包含多取代的蛋白酶变体的漂白组合物 |
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| 申请号 | CN200410039976.6 | 申请日 | 1998-10-23 | 公开(公告)号 | CN1597899A | 公开(公告)日 | 2005-03-23 |
| 申请人 | 宝洁公司; 詹伦卡国际有限公司; | 发明人 | C·K·高希; A·C·贝克; R·奥塔尼; A·布施; M·S·肖维尔; V·彻尔伦伯格; 小J·T·凯利斯; C·佩斯; J·纳德赫尼; D·P·纳基; K·D·科利尔; R·M·卡尔德维尔; A·J·普洛瑟; | ||||
| 摘要 | 包含蛋白酶变体的漂白组合物及其用法。一种漂白组合物，其包含蛋白酶变体， 漂白剂 和一种或多种清洗辅助物质，所述蛋白酶变体包括在对应于 淀粉 分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103 位置 的 氨 基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基，同时结合在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的如 说明书 所述位置的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基。另一种漂白组合物包含蛋白酶变体，漂白剂和一种或多种清洗辅助物质，所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种漂白组合物，其包含： (a)有效量的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉 分解芽孢杆菌枯草溶菌素的230和232位置中的一个或多个氨基酸残基 位置处用另一种天然产生的氢基酸残基取代所述位置的氨基酸残基； (b)一种漂白剂，其是有机过氧酸或是漂白活化剂和能够产生过氧 化氢的过氧化合物的混合物，所述产生的过氧化氢可在由该组合物形成 的漂白溶液中就地与活化剂反应形成有机过氧酸；和 (c)一种或多种清洗辅助材料。 2.根据权利要求1的漂白组合物，其中所述蛋白酶变体是由枯草 芽孢杆菌，优选缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素或枯草溶菌素309衍生得到。 3.根据权利要求1的漂白组合物，其中所述蛋白酶变体包括在选 自以下位置的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代： (1)230位置和在以下68、103、104、159、232、236和245位置 中的一个或多个位置； (2)232位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、 103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、 217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个 或多个位置； (3)232位置和在以下103、104、236和245位置中的一个或多个 位置； (4)232和103位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、 102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、 213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中 的一个或多个位置； (5)232和104位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、 102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、 213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中 的一个或多个位置； (6)232和236位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、 102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、 213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中 的一个或多个位置； |
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| 说明书全文 | 本申请是申请日为1998年10月23日、申请号为98812637.0的专 利申请的分案申请。发明领域 本发明涉及包含一种或多种蛋白酶和具有一种或多种漂白剂，尤其 是漂白活化剂的漂白体系的漂白组合物，特别是洗衣洗涤剂和使用这种 漂白组合物的方法，其中所述蛋白酶是多取代的蛋白酶变体。 发明背景 长期以来，在洗衣洗涤剂中常规使用各种类型的酶以助于从织物上 去除某些污渍。这些污渍一般与类脂和蛋白污垢有关。然而，已证实酶 对其他类型的污垢和污渍有较低的效果。 1997年10月10日授权的Ghosh等的美国专利5677272公开了漂 白组合物，其包含：1)一种蛋白酶变体，其包括在对应于淀粉分解芽孢 杆菌枯草溶菌素的76位置处，同时结合99，101，103，104，107，123， 27，105，109，126，128，135，156，166，195，197，204，206，210， 216，217，218，222，260，265和/或274位中的一个或多个位置处用 其他氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基；2)一种漂白剂；和3)一 种或多种与蛋白酶变体和漂白剂相容的漂白组合物材料。 然而，对更有效地去除污渍和/或使污秽清洁的常规漂白组合物的 需求仍存在。 本发明，已发现新蛋白酶和漂白剂，尤其是和漂白活化剂的组合， 其中所述新蛋白酶是多取代的蛋白酶变体，该组合物比常规漂白组合物 增强和改善了去污渍和/或使污秽清洁的效果。 因此，本发明的目的是提供漂白组合物，特别是洗衣洗涤剂组合物， 其具有改善的去污渍和/或污垢和/或使污秽清洁的效果和/或清洁织物 效果和/或漂白性质。 由下文的详细描述，本发明的这些和其他目的将是显然的。 发明概述 本发明满足了上述需求，在于令人吃惊地发现本发明多取代的蛋白 酶变体当用于漂白组合物中时比含常规蛋白酶的漂白组合物提供了改善 和增强的清洗效果，包括，但不限于去除和/或减少污渍和/或污垢和/ 或保持白度和/或使污秽清洁和/或去除和/或减少污斑和/或膜。 本发明多取代的蛋白酶变体适用于高和低密度颗粒、重垢和轻垢型 液体、片、粉末、凝胶体、泡沫体、喷洒剂、膏体以及合成洗涤剂条组 合物和其他漂白组合物。 本发明的一方面，漂白组合物包含： (a)蛋白酶变体，优选有效量的蛋白酶变体，按该漂白组合物的重 量计更优选约0.0001％-10％蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体包括在对 应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位的氨基酸残基位置处用另一 种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基，同时结合在对应 于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、 17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、 58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、 101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、 126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、 159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、 188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、 214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、 238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、 254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、 270、271、272、274和275位的一个或多个氨基酸残基位置处用另一 种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基；其中当所述蛋白 酶变体包括在对应于103和76位置处的氨基酸残基的取代时，还存在 在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、 109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265 或274位的氨基酸残基位置的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残 基的取代； (b)一种漂白剂，其是有机过氧酸或是漂白活化剂和能够产生过氧 化氢的过氧化合物的混合物，所述产生的过氧化氢可在由该组合物制得 的漂白溶液中就地与活化剂反应形成有机过氧酸；和 (c)一种或多种清洗辅助材料。 本发明另一方面，提供了一种织物漂白组合物，其包含： (a)有效量，按织物漂白组合物的重量计优选约0.0001％-10％上述 的蛋白酶变体； (b)一种漂白剂，其是有机过氧酸或是漂白活化剂和能够产生过氧 化氢的过氧化合物的混合物，所述产生的过氧化氢可在由该组合物制得 的漂白溶液中就地与活化剂反应形成有机过氧酸； (c)按织物漂白组合物重量计至少约5％的表面活性剂；和 (d)按织物漂白组合物重量计至少约5％的助洗剂。 本发明还一方面，提供了一种清洗需要被清洁的织物的方法，包括 将织物与本发明的织物漂白组合物接触。 本发明还一个方面，提供了一种洗餐具漂白组合物，其包含： (a)有效量，按洗餐具组合物的重量计，优选约0.0001％-10％上述 的蛋白酶变体； (b)一种漂白剂，其是有机过氧酸或是漂白活化剂和能够产生过氧 化氢的过氧化合物的混合物，所述产生的过氧化氢可在由该组合物制得 的漂白溶液中就地与活化剂反应形成有机过氧酸；和 (c)约0.1％-10％重量表面活性剂。 本发明还一个方面，提供了一种清洗需要被清洁的餐具的方法，其 包括将餐具与本发明洗餐具漂白组合物接触。 本发明还一个方面，提供了一种个人清洗组合物，其包含： (a)有效量，按个人清洗组合物的重量计，优选约0.001％-5％上述 的蛋白酶变体； (b)一种漂白剂，其是有机过氧酸或是漂白活化剂和能够产生过氧 化氢的过氧化合物的混合物，所述产生的过氧化氢可在由该组合物制得 的漂白溶液中就地与活化剂反应形成有机过氧酸；和 (c)按个人清洗组合物的重量计，约0.1％-95％表面活性剂体系；和 (d)任选地，按个人清洗组合物的重量计，约0.05％-50％酶稳定剂。 本发明还一个方面，提供了一种个人清洗需要被清洁的人体或低级 动物体部分的方法，包括将所述部分与本发明个人清洗组合物接触。 本发明还一个方面，提供了一种漂白组合物，其包含： (a)蛋白酶变体，优选有效量的蛋白酶变体，按该漂白组合物的重 量计更优选约0.0001％-10％蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体包括在对 应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257 位置处的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基 取代所述位置的氨基酸残基； (b)一种漂白剂，其是有机过氧酸或是漂白活化剂和能够产生过氧 化氢的过氧化合物的混合物，所述产生的过氧化氢可在由该组合物制得 的漂白溶液中就地与活化剂反应形成有机过氧酸；和 (c)一种或多种清洗辅助材料。 本发明还一个方面，提供了一种织物漂白组合物，其包含： (a)有效量，按该织物漂白组合物的重量计优选约0.0001％-10％蛋 白酶变体，其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶 菌素的62、212、230、232、252和257位置处的一个或多个氨基酸残 基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基； (b)一种漂白剂，其是有机过氧酸或是漂白活化剂和能够产生过氧 化氢的过氧化合物的混合物，所述产生的过氧化氢可在由该组合物制得 的漂白溶液中就地与活化剂反应形成有机过氧酸；和 (c)按该织物漂白组合物的重量计，至少约5％表面活性剂；和 (d)按该织物漂白组合物的重量计，至少约5％助洗剂。 本发明还一个方面，提供了一种清洗需要被清洁的织物的方法，其 包括将织物与本发明织物漂白组合物接触。 本发明还一个方面，提供了一种洗餐具漂白组合物，其包含： (a)有效量，按该织物漂白组合物的重量计优选约0.0001％-10％蛋 白酶变体，其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶 菌素的62、212、230、232、252和257位置处的一个或多个氨基酸残 基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基； (b)一种漂白剂，其是有机过氧酸或是漂白活化剂和能够产生过氧 化氢的过氧化合物的混合物，所述产生的过氧化氢可在由该组合物制得 的漂白溶液中就地与活化剂反应形成有机过氧酸；和 (c)按该洗餐具组合物的重量计，约0.1％-10％表面活性剂。 本发明还一个方面，提供了一种清洗需要被清洁的餐具的方法，其 包括将餐具与本发明洗餐具漂白组合物接触。 本发明还一个方面，提供了一种个人清洗组合物，其包含： (a)有效量，按该个人清洗组合物的重量计优选约0.001％-5％蛋白 酶变体，其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌 素的62、212、230、232、252和257位置处的一个或多个氨基酸残基 位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基； (b)一种漂白剂，其是有机过氧酸或是漂白活化剂和能够产生过氧 化氢的过氧化合物的混合物，所述产生的过氧化氢可在由该组合物制得 的漂白溶液中就地与活化剂反应形成有机过氧酸； (c)按该个人清洗组合物的重量计，约0.1％-95％表面活性剂体系； 和 (d)任选地，按该个人清洗组合物的重量计，约0.05％-50％酶稳定 剂。 本发明还一个方面，提供了一种个人清洗需要被清洁的人体或低级 动物体部分的方法，包括将所述部分与本发明个人清洗组合物接触。 因此，本发明的目的是提供含有蛋白酶变体的漂白组合物，其能够 改善和增强对织物、器皿、餐具、厨具、炊具和其他硬表面载污体的清 洗。本发明还一个目的是通过使用本发明含蛋白酶变体的漂白组合物来 提供清洗织物、器皿、餐具、厨具、炊具和其他硬表面载污体的方法。 由以下的详细描述、实施例和所附的权利要求书，本发明的这些和 其他目的、特征和优点将是显然的。 除非另外说明，本发明的所有百分数、比例和比率是按重量计。本 文引用的所有文献在此引用作参考。 附图简述 图1A-C描述了淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的DNA和氨基酸序列 和该基因的部分限制图。 图2描述了得自淀粉分解芽孢杆菌(BPN’)和缓慢芽孢杆菌(野生 型)的枯草溶菌素中的保守氨基酸残基。 图3A和3B描述了四种枯草溶菌素的氨基酸序列。上部的线表示得 自淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素(有时还称为枯草溶菌素BPN’)的枯草 溶菌素的氨基酸序列。第二条线描述了得自枯草芽孢杆菌的枯草溶菌素 的氨基酸序列。第三条线描述了得自地衣形芽孢杆菌的枯草溶菌素的氨 基酸序列。第四条线描述了得自缓慢芽孢杆菌的枯草溶菌素(在 PCTWO89/06276中还称为枯草溶菌素309)的枯草溶菌素的氨基酸序列。 符号*表示与枯草溶菌素BPN’相比，不存在特定的氨基酸残基。 发明详述 本发明使用的漂白组合物改善和增强了对织物、器皿、厨具、餐具 和其他硬表面的清洗，如本文更充分描述的，从织物和其他硬表面上去 除和/或减少了污垢和/或污渍，和从器皿和其他硬表面上去除和/或减 少了污斑和/或膜。 漂白体系与本发明蛋白酶的组合对从织物上去除大多数类型的污垢 特别有效，所述污垢包括蛋白和类脂污垢、污秽污垢和重载垢，特别是 亲核性的和人体污垢。 本发明有用的蛋白酶、漂白剂(包括过氧酸和漂白体系)和清洗辅 助材料，包括优选的含量在下文被详细描述。 1. 蛋白酶-蛋白酶是通常起到使蛋白质或肽的肽键断开作用的羰基 水解酶。这里所述的“蛋白酶”意思是天然产生的蛋白酶或重组蛋白酶。 天然产生的蛋白酶包括α-氨基酰基肽水解酶、肽基氨基酸水解酶、酰 基氨基水解酶、丝氨酸羧基肽酶、金属羧基肽酶、硫醇蛋白酶、羧基蛋 白酶和金属蛋白酶。包括丝氨酸、金属、硫醇和酸蛋白酶以及内切和外 切蛋白酶。 本发明包括蛋白酶，其是非天然产生的羰基水解酶变体(蛋白酶变 体)，其与产生该变体的氨基酸序列的前体羰基水解酶相比具有不同的 蛋白水解活性、稳定性、基质特异性、pH范围和/或性能特征。具体而 言，这种蛋白酶变体具有在自然界中未发现的氨基酸序列，其由用不同 的氨基酸取代前体蛋白酶的多个氨基酸残基得到。该前体蛋白酶可以是 天然产生的蛋白酶或重组蛋白酶。如先前所述，蛋白酶变体被设计成具 有似胰蛋白酶的特异性并优选还是漂白稳定的。 本发明有用的蛋白酶变体包括任何十九个天然产生的L-氨基酸在指 定氨基酸残基位置处的取代。这种取代可在任何前体枯草溶菌素(原核 生物、真核生物、哺乳动物等)中进行。本申请中，通过普通的1和3 个字母编码的方式来参考各种氨基酸。这种编码确定在Dale，M.W. (1989)， 细菌的分子遗传，John Wiley & Sons，Ltd.，附录B中。 本发明有用的蛋白酶变体优选得自芽孢杆菌枯草溶菌素。更优选， 该蛋白酶变体得自缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素和/或枯草溶菌素309。 羰基水解酶-羰基水解酶是水解含： 键的化合物的蛋白酶，其中X是氧或氨。它们包括天然产生的羰基水解 酶和重组羰基水解酶。天然产生的羰基水解酶主要包括水解酶例如肽水 解酶例如枯草溶菌素或金属蛋白酶。肽水解酶包括α-氨基酰基肽水解 酶、肽基氨基酸水解酶、酰基氨基水解酶、丝氨酸羧基肽酶、金属羧基 肽酶、硫醇蛋白酶、羧基蛋白酶和金属蛋白酶。包括丝氨酸、金属、硫 醇和酸蛋白酶以及内切和外切蛋白酶。 枯草溶菌素-枯草溶菌素是细菌或真菌蛋白酶，其一般起到使蛋白 质或肽的肽键断开的作用。这里所述的“枯草溶菌素”意思是天然产生 的枯草溶菌素或重组枯草溶菌素。一组天然产生的枯草溶菌素已知是可 生产的并通常由各种微生物品种分泌。该组中的枯草溶菌素的氨基酸序 列不完全是同源的。然而，该组中的枯草溶菌素表现出相同或相似类型 的蛋白水解活性。此类丝氨酸蛋白酶具有定义催化三分体的普通氨基酸 序列，它们不同于胰凝乳蛋白酶相关类型的丝氨酸蛋白酶。该枯草溶菌 素和胰凝乳蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶都具有催化三分体，包括天冬氨 酸、组氨酸和丝氨酸。在枯草溶菌素相关的蛋白酶中，这些氨基酸的相 对顺序，从与端羧基相连的氨基读起，是天冬氨酸-组氨酸-丝氨酸。然 而，在胰凝乳蛋白酶相关的蛋白酶中，相对的顺序是组氨酸-天冬氨酸- 丝氨酸。因此，本发明的枯草溶菌素是指具有枯草溶菌素相关的蛋白酶 的催化三分体的丝氨酸蛋白酶。实例包括，但不限于：在本文的图3中 确定的枯草溶菌素。一般，对于本发明目的，蛋白酶的氨基酸编号对应 于在图1中所示的成熟的淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素序列给定的编 号。 蛋白酶变体-“蛋白酶变体”具有从“前体蛋白酶”的氨基酸序列 衍生得到的氨基酸序列。前体蛋白酶包括天然产生的蛋白酶和重组蛋白 酶。蛋白酶变体的氨基酸序列是通过前体氨基酸序列中的一个或多个氨 基酸的取代、缺失或插入而由前体蛋白酶氨基酸序列“衍生”得到。这 种修饰是对“前体DNA序列”的修饰，其编码了前体蛋白酶的氨基酸序 列，而不是前体蛋白酶本身的操作。这种操作前体DNA序列的适合方法 包括本文中公开的方法以及本领域技术人员公知的方法(参见，例如 EP0328299，WO89/06279和本文已参考的美国专利和申请)。 在优选的实施方案中，该蛋白酶变体是本发明漂白组合物中有用的 蛋白酶，所述漂白组合物包含下述的蛋白酶变体和一种或多种清洗辅助 材料，所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103 位的氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的 氨基酸残基，同时结合在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的1、3、 4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、 38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、 86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、 116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、 141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、 181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、 209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、 228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、 248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、 262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置处中的一 个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位 置的氨基酸残基；其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置 处的氨基酸残基的取代时，还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶 菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、 216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置处的一个或 多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代。 虽然可使用以上所列的氨基酸取代的任何组合，但本发明适用的优 选的蛋白酶变体包括按下列组合方式的取代、缺失或插入氨基酸残基： (1)一种蛋白酶变体，其包括在103位置和在以下236和245位置 中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (2)一种蛋白酶变体，其包括在103和236位置和在以下12、61、62、 68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、185、205、 209、210、211、212、213、215、217、230、232、248、252、257、260、 270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (3)一种蛋白酶变体，其包括在103和245位置和在以下12、61、 62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、、170、183、 185、205、209、210、211、212、213、215、217、222、230、232、248、 252、257、260、261、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸 残基的取代；和 (4)一种蛋白酶变体，其包括在103、236和245位置和在以下12、 61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、 185、205、209、210、211、212、213、215、217、230、232、243、248、 252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基 的取代。 