糖乳酸杆菌品种发酵产生包含有ACE抑制肽的发酵牛 奶。
于EP1016709(Calpis Food Industry)中所述，是使用寄存编号为FERM BP-6060的纤维二糖乳酸杆菌品种发酵产生包含有ACE抑制肽的发酵牛奶。
于WO01/32836(Valio Ltd)中所述，经由使用寄存编号为DSM13137的纤 维二糖乳酸杆菌品种发酵产生包含有ACE抑制肽的发酵牛奶。
因为乳酸菌(LAB)是多种氨基酸营养缺陷型菌株，LAB依赖于复杂的蛋白质 水解体系，以便从牛奶中的酪蛋白获得必要的氨基酸。使用LAB将酪蛋白水解 成氨基酸是开始于藉由细胞壁蛋白酶水解酪蛋白成为寡肽，然后藉由寡肽传输 系统将寡肽传输至菌胞内，一但寡肽进入到细胞内，细胞内的肽酶会将其水解 成为自由氨基酸。
威斯康新大学(University of Wisconsin)与犹它州立大学(Utah State University)的论文[Pederson等(1999，J.of Bacteriology，181： 4592-4597)]中描述了来自纤维二糖乳酸杆菌CNRZ32品种的prtH 204kDa细 胞壁蛋白酶的DNA和氨基酸序列，但此论文没有叙述也不建议使用这一品种来 制造具有抗高血压特性的肽。
Calpis Food Industry公司的论文[Yamamoto等(2000)，Biosci. Biotechnol.Biochem.，64(6)：1217-1222]中描述了来自纤维二糖乳酸杆菌 CP790品种的prtY 45kDa细胞壁蛋白酶的DNA和氨基酸序列，CP790品种不 包括prtH 204kDa细胞壁蛋白酶[参照Yamamoto等(2000)的“讨论”部分]。 CP790品种是被使用于Calpis Food Industry的商业产品如“材料和方法”部 分所记载，“CP790，是从Calpis培养菌原分离出来的，是日本发酵牛奶产品”。
发明概述
本发明所要解决的问题是提供一种方法，以获得具有增进特性的乳酸菌 (LAB)，特别是有关制造具有抗高血压特性的肽。
本发明的解决方案是基于本发明人已确定包含特定性质细胞壁蛋白酶的 乳酸菌具有这样的特性。在此所指的细胞壁蛋白酶称为prtH200。本文实施例 5中是说明具有prtH200细胞壁蛋白酶的乳酸菌于体内的情形，在此所述是其 具有制造增进抗高血压特性的肽的功能。
在此所述的prtH200蛋白酶与威斯康新大学与犹它州立大学的论文 [Pederson等(1999)](如上)所述的来自纤维二糖乳酸杆菌CNRZ32品种的一 prtH 204kDa细胞壁蛋白酶相符合，但在此论文中没有叙述也无建议使用 CNRZ32品种来制造具有抗高血压性能的肽。
依据本发明人的了解，没有任何参考文件明白叙述包含有细胞壁蛋白酶的 乳酸菌，该细胞壁蛋白酶对应于本发明例所述的prtH200蛋白酶。
实施例3是实验性说明使用寄存编号DSM 13137的纤维二糖乳酸杆菌 品种如WO01/32836(Valio Ltd)所述，不包含prtH200细胞壁蛋白酶基因 序列，其是由在此所述的特殊prtH200的PCR引物来识别，如Calpis Food Industry公司的论文[Yamamoto等(2000)]所叙述(如上)，在最新的日本发 酵牛奶产品Calpis Food Industry包含一不具有prtH200细胞壁蛋白酶的 品种(CP790)。
存在于乳酸菌中的基因序列编码成prtH200蛋白酶已被使用适当设计的聚 合酶链反应(Polymerase chain reaction，PCR)引物(primer)的PCR扩增方法 证实。当熟悉本领域的技术人员具有适当设计的PCR引物，对他而言，使用其 一般知识来选择一特定适当的PCR扩增法去验证此基因序列是否存在于乳酸菌 中是相当容易的。
所以，熟悉本领域的技术人员可以筛选(screen)出乳酸菌的数量，验明包 含有prtH200基因序列的乳酸菌，并因此得到具有改良工业相关特性的特选乳 酸菌。
因此，本发明的第一个方面是有关一种获取乳酸菌的方法，包含：
(i)研究任一种乳酸菌，此乳酸菌是包含有一基因序列编码成一细胞壁蛋 白酶(称为prtH200)，其中此基因序列是使用PCR引物组的乳酸菌的基因组DNA 的PGR扩增方法来进行识别鉴定，所述PCR引物选自下列组成的群组[有义序 列(sense sequence)称为S；反义序列(antisense sequence)称为A]：
PrtH200：(a)：(S)：5’CGATGATAATCCTAGCGAGC 3’，
              (A)：5’TGGCAGAACCTGTGCCTA 3’；
         (b)：(S)：5’GCCAAGACGCCTCTGGTA 3’，
              (A)：5’TAGGTATAGTTTCCATCAGGA 3’；和
         (c)：(S)：5’AARGTWCCWTAYGGYYWYAAYTA 3’，
              (A)：5’GCCATDSWDGTRCCDSWCATDTK 3’；以及
(ii)假如该乳酸菌符合步骤(i)标准，则可获得该乳酸菌；或
(iii)假如该乳酸菌不符合步骤(i)标准，则重复步骤(i)研究其它乳酸菌，
本实施例中的乳酸菌为纤维二糖乳酸杆菌CNRZ32品种。
被称为“纤维二糖乳酸杆菌CNRZ32品种”的品种描述于威斯康新大学与 犹它州立大学的论文[Pederson等(1999)](如上)。
纤维二糖乳酸杆菌DSM 14998的prtH200的DNA及氨基酸序列如SEQ ID NO 1及SEQ ID NO 2所示。
基于prtH200序列及其同源基因的适当PCR引物，可以为常规验证，以验 证位于SEQ ID NO 1的prtH200基因及其同源基因，如下所述。
因此，本发明的第二个方面是有关一种获得乳酸菌的方法，包含：
(i)研究任一种乳酸菌，此乳酸菌包含一基因序列编码成一细胞壁蛋白酶 (称为prtH200)，其中此基因序列定义为：prtH200的基因序列为一去氧核糖 核酸(DNA)序列编码成一酶释出细胞壁蛋白酶活性，此DNA序列选自由下列组 成的群组：
(a)SEQ ID NO 1的1-5550的位置所示的DNA序列；
(b)一DNA序列，包含一至少75碱基对(bp)的片段(fragment)，其 与(a)所定义的DNA序列的对应片段至少有50％的同一性；
(c)一DNA序列，可编码一多肽，包含至少200氨基酸(aa)的片段， 其与SEQ ID NO 2的1-1849位置所示的多肽序列的对应片段至少有30％ 的同一性；
(d)一DNA序列，与包含SEQ ID NO 1的1-5550位置所示的DNA序 列的双股DNA探针在低严格性下进行杂交(hybridize)；以及
(e)一DNA序列，其为(a)、(b)、(c)或(d)中说明的DNA序列片段； 以及
(ii)假如该乳酸菌符合步骤(i)标准，则可获得该乳酸菌；或
(iii)假如该乳酸菌不符合步骤(i)标准，则重复步骤(i)研究其它乳酸菌，
本实施例中的乳酸菌为纤维二糖乳酸杆菌CNRZ32品种。
如上所述，包含有prtH200蛋白酶的乳酸菌的一优点为，可以增加有关制 造具有抗高血压特性的肽的特性。
因此，本发明的第三个方面是有关制备具有抗高血压特性的肽的方法，此 方法包含发酵食材，其包含动物性牛奶蛋白或植物性蛋白，经由乳酸菌作用使 得发酵食材获得具有抗高血压特性的肽，其特征在于该乳酸菌是包含有一基因 序列编码成一细胞壁蛋白酶(称为prtH200)，且此基因序列是使用PCR引物的 乳酸菌的基因组DNA的PCR扩增方法来进行识别鉴定，此PCR引物选自[有义 序列(sense sequence)称为S；反义序列(antisense sequence)称为A]由下列 组成的群组：
PrtH200：(a)：(S)：5’CGATGATAATCCTAGCGAGC3’，
              (A)：5’TGGCAGAACCTGTGCCTA 3’；
         (b)：(S)：5’GCCAAGACGCCTCTGGTA 3’，
              (A)：5’TAGGTATAGTTTCCATCAGGA 3’；和
         (c)：(S)：5’AARGTWCCWTAYGGYYWYAAYTA 3’，
              (A)：5’GCCATDSWDGTRCCDSWCATDTK 3’。
第四个方面，本发明是有关一种制备具有抗高血压特性的肽的方法，此方 法是利用乳酸菌发酵一食材，其包含动物性牛奶蛋白或植物性蛋白，以得到一 发酵食材，其包含具有抗高血压特性的肽，其特征在于此乳酸菌包含有一基因 序列编码成一细胞壁蛋白酶(称为prtH200)，其中此基因序列是定义为prtH200 的基因序列为一去氧核糖核酸(DNA)序列编码成一酶释出细胞壁蛋白酶活性， 此DNA序列选自由下列组成的群组：
(a)SEQ ID NO 1的1-5550的位置所示的DNA序列；
(b)一DNA序列，包含一至少75碱基对(bp)的片段(fragment)，其 与(a)所定义的DNA序列的对应片段至少有50％的同一性；
(c)一DNA序列，可编码一多肽，包含至少200氨基酸(aa)的片段， 其与SEQ ID NO 2的1-1849位置所示的多肽序列的对应片段至少有30 ％的同一性；
(d)一DNA序列，与包含SEQ ID NO 1的1-5550位置所示的DNA序 列的双股DNA探针在低严格性下进行杂交(hybridize)；以及
(e)一DNA序列，其为(a)、(b)、(c)或(d)中说明的DNA序列片段。
如上所述，依据本发明人(群)所拥有的知识，没有在任何参考文件有明白 叙述如本发明第三、四方面的工艺中使用乳酸菌的作用。然而，可能需要更进 一步实验验证乳酸菌，在本发明申请日前所述的应用，已使用在根据第三及第 四方面的工艺中，但其并无包含有于此叙述的prtH200基因序列。在这类高血 压案例中特定的乳酸菌将无法达到本发明的第三及第四方面的主张目标，换而 言之，第三和第四方面将包含一声明，即可视为“例外的可能特定乳酸菌种”。
本发明的第五个方面是有关一种制备肽的工艺，包含：
(i)获得一乳酸菌，其是利用根据本发明第一与第二方面取得乳酸菌的方法 取得；以及
(ii)发酵一材料，其包含具有在(i)中获得的乳酸菌的蛋白质，以获得含有 肽的发酵材料。
本发明的第五个方面的一个实施方案为制备具有抗高血压特性的肽的工 艺，包含：
(i)获得一乳酸菌，其是利用根据本发明第一或/及第二方面取得乳酸菌的 方法取得；以及
(ii)发酵一食材，其包含动物性牛奶蛋白或植物性白，此食材具有在(i) 中获得的乳酸菌，以获得含有抗高血压特性的肽的发酵食材。
如上放弃讨论的涉及本发明第三与第四方面的步骤，是与第五方面及其具 体实施方案间并无重大关系。第五方面包含一对于现有所讨论的prtH200蛋白 酶的乳酸菌活性研究的步骤。对于现有的背景而言，这是一新的步骤。
于此所生产的肽，可以用来制造具有抗高血压特性的发酵食品。
因此，本发明的第六个方面是有关一种制备含有具有抗高血压特性的肽的 发酵食品的工艺，此工艺包含下列几个步骤：
(i)根据在此描述的制备具有抗高血压特性的肽的方法来制备一发酵食材；
(ii)以适当方式包装此发酵食材，获得一功能性食品。
有关“包装”应该可以被广泛的了解，其是指当一食材被发酵而得到一发 酵食材，此发酵食材可以被包装起来以提供给消费者。它可以被包装在一瓶子 或一利乐包(tetra pack)内等，最好是在包装上或相对应的销售工具上能够指 明此功能性食品具有抗高血压特性。
第六方面的工艺说明了以上所述的工艺的一个优点。使用所述含有 prtH200蛋白酶的乳酸菌直接提供作为发酵作用，产生大量有用具有良好的抗 高血压特性的肽。因此，就不需要更进一步的从发酵食材中纯化或再浓缩出肽。 此发酵食材可以直接包装，并作为功能性食品直接提供到市场。
在本发明所述的第七个方面是有关具有抗高血压特性的肽，其是由在此描 述的制备具有高血压特性的肽的工艺来取得。
经由所述的包含有prtH200蛋白酶的乳酸菌发酵所产生的肽，不同于不包 含有这种蛋白酶的乳酸菌发酵所产生的肽，这可验证包含有prtH200蛋白酶的 乳酸菌发酵所产生的肽具有增加抗高血压效力的功能性。
于本发明所述的第八个方面是有关一种包含具有抗高血压的肽的功能性 食品，其是由所述的制造功能性食品的工艺所取得。
于本发明所述的第九个方面是有关一种使用第七方面的具有抗高血压特 性的肽，用以制造治疗高血压的药剂。
于本发明所述的第十个方面是有关一种使用第八方面的含有具有抗高血 压特性的肽的功能性食品，用以制造治疗高血压的药剂。
定义：
在讨论本发明的具体实施方式之前提供有关本发明主要方面的各特殊术 语的定义。
术语“乳酸菌”的定义是指革兰氏阳性菌、无细菌芽胞增殖菌(non-sporing bacteria)的组群，其能使糖发酵而产生出乳酸。
根据惯用的定义，术语“基因”的定义为遗传的基本物理与功能单位。一 种基因为在特定染色体的特定位置上的整齐序列的核甘酸(例如DNA或RNA)， 以编码成一特定功能的产品(例如蛋白质或RNA分子)。
“退化引物的命名(nomenclature of degenerated primers)”是根据现 有技术的标准命名法，Y＝C或T；R＝A或G；M＝A或C；K＝G或T；S＝G或C；W＝A 或T；H＝A或C或T；B＝G或T或C；V＝G或C或A；D＝G或A或T；N＝G、A、C 或T。
术语“片段”与DNA/氨基酸序列有关，是包含表示一连续的部分序列的片 段。例如，在具有600个氨基酸的氨基酸序列的75至300位置。
术语“对应片段(corresponding fragment)”与比较二序列的片段的对应 长度有关，优选的，此二片段比较后的长度差异少于50％；换而言之，假如一 片段为100bp，另一片段则最好少于150bp。更优选的，此二片段比较后的 长度差异小于25％，以及最优选的，此二片段比较后的长度差异小于5％。
本发明的具体实施方式藉由实施例描述如下。
附图说明
图1：纤维二糖乳酸杆菌CHCC5951品种(寄存编号DSM 14998)的脉冲式凝 胶电泳(PFGE)分析鉴定。
发明详述
prtH200细胞壁蛋白酶
存在于乳酸菌中的细胞壁蛋白酶的活性已被证实，一合适的策略是以在基 因编码成细胞壁蛋白酶的分解中利用一致命突变(lethal mutation)构建一乳 酸菌，然后此构建细菌的蛋白质水解活性(以下述适当检测)可与相同的野生型 细菌(wild type bacterium)进行比较。实验证明具致命突变的乳酸菌与野生 型细菌比较蛋白质水解活性减少，且此基因编码成细胞壁蛋白酶被分解为基因 编码成一活性乳酸菌细胞壁蛋白酶。
熟悉本领域的技术人员知道如何利用适当的致命突变来构建一乳酸菌，其 制造方式请参考如Pederson等人(1999)及Yamamoto等人(1994)的论文。
在本发明的申请日，国家生物技术信息中心(NCBI)在其网站 ( http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)上提供了进行一标准BLAST计算机序列同源 性搜寻的可能性。
SEQ ID NO 1及SEQ ID NO 2所示的纤维二糖乳酸杆菌DSM 14998的prtH200 的DNA及氨基酸序列已经公布在GeneBank数据库中，登记号为AF133727，且 其数据库序列标识(database sequence identification)为 gi/5758038/gb/AF133727.1/AF133727。
标准蛋白质-蛋白质BLAST[blastp]搜寻是使用SEQ ID NO 2的1-1849 位置所示的prtH200氨基酸序列作为参考序列，其中，搜寻结果如下所示(斜 体字代表数据库序列标识，此报告明白确认已发表的序列，且熟悉本领域的技 术人员知道如何藉此得到这些序列)：
gi/129346/sp/P15293/P2P_LACLC：PII型蛋白酶前驱物(Lactocepin)(细 胞壁-结合丝蛋白酶)。
有机体：Lactococcus lactis subsp.cremoris.
同一性：一1600氨基酸片段与SEQ ID NO 2的prtH200氨基酸序列的对 应片段有50％的同一性。
gi/149582/gb/AAA25248.1/：蛋白酶。
有机体：Lactobacillus paracasei.
同一性：一1632氨基酸片段与SEQ ID NO 2的prtH200氨基酸序列的对 应片段有49％的同一性。
gi/1381114/gb/AAC41529.1/：(L48487)蛋白酶前驱物。
有机体：Lactobacillus delbrueckii.
同一性：一1682氨基酸片段与SEQ ID NO 2的prtH200氨基酸序列的对 应片段有32％的同一性。
gi/18568398/gb/AAL76069.1/：(AF468027)细胞膜蛋白酶。
有机体：Lactobacillus pentosus.
同一性：一415氨基酸片段与SEQ ID NO 2的prtH200氨基酸序列的对应 片段有63％的同一性。
Gi/9963932/gb/AAG09771.1/AF243528_1：(AF243528)细胞膜蛋白酶。
有机体：Streptococcus thermophilus.
同一性：一781氨基酸片段与SEQ ID NO 2的prtH200氨基酸序列的对应 片段有30％的同一性。
gi/482386/pir/A44833：PII型蛋白酶前驱物(EC 3.4.21.96)。
有机体：Lactococcus lactis.
同一性：一264氨基酸片段与SEQ ID NO 2的prtH200氨基酸序列的对应 片段有61％的同一性。
这些特定的序列全部代表一DNA序列，其编码成一多肽，释出细胞壁蛋白 酶活性，包含至少200氨基酸(amino acids，aa)片段，其与SEQ ID NO 2的 1-1849位置所示的多肽序列的对应片段至少有30％的同一性。
标准核甘酸-核甘酸BLAST[blastn]搜寻是使用SEQ ID NO 1的1-5550 位置所示的prtH200 DNA序列作为参考序列，其中，搜寻结果如下所示：
gi/149580/gb/M83946.1/LBAMPRO.蛋白酶(prtP)基因。
有机体：Lactobacillus paracasei.
同一性：一102bp片段与SEQ ID NO 1的prtH200 DNA序列的对应片段 有84％的同一性。
gi/47197/emb/X14130.1/SLPRT763.质体pLP763 prt基因，细胞壁-结合 丝蛋白酶。
有机体：Streptococcus lactis
同一性：一81bp片段与SEQ ID NO 1的prtH200 DNA序列的对应片段有 86％的同一性。
gi/472834/gb/M24767.1/STRWGPROT.Wg2蛋白酶基因。
有机体：S.Cremoris
同一性：一81bp片段与SEQ ID NO 1的prtH200 DNA序列的对应片段有 86％的同一性。
gi/149476/gb/J04962.1/LACPRASE.PIII型蛋白酶(prtP)及成熟蛋白质。
有机体：Lactococcus lactis.
同一性：一81bp片段与SEQ ID NO 1的prtH200 DNA序列的对应片段有 86％的同一性。
gi/18568397/gb/AF468027.1/.细胞膜蛋白酶(prtP)基因。
有机体：Lactobacillus pentosus
同一性：一102bp片段与SEQ ID NO 1的prtH200 DNA序列的对应片段 有83％的同一性。
这些特定的序列全部代表一DNA序列，包含至少75个碱基对(bp)片段， 其与SEQ ID NO 1的1-5550位置所示的DNA序列的对应片段至少有50％的同 一性。
其它“指纹”基因序列(orfF3，orfF4及orfF1)
在此讨论的prtH200基因序列可以看作乳酸菌(LAB)的“指纹”。
orfF3：
优选的，除了prtH200基因序列之外，乳酸菌还包括一含有称为orfF3开 放读码框(open reading frame)的基因，此基因可视为一附加的指纹。
纤维二糖乳酸杆菌DSM 14998的orfF3的DNA及氨基酸序列请参见SEQ ID NO 3及SEQ ID NO 4所示。实施例3的研究显示基于适当的引物来确认orfF3。
因此，在一优选实施例中，在此段描述的乳酸菌包括prtH200基因和一基 因序列(称为orfF3)编码成一开放读码框，其中此基因序列是使用PCR引物的 乳酸菌的基因组PCR扩增方法来进行识别鉴定，此PCR引物选自下列所组成的 群组[有义序列(sense sequence)称为S；反义序列(antisense sequence)称为 A]：
orfF3：(a)：(S)：5’CGAAGGCGATAAGTCAAACTTTGATAATGC 3’，
            (A)：5’CCCGGTTCTGTAAGATAATTTGGATCG 3’；和
       (b)：(S)：5’ASTCWRRYTTYGATRATGCW 3’，
            (A)：5’BHKYAMSAWARTTTGGATCR 3’。
上述合适的PCR引物可以基于在此揭露的序列进行识别确认。
因此，在一优选实施例中，在此段描述的乳酸菌包括prtH200基因和一基 因序列编码成一开放读码框(称为orfF3)，其中定义为orfF3的DNA序列为一 去氧核糖核酸(DNA)序列编码成一开放读码框，且此DNA序列选自由下列组成 的群组：
(a)SEQ ID NO 3的1-2679的位置所示的DNA序列；
(b)一DNA序列，包含一至少75碱基对(bp)的片段(fragment)，其 与(a)所定义的DNA序列的对应片段至少有40％的同一性；
(c)一DNA序列，编码一多肽，包含至少200氨基酸(aa)的片段， 其与SEQ ID NO 4的1-893位置所示的多肽序列的对应片段至少有30％ 的同一性；
(d)一DNA序列，与包含SEQ ID NO 3的1-2679位置所示的DNA序 列的双股DNA探针在低严格性下进行杂交(hybridize)；以及
(e)一DNA序列，其为(a)、(b)、(c)或(d)中说明的DNA序列片段。
术语“开放读码框(open reading frame)”表示为一DNA的延伸，其包含 将足够长的氨基酸编码成一蛋白质的转译过程的开始讯号以及转译的终止讯 号，并因此而验证一蛋白质编码基因的存在。
在本发明的申请日，一标准蛋白质-蛋白质BLAST[blastp]搜寻是使用SEQ ID NO 4的1-893位置所示的演绎orfF3氨基酸序列作为参考序列，且其相对 限制的最终结果与已发表的同源序列有关。
然而，无须受限于理论，在此描述的orfF3基因编码成一细胞壁蛋白酶为 可信的，因此，在一优选实施例中描述的orfF3基因可编码成一细胞壁蛋白酶。
orfF4：
优选的，除了prtH200基因序列之外，所述乳酸菌还包括一含有开放读码 框的基因，在此称为orfF4。
纤维二糖乳酸杆菌DSM 14998的orfF4的DNA及氨基酸序列请参见SEQ ID NO 5及SEQ ID NO 6所示。实施例3显示了基于适当的引物来确认orfF4。
因此，在一优选实施例中，所描述的乳酸菌包括此prtH200基因和一基因 序列(称为orfF4)编码成一开放读码框，其中此基因序列是使用PCR引物的乳 酸菌的基因组PCR扩增方法来进行识别鉴定，此PCR引物选自由下列组成的群 组[有义序列(sense sequence)称为S；反义序列(antisense sequence)称为 A]：
orfF4：(a)：(S)：5’GGTGTTGCTCCTGAAGC 3’
            (A)：5’ACTCTAGCACCAGCTAATTGAACATCATG 3’。
上述合适的PCR引物可以基于在此揭露的序列进行识别确认。
因此，在一优选实施例中，在此描述的乳酸菌包括prtH200基因和一基因 序列编码成一开放读码框(称为orfF4)，其中定义为orfF4的基因序列是DNA 序列编码成一开放读码框，且此DNA序列选自由下列组成的群组：
(a)SEQ ID NO 5的1-4881的位置所示的DNA序列；
(b)一DNA序列，包含一至少75碱基对(bp)的片段，其与(a)所定 义的DNA序列的对应片段至少有40％的同一性；
(c)一DNA序列，编码一多肽，包含至少200氨基酸(aa)的片段， 其与SEQ ID NO 6所示的1-1627位置的多肽序列的对应片段至少有30％ 的同一性；
(d)一DNA序列，与包含SEQ ID NO 5的1-4881位置所示的DNA序 列的双股DNA探针在低严格性下进行杂交；以及
(e)一DNA序列，其为(a)、(b)、(c)或(d)中说明的DNA序列片段。
在本发明的申请日，一标准蛋白质-蛋白质BLAST[blastp]搜寻是使用SEQ ID NO 6的1-1627位置所示的演绎orfF4氨基酸序列作为参考序列，且其相对 限制的最终结果与已发表的同源序列有关。
然而，无须受限于理论，在此描述的orfF4基因编码成一细胞壁蛋白酶是 可信的，因此，在一优选实施例中描述的orfF4基因可编码成一细胞壁蛋白酶。
优选的，在此描述的乳酸菌包括所叙述的prtH200基因、orfF3基因以及 orfF4基因。
orfF1：
优选的，除了prtH200基因序列之外，所述乳酸菌还包括一含有开放读码 框的基因，在此称为orfF1。
纤维二糖乳酸杆菌DSM 14998的orfF1的DNA及氨基酸序列请参见SEQ ID NO 19及SEQ ID NO 20所示。
因此，在一优选实施例中，在此描述的乳酸菌是包括此prtH200基因和一 基因序列编码成一开放读码框(称为orfF1)，其中所述定义为orfF1的基因序 列是DNA序列编码成一开放读码框，且此DNA序列选自由下列组成的群组：
(a)SEQ ID NO 19的1-5358的位置所示的DNA序列；
(b)一DNA序列，包含一至少75碱基对(bp)的片段，其与(a)所定 义的DNA序列的对应片段至少有40％的同一性；
(c)一DNA序列，其编码成一多肽，包含至少200氨基酸(aa)的片 段，其与SFQ ID NO 20的1-1785位置所示的多肽序列的对应片段至少 有30％的同一性；
(d)一DNA序列，与包含SEQ ID NO 19的1-5358位置所示的DNA 序列的双股DNA探针在低严格性下进行杂交；以及
(e)一DNA序列，其为(a)、(b)、(c)或(d)中说明的DNA序列片段。
在本发明的申请日，一标准蛋白质-蛋白质BLAST[blastp]搜寻是使用SEQ ID NO 20的1-1785位置所示的演绎orfF1氨基酸序列作为参考序列，且其相 对限制的最终结果与已发表的同源序列有关。
然而，无须受限于理论，在此描述的orfF1基因编码成一细胞壁蛋白酶是 可信的，因此，在一优选实施例中描述的orfF1基因可编码成一细胞壁蛋白酶。
优选的，在此描述的乳酸菌包括所叙述的prtH200基因、orfF3基因、orfF4 基因以及orfF1基因。
脉冲式凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis，PFGE)分析鉴定
另一个揭示所述LAB特征的适当方法是利用所谓的脉冲式凝胶电泳(PFGE) 分析鉴定技术。
PFGE分析鉴定是一现有的标准技术，在此所偏好的模式是关于从关注的细 菌中分离出独立染色体DNA，使用限制酶SmaI做完全消化和使用适当的MW标 志在琼脂(agarose gel)上跑。于此所述的实施例7更详细叙述PFGE方案。
借助分析琼脂，可以定义所关注的LAB的特定DNA频带。如图1显示出于 此所述优选的纤维二糖乳酸杆菌CHCC5951(寄存编号为DSM 14998)。图1和 实施例7显示了CHCC5951的PFGE分析鉴定定义至少12个染色体的频带，这 些频带是：
频带编号1：283kbp
频带编号2：259kbp
频带编号3：219kbp
频带编号4：138kbp
频带编号5：127kbp
频带编号6：119kbp
频带编号7：106kbp
频带编号8：88kbp
频带编号9：71kbp
频带编号10：59kbp
频带编号11：54kbp
频带编号12：46kbp
一些已经获得相同的PFGE分析鉴定的菌种，包含于上述背景技术章节中 所描述的Calpis Food Industry和Valio Ltd的菌种。
测试菌种中没有一个包含有与283kbp的频带编号1和219kbp的频带编 号3二频带相同的结合；而且，测试菌种中没有一个包含有与46kbp的频带 编号12相同者。
这些频带编码信息是用来负责改进所述乳酸菌的特性。
因此，在一优选实施例中所述的乳酸菌包含有prtH200基因以及，登记号 码为DSM 14998的纤维二糖乳酸杆菌的PFGE分析鉴定为结合二种PFGE分析鉴 定频带对应至283kbp频带和219kbp频带者，其中PFGE分析鉴定是藉由包含 分离出的乳酸菌的独立染色体DNA的方案，并使用限制酶SmaI做完全消化染 色体DNA和在琼脂上对消化过的DNA跑电泳。
所称的“PFGE分析鉴定频带相对应至登记号码为DSM 14998的纤维二糖乳 酸杆菌的特殊大小的PFGE分析鉴定频带”应该理解为DSM 14998纤维二糖乳 酸杆菌有可能视为参考品种，优选的，有兴趣的LAB必须制造相同PFGE鉴定 分析(使用相同协议)与DSM 14998纤维二糖乳酸杆菌。有兴趣的LAB的消化DNA 和DSM 14998纤维二糖乳酸杆菌据此都可以使用适当的MW标志在琼脂上跑电 泳。藉由分析电泳琼脂，熟悉本领域的技术人员可以藉由基本法则判断有兴趣 的LAB的频带对应于特定大小频带的DSM 14998的纤维二糖乳酸杆菌，如熟悉 本领域的技术人员所熟知的，其大小上可能会有一些微细变异，在现有的内容， 如此的微细变异最好在±5kbp之内，因此，如果DSM 14998的纤维二糖乳酸 杆菌的参考频带是例如283kbp，则相关的有兴趣的LAB的分析频带大小最好 是283kbp±5kb。
在另一优选实施例中，于此所述的乳酸菌，包含有prtH200基因以及，登 记号码为DSM 14998的纤维二糖乳酸杆菌的PFGE分析鉴定频带对应于PFGE分 析鉴定46kbp频带者，其中PFGE分析鉴定是藉由包含分离出的乳酸菌的独立 染色体DNA的方案，并使用限制酶SmaI做完全消化染色体DNA和在琼脂上对 消化过的DNA跑电泳。
更优选的使用相同方法分析乳酸菌，于此所述包含下列所有PFGE分析鉴 定频带：
频带对应于DSM 14998纤维二糖乳酸杆菌的283kbp频带；
频带对应于DSM 14998纤维二糖乳酸杆菌的219kbp频带；以及
频带对应于DSM 14998纤维二糖乳酸杆菌的46kbp频带。
最优选的，在此所述的乳酸菌包含对应至上面所述所有的纤维二糖乳酸杆 菌DSM 14998的十二种PFGE分析鉴定频带。
聚合酶链反应(PCR)扩增
如上所述，在此描述的基因序列的存在最好利用此使用PCR引物的PCR扩 增来证实，且此PCR引物的设计是根据在此所教导的。当熟悉本领域的技术人 员具有适当设计的PCR引物时，对他而言，使用一般知识来选择一特定适当的 PCR扩增方案去验证这些基因是否存在于乳酸菌中是相当容易的。
优选的，此PCR扩增方案(反应)是根据实施例1所描述的内容来制定。
一旦进行PCR扩增，研究产生的PCR扩展序列是否相当于在此段描述的基 本片段，对熟悉本领域的技术人员而言，为其研究惯常的程序。由于熟悉本领 域的技术人员一般概略地知道一阳性PCR片段会有多大的长度，所以通常可基 于PCR片段的长度来进行验明，且阳性PCR片段与在此段描述的基因PCR片段 有关。选择性地，PCR片段可以为DNA片段，然后产生的DNA序列可与在此揭 露的序列相比较；再者，相当于此PCR片段的具有基因致命变种的乳酸菌可被 制造，然后此制造细菌的蛋白质水解活性(参下面)可以与相对的野生细菌进行 比较，且在此二细菌间的蛋白质水解活性的测量变化可被实验确认，而不管相 当于扩展PCR片段的基因是否为一基因编码成一乳酸细胞壁蛋白酶，如此段所 描述。
总之，不管一特定乳酸菌是否包含能给予相对阳性PCR片段的基因，熟悉 本领域的技术人员可使用在此教导所设计的PCR引物来进行验明。
PCR是用来研究此基因是否存在于乳酸菌中最好的方式，然而，也可以以 其它进行，例如，利用南方墨点分析法(Southern blot analysis)。
PCR引物
如上述说明，关于PrtH200基因的适当PCR引物为：
PrtH200：(a)：(S)：5’CGATGATAATCCTAGCGAGC3’，
              (A)：5’TGGCAGAACCTGTGCCTA 3’；
         (b)：(S)：5’GCCAAGACGCCTCTGGTA 3’，
              (A)：5’TAGGTATAGTTTCCATCAGGA 3’；和
         (c)：(S)：5’AARGTWCCWTAYGGYYWYAAYTA 3’，
              (A)：5’GCCATDSWDGTRCCDSWCATDTK 3’。
PrtH200：(a)：(S)为SEQ ID NO 7所示；PrtH200：(a)：(A)为SEQ ID NO 8所示；PrtH200：(b)：(S)为SEQ ID NO 9所示；PrtH200：(b)：(A) 为SEQ ID NO 10所示；PrtH200：(c)：(S)为SEQ ID NO 11所示；PrtH200： (c)：(A)为SEQ ID NO 12所示。
当使用(a)的引物时，此扩展的PrtH200 PCR片段优选的长度应该介于 400bp至800bp之间，更优选的长度则介于500bp至700bp之间。当使用(b) 的引物时，此扩展的PrtH200 PCR片段优选的长度应该介于200bp至500bp 之间，更优选的长度则介于250bp至375bp之间。当使用(c)的引物时，此 扩展的PrtH200 PCR片段优选的长剫该介于400bp至800bp之间，更优选 的长度则介于500bp至700bp之间。
最优选的PrtH200相关的PCR引物为编号(a)的引物以及编号(b)的引物。
如上述说明，关于orfF3的适当PCR引物为：
orfF3：(a)：(S)：5’CGAAGGCGATAAGTCAAACTTTGATAATGC 3’，
            (A)：5’CCCGGTTCTGTAAGATAATTTGGATCG 3’；和
       (b)：(S)：5’ASTCWRRYTTYGATRATGCW 3’，
            (A)：5’BHKYAMSAWARTTTGGATCR 3’。
orfF3：(a)：(S)为SEQ ID NO 13所示；orfF3：(a)：(A)为SEQ ID NO 14所示；orfF3：(b)：(S)为SEQ ID NO 15所示；orfF3：(b)：(A)为SEQ ID NO 16所示。
当使用(a)的引物时，此扩展的orfF3 PCR片段优选的长度应该介于1250bp 至1900bp之间，更优选的长度则介于1500bp至1725bp之间。当使用(b) 的引物时，此扩展的orfF3 PCR片段优选的长度应该介于1250bp至1900bp 之间。更优选的长度则介于1500bp至1725bp之间。
最优选的orfF3相关的PCR引物为编号(a)的引物。
如上述说明，关于orfF4的适当PCR引物为：
orfF4：(a)：(S)：5’GGTGTTGCTCCTGAAGC 3’
            (A)：5’ACTCTAGCACCAGCTAATTGAACATCATG 3’。
orfF4：(a)：(S)为SEQ ID NO 17所示；orfF4：(a)：(A)为SEQ ID NO 18 所示。
当使用(a)的引物时，此扩展的orfF4 PCR片段优选的长度应该介于700bp 至1150bp之间，更优选的长度则介于875bp至1025bp之间。
DNA序列的同源/一致性
参照上述内容，DNA序列的同源/一致性由二序列，第一序列与第二序列， 两者间的同一性差异程度所决定。
在本发明的申请日，国家生物技术信息中心(NCBI)将其提供至其网站 ( http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)，以供一标准BLAST计算机序列同源性的搜 寻。
BLAST程序叙述于[Altschul等(1997)，″Gapped BLAST and PSI-BLAST：a new generation of protein database search programs″，Nucleic Acids Res. 25：3389-3402]。
在本文中，优选的计算机同源搜寻程序为“标准核甘酸-核甘酸BLAST [blastn]”搜寻，且在本申请案的申请日，在NCBI网站已具有过滤性(filter)： 低复杂性；预期性(expect)：10，及序列长度：11等设定。
此参考序列采用此程序，且此程序一起验明已发表序列与一参考序列的对 应片段间的同一性百分比。
使用标准核甘酸-核甘酸BLAST计算机程序，在此描述的prtH200序列通 常为含有至少75碱基对(bp)片段的DNA序列，其与SEQ ID NO 1的1-5550位 置所示的prtH200 DNA序列的对应片段至少有60％的同一性；更优选的，含有 至少75碱基对(bp)片段的DNA序列与SEQ ID NO 1的1-5550位置所示的 prtH200 DNA序列的对应片段至少有70％的同一性；最优选的，含有至少75 碱基对(bp)片段的DNA序列与SEQ ID NO 1的1-5550位置所示的prtH200 DNA 序列的对应片段至少有80％的同一性。
就上述所提供的同一性百分比而言，此片段通常为至少100碱基对(bp)， 优选的片段为至少200碱基对(bp)，更优选的片段为至少400碱基对(bp)，最 优选的片段则为至少1500碱基对(bp)。
使用标准核甘酸-核甘酸BLAST计算机程序，在此描述的orfF3序列通常 为含有至少75碱基对(bp)片段的DNA序列，其与SEQ ID NO 3的1-2679位置 所示的orfF3 DNA序列的对应片段至少有60％的同一性；更优选的，含有至少 75碱基对(bp)片段的DNA序列与SEQ ID NO 3的1-2679位置所示的orfF3 DNA 序列的对应片段至少有70％的同一性；以及，最优选的，含有至少75碱基对 (bp)片段的DNA序列与SEQ ID NO 3的1-2679位置所示的orfF3 DNA序列的 对应片段至少有80％的同一性。
就上述所提供的同一性百分比而言，此片段通常为至少100碱基对(bp)， 优选的片段为至少200碱基对(bp)，更优选的片段为至少400碱基对(bp)，最 优选的片段则为至少1500碱基对(bp)。
使用此标准核甘酸-核甘酸BLAST计算机程序，在此描述的orfF4序列通 常为含有至少75碱基对(bp)片段的DNA序列，其与SEQ ID NO 5的1-4881位 置所示的orfF4 DNA序列的对应片段至少有60％的同一性；更优选的，含有至 少75碱基对片段的DNA序列与SEQ ID NO 5的1-4881位置所示的orfF4 DNA 序列的对应片段至少有70％的同一性；以及，最优选的，含有至少75碱基对 片段的DNA序列与SEQ ID NO 5的1-4881位置所示的orfF4 DNA序列的对应 片段至少有80％的同一性。
就上述所提供的同一性百分比而言，此片段通常为至少100碱基对(bp)， 优选的片段为至少200碱基对(bp)，更优选的片段为至少400碱基对(bp)，最 优选的片段则为至少1500碱基对(bp)。
选择性地，此同源/一致性可适当地利用任何已知的计算机程序工具来决 定，例如，在GCG程序软件包中所提供的GAP(Program Manual for the Wisconsin Package，Version 8，1994年8月，Genetics Computer Group，575 Science Drive，Madison，Wisconsin，USA 53711)(Needleman，S.B.和Wunsch， C.D.，(1970)，Journal of Molecular Biology，48，443-453)。
使用GAP来进行DNA序列比对具有下列设定：GAP创造罚分(creation penalty)为5.0且GAP延伸罚分(extension penalty)为0.3，当使用GAP时， 关于BLAST程序所提供的同一性百分比也可为优选的同一性。
氨基酸序列的同源(Homology to amino acid sequences)
相似于核甘酸同源分析，在本文中，一优选的计算机同源搜寻程序为“标 准蛋白质-蛋白质BLAST[blastp]”搜寻，且在本申请案的申请日，在NCBI 网站已具有成分统计：是，过滤性：低复杂性；预期性：10，序列长度：3， 矩阵：BLOSUM 62，间隔损失：存在11延伸1等设定。
使用此标准蛋白质-蛋白质BLAST计算机程序，在此描述的prtH200序列 是编码成一多肽(polypeptide)，释出细胞壁蛋白酶活性，包含有至少200氨 基酸(amino acids，aa)片段的DNA序列，其与SEQ ID NO 2的1-1849位置所 示的prtH200多肽序列的对应片段至少有40％的同一性；优选的，这一编码成 多肽，释出细胞壁蛋白酶活性，包含有至少200氨基酸(aa)片段的DNA序列， 其与SEQ ID NO 2的1-1849位置的prtH200多肽序列的对应片段至少有50％ 的同一性；更优选的，这一编码成多肽，释出细胞壁蛋白酶活性，包含有至少 200氨基酸(aa)片段的DNA序列，其与SEQ ID NO 2的1-1849位置所示的prtH200 多肽序列的对应片段至少有65％的同一性；最优选的，这一编码成多肽，释出 细胞壁蛋白酶活性，包含有至少200氨基酸(aa)片段的DNA序列，其与SEQ ID NO 2的1-1849位置所示的prtH200多肽序列的对应片段至少有80％的同一性。
就上述所提供的同一性百分比而言，此片段通常为至少300氨基酸(aa)， 较优选的片段为至少400氨基酸(aa)，更优选的片段为至少800氨基酸(aa)， 最优选的片段则为至少1200氨基酸(aa)。
使用此标准蛋白质-蛋白质BLAST计算机程序，在此描述的orfF3序列编 码成一多肽(polypeptide)，包含有至少200氨基酸(amino acids，aa)片段的 DNA序列，其与SEQ ID NO 4的1-893位置所示的orfF3多肽序列的对应片段 至少有40％的同一性；较优选的，这一编码成多肽，包含有至少200氨基酸(aa) 片段的DNA序列，其与SEQ ID NO 4的1-893位置所示的orfF3多肽序列的对 应片段至少有50％的同一性；更优选的，这一编码成多肽，包含有至少200 氨基酸(aa)片段的DNA序列，其与SEQ ID NO 4的1-893位置所示的orfF3多 肽序列的对应片段至少有65％的同一性；最优选的，这一编码成多肽，包含有 至少200氨基酸(aa)片段的DNA序列，其与SEQ ID NO 4的1-893位置所示的 orfF3多肽序列的对应片段至少有80％的同一性。
就上述所提供的同一性百分比而言，此片段通常为至少300氨基酸(aa)， 优选的片段为至少400氨基酸(aa)，更优选的片段为至少800氨基酸(aa)，最 优选的片段则为至少1200氨基酸(aa)。
使用此标准蛋白质-蛋白质BLAST计算机程序，在此描述的orfF4序列是 编码成一多肽，包含有至少200氨基酸(aa)片段的DNA序列，其与SEQ ID NO 6 的1-1627位置所示的orfF4多肽序列的对应片段至少有40％的同一性；优选 的，这一编码成多肽，包含有至少200氨基酸(aa)片段的DNA序列，其与SEQ ID NO 6的1-1627位置所示的orfF4多肽序列的对应片段至少有50％的同一性； 更优选的，这一编码成多肽，包含有至少200氨基酸(aa)片段的DNA序列，其 与SEQ ID NO 6的1-1627位置所示的orfF4多肽序列的对应片段至少有65％ 的同一性；最优选的，这一编码成多肽，包含有至少200氨基酸(aa)片段的DNA 序列，其与SEQ ID NO 6的1-1627位置所示的orfF4多肽序列的对应片段至 少有80％的同一性。
就上述所提供的同一性百分比而言，此片段通常为至少300氨基酸(aa)， 优选的片段为至少400氨基酸，更优选的片段为至少800氨基酸，最优选的片 段则为至少1200氨基酸。
选择性地，此同源性可适当地利用任何已知的计算机程序工具来决定，例 如，在GCG程序软件包中所提供的GAP(Program Manual for the Wisconsin Package，Version 8，1994年8月，Genetics Computer Group，575Science Drive，Madison，Wisconsin，USA 53711)(Needleman，S.B.和Wunsch， C.D.，(1970)，Journal of Molecular Biology，48，443-453。
使用GAP来进行多肽序列比对具有下列设定：GAP创造罚分为3.0且GAP 延伸罚分为0.1，当使用GAP时，关于BLAST程序所提供的同一性百分比也可 为优选的同一性。
杂交反应(Hybridisation)
此杂交反应根据前文所预期包含一同功DNA序列(analogous DNA sequence)，其是杂交至一双股DNA探针。在一核甘酸探针与一同源DNA或RNA 序列之间决定杂交反应为低严格性、中严格性或高严格性的适当实验条件包 含，将含有欲杂交DNA片段或RNA的滤膜(fliter)预浸(pre-soaking)在5× SSC(氯化钠/柠檬酸钠，Sambrook等.1989)溶液中10分钟，并将滤膜置于5× SSC、5×Denhard’s溶液(Sambrook等.1989)、0.5％SDS及100mu g/ml 改质超声处理的鲑鱼精DNA(Sambroo等.1989)的溶液中进行预杂交 (prehybridization)，随后在含有10ng/ml随机引物(Feinberg，A.P.and Vogelstein，B.(1983)Anal.Biochem.132：6-13)、P-dCTP-标记(特定活性 ＞1×10cpm/mu g)探针的相同溶液中杂交12小时，且其温度为45℃。然后 此滤膜在2×SSC、0.5％SDS溶液下清洗二次30分钟，其温度为至少55℃(低 严格性)，优选的温度为至少60℃(中严格性)，仍为优选的温度为至少65℃(中 /高严格性)，更优选的温度为至少70℃(高严格性)，以及最优选的温度为至少 75℃(很高严格性)。
利用X光片(X-ray film)侦测在上述条件下的寡核甘酸探针杂交的分子。
包含蛋白质的发酵材料
术语“包含蛋白质的材料”的相关表述如“包含具乳酸菌的蛋白质的发 酵材料”，在此表示任何包含有蛋白质的材料皆可以使用乳酸菌使其增长和制 造成为含有肽的发酵材料，需了解的是肽的取得必须是藉由乳酸菌细胞壁蛋白 酶水解蛋白质而来。
举例而言，包含蛋白质的材料可以是适当的标准乳酸菌发酵介质如M17琼 脂或MRS琼脂，此介质优选的是包含动物性牛奶蛋白，牛奶蛋白的构成要素举 例而言，如同全脂或脱脂牛奶或牛奶酪蛋白。
