含有多取代的蛋白酶变体和淀粉酶变体的清洗组合物 |
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| 申请号 | CN98812640.0 | 申请日 | 1998-10-23 | 公开(公告)号 | CN100558871C | 公开(公告)日 | 2009-11-11 |
| 申请人 | 詹伦卡国际有限公司; | 发明人 | C·K·高希; A·C·贝克; R·奥塔尼; A·布施; M·S·肖维尔; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及包含蛋白酶变体的清洗组合物。一种清洗组合物包含一种蛋白酶变体，和一种或多种清洗辅助物质，所述蛋白酶变体包括在对应于 淀粉 分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位的 氨 基酸残基 位置 处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基，同时结合在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基；其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置处的氨基酸残基的取代时，还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代。另一种清洗组合物包含一种蛋白酶变体，一种淀粉酶变体和一种或多种清洗辅助物质，所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位中的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基。还提供了使用清洗组合物的方法。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种织物和/或洗餐具和/或硬表面清洗组合物，其包含： |
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| 说明书全文 | 发明领域本发明涉及包含一种或多种蛋白酶和一种或多种淀粉酶的清洗组 合物，其中所述蛋白酶是多取代的蛋白酶变体，所述淀粉酶是淀粉酶 变体。更具体地，本发明涉及包含一种或多种多取代的蛋白酶变体和 一种或多种淀粉酶变体的洗衣洗涤剂组合物、洗餐具洗涤剂组合物、 硬表面清洗组合物和个人清洗组合物。 发明背景长期在洗衣洗涤剂中使用各种类型的酶，以助于从织物上去除某 些污渍。每种类型的酶(淀粉酶、蛋白酶等)一般催化不同的化学反 应。例如，已知蛋白酶具有水解(将化合物分解成两种或多种更简单 的化合物)其他蛋白质的能力。通过将天然产生的或工程蛋白酶加入 洗衣洗涤剂组合物中已利用了它们的这种能力。 最近几年，还研究了酶在自动洗餐具组合物中的应用。遗憾地是， 许多酶，例如许多常规蛋白酶，不能很好地转移到洗涤环境中。具体 说，要求热稳定性、pH稳定性、氧化稳定性和基质特异性最好以保证 满意的性能。 Estell等的美国专利RE34606公开了在对应于淀粉分解芽孢杆菌 枯草溶菌素中的酪氨酸-1、天冬氨酸+32、天冬酰胺+155、酪氨酸+104、 蛋氨酸+222、甘氨酸+166、组氨酸+64、甘氨酸+169、苯基丙氨酸+189、 丝氨酸+33、丝氨酸+221、酪氨酸+217、谷氨酸+156和丙氨酸+152位 置的枯草溶菌素氨基酸残基的修饰。 美国专利5182204公开了对淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素中的 +224氨基酸残基和对其他枯草溶菌素中的等同位置的修饰，这种修饰 可以借助于取代、插入或缺失改进并且可以结合美国专利RE34606中 确定的残基的修饰，以形成有用的枯草溶菌素突变体或变体。美国专 利5182204还公开了对枯草溶菌素中的许多氨基酸残基的修饰，具体 包括+99、+101、+103、+107、+126、+128、+135、+197和+204。 Baeck等的美国专利5679630公开了包含蛋白酶变体和一种或多 种清洗组合物材料的清洗组合物，所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉 分解芽孢杆菌枯草溶菌素的76位置处，同时结合99，101，103，104， 107，123，27，105，109，126，128，135，156，166，195，197，204， 206，210，216，217，218，222，260，265和/或274位中的一个或 多个位置处用其他氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基。 除了蛋白酶外，已使用淀粉酶用于各种不同的目的，其中最重要 的是淀粉液化、织物退浆、纸和纸浆工业的淀粉改性和用于酿造和烘 烤。成为日益重要的淀粉酶的另外用途是在洗涤织物、硬表面和/或餐 具过程中，对含淀粉的污垢和污渍的去除。 1994年8月18日公布的WO94/18314(Genencor)、1994年2 月3日公布的WO94/02596(Novo)和1995年4月20日公布的 WO95/10603(Novo)描述了掺入突变体淀粉酶的清洗组合物。 用于清洗组合物中已知的其他淀粉酶包括α-和β-淀粉酶。α-淀 粉酶是现有技术已知的并包括在美国专利5003257；EP252666； WO91/00353；FR2676456；EP285123；EP525610；EP368341；和英国 专利说明书1296839(Novo)中公开的那些。 1995年10月5日公布的WO95/26397(Novo)公开了一种α一淀 粉酶，其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下，比活度比 的比活度高至少25％。 1998年2月12日公布的WO98/05748(P&G)公开了用于洗涤剂 组合物中的在WO95/26397中描述的α-淀粉酶的变体。 1998年7月16日公布的WO98/30669(Henkel)公开了含有蛋白 酶和淀粉酶的洗涤剂组合物，其中蛋白酶是一种蛋白酶突变体，其中 在野生型蛋白酶的211位置(BLAP编号方法)处存在的氨基酸亮氨酸 被天冬氨酸或谷氨酸交换；淀粉酶是一种淀粉酶突变体，其中在野生 型淀粉酶中存在的至少一个蛋氨酸、色氨酸、半胱氨酸或酪氨酸被除 去或被具体不是半胱氨酸或蛋氨酸的另一种氨基酸交换。适用于 WO98/30669的组合物中的淀粉酶突变体的实例公开在WO94/02597 (Novo)、WO95/10603(Novo)和WO94/18314(Genencor)中并且 可按(Novo)和Purafect(Genencor)商购。 然而，仍存在消费者对清洗组合物的需求，这种清洗组合物比含 常规酶的清洗组合物能提供从底物上更强和/或改善的对污垢和/或污 渍的清洗(去除和/或减少)。 本发明已发现新蛋白酶和淀粉酶的组合比含常规酶清洗组合物和/ 或含本发明新蛋白酶而不存在本发明淀粉酶的清洗组合物提供了增强 和/或改善的去污垢和/或污渍效果，其中所述新蛋白酶是多取代的蛋 白酶变体，所述淀粉酶是淀粉酶变体。 另外，令人吃惊地发现包含本发明新蛋白酶和本发明淀粉酶的新 组合的清洗组合物提供了比包含本发明新蛋白酶或本发明淀粉酶中的 一种或另一种，但不是这两种的清洗组合物提供的累积清洗效果更优 异的清洗效果。 因此，本发明的目的是提供清洗组合物，特别是洗衣洗涤剂组合 物和/或洗餐具洗涤剂组合物，其具有改善的去污垢和/或污渍效果和/ 或清洁织物效果。 另外，本申请中要求保护的特定组合未在任何这些现有技术参考 文献中被确认。 发明概述 本发明满足了上述需求，在于令人吃惊地发现本发明多取代的蛋 白酶变体当与本发明淀粉酶变体组合用于清洗组合物中时比含常规酶 的清洗组合物提供了改善和增强的清洗能力，包括，但不限于去除和/ 或减少污渍和/或污垢和/或保持白度和/或使污秽清洁和/或去除和/或 减少污斑和/或膜。 本发明多取代的蛋白酶变体和淀粉酶变体适用于高和低密度颗 粒、重垢和轻垢型液体、片以及合成洗涤剂条组合物和其他清洗组合 物。 本发明的一方面，清洗组合物包含： (a)蛋白酶变体，优选有效量的蛋白酶变体，按该清洗组合物的重 量计更优选约0.0001％-10％蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体包括 在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位的氨基酸残基位置处 用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基，同时结 合在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、 13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、 55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、 98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、 121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、 146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、 182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、 209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、 227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、 246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、 259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和 275位的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残 基取代所述位置的氨基酸残基；其中当所述蛋白酶变体包括在对应于 103和76位置处的氨基酸残基的取代时，还存在在非对应于淀粉分解 芽孢杆菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、 204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸 残基位置的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代； (b)淀粉酶变体，优选有效量的淀粉酶变体，按该清洗组合物的重 量计更优选约0.0001％-10％淀粉酶变体，其中所述淀粉酶变体选 自： (i)α-淀粉酶，特征在于由α-淀粉酶活性实验测定， 其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下，比活度比的比活 度高至少25％；和/或 (ii)根据(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基 酸序列或与SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀 粉酶，和/或 (iii)根据(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基 酸序列或与SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀 粉酶，和/或 (iv)根据(i)的α-淀粉酶，其包含以下N-端氨基酸序列：His- His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr- Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或与N-端中所示的氨基酸序列(SEQ ID No.3)至少80％同源的α-淀粉酶，和/或 (v)根据(i-iv)的α-淀粉酶，其中该α-淀粉酶可由嗜碱的芽孢杆 菌种得到，和/或 (vi)根据(v)的α-淀粉酶，其中该淀粉酶可由NCIB 12289、 NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到，和/或 (vii)α-淀粉酶，其与具有分别对应于SEQ ID No.1、ID No.2 或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出阳性免疫交 叉反应活性，和/或 (viii)母体α-淀粉酶变体，其中母体α-淀粉酶(1)具有分别在 SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一种氨基酸序列，或(2) 表现出与一个或多个所述的氨基酸序列至少80％同源，和/或与具有 一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出免疫交叉反应活 性，和/或由一种DNA序列编码，该DNA序列与编码具有一个所述氨基 酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探针杂交，该变体中：(A)所述 母体α-淀粉酶中缺失至少一个氨基酸残基；和/或(B)所述母体α-淀 粉酶的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基代替；和/或(C)相 对所述的母体α-淀粉酶，插入至少一个氨基酸残基；所述变体具有α -淀粉酶活性并相对所述母体α-淀粉酶表现出至少一种以下性质：提 高了热稳定性、提高了抗氧化的稳定性；降低了对Ca离子的依赖性； 在中性至相对高pH值下提高了稳定性和/或α-淀粉分解活性；在相对 高温下提高了α-淀粉分解活性；和提高或降低了等电点(pI)，以便 使α-淀粉酶变体的pI值更好地与介质的pH匹配；和 (c)一种或多种清洗辅助材料。 本发明另一方面，提供了一种织物清洗组合物，其包含： (a)蛋白酶变体，优选有效量的蛋白酶变体，按该织物清洗组合 物的重量计更优选约0.0001％-10％蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变 体如上文所述； (b)淀粉酶变体，优选有效量的淀粉酶变体，按该清洗组合物的 重量计更优选约0.0001％-10％淀粉酶变体，其中所述淀粉酶变体如 上文所述； (c)按织物清洗组合物重量计至少约5％的表面活性剂；和 (d)按织物清洗组合物重量计至少约5％的助洗剂。 本发明还一方面，提供了一种清洗需要被清洁的织物的方法，包 括将织物与本发明的织物清洗组合物接触。 本发明还一个方面，提供了一种洗餐具组合物，其包含： (a)蛋白酶变体，优选有效量的蛋白酶变体，按该洗餐具组合物 的重量计更优选约0.0001％-10％蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体 如上文所述； (b)淀粉酶变体，优选有效量的淀粉酶变体，按该清洗组合物的 重量计更优选约0.0001％-10％淀粉酶变体，其中所述淀粉酶变体如 上文所述；和 (c)约0.1％-10％重量表面活性剂。 本发明还一个方面，提供了一种清洗需要被清洁的餐具的方法， 其包括将餐具与本发明洗餐具组合物接触。 本发明还一个方面，提供了一种个人清洗组合物，其包含： (a)蛋白酶变体，优选有效量的蛋白酶变体，按该个人清洗组合 物的重量计更优选约0.001％-5％蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体 如上文所述； (b)淀粉酶变体，优选有效量的淀粉酶变体，按该清洗组合物的 重量计更优选约0.0001％-10％淀粉酶变体，其中所述淀粉酶变体如 上文所述；和 (c)按个人清洗组合物的重量计，约0.1％-95％表面活性剂体 系；和 (d)任选地，按个人清洗组合物的重量计，约0.05％-50％酶稳 定剂。 本发明还一个方面，提供了一种个人清洗需要被清洁的人体或低 级动物体部分的方法，包括将所述部分与本发明个人清洗组合物接触。 本发明还一个方面，提供了一种清洗组合物，其包含： (a)蛋白酶变体，优选有效量的蛋白酶变体，按该清洗组合物的 重量计更优选约0.0001％-10％蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体包 括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252 和257位置处的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨 基酸残基取代所述位置的氨基酸残基； (b)淀粉酶变体，优选有效量的淀粉酶变体，按该清洗组合物的重 量计更优选约0.0001％-10％淀粉酶变体，其中所述淀粉酶变体选 自： (i)α-淀粉酶，特征在于由α-淀粉酶活性实验测定， 其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下，比活度比的比 活度高至少25％；和/或 (ii)根据(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基 酸序列或与SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀 粉酶，和/或 (iii)根据(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基 酸序列或与SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80％同源的α-淀 粉酶，和/或 (iv)根据(i)的α-淀粉酶，其包含以下N-端氨基酸序列：His- His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr- Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或与N-端中所示的氨基酸序列(SEQ ID No.3)至少80％同源的α-淀粉酶，和/或 (v)根据(i-iv)的α-淀粉酶，其中该α-淀粉酶可由嗜碱的芽孢杆 菌种得到，和/或 (vi)根据(v)的α-淀粉酶，其中该淀粉酶可由NCIB 12289、 NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到，和/或 (vii)α-淀粉酶，其与具有分别对应于SEQ ID No.1、ID No.2 或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出阳性免疫交 叉反应活性，和/或 (viii)母体α-淀粉酶变体，其中母体α-淀粉酶(1)具有分别在 SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一种氨基酸序列，或(2) 表现出与一个或多个所述的氨基酸序列至少80％同源，和/或与具有 一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出免疫交叉反应活 性，和/或由一种DNA序列编码，该DNA序列与编码具有一个所述氨基 酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探针杂交，该变体中：(A)所述 母体α-淀粉酶中缺失至少一个氨基酸残基；和/或(B)所述母体α-淀 粉酶的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基代替；和/或(C)相 对所述的母体α-淀粉酶，插入至少一个氨基酸残基；所述变体具有α -淀粉酶活性并相对所述母体α-淀粉酶表现出至少一种以下性质：提 高了热稳定性、提高了抗氧化的稳定性；降低了对Ca离子的依赖性； 在中性至相对高pH值下提高了稳定性和/或α-淀粉分解活性；在相对 高温下提高了α-淀粉分解活性；和提高或降低了等电点(pI)，以便 使α-淀粉酶变体的pI值更好地与介质的pH匹配；和 (c)一种或多种清洗辅助材料。 本发明还一个方面，提供了一种织物清洗组合物，其包含： (a)蛋白酶变体，优选有效量的蛋白酶变体，按该织物清洗组合 物的重量计更优选约0.0001％-10％蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变 体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、 252和257位置处的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生 的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基； (b)淀粉酶变体，优选有效量的淀粉酶变体，按该清洗组合物的 重量计更优选约0.0001％-10％淀粉酶变体，其中所述淀粉酶变体如 上文所述； (c)按该织物清洗组合物的重量计，至少约5％表面活性剂；和 (d)按该织物清洗组合物的重量计，至少约5％助洗剂。 本发明还一个方面，提供了一种清洗需要被清洁的织物的方法， 其包括将织物与本发明织物清洗组合物接触。 本发明还一个方面，提供了一种洗餐具组合物，其包含： (a)蛋白酶变体，优选有效量的蛋白酶变体，按该织物清洗组合 物的重量计更优选约0.0001％-10％蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变 体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、 252和257位置处的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生 的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基； (b)淀粉酶变体，优选有效量的淀粉酶变体，按该清洗组合物的 重量计更优选约0.0001％-10％淀粉酶变体，其中所述淀粉酶变体如 上文所述；和 (c)按该洗餐具组合物的重量计，约0.1％-10％表面活性剂。 本发明还一个方面，提供了一种清洗需要被清洁的餐具的方法， 其包括将餐具与本发明洗餐具组合物接触。 本发明还一个方面，提供了一种个人清洗组合物，其包含： (a)蛋白酶变体，优选有效量的蛋白酶变体，按该个人清洗组合 物的重量计更优选约0.001％-5％蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体 包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252 和257位置处的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨 基酸残基取代所述位置的氨基酸残基； (b)淀粉酶变体，优选有效量的淀粉酶变体，按该清洗组合物的 重量计更优选约0.0001％-10％淀粉酶变体，其中所述淀粉酶变体如 上文所述；和 (c)按该个人清洗组合物的重量计，约0.1％-95％表面活性剂体 系；和 (d)任选地，按该个人清洗组合物的重量计，约0.05％-50％酶 稳定剂。 本发明还一个方面，提供了一种个人清洗需要被清洁的人体或低 级动物体部分的方法，包括将所述部分与本发明个人清洗组合物接触。 因此，本发明的目的是提供含有蛋白酶变体和淀粉酶变体的组合 的清洗组合物，其能够改善和增强对织物、器皿、餐具、厨具、炊具 和其他硬表面载污体的清洗。本发明还一个目的是通过使用本发明含 蛋白酶变体/淀粉酶变体的清洗组合物来提供清洗织物、器皿、餐具、 厨具、炊具和其他硬表面载污体的方法。 由以下的详细描述、实施例和所附的权利要求书，本发明的这些 和其他目的、特征和优点将是显然的。 除非另外说明，本发明的所有百分数、比例和比率是按重量计。 本文引用的所有文献在此引用作参考。 附图简述 图1A-C描述了淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的DNA和氨基酸 序列和该基因的部分限制图。 图2描述了得自淀粉分解芽孢杆菌(BPN’)和缓慢芽孢杆菌(野 生型)的枯草溶菌素中的保守氨基酸残基。 图3A和3B描述了四种枯草溶菌素的氨基酸序列。上部的线表示 得自淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素(有时还称为枯草溶菌素BPN’)的 枯草溶菌素的氨基酸序列。第二条线描述了得自枯草芽孢杆菌的枯草 溶菌素的氨基酸序列。第三条线描述了得自地衣形芽孢杆菌的枯草溶 菌素的氨基酸序列。第四条线描述了得自缓慢芽孢杆菌的枯草溶菌素 (在PCT WO89/06276中还称为枯草溶菌素309)的枯草溶菌素的氨基 酸序列。符号*表示与枯草溶菌素BPN’相比，不存在特定的氨基酸残基。 发明详述 1.蛋白酶-蛋白酶是通常起到使蛋白质或肽的肽键断开作用的羰 基水解酶。这里所述的“蛋白酶”意思是天然产生的蛋白酶或重组蛋 白酶。天然产生的蛋白酶包括α-氨基酰基肽水解酶、肽基氨基酸水解 酶、酰基氨基水解酶、丝氨酸羧基肽酶、金属羧基肽酶、硫醇蛋白酶、 羧基蛋白酶和金属蛋白酶。包括丝氨酸、金属、硫醇和酸蛋白酶以及 内切和外切蛋白酶。 本发明包括蛋白酶，其是非天然产生的羰基水解酶变体(蛋白酶 变体)，其与产生该变体的氨基酸序列的前体羰基水解酶相比具有不 同的蛋白水解活性、稳定性、基质特异性、pH范围和/或性能特征。 具体而言，这种蛋白酶变体具有在自然界中未发现的氨基酸序列，其 由用不同的氨基酸取代前体蛋白酶的多个氨基酸残基得到。该前体蛋 白酶可以是天然产生的蛋白酶或重组蛋白酶。如先前所述，蛋白酶变 体被设计成具有似胰蛋白酶的特异性并优选还是漂白稳定的。 本发明有用的蛋白酶变体包括任何十九个天然产生的L-氨基酸在 指定氨基酸残基位置处的取代。这种取代可在任何前体枯草溶菌素(原 核生物、真核生物、哺乳动物等)中进行。本申请中，通过普通的1 和3个字母编码的方式来参考各种氨基酸。这种编码确定在Dale，M.W. (1989)，细菌的分子遗传，John Wiley&Sons，Ltd.，附录B中。 本发明有用的蛋白酶变体优选得自枯草芽孢杆菌。更优选，该蛋 白酶变体得自缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素和/或枯草溶菌素309。 羰基水解酶-羰基水解酶是水解含： 键的化合物的蛋白酶，其中X是氧或氮。它们包括天然产生的羰基水 解酶和重组羰基水解酶。天然产生的羰基水解酶主要包括水解酶例如 肽水解酶例如枯草溶菌素或金属蛋白酶。肽水解酶包括α-氨基酰基肽 水解酶、肽基氨基酸水解酶、酰基氨基水解酶、丝氨酸羧基肽酶、金 属羧基肽酶、硫醇蛋白酶、羧基蛋白酶和金属蛋白酶。包括丝氨酸、 金属、硫醇和酸蛋白酶以及内切和外切蛋白酶。 枯草溶菌素-枯草溶菌素是细菌或真菌蛋白酶，其一般起到使蛋 白质或肽的肽键断开的作用。这里所述的“枯草溶菌素”意思是天然 产生的枯草溶菌素或重组枯草溶菌素。一组天然产生的枯草溶菌素已 知是可生产的并通常由各种微生物物种分泌。该组中的枯草溶菌素的 氨基酸序列不完全是同源的。然而，该组中的枯草溶菌素表现出相同 或相似类型的蛋白水解活性。此类丝氨酸蛋白酶具有定义催化三分体 的普通氨基酸序列，它们不同于胰凝乳蛋白酶相关类型的丝氨酸蛋白 酶。该枯草溶菌素和胰凝乳蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶都具有催化三 分体，包括天冬氨酸、组氨酸和丝氨酸。在枯草溶菌素相关的蛋白酶 中，这些氨基酸的相对顺序，从与端羧基相连的氨基读起，是天冬氨 酸-组氨酸-丝氨酸。然而，在胰凝乳蛋白酶相关的蛋白酶中，相对的 顺序是组氨酸-天冬氨酸-丝氨酸。因此，本发明的枯草溶菌素是指具 有枯草溶菌素相关的蛋白酶的催化三分体的丝氨酸蛋白酶。实例包括， 但不限于：在本文的图3中确定的枯草溶菌素。一般，对于本发明目 的，蛋白酶的氨基酸编号对应于在图1中所示的成熟的淀粉分解芽孢 杆菌枯草溶菌素序列给定的编号。 蛋白酶变体-“蛋白酶变体”具有从“前体蛋白酶”的氨基酸序 列衍生得到的氨基酸序列。前体蛋白酶包括天然产生的蛋白酶和重组 蛋白酶。蛋白酶变体的氨基酸序列是通过前体氨基酸序列中的一个或 多个氨基酸的取代、缺失或插入而由前体蛋白酶氨基酸序列“衍生” 得到。这种修饰是对“前体DNA序列”的修饰，其编码了前体蛋白酶 的氨基酸序列，而不是前体蛋白酶本身的操作。这种操作前体DNA序 列的适合方法包括本文中公开的方法以及本领域技术人员公知的方法 (参见，例如EP0328299，WO89/06279和本文已参考的美国专利和申 请)。 在优选的实施方案中，该蛋白酶变体是本发明清洗组合物中有用 的蛋白酶，所述清洗组合物包含下述的蛋白酶变体和一种或多种清洗 辅助材料，所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌 素的103位的氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代 所述位置的氨基酸残基，同时结合在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶 菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、 24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、 75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、 107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、 131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、 166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、 192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、 214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、 237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、 252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、 265、268、269、270、271、272、274和275位置处中的一个或多个 氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨 基酸残基；其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置处的氨 基酸残基的取代时，还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素 的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、 216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置处的一个 或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代。 