粉混合物的制备方法及其用于治疗糖尿病的用途 |
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申请号 | CN202180091384.0 | 申请日 | 2021-12-22 | 公开(公告)号 | CN116867377A | 公开(公告)日 | 2023-10-10 |
申请人 | 多佐博士实验室; | 发明人 | 古尔迪亚尔·辛格·阿罗拉; | ||||
摘要 | 本 发明 涉及用于制备用于糖尿病和糖尿病并发症 治疗 的药物制剂的方法。本发明还提供了使用碎麦米、小麦和鹰嘴豆或包含它们及其混合物的药物制剂来治疗糖尿病和糖尿病并发症的方法。本发明的方法简单、经济、 生物 友好并且工业适用。 | ||||||
权利要求 | 1.制备药物制剂的方法,其中所述方法包括以下步骤: |
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说明书全文 | 粉混合物的制备方法及其用于治疗糖尿病的用途技术领域[0001] 本发明涉及药物科学领域。相应地,本发明涉及用于制备用于糖尿病和糖尿病并发症治疗的药物制剂的方法。本发明还提供了使用碎麦米(Semolina)、小麦(triticum)和鹰嘴豆(chickpea)或包含它们及其混合物的药物制剂来治疗糖尿病和糖尿病并发症的方法。本发明的方法简单、经济、生物友好并且工业适用。 背景技术[0002] 糖尿病是具有多种病因的慢性代谢性病症,该病症的特征在于慢性高血糖伴有碳水化合物、脂肪和蛋白质代谢障碍,其由胰岛素分泌缺陷、胰岛素作用缺陷或二者引起。糖尿病的影响包括多个器官的长期损伤、功能障碍和衰竭。糖尿病通常分为两个主要的类别: [0003] ·1型糖尿病(原名胰岛素依赖性糖尿病),其涵盖主要由于胰岛β细胞破坏导致的大多数情况,通常发生在儿童期或青少年期,并且易于发生酮症和酸中毒。1型糖尿病占所有糖尿病的约10%。 [0004] ·2型糖尿病(原名非胰岛素依赖性糖尿病),其包括由胰岛素分泌缺陷导致的常见主要形式的糖尿病,几乎总是主要由胰岛素抵抗引起。2型糖尿病占所有糖尿病的约90%。 [0005] 一种影响身体处理血糖(葡萄糖)方式的慢性疾病。在2型糖尿病的情况下,身体产生不了足够的胰岛素或者身体抵抗胰岛素。2型糖尿病是终身疾病,其阻止你的身体以其应有的方式使用胰岛素。据说患有2型糖尿病的人具有胰岛素抵抗。 [0006] 中年或更年长的人最有可能患上这种糖尿病。它过去称为成人‑发作的糖尿病。但2型糖尿病也影响儿童和青少年,主要是因为儿童期肥胖。2型是最常见的糖尿病类型。美国有约2900万人患有2型。另有8400万人患有前驱糖尿病,意味着他们的血糖(或血葡萄糖)高,但还没有高到糖尿病的程度。 [0008] 这是目的在于研究可食用物质并将其转化为主动靶向治疗以及照顾危重疾病和慢性疾病的本发明人的构思。这就是本发明人如何偶然发现鹰嘴豆、小麦和碎麦米并开始研究其抗关节炎特性的原因。在进行进一步的研究和临床前研究之后,本发明人观察到其抗关节炎活性过于显著。另外,对其进行了人体内测试,在目前治疗不起作用的领域取得了令人鼓舞的结果。这是独特的,因为其来源于碎麦米、小麦和鹰嘴豆的混合物,并且还涉及为最终产品带来效力的生物技术方法。 [0009] 鹰嘴豆、碎麦米和小麦在世界多个地区都普遍栽培。其既可在夏季生长,也可在冬季生长。它们生长的田地离本发明人的住所很近。首先将谷粒研磨并粉碎成粉末形式,并随后进行生物技术加工。于2000年3月首次使用该混合物以研究其抗关节炎特性。对原料进行了农药含量测试,并且未发现农药含量。 [0010] 本发明的发明人开发了用于制备药物制剂的方法。所述制剂在糖尿病和糖尿病并发症治疗方面显示出结果。因此,本发明提供了制备可用于治疗糖尿病和糖尿病并发症的药物制剂的方法。