稳定的油包水乳状液

本发明描述了稳定的油包水乳状液。此乳状液用于向饲料、食 品或化妆品组合物中加入不稳定化合物。

用于食品、饲料和化妆品的几种添加剂被认为是不稳定的，例 如着色剂、维生素、疫苗或酶。

添加剂与组合物中其他化合物可能是化学不相容的或酶不相容 的。另外，添加剂可能是热不稳定的，因此，在升温过程中可能会 失活。例如，饲料或食品经常经挤压过程来制备。为了得到所需形 状的食品或饲料颗粒，挤压过程是非常必要的。此外，有一种增长 的趋势，那就是基本的饲料或食品含有各种添加剂。饲料或食品组 合物更经常的是由各种添加剂构成，这些添加剂以前是单独使用的。

已建议采用几种办法解决不稳定化合物降解的问题。一种办法 是在提高的温度下，在一个工序之后，例如挤压工序之后，加入所 需化合物。关于不稳定化合物的成分和向食品或饲料中加入这种化 合物的方法，已经有不同的报道。

DE 26 02260描述了酶悬浮液在一种液体或一种熔融食用脂肪 中的应用。混合物冷却后，原料必须粒化。经过粗略破坏后，颗粒 可进一步处理例如，通过碾磨。此过程的缺点是，保证小颗粒尺寸 而进行的粉剂研磨非常费时而且会导致粉尘出现。

国际专利申请WO 93/14645解决了这个问题，在挤压过程后， 加入含热不稳定化合物的油悬浮液。在降低的压力下向颗粒中加入 悬浮液。

国际专利申请WO 92/06599描述了用于保护疫苗的油包水乳 状液的应用。没有提到作为乳状液一部分的(蛋白质)稳定剂(即 水活性低的)的使用。不稳定化合物，例如酶，在这样的乳状液中 会导致酶活性很快的损失。在热的天气里这种损失每月可能达到 50％，这对于商业产品来说是不可接受的。此专利申请也描述了基 于卵磷酯的乳化剂的优选应用。

国际专利申请WO 93/16175描述了含有作为稳定剂的脲和/或 多元醇的稳定的含水酶溶液。脲和多元醇是熟知的用于稳定水环境 中酶的稳定剂。

在化妆品领域，也有一个增长的趋势，即在含有最后产物的油 中含有不稳定化合物。用于皮肤防护，清洁和恢复活力的化合物显 然是令人感兴趣的。不稳定化合物在这方面有着有益的效果，包括 酶，例如蛋白酶。

为了在延长的存放期内保证化妆品成分中酶的活性，基本不含 水、疏水化合物例如蜡，植物或矿物油常用于酶配制剂中。尽管这 种方法预示了在化妆配制品中酶的高贮藏稳定性，一个严重缺点是， 只有通过把配制品置于大量水中，酶才能活化。(在此过程中，最初 的不含水的酶被溶解)。一个随之而来的问题是酶活性比较低，浪费 了大量的初始酶活性。这种方法在几种化妆品应用中不太方便。

J03004791中描述的一种可替代方法中，通过把多糖加入酶水 溶液中使要在化妆品中使用的蛋白分解酶稳定。尽管这种方法能够 用最少量的水使酶重新活化，但此法不考虑在化妆品配方中使用亲 油相。

本发明公开了稳定的油包水乳状液。特别的是，本发明公开一 种油包水乳状液，其特征是，乳状液含有下列成分：水、油、所研 究的一种不稳定化合物、一种稳定剂和一种乳化剂。

本发明的油包水乳状液含有溶解于水相中、通过加入稳定剂使 其稳定的不稳定化合物，优选稳定剂是一种水活性降低剂，更优选 多元醇。多元醇以高浓度加入油包水乳状液的水相中，即至少占总 量的10％，优选10-70％，最优选30～70％(重量百分比)。

优选的组成包括油包水乳状液，水相中不稳定化合物与多元醇 共存，乳状液用乳化剂稳定，乳化剂在高浓度的多元醇下是有活性 的。优选使用的乳化剂是蒸馏过的单酸甘油酯或聚甘油聚蓖麻油酸 酯。