虽然可使用以上所列的氨基酸取代的任何组合，但本发明适用的 优选的蛋白酶变体包括按下列组合方式的取代、缺失或插入氨基酸残 基： (1)一种蛋白酶变体，其包括在103位置和在以下236和245位 置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (2)一种蛋白酶变体，其包括在103和236位置和在以下12、61、 62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、 185、205、209、210、211、212、213、215、217、230、232、248、 252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基 的取代； (3)一种蛋白酶变体，其包括在103和245位置和在以下12、61、 62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、、170、 183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、222、230、 232、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的 氨基酸残基的取代；和 (4)一种蛋白酶变体，其包括在103、236和245位置和在以下12、 61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、 185、205、209、210、211、212、213、215、217、230、232、243、 248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基 酸残基的取代。 本发明清洗组合物中有用的更优选的蛋白酶变体包括选自以下的 一组取代(下表I中每行一组取代)： 表I 76 98 103 104 76 78 103 104 76 103 104 107 4 76 103 104 76 103 104 246 76 77 103 104 76 103 104 183 218 16 76 103 104 248 1 76 103 104 76 103 104 261 76 103 104 160 76 103 104 216 17 76 103 104 37 76 103 104 76 77 103 104 174 38 76 103 104 38 76 103 104 237 8 76 103 104 76 103 104 183 19 76 103 104 13 76 103 104 19 76 103 104 76 103 104 184 76 103 104 252 76 103 104 259 76 103 104 251 76 86 103 104 72 76 103 104 185 76 103 104 237 274 76 103 104 160 76 103 104 228 55 76 103 104 240 76 103 104 254 76 103 104 204 76 103 104 204 43 76 103 104 76 103 104 159 10 76 103 104 177 58 76 103 104 76 103 104 270 76 103 104 185 27 76 103 104 76 103 104 262 76 78 103 104 24 76 103 104 76 103 104 166 236 251 17 76 103 104 237 76 103 104 130 76 103 104 109 76 99 103 104 204 76 103 104 181 12 76 103 104 76 103 104 212 271 76 103 104 252 261 76 103 104 242 76 103 104 271 12 76 103 104 242 43 76 103 104 116 183 76 103 104 258 76 103 104 271 61 76 103 104 38 76 103 104 182 263 76 103 104 182 272 76 103 104 109 246 76 87 103 104 206 249 265 76 103 104 137 238 271 103 104 228 76 103 104 182 198 21 76 103 104 182 76 103 104 119 137 76 103 104 137 248 13 76 103 104 206 76 103 104 206 76 103 104 212 258 58 76 103 104 271 76 103 104 206 261 4 76 103 104 206 76 77 103 104 206 76 103 104 158 76 103 104 206 4 76 103 104 159 217 251 4 76 103 104 159 217 252 76 77 103 104 133 185 251 76 103 104 159 206 244 4 76 103 104 188 4 76 103 104 158 76 77 103 104 185 76 103 104 206 251 48 76 103 104 111 159 68 76 103 104 159 236 42 76 103 104 159 12 62 76 103 104 159 42 76 103 104 159 76 103 104 146 159 76 103 104 159 238 76 103 104 159 224 76 103 104 212 268 271 76 89 103 104 76 87 103 104 212 271 76 103 104 212 245 271 76 103 104 134 141 212 271 76 103 104 212 236 243 271 76 103 104 109 245 76 103 104 109 210 20 62 76 103 104 68 76 103 104 236 68 76 103 104 159 236 271 68 76 103 104 159 236 245 68 76 103 104 159 217 236 271 17 68 76 103 104 68 76 103 104 68 76 103 104 159 236 68 75 76 103 104 159 236 68 76 76 103 114 121 159 236 245 12 68 76 103 104 159 236 68 76 103 104 159 209 236 253 68 76 103 104 117 159 184 236 68 76 103 104 159 236 243 68 76 103 104 159 236 245 68 76 103 104 142 159 68 76 103 104 123 159 236 249 68 76 103 104 159 236 249 76 103 104 222 245 12 76 103 104 222 249 76 103 104 173 222 76 103 104 222 263 21 76 103 104 222 237 263 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N183D R19L N76D S103A V104I A13V N76D S103A V104I R19C N76D S103A V104I N76D S103A V104I N184D N76D S103A V104I N252D N76D S103A V104I S259C N76D S103A V104I K231T N76D P86S S103A V104I I72V N76D S103A V104I N185D N76D S103A V104I K237E T274A N76D S103A V104I S160L N76D S103A V104I A228V P55S N76D S103A V104I S240T N76D S103A V104I A254T N76D S103A I104N N204T N76D S103A V104I N204D N43S N76D S103A V104I N76D S103A V104I G159D R10H N76D S103A V104I V177A T58S N76D S103A V104I N76D S103A V104I A270V N76D S103A V104I N185D K27N N76D S103A V104I N76D S103A V104I L262M N76D S78P S103A V104I S24P N76D S103A V104I N76D S103A V104I S166G Q236R K251R H17L N76D S103A V104I K237E N76D S103A V104I S130L N76D S103A V104I Q109R N76D S99R S103A V104I N204T N76D S103A V104I D181N Q12R N76D S103A V104I N76D S103A V104I S212P E271V N76D S103A V104I N252K N261Y N76D S103A V104I S242T N76D S103A V104I E271Q Q12R N76D S103A V104I S242T N43S N76D S103A V104I N116K N183I N76D S103A V104I G258R N76D S103A V104I E271G G61R N76D S103A V104I T38S N76D S103A V104I Q182R Y263H N76D S103A V104I Q182R A272S N76D S103A V104I Q109R 1246V N76D S87G S103A V104I Q206R H249Q S265G N76D S103A V104I Q137R N238Y E271V S103A V104I A228T N76D S103A V104I Q182R I198V L21M N76D S103A V104I Q182R N76D S103A V104I M119I Q137R N76D S103A V104I Q137R N248S A13T N76D S103A V104I Q206R N76D S103A V104I Q206R N76D S103A V104I S212P G258R T58S N76D S103A V104I E271G N76D S103A V104I Q206E N261D V4E N76D S103A V104I Q206E N76D N77D S103A V104I Q206E N76D S103A V104I A158E N76D S103A V104I Q206E V4E N76D S103A V104I G159D L217E K251Q V4E N76D S103A V104I G159D L217E N252D N76D N77D S103A V104I A133T N185D K251T N76D S103A V104I G159D Q206E V244A V4E N76D S103A V104I S188E V4E N76D S103A V104I A158E N76D N77D S103A V104I N185D N76D S103A V104I Q206E K251T A48T N76D S103A V104I L111M G159D V68A N76D S103A V104I G159D Q236H L42V N76D S103A V104I G159D Q12H N62H N76D S103A V104I G159D L42I N76D S103A V104I G159D N76D 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V104I G159D V205I Y209W A232V Q236H Q245R T260A V68A S103A V104I G159D V205I Y209W P210I A232V Q236H Q245R S103A V104I G159D V205I Y209W P210I A232V Q236H Q245R L257V S103A V104I G159D V205I Y209W A232V Q236H Q245R L257V V68A S103A V104I G159D V205I Y209W P210I A232V Q236H Q245R T260A S103A V104I G159D V205I Y209W P210I A232V Q236H Q245R S103A V104I G159D Y209W P210I A232V Q236H Q245R S103A V106I G159D V205I P210I A232V Q236H Q245R V68A S103A V104I S128L G159D A232V Q236H Q245R A48V S103A V104I G159D A230V Q236H Q245R A48V V68A S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R A48V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K A48V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V N261W G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K Q12R G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K G102A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V1041 G159D N184S A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I G159D N184G A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A232V Q236H V244T Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A232V Q236H V244A Q245R N248D N252K N62D S103A V104I G159D 7213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S256R Q12R N62D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D N185D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D Q206E A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D T213Q A232V Q236H Q245R N248D N252K A98L G102A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G G102A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H N248D N252K N62D S103A V104I Q109R G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I G159D S212G T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S101G S103A V104I G159D S212G T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A232V Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A230V Q245R N62D S103A V104I S130G G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I S130G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I S128G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I S128L G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S101G S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I S128G G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I S128L G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260A S101G S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K A98V S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S99G S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D P210I A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D V205I A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A230V Q236H Q245R S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K N76D S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A230V A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I G159D N185D Q206E T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K E271Q 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组 取代，其选自除了以下表III的多组取代外的表I中的多组取代： 表III 76 103 104 259 76 86 103 104 76 103 104 130 76 99 103 104 204 76 103 104 242 76 103 104 104 182 198 21 76 103 104 182 76 103 104 119 137 76 103 104 173 222 61 76 103 104 222 68 76 103 104 116 159 170 185 232 236 245 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组 取代，其选自表IV中的多组取代： 表IV 76 103 104 222 245 76 103 104 222 249 68 103 104 159 232 236 245 252 68 76 103 104 159 213 232 236 245 260 22 68 76 103 104 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 68 103 104 140 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 12 76 103 104 130 222 245 261 76 103 104 130 222 245 68 103 104 159 232 236 245 257 68 76 103 104 159 210 232 236 245 68 103 104 159 224 232 236 245 257 76 103 104 159 232 236 245 257 68 76 103 104 159 211 232 236 245 12 68 76 103 104 159 214 232 236 245 68 76 103 104 159 215 232 236 245 12 68 76 103 104 159 232 236 245 20 68 76 103 104 159 232 236 245 259 68 76 87 103 104 159 232 236 245 260 68 76 103 104 159 232 236 245 261 12 48 68 76 103 104 159 232 236 245 76 103 104 159 192 232 236 245 76 103 104 147 159 232 236 245 248 251 12 68 76 103 104 159 232 236 245 272 68 76 103 104 159 183 206 232 236 245 68 76 103 104 159 232 236 245 256 68 76 103 104 159 206 232 236 245 27 68 76 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 109 159 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 159 210 232 236 245 248 252 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 68 103 104 159 213 232 236 245 248 252 68 103 104 213 232 236 245 248 252 68 103 104 159 215 232 236 245 248 252 68 103 104 159 216 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 255 68 103 104 159 232 236 245 248 252 256 68 103 104 159 232 236 245 248 252 260 68 103 104 159 228 232 236 245 248 252 68 76 89 103 104 159 210 213 232 236 245 260 68 103 104 159 218 232 236 245 248 252 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组 取代，其选自表V中的多组取代： 表V V68A S103A V104I G159D A228V A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D N218S A232V Q236H Q245R N248D N252K G20R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A N76D E89D S103A V104I G159D P210L T213R A232V Q236H Q245R T260A V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T255V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256N V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252L V68A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D A215V A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S216T A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S216V A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I T213S A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D P210L A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S212C A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I Q109R G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K G20R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D Y209F A232V Q236H Q245R N248D N252K Q12R N76D S103A I104T S130T M222S Q245R N261D N76D S103A I104T S130T M222S Q245R N76D S103A V104I M222S H249R N76D S103A V104I M222S Q245R N76D S103A V104I G159D Y192F A232V Q236H Q245R N76D S103A V104I V147I G159D A232V Q236H Q245R N248S K251R Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R A272S V68A N76D S103A V104I G159D N183K Q206L A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S256R V68A N76D S103A V104I G159D Q206R A232V Q236H Q245R K27R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R Q12R A48V V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N261W V68A N76D S103A V104I G159D G211R A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D G211V A232V Q236H Q245R Q12R V68A N76D S103A V104I G159D Y214L A232V Q236H Q245R V68A N76D S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R G20R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S259G V68A N76D S87R S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R T260V N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V V68A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A T22K V68A N76D S103A V104I V68A N76D S103A V104I G159D P210R A232V Q236H Q245R V68A S103A V104I G159D S212P A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D T224A A232V Q236H Q245R L257V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R V68A S103A V104I N140D G159D A232V Q236H Q245R N252K N43S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K N43K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N43D V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V 本发明清洗组合物中有用的高度优选的蛋白酶变体包括选自以下 的一组取代： 12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；12/76/103/104/130/170/185/222/243/245； 12/76/103/104/130/222/245/261； 12/76/103/104/130/222/245； 12/76/103/104/222/245； 61/68/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252/270； 68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/230/232/236/245； 68/76/103/104/159/209/232/236/245； 68/103/104/232/236/245/248/257/275； 68/103/104/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/209/232/236/245； 68/76/103/104/159/236； 68/76/103/104/159/236/245； 68/76/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/252； 68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257； 68/76/103/104/159/211/232/236/245； 68/76/103/104/159/215/232/236/245； 68/103/104/159/210/232/236/245； 68/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/103/104/159/236； 