本发明清洗组合物中有用的更优选的蛋白酶变体包括选自以下的一 组取代(下表I中每行一组取代)： 表I 76 98 103 104 76 78 103 104 76 103 104 107 4 76 103 104 76 103 104 246 76 77 103 104 76 103 104 183 218 16 76 103 104 248 1 76 103 104 76 103 104 261 76 103 104 160 76 103 104 216 17 76 103 104 37 76 103 104 76 77 103 104 174 38 76 103 104 38 76 103 104 237 8 76 103 104 76 103 104 183 19 76 103 104 13 76 103 104 19 76 103 104 76 103 104 184 76 103 104 252 76 103 104 259 76 103 104 251 76 86 103 104 72 76 103 104 185 76 103 104 237 274 76 103 104 160 76 103 104 228 55 76 103 104 240 76 103 104 254 76 103 104 204 76 103 104 204 43 76 103 104 76 103 104 159 10 76 103 104 177 58 76 103 104 76 103 104 270 76 103 104 185 27 76 103 104 76 103 104 262 76 78 103 104 24 76 103 104 76 103 104 166 236 251 17 76 103 104 237 76 103 104 130 76 103 104 109 76 99 103 104 204 76 103 104 181 12 76 103 104 76 103 104 212 271 76 103 104 252 261 76 103 104 242 76 103 104 271 12 76 103 104 242 43 76 103 104 116 183 76 103 104 258 76 103 104 271 61 76 103 104 38 76 103 104 182 263 76 103 104 182 272 76 103 104 109 246 76 87 103 104 206 249 265 76 103 104 137 238 271 103 104 228 76 103 104 182 198 21 76 103 104 182 76 103 104 119 137 76 103 104 137 248 13 76 103 104 206 76 103 104 206 76 103 104 212 258 58 76 103 104 271 76 103 104 206 261 4 76 103 104 206 76 77 103 104 206 76 103 104 158 76 103 104 206 4 76 103 104 159 217 251 4 76 103 104 159 217 252 76 77 103 104 133 185 251 76 103 104 159 206 244 4 76 103 104 188 4 76 103 104 158 76 77 103 104 185 76 103 104 206 251 48 76 103 104 111 159 68 76 103 104 159 236 42 76 103 104 159 12 62 76 103 104 159 42 76 103 104 159 76 103 104 146 159 76 103 104 159 238 76 103 104 159 224 76 103 104 212 268 271 76 89 103 104 76 87 103 104 212 271 76 103 104 212 245 271 76 103 104 134 141 212 271 76 103 104 212 236 243 271 76 103 104 109 245 76 103 104 109 210 20 62 76 103 104 68 76 103 104 236 68 76 103 104 159 236 271 68 76 103 104 159 236 245 68 76 103 104 159 217 236 271 17 68 76 103 104 68 76 103 104 68 76 103 104 159 236 68 75 76 103 104 159 236 68 76 76 103 114 121 159 236 245 12 68 76 103 104 159 236 68 76 103 104 159 209 236 253 68 76 103 104 117 159 184 236 68 76 103 104 159 236 243 68 76 103 104 159 236 245 68 76 103 104 142 159 68 76 103 104 123 159 236 249 68 76 103 104 159 236 249 76 103 104 222 245 12 76 103 104 222 249 76 103 104 173 222 76 103 104 222 263 21 76 103 104 222 237 263 76 103 104 109 222 76 103 104 109 222 271 61 76 103 104 222 76 103 104 137 222 76 103 104 109 222 248 76 103 104 222 249 68 76 103 104 159 236 245 261 68 76 103 104 141 159 236 245 255 68 76 103 104 159 236 245 247 68 76 103 104 159 174 204 236 245 68 76 103 104 159 204 236 245 68 76 103 104 133 159 218 236 245 68 76 103 104 159 232 236 245 68 76 103 104 159 194 203 236 245 12 76 103 104 222 245 76 103 104 232 245 24 68 76 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 232 236 245 252 68 76 103 104 159 213 232 236 245 260 12 76 103 104 222 244 245 12 76 103 222 210 245 12 76 103 104 130 222 245 22 68 76 103 104 68 76 103 104 184 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 68 103 104 140 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 43 68 103 104 159 232 236 245 252 68 87 103 104 159 232 236 245 252 275 12 76 103 104 130 222 245 248 262 12 76 103 104 130 215 222 245 12 76 103 104 130 222 227 245 262 12 76 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N76D S103A V104I N76D S103A V104I N183D R19L N76D S103A V104I A13V N76D S103A V104I R19C N76D S103A V104I N76D S103A V104I N184D N76D S103A V104I N252D N76D S103A V104I S259C N76D S103A V104I K251T N76D P86S S103A V104I I72V N76D S103A V104I N185D N76D S103A V104I K237E T274A N76D S103A V104I S160L N76D S103A V104I A228V P55S N76D S103A V104I S240T N76D S103A V104I A254T N76D S103A I104N N204T N76D S103A V104I N204D N43S N76D S103A V104I N76D S103A V104I G159D R10H N76D S103A V104I V177A T58S N76D S103A V104I N76D S103A V104I A270V N76D S103A V104I N185D K27N N76D S103A V104I N76D S103A V104I L262M N76D S78P S103A V104I S24P N76D S103A V104I N76D S103A V104I S166G Q236R K251R H17L N76D S103A V104I K237E N76D S103A V104I S130L N76D S103A V104I Q109R N76D S99R S103A V104I N204T N76D S103A V104I D181N Q12R N76D S103A V104I N76D S103A V104I S212P E271V N76D S103A V104I N252K N261Y N76D S103A V104I S242T N76D S103A V104I E271Q Q12R N76D S103A V104I S242T N43S N76D S103A V104I N116K N183I N76D S103A V104I G258R N76D S103A V104I E271G G61R N76D S103A V104I T38S N76D S103A V104I Q182R Y263H N76D S103A V104I Q182R A272S N76D S103A V104I Q109R I246V N76D S87G S103A V104I Q206R H249Q S265G N76D S103A V104I Q137R N238Y E271V S103A V104I A228T N76D S103A V104I Q182R I198V L21M N76D S103A V104I Q182R N76D S103A V104I M119I Q137R N76D S103A V104I Q137R N248S A13T N76D S103A V104I Q206R N76D S103A V104I Q206R N76D S103A V104I S212P G258R T58S N76D S103A V104I E271G N76D S103A V104I Q206E N261D V4E N76D S103A V104I Q206E N76D N77D S103A V104I Q206E N76D S103A V104I A158E N76D S103A V104I Q206E V4E N76D S103A V104I G159D L217E K251Q V4E N76D S103A V104I G159D L217E N252D N76D N77D S103A V104I A133T N185D K251T N76D S103A V104I G159D Q206E V244A V4E N76D S103A V104I S188E V4E N76D S103A V104I A158E N76D N77D S103A V104I N185D N76D S103A V104I Q206E K251T A48T N76D S103A V104I L111M G159D V68A N76D S103A V104I G159D Q236H L42V N76D S103A V104I G159D Q12H N62H N76D S103A V104I G159D L42I N76D S103A V104I G159D N76D S103A V104I G146S G159D N76D S103A V104I G159D N238S N76D S103A V104I G159D T224A N76D S103A V104I S212P V268F E271V N76D E89A S103A V104I N76D S87R S103A V104I S212P E271V N76D S103A V104I S212P Q245L E271V N76D S103A V104I T134S S141N S212P E271V N76D S103A V104I S212P Q236L N243S E271V N76D S103A V104I Q109R Q245R N76D S103A V104I Q109R P210L G20V N62S N76D S103A V104I V68A N76D S103A V104I Q236H V68A N76D S103A V104I G159D Q236H E271V V68A N76D S103A V104I G159D Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D L217I Q236H E271V H17Q V68A N76D S103A V104I V68A N76D S103A V104I V68A N76D S103A V104I G159D Q236R V68A L75R N76D S103A V104I G159D Q236H V68A N76D N76D S103A A114V V121I G159D Q236H Q245R Q12R V68A N76D S103A V104I G159D Q236H V68A N76D S103A V104I G159D Y209S Q236H T253K V68A N76D S103A V104I N117K G159D N184S Q236H V68A N76D S103A V104I G159D Q236H N243I V68A N76D S103A V104I G159D Q236H Q245L V68A N76D S103A V104I A142V G159D V68A N76D S103A 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S101G S103A V104I G159D S212G T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A232V Q245R N248D N252K S103A V104I G1 59D A230V Q245R N62D S103A V104I S130G G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I S130G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I S128G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I S128L G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S101G S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I S128G G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I S128L G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260A S101G S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K A98V S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S99G S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D P210I A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D V205I A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A230V Q236H Q245R S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K N76D S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A230V A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I G159D N185D Q206E T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K E271Q 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取 代，其选自除了以下表III的多组取代外的表I中的多组取代： 表III 76 103 104 259 76 86 103 104 76 103 104 130 76 99 103 104 204 76 103 104 242 76 103 104 104 182 198 21 76 103 104 182 76 103 104 119 137 76 103 104 173 222 61 76 103 104 222 68 76 103 104 116 159 170 185 232 236 245 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取 代，其选自表IV中的多组取代： 表IV 76 103 104 222 245 76 103 104 222 249 68 103 104 159 232 236 245 252 68 76 103 104 159 213 232 236 245 260 22 68 76 103 104 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 68 103 104 140 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 12 76 103 104 130 222 245 261 76 103 104 130 222 245 68 103 104 159 232 236 245 257 68 76 103 104 159 210 232 236 245 68 103 104 159 224 232 236 245 257 76 103 104 159 232 236 245 257 68 76 103 104 159 211 232 236 245 12 68 76 103 104 159 214 232 236 245 68 76 103 104 159 215 232 236 245 12 68 76 103 104 159 232 236 245 20 68 76 103 104 159 232 236 245 259 68 76 87 103 104 159 232 236 245 260 68 76 103 104 159 232 236 245 261 12 48 68 76 103 104 159 232 236 245 76 103 104 159 192 232 236 245 76 103 104 147 159 232 236 245 248 251 12 68 76 103 104 159 232 236 245 272 68 76 103 104 159 183 206 232 236 245 68 76 103 104 159 232 236 245 256 68 76 103 104 159 206 232 236 245 27 68 76 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 109 159 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 159 210 232 236 245 248 252 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 68 103 104 159 213 232 236 245 248 252 68 103 104 213 232 236 245 248 252 68 103 104 159 215 232 236 245 248 252 68 103 104 159 216 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 255 68 103 104 159 232 236 245 248 252 256 68 103 104 159 232 236 245 248 252 260 68 103 104 159 228 232 236 245 248 252 68 76 89 103 104 159 210 213 232 236 245 260 68 103 104 159 218 232 236 245 248 252 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取 代，其选自表V中的多组取代： 表V V68A S103A V104I G159D A228V A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D N218S A232V Q236H Q245R N248D N252K G20R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A N76D E89D S103A V104I G159D P210L T213R A232V Q236H Q245R T260A V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T255V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256N V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252L V68A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D A215V A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S216T A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S216V A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I T213S A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D P210L A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S212C A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I Q109R G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K G20R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D Y209F A232V Q236H Q245R N248D N252K Q12R N76D S103A I104T S130T M222S Q245R N261D N76D S103A I104T S130T M222S Q245R N76D S103A V104I M222S H249R N76D S103A V104I M222S Q245R N76D S103A V104I G159D Y192F A232V Q236H Q245R N76D S103A V104I V147I G159D A232V Q236H Q245R N248S K251R Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R A272S V68A N76D S103A V104I G159D N183K Q206L A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S256R V68A N76D S103A V104I G159D Q206R A232V Q236H Q245R K27R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R Q12R A48V V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N261W V68A N76D S103A V104I G159D G211R A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D G211V A232V Q236H Q245R Q12R V68A N76D S103A V104I G159D Y214L A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R G20R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S259G V68A N76D S87R S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R T260V N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V V68A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A T22K V68A N76D S103A V104I V68A N76D S103A V104I G159D P210R A232V Q236H Q245R V68A S103A V104I G159D S212P A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D T224A A232V Q236H Q245R L257V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R V68A S103A V104I N140D G159D A232V Q236H Q245R N252K N43S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K N43K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N43D V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V 本发明清洗组合物中有用的高度优选的蛋白酶变体包括选自以下的 一组取代： 12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 12/76/103/104/130/170/185/222/243/245； 12/76/103/104/130/222/245/261； 12/76/103/104/130/222/245； 12/76/103/104/222/245； 61/68/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/232/236/245/248/252/270； 68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/230/232/236/245； 68/76/103/104/159/209/232/236/245； 68/103/104/232/236/245/248/257/275； 68/103/104/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/209/232/236/245； 68/76/103/104/159/236； 68/76/103/104/159/236/245； 68/76/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/252； 68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257； 68/76/103/104/159/211/232/236/245； 68/76/103/104/159/215/232/236/245； 68/103/104/159/210/232/236/245； 68/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/103/104/159/236； 68/76/103/104/159/210/232/236/245/260； 68/103/104/159/236/245； 68/103/104/159/183/232/236/245/248/252； 68/76/103/104/159/236/245； 68/103/104/232/236/245/257/275； 68/103/104/159/213/232/236/245； 76/103/222/245； 76/103/104/222/245； 76/103/104/159/232/236/245； 76/103/104/159/213/232/236/245/260； 76/103/104/159； 76/103/104/131/159/232/236/245/248/252； 97/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 98/103/104/159/232/236/245/248/252； 101/103/104/159/232/236/245/248/252； 102/103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/232/236/245； 103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/205/209/232/236/245/257 103/104/159/232/245/248/252； 103/104/159/205/209/210/232/236/245/257； 103/104/159/213/232/236/245/248/252； 103/104/159/217/232/236/245/248/252； 103/104/130/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/230/236/245； 103/104/159/236/245； 103/104/159/248/252/270； 103/104/131/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/205/209/232/236/245；和 103/104/159/232/236/245/257. 