此外，所研究的化合物优选是酶、维生素、着色剂或疫苗。

本发明的乳状液可用于保护加入到食品、饲料、化妆品或油性 组合物之前的不稳定化合物。

本发明的油包水乳状液在更长的期间内是稳定的。它们可以用 于制备人类或动物食物。例如，本发明的油包水乳状液被喷洒到食 品或饲料颗粒上。优选乳状液在油或脂肪中稀释后再喷洒到饲料或 食品颗粒上。另外，本发明的乳状液可用于化妆品组合物的制备。

本发明公开了一种油包水乳状液，乳状液的水相中含有所研究 的一种不稳定化合物和一种稳定剂，用一种适当的乳化剂稳定乳状 液。

油包水乳状液含有以下成分：水，油，所研究的一种不稳定的 化合物，一种稳定剂和一种乳化剂。不稳定化合物存在于水相中。稳 定剂加到水相中以稳定所需的化合物。

不稳定化合物可以是任何一种化合物，此化合物与其它化合物 在化学上或酶学上是不相容的。不相容的化合物可以存在于乳状液 中或存在于加入了乳状液的组合物中。另外，不稳定化合物可以是 任何热不稳定化合物。

本发明公开了在水相中含有不只一种不稳定化合物的稳定油包 水乳状液。本发明还公开了另一种稳定的油包水乳状液，此乳状液 在水相中含有一种不稳定化合物和一种与不稳定化合物不相容的化 合物。本发明能够制备含有互不相容的水溶性化合物的乳状液。通 过不相容化合物并入乳状液油相中的单个水滴，可完成不相容化合 物的物理分离。

不稳定化合物优选含有例如可以做为前生命期的微生物。不稳 定化合物更优选酶、维生素、着色剂或疫苗。合适的酶包括蛋白酶、 植酸酶、糖酶、脂肪酶、磷脂酶和氧化还原酶。合适的维生素包括 水溶性维生素，例如维生素C。

本发明的乳状液对配制互不相容的化合物，例如，其中之一是 蛋白水解酶的酶混合物，是特别有用的。

此外，本发明的乳状液能够使不稳定化合物有准确的剂量。首 先是因为不稳定化合物的稳定性能够保证，另外是因为液体乳状液 的剂量，特别是稀释在油中的乳状液的剂量，比粉剂的剂量更准确。 例如，在饲料加工过程中，象热、压力、湿度、氧化还原反应和摩 擦等因素可能会对维生素稳定性有惊人的影响，这是众所周知的。特 别是维生素E、维生素K和维生素C(抗坏血酸)的不稳定性是众所 周知的(例如，参见M.B Coelho，Feed International，December 1991， p39-45)。抗坏血酸是水溶性的，对象铁这样经常加到饲料中的痕量 矿物质是极其敏感的。抗坏血酸并入到本发明的油包水乳状液的水 相对于尽量减少维生素用量是很有吸引力的选择。

本发明的油包水乳状液包括含有高浓度所需化合物的水相。以 0.01-30％(重量比，以活性化合物的干重计)的量向水相中加入 此化合物。

通过向水相中加入稳定剂使不稳定化合物稳定。优选水活性降 低剂作稳定剂。优选的水活性降低剂是盐，更优选的是多元醇。特 别适用的多元醇是甘油、山梨醇、蔗糖、聚丙二醇、海藻糖、麦芽 糖糊精、乳糖和葡萄糖。

另外，水活性降低剂有抑制乳状液水相中微生物生长的作用。如 果需要，可以通过与苯甲酸酯和山梨酸酯这样可被接受的(食物 级)抗菌剂的结合，提高水相的微生物稳定性。

水活性降低剂加到水相中的量取决于达到所需稳定效果或抗菌 效果所要求的剂量。加入水相中多元醇至少为10％，优选10～70％， 更优选30～70％(重量百分比)。

使用乳化剂以获得稳定的乳状液。乳化剂是表面活性物质，能 够使一种液相分散到另一种液相中。乳化剂含有亲水基和亲油基，亲 水基和亲油基的比值称为HLB值。

一般地，脂溶疏水乳化剂的HLB值范围为0-9，而水溶性物质 的HLB值在11和20之间。用于稳定油包水乳状液的合适的乳化剂 或乳化剂混合物的HLB值要求在较低的范围内。