68/76/103/104/159/210/232/236/245/260； 68/103/104/159/236/245； 68/103/104/159/183/232/236/245/248/252； 68/76/103/104/159/236/245； 68/103/104/232/236/245/257/275； 68/103/104/159/213/232/236/245； 76/103/222/245； 76/103/104/222/245； 76/103/104/159/232/236/245； 76/103/104/159/213/232/236/245/260； 76/103/104/159； 76/103/104/131/159/232/236/245/248/252； 97/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；98/103/104/159/232/236/245/248/252； 101/103/104/159/232/236/245/248/252； 102/103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/232/236/245； 103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/205/209/232/236/245/257 103/104/159/232/245/248/252； 103/104/159/205/209/210/232/236/245/257； 103/104/159/213/232/236/245/248/252； 103/104/159/217/232/236/245/248/252； 103/104/130/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/230/236/245； 103/104/159/236/245； 103/104/159/248/252/270； 103/104/131/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/205/209/232/236/245；和 103/104/159/232/236/245/257 本发明清洗组合物中有用的更高度优选的蛋白酶变体包括选自以 下的一组取代： 12R/76D/103A/104T/130T/222S/245R； 12R/76D/103A/104I/222S/245R； 12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K； 12R/76D/103A/104T/130G/222S/245R/261D； 12R/76D/103A/104T/130G/170S/185D/222S/243D/245R； 61E/68A/103A/104I/I 59D/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A； 68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 68A/103A/104I/159D/236H； 68A/103A/104I/159D/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A； 68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 68A/76D/103A/104I/159D/236H； 68A/76D/103A/104I/159D/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V； 68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H； 68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H； 68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R； 76D/103A/222S/245R； 76D/103A/104I/222S/245R； 76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 76D/103A/104I/159D； 76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K； 101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252L； 103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/230V/236H/245R； 103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/236H/245R； 103A/104I/159D/248D/252K/270V； 103A/104I/159D/232V/236H/245R； 103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R； 103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V； 103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V； 103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/1041/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V；和 103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K 本发明清洗组合物中有用的甚至更高度优选的蛋白酶变体包括选 自以下的一组取代； 12/76/103/104/130/222/245/261； 62/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/230/232/236/245； 68/103/104/159/209/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257； 68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/183/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/213/232/236/245； 98/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 101/103/104/159/232/236/245/248/252； 102/103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/230/236/245； 103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/217/232/236/245/248/252； 103/104/130/159/232/236/245/248/252； 103/104/131/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/213/232/236/245/248/252；和 103/104/159/232/236/245. 本发明清洗组合物中有用的最高度优选的蛋白酶变体包括选自以 下的一组取代： 12R/76D/103A/104T/130T/222S/245R/261D； 62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V； 68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/1041/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R； 98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K； 101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/230V/236H/245R； 103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 1D3A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；和 103A/104I/159D/232V/236H/245R. 在另一优选的实施方案中，该蛋白酶变体是本发明清洗组合物中 有用的蛋白酶，该蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶 菌素的62、212、230、232、252和257位置中的一个或多个氨基酸 残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残 基。 虽然可使用以上所列的氨基酸取代的任何组合，但本发明适用的 优选的蛋白酶变体包括按下列组合方式的取代、缺失或插入氨基酸残 基： (1)一种蛋白酶变体，其包括在62位置和在以下103、104、109、 159、213、232、236、245、248和252位置中的一个或多个位置处的 氨基酸残基的取代； (2)一种蛋白酶变体，其包括在212位置和在以下12、98、102、 103、104、159、232、236、245、248和252位置中的一个或多个位 置处的氨基酸残基的取代； (3)一种蛋白酶变体，其包括在230位置和在以下68、103、104、 159、232、236和245位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取 代； (4)一种蛋白酶变体，其包括在232位置和在以下12、61、62、 68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、 257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取 代； (5)一种蛋白酶变体，其包括在232位置和在以下103、104、236 和245位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (6)一种蛋白酶变体，其包括在232和103位置和在以下12、61、 62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、 183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、 252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基 的取代； (7)一种蛋白酶变体，其包括在232和104位置和在以下12、61、 62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、 183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、 252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基 的取代； (8)一种蛋白酶变体，其包括在232和236位置和在以下12、61、 62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、 183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、 252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基 的取代； (9)一种蛋白酶变体，其包括在232和245位置和在以下12、61、 62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、 183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、 252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基 的取代； (10)一种蛋白酶变体，其包括在232、103、104、236和245位 置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、 130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、 236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位 置处的氨基酸残基的取代； (11)一种蛋白酶变体，其包括在252位置和在以下12、61、62、 68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、 210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多 个位置处的氨基酸残基的取代； (12)一种蛋白酶变体，其包括在252位置和在以下103、104、236 和245位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (13)一种蛋白酶变体，其包括在252和103位置和在以下12、61、 62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一 个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (14)一种蛋白酶变体，其包括在252和104位置和在以下12、61、 62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一 个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (15)一种蛋白酶变体，其包括在252和236位置和在以下12、61、 62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一 个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (16)一种蛋白酶变体，其包括在252和245位置和在以下12、61、 62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、 185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一 个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (17)一种蛋白酶变体，其包括在252、103、104、236和245位 置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、 131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248 和270位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代； (18)一种蛋白酶变体，其包括在257位置和在以下68、103、104、 205、209、210、232、236、245和275位置中的一个或多个位置处的 氨基酸残基的取代。 本发明清洗组合物中有用的更优选的蛋白酶变体包括选自以下的 一组取代(下表VI中每行一组取代)： 表VI 76 103 104 212 271 76 103 104 252 261 76 103 104 212 258 4 76 103 104 159 217 252 12 62 76 103 104 159 76 103 104 212 268 271 76 87 103 104 212 271 76 103 104 212 245 271 76 103 104 134 141 212 271 76 103 104 212 236 243 271 20 62 76 103 104 68 76 103 104 159 232 236 245 76 103 104 232 245 24 68 76 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 232 236 245 252 68 76 103 104 159 213 232 236 245 260 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 68 103 104 140 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 43 68 103 104 159 232 236 245 252 68 87 103 104 159 232 236 245 252 275 68 103 104 159 232 236 245 257 68 103 104 116 159 232 236 245 68 103 104 159 232 236 245 248 10 68 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 203 232 236 245 68 103 104 159 232 236 237 245 68 76 79 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 183 232 236 245 68 103 104 159 174 206 232 236 245 68 103 104 159 188 232 236 245 68 103 104 159 230 232 236 245 68 98 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 215 232 236 245 68 103 104 159 232 236 245 248 68 76 103 104 159 232 236 245 68 76 103 104 159 210 232 236 245 68 76 103 104 159 232 236 245 257 76 103 104 232 236 245 257 68 103 104 159 232 236 245 257 275 76 103 104 257 275 68 103 104 159 224 232 236 245 257 76 103 104 159 232 236 245 257 68 76 103 104 159 209 232 236 245 68 76 103 104 159 211 232 236 245 12 68 76 103 104 159 214 232 236 245 68 76 103 104 159 215 232 236 245 12 68 76 103 104 159 232 236 245 20 68 76 103 104 159 232 236 245 259 68 87 76 103 104 159 232 236 245 260 68 76 103 104 159 232 236 245 261 76 103 104 232 236 242 245 68 76 103 104 159 210 232 236 245 12 48 68 76 103 104 159 232 236 245 76 103 104 232 236 245 76 103 104 159 192 232 236 245 76 103 104 147 159 232 236 245 248 251 12 68 76 103 104 159 232 236 245 272 68 76 103 104 159 183 206 232 236 245 68 76 103 104 159 232 236 245 256 68 76 103 104 159 206 232 236 245 27 68 76 103 104 159 232 236 245 68 76 103 104 116 159 170 185 232 236 245 61 68 103 104 159 232 236 245 248 252 43 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 68 103 104 99 159 184 232 236 245 248 252 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 109 159 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 261 68 103 104 159 185 232 236 245 248 252 68 103 104 159 210 232 236 245 248 252 68 103 104 159 185 210 232 236 245 248 252 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 68 103 104 159 213 232 236 245 248 252 68 103 104 213 232 236 245 248 252 68 103 104 159 215 232 236 245 248 252 68 103 104 159 216 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 173 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 251 252 68 103 104 159 206 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 55 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 255 68 103 104 159 232 236 245 248 252 256 68 103 104 159 232 236 245 248 252 260 68 103 104 159 232 236 245 248 252 257 68 103 104 159 232 236 245 248 252 258 8 68 103 104 159 232 236 245 248 252 269 68 103 104 116 159 232 236 245 248 252 260 68 103 104 159 232 236 245 248 252 261 68 103 104 159 232 236 245 248 252 261 68 76 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 232 236 245 248 252 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 18 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 76 101 103 104 159 213 218 232 236 245 260 68 103 104 159 228 232 236 245 248 252 33 68 76 103 104 159 232 236 245 248 252 68 76 89 103 104 159 210 213 232 236 245 260 61 68 76 103 104 159 232 236 245 248 252 103 104 159 205 210 232 236 245 61 68 103 104 130 159 232 236 245 248 252 61 68 103 104 133 137 159 232 236 245 248 252 61 103 104 133 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 218 232 236 245 248 252 61 68 103 104 159 160 232 236 245 248 252 3 61 68 76 103 104 232 236 245 248 252 61 68 103 104 159 167 232 236 245 248 252 97 103 104 159 232 236 245 248 252 98 103 104 159 232 236 245 248 252 99 103 104 159 232 236 245 248 252 101 103 104 159 232 236 245 248 252 102 103 104 159 232 236 245 248 252 103 104 106 159 232 236 245 248 252 103 104 109 159 232 236 245 248 252 103 104 159 232 236 245 248 252 261 62 103 104 159 232 236 245 248 252 103 104 159 184 232 236 245 248 252 103 104 159 166 232 236 245 248 252 103 104 159 217 232 236 245 248 252 20 62 103 104 159 213 232 236 245 248 252 62 103 104 159 213 232 236 245 248 252 103 104 159 206 217 232 236 245 248 252 62 103 104 159 206 232 236 245 248 252 103 104 130 159 232 236 245 248 252 103 104 131 159 232 236 245 248 252 27 103 104 159 232 236 245 248 252 38 103 104 159 232 236 245 248 252 38 76 103 104 159 213 232 236 245 260 68 76 103 104 159 213 232 236 245 260 271 68 76 103 104 159 209 213 232 236 245 260 68 76 103 104 159 210 213 232 236 245 260 68 76 103 104 159 205 213 232 236 245 260 68 76 103 104 159 210 232 236 245 260 68 103 104 159 213 232 236 245 260 76 103 104 159 213 232 236 245 260 68 103 104 159 209 232 236 245 68 103 104 159 210 232 236 245 68 103 104 159 230 232 236 245 68 103 104 159 126 232 236 245 68 103 104 159 205 232 236 245 68 103 104 159 210 232 236 245 103 104 159 230 236 245 68 103 104 159 232 236 245 260 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 174 232 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A230V Q236H Q245R A48V V68A S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R A48V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K A48V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V N261W G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K Q12R G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K G102A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I G159D N184S A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I G159D N184G A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A232V Q236H V244T Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A232V Q236H V244A Q245R N248D N252K N62D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S256R Q12R N62D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D N185D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D Q206E A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D T213Q A232V Q236H Q245R N248D N252K A98L G102A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G G102A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H N248D N252K N62D S103A V104I Q109R G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I G159D S212G T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S101G S103A V104I G159D S212G T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A232V Q245R N248D N252K S103A V104I G159D A230V Q245R N62D S103A