食材
本发明的食材包含动物乳汁蛋白质或是植物蛋白质。
优选的，食材包含有所列举的动物乳汁蛋白质，例如全脂或脱脂动物乳汁 或乳汁酪白质等的乳汁蛋白质成分。
优选的，食材包含所列举的植物蛋白质，例如谷物、谷物蛋白质、小麦、 小麦蛋白质、大豆、脱脂大豆或大豆蛋白质。
乳酸菌
有关“乳酸菌”的命名是指革兰氏阳性菌、无细菌芽胞增殖(non-sporing bacteria)的组群，其能使糖发酵而产生乳酸。
其中，包括乳酸杆菌属乳酸菌(genus Lactobacillus)，例如纤维二糖乳 酸杆菌(Lactobacillus helveticus)、保加利亚乳酸杆菌(Lactobacillus delbruekii subsp.bulgaricus)等；乳酸球菌属乳酸菌(genus Lactococcus)， 例如乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)；链球菌属乳酸菌(genus Streptococcus)，例如嗜热性链球菌唾液亚种(Streptococcus salivarius subsp.thermophilus)；明串球菌属乳酸菌(genus Leuconostoc)，例如乳酸 明串球菌(Leuconostoc lactis)；双歧杆菌属乳酸菌(genus Bifidobacterium)，例如长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)或短双歧杆菌 (Bifidobacterium breve)；以及片球菌属乳酸菌(genus Pediococcus)。
乳酸菌可用来作为含有其它微生物体的混合物，例如，酵母(yeasts)。
对于熟悉本领域的技术人员，许多不同的乳酸菌为可公开获得的，请参照 德国微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)，以及国家生物技术信息中心(NCBI)的网际网 络分类浏览器( http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/.)。
为了验证识别一合适的具体乳酸菌，对熟悉本领域的技术人员而言是简单 的日常工作，例如，取得足够数量的可公开获得的不同乳酸菌，并识别一或多 种具体菌种，其包含在此讨论的基因序列。优选的，是利用在此描述的PCR扩 增方案来完成的。
优选地，乳酸菌为一种杆菌门(phylum Firmicutes)的细菌，优选的是杆 菌纲(class Bacillus)，更好的是乳酸杆菌目(order Lactobacillales)，在 此目中的乳酸菌为一种乳酸杆菌科(family Lactobacillaceae)，优选的为乳 酸杆菌属，更好地，它是一种纤维二糖乳酸杆菌种。有关分类法更进一步地详 细说明记载于与Bergey细菌分类手册第二版第一册(Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology，Second Edition，Volume 1：The Archea and the Deeply Branching and Phototrophic Bacteria)。
一个特别好的纤维二糖乳酸杆菌种(Lactobacillus helveticus strain)CHCC5951的样品已经保藏在德国微生物和细胞培养物保藏中心 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)， 取得的登记号为DSM 14998，保藏日为2002年5月15日。此保藏是根据国际 认可的有关微生物保存布达佩斯条约(Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Micro organisms for the Purposes of Patent Procedure)的规定为了专利程序而做的。
所以，有关在此使用的乳酸菌的一优选实施例为登记号DSM 14998的纤维 二糖乳酸杆菌。
在此关系中，本发明的一个独立方面是有关一种登记号DSM 14998的纤维 二糖乳酸杆菌或其突变种。
使用菌原材料是培养出DSM14998的菌种，熟悉本领域的阅读者可藉由一 般的突变发展或再离析技术获得更进一步的突变体或衍生物，并保持适当的能 力来制造具抗高血压特性的肽。
另外，一纤维二糖乳酸杆菌种(Lactobacillus helveticus strain)CHCC 4080的样品已经保藏在DSMZ(徳国微生物和细胞培养物保藏中心，Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)内，取得的登记 号为DSM 14997，保藏日为2002年5月15日。此保藏是根据国际认可的有关 微生物保存布达佩斯条约的规定为了专利程序而做的。
乳酸菌的蛋白水解活性(Proteolytic activity of the lactic acid bacteria)
于此段描述的prtH200、orfF3及orfF4基因序列可视为指纹，其具有高 度适合证明在此描述的乳酸菌。无须受限于学理，理论上，尽管在此描述的指 纹基因序列无法展现任何有利的特性，一些品种仍然可以存在。
因此，一旦验证在乳酸菌中具有本文描述的指纹基因序列存在时，其是有 利于测试乳酸菌的蛋白水解活性。在本文中，一个优选的乳酸菌是具有较佳的 蛋白水解活性，详细说明如下。
在本文中，当一乳酸菌具有合成一活性细胞壁蛋白酶的能力时，此乳酸菌 被认为具有蛋白水解活性；换而言之，证明蛋白酶可于细菌的细胞部分外的活 性能力。再者，此蛋白酶应该具有使其降解(degrade)蛋白质(例如牛奶中的酪 蛋白)的专一性能力，以得到具有抗高血压特性的肽。
优选的，一细菌的蛋白水解活性是利用一方案确定，包括下列步骤：
(i)以细菌发酵200毫升的食材一整夜；
(ii)抽取(extract)产生的肽；以及
(iii)测量此些抽取出肽的抗高血压特性，其是利用一基因检测法来测量 需要抑制50％血管收缩素转化酶(ACE)活性的肽浓度。
所述ACE抑制活性检测法在此也称之为DL50，较低的DL50值即表示包含 在本发酵食材中的肽的抗高血压效果较佳。
在该方案的步骤(i)中，优选的食材为新鲜牛奶；再者，细菌最好以1％v/v 整夜的贮存培养菌方式灌注至食材中并维持于一适当的温度，这一适当温度为 适合细菌生长的温度，针对特定的细菌，熟悉本领域的技术人员应知道如何确 定。对于乳酸杆菌种，其适当温度为37℃，而对乳酸球菌种的适当温度则为 30℃。
在实施例2提供了一详细的优选方案，以说明发酵及抽取步骤，并详细说 明此DL50的ACE活性检测。
优选的，此乳酸菌具有蛋白质水解活性的能力的获知，这一方案包括下列 步骤：
(i)以细菌发酵200毫升的食材一整夜；
(ii)抽取产生的肽；以及
(iii)测量此些抽取出肽的抗高血压特性，其是利用一基因检测法来测量 需要抑制50％ACE活性(DL50)的肽浓度。
产生的肽的ACE抑制活性(DL50)为0.25至5.0(毫克/毫升)之间。
优选的，此乳酸菌为具有产生肽的ACE抑制活性(DL50)0.25至4.0(毫克/ 毫升)间的能力；更优选的，此蛋白质水解乳酸菌为具有产生肽或其它活性成 分的ACE抑制活性(DL50)0.25至3.5(毫克/毫升)间的能力。
较低的DL50范围可以0.25毫克/毫升及1.0毫克/毫升代替。
发酵
在本发明的制作过程中，所述食材是藉由乳酸菌在操作条件下进行发酵， 其可依据食材的种类及/或乳酸菌的结合而予以变化。优选的，若食材并非为 一水性溶液，则需将食材先溶解于一适当的水性溶液中，然后再与乳酸菌相混 合，并以发酵方式培养。
乳酸菌的培养可藉由将预培养乳酸菌的菌原(starter)加入食材培养基 (medium)来完成，其可先经过高温消毒(heat-sterilized)并冷却至一预设温 度进行孵化。此乳酸菌菌原的最佳培养数量为105至107个乳酸菌/每毫升培养 基；孵化的温度通常为20至50℃，优选的为30至45℃；孵化时间通常为3 至48小时，且优选的为6至24小时。特别的是，此过程最好是在pH值3.5 至7范围的培养基中进行孵化，且为了有效率地进行乳酸菌孵化，其pH值最 好是在5至6之间。再者，为进行pH-饱和的孵化，其pH值最好维持在4至7 的范围内。没有严格的限制，当乳酸菌的数量超过108个/毫升之时，此培养即 可终止。
有关一制作过程的优选实施例，此食材的发酵是在每100毫升的食材中生 产出0.5至25毫克具有抗高血压特性的肽或其它活性成分的情况下完成，更 好的，是在每100毫升的食材中生产出1至5毫克具有抗高血压特性的肽。
自发酵食材取得的抗高血压特性的后续纯化(purification)
呈上所述，在此描述的乳酸菌的使用，是直接提供进行发酵，以便于发酵 后得到有用量的具有很好抗高血压特性的肽。
然而，在一些环境下，最好对自发酵食材取得的抗高血压肽进行一后续纯 化步骤，例如，当肽被制作成一药片剂，其需要很高浓度的抗高血压肽。
因此，本发明的一实施例是与在此描述的使用有关，即发酵食材需经更进 一步处理，以纯化或向上浓缩(up-concentrate)该具有抗高血压特性的肽。
举例而言，具有抗高血压特性的肽的发酵食材进行离心，并可对分离后的 上层液(supernatant)以一反相树脂进行纯化处理以获得最后悬浮物，用以增 加获得包含具有抗高血压特性的肽。
此离心分离法最好使用，例如，转速在2,000rpm至20,000rpm并持续1 至20分钟，此离心分离法也可在一离心机中进行。
此取得的上层液更可进一步利用反相树脂(reverse-phase resin)进行纯 化处理，以反相树脂对肽进行吸附及洗脱(elution)，及/或利用反相色层分析 法(chromatography)，使得肽的纯度增加。
有关此反相树脂理论文献的更多的技术说明请参阅EP 821968。
选择性地，此发酵食材更可进行进一步处理，其方式为在发酵食材上进行 纳米过滤(nanofiltration)，为了从发酵食材中去除乳酸或单价离子可以采用 这种做法。
有关此纳米过滤理论文献的更多的技术说明请参阅WO 01/32905。
包含具有抗高血压特性的肽的功能性食品
如上所述，是使用所述的包含prtH200蛋白酶的乳酸菌直接进行发酵，以 得到大量有用且具有很好的抗高血压特性的肽。因此，并不一定要从发酵食材 中更进一步的纯化或向上浓缩该肽，且发酵食材可以直接包装并如食品般于市 场上供应，最好是以冷冻干燥形式存在的功能性食品或食品添加物等。
在实施例6中该说法将获得验证。简言之，实施例6的结果显示，无需任 何其它处理，发酵牛奶本身即具有良好的降低血压功效。另外，经冷冻干燥的 发酵牛奶可悬浮于中性牛奶中，进而可产生一适当的功能食品，此经冷冻干燥 的发酵牛奶可因而被视为一适当的食物添加剂产品。
因此，本发明的实施例是有关一功能性食品的制作过程，其包含具有抗高 血压特性的肽，此食品的制作方法包括下列步骤：
(i)根据所述制造具有抗高血压特性的肽的方法准备一发酵食材；
(ia)将此发酵食材进行干燥；以及
(ii)以适当方式包装此发酵食材，以得到一功能性食品。
其中，步骤(ia)最好使用冷冻干燥法。
换而言之，对于最终的功能性食品不需要再做任何处理，其也可以有一特 性为包含一重要部分即发酵过程中所存在的乳酸菌，实施例6清楚的表示这样 的产品具有良好的功能和在功能性食品中存在有乳酸菌具有实质的优点。
因此，本发明的实施例是有关一种功能性食品的制作过程，该功能性食品 包含具有抗高血压特性的肽，制作方法包括下列步骤：
(i)根据所述制造具有抗高血压特性的肽的方法准备一发酵食材；
(ia)保留小部分的乳酸菌于发酵食材的发酵过程中；以及
(ii)以适当方式包装此发酵食材，以得到一食品或食品添加物。
“保留小部分的乳酸菌于发酵食材的发酵过程中”如上所述可以解释为 不需要考虑移除乳酸菌。一些细菌可能需要移除。数量上，在发酵食材的发酵 过程中可能至少需要保留5％的乳酸菌存在；或是在发酵食材的发酵过程中保留 至少20％的乳酸菌存在。
如实施例6所示，保留在功能性食品中的乳酸菌可能为死掉或有活性的， 由于热处理的发酵食材也可以有良好的降血压特性，所以更优选的为来自于发 酵食材的抗高血压肽可经过适当的纯化作用。
因此，本发明的实施例是有关一功能性食品的制作过程，此食品包含具有 抗高血压特性的肽，制作方法包括下列步骤：
(i)根据所述制造具有抗高血压特性的肽的方法准备一发酵食材；
(ia)步骤(i)的发酵食材更进一步的经过如上所描述的方式纯化或向上浓 缩具抗高血压特性的肽；
(ib)然后在食材中加入经步骤(ia)纯化或向上浓缩的肽；以及
(iv)以适当方式包装此发酵食材，以得到一功能性食品。
更优选的，步骤(ib)的食材是如所述的制造过程的发酵食材，这相关于 哪一种功能性食品需要具有相对较高浓度的具有抗高血压特性的肽的情形。
具有抗高血压特性的肽的使用与优选剂量
利用本发明方法获得具有抗高血压特性的肽，其通常为肽混合物，且可能 包含有其它肽。使用于食物或饮料中，可以直接使用包含有肽及/或纯化产品 的发酵食材，选择性地，使用前药剂可以藉由冷冻干燥，喷雾干燥或鼓风机干 燥而成为粉末形式。
本发明的抗高血压肽的优选有效用量与人的年龄与状态有关，剂量为0.05 到10毫克/千克体重/日，优选的则为0.3到3.0毫克/千克体重/日。如果剂 量没有低于0.05毫克/千克体重/日，可以预期有足够的效用；如果剂量没有 大于10毫克/千克体重/日，此效用可能有效地显现作用。
使用于胆固醇降低疗法
(Teo，K.等，Circulation(2000)102：1748-1754)的论文描述ACE抑制 药物(Emalapril)可能具有对降低胆固醇的治疗有正面效用，特别是降低冠状 动脉粥样硬化性(coronary atherosclerotic)疾病。
因此，本发明的一独立观点是有关使用含有抗高血压特性的肽，其是由本 发明的制程所制造出的药剂或功能性食品，用于胆固醇降低疗法，特别是关于 降低冠状动脉粥样硬化性(coronary atherosclerotic)疾病。
发明内容与实施方案所呈现的专利范围
本发明的实施例及观点可以显示于所谓的权利要求格式中，本发明的一些 内容与实施例以下述的权利要求形式呈现。
1.一种获得乳酸菌的方法，包括：
(i)研究任一种乳酸菌，此乳酸菌是包含有一基因序列编码成为一细胞壁 蛋白酶(称为prtH200)，其中该基因序列是使用PCR引物的乳酸菌的基因组DNA 的PCR扩增方法来进行识别鉴定，该PCR引物选自由下列组成的群组[有义序 列(sense sequence)称为S；反义序列(antisense sequence)称为A]：
PrtH200：(a)：(S)：5’CGATGATAATCCTAGCGAGC3’，
              (A)：5’TGGCAGAACCTGTGCCTA 3’；
         (b)：(S)：5’GCCAAGACGCCTCTGGTA 3’，
              (A)：5’TAGGTATAGTTTCCATCAGGA 3’；及
         (c)：(S)：5’AARGTWCCWTAYGGYYWYAAYTA 3’，
              (A)：5’GCCATDSWDGTRCCDSWCATDTK 3’；及
(ii)假如乳酸菌符合步骤(i)的标准，则获得了该乳酸菌；或
(iii)假如乳酸菌不符合步骤(i)标准，则重复步骤(i)研究其它乳酸菌。
2.权利要求1所述的获得乳酸菌的方法，其中在步骤(i)中也包含研究任 一乳酸菌包含有基因序列(称为orfF3)编码成一开放读码框，其中该基因序列 是使用PCR引物的乳酸菌的基因组DNA的PCR扩增方法来进行识别鉴定，且该 PCR引物选自由下列组成的群组[有义序列(sense sequence)称为S；反义序列 (antisense sequence)称为A]：
orfF3：(a)：(S)：5’CGAAGGCGATAAGTCAAACTTTGATAATGC 3’，
            (A)：5’CCCGGTTCTGTAAGATAATTTGGATCG 3’；及
       (b)：(S)：5’ASTCWRRYTTYGATRATGCW 3’，
            (A)：5’BHKYAMSAWARTTTGGATCR 3’。
3.一种获得乳酸菌的方法，包括：
(i)研究任一种乳酸菌，该乳酸菌是包含有一基因序列编码成为一细胞壁 蛋白酶(称为prtH200)，其中该基因序列定义为prtH200为一去氧核糖核酸 (DNA)序列编码成一酶释出细胞壁蛋白酶活性，且该DNA序列选自由下列组成 的群组：
(a)SEQ ID NO 1的1-5550的位置所示的DNA序列；
(b)一DNA序列，包含一至少75碱基对(bp)的片段(fragment)，其 与(a)所定义的DNA序列的对应片段至少有50％的同一性。
(c)一DNA序列，编码成一多肽，包含至少200氨基酸(aa)的片段， 其与SEQ ID NO 2的1-1849位置所示的多肽序列的对应片段至少有30％ 的同一性；
(d)一DNA序列，与包含SEQ ID NO 1的1-5550位置所示的DNA序 列的双股DNA探针在低严格性下进行杂交(hybridize)；以及
(e)一DNA序列，其为(a)、(b)、(c)或(d)中说明的DNA序列片段； 以及
(ii)假如乳酸菌符合步骤(i)标准，则可获得该乳酸菌；或
(iii)假如乳酸菌不符合步骤(i)标准，则重复步骤(i)于其它乳酸菌中。
4.权利要求3所述的获得乳酸菌的方法，其中在该步骤(i)中也包含研究 任一乳酸菌包含有基因序列(称为orfF3)编码成一开放读码框，其中该基因序 列定义该orfF3为一去氧核糖核酸(DNA)序列编码成一开放读码框，且该DNA 序列选自下列组成的群组：
(a)SEQ ID NO 3的1-2679的位置所示的DNA序列；
(b)一DNA序列，包含一至少75碱基对(bp)的片段(fragment)，其 与(a)所定义的DNA序列的对应片段至少有40％的同一性。
(c)一DNA序列，编码成一多肽，包含至少200氨基酸(aa)的片段， 其与SEQ ID NO 4的1-893位置所示的多肽序列的对应片段至少有30％的 同一性；
(d)一DNA序列，与包含SEQ ID NO 3的1-2679位置所示的DNA序 列的双股DNA探针在低严格性下进行杂交(hybridize)；以及
(e)一DNA序列，其为(a)、(b)、(c)或(d)中说明的DNA序列片段。
5.权利要求1到4中任一获得乳酸菌的方法，其中该乳酸菌具有蛋白质水 解的能力，其方法包含下列步骤：
(i)以细菌发酵200毫升的食材一整夜；
(ii)抽取产生的肽；以及
(iii)测量这些抽取出肽的抗高血压特性，其是利用一基因检测法来测量 需要抑制50％ACE活性的肽浓度；
产生的肽具有的ACE抑制活性(DL50)为0.25至5.0(毫克/毫升)之间。
6.前述任一项权利要求所述的获得乳酸菌的方法，其中该乳酸菌为杆菌门 的细菌，优选为杆菌纲，最优选为乳酸杆菌目。
7.权利要求6所述的获得乳酸菌的方法，其中该乳酸杆菌目的细菌为乳酸 杆菌科，优选为乳酸杆菌属，最优选为纤维二糖乳酸杆菌。
8.权利要求7所述的获得乳酸菌的方法，其中该细菌为具有登记号为DSM 14998的纤维二糖乳酸杆菌或其突变体。
9.一种制备具有抗高血压特性的肽的方法，该方法包括使用乳酸菌发酵包 含动物性牛奶蛋白或植物性蛋白的食材，以获得含有抗高血压特性的肽的发酵 食材，其特征在于：该乳酸菌是包含有一基因序列编码成一细胞壁蛋白酶(称 为prtH200)，其中该基因序列是使用PCR引物组的乳酸菌的基因组DNA的PCR 扩增方法来进行识别鉴定，该PCR引物选自下列组成的群组[有义序列(sense sequence)称为S；反义序列(antisense sequence)称为A]：
PrtH200：(a)：(S)：5’CGATGATAATCCTAGCGAGC3’，
              (A)：5’TGGCAGAACCTGTGCCTA 3’；
         (b)：(S)：5’GCCAAGACGCCTCTGGTA 3’，
              (A)：5’TAGGTATAGTTTCCATCAGGA 3’；及
         (c)：(S)：5’AARGTWCCWTAYGGYYWYAAYTA 3’，
              (A)：5’GCCATDSWDGTRCCDSWCATDTK 3’。
10.权利要求10所述的制备具有抗高血压特性的肽的方法，其中该乳酸菌 更包含有一基因序列(称为orfF3)编码成一开放读码框，其中该基因序列是使 用PCR引物组的乳酸菌的基因组DNA的PCR扩增方法来进行识别鉴定，该PCR 引物选自下列组成的群组[有义序列(sense sequence)称为S；反义序列 (antisense sequence)称为A]：
orfF3：(a)：(S)：5’CGAAGGCGATAAGTCAAACTTTGATAATGC 3’，
            (A)：5’CCCGGTTCTGTAAGATAATTTGGATCG 3’；及
       (b)：(S)：5’ASTCWRRYTTYGATRATGCW 3’，
            (A)：5’BHKYAMSAWARTTTGGATCR 3’。
11.一种制备具有抗高血压特性的肽的方法，该方法包括使用乳酸菌发酵 包含动物性奶蛋白或植物性蛋白的食材，以获得具有抗高血压特性的肽的发酵 食材，其特征在于：该乳酸菌包含有一基因序列编码成细胞壁蛋白酶(称为 prtH200)，其中该基因序列定义为prtH200为一去氧核糖核酸(DNA)序列编码 成一酶释出细胞壁蛋白酶活性，该DNA序列选自下列组成的群组：
(a)SEQ ID NO 1的1-5550的位置所示的DNA序列；
(b)一DNA序列，包含一至少75碱基对(bp)的片段(fragment)，其 与(a)所定义的DNA序列的对应片段至少有50％的同一性；
(c)一DNA序列，编码成一多肽，包含至少200氨基酸(aa)的片段， 其与SEQ ID NO 2的1-1849位置所示的多肽序列的对应片段至少有30％ 的同一性；
(d)一DNA序列，与包含SEQ ID NO 1的1-5550位置所示的DNA序 列的双股DNA探针在低严格性下进行杂交(hybridize)；以及
(e)一DNA序列，其为(a)、(b)、(c)或(d)中说明的DNA序列片段。
12.权利要求11所述的制备具有抗高血压特性的肽的方法，其中该乳酸菌 更包含一基因序列编码成一开放读码框(称为orfF3)，其中该基因序列定义为 orfF3的DNA序列为一去氧核糖核酸(DNA)序列编码成一开放读码框，且该DNA 序列选自下列组成的群组：
(a)SEQ ID NO 3的1-2679的位置所示的DNA序列；
(b)一DNA序列，包含一至少75碱基对(bp)的片段(fragment)，其 与(a)所定义的DNA序列的对应片段至少有40％的同一性；
(c)一DNA序列，编码成一多肽，包含至少200氨基酸的片段，其与 SEQ ID NO 4的1-893位置所示多肽序列的对应片段至少有30％的同一性；
(d)一DNA序列，与包含SEQ ID NO 3的1-2679位置所示的DNA序 列的双股DNA探针在低严格性下进行杂交(hybridize)；以及
(e)一DNA序列，其为(a)、(b)、(c)或(d)中说明的DNA序列片段。
13.一种制备肽的方法，包括：
(i)根据权利要求1到8任一项的获得乳酸菌的方法获得一乳酸菌；以及
(ii)使用在步骤(i)获得的乳酸菌发酵含蛋白质的材料，以获得含肽的发 酵材料。
14.权利要求13所述的制备肽的方法，其中该方法为一制造具有抗高血压 肽的工艺，包括：
(i)根据权利要求1到8的获得乳酸菌的方法，以获得一乳酸菌；以及
(ii)使用在步骤(i)获得的乳酸菌发酵包含动物性牛奶蛋白或植物性蛋白 的发酵食材，以获得具有抗高血压特性的肽的发酵食材。
15.权利要求9到14任一项所述的制备肽的方法，其中该食材包含动物性 牛奶蛋白。
16.权利要求15所述的制备肽的方法，其中该动物性牛奶蛋白为酪蛋白。
17.权利要求15所述的制备肽的方法，其中该食材为牛奶或牛奶制品。
18.权利要求9到17任一项所述的制备肽的方法，其中该乳酸菌具有蛋白 质水解活性的能力，在一方案包括下列步骤：
(i)以细菌发酵200毫升的食材一整夜；
(ii)抽取产生的肽；以及
(iii)测量这些抽取出肽的抗高血压特性，其是利用一基因检测法来测量 需要抑制50％ACE活性(DL50)的肽浓度；
产生的肽的ACE抑制活性(DL50)为0.25至5.0(毫克/毫升)之间。
19.权利要求9到18任一项所述的制备肽的方法，其中该乳酸菌为杆菌门 的细菌，优选为杆菌纲，更优选为乳酸杆菌目。
20.权利要求19所述的制备肽的方法，其中该乳酸杆菌目的细菌为乳酸杆 菌科，优选是乳酸杆菌属，更优选是纤维二糖乳酸杆菌。
21.权利要求20所述的制备肽的方法，其中该细菌为登记编号为DSM 14998 的纤维二糖乳酸杆菌或其突变种。
22.权利要求9到21任一项所述的制备肽的方法，其中该发酵食材完成时 的情形是，每100毫升的食材含有0.5到25毫克的具有抗高血压特性的肽。
23.权利要求9到22任一项所述的制备肽的方法，其中该食材的发酵需要 在摄氏20到50度中发酵3到48小时。
24.权利要求9到23任一项所述的制备肽的方法，其中该发酵食材是在酸 碱值在pH3.5到7间的情况下进行。
25.权利要求9到24任一项所述的制备肽的方法，其中该发酵食材更可进 行一纯化或向上浓缩该具有抗高血压特性的肽。
26.权利要求25所述的制备肽的方法，其中该发酵食材经离心并获得分离 出的包含具有抗高血压的肽的上层液。
27.权利要求26所述的制备肽的方法，其中该肽是藉由反相树脂纯化该上 层液。
28.权利要求25所述的制备肽的方法，其中该发酵食材可进行一纳米过滤 处理。
29.一种制备含有抗高血压特性的肽的功能性食品的方法，该方法包括下 列步骤：
(i)根据权利要求9到24任一项所述的方法来制备一发酵食材；以及
(ii)以适当方式包装该发酵食材，以得到一功能性食品。
30.权利要求29所述的制备功能性食品的方法，更进一步的包含下列中间 步骤[介于步骤(i)和(ii)之间]：
(ia)权利要求20的步骤(i)的发酵食材进一步地按照权利要求25到28 任一项所述纯化或向上浓缩该具有抗高血压特性肽的过程；以及
(ib)然后将经步骤(ia)的纯化或向上浓缩的肽添加于一食材上。
31.权利要求30所述的制备功能性食品的方法，其中该权利要求21的步 骤(ib)的食材为根据权利要求9到24任一项的制造发酵食材的方法制备的发 酵食材。
32.一种具有抗高血压特性的肽是藉由权利要求25到28任一项所述的制 备具有抗高血压特性的肽的方法而获得的。
33.一种包含具抗高血压特性的肽的功能性食品是藉由权利要求29到31 任一项所述的制备功能性食品的方法而获得的。
34.使用权利要求32所述的具有抗高血压特性的肽制造一药剂用以治疗高 血压。
35.使用权利要求33所述的包含具抗高血压特性的肽的功能性食品制一药 剂用以治疗高血压。
36.一种具有登记编号为DSM 14998的纤维二糖乳酸杆菌或其突变种。
实施例：
假如没有另外说明，每一个步骤皆可使用标准方法来进行，此标准方法例 如是描述在一般教科书中的(Maniatis，T.，Fritsch，E.F.，Sambrook， J.″Molecular Cloning.A laboratory manual″.Cold Spring Harbor Laboratories，2nd Edition/3 Volume，1989；Ausubel，F.M.，等(eds.) ″Current Protocols in Molecular Biology″.John Wiley和Sons，1995.)。
实施例1：PCR扩增反应
模板DNA(template DNA)是藉由苯酚-氯仿(phenol-chloroform)反应取 得，如前面所述述(Marmur(1961，Journal of Molecular Biology，3，208-218)。 此最终制备是在TE缓冲液+RNAse中的基因组模板DNA。
此PCR反应的制备如下所述：
(i)1.0μl的模板DNA
1.0μl的前置引物(forward primer)(5pmol/μl)
1.0μl的反置引物(reverse primer)(5pmol/μl)
1.0μl 2.5mM的dNTD(dATP、dCTP、dGTP及dTTP的混合物)
5.0μl Mg缓冲液(20mM MgSO4)
0.5μl DNA聚合酶(Pwo，100U)
10.5μl水(H2O)
(ii)PCR扩增的热程序是在94℃下1分钟30个循环，在50℃下90秒(当 引物Tm在55℃左右)，55℃下90秒(当引物Tm在62℃左右)，45℃下90秒(当 引物Tm在50℃左右)以及在72℃下1分钟。在30个循环完成后，这些样品在 4℃下进行冷却。
(iii)此PCR产品在60V、1.5％琼脂糖凝胶(agarose gel)上跑电泳，在 紫外光下自琼脂糖凝胶中分离，并根据制造商操作指南(Qiagen，Cat.No. 28704)来使用器材QIAquick Gel Extraction Kit进行纯化。
实施例2：蛋白水解(ACE)活性分析
贮存培养菌(stock culture)的制备
乳酸杆菌(Lactobacillus)种是形成在耐甲氧西林葡萄球菌琼脂(MRS agar) 上，并在厌氧性(anaerobically)、37℃的环境下培养48小时，选择单一菌落 (colony)，再接种至MRS培养液中，并于37℃下成长整晚。乳酸杆菌种是形成 在M17琼脂上，并在好氧性(aerobically)、30℃的环境下培养48小时，选择 单一菌落，再接种至M17培养液中，并于30℃下过夜培养。准备来自隔夜的贮 存培养菌，将其贮存在-80℃的20％甘油中。
发酵牛奶的制备与肽的抽取
将实施例1的隔夜贮存培养菌(1％v/v)接种至200毫升新鲜牛奶中进行发 酵，并依据使用的菌种保持温度整夜在37℃或30℃。
在该新鲜牛奶中，肽的抽取可藉由使用下列方案来达成：
-在室温下进行10分钟、3000g的离心。
-分离出上层液，并以NaOH调pH值至8.3(ACE活性试验的最佳pH值)。
-在室温下对取得的上层液进行10分钟、3000g的离心。
-分离出上层液(乳浆)，其包含肽。
-利用Lowry试验(Lowry等，1951.J.Biol.Chem.，193：265-275)， 测定在乳浆中的肽浓度(每毫升乳浆中含有的肽毫克数)。
此乳浆直接以ACE分析并在-20℃下冷冻，且此乳浆浆包含肽成分，其在 实施例3中称为“肽溶液”。
ACE活性分析
发酵牛奶中的肽进行体外(in vitro)ACE活性试验。肽浓度为DL 50(mg/ml)，其抑制50％的ACE活性，较低的此值是具有较佳的发酵牛奶的抗 高血压功效。抽取出的肽是以下列的方案来进行量测：
此试验分析主要是ACE退化一HHL(hippuryl-L-histidyl-L-leucine)基 质，并加入染色剂(color reagent)进行染色。若存在有肽，此肽抑制ACE，并 有较少的HHL基质退化，也就是在加入染色剂之后，形成有较少的颜色。
溶液制备：
培养缓冲液(Incubation buffer)：188mmol/l硼酸，pH值8.3，及1.375 mmol/l的氯化钾。(将2.91克硼酸与25.63克氯化钾溶解在200ml的蒸馏水 中，以1mol/l的氢氧化钾(potassium hydroxide)将pH值调整为8.3，并以 蒸馏水稀释至250毫升；贮存在室温下)。
基质溶液(Substrate solution)：5.8mmol/l的HHL(hippuryl-L-histidyl -L-leucine)。(将250毫克的HHL溶解在约90毫升的培养缓冲液中，并以相 同缓冲液填充成100毫升，40℃贮存，此基质溶液可使用至少2星期)。
停止溶液(Stop solution)：100mmol/l的HEPES，pH值为9，2.5mmol 的EDTA。(将23.83克的HEPES与0.93克的EDTA溶解在800毫升的蒸馏水中， 以1mol/l的氢氧化钠将pH值调整为9，并以蒸馏水稀释至1升。室温贮存。)
染色剂：136mmol/l的三聚氯氰(cyanuric chloride)在1，4-二氧杂环乙 烷(1，4-dioxane)中。(将12.50毫克的三聚氯氰溶解在400毫升的1，4-二氧杂 环乙烷中，并以1，4-二氧杂环乙烷填充至500毫升，贮存在室温下及暗棕色玻 璃瓶内)。
分析：(所有溶液先平衡至室温)
-制造一经由培养缓冲液连续稀释的肽溶液，连续6次稀释将未稀释的 肽溶液稀释至完全(只有培养缓冲液)。
-对每次稀释而言，于一玻璃管中放置10μl的肽溶液、40μl的基 质(HHL)溶液(2.5g/l)以及2.5μl的ACE(0.25单位/毫升)。
-阳性对照包括2.5μl的ACE、10μl的培养缓冲液以及40μl的基 质(HHL)溶液。
-阴性对照包括12μl的培养缓冲液以及40μl的基质(HHL)溶液。
-在37℃下培养1小时。
-加入300μl的停止溶液停止反应，随后以150μl的染色剂混合。
-容许其沉积5分钟，并在室温下以3300g离心30分钟，以去除变质 的蛋白质和过量的三聚氯氰。
-搬移每一样品的300μl上层液至微量滴定盘(microtiter plate)的 孔洞中。
-在405nm下对照水进行读取。
ACE抑制百分比是以下列公式表示：

每次稀释具有其所属的ACE抑制百分比值，其是提供一曲线表示ACE抑制 百分比与乳浆的肽浓度的函数。DL50(具50％抑制活性的肽浓度)的获得是藉由 读取位在该曲线与轴上对应的50％ACE抑制点的交叉点的肽浓度而得到。
实施例3：分析prtH200，orfF3与orfF4基因序列在不同细菌中的存在
研究不同乳酸菌种中prtH200、orfF3与orfF4基因序列的存在。进行 在实施例1所描述的PCR反应，表1a显示利用PCR引物组用来研究prtH200 基因编码成一蛋白酶的存在。表1b显示利用PCR引物组用来研究orfF3基因 存在。表1c显示利用PCR引物组用来研究orfF4基因存在。
在这些表中也提供扩增PCR片段的预计长度，且该预计长度是基于 prtH200 SEQ ID NO 1，orfF3 SEQ ID NO 3以及orfF4 SEQ ID NO 5来决定。
表1a(prtH200蛋白酶)   引物组编号   序列   PCR片段的   预计长度   (a)   (S)：5’CGATGATAATCCTAGCGAGC3’，   (A)：5’TGGCAGAACCTGTGCCTA3’   620bp   (b)   (S)：5’GCCAAGACGCCTCTGGTA3’，   (A)：5’TAGGTATAGTTTCCATCAGGA3’   313bp   (c)   (S)：5’AARGTWCCWTAYGGYYWYAAYTA3’，   (A)：5’GCCATDSWDGTRCCDSWCATDTK3’   624bp
表1b(orfF3蛋白酶)   引物组编号   序列   PCR片段的   预计长度   (a)   (S)：5’CGAAGGCGATAAGTCAAACTTTGATAATGC3’，   (A)：5’CCCGGTTCTGTAAGATAATTTGGATCG3’   1605bp   (b)   (S)：5’ASTCWRRYTTYGATRATGCW3’，   (A)：5’BHKYAMSAWARTTTGGATCR3’   1587bp
有义序列(S)，反义序列(A)
表1c(orfF4蛋白酶)   引物组编号   序列   PCR片段的   预计长度   (a)   (S)：5’GGTGTTGCTCCTGAAGC3’     (A)：5’ACTCTAGCACCAGCTAATTGAACATCATG3   950
有义序列(S)，反义序列(A)
表2是显示PCR研究的所有结果。
表2：   种   Ref   (CHCC)   p：   (a)   p：   (b)   p：   (c)   o3：   (a)   o3：   (b)   o4   (a)   Lb.helveticus   5951   +   +   +   +   +   +   Lb.helveticus   4080   -   -   -   -   -   -   Lb.helveticus   3610   +   +   +   -   -   ？   Lb.helveticus   637   -   -   -   +   ？   +   Lb.helveticus   3552   -   -   -   -   ？   +   Lb.helveticus   DSM13137   -   -   ？   +   ？   +
“p：”为prtH200引物组；“o3：”为orfF3引物组；“o4：”为orfF4引物组；
“+”代表一正PCR片段；“-”代表无PCR片段或一负PCR片段；“？”代表无测试。
“Lb.helveticus DSM 13137”描述在WO01/32836(Valio Ltd)。
表2的正片段是在表1所给予的预期大小内，其皆为DNA序列，且确定包含 一个与一预期的DNA序列一致的DNA序列。
根据本发明，具有参考编号5951的特殊菌包含有prtH200、orfF3与orfF4 基因序列。
实施例4：ACE活性
在实施例3介绍的菌种培养菌按照实施例2中所述进行ACE活性试验，其试 验结果如表3所示。
表3.   使用培养菌   具DL50(mg/ml)抗高血压效用   三次测定平均   Lb.helveticus 5951   2.99   Lb.helveticus 4080   2.34   Lb.helveticus 637   3.32
实施例5：抗高血压特性的体内(in vivo)试验
材料与方法
菌种与培养(Strains and cultivation)
将菌种涂布在耐甲氧西林葡萄球菌琼脂(MBS agar)上，并在厌氧性、37℃ 的环境下培养48小时，选择一菌落(colony)，再接种至MRS培养液中，并 于37℃下过夜培养。准备来自隔夜的贮存培养菌，将其贮存在-80℃的20％甘 油中；再将这一菌种1％(v/v)置于新鲜牛奶中作为发酵之用，并放置于牛奶中 培养一整夜。
样品的制备
浓缩发酵牛奶：
将含有单一或混合菌落菌种的牛奶利用一1％(v/v)接种层级发酵16小 时，全部发酵产物经冷冻干燥。第二次发酵，在与第一次发酵的相同条件下进 行发酵，经离心后取得乳浆部分，其颗粒状物已去除，并将乳浆通过0.45mm 滤膜进行过滤并冷冻。在喂食大鼠之前，此乳浆是用来溶解冷冻干燥乳浆粉末 并利用因素5(factor 5)使之浓缩。
自发性高血压大鼠(Spontaneous Hypertensive Rats)：
自发性高血压大鼠(SHR)来自于IFFA CRED0(a Charles River company)， 里昂，法国。
每一次治疗在9:00至9:15之间以胃管灌食法实施，且每一只动物接受 总体积为2毫升的剂量。
实验设计：
共分成三组别：
第1组(n＝16)：接受治疗1(牛奶；n＝16)
第2组(n＝12)：接受连续治疗2-7，每一次实施间隔3天的空窗期
第3组(n＝12)：接受连续治疗8-12，每一次实施间隔3天的空窗期
研究参数(Investiga ted parameters)：
在喂食5及24小时后，利用体积变化描记器(plethysmography)测定清醒 的SHR在不同时间点的心脏收缩压。
在所有SHR进行实验之前，先使其适应动物场合9星期，此外，在进 行第一次灌食之前，所有动物需先习惯胃管灌食法，并测量3天的心脏收 缩压。
第1组的心脏收缩压的测定与第2组及第3组相平行，作为对照组。
在喂食前6小时及喂食后24小时之间，定期测定其心脏收缩压。
结果
在表4显示在服用不同物质用量后，5及24小时的心脏收缩压的变动 情形。
表4：   牛奶   水  ACE抑制药物  Enalapril   Calpis   商业产品   CHCC   4080   CHCC   5951   CHCC   637   5小时   -4   -4  -30   -13   -14   -18   -8   24小时   -4   -2  -17   +2   -1   -19   -8
牛奶：样品为未发酵的牛奶，9.5％再生脱脂乳。
Enalapril：通常用于治疗高血压患者的药物。以20mg/kg的高浓度添加到牛奶 中，以测试大鼠对抗高血压组合物反应的能力。
Calpis商业产品：Calpis食品公司(Calpis Food Industry)的商业产品，该产 品名称为Calpis，其是Lb.Helveticus和Saccharomyces cerevisiae菌种混合物的液 态发酵牛奶。
CHCC 4080：CHCC 4080发酵的浓缩牛奶
CHCC 5951：CHCC 5951发酵的浓缩牛奶
CHCC 637：CHCC 637发酵的浓缩牛奶
上述结果证明， CHCC 5951为乳酸菌种，其具有制造最好的高血压特性 的肽的能力。表2(上述)显示此菌种包含在此描述的prtH200、orfF3与 orfF4，在24小时，使用CHCC 5951菌种产生的肽具有的效用可与药剂 Enalapril相比。
CHCC 4080没有包含任何基因。CHCC 637包含有orfF3与orfF4基因而没 有prtH200基因。
如上所述，Calpis Food Industry的商业产品是藉由使用CP790乳酸菌制 造的，且此菌种并不包含有prtH200[Yamamoto等(2000)]。
实施例6：使用CHCC5951菌种的体内试验
菌种与培养与SHR大鼠：与实施例5相同
样品的制备
发酵牛奶：
将含有单一或混合菌落菌种的牛奶利用一1％(v/v)接种层级发酵16小 时，全部发酵产品经冷冻干燥。第二次发酵，在与第一次发酵的相同条件下进 行发酵，经离心后取得乳浆部分，其颗粒状物已去除，并将乳浆通过0.45mm 滤膜进行过滤并冷冻。在喂食大鼠之前，此乳浆是用来溶解冷冻干燥乳浆粉末 并利用不同因素使之浓缩。
实验设计：
动物：自发性高血压大鼠(22周大)
组别：(1)安慰剂(牛奶)
(2)样品1(在3不同乳浆浓缩3剂量的发酵牛奶；剂量1：因素1， 剂量2：因素2.5，剂量3：因素5)
(3)样品2(悬浮在中性pH值牛奶中的冷冻干燥发酵牛奶)
(4)样品3(只是发酵牛奶产品)
(5)样品4(在发酵后经过加热处理的发酵牛奶)
(5)样品5(未经过发酵，但具有活乳酸菌的牛奶)
所有大鼠均在10:00h与10:05h之间给予喂食，喂食剂量为2ml产品。
研究参数(Investigated parameters)：在喂食24小时后，利用自动测量 仪(Data Sciences Int.)检测清醒的SHR在不同时间点的心脏收缩压。在施药 前24小时和施药后48小时每15分钟记录心脏收缩、心脏舒张压的平均值(1 分钟内)。
藉由这些追踪记录，计算每一组别的心脏收缩压与心脏舒张压的24小时 平均值。再者，心脏收缩压与心脏舒张压的变动是由本体相较于未经治疗数值 经计算产生，其是计算喂食24小时，且在喂食后的时间3至6、12至15及21 至24小时周期。
在所有SHR进行实验之前，先使其适应动物场合9星期，此外，在进行第 一次灌食之前，所有动物需先习惯胃管灌食法，并测量3天的心脏收缩压。
统计资料(Statistics)
所有结果皆以平均值±平均标准误差来表示。
结果表
表1.经胃管喂食后的心脏收缩压 组别                  周期                      变动vs.未经治疗1 0-24 3-6 12-15 21-24     0-24   3-6   12-15   21-24 安慰剂1 样品1 剂量1 剂量2 剂量3 184±6   178± 178± 178± 184±6   172± 175± 174± 183±5   176± 172± 175± 190±8   184± 184± 186±         -     -     -       -   -9.6±2.7   -       -   -   -       -   -   - 安慰剂2 样品2 样品3 样品4 样品5 176±9 169± 170± 170± 180± 169±9 163± 168± 167± 180± 179±9 172± 169± 172± 181± 161±9 166± 165± 168± 178±                      变动vs.未经治疗2       -     -     -     5.2±1.     -5.9±2.7   -0.6±3.1   -1.3±4.4   11.4±6.     -   -   -   2.6±2.2     -   -   -   7.1±2.8
*：p＜0.05vs.安慰剂(placebo)
安慰剂1及安慰剂2分别作为研究编号1与研究编号2的对照组。
表2.胃管喂食后的心脏舒张压  组别                    周期                      变动vs.安慰剂 0-24 3-6 12-15 21-24 0-24 3-6 12-15 21-24  未经治疗1  样品1  剂量1  剂量2  剂量3 126±   120± 122± 123± 127±   118± 120± 120± 124±   118± 120± 121± 129±   124± 129± 128±     - - -     - - -     - - -     -5.3±2.4 -0.3±2.3 -1.4±1.6  未经治疗2  样品2  样品3  样品4  样品5 131±5 123± 126± 127± 133± 125±5 119± 127± 126± 135± 134±5 125± 125± 128± 133± 125±5 119± 121± 123± 130±   - - - 3.2±2.3   - 2.7±2.6 1.2±3.5 9.7±5.5   - - - -   -5.7±3.3 -4.1±2.3 -2.5±2.6 4.8±3.3
*：p＜0.05vs.未经治疗
未经治疗1及未经治疗2分别作为研究编号1与研究编号2的对照组
结果显示没有必要向上浓缩(up-concentrate)发酵牛奶产品。样品3只是 发酵牛奶产品，其与冷冻干燥浓缩发酵样品1(剂量1，2，3)和样品2具有 相当的降血压作用。
样品2为悬浮在中性pH值牛奶中的冷冻干燥发酵牛奶，其可降低血压。证 明在此描述的发酵产品具有广泛的应用，这是由于其可溶解在不同液体中，以 得到一必须最终的适当使用。不同pH值的特性不一定影响产品的血压还原活性。
经发酵后加热处理的样品4也可降低血压，大体上，所有在此样品内的细 菌皆被杀死，因此，即证明在最终产品中并不需要活的细菌。
样品5没有经过发酵，但其含有活的细菌，其无法降低血压，故证明发酵 步骤为必要的。
实施例7：脉冲式凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis，PFGE) 分析鉴定