本发明清洗组合物中有用的更高度优选的蛋白酶变体包括选自以下 的一组取代： 124/76D/103A/104T/130T/222S/245R； 12R/76D/103A/104I/222S/245R； 12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K； 12R/76D/103A/104T/130G/222S/245R/261D； 12R/76D/103A/104T/130G/170S/185D/222S/243D/245R； 61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A； 68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 68A/103A/104I/159D/236H； 68A/103A/104I/159D/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A； 68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/1041/159D/209W/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 68A/76D/103A/104I/159D/236H； 68A/76D/103A/104I/159D/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V； 68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H； 68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H； 68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R； 76D/103A/222S/245R； 76D/103A/104I/222S/245R； 76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 76D/103A/104I/159D； 76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K； 101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/230V/236H/245R； 103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/236H/245R； 103A/104I/159D/248D/252K/270V； 103A/104I/159D/232V/236H/245R； 103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R； 103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V； 103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V； 103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V；和 103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K. 本发明清洗组合物中有用的甚至更高度优选的蛋白酶变体包括选自 以下的一组取代： 12/76/103/104/130/222/245/261； 62/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/230/232/236/245； 68/103/104/159/209/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257； 68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/183/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/213/232/236/245； 98/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 101/103/104/159/232/236/245/248/252； 102/103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/230/236/245； 103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/217/232/236/245/248/252； 103/104/130/159/232/236/245/248/252； 103/104/131/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/213/232/236/245/248/252；和 103/104/159/232/236/245. 本发明清洗组合物中有用的最高度优选的蛋白酶变体包括选自以下 的一组取代： 12R/76D/103A/104T/130T/222S/2454/261D； 62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/I59D/232V/236H/245R/257V； 68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R； 98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K； 101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/230V/236H/245R； 103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；和 103A/104I/159D/232V/236H/245R. 在另一优选的实施方案中，该蛋白酶变体是本发明清洗组合物中有 用的蛋白酶，该蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素 的62、212、230、232、252和257位置中的一个或多个氨基酸残基位 置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基。 虽然可使用以上所列的氨基酸取代的任何组合，但本发明适用的优 选的蛋白酶变体包括按下列组合方式的取代、缺失或插入氨基酸残基： (1)一种蛋白酶变体，其包括在62位置和在以下103、104、109、 159、213、232、236、245、248和252位置中的一个或多个位置处的 氨基酸残基的取代； (2)一种蛋白酶变体，其包括在212位置和在以下12、98、102、 103、104、159、232、236、245、248和252位置中的一个或多个位置 处的氨基酸残基的取代； (3)一种蛋白酶变体，其包括在230位置和在以下68、103、104、 159、232、236和245位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (4)一种蛋白酶变体，其包括在232位置和在以下12、61、62、68、 76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、 205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、 270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (5)一种蛋白酶变体，其包括在232位置和在以下103、104、236 和245位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (6)一种蛋白酶变体，其包括在232和103位置和在以下12、61、 62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、 260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (7)一种蛋白酶变体，其包括在232和104位置和在以下12、61、 62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、 260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (8)一种蛋白酶变体，其包括在232和236位置和在以下12、61、 62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、 260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (9)一种蛋白酶变体，其包括在232和245位置和在以下12、61、 62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、 260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (10)一种蛋白酶变体，其包括在232、103、104、236和245位置 和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、 130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、 245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的 氨基酸残基的取代； (11)一种蛋白酶变体，其包括在252位置和在以下12、61、62、 68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、 210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多 个位置处的氨基酸残基的取代； (12)一种蛋白酶变体，其包括在252位置和在以下103、104、236 和245位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (13)一种蛋白酶变体，其包括在252和103位置和在以下12、61、 62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个 或多个位置处的氨基酸残基的取代； (14)一种蛋白酶变体，其包括在252和104位置和在以下12、61、 62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个 或多个位置处的氨基酸残基的取代； (15)一种蛋白酶变体，其包括在252和236位置和在以下12、61、 62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个 或多个位置处的氨基酸残基的取代； (16)一种蛋白酶变体，其包括在252和245位置和在以下12、61、 62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个 或多个位置处的氨基酸残基的取代； (17)一种蛋白酶变体，其包括在252、103、104、236和245位置 和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、 131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和 270位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (18)一种蛋白酶变体，其包括在257位置和在以下68、103、104、 205、209、210、232、236、245和275位置中的一个或多个位置处的 氨基酸残基的取代。 本发明清洗组合物中有用的更优选的蛋白酶变体包括选自以下的一 组取代(下表VI中每行一组取代)： 表VI 76 103 104 212 271 76 103 104 252 261 76 103 104 212 258 4 76 103 104 159 217 252 12 62 76 103 104 159 76 103 104 212 268 271 76 87 103 104 212 271 76 103 104 212 245 271 76 103 104 134 141 212 271 76 103 104 212 236 243 271 20 62 76 103 104 68 76 103 104 159 232 236 245 76 103 104 232 245 24 68 76 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 232 236 245 252 68 76 103 104 159 213 232 236 245 260 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 68 103 104 140 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 43 68 103 104 159 232 236 245 252 68 87 103 104 159 232 236 245 252 275 68 103 104 159 232 236 245 257 68 103 104 116 159 232 236 245 68 103 104 159 232 236 245 248 10 68 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 203 232 236 245 68 103 104 159 232 236 237 245 68 76 79 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 183 232 236 245 68 103 104 159 174 206 232 236 245 68 103 104 159 188 232 236 245 68 103 104 159 230 232 236 245 68 98 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 215 232 236 245 68 103 104 159 232 236 245 248 68 76 103 104 159 232 236 245 68 76 103 104 159 210 232 236 245 68 76 103 104 159 232 236 245 257 76 103 104 232 236 245 257 68 103 104 159 232 236 245 257 275 76 103 104 257 275 68 103 104 159 224 232 236 245 257 76 103 104 159 232 236 245 257 68 76 103 104 159 209 232 236 245 68 76 103 104 159 211 232 236 245 12 68 76 103 104 159 214 232 236 245 68 76 103 104 159 215 232 236 245 12 68 76 103 104 159 232 236 245 20 68 76 103 104 159 232 236 245 259 68 87 76 103 104 159 232 236 245 260 68 76 103 104 159 232 236 245 261 76 103 104 232 236 242 245 68 76 103 104 159 210 232 236 245 12 48 68 76 103 104 159 232 236 245 76 103 104 232 236 245 76 103 104 159 192 232 236 245 76 103 104 147 159 232 236 245 248 251 12 68 76 103 104 159 232 236 245 272 68 76 103 104 159 183 206 232 236 245 68 76 103 104 159 232 236 245 256 68 76 103 104 159 206 232 236 245 27 68 76 103 104 159 232 236 245 68 76 103 104 116 159 170 185 232 236 245 61 68 103 104 159 232 236 245 248 252 43 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 68 103 104 99 159 184 232 236 245 248 252 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 109 159 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 261 68 103 104 159 185 232 236 245 248 252 68 103 104 159 210 232 236 245 248 252 68 103 104 159 185 210 232 236 245 248 252 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 68 103 104 159 213 232 236 245 248 252 68 103 104 213 232 236 245 248 252 68 103 104 159 215 232 236 245 248 252 68 103 104 159 216 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 173 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 251 252 68 103 104 159 206 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 55 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 255 68 103 104 159 232 236 245 248 252 256 68 103 104 159 232 236 245 248 252 260 68 103 104 159 232 236 245 248 252 257 68 103 104 159 232 236 245 248 252 258 8 68 103 104 159 232 236 245 248 252 269 68 103 104 116 159 232 236 245 248 252 260 68 103 104 159 232 236 245 248 252 261 68 103 104 159 232 236 245 248 252 261 68 76 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 232 236 245 248 252 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 18 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 76 101 103 104 159 213 218 232 236 245 260 68 103 104 159 228 232 236 245 248 252 33 68 76 103 104 159 232 236 245 248 252 68 76 89 103 104 159 210 213 232 236 245 260 61 68 76 103 104 159 232 236 245 248 252 103 104 159 205 210 232 236 245 61 68 103 104 130 159 232 236 245 248 252 61 68 103 104 133 137 159 232 236 245 248 252 61 103 104 133 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 218 232 236 245 248 252 61 68 103 104 159 160 232 236 245 248 252 3 61 68 76 103 104 232 236 245 248 252 61 68 103 104 159 167 232 236 245 248 252 97 103 104 159 232 236 245 248 252 98 103 104 159 232 236 245 248 252 99 103 104 159 232 236 245 248 252 101 103 104 159 232 236 245 248 252 102 103 104 159 232 236 245 248 252 103 104 106 159 232 236 245 248 252 103 104 109 159 232 236 245 248 252 103 104 159 232 236 245 248 252 261 62 103 104 159 232 236 245 248 252 103 104 159 184 232 236 245 248 252 103 104 159 166 232 236 245 248 252 103 104 159 217 232 236 245 248 252 20 62 103 104 159 213 232 236 245 248 252 62 103 104 159 213 232 236 245 248 252 103 104 159 206 217 232 236 245 248 252 62 103 104 159 206 232 236 245 248 252 103 104 130 159 232 236 245 248 252 103 104 131 159 232 236 245 248 252 27 103 104 159 232 236 245 248 252 38 103 104 159 232 236 245 248 252 38 76 103 104 159 213 232 236 245 260 68 76 103 104 159 213 232 236 245 260 271 68 76 103 104 159 209 213 232 236 245 260 68 76 103 104 159 210 213 232 236 245 260 68 76 103 104 159 205 213 232 236 245 260 68 76 103 104 159 210 232 236 245 260 68 103 104 159 213 232 236 245 260 76 103 104 159 213 232 236 245 260 68 103 104 159 209 232 236 245 68 103 104 159 210 232 236 245 68 103 104 159 230 232 236 245 68 103 104 159 126 232 236 245 68 103 104 159 205 232 236 245 68 103 104 159 210 232 236 245 103 104 159 230 236 245 68 103 104 159 232 236 245 260 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 174 232 236 245 257 68 103 104 159 194 232 236 245 257 68 103 104 159 209 232 236 245 257 103 104 159 232 236 245 257 68 76 103 104 159 213 232 236 245 260 261 68 103 104 159 232 236 245 257 261 103 104 159 213 232 236 245 260 103 104 159 210 232 236 245 248 252 103 104 159 209 232 236 245 257 68 76 103 104 159 210 213 232 236 245 260 12 103 104 159 209 213 232 236 245 260 103 104 209 232 236 245 257 103 104 159 205 210 213 232 236 245 260 103 104 159 205 209 232 236 245 260 68 103 104 159 205 209 210 232 236 245 103 104 159 205 209 210 232 236 245 257 103 104 159 205 209 232 236 245 257 68 103 104 159 205 209 210 232 236 245 260 103 104 159 205 209 210 232 236 245 103 104 159 209 210 232 236 245 103 104 159 205 210 232 236 245 68 103 104 128 159 232 236 245 48 103 104 159 230 236 245 48 68 103 104 159 209 232 236 245 48 68 103 104 159 232 236 245 248 252 48 68 103 104 159 232 236 245 257 261 102 103 104 159 212 232 236 245 248 252 12 102 103 104 159 212 232 236 245 248 252 101 102 103 104 159 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G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260A S101G S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K A98V S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S99G S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D P210I A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D V205I A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A230V Q236H Q245R S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K N76D S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A230V A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I G159D N185D Q206E T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K E271Q 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取 代，其选自除了以下表VIII的取代外的表VI中的多组取代： 表VIII 68 76 103 104 116 159 170 185 232 236 245 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取 代，其选自表IX中的多组取代： 表IX 68 103 104 159 232 236 245 252 68 76 103 104 159 213 232 236 245 260 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 68 103 104 140 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 232 236 245 257 68 76 103 104 159 210 232 236 245 68 103 104 159 224 232 236 245 257 76 103 104 159 232 236 245 257 68 76 103 104 159 211 232 236 245 12 68 76 103 104 159 214 232 236 245 68 76 103 104 159 215 232 236 245 12 68 76 103 104 159 232 236 245 20 68 76 103 104 159 232 236 245 259 68 76 87 103 104 159 232 236 245 260 68 76 103 104 159 232 236 245 261 12 48 68 76 103 104 159 232 236 245 76 103 104 159 192 232 236 245 76 103 104 147 159 232 236 245 248 251 12 68 76 103 104 159 232 236 245 272 68 76 103 104 159 183 206 232 236 245 68 76 103 104 159 232 236 245 256 68 76 103 104 159 206 232 236 245 27 68 76 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 109 159 