V104I S130G G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I S130G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I S128G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I S128L G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S101G S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I S128G G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I S128L G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260A S101G S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K A98V S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S99G S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D P210I A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D V205I A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A230V Q236H Q245R S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K N76D S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K S101G S103A V104I G159D A230V A232V Q236H Q245R N248D N252K N62D S103A V104I G159D N185D Q206E T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K E271Q 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组 取代，其选自除了以下表VIII的取代组外的表VI中的多组取代： 表VIII 68 76 103 104 116 159 170 185 232 236 245 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组 取代，其选自表IX中的多组取代： 表IX 68 103 104 159 232 236 245 252 68 76 103 104 159 213 232 236 245 260 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 68 103 104 140 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 252 43 68 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 232 236 245 257 68 76 103 104 159 210 232 236 245 68 103 104 159 224 232 236 245 257 76 103 104 159 232 236 245 257 68 76 103 104 159 211 232 236 245 12 68 76 103 104 159 214 232 236 245 68 76 103 104 159 215 232 236 245 12 68 76 103 104 159 232 236 245 20 68 76 103 104 159 232 236 245 259 68 76 87 103 104 159 232 236 245 260 68 76 103 104 159 232 236 245 261 12 48 68 76 103 104 159 232 236 245 76 103 104 159 192 232 236 245 76 103 104 147 159 232 236 245 248 251 12 68 76 103 104 159 232 236 245 272 68 76 103 104 159 183 206 232 236 245 68 76 103 104 159 232 236 245 256 68 76 103 104 159 206 232 236 245 27 68 76 103 104 159 232 236 245 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 109 159 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 209 232 236 245 248 252 68 103 104 159 210 232 236 245 248 252 68 103 104 159 212 232 236 245 248 252 68 103 104 159 213 232 236 245 248 252 68 103 104 213 232 236 245 248 252 68 103 104 159 215 232 236 245 248 252 68 103 104 159 216 232 236 245 248 252 20 68 103 104 159 232 236 245 248 252 68 103 104 159 232 236 245 248 252 255 68 103 104 159 232 236 245 248 252 256 68 103 104 159 232 236 245 248 252 260 68 103 104 159 228 232 236 245 248 252 68 76 89 103 104 159 210 213 232 236 245 260 68 103 104 159 218 232 236 245 248 252 本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组 取代，其选自表X中的多组取代： 表X V68A S103A V104I G159D A228V A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D N218S A232V Q236H Q245R N248D N252K G20R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A N76D E89D S103A V104I G159D P210L T213R A232V Q236H Q245R T260A V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T255V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256N V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252L V68A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D A215V A232V Q236H Q245R N248D N252K V68A S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R N248D N252K N43D V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V 本发明清洗组合物中有用的高度优选的蛋白酶变体包括选自以下 的一组取代： 12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；61/68/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/232/236/245/248/252/270； 68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/230/232/236/245； 68/76/103/104/159/209/232/236/245； 68/103/104/232/236/245/248/257/275； 68/103/104/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/209/232/236/245； 68/76/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/252； 68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257； 68/76/103/104/159/211/232/236/245； 68/76/103/104/159/215/232/236/245； 68/103/104/159/210/232/236/245； 68/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/76/103/104/159/210/232/236/245/260； 68/103/104/159/183/232/236/245/248/252； 68/103/104/232/236/245/257/275； 68/103/104/159/213/232/236/245； 76/103/104/159/232/236/245； 76/103/104/159/213/232/236/245/260； 76/103/104/131/159/232/236/245/248/252； 97/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；101/103/104/159/232/236/245/248/252； 102/103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/232/236/245； 103/104/159/248/252/270； 103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/205/209/232/236/245/257 103/104/159/232/245/248/252； 103/104/159/205/209/210/232/236/245/257； 103/104/159/213/232/236/245/248/252； 103/104/159/217/232/236/245/248/252； 103/104/130/159/232/236/245/248/252； 103/104/131/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/205/209/232/236/245；和 103/104/159/232/236/245/257. 本发明清洗组合物中有用的更高度优选的蛋白酶变体包括选自以下的 一组取代： 12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K； 61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A； 68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/1041/159D/209W/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V； 68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/2I0L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R； 68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H； 68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H； 68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R； 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A； 76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R； 76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A； 97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K； 101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/248D/252K/270V； 103A/104I/159D/232V/236H/245R； 103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R； 103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V； 103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V； 103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K； 103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V；和 103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K. 重组蛋白酶/重组枯草溶菌素-“重组蛋白酶”或“重组枯草溶菌 素”是指其中分别编码天然产生的蛋白酶或枯草溶菌素的DNA序列被 修饰产生突变DNA序列的蛋白酶或枯草溶菌素，所述突变DNA序列编 码了蛋白酶或枯草溶菌素氨基酸序列中的一个或多个氨基酸的取代、 插入或缺失。适合的修饰方法公开在本文和美国专利RE34606， US5204015和5185258中。 非人体蛋白酶/非人体枯草溶菌素-“非人体蛋白酶”或“非人体 枯草溶菌素”和编码它们的DNA可由许多原核生物和真核生物得到。 原核生物的适合实例包括革兰氏阴性生物例如大肠杆菌或假单胞菌和 革兰氏阳性细菌例如微球菌或芽孢杆菌。可由其得到羰基水解酶和它 们的基因的真核生物的实例包括酵母例如啤酒糖酵母，真菌例如曲霉 属和非人类的哺乳动物源例如牛物种，由其可得到编码蛋白凝乳酶或 枯草溶菌素凝乳酶的基因。可从各种相关的物种得到一系列蛋白酶和/ 或枯草溶菌素，该系列物种之间具有不完全同源的氨基酸序列，但尽 管如此仍表现出相同或相似类型的生物活性。因此，本文使用的非人 体蛋白酶或非人体枯草溶菌素具有一种功能定义，其分别称为蛋白酶 或枯草溶菌素，其直接或间接与原核和真核生物源相关。 变异的DNA序列-编码这种蛋白酶或枯草溶菌素变体的变异的DNA 序列是由编码天然产生的或重组前体酶的前体DNA序列衍生得到。该 变异的DNA序列是由修饰前体DNA序列衍生得到，其编码了由前体DNA 序列编码的对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位置的一个或 多个特定氨基酸残基的取代，同时结合淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素 的以下1、3、4、8、10、12、13、15、16、17、18、20、21、22、24、 25、27、33、37、38、42、43、48、55、57、61、62、68、72、75、 76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、 107、109、111、114、115、116、117、119、121、123、128、130、 131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、 161、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、 188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、 213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、 236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、 251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、 263、265、268、269、270、271、272、274和275位置处的一个或多 个氨基酸残基的取代；其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76 位置处的氨基酸残基的取代时，还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌 枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、 206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位 置处的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代。尽管在本 文确认用于修饰的氨基酸残基是根据淀粉分解芽孢杆菌应用的编号来 确定(其已成为确定在所有枯草溶菌素中的残基位置的常规方法)， 但本发明适用的优选的前体DNA序列是如图3中所示的缓慢芽孢杆菌 的DNA序列。 在优选的实施方案中，这些变异的DNA序列编码了对应于淀粉分 解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位置的氨基酸残基的取代、插入或缺失， 同时结合淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的以下1、3、4、8、9、10、12、 13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、 48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、 89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、 117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、 141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、 177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、 205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、 222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、 244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、 257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、 272、274和275位置处的一个或多个其他氨基酸残基的取代、插入或 缺失；其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置处的氨基酸 残基的取代时，还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的 27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、 217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置处的一个或多 个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代。更优选，这些变异DNA序 列编码本文描述的蛋白酶变体。 在另一优选的实施方案中，这些变异的DNA序列编码了对应于淀 粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置 的一个或多个氨基酸残基的取代、插入或缺失。更优选这些变异的DNA 序列编码了本文描述的蛋白酶变体。 尽管在本文确认用于修饰的氨基酸残基是根据淀粉分解芽孢杆菌 应用的编号来确定(其已成为确定在所有枯草溶菌素中的残基位置的 常规方法)，但本发明适用的优选的前体DNA序列是如图3中所示的 缓慢芽孢杆菌的DNA序列。 这些重组DNA序列编码了具有新氨基酸序列的蛋白酶变体，并且 一般至少有一种性质显著地不同于由前体蛋白酶DNA序列编码的酶的 同一性质。这种性质包括蛋白水解活性、基质特异性、稳定性、变化 的pH范围和/或增强的性能特征。 本文描述了对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位置的特 定取代，同时结合以下1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、 20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、 62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、 102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、 126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、 158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、 184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、 211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、 230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、 248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、 261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置 中的一个或多个位置的取代；其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103 和76位置处的氨基酸残基的取代时，还存在在非对应于27、99、101、 104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、 222、260、265或274位的氨基酸残基位置处的一个或多个氨基酸残 基位置处的氨基酸残基的取代，其中编号的位置对应于来自淀粉分解 芽孢杆菌的天然产生的枯草溶菌素或对应于在其他羰基水解酶或枯草 溶菌素(例如缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素)中的相当氨基酸残基。另外， 本文描述了对应于以下62、212、230、232、252和257位置中的一 个或多个位置的特定取代，其中编号的位置对应于来自淀粉分解芽孢 杆菌的天然产生的枯草溶菌素或对应于在其他羰基水解酶或枯草溶菌 素(例如缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素)中的相当氨基酸残基。这些氨基 酸位置编号是指编排在图1中表示的成熟淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌 素序列的那些。然而，本发明不限于使用该特定枯草溶菌素的突变， 而是延伸到在“相当于”与淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素中特别确定 的残基位置处含有氨基酸残基的前体蛋白酶。在本发明优选的实施方 案中，前体蛋白酶是缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素和在缓慢芽孢杆菌中对 应于以上所列的那些相当氨基酸残基处进行取代、缺失或插入。 若是同源的(即对应于一级或三级结构中的位置)或类似于淀粉 分解芽孢杆菌枯草溶菌素中的特定残基或部分特定残基(即在化学上 具有相同或相似的结合、反应或相互作用的功能)，则前体蛋白酶的 残基(氨基酸)相当于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的残基。 为了确定与一级结构的同源性，直接将前体蛋白酶的氨基酸序列 与淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的一级序列相比，特别是与已知序列 的枯草溶菌素中不变的一组已知残基相比。例如，本文图2说明了在 淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素和缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素之间保守残 基。在排列保守残基后，允许必要的插入和缺失以保持排列(即避免 通过任意的缺失和插入而消除保守残基)，确定与淀粉分解芽孢杆菌 枯草溶菌素的一级序列中的特定氨基酸相当的残基。保守残基的排列 优选应当保守100％这种残基。然而，有大于75％或少至50％保守残 基的排列也足以确定相当残基。应当维持催化三分体， Asp32/His64/Ser221的保守。 例如，在图3中，排列了从淀粉分解芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、 地衣形芽孢杆菌(carlsbergensis)和缓慢芽孢杆菌得到的枯草溶菌 素的氨基酸序列以提供在氨基酸序列间最大量的同源性。这些序列的 比较表明存在许多含在各序列中的保守残基。在图2中确定了这些保 守残基(如BPN’和缓慢芽孢杆菌之间)。 因此这些保守残基可用于确定相应的缓慢芽孢杆菌的相当氨基酸 残基(PCT公开号WO89/06279，1989年7月13日公布)、本发明优 选的蛋白酶前体酶或称为PB92的枯草溶菌素(EP0328299)，其与优 选的缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素高度同源。这些中的一些枯草溶菌素的 氨基酸序列被排列在图3A和3B中，其中列出了产生保守残基的最大 同源性的淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的序列。可以看出，与淀粉分 解芽孢杆菌枯草溶菌素相比，在缓慢芽孢杆菌序列中存在许多缺失。 因此，例如在其他枯草溶菌素中与淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素中的 Val 165相当的氨基酸，对于缓慢芽孢杆菌和地衣形芽孢杆菌是异亮 氨酸。因此，例如在淀粉分解芽孢杆菌和缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素中 的+76位置的氨基酸是天冬酰胺(N)。然而，在本发明蛋白酶变体中， 相当于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的+76位置的氨基酸被天冬氨酸 (D)取代。本发明中所有氨基酸的缩写和一种字母编号符合Patentin 使用手册(GenBank，Mountain View，CA)，1990，第101页。 也可通过测定前体蛋白酶的三级结构水平的同源性来确定“相当 残基”，前体蛋白酶的三级结构是通过X-射线晶体学来测定。相当残 基被定义为以下的那些：前体蛋白酶和淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素 的特定氨基酸残基的两个或多个主链原子的原子坐标(N对N，CA对CA， C对C和O对O)在排列之后是在0.13nm内，优选0.1nm内。在最好 的模型被定位和放置得到最大覆盖关于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素 的蛋白酶的非氢蛋白质原子的原子坐标后之后，才获得排列。最好的 模型是晶体学模型，其在可得到的最高分辨率下给出了实验衍射数据 的最低R因子： 功能类似于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的特定残基的相当残基 被定义为那些下述的前体蛋白酶的氨基酸：其可采取一定的构型使得 它们改变、改善或有助于蛋白质的结构、结合基质或催化，这是以一 种确认的方式和归结于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的特定残基的原 因。另外，它们是占据类似位置至一定程度的前体蛋白酶的那些残基 (已由X-射线晶体学得到三级结构)，使得按占据同源位置为基础计， 虽然给定残基的主链原子可能不满足等价标准，但该残基的至少两个 侧链原子的原子坐标落在淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的相应侧链原 子的0.13nm内。淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的三维结构的坐标在EPO 公开号0251446(等同于美国专利5182204，其公开内容在本文引用作 参考)中给出并可按以上概述用于测定在三级结构水平上的相当残基。 确认用于取代、插入或缺失的一些残基是保守残基，而其他的不 是。在残基不被保守的情况下，取代一个或多个氨基酸是受限于这样 的取代：其产生的变体的氨基酸序列不对应于自然界中发现的一种。 在保守残基的情况中，这种取代不应当导致天然产生的序列。本发明 蛋白酶变体包括成熟的蛋白酶变体形式以及这种蛋白酶变体的原体和 前体形式。该前体形式是优选的结构，因为这有助于蛋白酶变体的表 达、分泌和成熟。 “原序列”指的是与成熟形式的蛋白酶的N-端部分相连的氨基酸 序列，当其除去时，得到了“成熟”形式的蛋白酶状态。在自然界中 发现许多蛋白水解酶为翻译酶原产品，在不存在后翻译加工下，其按 此方式表达。产生蛋白酶变体的优选原序列是淀粉分解芽孢杆菌枯草 溶菌素的推定的原序列，但可使用其他的蛋白酶原序列。 “信号序列”或“前序列”指的是与蛋白酶的N’端部分或蛋白酶 原的N-端部分相连的任何氨基酸序列，其可参与成熟或原体形式的蛋 白酶的分泌。信号序列的此定义是一种功能性的定义，意思是包括由 蛋白酶基因的N-端部分编码的所有那些氨基序列，其参与在自然条件 下的蛋白酶分泌的实施。本发明使用这种序列以实现本文定义的蛋白 酶变体的分泌。一种可能的信号序列包括来自枯草芽孢杆菌枯草溶菌 素的信号序列的头七个氨基酸残基并合到来自缓慢芽孢杆菌 (ATCC21536)的枯草溶菌素的信号序列的其余部分上。 “前体”形式的蛋白酶变体由成熟形式的蛋白酶组成，该成熟形 式的蛋白酶具有与蛋白酶的氨基端可操作连接的原序列和与该原序列 的氨基端可操作连接的“前”或“信号”序列。 “表达载体”指的是含有可操作连接适合的控制序列的DNA序列 的DNA构建物，所述控制序列能够实现所述DNA在适合宿主中的表达。 这种控制序列包括转录的启动子、控制这种转录的选择性的操纵基因 序列、编码适合的控制转录和翻译的mRNA核糖体结合部位和序列。该 载体可以是质粒、噬菌粒或简单潜在的基因组插入片段。一旦转化至 适合的宿主中，该载体可独立地复制和起作用或宿主基因组在某些情 况下可整合到基因组本身中。在本说明书中，“质粒”和“载体”有 时相互交换使用，因为质粒是目前最通常使用的载体形式。然而，本 发明预期包括这种其他形式的表达载体，其具有等价的功能并是或成 为现有技术中已知的。 本发明使用的“宿主细胞”一般是原核生物或真核生物宿主，其 优选用美国专利RE34606中公开的方法控制使用，以使它们不能酶催 分泌活性的内切蛋白酶。表达蛋白酶的优选的宿主细胞是芽孢杆菌 属菌株BG2036，在酶催活性的中性蛋白酶和碱性蛋白酶(枯草溶菌 素)中其是缺损的。菌株BG2036的构建详细地描述在美国专利5264366 中。表达蛋白酶的其他宿主细胞包括枯草芽孢杆菌168(还描述在 美国专利RE34606和美国专利5264366中，其公开内容在本文引用 作参考)以及任何适合的芽孢杆菌菌株例如地衣形芽孢杆菌、缓慢芽 孢杆菌等。 用重组DNA技术构建的载体转化或转染宿主细胞。这种被转化的 宿主细胞能够复制编码蛋白酶变体或表达所需的蛋白酶变体的载体。 在编码前体形式的蛋白酶变体的载体的情况下，这种变体当被表达时 一般是从宿主细胞分泌到宿主细胞介质中。 当描述两个DNA区之间的关系时，“可操作连接”简单地意思是 它们彼此间功能相关。例如，原序列如果作为一种信号序列的话与肽 可操作连接，参与成熟形式的蛋白酶的分泌，多半可能包括信号序列 的断开。启动子如果控制编码序列的转录的话，其与编码序列可操作 连接，核糖体结合部位如果其处的位置允许翻译的话，其与编码序列 可操作连接。 根据本领域技术人员已知的一般方法可得到编码天然产生的前体 蛋白酶的基因。该方法一般包括合成标记的探针，其具有编码感兴趣 的蛋白酶区域的推定的序列，从表达蛋白酶的有机体制备基因组文库， 通过与探针杂交筛分该文库得到感兴趣的基因。然后绘制和排序正杂 交克隆。 克隆的蛋白酶然后用于转化宿主细胞，以便表达该蛋白酶。该蛋 白酶基因然后被连接入高拷贝数目的质粒中。该质粒在宿主中复制， 在这种意义上其含有质粒复制必要的公知要素：一种与所述的基因可操 作连接的启动子(其可作为该基因自身同源的启动子提供，如果其被 确认，即由宿主转换的话)，转录终止和聚腺苷酸化区域(对由宿主 从某些真核宿主细胞中的蛋白酶基因转换的mRNA的稳定性是必要的) 其是外源的或由蛋白酶基因的内源终止区提供，最好选择基因例如抗 生素抗性基因通过在含抗生素的介质中生长能够连续地培养维持质粒 感染的宿主细胞。高拷贝数目的质粒还含有宿主的复制源，由此使得 多数质粒在细胞质中生殖而不受染色体的限制。然而，在本发明范围 内是将多次将蛋白酶基因拷贝整合到宿主基因组中。这被原核生物和 真核生物促进，它们对同源重组特别敏感。该基因可以是天然的缓慢 芽孢杆菌基因。另外，可生产编码天然产生的或突变前体蛋白酶的合 成基因。在这种方法中，确定了前体蛋白酶的DNA和/或氨基酸序列。 在下文合成了多重重叠合成的单链DNA片段，其经杂交和连接产生编 码前体蛋白酶的合成DNA。合成基因构建的实例在美国专利5204105 的实施例3中列出，其公开内容在本文引用作参考。 一旦天然产生或合成前体蛋白酶基因被克隆，就进行多种修饰以 增加不能合成天然产生的前体蛋白酶的基因的使用。这种修饰包括生 产重组蛋白酶如美国专利RE34606和EPO公开号0251446中所述和生 产本文描述的蛋白酶变体。 可使用以下盒式诱变方法来促进本发明蛋白酶变体的构建，但也 可使用其他方法。首先，得到编码蛋白酶的天然产生的基因，其是完 整的或部分序列。然后在该序列中寻找到一理想的点，以在被编码的 酶中对一个或多个氨基酸进行突变(缺失、插入或取代)。在有用寡 核苷酸库替代短基因碎片的限制部位存在下，评价旁侧所述点位的序 列，所述寡核苷酸库当被表达时将编码各种突变体。这种限制部位优 选是在蛋白酶基因中的独特部位，以便促使基因碎片的替代。然而， 可使用在蛋白酶基因中不过分多余的任何适宜限制部位，条件是由限 制消化产生的基因碎片可以适当的序列重装配。如果在离所选择的点 的适宜距离(从10-15个核苷酸)内的位置处不存在限制部位，则以 一定的方式通过取代基因中的核苷酸而产生这种部位，所述方式是使 得读框或编码的氨基酸在最终结构中都不改变。为改变其序列以符合 所要求序列的基因突变是根据一般公知的方法由M13引子扩展完成。 确定适合的旁侧区域和评价达到两种适宜的限制部位序列所需的变 化，这两方面工作通常是由多余的遗传密码、基因的限制酶图和大量 的不同限制性酶来完成。注意到若适宜的旁侧限制部位可得到，以上 方法的使用仅与不含所述部位的旁侧区域有关。 一旦天然产生的DNA或合成DNA被克隆，旁侧被突变的位置的限 制部位就用相关限制性酶消化并且多个末端互补的寡核苷酸盒被连接 到基因中。通过该方法简化了诱变，因为可合成所有的寡核苷酸，以 便具有相同的限制部位，和不需要合成连接物来产生限制部位。这里 使用的蛋白水解活性被定义为每毫克活性酶的肽键水解速率。存在测 定蛋白水解活性的许多公知方法(K.M.Kalisz，“微生物蛋白酶”， 高等生物化学工程/生物技术A.Fiechter等，1988)。除此之外或 作为改性的蛋白水解活性的替代，本发明变异体酶具有许多其他的改 性性质例如Km，kcat，kcat/Km比例和/或具体改性的基质和/或改性的 pH活性范围。这些酶可适合特定的基质，所述基质例如在制备肽中或 对于水解过程例如洗衣应用中是预期存在的。 本发明的一方面，目的是保证变体蛋白酶具有与前体蛋白酶相比 改变的蛋白水解活性，由于增加了这种活性(数值上较大)能够使酶 更有效地作用于目标基质。还有利的是与前体相比具有改变的热稳定 性和/或改变的基质特异性的变异体酶。在一些情况下，较低的蛋白水 解活性可能是理想的，例如当蛋白酶的合成活性是理想时，蛋白水解 活性的降低是有用的(如用于合成肽)。一种情况可能希望降低此蛋 白水解活性，其能够破坏这种合成的产品。相反，在一些情况下，可 能需要增加变体酶相对其前体的蛋白水解活性。此外，可能需要增加 或降低(改变)变异体的稳定性，无论是碱性或热稳定性。Km，kcat或 kcat/Km的增加或降低对用于测定这些动力学参数的基质是特定的。 本发明的另一方面，已确定在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌 素的103位置的取代，同时结合以下1、3、4、8、9、10、12、13、16、 17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、 57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、 98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、 121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、 146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、 182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、 209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、 227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、 246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、 259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274 和275位置中的一个或多个位置的取代对调整酶的总稳定性和/或蛋白 水解活性是重要的。 本发明的另一方面，已确定在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌 素的以下62、212、230、232、252和257位中的一个或多个位置处 的取代对调整酶的总稳定性和/或蛋白水解活性也是重要的。 这些取代优选在缓慢芽孢杆菌(重组或天然类型的)枯草溶菌素 中进行，尽管在任何芽孢杆菌蛋白酶中也可以进行取代。 根据变体蛋白酶得到的筛分结果，注意到在淀粉分解芽孢杆菌枯 草溶菌素中的突变对于这些酶的蛋白水解活性、性能和/或稳定性和对 这种变体酶的清洗或洗涤性能都是重要的。 制备本发明洗涤剂和清洗组合物中使用的酶的方法和步骤是已知 的并披露在PCT申请号WO95/10615中。 本发明酶具有似胰蛋白酶的特异性。即本发明酶水解蛋白质是通 过优先断开带电荷的氨基酸残基的肽键，更具体地是例如精氨酸和赖 氨酸的残基，而不优先断开疏水氨基酸残基的肽键，更具体地是苯基 丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。具有后者情况的酶具有似胰凝乳蛋白酶的 特异性。以上所述的基质特异性由酶对两种合成基质的作用来说明。 具有似胰蛋白酶特异性的蛋白酶要优先于合成基质suCAAPF-pNA水解 合成基质bVGR-pNA。相反，似胰凝乳蛋白酶的蛋白酶水解前者要比后 者更快。对于本发明目的而言，使用以下方法定义本发明蛋白酶的似 胰蛋白酶的特异性。 将pH为10和在温度25℃下的固定量的甘氨酸缓冲液加入标准 10ml试管中。将要测试的0.5ppm活性酶加入该试管中。将每ml缓冲 溶液大约1.25mg合成基质加入试管中。使该混合物在25℃下培养15 分钟。培养阶段完成时，向混合物中以每ml缓冲液0.5mg量加入酶 抑制剂，PMSF。在410nm波长处读取混合物的吸光度或OD值。该吸 光度则表示酶对合成基质的活性。吸光度越大，对基质的活性水平越 高。 为了测定各酶的特异性，可将对两种合成基质蛋白质的吸光度转 化成特异性比值。对于本发明目的，由下式确定特异性比值： [对sAAPF-pNA的活性]/[对bVGR-pNA的活性] 则具有比值低于约10，更优选低于约5，最优选低于约2.5的酶 被认为证明有似胰蛋白酶的活性。 这种变体一般具有至少一种性质不同于得到变体的氨基酸序列的 蛋白酶前体的同一种性质。 本发明的一方面是用于处理织物、器皿、餐具、厨具、炊具和其 他硬表面底物的组合物，例如洗涤剂和清洗组合物，其包括一种或多 种本发明的变体蛋白酶。含蛋白酶的组合物可用于处理例如丝绸或羊 毛以及其他类型的织物，如公开文献例如RD216034，EP134267， US4533359和EP344259中所述；和处理器皿、餐具、厨具、炊具和其 他硬表面底物如公开文献例如美国专利5478742，US5346822， US5679630和US5677272中所述。 II.淀粉酶变体-用于本发明的淀粉酶变体包括，但不限于：描述 在WO95/26397和WO96/23873(Novo)中的淀粉酶。这些酶在清洗组 合物中的掺入量，按该清洗组合物的重量计，为从约0.0001％，优选 从约0.00018％，更优选从约0.00024％，最优选从约0.05％至约0.1 ％，优选至约0.060％，更优选至约0.048％纯酶。 淀粉酶变体优选选自α-淀粉酶变体。 用于本发明的适合的α-淀粉酶变体包括，但不限于以下的α-淀 粉酶： (i)α-淀粉酶，特征在于由α-淀粉酶活性实验测 定，其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下，比活度比的 比活度高至少25％；和/或 (ii)根据(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.1中所示的 氨基酸序列或与SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80％同源的α -淀粉酶，和/或 (iii)根据(i)的α-淀粉酶，其包含在SEQ ID No.2中所示的 氨基酸序列或与SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80％同源的α -淀粉酶，和/或 (iv)根据(i)的α-淀粉酶，其包含以下N-端氨基酸序列： His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp- Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或与N-端中所示的氨基酸序列 (SEQ ID No.3)至少80％同源的α-淀粉酶，和/或 (v)根据(i-iv)的α-淀粉酶，其中该α-淀粉酶可由嗜碱的芽 孢杆菌种得到，和/或 (vi)根据(v)的α-淀粉酶，其中该淀粉酶可由NCIB 12289、 NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到，和/或 (vii)α-淀粉酶，其与具有分别对应于SEQ ID No.1、ID No.2 或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出阳性免疫交 叉反应活性，和/或 (viii)母体α-淀粉酶变体，其中母体α-淀粉酶(1)具有分别 在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一种氨基酸序列，或 (2)表现出与一个或多个所述的氨基酸序列至少80％同源，和/或与具 有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出免疫交叉反应活 性，和/或由一种DNA序列编码，该DNA序列与编码具有一个所述氨基 酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探针杂交，该变体中：(A)所述 母体α-淀粉酶中缺失至少一个氨基酸残基；和/或(B)所述母体α-淀 粉酶的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基代替；和/或(C)相 对所述的母体α-淀粉酶，插入至少一个氨基酸残基；所述变体具有α -淀粉酶活性并相对所述母体α-淀粉酶表现出至少一种以下性质：提 高了热稳定性、提高了抗氧化的稳定性；降低了对Ca离子的依赖性； 在中性至相对高pH值下提高了稳定性和/或α-淀粉分解活性；在相对 高温下提高了α-淀粉分解活性；和提高或降低了等电点(pI)，以便 使α-淀粉酶变体的pI值更好地与介质的pH匹配。 若比较通过例如由Lipman和Pearson在科学227，1985，第1435 页中所述的一种算法预制的各氨基酸序列显示了有X％同一性，则认 为多肽与母体淀粉酶有X％同源。 在本发明中，术语“由…可得”意思不仅表示由芽孢杆菌属菌株 产生的淀粉酶，而且表示由从芽孢杆菌属菌株中分离出的DNA序列编 码的淀粉酶和在用DNA序列转化的宿主有机体中产生的淀粉酶。 III.蛋白酶/淀粉酶组合-在本发明高度优选的实施方案中，尽管 上述的任何一种或多种蛋白酶变体可与上述的一种或多种淀粉酶变体 组合，但蛋白酶变体包含一组取代： 101/103/104/159/232/236/245/248/252，更高度优选的一组取代是： 101G/103A/104I/232V/236H/245R/248D/252K。 尽管蛋白酶变体和淀粉酶变体可以任何ppm计的比例存在于清洗 组合物中，但在本发明清洗组合物中，蛋白酶变体与淀粉酶变体的ppm 优选比例为约1∶20-20∶1，优选约1∶10-10∶1，更优选约1∶3-3∶1。 清洗组合物 除了上文所述的一种或多种蛋白酶变体外，本发明清洗组合物还 包含优选与蛋白酶变体相容的一种或多种清洗辅助物质。本文使用的 术语“清洗辅助物质”意思是选择用于理想的特定类型的清洗组合物 和产品形式(例如液体；颗粒；粉状；条；膏状；喷雾剂；片；凝胶； 泡沫体组合物)的任何液体、固体或气态材料，该材料还优选与组合 物中使用的蛋白酶是相容的。颗粒组合物还可以是“浓缩”形式，液 体组合物还可以是“浓缩”形式。 清洗辅助物质的具体选择可容易地由考虑被清洗的表面、物品或 织物和用于使用中的清洗条件(例如洗涤剂使用经过的)的所需组合 物形式来确定。本文所述术语“相容”意思是清洗组合物材料不降低 蛋白酶的蛋白水解活性至蛋白酶在正常的使用条件下不是预期有效的 程度。适合的清洗辅助物质的实例包括，但不限于：表面活性剂、助 洗剂、漂白剂、漂白活化剂、漂白催化剂、其他酶、酶稳定体系、螯 合剂、荧光增白剂、污垢解脱聚合物、染料转移抑制剂、分散剂、抑 泡剂、染料、香料、着色剂、填料盐、水溶助长剂、光活化剂、荧光 剂、织物调理剂、可水解的表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂、防缩剂、 抗皱剂、杀菌剂、杀真菌剂、色粒、银器护理剂、防晦暗和/或防腐蚀 剂、碱源、增溶剂、载体、加工助剂、颜料和pH控制剂，其描述在美 国专利5705464、5710115、5698504、5695679、5686014和5646101 中。具体的清洗组合物物质在下文详细举例说明。 若清洗辅助物质与清洗组合物中的蛋白酶变体不相容，则可使用 适当的方法，保持清洗辅助物质和蛋白酶变体隔离(彼此不相互接触)， 直至两种组分的组合是适当的。适合的方法可以是本领域任何公知的 方法，例如胶封、包胶、成片、物理分离等。 优选在适用于清洗需要去除蛋白质类污垢的各种表面的组合物中 包括有效量的上述一种或多种蛋白酶变体。这种清洗组合物包括用于 清洗硬表面的洗涤剂组合物，形式不限(例如液体和颗粒)；用于清 洗织物的洗涤剂组合物，形式不限(例如颗粒、液体和条制品等)； 洗餐具组合物(形式不限并包括自动洗餐具用颗粒和液体)；口腔清 洗组合物，形式不限(例如洁齿剂、牙膏和漱口制剂)；和假牙清洗 组合物，形式不限(例如液体、片)。 这里所述的“有效量的蛋白酶变体”是指需要获得在特定清洗组 合物中所需的酶活性的上述蛋白酶变体的数量。这种有效量容易由本 领域的普通技术人员来确定，其基于许多因素，例如所用的特定变体、 清洗应用、清洗组合物的特定组成和是否需要液体或干燥(例如颗粒、 条)组合物等。 按清洗组合物的重量计，优选清洗组合物包含从约0.0001％，优 选从约0.001％，更优选从约0.01％至约10％，优选至约1％，更优 选至约0.1％的一种或多种本发明蛋白酶变体。还优选本发明蛋白酶 变体在组合物中存在足够量，以提供每100g组合物的活性蛋白酶mg 与由洗涤水溶液中的任何过氧酸得到的理论有效O2(“AvO2”)ppm 之比，在本文称为酶与漂白剂之比(E/B之比)，为约1∶1-20∶1。 在下文进一步详细地讨论其中可使用本发明蛋白酶变体的各种清洗组 合物的几个实例。另外，清洗组合物按该组合物的重量计可包括约1 ％-99.9％清洗辅助物质。 本发明清洗组合物可以是“织物清洗组合物”或“非织物清洗组 合物”形式。 这里所述的“织物清洗组合物”包括手洗和机器洗衣洗涤剂组合 物，包括洗衣添加剂组合物和适用于浸泡和/或预处理脏织物的组合 物。 这里所述的“非织物清洗组合物”包括硬表面清洗组合物、洗餐 具洗涤剂组合物、口腔清洗组合物、假牙清洗组合物和个人清洗组合 物。 当本发明清洗组合物配制成适用于洗衣机洗涤方法的组合物时， 本发明组合物优选含有表面活性剂和助洗剂两类化合物和其他的一种 或多种清洗辅助物质，其优选选自有机聚合物、漂白剂、附加酶、抑 泡剂、分散剂、钙皂分散剂、污垢悬浮和抗再沉积剂和腐蚀抑制剂。 洗衣组合物还可含有柔软剂，其作为其他的清洗辅助物质。 本发明组合物还可作为固体或液体形式的洗涤剂添加剂产品。这 种添加剂产品用于补充或促进常规洗涤剂组合物的性能并可在清洗过 程的任何阶段加入。 当配制成用于手洗餐具方法的组合物时，本发明组合物优选含有 表面活性剂和优选含有其它的清洗辅助物质，其选自有机聚合物、增 泡剂、II族的金属离子、溶剂、水溶助长剂和附加酶。 如果需要的话，本发明洗衣洗涤剂组合物在20℃下测定的密度为 400-1200g/l，优选500-950g/l组合物。 本发明清洗组合物的“密实”形式由密度和就组成而言，由无机 填料盐的量得以最好地反映。无机填料盐是粉状洗涤剂组合物的常规 组分。在常规洗涤剂组合物中，填料盐是以大量存在，一般为总组合 物重量的17-35％。在密实组合物中，填料盐的含量不超过总组合物 的15％，优选不超过10％，最优选不超过组合物重量的5％。无机填 料盐，例如在本发明组合物中意思是选自碱金属和碱土金属硫酸盐和 氯化物。优选的填料盐是硫酸钠。 根据本发明的液体清洗组合物还可以是“浓缩形式”，在这种情 况下，根据本发明的液体清洗组合物比常规液体洗涤剂将含有更低量 的水。一般浓缩液体清洗组合物的水含量，按该清洗组合物重量计， 优选少于40％，更优选少于30％，最优选少于20％。 清洗辅助物质 表面活性剂体系-包括在由本发明制得的完整配方的清洗组合物 中的去污表面活性剂占清洗组合物重量的至少0.01％，优选至少约0.1 ％，更优选至少约0.5％，最优选至少约1％-60％，更优选至约35％， 最优选至约30％，这取决于所用的特定表面活性剂和所要求的效果。 去污表面活性剂可以是非离子型、阴离子型、两性型、两性离子 型、阳离子型、半极性非离子型的表面活性剂和其混合物，其非限制 性实例公开在美国专利5707950和5576282中。优选的洗涤剂和清洗 组合物包含阴离子去污表面活性剂或阴离子表面活性剂与其他表面活 性剂，特别是非离子表面活性剂的混合物。 适用于本发明的表面活性剂的非限制实例包括常规C11-C18烷基苯 磺酸盐和伯、仲和无规烷基硫酸盐，C10-C18烷基烷氧基硫酸盐，C10- C18烷基多苷和它们相应的硫酸化多苷，C12-C18α-磺化的脂肪酸酯，C12 -C18烷基和烷基酚烷氧基化物(特别是乙氧基化物和混合的乙氧基/丙 氧基化物)，C12-C18甜菜碱和磺基甜菜碱，C10-C18氧化胺等。其它常 规适用的表面活性剂列在标准教科书中。 优选配制表面活性剂与组合物中存在的酶组分相容。在液体或凝 胶组合物中，最优选配制表面活性剂使得其促进或至少不降低这些组 合物中的任何酶的稳定性。 非离子表面活性剂-烷基酚的聚氧乙烯、聚氧丙烯和聚氧丁烯的 缩合物适合用作本发明表面活性剂体系中的非离子型表面活性剂，优 选的是聚氧乙烯缩合物。商业上可购得的这种类型的非离子表面活性 剂包括IgepalTM CO-630，是由GAF Corporation出售的；和TritonTM X-45，X-114，X-100和X-102，它们都是由Rohm&Haas公司出售的。这些 表面活性剂通常称为烷基酚烷氧基化物(例如烷基酚乙氧基化物)。 伯和仲脂肪醇与约1至约25摩尔环氧乙烷的缩合产物适合用作本 发明非离子表面活性剂体系中的非离子表面活性剂。商业上可购得的 这种类型的非离子表面活性剂包括TergitolTM 15-S-9(C11-C15直链醇 与9摩尔环氧乙烷的缩合产物)、TergitolTM24-L-6NMW(C12-C14伯醇 与6摩尔环氧乙烷的缩合产物，并具有窄的分子量分布)，两种均由 Union Carbide Corporation出售；由Shell Chemical Company出售 的NeodolTM 45-9(C14-C15直链醇与9摩尔环氧乙烷的缩合产物)， NeodolTM23-3(C12-C13直链醇与3.0摩尔环氧乙烷的缩合产物)， NeodolTM45-7(C14-C15直链醇与7摩尔环氧乙烷的缩合产物)，NeodolTM 45-5(C14-C15直链醇与5摩尔环氧乙烷的缩合产物)；由Procter&Gamble Company出售的KyroTM EOB(C13-C15醇与9摩尔环氧乙烷的缩合产物)； 和由Hoechst出售的Genapol LAO3O或LA O5O(C12-C14醇与3或5摩 尔环氧乙烷的缩合产物)。这些产物优选的HLB范围是8-11，最优 选8-10。 还适合用作本发明表面活性剂体系中的非离子表面活性剂的是在 美国专利US 4565647中公开的烷基多糖。 优选的烷基多苷具有式：R2O(CnH2nO)t(糖基)x 其中R2选自烷基、烷基苯基、羟烷基、羟烷基苯基和其混合物， 其中烷基含有约10至约18个碳原子，优选约12至约14个碳原子； n是2或3，优选2；t是0至约10，优选0；x是约1.3至约10，优 选约1.3至约3，最优选约1.3至约2.7。 环氧乙烷与通过环氧丙烷与丙二醇缩合形成的疏水基的缩合产物 也适合用作本发明附加的非离子表面活性剂体系。这种类型化合物的 实例包括一些商业上可购得的PlurafacTM LF404和PluronicTM表面 活性剂，它由BASF出售。 也适合用作本发明非离子表面活性剂体系中的非离子表面活性剂 的是环氧乙烷与由环氧丙烷和乙二胺反应得到的产物进行缩合的产 物。这种类型非离子表面活性剂的实例包括一些商业上可购得的 TetronicTM化合物，由BASF出售。 优选的用作本发明表面活性剂体系中的非离子表面活性剂的是烷 基酚的聚氧乙烯缩合物、伯和仲脂肪醇与约1至约25摩尔环氧乙烷的 缩合产物、烷基多糖和其混合物。最优选的是具有3至15个乙氧基的 C8-C14烷基酚乙氧基化物和具有2至10个乙氧基的C8-C18醇乙氧基 化物(优选C10平均)，和其混合物。 高度优选的非离子表面活性剂是式：R2-C(O)-N(R1)-Z的多羟基脂 肪酸酰胺表面活性剂，其中R1是H，或R1是C1-4烃基、2-羟基乙基、 2-羟基丙基或其混合物，R2是C5-31烃基，Z是具有直接连有至少3 个羟基的直链烃基链的多羟基烃基，或其烷氧基化的衍生物。优选R1 是甲基，R2是直链C11-15烷基或C16-18烷基或链烯基例如椰子油烷基或 其混合物，Z是由在还原胺化反应中的还原糖例如葡萄糖、果糖、麦 芽糖、乳糖衍生得到。 阴离子表面活性剂-适合使用的阴离子表面活性剂是直链烷基苯 磺酸盐、烷基酯磺酸盐表面活性剂，包括按照“美国油化学家学会杂 志”(“The Journal of the American Oil Chemists Society”)，52 (1975)，第323-329页的方法用气态SO3磺化的直链C8-C20羧酸(即 脂肪酸)酯。适合的原料包括天然的脂肪类物质如由牛油、棕榈油等 衍生的物质。 特别用于洗衣应用的优选的烷基酯磺酸盐表面活性剂包括具有以 下结构式的烷基酯磺酸盐表面活性剂： 其中R3是C8-C20烃基，优选烷基，或其组合，R4是C1-C6烃基，优 选烷基，或其组合，M是阳离子，其与烷基酯磺酸根形成水溶性盐。 适合的形成盐阳离子包括金属例如钠、钾和锂，以及取代或未取代的 铵阳离子例如单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺。优选R3是C10-C16烷 基，R4是甲基、乙基或异丙基。特别优选的是甲基酯磺酸盐其中R3是 C10-C16烷基。 其它适合的阴离子表面活性剂包括烷基硫酸盐表面活性剂，其是 式ROSO3M的水溶性盐或酸，其中R优选是C10-C24烃基，优选烷基或 具有C10-C20烷基部分的羟烷基，更优选C12-C18烷基或羟烷基，M是 H或阳离子。一般对于较低的洗涤温度(例如低于约50℃)，优选C12 -C16烷基链，而对较高的洗涤温度(例如高于约50℃)，优选C16-C18 烷基链。 其它可用于洗涤目的的阴离子表面活性剂包括皂的盐、C8-C22伯 或仲烷烃磺酸盐、C8-C24链烯烃磺酸盐、通过磺化碱土金属柠檬酸盐 的热解产物制得的磺化的多羧酸，例如在英国专利说明书 No.1,082,179中所描述的；C8-C24烷基聚乙二醇醚硫酸盐(含有多至 10摩尔氧乙烯)；烷基甘油磺酸盐、脂肪酰基甘油磺酸盐、脂肪油酰 基甘油硫酸盐、烷基酚氧乙烯醚硫酸盐、石蜡烃磺酸盐、烷基磷酸盐、 羟乙磺酸盐例如酰基羟乙磺酸盐、N-酰基牛磺酸盐、烷基琥珀酰胺酸 盐和磺基琥珀酸盐、磺基琥珀酸单酯(特别是饱和和不饱和的C12-C18 单酯)和磺基琥珀酸二酯(特别是饱和和不饱和的C6-C12二酯)、酰 基肌氨酸盐、烷基多糖的硫酸盐例如烷基多葡萄糖苷硫酸盐(下文描 述的非离子性的非硫酸化的化合物)、支链的伯烷基硫酸盐和烷基聚 乙氧基羧酸盐例如那些具有式RO(CH2CH2O)kCH2COO-M+的盐，其中R 是C8-C22烷基，k为1至10的整数，M是形成可溶性盐的阳离子。树 脂酸和氢化树脂酸也是适用的，例如松香、氢化松香，以及存在于松 浆油或由松浆油衍生的树脂酸和氢化树脂酸。 其它例子被描述在“表面活性剂和洗涤剂”(第I和II卷，由 Schwartz，Perry及Berch编著)书中。各种这样的表面活性剂也一般 性地公开在1975年12月30日授予Laughlin等人的美国专利 US3,929,678，第23栏58行至29栏23行中(本文引用作参考)。 高度优选的阴离子表面活性剂包括烷基烷氧基化硫酸盐表面活性 剂，其是式RO(A)mSO3M的水溶性盐或酸，其中R是未取代的C10-C24 烷基或具有C10-C24烷基部分的羟烷基，优选C12-C20烷基或羟烷基， 更优选C12-C18烷基或羟烷基，A是乙氧基或丙氧基单元，m值大于0， 一般在约0.5至约6之间，更优选在约0.5至约3之间，M是H或阳 离子，其可以是例如金属阳离子(例如钠、钾、锂、钙、镁等)、铵 或取代的铵阳离子。烷基乙氧基化硫酸盐以及烷基丙氧基化硫酸盐是 本发明预期使用的。取代的铵阳离子的具体实例包括甲基、二甲基、 三甲基铵阳离子和季铵阳离子例如四甲基铵和二甲基哌啶鎓阳离子， 以及那些由烷基胺例如乙胺、二乙胺、三乙胺和其混合物衍生的阳离 子等。示例性的表面活性剂有C12-C18烷基聚乙氧基化物(1.0)硫酸 盐(C12-C18E(1.0)M)，C12-C18烷基聚乙氧基化物(2.25)硫酸盐(C12 -C18E(2.25)M)，C12-C18烷基聚乙氧基化物(3.0)硫酸盐(C12- C18E(3.0)M)和C12-C18烷基聚乙氧基化物(4.0)硫酸盐(C12- C18E(4.0)M)，其中M适宜选自钠和钾。 当含有它们时，本发明清洗组合物典型地含有从约1％，优选从 约3％至约40％，优选约20％重量的这种阴离子表面活性剂。 阳离子表面活性剂-适合用于本发明清洗组合物中的阳离子去污 表面活性剂是那些具有一个长链烃基的表面活性剂。这种阳离子型表 面活性剂的实例包括铵盐表面活性剂例如烷基三甲基卤化铵，以及具 有下式的那些表面活性剂：[R2(OR3)y][R4(OR3)y]2R5N+X- ，其中R2是在其烷基链中含有约8至约18个碳原子的烷基或烷 基苄基，每个R3选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2CH(CH2OH)-、- CH2CH2CH2-和其混合物；每个R4选自C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、由 连接两个R4基团形成的苄基环结构、-CH2CHOH-CHOHCOR6CHOHCH2OH， 其中R6是分子量小于约1000的任何己糖或己糖聚合物基团，以及氢(当 y不为0时)；R5是同R4相同的基团，或者是烷基链，其中R2加R5的碳 原子总数不多于约18个；每个y是0至约10，并且y值总和为0至 约15；X是任何一种相容的阴离子。 