令人吃惊的是，大家熟知的乳化剂，例如SpanTM 80(HLB＝4. 3)，TweenTM 80(HLB＝15)及其混合物在相对较多的多元醇存在情 况下没有产生稳定的油包水乳状液。基于卵磷脂的乳化剂，象 EmulbestoTM 200，EmulfluidTM E同样会导致快速分相。

本发明首次描述了在较多的多元醇存在情况下有活性的乳化 剂。已发现了在高达50％多元醇存在情况下仍有效的乳化剂。

适用的乳化剂是单酸甘油酯(例如HymonoTM1163和HymonoTM 8704)和聚甘油聚蓖麻油酸酯(AdmulTM WOL 1403)。由于所选择的 乳化剂在较多的多元醇存在情况下的有效性，油相中单个水滴的聚 结是很少的。这样，本发明的乳状液可适当阻止非油溶化合物在乳 状液单个水滴之间的迁移。

聚甘油聚蓖麻油酸酯(AdmulTM WOL 1403)与植酸酶结合是非 常有用的。

聚甘油聚蓖麻油酸酯在室温下是液体，在与油混合前或混合过 程中不需要加热。使用聚甘油聚蓖麻油酸酯时，乳状液的粘度仍然 很低，而且几乎不发生液滴絮凝。另外，使用聚甘油聚蓖麻油酸酯 允许在乳状液中有高浓度的水相。

本发明乳状液所用的油是在食品、饲料或化妆品制备中常用的 油。包括鱼油、豆油、菜子油、橄榄油、玉米油、棕榈油、鳄梨油 和不同的矿物油。

本发明进一步公开了油包水乳状液的制备方法。

制备乳状液需输入大量的能量。例如通过剧烈的搅拌或通过很 大的剪切力。用这种方法，可得到稳定的乳状液，乳状液可以此形 式稳定地贮藏。

本发明公开了在长期贮存中保持稳定的乳状液。乳状液在一个 月贮存期内是稳定的，更优选6个月贮存期是稳定的，最优选超过 一年。

本发明的油包水乳状液可以做为食品、饲料或化妆品的添加剂。

使用本发明的乳状液能够使食品、饲料或化妆品生产厂家把不 稳定化合物应用于用其它方法将导致不稳定化合物失活的工序。而 且，使用本发明的乳状液适当地防止了非油溶化合物从饲料、食品 或化妆品组合物迁移到乳状液的水相。这样，所研究的存在于乳状 液水相中的不稳定化合物被适当地保护，避免了加入了乳状液的组 合物中存在的化学不相容性或酶不相容性。

本发明的乳状液用于人食品或动物饲料颗粒的制备，特别是用 于鱼或家禽饲料颗粒的制备。优选通过喷洒将乳状液加到食品或饲 料颗粒上。象在国际专利申请WO 93/14645中描述的那样，乳状液 的加入可以在减压情况下操作。

乳状液可以照这样应用于食品或饲料颗粒。优选在加入食品或 饲料前，乳状液在油或脂肪中稀释。这个方法的一个优点是，浓缩 的不稳定化合物可以容易地(即输入能量低)均匀地与油混合。用 这种方法，能够保证活性化合物在油中的均匀分配。然后可将含有 稀释过的所需化合物的油喷洒到食品或饲料颗粒上。在制备要喷洒 到颗粒上的最终混合物方面，此方法所需投资最少。

在另一个应用中，本发明的乳状液可用于改善酱油和菜子油的 脱胶。此情形中，乳状液含有磷脂酶A2。脱胶是从指定的油中除去 卵磷脂。在EP 0513 709中，磷脂酶用于脱胶已经有详尽描述。这种 酶可以改善非水合磷脂酶的水溶性，促进它们从油中除去。本发明 的油包水乳状液便于磷脂酶加入到指定油中。