纤维二糖乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)种CHCC5951(寄存编号为 DSM 14998)在37℃标准MRS培养基中过夜培养，并使用Qiagen试剂盒来分离 出染色体DNA。此分离出的染色体DNA使用限制酶SmaI做完全消化(根据操作 说明进行)。
消化DNA的电泳条件为：CHEF Mapper XA系统，在5.3V/cm下，脉冲时间2 至30秒线性跳跃超过24小时，1.1％琼脂糖，1/2×TBE，14℃。
用来跑凝胶的程序为：
参数                            PFGE程序标号
                   1      2      3         4      5      6
起始打开时间/秒    2      3      2         2      3      1
最终关闭时间/秒    30     80     60        40     18     10
跳跃因素           线性   -1.53  -1.24     线性   线性   线性
跑时间/小时        24     24     24        24     24     21
使用Gel Compar II程序在计算机上比较这些频带。
频带大小是藉由测量在三个独立PFGE上的频带移动距离，以及与这些距离 相关联的具已知频带大小的标准移动来决定。此频带大小为三个量测值的平均 值±5kbp。
琼脂的实验结果如图1所示，所示的12个频带的大小为：
频带编号1：283kbp
频带编号2：259kbp
频带编号3：219kbp
频带编号4：138kbp
频带编号5：127kbp
频带编号6：119kbp
频带编号7：106kbp
频带编号8：88kbp
频带编号9：71kbp
频带编号10：59kbp
频带编号11：54kbp
频带编号12：46kbp
参考文献：
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atg agg aga aac aaa tat gca ggc tta tta gtt tgt gcc act act cta     48
Met Arg Arg Asn Lys Tyr Ala Gly Leu Leu Val Cys Ala Thr Thr Leu
1               5                   10                  15
tcc gtc gta tct gtg ttc tct act gcc gaa caa caa gtt aag gct agt     96
Ser Val Val Ser Val Phe Ser Thr Ala Glu Gln Gln Val Lys Ala Ser
            20                  25                  30
gtt gac agc caa aca aaa act gtt gaa aaa agt act aaa gca gca gaa    144
Val Asp Ser Gln Thr Lys Thr Val Glu Lys Ser Thr Lys Ala Ala Glu
        35                  40                  45
tct act aca gca aat tta act aac aaa gca gtt gaa gcg caa tta gcc    192
Ser Thr Thr Ala Asn Leu Thr Asn Lys Ala Val Glu Ala Gln Leu Ala
    50                  55                  60
gca aaa ggt gtt aat ttt aaa cac tta act gtt aat caa aaa caa gat    240
Ala Lys Gly Val Asn Phe Lys His Leu Thr Val Asn Gln Lys Gln Asp
65                  70                  75                  80
gta tat gtt gat gta att gtt cag tta tcg gct acc cca gct gct act    288
Val Tyr Val Asp Val Ile Val Gln Leu Ser Ala Thr Pro Ala Ala Thr
                85                  90                  95
aat ggc tca gta agt gct aat tca agt agc gca gaa att gaa caa gct    336
Asn Gly Ser Val Ser Ala Asn Ser Ser Ser Ala Glu Ile Glu Gln Ala
            100                 105                 110
tct aaa aaa gta att gcc aat caa gct tct att aag gaa aaa gtt aag    384
Ser Lys Lys Val Ile Ala Asn Gln Ala Ser Ile Lys Glu Lys Val Lys
        115                 120                 125
gca att act aac caa gca att ggt aaa agt tat ggt tat gta gtt aac    432
Ala Ile Thr Asn Gln Ala Ile Gly Lys Ser Tyr Gly Tyr Val Val Asn
    130                 135                 140
gga ttt gca acc aaa gca aaa gta aag gat att caa aaa cta aga aat    480
Gly Phe Ala Thr Lys Ala Lys Val Lys Asp Ile Gln Lys Leu Arg Asn
145                 150                 155                 160
atc cct ggg gtt aaa tca gta act tta gct aaa gtt tat tac gca aat    528
Ile Pro Gly Val Lys Ser Val Thr Leu Ala Lys Val Tyr Tyr Ala Asn
                165                 170                 175
gat tct tca gct gac aat atg gct aac gtt tca acc gtt tgg aac aat    576
Asp Ser Ser Ala Asp Asn Met Ala Asn Val Ser Thr Val Trp Asn Asn
            180                 185                 190
tat aaa tac aaa ggg gaa ggt acc gtc gtt tct atc atc gat act ggt    624
Tyr Lys Tyr Lys Gly Glu Gly Thr Val Val Ser Ile Ile Asp Thr Gly
        195                 200                 205
att gat ccc aat cac aaa gat ttg cgc tta agc gat gat tcc aag gtc    672
Ile Asp Pro Asn His Lys Asp Leu Arg Leu Ser Asp Asp Ser Lys Val
    210                 215                 220
aaa tta acc aaa gat aag gtt aat gct ttt act aaa gaa tct ggt tat    720
Lys Leu Thr Lys Asp Lys Val Asn Ala Phe Thr Lys Glu Ser Gly Tyr
225                 230                 235                 240
ggt cgt tac ttt act gat aaa gtg cca tac ggt cac aat tat tca gac    768
Gly Arg Tyr Phe Thr Asp Lys Val Pro Tyr Gly His Asn Tyr Ser Asp
                245                 250                 255
aat aat gat aat att acc gat gat aat cct agc gag caa cat ggt atg    816
Asn Asn Asp Asn Ile Thr Asp Asp Asn Pro Ser Glu Gln His Gly Met
            260                 265                 270
cac gtt gct ggt atc gta gct gcc aat ggt act gcc gat tct gtt aac    864
His Val Ala Gly Ile Val Ala Ala Asn Gly Thr Ala Asp Ser Val Asn
        275                 280                 285
tct gtt gtt ggt gtt gcc cca gaa gct caa tta cta gct atg aag gct     912
Ser Val Val Gly Val Ala Pro Glu Ala Gln Leu Leu Ala Met Lys Ala
    290                 295                 300
ttc tct aat tca gat agt tca gcc tct act gat tct act agc att atc     960
Phe Ser Asn Ser Asp Ser Ser Ala Ser Thr Asp Ser Thr Ser Ile Ile
305                 310                 315                 320
ggt gca atc gat gat tct gcc aag ctt ggg gct gac gtt cta aac atg    1008
Gly Ala Ile Asp Asp Ser Ala Lys Leu Gly Ala Asp Val Leu Asn Met
                325                 330                 335
tca tta ggt tca gtt tct ggt gaa caa act gaa gac gat cca gaa gtt    1056
Ser Leu Gly Ser Val Ser Gly Glu Gln Thr Glu Asp Asp Pro Glu Val
            340                 345                 350
gcc gct gtt gaa cgt gcc act aag aaa ggt act gca gct gta att tct    1104
Ala Ala Val Glu Arg Ala Thr Lys Lys Gly Thr Ala Ala Val Ile Ser
         355                360                 365
gcc ggt aac tcc ggc act tca aat tca gaa att gaa ggt gtt aat aaa    1152
Ala Gly Asn Ser Gly Thr Ser Asn Ser Glu Ile Glu Gly Val Asn Lys
    370                 375                 380
gct tat tac ggg aat cct gat atg gaa act tta ggt aat cca ggc act    1200
Ala Tyr Tyr Gly Asn Pro Asp Met Glu Thr Leu Gly Asn Pro Gly Thr
385                 390                 395                 400
gca aga agt gca aca act gtt gcc tct gct gaa aac act aag gct act    1248
Ala Arg Ser Ala Thr Thr Val Ala Ser Ala Glu Asn Thr Lys Ala Thr
                405                 410                 415
aca gat gga gta act att aca tct gct gat gga aaa act act atc gca    1296
Thr Asp Gly Val Thr Ile Thr Ser Ala Asp Gly Lys Thr Thr Ile Ala
            420                 425                 430
ggt cca gaa gct act cag ctt tca gaa ggt act gac cgt gct ttc ttt    1344
Gly Pro Glu Ala Thr Gln Leu Ser Glu Gly Thr Asp Arg Ala Phe Phe
        435                 440                 445
aat gat aaa aaa ttc tac gtc gta aaa gat aag aat ggc aat tta ggc    1392
Asn Asp Lys Lys Phe Tyr Val Val Lys Asp Lys Asn Gly Asn Leu Gly
    450                 455                 460
aca ggt tct gcc aag caa tat act tct gct gta aaa ggt aaa att gca    1440
Thr Gly Ser Ala Lys Gln Tyr Thr Ser Ala Val Lys Gly Lys Ile Ala
465                 470                 475                 480
att gtc aag cgt ggt gaa ctt act ttc act gat aaa caa aaa tat gcc    1488
Ile Val Lys Arg Gly Glu Leu Thr Phe Thr Asp Lys Gln Lys Tyr Ala
                485                 490                 495
caa gaa gct ggt gcc gct ggt tta atc att gtt aac aac aaa gcc ggc    1536
Gln Glu Ala Gly Ala Ala Gly Leu Ile Ile Val Asn Asn Lys Ala Gly
            500                 505                 510
gat ata act ggc atg tta ctt aac gct ggc ttc cct act gct ggt tta    1584
Asp Ile Thr Gly Met Leu Leu Asn Ala Gly Phe Pro Thr Ala Gly Leu
        515                 520                 525
tca gct aca tca gga gaa aaa tta gta aaa tat gtt gaa gcc cat cct    1632
Ser Ala Thr Ser Gly Glu Lys Leu Val Lys Tyr Val Glu Ala His Pro
    530                 535                 540
gat gaa gca ttg aag gta agt att gtt gtc caa gcc tta aat aat tct    1680
Asp Glu Ala Leu Lys Val Ser Ile Val Val Gln Ala Leu Asn Asn Ser
545                 550                 555                 560
gct cgt caa aca gac tta atg tct gat ttc acc tca tac ggt ccc act    1728
Ala Arg Gln Thr Asp Leu Met Ser Asp Phe Thr Ser Tyr Gly Pro Thr
                565                 570                 575
tct agc ttg gca ttt aag cca gat atc tca gca cca ggt gga cat att    1776
Ser Ser Leu Ala Phe Lys Pro Asp Ile Ser Ala Pro Gly Gly His Ile
            580                 585                 590
tgg tca act caa aat aac aat ggc tat act aac atg tct ggt act tca    1824
Trp Ser Thr Gln Asn Asn Asn Gly Tyr Thr Asn Met Ser Gly Thr Ser
        595                 600                 605
atg gct tct cca ttt att gct ggt acc caa gca ctt gtt agt caa aca    1872
Met Ala Ser Pro Phe Ile Ala Gly Thr Gln Ala Leu Val Ser Gln Thr
    610                 615                 620
atg aac gac aag aat ggt gct ttc tac gca act tat caa aag atg agc    1920
Met Asn Asp Lys Asn Gly Ala Phe Tyr Ala Thr Tyr Gln Lys Met Ser
625                 630                 635                 640
gca gaa gaa aga acg cca ttt att aag act cta gaa atg aat act gca    1968
Ala Glu Glu Arg Thr Pro Phe Ile Lys Thr Leu Glu Met Asn Thr Ala
                645                 650                 655
agt att caa cct gat att agc cat gat aat gtc atc gtt tca cca cgt    2016
Ser Ile Gln Pro Asp Ile Ser His Asp Asn Val Ile Val Ser Pro Arg
            660                 665                 670
aga caa ggt gct gga ttt att aac gct aac gct act atc caa gct tta    2064
Arg Gln Gly Ala Gly Phe Ile Asn Ala Asn Ala Thr Ile Gln Ala Leu
        675                 680                 685
gct aaa aat cct tca act gta gtc agc agc aat ggc tat cct ggt gta    2112
Ala Lys Asn Pro Ser Thr Val Val Ser Ser Asn Gly Tyr Pro Gly Val
    690                 695                 700
gaa ctc aaa agt ttt aaa gat aga act ctt aat ttc caa gtt aaa ttt    2160
Glu Leu Lys Ser Phe Lys Asp Arg Thr Leu Asn Phe Gln Val Lys Phe
705                 710                 715                 720
act aac cgt acc aac aag gcc tta act tat aaa tta gca aac aat ggt    2208
Thr Asn Arg Thr Asn Lys Ala Leu Thr Tyr Lys Leu Ala Asn Asn Gly
                725                 730                 735
aaa aat tct gac gtt tac act tct gct act gat agt tct gca gtt tta    2256
Lys Asn Ser Asp Val Tyr Thr Ser Ala Thr Asp Ser Ser Ala Val Leu
            740                 745                 750
tat gat aag aag att gat ggc gca tca gtt aag gct agt ggt gac att    2304
Tyr Asp Lys Lys Ile Asp Gly Ala Ser Val Lys Ala Ser Gly Asp Ile
        755                 760                 765
ttt gtc ccg gca aat tct act aaa gaa cta act tta acc ttg acc tta    2352
Phe Val Pro Ala Asn Ser Thr Lys Glu Leu Thr Leu Thr Leu Thr Leu
    770                 775                 780
cct agt gac ttt aaa gaa aat caa tat gtt gaa ggc ttc tta aca ttt    2400
Pro Ser Asp Phe Lys Glu Asn Gln Tyr Val Glu Gly Phe Leu Thr Phe
785                 790                 795                 800
aat agt tca gat tct tca caa ttg cgt ctt cca tat atg ggc ttc ttt    2448
Asn Ser Ser Asp Ser Ser Gln Leu Arg Leu Pro Tyr Met Gly Phe Phe
                 805                 810                 815
ggc gat tgg gca agt tca gat ctt cca atc ttt gct agt ctt aat gat    2496
Gly Asp Trp Ala Ser Ser Asp Leu Pro Ile Phe Ala Ser Leu Asn Asp
            820                 825                 830
cca aat gta ttt cag cct gac aac aat atg ttt ggt aca ttg gta act    2544
Pro Asn Val Phe Gln Pro Asp Asn Asn Met Phe Gly Thr Leu Val Thr
        835                 840                 845
gta ggt aat agt tca gac aat act aat cct ggt tta agc caa gac gcc    2592
Val Gly Asn Ser Ser Asp Asn Thr Asn Pro Gly Leu Ser Gln Asp Ala
    850                 855                 860
tct ggt aac tta agt ttt gat tct tcg aaa ttt gca att tct aat gct    2640
Ser Gly Asn Leu Ser Phe Asp Ser Ser Lys Phe Ala Ile Ser Asn Ala
865                 870                 875                 880
aaa aat gca caa ttt aag tgg ttt aaa cct act tac tac tta tac aga    2688
Lys Asn Ala Gln Phe Lys Trp Phe Lys Pro Thr Tyr Tyr Leu Tyr Arg
                885                 890                 895
aac gca aac aac gtt aaa atc caa att tta gat aag aat ggt aaa gta    2736
Asn Ala Asn Asn Val Lys Ile Gln Ile Leu Asp Lys Asn Gly Lys Val
            900                 905                 910
atc aat act tta gcc tct ttg agt aac gca acc aag act tac tat aac    2784
Ile Asn Thr Leu Ala Ser Leu Ser Asn Ala Thr Lys Thr Tyr Tyr Asn
        915                 920                 925
tct caa gct caa agc tat act tat ttt gac gat gct cct tct tgg gac    2832
Ser Gln Ala Gln Ser Tyr Thr Tyr Phe Asp Asp Ala Pro Ser Trp Asp
    930                 935                 940
ggc aca tac ttc gat caa caa gct aat aaa act gtt aat gct cct gat    2880
Gly Thr Tyr Phe Asp Gln Gln Ala Asn Lys Thr Val Asn Ala Pro Asp
945                 950                 955                 960
gga aac tat acc tac aga att tct gca act atc gat gga act aat act       2928
Gly Asn Tyr Thr Tyr Arg Ile Ser Ala Thr Ile Asp Gly Thr Asn Thr
                965                 970                 975
gaa caa cat tac gat atc cct gtt aaa gtt gac agt gtt gca cct gta       2976
Glu Gln His Tyr Asp Ile Pro Val Lys Val Asp Ser Val Ala Pro Val
            980                 985                 990
gta aag aac ctt aaa tta gaa tca  agc aag gtt gaa gat  gct aaa ggt     3024
Val Lys Asn Leu Lys Leu Glu Ser  Ser Lys Val Glu Asp  Ala Lys Gly
        995                 1000                 1005
caa gag  caa aca cgt tac tac  tta tct gca gaa gca  aaa gat gaa        3069
Gln Glu  Gln Thr Arg Tyr Tyr  Leu Ser Ala Glu Ala  Lys Asp Glu
    1010                 1015                 1020
ctc agt  ggt tta agt gga gac  gca aat gtt tct gtc  aat ggc gtt        3114
Leu Ser  Gly Leu Ser Gly Asp  Ala Asn Val Ser Val  Asn Gly Val
    1025                 1030                 1035
tca gct  caa tta gaa tac gat  cct act gct aag gct  gat aag gat        3159
Ser Ala  Gln Leu Glu Tyr Asp  Pro Thr Ala Lys Ala  Asp Lys Asp
    1040                 1045                 1050
ggt ttc  caa aaa gtg gaa atc  gat tta tcc cca gct  caa gca aag        3204
Gly Phe  Gln Lys Val Glu Ile  Asp Leu Ser Pro Ala  Gln Ala Lys
    1055                 1060                 1065
gct ctt  caa gca ggt aca aac  acc ttt tct gtt gcc  tta ttc gat        3249
Ala Leu  Gln Ala Gly Thr Asn  Thr Phe Ser Val Ala  Leu Phe Asp
    1070                 1075                 1080
aat gct  gca aat gca ggt aca  gct tca ggt gaa ggc  aat aaa cca        3294
Asn Ala  Ala Asn Ala Gly Thr  Ala Ser Gly Glu Gly  Asn Lys Pro
    1085                 1090                 1095
ggt gaa  act aac ttc ggt tta  gtt ctt aga aac ggt  ggc tta cca        3339
Gly Glu  Thr Asn Phe Gly Leu  Val Leu Arg Asn Gly  Gly Leu Pro
    1100                 1105                 1110
gac aaa  atc tca tct caa act  aag ggc tac gat gcc  aaa aat ggt        3384
Asp Lys  Ile Ser Ser Gln Thr  Lys Gly Tyr Asp Ala  Lys Asn Gly
    1115                 1120                 1125
act tat  gta ttc tct ggt act  tac cca agc aaa ctc  tat gga act        3429
Thr Tyr  Val Phe Ser Gly Thr  Tyr Pro Ser Lys Leu  Tyr Gly Thr
    1130                 1135                 1140
tac act  gat aaa gat ggt caa  acc cat gac tta aat  gta gaa agt        3474
Tyr Thr  Asp Lys Asp Gly Gln  Thr His Asp Leu Asn  Val Glu Ser
    1145                 1150                 1155
gat ggc  aac aag tta ttc gtt  gca aag ctt cca ctt  tct aaa gat        3519
Asp Gly  Asn Lys Leu Phe Val  Ala Lys Leu Pro Leu  Ser Lys Asp
    1160                 1165                 1170
gac tat  aag act act gtt acc  ctt tac gct gat tct  gac cat aag    3564
Asp Tyr  Lys Thr Thr Val Thr  Leu Tyr Ala Asp Ser  Asp His Lys
    1175                 1180                 1185
acc ttg  ctt aag aaa caa gac  att acc gta agc tta  gtc cca gct    3609
Thr Leu  Leu Lys Lys Gln Asp  Ile Thr Val Ser Leu  Val Pro Ala
    1190                 1195                 1200
aag gtc  gaa agt ttg tct gta  gat aag aat gat act  tat gat gag    3654
Lys Val  Glu Ser Leu Ser Val  Asp Lys Asn Asp Thr  Tyr Asp Glu
    1205                 1210                 1215
act aaa  gat tcg tcg gct gca  tta gct caa act tct  gaa aac act    3699
Thr Lys  Asp Ser Ser Ala Ala  Leu Ala Gln Thr Ser  Glu Asn Thr
    1220                 1225                 1230
gta aaa  ctt tct ggt aaa gta  agt ggt gat act aag  act tta gtg    3744
Val Lys  Leu Ser Gly Lys Val  Ser Gly Asp Thr Lys  Thr Leu Val
    1235                 1240                 1245
gtt aaa  caa aaa ggt cag aaa  gac atc tca gtt aaa  ctt aat gct    3789
Val Lys  Gln Lys Gly Gln Lys  Asp Ile Ser Val Lys  Leu Asn Ala
    1250                 1255                 1260
gat cac  aca ttt agt act gaa  ctg cca gta agc ttt  ggt gaa aat    3834
Asp His  Thr Phe Ser Thr Glu  Leu Pro Val Ser Phe  Gly Glu Asn
    1265                 1270                 1275
gac ttt  act att gta gca acc  gac tct aat ggt aat  tca tct agt    3879
Asp Phe  Thr Ile Val Ala Thr  Asp Ser Asn Gly Asn  Ser Ser Ser
    1280                 1285                 1290
gta gaa  caa aaa gtt aaa tct  agt gat cgt ggt aaa  act act gtt    3924
Val Glu  Gln Lys Val Lys Ser  Ser Asp Arg Gly Lys  Thr Thr Val
    1295                 1300                 1305
tca agt  agt gat gtt acc ttc  gat aac ggt atc aag  tgg ggt act    3969
Ser Ser  Ser Asp Val Thr Phe  Asp Asn Gly Ile Lys  Trp Gly Thr
    1310                 1315                 1320
cgt aac  gtt aac ggt att cgt  aac gtt aac gcc aag  act aag aac    4014
Arg Asn  Val Asn Gly Ile Arg  Asn Val Asn Ala Lys  Thr Lys Asn
    1325                 1330                 1335
tac aat  cct aag act ggt gag  tta acc ctt act ggt  aaa gta aaa    4059
Tyr Asn  Pro Lys Thr Gly Glu  Leu Thr Leu Thr Gly  Lys Val Lys
    1340                 1345                 1350
aga cca  act act act ttg caa  att ggc ggt aaa aac  gta aaa att    4104
Arg Pro  Thr Thr Thr Leu Gln  Ile Gly Gly Lys Asn  Val Lys Ile
    1355                 1360                 1365
aat tca  gat cag aca ttt aaa  gta gta tta aat att  ggt act cat    4149
Asn Ser  Asp Gln Thr Phe Lys  Val Val Leu Asn Ile  Gly Thr His
    1370                 1375                 1380
ggt gct  aag att ttc cct gcg  ttg atc ggt gat tca  act gtt aga    4194
Gly Ala  Lys Ile Phe Pro Ala  Leu Ile Gly Asp Ser  Thr Val Arg
    1385                 1390                 1395
gaa act  act caa gaa aga tta  agt ttc tat gta gat  gca gaa gct    4239
Glu Thr  Thr Gln Glu Arg Leu  Ser Phe Tyr Val Asp  Ala Glu Ala
    1400                 1405                 1410
cct act  ttg aac tta gat agt  gaa aac act gtc tac  acc aac aag    4284
Pro Thr  Leu Asn Leu Asp Ser  Glu Asn Thr Val Tyr  Thr Asn Lys
    1415                 1420                 1425
gat aag  ttt act atc tca ggc  act ata agt gat gat  tac aag ttc    4329
Asp Lys  Phe Thr Ile Ser Gly  Thr Ile Ser Asp Asp  Tyr Lys Phe
    1430                 1435                 1440
tac gac  tta tca ata aat ggt  aac gat gtt gaa act  agc tgg agc    4374
Tyr Asp  Leu Ser Ile Asn Gly  Asn Asp Val Glu Thr  Ser Trp Ser
    1445                 1450                 1455
gcc gta  gac tac cac agc aaa  gaa ggt atc aag aag  aac ttt aag    4419
Ala Val  Asp Tyr His Ser Lys  Glu Gly Ile Lys Lys  Asn Phe Lys
    1460                 1465                 1470
cat gaa  gtt gac ttg aag aaa  ggt aag aat act ttt  aac gtt aaa    4464
His Glu  Val Asp Leu Lys Lys  Gly Lys Asn Thr Phe  Asn Val Lys
    1475                 1480                 1485
gta act  gac att cag ggt aac  tca agt tca caa gca  tta gtt gta    4509
Val Thr  Asp Ile Gln Gly Asn  Ser Ser Ser Gln Ala  Leu Val Val
    1490                 1495                 1500
tac tat  gaa cct gct aag act  tta gct gag cct agt  gta gac aag    4554
Tyr Tyr  Glu Pro Ala Lys Thr  Leu Ala Glu Pro Ser  Val Asp Lys
    1505                 1510                 1515
ttg tta  aca aag acg gca aat  ttg caa ctt ctt aaa  gct act act    4599
Leu Leu  Thr Lys Thr Ala Asn  Leu Gln Leu Leu Lys  Ala Thr Thr
    1520                 1525                 1530
gat gaa  tct gaa gct aaa gtt  gtt tac agc ctt gat  aat ggc aag    4644
Asp Glu  Ser Glu Ala Lys Val  Val Tyr Ser Leu Asp  Asn Gly Lys
    1535                 1540                 1545
aca ttc  aac gat gta cca gct  gat ggt ttc aag gtt  act gaa aac    4689
Thr Phe  Asn Asp Val Pro Ala  Asp Gly Phe Lys Val  Thr Glu Asn
    1550                 1555                 1560
gga act  gta caa ttt aaa gca  gtt gat aaa tac ggc  aac gaa tcc    4734
Gly Thr  Val Gln Phe Lys Ala  Val Asp Lys Tyr Gly  Asn Glu Ser
    1565                 1570                 1575
aaa gtc  aag tct gta gaa att  aag gga ctt aac aag  gaa aac caa    4779
Lys Val  Lys Ser Val Glu Ile  Lys Gly Leu Asn Lys  Glu Asn Gln
    1580                 1585                 1590