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 159 210 232 236 245 248 252 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 68 103 104 159 213 232 236 245 248 252 68 103 104 213 232 236 245 248 252 68 103 104 159 215 232 236 245 248 252 68 103 104 159 216 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 255 68 103 104 159 232 236 245 248 252 256 68 103 104 159 232 236 245 248 252 260 68 103 104 159 228 232 236 245 248 252 68 76 89 103 104 159 210 213 232 236 245 260 68 103 104 159 218 232 236 245 248 252 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取 代，其选自表X中的多组取代： 表X V68A S103A V104I G159D A228V A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D N218S A232V Q236H Q245R N248D N252K G20R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A N76D E89D S103A V104I G159D P210L T213R A232V Q236H Q245R T260A V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T255V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256N V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252L V68A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D A215V A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S216T A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S216V A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I T213S A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D P210L A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S212C A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I Q109R G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K G20R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D Y209F A232V Q236H Q245R N248D N252K N76D S103A V104I G159D Y192F A232V Q236H Q245R N76D S103A V104I V147I G159D A232V Q236H Q245R N248S K251R Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R A272S V68A N76D S103A V104I G159D N183K Q206L A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S256R V68A N76D S103A V104I G159D Q206R A232V Q236H Q245R K27R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R Q12R A48V V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N261W V68A N76D S103A V104I G159D G211R A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D G211V A232V Q236H Q245R Q12R V68A N76D S103A V104I G159D Y214L A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R G20R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S259G V68A N76D S87R S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R T260V N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V V68A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A V68A N76D S103A V104I G159D P210R A232V Q236H Q245R V68A S103A V104I G159D S212P A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D T224A A232V Q236H Q245R L257V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R V68A S103A V104I N140D G159D A232V Q236H Q245R N252K N43S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K N43K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N43D V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V 本发明清洗组合物中有用的高度优选的蛋白酶变体包括选自以下的 一组取代： 12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；61/68/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/101/103/104/1 59/212/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/232/236/245/248/252/270； 68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/230/232/236/245； 68/76/103/104/159/209/232/236/245； 68/103/104/232/236/245/248/257/275； 68/103/104/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/209/232/236/245； 68/76/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/252； 68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257； 68/76/103/104/159/211/232/236/245； 68/76/103/104/159/215/232/236/245； 68/103/104/159/210/232/236/245； 68/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/76/103/104/159/210/232/236/245/260； 68/103/104/159/183/232/236/245/248/252； 68/103/104/232/236/245/257/275； 68/103/104/159/213/232/236/245； 76/103/104/159/232/236/245； 76/103/104/159/213/232/236/245/260； 76/103/104/131/159/232/236/245/248/252； 97/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；101/103/104/159/232/236/245/248/252； 102/103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/232/236/245； 103/104/159/248/252/270； 103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/205/209/232/236/245/257 103/104/159/232/245/248/252； 103/104/159/205/209/210/232/236/245/257； 103/104/159/213/232/236/245/248/252； 103/104/159/217/232/236/245/248/252； 103/104/130/159/232/236/245/248/252； 103/104/131/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/205/209/232/236/245；知 103/104/159/232/236/245/257. 本发明清洗组合物中有用的更高度优选的蛋白酶变体包括选自以下 的一组取代： 12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K； 61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A； 68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/I04I/I59D/209W/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V； 68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R； 63A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H； 68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H； 68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A； 76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 98L/102A/103A/1041/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K； 101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/248D/252K/270V； 103A/104I/159D/232V/236H/245R； 103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R； 103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V； 103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V； 103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V；知 103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K. 重组蛋白酶/重组枯草溶菌素-“重组蛋白酶”或“重组枯草溶菌素” 是指其中分别编码天然产生的蛋白酶或枯草溶菌素的DNA序列被修饰产 生突变DNA序列的蛋白酶或枯草溶菌素，所述突变DNA序列编码了蛋白 酶或枯草溶菌素氨基酸序列中的一个或多个氨基酸的取代、插入或缺 失。适合的修饰方法公开在本文和美国专利RE34606，US5204015和 5185258中。 非人体蛋白酶/非人体枯草溶菌素-“非人体蛋白酶”或“非人体枯 草溶菌素”和编码它们的DNA可由许多原核生物和真核生物得到。原核 生物的适合实例包括革兰氏阴性生物例如大肠杆菌或假单胞菌和革兰氏 阳性细菌例如微球菌或芽孢杆菌。可由其得到羰基水解酶和它们的基因 的真核生物的实例包括酵母例如啤酒糖酵母，真菌例如曲霉属和非人类 的哺乳动物源例如牛物种，由其可得到编码蛋白凝乳酶或枯草溶菌素凝 乳酶的基因。可从各种相关的物种得到一系列蛋白酶和/或枯草溶菌素， 该系列物种之间具有不完全同源的氨基酸序列，但尽管如此仍表现出相 同或相似类型的生物活性。因此，本文使用的非人体蛋白酶或非人体枯 草溶菌素具有一种功能定义，其分别称为蛋白酶或枯草溶菌素，其直接 或间接与原核和真核生物源相关。 变异的DNA序列-编码这种蛋白酶或枯草溶菌素变体的变异的DNA 序列是由编码天然产生的或重组前体酶的前体DNA序列衍生得到。 在本发明优选的实施方案中，变异的DNA序列是由修饰前体DNA序 列衍生得到，其编码了由前体DNA序列编码的对应于淀粉分解芽孢杆菌 枯草溶菌素的103位置的一个或多个特定氨基酸残基的取代、插入或缺 失，同时结合淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的以下1、3、4、8、9、10、 12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、 48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、 97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、 119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、 146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、 183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、 211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、 232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、 251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、 265、268、269、270、271、272、274和275位置处的一个或多个氨基 酸残基的取代、插入或缺失；其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103 和76位置处的氨基酸残基的取代时，还存在在非对应于淀粉分解芽孢 杆菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、 206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位 置处的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代。更优选，这 些变异DNA序列编码本文描述的蛋白酶变体。 在另一优选的实施方案中，这些变异的DNA序列编码了对应于淀粉 分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置的一 个或多个氨基酸残基的取代、插入或缺失。更优选这些变异的DNA序列 编码了本文描述的蛋白酶变体。 尽管在本文确认用于修饰的氨基酸残基是根据淀粉分解芽孢杆菌应 用的编号来确定(其已成为确定在所有枯草溶菌素中的残基位置的常规 方法)，但本发明适用的优选的前体DNA序列是如图3中所示的缓慢芽 孢杆菌的DNA序列。 这些重组DNA序列编码了具有新氨基酸序列的蛋白酶变体，并且一 般至少有一种性质显著地不同于由前体蛋白酶DNA序列编码的酶的同一 性质。这种性质包括蛋白水解活性、基质特异性、稳定性、变化的pH 范围和/或增强的性能特征。 本文描述了对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位置的特定 取代，同时结合以下1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、 20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、 68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、 104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、 130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、 166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、 194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、 216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、 242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、 256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、 272、274和275位置中的一个或多个位置的取代；其中当所述蛋白酶变 体包括在对应于103和76位置处的氨基酸残基的取代时，还存在在非 对应于27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、 216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置处的一个 或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代，其中编号的位置对应于 来自淀粉分解芽孢杆菌的天然产生的枯草溶菌素或对应于在其他羰基水 解酶或枯草溶菌素(例如缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素)中的相当氨基酸残 基。另外，本文描述了对应于以下62、212、230、232、252和257位 置中的一个或多个位置的特定取代，其中编号的位置对应于来自淀粉分 解芽孢杆菌的天然产生的枯草溶菌素或对应于在其他羰基水解酶或枯草 溶菌素(例如缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素)中的相当氨基酸残基。这些氨 基酸位置编号是指编排在图1中表示的成熟淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌 素序列的那些。然而，本发明不限于使用该特定枯草溶菌素的突变，而 是延伸到在“相当于”淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素中特别确定的残基 位置处含有氨基酸残基的前体蛋白酶。在本发明优选的实施方案中，前 体蛋白酶是缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素和在缓慢芽孢杆菌中对应于以上所 列的那些相当氨基酸残基处进行取代、缺失或插入。 若是同源的(即对应于一级或三级结构中的位置)或类似于淀粉分 解芽孢杆菌枯草溶菌素中的特定残基或部分特定残基(即在化学上具有 相同或相似的结合、反应或相互作用的功能)，则前体蛋白酶的残基(氨 基酸)相当于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的残基。 为了确定与一级结构的同源性，直接将前体蛋白酶的氨基酸序列与 淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的一级序列相比，特别是与已知序列的枯 草溶菌素中不变的一组已知残基相比。例如，本文图2说明了在淀粉分 解芽孢杆菌枯草溶菌素和缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素之间保守的残基。在 排列保守残基后，允许必要的插入和缺失以保持排列(即避免通过任意 的缺失和插入而消除保守残基)，确定与淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素 的一级序列中的特定氨基酸相当的残基。保守残基的排列优选应当保守 100％这种残基。然而，有大于75％或少至50％被保守残基的排列也足以 确定相当残基。应当维持催化三分体，Asp32/His64/Ser221的保守。 例如，在图3中，排列从淀粉分解芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣 形芽孢杆菌(carlsbergensis)和缓慢芽孢杆菌得到的枯草溶菌素的氨 基酸序列以提供在氨基酸序列间最大量的同源性。这些序列的比较表明 存在许多含在各序列中的保守残基。在图2中确定了这些保守残基(如 BPN’和缓慢芽孢杆菌之间)。 因此这些保守残基可用于确定相应的缓慢芽孢杆菌的相当氨基酸残 基(PCT公开号WO89/06279，1989年7月13日公布)、本发明优选的 蛋白酶前体酶或称为PB92的枯草溶菌素(EP0328299)，其与优选的缓 慢芽孢杆菌枯草溶菌素高度同源。这些中的一些枯草溶菌素的氨基酸序 列被排列在图3A和3B中，其中列出了产生保守残基的最大同源性的淀 粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的序列。可以看出，与淀粉分解芽孢杆菌枯 草溶菌素相比，在缓慢芽孢杆菌序列中存在许多缺失。因此，例如在其 他枯草溶菌素中与淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素中的Val 165相当的氨 基酸，对于缓慢芽孢杆菌和地衣形芽孢杆菌是异亮氨酸。因此，例如在 淀粉分解芽孢杆菌和缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素中的+76位置的氨基酸是 天冬酰胺(N)。然而，在本发明蛋白酶变体中，相当于淀粉分解芽孢杆 菌枯草溶菌素的+76位置的氨基酸被天冬氨酸(D)取代。本发明中所有 氨基酸的缩写和一种字母编号符合Patentin使用手册(GenBank， Mountain View，CA)，1990，第101页。 也可通过测定前体蛋白酶的三级结构水平的同源性来确定“相当残 基”，前体蛋白酶的三级结构是通过X-射线晶体学来测定。相当残基被 定义为以下的那些：前体蛋白酶和淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的特定 氨基酸残基的两个或多个主链原子的原子坐标(N对N，CA对CA，C对 C和O对O)在排列之后是在0.13nm内，优选0.1nm内。在最好的模型 被定位和放置得到最大覆盖关于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的蛋白酶 的非氢蛋白质原子的原子坐标后之后，才获得排列。最好的模型是晶体 学模型，其在可得到的最高分辨率下给出了实验衍射数据的最低R因子： 功能类似于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的特定残基的相当残基被 定义为那些下述的前体蛋白酶的氨基酸：其可采取一定的构型使得它们 改变、改善或有助于蛋白质的结构、结合基质或催化，这是以一种确认 的方式和归结于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的特定残基的原因。另 外，它们是占据类似位置至一定程度的前体蛋白酶的那些残基(已由X- 射线晶体学得到三级结构)，使得按占据同源位置为基础计，虽然给定 残基的主链原子可能不满足等价标准，但该残基的至少两个侧链原子的 原子坐标落在淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的相应侧链原子的0.13nm 内。淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的三维结构的坐标在EPO公开号 0251446(等同于美国专利5182204，其公开内容在本文引用作参考) 中给出并可按以上概述用于测定在三级结构水平上的相当残基。 确认用于取代、插入或缺失的一些残基是保守残基，而其他的不是。 在残基不被保守的情况下，取代一个或多个氨基酸是受限于这样的取 代：其产生的变体的氨基酸序列不对应于自然界中发现的一种。在保守 残基的情况中，这种取代不应当导致天然产生的序列。本发明蛋白酶变 体包括成熟的蛋白酶变体形式以及这种蛋白酶变体的原体和前体形式。 该前体形式是优选的结构，因为这有助于蛋白酶变体的表达、分泌和成 熟。 “原序列”指的是与成熟形式的蛋白酶的N-端部分相连的氨基酸序 列，当其除去时，得到了“成熟”形式的蛋白酶状态。在自然界中发现 许多蛋白水解酶为翻译酶原产品，在不存在后翻译加工下，其按此方式 表达。产生蛋白酶变体的优选原序列是淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的 推定的原序列，但可使用其他的蛋白酶原序列。 “信号序列”或“前序列”指的是与蛋白酶的N’端部分或蛋白酶原 的N-端部分相连的任何氨基酸序列，其可参与成熟或原体形式的蛋白酶 的分泌。信号序列的此定义是一种功能性的定义，意思是包括由蛋白酶 基因的N-端部分编码的所有那些氨基序列，其参与在自然条件下的蛋白 酶分泌的实施。本发明使用这种序列以实现本文定义的蛋白酶变体的分 泌。一种可能的信号序列包括来自枯草芽孢杆菌枯草溶菌素的信号序列 的头七个氨基酸残基并合到来自缓慢芽孢杆菌(ATCC21536)的枯草溶 菌素的信号序列的其余部分上。 “前体”形式的蛋白酶变体由成熟形式的蛋白酶组成，该成熟形式 的蛋白酶具有与蛋白酶的氨基端可操作连接的原序列和与该原序列的氨 基端可操作连接的“前”或“信号”序列。 “表达载体”指的是含有可操作连接适合的控制序列的DNA序列的 DNA构建物，所述控制序列能够实现所述DNA在适合宿主中的表达。这 种控制序列包括实现转录的启动子、控制这种转录的选择性的操纵基因 序列、编码适合的控制转录和翻译的mRNA核糖体结合部位和序列。该 载体可以是质粒、噬菌粒或简单潜在的基因组插入片段。一旦转化至适 合的宿主中，该载体可独立地复制和起作用或宿主基因组在某些情况下 可整合到基因组本身中。在本说明书中，“质粒”和“载体”有时相互 交换使用，因为质粒是目前最通常使用的载体形式。然而，本发明预期 包括这种其他形式的表达载体，其具有等价的功能并是或成为现有技术 中已知的。 本发明使用的“宿主细胞”一般是原核生物或真核生物宿主，其优 选用美国专利RE34606中公开的方法控制使用，以使它们不能酶催分泌 活性的内切蛋白酶。表达蛋白酶的优选的宿主细胞是芽孢杆菌属菌株 BG2036，在酶催活性的中性蛋白酶和碱性蛋白酶(枯草溶菌素)中其是 缺损的。菌株BG2036的构建详细地描述在美国专利5264366中。表达 蛋白酶的其他宿主细胞包括枯草芽孢杆菌168(还描述在美国专利 RE34606和美国专利5264366中，其公开内容在本文引用作参考)以及 任何适合的芽孢杆菌菌株例如地衣形芽孢杆菌、缓慢芽孢杆菌等。 用重组DNA技术构建的载体转化或转染宿主细胞。这种被转化的宿 主细胞能够复制编码蛋白酶变体或表达所需的蛋白酶变体的载体。在编 码前体形式的蛋白酶变体的载体的情况下，这种变体当被表达时一般是 从宿主细胞分泌到宿主细胞介质中。 当描述两个DNA区之间的关系时，“可操作连接”简单地意思是它 们彼此间功能相关。例如，原序列如果作为一种信号序列的话与肽可操 作连接，参与成熟形式的蛋白酶的分泌，多半可能包括信号序列的断开。 启动子如果控制编码序列的转录的话，其与编码序列可操作连接，核糖 体结合部位如果其处的位置允许翻译的话，其与编码序列可操作连接。 根据本领域技术人员已知的一般方法可得到编码天然产生的前体蛋 白酶的基因。