下面提出一些实施例，它们只是用于说明本发明绝不用来限制 本发明的范围。

                   实施例1

使用不同乳化剂和不同酶的油包水乳状液的物理稳定性 1a. 酶溶液的组成

用食品级中性蛋白酶和饲料级植酸酶说明各种油包水乳状液的 稳定性。

蛋白酶标准溶液含有溶于80克水中的20克蛋白酶B500(Gist -brocades，Holland)。完全溶解后，加入山梨醇或甘油，溶解以达到 标明的浓度。植酸酶标准溶液含有粗发酵浓缩物(NatuphosR UF浓 缩物，通过超滤无菌的曲酶属培养物滤液获得)或含有含40％山梨 醇的标准发酵产品Natuphos5000(Gist-brocades，Holland)。在各 种实验中使用的植酸酶溶液，含有最终浓度在35～50％之间的甘油 或山梨醇。 1b. 用SpanTM  80/TweenTM  80混合物制备的乳状液0.5克SpanTM 80 或TweenTM 80乳化剂(两者都来自Brocacef，the Netherlands)加入到 5克鱼油(毛鳞鱼油，从Skretting，Norway获得)中。另外，制备了 含有不同比率上述SpanTM 80和TweenTM 80溶液的乳化剂混合物。彻 底混合后，加入0.18克上述稳定过的酶溶液，接着进行充分漩流。

含有与各种SpanTM 80和/或TweenTM 80乳化剂中的一种乳化剂 结合的蛋白酶或植酸酶的乳状液，在室温下，几小时内显示出了油 层和水层的分离。 1c. 用基于卵磷脂的乳化剂制备的乳状液

EmulbestTM 2000，EmulfluidTM E和VP627都是基于卵磷脂的乳 化剂，得自Lucas Meyer，Germany。经过1b中已概括的步骤后，用 0.5克上述每种基于卵磷脂的乳化剂制备乳状液。在几个小时内，用 这些乳化剂产品制备的乳状液就显示出了油层和水层的分离。 1d. 用单酸甘油酯乳化剂制备的乳状液

HymonoTM 1163和HymonoTM 7804得自Quest，Holland。

在慢慢搅拌下，在温度为70℃(对HymonoTM 1163)或50℃ (对HymonoTM 7804)下，24克HymonoTM(一种单酸甘油酯；E471) 溶解于700克鱼油中。随后，溶液至少冷却到50℃，用高速均化器 (Ultra Turrax)将200克酶溶液分散到含乳化剂的油相中，乳状液冷 却到室温。几天以后，水相中只有少量沉积物。通过加入棕榈酸可 使沉积物最少。 1e： 用聚甘油聚蓖麻油酸酯制备乳状液

AdmulTM WOL 1403(聚甘油聚蓖麻油酸酯)得自Quest，Holland。 与不稳定化合物结合，这种乳化剂有其它优点，事实上AdmulTM WOL 1403在室温下是液体，很容易在油相中溶解。这就不需要加热油，使 得处理更加容易，不稳定化合物可以在室温下加到油/乳化剂的混合 物中，因此，使热应力最小。

为了用AdmulTM WOL 1403制备乳状液，把3克AdmulTM WOL 1403与87.5克鱼油混合，接着加入25克Natuphos5000(用50％ 山梨醇稳定)。乳状液的粘度仍然很低，水相液滴大小大约为2μ，而 且没有液滴缔合作用发生。这表明了在这个体系中，AdmulTM WOL 1403具有很好的乳化性能。乳状液的低粘度能够允许浓度高得多的 含酶水相存在于最终的乳状液中。

把AdmulTM的量从3克增加到9克，乳化75克Natuphos5000 液体在87.5克鱼油中的混合物似乎是可能的。至少在6个月内，此 乳状液是物理稳定的。就凝絮作用而言，含植酸酶的AdmulTM乳状液 优于HymonoTM乳状液，而且物理稳定性更高(参见表1)。 表  1 HymonoTM 1163和  AdmulTM WOL 1403乳状液的物理参数