cct agc  gaa gat aag gaa tta  gct aag gct aag gaa  aat ctt cag    4824
Pro Ser  Glu Asp Lys Glu Leu  Ala Lys Ala Lys Glu  Asn Leu Gln
    1595                 1600                 1605
gct aag  gtt gat gcc ggt gaa  aag aag gat ctt gat  aag tac act    4869
Ala Lys  Val Asp Ala Gly Glu  Lys Lys Asp Leu Asp  Lys Tyr Thr
    1610                 1615                 1620
gct gac  tcc aag aag gac ttc  aat gat gcc ttg aag  aag gct aag    4914
Ala Asp  Ser Lys Lys Asp Phe  Asn Asp Ala Leu Lys  Lys Ala Lys
    1625                 1630                 1635
gat gtt  tta gct gac aag aat  gct aaa tta gct gac  ctt caa gat    4959
Asp Val  Leu Ala Asp Lys Asn  Ala Lys Leu Ala Asp  Leu Gln Asp
    1640                 1645                 1650
gct gct  aag gct ctt gat aag  gca gag caa gct tta  act gaa aag    5004
Ala Ala  Lys Ala Leu Asp Lys  Ala Glu Gln Ala Leu  Thr Glu Lys
    1655                 1660                 1665
cct gct  gaa cca act atc cca  ctg cta caa ggg aac  aat aat gct    5049
Pro Ala  Glu Pro Thr Ile Pro  Leu Leu Gln Gly Asn  Asn Asn Ala
    1670                 1675                 1680
gta tcg  aat att aat act tcc  tct gat aac caa gtt  gca gct cct    5094
Val Ser  Asn Ile Asn Thr Ser  Ser Asp Asn Gln Val  Ala Ala Pro
    1685                 1690                 1695
gtg cat  gct gaa aaa gac acc  aag aat gat aac aag  aat aca aca    5139
Val His  Ala Glu Lys Asp Thr  Lys Asn Asp Asn Lys  Asn Thr Thr
    1700                 1705                 1710
gaa gaa  ggt aag gac act aag  gta atg ttc aag tca  gtt ctt tac    5184
Glu Glu  Gly Lys Asp Thr Lys  Val Met Phe Lys Ser  Val Leu Tyr
    1715                 1720                 1725
act aaa  gac ctt aaa aag aca  agg agc act gcc caa  gcc tac agt    5229
Thr Lys  Asp Leu Lys Lys Thr  Arg Ser Thr Ala Gln  Ala Tyr Ser
    1730                 1735                 1740
tca ctc  aaa ctt gta acc gaa  aaa gga aag ctt aag  gtt tac aca    5274
Ser Leu  Lys Leu Val Thr Glu  Lys Gly Lys Leu Lys  Val Tyr Thr
    1745                 1750                 1755
ttc aaa  ggt cac tac ttc tac  aag gtt gtt gat cgg  aat gca tat    5319
Phe Lys  Gly His Tyr Phe Tyr  Lys Val Val Asp Arg  Asn Ala Tyr
    1760                 1765                 1770
gtt cgt  gta aga aat gtg act  ggt act aag gca acg  tta aag aga    5364
Val Arg  Val Arg Asn Val Thr  Gly Thr Lys Ala Thr  Leu Lys Arg
    1775                 1780                 1785
aat tca  ttt gtc tac caa tca  aat ggt aag aaa gca  tca cgt aaa    5409
Asn Ser  Phe Val Tyr Gln Ser  Asn Gly Lys Lys Ala  Ser Arg Lys
    1790                 1795                 1800
ctt ctc  aag aaa ggt act acc  att acc gtc tac ggc  gat caa tac    5454
Leu Leu  Lys Lys Gly Thr Thr  Ile Thr Val Tyr Gly  Asp Gln Tyr
    1805                 1810                 1815
aaa gct  ctt aag cat tac aag  aag tat gct tac aga  atc ggt gaa    5499
Lys Ala  Leu Lys His Tyr Lys  Lys Tyr Ala Tyr Arg  Ile Gly Glu
    1820                 1825                 1830
ggt aga  tac ata aag agt gtc  aat gtt aac aga gtt  gat ctt gta    5544
Gly Arg  Tyr Ile Lys Ser Val  Asn Val Asn Arg Val  Asp Leu Val
    1835                 1840                 1845
aaa taa                                                           5550
Lys
<210>2
<211>1849
<212>PRT
<213>纤维二糖乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)
<400>2
Met Arg Arg Asn Lys Tyr Ala Gly Leu Leu Val Cys Ala Thr Thr Leu
1               5                   10                  15
Ser Val Val Ser Val Phe Ser Thr Ala Glu Gln Gln Val Lys Ala Ser
            20                  25                  30
Val Asp Ser Gln Thr Lys Thr Val Glu Lys Ser Thr Lys Ala Ala Glu
        35                  40                  45
Ser Thr Thr Ala Asn Leu Thr Asn Lys Ala Val Glu Ala Gln Leu Ala
    50                  55                  60
Ala Lys Gly Val Asn Phe Lys His Leu Thr Val Asn Gln Lys Gln Asp
65                  70                  75                  80
Val Tyr Val Asp Val Ile Val Gln Leu Ser Ala Thr Pro Ala Ala Thr
                85                  90                  95
Asn Gly Ser Val Ser Ala Asn Ser Ser Ser Ala Glu Ile Glu Gln Ala
            100                 105                 110
Ser Lys Lys Val Ile Ala Asn Gln Ala Ser Ile Lys Glu Lys Val Lys
        115                 120                 125
Ala Ile Thr Asn Gln Ala Ile Gly Lys Ser Tyr Gly Tyr Val Val Asn
    130                 135                 140
Gly Phe Ala Thr Lys Ala Lys Val Lys Asp Ile Gln Lys Leu Arg Asn
145                 150                 155                 160
Ile Pro Gly Val Lys Ser Val Thr Leu Ala Lys Val Tyr Tyr Ala Asn
                165                 170                 175
Asp Ser Ser Ala Asp Asn Met Ala Asn Val Ser Thr Val Trp Asn Asn
            180                 185                 190
Tyr Lys Tyr Lys Gly Glu Gly Thr Val Val Ser Ile Ile Asp Thr Gly
        195                 200                 205
Ile Asp Pro Asn His Lys Asp Leu Arg Leu Ser Asp Asp Ser Lys Val
    210                 215                 220
Lys Leu Thr Lys Asp Lys Val Asn Ala Phe Thr Lys Glu Ser Gly Tyr
225                 230                 235                 240
Gly Arg Tyr Phe Thr Asp Lys Val Pro Tyr Gly His Asn Tyr Ser Asp
                245                 250                 255
Asn Asn Asp Asn Ile Thr Asp Asp Asn Pro Ser Glu Gln His Gly Met
            260                 265                 270
His Val Ala Gly Ile Val Ala Ala Asn Gly Thr Ala Asp Ser Val Asn
        275                 280                 285
Ser Val Val Gly Val Ala Pro Glu Ala Gln Leu Leu Ala Met Lys Ala
    290                 295                 300
Phe Ser Asn Ser Asp Ser Ser Ala Ser Thr Asp Ser Thr Ser Ile Ile
305                 310                 315                 320
Gly Ala Ile Asp Asp Ser Ala Lys Leu Gly Ala Asp Val Leu Asn Met
                325                 330                 335
Ser Leu Gly Ser Val Ser Gly Glu Gln Thr Glu Asp Asp Pro Glu Val
            340                 345                 350
Ala Ala Val Glu Arg Ala Thr Lys Lys Gly Thr Ala Ala Val Ile Ser
        355                 360                 365
Ala Gly Asn Ser Gly Thr Ser Asn Ser Glu Ile Glu Gly Val Asn Lys
    370                 375                 380
Ala Tyr Tyr Gly Asn Pro Asp Met Glu Thr Leu Gly Asn Pro Gly Thr
385                 390                 395                 400
Ala Arg Ser Ala Thr Thr Val Ala Ser Ala Glu Asn Thr Lys Ala Thr
                405                 410                 415
Thr Asp Gly Val Thr Ile Thr Ser Ala Asp Gly Lys Thr Thr Ile Ala
            420                 425                 430
Gly Pro Glu Ala Thr Gln Leu Ser Glu Gly Thr Asp Arg Ala Phe Phe
         435                440                 445
Asn Asp Lys Lys Phe Tyr Val Val Lys Asp Lys Asn Gly Asn Leu Gly
    450                 455                 460
Thr Gly Ser Ala Lys Gln Tyr Thr Ser Ala Val Lys Gly Lys Ile Ala
465                 470                 475                 480
Ile Val Lys Arg Gly Glu Leu Thr Phe Thr Asp Lys Gln Lys Tyr Ala
                485                 490                 495
Gln Glu Ala Gly Ala Ala Gly Leu Ile Ile Val Asn Asn Lys Ala Gly
            500                 505                 510
Asp Ile Thr Gly Met Leu Leu Asn Ala Gly Phe Pro Thr Ala Gly Leu
         515                520                 525
Ser Ala Thr Ser Gly Glu Lys Leu Val Lys Tyr Val Glu Ala His Pro
    530                 535                 540
Asp Glu Ala Leu Lys Val Ser Ile Val Val Gln Ala Leu Asn Asn Ser
545                 550                 555                 560
Ala Arg Gln Thr Asp Leu Met Ser Asp Phe Thr Ser Tyr Gly Pro Thr
                565                 570                 575
Ser Ser Leu Ala Phe Lys Pro Asp Ile Ser Ala Pro Gly Gly His Ile
            580                 585                 590
Trp Ser Thr Gln Asn Asn Asn Gly Tyr Thr Asn Met Ser Gly Thr Ser
        595                 600                 605
Met Ala Ser Pro Phe Ile Ala Gly Thr Gln Ala Leu Val Ser Gln Thr
    610                 615                 620
Met Asn Asp Lys Asn Gly Ala Phe Tyr Ala Thr Tyr Gln Lys Met Ser
625                 630                 635                 640
Ala Glu Glu Arg Thr Pro Phe Ile Lys Thr Leu Glu Met Asn Thr Ala
                645                 650                 655
Ser Ile Gln Pro Asp Ile Ser His Asp Asn Val Ile Val Ser Pro Arg
            660                 665                 670
Arg Gln Gly Ala Gly Phe Ile Asn Ala Asn Ala Thr Ile Gln Ala Leu
        675                 680                 685
Ala Lys Asn Pro Ser Thr Val Val Ser Ser Asn Gly Tyr Pro Gly Val
    690                 695                 700
Glu Leu Lys Ser Phe Lys Asp Arg Thr Leu Asn Phe Gln Val Lys Phe
705                 710                 715                 720
Thr Asn Arg Thr Asn Lys Ala Leu Thr Tyr Lys Leu Ala Asn Asn Gly
                725                 730                 735
Lys Asn Ser Asp Val Tyr Thr Ser Ala Thr Asp Ser Ser Ala Val Leu
            740                 745                 750
Tyr Asp Lys Lys Ile Asp Gly Ala Ser Val Lys Ala Ser Gly Asp Ile
        755                 760                 765
Phe Val Pro Ala Asn Ser Thr Lys Glu Leu Thr Leu Thr Leu Thr Leu
    770                 775                 780
Pro Ser Asp Phe Lys Glu Asn Gln Tyr Val Glu Gly Phe Leu Thr Phe
785                 790                 795                 800
Asn Ser Ser Asp Ser Ser Gln Leu Arg Leu Pro Tyr Met Gly Phe Phe
                805                 810                 815
Gly Asp Trp Ala Ser Ser Asp Leu Pro Ile Phe Ala Ser Leu Asn Asp
            820                 825                 830
Pro Asn Val Phe Gln Pro Asp Asn Asn Met Phe Gly Thr Leu Val Thr
        835                 840                 845
Val Gly Asn Ser Ser Asp Asn Thr Asn Pro Gly Leu Ser Gln Asp Ala
    850                 855                 860
Ser Gly Asn Leu Ser Phe Asp Ser Ser Lys Phe Ala Ile Ser Asn Ala
865                 870                 875                 880
Lys Asn Ala Gln Phe Lys Trp Phe Lys Pro Thr Tyr Tyr Leu Tyr Arg
                885                 890                 895
Asn Ala Asn Asn Val Lys Ile Gln Ile Leu Asp Lys Asn Gly Lys Val
            900                 905                 910
Ile Asn Thr Leu Ala Ser Leu Ser Asn Ala Thr Lys Thr Tyr Tyr Asn
        915                 920                 925
Ser Gln Ala Gln Ser Tyr Thr Tyr Phe Asp Asp Ala Pro Ser Trp Asp
    930                 935                 940
Gly Thr Tyr Phe Asp Gln Gln Ala Asn Lys Thr Val Asn Ala Pro Asp
945                 950                 955                 960
Gly Asn Tyr Thr Tyr Arg Ile Ser Ala Thr Ile Asp Gly Thr Asn Thr
                965                 970                 975
Glu Gln His Tyr Asp Ile Pro Val Lys Val Asp Ser Val Ala Pro Val
            980                 985                 990
Val Lys Asn Leu Lys Leu Glu Ser  Ser Lys Val Glu Asp  Ala Lys Gly
        995                 1000                 1005
Gln Glu  Gln Thr Arg Tyr Tyr  Leu Ser Ala Glu Ala  Lys Asp Glu
    1010                 1015                 1020
Leu Ser  Gly Leu Ser Gly Asp  Ala Asn Val Ser Val  Asn Gly Val
    1025                 1030                 1035
Ser Ala  Gln Leu Glu Tyr Asp  Pro Thr Ala Lys Ala  Asp Lys Asp
    1040                 1045                 1050
Gly Phe  Gln Lys Val Glu Ile  Asp Leu Ser Pro Ala  Gln Ala Lys
    1055                 1060                 1065
Ala Leu  Gln Ala Gly Thr Asn  Thr Phe Ser Val Ala  Leu Phe Asp
    1070                 1075                 1080
Asn Ala  Ala Asn Ala Gly Thr  Ala Ser Gly Glu Gly  Asn Lys Pro
    1085                 1090                 1095
Gly Glu  Thr Asn Phe Gly Leu  Val Leu Arg Asn Gly  Gly Leu Pro
    1100                 1105                 1110
Asp Lys  Ile Ser Ser Gln Thr  Lys Gly Tyr Asp Ala  Lys Asn Gly
    1115                 1120                 1125
Thr Tyr  Val Phe Ser Gly Thr  Tyr Pro Ser Lys Leu  Tyr Gly Thr
    1130                 1135                 1140
Tyr Thr  Asp Lys Asp Gly Gln  Thr His Asp Leu Asn  Val Glu Ser
    1145                 1150                 1155
Asp Gly  Asn Lys Leu Phe Val  Ala Lys Leu Pro Leu  Ser Lys Asp
    1160                 1165                 1170
Asp Tyr  Lys Thr Thr Val Thr  Leu Tyr Ala Asp Ser  Asp His Lys
    1175                 1180                 1185
Thr Leu  Leu Lys Lys Gln Asp  Ile Thr Val Ser Leu  Val Pro Ala
    1190                 1195                 1200
Lys Val  Glu Ser Leu Ser Val  Asp Lys Asn Asp Thr  Tyr Asp Glu
    1205                 1210                 1215
Thr Lys  Asp Ser Ser Ala Ala  Leu Ala Gln Thr Ser  Glu Asn Thr
    1220                 1225                 1230 
Val Lys  Leu Ser Gly Lys Val  Ser Gly Asp Thr Lys  Thr Leu Val
    1235                 1240                 1245
Val Lys  Gln Lys Gly Gln Lys  Asp Ile Ser Val Lys  Leu Asn Ala
    1250                 1255                 1260
Asp His  Thr Phe Ser Thr Glu  Leu Pro Val Ser Phe  Gly Glu Asn
    1265                 1270                 1275
Asp Phe  Thr Ile Val Ala Thr  Asp Ser Asn Gly Asn  Ser Ser Ser
    1280                 1285                 1290
Val Glu  Gln Lys Val Lys Ser  Ser Asp Arg Gly Lys  Thr Thr Val
    1295                 1300                 1305
Ser Ser  Ser Asp Val Thr Phe  Asp Asn Gly Ile Lys  Trp Gly Thr
    1310                 1315                 1320
Arg Asn  Val Asn Gly Ile Arg  Asn Val Asn Ala Lys  Thr Lys Asn
    1325                 1330                 1335
Tyr Asn  Pro Lys Thr Gly Glu  Leu Thr Leu Thr Gly  Lys Val Lys
    1340                 1345                 1350
Arg Pro  Thr Thr Thr Leu Gln  Ile Gly Gly Lys Asn  Val Lys Ile
    1355                 1360                 1365
Asn Ser  Asp Gln Thr Phe Lys  Val Val Leu Asn Ile  Gly Thr His
    1370                 1375                 1380
Gly Ala  Lys Ile Phe Pro Ala  Leu Ile Gly Asp Ser  Thr Val Arg
    1385                 1390                 1395
Glu Thr  Thr Gln Glu Arg Leu  Ser Phe Tyr Val Asp  Ala Glu Ala
    1400                 1405                 1410
Pro Thr  Leu Asn Leu Asp Ser  Glu Asn Thr Val Tyr  Thr Asn Lys
    1415                 1420                 1425
Asp Lys  Phe Thr Ile Ser Gly  Thr Ile Ser Asp Asp  Tyr Lys Phe
    1430                 1435                 1440
Tyr Asp  Leu Ser Ile Asn Gly  Asn Asp Val Glu Thr  Ser Trp Ser
    1445                 1450                 1455
Ala Val  Asp Tyr His Ser Lys  Glu Gly Ile Lys Lys  Asn Phe Lys
    1460                 1465                 1470
His Glu  Val Asp Leu Lys Lys  Gly Lys Asn Thr Phe  Asn Val Lys
    1475                 1480                 1485
Val Thr  Asp Ile Gln Gly Asn  Ser Ser Ser Gln Ala  Leu Val Val
    1490                 1495                 1500
Tyr Tyr  Glu Pro Ala Lys Thr  Leu Ala Glu Pro Ser  Val Asp Lys
    1505                 1510                 1515
Leu Leu  Thr Lys Thr Ala Asn  Leu Gln Leu Leu Lys  Ala Thr Thr
    1520                 1525                 1530
Asp Glu  Ser Glu Ala Lys Val  Val Tyr Ser Leu Asp  Asn Gly Lys
    1535                 1540                 1545
Thr Phe  Asn Asp Val Pro Ala  Asp Gly Phe Lys Val  Thr Glu Asn
    1550                 1555                 1560
Gly Thr  Val Gln Phe Lys Ala  Val Asp Lys Tyr Gly  Asn Glu Ser
    1565                 1570                 1575
Lys Val  Lys Ser Val Glu Ile  Lys Gly Leu Asn Lys  Glu Asn Gln
    1580                 1585                 1590
Pro Ser  Glu Asp Lys Glu Leu  Ala Lys Ala Lys Glu  Asn Leu Gln
    1595                 1600                 1605
Ala Lys  Val Asp Ala Gly Glu  Lys Lys Asp Leu Asp  Lys Tyr Thr
    1610                 1615                 1620
Ala Asp  Ser Lys Lys Asp Phe  Asn Asp Ala Leu Lys  Lys Ala Lys
    1625                 1630                 1635
Asp Val  Leu Ala Asp Lys Asn  Ala Lys Leu Ala Asp  Leu Gln Asp
    1640                 1645                 1650
Ala Ala  Lys Ala Leu Asp Lys  Ala Glu Gln Ala Leu  Thr Glu Lys
    1655                 1660                 1665
Pro Ala  Glu Pro Thr Ile Pro  Leu Leu Gln Gly Asn  Asn Asn Ala
    1670                 1675                 1680
Val Ser  Asn Ile Asn Thr Ser  Ser Asp Asn Gln Val  Ala Ala Pro
    1685                 1690                 1695
Val His  Ala Glu Lys Asp Thr  Lys Asn Asp Asn Lys  Asn Thr Thr
    1700                 1705                 1710
Glu Glu  Gly Lys Asp Thr Lys  Val Met Phe Lys Ser  Val Leu Tyr
    1715                 1720                 1725
Thr Lys  Asp Leu Lys Lys Thr  Arg Ser Thr Ala Gln  Ala Tyr Ser
    1730                 1735                 1740
Ser Leu  Lys Leu Val Thr Glu  Lys Gly Lys Leu Lys  Val Tyr Thr
    1745                 1750                 1755
Phe Lys  Gly His Tyr Phe Tyr  Lys Val Val Asp Arg  Asn Ala Tyr
    1760                 1765                 1770
Val Arg  Val Arg Asn Val Thr  Gly Thr Lys Ala Thr  Leu Lys Arg
    1775                 1780                 1785
Asn Ser  Phe Val Tyr Gln Ser  Asn Gly Lys Lys Ala  Ser Arg Lys
    1790                 1795                 1800
Leu Leu  Lys Lys Gly Thr Thr  Ile Thr Val Tyr Gly  Asp Gln Tyr
    1805                 1810                 1815
Lys Ala  Leu Lys His Tyr Lys  Lys Tyr Ala Tyr Arg  Ile Gly Glu
    1820                 1825                 1830
Gly Arg  Tyr Ile Lys Ser Val  Asn Val Asn Arg Val  Asp Leu Val
    1835                 1840                 1845
Lys
<210>3
<211>2679
<212>DNA
<213>纤维二糖乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(2679)
<223>
<400>3
atg ata aga cta ctg gga aga tgg ttg tgc tcc aga tgg tca ata cac     48
Met Ile Arg Leu Leu Gly Arg Trp Leu Cys Ser Arg Trp Ser Ile His
1               5                   10                  15
tta ccg ctt tgt tgc ccc ttg tac aac aat ggt gaa aac aaa gtt caa     96
Leu Pro Leu Cys Cys Pro Leu Tyr Asn Asn Gly Glu Asn Lys Val Gln
            20                  25                  30
act aat gac act cca gtt atc att gat act act gct cct gtt ttg aac    144
Thr Asn Asp Thr Pro Val Ile Ile Asp Thr Thr Ala Pro Val Leu Asn
        35                  40                  45
aat gtg aaa tat gat aca tct tct ttc aca ttg tca ggt gat tac gct    192
Asn Val Lys Tyr Asp Thr Ser Ser Phe Thr Leu Ser Gly Asp Tyr Ala
    50                  55                  60
gat gca ggt gca ggc ttt act gac tac tca tat gca act gta act gtt    240
Asp Ala Gly Ala Gly Phe Thr Asp Tyr Ser Tyr Ala Thr Val Thr Val
65                  70                  75                  80
aac gat cat gtc ttt ggc ttt aag tta aac gaa ggc gat aag tca aac    288
Asn Asp His Val Phe Gly Phe Lys Leu Asn Glu Gly Asp Lys Ser Asn
                85                  90                  95
ttt gat aat gct aat aaa acc aag gga cac ttt gtc ttt gtt ttg act    336
Phe Asp Asn Ala Asn Lys Thr Lys Gly His Phe Val Phe Val Leu Thr
            100                 105                 110
ccg gaa gaa caa gct gct tta act agc gct gct aac aag gtt acc gtt    384
Pro Glu Glu Gln Ala Ala Leu Thr Ser Ala Ala Asn Lys Val Thr Val
        115                 120                 125
gcc ttt agt gat gtc gca gat aac act gca acg caa aca ttt aat gtt    432
Ala Phe Ser Asp Val Ala Asp Asn Thr Ala Thr Gln Thr Phe Asn Val
    130                 135                 140
gca cct gta gca ggt cat aaa aag att gca gtt tgg aat gca att aat    480
Ala Pro Val Ala Gly His Lys Lys Ile Ala Val Trp Asn Ala Ile Asn
145                 150                 155                 160
ggg tta cca ttc aat gaa aat tcc gat gat tat aat gtt ggt cgc aaa     528
Gly Leu Pro Phe Asn Glu Asn Ser Asp Asp Tyr Asn Val Gly Arg Lys
                165                 170                 175
gta ttt atg ctt cgt ggt ggt gct gaa cat gat ttc tat gtc aat ggt     576
Val Phe Met Leu Arg Gly Gly Ala Glu His Asp Phe Tyr Val Asn Gly
            180                 185                 190
aag tgg gtt cag gtt gat caa ggt caa ttt gta ttg cca gtt agt gtt     624
Lys Trp Val Gln Val Asp Gln Gly Gln Phe Val Leu Pro Val Ser Val
        195                 200                 205
gat gaa cag aat ttt gtt ttc agt tca gat caa gcg ggt aaa aat att     672
Asp Glu Gln Asn Phe Val Phe Ser Ser Asp Gln Ala Gly Lys Asn Ile
    210                 215                 220
tta ggt aag ttc act act ttt act cct aaa gct caa ttc gca tgg caa     720
Leu Gly Lys Phe Thr Thr Phe Thr Pro Lys Ala Gln Phe Ala Trp Gln
225                 230                 235                 240
cat gtt gat ggt gaa gaa aga tca ttt ggt gtc agt gtt tac tca gta     768