该方法一般包括合成标记的探针，其具有编码感兴趣的蛋 白酶区域的推定的序列，从表达蛋白酶的有机体制备基因组文库，通过 与探针杂交筛分该文库得到感兴趣的基因。然后绘制和排序正杂交克 隆。 克隆的蛋白酶然后用于转化宿主细胞，以便表达该蛋白酶。该蛋白 酶基因然后被连接入高拷贝数目的质粒中。该质粒在宿主中复制，在这 种意义上其含有质粒复制必要的公知要素：一种与所述的基因可操作连 接的启动子(其可作为该基因自身同源的启动子提供，如果其被确认， 即由宿主转换的话)，转录终止和聚腺苷酸化区域(对由宿主从某些真 核宿主细胞中的蛋白酶基因转换的mRNA的稳定性是必要的)其是外源 的或由蛋白酶基因的内源终止区提供，最好选择基因例如抗生素抗性基 因通过在含抗生素的介质中生长能够连续地培养维持质粒感染的宿主细 胞。高拷贝数目的质粒还含有宿主的复制源，由此使得多数质粒在细胞 质中生殖而不受染色体的限制。然而，在本发明范围内是将多次将蛋白 酶基因拷贝整合到宿主基因组中。这被原核生物和真核生物促进，它们 对同源重组特别敏感。该基因可以是天然的缓慢芽孢杆菌基因。另外， 可生产编码天然产生的或突变前体蛋白酶的合成基因。在这种方法中， 确定了前体蛋白酶的DNA和/或氨基酸序列。在下文合成了多重重叠合 成的单链DNA片段，其经杂交和连接产生编码前体蛋白酶的合成DNA。 合成基因构建的实例在美国专利5204105的实施例3中列出，其公开内 容在本文引用作参考。 一旦天然产生或合成前体蛋白酶基因被克隆，就进行多种修饰以增 加不能合成天然产生的前体蛋白酶的基因的使用。这种修饰包括生产重 组蛋白酶如美国专利RE34606和EPO公开号0251446中所述和生产本文 描述的蛋白酶变体。 可使用以下盒式诱变方法来促进本发明蛋白酶变体的构建，但也可 使用其他方法。首先，得到编码蛋白酶的天然产生的基因，其是完整的 或部分序列。然后在该序列中寻找到一理想的点，以在被编码的酶中对 一个或多个氨基酸进行突变(缺失、插入或取代)。在有用寡核苷酸库 替代短基因碎片的限制部位存在下，评价旁侧所述点位的序列，所述寡 核苷酸库当被表达时将编码各种突变体。这种限制部位优选是在蛋白酶 基因中的独特部位，以便促使基因碎片的替代。然而，可使用在蛋白酶 基因中不过分多余的任何适宜限制部位，条件是由限制消化产生的基因 碎片可以适当的序列重装配。如果在离所选择的点的适宜距离(从10-15 个核苷酸)内的位置处不存在限制部位，则以一定的方式通过取代基因 中的核苷酸而产生这种部位，所述方式是使得读框或编码的氨基酸在最 终结构中都不改变。为改变其序列以符合所要求序列的基因突变是根据 一般公知的方法由M13引子扩展完成。确定适合的旁侧区域和评价达到 两种适宜的限制部位序列所需的变化，这两方面工作通常是由多余的遗 传密码、基因的限制酶图和大量的不同限制性酶来完成。注意到若适宜 的旁侧限制部位可得到，以上方法的使用仅与不含所述部位的旁侧区域 有关。 一旦天然产生的DNA或合成DNA被克隆，旁侧被突变的位置的限制 部位就用相关限制性酶消化并且多个末端互补的寡核苷酸盒被连接到基 因中。通过该方法简化了诱变，因为可合成所有的寡核苷酸，以便具有 相同的限制部位，和不需要合成连接物来产生限制部位。这里使用的蛋 白水解活性被定义为每毫克活性酶的肽键水解速率。存在测定蛋白水解 活性的许多公知方法(K.M.Kalisz，“微生物蛋白酶”， 高等生物化学工 程/生物技术A.Fiechter等，1988)。除此之外或作为改性的蛋白水解 活性的替代，本发明变异体酶具有许多其他的改性性质例如Km，kcat，kcat/ Km比例和/或具体改性的基质和/或改性的pH活性范围。这些酶可适合 特定的基质，所述基质例如在制备肽中或对于水解过程例如洗衣应用中 是预期存在的。 本发明的一方面，目的是保证变体蛋白酶具有与前体蛋白酶相比改 变的蛋白水解活性，由于增加了这种活性(数值上较大)能够使酶更有 效地作用于目标基质。还有利的是与前体相比具有改变的热稳定性和/ 或改变的基质特异性的变异体酶。在一些情况下，较低的蛋白水解活性 可能是理想的，例如当蛋白酶的合成活性是理想时，蛋白水解活性的降 低是有用的(如用于合成肽)。一种情况可能希望降低此蛋白水解活性， 其能够破坏这种合成的产品。相反，在一些情况下，可能需要增加变体 酶相对其前体的蛋白水解活性。此外，可能需要增加或降低(改变)变 异体的稳定性，无论是碱性或热稳定性。Km，kcat，或kcat/Km的增加或 降低对用于测定这些动力学参数的基质是特定的。 本发明的另一方面，已确定在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素 的103位置的取代，同时结合以下1、3、4、8、9、10、12、13、16、 17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、 58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、 101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、 126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、 159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、 188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、 214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、 238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、 254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、 270、271、272、274和275位置中的一个或多个位置的取代对调整酶 的总稳定性和/或蛋白水解活性是重要的。 本发明的另一方面，已确定在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素 的以下62、212、230、232、252和257位中的一个或多个位置处的取 代对调整酶的总稳定性和/或蛋白水解活性也是重要的。 这些取代优选在缓慢芽孢杆菌(重组或天然类型的)枯草溶菌素中 进行，尽管在任何芽孢杆菌蛋白酶中也可以进行取代。 根据变体蛋白酶得到的筛分结果，注意到在淀粉分解芽孢杆菌枯草 溶菌素中的突变对于这些酶的蛋白水解活性、性能和/或稳定性和对这 种变体酶的清洗或洗涤性能都是重要的。 制备本发明洗涤剂和漂白组合物中使用的酶的方法和步骤是已知的 并披露在PCT申请号WO95/10615中。 本发明酶具有似胰蛋白酶的特异性。即本发明酶水解蛋白质是通过 优先断开带电荷的氨基酸残基的肽键，更具体地是例如精氨酸和赖氨酸 的残基，而不优先断开疏水氨基酸残基的肽键，更具体地是苯基丙氨酸、 色氨酸和酪氨酸。具有后者情况的酶具有似胰凝乳蛋白酶的特异性。以 上所述的基质特异性由酶对两种合成基质的作用来说明。具有似胰蛋白 酶特异性的蛋白酶要优先于合成基质sucAAPF-pNA水解合成基质bVGR- pNA。相反，似胰凝乳蛋白酶的蛋白酶水解前者要比后者更快。对于本 发明目的而言，使用以下方法定义本发明蛋白酶的似胰蛋白酶的特异 性。 将pH为10和在温度25℃下的固定量的甘氨酸缓冲液加入标准10ml 试管中。将要测试的0.5ppm活性酶加入该试管中。将每ml缓冲溶液大 约1.25mg合成基质加入试管中。使该混合物在25℃下培养15分钟。培 养阶段完成时，向混合物中以每ml缓冲液0.5mg量加入酶抑制剂，PMSF。 在410nm波长处读取混合物的吸光度或OD值。该吸光度则表示酶对合 成基质的活性。吸光度越大，对基质的活性水平越高。 为了测定各酶的特异性，可将对两种合成基质蛋白质的吸光度转化 成特异性比值。对于本发明目的，由下式确定特异性比值： [对sAAPF-pNA的活性]/[对bVGR-pNA的活性] 则具有比值低于约10，更优选低于约5，最优选低于约2.5的酶被 认为证明有似胰蛋白酶的活性。 这种变体一般具有至少一种性质不同于得到变体的氨基酸序列的蛋 白酶前体的同一种性质。 本发明的一方面是用于处理织物、器皿、餐具、厨具、炊具和其他 硬表面底物的组合物，例如洗涤剂和漂白组合物，其包括一种或多种本 发明的变体蛋白酶。含蛋白酶的组合物可用于处理例如丝绸或羊毛以及 其他类型的织物，如公开文献例如RD216034，EP134267，US4533359和 EP344259中所述；和处理器皿、餐具、厨具、炊具和其他硬表面底物如 公开文献例如美国专利5478742，US5346822，US5679630和US5677272 中所述。 II. 漂白剂-本发明漂白组合物含有漂白剂，其优选占该组合物的约 0.5％-20％重量。漂白剂基本上是不溶性的，优选是固体的有机过氧酸， 或包含漂白活化剂和能够产生过氧化氢的过氧漂白化合物的漂白体系或 这两者的组合。组合物中的过酸或由活化剂和过氧化合物形成的过酸优 选是具有亲水-亲油平衡(“H.L.B”)值为约3-6.5的相应羧酸。因此， 可用于表征本发明适用的优选过氧酸(由活化剂得到或作为预制的过氧 酸)的方法是“H.L.B标准”，例如其描述在Davies，J.T. Proc 2nd Internat. Congr.Surface Activity 1，426，Butterworths，伦敦(1957)，其 在本文引用作参考。在研究表面活性剂中已使用这种H.L.B标准(亲水 -亲油平衡)作为关于表面活性剂在亲水(似水)和亲油(似油)相之 间分布的一种量度。以这种方式，可使用H.L.B值表示活性漂白物在洗 涤中的亲油(疏水)特征(即过氧酸从洗涤水溶液中分配出和在油/织 物界面上浓缩的能力)。 在下表A中列出了被选择的过氧酸(为相应的羧酸)的计算H.L.B 值。用于计算H.L.B值的等式可列为： HLB＝(亲水基团数目)的总和-(疏水基团数目)的总和+7 亲水基团数目值是[-C(O)OH&-N(H)C(O)-＝2.1]和疏水基团数目值是 [脂族/芳族碳＝0.475&极性基团间的脂族碳原子是烃链中的脂族碳原子 值的1/2＝(0.475)/2]。作为参照，H.L.B值＞7表示该物质优选是水溶 性的，H.L.B值＜7表示增加了表面活性和疏水性。 表A 各种过氧酸的H.L.B值 活化剂/预制的过氧酸 缩写 过氧酸 相应羧酸的H.L.B 四乙酰乙二胺 TAED CH3C(O)OOH 8.6 二过氧十二烷二酸 DPDDA HOO(O)C(CH2)10-C(O)OOH 6.5 过氧琥珀酸壬酰胺 NAPSA CH3(CH2)8N(H)-C(O)(CH2)2C(O)OOH 6.4 苯甲酰氧基苯磺酸盐 BOBS C6H5C(O)OOH 6.3 过氧己二酸壬酰胺 NAPAA CH3(CH2)8N(H)C(O)(CH2)4C(O)OOH 6.0 壬酰基氧苯磺酸盐 NOBS CH3(CH2)7C(O)OOH 5.3 癸酰基氧苯磺酸盐 DOBS CH3(CH2)8C(O)OOH 4.8 过月桂酸 PLA CH3(CH2)10C(O)OOH 3.9 如上述，本发明过氧酸(无论是直接添加或就地产生的)(相应羧 酸)的H.L.B值的优选范围是约3.0-6.5。用于本发明的过氧酸(无论 是直接添加或就地产生的)(作为羧酸)的H.L.B值的更优选范围是约 4.0-6.5。本发明过氧酸(无论是直接添加或就地产生的)(作为羧酸) 的H.L.B值的最优选范围是约4.0-6.0。 (a) 过氧酸 本发明涉及包含有效量的蛋白酶和漂白体系的洗涤剂组合物，所述 漂白体系包含至少约0.1％，优选约0.1％-50％重量基本上不溶的有机过 氧酸。本发明有用的过氧酸优选占该组合物重量的约0.5％-20％，更优选 约1％-10％，最优选约2％-7％。 优选的有机过氧酸选自4-壬基氨基-4-氧代过氧丁酸；6-(壬基氨 基)-6-氧代过氧己酸；1，12-二过氧十二烷二酸；庚基磺酰基过丙酸； 癸基磺酰基过丙酸；和庚基-，辛基-，壬基-，癸基磺酰基过丁酸和其 混合物。 有机过氧酸中，酰氨基过氧酸(酰胺取代的过氧羧酸)是优选的。 用于本发明适合的酰氨基过氧酸描述在分别于1987年1月6日和1987 年8月11日授权的Burns等的美国专利4634551和4686063中，这两 篇专利在本文引用作参考。适合的酰氨基过氧酸具有式： 其中，R1为含有约1-14个碳原子的烷基、芳基或烷芳基(优选R1是含 有约6-12个碳原子的烷基)，R2为含有约1-14个碳原子的亚烷基、亚 芳基或烷亚芳基(优选R2是含有约1-6个碳原子的亚烷基)，R5为H或 含有约1-10个碳原子的烷基、芳基或烷芳基(优选R5是H)。更优选R1 是含有约8-10个碳原子的烷基，R2是含有约2-4个碳原子的亚烷基。 另一种优选的预制过酸包括E-苯二甲酰亚氨基-过氧己酸(“PAP”)。 参见例如美国专利5487818，5310934，5246620，5279757和5132431。 其他适合的过氧己酸包括，但不限于：N，N’-对苯二甲酰-二-(6-氨 基-过氧己酸)(“TPCAP”)和描述在美国专利5770551中的那些。此外， N-壬酰基-6-氨基过氧己酸(“NAPCA”)也可用作过酸。参见美国专利 5523434，4634551和4852989。 还适用于本发明的是过氧富马酸盐，其描述在1989年8月1日授 权的Burns等的美国专利4852989，其在本文引用作参考，和砜过氧酸 (砜过氧羧酸)，其描述在分别于1988年7月19日、1989年4月25 日和1991年4月2日授权的Dryoff等的美国专利4758369，4824591 和5004558中，其都在本文引用作参考。 美国专利4686063的实施例I含有合成NAPSA的一种描述，从第8 栏第40行至第9栏第5行，和NAPAA，从第9栏第15行至第9栏第65 行。在酰氨基过氧酸的合成结尾，反应用水急冷，过滤，用水洗涤除去 一些过量的硫酸(或制备过氧酸的其他强酸)并再过滤。 根据1990年3月20日授权的Sadlowski等的美国专利4909953(其 在本文引用作参考)，将由此得到的酰氨基过氧酸湿饼与pH约3.5-6， 优选约4-5的磷酸盐缓冲液接触。 用于使储存稳定或控制放热的其他试剂在酰氨基过氧酸掺入最终产 品中之前可加入其中。例如，硼酸、在1987年8月11日授权并在本文 引用的Burns的美国专利4686063中公开的放热控制试剂可按过酸∶硼 酸约2∶1比例与酰氨基过氧酸(已用磷酸盐缓冲液洗涤过)混合。磷酸 盐缓冲液洗涤过的酰氨基过氧酸也可与适当量的吡啶二甲酸和焦磷酸四 钠、螯合稳定体系混合。在与湿饼接触之前，螯合剂可任选地包括在磷 酸盐缓冲液中。 湿饼优选由平均颗粒直径为约0.1-260微米，优选约10-100微米， 最优选约30-60微米的颗粒构成。小颗粒尺寸的NAPAA晶体是本发明希 望的。参见1991年10月8日授权的Getty等的美国专利5055218，其 在本文引用作参考。 这里的NAPAA过滤饼优选用磷酸盐缓冲液洗涤两次。发现两次连续 的磷酸盐缓冲液洗涤使NAPAA有最好的稳定性。 理论AvO(有效氧)在约3-12，最优选5-7的颗粒(固体)有机过 氧酸是优选的。 用于本发明最优选的是NAPAA。过氧己二酸的壬酰胺(“NAPAA”) 的另一种名称是6-(壬基氨基)-6-氧代过氧己酸。NAPAA的化学式是： NAPAA的分子量为287.4。 含有NAPAA的洗涤剂组合物和漂白组合物提供了对织物极有效的表 面漂白。从织物上除去了污渍和/或污垢。这些组合物对从织物上去除 污秽污垢特别有效。 NAPAA极性酰胺或取代的酰胺部分导致过氧酸具有非常低的蒸汽压 并由此具有低气味以及优异的漂白性能。相信酰胺基团的极性导致过氧 酸的蒸汽压降低和提高了熔点。 NAPAA可直接用作漂白剂。其在洗衣应用中具有降低的蒸汽压和良 好的气味。 NAPAA可通过例如首先将NAAA(已二酸的单壬基酰胺)、硫酸和过 氧化氢反应来制备。反应产物通过加入冰水中被急冷，然后过滤，用蒸 馏水洗涤，最后空吸过滤回收湿饼。继续洗涤直至滤液的pH为中性。 还优选NAPAA的pH(在水10％固体)在约4.2-4.8之间。令人吃惊 地，该pH导致热稳定更好的颗粒。 (b) 漂白体系-漂白活化剂和过氧漂白化合物 (I) 漂白活化剂 用于本发明的漂白体系中的漂白活化剂优选具有以下结构： 其中R是含有约5-18个碳原子的烷基，其中从羰基碳延伸的和包括羰 基碳的最长的直链烷基含有约6-10个碳原子，L是离去基团，其共轭酸 的pKa为约4-13，优选约6-11，最优选约8-11。 L基本上可以是任何适宜的离去基团。离去基团是由于过氢氧化物 阴离子亲核进攻漂白活化剂，结果从漂白活化剂上脱去的任何基团。该 过水解反应导致形成过羧酸。一般，为适合的离去基团的基团必须存在 吸电子作用。这有助于过氢氧化物阴离子的亲核进攻。 L基团必须对在最佳的时间段(例如洗涤周期)内发生的反应有足 够的反应性。可是，如果L反应性太强，那么该活化剂将难以稳定。这 些特征一般与离去基团的共轭酸的pKa相应，此常规的例外情况也是已 知的。 优选的漂白活化剂是具有以下通式的那些： 或 其中R1是含有约6-约12个碳原子的烷基，R2是含有1-约6个碳原子的 亚烷基，R5是氢或含有约1-约10个碳原子的烷基、芳基或烷芳基，和 L选自： 和 其中R6是含有约1-约14个碳原子的亚烷基、亚芳基或烷亚芳基，R3是 含有约1-约8个碳原子的烷基链，R4是H或R3，Y是H或增溶基团，Y 优选选自-SO3-M+、-COO-M+、-SO4-M+、(-N+R3’)X-和O←N(R3’)，其中R’是 含有约1-约4个碳原子的烷基链，M为给漂白活化剂提供溶解性的阳离 子，X为给漂白活化剂提供溶解性的阴离子。优选M为碱金属、铵或取 代的铵阳离子，最优选钠和钾，X是选自卤素、氢氧根、甲基硫酸根或 乙酸根的阴离子。更优选Y是-SO3-M+、-COO-M+。应当注意到具有不含增 溶基团的离去基团的漂白活化剂应当很好地分散在漂白溶液中，以便有 助于它们的溶解。优选的是： 其中R3同以上定义，Y是-SO3-M+或-COO-M+，其中M同以上定义。 特别优选的漂白活化剂中R1是含有约6-约12个碳原子的直链烷 基，R2是含有约2-约6个碳原子的直链亚烷基，R5是H，L选自： 和 其中R3同以上定义，Y是-SO3-M+或-COO-M+，M同以上定义。 优选的漂白活化剂是： 其中R是H、烷基、芳基或烷芳基。其描述在Hodge等的美国专利4966723 中，其在本文引用作参考。 优选的漂白活化剂是： 或 其中R1是H或含有约1-约6个碳原子的烷基，R2是含有约1-约6个碳 原子的烷基，L同以上定义。 优选的漂白活化剂还为以上通式的那些活化剂，其中L同通式中所 定义，R1是H或含有约1-约4个碳原子的烷基。 甚至更优选的是以上通式的那些漂白活化剂，其中L如通式中所定 义，R1是H。 更优选的漂白活化剂是以上通式的那些漂白活化剂，其中R是含有 约5-约9，优选约6-约8个碳原子的直链烷基，L选自： 其中R、R2、R3和Y同以上定义。 特别优选的漂白活化剂是以上通式的那些漂白活化剂，其中R是含 有约5-约12个碳原子的烷基，其中从羰基碳延伸的和包括羰基碳的烷 基链的最长直链部分含有约6-10个碳原子，L选自： 和 其中R2是含有约1-约8个碳原子的烷基链，和Y是-SO3-M+或-COO-M+， 其中M是碱金属、铵或取代的铵阳离子。 特别优选的漂白活化剂是以上通式的那些漂白活化剂，其中R是含 有约5-约9，优选约6-约8个碳原子的直链烷基，L选自： 和 其中R2同以上定义，和Y是-SO3-M+或-COO-M+，其中M同以上定义。 最优选的漂白活化剂具有式： 其中R是含有约5-约9，优选约6-约8个碳原子的直链烷基，M是钠或 钾。 优选，本发明漂白活化剂是壬酰氧基苯磺酸钠(NOBS)或苯甲酰氧 基苯磺酸钠(BOBS)。 用于本发明漂白组合物中还特别优选的是以下漂白活化剂，其对于 具有天然橡胶部件的机器的使用特别安全。相信这是由于这些酰氨基酸 衍生的漂白活化剂的过水解反应不产生油性的二酰基过氧化物(DAP)， 而是生成了不溶性的结晶固体DAP’s的结果。相信这些固体不形成涂膜， 由此天然橡胶部件不与DAP’s接触长时间。这些优选的漂白活化剂选自： a)以下通式的漂白活化剂或其混合物： 其中，R1为含有约1-14个碳原子的烷基、芳基或烷芳基，R2为含有约1-14 个碳原子的亚烷基、亚芳基或烷亚芳基，R5为H或含有约1-10个碳原 子的烷基、芳基或烷芳基，和L是离去基团； b)以下通式的苯并噁嗪型漂白活化剂： 其中R1是H、烷基、烷芳基、芳基、芳烷基，和其中R2，R3，R4和R5可 以是相同或不同的取代基，其选自H、卤素、烷基、链烯基、芳基、羟 基、烷氧基、氨基、烷基氨基、COOR6(其中R6是H或烷基)和羰基官 能团； c)以下通式的N-酰基己内酰胺漂白活化剂： 其中R6是H或含有1-12个碳原子的烷基、芳基、烷氧基芳基或烷芳基； 和 d)a)、b)和c)的混合物。 优选的a)型漂白活化剂是其中R1是含有约6-约12个碳原子的烷 基，R2含有约1-约8个碳原子和R5是H或甲基的那些漂白活化剂。特 别优选的漂白活化剂是以上通式的那些漂白活化剂，其中R1是含有约7- 约10个碳原子的烷基和R2含有约4-5个碳原子。 优选的b)型漂白活化剂是其中R2、R3、R4和R5是H和R1是苯基的 那些漂白活化剂。 优选的所述c)型的N-酰基己内酰胺漂白活化剂的酰基部分具有式 R6-CO-，其中R6是H或含有1-12个碳原子，优选6-12个碳原子的烷基、 芳基、烷氧基芳基或烷芳基。在高度优选的实例中，R6选自苯基、庚基、 辛基、壬基、2，4，4-三甲基戊基、癸烯基和其混合物。 酰氨基衍生的漂白活化剂-本发明使用的a)型漂白活化剂是以下通 式的酰胺取代的化合物或其混合物： 其中R1、R2和R5同以上定义，L基本上可以是任何适合的离去基团。优 选的漂白活化剂是具有以上通式的那些，其中R1、R2和R5同过氧酸中所 定义和L选自： 和 ，和 和其混合物，其中R1为含有约1-14个碳原子的烷基、芳基或烷芳基，R3 为含有1-约8个碳原子的烷基链，R4为H或R3，Y为H或增溶性基团。 优选的增溶性基团为-SO3-M+、-CO2-M+、-SO4-M+、-N+(R3)4X-和O＜- -N(R3)3，最优选-SO3-M+和-CO2-M+，其中，R3为含有约1-4个碳原子的烷 基链，M为给漂白活化剂提供溶解性的阳离子，X为给漂白活化剂提供 溶解性的阴离子。优选M为碱金属、铵或取代的铵阳离子，最优选钠和 钾，X为卤素、氢氧根、甲基硫酸根或乙酸根阴离子。应当注意到具有 不含增溶基团的离去基团的漂白活化剂应当很好地分散在漂白溶液中， 以便有助于它们的溶解。 优选的漂白活化剂是以上通式的那些，其中L选自： 和 其中R3如上定义，Y是-SO3-M+或-CO2-M+，其中M同以上定义。 另一种重要类型的漂白活化剂，包括类型b)和类型c)的那些，由 于过氢氧化物阴离子亲核进攻环上的羰基碳结果开环得到了本文描述的 有机过酸。例如，在类型c)活化剂中的开环反应包括过氧化氢或其阴离 子进攻己内酰胺环的羰基。由于过氧化氢或其阴离子进攻酰基己内酰胺 优选是发生在外环羰基处，因此得到明显的开环部分可能需要催化剂。 开环漂白活化剂的另一实例可发现于类型b)活化剂中，例如在1990年 10月30日授权的Hodge等的美国专利4966723中公开的那些。 苯并噁嗪型漂白活化剂-由Hodge公开的这种活化剂化合物包括苯 并噁嗪型活化剂，其具有式： 包括以下类型的取代的苯并噁嗪： 其中R1是H、烷基、烷芳基、芳基、芳烷基，和其中R2，R3，R4和R5可 以是相同或不同的取代基，其选自H、卤素、烷基、链烯基、芳基、羟 基、烷氧基、氨基、烷基氨基、COOR6(其中R6是H或烷基)和羰基官 能团。 苯并噁嗪型的优选活化剂是： 当使用活化剂时，为促进过水解反应，洗涤溶液的pH在约8.5- 10.5，优选9.5-10.5，该洗涤溶液得到了漂白表面的最佳性能。这种pH 可用通常已知的为缓冲剂的物质得到，其为本发明漂白体系的任选组 分。 N-酰基己内酰胺漂白活化剂-本发明使用的类型c)的N-酰基己内酰 胺漂白活化剂具有式： 其中R6是H或含有1-12个碳原子的烷基、芳基、烷氧基芳基或烷芳基。 其中R6部分含有至少约6个碳原子，优选6-约12个碳原子的己内酰胺 活化剂提供了疏水漂白，如上所述，其能清洁亲核和人体污垢。其中R6 含有1-约6个碳原子的己内酰胺活化剂提供了亲水漂白物，其对漂白饮 料污渍特别有效。本发明可使用疏水和亲水己内酰胺一般以重量比1∶5- 5∶1，优选1∶1的混合物，以获得去除混合污渍的效果。 高度优选的N-酰基己内酰胺选自苯甲酰己内酰胺、辛酰基己内酰 胺、壬酰基已内酰胺、3，5，5-三甲基己酰基己内酰胺、癸酰基己内酰胺、 十一碳烯酰基己内酰胺和其混合物。制备N-酰基己内酰胺的方法是本领 域已知的。 与美国专利4545784中的教导相反，漂白活化剂优选不吸附到过氧 漂白化合物中。否则这样作，在存在其他有机去污组分下，会引起安全 性问题。 类型a)、b)或c)的漂白活化剂占漂白体系或漂白组合物重量的至 少约0.01％，优选从约0.1％，更优选从约1％，最优选从约3％-50％，优 选至约30％，更优选至约15％，还更优选至约10％，最优选至约8％。 本发明优选的酰氨基衍生的和己内酰胺漂白活化剂还可与橡胶安 全、酶安全的亲水活化剂例如TAED结合使用，一般以酰氨基衍生的或 己内酰胺活化剂∶TAED的重量比为1∶5-5∶1，优选约1∶1。 高度优选的漂白活化剂选自四乙酰乙二胺(TAED)、苯甲酰己内酰 胺(BzCL)、4-硝基苯甲酰己内酰胺、3-氯代苯甲酰己内酰胺、苯甲酰 氧基苯磺酸盐(BOBS)、壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)、苯甲酸苯酯(PhBz)、 癸酰氧基苯磺酸盐(C10-OBS)、苯甲酰戊内酰胺(BZVL)、辛酰氧基苯磺 酸盐(C8-OBS)、可过水解的酯和它们的混合物，最优选苯甲酰己内酰胺 和苯甲酰戊内酰胺。在pH约8-9.5范围的特别优选的漂白活化剂是那 些选择具有OBS或VL离去基团的活化剂。 其他优选的漂白活化剂描述在1997年12月16日授权的Christie 等的美国专利5698504；1997年12月9日授权的Christie等的美国专 利5695679；1997年11月11日授权的Willey等的美国专利5686401； 1997年11月11日授权的Hartshorn等的美国专利5686014；1995年4 月11日授权的Willey等的美国专利5405412；1995年4月11日授权 的Willey等美国专利5405413；1992年7月14日授权的Mitchel等的 美国专利5130045；和1983年11月1日授权的Chung等的美国专利 4412934，和未结案的美国专利申请序号08/709072，08/064564，所有 这些在本文引用作参考。 优选的疏水漂白活化剂包括，但不限于：壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)、 4-[N-(壬酰基)氨基己酰基氧]苯磺酸钠(NACA-OBS)，其实例描述在美 国专利5523434中，十二烷酰基氧基苯磺酸盐(LOBS或C12-OBS)、10- 十一碳烯酰基氧基苯磺酸盐(UDOBS或C11-OBS，在10-位置有不饱和度) 和癸酰基氧基苯甲酸(DOBA)。 还可包括四元取代的漂白活化剂。本发明清洗组合物优选包含四元 取代的漂白活化剂(QSBA)或四元取代的过酸(QSP)；更优选前者。优 选的QSBA结构还被描述在1997年11月11日授权的Willey等的美国 专利5686015；1997年8月5日授权的Taylor等的美国专利5654421； 1995年10月24日授权的Gosselink等的美国专利5460747；1996年12 月17日授权的Miracle等的美国专利5584888和1996年11月26日授 权的Taylor等的美国专利5578136，所有这些在本文引用作参考。 本发明有用的高度优选的漂白活化剂是酰胺-取代的类型，如美国 专利5698504，5695679和5686014中所述，其在本文引用作参考。这 种漂白活化剂的优选实例包括(6-辛酰氨基己酰基)氧苯磺酸盐，(6-壬 酰氨基己酰基)氧苯磺酸盐，(6-癸酰氨基己酰基)氧苯磺酸盐，和它们 的混合物。 公开在美国专利5698504，5695679和5686014(其在本文引用作 参考)和1990年10月30日授权的Hodge等的美国专利4966723中的 其他有用的活化剂包括苯并噁嗪型活化剂，例如C6H4环被稠合在 -C(O)OC(R1)＝N-部分的1，2-位置。 根据活化剂和确切的应用，可由在使用中pH为约6-约13，优选约 9.0-约10.5的漂白体系得到良好的漂白结果。一般，例如，具有吸电 子部分的活化剂是用于近中性或中性以下pH范围。碱和缓冲剂可用于 保证这种pH。 如描述在美国专利5698504，5695679和5686014(其在本文引用 作参考)中的酰基内酰胺活化剂是本发明非常有用的，尤其是酰基己内 酰胺(参见例如WO94-28102A)和酰基戊内酰胺(参见1996年4月2日授 权的Willey等的US5503639，其在本文引用作参考)。 一般，漂白机理，和尤其是漂白表面的机理不完全清楚。然而，一 般认为漂白活化剂经过过氢氧化物阴离子的亲核进攻，形成了过氧羧 酸，其中所述过氢氧化物阴离子是由过氧漂白剂放出的过氧化氢产生 的。该反应通常称为过水解。 当使用活化剂时，为促进过水解反应，洗涤溶液的pH在约8.5- 10.5，优选9.5-10.5，该洗涤溶液得到了漂白表面的最佳性能。这种pH 可用通常已知的为缓冲剂的物质得到，其为本发明漂白体系的任选组 分。 (ii) 过氧漂白化合物 本发明有用的过氧漂白体系是在水溶液中能够产生过氧化氢的那 些。这些化合物是本领域公知的并包括过氧化氢和碱金属过氧化物、有 机过氧漂白化合物例如尿素过氧化物，和无机过盐漂白化合物，例如碱 金属过硼酸盐、过碳酸盐、过磷酸盐等。