  和特性的比较

  物理参数和特性     HYMONO 1163     ADMUL WOL   溶解乳化剂的温度     70℃     室温   加酶过程中的温度     50℃     室温   制备乳状液所需能量     高     低   乳状液的粘度     中等     低   液滴絮凝作用     中等     低   液滴大小     2-10μ     2μ   乳状液中水相的最大浓度     约22％     (w/w)     约44％     (w/w)

                  实施例2

        中性蛋白酶油包水乳状液中的酶活性 溶液A：

在慢慢搅拌下，5克喷雾干燥的蛋白酶B500制剂溶解在20克 软化水中。用甘油稀释蛋白酶溶液，使甘油最终浓度为50％。 溶液B：

在70℃、慢慢搅拌下，6克HymonoTM 1163溶解于175克鱼油 中。随后，将溶液冷却到50℃。

使用高速均化器，把溶液A分散于溶液B中。将乳状液冷却到 室温。

蛋白酶油包水乳状液的蛋白酶活性大约为17,000U/g乳状液。 蛋白酶从溶液A和从油包水乳状液中的回收率大约为90％，这表明 乳化作用对蛋白质分解活性没有显著的不利影响。25℃或35℃下保 持的乳状液贮藏稳定性示于表2。

              表2  蛋白酶乳状液制品的贮藏稳定性

    时间     (周)     蛋白水解活性             液滴直径                μ     25℃     35℃     U*/g    乳状液   ％     U*/g    乳状液     ％     25℃     35℃     0   16,926     100   16,926     100    2-10    2-10     1   12,078     71   14,719     87    2-10    2-10     2   19,957     118   17,446     103    ---    ---     3   17,056     101   14,892     88    ---    ---     4   15,281     90   14,113     83    ---    ---     5   14,848     88   12,468     74    ---    ---     6   15,844     94   7,143     42    2-10    2-10     7   13,420     79   10,736     63    ---    ---     5    (月)   ---     --   ---     --    2-15    --- *一个蛋白酶活性单位是pH7.0和37℃下从酪蛋白(Hammer- sten，Merck)产生一定量水解产物的酶活性量，在275nm下与1.5μg/ ml酪氨酸有类似的光密度。

                       实施例3

稳定的植酸酶油包水乳状液中的酶活性 溶液A：

在慢慢搅拌下，100克山梨醇溶解于100克NatuphosUF浓缩 物中。 溶液B：

在70℃、慢慢搅拌下，24克HymonoTM1163溶解在700克鱼油 中。随后，溶液冷却至50℃。

使用高速均化器，把溶液A分散于溶液B中。乳状液冷却到室 温。

植酸酶活性从溶液A和植酸酶油包水乳状液中的回收率大约 为90％。这说明，乳化作用对酶的植酸降解活性没有不利影响。用 如EP 0 420 358所述方法测定植酸酶活性。

25℃或35℃下保持的乳状液贮藏稳定性示于表3。

                表3  植酸酶乳状液制品的贮藏稳定性

    时间     (周)     植酸酶活性            液滴直径               μ   25℃   35℃   U*/g   乳状液      ％   U*/g   乳状液      ％    25℃   35℃     0   531     100   531     100    2-10   2-10     1   623     117   569     107    2-10   2-10     3   494     93   654     123    ---   ---     4   616     116   528     99    ---   ---     5   523     98   337     63    ---   ---     6   513     97   451     85    2-10   2-15     7   295     56   380     71    ---    ---     5    (月)   ---     --   ---     --    2-10    ---

*一个植酸酶活性单位定义为，37℃、pH5.50下以1μmol/min 速率从1.5mM肌醇六磷酸钠释放无机磷的酶量。

                        实施例4

使用聚甘油聚蓖麻油酸酯的稳定的植酸酶和蛋白酶油包水乳状 液的制备 4a. 植酸酶/油乳状液

3.0克或9.0克AdmulTM W 1403溶解在87.5克鱼油中，于是在 2*30秒期间内在全速下使用Ultra Turrax，用75.0克含50％山梨醇 的Natuphos5000来制备乳状液。用40％山梨醇稳定的Natuphos ，在使用了另外的山梨醇后，已达到含山梨醇为50％。结果，计 算的活性将是4100U/g而不是5000U/g。 乳状液的破碎：