His Val Asp Gly Glu Glu Arg Ser Phe Gly Val Ser Val Tyr Ser Val
                245                 250                 255
gaa ggc aag gat cca caa gat att gtt gtt caa gca tca gta ccc aag     816
Glu Gly Lys Asp Pro Gln Asp Ile Val Val Gln Ala Ser Val Pro Lys
            260                 265                 270
ggt gac aat gtt aaa gct ttt gcg aag gac tac ttc act cat gaa gtt     864
Gly Asp Asn Val Lys Ala Phe Ala Lys Asp Tyr Phe Thr His Glu Val
        275                 280                 285
tat acc ggt gag gtt cat gac ggt gta gct act ttc cac att cat acc     912
Tyr Thr Gly Glu Val His Asp Gly Val Ala Thr Phe His Ile His Thr
    290                 295                 300
agt gtc aat aaa gac gct gca act ggc att aat tta aga gcc ctt ctt     960
Ser Val Asn Lys Asp Ala Ala Thr Gly Ile Asn Leu Arg Ala Leu Leu
305                 310                 315                 320
caa ggt tgg gtt gaa att gat gga cca aca ttt aat gct aaa caa gta    1008
Gln Gly Trp Val Glu Ile Asp Gly Pro Thr Phe Asn Ala Lys Gln Val
                325                 330                 335
acg gat cca tcg cca att aat gat gct aac tac ttg ggt gtg tac tac    1056
Thr Asp Pro Ser Pro Ile Asn Asp Ala Asn Tyr Leu Gly Val Tyr Tyr
            340                 345                 350
aat cca aat gct gaa gag aga aag aat tat gat aat cgc gat gat ctt    1104
Asn Pro Asn Ala Glu Glu Arg Lys Asn Tyr Asp Asn Arg Asp Asp Leu
        355                 360                 365
ggc gta gac ttt gaa gat gaa gca gct gac aca aac aca ttt ggc cca    1152
Gly Val Asp Phe Glu Asp Glu Ala Ala Asp Thr Asn Thr Phe Gly Pro
    370                 375                 380
ggg aat tat tca agt gcg aaa gat gac gct aaa att cat ttc gac tac    1200
Gly Asn Tyr Ser Ser Ala Lys Asp Asp Ala Lys Ile His Phe Asp Tyr
385                 390                 395                 400
ttg aat aat aat ggt att tct act ttg ggt aat aaa gca gta gaa aag    1248
Leu Asn Asn Asn Gly Ile Ser Thr Leu Gly Asn Lys Ala Val Glu Lys
                405                 410                 415
ggt tat tac aat cca gca act cat aaa ttt act ttg act ggt cgg gtt    1296
Gly Tyr Tyr Asn Pro Ala Thr His Lys Phe Thr Leu Thr Gly Arg Val
            420                 425                 430
aat cca gaa gtt att agc tta aca ttc tta gct gat agt ccg tat gaa    1344
Asn Pro Glu Val Ile Ser Leu Thr Phe Leu Ala Asp Ser Pro Tyr Glu
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gtc gat cca gaa aat caa gct gat att cat gat aat ggt aaa ttc tct    1392
Val Asp Pro Glu Asn Gln Ala Asp Ile His Asp Asn Gly Lys Phe Ser
    450                 455                 460
gta aca ttc aca att gat aat cca gca aca cgt caa tta tca tat ttc    1440
Val Thr Phe Thr Ile Asp Asn Pro Ala Thr Arg Gln Leu Ser Tyr Phe
465                 470                 475                 480
ttt aag acg aat gat ggc aaa aca aca aga ggc tct ttg act tta att    1488
Phe Lys Thr Asn Asp Gly Lys Thr Thr Arg Gly Ser Leu Thr Leu Ile
               485                 490                 495
ctt gac act gtt gat cca act ctt act gta gat caa tta ggc gac aag    1536
Leu Asp Thr Val Asp Pro Thr Leu Thr Val Asp Gln Leu Gly Asp Lys
            500                 505                 510
gat gag gct gaa att act act aat aag cca acc ttt aag tta tcc ggt    1584
Asp Glu Ala Glu Ile Thr Thr Asn Lys Pro Thr Phe Lys Leu Ser Gly
        515                 520                 525
gag gcc aac gat aac att gat ggt tac aat gta ttt atc aat ggt gat    1632
Glu Ala Asn Asp Asn Ile Asp Gly Tyr Asn Val Phe Ile Asn Gly Asp
    530                 535                 540
aat gtt ttt ggg caa ttt ggt aat tcg ggt tat gat ttt ctg cca gga    1680
Asn Val Phe Gly Gln Phe Gly Asn Ser Gly Tyr Asp Phe Leu Pro Gly
545                 550                 555                 560
atc tac aat gat tta aat caa aat act cca aat ttg tac gga tct tac    1728
Ile Tyr Asn Asp Leu Asn Gln Asn Thr Pro Asn Leu Tyr Gly Ser Tyr
                565                 570                 575
aag ttt gat caa gaa gag caa ttg gat gat cag aat ggg caa cca aca    1776
Lys Phe Asp Gln Glu Glu Gln Leu Asp Asp Gln Asn Gly Gln Pro Thr
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acc cat gtc ttt act att gca gta gag gac caa gct ggt aac aga gtt    1824
Thr His Val Phe Thr Ile Ala Val Glu Asp Gln Ala Gly Asn Arg Val
        595                 600                 605
gaa aag aag gtt act gtt cat tac gat cca aat tat ctt aca gaa ccg    1872
Glu Lys Lys Val Thr Val His Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Thr Glu Pro
    610                 615                 620
ggt aat aca gga aaa aaa gat gat caa gca gat gta aaa ccg gca gaa    1920
Gly Asn Thr Gly Lys Lys Asp Asp Gln Ala Asp Val Lys Pro Ala Glu
625                 630                 635                 640
ggt caa aag caa gat aaa aat gac aac caa act gtt aac aat tca aaa    1968
Gly Gln Lys Gln Asp Lys Asn Asp Asn Gln Thr Val Asn Asn Ser Lys
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gaa gat cca gag agt ggt caa act act gaa aat gct caa tct aca gaa    2016
Glu Asp Pro Glu Ser Gly Gln Thr Thr Glu Asn Ala Gln Ser Thr Glu
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agt caa gag caa aat aag act gat gta act aaa cca gca gca aag cca    2064
Ser Gln Glu Gln Asn Lys Thr Asp Val Thr Lys Pro Ala Ala Lys Pro
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Ser Asn Asp Asp Gln Lys Glu Asn His Arg Ala Gly Glu Ser Thr Ile
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gag tta aat caa gag aaa caa cta ggt caa agt aat gtc caa gcc caa    2160
Glu Leu Asn Gln Glu Lys Gln Leu Gly Gln Ser Asn Val Gln Ala Gln
705                 710                 715                 720
gat act aaa cca gat aaa aca gta gtt caa ggt aat gtt caa aat act    2208
Asp Thr Lys Pro Asp Lys Thr Val Val Gln Gly Asn Val Gln Asn Thr
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gca ccg aca aca ggt cat ttg act aat tct tca gta aat gtg caa caa    2256
Ala Pro Thr Thr Gly His Leu Thr Asn Ser Ser Val Asn Val Gln Gln
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ttt aag act aag aaa gaa aca cta caa tta aag aag ttt aag tta tta    2304
Phe Lys Thr Lys Lys Glu Thr Leu Gln Leu Lys Lys Phe Lys Leu Leu
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aag aat aca tat ggc tac act tta aat ggt aaa att gct aaa aaa cac    2352
Lys Asn Thr Tyr Gly Tyr Thr Leu Asn Gly Lys Ile Ala Lys Lys His
    770                 775                 780
ggt aaa aag tta ctc ttt aag aaa gga aaa acc gtc ctt gtt tgg aac    2400
Gly Lys Lys Leu Leu Phe Lys Lys Gly Lys Thr Val Leu Val Trp Asn
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aac agt aga gtt gtg act atc aag gga caa aag tac tac cgt gct act    2448
Asn Ser Arg Val Val Thr Ile Lys Gly Gln Lys Tyr Tyr Arg Ala Thr
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aag aat gta ttt gtt aaa gtt tca act atc aag cag gtt aaa gac ttg    2496
Lys Asn Val Phe Val Lys Val Ser Thr Ile Lys Gln Val Lys Asp Leu
            820                 825                 830
aaa tta gtt tta acg aag aac tcc tac gtt tac aat aaa ttg ggc aaa    2544
Lys Leu Val Leu Thr Lys Asn Ser Tyr Val Tyr Asn Lys Leu Gly Lys
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cgc gtt aag tat aag agt caa agt ttg ctt aag gaa ggt aaa cat ctt    2592
Arg Val Lys Tyr Lys Ser Gln Ser Leu Leu Lys Glu Gly Lys His Leu
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tct acc cac aat aat gga aaa gtt gtg act att aaa aat ata cat ttt    2640
Ser Thr His Asn Asn Gly Lys Val Val Thr Ile Lys Asn Ile His Phe
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ttt aat ata tct ctt ttc tta aaa tat ttc caa caa cgt                2679
Phe Asn Ile Ser Leu Phe Leu Lys Tyr Phe Gln Gln Arg
                885                 890
<210>4
<211>893
<212>PRT
<213>纤维二糖乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)
<400>4
Met Ile Arg Leu Leu Gly Arg Trp Leu Cys Ser Arg Trp Ser Ile His
1               5                   10                  15
Leu Pro Leu Cys Cys Pro Leu Tyr Asn Asn Gly Glu Asn Lys Val Gln
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Thr Asn Asp Thr Pro Val Ile Ile Asp Thr Thr Ala Pro Val Leu Asn
        35                  40                  45
Asn Val Lys Tyr Asp Thr Ser Ser Phe Thr Leu Ser Gly Asp Tyr Ala
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Asp Ala Gly Ala Gly Phe Thr Asp Tyr Ser Tyr Ala Thr Val Thr Val
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Asn Asp His Val Phe Gly Phe Lys Leu Asn Glu Gly Asp Lys Ser Asn
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Phe Asp Asn Ala Asn Lys Thr Lys Gly His Phe Val Phe Val Leu Thr
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Pro Glu Glu Gln Ala Ala Leu Thr Ser Ala Ala Asn Lys Val Thr Val
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Ala Phe Ser Asp Val Ala Asp Asn Thr Ala Thr Gln Thr Phe Asn Val
    130                 135                 140
Ala Pro Val Ala Gly His Lys Lys Ile Ala Val Trp Asn Ala Ile Asn
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Gly Leu Pro Phe Asn Glu Asn Ser Asp Asp Tyr Asn Val Gly Arg Lys
                165                 170                 175
Val Phe Met Leu Arg Gly Gly Ala Glu His Asp Phe Tyr Val Asn Gly
            180                 185                 190
Lys Trp Val Gln Val Asp Gln Gly Gln Phe Val Leu Pro Val Ser Val
        195                 200                 205
Asp Glu Gln Asn Phe Val Phe Ser Ser Asp Gln Ala Gly Lys Asn Ile
    210                 215                 220
Leu Gly Lys Phe Thr Thr Phe Thr Pro Lys Ala Gln Phe Ala Trp Gln
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Tyr Thr Gly Glu Val His Asp Gly Val Ala Thr Phe His Ile His Thr
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Ile Tyr Asn Asp Leu Asn Gln Asn Thr Pro Asn Leu Tyr Gly Ser Tyr
                565                 570                 575
Lys Phe Asp Gln Glu Glu Gln Leu Asp Asp Gln Asn Gly Gln Pro Thr
            580                 585                 590
Thr His Val Phe Thr Ile Ala Val Glu Asp Gln Ala Gly Asn Arg Val
        595                 600                 605
Glu Lys Lys Val Thr Val His Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Thr Glu Pro
    610                 615                 620
Gly Asn Thr Gly Lys Lys Asp Asp Gln Ala Asp Val Lys Pro Ala Glu
625                 630                 635                 640
Gly Gln Lys Gln Asp Lys Asn Asp Asn Gln Thr Val Asn Asn Ser Lys
                645                 650                 655
Glu Asp Pro Glu Ser Gly Gln Thr Thr Glu Asn Ala Gln Ser Thr Glu
            660                 665                 670
Ser Gln Glu Gln Asn LysThr Asp Val Thr Lys Pro Ala Ala Lys Pro
        675                 680                 685
Ser Asn Asp Asp Gln Lys Glu Asn His Arg Ala Gly Glu Ser Thr Ile
    690                 695                 700
Glu Leu Asn Gln Glu Lys Gln Leu Gly Gln Ser Asn Val Gln Ala Gln
705                 710                 715                 720
Asp Thr Lys Pro Asp Lys Thr Val Val Gln Gly Asn Val Gln Asn Thr
                725                 730                 735
AlaPro Thr Thr Gly His Leu Thr Asn Ser Ser Val Asn Val Gln Gln
           740                 745                 750
Phe Lys Thr Lys Lys Glu Thr Leu Gln Leu Lys Lys Phe Lys Leu Leu
        755                 760                 765
Lys Asn Thr Tyr Gly Tyr Thr Leu Asn Gly Lys Ile Ala Lys Lys His
    770                 775                 780
Gly Lys Lys Leu Leu Phe Lys Lys Gly Lys Thr Val Leu Val Trp Asn
785                 790                 795                 800
Asn Ser Arg Val Val Thr Ile Lys Gly Gln Lys Tyr Tyr Arg Ala Thr
                 805                 810                 815
Lys Asn Val Phe Val Lys Val Ser Thr Ile Lys Gln Val Lys Asp Leu
            820                 825                 830
Lys Leu Val Leu Thr Lys Asn Ser Tyr Val Tyr Asn Lys Leu Gly Lys
        835                 840                 845
Arg Val Lys Tyr Lys Ser Gln Ser Leu Leu Lys Glu Gly Lys His Leu
    850                 855                 860
Ser Thr His Asn Asn Gly Lys Val Val Thr Ile Lys Asn Ile His Phe
865                 870                 875                 880
Phe Asn Ile Ser Leu Phe Leu Lys Tyr Phe Gln Gln Arg
                885                 890
<210>5
<211>4881
<212>DNA
<213>纤维二糖乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(4881)
<223>
<400>5
atg cta ctg gta ttc cag aaa ttg cag tta tgg gtg gct gca gca att     48
Met Leu Leu Val Phe Gln Lys Leu Gln Leu Trp Val Ala Ala Ala Ile
1               5                   10                  15
att gct ctt gct tca ggc tcc act gtt ttt ctt agt caa aat act gct     96
Ile Ala Leu Ala Ser Gly Ser Thr Val Phe Leu Ser Gln Asn Thr Ala
            20                  25                  30
gaa gca gca act aat gat cct ggt gct tca gat gtt caa gtt aaa gta    144
Glu Ala Ala Thr Asn Asp Pro Gly Ala Ser Asp Val Gln Val Lys Val
        35                  40                  45
gta caa caa gat caa aaa caa gac caa aac agt act gct aac gca gct    192
Val Gln Gln Asp Gln Lys Gln Asp Gln Asn Ser Thr Ala Asn Ala Ala
    50                  55                  60
gtt tca aat tct gat tct gcc aag aca cag act aat gca acg gac cag    240
Val Ser Asn Ser Asp Ser Ala Lys Thr Gln Thr Asn Ala Thr Asp Gln
65                  70                  75                  80
aca caa aat tca act gtg gtt tct ggt gat tcc acg act gcg aat tct    288
Thr Gln Asn Ser Thr Val Val Ser Gly Asp Ser Thr Thr Ala Asn Ser
                85                  90                  95
aag acc tca cag act tct aat gca caa act aca agt aca aca aca aat    336
Lys Thr Ser Gln Thr Ser Asn Ala Gln Thr Thr Ser Thr Thr Thr Asn
            100                 105                 110
agt gta gat cca aac cag gaa caa caa cct gct aat caa gct gat cat    384
Ser Val Asp Pro Asn Gln Glu Gln Gln Pro Ala Asn Gln Ala Asp His
        115                 120                 125
gtt aaa gga aat gtg cag tct gca tgg gat caa gga tat agg gga caa    432
Val Lys Gly Asn Val Gln Ser Ala Trp Asp Gln Gly Tyr Arg Gly Gln
    130                 135                 140
gga aca gtt gtt gca gtc atc gat tcc ggt gca gat cca act cat aaa    480
Gly Thr Val Val Ala Val Ile Asp Ser Gly Ala Asp Pro Thr His Lys
145                 150                 155                 160
gat ttt aaa acc atg cca gaa gat cct aag ctg tcc gag gat gat atg    528
Asp Phe Lys Thr Met Pro Glu Asp Pro Lys Leu Ser Glu Asp Asp Met
               165                  170                 175
caa gct aag atc gcc aag caa ggc tat ggt aaa tat gtg aat gaa aag    576
Gln Ala Lys Ile Ala Lys Gln Gly Tyr Gly Lys Tyr Val Asn Glu Lys
            180                 185                 190
ttc cca tat gtt tat aat tat gcc gat cgt gat aat gac tat att act    624
Phe Pro Tyr Val Tyr Asn Tyr Ala Asp Arg Asp Asn Asp Tyr Ile Thr
        195                 200                 205
tcg gat gac acc aat gct aat gat tct cca cac ggt caa cac gtt tca    672
Ser Asp Asp Thr Asn Ala Asn Asp Ser Pro His Gly Gln His Val Ser
    210                 215                 220
gga atc att gca gct gat ggt aag cca gat gga aat aaa gaa tat gtc    720
Gly Ile Ile Ala Ala Asp Gly Lys Pro Asp Gly Asn Lys Glu Tyr Val
225                 230                 235                 240
gtt ggt gtt gct cct gaa gct caa ttg atg cag ctg aga gtt ttt gga    768
Val Gly Val Ala Pro Glu Ala Gln Leu Met Gln Leu Arg Val Phe Gly
                245                 250                 255
caa ttt tca gat gaa aaa act gat gat gtg gca aaa gca atc tac gat    816
Gln Phe Ser Asp Glu Lys Thr Asp Asp Val Ala Lys Ala Ile Tyr Asp
            260                 265                 270
gct acc aat tta ggt gcg gat gtc atc caa atg tca tta gga caa ggt    864
Ala Thr Asn Leu Gly Ala Asp Val Ile Gln Met Ser Leu Gly Gln Gly
        275                 280                 285
gtt gcc gat caa caa ttg acc aat att gag caa aaa gct gtt caa tat     912
Val Ala Asp Gln Gln Leu Thr Asn Ile Glu Gln Lys Ala Val Gln Tyr
    290                 295                 300
gca att gat cac ggt gta ttt gta tca att tca gca tct aat aac ggt     960
Ala Ile Asp His Gly Val Phe Val Ser Ile Ser Ala Ser Asn Asn Gly
305                 310                 315                 320
aat tca gct tca gtt gat aat cca agt aaa gtt aaa gat caa gga tat    1008
Asn Ser Ala Ser Val Asp Asn Pro Ser Lys Val Lys Asp Gln Gly Tyr
                325                 330                 335
caa tct ggt agc caa gct ggt aac tat gaa cct ctt aat tta agt act    1056
Gln Ser Gly Ser Gln Ala Gly Asn Tyr Glu Pro Leu Asn Leu Ser Thr
            340                 345                 350
gta gca aac cct ggt gtg tca aag aac gca tta act gtt gct gca gaa    1104
Val Ala Asn Pro Gly Val Ser Lys Asn Ala Leu Thr Val Ala Ala Glu
        355                 360                 365
aca tca gat act ggt gat tta agc gat atg gcc tac ttc tca tca tgg    1152
Thr Ser Asp Thr Gly Asp Leu Ser Asp Met Ala Tyr Phe Ser Ser Trp
    370                 375                 380
ggc cca gct caa gac tat act tta aag cca gat tta tca gca cct gga    1200
Gly Pro Ala Gln Asp Tyr Thr Leu Lys Pro AsP Leu Ser Ala Pro Gly
385                 390                 395                 400
tat caa gta gtt tct acc gtt aat cat gat cag tac caa aca atg agt    1248
Tyr Gln Val Val Ser Thr Val Asn His Asp Gln Tyr Gln Thr Met Ser
                405                 410                 415
ggt act tca atg gct ggt cca ttt gcc gca gct agt gct gcc tta gta    1296
Gly Thr Ser Met Ala Gly Pro Phe Ala Ala Ala Ser Ala Ala Leu Val
           420                 425                 430
att caa cga ttg aag caa act aat cct gaa ttg aag ggt gca caa tta    1344
Ile Gln Arg Leu Lys Gln Thr Asn Pro Glu Leu Lys Gly Ala Gln Leu
        435                 440                 445
gta gct gct gct aaa gca atg ctg atg aat acg gcc aaa cca caa aca    1392
Val Ala Ala Ala Lys Ala Met Leu Met Asn Thr Ala Lys Pro Gln Thr
    450                 455                 460
caa tta ggc tat aca aca cct gtt tca cca aga cgt caa ggt gca ggt    1440
Gln Leu Gly Tyr Thr Thr Pro Val Ser Pro Arg Arg Gln Gly Ala Gly
465                 470                 475                 480
caa att gat gtt ggt gct gct acg gct act cca gtt tat gta act act    1488
Gln Ile Asp Val Gly Ala Ala Thr Ala Thr Pro Val Tyr Val Thr Thr
                485                 490                 495
gat gac ggc act agt tca gta tca ctt cat caa gtt ggt gaa agt act    1536
Asp Asp Gly Thr Ser Ser Val Ser Leu His Gln Val Gly Glu Ser Thr
            500                 505                 510
aaa ttt acg tta acc ttc cat aat tta act gac caa agc cga act tat    1584
Lys Phe Thr Leu Thr Phe His Asn Leu Thr Asp Gln Ser Arg Thr Tyr
        515                 520                 525
act ttc gat gat tat ggt gga ggt tac act gaa caa aga gat aca acc    1632
Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Gly Gly Tyr Thr Glu Gln Arg Asp Thr Thr
    530                 535                 540
acc ggc gtt ttt cat gat gtt caa tta gct ggt gct aga gta aat ggt    1680
Thr Gly Val Phe His Asp Val Gln Leu Ala Gly Ala Arg Val Asn Gly
545                 550                 555                 560
gaa cat agt ttt act tta gct cct aaa gaa gaa cgt caa gtt agc tat    1728
Glu His Ser Phe Thr Leu Ala Pro Lys Glu Glu Arg Gln Val Ser Tyr
                565                 570                 575
tca tta gac ttg acc ggc tta aag aag aac caa tta gtt gaa gga ttt    1776
Ser Leu Asp Leu Thr Gly Leu Lys Lys Asn Gln Leu Val Glu Gly Phe
            580                 585                 590
tta cgc ttt act aat gcc aat aat gca tct acg gtt tct gtt cct tac    1824
Leu Arg Phe Thr Asn Ala Asn Asn Ala Ser Thr Val Ser Val Pro Tyr
        595                 600                 605
tta gct tat tat ggg gac tta act agt gaa aac gtc ttt gat caa aat    1872
Leu Ala Tyr Tyr Gly Asp Leu Thr Ser Glu Asn Val Phe Asp Gln Asn
    610                 615                 620
gca aat gag gag cat cta gat atc cag ggt aat cgt tta gtt aat gaa    1920
Ala Asn Glu Glu His Leu Asp Ile Gln Gly Asn Arg Leu Val Asn Glu
625                 630                 635                 640
caa aac tat cct cgt ggt att gca gat caa gaa tca ttg aag gaa ctt    1968
Gln Asn Tyr Pro Arg Gly Ile Ala Asp Gln Glu Ser Leu Lys Glu Leu
                645                 650                 655
gta aat gtt gat gga aac tat aat tgg caa gaa gta gcc aaa tta tat    2016