若需要的话，也可使用两种或 多种这样漂白化合物的混合物。 过氧化氢源详细地描述在本文引用的Kirk Othmer的化学工艺百科 全书，第4版(1992，John Wiley & Sons)，第4卷，第271-300页“漂 白剂(综述)”，包括各种形式的过硼酸钠和过碳酸钠，包括各种涂覆和 改性的形式。 优选的过氧漂白化合物包括过硼酸钠，商业上可得到的是一，三和 四水合物形式，焦磷酸钠过氧水合物，尿素过氧水合物，过碳酸钠和过 氧化钠。特别优选的是过硼酸钠四水合物、过硼酸钠一水合物和过碳酸 钠。过碳酸钠是特别优选的，因为其在储存下非常稳定并且还非常快地 溶解到漂白水溶液中。相信这种快速的溶解导致形成高含量的过羧酸， 由此增强了漂白表面的性能。 高度优选的过碳酸盐可以是未涂覆或被涂覆的形式。未涂覆过碳酸 盐的平均粒度为约400-1200微米，最优选约400-600微米。若使用涂 覆的过碳酸盐，优选的涂覆材料包括碳酸盐和硫酸盐的混合物，硅酸盐， 硼硅酸盐或脂肪羧酸。 过氧漂白化合物占漂白体系或漂白组合物重量的至少约0.1％，优选 约1％-75％，更优选约3％-40％，最优选约3％-25％。 漂白体系中，漂白活化剂与过氧漂白化合物的重量比一般为约2∶1- 1∶5。优选的比例范围是约1∶1-1∶3。 在本发明中，过氧漂白化合物(按AvO)与漂白活化剂的摩尔比一 般至少为1∶1，优选从至少1.5∶1，最优选从至少2∶1，至约20∶1，优 选至约10∶1，更优选至约3∶1。优选，本发明漂白组合物包含约0.5％- 20％，最优选约1％-10％重量过氧漂白化合物。 本发明漂白活化剂/漂白化合物体系本身可作为漂白剂。然而，这 种漂白体系特别适用于可包含各种去污辅助物例如表面活性剂、助洗剂 等的组合物中。 漂白催化剂-本发明组合物还可包含一种或多种漂白催化剂。优选 的漂白催化剂是两性离子漂白催化剂，其描述在美国专利5576282和 5817614中(特别是3-(3，4-二氢异喹啉鎓)丙磺酸盐。其他漂白催化剂 包括阳离子漂白催化剂，其描述在美国专利5360569、5442066、5478357、 5370826、5482515、5550256和WO95/13351，WO95/13352和WO95/13353 中。 漂白组合物 除了上文所述的一种或多种蛋白酶变体和一种或多种漂白剂外，本 发明漂白组合物还包含最好与蛋白酶变体和漂白剂相容的一种或多种清 洗辅助物质。本文所述术语“相容”意思是漂白组合物材料不降低蛋白 酶的蛋白水解活性至蛋白酶在正常的使用条件下不是预期有效的程度。 本文使用的术语“清洗辅助物质”意思是选择用于理想的特定类型的漂 白组合物和产品形式(例如液体；颗粒；粉状；条；膏状；喷雾剂；片； 凝胶；泡沫体组合物)的任何液体、固体或气态材料，该材料还优选与 组合物中使用的蛋白酶和漂白剂是相容的。颗粒组合物还可以是“密实” 形式，液体组合物还可以是“浓缩”形式。 清洗辅助物质的具体选择可容易地由考虑被清洗的表面、物品或织 物和用于使用中的清洗条件(例如洗涤剂使用经过的)的所需组合物形 式来确定。适合的清洗辅助物质的实例包括，但不限于：表面活性剂、 助洗剂、漂白剂、漂白活化剂、漂白催化剂、其他酶、酶稳定体系、螯 合剂、荧光增白剂、污垢解脱聚合物、染料转移抑制剂、分散剂、抑泡 剂、染料、香料、着色剂、填料盐、水溶助长剂、光活化剂、荧光剂、 织物调理剂、可水解的表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂、防缩剂、抗皱 剂、杀菌剂、杀真菌剂、色粒、银器护理剂、防晦暗和/或防腐蚀剂、 碱源、增溶剂、载体、加工助剂、颜料和pH控制剂，其描述在美国专 利5705464、5710115、5698504、5695679、5686014和5646101中。 具体的漂白组合物物质在下文详细举例说明。 若清洗辅助物质与漂白组合物中的蛋白酶变体不相容，则可使用适 当的方法，保持清洗辅助物质和蛋白酶变体隔离(彼此不相互接触)， 直至两种组分的组合是适当的。适合的方法可以是本领域任何公知的方 法，例如胶封、包胶、成片、物理分离等。 优选在适用于清洗需要去除蛋白质类污垢的各种表面的组合物中包 括有效量的上述一种或多种蛋白酶变体。这种漂白组合物包括用于清洗 硬表面的洗涤剂组合物，形式不限(例如液体、颗粒、膏体、泡沫体、 喷雾剂等)；用于清洗织物的洗涤剂组合物，形式不限(例如颗粒、液 体、条制品等)；洗餐具组合物(形式不限并包括自动洗餐具用颗粒和 液体)；口腔增白组合物，形式不限(例如洁齿剂、牙膏和漱口制剂)； 和假牙漂白组合物，形式不限(例如液体、片)。 本发明织物漂白组合物主要是用于洗衣机的洗涤周期中；然而，其 他用途也被考虑，例如作为重污垢织物的预处理产品，或浸泡产品；其 用途不必然就限制在用于洗衣机方面，本发明组合物可以单独使用或与 可相容的手洗组合物结合使用。 这里所述的“有效量的蛋白酶变体”是指需要获得在特定漂白组合 物中所需的酶活性的上述蛋白酶变体的数量。这种有效量容易由本领域 的普通技术人员来确定，其基于许多因素，例如所用的特定变体、清洗 应用、漂白组合物的特定组成和是否需要液体或干燥(例如颗粒、条) 组合物等。 优选漂白组合物包含约0.0001％-10％本发明的一种或多种蛋白酶变 体，更优选约0.001％-1％，还更优选约0.001％-0.1％。还优选本发明蛋 白酶变体在组合物中存在足够量，以提供每100g组合物的活性蛋白酶mg 与来自洗涤水溶液中的任何过氧酸的理论有效O2(“AvO2”)ppm之比， 在本文称为酶与漂白剂之比(E/B之比)，为约1∶1-20∶1。在下文进一 步详细地讨论其中可使用本发明蛋白酶变体的各种漂白组合物的几个实 例。另外，漂白组合物按该组合物的重量计可包括约1％-99.9％清洗辅助 物质。 这里所述的“非织物漂白组合物”包括硬表面漂白组合物、洗餐具 组合物、口腔漂白组合物、假牙漂白组合物和个人清洗组合物。 当本发明漂白组合物配制成适用于洗衣机洗涤方法的组合物时， 本发明组合物优选含有表面活性剂和助洗剂两类化合物和其他的一种 或多种清洗辅助物质，其优选选自有机聚合物、漂白剂、附加酶、抑泡 剂、分散剂、钙皂分散剂、污垢悬浮和抗再沉积剂和腐蚀抑制剂。洗衣 组合物还可含有柔软剂，其作为其他的清洗辅助物质。 本发明组合物还可作为固体或液体形式的洗涤剂添加剂产品。这种 添加剂产品用于补充或促进常规洗涤剂组合物的性能并可在清洗过程的 任何阶段加入。 当配制成用于手洗餐具方法的组合物时，本发明组合物优选含有表 面活性剂和优选含有其它的清洗辅助物质，其选自有机聚合物、增泡剂、 II族的金属离子、溶剂、水溶助长剂和附加酶。 如果需要的话，本发明洗衣洗涤剂组合物在20℃下测定的密度为 400-1200g/l，优选500-950g/l组合物。 本发明漂白组合物的“密实”形式由密度和就组成而言，由无机填 料盐的量得以最好地反映。无机填料盐是粉状洗涤剂组合物的常规组 分。在常规洗涤剂组合物中，填料盐是以大量存在，一般为总组合物重 量的17-35％。在密实组合物中，填料盐的含量不超过总组合物的15％， 优选不超过10％，最优选不超过组合物重量的5％。无机填料盐，例如在 本发明组合物中意思是选自碱金属和碱土金属硫酸盐和氯化物。优选的 填料盐是硫酸钠。 根据本发明的液体漂白组合物还可以是“浓缩形式”，在这种情况 下，根据本发明的液体漂白组合物比常规液体洗涤剂将含有更低量的 水。一般浓缩液体漂白组合物的水含量，按该漂白组合物重量计，优选 少于40％，更优选少于30％，最优选少于20％。 清洗辅助物质 表面活性剂体系-包括在由本发明制得的完整配方的漂白组合物中 的去污表面活性剂占漂白组合物重量的至少0.01％，优选至少约0.1％， 更优选至少约0.5％，最优选至少约1％-60％，更优选至约35％，最优选至 约30％，这取决于所用的特定表面活性剂和所要求的效果。 去污表面活性剂可以是非离子型、阴离子型、两性型、两性离子型、 阳离子型、半极性非离子型的表面活性剂和其混合物，其非限制性实例 公开在美国专利5707950和5576282中。优选的洗涤剂和漂白组合物包 含阴离子去污表面活性剂或阴离子表面活性剂与其他表面活性剂，特别 是非离子表面活性剂的混合物。 适用于本发明的表面活性剂的非限制实例包括常规C11-C18烷基苯磺 酸盐和伯、仲和无规烷基硫酸盐，C10-C18烷基烷氧基硫酸盐，C10-C18烷 基多苷和它们相应的硫酸化多苷，C12-C18a-磺化的脂肪酸酯，C12-C18烷 基和烷基酚烷氧基化物(特别是乙氧基化物和混合的乙氧基/丙氧基化 物)，C12-C18甜菜碱和磺基甜菜碱，C10-C18氧化胺等。其它常规适用的表 面活性剂列在标准教科书中。 优选配制表面活性剂与组合物中存在的酶组分相容。在液体或凝胶 组合物中，最优选配制表面活性剂使得其促进或至少不降低这些组合物 中的任何酶的稳定性。 非离子表面活性剂-烷基酚的聚氧乙烯、聚氧丙烯和聚氧丁烯的缩 合物适合用作本发明表面活性剂体系中的非离子型表面活性剂，优选的 是聚氧乙烯缩合物。商业上可购得的这种类型的非离子表面活性剂包括 IgepalTM CO-630，是由GAF Corporation出售的；和TritonTM X-45，X- 114，X-100和X-102，它们都是由Rohm&Haas公司出售的。这些表面活性 剂通常称为烷基酚烷氧基化物(例如烷基酚乙氧基化物)。 伯和仲脂肪醇与约1至约25摩尔环氧乙烷的缩合产物适合用作本 发明非离子表面活性剂体系中的非离子表面活性剂。商业上可购得的这 种类型的非离子表面活性剂包括TergitolTM 15-S-9(C11-C15直链醇与9 摩尔环氧乙烷的缩合产物)、TergitolTM 24-L-6 NMW(C12-C14伯醇与6摩 尔环氧乙烷的缩合产物，并具有窄的分子量分布)，两种均由Union Carbide Corporation出售；由Shell Chemical Company出售的NeodolTM 45-9(C14-C15直链醇与9摩尔环氧乙烷的缩合产物)，NeodolTM 23-3(C12-C13 直链醇与3.0摩尔环氧乙烷的缩合产物)，NeodolTM 45-7(C14-C15直链 醇与7摩尔环氧乙烷的缩合产物)，NeodolTM 45-5(C14-C15直链醇与5 摩尔环氧乙烷的缩合产物)；由Procter&Gamble Company出售的KyroTM EOB(C13-C15醇与9摩尔环氧乙烷的缩合产物)；和由Hoechst出售的 Genapol LA030或LA 050(C12-C14醇与3或5摩尔环氧乙烷的缩合产物)。 这些产物优选的HLB范围是8-11，最优选8-10。 还适合用作本发明表面活性剂体系中的非离子表面活性剂的是在美 国专利US 4565647中公开的烷基多糖。 优选的烷基多苷具有式：R2O(CnH2nO)t(糖基)x 其中R2选自烷基、烷基苯基、羟烷基、羟烷基苯基和其混合物，其中烷 基含有约10至约18个碳原子，优选约12至约14个碳原子；n是2或 3，优选2；t是0至约10，优选0；x是约1.3至约10，优选约1.3至 约3，最优选约1.3至约2.7。 环氧乙烷与通过环氧丙烷与丙二醇缩合形成的疏水基的缩合产物也 适合用作本发明附加的非离子表面活性剂体系。这种类型化合物的实例 包括一些商业上可购得的PlurafacTM LF404和PluronicTM表面活性 剂，它由BASF出售。 也适合用作本发明非离子表面活性剂体系中的非离子表面活性剂的 是环氧乙烷与由环氧丙烷和乙二胺反应得到的产物进行缩合的产物。这 种类型非离子表面活性剂的实例包括一些商业上可购得的TetronicTM化 合物，由BASF出售。 优选的用作本发明表面活性剂体系中的非离子表面活性剂的是烷基 酚的聚氧乙烯缩合物、伯和仲脂肪醇与约1至约25摩尔环氧乙烷的缩 合产物、烷基多糖和其混合物。最优选的是具有3至15个乙氧基的C8- C14烷基酚乙氧基化物和具有2至10个乙氧基的C8-C18醇乙氧基化物(优 选C10平均)，和其混合物。 高度优选的非离子表面活性剂是式：R2-C(O)-N(R1)-Z的多羟基脂 肪酸酰胺表面活性剂，其中R1是H，或R1是C1-4烃基、2-羟基乙基、2- 羟基丙基或其混合物，R2是C5-31烃基，Z是具有直接连有至少3个羟基 的直链烃基链的多羟基烃基，或其烷氧基化的衍生物。优选R1是甲基， R2是直链C11-15烷基或C16-18烷基或链烯基例如椰子油烷基或其混合物，Z 是由在还原胺化反应中的还原糖例如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖衍生 得到。 阴离子表面活性剂-适合使用的阴离子表面活性剂是直链烷基苯磺 酸盐、烷基酯磺酸盐表面活性剂，包括按照“美国油化学家学会杂志” (“The Journal of the American Oil Chemists Society”)，52(1975)， 第323-329页的方法用气态SO3磺化的直链C8-C20羧酸(即脂肪酸)酯。 适合的原料包括天然的脂肪类物质如由牛油、棕榈油等衍生的物质。 特别用于洗衣应用的优选的烷基酯磺酸盐表面活性剂包括具有以下 结构式的烷基酯磺酸盐表面活性剂： 其中R3是C8-C20烃基，优选烷基，或其组合，R4是C1-C6烃基，优选烷 基，或其组合，M是阳离子，其与烷基酯磺酸根形成水溶性盐。适合的 形成盐阳离子包括金属例如钠、钾和锂，以及取代或未取代的铵阳离子 例如单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺。优选R3是C10-C16烷基，R4是甲基、 乙基或异丙基。特别优选的是甲基酯磺酸盐其中R3是C10-C16烷基。 其它适合的阴离子表面活性剂包括烷基硫酸盐表面活性剂，其是式 ROSO3M的水溶性盐或酸，其中R优选是C10-C24烃基，优选烷基或具有 C10-C20烷基部分的羟烷基，更优选C12-C18烷基或羟烷基，M是H或阳离 子。一般对于较低的洗涤温度(例如低于约50℃)，优选C12-C16烷基链， 而对较高的洗涤温度(例如高于约50℃)，优选C16-C18烷基链。 其它可用于洗涤目的的阴离子表面活性剂包括皂的盐、C8-C22伯或 仲烷烃磺酸盐、C8-C24链烯烃磺酸盐、通过磺化碱土金属柠檬酸盐的热 解产物制得的磺化的多羧酸，例如在英国专利说明书No.1,082,179中 所描述的；C8-C24烷基聚乙二醇醚硫酸盐(含有多至10摩尔氧乙烯)； 烷基甘油磺酸盐、脂肪酰基甘油磺酸盐、脂肪油酰基甘油硫酸盐、烷基 酚氧乙烯醚硫酸盐、石蜡烃磺酸盐、烷基磷酸盐、羟乙磺酸盐例如酰基 羟乙磺酸盐、N-酰基牛磺酸盐、烷基琥珀酰胺酸盐和磺基琥珀酸盐、磺 基琥珀酸单酯(特别是饱和和不饱和的C12-C18单酯)和磺基琥珀酸二酯 (特别是饱和和不饱和的C6-C12二酯)、酰基肌氨酸盐、烷基多糖的硫酸 盐例如烷基多葡萄糖苷硫酸盐(下文描述的非离子性的非硫酸化的化合 物)、支链的伯烷基硫酸盐和烷基聚乙氧基羧酸盐例如那些具有式 RO(CH2CH2O)kCH2COO-M+的盐，其中R是C8-C22烷基，k为1至10的整数， M是形成可溶性盐的阳离子。树脂酸和氢化树脂酸也是适用的，例如松 香、氢化松香，以及存在于松浆油或由松浆油衍生的树脂酸和氢化树脂 酸。 其它例子被描述在“表面活性剂和洗涤剂”(第I和II卷，由 Schwartz，Perry及Berch编著)书中。各种这样的表面活性剂也一般 性地公开在1975年12月30日授予Laughlin等人的美国专利 US3,929,678，第23栏58行至29栏23行中(本文引用作参考)。 高度优选的阴离子表面活性剂包括烷基烷氧基化硫酸盐表面活性 剂，其是式RO(A)mSO3M的水溶性盐或酸，其中R是未取代的C10-C24烷基 或具有C10-C24烷基部分的羟烷基，优选C12-C20烷基或羟烷基，更优选 C12-C18烷基或羟烷基，A是乙氧基或丙氧基单元，m值大于0，一般在约 0.5至约6之间，更优选在约0.5至约3之间，M是H或阳离子，其可 以是例如金属阳离子(例如钠、钾、锂、钙、镁等)、铵或取代的铵阳 离子。烷基乙氧基化硫酸盐以及烷基丙氧基化硫酸盐是本发明预期使用 的。取代的铵阳离子的具体实例包括甲基、二甲基、三甲基铵阳离子和 季铵阳离子例如四甲基铵和二甲基哌啶鎓阳离子，以及那些由烷基胺例 如乙胺、二乙胺、三乙胺和其混合物衍生的阳离子等。示例性的表面活 性剂有C12-C18烷基聚乙氧基化物(1.0)硫酸盐(C12-C18E(1.0)M)，C12- C18烷基聚乙氧基化物(2.25)硫酸盐(C12-C18E(2.25)M)，C12-C18烷基 聚乙氧基化物(3.0)硫酸盐(C12-C18E(3.0)M)和C12-C18烷基聚乙氧基 化物(4.0)硫酸盐(C12-C18E(4.0)M)，其中M适宜选自钠和钾。 当含有它们时，本发明漂白组合物典型地含有从约1％，优选从约3％ 至约40％，优选约20％重量的这种阴离子表面活性剂。 阳离子表面活性剂-适合用于本发明漂白组合物中的阳离子去污表 面活性剂是那些具有一个长链烃基的表面活性剂。这种阳离子型表面活 性剂的实例包括铵盐表面活性剂例如烷基三甲基卤化铵，以及具有下式 的那些表面活性剂：[R2(OR3)y][R4(OR3)y]2R5N+X-，其中R2是在其烷基链中含有约8至约18个碳原子的烷基或烷基苄基， 每个R3选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2CH(CH2OH)-、-CH2CH2CH2-和其 混合物；每个R4选自C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、由连接两个R4基团形成 的苄基环结构、-CH3CHOH-CHOHCOR6CHOHCH2OH，其中R6是分子量小于约 1000的任何己糖或己糖聚合物基团，以及氢(当y不为0时)；R5是同R4 相同的基团，或者是烷基链，其中R2加R5的碳原子总数不多于约18个； 每个y是0至约10，并且y值总和为0至约15；X是任何一种相容的阴 离子。 适用于本发明组合物的高度优选的阳离子型表面活性剂是水溶性季 铵盐化合物，其具有式(i)：R1R2R3R4N+X-，其中R1是C8-C16烷基，每个 R2、R3和R4独立地为C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、苄基和-(C2H4O)xH，其中 x值为2至5，X是阴离子。R2、R3、R4中是苄基的应当不能多于一个。R1 的烷基链长优选是C12-C15，特别是，该烷基是由椰子或棕榈仁脂肪衍生 的链长的混合物，或者是通过链烯烃或羰基合成醇合成得到的。R2、R3 和R4优选的基团是甲基和羟乙基，并且阴离子X可选自卤化物、甲基硫 酸根、乙酸根和磷酸根离子。 用于本发明的具有式(i)的适合季铵盐化合物的实例包括，但不限 于：椰子油三甲基氯化铵或溴化铵；椰子油甲基二羟乙基氯化铵或溴化 铵；癸基三乙基氯化铵； 癸基二甲基羟乙基氯化铵或溴化铵；C12-C15二 甲基羟乙基氯化铵或溴化铵；椰子油二甲基羟乙基氯化铵或溴化铵；肉 豆蔻基三甲基甲基硫酸铵；月桂基二甲基苄基氯化铵或溴化铵；月桂基 二甲基(氧乙烯)4氯化铵或溴化铵；胆碱酯(式(i)的化合物，其中R1是 CH2-CH2-O-C(O)-C12-14烷基，和R2、R3、R4是甲基)；和二烷基咪唑啉 [(i)]。 本发明有用的其它阳离子表面活性剂还描述在1980年10月14日 授予的Cambre的美国专利US4,228,044和欧洲专利申请EP000,224中。 当包含它们时，本发明漂白组合物典型地含有约0.2％，优选从约1％ 至约25％，优选至约8％重量这种阳离子表面活性剂。 两性表面活性剂-两性表面活性剂也适用于本发明漂白组合物中， 其实例描述在美国专利3929678中。 当包含它们时，本发明漂白组合物典型地含有约0.2％，优选从约1％ 至约15％，优选至约10％重量这种两性表面活性剂。 两性离子表面活性剂-两性离子表面活性剂也适用于漂白组合物 中，其实例描述在美国专利3929678中。 当包含它们时，本发明漂白组合物典型地含有约0.2％，优选从约1％ 至约15％，优选至约10％重量这种两性离子表面活性剂。 半极性非离子表面活性剂-半极性非离子表面活性剂是特殊的一类 非离子表面活性剂，其包括具有下式的水溶性氧化胺： 其中R3是含有约8至约22个碳原子的烷基、羟烷基或烷基苯基、或它 们的混合物；R4是含有约2至约3个碳原子的亚烷基或羟亚烷基或它们 的混合物；x为0至约3；每个R5是含有约1至约3个碳原子的烷基或 羟烷基或含有约1至约3个氧乙烯基团的聚氧乙烯基团。(R5基团可彼 此连接，例如通过氧或氮原子连接形成环状结构)；水溶性氧化膦，其 含有一个约10-18个碳原子的烷基部分和选自含有约1-3个碳原子的烷 基和羟烷基的两个残基部分；和水溶性亚砜，其含有一个约10-18个碳 原子的烷基部分和选自具有约1-3个碳原子的烷基和羟烷基的一个残基 部分。 氧化胺表面活性剂特别是包括C10-C18烷基二甲基氧化胺和C8-C12烷 氧基乙基二羟乙基氧化胺。 当包含它们时，本发明清洗组合物典型地含有0.2％，优选从约1％ 至约15％，优选至约10％重量这种半极性非离子表面活性剂。 辅助表面活性剂-本发明漂白组合物还可包含选自伯或叔胺的辅助 表面活性剂。用于本发明的适合的伯胺包括根据式R1NH2的胺，其中R1 是C6-C12，优选C6-C10烷基链，或R4X(CH2)n，X是-O-，-C(O)NH-或-NH-，R4 是C6-C12烷基链，n是1-5，优选3。R1烷基链可以是直链或支链，并且 可间隔多至12个，优选少于5个氧乙烯部分。 根据本文上式，优选的胺是正烷基胺。用于本发明适合的胺可选自 1-己胺、1-辛胺、1-癸胺和月桂胺。其它优选的伯胺包括C8-C10氧丙 胺、辛氧基丙基胺、2-乙基己基氧丙基胺、月桂基酰氨基丙基胺和酰氨 基丙基胺。用于本发明组合物最优选的胺是1-己胺、1-辛胺、1-癸胺、 1-十二烷基胺。特别适合的是正十二烷基二甲基胺和二羟乙基椰子油烷 基胺和7摩尔乙氧基化的油胺、月桂基酰氨基丙基胺和椰子油酰氨基丙 基胺。 LFNIs-在本发明自动洗餐具组合物(ADD)中特别优选的表面活性 剂是低泡非离子表面活性剂(LFNI)，其描述在美国专利5705464和 5710115中。LFNI的含量可为0.01％-约10％重量，优选约0.1％-10％， 最优选约0.25％-4％。ADDs中最典型使用LFNIs，这是由于它们赋予ADD 产品改善的使水成片的作用(特别是从玻璃上)。它们还包含下文进一步 说明的已知能使自动洗餐具中碰到的食物污垢消泡的非硅氧烷、非磷酸 盐聚合材料。 优选的LFNIs包括非离子烷氧基化表面活性剂，特别是由伯醇衍生 的乙氧基化物和它们与更复杂的表面活性剂的混合体，例如聚氧丙烯/ 聚氧乙烯/聚氧丙烯(P0/EO/PO)逆嵌段聚合物，其描述在美国专利 5705464和5710115中。 还可使用的LFNIs包括从Olin Corp.购得的那些POLY- TERGENT_SLF18非离子表面活性剂，和具有上文讨论的熔点性质的任何 可生物降解的LFNI。 这些和其它非离子表面活性剂是现有技术公知的，其更详细地描述 在Kirk Othmer’s的化学工艺百科全书(Encyclopedia of Chemical Technology)，第3版，第22卷，第360-379页，“表面活性剂和去污 酶”中，其在本文引用作参考。 漂白剂-本发明组合物除了包含上述漂白体系外，还任选地包含其 他漂白剂例如氯漂白剂(但对于含有酶的组合物不太优选)，其实例是 现有技术公知的，包括二氯异氰脲酸钠(“NaDCC”)和漂白催化剂。当 存在时，这些其他漂白剂一般占组合物重量的从约1％，优选从约5％至 约30％，优选至约20％。 (a) 有机过氧化物，特别是二酰基过氧化物 这些化合物详细地描述在Kirk Othmer的化学工艺百科全书 (Encylopedia of Chemical Technology)，第17卷，John Wiley and Sons，1982，第27-90页，特别是第63-72页，所有这些被本文引用作参 考。如果使用二酰基过氧化物的话，优选其是对去斑/成膜产生最小不 利影响的一种。 (b) 含金属的漂白催化剂 本发明组合物和方法使用了用于漂白组合物中有效的含金属的漂白 催化剂。优选的是含锰和钴的漂白催化剂。 一种类型的含金属的漂白催化剂是一种催化剂体系，其包含具有 所定义的漂白催化活性的过渡金属阳离子例如铜、铁、钛、钌、钨、 钼或锰阳离子；具有少的或不具有漂白催化活性的辅助金属阳离子例 如锌或铝阳离子，和对催化和辅助金属阳离子具有定义的稳定常数的 螯合剂，特别是乙二胺四乙酸、乙二胺四(亚甲基膦酸)和其水溶性 盐。这类催化剂公开在1982年2月2日授权的Bragg的美国专利 4,430,243中。 锰金属配合物 如果需要的话，本发明组合物可以用锰化合物来催化。该类化合物 和其用量是本领域公知的，包括例如在美国专利US5576282、US5246621， US5244594，US5194416，US5114606和欧洲专利申请公开号EP549271A1， EP549272A1，EP544440A2和EP544490A1中公开的锰基催化剂。这些催化 剂的优选实例包括MnIV2(u-O)3(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂环壬 烷)2(PF6)2，MnIII2(u-O)1(u-OAc)2(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂 环壬烷)2(ClO4)2，MnIV4(u-O)6(1，4，7-三氮杂环壬烷)4(ClO4)4， MnIIIMnIV4(u-O)1(u-OAc)2(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂环壬烷)2 (ClO4)3，MnIV(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂环壬烷)(OCH3)3 (PF6)，和它们的混合物。其他金属基漂白催化剂包括在美国专利 US4430243、US5114611中公开的那些。使用带有各种配合物配体的锰 用于提高漂白力也在下列美国专利中被报道：US4728455，US5284944， US5246612，US5256779，US5280117，US5274147，US5153161和 US5227084。 钴金属配合物-用于本发明的钴漂白催化剂是已知的，其描述在 例如美国专利5597936；5595967和5703030和M.L.Tobe，“过渡金 属配合物的碱水解”， 高等无机生物无机机理(Adv.Inorg.Bioinorg. Mech.)，(1983)，2，第1-94页中。适合于本发明的最优选的钴催化 剂是具有式[Co(NH3)5OAc]Ty的钴五胺乙酸盐，其中“OAc”表示乙酸 根部分，“Ty”是阴离子，特别是氯化钴五胺乙酸[Co(NH3)5OAc]Cl2； 以及[Co(NH3)5OAc](OAc)2；[Co(NH3)5OAc](PF6)2； [Co(NH3)5OAc](SO4)；[Co(NH3)5OAc](BF4)2；和[Co(NH3)5OAc](NO3)2(本文 “PAC”)。 这些钴催化剂容易用已知的方法制备，例如在美国专利5597936； 5595967和5703030；在Tobe文章和其中引用的参考文献；在美国专利 US4,810,410； T.Chem.Ed.(1989)， 66(12)，1043-1045；无机化合物的 合成和表征，W.L.Jolly(Prentice-Hall；1970)，第461-463页； 无机 化学， 18，1497-1502(1979〕； 无机化学， 21，2881-2885(1982)； 无 机化学， 18，2023-2025(1979)；无机合成，173-176(1960)；和 物理化 学杂志， 56，22-25(1952)中讲述的。 大多环刚性配位体的过渡金属配合物-本发明组合物还适宜包括作 为漂白催化剂的大多环刚性配位体的过渡金属配合物。短语“大多环刚 性配位体”在下文讨论中有时缩写为“MRL”。所用量是催化有效量，适 宜为约1ppb或更多，例如高至约99.9％，更典型地是约0.001ppm或更 多，优选约0.05ppm-500ppm(其中“ppb”表示十亿分之一重量份，“ppm” 表示百万分之一重量份)。 适合的过渡金属例如锰，在下文被例举说明。“大多环”意思是MRL 既是大环又是多环。“多环”意思是至少双环。这里所述的术语“刚性” 包括“具有超结构”和“交联”。“刚性”被定义为挠曲性转变是受限的： 参见D.H Bush. 化学综述(Chemical Reviews)(1993)， 93，847-860， 其在本文引用作参考。更具体地讲，本文所述的“刚性”意思是MRL必 须比否则相同的(在主环中具有相同的环尺寸和类型和原子数目)但缺 少MRL中存在的超结构(特别是连接部分，或优选交联部分)的大环(“母 体大环”)有可测定的更强的刚性。在测定具有和不具有超结构的大环 的对比刚性中，本专业人员使用大环的游离形式(不是结合金属的形 式)。已知可使用刚性来比较大环；测定、测量或比较刚性的适合方法 包括计算方法(参见例如Zimmer，. 化学综述(Chemical Reviews) (1995)，95(38)，2629-2648或HaRcock等， 无机Chimica Acta， (1989)，164，73-84)。 本发明优选的MRL是特殊类型的交联的超刚性配位体。“交联”非 限制性地说明在以下的1.11中。在1.11中，交联是-CH2CH2-部分，其 桥连该示例结构中的N1和N8。通过对比，“同侧的”桥连，例如若横跨 1.11中的N1和N12加入的一个桥连，其不能充分地构成“交联”，因此 不是优选的。 