将乳状液缓慢深冻，直至-20℃为止，在这个温度下保持20小 时。然后，让乳状液的温度回升到室温，在20,000转/分钟下，在 Sorvall离心器中(SM 24个转子)，乳状液被离心分离30分钟。在此 处理过程中，温度为20-25℃。

这时，含有3.0克乳化剂的乳状液分成3层，即清澈的油层，薄 的中间相和清澈的水层。在水层内，测得植酸酶活性为3750U/g，表 明植酸酶活性回收率至少为90％。

含有9.0克乳化剂的乳状液不能采用离心法分离。在室温下，至 少在6个月期间内，此乳状液可以保持稳定。这与在实施例1中描 述的植酸酶乳状液的高稳定性是一致的。 4b. 蛋白酶/油乳状液

用上述对植酸酶/油乳状液所用的同样方法，使在50％山梨醇 溶液中的87.5克鱼油、3.0克AdmulTM WOL 1403(溶解在鱼油中) 和75.0克蛋白酶B500的混合物变得均匀。出乎意料的是，蛋白质 分解酶与AdmulTM WOL乳化剂结合产生的乳状液，同蛋白酶B500 与HymonoTM乳化剂(见实施例2)结合产生的乳状液稳定性相比，此 乳状液显示出了降低的稳定性。显然，在制备蛋白酶B500乳状液中， 将优选HymonoTM乳化剂。

                     实施例5

植酸酶在含蛋白酶的乳状液中的稳定性

为了表明乳状液对不相容化合物的保护效果，制备了含植酸酶 和酸性蛋白酶的油包水乳状液。本实施例表明，在水相中含有植酸 酶或蛋白酶的乳状液混合物，比在同一水相中含两种混合酶的乳状 液更稳定。 原料 Natuphos UF浓缩液(用通过稀释得自Freres，France的70％山梨 醇溶液而得到的50％山梨醇溶液稳定)。 Fromase150 TL(一种源于米黑毛霉(Mucor miehei)的液体酸性蛋 白酶，得自Gist-brocades) AdmulTM WOL 1403(得自Quest，Holland)。 鱼油(毛鳞鱼油，得自Skretting，Norway)。 5a. Natuphos /油乳状液

按实施例4中已述方法，把6克AdmulTM WOL溶解在87.5克鱼 油中，随后把75克NatuphosUF浓缩物与此鱼油强烈混合而得到 乳状液。乳状液在20℃下保存。第一个样品立刻在-20℃下冷冻。 5b. Fromase /油乳状液

2毫升Fromase150 TL加到含50％山梨醇的98毫升水中。通 过混合87.5克鱼油、6克AdmulTM WOL和75克Fromase溶液制备 标准乳状液。乳状液在20℃下保存。 5c. 混合的乳状液

乳状液(5a)和(5b)制备完毕后，通过立刻把100毫升Natuphos /油乳状液加到100毫升Fromase/油乳状液中制备混合的乳状 液。彻底地手动混合后，混合物在20℃下贮存。第一个样品立即在 -20℃下冷冻。 5d. Natuphos -Fromase /油乳状液

750微升的FromaseTL加到含山梨醇的75克Natuphos UF浓缩物中，然后混合。加入87.5克含6克AdmulTM WOL的鱼油， 紧接着强烈混合，制得所需乳状液。乳状液在20℃下贮藏。第一个 样品立刻在-20℃下冷冻。 5c. 植酸酶在各种乳状液中的稳定性

各种乳状液在20℃保存，经过5天和10天贮藏后取出样品，立 刻在-20℃下冷冻。在-20℃下至少一夜后，把各样品解冻，然后 如实施例4中所述进行离心分离。通过得自水层的样品测定植酸酶 活性。假设得自Natuphos/油乳状液(5a)的各样品的活性为 100％，分别经过5天和10天贮藏后，记录下列植酸酶活性。

