具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用 |
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| 申请号 | CN201510684453.5 | 申请日 | 2015-10-22 | 公开(公告)号 | CN105273976A | 公开(公告)日 | 2016-01-27 |
| 申请人 | 甘肃农业大学; | 发明人 | 唐勋; 司怀军; 张国栋; 杨江伟; 张宁; 李世贵; 张莉; 赵仕荣; 雷煜; 徐萍萍; | ||||
| 摘要 | 本 发明 提供了具备焦 碳 酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用，其结构包括：DEPC稀释与储备罐（1）、高压灭菌锅（2）、连接 阀 （5）、 电动机 （6）、气 泵 （7）、DEPC加样孔（8）、进 水 阀（9）、储备罐进水漏斗（10）、搅拌叶（11）、枪头盒架（12）、排水阀（13）、排气阀（14）、灭菌锅顶盖（15）、加 热管 （16）、离心桶（17）、EP管固定仓（21）等结构组成。本发明能够一次对大量枪头和EP管进行RNase灭活，大大减轻了实验员工作量。本仪器对DEPC水封闭管理，避免实验员 接触 DEPC中毒事件的发生。本仪器对DEPC循环使用节约了化学 试剂 ，并对DEPC水加 热分解 处理后排放，保护了环境。 | ||||||
| 权利要求 | 1.具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用，其特征在于所述RNase灭活仪的结构包括：DEPC稀释与储备罐（1）、高压灭菌锅（2）、底座（3）、万向轮（4）、连接阀（5）、电动机（6）、气泵（7）、DEPC加样孔（8）、储备罐进水阀（9）、储备罐进水漏斗（10）、搅拌叶（11）、枪头盒架（12）、排水阀（13）、排气阀（14）、灭菌锅顶盖（15）、加热管（16）、离心桶（17）、枪头盒架锁扣（18）、EP管固定仓挡板（20）、EP管固定仓（21）、枪头档板（22）、枪头盒面板（23）、高压灭菌锅进水漏斗（25）；储备罐和高压灭菌锅安装在带万向轮的底座上；气泵和储备罐进水阀安装在储备罐上方，连接阀安装在储备罐和高压灭菌锅的下方，控制DEPC水在储备罐和高压灭菌锅之间流动；离心桶安装在高压灭菌锅内部，底部连接电动机；离心桶内安装有可拆卸的枪头盒架；离心桶内下方设有EP管固定仓（21）。 |
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| 说明书全文 | 具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用技术领域背景技术[0002] RNA提取纯化是分子生物学研究的基本工作内容，也是转录水平研究的初步工作。由于RNA水解酶（RNase）的广泛存在和难以灭活的顽固本性，使得RNA的抽提纯化和后续工作特别困难。虽然Trizol试剂和各类RNA抽提纯化试剂盒的广泛应用使得RNA抽提和 纯化变得相对简单，但是涉及RNA的工作仍然是分子生物学研究中最让人头痛的问题。归根结底，RNA工作的主要问题是防止RNase的污染。RNase无处不在，在实验操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不妥当的操作都有可能造成RNase的污染，从而导致整个实验的失败。因此，严格控制实验条件，避免任何可能的RNase污染，是保证实验成功的关键。 [0003] 跟RNA样品直接接触的仪器EP管和枪头的RNase灭活是极严格的，一般采用焦碳酸二乙酯（DEPC）水溶液浸泡后高温灭菌两次，具体操作如下：一、EP管和枪头用0.1% DEPC水溶液在 37℃下浸泡处理 12 小时。二、两次120℃下高压灭菌 30 分钟进一步灭活RNas并高温除去残留的 DEPC。 [0004] RNase灭活现有技术中存在以下三处问题：一、浸泡枪头和EP管时因为枪头和EP管漂浮在DEPC水面上或因为枪头和EP管内空气无法排除而导致DEPC水很难进入枪头和EP管内部，达不到RNase灭活的作用。二、浸泡枪头时枪头散落在容器内，灭菌时需要将枪头逐个放入枪头盒内。枪头数量庞大，并且DEPC有剧毒，为了实验员安全和不污染浸泡过的枪头，常常使用镊子逐个夹取枪头，还需甩出枪头内DEPC水，这样实验员工作强度很大，并有DEPC中毒的风险。三、传统方法未在全密闭的环境下浸泡DEPC水不能重复利用，一般直接倒入下水道，造成试剂浪费且导致环境污染。 