Val Asn Val Asp Gly Asn Tyr Asn Trp Gln Glu Val Ala Lys Leu Tyr
            660                 665                 670
gaa agt ggt aaa gtt gcc ttt tca cca aat gat aat caa aag agc gat    2064
Glu Ser Gly Lys Val Ala Phe Ser Pro Asn Asp Asn Gln Lys Ser Asp
        675                 680                 685
tta ctg aag cca tat gtt tac ttg aag caa aat gtt aaa gat ctt aag    2112
Leu Leu Lys Pro Tyr Val Tyr Leu Lys Gln Asn Val Lys Asp Leu Lys
    690                 695                 700
gta gaa atc ctc gat gca caa ggt aac gtg gtt aga gtg gtt tct gac    2160
Val Glu Ile Leu Asp Ala Gln Gly Asn Val Val Arg Val Val Ser Asp
705                 710                 715                 720
gtt caa ggc gta gat aaa tct tac gat gaa aat ggt gta act aaa gat    2208
Val Gln Gly Val Asp Lys Ser Tyr Asp Glu Asn Gly Val Thr Lys Asp
                725                 730                 735
act agt tta tca gtt tca atg aga gat aat cct gac gct ctt gaa tgg    2256
Thr Ser Leu Ser Val Ser Met Arg Asp Asn Pro Asp Ala Leu Glu Trp
            740                 745                 750
gat ggt aaa gtt tat aac agc aaa aca ggc aaa atg gaa act gcc aaa    2304
Asp Gly Lys Val Tyr Asn Ser Lys Thr Gly Lys Met Glu Thr Ala Lys
        755                 760                 765
gat ggc aat tac act tac cgt tta gtt gct act ctt tgg aac aaa gga    2352
Asp Gly Asn Tyr Thr Tyr Arg Leu Val Ala Thr Leu Trp Asn Lys Gly
    770                 775                 780
cca cat caa gtt caa aca gct gat ttc cca gta gta gtt gat aca gtt    2400
Pro His Gln Val Gln Thr Ala Asp Phe Pro Val Val Val Asp Thr Val
785                 790                 795                 800
gct cca aca ttg tca aat gtg aaa tat gat gct gcc tca cat act ttg    2448
Ala Pro Thr Leu Ser Asn Val Lys Tyr Asp Ala Ala Ser His Thr Leu
                805                 810                 815
tca ggt gaa tac caa gat gct ggt gca gga ttt acg aat tat tca tat    2496
Ser Gly Glu Tyr Gln Asp Ala Gly Ala Gly Phe Thr Asn Tyr Ser Tyr
            820                 825                 830
gca acg gta aca gtt aat gat aag gtc ttt ggc tat aag ttg agt gat    2544
Ala Thr Val Thr Val Asn Asp Lys Val Phe Gly Tyr Lys Leu Ser Asp
        835                 840                 845
ggt gga tca ggc ttc gat aat gca gaa aag act aag gga cat ttt agc    2592
Gly Gly Ser Gly Phe Asp Asn Ala Glu Lys Thr Lys Gly His Phe Ser
    850                 855                 860
ttt gtg tta ggt caa gat gca ctt tct gca tta aca gct gct gca aac    2640
Phe Val Leu Gly Gln Asp Ala Leu Ser Ala Leu Thr Ala Ala Ala Asn
865                 870                 875                 880
aag gtg acc gta gcc ttg agt gat gtc gct gat aat act tca ttg gct    2688
Lys Val Thr Val Ala Leu Ser Asp Val Ala Asp Asn Thr Ser Leu Ala
                885                 890                 895
act gtt aat gtt gcc ggt gac cat gat agt gag act ggt gta agt gtt    2736
Thr Val Asn Val Ala Gly Asp His Asp Ser Glu Thr Gly Val Ser Val
            900                 905                 910
tgg aat gct gtc aat ggt tta gcc ttt gat caa aaa tca cca aac tat    2784
Trp Asn Ala Val Asn Gly Leu Ala Phe Asp Gln Lys Ser Pro Asn Tyr
        915                 920                 925
gat gca gct act aag act tac aca tta gtt ggt gga gct aac cat gac    2832
Asp Ala Ala Thr Lys Thr Tyr Thr Leu Val Gly Gly Ala Asn His Asp
    930                 935                 940
ttc tac tta aat ggc aag ttg gtc caa gta caa gat ggc aaa tat caa    2880
Phe Tyr Leu Asn Gly Lys Leu Val Gln Val Gln Asp Gly Lys Tyr Gln
945                 950                 955                 960
gtt cca gtc agt gta aat aca act aag ttt gtg ttt agt act gat cct       2928
Val Pro Val Ser Val Asn Thr Thr Lys Phe Val Phe Ser Thr Asp Pro
                965                 970                 975
gaa ggt caa cat gtt ctt aag gat ctt tca act gta acg gct aaa gca       2976
Glu Gly Gln His Val Leu Lys Asp Leu Ser Thr Val Thr Ala Lys Ala
            980                 985                 990
ttc ttt aat tgg caa aag act gat  aca ttt gat gga aac  ttt ggt gta     3024
Phe Phe Asn Trp Gln Lys Thr Asp  Thr Phe Asp Gly Asn  Phe Gly Val
        995                 1000                 1005
act att  agt tca gtt aaa act  aat aat cca aat gat  aca gtt gtt        3069
Thr Ile  Ser Ser Val Lys Thr  Asn Asn Pro Asn Asp  Thr Val Val
    1010                 1015                 1020
caa gct  gtt gta acc aaa ggt  aaa aat gta aag gcc  tat gca atg        3114
Gln Ala  Val Val Thr Lys Gly  Lys Asn Val Lys Ala  Tyr Ala Met
    1025                 1030                 1035
gat tac  ttt act ggg gaa gtt  tat acc ggt gaa gta  aaa gac gga        3159
Asp Tyr  Phe Thr Gly Glu Val  Tyr Thr Gly Glu Val  Lys Asp Gly
    1040                 1045                 1050
att gca  aca ttc cat gtt cat  act tca atc aat aaa  gat gct aca        3204
Ile Ala  Thr Phe His Val His  Thr Ser Ile Asn Lys  Asp Ala Thr
    1055                 1060                 1065
act ggt  gtt tat agg aga gca  tta cta aca ggt tgg  act gaa gtg        3249
Thr Gly  Val Tyr Arg Arg Ala  Leu Leu Thr Gly Trp  Thr Glu Val
    1070                 1075                 1080
gat gga  cca tcc ttt aat gat  aaa caa gaa aca tct  aga gat ggt        3294
Asp Gly  Pro Ser Phe Asn Asp  Lys Gln Glu Thr Ser  Arg Asp Gly
    1085                 1090                 1095
gta tca  agt agt aac cac cta  ggg gtt ttc tac ttt  gct gat gca        3339
Val Ser  Ser Ser Asn His Leu  Gly Val Phe Tyr Phe  Ala Asp Ala
    1100                 1105                 1110
gct aat  cgc cca gtt tat aca  gat aga aat gcc ttg  gga gta gaa        3384
Ala Asn  Arg Pro Val Tyr Thr  Asp Arg Asn Ala Leu  Gly Val Glu
    1115                 1120                 1125
gct aaa  gat gaa gct gca aag  tta gat tca ttt tgc  cca ggt gca        3429
Ala Lys  Asp Glu Ala Ala Lys  Leu Asp Ser Phe Cys  Pro Gly Ala
    1130                 1135                 1140
tac cca  gga cac gca cca tca  gct ctg aca acc aga  acg gat cct        3474
Tyr Pro  Gly His Ala Pro Ser  Ala Leu Thr Thr Arg  Thr Asp Pro
    1145                 1150                 1155
aat cca  gat att cat ttt gat  tat atg aat gac aac  gat act act        3519
Asn Pro  Asp Ile His Phe Asp  Tyr Met Asn Asp Asn  Asp Thr Thr
    1160                 1165                 1170
cgt ttt  ggt cag aat gcc gtt  act cat gga tac tat  gat cct tca    3564
Arg Phe  Gly Gln Asn Ala Val  Thr His Gly Tyr Tyr  Asp Pro Ser
    1175                 1180                 1185
act cag  aag ttt acg gtt acc  ggt aaa gtt gat gac  aat gta gta    3609
Thr Gln  Lys Phe Thr Val Thr  Gly Lys Val Asp Asp  Asn Val Val
    1190                 1195                 1200
tct cta  act gtg tta ggc gat  aac tca aat gaa aat  gct cct gaa    3654
Ser Leu  Thr Val Leu Gly Asp  Asn Ser Asn Glu Asn  Ala Pro Glu
    1205                 1210                 1215
aac caa  gtt aag tta ggc aac  gac ggt aag ttt agc  ttt acg gta    3699
Asn Gln  Val Lys Leu Gly Asn  Asp Gly Lys Phe Ser  Phe Thr Val
    1220                 1225                 1230
aca gct  aac aga aca ggg caa  cgt cca att gca tat  att tac aaa    3744
Thr Ala  Asn Arg Thr Gly Gln  Arg Pro Ile Ala Tyr  Ile Tyr Lys
    1235                 1240                 1245
gct aaa  gat gga caa aga gtt  cgt ggt acc ttg aat  ctt att ctt    3789
Ala Lys  Asp Gly Gln Arg Val  Arg Gly Thr Leu Asn  Leu Ile Leu
    1250                 1255                 1260
gat act  gtt gct cct agc ttg  gaa gta aat cag gtt  aat ggg gat    3834
Asp Thr  Val Ala Pro Ser Leu  Glu Val Asn Gln Val  Asn Gly Asp
    1265                 1270                 1275
gaa tta  gag ctt tgg act aat  aat cca aaa ttc act  ctg tcc gga    3879
Glu Leu  Glu Leu Trp Thr Asn  Asn Pro Lys Phe Thr  Leu Ser Gly
    1280                 1285                 1290
aag gta  aat gat aat ctt gat  gga tat agg tta ttc  gtt aat ggt    3924
Lys Val  Asn Asp Asn Leu Asp  Gly Tyr Arg Leu Phe  Val Asn Gly
    1295                 1300                 1305
aat aat  att tat cga gaa ttc  cta aac tct ggt tat  aat cag gtt    3969
Asn Asn  Ile Tyr Arg Glu Phe  Leu Asn Ser Gly Tyr  Asn Gln Val
    1310                 1315                 1320
gca gga  ttg aat acg gat act  gag ttt act aat cca  tat gga gct    4014
Ala Gly  Leu Asn Thr Asp Thr  Glu Phe Thr Asn Pro  Tyr Gly Ala
    1325                 1330                 1335
cat gat  ttt gaa gag gtt gaa  aac tta aat gac aat  aat gat caa    4059
His Asp  Phe Glu Glu Val Glu  Asn Leu Asn Asp Asn  Asn Asp Gln
    1340                 1345                 1350
ccg act  act cat gtc ttc aca  gtt tat gtt gta gac  caa gtt gga    4104
Pro Thr  Thr His Val Phe Thr  Val Tyr Val Val Asp  Gln Val Gly
    1355                 1360                 1365
aac aag  gta gaa aag aaa tta  act gtt cac ttt gat  cca aat tat    4149
Asn Lys  Val Glu Lys Lys Leu  Thr Val His Phe Asp  Pro Asn Tyr
    1370                 1375                 1380
gtt gct  cca gaa gaa gta cca  aat act gat act tca  tat act tta    4194
Val Ala  Pro Glu Glu Val Pro  Asn Thr Asp Thr Ser  Tyr Thr Leu
    1385                 1390                 1395
gag aat  cca tta agt act aca  act gta gaa aac cca  gtt act gat    4239
Glu Asn  Pro Leu Ser Thr Thr  Thr yal Glu Asn Pro  Val Thr Asp
    1400                 1405                 1410
gtt tct  acg gtt caa cct aag  ggt gaa act tta act  ggt aag tca    4284
Val Ser  Thr Val Gln Pro Lys  Gly Glu Thr Leu Thr  Gly Lys Ser
    1415                 1420                 1425
ttc aac  tta tta cac gat gct  tat atc tac aac aaa  gat ggt caa    4329
Phe Asn  Leu Leu His Asp Ala  Tyr Ile Tyr Asn Lys  Asp Gly Gln
    1430                 1435                 1440
gtc gtt  tta agt act gat act  aat aag agt agc ttg  ctt aag aaa    4374
Val Val  Leu Ser Thr Asp Thr  Asn Lys Ser Ser Leu  Leu Lys Lys
    1445                 1450                 1455
ggc caa  aga att act gca tta  gac aat ggc aaa act  gtt gta atc    4419
Gly Gln  Arg Ile Thr Ala Leu  Asp Asn Gly Lys Thr  Val Val Ile
    1460                 1465                 1470
aat ggc  gtg caa tac tat cgt  gtc ggc gat aat cag  ttt gtg aag    4464
Asn Gly  Val Gln Tyr Tyr Arg  Val Gly Asp Asn Gln  Phe Val Lys
    1475                 1480                 1485
gta act  aat acg att tta caa  gcc ggt aag aga ttg  cag tta aag    4509
Val Thr  Asn Thr Ile Leu Gln  Ala Gly Lys Arg Leu  Gln Leu Lys
    1490                 1495                 1500
cat aat  gca cac ctt tat gat  aag aac ggt aaa gtt  gtt aaa aga    4554
His Asn  Ala His Leu Tyr Asp  Lys Asn Gly Lys Val  Val Lys Arg
    1505                 1510                 1515
aat ggc  aaa cct gtc ttg tta  aga aag ggt aga tgg  atc agt gct    4599
Asn Gly  Lys Pro Val Leu Leu  Arg Lys Gly Arg Trp  Ile Ser Ala
    1520                 1525                 1530
ttg aac  aac gcc gat aag tat  gta atc aat ggc aag  acc ttc  tac   4644
Leu Asn  Asn Ala Asp Lys Tyr  Val Ile Asn Gly Lys  Thr Phe Tyr
    1535                 1540                 1545
aag tta  gct aat ggt gaa ttt  gtg aag gtg gca aac  act aaa ctt    4689
Lys Leu  Ala Asn Gly Glu Phe  Val Lys Val Ala Asn  Thr Lys Leu
    1550                 1555                 1560
caa aag  cct aaa gct ttg aag  ctt aca cac aat gca  ttt gtt tac    4734
Gln Lys  Pro Lys Ala Leu Lys  Leu Thr His Asn Ala  Phe Val Tyr
    1565                 1570                 1575
gat gaa  aat ggt aag cgt gta  aag aag agt aaa gtt  tta aag aaa    4779
Asp Glu  Asn Gly Lys Arg Val  Lys Lys Ser Lys Val  Leu Lys Lys
    1580                 1585                 1590
ggc caa  acg att tta gca gaa  aat aat gca gaa aaa  ttc cat atc   4824
Gly Gln  Thr Ile Leu Ala Glu  Asn Asn Ala Glu Lys  Phe His Ile
    1595                 1600                 1605
aaa ggt  aag gct tac tat aaa  gtt aat ggt cat ttt  gta aaa gtt   4869
Lys Gly  Lys Ala Tyr Tyr Lys  Val Asn Gly His Phe  Val Lys Val
    1610                 1615                 1620
gca aat  act ttg                                                 4881
Ala Asn  Thr Leu
    1625
<210>6
<211>1627
<212>PRT
<213>纤维二糖乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)
<400>6
Met Leu Leu Val Phe Gln Lys Leu Gln Leu Trp Val Ala Ala Ala Ile
1               5                   10                  15
Ile Ala Leu Ala Ser Gly Ser Thr Val Phe Leu Ser Gln Asn Thr Ala
            20                  25                  30
Glu Ala Ala Thr Asn Asp Pro Gly Ala Ser Asp Val Gln Val Lys Val
        35                  40                  45
Val Gln Gln Asp Gln Lys Gln Asp Gln Asn Ser Thr Ala Asn Ala Ala
    50                  55                  60
Val Ser Asn Ser Asp Ser Ala Lys Thr Gln Thr Asn Ala Thr Asp Gln
65                  70                  75                  80
Thr Gln Asn Ser Thr Val Val Ser Gly Asp Ser Thr Thr Ala Asn Ser
                85                  90                  95
Lys Thr Ser Gln Thr Ser Asn Ala Gln Thr Thr Ser Thr Thr Thr Asn
            100                 105                 110
Ser Val Asp Pro Asn Gln Glu Gln Gln Pro Ala Asn Gln Ala Asp His
        115                 120                 125
Val Lys Gly Asn Val Gln Ser Ala Trp Asp Gln Gly Tyr Arg Gly Gln
    130                 135                 140
Gly Thr Val Val Ala Val Ile Asp Ser Gly Ala Asp Pro Thr His Lys
145                 150                 155                 160
Asp Phe Lys Thr Met Pro Glu Asp Pro Lys Leu Ser Glu Asp Asp Met
                165                 170                 175
Gln Ala Lys Ile Ala Lys Gln Gly Tyr Gly Lys Tyr Val Asn Glu Lys
            180                 185                 190
Phe Pro Tyr Val Tyr Asn Tyr Ala Asp Arg Asp Asn Asp Tyr Ile Thr
        195                 200                 205
Ser Asp Asp Thr Asn Ala Asn Asp Ser Pro His Gly Gln His Val Ser
    210                 215                 220
Gly Ile Ile Ala Ala Asp Gly Lys Pro Asp Gly Asn Lys Glu Tyr Val
225                 230                 235                 240
Val Gly Val Ala Pro Glu Ala Gln Leu Met Gln Leu Arg Val Phe Gly
                245                 250                 255
Gln Phe Ser Asp Glu Lys Thr Asp Asp Val Ala Lys Ala Ile Tyr Asp
            260                 265                 270
Ala Thr Asn Leu Gly Ala Asp Val Ile Gln Met Ser Leu Gly Gln Gly
        275                 280                 285
Val Ala Asp Gln Gln Leu Thr Asn Ile Glu Gln Lys Ala Val Gln Tyr
    290                 295                 300
Ala Ile Asp His Gly Val Phe Val Ser Ile Ser Ala Ser Asn Asn Gly
305                 310                 315                 320
Asn Ser Ala Ser Val Asp Asn Pro Ser Lys Val Lys Asp Gln Gly Tyr
                325                 330                 335
Gln Ser Gly Ser Gln Ala Gly Asn Tyr Glu Pro Leu Asn Leu Ser Thr
            340                 345                 350
Val Ala Asn Pro Gly Val Ser Lys Asn Ala Leu Thr Val Ala Ala Glu
        355                 360                 365
Thr Ser Asp Thr Gly Asp Leu Ser Asp Met Ala Tyr Phe Ser Ser Trp
    370                 375                 380
Gly Pro Ala Gln Asp Tyr Thr Leu Lys Pro Asp Leu Ser Ala Pro Gly
385                 390                 395                 400
Tyr Gln Val Val Ser Thr Val Asn His Asp Gln Tyr Gln Thr Met Ser
                405                 410                 415
Gly Thr Ser Met Ala Gly Pro Phe Ala Ala Ala Ser Ala Ala Leu Val
            420                 425                 430
Ile Gln Arg Leu Lys Gln Thr Asn Pro Glu Leu Lys Gly Ala Gln Leu
        435                 440                 445
Val Ala Ala Ala Lys Ala Met Leu Met Asn Thr Ala Lys Pro Gln Thr
    450                 455                 460
Gln Leu Gly Tyr Thr Thr Pro Val Ser Pro Arg Arg Gln Gly Ala Gly
465                 470                 475                 480
Gln Ile Asp yal Gly Ala Ala Thr Ala Thr Pro Val Tyr Val Thr Thr
                485                 490                 495
Asp Asp Gly Thr Ser Ser Val Ser Leu His Gln Val 6ly Glu Ser Thr
            500                 505                 510
Lys Phe Thr Leu Thr Phe His Asn Leu Thr Asp Gln Ser Arg Thr Tyr
        515                 520                 525
Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Gly Gly Tyr Thr Glu Gln Arg Asp Thr Thr
    530                 535                 540
Thr Gly Val Phe His Asp Val Gln Leu Ala Gly Ala Arg Val Asn Gly
545                 550                 555                 560
Glu His Ser Phe Thr Leu Ala Pro Lys Glu Glu Arg Gln Val Ser Tyr
                565                 570                 575
Ser Leu Asp Leu Thr Gly Leu Lys Lys Asn Gln Leu Val Glu Gly Phe
            580                 585                 590
Leu Arg Phe Thr Asn Ala Asn Asn Ala Ser Thr Val Ser Val Pro Tyr
        595                 600                 605
Leu Ala Tyr Tyr Gly Asp Leu Thr Ser Glu Asn Val Phe Asp Gln Asn
    610                 615                 620
Ala Asn Glu Glu His Leu Asp Ile Gln Gly Asn Arg Leu Val Asn Glu
625                 630                 635                 640
Gln Asn Tyr Pro Arg Gly Ile Ala Asp Gln Glu Ser Leu Lys Glu Leu
                645                 650                 655
Val Asn Val Asp Gly Asn Tyr Asn Trp Gln Glu Val Ala Lys Leu Tyr
            660                 665                 670
Glu Ser Gly Lys Val Ala Phe Ser Pro Asn Asp Asn Gln Lys Ser Asp
        675                 680                 685
Leu Leu Lys Pro Tyr Val Tyr Leu Lys Gln Asn Val Lys Asp Leu Lys
    690                 695                 700
Val Glu Ile Leu Asp Ala Gln Gly Asn Val Val Arg Val Val Ser Asp
705                 710                 715                 720
Val Gln Gly Val Asp Lys Ser Tyr Asp Glu Asn Gly Val Thr Lys Asp
                725                 730                 735
Thr Ser Leu Ser Val Ser Met Arg Asp Asn Pro Asp Ala Leu Glu Trp
            740                 745                 750
Asp Gly Lys Val Tyr Asn Ser Lys Thr Gly Lys Met Glu Thr Ala Lys
        755                 760                 765
Asp Gly Asn Tyr Thr Tyr Arg Leu Val Ala Thr Leu Trp Asn Lys Gly
    770                 775                 780
Pro His Gln Val Gln Thr Ala Asp Phe Pro Val Val Val Asp Thr Val
785                 790                 795                 800
Ala Pro Thr Leu Ser Asn Val Lys Tyr Asp Ala Ala Ser His Thr Leu
                805                 810                 815
Ser Gly Glu Tyr Gln Asp Ala Gly Ala Gly Phe Thr Asn Tyr Ser Tyr
            820                 825                 830
Ala Thr Val Thr Val Asn Asp Lys Val Phe Gly Tyr Lys Leu Ser Asp
        835                 840                 845
Gly Gly Ser Gly Phe Asp Asn Ala Glu Lys Thr Lys Gly His Phe Ser
    850                 855                 860
Phe Val Leu Gly Gln Asp Ala Leu Ser Ala Leu Thr Ala Ala Ala Asn
865                 870                 875                 880
Lys Val Thr Val Ala Leu Ser Asp Val Ala Asp Asn Thr Ser Leu Ala
                885                 890                 895
Thr Val Asn Val Ala Gly Asp His Asp Ser Glu Thr Gly Val Ser Val
            900                 905                 910
Trp Asn Ala Val Asn Gly Leu Ala Phe Asp Gln Lys Ser Pro Asn Tyr
        915                 920                 925
Asp Ala Ala Thr Lys Thr Tyr Thr Leu Val Gly Gly Ala Asn His Asp
    930                 935                 940
Phe Tyr Leu Asn Gly Lys Leu Val Gln Val Gln Asp Gly Lys Tyr Gln
945                 950                 955                 960
Val Pro Val Ser Val Asn Thr Thr Lys Phe Val Phe Ser Thr Asp Pro
                965                 970                 975
Glu Gly Gln His Val Leu Lys Asp Leu Ser Thr Val Thr Ala Lys Ala
            980                 985                 990
Phe Phe Asn Trp Gln Lys Thr Asp  Thr Phe Asp Gly Asn  Phe Gly Val
    995                     1000                 1005
Thr Ile  Ser Ser Val Lys Thr  Asn Asn Pro Asn Asp  Thr Val Val
    1010                 1015                 1020
Gln Ala  Val Val Thr Lys Gly  Lys Asn Val Lys Ala  Tyr Ala Met
    1025                 1030                 1035
Asp Tyr  Phe Thr Gly Glu Val  Tyr Thr Gly Glu Val  Lys Asp Gly
    1040                 1045                 1050
Ile Ala  Thr Phe His Val His  Thr Ser Ile Asn Lys  Asp Ala Thr
    1055                 1060                 1065
Thr Gly  Val Tyr Arg Arg Ala  Leu Leu Thr Gly Trp  Thr Glu Val
    1070                 1075                 1080
Asp Gly  Pro Ser Phe Asn Asp  Lys Gln Glu Thr Ser  Arg Asp Gly
    1085                 1090                 1095
Val Ser  Ser Ser Asn His Leu  Gly Val Phe Tyr Phe  Ala Asp Ala