适用于本发明组合物的高度优选的阳离子型表面活性剂是水溶性 季铵盐化合物，其具有式(i)：R1R2R3R4N+X-，其中R1是C8-C16烷基， 每个R2、R3和R4独立地为C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、苄基和- (C2H4O)xH，其中x值为2至5，X是阴离子。R2、R3、R4中是苄基的应 当不能多于一个。R1的烷基链长优选是C12-C15，特别是，该烷基是由 椰子或棕榈仁脂肪衍生的链长的混合物，或者是通过链烯烃或羰基合 成醇合成得到的。R2、R3和R4优选的基团是甲基和羟乙基，并且阴离 子X可选自卤化物、甲基硫酸根、乙酸根和磷酸根离子。 用于本发明的具有式(i)的适合季铵盐化合物的实例包括，但不限 于：椰子油三甲基氯化铵或溴化铵；椰子油甲基二羟乙基氯化铵或溴 化铵；癸基三乙基氯化铵；癸基二甲基羟乙基氯化铵或溴化铵；C12 -C15二甲基羟乙基氯化铵或溴化铵；椰子油二甲基羟乙基氯化铵或溴 化铵；肉豆蔻基三甲基甲基硫酸铵；月桂基二甲基苄基氯化铵或溴化 铵；月桂基二甲基(氧乙烯)4氯化铵或溴化铵；胆碱酯(式(i)的化合物， 其中R1是CH2-CH2-O-C(O)-C12-14烷基，和R2、R3、R4是甲基)；和二 烷基咪唑啉[(i)]。 本发明有用的其它阳离子表面活性剂还描述在1980年10月14日 授予的Cambre的美国专利US4,228,044和欧洲专利申请EP000,224 中。 当包含它们时，本发明清洗组合物典型地含有约0.2％，优选从约 1％至约25％，优选至约8％重量这种阳离子表面活性剂。 两性表面活性剂-两性表面活性剂也适用于本发明清洗组合物 中，其实例描述在美国专利3929678中。 当包含它们时，本发明清洗组合物典型地含有约0.2％，优选从约 1％至约15％，优选至约10％重量这种两性表面活性剂。 两性离子表面活性剂-两性离子表面活性剂也适用于清洗组合物 中，其实例描述在美国专利3929678中。 当包含它们时，本发明清洗组合物典型地含有约0.2％，优选从约 1％至约15％，优选至约10％重量这种两性离子表面活性剂。 半极性非离子表面活性剂-半极性非离子表面活性剂是特殊的一 类非离子表面活性剂，其包括具有下式的水溶性氧化胺： 其中R3是含有约8至约22个碳原子的烷基、羟烷基或烷基苯基、或 它们的混合物；R4是含有约2至约3个碳原子的亚烷基或羟亚烷基或 它们的混合物；x为0至约3；每个R5是含有约1至约3个碳原子的 烷基或羟烷基或含有约1至约3个氧乙烯基团的聚氧乙烯基团。(R5 基团可彼此连接，例如通过氧或氮原子连接形成环状结构)；水溶性 氧化膦，其含有一个约10-18个碳原子的烷基部分和选自含有约1- 3个碳原子的烷基和羟烷基的两个残基部分；和水溶性亚砜，其含有 一个约10-18个碳原子的烷基部分和选自具有约1-3个碳原子的烷 基和羟烷基的一个残基部分。 氧化胺表面活性剂特别是包括C10-C18烷基二甲基氧化胺和C8-C12 烷氧基乙基二羟乙基氧化胺。 当包含它们时，本发明清洗组合物典型地含有0.2％，优选从约1 ％至约15％，优选至约10％重量这种半极性非离子表面活性剂。 辅助表面活性剂-本发明清洗组合物还可包含选自伯或叔胺的辅 助表面活性剂。用于本发明的适合的伯胺包括根据式R1NH2的胺，其中 R1是C6-C12，优选C6-C10烷基链，或R4X(CH2)n，X是-O-，-C(O)NH- 或-NH-，R4是C6-C12烷基链，n是1-5，优选3。R1烷基链可以是直链 或支链，并且可间隔多至12个，优选少于5个氧乙烯部分。 根据本文上式，优选的胺是正烷基胺。用于本发明适合的胺可选 自1-己胺、1-辛胺、1-癸胺和月桂胺。其它优选的伯胺包括C8-C10 氧丙胺、辛氧基丙基胺、2-乙基己基氧丙基胺、月桂基酰氨基丙基胺 和酰氨基丙基胺。用于本发明组合物最优选的胺是1-己胺、1-辛胺、 1-癸胺、1-十二烷基胺。特别适合的是正十二烷基二甲基胺和二羟乙 基椰子油烷基胺和7摩尔乙氧基化的油胺、月桂基酰氨基丙基胺和椰 子油酰氨基丙基胺。 LFNIs-在本发明自动洗餐具组合物(ADD)中特别优选的表面活 性剂是低泡非离子表面活性剂(LFNI)，其描述在美国专利5705464和 5710115中。LFNI的含量可为0.01％-约10％重量，优选约0.1％- 10％，最优选约0.25％-4％。ADDs中最典型使用LFNIs，这是由于 它们赋予ADD产品改善的使水成片的作用(特别是从玻璃上)。它们还 包含下文进一步说明的已知能使自动洗餐具中碰到的食物污垢消泡的 非硅氧烷、非磷酸盐聚合材料。 优选的LFNIs包括非离子烷氧基化表面活性剂，特别是由伯醇衍 生的乙氧基化物和它们与更复杂的表面活性剂的混合体，例如聚氧丙 烯/聚氧乙烯/聚氧丙烯(PO/EO/PO)逆嵌段聚合物，其描述在美国专利 5705464和5710115中。 还可使用的LFNIs包括从Olin Corp.购得的那些POLY- SLF18非离子表面活性剂，和具有上文讨论的熔点性质的任 何可生物降解的LFNI。 这些和其它非离子表面活性剂是现有技术公知的，其更详细地描 述在Kirk Othmer’s的化学工艺百科全书(Encyclopedia of Chemical Technology)，第3版，第22卷，第360-379页，“表面活性剂和去 污酶”中，其在本文引用作参考。 漂白体系-本发明清洗组合物优选包含漂白体系。漂白体系一般 包含“漂白剂”(过氧化氢源)和“引发剂”或“催化剂”。当存在 时，漂白剂一般占组合物重量的从约1％，优选从约5％至约30％， 优选至约20％。如果存在的话，漂白活化剂的含量一般为包含漂白剂 加上漂白活化剂的漂白组合物重量的从约0.1％，优选从约0.5％至约 60％，优选至约40％。 漂白剂-过氧化氢源详细地描述在本文引用的Kirk Othmer的化 学工艺百科全书，第4版(1992，John Wiley&Sons)，第4卷，第 271-300页“漂白剂(综述)”，包括各种形式的过硼酸钠和过碳酸 钠，包括各种涂覆和改性的形式。 本发明使用的优选的过氧化氢源可以来自任何适宜的来源，包括 过氧化氢本身。本发明可使用例如，过硼酸盐，例如过硼酸钠(任何 水合物，但优选一水合物或四水合物)、碳酸钠过氧水合物或等同的 过碳酸盐、焦磷酸钠过氧水合物、尿素过氧水合物或过氧化钠。还适 合的是有效氧的来源例如过硫酸盐漂白剂(例如OXONE，由DuPont生 产)。过硼酸钠一水合物和过碳酸钠是特别优选的。还可使用任何适 宜的过氧化氢源的混合物。 优选的过碳酸盐漂白剂包括具有平均颗粒度在约500至约1000微米 范围的干燥颗粒，小于约200微米的所述颗粒不超过约10％(重量)， 大于约1250微米的所述颗粒不超过约10％(重量)。过碳酸盐可以选 择性地用硅酸盐、硼酸盐或水溶性表面活性剂涂覆。过碳酸盐可以从 各种商业来源如FMC，Solvay和Tokai Denka得到。 本发明组合物还可包含作为漂白剂的氯型漂白物质。这种试剂是 本领域已知的并包括例如二氯异氰脲酸钠(“NaDCC”)。然而，氯型 漂白剂在包含酶的组合物中不太优选。 (a)漂白活化剂-优选，组合物中的过氧漂白剂组分与活化剂(过 酸前体)一起配制。按组合物的重量计，活化剂的含量为从约0.01％， 优选从约0.5％，更优选从约1％至约15％，优选至约10％，更优选 至约8％。优选的漂白活化剂选自四乙酰乙二胺(TAED)、苯甲酰己 内酰胺(BzCl)、4-硝基苯甲酰己内酰胺、3-氯代苯甲酰己内酰胺、 苯甲酰氧基苯磺酸盐(BOBS)、壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)、苯甲酸 苯酯(PhBz)、癸酰氧基苯磺酸盐(C10-OBS)、苯甲酰戊内酰胺 (BZVL)、辛酰氧基苯磺酸盐(C8-OBS)、可过水解的酯和它们的混 合物，最优选苯甲酰己内酰胺和苯甲酰戊内酰胺。在pH约8-9.5范 围的特别优选的漂白活化剂是那些选择具有OBS或VL离去基团的活化 剂。 优选的疏水漂白活化剂包括，但不限于：壬酰氧基苯磺酸盐 (NOBS)、4-[N-(壬酰基)氨基己酰基氧]苯磺酸钠(NACA-OBS)，其 实例描述在美国专利5523434中，十二烷酰基氧基苯磺酸盐(LOBS或 C12-OBS)、10-十一碳烯酰基氧基苯磺酸盐(UDOBS或C11-OBS，在10- 位置有不饱和度)和癸酰基氧基苯甲酸(DOBA)。 优选的漂白活化剂描述在1997年12月16日授权的Christie等 的美国专利5698504；1997年12月9日授权的Christie等的美国专 利5695679；1997年11月11日授权的Willey等的美国专利5686401； 1997年11月11日授权的Hartshorn等的美国专利5686014；1995年 4月11日授权的Willey等的美国专利5405412；1995年4月11日授 权的Willey等美国专利5405413；1992年7月14日授权的Mitchel 等的美国专利5130045；和1983年11月1日授权的Chung等的美国 专利4412934，和未结案的美国专利申请序号08/709072，08/064564， 所有这些在本文引用作参考。 本发明中，过氧漂白化合物(按AvO)与漂白活化剂的摩尔比- 般至少为1∶1，优选约20∶1，更优选约10∶1至约1∶1，优选至约3∶1。 还可包括四元取代的漂白活化剂。本发明清洗组合物优选包含四 元取代的漂白活化剂(QSBA)或四元取代的过酸(QSP)；更优选前 者。优选的QSBA结构还被描述在1997年11月11日授权的Willey 等的美国专利5686015；1997年8月5日授权的Taylor等的美国专 利5654421；1995年10月24日授权的Gosselink等的美国专利 5460747；1996年12月17日授权的Miracle等的美国专利5584888 和1996年11月26日授权的Taylor等的美国专利5578136，所有这 些在本文引用作参考。 本发明有用的高度优选的漂白活化剂是酰胺-取代的类型，如美国 专利5698504，5695679和5686014中所述，其在本文引用作参考。 这种漂白活化剂的优选实例包括(6-辛酰氨基己酰基)氧苯磺酸盐，(6- 壬酰氨基己酰基)氧苯磺酸盐，(6-癸酰氨基己酰基)氧苯磺酸盐，和它 们的混合物。 公开在美国专利5698504，5695679和5686014(其在本文引用作 参考)和1990年10月30日授权的Hodge等的美国专利4966723中 的其他有用的活化剂包括苯并噁嗪型活化剂，例C6H4环被稠合在- C(O)OC(R1)＝N-部分的1，2-位置。 根据活化剂和确切的应用，可由在使用中pH为约6-约13，优 选约9.0-约10.5的漂白体系得到良好的漂白结果。一般，例如，具 有吸电子部分的活化剂是用于近中性或中性以下pH范围。碱和缓冲剂 可用于保证这种pH。 如描述在美国专利5698504，5695679和5686014(其在本文引用 作参考)中的酰基内酰胺活化剂是本发明非常有用的，尤其是酰基己 内酰胺(参见例如WO94-28102A)和酰基戊内酰胺(参见1996年4月2 日授权的Willey等的US5503639，其在本文引用作参考)。 (b)有机过氧化物，特别是二酰基过氧化物 这些化合物详细地描述在Kirk Othmer的化学工艺百科全书 (Encylopedia of Chemical Technology)，第17卷，John Wiley and Sons，1982，第27-90页，特别是第63-72页，所有这些被本文引用 作参考。如果使用二酰基过氧化物的话，优选其是对去斑/成膜产生最 小不利影响的一种。 (c)含金属的漂白催化剂 本发明组合物和方法使用了用于漂白组合物中有效的含金属的漂 白催化剂。优选的是含锰和钴的漂白催化剂。 一种类型的含金属的漂白催化剂是一种催化剂体系，其包含具有 所定义的漂白催化活性的过渡金属阳离子例如铜、铁、钛、钌、钨、 钼或锰阳离子；具有少的或不具有漂白催化活性的辅助金属阳离子例 如锌或铝阳离子，和对催化和辅助金属阳离子具有定义的稳定常数的 螯合剂，特别是乙二胺四乙酸、乙二胺四(亚甲基膦酸)和其水溶性 盐。这类催化剂公开在1982年2月2日授权的Bragg的美国专利 4,430,243中。 锰金属配合物 如果需要的话，本发明组合物可以用锰化合物来催化。该类化合 物和其用量是本领域公知的，包括例如在美国专利US5576282、 US5246621，US5244594，US5194416，US5114606和欧洲专利申请公开 号EP549271A1，EP549272A1，EP544440A2和EP544490A1中公开的锰基 催化剂。这些催化剂的优选实例包括MnIV2(u-0)3(1，4，7-三甲 基-1，4，7-三氮杂环壬烷)2(PF6)2，MnIII2(u-O)1(u-OAc)2 (1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂环壬烷)2(ClO4)2，MnIV4(u -O)6(1，4，7-三氮杂环壬烷)4(ClO4)4，MnIIIMnIV4(u-O)1(u -OAc)2(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂环壬烷)2(ClO4)3， MnIV(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮杂环壬烷)(OCH3)3(PF6)， 和它们的混合物。其他金属基漂白催化剂包括在美国专利US4430243、 US5114611中公开的那些。使用带有各种配合物配体的锰用于提高漂 白力也在下列美国专利中被报道：US4728455，US5284944，US5246612， US5256779，US5280117，US5274147，US5153161和US5227084。 钴金属配合物-用于本发明的钴漂白催化剂是已知的，其描述在 例如美国专利5597936；5595967和5703030和M.L.Tobe，“过渡金 属配合物的碱水解”，高等无机生物无机机理 (Adv.Inorg.Bioinorg.Mech.)，(1983)，2，第1-94页中。适合 于本发明的最优选的钴催化剂是具有式[Co(NH3)5OAc]Ty的钴五胺乙酸 盐，其中“OAc”表示乙酸根部分，“Ty”是阴离子，特别是氯化钴五 胺乙酸[Co(NH3)5OAc]Cl2；以及[Co(NH3)5OAc](OAc)2；[Co(NH3)5OAc] (PF6)2；[Co(NH3)5OAc](SO4)；[Co(NH3)5OAc](BF4)2；和[Co(NH3)5OAc] (NO3)2(本文“PAC”)。 这些钴催化剂容易用已知的方法制备，例如在美国专利5597936； 5595967和5703030；在Tobe文章和其中引用的参考文献；在美国专 利US4,810,410；J.Chem.Ed.(1989)，66(12)，1043-1045；无机化合 物的合成和表征，W.L.Jolly(Prentice-Hall；1970)，第461-463页； 无机化学，18，1497-1502(1979〕；无机化学，21，2881-2885(1982)； 无机化学，18，2023-2025(1979)；无机合成，173-176(1960)；和 物理化学杂志，56，22-25(1952)中讲述的。 大多环刚性配位体的过渡金属配合物-本发明组合物还适宜包括 作为漂白催化剂的大多环刚性配位体的过渡金属配合物。短语“大多 环刚性配位体”在下文讨论中有时缩写为“MRL”。所用量是催化有效 量，适宜为约1ppb或更多，例如高至约99.9％，更典型地是约0.001ppm 或更多，优选约0.05ppm-500ppm(其中“ppb”表示十亿分之一重量 份，“ppm”表示百万分之一重量份)。 适合的过渡金属例如锰，在下文被例举说明。“大多环”意思是 MRL既是大环又是多环。“多环”意思是至少双环。这里所述的术语 “刚性”包括“具有超结构”和“交联”。“刚性”被定义为挠曲性 转变是受限的：参见D.H Bush.化学综述(Chemical Reviews) (1993)，93，847-860，其在本文引用作参考。更具体地讲，本文所述 的“刚性”意思是MRL必须比否则相同的(在主环中具有相同的环尺 寸和类型和原子数目)但缺少MRL中存在的超结构(特别是连接部分， 或优选交联部分)的大环(“母体大环”)有可测定的更强的刚性。 在测定具有和不具有超结构的大环的对比刚性中，本专业人员使用大 环的游离形式(不是结合金属的形式)。已知可使用刚性来比较大环； 测定、测量或比较刚性的适合方法包括计算方法(参见例如Zimmer，. 化学综述(Chemical Reviews)(1995)，95(38)，2629-2648或Hancock 等，无机Chimica Acta，(1989)，164，73-84)。 本发明优选的MRL是特殊类型的交联的超刚性配位体。“交联” 非限制性地说明在以下的1.11中。在1.11中，交联是-CH2CH2-部分， 其桥连该示例结构中的N1和N8。通过对比，“同侧的”桥连，例如若 横跨1.11中的N1和N12加入的一个桥连，其不能充分地构成“交联”， 因此不是优选的。 刚性配位体配合物中的适合金属包括Mn(II)、Mn(III)、Mn(IV)、 Mn(V)、Fe(II)、Fe(III)、Fe(IV)、Co(I)、Co(II)、Co(III)、Ni(I)、 Ni(II)、Ni(III)、Cu(I)、Cu(II)、Cu(III)、Cr(II)、Cr(III)、Cr(IV)、 Cr(V)、Cr(VI)、V(III)、V(IV)、V(V)、Mo(IV)、Mo(V)、Mo(VI)、W(IV)、 W(V)、W(VI)、Pd(II)、Ru(II)、Ru(III)和Ru(IV)。本发明过渡金 属漂白催化剂中优选的过渡金属包括锰、铁和铬。 更一般地是，本发明MRL(和相应的过渡金属催化剂)适宜包含： (a)至少一个包含4个或更多个杂原子的主要的大环；和 (b)能够增强大环刚性的共价连接的非金属超结构，优选选自： (i)桥连超结构，例如连接部分； (ii)交联超结构，例如交联的连接部分；和 (iii)它们的组合。 本文所述的术语“超结构”如在Busch等的文章中所定义，参见 例如Busch在“化学综述”中的文章。 本文优选的超结构不仅增强了母体大环的刚性，而且还有助于大 环的折叠，使得其与缝隙处的金属配位。适合的超结构明显可以是简 单的，例如可使用诸如以下图1和图2中说明的任何连接部分： 其中n是整数，例如为2-8，优选低于6，一般为2-4，或 其中m和n是约1-8的整数，更优选1-3；Z是N或CH；T是相容 的取代基，例如H、烷基、三烷基铵、卤素、硝基、磺酸根等。在1.10 中的芳环可被饱和环代替，其中连接环的Z中的原子可含N、O、S或 C。 适合的MRL还非限制性地由以下化合物说明： 这是根据本发明的MRL，其是高度优选的交联的甲基取代的(所 有氮原子是叔氮)cyclam的衍生物。正规地讲，使用推广的yon Baeyer 系统，该配位体的名称为5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2] 十六烷。参见“有机化合物IUPAC命名法介绍指南1993”，(A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds：Recommendations 1993)，R.Panico，W.H.Powell和J-C Richer(编辑)，Blackwell 科技出版社，波士顿，1993；特别参见R-2.4.2.1部分。 本发明组合物适用的大环刚性配位体的过渡金属漂白催化剂一般 可包括符合本发明定义的公知化合物，以及更优选一些大量的特意指 定用于本发明洗衣或清洗应用的新化合物，由以下进行非限制说明： 二氯-5，12-二甲基-1，5，8，12，-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II)； 二水合-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II)六 氟磷酸盐； 水合-羟基-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(III) 六氟磷酸盐； 二水合-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II)四 氟硼酸盐； 二氯-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(III)六氟 磷酸盐； 二氯-5，12-二正丁基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II)； 二氯-5，12-二苄基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II)； 二氯-5-正丁基-12-甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰 (II)； 二氯-5-正辛基-12-甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰 (II)； 二氯-5-正丁基-12-甲基-1，5，8，12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰 (II)。 在实施中，不受限制，本发明组合物和清洗方法可被调整以在含 水洗涤介质中提供约至少万万分之一份的活性漂白催化剂物质，优选 在洗涤水溶液中提供约0.01ppm至约25ppm，更优选约0.05ppm至约 10ppm，最优选约0.1ppm至约5ppm漂白催化剂物质。在自动洗涤过 程的洗涤水溶液中为了达到这种含量，本发明典型的组合物按该漂白 组合物重量计将包含约0.0005％至约0.2％，更优选约0.004％至约 0.08％漂白催化剂，特别是锰或钴催化剂。 (d)其他漂白催化剂-本发明组合物可包含一种或多种其他漂白催 化剂。优选的漂白催化剂是两性离子漂白催化剂，其描述在美国专利 5576282中，特别是3-(3，4-二氢异喹啉鎓)丙磺酸盐。其他漂白催化 剂包括阳离子漂白催化剂，其描述在美国专利5360569、5442066、 5478357、5370826、5482515、5550256和WO95/13351，WO95/13352 和WO95/13353中。 还适合作为漂白剂的是预制过酸，例如苯二甲酰亚氨基-过氧己酸 (“PAP”)。参见例如美国专利5487818，5310934，5246620，5279757 和5132431。 任选的去污酶-本发明洗涤剂和清洗组合物还可任选地含有一种 或多种类型的洗涤剂酶。这种酶可包括其他蛋白酶、淀粉酶、纤维素 酶和脂肪酶。这种物质是现有技术公知的并可按商品名商购。它们可 以悬浮液、“颗粒”(marumes)或“小球”的形式掺入本发明非水 基液体洗涤剂组合物中。另一类适合的酶包括酶在非离子表面活性剂 中的浆料形式，例如由Novo Nordisk按商品名“SL”销售的酶或由Novo Nordisk按商品名“LDP”销售的微囊包封的酶。适合的酶和其用量描 述在美国专利5576282、5705464和5710115中。 对用于本发明，酶以常规的酶小球的形式加入本发明组合物中是 特别优选的。这种小球一般尺寸在约100-1000微米，更优选在约200 -800微米，并且将悬浮在组合物的整个非水液相中。本发明组合物 中的酶小球与其它酶形式相比，就随时间推移保持酶活性而论，发现 表现出特别理想的酶稳定性。因此，使用酶小球的组合物不需要含有 常规的酶稳定剂，例如当酶掺入含水液体洗涤剂中时必须通常使用的 酶稳定剂。 然而，加入本发明组合物中的酶可以是颗粒，优选T-颗粒形式。 本文中使用的“去污酶”指在洗衣、硬表面清洗或个人护理洗涤 剂组合物中具有洗涤、去污渍或其它有益效果的任何酶。优选的洗涤 酶是水解酶如蛋白酶，淀粉酶和脂肪酶。优选的用于洗衣用途的酶包 括，但不局限于，蛋白酶，纤维素酶，脂肪酶和过氧化物酶。用于自 动洗餐具高度优选的是淀粉酶和/或蛋白酶，包括通常商业可购得的类 型和改进的类型，虽然越来越多的漂白剂经过不断的改进是可相容的， 但仍保留一定程度的漂白剂失活敏感度。 适合的酶的实例包括，但不限于：半纤维素酶、过氧化物酶、蛋 白酶、纤维素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶 酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质素酶、 支链淀粉酶、单宁酶、戊聚糖酶、苹果酸酶(malanase)、β-葡聚 糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酶、软骨素酶、漆酶和公知的淀粉酶， 或它们的混合物。 这种适合的酶的实例公开在美国专利US5705464、5710115、 5576282、5728671和5707950中。 本发明使用的纤维素酶包括细菌和霉菌纤维素酶。优选它们具有 最佳pH范围5-12和比活性高于50CEVU(纤维素粘度单位)。适宜的纤 维素酶公开在美国专利US4,435,307，J61078384和WO96/02653中，其 公开了分别由Humicola insolens、木霉属、草根霉属和孢子丝菌属 产生的霉菌纤维素酶。EP739982描述了从新的杆菌种分离出的纤维素 酶。适宜的纤维素酶还公开在GB-A-2075028；GB-A-2095275；DE-OS- 2247832和WO95/26398中。 这种纤维素酶的实例是由Humicola insolens(灰色腐质霉变异 的thermoidea)菌株，特别是腐质霉属菌株DSM1800产生的纤维素酶。 其它适合的纤维素酶是来源于Humicola insolens、具有分子量约 50KDa、等电点为5.5并含有415个氨基酸的纤维素酶，和由腐质霉属 insolens，DSM1800衍生的具有纤维素酶活性的～43kD的内葡聚糖酶； 优选的内葡聚糖酶组分具有在WO91/17243中公开的氨基酸序列。还适 合的纤维素酶是由Trichoderma longibrachiatum得到的EGIII纤维素 酶，其描述在Genencor的WO94/21801中。特别适合的纤维素酶是具有 护理颜色作用的纤维素酶。这种纤维素酶的实例是在1991年11月6日 (Novo)提交的欧洲专利申请No.91202879.2中描述的那些纤维素酶。 Carezyme和Celluzyme(Novo Nordisk A/S)是特别适用的。还参见 WO91/17244和WO91/21801。具有护理织物和/或清洗性质的其它适合 的纤维素酶描述在WO96/34092、WO96/17994和WO95/24471中。 纤维素酶，当存在时，一般在清洗组合物中的掺入量为清洗组合 物重量的O.0001％-2％纯酶。 过氧化物酶是与氧源，例如过碳酸盐、过硼酸盐、过硫酸盐、过 氧化氢等以及与作为增强漂白剂分子的酚类基质结合使用。它们用于 “漂白溶液”，即抑制在洗涤过程中从底物上脱落的染料或颜料迁移 至洗涤溶液中的其它底物上。过氧化物酶在本文技术领域中是已知的， 包括例如，辣根过氧化物酶、木质素酶和卤代过氧化物酶，如氯代和 溴代过氧化物酶。适合的过氧化物酶和含有过氧化物酶的洗涤剂组合 物公开在，例如美国专利5705464、5710115、5576282、5728671和 5707950、PCT国际申请WO 89/099813、WO89/09813和1991年11月6日 申请的欧洲专利申请No.91202882.6和1996年2月20日申请的 EP96870013.8中。还适合的是漆酶。 增效剂一般占总组合物重量的0.1％-5％。优选的增效剂为取代 的吩噻嗪和吩噁嗪10-吩噻嗪丙酸(PPT)、10-乙基吩噻嗪-4-羧酸 (EPC)、10-吩噁嗪丙酸(POP)和10-甲基吩噁嗪(如WO94/12621所述) 和取代的丁香酸酯(C3-C5取代的烷基丁香酸酯)和苯酚。过碳酸钠或过 硼酸钠是优选的过氧化氢源。 以清洗组合物重量计，清洗组合物中所述过氧化物酶的掺入量通常 为O.0001-2％纯酶。 可使用酶催体系作为漂白剂。还可通过加入能在洗涤和/或漂清过 程的开始或过程中产生过氧化氢的酶催体系(即酶和随之的基质)产 生过氧化氢。这种酶催体系公开在1991年10月9日申请的欧洲专利 申请91202655.6中。 本发明清洗组合物可包括的其它优选酶包括脂肪酶。洗涤剂可使 用的适宜脂肪酶包括由假单胞菌属族中的微生物，如司徒茨氏 (stutzeri)假单胞菌ATCC 19.154产生的那些脂肪酶，如公开在 英国专利1372034中。适合的脂肪酶包括由微生物荧光假单胞菌IAM 1057产生的与脂肪酶的抗体表现出阳性免疫交叉反应的那些脂肪酶。 这种脂肪酶可由Amano Pharmacetical有限公司，Nagoya，日本买到， 商品名为脂肪酶P“Amano”，下文称之为“Amano-P”。其他适合的 商业脂肪酶包括Amano-CES，由粘稠色杆菌(Chromobacter viscosum) 得到的脂酶，例如由Toyo Jozo公司，Tagata，日本得到的粘稠色杆 菌变异的lipolyticum NRRLB 3673，；由U.S.Biochemical公司，U.S.A. 和荷兰的Disoynth公司得到的粘稠色杆菌脂酶和由唐菖蒲假单胞菌 (Pseudomonas gladioli)得到的脂酶.特别适合的脂肪酶是诸如M1 LipaseR和LipomaxR(Gist-Brocades)和LipolaseR和Lipolase UltraR(Novo)的脂酶，已发现当它们与本发明组合物组合使用时是非 常有效的。还适合的是由Novo Nordisk描述在EP258068、WO92/05249 和WO95/22615和由Unilever描述在WO94/03578、WO95/35381和 WO96/00292中的脂解酶。 还适合的酶是角质酶[EC 3.1.1.50]，其被认为是-种特殊种类 的脂肪酶，称为不需要界面活化的脂肪酶。在清洗组合物中加入角质 酶已被描述在例如WO-A-88/09367(Genencor)；WO90/09446(Plant Genetic System)和WO94/14963和WO94/14964(Unilever)中。 脂肪酶和/或角质酶，当存在时，一般在清洗组合物中的掺入量为 清洗组合物重量的0.0001％-2％纯酶。 除了上述的脂肪酶外，磷脂酶也可掺入本发明清洗组合物中。适 合的磷脂酶的非限制实例包括EC 3.1.1.32磷脂酶A1；EC3.1.1.4磷脂 酶A2；EC3.1.1.5溶血磷脂酶；EC3.1.4.3磷脂酶C；EC3.1.4.4磷脂酶 D。可商购的磷脂酶包括从丹麦的Novo Nordisk A/S购得的 和从Sigma购得的磷脂酶A2。当磷脂酶包括在本发明组合物中时，优 选还包括淀粉酶。不希望受理论的限制，相信磷脂酶和淀粉酶的结合 作用显著地去除了污渍，特别是对油脂/油性的淀粉和浓色的污渍和污 垢。优选，磷脂酶和淀粉酶，当存在时，是以重量比为4500∶1-1∶5， 更优选50∶1-1∶1的纯酶掺入本发明组合物中。 适宜的蛋白酶为枯草溶菌素，它是由枯草芽胞杆菌和地衣型芽胞 杆菌的特定菌株得到(枯草溶菌素BPN和BPN’)。一种适合的蛋白酶是 由杆菌菌株得到，它在pH8-12范围内具有最大活性，它由丹麦的Novo Industries A/S公司，下文中称为“Novo”，开发并以销 售。