刚性配位体配合物中的适合金属包括Mn(II)、Mn(III)、Mn(IV)、 Mn(V)、Fe(II)、Fe(III)、Fe(IV)、Co(I)、Co(II)、Co(III)、Ni(I)、 Ni(II)、Ni(III)、Cu(I)、Cu(II)、Cu(III)、Cr(II)、Cr(III)、Cr(IV)、 Cr(V)、Cr(VI)、V(III)、V(IV)、V(V)、Mo(IV)、Mo(V)、Mo(VI)、W(IV)、 W(V)、W(VI)、Pd(II)、Ru(II)、Ru(III)和Ru(IV)。本发明过渡金属 漂白催化剂中优选的过渡金属包括锰、铁和铬。 更一般地是，本发明MRL(和相应的过渡金属催化剂)适宜包含： (a)至少一个包含4个或更多个杂原子的主要的大环；和 (b)能够增强大环刚性的共价连接的非金属超结构，优选选自： (i)桥连超结构，例如连接部分； (ii)交联超结构，例如交联的连接部分；和 (iii)它们的组合。 本文所述的术语“超结构”如在Busch等的文章中所定义，参见 例如Busch在“化学综述”中的文章。 本文优选的超结构不仅增强了母体大环的刚性，而且还有助于大 环的折叠，使得其与缝隙处的金属配位。适合的超结构明显可以是简 单的，例如可使用诸如以下式1和式2中说明的任何连接部分： 式1 其中n是整数，例如为2-8，优选低于6，一般为2-4，或 式2 其中m和n是约1-8的整数，更优选1-3；Z是N或CH；T是相容的 取代基，例如H、烷基、三烷基铵、卤素、硝基、磺酸根等。在1.10 中的芳环可被饱和环代替，其中连接环的Z中的原子可含N、O、S或C。 适合的MRL还非限制性地由以下化合物说明： 式3 这是根据本发明的MRL，其是高度优选的交联的甲基取代的(所有 氮原子是叔氮)cyclam的衍生物。正规地讲，使用推广的von Baeyer 系统，该配位体的名称为5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2] 十六烷。参见“有机化合物IUPAC命名法介绍指南1993”，(A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds：Recommendations 1993)， R.Panico，W.H.Powell和J-C Richer(编辑)，Blackwell科技出 版社，波士顿，1993；特别参见R-2.4.2.1部分。 本发明组合物适用的大环刚性配位体的过渡金属漂白催化剂一般 可包括符合本发明定义的公知化合物，以及更优选一些大量的特意指 定用于本发明洗衣或清洗应用的新化合物，由以下进行非限制说明： 二氯-5，12-二甲基-1，5，8，12，-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰 (II)； 二水合-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II) 六氟磷酸盐； 水合-羟基-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰 (III)六氟磷酸盐； 二水合-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II) 四氟硼酸盐； 二氯-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(III) 六氟磷酸盐； 二氯-5，12-二-正丁基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II)； 二氯-5，12-二苄基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II)； 二氯-5-正丁基-12-甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰 (II)； 二氯-5-正辛基-12-甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰 (II)； 二氯-5-正丁基-12-甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰 (II)。 在实施中，不受限制，本发明组合物和清洗方法可被调整以在含水 洗涤介质中提供约至少万万分之一份的活性漂白催化剂物质，优选在洗 涤水溶液中提供约0.01ppm至约25ppm，更优选约0.05ppm至约10ppm， 最优选约0.1ppm至约5ppm漂白催化剂物质。在自动洗涤过程的洗涤水 溶液中为了达到这种含量，本发明典型的组合物按该漂白组合物重量计 将包含约0.0005％至约0.2％，更优选约0.004％至约0.08％漂白催化剂， 特别是锰或钴催化剂。 (d) 其他漂白催化剂-本发明组合物可包含一种或多种其他漂白催化 剂。优选的漂白催化剂是两性离子漂白催化剂，其描述在美国专利 5576282中，特别是3-(3，4-二氢异喹啉鎓)丙磺酸盐。其他漂白催化剂 包括阳离子漂白催化剂，其描述在美国专利5360569、5442066、5478357、 5370826、5482515、5550256和WO95/13351，WO95/13352和WO95/13353 中。 任选的去污酶-本发明洗涤剂和漂白组合物还可任选地含有一种或 多种类型的洗涤剂酶。这种酶可包括其他蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和 脂肪酶。这种物质是现有技术公知的并可按商品名商购。它们可以悬浮 液、“颗粒”(marumes)或“小球”的形式掺入本发明非水基液体洗涤 剂组合物中。另一类适合的酶包括酶在非离子表面活性剂中的浆料形 式，例如由Novo Nordisk按商品名“SL”销售的酶或由Novo Nordisk 按商品名“LDP”销售的微囊包封的酶。适合的酶和其用量描述在美国 专利5576282、5705464和5710115中。 对用于本发明，酶以常规的酶小球的形式加入本发明组合物中是特 别优选的。这种小球一般尺寸在约100-1000微米，更优选在约200-800 微米，并且将悬浮在组合物的整个非水液相中。本发明组合物中的酶小 球与其它酶形式相比，就随时间推移保持酶活性而论，发现表现出特别 理想的酶稳定性。因此，使用酶小球的组合物不需要含有常规的酶稳定 剂，例如当酶掺入含水液体洗涤剂中时必须通常使用的酶稳定剂。 然而，加入本发明组合物中的酶可以是颗粒，优选T-颗粒形式。 本文中使用的“去污酶”指在洗衣、硬表面清洗或个人护理洗涤剂 组合物中具有洗涤、去污渍或其它有益效果的任何酶。优选的洗涤酶是 水解酶如蛋白酶，淀粉酶和脂肪酶。优选的用于洗衣用途的酶包括，但 不局限于，蛋白酶，纤维素酶，脂肪酶和过氧化物酶。用于自动洗餐具 高度优选的是淀粉酶和/或蛋白酶，包括通常商业可购得的类型和改进 的类型，虽然越来越多的漂白剂经过不断的改进是可相容的，但仍保留 一定程度的漂白剂失活敏感度。 适合的酶的实例包括，但不限于：半纤维素酶、过氧化物酶、蛋白 酶、纤维素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、 角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质素酶、支链淀 粉酶、单宁酶、戊聚糖酶、苹果酸酶(malanase)、β-葡聚糖酶、阿拉 伯糖苷酶、透明质酶、软骨素酶、漆酶和公知的淀粉酶，或它们的混合 物。 这种适合的酶的实例公开在美国专利US5705464、5710115、 5576282、5728671和5707950中。 本发明使用的纤维素酶包括细菌和霉菌纤维素酶。优选它们具有最 佳pH范围5-12和比活性高于50CEVU(纤维素粘度单位)。适宜的纤维素 酶公开在美国专利US4,435,307，J61078384和WO96/02653中，其公开了 分别由Humicola insolens、木霉属、草根霉属和孢子丝菌属产生的霉 菌纤维素酶。EP739982描述了从新的杆菌种分离出的纤维素酶。适宜的 纤维素酶还公开在GB-A-2075028；GB-A-2095275；DE-OS-2247832和 WO95/26398中。 这种纤维素酶的实例是由Humicola insolens(灰色腐质霉变异的 thermoidea)菌株，特别是腐质霉属菌株DSM1800产生的纤维素酶。其 它适合的纤维素酶是来源于Humicola insolens、具有分子量约50KDa、 等电点为5.5并含有415个氨基酸的纤维素酶，和由腐质霉属 insolens，DSM1800衍生的具有纤维素酶活性的～43kD的内葡聚糖酶；优 选的内葡聚糖酶组分具有在WO91/17243中公开的氨基酸序列。还适合的 纤维素酶是由Trichoderma longibrachiatum得到的EGIII纤维素酶，其 描述在Genencor的WO94/21801中。特别适合的纤维素酶是具有护理颜色 作用的纤维素酶。这种纤维素酶的实例是在1991年11月6日(Novo)提 交的欧洲专利申请No.91202879.2中描述的那些纤维素酶。Carezyme和 Celluzyme(Novo Nordisk A/S)是特别适用的。还参见WO91/17244和 WO91/21801。具有护理织物和/或清洗性质的其它适合的纤维素酶描述 在WO96/34092、WO96/17994和WO95/24471中。 纤维素酶，当存在时，一般在清洗组合物中的掺入量为清洗组合物 重量的0.0001％-2％纯酶。 过氧化物酶是与氧源，例如过碳酸盐、过硼酸盐、过硫酸盐、过氧 化氢等以及与作为增强漂白剂分子的酚类基质结合使用。它们用于“漂 白溶液”，即抑制在洗涤过程中从底物上脱落的染料或颜料迁移至洗涤 溶液中的其它底物上。过氧化物酶在本文技术领域中是已知的，包括例 如，辣根过氧化物酶、木质素酶和卤代过氧化物酶，如氯代和溴代过氧 化物酶。适合的过氧化物酶和含有过氧化物酶的洗涤剂组合物公开在， 例如美国专利5705464、5710115、5576282、5728671和5707950、PCT 国际申请WO89/099813、WO89/09813和1991年11月6日申请的欧洲专利 申请No.91202882.6和1996年2月20日申请的EP96870013.8中。还适合的 是漆酶。 增效剂一般占总组合物重量的0.1％-5％。优选的增效剂为取代的吩 噻嗪和吩噁嗪10-吩噻嗪丙酸(PPT)、10-乙基吩噻嗪-4-羧酸(EPC)、10- 吩噁嗪丙酸(POP)和10-甲基吩噁嗪(如WO94/12621所述)和取代的丁香 酸酯(C3-C5取代的烷基丁香酸酯)和苯酚。过碳酸钠或过硼酸钠是优选的 过氧化氢源。 以清洗组合物重量计，清洗组合物中所述过氧化物酶的掺入量通常 为0.0001-2％纯酶。 可使用酶催体系作为漂白剂。还可通过加入能在洗涤和/或漂清过 程的开始或过程中产生过氧化氢的酶催体系(即酶和随之的基质)产生 过氧化氢。这种酶催体系公开在1991年10月9日申请的欧洲专利申请 91202655.6中。 本发明清洗组合物可包括的其它优选酶包括脂肪酶。洗涤剂可使用 的适宜脂肪酶包括由假单胞菌属族中的微生物，如司徒茨氏(stutzeri) 假单胞菌ATCC 19.154产生的那些脂肪酶，如公开在英国专利1372034 中。适合的脂肪酶包括由微生物荧光假单胞菌IAM 1057产生的与脂肪 酶的抗体表现出阳性免疫交叉反应的那些脂肪酶。这种脂肪酶可由Amano Pharmacetical有限公司，Nagoya，日本买到，商品名为脂肪酶P “Amano”，下文称之为“Amano-P”。其他适合的商业脂肪酶包括Amano- CES，由粘稠色杆菌(Chromobacter viscosum)得到的脂酶，例如由Toyo Jozo公司，Tagata，日本得到的粘稠色杆菌变异的lipolyticum NRRLB 3673，；由U.S.Biochemical公司，U.S.A.和荷兰的Disoynth公司得 到的粘稠色杆菌脂酶和由唐菖蒲假单胞菌(Pseudomonas gladioli)得 到的脂酶。特别适合的脂肪酶是诸如M1 LipaseR和LipomaxR(Gist- Brocades)和LipolaseR和Lipolase UltraR(Novo)的脂酶，已发现当它 们与本发明组合物组合使用时是非常有效的。还适合的是由Novo Nordisk 描述在EP258068、WO92/05249和WO95/22615和由Unilever描述在 WO94/03578、WO95/35381和WO96/00292中的脂解酶。 还适合的酶是角质酶[EC 3.1.1.50]，其被认为是一种特殊种类的 脂肪酶，称为不需要界面活化的脂肪酶。在清洗组合物中加入角质酶已 被描述在例如WO-A-88/09367(Genencor)；WO90/09446(Plant Genetic System)和WO94/14963和WO94/14964(Unilever)中。 脂肪酶和/或角质酶，当存在时，一般在清洗组合物中的掺入量为 清洗组合物重量的0.0001％-2％纯酶。 除了上述的脂肪酶外，磷脂酶也可掺入本发明清洗组合物中。适合 的磷脂酶的非限制实例包括EC3.1.1.32磷脂酶A1；EC3.1.1.4磷脂酶 A2；EC3.1.1.5溶血磷脂酶；EC3.1.4.3磷脂酶C；EC3.1.4.4磷脂酶D。 可商购的磷脂酶包括从丹麦的Novo Nordisk A/S购得的LECITASE_和从 Sigma购得的磷脂酶A2。当磷脂酶包括在本发明组合物中时，优选还包 括淀粉酶。不希望受理论的限制，相信磷脂酶和淀粉酶的结合作用显著 地去除了污渍，特别是对油脂/油性的淀粉和浓色的污渍和污垢。优选， 磷脂酶和淀粉酶，当存在时，是以重量比为4500∶1-1∶5，更优选50∶1-1∶1 的纯酶掺入本发明组合物中。 适宜的蛋白酶为枯草溶菌素，它是由枯草芽胞杆菌和地衣型芽胞杆 菌的特定菌株得到(枯草溶菌素BPN和BPN’)。一种适合的蛋白酶是由杆 菌菌株得到，它在pH8-12范围内具有最大活性，它由丹麦的Novo Industries A/S公司，下文中称为“Novo”，开发并以ESPERASE_销售。 这种酶和类似酶的制备描述在Novo公司的英国专利说明书GB1243784 中。蛋白水解酶还包括改性的细菌丝氨酸蛋白酶，例如在1987年4月28 日提交的欧洲专利申请序列号为87303761.8中(特别是第17、24和98页) 描述的那些，其在本文被称为“蛋白酶B”，和在1986年10月29日公开的 Venegas的欧洲专利申请199404中描述的那些，它们是改性的细菌丝氨 酸蛋白水解酶，在本文被称为“蛋白酶A”。适合的是在本文被称为“蛋 白酶C”的蛋白酶，它们是由杆菌得到的碱性丝氨酸蛋白酶的变体，其 中赖氨酸取代27位置的精氨酸，酪氨酸取代104位置的缬氨酸、丝氨酸 取代123位置的天冬酰胺，和丙氨酸取代274位置的苏氨酸。蛋白酶C描 述在EP90915958：4中，其相应于1991年5月16日公开的WO91/06637。遗 传改性的变体，特别是蛋白酶C的变体也包括在本发明中。 被称为“蛋白酶D”的优选蛋白酶是如描述在美国专利5677272和 WO95/10591中的羰基水解酶。还适合的是描述在WO95/10591中的蛋白 酶的羰基水解酶变体，其氨基酸序列是通过取代位于前体酶中对应于 +210位置处的多个氨基酸残基，同时结合取代以下位置处的一个或多个 残基得到的：+33，+62，+67，+76，+100，+101，+103，+104，+107， +128，+129，+130，+132，+135，+156，+158，+164，+166，+167，+170， +209，+215，+217，+218，和+222，这里的编号位置对应于由淀粉分解 芽孢杆菌得到的天然存在的枯草溶菌素或其它羰基水解酶或枯草溶菌素 例如缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素的等价的氨基酸残基(1997年6月4日申 请的未结案的专利申请US60/048550和PCT国际申请序号 PCT/IB98/00853)。 还适合于本发明的是描述在专利申请EP251446和WO91/06637中的 蛋白酶、描述在WO91/02792中的蛋白酶BLAP_和描述在WO95/23221中 的它们的变体。 还参见描述在Novo的WO9318140A中的得自杆菌NCIMB 40338的 高pH蛋白酶。含有蛋白酶，一种或多种其他酶，和可逆蛋白酶抑制剂 的加酶洗涤剂描述在Novo的WO9203529A中。当需要时，如在Procter & Gamble的WO95/07791中描述的，可以得到吸附降低和水解提高的 蛋白酶。适合于本发明洗涤剂的类似胰蛋白酶的重组蛋白酶描述在Novo 的WO9425583中。其它适合的蛋白酶描述在Unilever的EP516200中。 特别适用的蛋白酶描述在PCT公开文献：WO95/30010；WO95/30011 和WO95/29979中。适合的蛋白酶可从丹麦的Novo Nordisk A/S按 ESPERASE_、ALCALASE_、DURAZYM_、SAVINASE_、EVERLASE_和KANNASE_ 商购，和从Genencor International(以前是荷兰的Gist-Brocades) 按MAXATASE_、MAXACAL_、PROPERASE_和MAXAPEM_商购。 这种蛋白水解酶，当存在时，在本发明清洗组合物中的掺入量，按 组合物的重量计，为0.0001％-2％，优选0.001％-0.2％，更优选0.005％-0.1％ 纯酶。 可包括淀粉酶(α和/或β)用于去除基于碳水化合物的污渍。 WO/94/02597描述了掺入突变体淀粉酶的清洗组合物。还参见 WO95/10603。用于清洗组合物中的其它公知的淀粉酶包括α-和β-淀 粉酶。α-淀粉酶是现有技术已知的，包括在US5003257；EP252666； WO91/00353；FR 2676456；EP285123；EP525610；EP368341和英国专利 说明书1296839(Novo)中公开的那些淀粉酶。其它适合的淀粉酶是稳 定性增强的淀粉酶，其描述在WO94/18314和Genencor的WO96/05295 中；和在WO95/10603中公开的由Novo Nordisk A/S购得的对直接母 体进行附加修饰得到的淀粉酶变异体。还适合的是描述在EP277216中 的淀粉酶。 商业α-淀粉酶产品的实例是从Genencor购得的Purafect Ox Am_和 Termamyl_，Ban_，Fungamyl_和Duramyl_，它们都可从Novo Nordisk A/S 丹麦购得。WO95/26397描述了其它适合的淀粉酶：α-淀粉酶，其特征 在于通过Phadebas_α-淀粉酶活性实验测定，在25℃-55℃温度和pH值 在8-10范围下具有比活度大于Termamyl_的比活度至少25％。适合的是描 述在WO96/23873(Novo Nordisk)中的以上酶的变体。具有改善的关于 活性量和热稳定性与更高活性量组合性质的其它淀粉分解酶描述在 WO95/35382中。 这种淀粉分解酶，当存在时，在本发明清洗组合物中的掺入量，按 该组合物的重量计，为0.0001％-2％，优选0.00018％-0.06％，更优选 0.00024％-0.048％纯酶。 上述酶可以来自任何适宜的来源，如植物、动物、细菌、霉菌和酵 母源。该源还可以是亲中介态或嗜极端态的(extremophilic)(嗜冷的、 冷食性的、嗜热的、嗜压的、嗜碱的、嗜酸的、嗜盐的等)。可使用这 些酶的纯化或非纯化形式。当今，普通的作法是通过蛋白/遗传工程技 术修饰野生型酶，以便使其在本发明洗衣洗涤剂和/或织物护理组合物 中的性能最有效。例如，可修饰变体使得酶与这种组合物中通常遇到的 组分的相容性增加。另外，可修饰变体使得该酶变体的最佳pH、漂白或 螯合稳定性、催化活性等适合于特定的清洗应用。 特别是，在漂白剂稳定的情况下，应将注意力集中在对氧化敏感的 氨基酸上和使表面活性剂相容的表面电荷上。这种酶的等电点可通过取 代一些带电荷的氨基酸而改变，例如等电点的增加可有助于改善与阴离 子表面活性剂的相容性。酶稳定性的增强还可通过产生例如附加的盐桥 键和强化钙的结合部位以增加螯合剂的稳定性来实现。 这些任选的去污酶，当存在时，一般在清洗组合物中的掺入量为清 洗组合物重量的0.0001％至2％纯酶。该酶可作为独立的单一组分加入(含 有一种酶的丸、粒、稳定的液体等…)或作为两种或多种酶的混合物加 入(例如复合颗粒)。 可加入的其它适合的洗涤剂组分是酶氧化清除剂。这种酶氧化清除 剂的实例是乙氧基化的四亚乙基多胺。 各种酶物质和将它们掺入合成洗涤剂组合物中的方法还公开在 Genencor International的WO9307263和WO9307260，WO8908694， 和1971年1月5日授权的McCarty等人的美国专利US3553139中。一 些酶还公开在美国专利US4101457和美国专利US4507219中。用于液体 洗涤剂配方的酶物质和它们掺入到这些配方中的方法公开在美国专利 US4261868中。 酶稳定剂-用于洗涤剂中的酶可用各种技术使其稳定化。酶稳定化 技术公开并举例说明在美国专利US3600319，EP199405和EP200586中。 酶稳定体系也描述在例如美国专利US3519570中。产生蛋白酶、木聚糖 酶和纤维素酶的有用的杆菌AC13描述在WO9401532A中。本发明使用 的酶可通过在成品组合物中存在钙和/或镁离子的水溶性源，以给酶提 供这种离子而使酶稳定。适合的酶稳定剂和其用量描述在美国专利 5705464，5710115和5576282中。 助洗剂-本文描述的洗涤剂和漂白组合物优选包含一种或多种洗涤 剂助洗剂或助洗剂体系。当存在助洗剂时，组合物中一般包含至少约1％ 的助洗剂，优选从约5％，更优选从约10％-80％，优选至约50％，更优选至 约30％的洗涤剂助洗剂。但这不意味着排除更低和更高含量的助洗剂。 用于本文描述的洗涤剂和漂白组合物，特别是洗餐具组合物中的优 选助洗剂包括，但不限于水溶性助洗剂化合物(例如多羧酸盐)如美国 专利5695679、5705464和5710115中所述。其他适合的多羧酸盐公开在 美国专利4144226、3308067和3723322中。优选的多羧酸盐是每分子含 有多至三个羧基的羟基羧酸盐，更具体地是柠檬酸盐。 无机或含磷助洗剂包括，但不局限于：以下的碱金属，铵和烷醇铵 盐:聚磷酸盐(例如三聚磷酸盐，焦磷酸盐，和玻璃状聚合的偏磷酸盐)、 膦酸盐(参见例如美国专利3159581；3213030；3422021；3400148和 3422137)、肌醇六磷酸、硅酸盐、碳酸盐(包括碳酸氢盐和倍半碳酸盐)、 硫酸盐和硅铝酸盐。 但是，在某些地区需要非磷助洗剂。重要的是，甚至在所谓的“弱” 助洗剂(与磷酸盐比较)如柠檬酸盐存在下，或在使用沸石或层状硅酸 盐助洗剂时可发生的所谓“低复配”情况下，本发明组合物的性能出乎 意料地好。 适合的硅酸盐包括SiO2∶Na2O比为约1.0-2.8，优选约1.6-2.4，最 优选约2.0的水溶性硅酸钠。硅酸盐可以是无水盐或水合盐的形式。 SiO2∶Na2O比为2.0的硅酸钠是最优选的。硅酸盐，当存在时，优选在本 文描述的洗涤剂和漂白组合物中的含量为组合物重量的约5％-50％，更优 选约10％-40％。 适用于洗涤剂和漂白组合物，特别是颗粒洗涤剂组合物中的部分可 溶性或不溶性的助洗剂化合物包括，但不限于：结晶层状硅酸盐，特别 是结晶层状硅酸钠(部分水溶性)如美国专利4664839中所述和铝硅酸 钠(水不溶性)。当存在于洗涤剂和漂白组合物中时，这些助洗剂的含 量一般为组合物重量的约1％-80％，优选约10％-70％，最优选约20％-60％。 本文所述组合物中可使用具有通式：NaMSixO2x+1·yH2O的结晶层 状硅酸钠，其中M为钠或氢，x为约1.9至约4的数值，优选为约2至约4， 最优选为2，y为约0至约20的数值，优选为0。该类结晶层状硅酸钠公开 在EP-A-0164514中，它们的制备方法公开在DE-A-3417649和DE-A- 3742043中。最优选的物质是从Hoechst AG按NaSKS-6购得的δ-Na2SiO5(在本文中通常缩写为″SKS-6″)。不象沸石助洗剂，Na SKS-6硅酸盐助 洗剂不含铝。NaSKS-6是具有δ-Na2SiO5形态学形式的层状硅酸盐。SKS-6 是本文所述组合物中使用的高度优选的层状硅酸盐，但本文所述组合物 中也可以使用这样其它的层状硅酸盐，如那些具有通式 NaMSixO2x+1·yH2O的层状硅酸盐，其中M为钠或氢，x为1.9至4的数值， 优选为2，y为0至20的数值，优选为0。从Hoechst购得的各种其它层状 硅酸盐包括NaSKS-5，NaSKS-7，和NaSKS-11，它们是以α、β和γ形式。 如上面所提到的，δ-Na2SiO5(NaSKS-6形式)是本文中最优选使用的。 其它的硅酸盐也是有用的，例如硅酸镁，其可作为颗粒配方的松脆剂、 作为氧漂白剂的稳定剂和作为控泡体系的组分。 结晶层状硅酸钠材料优选作为与固体水溶性的可电离材料的紧密混 合物颗粒形式存在于颗粒洗涤剂组合物中。固体水溶性的可电离材料优 选选自有机酸、有机和无机酸盐和其混合物。 硅铝酸盐助洗剂在最通常市售的重垢型颗粒洗涤剂组合物中最重 要，并且也可以是液体洗涤剂配方中重要的助洗剂组分。硅铝酸盐助洗 剂具有下列经验式： [Mz(zAlO2)y].xH2O 其中z和y为至少6的整数，z与y的摩尔比在1.0至约0.5的范围内，x是约 15至约264的整数。优选硅铝酸盐助洗剂是具有以下单元晶胞的硅铝酸 盐沸石： Naz[(AlO2)z(SiO2)y].xH2O 其中z和y至少为6；z与y的摩尔比为1.0至0.5，x至少为5，优选7.5-276， 更优选10-264。硅铝酸盐助洗剂优选是水合形式，优选是晶体，其含有 约10％-28％，更优选约18％-22％结合水。 这些硅铝酸盐离子交换材料可以是结晶或无定形结构，并且可以是 天然产生的硅铝酸盐或是合成得到的。制备硅铝酸盐离子交换材料的方 法揭示于美国专利US3985669中。用于本文的优选的合成结晶硅铝酸盐 离子交换材料可以按注册商标为沸石A、沸石B、沸石P、沸石X、沸石MAP 和沸石HS和其混合物购买到。在特别优选的实施方案中，结晶硅铝酸盐 离子交换材料具有下式： Na12[(AlO2)12(SiO2)12].xH2O 其中x为约20至约30，尤其是约27。该物质称为沸石A。脱水沸石(x＝ 0-10)也可以在本文中使用。硅铝酸盐优选具有直径为约0.1-10微米的 粒度。沸石X具有式： Na86[(AlO2)86(SiO2)106].276H2O 柠檬酸盐助洗剂，例如，柠檬酸和其可溶性盐(特别是钠盐)是重 垢液体洗涤剂配方中特别重要的多羧酸盐助洗剂，原因是它们可由再生 资源得到和它们具有生物降解能力。柠檬酸盐也可用于颗粒组合物中， 特别是与沸石和/或层状硅酸盐助洗剂结合使用。氧二琥珀酸盐在这种 组合物和混合物中也特别有用。 适合于本文所述洗涤剂组合物的还有在美国专利US4566984中公开 的3，3-二羧基-4-氧杂-1，6-己二酸盐以及有关的化合物。有用的琥珀 酸助洗剂包括C5-C20烷基和链烯基琥珀酸和它们的盐。这种类型中特别 优选的化合物是十二碳烯基琥珀酸。琥珀酸盐助洗剂的具体实例包括： 月桂基琥珀酸盐，肉豆寇基琥珀酸盐、棕榈基琥珀酸盐、2-十二碳烯基 琥珀酸盐(优选)，2-十五碳烯基琥珀酸盐等。月桂基琥珀酸盐是该组 中优选的助洗剂，并被描述在1986年11月5日公开的欧洲专利申请 86200690.5/0200263中。 脂肪酸，例如C12-C18单羧酸，也可以单独地掺入组合物中，或与前 述的助洗剂，尤其是柠檬酸盐和/或琥珀酸盐助洗剂结合掺入组合物中， 以提供额外的助洗剂活性。使用脂肪酸一般会导致消弱起泡，这是配方 师应当考虑的。 分散剂-可将一种或多种适合的聚亚烷基亚胺分散剂掺入本发明清 洗组合物中。这种适合的分散剂的实例可参见欧洲专利申请111965、 111984和112592；美国专利4597898、4548744和5565145。然而，在本 发明洗衣组合物中可使用任何适合的粘土/污垢分散剂或抗再沉积剂。 此外，包括聚合多羧酸盐和聚乙二醇的聚合分散剂也适合用于本发 明中。可以经聚合形成适合的聚合多羧酸盐的不饱和单体酸包括丙烯 酸，马来酸(或马来酸酐)，富马酸，衣康酸，乌头酸，中康酸，柠康 酸和亚甲基丙二酸。尤其适合的聚合多羧酸盐可以从丙烯酸得到。可以 用于本发明中的该类基于丙烯酸的聚合物是聚合丙烯酸的水溶性盐。以 酸形式存在的该类聚合物的平均分子量优选为约2000-10000，更优选为 约4000-7000，最优选为约4000-5000。该类丙烯酸聚合物的水溶性盐可 以包括，例如，碱金属盐，铵盐和取代铵盐。该类可溶的聚合物是已知 的材料。该类聚丙烯酸盐在洗涤剂组合物中的应用公开在例如美国专利 US3308067中。 基于丙烯酸/马来酸的共聚物也可以用作分散/抗沉积剂的优选组 分。这类物质包括丙烯酸和马来酸共聚物的水溶性盐。以酸形式存在的 该类共聚物的平均分子量优选为约2000-100000，更优选为约5000- 75000，最优选为约7000-65000。在该类共聚物中丙烯酸盐部分与马来 酸盐部分的比率一般为约30∶1至约1∶1，更优选约10∶1至2∶1。这类 丙烯酸/马来酸共聚物的水溶性盐可以包括，例如，碱金属盐，铵盐和 取代铵盐。这类可溶性丙烯酸盐/马来酸盐共聚物是在1982年12月15日 公开的欧洲专利申请EP66915以及在1986年9月3日公开的欧洲专利 EP193360中描述的已知物质，后者还描述了包括丙烯酸羟基丙基酯的该 类聚合物。另一类有用的分散剂包括马来酸/丙烯酸/乙烯基醇三元共聚 物。该材料也在EP193160中被公开，包括，例如，45/45/10的丙烯酸/ 马来酸/乙烯基醇三元共聚物。 另一类可以被包括的聚合材料是聚乙二醇(PEG)。PEG除了可以作 为去除粘土污垢-抗再沉积剂之外还具有分散剂的性能。作为该用途的 聚乙二醇的平均分子量一般为约500-约100000，优选为约1000-约 50000，更优选为约1500-约10000。 本发明也可以使用聚天冬氨酸盐和聚谷氨酸盐分散剂，尤其是与沸 石助洗剂结合使用。