在混合的乳状液(5c)中：分别具有94％和96％的初始植酸酶 活性。

在Natuphos-Fromase油乳状液(5d)中：分别具有80％和 78％的初始植酸酶活性。

考虑到由于山梨醇的存在，Fromase的蛋白水解活性较低，数 据表明乳状液增加了合成的不稳定化合物的稳定性。当与蛋白酶分 别被乳化时，植酸酶被保护以防止蛋白水解的作用。

                   实施例6

维生素C在具有化学不相容性饲料中的稳定性

除了在同一乳状液中使用两种不相容酶的实施例中所观察到的 稳定效果以外，在把维生素C(抗坏血酸)与饲料颗粒接触时，也观 察到类似的效果。

有许多文献证明了抗坏血酸和象铜、铁这样痕量矿物质的不相 容性(例如参见CRC Handbook of Food Additives，second edition，page 85及其以后内容)。然而，对某一饲料的应用，例如烤焙精制饲料， 营养学家建议铁与抗坏血酸结合使用。本实施例说明，混合到乳状 液里的抗坏血酸比与烤焙精制饲料颗粒混合后没有乳化的抗坏血酸 更稳定。 原料：

豆油(由OPG Farma，Holland精炼)。

AdmulTM WOL 1403 甘油86％ 柠檬酸(一水合物p.a.) 抗坏血酸(p.a.) 烤焙精制饲料(得自Arkervaart，Holland) 6a. 抗坏血酸和柠檬酸的水溶液

通过在45克软化水中溶解1克柠檬酸和4克抗坏血酸来制备 水相。所得到的水溶液混合物的pH约为2.4。完全溶解后，加入50 克甘油，混合物被充分混合。 6b. 抗坏血酸/油乳状液

按实施例4中所述方法，把3克AdmulTM 1403溶解在87.5 克豆油中，再加入75克6a中所述的水相，可制得一种稳定的乳状 液。 6c. 抗坏血酸/油乳状液在脂肪中的稀释

在油或液化的脂肪中稀释后再使用这些乳状液。稀释后的乳状 液被喷洒到颗粒状或挤压成形的饲料上。为使乳状液与脂肪混合，把 100毫升乳状液(6b)加入100毫升豆油中，然后，液体被用手工充 分地混合。 6d. 抗坏血酸/脂肪乳状液和抗坏血酸水溶液与烤焙精制饲料的混 合

不论是从抗坏血酸脂乳状液开始，还是从抗坏血酸水溶液开始， 等量的抗坏血酸(最终浓度为200ppm)加到烤焙精制饲料颗粒上，此 烤焙精制饲料颗粒来源于本地供应商。为此，把200毫升油乳状液 喷洒到10千克在混凝土混合器中旋转的饲料颗粒上。同样，把50毫 升含水抗坏血酸混合物(6a)喷洒到10千克在混凝土混合器中旋转 的饲料颗粒上。然后，把另外100毫升豆油喷洒到这些饲料颗粒上。 喷洒并立刻取样后，对样品进行抗坏血酸和脱氢抗坏血酸分析。 6e. 在烤焙精制饲料中的抗坏血酸分析

用如Methods of Biochemical Analysis and Food Analysis using Sin- gle Reagents(Boehringer Mannheim，1989)中所述的脱氢抗坏血酸/抗 坏血酸检验方法，分析抗坏血酸和脱氢抗坏血酸。

用10毫升丙酮萃取10克颗粒10分钟(用于溶解脂肪物质)，随 后加入90毫升含1克/升的乙底酸钠的软化水。把饲料颗粒与水相 在Ultra Turrax混合1分钟后，把样品离心分离。使用试剂盒 NO.409677(Boehringer Mannheim)，测定上清液中的抗坏血酸和脱氢 抗坏血酸的水平。

从被喷洒了含水抗坏血酸的饲料颗粒中，可以回收20％的抗坏 血酸。相反，从用稀释过的抗坏血酸。相反，从用稀释过的抗坏血 酸/油乳状液喷洒的饲料颗粒中，90％的抗坏血酸得到回收。这表明， 在饲料制备中乳状液对抗坏血酸稳定性具有保护作用。