这种酶和类似酶的制备描述在Novo公司的英国专利说明书 GB1243784中。蛋白水解酶还包括改性的细菌丝氨酸蛋白酶，例如在 1987年4月28日提交的欧洲专利申请序列号为87303761.8中(特别是 第17、24和98页)描述的那些，其在本文被称为“蛋白酶B”，和在1986 年10月29日公开的Venegas的欧洲专利申请199404中描述的那些，它 们是改性的细菌丝氨酸蛋白水解酶，在本文被称为“蛋白酶A”。适合 的是在本文被称为“蛋白酶C”的蛋白酶，它们是由杆菌得到的碱性丝 氨酸蛋白酶的变体，其中赖氨酸取代27位置的精氨酸，酪氨酸取代104 位置的缬氨酸、丝氨酸取代123位置的天冬酰胺，和丙氨酸取代274位 置的苏氨酸。蛋白酶C描述在EP90915958：4中，其相应于1991年5月16 日公开的WO91/06637。遗传改性的变体，特别是蛋白酶C的变体也包 括在本发明中。 被称为“蛋白酶D”的优选蛋白酶是如描述在美国专利5677272 和WO95/10591中的羰基水解酶。还适合的是描述在WO95/10591中的 蛋白酶的羰基水解酶变体，其氨基酸序列是通过取代位于前体酶中对 应于+210位置处的多个氨基酸残基，同时结合取代以下位置处的一个 或多个残基得到的：+33，+62，+67，+76，+100，+101，+103，+104， +107，+128，+129，+130，+132，+135，+156，+158，+164，+166，+167， +170，+209，+215，+217，+218，和+222，这里的编号位置对应于由 淀粉分解芽孢杆菌得到的天然存在的枯草溶菌素或其它羰基水解酶或 枯草溶菌素例如缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素的等价的氨基酸残基(1997 年6月4日申请的未结案的专利申请US60/048550和PCT国际申请序 号PCT/IB98/00853)。 还适合于本发明的是描述在专利申请EP251446和WO91/06637中 的蛋白酶、描述在WO91/02792中的蛋白酶和描述在WO95/23221 中的它们的变体。 还参见描述在Novo的WO 9318140A中的得自杆菌NCIMB 40338 的高pH蛋白酶。含有蛋白酶，一种或多种其他酶，和可逆蛋白酶抑制 剂的加酶洗涤剂描述在Novo的WO 9203529A中。当需要时，如在Procter &Gamble的WO 95/07791中描述的，可以得到吸附降低和水解提高的 蛋白酶。适合于本发明洗涤剂的类似胰蛋白酶的重组蛋白酶描述在 Novo的WO 9425583中。其它适合的蛋白酶描述在Unilever的EP516200 中。 特别适用的蛋白酶描述在PCT公开文献：WO95/30010；WO95/30011 和WO95/29979中。适合的蛋白酶可从丹麦的Novo Nordisk A/S按 和 商购，和从Genencor International(以前是荷兰的Gist-Brocades) 按和商购。 这种蛋白水解酶，当存在时，在本发明清洗组合物中的掺入量， 按组合物的重量计，为0.0001％-2％，优选0.001％-0.2％，更优选 0.005％-0.1％纯酶。 可包括淀粉酶(α和/或β)用于去除基于碳水化合物的污渍。 WO/94/02597描述了掺入突变体淀粉酶的清洗组合物。还参见 WO95/10603。用于清洗组合物中的其它公知的淀粉酶包括α-和β-淀 粉酶。α-淀粉酶是现有技术已知的，包括在US5003257；EP252666； WO91/00353；FR 2676456；EP285123；EP525610；EP368341和英国专利说 明书1296839(Novo)中公开的那些淀粉酶。其它适合的淀粉酶是稳定 性增强的淀粉酶，其描述在WO94/18314和Genencor的WO96/05295中； 和在WO95/10603中公开的由Novo Nordisk A/S购得的对直接母体进行 附加修饰得到的淀粉酶变异体。还适合的是描述在EP277216中的淀粉 酶。 商业α-淀粉酶产品的实例是从Genencor购得的Purafect Ox 和和它们都可从Novo Nordisk A/S丹麦购得。WO95/26397描述了其它适合的淀粉酶：α-淀粉酶，其 特征在于通过α-淀粉酶活性实验测定，在25℃-55℃温度 和pH值在8-10范围下具有比活度大于的比活度至少25％。 适合的是描述在WO96/23873(Novo Nordisk)中的以上酶的变体。具 有改善的关于活性量和热稳定性与更高活性量组合性质的其它淀粉分 解酶描述在WO95/35382中。 这种淀粉分解酶，当存在时，在本发明清洗组合物中的掺入量， 按该组合物的重量计，为0.0001％-2％，优选0.00018％-0.06％，更 优选0.00024％-0.048％纯酶。 上述酶可以来自任何适宜的来源，如植物、动物、细菌、霉菌和 酵母源。该源还可以是亲中介态或嗜极端态的(extremophilic)(嗜 冷的、冷食性的、嗜热的、嗜压的、嗜碱的、嗜酸的、嗜盐的等)。 可使用这些酶的纯化或非纯化形式。当今，普通的作法是通过蛋白/遗 传工程技术修饰野生型酶，以便使其在本发明洗衣洗涤剂和/或织物护 理组合物中的性能最有效。例如，可修饰变体使得酶与这种组合物中 通常遇到的组分的相容性增加。另外，可修饰变体使得该酶变体的最 佳pH、漂白或螯合稳定性、催化活性等适合于特定的清洗应用。 特别是，在漂白剂稳定的情况下，应将注意力集中在对氧化敏感 的氨基酸上和使表面活性剂相容的表面电荷上。这种酶的等电点可通 过取代一些带电荷的氨基酸而改变，例如等电点的增加可有助于改善 与阴离子表面活性剂的相容性。酶稳定性的增强还可通过产生例如附 加的盐桥键和强化钙的结合部位以增加螯合剂的稳定性来实现。 这些任选的去污酶，当存在时，一般在清洗组合物中的掺入量为 清洗组合物重量的0.0001％至2％纯酶。该酶可作为独立的单一组分加 入(含有一种酶的丸、粒、稳定的液体等…)或作为两种或多种酶的 混合物加入(例如复合颗粒)。 可加入的其它适合的洗涤剂组分是酶氧化清除剂。这种酶氧化清 除剂的实例是乙氧基化的四亚乙基多胺。 各种酶物质和将它们掺入合成洗涤剂组合物中的方法还公开在 Genencor International的WO 9307263和WO 9307260，WO 8908694， 和1971年1月5日授权的McCarty等人的美国专利US3553139中。 一些酶还公开在美国专利US4101457和美国专利US4507219中。用于 液体洗涤剂配方的酶物质和它们掺入到这些配方中的方法公开在美国 专利US4261868中。 酶稳定剂-用于洗涤剂中的酶可用各种技术使其稳定化。酶稳定 化技术公开并举例说明在美国专利US3600319，EP199405和EP200586 中。酶稳定体系也描述在例如美国专利US3519570中。产生蛋白酶、 木聚糖酶和纤维素酶的有用的杆菌AC13描述在WO 9401532A中。本 发明使用的酶可通过在成品组合物中存在钙和/或镁离子的水溶性源， 以给酶提供这种离子而使酶稳定。适合的酶稳定剂和其用量描述在美 国专利5705464，5710115和5576282中。 助洗剂-本文描述的洗涤剂和清洗组合物优选包含一种或多种洗 涤剂助洗剂或助洗剂体系。当存在助洗剂时，组合物中一般包含至少 约1％的助洗剂，优选从约5％，更优选从约10％-80％，优选至约50 ％，更优选至约30％的洗涤剂助洗剂。但这不意味着排除更低和更高 含量的助洗剂。 用于本文描述的洗涤剂和清洗组合物，特别是洗餐具组合物中的 优选助洗剂包括，但不限于水溶性助洗剂化合物(例如多羧酸盐)如 美国专利5695679、5705464和5710115中所述。其他适合的多羧酸盐 公开在美国专利4144226、3308067和3723322中。优选的多羧酸盐是 每分子含有多至三个羧基的羟基羧酸盐，更具体地是柠檬酸盐。 无机或含磷助洗剂包括，但不局限于：以下的碱金属，铵和烷醇 铵盐：聚磷酸盐(例如三聚磷酸盐，焦磷酸盐，和玻璃状聚合的偏磷 酸盐)、膦酸盐(参见例如美国专利3159581；3213030；3422021；3400148 和3422137)、肌醇六磷酸、硅酸盐、碳酸盐(包括碳酸氢盐和倍半 碳酸盐)、硫酸盐和硅铝酸盐。 但是，在某些地区需要非磷助洗剂。重要的是，甚至在所谓的“弱” 助洗剂(与磷酸盐比较)如柠檬酸盐存在下，或在使用沸石或层状硅 酸盐助洗剂时可发生的所谓“低复配”情况下，本发明组合物的性能 出乎意料地好。 适合的硅酸盐包括SiO2∶Na2O比为约1.0-2.8，优选约1.6-2.4， 最优选约2.0的水溶性硅酸钠。硅酸盐可以是无水盐或水合盐的形式。 SiO2∶Na2O比为2.0的硅酸钠是最优选的。硅酸盐，当存在时，优选在 本文描述的洗涤剂和清洗组合物中的含量为组合物重量的约5％-50 ％，更优选约10％-40％。 适用于洗涤剂和清洗组合物，特别是颗粒洗涤剂组合物中的部分 可溶性或不溶性的助洗剂化合物包括，但不限于：结晶层状硅酸盐， 特别是结晶层状硅酸钠(部分水溶性)如美国专利4664839中所述和 铝硅酸钠(水不溶性)。当存在于洗涤剂和清洗组合物中时，这些助 洗剂的含量一般为组合物重量的约1％-80％，优选约10％-70％， 最优选约20％-60％。 本文所述组合物中可使用具有通式：NaMSixO2x+1·yH2O的结晶 层状硅酸钠，其中M为钠或氢，x为约1.9至约4的数值，优选为约2至 约4，最优选为2，y为约0至约20的数值，优选为0。该类结晶层状硅 酸钠公开在EP-A-0164514中，它们的制备方法公开在DE-A-3417649和 DE-A-3742043中。最优选的物质是从Hoechst AG按NaSKS-6购得的δ- Na2SiO5(在本文中通常缩写为″SKS-6″)。不象沸石助洗剂，Na SKS -6硅酸盐助洗剂不含铝。NaSKS-6是具有δ-Na2SiO5形态学形式的 层状硅酸盐。SKS-6是本文所述组合物中使用的高度优选的层状硅酸 盐，但本文所述组合物中也可以使用这样其它的层状硅酸盐，如那些 具有通式NaMSixO2x+1·yH2O的层状硅酸盐，其中M为钠或氢，x为1.9 至4的数值，优选为2，y为0至20的数值，优选为0。从Hoechst购得的 各种其它层状硅酸盐包括NaSKS-5，NaSKS-7，和NaSKS-11，它们 是以α、β和γ形式。如上面所提到的，δ-Na2SiO5(NaSKS-6形 式)是本文中最优选使用的。其它的硅酸盐也是有用的，例如硅酸镁， 其可作为颗粒配方的松脆剂、作为氧漂白剂的稳定剂和作为控泡体系 的组分。 结晶层状硅酸钠材料优选作为与固体水溶性的可电离材料的紧密 混合物颗粒形式存在于颗粒洗涤剂组合物中。固体水溶性的可电离材 料优选选自有机酸、有机和无机酸盐和其混合物。 硅铝酸盐助洗剂在最通常市售的重垢型颗粒洗涤剂组合物中最重 要，并且也可以是液体洗涤剂配方中重要的助洗剂组分。硅铝酸盐助 洗剂具有下列经验式： [Mz(zAlO2)y]xH2O 其中z和y为至少6的整数，z与y的摩尔比在1.0至约0.5的范围内，x是 约15至约264的整数。优选硅铝酸盐助洗剂是具有以下单元晶胞的硅铝 酸盐沸石： Naz[(AlO2)z(SiO2)y].xH2O 其中z和y至少为6；z与y的摩尔比为1.0至0.5，x至少为5，优选7.5- 276，更优选10-264。硅铝酸盐助洗剂优选是水合形式，优选是晶体， 其含有约10％-28％，更优选约18％-22％结合水。 这些硅铝酸盐离子交换材料可以是结晶或无定形结构，并且可以 是天然产生的硅铝酸盐或是合成得到的。制备硅铝酸盐离子交换材料 的方法揭示于美国专利US3985669中。用于本文的优选的合成结晶硅 铝酸盐离子交换材料可以按注册商标为沸石A、沸石B、沸石P、沸石X、 沸石MAP和沸石HS和其混合物购买到。在特别优选的实施方案中，结晶 硅铝酸盐离子交换材料具有下式： Na12[(AlO2)12(SiO2)12].xH2O 其中x为约20至约30，尤其是约27。该物质称为沸石A。脱水沸石(x ＝0-10)也可以在本文中使用。硅铝酸盐优选具有直径为约0.1-10 微米的粒度。沸石X具有式： Na86[(AlO2)86(SiO2)106].276H2O 柠檬酸盐助洗剂，例如，柠檬酸和其可溶性盐(特别是钠盐)是 重垢液体洗涤剂配方中特别重要的多羧酸盐助洗剂，原因是它们可由 再生资源得到和它们具有生物降解能力。柠檬酸盐也可用于颗粒组合 物中，特别是与沸石和/或层状硅酸盐助洗剂结合使用。氧二琥珀酸盐 在这种组合物和混合物中也特别有用。 适合于本文所述洗涤剂组合物的还有在美国专利US4566984中公 开的3，3-二羧基-4-氧杂-1，6-己二酸盐以及有关的化合物。有 用的琥珀酸助洗剂包括C5-C20烷基和链烯基琥珀酸和它们的盐。这种 类型中特别优选的化合物是十二碳烯基琥珀酸。琥珀酸盐助洗剂的具 体实例包括：月桂基琥珀酸盐，肉豆寇基琥珀酸盐、棕榈基琥珀酸盐、 2-十二碳烯基琥珀酸盐(优选)，2-十五碳烯基琥珀酸盐等。月桂 基琥珀酸盐是该组中优选的助洗剂，并被描述在1986年11月5日公开 的欧洲专利申请86200690.5/0200263中。 脂肪酸，例如C12-C18单羧酸，也可以单独地掺入组合物中，或与 前述的助洗剂，尤其是柠檬酸盐和/或琥珀酸盐助洗剂结合掺入组合物 中，以提供额外的助洗剂活性。使用脂肪酸一般会导致消弱起泡，这 是配方师应当考虑的。 分散剂-可将一种或多种适合的聚亚烷基亚胺分散剂掺入本发明 清洗组合物中。这种适合的分散剂的实例可参见欧洲专利申请111965、 111984和112592；美国专利4597898、4548744和5565145。然而，在 本发明洗衣组合物中可使用任何适合的粘土/污垢分散剂或抗再沉积 剂。 此外，包括聚合多羧酸盐和聚乙二醇的聚合分散剂也适合用于本 发明中。可以经聚合形成适合的聚合多羧酸盐的不饱和单体酸包括丙 烯酸，马来酸(或马来酸酐)，富马酸，衣康酸，乌头酸，中康酸， 柠康酸和亚甲基丙二酸。尤其适合的聚合多羧酸盐可以从丙烯酸得到。 可以用于本发明中的该类基于丙烯酸的聚合物是聚合丙烯酸的水溶性 盐。以酸形式存在的该类聚合物的平均分子量优选为约2000-10000， 更优选为约4000-7000，最优选为约4000-5000。该类丙烯酸聚合物 的水溶性盐可以包括，例如，碱金属盐，铵盐和取代铵盐。该类可溶 的聚合物是已知的材料。该类聚丙烯酸盐在洗涤剂组合物中的应用公 开在例如美国专利US3308067中。 基于丙烯酸/马来酸的共聚物也可以用作分散/抗沉积剂的优选组 分。这类物质包括丙烯酸和马来酸共聚物的水溶性盐。以酸形式存在 的该类共聚物的平均分子量优选为约2000-100000，更优选为约5000 -75000，最优选为约7000-65000。在该类共聚物中丙烯酸盐部分与 马来酸盐部分的比率一般为约30∶1至约1∶1，更优选约10∶1至2∶1。 这类丙烯酸/马来酸共聚物的水溶性盐可以包括，例如，碱金属盐，铵 盐和取代铵盐。这类可溶性丙烯酸盐/马来酸盐共聚物是在1982年12 月15日公开的欧洲专利申请EP66915以及在1986年9月3日公开的欧洲 专利EP193360中描述的已知物质，后者还描述了包括丙烯酸羟基丙基 酯的该类聚合物。另一类有用的分散剂包括马来酸/丙烯酸/乙烯基醇 三元共聚物。该材料也在EP193160中被公开，包括，例如，45/45/10 的丙烯酸/马来酸/乙烯基醇三元共聚物。 另一类可以被包括的聚合材料是聚乙二醇(PEG)。PEG除了可以 作为去除粘土污垢-抗再沉积剂之外还具有分散剂的性能。作为该用 途的聚乙二醇的平均分子量一般为约500-约100000，优选为约1000 -约50000，更优选为约1500-约10000。 本发明也可以使用聚天冬氨酸盐和聚谷氨酸盐分散剂，尤其是与 沸石助洗剂结合使用。分散剂如聚天冬氨酸盐优选具有约10000的分子 量(平均)。 污垢解脱剂-本发明组合物可任选地包含一种或多种污垢解脱 剂。如果使用的话，污垢解脱剂一般占本发明组合物重量的约0.01％， 优选从约0.1％，更优选从约0.2％至约10％，优选至约5％，更优选 至3％。适合的污垢解脱聚合物的非限制实例公开在美国专利 5728671；5691298；5599782；5415807；5182043；4956447；4976879； 4968451；4925577；4861512；4877896；4771730；4711730、4721580； 4000093；3959230和3893929；和欧洲专利申请0219048。 另外适合的污垢解脱剂描述在美国专利US4201824；US4240918； US4525524；US4579681；US4240918；US4787989；EP279134A； EP457205A；和DE2335044。 螯合剂-本发明组合物还可以任选地含有起螯合否则会使漂白剂 失活的金属离子和金属杂质作用的螯合剂。有用的螯合剂可包括氨基 羧酸盐，膦酸盐、氨基膦酸盐，多官能取代的芳族螯合剂及其混合物。 适合的螯合剂的进一步实例和其用量描述在美国专利US5705454、 5710115、5728671和5576282中。 本发明组合物还可含有水溶性的甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)盐(或 酸形式)作为螯合剂，或作为例如不溶性的助洗剂如沸石、层状硅酸 盐等的有用的辅助助洗剂。 如果使用螯合剂，则这些螯合剂一般占本发明洗涤剂组合物重量 的约0.1％-15％，更优选约0.1％-3.0％。 抑泡剂-另一种任选的组分是抑泡剂，示例为聚硅氧烷，和二氧 化硅-聚硅氧烷混合物。适合的抑泡剂的实例公开在美国专利 US5707950和5728671中。这些抑泡剂使用量一般为组合物重量的 0.001％至2％，优选0.01％至1％。 柔软剂-织物柔软剂也可掺入本发明洗衣洗涤剂组合物中。无机 柔软剂的示例有公开在GB-A-1400898和USP 5,019,292中的绿土类。 有机柔软剂包括如公开在GB-A 1 514 276和EP-B 0 011 340中的水 不溶性叔胺和公开在EP-B-0 026 527和EP-B-0 026 528中前者 叔胺与单C12-C14季铵盐的混合物，以及如公开在EP-B-0242 919 中的双长链酰胺。用于织物柔软剂体系的其它适合的有机组分包括公 开在EP-A-0299 575和0 313 146中的高分子量聚环氧乙烷物质。 特别适合的织物柔软剂公开在美国专利US5707950和5728673中。 绿土的含量通常为2％至20％，更优选5％至15％重量，该物质是 作为干混组分加入到配方的其余组分中。有机织物柔软剂例如水不溶 性叔胺或双长链的酰胺物质的掺入量是0.5％至5％重量，通常是1％至 3％重量，而高分子量聚环氧乙烷物质和水溶性阳离子物质的加入量是 0.1％至2％，通常是0.15％至1.5％重量。虽然在某些情况下，这些物质 作为干混颗粒加入或将它们作为熔融液体喷到组合物的其它固体组分 上可能更为方便，但通常将它们加入组合物的喷雾干燥的部分中。 如描述在EP-A-040562和EP-A-239910中的生物可降解的季铵化 合物已作为传统使用的氯化和甲基硫酸化双长链烷基铵的替代物而存 在。 用于季铵化合物和胺前体的与柔软剂相容的阴离子的非限制实例 包括氯或甲基硫酸根。 染料转移抑制作用-本发明洗涤剂组合物还可包括用于抑制在包 含带色织物的洗涤织物和调理操作过程中碰到的溶解和悬浮的染料从 一种织物转移至另一种织物上的化合物。 聚合染料转移抑制剂 本发明洗涤剂组合物还可包含0.001％至10％，优选0.01％至2％， 更优选0.05％至1％重量聚合的染料转移抑制剂。通常将所说的聚合染 料转移抑制剂掺入洗涤剂组合物中是为了抑制染料从带色的织物上转 移至同时洗涤的织物上。在从带色织物洗涤下来的短效染料有机会接 触洗涤中的其它物品之前，这些聚合物具有将其螯合或吸附的能力。 特别适合的聚合染料转移抑制剂是聚胺N-氧化物聚合物、N-乙 烯基吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基吡咯烷酮聚合物、 聚乙烯基噁唑烷酮和聚乙烯基咪唑或它们的混合物。这种染料转移抑 制剂的实例公开在美国专利US5707950和US5707951中。 其他适合的染料转移抑制剂包括，但不限于交联的聚合物。交联 聚合物是其骨架互连至一定程度的聚合物；这些键可以是化学或物理 性的，在骨架上或在支链上可具有活性基团。交联聚合物已被描述在 聚合物科技杂志，第22卷，第1035-1039页。 在一种实施方案中，交联聚合物是以这样的方法制备的，即它们 形成三维的刚性结构，其能将染料捕集在由三维结构形成的孔中。在 另一实施方案中，交联聚合物通过溶胀捕集染料。这种交联聚合物被 描述在未结案的欧洲专利申请94870213.9中。 另外，这种聚合物还增强了本发明酶的性能。 pH和缓冲变化-本文描述的许多洗涤剂和清洗组合物将被缓冲， 即在酸性污垢存在下，它们相对耐pH降低。然而，本发明其他组合物 可具有优异的低缓冲能力或可基本上不被缓冲。在建议使用值下控制 或变化pH的技术更通常是包括不仅使用缓冲剂，而且使用其他的碱、 酸、pH调节体系、双室容器等，它们是本领域技术人员公知的。 本发明优选的ADD组合物包含pH调节组分，其选自水溶性碱性无机 盐和水溶性有机或无机助洗剂，如描述在美国专利5705464和5710115 中。 材料护理剂-优选的ADD组合物可含有作为腐蚀抑制剂和/或防晦 暗助剂有效的一种或多种材料护理剂，如描述在美国专利5705464、 5710115和5646101中。 当存在时，这种保护材料优选掺入低量，例如为ADD组合物的约0.01 ％-5％。 其他材料-任选地包括在本发明组合物中的去污组分或辅助材料 可包括有助于或增强清洗性能、对被清洗的底物的处理或用于改善组 合物的美学性的一种或多种材料。还可包括在本发明组合物中的辅助 物，是以它们常规技术确定的含量使用(一般，辅助材料总共占组合 物重量约30％-99.9％，优选约70％-95％)，包括其他活性组分例 如非磷酸盐助洗剂、色粒、银器护理剂、防晦暗和/或防腐蚀剂、染料、 填料、杀菌剂、碱源、水溶助长剂、抗氧化剂、香料、增溶剂、载体、 加工助剂、颜料和pH控制剂，其描述在美国专利5705464、5710115、 5698504、5695679、5686014和5646101中。 清洗方法-除了本文描述的清洗织物、餐具和其他硬表面和由个 人清洗人体部分的方法外，本发明还包括已带有污垢或污渍的织物的 洗涤预处理方法，包括在使用常规洗涤水溶液洗涤这种织物之前，将 所述污渍和/或污垢直接与高浓度形式的上述清洗组合物接触。优选， 在用常规方法洗涤预处理过的污垢/污渍底物之前，将清洗组合物与污 垢/污渍保持接触约30秒-24小时。更优选，预处理时间为约1-180 分钟。 以下实施例是用于说明本发明组合物，但不必然用于限制或另外 定义本发明的范围。 在所有以下实施例中，蛋白酶1意思是指包含在对应于淀粉分解芽 孢杆菌枯草溶菌素的101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R /248D/252K位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的 氨基酸残基的蛋白酶变体。蛋白酶1可以用本发明任何其他附加的蛋白 酶变体代替，在以下实施例中得到明显相似的结果。 在本发明清洗组合物实施例中，蛋白酶1的酶含量是按纯酶占总组 合物重量表示，其他酶含量是按原料占总组合物重量表示，和除非另 外说明，其他组分按占总组合物重量表示。 另外，在所有以下实施例中，淀粉酶3意思是根据本发明的淀粉酶 变体。 另外，在以下实施例中，使用本领域普通技术人员公知的一些缩 写，其与本文公开内容一致。 实施例1-7 液体硬表面清洗组合物 2非蛋白酶1的蛋白酶，包括，但不限于这里所述的本发明中有用 的其他蛋白酶 **乙二胺二乙酸四钠 ***二乙二醇一己醚 ****所有配方均调至pH7 在实施例6和7中，其中，在这里所述的本发明中有用的蛋白酶的 任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的结果。 实施例2-7 洗餐具组合物 2非蛋白酶1的蛋白酶，包括，但不限于这里所述的本发明中有用的其 他蛋白酶 ****产品pH被调至pH7 在实施例6和7中，其中，在这里所述的本发明中有用的蛋白酶的 任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的结果。 实施例8 洗餐具组合物(A&B ADW；C液体) 组分 A B C STPP 17.5 - - 柠檬酸盐 15.0 - 聚丙烯酸钠(MW 4500) 0.80 - - Acusol 480N - 5.10 - 碳酸钾 8.30 - - 碳酸钠 - 8.50 - 2.1r硅酸钾 3.99 - - 2.0r硅酸钠 2.00 - - 3.2r硅酸钠 5.18 - - 三硬脂酸铅 0.10 - - 非离子表面活性剂 - 2.50 - NaAE0.6S - - 24.70 葡糖酰胺 - - 3.09 C10E8 - - 4.11 甜菜碱 - - 2.06 氧化胺 - - 2.06 氧化镁 - - 0.49 水溶助长剂 - - 4.47 为AvCl2的次氯酸钠 1.15 - - 淀粉酶3 0.002 0.03 0.005 蛋白酶1 0.01 0.43 0.05 平衡量至100％ 实施例9 液体洗餐具组合物(特别适合于日本条件) 组分 A B AE1.4S 24.69 24.69 N-椰油基N-甲基葡糖胺 3.09 3.09 氧化胺 2.06 2.06 甜菜碱 2.06 2.06 非离子表面活性剂 4.11 4.11 水溶助长剂 4.47 4.47 镁 0.49 0.49 乙醇 7.2 7.2 LemonEase 0.45 0.45 香叶醇/BHT - 0.60/0.02 淀粉酶3 0.03 0.005 蛋白酶1 0.01 0.43 平衡量至100％ 实施例10 粒状自动洗餐具组合物 组分 A B C 柠檬酸 15.0 - - 柠檬酸盐 4.0 29.0 15.0 丙烯酸盐/异丁烯酸盐共聚物 6.0 - 6.0 丙烯酸马来酸共聚物 - 3.7 - 干添加剂碳酸盐 9.0 - 20.0 碱金属硅酸盐 8.5 17.0 9.0 石蜡 - 0.5 - 苯并三唑 - 0.3 - 淀粉酶3 1.6 1.6 1.6 蛋白酶1 0.2 0.1 0.06 过碳酸盐(AvO) 1.5 - - 过硼酸盐一水合物 - 0.3 1.5 过硼酸盐四水合物 - 0.9 - 四乙酰乙二胺 3.8 4.4 - 二亚乙基三胺五甲基膦酸(Mg盐) 0.13 0.13 0.13 3摩尔乙氧基化的烷基乙氧基硫酸盐 3.0 - - 烷基乙氧基丙氧基非离子表面活性剂 - 1.5 - 抑泡剂 2.0 - - Olin SLF 18非离子表面活性剂 - - 2.0 硫酸盐 平衡量至100％ 实施例11 根据本发明的密实型高密度(0.96Kg/l)洗餐具洗涤剂组合物A- F： 组分 A B C D E F STPP - 51.4 51.4 - - 44.3 柠檬酸盐 17.05 - - 49.6 40.2 - 碳酸盐 17.50 14.0 20.0 - 8.0 33.6 碳酸氢盐 - - - 26.0 - - 硅酸盐 14.81 15.0 8.0 - 25.0 3.6 偏硅酸盐 2.50 4.5 4.5 - - - PB1 9.74 7.79 7.79 - - - PB4 - - - 9.6 - - 过碳酸盐 - - - - 11.8 4.8 非离子型表面活性剂 2.00 1.50 1.50 2.6 1.9 5.9 TAED 2.39 - - 3.8 - 1.4 HEDP 1.00 - - - - - DETPMP 0.65 - - - - - MnTACN - - - - 0.008 - PAAC - 0.008 0.008 - - - 石蜡 0.50 0.38 0.38 0.6 - - 蛋白酶1 0.1 0.06 0.05 0.03 0.07 0.01 淀粉酶3 1.5 1.5 1.5 2.6 2.1 0.8 BTA 0.30 0.22 0.22 0.3 0.3 0.3 多羧酸盐 6.0 - - - 4.2 0.9 香料 0.2 0.12 0.12 0.2 0.2 0.2 硫酸盐/水 20.57 1.97 2.97 3.6 4.5 3.9 pH(1％溶液) 11.0 11.0 11.3 9.6 10.8 10.9 实施例12 根据本发明的堆密度为1.02Kg/l的粒状洗餐具洗涤剂组合物实施 例A-F： 组分 A B C D E F STPP 30.00 33.5 27.9 29.62 33.8 22.0 碳酸盐 30.50 30.50 30.5 23.00 34.5 45.0 硅酸盐 7.40 7.50 12.6 13.3 3.2 6.2 偏硅酸盐 - 4.5 过碳酸盐 - - - 4.0 PB1 4.4 4.5 4.3 - - NaDCC - - 2.00 - 0.9 非离子型表面活性剂 1.0 0.75 1.0 1.90 0.7 0.5 TAED 1.00 - - 0.9 PAAC - 0.004 - - 石蜡 0.25 0.25 - - 蛋白酶1 0.05 0.06 0.025 0.1 0.02 0.07 淀粉酶3 0.38 0.64 0.46 - 0.6 BTA 0.15 0.15 - 0.2 香料 0.2 0.2 0.05 0.1 0.2 硫酸盐/水 23.45 16.87 22.26 30.08 21.7 25.4 pH(1％溶液) 10.80 11.3 11.0 10.70 11.5 10.9 实施例13 使用标准12头旋转压型机，在压力13KN/cm2下挤压粒状洗餐具洗 涤剂组合物来制备根据本发明的片状洗涤剂组合物实施例A-H： 组分 A B C D E F G H STPP - 48.8 54.7 38.2 - 52.4 56.1 36.0 柠檬酸盐 20.0 - - - 35.9 - - - 碳酸盐 20.0 5.0 14.0 15.4 8.0 23.0 20.0 28.0 硅酸盐 15.0 14.8 15.0 12.6 23.4 2.9 4.3 4.2 蛋白酶1 0.05 0.09 0.05 0.03 0.06 0.03 0.03 0.1 淀粉酶3 1.5 1.5 1.5 0.85 1.9 0.4 2.1 0.3 PB1 143 7.8 11.7 12.2 - - 6.7 8.5 PB4 - - - - 22.8 - 3.4 - 过碳酸盐 - - - - - 10.4 - - 非离子型表面活性剂 1.5 2.0 2.0 2.2 1.0 4.2 4.0 6.5 PAAC - - 0.016 0.009 - - - - MnTACN - - - - 0.007 - - - TAED 2.7 2.4 - - - 2.1 0.7 1.6 HEDP 1.0 - - 0.93 - 0.4 0.2 - DETPMP 0.7 - - - - - - - 石蜡 0.4 0.5 0.5 0.55 - - 0.5 - BTA 0.2 0.3 0.3 0.33 0.3 0.3 0.3 - 多羧酸盐 4.0 - - - 4.9 0.6 0.8 - PEG - - - - - 2.0 - 2.0 甘油 - - - - - 0.4 - 0.5 香料 - - - 0.05 0.20 0.2 0.2 0.2 硫酸盐/水 17.4 14.7 - 15.74 - - - 11.3 片的重量 20g 25g 20g 30g 18g 20g 25g 24.0 pH(1％溶液) 10.7 10.6 10.7 10.7 10.9 11.2 11.0 10.8 实施例14 凹片状自动洗餐具组合物 组分 A(％R.M.) B(g R.M.) C(g R.M.) 