发明内容[0005] 本发明专利提供了一种高效且具备DEPC隔离功能的RNase灭活仪，其结构包括：DEPC稀释与储备罐（1）（以下简称储备罐）、高压灭菌锅（2）、底座（3）、万向轮（4）、连接阀（5）、电动机（6）、气泵（7）、DEPC加样孔（8）、进水阀（9）、储备罐进水漏斗（10）、搅拌叶（11）、枪头盒架（12）、排水阀（13）、排气阀（14）、灭菌锅顶盖（15）、加热管（16）、离心桶（17）、枪头盒架锁扣（18）、枪头（19）、EP管固定仓挡板（20）、EP管固定仓（21）、枪头档板（22）、枪头盒面板（23）、高压灭菌锅进水漏斗（25）；其中气泵的功能可以被水泵（24）代替。 [0006] 储备罐和高压灭菌锅安装在带万向轮的底座上，方便移动。万向轮具有锁扣，不移动时避免滑动。连接阀安装在储备罐和高压灭菌锅的下方，控制DEPC水在储备罐和高压灭菌锅之间流动。整个仪器具有三个电动机分别为搅拌叶（6-1）、气泵（6-2）、离心桶（6-3）提供动力。气泵在电动机正转和反转下实现对储备罐加压和抽气。DEPC加样孔连接在进水管上，具有拧盖，能够密封。离心桶安装在高压灭菌锅内部，底部连接电动机，离心桶内安装有可拆卸的与离心桶成60-85度倾角的枪头盒架，枪头（19）放置在枪头盒自带的枪头盒面板（23）上（RNase灭活后只直接将面板放回枪头盒），枪头盒架能够将面板固定，并锁住出口（18）；枪头盒架上方设有带许多小孔的枪头档板（22），形状如同倒“凹”字形，能够挡住枪头在DEPC水中上浮，金属板的小孔能让DEPC水自由流动进入枪头。枪头盒架在离心桶内均匀分布，以使离心时能够平衡；枪头盒架在离心桶内设置5-15层，每层4-10个，每个枪头盒架能够放置1-3个枪头盒面板。离心桶内的枪头盒架拆卸后可在离心桶内放入EP管固定仓（21），上方放置固定在离心桶内的挡板（20），避免离心时EP管移动；为了离心时能够平衡，EP管固定仓设置成4或8个等大的空间。以上结构除电动机、底座和万向轮外均由不锈钢材料制成。 [0007] 具备使DEPC水在储备罐和高压灭菌锅之间流动功能的结构除了气泵对储备罐加压和抽气外，还有一种替代结构是安装在储备罐和高压灭菌锅底部连接管上的水泵，水泵在电动机（6-4）的正转和反转带动下实现使DEPC水在储备罐和高压灭菌锅之间来回流动。 [0008] 本发明具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用在使用时先根据DEPC水浓度和储备罐体积计算DEPC用量，将一定量的DEPC加入DEPC加样孔后拧紧盖子。 打开进水阀，从进水漏斗中加入一定量蒸馏水，蒸馏水将DEPC冲入储备罐。开启搅拌叶电动机，使DEPC溶解均匀。将EP管均匀放入EP管固定仓的各个空间内，盖上挡板。安装枪头盒架，并将带枪头的枪头盒面板固定在枪头盒架上，锁住出口，并关闭高压灭菌锅顶盖。打开连接阀，并开启气泵电动机对储备罐加压，使DEPC水全部进入高压灭菌锅，并淹没离心桶。关闭气泵电动机和连接阀，开启离心桶电动机将转速控制在10-100 r/min，在转动情况下，DEPC水充分进入枪头和EP管内，关闭离心桶电动机，浸泡30min。充分浸泡后打开连接阀和气泵电动机，气泵对储备罐抽气，使DEPC水回到储备罐，留有少量液体作为高压灭菌的蒸汽来源（或打开顶盖加入蒸馏水作为高压灭菌的蒸汽来源）。开启离心桶电动机进行离心，将枪头和EP管内DEPC水甩出。调节高压灭菌锅气压和时间，高压灭菌两次，再次开启离心桶电动机进行离心，将灭菌时枪头和EP管内产生的冷凝水甩出。DEPC水循环使用多次后，将DEPC水泵入高压灭菌锅内加热使DEPC分解后打开排水阀排放。 [0009] 本发明的有益效果是：本发明能够一次对大量枪头和EP管进行RNase灭活，大大减轻了实验员工作量。本仪器对DEPC水封闭管理，避免实验员接触DEPC中毒事件的发生。本仪器对DEPC循环使用节约了化学试剂，并对DEPC水加热分解处理后排放，保护了环境。 附图说明 [0010] 图1是本发明具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用纵剖面构造图。 [0011] 图2是本发明具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用离心桶纵剖面构造图。 [0012] 图3是本发明具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用枪头盒架纵剖面结构示意。 [0013] 图4是本发明具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用枪头盒架右视意。 [0014] 图5是本发明具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用EP管固定仓俯视图。 [0015] 图6是本发明具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用水泵结构示意图。 [0016] 图7是本发明具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用高压灭菌锅进水漏斗安装位置和结构示意图。 具体实施方式[0017] 具体实施方式一：如附图1：本发明专利提供了一种高效且具备DEPC隔离功能的RNase灭活仪，其结构 包括：DEPC稀释与储备罐（1）（以下简称储备罐）、高压灭菌锅（2）、底座（3）、万向轮（4）、连接阀（5）、电动机（6）、气泵（7）、DEPC加样孔（8）、进水阀（9）、进水漏斗（10）、搅拌叶（11）、枪头盒架（12）、排水阀（13）、排气阀（14）、灭菌锅顶盖（15）、加热管（16）、离心桶（17）。储备罐和高压灭菌锅安装在带万向轮的底座上，方便移动。万向轮具有锁扣，不移动时避免滑动。连接阀安装在储备罐和高压灭菌锅的下方，控制DEPC水在储备罐和高压灭菌锅之间流动。整个仪器具有三个电动机分别为搅拌叶（6-1）、气泵（6-2）、离心桶（6-3）提供动力。气泵在电动机正转和反转下实现对储备罐加压和抽气。DEPC加样孔连接在进水管上，具有拧盖，能够密封。 [0018] 如附图3和附图4：离心桶安装在高压灭菌锅内部，底部连接电动机，离心桶内安装有可拆卸的与离心桶成70-85度倾角的枪头盒架，枪头（19）放置在枪头盒带小孔的面板（23）上，枪头盒架能够将面板固定，并锁住出口（18）；枪头盒架上方设有带许多小孔的金属板，能够挡住枪头在DEPC水中上浮，并能让DEPC水自由流动进入枪头。 [0019] 如附图2和附图5：离心桶内的枪头盒架拆卸后可放入EP管固定仓（21），上方放置固定在离心桶内挡板（20），避免离心时EP管移动；为了离心时能够平衡，EP管固定仓设置成4或8个等大的空间。以上结构除电动机、底座和万向轮外均由不锈钢材料制成。 [0020] 本发明具备焦碳酸二乙酯隔离功能的核酸酶灭活仪及其应用在使用时先根据DEPC水浓度和储备罐体积计算DEPC用量，将一定量的DEPC加入DEPC加样孔后拧紧盖子。 打开进水阀，从进水漏斗中加入一定量蒸馏水，蒸馏水将DEPC冲入储备罐。开启搅拌叶电动机，使DEPC溶解均匀。将EP管均匀放入EP管固定仓的各个空间内，盖上挡板。安装枪头盒架，并将带枪头的枪头盒面板固定在枪头盒架上，锁住出口，并关闭高压灭菌锅顶盖。 打开连接阀，并开启气泵电动机对储备罐加压，使DEPC水全部进入高压灭菌锅，并淹没离心桶。关闭气泵电动机和连接阀，开启离心桶电动机控制转速为20 r/min，在转动情况下，DEPC水充分进入枪头和EP管内，关闭离心桶电动机，浸泡30min。充分浸泡后打开连接阀和气泵电动机，气泵对储备罐抽气，使DEPC水回到储备罐，留有少量液体作为高压灭菌的蒸汽来源（或打开顶盖加入蒸馏水作为高压灭菌的蒸汽来源）。开启离心桶电动机进行离心，将枪头和EP管内DEPC水甩出。调节高压灭菌锅气压和时间，高压灭菌两次，再次开启离心桶电动机进行离心，将灭菌时枪头和EP管内产生的冷凝水甩出。DEPC水循环使用多次后，将DEPC水泵入高压灭菌锅内加热使DEPC分解后打开排水阀排放。 [0021] 具体实施方式二：如附1、6和7：将一定量的DEPC加入DEPC加样孔后拧紧盖子。打开进水阀，从进水漏 斗中加入一定量蒸馏水，蒸馏水将DEPC冲入储备罐。开启搅拌叶电动机，使DEPC溶解均匀。 将EP管均匀放入EP管固定仓的各个空间内，盖上挡板。安装枪头盒架，并将带枪头的枪头盒面板固定在枪头盒架上，锁住出口，并关闭高压灭菌锅顶盖。打开连接阀（5），并开启水泵电动机，使DEPC水全部进入高压灭菌锅，并淹没离心桶。关闭水泵电动机和连接阀，开启离心桶电动机将转速控制在10-100 r/min，在转动情况下，DEPC水充分进入枪头和EP管内，关闭离心桶电动机，浸泡30min。充分浸泡后打开连接阀和水泵电动机，水泵电动机反转，使DEPC水回到储备罐，留有少量液体作为高压灭菌的蒸汽来源（或从高压灭菌锅进水漏斗（25）加入蒸馏水）。开启离心桶电动机进行离心，将枪头和EP管内DEPC水甩出。调节高压灭菌锅气压和时间，高压灭菌两次，再次开启离心桶电动机进行离心，将灭菌时枪头和EP管内产生的冷凝水甩出。DEPC水循环使用多次后，将DEPC水泵入高压灭菌锅内加热使DEPC分解后打开排水阀排放。 |
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