    1100                 1105                 1110
Ala Asn  Arg Pro Val Tyr Thr  Asp Arg Asn Ala Leu  Gly Val Glu
    1115                 1120                 1125
Ala Lys  Asp Glu Ala Ala Lys  Leu Asp Ser Phe Cys  Pro Gly Ala
    1130                 1135                 1140
Tyr Pro  Gly His Ala Pro Ser  Ala Leu Thr Thr Arg  Thr Asp Pro
    1145                 1150                 1155
Asn Pro  Asp Ile His Phe Asp  Tyr Met Asn Asp Asn  Asp Thr Thr
    1160                 1165                 1170
Arg Phe  Gly Gln Asn Ala Val  Thr His Gly Tyr Tyr  Asp Pro Ser
    1175                 1180                 1185
Thr Gln  Lys Phe Thr Val Thr  Gly Lys Val Asp Asp  Asn Val Val
    1190                 1195                 1200
Ser Leu  Thr Val Leu Gly Asp  Asn Ser Asn Glu Asn  Ala Pro Glu
    1205                 1210                 1215
Asn Gln  Val Lys Leu Gly Asn  Asp Gly Lys Phe Ser  Phe Thr Val
    1220                 1225                 1230
Thr Ala  Asn Arg Thr Gly Gln  Arg Pro Ile Ala Tyr  Ile Tyr Lys
    1235                 1240                 1245
Ala Lys  Asp Gly Gln Arg Val  Arg Gly Thr Leu Asn  Leu Ile Leu
    1250                 1255                 1260
Asp Thr  Val Ala Pro Ser Leu  Glu Val Asn Gln Val  Asn Gly Asp
    1265                 1270                 1275
Glu Leu  Glu Leu Trp Thr Asn  Asn Pro Lys Phe Thr  Leu Ser Gly
    1280                 1285                 1290
Lys Val  Asn Asp Asn Leu Asp  Gly Tyr Arg Leu Phe  Val Asn Gly
    1295                 1300                 1305
Asn Asn  Ile Tyr Arg Glu Phe  Leu Asn Ser Gly Tyr  Asn Gln Val
    1310                 1315                 1320
Ala Gly  Leu Asn Thr Asp Thr  Glu Phe Thr Asn Pro  Tyr Gly Ala
    1325                 1330                 1335
His Asp  Phe Glu Glu Val Glu  Asn Leu Asn Asp Asn  Asn Asp Gln
    1340                 1345                 1350
Pro Thr  Thr His Val Phe Thr  Val Tyr Val Val Asp  Gln Val Gly
    1355                 1360                 1365
Asn Lys  Val Glu Lys Lys Leu  Thr Val His Phe Asp  Pro Asn Tyr
    1370                 1375                 1380
Val Ala  Pro Glu Glu Val Pro  Asn Thr Asp Thr Ser  Tyr Thr Leu
    1385                 1390                 1395
Glu Asn  Pro Leu Ser Thr Thr  Thr Val Glu Asn Pro  Val Thr Asp
    1400                 1405                 1410
Val Ser  Thr Val Gln Pro Lys  Gly Glu Thr Leu Thr  Gly Lys Ser
    1415                 1420                 1425
Phe Asn  Leu Leu His Asp Ala  Tyr Ile Tyr Asn Lys  Asp Gly Gln
    1430                 1435                 1440
Val Val  Leu Ser Thr Asp Thr  Asn Lys Ser Ser Leu  Leu Lys Lys
    1445                 1450                 1455
Gly Gln  Arg Ile Thr Ala Leu  Asp Asn Gly Lys Thr  Val Val Ile
    1460                 1465                 1470
Asn Gly  Val Gln Tyr Tyr Arg  Val Gly Asp Asn Gln  Phe Val Lys
    1475                 1480                 1485
Val Thr  Asn Thr Ile Leu Gln  Ala Gly Lys Arg Leu  Gln Leu Lys
    1490                 1495                 1500
His Asn  Ala His Leu Tyr Asp  Lys Asn Gly Lys Val  Val Lys Arg
    1505                 1510                 1515
Asn Gly  Lys Pro Val Leu Leu  Arg Lys Gly Arg Trp  Ile Ser Ala
    1520                 1525                 1530
Leu Asn  Asn Ala Asp Lys Tyr  Val Ile Asn Gly Lys  Thr Phe Tyr
    1535                 1540                 1545
Lys Leu  Ala Asn Gly Glu Phe  Val Lys Val Ala Asn  Thr Lys Leu
    1550                 1555                 1560
Gln Lys  Pro Lys Ala Leu Lys  Leu Thr His Asn Ala  Phe Val Tyr
    1565                 1570                 1575
Asp Glu  Asn Gly Lys Arg Val  Lys Lys Ser Lys Val  Leu Lys Lys
    1580                 1585                 1590
Gly Gln  Thr Ile Leu Ala Glu  Asn Asn Ala Glu Lys  Phe His Ile
    1595                 1600                 1605
Lys Gly  Lys Ala Tyr Tyr Lys  Val Asn Gly His Phe  Val Lys Val
    1610                 1615                 1620
Ala Asn  Thr Leu
    1625
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<211>20
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<213>人工序列
<220>
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<220>
<223>PCR引物
<400>8
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<210>9
<211>18
<212>DNA
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<220>
<223>PCR引物
<400>9
gccaagacgc ctctggta                                                        18
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<220>
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taggtatagt ttccatcagg a                                                    21
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aargtwccwt ayggyywyaa yta                                                  23
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cgaaggcgat aagtcaaact ttgataatgc                                           30
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cccggttctg taagataatt tggatcg                                              27
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<211>5358
<212>DNA
<213>纤维二糖乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)
<220>
<221>CDS
<222>(1)...(5358)
<223>
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atg aat aaa tct gat tta aaa gaa gcg aat cag ttt aaa tat gtc tac     48
Met Asn Lys Ser Asp Leu Lys Glu Ala Asn Gln Phe Lys Tyr Val Tyr
1               5                   10                  15
caa agt gga caa aag ctg aac gca gtc cac aat caa aaa agt tca cgc     96
Gln Ser Gly Gln Lys Leu Asn Ala Val His Asn Gln Lys Ser Ser Arg
            20                  25                  30
ttt tta agt aag tta cat aag aaa tgg gct gga gca aca att gtt gcc    144
Phe Leu Ser Lys Leu His Lys Lys Trp Ala Gly Ala Thr Ile Val Ala
        35                  40                  45
tta gct tca agt acc gtt ctc ttg ttc tca agt cat aat gtt aaa gct    192
Leu Ala Ser Ser Thr Val Leu Leu Phe Ser Ser His Asn Val Lys Ala
    50                  55                  60
gat gct caa gca cca agc gat gat aag caa cca gat cct gtt gta caa    240
Asp Ala Gln Ala Pro Ser Asp Asp Lys Gln Pro Asp Pro Val Val Gln
65                  70                  75                  80
aag agt gaa caa agt caa ggt caa act ttg caa gct gtt caa cgt aaa    288
Lys Ser Glu Gln Ser Gln Gly Gln Thr Leu Gln Ala Val Gln Arg Lys
                85                  90                  95
gac gat gca gta cca tct gat gca tac caa caa tct gca gct gta caa    336
Asp Asp Ala yal Pro Ser Asp Ala Tyr Gln Gln Ser Ala Ala Val Gln
            100                 105                110
gct aat aac aat aat gat caa caa gct caa gac aat aaa caa gct agt    384
Ala Asn Asn Asn Asn Asp Gln Gln Ala Gln Asp Asn Lys Gln Ala Ser
        115                 120                 125
caa cca act agt cca gtg gca caa gct caa ccg gct caa caa caa aaa    432
Gln Pro Thr Ser Pro Val Ala Gln Ala Gln Pro Ala Gln Gln Gln Lys
    130                 135                 140
gca aag gat gtt gtt cca agt aag cca caa cct caa cca caa ccg gct    480
Ala Lys Asp Val Val Pro Ser Lys Pro Gln Pro Gln Pro Gln Pro Ala
145                 150                 155                 160
aag caa act act aat ggt caa act gaa gat gaa gat ggt caa aag gat    528
Lys Gln Thr Thr Asn Gly Gln Thr Glu Asp Glu Asp Gly Gln Lys Asp
                165                 170                 175
aag aat ggt gtt caa tta cca gct aat aat caa gac cat gta aaa ggt    576
Lys Asn Gly Val Gln Leu Pro Ala Asn Asn Gln Asp His Val Lys Gly
            180                 185                 190
aat gtt caa tcc gct tgg gat caa ggc tac cgc ggt gaa cat act gtt    624
Asn Val Gln Ser Ala Trp Asp Gln Gly Tyr Arg Gly Glu His Thr Val
        195                 200                 205
gta gca gtt att gac tct ggg gta gat gtt cat cat aaa gat ttc tta    672
Val Ala Val Ile Asp Ser Gly Val Asp Val His His Lys Asp Phe Leu
    210                 215                 220
acc atg cct aag aat cct aaa tta act gct gat caa atg aaa cgt ttg     720
Thr Met Pro Lys Asn Pro Lys Leu Thr Ala Asp Gln Met Lys Arg Leu
225                 230                 235                 240
att aag aga tta ggt tat ggt cgt tat gta aat gaa aaa ttc cca ttt     768
Ile Lys Arg Leu Gly Tyr Gly Arg Tyr Val Asn Glu Lys Phe Pro Phe
                245                 250                 255
gct tat aat tat gtt gat aat gaa aat gat cat tta aag gct cca aat     816
Ala Tyr Asn Tyr Val Asp Asn Glu Asn Asp His Leu Lys Ala Pro Asn
            260                 265                 270
ggt gag cct cac gga caa cac gtt tcc ggt att att gct gct gat ggt     864
Gly Glu Pro His Gly Gln His Val Ser Gly Ile Ile Ala Ala Asp Gly
        275                 280                 285
cat cca gat ggt gat aat act tat gtt gtg ggt gtt gct cct gaa gca     912
His Pro Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Val Val Gly Val Ala Pro Glu Ala
    290                 295                 300
caa tta atg caa ttg aaa gta ttt ggc gat aac tca act tct ctt gat     960
Gln Leu Met Gln Leu Lys Val Phe Gly Asp Asn Ser Thr Ser Leu Asp
305                 310                 315                 320
atg gcc aaa gaa att tgc gat gct gtt aac ttg ggt gcc gat gtt atc    1008
Met Ala Lys Glu Ile Cys Asp Ala Val Asn Leu Gly Ala Asp Val Ile
                325                 330                 335
aat atg tca tta ggt ggt ggt gtt tct gct gct gac ctc aac att cag    1056
Asn Met Ser Leu Gly Gly Gly Val Ser Ala Ala Asp Leu Asn Ile Gln
        340                 345                 350
gat caa aga gca gtt caa tat gct gtt gat cat ggg gtt gtc gtt gtc    1104
Asp Gln Arg Ala Val Gln Tyr Ala Val Asp His Gly Val Val Val Val
        355                 360                 365
att tca gct gct aat aat ggt aat gca gct tct gtt gat aat cca act    1152
Ile Ser Ala Ala Asn Asn Gly Asn Ala Ala Ser Val Asp Asn Pro Thr
    370                 375                 380
cac tta aca gat tta gat aac tac caa gca ggt ggt aac gct ggt aac    1200
His Leu Thr Asp Leu Asp Asn Tyr Gln Ala Gly Gly Asn Ala Gly Asn
385                 390                 395                 400
tat aat cca ttt agt tca agt act gta gct aac cca ggt gct gcc aga    1248
Tyr Asn Pro Phe Ser Ser Ser Thr Val Ala Asn Pro Gly Ala Ala Arg
                405                 410                 415
agt gcg atc aca gta gca gct gaa act tct ggt act ggt aaa gat agc    1296
Ser Ala Ile Thr Val Ala Ala Glu Thr Ser Gly Thr Gly Lys Asp Ser
            420                 425                 430
gat atg gcc ttc ttt agt tct tgg ggt cca tta cct gat ttc act tta    1344
Asp Met Ala Phe Phe Ser Ser Trp Gly Pro Leu Pro Asp Phe Thr Leu
        435                 440                 445
aag cca gat gtt tcg gcc cca ggt tat gat gtc att tca acc gct aac    1392
Lys Pro Asp Val Ser Ala Pro Gly Tyr Asp Val Ile Ser Thr Ala Asn
    450                 455                 460
ggc aat tca tac acg caa atg agc ggt act tca atg gct agt cca ttc    1440
Gly Asn Ser Tyr Thr Gln Met Ser Gly Thr Ser Met Ala Ser Pro Phe
465                 470                 475                 480
gtg gct ggt gct gca gct ctt gtg aga gaa aga tta tta aag acc aat    1488
Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Val Arg Glu Arg Leu Leu Lys Thr Asn
                485                 490                 495
cct aag tta aag ggt gct gct tta gtt gaa gcc atc aaa gct ttg tta    1536
Pro Lys Leu Lys Gly Ala Ala Leu Val Glu Ala Ile Lys Ala Leu Leu
            500                 505                 510
act aat acg gct gat cca caa gtt caa aat ggc tac aac act ttg gtc    1584
Thr Asn Thr Ala Asp Pro Gln Val Gln Asn Gly Tyr Asn Thr Leu Val
        515                 520                 525
tca cca aga aga caa ggt gct ggt caa att aat gtt ggt gcc gca act    1632
Ser Pro Arg Arg Gln Gly Ala Gly Gln Ile Asn Val Gly Ala Ala Thr
    530                 535                 540
aaa tct ccg gtt tat gtt act act gct gac gga act ggt gcc tta agc    1680
Lys Ser Pro Val Tyr Val Thr Thr Ala Asp Gly Thr Gly Ala Leu Ser
545                 550                 555                 560
tta cgc caa gtt ggc aat tcg acc act ttt gtc ttg aac ttg cat aac    1728
Leu Arg Gln Val Gly Asn Ser Thr Thr Phe Val Leu Asn Leu His Asn
                565                 570                 575
tta tca aat gaa gaa caa gaa tat aat ttt gat gac ttc ggc ggt ggc    1776
Leu Ser Asn Glu Glu Gln Glu Tyr Asn Phe Asp Asp Phe Gly Gly Gly
            580                 585                 590
ttt act gaa ctt agg aat aag gct aac ggt gtc ttc cat gat gtt caa    1824
Phe Thr Glu Leu Arg Asn Lys Ala Asn Gly Val Phe His Asp Val Gln
        595                 600                 605
tta gct ggt gct aga gtt aac ggt gac aat gtt gtt gtc tta aag cca    1872
Leu Ala Gly Ala Arg Val Asn Gly Asp Asn Val Val Val Leu Lys Pro
    610                 615                 620
aat gaa act aaa caa gtt acc tat act ttg aat tta act agc att aaa    1920
Asn Glu Thr Lys Gln Val Thr Tyr Thr Leu Asn Leu Thr Ser Ile Lys
625                 630                 635                 640
aag aat caa tta gtt gaa ggt ttc ttg aga ttt act aac tcc aag gat    1968
Lys Asn Gln Leu Val Glu Gly Phe Leu Arg Phe Thr Asn Ser Lys Asp
                645                 650                 655
aaa tca acc tta gtt gta cct tac ttg tca tac tat ggc gat atg act    2016
Lys Ser Thr Leu Val Val Pro Tyr Leu Ser Tyr Tyr Gly Asp Met Thr
            660                 665                 670
aag gaa aat gtc ttt gac caa aat gct aat gat cct aag cct gat att    2064
Lys Glu Asn Val Phe Asp Gln Asn Ala Asn Asp Pro Lys Pro Asp Ile
        675                 680                 685
caa ggt aat cgt tta gtt aac gaa gat aat tat cct cgt ggt att gct    2112
Gln Gly Asn Arg Leu Val Asn Glu Asp Asn Tyr Pro Arg Gly Ile Ala
    690                 695                 700
gac gaa aat tca tta aaa gaa tta gtc aat gtt gac ggt aat tat aac    2160
Asp Glu Asn Ser Leu Lys Glu Leu Val Asn Val Asp Gly Asn Tyr Asn
705                 710                 715                 720
tgg caa gaa gtt gct aag tta tat gag agt ggt aaa gtt gcc ttc tca    2208
Trp Gln Glu Val Ala Lys Leu Tyr Glu Ser Gly Lys Val Ala Phe Ser
                725                 730                 735
cca aat ggt gat cat aag agt gac tta att aag cca tac gct tac ttg    2256
Pro Asn Gly Asp His Lys Ser Asp Leu Ile Lys Pro Tyr Ala Tyr Leu
            740                 745                 750
aaa caa aat gtc aag gac ttg aag gtt gag att ctt gat ggt tca ggt    2304
Lys Gln Asn Val Lys Asp Leu Lys Val Glu Ile Leu Asp Gly Ser Gly
        755                 760                 765
aaa gtt gtt cgt gtc ctt gct gat tct cgt ggc gtt gaa aag tca tac    2352
Lys Val Val Arg Val Leu Ala Asp Ser Arg Gly Val Glu Lys Ser Tyr
    770                 775                 780
cat tca gac ggt gat ggt gca aca gtt gac ctt gat aat ggt gca act    2400
His Ser Asp Gly Asp Gly Ala Thr Val Asp Leu Asp Asn Gly Ala Thr
785                 790                 795                 800
aac tct gat gtc ttc gac tgg gat ggt aaa tta tat gat gct aag act    2448
Asn Ser Asp Val Phe Asp Trp Asp Gly Lys Leu Tyr Asp Ala Lys Thr
                805                 810                 815
ggt aag atg gtt gcc gct cca gat ggc aat tac act tac cgc ttc atc    2496
Gly Lys Met Val Ala Ala Pro Asp Gly Asn Tyr Thr Tyr Arg Phe Ile
            820                 825                 830
gca act ttg tat aac gat ggc cca caa aaa gtt caa act aat gat acc    2544
Ala Thr Leu Tyr Asn Asp Gly Pro Gln Lys Val Gln Thr Asn Asp Thr
        835                 840                 845
cca gtt atc atc gat acc act gct cct gtt tta agc gat gtt cac tac    2592
Pro Val Ile Ile Asp Thr Thr Ala Pro Val Leu Ser Asp Val His Tyr
    850                 855                 860
aac cgc aga agt aat aca att act ggt agt tac gct gat aag ggt gct    2640
Asn Arg Arg Ser Asn Thr Ile Thr Gly Ser Tyr Ala Asp Lys Gly Ala
865                 870                 875                 880
ggc ttt act gac tac tca tac gct aca gta act att aat gat cat gca    2688
Gly Phe Thr Asp Tyr Ser Tyr Ala Thr Val Thr Ile Asn Asp His Ala
                885                 890                 895
ttt ggt ttc aag ttg aat gat ggc aag aac tct ggt ttc gat gat gct     2736
Phe Gly Phe Lys Leu Asn Asp Gly Lys Asn Ser Gly Phe Asp Asp Ala
            900                 905                 910
aac aag aca aaa ggt cac ttc agt ttc aag tta act ggg gat gaa ctt     2784
Asn Lys Thr Lys Gly His Phe Ser Phe Lys Leu Thr Gly Asp Glu Leu
        915                 920                 925
aaa gca tta act agt gca gat aac cta gtt tca gta gct ttc agt gac     2832
Lys Ala Leu Thr Ser Ala Asp Asn Leu Val Ser Val Ala Phe Ser Asp
    930                 935                 940
gtt gca gat aac aca gtt gta aag agc ttg aaa ctt gat ggt agt ttt     2880
Val Ala Asp Asn Thr Val Val Lys Ser Leu Lys Leu Asp Gly Ser Phe
945                 950                 955                 960
gat caa cca ggc gtt tca att tgg aat gca act aat ggt tta cca ttt     2928
Asp Gln Pro Gly Val Ser Ile Trp Asn Ala Thr Asn Gly Leu Pro Phe
                965                 970                 975
aat gaa aac tca gct gac tat gac aag gct gct aac acc ttc aac tta     2976
Asn Glu Asn Ser Ala Asp Tyr Asp Lys Ala Ala Asn Thr Phe Asn Leu
            980                 985                 990
cgt ggt agt gct agt gat gac ttc  tac ctt aat ggt aag  tgg gtt caa   3024
Arg Gly Ser Ala Ser Asp Asp Phe  Tyr Leu Asn Gly Lys  Trp Val Gln
        995                 1000                 1005
ctt gat  gac aat ggt caa ttc  gtt gtc cca gtt agt  gcg caa gga      3069
Leu Asp  Asp Asn Gly Gln Phe  Val Val Pro Val Ser  Ala Gln Gly
    1010                 1015                 1020
gaa caa  gat tta gtc ttc agt  tct gat gat ggt ggt  aaa gat gtc      3114
Glu Gln  Asp Leu Val Phe Ser  Ser Asp Asp Gly Gly  Lys Asp Val
    1025                 1030                 1035
ctt act  acc ttt aga aat tac  aca cca aag gct aaa  ttt gca tgg      3159
Leu Thr  Thr Phe Arg Asn Tyr  Thr Pro Lys Ala Lys  Phe Ala Trp
    1040                 1045                 1050
caa cat  gta gat ggt caa gat  gaa cac ttt ggc cca  gca att tac      3204
Gln His  Val Asp Gly Gln Asp  Glu His Phe Gly Pro  Ala Ile Tyr
    1055                1060                 1065
tca atc  ttt ggt agt aac cca  gat gat att gtt gtt  caa gct gca      3249
Ser Ile  Phe Gly Ser Asn Pro  Asp Asp Ile Val Val  Gln Ala Ala
    1070                 1075                 1080
gtt act  aag ggt gat aac gtt  aag gcc ttt gct aag  gat tac ttc      3294
Val Thr  Lys Gly Asp Asn Val  Lys Ala Phe Ala Lys  Asp Tyr Phe
    1085                 1090                 1095
act ggt  caa att tat act ggt  gtt gta aaa gat ggg  gtt gcc aca      3339
Thr Gly  Gln Ile Tyr Thr Gly  Val Val Lys Asp Gly  Val Ala Thr
    1100                 1105                 1110
ttc cac  gtt aag aca agt att  aac aaa gat cca aag  act aat atc    3384
Phe His  Val Lys Thr Ser Ile  Asn Lys Asp Pro Lys  Thr Asn Ile
    1115                 1120                 1125
ttt gct  cgt gcc tta tta caa  ggt tgg act gaa gtt  gat gga cca    3429
Phe Ala  Arg Ala Leu Leu Gln  Gly Trp Thr Glu Val  Asp Gly Pro
    1130                 1135                  1140
acc ttt  aat gat aag caa aag  act gat cca act gct  att aag gat    3474
Thr Phe  Asn Asp Lys Gln Lys  Thr Asp Pro Thr Ala  Ile Lys Asp
    1145                 1150                 1155
gct aac  tac atc ggt gtc tac  tat gat aaa gat gct  gta gct cat    3519
Ala Asn  Tyr Ile Gly Val Tyr  Tyr Asp Lys Asp Ala  Val Ala His
    1160                 1165                 1170
gta tac  act aat cgt gat gat  tta ggt gta gta atg  acg gat gaa    3564
Val Tyr  Thr Asn Arg Asp Asp  Leu Gly Val Val Met  Thr Asp Glu
    1175                 1180                 1185
gtg gca  gat cca aag gac ttc  ggc cca ggt cta tat  cca ggt cat    3609
Val Ala  Asp Pro Lys Asp Phe  Gly Pro Gly Leu Tyr  Pro Gly His
    1190                 1195                 1200
tct gct  cca agt gca cat aat  cca cat atc aag ttt  gat tac ttg    3654
Ser Ala  Pro Ser Ala His Asn  Pro His Ile Lys Phe  Asp Tyr Leu
    1205                 1210                 1215
gat gat  aat aat gta gct agt  gtt ggt gca gaa gcc  gtt aag aag    3699
Asp Asp  Asn Asn Val Ala Ser  Val Gly Ala Glu Ala  Val Lys Lys
    1220                 1225                 1230
ggc tac  tac aac cca aga aca  cat gag ttt acg cta  act ggc caa    3744
Gly Tyr  Tyr Asn Pro Arg Thr  His Glu Phe Thr Leu  Thr Gly Gln
    1235                 1240                 1245