分散剂如聚天冬氨酸盐优选具有约10000的分子量 (平均)。 污垢解脱剂-本发明组合物可任选地包含一种或多种污垢解脱剂。 如果使用的话，污垢解脱剂一般占本发明组合物重量的约0.01％，优选 从约0.1％，更优选从约0.2％至约10％，优选至约5％，更优选至3％。适合 的污垢解脱聚合物的非限制实例公开在美国专利5728671；5691298； 5599782；5415807；5182043；4956447；4976879；4968451；4925577； 4861512；4877896；4771730；4711730、4721580；4000093；3959230 和3893929；和欧洲专利申请0219048。 另外适合的污垢解脱剂描述在美国专利US4201824；US4240918； US4525524；US4579681；US4240918；US4787989；EP279134A；EP457205A； 和DE2335044。 螯合剂-本发明组合物还可以任选地含有起螯合否则会使漂白剂失 活的金属离子和金属杂质作用的螯合剂。有用的螯合剂可包括氨基羧酸 盐，膦酸盐、氨基膦酸盐，多官能取代的芳族螯合剂及其混合物。适合 的螯合剂的进一步实例和其用量描述在美国专利US5705454、5710115、 5728671和5576282中。 本发明组合物还可含有水溶性的甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)盐(或 酸形式)作为螯合剂，或作为例如不溶性的助洗剂如沸石、层状硅酸盐 等的有用的辅助助洗剂。 如果使用螯合剂，则这些螯合剂一般占本发明洗涤剂组合物重量的 约0.1％-15％，更优选约0.1％-3.0％。 抑泡剂-另一种任选的组分是抑泡剂，示例为聚硅氧烷，和二氧化 硅-聚硅氧烷混合物。适合的抑泡剂的实例公开在美国专利US5707950和 5728671中。这些抑泡剂使用量一般为组合物重量的0.001％至2％，优选 0.01％至1％。 柔软剂-织物柔软剂也可掺入本发明洗衣洗涤剂组合物中。无机柔 软剂的示例有公开在GB-A-1400898和USP 5,019,292中的绿土类。有机 柔软剂包括如公开在GB-A 1 514 276和EP-B 0 011 340中的水不溶性叔 胺和公开在EP-B-0 026 527和EP-B-0 026 528中前者叔胺与单C12-C14 季铵盐的混合物，以及如公开在EP-B-0242 919中的双长链酰胺。用于 织物柔软剂体系的其它适合的有机组分包括公开在EP-A-0299 575和0 313 146中的高分子量聚环氧乙烷物质。 特别适合的织物柔软剂公开在美国专利US5707950和5728673中。 绿土的含量通常为2％至20％，更优选5％至15％重量，该物质是作为干 混组分加入到配方的其余组分中。有机织物柔软剂例如水不溶性叔胺或 双长链的酰胺物质的掺入量是0.5％至5％重量，通常是1％至3％重量，而高 分子量聚环氧乙烷物质和水溶性阳离子物质的加入量是0.1％至2％，通常 是0.15％至1.5％重量。虽然在某些情况下，这些物质作为干混颗粒加入 或将它们作为熔融液体喷到组合物的其它固体组分上可能更为方便，但 通常将它们加入组合物的喷雾干燥的部分中。 如描述在EP-A-040562和EP-A-239910中的生物可降解的季铵化 合物已作为传统使用的氯化和甲基硫酸化双长链烷基铵的替代物而存 在。 用于季铵化合物和胺前体的与柔软剂相容的阴离子的非限制实例包 括氯或甲基硫酸根。 染料转移抑制作用-本发明洗涤剂组合物还可包括用于抑制在包含 带色织物的洗涤织物和调理操作过程中碰到的溶解和悬浮的染料从一种 织物转移至另一种织物上的化合物。 聚合染料转移抑制剂 本发明洗涤剂组合物还可包含0.001％至10％，优选0.01％至2％，更优 选0.05％至1％重量聚合的染料转移抑制剂。通常将所说的聚合染料转移 抑制剂掺入洗涤剂组合物中是为了抑制染料从带色的织物上转移至同时 洗涤的织物上。在从带色织物洗涤下来的短效染料有机会接触洗涤中的 其它物品之前，这些聚合物具有将其螯合或吸附的能力。 特别适合的聚合染料转移抑制剂是聚胺N-氧化物聚合物、N-乙烯基 吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基吡咯烷酮聚合物、聚乙烯 基噁唑烷酮和聚乙烯基咪唑或它们的混合物。这种染料转移抑制剂的 实例公开在美国专利US5707950和US5707951中。 其他适合的染料转移抑制剂包括，但不限于交联的聚合物。交联聚 合物是其骨架互连至一定程度的聚合物；这些键可以是化学或物理性 的，在骨架上或在支链上可具有活性基团。交联聚合物已被描述在聚合 物科技杂志，第22卷，第1035-1039页。 在一种实施方案中，交联聚合物是以这样的方法制备的，即它们形 成三维的刚性结构，其能将染料捕集在由三维结构形成的孔中。在另一 实施方案中，交联聚合物通过溶胀捕集染料。这种交联聚合物被描述在 未结案的欧洲专利申请94870213.9中。 另外，这种聚合物还增强了本发明酶的性能。 pH和缓冲变化-本文描述的许多洗涤剂和漂白组合物将被缓冲，即 在酸性污垢存在下，它们相对耐pH降低。然而，本发明其他组合物可具 有优异的低缓冲能力或可基本上不被缓冲。在建议使用值下控制或变化 pH的技术更通常是包括不仅使用缓冲剂，而且使用其他的碱、酸、pH调 节体系、双室容器等，它们是本领域技术人员公知的。 本发明优选的ADD组合物包含pH调节组分，其选自水溶性碱性无机 盐和水溶性有机或无机助洗剂，如描述在美国专利5705464和5710115 中。 材料护理剂-优选的ADD组合物可含有作为腐蚀抑制剂和/或防晦暗 助剂有效的一种或多种材料护理剂，如描述在美国专利5705464、5710115 和5646101中。 当存在时，这种保护材料优选掺入低量，例如为ADD组合物的约 0.01％-5％。 其他材料-任选地包括在本发明组合物中的去污组分或辅助材料可 包括有助于或增强清洗性能、对被清洗的底物的处理或用于改善组合物 的美学性的一种或多种材料。还可包括在本发明组合物中的辅助物，是 以它们常规技术确定的含量使用(一般，辅助材料总共占组合物重量约 30％-99.9％，优选约70％-95％)，包括其他活性组分例如非磷酸盐助洗剂、 色粒、银器护理剂、防晦暗和/或防腐蚀剂、染料、填料、杀菌剂、碱 源、水溶助长剂、抗氧化剂、香料、增溶剂、载体、加工助剂、颜料和 pH控制剂，其描述在美国专利5705464、5710115、5698504、5695679、 5686014和5646101中。 清洗方法-除了本文描述的清洗织物、餐具和其他硬表面和由个人 清洗人体部分的方法外，本发明还包括已带有污垢或污渍的织物的洗涤 预处理方法，包括在使用常规洗涤水溶液洗涤这种织物之前，将所述污 渍和/或污垢直接与高浓度形式的上述漂白组合物接触。优选，在用常 规方法洗涤预处理过的污垢/污渍底物之前，将漂白组合物与污垢/污渍 保持接触约30秒-24小时。更优选，预处理时间为约1-180分钟。 以下实施例是用于说明本发明组合物，但不必然用于限制或另外定 义本发明的范围。 在所有以下实施例中，蛋白酶1意思是指包含在对应于淀粉分解芽孢 杆菌枯草溶菌素的101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K 位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基的蛋 白酶变体。蛋白酶1可以用本发明任何其他附加的蛋白酶变体代替，在以 下实施例中得到明显相似的结果。 在本发明清洗组合物实施例中，蛋白酶1的酶含量是按纯酶占总组合 物重量表示，其他酶含量是按原料占总组合物重量表示，和除非另外说 明，其他组分按占总组合物重量表示。 另外，在以下实施例中，使用本领域普通技术人员公知的一些缩写， 其与本文公开内容一致。 实施例1 粒状自动洗餐具组合物 组分 A B C 柠檬酸 15.0 - - 柠檬酸盐 4.0 29.0 15.0 丙烯酸盐/异丁烯酸盐共聚物 6.0 - 6.0 丙烯酸马来酸共聚物 - 3.7 - 干添加剂碳酸盐 9.0 - 20.0 碱金属硅酸盐 8.5 17.0 9.0 石蜡 - 0.5 - 苯并三唑 - 0.3 - Termamyl 60T 1.6 1.6 1.6 蛋白酶1 0.2 0.1 0.06 过碳酸盐(AvO) 1.5 - - 过硼酸盐一水合物 - 0.3 1.5 过硼酸盐四水合物 - 0.9 - NOBS - - 2.40 TAED 3.8 4.4 - 二亚乙基三胺五甲基膦酸 0.13 0.13 0.13 (Mg盐) 烷基乙氧基硫酸盐-3摩尔乙氧基化 3.0 - - 烷基乙氧基丙氧基非离子表面活性剂 - 1.5 - 抑泡剂 2.0 - - Olin SLF 18非离子表面活性剂 - - 2.0 硫酸盐(平衡量至100％) 实施例2 根据本发明的密实型高密度(0.96Kg/l)洗餐具洗涤剂组合物A-F： 组分 A B C D E F STPP - 51.4 51.4 - - 44.3 柠檬酸盐 17.05 - - 49.6 40.2 - 碳酸盐 17.50 14.0 20.0 - 8.0 33.6 碳酸氢盐 - - - 26.0 - - 硅酸盐 14.81 15.0 8.0 - 25.0 3.6 偏硅酸盐 2.50 4.5 4.5 - - - PB1 9.74 7.79 7.79 - - - PB4 - - - 9.6 - - 过碳酸盐 - - - - 11.8 4.8 非离子型表面活性剂 2.00 1.50 1.50 2.6 1.9 5.9 TAED 2.39 - - 3.8 - 1.4 HEDP 1.00 - - - - - DETPMP 0.65 - - - - - Mn TACN - - - - 0.008 - NOBS - 2.40 - - - - PAAC - - 0.008 - - - 石蜡 0.50 0.38 0.38 0.6 - - 蛋白酶1 0.1 0.06 0.05 0.03 0.07 0.01 淀粉酶 1.5 1.5 1.5 2.6 2.1 0.8 BTA 0.30 0.22 0.22 0.3 0.3 0.3 多羧酸盐 6.0 - - - 4.2 0.9 香料 0.2 0.12 0.12 0.2 0.2 0.2 硫酸盐/水 20.57 1.97 2.97 3.6 4.5 3.9 pH(1％溶液) 11.0 11.0 11.3 9.6 10.8 10.9 实施例3 根据本发明的堆密度为1.02Kg/l的粒状洗餐具洗涤剂组合物实施例 A-F： 组分 A B C D E F STPP 30.00 33.5 27.9 29.62 33.8 22.0 碳酸盐 30.50 30.50 30.5 23.00 34.5 45.0 硅酸盐 7.40 7.50 12.6 13.3 3.2 6.2 偏硅酸盐 - 4.5 过碳酸盐 - - - 4.0 PB1 4.4 4.5 4.3 - - NaDCC - - 2.00 - 0.9 非离子型表面活性剂 1.0 0.75 1.0 1.90 0.7 0.5 TAED 1.00 - - - NOBS - - - - 2.0 - PAAC - 0.004 - - 石蜡 0.25 0.25 - - 蛋白酶1 0.05 0.06 0.025 0.1 0.02 0.07 淀粉酶 0.38 0.64 0.46 - 0.6 BTA 0.15 0.15 - 0.2 香料 0.2 0.2 0.05 0.1 0.2 硫酸盐/水 23.45 16.87 22.26 30.08 21.7 25.4 pH(1％溶液) 10.80 11.3 11.0 10.70 11.5 10.9 实施例4 使用标准12头旋转压型机，在压力13KN/cm2下挤压粒状洗餐具洗涤 剂组合物来制备根据本发明的片状洗涤剂组合物实施例A-H： 组分 A B C D E F G H STPP - 48.8 54.7 38.2 - 52.4 56. 1 36. 0 柠檬酸盐 20.0 - - - 35.9 - - - 碳酸盐 20.0 5.0 14.0 15.4 8.0 23.0 20. 0 28. 0 硅酸盐 15.0 14.8 15.0 12.6 23.4 2.9 4.3 4.2 蛋白酶1 0.05 0.09 0.05 0.03 0.06 0.03 0.0 3 0.1 淀粉酶 1.5 1.5 1.5 0.85 1.9 0.4 2.1 0.3 PB1 14.3 7.8 11.7 12.2 - - 6.7 8.5 PB4 - - - - 22.8 - 3.4 - 过碳酸盐 - - - - - 10.4 - - 非离子型表面活性剂 1.5 2.0 2.0 2.2 1.0 4.2 4.0 6.5 PAAC - - 0.016 0.009 - - - - MnTACN - - - - 0.007 - - - TAED 2.7 2.4 - - - 2.1 0.7 1.6 HEDP 1.0 - - 0.93 - 0.4 0.2 - DETPMP 0.7 - - - - - - - 石蜡 0.4 0.5 0.5 0.55 - - 0.5 - BTA 0.2 0.3 0.3 0.33 0.3 0.3 0.3 - 多羧酸盐 4.0 - - - 4.9 0.6 0.8 - PEG - - - - - 2.0 - 2.0 甘油 - - - - - 0.4 - 0.5 香料 - - - 0.05 0.20 0.2 0.2 0.2 硫酸盐/水 17.4 14.7 - 15.74 - - - 11. 3 片的重量 20g 25g 20g 30g 18g 20g 25g 24. 0 pH(1％溶液) 10.7 10.6 0 10.7 10.7 10.9 11.2 11. 0 10. 8 实施例5 粒状织物清洗组合物 实施例编号 组分 A B 直链烷基苯磺酸盐 11.4 10.70 牛油烷基硫酸盐 1.80 2.40 C14-15烷基硫酸盐 3.00 3.10 7摩尔乙氧基化的C14-15醇 4.00 4.00 11摩尔乙氧基化的牛油醇 1.80 1.80 分散剂 0.07 0.1 聚硅氧烷流体 0.80 0.80 柠檬酸三钠 14.00 15.00 柠檬酸 3.00 2.50 沸石 32.50 32.10 马来酸丙烯酸共聚物 5.00 5.00 二亚乙基三胺五亚甲基膦酸 1.00 0.20 蛋白酶 0.1 0.01 脂肪酶 0.36 0.40 淀粉酶 0.30 0.30 硅酸钠 2.00 2.50 硫酸钠 3.50 5.20 聚乙烯基吡咯烷酮 0.30 0.50 过硼酸盐 0.5 1 TAED 1.0 - NOBS - 1.0 苯酚磺酸盐 0.1 - 过氧化物酶 0.1 0.1 少量组分 最多至100 最多至100 实施例6 粒状织物清洗组合物 实施例编号 组分 A B 直链C12烷基苯磺酸钠 6.5 8.0 硫酸钠 15.0 18.0 沸石A 26.0 22.0 次氮基三乙酸钠 5.0 5.0 聚乙烯基吡咯烷酮 0.5 0.7 TAED 3.0 - NOBS - 2.4 硼酸 4.0 - 过硼酸盐 0.5 1 苯酚磺酸盐 0.1 - 蛋白酶1 0.02 0.05 填料(例如硅酸盐；碳酸盐；香料；水) 最多至100 最多至100 实施例7 密实型粒状织物清洗组合物 组分 重量％ 烷基硫酸盐 8.0 烷基乙氧基硫酸盐 2.0 3和7摩尔乙氧基化的C25和C45醇混合物 6.0 多羟基脂肪酸酰胺 2.5 沸石 17.0 层状硅酸盐/柠檬酸盐 16.0 碳酸盐 7.0 马来酸丙烯酸共聚物 5.0 污垢解脱聚合物 0.4 羧甲基纤维素 0.4 聚(4-乙烯基吡啶)-N-氧化物 0.1 乙烯基咪唑和乙烯基吡咯烷酮的共聚物 0.1 PEG2000 0.2 蛋白酶1 0.03 脂肪酶 0.2 纤维素酶 0.2 TAED 6.0 过碳酸盐 22.0 乙二胺二琥珀酸 0.3 抑泡剂 3.5 4，4′-二(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨 0.25 基)芪-2，2′-二磺酸二钠 4，4′-二(2-磺基苯乙烯基)联苯二钠 0.05 水、香料和少量组分 最多至100 实施例8 粒状织物清洗组合物 组分 重量％ 直链烷基苯磺酸盐 7.6 C16-C18烷基硫酸盐 1.3 7摩尔乙氧基化的C14-15醇 4.0 椰子烷基二甲基羟乙基氯化铵 14 分散剂 0.07 聚硅氧烷流体 0.8 柠檬酸三钠 5.0 沸石4A 15.0 马来酸丙烯酸共聚物 4.0 二亚乙基三胺五亚甲基膦酸 0.4 过硼酸盐 15.0 TAED 5.0 绿土 10.0 聚(氧乙烯)(MW 300,000) 0.3 蛋白酶1 0.02 脂肪酶 0.2 淀粉酶 0.3 纤维素酶 0.2 硅酸钠 3.0 碳酸钠 10.0 羧甲基纤维素 0.2 增白剂 0.2 水、香料和少量组分 最多至100 实施例9 粒状织物清洗组合物 组分 重量％ 直链烷基苯磺酸盐 6.92 牛油烷基硫酸盐 2.05 7摩尔乙氧基化的C14-15醇 4.4 3摩尔乙氧基化的C12-15烷基乙氧基硫酸盐 0.16 沸石 20.2 柠檬酸盐 5.5 碳酸盐 15.4 硅酸盐 3.0 马来酸丙烯酸共聚物 4.0 羧甲基纤维素 0.31 污垢解脱聚合物 0.30 蛋白酶1 0.1 脂肪酶 0.36 纤维素酶 0.13 过硼酸盐四水合物 11.64 过硼酸盐一水合物 8.7 TAED 5.0 二亚乙基三胺五亚甲基膦酸 0.38 硫酸镁 0.40 增白剂 0.19 香料、聚硅氧烷、抑泡剂 0.85 少量组分 最多至100 实施例10 粒状织物清洗组合物 组分 A B C 基本颗粒组分 LAS/AS/AES(65/35) 9.95 - - LAS/AS/AES(70/30) - 12.05 7.70 硅铝酸盐 14.06 15.74 17.10 碳酸钠 11.86 12.74 13.07 硅酸钠 0.58 0.58 0.58 NaPAA固体 2.26 2.26 1.47 PEG固体 1.01 1.12 0.66 增白剂 0.17 0.17 0.11 DTPA - - 0.70 硫酸盐 5.46 6.64 4.25 DC-1400 Deaerant 0.02 0.02 0.02 水分 3.73 3.98 4.33 少量组分 0.31 0.49 0.31 B.O.T.喷雾 非离子型表面活性剂 0.50 0.50 0.50 附聚物组分 LAS/AS(25/75) 11.70 9.60 10.47 硅铝酸盐 13.73 11.26 12.28 碳酸盐 8.11 6.66 7.26 PEG 4000 0.59 0.48 0.52 水分/少量组分 4.88 4.00 4.36 功能性添加剂 碳酸钠 7.37 6.98 7.45 过硼酸盐 1.03 1.03 2.56 AC底涂层 - 1.00 - NOBS - - 2.40 污垢解脱聚合物 0.41 0.41 0.31 纤维素酶 0.33 0.33 0.24 蛋白酶1 0.1 0.05 0.15 AE-薄片 0.40 0.40 0.29 液体喷雾 香料 0.42 0.42 0.42 非离子型表面活性剂喷雾剂 1.00 1.00 0.50 少量物质 最多至100 实施例11 粒状织物清洗组合物 A B 表面活性剂 -NaLAS -KLAS -AS/AE3S -TAS -C24AE5 -Genagen -N-椰油基N-甲基 葡糖胺(直链) 6.40 - 6.40 0.08 3.48 - 1.14 - 9.90 4.39 0.11 - 1.88 2.82 -C8-10二甲基羟 乙基氯化铵 1.00 1.40 助洗剂 -沸石 -SKS-6 -柠檬酸 20.59 10.84 2.00 13.39 10.78 - 缓冲剂 -碳酸盐 -碳酸氢盐 -硫酸盐 -硅酸盐 9.60 2.00 2.64 0.61 12.07 2.00 - 0.16 聚合物 -丙烯酸/马来酸共聚物 (Na) -CMC -聚合物 -六亚甲基二胺四 -E24乙氧基化物，用 甲基氯二季铵化 1.17 0.45 0.34 1.00 1.12 0.24 0.18 1.00 酶 -蛋白酶1 (％纯酶) -纤维素酶 -淀粉酶 -脂肪酶 0.03 0.26 0.65 0.27 0.03 0.26 0.73 0.15 漂白剂 -TAED(100％) -N-壬酰基-6-氨基己 酸的苯酚磺酸酯 -过碳酸盐 -HEDP -EDDS 3.85 - 16.20 0.48 0.30 3.50 2.75 18.30 0.48 0.30 微量组分 -苹果酸颗粒 -增白剂 15/49 -酞菁磺酸锌 -具有三甲基甲硅烷 基封端单元的聚二甲 基硅氧烷 -皂 -香料 0.077/0.014 0.0026 0.25 - 0.45 2.20+bicarb 0.07/0.014 0.0026 0.24 1.00 0.55 总计 100 100 实施例12 粒状织物清洗组合物 A B 表面活性剂 NaLAS KAS FAS AS C25AE3S AE5 N-椰油基N-甲基葡糖胺 C8-10二甲基羟乙基氯化铵 6.8 - 0.9 0.6 0.1 4.2 - - - 0.4 10.9 0.1 1.5 - - 1.8 1.2 1.0 助洗剂 SKS-6 沸石 柠檬酸 3.3 17.2 1.5 9.0 18.9 - 缓冲剂 碳酸盐 碳酸氢钠 硫酸盐 苹果酸 硅酸盐 21.1 - 15.2 - 0.1 15.0 2.6 5.5 2.9 - 聚合物 丙烯酸/马来酸共聚物 (Na) 六亚甲基二胺四-E24乙氧 基化物，用甲基氯二季铵化 聚合物 CMC 2.2 0.5 0.1 0.2 0.9 0.7 0.1 0.1 酶 蛋白酶1(％纯酶) 脂肪酶 淀粉酶 纤维素酶 0.02 0.18 0.64 0.13 0.05 0.14 0.73 0.26 漂白剂 TAED N-壬酰基-6-氨基己酸的苯酚 磺酸酯 过碳酸钠 PB4 EDDS MgSO4 HEDP 2.2 - - 15.6 0.17 0.35 0.15 2.5 1.96 13.1 - 0.21 0.47 0.34 增白剂 -酞菁磺酸锌 -具有三甲基甲硅烷基封端单元 的聚二甲基硅氧烷 皂 香料 斑粒 0.06 0.0015 0.04 0.5 0.35 0.5 0.04 0.0020 0.14 0.7 0.45 0.6 实施例13 根据本发明的粒状洗衣洗涤剂组合物13A-C特别适用于欧洲洗衣机 条件： 组分 A B C LAS 7.0 5.61 4.76 TAS - - 1.57 C45AS 6.0 2.24 3.89 C25E3S 1.0 0.76 1.18 C45E7 - - 2.0 C25E3 4.0 5.5 - QAS 0.8 2.0 2.0 STPP - - - 沸石A 25.0 19.5 19.5 柠檬酸 2.0 2.0 2.0 NaSKS-6 8.0 10.6 10.6 碳酸盐1 8.0 10.0 8.6 MA/AA 1.0 2.6 1.6 CMC 0.5 0.4 0.4 PB4 - 12.7 - 过碳酸盐 - - 19.7 TAED - 3.1 5.0 柠檬酸盐 7.0 - - DTPMP 0.25 0.2 0.2 HEDP 0.3 0.3 0.3 QEA 1 0.9 1.2 1.0 蛋白酶1 0.02 0.05 0.035 脂肪酶 0.15 0.25 0.15 纤维素酶 0.28 0.28 0.28 淀粉酶 0.4 0.7 0.3 PVPI/PVNO 0.4 - 0.1 光敏化的漂白剂(ppm) 15ppm 27ppm 27ppm 增白剂 1 0.08 0.19 0.19 增白剂 2 - 0.04 0.04 香料 0.3 0.3 0.3 泡腾颗粒(苹果酸40％， 碳酸氢钠40％，碳酸钠20％) 15 15 5 聚硅氧烷消泡剂 0.5 2.4 2.4 少量组分/隋性组分至100％ 实施例14 以下配方是根据本发明组合物的实施例，其可以是颗粒或片状。 组分 14 C45 AS/TAS 3.0 LAS 8.0 C25AE3S 1.0 NaSKS-6 9.0 C25AE5/AE3 5.0 沸石A 10.0 SKS-6(I)(干添加剂) 2.0 MA/AA 2.0 柠檬酸 1.5 EDDS 0.5 HEDP 0.2 PB1 10.0 NACA OBS 2.0 TAED 2.0 碳酸盐 8.0 硫酸盐 2.0 淀粉酶 0.3 脂肪酶 0.2 蛋白酶1 0.02 少量组分(增白剂/SRP1/ CMC/光漂白剂/MgSO4/ PVPVI/抑泡剂/ PEG) 0.5 香料 0.5 实施例15 液体织物清洗组合物 实施例号 组分 A B C12-14烯基琥珀酸 3.0 8.0 柠檬酸一水合物 10.0 15.0 C12-15烷基硫酸钠 8.0 8.0 2摩尔乙氧基化的C12-15醇硫酸钠 - 3.0 7摩尔乙氧基化的C12-15醇 - 8.0 5摩尔乙氧基化的C12-15醇 8.0 - 二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸) 0.2 - 油酸 1.8 - 乙醇 4.0 4.0 丙二醇 2.0 2.0 蛋白酶1 0.01 0.02 抑泡剂 0.15 0.15 NaOH 最多至pH7.5 过硼酸盐 0.5 1 苯酚磺酸盐 0.1 0.2 过氧化物酶 0.4 0.1 水和少量组分 最多至100％ 实施例16 液体织物清洗组合物 实施例号 组分 17 NaLAS(100％am) 16 Neodol 21.5 EDDS 1.2 分散剂 1.3 过硼酸盐 12 N-壬酰基-6-氨基己酸的苯酚磺酸酯 6 蛋白酶1(％纯酶) 0.03 纤维素酶 0.03 溶剂(BPP) 18.5 聚合物 0.1 碳酸盐 10 FWA 15 0.2 TiO2 0.5 PEG 8000 0.4 香料 1.0-1.2 抑泡剂 0.06 水和少量组分 最多至100％ 实施例17 两层泡腾假牙清洗片 实施例编号 组分 A B C D 酸性层 蛋白酶1 1.0 1.5 0.01 0.05 酒石酸 24.0 24.0 24.00 24.00 碳酸钠 4.0 4.0 4.00 4.00 氨基磺酸 10.0 10.0 10.00 10.00 PEG 20,000 4.0 4.0 4.00 4.00 碳酸氢钠 24.5 24.5 24.50 24.50 过硫酸钾 15.0 15.0 15.00 15.00 酸式焦磷酸钠 7.0 7.0 7.00 7.00 热生二氧化硅 2.0 2.0 2.00 2.00 甲乙酰乙二胺 7.0 7.0 7.00 7.00 香料 1.0 1.0 1.00 1.00 碱性层 过硼酸钠一水合物 32.0 32.0 32.00 32.00 碳酸氢钠 19.0 19.0 19.00 19.00 EDTA 3.0 3.0 23.00 3.00 三聚磷酸钠 12.0 12.0 12.00 12.00 PEG 20,000 2.0 2.0 2.00 2.00 碳酸钠 2.0 2.0 2.00 2.00 热生二氧化硅 2.0 2.0 2.00 2.00 染料/香料 2.0 2.0 2.00 2.00 实施例18 粒状洗衣洗涤剂组合物18A-E特别适用于日本洗衣机条件并根据本 发明制备： 组分 A B C D E LAS 23.57 23.57 21.67 21.68 21.68 FAS 4.16 4.16 3.83 3.83 3.83 非离子表面活性剂 3.30 3.30 2.94 3.27 3.27 二(羟乙基)甲基烷基氯化铵 0.47 0.47 1.20 1.20 1.20 SKS-6 7.50 7.50 5.17 5.76 5.06 聚丙烯酸盐共聚物(MW 11000)(马来酸/丙烯酸盐比为 4∶6) 7.03 7.03 14.36 14.36 14.36 沸石 11.90 11.40 10.69 11.34 11.34 碳酸盐 14.90 14.82 11.71 11.18 11.18 硅酸盐 12.00 12.00 12.37 12.38 12.38 蛋白酶1 0.016 0.016 0.046 0.046 0.046 脂肪酶 - - 0.28 - - 淀粉酶 - - 0.62 - - 纤维素酶 - - 0.48 - 0.70 NOBS 3.75 3.75 2.70 2.70 2.70 PB1 3.53 - 2.60 - - 过碳酸钠 - 4.21 - 3.16 3.16 SRP 0.52 0.52 0.70 0.70 0.70 增白剂 0.31 0.31 0.28 0.28 0.50 AE-复合薄片 0.17 0.20 0.17 0.17 0.17 聚二甲基硅氧烷 - - 0.68 0.68 0.68 香料 0.06 0.06 0.08 - - 香料 - - - 0.23 0.23 疏水性沉淀二氧化硅 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 PEG4000 0.19 0.19 0.17 0.17 0.17 少量组分/惰性组分至100％ 虽然已描述了本发明的具体实施方案，但在不脱离本发明精神和范 围下可对本发明进行各种变化和修改，这对于本领域技术人员来说是显 而易见的。在所附的权利要求书中意图覆盖了在本发明范围内的所有这 样的修改。 本发明组合物可适宜用配方师选择的任何方法来制备，其非限制实 施例描述在美国专利5691297；5574005；5569645；5565422；5516448； 5489392和5486303中。 除了上述实施例外，本发明漂白组合物可配制成任何适合的洗衣洗 涤剂组合物，其非限制实例描述在美国专利5679630；5565145；5478489； 5470507；5466802；5460752；5458810；5458809和5288431中。 参考优选的实施方案和实施例，已详细描述了本发明，在不脱离本 发明范围下可作各种变化和修改，这对于本领域技术人员来说是显然 的，并且不认为本发明限制在说明书中所述内容。 |
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