片体 碳酸钠 15.348 3.500 5.25 STPP(12％H2O) 46.482 10.600 9.93 Gran HEDP 0.789 0.180 0.28 SKS 6 6.578 1.500 2.25 2比例硅酸盐 7.016 1.600 1.65 PB1 10.743 2.450 3.68 Termamyl 2x PCA 0.491 0.112 .17 Savinase 0.526 0.120 0.18 Plurafac 3.508 0.800 0.9 BTA 0.263 0.060 0.09 PEG 1.140 0.260 - PEG 4000 - - 0.39 Winog 0.439 0.100 0.15 香料 0.101 0.023 0.01 凹处的填料 柠檬酸 0.987 0.225 0.23 碳酸氢盐 2.600 0.593 0.59 Sandolan EHRL染料 0.007 0.0017 0.0017 PEG 400/4000 0.395 0.090 PEG 400 - - 0.02 PEG 4000 - - 0.08 蛋白酶1 0.05 0.268 0.27 淀粉酶3 1.412 0.322 0.32 粒状织物清洗组合物 本发明粒状织物清洗组合物含有有效量的一种或多种蛋白酶，按 组合物的重量计，优选约0.001％-10％，更优选约0.005％-5％，更 优选0.01％-1％活性蛋白酶。(参见美国专利5679630的实施例)。 实施例15 粒状织物清洗组合物 2非蛋白酶1的蛋白酶，包括，但不限于这里所述的本发明中有用的其 他蛋白酶。 在实施例15C和D中，其中，在这里所述的本发明中有用的蛋白酶 的任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的结果。 实施例16 粒状织物清洗组合物 2非蛋白酶1的蛋白酶，包括，但不限于这里所述的本发明中有用的其 他蛋白酶。 在实施例16C和D中，其中，在这里所述的本发明中有用的蛋白酶 的任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的结果。 实施例17 粒状织物清洗组合物 组分 实施例编号 A B 直链烷基苯磺酸盐 11.4 10.70 牛油烷基硫酸盐 1.80 2.40 C14-15烷基硫酸盐 3.00 3.10 7摩尔乙氧基化的C14-15醇 4.00 4.00 11摩尔乙氧基化的牛油醇 1.80 1.80 分散剂 0.07 0.1 聚硅氧烷流体 0.80 0.80 柠檬酸三钠 14.00 15.00 柠檬酸 3.00 2.50 沸石 32.50 32.10 马来酸丙烯酸共聚物 5.00 5.00 二亚乙基三胺五亚甲基磷酸 1.00 0.20 蛋白酶1 0.1 0.01 脂肪酶 0.36 0.40 淀粉酶3 0.30 0.30 硅酸钠 2.00 2.50 硫酸钠 3.50 5.20 聚乙烯基吡咯烷酮 0.30 0.50 过硼酸盐 0.5 1 苯酚磺酸盐 0.1 0.2 过氧化物酶 0.1 0.1 少量组分 最多至100 最多至100 实施例18 粒状织物清洗组合物 实施例编号 组分 A B C12直链烷基苯磺酸钠 6.5 8.0 硫酸钠 15.0 18.0 沸石A 26.0 22.0 次氮基三乙酸钠 5.0 5.0 聚乙烯基吡咯烷酮 0.5 0.7 四乙酰乙二胺 3.0 3.0 硼酸 4.0 - 过硼酸盐 0.5 1 苯酚磺酸盐 0.1 0.2 蛋白酶1 0.02 0.05 淀粉酶3 0.005 0.002 填料(例如硅酸盐、碳酸盐、香料、水) 最多至100 最多至100 实施例19 密实型粒状织物清洗组合物 组分 重量％ 烷基硫酸盐 8.0 烷基乙氧基硫酸盐 2.0 3和7摩尔乙氧基化的C25和C45醇的混合物 6.0 多羟基脂肪酸酰胺 2.5 沸石 17.0 层状硅酸盐/柠檬酸盐 16.0 碳酸盐 7.0 马来酸丙烯酸共聚物 5.0 污垢解脱聚合物 0.4 羧甲基纤维素 0.4 聚(4-乙烯基吡啶)-N-氧化物 0.1 乙烯基咪唑和乙烯基吡咯烷酮的共聚物 0.1 PEG2000 0.2 蛋白酶1 0.03 脂肪酶 0.2 纤维素酶 0.2 淀粉酶3 0.005 四乙酰乙二胺 6.0 过碳酸盐 22.0 乙二胺二琥珀酸 0.3 抑泡剂 3.5 4，4′-二(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6- 0.25 基氨基)茋-2，2′-二磺酸二钠 4，4′-二(2-磺基苯乙烯基)联苯二钠 0.05 水、香料和少量组分 最多至100 实施例20 粒状织物清洗组合物 组分 重量％ 直链烷基苯磺酸盐 7.6 C16-C18烷基硫酸盐 1.3 7摩尔乙氧基化的C14-C15醇 4.0 椰油烷基二甲基羟乙基氯化铵 1.4 分散剂 0.07 聚硅氧烷流体 0.8 柠檬酸三钠 5.0 沸石4A 15.0 马来酸丙烯酸共聚物 4.0 二亚乙基三胺五亚甲基膦酸 0.4 过硼酸盐 15.0 四乙酰乙二胺 5.0 绿土 10.0 聚(氧乙烯)(MW300.000) 0.3 蛋白酶1 0.02 脂肪酶 0.2 淀粉酶2 0.3 纤维素酶 0.2 硅酸钠 3.0 碳酸钠 10.0 羧甲基纤维素 0.2 增白剂 0.2 水、香料和少量组分 最多至100 实施例21 粒状织物清洗组合物 组分 重量％ 直链烷基苯磺酸盐 6.92 牛油烷基硫酸盐 2.05 7摩尔乙氧基化的C14-C15醇 4.4 3摩尔乙氧基化的C12-C15烷基乙氧基硫酸盐 0.16 沸石 20.2 柠檬酸盐 5.5 碳酸钠 15.4 硅酸钠 3.0 马来酸丙烯酸共聚物 4.0 羧甲基纤维素 0.31 污垢解脱聚合物 0.30 蛋白酶1 0.1 脂肪酶 0.36 纤维素酶 0.13 淀粉酶3 0.005 过硼酸盐四水合物 11.64 过硼酸盐一水合物 8.7 四乙酰乙二胺 5.0 二亚乙基三胺五甲基磷酸 0.38 硫酸镁 0.40 增白剂 0.19 香料、聚硅氧烷、抑泡剂 0.85 少量组分 最多至100 实施例22 粒状织物清洗组合物 组分 A B C 基本颗粒组分 LAS/AS/AES(65/35) 9.95 - - LAS/AS/AES(70/30) - 12.05 7.70 硅铝酸盐 14.06 15.74 17.10 碳酸钠 11.86 12.74 13.07 硅酸钠 0.58 0.58 0.58 NaPAA固体 2.26 2.26 1.47 PEG固体 1.01 1.12 0.66 增白剂 0.17 0.17 0.11 DTPA - - 0.70 硫酸盐 5.46 6.64 4.25 DC-1400 Deaerant 0.02 0.02 0.02 水分 3.73 3.98 4.33 少量组分 0.31 0.49 0.31 B.O.T.喷雾 非离子表面活性剂 0.50 0.50 0.50 附聚物组分 LAS/AS(25/75) 11.70 9.60 10.47 硅铝酸盐 13.73 11.26 12.28 碳酸盐 8.11 6.66 7.26 PEG 4000 0.59 0.48 0.52 水/少量组分 4.88 4.00 4.36 功能性添加剂 碳酸钠 7.37 6.98 7.45 过硼酸盐 1.03 1.03 2.56 AC底涂层 - 1.00 - NOBS - - 2.40 污垢解脱聚合物 0.41 0.41 0.31 纤维素酶 0.33 0.33 0.24 蛋白酶1 0.1 0.05 0.15 淀粉酶3 0.002 0.005 0.04 AE-薄片 0.40 0.40 0.29 喷上液体 香料 0.42 0.42 0.42 非离子型喷雾剂 1.00 1.00 0.50 少量组分 最多至100 实施例23 粒状织物清洗组合物 实施例24 粒状织物清洗组合物 实施例25 粒状洗衣洗涤剂组合物25A-C特别适用于欧洲洗衣机条件并根据 本发明制备： 组分 A B C LAS 7.0 5.61 4.76 TAS - - 1.57 C45AS 6.0 2.24 3.89 C25E3S 1.0 0.76 1.18 C45E7 - 2.0 C25E3 4.0 5.5 - QAS 0.8 2.0 2.0 STPP - - 沸石A 25.0 19.5 19.5 柠檬酸 2.0 2.0 2.0 NaSKS-6 8.0 10.6 10.6 碳酸盐I 8.0 10.0 8.6 MA/AA 1.0 2.6 1.6 CMC 0.5 0.4 0.4 PB4 - 12.7 - 过碳酸盐 - - 19.7 TAED 3.1 5.0 Citrate 7.0 - - DTPMP 0.25 0.2 0.2 HEDP 0.3 0.3 0.3 QEA 1 0.9 1.2 1.0 蛋白酶1 0.02 0.05 0.035 脂肪酶 0.15 0.25 0.15 纤维素酶 0.28 0.28 0.28 淀粉酶 0.4 0.7 0.3 PVPI/PVNO 0.4 - 0.1 光敏化的漂白剂(ppm) 15ppm 27ppm 27ppm 增白剂1 0.08 0.19 0.19 增白剂2 - 0.04 0.04 香料 0.3 0.3 0.3 泡腾颗粒 (苹果酸40％，碳酸氢钠 40％，碳酸钠20％) 15 15 5 聚硅氧烷消泡剂 0.5 2.4 2.4 少量组分/惰性组分至100％ 实施例26 以下配方是根据本发明组合物的实施例，其可以是颗粒或片状。 实施例27 以下粒状洗衣洗涤剂组合物27A-E特别适用于日本洗衣机条件并 根据本发明制备： 组分 A B C D E LAS 23.57 23.57 21.67 21.68 21.68 FAS 4.16 4.16 3.83 3.83 3.83 非离子表面活性剂 3.30 3.30 2.94 3.27 3.27 二(羟乙基)甲基烷基氯化铵 0.47 0.47 1.20 1.20 1.20 SKS-6 7.50 7.50 5.17 5.76 5.06 聚丙烯酸盐共聚物(MW 11000)(马来酸/丙烯酸盐 比例为4∶6) 7.03 7.03 14.36 14.36 14.36 沸石 11.90 11.40 10.69 11.34 11.34 碳酸盐 14.90 14.82 11.71 11.18 11.18 硅酸盐 12.00 12.00 12.37 12.38 12.38 蛋白酶1 0.016 0.016 0.046 0.046 0.046 脂肪酶 - - 0.28 - - 淀粉酶2 - - 0.62 - - 纤维素酶 - - 0.48 - 0.70 NOBS 3.75 3.75 2.70 2.70 2.70 PB1 3.53 - 2.60 - - 过碳酸钠 - 4.21 - 3.16 3.16 SRP 0.52 0.52 0.70 0.70 0.70 增白剂 0.31 0.31 0.28 0.28 0.50 AE-复合薄片 0.17 0.20 0.17 0.17 0.17 聚二甲基硅氧烷 - - 0.68 0.68 0.68 香料 0.06 0.06 0.08 - - 香料 - - - 0.23 0.23 疏水性沉淀二氧化硅 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 PEG4000 0.19 0.19 0.17 0.17 0.17 少量组分/惰性组分至100％ 液体织物清洗组合物 本发明液体织物清洗组合物优选含有有效量的一种或多种蛋白 酶，按组合物的重量计，优选约0.001％-10％，更优选约0.001％-1 ％，最优选0.0001％-0.1％活性蛋白酶。(参见美国专利5679630的 实施例)。 实施例28 液体织物清洗组合物 2非蛋白酶1的蛋白酶，包括，但不限于这里所述的本发明中有用 的其他蛋白酶 在实施例28D和E中，其中，在这里所述的本发明中有用的蛋白酶 的任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的结果。 实施例29 液体织物清洗组合物 实施例编号 组分 A B C12-14烯基琥珀酸 3.0 8.0 柠檬酸-水合物 10.0 15.0 C12-14烷基硫酸钠 8.0 8.0 2摩尔乙氧基化的C12-15醇 - 3.0 7摩尔乙氧基化的C12-15醇 - 8.0 5摩尔乙氧基化的C12-15醇 8.0 - 二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸) 0.2 - 油酸 1.8 - 乙醇 4.0 4.0 丙二醇 2.0 2.0 蛋白酶1 0.01 0.02 淀粉酶3 0.005 0.002 聚乙烯基吡咯烷酮 1.0 2.0 抑泡剂 0.15 0.15 NaOH 最多至pH7.5 过硼酸盐 0.5 1 苯酚磺酸盐 0.1 0.2 过氧化物酶 0.4 0.1 水和少量组分 最多至100％ 实施例30 液体织物清洗组合物 实施例编号 组分 28 NaLAS(100％am) 16 Neodol 21.5 柠檬酸盐 6.8 EDDS 1.2 分散剂 1.3 过硼酸盐 12 N-壬酰基-6-氨基己酸的苯酚磺酸酯 6 蛋白酶1(％纯酶) 0.03 淀粉酶3 0.40 Carezyme 0.03 溶剂(BPP) 18.5 聚合物 0.1 碳酸盐 10 FWA 15 0.2 TiO2 0.5 PEG8000 0.4 香料 1.0-1.2 抑泡剂 0.06 水和少量组分 最多至100％ 实施例31 液体织物清洗组合物 实施例编号 组分 A B Dl水 38.63 - MEA 0.48 9.0 NaOH 4.40 1.0 Pdiol 4.00 10.0 柠檬酸 2.50 2.0 DTPA 0.50 1.0 FWA预混合物(Br 15/MEA/NI 23-9) 0.15 0.15 Na C25AE1.80S 23.50 - AE3S(H) - 4.0 C11.8HLAS 3.00 14.0 Neodol 2.00 6.0 EtOH 0.50 2.0 甲酸钙* 0.10 0.1 硼砂预混合物(硼砂/MEA/Pdiol/柠檬酸) 2.50 - C10 APA 1.50 - TEPA 105 1.20 - FA C12-18 5.00 - Neptune LC 0.50 - 染料 0.0040 0.0015 纤维素酶 0.053 0.2 淀粉酶3 0.15 0.2 蛋白酶1 0.1 0.1 DC 2-3597 0.12 0.2 菜子FA 6.50 4.0 水和少量组分 最多至100％ 实施例32 液体织物清洗组合物 组分 30 NaOH 5.50 Pdiol 6.90 柠檬酸 1.50 DTPA 1.50 FWA预混合物(Br15/MEA/N1 23-9) 0.15 AE3S(H) 2.50 LAS(H) 13.0 Neodol 2.00 EtOH 3.50 甲酸钙* 0.10 硼酸 1.00 粘土 4.00 淀粉酶3 0.15 蛋白酶1 0.02 脂肪酸 16.50 水和少量组分 最多至100％ 实施例34 液体织物清洗组合物 根据本发明制备以下特别适用于日本洗衣机条件的液体织物清洗 组合物： 组分 34 AE2.5S 15.00 AS 5.50 N-椰油基-N-甲基葡糖胺 5.00 非离子表面活性剂 4.50 柠檬酸 3.00 脂肪酸 5.00 碱 0.97 单乙醇胺 5.10 1，2-丙二醇 7.44 EtOH 5.50 HXS 1.90 硼酸 3.50 乙氧基化四亚乙基五胺 3.00 SRP 0.30 蛋白酶1 0.069 淀粉酶3 0.06 纤维素酶 0.08 脂肪酶 0.18 增白剂 0.10 少量组分/惰性组分至100％ 实施例35 液体织物清洗组合物 根据本发明制备以下特别适用于日本洗衣机条件的液体织物清洗 组合物： 组分 35 AE2.5S 2.16 AS 3.30 N-椰油基-N-甲基葡糖胺 1.10 非离子表面活性剂 10.00 柠檬酸 0.40 脂肪酸 0.70 碱 0.85 单乙醇胺 1.01 1，2-丙二醇 1.92 EtOH 0.24 HXS 2.09 蛋白酶1 0.01 淀粉酶3 0.06 少量组分/惰性组分至100％ 条状织物清洗组合物 适用于手洗脏织物的本发明条状织物清洗组合物一般含有有效量 的一种或多种蛋白酶，按组合物的重量计，优选约0.001％-10％，更 优选约0.01％-1％活性蛋白酶。(参见美国专利5679630的实施例)。 实施例36 条状织物清洗组合物 *可选自适宜的材料例如CaCO3、滑石粉、粘土、硅酸盐等。 2非蛋白酶1的蛋白酶，包括，但不限于这里所述的本发明中有用的其 他蛋白酶。 在实施例36C和D中，其中，在这里所述的本发明中有用的蛋白酶 的任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2，得到基本上相似的结果。 虽然已描述了本发明的具体实施方案，但在不脱离本发明精神和 范围下可对本发明进行各种变化和修改，这对于本领域技术人员来说 是显而易见的。在所附的权利要求书中意图覆盖在本发明范围内的所 有这样的修改。 本发明组合物可适宜用配方师选择的任何方法来制备，其非限制 实施例描述在1997年11月11日授权的Nassano等的美国专利5691297； 1996年11月12日授权的Welch等的美国专利5574005；1996年10月29日 授权的Dinniwell等的美国专利5569645；1996年10月15日授权的Greco 等的美国专利5565422；1996年5月14日授权的Capeci等的美国专利 5516448；1996年2月6日授权的Capeci等的美国专利5489392和1996年1 月23日授权的Capeci等的5486303中，所有这些专利在本文引用作参 考。 除了上述实施例外，本发明清洗组合物可配制成任何适合的洗衣 洗涤剂组合物，其非限制实例描述在1997年10月21日授权的Baeck等的 美国专利5679630；1996年10月15日授权的Watson等的美国专利 5565145；1995年12月26日授权的Fredj等的美国专利5478489；1995年 11月28日授权的Fredj等美国专利5470507；1995年11月14日授权的 Panandiker等的美国专利5466802；1995年10月24日授权的Fredj等的 美国专利5460752；1995年10月17日授权的Fredj等美国专利5458810； 1995年10月17日授权的Fredj等美国专利5458809和1994年2月22日授权 的Huber等的美国专利5288431中，所有这些专利在本文引用作参考。 参考优选的实施方案和实施例，已详细描述了本发明，在不脱离 本发明范围下可作各种变化和修改，这对于本领域技术人员来说是显 然的，并且不认为本发明限制在说明书中所述内容。 序列描述：SEQ ID No.1 His His Asr Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr 1 5 10 15 Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ala 20 25 30 Asn Leu Lys Ser Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp 35 40 45 Lys Gly Thr Ser Gln Asr Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr 50 55 60 Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly 65 70 75 80 Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Thr Ser Leu Lys Asn Asn Gly 85 90 95 Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp 100 105 110 Gly Tnr Glu Ile Val Asn Ala Val Glu Val Asn Arg Ser Asn Arg Asn 115 120 125 Gln Glu Thr Ser Gly Glu Tyr Ala Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp 130 135 140 Phe Pro Gly Arg Gly Asn Asn His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr 145 150 155 160 His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Gln Asn Lys 165 170 175 Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Thr Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp 180 185 190 Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met 195 200 205 Asp His Pro Glu Val Ile His Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr 210 215 220 Thr Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His 225 230 235 240 Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Thr 245 250 255 Thr Gly Lys Pro Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu 260 265 270 Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Ser Trp Asn His Ser Val 275 280 285 Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly 290 295 300 Gly Tyr Tyr Asp Met Arg Asn Ile Leu Asn Gly Ser Val Val Gln Lys 305 310 315 320 His Pro Thr His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro 325 330 335 Gly Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Gln Gln Trp Phe Lys Pro Leu Ala 340 345 350 Tyr Ala Leu Val Ieu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr 355 360 365 Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser 370 375 380 Lys Ile Asp Pro Ieu Leu Gln Ala Arg Gln Thr Phe Ala Tyr Gly Thr 385 390 395 400 Gln His Asp Tyr Phe Asp His His Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu 405 410 415 Gly Asn Ser Ser His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp 420 425 430 Gly Pro Gly Gly Asn Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Asn Lys Ala Gly 435 440 445 Gln Val Trp Arg Asp Ile Thr Gly Asn Arg Thr Gly Thr Val Thr Ile 450 455 460 Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser 465 470 475 480 Val Trp Val Lys Gln 485 序列描述：SEQ ID NO.2 His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His 1 5 10 15 Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser 20 25 30 Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp 35 40 45 Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr 50 55 60 Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly 65 70 75 Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly 80 85 90 95 Val Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp 100 105 110 Ala Thr Glu Asn Val Leu Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn 115 120 125 Gln Glu Ile Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp 130 135 140 Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr 145 150 155 His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg 160 165 170 175 Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trl Asp Trp Glu Val Asp 180 185 190 Ser Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met 195 200 205 Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr 210 215 220 Thr Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His 225 230 235 Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala 240 245 250 255 Thr Gly Lys Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu 260 265 270 Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Asr Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val 275 280 285 Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn LeL Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly 290 295 300 Gly Asn Tyr Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys 305 310 315 His Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro 320 325 330 335 Gly Glu Ser Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala 340 345 350 Tyr Ala Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln GlY Tyr Pro Ser Val Phe Tyr 355 360 365 Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala 370 375 380 Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Thr 385 390 395 Gln His Asp Tyr Phe Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu 400 405 410 415 Gly Asn Thr Thr His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met 5er Asp 420 425 430 Gly Pro Gly Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asn Lys Ala Gly 435 440 445 Gln Val Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Pro Gly Thr Val Thr Ile 450 455 460 Asn Ala Asp Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser 465 470 475 Ile Trp Val Lys Arg 480 序列描述：SEQ ID No.3 His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro- Asn-Asp 序列描述：SEQ ID No.4 AAPFNGTMMQ YFEWYLPDDG TLWTKVANEA NNLSSLGITA LWLPPAYKGT SRSDVGYGVY DLYDLGEFNQ KGAVRTKYGT KAQYLQAIQA AHAAGMQVYA DVVFDHKGGA DGTEWVDAVE VNPSDRNQEI SGTYQIQAWT KFDFPGRGNT YSSFKWRWYH FDGVDWDESR KLSRIYKFRG IGKAWDWEVD TENGNYDYLM YADLDMDHPE VVTELKSWGK WYVNTTNIDG FRLDAVKHIK FSFFPDWLSD VRSQTGKPLF TVGEYWSYDI NKLHNYIMKT NGTMSLFDAP LHNKFYTASK SGGTFDMRTL MTNTLMKDQP TLAVTFVDNH DTEPGQALQS WVDPWFKPLA YAFILTRQEG YPCVFYGDYY GIPDYNIPSL KSKIDPLLIA RRDYAYGTQH DYLDHSDIIG WTREGVTEKP GSGLAALITD GPGGSKWMYV GKQHAGKVFY DLTGNRSDTV TINSDGWGEF KVNGGSVSVW VPRKTTVSTI AWSITTRPWT DEFVRWTEPR LVAWP |
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