gtt gat  gct aat gta atc agt  tta acc ttc tta gca  gct agt cca    3789
Val Asp  Ala Asn Val Ile Ser  Leu Thr Phe Leu Ala  Ala Ser Pro
    1250                 1255                 1260
tat gaa  gaa gct gca gaa aat  caa gct gat att agc  caa aat ggt    3834
Tyr Glu  Glu Ala Ala Glu Asn  Gln Ala Asp Ile Ser  Gln Asn Gly
    1265                 1270                 1275
aag ttt  aag ttt agc ttc aag  att cca aat gct ggt  aca aga gaa    3879
Lys Phe  Lys Phe Ser Phe Lys  Ile Pro Asn Ala Gly  Thr Arg Glu
    1280                 1285                 1290
tta tca  tac ttg tac atg act  tct gac ggt aaa gta  aca cgt ggt    3924
Leu Ser  Tyr Leu Tyr Met Thr  Ser Asp Gly Lys Val  Thr Arg Gly
    1295                 1300                 1305
tct ttg  aca ctt atc tta gat  act gtt ttg cct act  tta cat gtt    3969
Ser Leu  Thr Leu Ile Leu Asp  Thr Val Leu Pro Thr  Leu His Val
    1310                 1315                 1320
gat caa  atg cca gca aat cgt  gca gaa gtt gaa tac  act acc agc    4014
Asp Gln  Met Pro Ala Asn Arg  Ala Glu Val Glu Tyr  Thr Thr Ser
    1325                 1330                 1335
aat cca  acc ttt acc ctt tct  ggt gta gct aat gat  aac tta gat    4059
Asn Pro  Thr Phe Thr Leu Ser  Gly Val Ala Asn Asp  Asn Leu Asp
    1340                 1345                 1350
gct tac  agt gtc tac atc aat  ggt gat aac gtc ttt  agt caa ttt    4104
Ala Tyr  Ser Val Tyr Ile Asn  Gly Asp Asn Val Phe  Ser Gln Phe
    1355                 1360                 1365
ggc aat  tct ggc tac aac ttc  att cca ggt ttg tac  aat gat cca    4149
Gly Asn  Ser Gly Tyr Asn Phe  Ile Pro Gly Leu Tyr  Asn Asp Pro
    1370                 1375                 1380
aag caa  aag aca cct aat act  tat ggt cca tat aac  ttt aat gtt    4194
Lys Gln  Lys Thr Pro Asn Thr  Tyr Gly Pro Tyr Asn  Phe Asn Val
    1385                 1390                 1395
aag gaa  gct ttg gat gat gaa  aat agt caa cca act  act cac gtc    4239
Lys Glu  Ala Leu Asp Asp Glu  Asn Ser Gln Pro Thr  Thr His Val
    1400                 1405                 1410
ttt gtt  gtt gca att gtt gat  gct gta ggg aac cgc  gtt gaa aag    4284
Phe Val  Val Ala Ile Val Asp  Ala Val Gly Asn Arg  Val Glu Lys
    1415                 1420                 1425
aga tta  gtt gtt cac tat gat  cca aac ttt ggt aag  acc gca gct    4329
Arg Leu  Val Val His Tyr Asp  Pro Asn Phe Gly Lys  Thr Ala Ala
    1430                 1435                 1440
aaa cca  gaa gat aat aaa ggc  gag ggt aat aaa caa  caa tct act    4374
Lys Pro  Glu Asp Asn Lys Gly  Glu Gly Asn Lys Gln  Gln Ser Thr
    1445                 1450                 1455
agt cct  gct gaa cca gtg aag  gta cca gct ggt caa  tca agt cag    4419
Ser Pro  Ala Glu Pro Val Lys  Val Pro Ala Gly Gln  Ser Ser Gln
    1460                 1465                 1470
cca aaa  caa cca act gct cca  gtt caa tca tca act  ggt aag aag    4464
Pro Lys  Gln Pro Thr Ala Pro  Val Gln Ser Ser Thr  Gly Lys Lys
    1475                 1480                 1485
gaa gag  agt agc aag cca gct  gca act cca act aag  cca gaa gca    4509
Glu Glu  Ser Ser Lys Pro Ala  Ala Thr Pro Thr Lys  Pro Glu Ala
    1490                 1495                 1500
ggt aag  gaa gta act cca gct  aag cca agt aaa cca  gaa aat gtt    4554
Gly Lys  Glu Val Thr Pro Ala  Lys Pro Ser Lys Pro  Glu Asn Val
    1505                 1510                 1515
gct caa  cca aca act ggt aag  aag gaa gag agt agc  aag cca gct    4599
Ala Gln  Pro Thr Thr Gly Lys  Lys Glu Glu Ser Ser  Lys Pro Ala
    1520                 1525                 1530
gta act  cca act aag cca gaa  gga ggc aag gaa gta  gcc cca gct    4644
Val Thr  Pro Thr Lys Pro Glu  Gly Gly Lys Glu Val  Ala Pro Ala
    1535                 1540                 1545
aag cca  agt aaa cca gcc agt  gcc act caa cca aca  act ggt aag    4689
Lys Pro  Ser Lys Pro Ala Ser  Ala Thr Gln Pro Thr  Thr Gly Lys
    1550                 1555                 1560
aag gaa  gaa agt ggc aag cca  gcc gca act cca gct  caa cca gct    4734
Lys Glu  Glu Ser Gly Lys Pro  Ala Ala Thr Pro Ala  Gln Pro Ala
    1565                 1570                 1575
aag cca  gca agt gaa aac aat  caa gct agt caa gca  act caa cct    4779
Lys Pro  Ala Ser Glu Asn Asn  Gln Ala Ser Gln Ala  Thr Gln Pro
    1580                 1585                 1590
tca caa  cct gca ggt caa ccg  gtc gct gct aag aaa  gat gaa agt    4824
Ser Gln  Pro Ala Gly Gln Pro  Val Ala Ala Lys Lys  Asp Glu Ser
    1595                 1600                 1605
aac aaa  caa gat act cct ctg  aca aaa cca gct aat  ggt tca caa    4869
Asn Lys  Gln Asp Thr Pro Leu  Thr Lys Pro Ala Asn  Gly Ser Gln
    1610                 1615                 1620
tca gaa  act tca aca tta tca  act gct cca act gaa  tca act aaa    4914
Ser Glu  Thr Ser Thr Leu Ser  Thr Ala Pro Thr Glu  Ser Thr Lys
    1625                 1630                 1635
tca agt  tca gaa aat aat aat  tta cct tca tct cct  gca caa agt    4959
Ser Ser  Ser Glu Asn Asn Asn  Leu Pro Ser Ser Pro  Ala Gln Ser
    1640                 1645                 1650
aac gaa  caa tca gtt gct ggt  cct gtt aaa gct caa  aag gtt gca    5004
Asn Glu  Gln Ser Val Ala Gly  Pro Val Lys Ala Gln  Lys Val Ala
    1655                 1660                 1665
aga aga  gct aaa caa gtt aag  tta acc cgt aat gca  cgt gca tat    5049
Arg Arg  Ala Lys Gln Val Lys  Leu Thr Arg Asn Ala  Arg Ala Tyr
    1670                 1675                 1680
aat ctt  aat ggg aaa tta gtc  ctt aag aag ggt aaa  gtt ctt act    5094
Asn Leu  Asn Gly Lys Leu Val  Leu Lys Lys Gly Lys  Val Leu Thr
    1685                 1690                 1695
ctt aga  aat aat ggc cgt gta  gta act att aaa tgt  cat aaa tat    5139
Leu Arg  Asn Asn Gly Arg Val  Val Thr Ile Lys Cys  His Lys Tyr
    1700                 1705                 1710
tac cag  gtt ggt aag aat gtt  tac gtt gct gtt gcc  aac act tta    5184
Tyr Gln  Val Gly Lys Asn Val  Tyr Val Ala Val Ala  Asn Thr Leu
    1715                 1720                 1725
aag caa  aga aca ttt aaa cat  aat gtt gct gtt tat  aac cat aaa    5229
Lys Gln  Arg Thr Phe Lys His  Asn Val Ala Val Tyr  Asn His Lys
    1730                 1735                 1740
ggc aag  aaa gtt ggt gtt ctt  aaa gct ggc aga aaa  gtt gtt tta      5274
Gly Lys  Lys Val Gly Val Leu  Lys Ala Gly Arg Lys  Val Val Leu
    1745                1750                 1755
tta aac  aat ggt aga acg aca  act att cat ggt aag  aag ttt tat      5319
Leu Asn  Asn Gly Arg Thr Thr  Thr Ile His Gly Lys  Lys Phe Tyr
    1760                 1765                 1770
caa gtt  ggt aag gat caa ttt  gtt aag gct agt gat  ctt              5358
Gln Val  Gly Lys Asp Gln Phe  Val Lys Ala Ser Asp  Leu
    1775                 1780                 1785
<210>20
<211>1786
<212>PRT
<213>纤维二糖乳酸杆菌(Lactobacillus helveticus)
<400>20
Met Asn Lys Ser Asp Leu Lys Glu Ala Asn Gln Phe Lys Tyr Val Tyr
1               5                   10                  15
Gln Ser Gly Gln Lys Leu Asn Ala Val His Asn Gln Lys Ser Ser Arg
            20                  25                  30
Phe Leu Ser Lys Leu His Lys Lys Trp Ala Gly Ala Thr Ile Val Ala
        35                  40                  45
Leu Ala Ser Ser Thr Val Leu Leu Phe Ser Ser His Asn Val Lys Ala
    50                  55                  60
Asp Ala Gln Ala Pro Ser Asp Asp Lys Gln Pro Asp Pro Val Val Gln
65                  70                  75                  80
Lys Ser Glu Gln Ser Gln Gly Gln Thr Leu Gln Ala Val Gln Arg Lys
                85                  90                  95
Asp Asp Ala Val Pro Ser Asp Ala Tyr Gln Gln Ser Ala Ala Val Gln
            100                 105                 110
Ala Asn Asn Asn Asn Asp Gln Gln Ala Gln Asp Asn Lys Gln Ala Ser
       115                 120                 125
Gln Pro Thr Ser Pro Val Ala Gln Ala Gln Pro Ala Gln Gln Gln Lys
    130                 135                 140
Ala Lys Asp Val Val Pro Ser Lys Pro Gln Pro Gln Pro Gln Pro Ala
145                 150                 155                 160
Lys Gln Thr Thr Asn Gly Gln Thr Glu Asp Glu Asp Gly Gln Lys Asp
                165                 170                 175
Lys Asn Gly Val Gln Leu Pro Ala Asn Asn Gln Asp His Val Lys Gly
            180                 185                 190
Asn Val Gln Ser Ala Trp Asp Gln Gly Tyr Arg Gly Glu His Thr Val
        195                 200                 205
Val Ala Val Ile Asp Ser Gly Val Asp Val His His Lys Asp Phe Leu
    210                 215                 220
Thr Met Pro Lys Asn Pro Lys Leu Thr Ala Asp Gln Met Lys Arg Leu
225                 230                 235                 240
Ile Lys Arg Leu Gly Tyr Gly Arg Tyr Val Asn Glu Lys Phe Pro Phe
                245                 250                 255
Ala Tyr Asn Tyr Val Asp Asn Glu Asn Asp His Leu Lys Ala Pro Asn
            260                 265                 270
Gly Glu Pro His Gly Gln His Val Ser Gly Ile Ile Ala Ala Asp Gly
        275                 280                 285
His Pro Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Val Val Gly Val Ala Pro Glu Ala
    290                 295                 300
Gln Leu Met Gln Leu Lys Val Phe Gly Asp Asn Ser Thr Ser Leu Asp
305                 310                 315                 320
Met Ala Lys Glu Ile Cys Asp Ala Val Asn Leu Gly Ala Asp Val Ile
                325                 330                 335
Asn Met Ser Leu Gly Gly Gly Val Ser Ala Ala Asp Leu Asn Ile Gln
            340                 345                 350
Asp Gln Arg Ala Val Gln Tyr Ala Val Asp His Gly Val Val Val Val
        355                 360                 365
Ile Ser Ala Ala Asn Asn Gly Asn Ala Ala Ser Val Asp Asn Pro Thr
    370                 375                 380
His Leu Thr Asp Leu Asp Asn Tyr Gln Ala Gly Gly Asn Ala Gly Asn
385                 390                 395                 400
Tyr Asn Pro Phe Ser Ser Ser Thr Val Ala Asn Pro Gly Ala Ala Arg
                405                 410                 415
Ser Ala Ile Thr Val Ala Ala Glu Thr Ser Gly Thr Gly Lys Asp Ser
            420                 425                 430
Asp Met Ala Phe Phe Ser Ser Trp Gly Pro Leu Pro Asp Phe Thr Leu
        435                 440                 445
Lys Pro Asp Val Ser Ala Pro Gly Tyr Asp Val Ile Ser Thr Ala Asn
    450                 455                 460
Gly Asn Ser Tyr Thr Gln Met Ser Gly Thr Ser Met Ala Ser Pro Phe
465                 470                 475                 480
Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Val Arg Glu Arg Leu Leu Lys Thr Asn
                485                 490                 495
Pro Lys Leu Lys Gly Ala Ala Leu Val Glu Ala Ile Lys Ala Leu Leu
            500                 505                 510
Thr Asn Thr Ala Asp Pro Gln Val Gln Asn Gly Tyr Asn Thr Leu Val
        515                 520                 525
Ser Pro Arg Arg Gln Gly Ala Gly Gln Ile Asn Val Gly Ala Ala Thr
    530                 535                 540
Lys Ser Pro Val Tyr Val Thr Thr Ala Asp Gly Thr Gly Ala Leu Ser
545                 550                 555                 560
Leu Arg Gln Val Gly Asn Ser Thr Thr Phe Val Leu Asn Leu His Asn
                565                 570                 575
Leu Ser Asn Glu Glu Gln Glu Tyr Asn Phe Asp Asp Phe Gly Gly Gly
            580                 585                 590
Phe Thr Glu Leu Arg Asn Lys Ala Asn Gly Val Phe His Asp Val Gln
        595                 600                 605
Leu Ala Gly Ala Arg Val Asn Gly Asp Asn Val Val Val Leu Lys Pro
    610                 615                 620
Asn Glu Thr Lys Gln Val Thr Tyr Thr Leu Asn Leu Thr Ser Ile Lys
625                 630                 635                 640
Lys Asn Gln Leu Val Glu Gly Phe Leu Arg Phe Thr Asn Ser Lys Asp
                645                 650                 655
Lys Ser Thr Leu Val Val Pro Tyr Leu Ser Tyr Tyr Gly Asp Met Thr
            660                 665                 670
Lys Glu Asn Val Phe Asp Gln Asn Ala Asn Asp Pro Lys Pro Asp Ile
        675                 680                 685
Gln Gly Asn Arg Leu Val Asn Glu Asp Asn Tyr Pro Arg Gly Ile Ala
    690                 695                 700
Asp Glu Asn Ser Leu Lys Glu Leu Val Asn Val Asp Gly Asn Tyr Asn
705                 710                 715                 720
Trp Gln Glu Val Ala Lys Leu Tyr Glu Ser Gly Lys Val Ala Phe Ser
                725                 730                 735
Pro Asn Gly Asp His Lys Ser Asp Leu Ile Lys Pro Tyr Ala Tyr Leu
            740                 745                 750
Lys Gln Asn Val Lys Asp Leu Lys Val Glu Ile Leu Asp Gly Ser Gly
        755                 760                 765
Lys Val Val Arg Val Leu Ala Asp Ser Arg Gly Val Glu Lys Ser Tyr
    770                 775                 780
His Ser Asp Gly Asp Gly Ala Thr Val Asp Leu Asp Asn Gly Ala Thr
785                 790                 795                 800
Asn Ser Asp Val Phe Asp Trp Asp Gly Lys Leu Tyr Asp Ala Lys Thr
                805                 810                 815
Gly Lys Met Val Ala Ala Pro Asp Gly Asn Tyr Thr Tyr Arg Phe Ile
             820                 825                 830
Ala Thr Leu Tyr Asn Asp Gly Pro Gln Lys Val Gln Thr Asn Asp Thr
        835                 840                 845
Pro Val Ile Ile Asp Thr Thr Ala Pro Val Leu Ser Asp Val His Tyr
    850                 855                 860
Asn Arg Arg Ser Asn Thr Ile Thr Gly Ser Tyr Ala Asp Lys Gly Ala
865                 870                 875                 880
Gly Phe Thr Asp Tyr Ser Tyr Ala Thr Val Thr Ile Asn Asp His Ala
                885                 890                 895
Phe Gly Phe Lys Leu Asn Asp Gly Lys Asn Ser Gly Phe Asp Asp Ala
            900                 905                 910
Asn Lys Thr Lys Gly His Phe Ser Phe Lys Leu Thr Gly Asp Glu Leu
        915                 920                 925
Lys Ala Leu Thr Ser Ala Asp Asn Leu Val Ser Val Ala Phe Ser Asp
    930                 935                 940
Val Ala Asp Asn Thr Val Val Lys Ser Leu Lys Leu Asp Gly Ser Phe
945                 950                 955                 960
Asp Gln Pro Gly Val Ser Ile Trp Asn Ala Thr Asn Gly Leu Pro Phe
                965                 970                 975
Asn Glu Asn Ser Ala Asp Tyr Asp Lys Ala Ala Asn Thr Phe Asn Leu
            980                 985                 990
Arg Gly Ser Ala Ser Asp Asp Phe  Tyr Leu Asn Gly Lys  Trp Val Gln
        995                 1000                 1005
Leu Asp  Asp Asn Gly Gln Phe  Val Val Pro Val Ser  Ala Gln Gly
    1010                 1015                 1020
Glu Gln  Asp Leu Val Phe Ser  Ser Asp Asp Gly Gly  Lys Asp Val
    1025                 1030                 1035
Leu Thr  Thr Phe Arg Asn Tyr  Thr Pro Lys Ala Lys  Phe Ala Trp
    1040                 1045                 1050
Gln His  Val Asp Gly Gln Asp  Glu His Phe Gly Pro  Ala Ile Tyr
    1055                 1060                 1065
Ser Ile  Phe Gly Ser Asn Pro  Asp Asp Ile Val Val  Gln Ala Ala
    1070                1075                  1080
Val Thr  Lys Gly Asp Asn Val  Lys Ala Phe Ala Lys  Asp Tyr Phe
    1085                 1090                 1095
Thr Gly  Gln Ile Tyr Thr Gly  Val Val Lys Asp Gly  Val Ala Thr
    1100                 1105                 1110
Phe His  Val Lys Thr Ser Ile  Asn Lys Asp Pro Lys  Thr Asn Ile
    1115                 1120                 1125
Phe Ala  Arg Ala Leu Leu Gln  Gly Trp Thr Glu Val  Asp Gly Pro
    1130                 1135                 1140
Thr Phe  Asn Asp Lys Gln Lys  Thr Asp Pro Thr Ala  Ile Lys Asp
    1145                 1150                 1155
Ala Asn  Tyr Ile Gly Val Tyr  Tyr Asp Lys Asp Ala  Val Ala His
    1160                 1165                 1170
Val Tyr  Thr Asn Arg Asp Asp  Leu Gly Val Val Met  Thr Asp Glu
    1175                 1180                 1185
Val Ala  Asp Pro Lys Asp Phe  Gly Pro Gly Leu Tyr  Pro Gly His
    1190                 1195                 1200
Ser Ala  Pro Ser Ala His Asn  Pro His Ile Lys Phe  Asp Tyr Leu
    1205                 1210                 1215
Asp Asp  Asn Asn Val Ala Ser  Val Gly Ala Glu Ala  Val Lys Lys
    1220                 1225                 1230
Gly Tyr  Tyr Asn Pro Arg Thr  His Glu Phe Thr Leu  Thr Gly Gln
    1235                 1240                 1245
Val Asp  Ala Asn Val Ile Ser  Leu Thr Phe Leu Ala  Ala Ser Pro
    1250                 1255                 1260
Tyr Glu  Glu Ala Ala Glu Asn  Gln Ala Asp Ile Ser  Gln Asn Gly
    1265                 1270                 1275
Lys Phe  Lys Phe Ser Phe Lys  Ile Pro Asn Ala Gly  Thr Arg Glu
    1280                 1285                 1290
Leu Ser  Tyr Leu Tyr Met Thr  Ser Asp Gly Lys Val  Thr Arg Gly
    1295                 1300                1305
Ser Leu  Thr Leu Ile Leu Asp  Thr Val Leu Pro Thr  Leu His Val
    1310                 1315                 1320
Asp Gln  Met Pro Ala Asn Arg  Ala Glu Val Glu Tyr  Thr Thr Ser
    1325                 1330                 1335
Asn Pro  Thr Phe Thr Leu Ser  Gly Val Ala Asn Asp  Asn Leu Asp
    1340                 1345                 1350
Ala Tyr  Ser Val Tyr Ile Asn  Gly Asp Asn Val Phe  Ser Gln Phe
    1355                 1360                 1365
Gly Asn  Ser Gly Tyr Asn Phe  Ile Pro Gly Leu Tyr  Asn Asp Pro
    1370                 1375                 1380
Lys Gln  Lys Thr Pro Asn Thr  Tyr Gly Pro Tyr Asn  Phe Asn Val
    1385                 1390                 1395
Lys Glu  Ala Leu Asp Asp Glu  Asn Ser Gln Pro Thr  Thr His Val
    1400                 1405                 1410
Phe Val  Val Ala Ile Val Asp  Ala Val Gly Asn Arg  Val Glu Lys
    1415                 1420                 1425
Arg Leu  Val Val His Tyr Asp  Pro Asn Phe Gly Lys  Thr Ala Ala
    1430                 1435                 1440
Lys Pro  Glu Asp Asn Lys Gly  Glu Gly Asn Lys Gln  Gln Ser Thr
    1445                 1450                 1455
Ser Pro  Ala Glu Pro Val Lys  Val Pro Ala Gly Gln  Ser Ser Gln
    1460                 1465                 1470
Pro Lys  Gln Pro Thr Ala Pro  Val Gln Ser Ser Thr  Gly Lys Lys
    1475                 1480                 1485
Glu Glu  Ser Ser Lys Pro Ala  Ala Thr Pro Thr Lys  Pro Glu Ala
    1490                 1495                 1500
Gly Lys  Glu Val Thr Pro Ala  Lys Pro Ser Lys Pro  Glu Asn Val
    1505                 1510                 1515
Ala Gln  Pro Thr Thr Gly Lys  Lys Glu Glu Ser Ser  Lys Pro Ala
    1520                 1525                 1530
Val Thr  Pro Thr Lys Pro Glu  Gly Gly Lys Glu Val  Ala Pro Ala
    1535                 1540                 1545
Lys Pro  Ser Lys Pro Ala Ser  Ala Thr Gln Pro Thr  Thr Gly Lys
    1550                 1555                 1560
Lys Glu  Glu Ser Gly Lys Pro  Ala Ala Thr Pro Ala  Gln Pro Ala
    1565                 1570                 1575
Lys Pro  Ala Ser Glu Asn Asn  Gln Ala Ser Gln Ala  Thr Gln Pro
    1580                 1585                 1590
Ser Gln  Pro Ala Gly Gln Pro  Val Ala Ala Lys Lys  Asp Glu Ser
    1595                 1600                 1605
Asn Lys  Gln Asp Thr Pro Leu  Thr Lys Pro Ala Asn  Gly Ser Gln
    1610                 1615                 1620
Ser Glu  Thr Ser Thr Leu Ser  Thr Ala Pro Thr Glu  Ser Thr Lys
    1625                 1630                 1635
Ser Ser  Ser Glu Asn Asn Asn  Leu Pro Ser Ser Pro  Ala Gln Ser
    1640                 1645                 1650
Asn Glu  Gln Ser Val Ala Gly  Pro Val Lys Ala Gln  Lys Val Ala
    1655                 1660                 1665
Arg Arg  Ala Lys Gln Val Lys  Leu Thr Arg Asn Ala  Arg Ala Tyr
    1670                 1675                 1680
Asn Leu  Asn Gly Lys Leu Val  Leu Lys Lys Gly Lys  Val Leu Thr
    1685                 1690                 1695
Leu Arg  Asn Asn Gly Arg Val  Val Thr Ile Lys Cys  His Lys Tyr
    1700                 1705                 1710
Tyr Gln  Val Gly Lys Asn Val  Tyr Val Ala Val Ala  Asn Thr Leu
    1715                 1720                 1725
Lys Gln  Arg Thr Phe Lys His  Asn Val Ala Val Tyr  Asn His Lys
    1730                 1735                 1740
Gly Lys  Lys Val Gly Val Leu  Lys Ala Gly Arg Lys  Val Val Leu
    1745                 1750                 1755
Leu Asn  Asn Gly Arg Thr Thr  Thr Ile His Gly Lys  Lys Phe Tyr
    1760                 1765                 1770
Gln Val  Gly Lys Asp Gln Phe  Val Lys Ala Ser Asp  Leu
    1775                 1780                 1785