还提供了使用碎麦米、小麦和鹰嘴豆或包含它们及其混合物的药物制剂来治疗糖尿病和糖尿病并发症的方法。 [0011] 发明目的 [0012] 本发明的主要目的是提供制备包含碎麦米、小麦和鹰嘴豆及其组合的药物制剂的方法。 [0013] 本发明的另一个目的是提供制备应用于治疗糖尿病和糖尿病相关并发症的药物制剂的方法。 [0014] 本发明的另一个目的是提供使用碎麦米、小麦和鹰嘴豆或包含它们的药物制剂来治疗糖尿病和糖尿病相关并发症的方法。 [0015] 本发明的另一个目的是提供简单、经济、生物友好并且工业适用的方法。 发明内容[0016] 本发明涉及用于制备用于糖尿病和糖尿病并发症治疗的药物制剂的方法。本发明还提供了使用碎麦米、小麦和鹰嘴豆或包含它们及其混合物的药物制剂来治疗糖尿病和糖尿病并发症的方法。本发明的方法简单、经济、生物友好并且工业适用。 具体实施方式[0017] 这是本发明人的新的想法并用于所述疾病。因此,本发明涉及用于制备用于治疗糖尿病和糖尿病并发症的药物制剂的方法。所述方法包括将小麦、鹰嘴豆和碎麦米(通过研磨谷粒获得)与水混合并剧烈搅拌的步骤。然后将溶液保持在27±3℃的温度下,并在所述温度下保持16小时,然后进行进一步搅拌,并放入80℃温度下的干燥器中保持48小时。将如此获得的物质进一步研磨以获得极细粉末。此外,将溶液在小于60度下缓慢干燥48小时。在研究中显示出非常好的抗糖尿病活性。 [0018] 根据本发明的一个优选实施方案,将粉与蒸馏水,更优选地与双蒸水混合。 [0019] 根据本发明的另一个优选实施方案,使粉溶液在27±3℃下保持16±2小时,使其在80℃的温度下干燥48小时。 [0020] 根据本发明的另一个实施方案,将溶液在小于60度下缓慢干燥48小时。 [0021] 根据本发明的另一个优选实施方案,将小麦、碎麦米和鹰嘴豆的粉分别与水以1∶2的比率混合。在通过已知方法进行干燥的第2步之后,尝试了多种方式以获得固体。 [0022] 本发明的另一个实施方案提供了使用碎麦米、小麦和鹰嘴豆或包含它们及其混合物的药物制剂来治疗糖尿病和糖尿病并发症的方法。 [0023] 本发明的另一个实施方案提供了碎麦米、小麦和鹰嘴豆或包含它们及其混合物的药物制剂在治疗糖尿病和糖尿病并发症中的用途。 [0024] 本发明的另一个实施方案提供了使用包含碎麦米、小麦和鹰嘴豆或其混合物的药物制剂来治疗糖尿病和糖尿病并发症的方法。 [0025] 本发明的另一个实施方案提供了制备所述药物制剂的方法,其中所述方法简单、经济、生物友好并且工业适用。 [0026] 本发明的一个优选实施方案提供了用于治疗糖尿病和糖尿病并发症的碎麦米、小麦和鹰嘴豆或其混合物的药物制剂。 [0027] 术语“治疗”及其变化形式意在包括减缓或逆转疾病或障碍的进展。这些术语还包括减轻、改善、减弱、消除或减少疾病或障碍或病症的一种或更多种症状,即使所述疾病或障碍或病症实际上没有消除,以及即使所述疾病或障碍或病症的进展本身没有减缓或逆转。 [0028] 如以上说明的,本发明的药物制剂可用于治疗或预防糖尿病和糖尿病相关并发症。因此本发明提供了用于治疗糖尿病和糖尿病相关并发症的药物制剂。还提供了用于治疗患有糖尿病或相关并发症的患者的方法,所述方法包括向所述患者施用有效量的药物制剂。还提供了药物制剂在制备用于治疗糖尿病和糖尿病相关并发症的药物中的用途。 [0029] 本发明的主要实施方案是提供制备药物制剂的方法,其中所述方法包括以下步骤: [0030] a)将小麦、鹰嘴豆和碎麦米的粉与水混合并剧烈搅拌以形成溶液。 [0031] b)使步骤(a)的溶液在25至35℃的合适的温度范围内保持12至19小时的足够的时间范围以形成另一种溶液。 [0032] c)将步骤(b)的溶液进行剧烈搅拌,然后在70至90℃的温度范围内干燥40至60小时的时间范围以获得混合物。 [0033] d)将步骤(c)的混合物进一步研磨以获得极细粉末。 [0034] e)将步骤(d)的粉末在0至65℃的温度范围内缓慢干燥42至55小时的时间范围以获得药物制剂。 [0035] 在本发明的另一个实施方案中,小麦、鹰嘴豆和碎麦米的粉是通过研磨谷粒获得的。 [0036] 在本发明的另一个实施方案中,所述水是蒸馏水。 [0037] 在本发明的另一个实施方案中,所述蒸馏水更优选地是双蒸水。 [0038] 在本发明的另一个实施方案中,将小麦、碎麦米和鹰嘴豆的粉与水以1:1至1:4的比率,优选1∶2的比率混合。 [0039] 在本发明的另一个实施方案中,步骤(b)所述的合适的温度在26至32℃的范围内。 [0040] 在本发明的另一个实施方案中,步骤(b)所述的合适的温度优选为27±3℃。 [0041] 在本发明的另一个实施方案中,步骤(b)所述的足够的时间在15至18小时的范围内。 [0042] 在本发明的另一个实施方案中,步骤(b)所述的足够的时间为16小时。 [0043] 在本发明的另一个实施方案中,步骤(c)所述的干燥在75至85℃,优选78至80℃的温度范围内进行。 [0044] 在本发明的另一个实施方案中,步骤(c)所述的温度为80℃。 [0045] 在本发明的另一个实施方案中,步骤(c)所述的时间范围为45至55小时,更优选48小时。 [0046] 在本发明的另一个实施方案中,步骤(e)所述的温度小于62℃,更优选小于60℃。 [0047] 在本发明的另一个实施方案中,步骤(e)所述的时间范围为46至52小时,更优选48小时。 [0048] 在本发明的另一个实施方案中,所述药物制剂应用于治疗糖尿病和糖尿病并发症。 [0049] 本发明的另一个实施方案提供了使用碎麦米、小麦和鹰嘴豆或包含其的药物制剂来治疗糖尿病和糖尿病并发症的方法。 [0050] 本发明的另一个实施方案提供了根据所述方法制备的药物制剂用于治疗糖尿病和糖尿病并发症的用途。 [0051] 本发明的又一个实施方案提供了制备药物制剂的方法,其中所述方法包括以下步骤: [0052] a.将小麦、鹰嘴豆和碎麦米的粉与水混合并剧烈搅拌以形成溶液。 [0053] b.使步骤(a)的溶液在27±3℃的合适的温度下保持16小时以形成另一种溶液。 [0054] c.将步骤(b)的溶液进行剧烈搅拌,然后在80℃的温度下干燥48小时以获得混合物。 [0055] d.将步骤(c)的混合物进一步研磨以获得极细粉末。 [0056] e.将步骤(d)的粉末在小于60℃的温度下缓慢干燥48小时以获得药物制剂。 [0057] 在本发明的另一个实施方案中,所述药物制剂应用于治疗糖尿病和糖尿病并发症。 [0058] 本发明的另一个实施方案提供了使用碎麦米、小麦和鹰嘴豆或包含其的药物制剂来治疗糖尿病和糖尿病并发症的方法。 [0059] 本发明的另一个实施方案提供了根据所述方法制备的药物制剂用于治疗糖尿病和糖尿病并发症的用途。 [0060] 本发明的又一个实施方案提供了制备药物制剂的方法,其中所述方法包括以下步骤: [0061] a.将小麦、鹰嘴豆和碎麦米的粉与水混合并剧烈搅拌以形成溶液。 [0062] b.使步骤(a)的溶液在27±3℃的合适的温度下保持16小时以形成另一种溶液。 [0063] c.将步骤(b)的溶液进行剧烈搅拌,然后在80℃的温度下干燥48小时以获得混合物。 [0064] d.将步骤(c)的混合物进一步研磨以获得极细粉末。 [0065] e.将步骤(d)的粉末在小于60℃的温度下缓慢干燥48小时以获得药物制剂。 [0066] 所述方法还包括将1∶1比率的羊毛脂和凡士林与5%浓度的步骤(e)的药物制剂混合以形成软膏剂的步骤。 [0067] 本发明的另一个实施方案提供了软膏剂,其是通过将1∶1比率的羊毛脂和凡士林与5%浓度的所述药物制剂混合而制备的。 [0068] 在本发明的另一个实施方案中,所述药物制剂或软膏剂应用于治疗糖尿病和糖尿病并发症。 [0069] 本发明的另一个实施方案提供了使用碎麦米、小麦和鹰嘴豆或者包含其的药物制剂或软膏剂来治疗糖尿病和糖尿病并发症的方法。 [0070] 本发明的另一个实施方案提供了所制备的药物制剂或软膏剂用于治疗糖尿病和糖尿病并发症的用途。 [0072] a.将小麦、鹰嘴豆和碎麦米的粉与水混合并剧烈搅拌以形成溶液。 [0073] b.使步骤(a)的溶液在27±3℃的合适的温度下保持16小时以形成另一种溶液。 [0074] c.将步骤(b)的溶液进行剧烈搅拌,然后在80℃的温度下干燥48小时以获得混合物。 [0075] d.将步骤(c)的混合物进一步研磨以获得极细粉末。 [0076] e.将步骤(d)的粉末在小于60℃的温度下缓慢干燥48小时以获得药物制剂。 [0077] f.将1∶1比率的羊毛脂和凡士林与5%浓度的步骤(e)的药物制剂混合以形成软膏剂。 [0078] 在本发明的另一个实施方案中,软膏剂是通过将1∶1比率的羊毛脂和凡士林与5%浓度的所述药物制剂混合而制备的,其中所述软膏剂每天以0.5gm施加于伤口上。 [0079] 在本发明的另一个实施方案中,所述软膏剂应用于治疗糖尿病和糖尿病并发症,其中所述软膏剂每天以0.5gm施加于伤口上。 [0080] 本发明的另一个实施方案提供了使用碎麦米、小麦和鹰嘴豆或者包含其的药物制剂或软膏剂来治疗糖尿病和糖尿病并发症的方法。 [0081] 本发明的另一个实施方案提供了软膏剂用于治疗糖尿病和糖尿病并发症的用途,其中所述软膏剂每天以0.5gm施加于伤口上。 [0082] 实施例 [0083] 本发明的范围由本文公开的以下实施例来举例说明,这些实施例并不旨在以任何方式限制本发明的范围。 [0084] 实施例1:制备药物制剂的方法 [0085] 步骤包括: [0086] a.将小麦、鹰嘴豆和碎麦米的粉与水混合并剧烈搅拌以形成溶液。 [0087] b.使步骤(a)的溶液在27±3℃的合适的温度下保持16小时以形成另一种溶液。 [0088] c.将步骤(b)的溶液进行剧烈搅拌,然后在80℃的温度下干燥48小时以获得混合物。 [0089] d.将步骤(c)的混合物进一步研磨以获得极细粉末。 [0090] e.将步骤(d)的粉末在小于60℃的温度下缓慢干燥48小时以获得药物制剂。 [0091] 实施例2:软膏剂的制备 [0092] 方法包括: [0093] a.将小麦、鹰嘴豆和碎麦米的粉与水混合并剧烈搅拌以形成溶液。 [0094] b.使步骤(a)的溶液在27±3℃的合适的温度下保持16小时以形成另一种溶液。 [0095] c.将步骤(b)的溶液进行剧烈搅拌,然后在80℃的温度下干燥48小时以获得混合物。 [0096] d.将步骤(c)的混合物进一步研磨以获得极细粉末。 [0097] e.将步骤(d)的粉末在小于60℃的温度下缓慢干燥48小时以获得药物制剂。 [0098] f.将1∶1比率的羊毛脂和凡士林与5%浓度的步骤(e)的药物制剂混合以形成软膏剂。 [0099] 实施例3:实验研究 [0100] 临床前: [0102] 进行研究以在实验性1型糖尿病(experimental type 1 diabetes,T1DM)方面对药物制剂进行评价。 [0103] 比较药物制剂相比于标准降血糖剂(如胰岛素)的效力。药物制剂对血浆葡萄糖的作用。 [0104] 药物制剂在控制血浆葡萄糖水平方面显示出非常好的效力。 [0105] 进行研究以在实验性2型糖尿病(experimental type 2 diabetes,T2DM)方面对药物制剂进行评价。 [0106] 比较该药物制剂相比于标准降血糖剂吡格列酮(pioglitazone)的效力。 [0107] 药物制剂对血浆葡萄糖的作用:药物制剂已显示出与吡格列酮相当的效力。 [0108] 药物制剂对糖基化血红蛋白的作用: [0109] 药物制剂已显示出与吡格列酮相当的效力。 [0110] TNFα对胰岛素抵抗的作用: [0111] 对肝:刺激急性期响应,导致C‑反应蛋白和许多其他介导子的提高。它还通过促进胰岛素受体底物‑1(insulin receptor substrate‑1,IRS‑1)的丝氨酸磷酸化(其损害胰岛素信号传导)来诱导胰岛素抵抗。因此TNFα水平提高意味着更多的胰岛素抵抗。因此,血糖水平提高。 [0112] 由于药物制剂降低TNFα水平,所以胰岛素抵抗更少,并且因此调节血糖水平。 [0113] 毒性研究测定描述: [0114] 测试系统‑OECD急性经口毒性‑上下法(Up‑and‑Down‑Procedure,UDP)[0115] 目的:急性经口毒性(用LD50的上下法) [0116] 测试动物:大鼠 [0117] 品系:Wistar大鼠 [0118] 性别:雌性 [0119] 一般介绍: [0120] 根据科学进展或变化的评估实践,定期审查OECD化学品测试指南。Dixon和Mood首先描述了上下测试方法的概念。在1985年,Bruce提出使用上下法(UDP)确定化学品的急性毒性。存在数种用于估计LD50的上下实验设计的变化形式。该指南是基于在1987年被ASTM采纳并于1990年修订的Bruce的方法。在1995年发表了对用UDP、常规LD50测试和固定剂量法(Fixed Dose Procedure,FDP,OECD测试指南420)获得的结果进行比较的研究。 [0121] 所述测试由单一有序剂量进展(single ordered dose progression)组成,其中以最少48小时的间隔对动物给药,一次一只。第一只动物接受的剂量比LD50的最佳估计水平低一级。如果该动物存活,则下一只动物的剂量提高到原始剂量的3.2倍[因数];如果它死亡,则下一只动物的剂量以类似的剂量逐步降低。在决定是否对下一只动物给药以及给药多少之前,应仔细观察每只动物长至48小时。该决定是基于所有动物长至该时间的48小时存活模式。使用停止标准的组合来保持低的动物数量,同时调整给药模式以降低较差起始值或低斜率的作用。当满足这些标准之一时,停止给药,此时基于终止时所有动物的状态来计算测试的LD50的估计值和置信区间。 [0122] 方法的描述: [0123] 动物物种的选择 [0124] 与OECD TG 425第15和16段一致,选择体重110至130克的健康年轻雌性大鼠作为优选物种进行测试。获得体重110至120g(实验开始时为12周龄)的健康年轻成年未生育且未孕的雌性Wistar大鼠。 [0125] 动物的准备 [0126] 随机选择动物,并在给药之前使其留在它们的笼中7天,以允许适应实验室环境。将动物安置,每个笼一只动物,并且在自然昼/夜循环(约12小时黑暗/光照)的情况下安置在22℃(±3℃)的温度以及45%(±5)的相对湿度下,并提供饮用水(不限量)和标准的大鼠饲料(20g/只动物/天)。向动物提供干净的稻壳铺垫,每3天更换。 [0127] 主要测试 [0128] 由于LD50值未知,因此测试直接进行主要测试(不进行限值测试)。给予的体积不多于2ml/剂/只动物/小时。所有动物在剂量施用之前禁食过夜。禁食期之后,确定每只动物的禁食BW,并根据剂量施用时的BW来计算剂量。在完成剂量施用之后,进一步禁用食物2至3小时的时间。通常以48小时的间隔对单只动物按顺序给药并且此后每天观察,共14天。使用aot425软件使用默认的进展因数来计算剂量作为假定的LD50。基于aot425软件的推荐,选择初始剂量(175mg/Kg BW),并用3.2的剂量进展因数来计算后续剂量。 [0129] 急性经口毒性(OECD测试指南425)统计程序 [0130] 测试/物质:药物制剂测试类型:主要测试 [0131] 限值剂量(mg/kg):2000 [0132] 假定的LD50(mg/kg):默认 [0133] 假定的σ(mg/kg):0.5 [0134] 推荐的剂量进展:2000、550、175、55、17.5、5.5、1.75 [0135] 数据: [0136] 表‑1: [0137] [0138] (X=死亡,O=存活) [0139] 剂量推荐:完成主要测试。 [0140] 符合停止标准:限值剂量下为3。 [0141] 长期结果总结: [0142] 表‑2: [0143]剂量 O X 共计 175 1 0 1 550 1 0 1 2000 3 0 3 所有剂量 5 0 5 [0144] 基于长期结局的统计评价: [0145] LD50大于2000mg/kg。 [0146] 剂量的准备 [0147] 原样施用药物制剂。 [0148] 所用剂量: [0149] 如急性经口毒性‑上下法(UDP)所推荐,当无法估计所述物质的致命性时,用于测试的最大剂量为2000mg/Kg体重。所选择的剂量范围包括175、500、2000mg/Kg体重。 [0150] 观察结果: [0151] 体重 [0152] 没有观察到施用最高允许剂量(2000mg/kg)的药物制剂的动物个体BW的显著变化。 [0153] 施用最高剂量14天之后确定的处理对大鼠体重的作用 [0154] 表‑3: [0155] [0156] S‑显著,NS‑不显著 [0157] 在所有测试的剂量下个体动物的体重 [0158] 表‑4: [0159] [0160] [0161] 注:测试中所有动物都存活 [0162] 响应表格和毒性体征: [0163] 表‑5: [0164] [0165] 毒性体征指数: [0166] T1‑正常 [0167] T2‑自残 [0168] T2U‑自残,导致溃疡性皮炎 [0169] T3‑活动过度 [0170] T4‑STRAUB’S TALE [0171] T5‑强直阵挛惊厥 [0172] T6‑活动降低 [0173] T7‑睡眠 [0174] T8‑昏迷 [0175] T9‑皮肤和皮毛改变 [0176] T10‑眼和黏液改变 [0177] T11‑腹泻 [0178] TS1‑食欲丧失/饲料消耗降低 [0179] M‑濒死X‑死亡 [0180] R‑逆转 [0181] 死亡率和LD50 [0182] 在任何动物和所有测试的剂量下均未观察到死亡。 [0183] 组织病理学检查结果 [0184] 未观察到任何严重毒性的明显变化。 [0185] 结果总结: [0186] 在测试中的剂量下没有任何毒性的证据。组织病理学研究证实了这一点。当施用测试的剂量时并且甚至在观察14天之后,都没有动物显示出死亡或发病。 [0187] 研究中没有发现毒性,证明药物制剂是安全的,并且可以以高剂量给予。基于这些发现,可注意到所提供的药物制剂样品在2000mg/Kg体重下没有显示出任何死亡。 [0188] 化学、制备和控制数据(Chemistry,manufacturing,and control data,CMC)[0189] ·原料是基于Agro的,来源于全国多个地区。 [0190] ·通过Novelty of Reactions(Biotech)获得最终产品。 [0191] ·原料的HPGLC指纹分析确保了一致的品质。 [0192] ·由HPGLC监测最终产品批次。 [0193] 药物制剂对1型糖尿病的作用: [0194] 本研究的目的是在1型糖尿病(T1DM)方面对药物制剂进行评价以及将效力与标准降血糖剂(如胰岛素)相比来进行比较。 [0195] 实验模型:链脲霉素(Streptozotocin,STZ)诱导的1型糖尿病(T1DM)。 [0196] 剂量:STZ(45mg/kg,对于大鼠)用于TIDM [0197] 途径:腹膜内(intraperitoneally,i.p.)施用STZ。以三剂口服(peroral,p.o.)施用药物制剂。 [0198] 施用体积:大鼠‑5ml/kg [0199] 动物:无论性别的体重为150至200g的Wistar或Sprague Dawley品系的大鼠。将动物安置在最佳实验室环境下,维持自然(12小时)光照和(12小时)黑暗循环,并可不限量地自由获取食物和水。在测试之前使动物适应实验室环境。 [0200] 研究设计:将动物分为8组,每组10只动物。 [0201] a)第I组:对照或载剂处理组 [0202] b)第II组:1型糖尿病组 [0203] c)第III组:药物制剂(90mg/kg)+糖尿病动物 [0204] d)第IV组:药物制剂(180mg/kg)+糖尿病动物 [0205] e)第V组:药物制剂(360mg/kg)+糖尿病动物 [0206] f)第VI组:Satcol(60mg/kg)+糖尿病动物 [0207] g)第VII组:药物制剂(90mg/kg)+胰岛素(10IU)+糖尿病动物 [0208] h)第VIII组:胰岛素(10IU)+糖尿病动物 [0209] 在确认糖尿病之后施用药物,持续28天。 [0210] 待评价的参数:在确认糖尿病时和处理28天之后评价以下参数。 [0211] a)每周监测体重、水和食物摄取。 [0213] c)经口葡萄糖耐受测试(Oral Glucose Tolerance Test,OGTT):在有意识的大鼠中进行经口葡萄糖耐受测试。为此,大鼠禁食过夜,并通过经口管饲给予30%溶液中的葡萄糖(2g/kg b.w.)。尾血液样品在葡萄糖负载之前以及顺序地在葡萄糖负载之后每半小时收集,直至90分钟,并立即分析葡萄糖。 [0214] d)血浆胰岛素水平的测量:使用胰岛素ELISA试剂盒(LINCO)估计胰岛素并按照制造商的说明进行实验。其为使用450nm下的微量微板读取器的固相夹心酶联免疫吸附测定(enzyme‑linked immunosorbent assay,ELISA)。由绘制的标准曲线计算胰岛素浓度。 [0215] 统计分析 [0216] 所有结果均以平均值±SEM表示。通过单因素方差分析(one‑way analysis of variance,ANOVA)然后是Tukey检验来测量组间变化。P<0.05时认为有统计学显著性。使用SPSS统计软件版本16(SPSS Inc.233South Wacker Drive,11th Floor Chicago,IL 60606‑6412)进行统计分析。 [0217] 结果: [0218] 药物制剂对血浆葡萄糖(mg/dl)的作用 [0219] 表‑6: [0220] [0221] STZ:链脲霉素(45mg/kg;腹膜内);药物制剂(90):药物制剂(90mg/kg;经口管饲);药物制剂(180):药物制剂(180mg/kg;经口管饲);药物制剂(360):药物制剂(360mg/kg;经口管饲);Sat(60):Satcol(60mg/kg;经口管饲);胰岛素(10):胰岛素(10IU/kg;皮下)。*p< 0.05,与对照相比;#p<0.05,与STZ组相比。 [0222] 药物制剂对OGTT‑平均血浆葡萄糖(mg/dl)的作用 [0223] 表‑7: [0224] [0225] STZ:链脲霉素(45mg/kg;腹膜内);药物制剂(90):药物制剂(90mg/kg;经口管饲);药物制剂(180):药物制剂(180mg/kg;经口管饲);药物制剂(360):药物制剂(360mg/kg;经口管饲);Sat(60):Satcol(60mg/kg;经口管饲);胰岛素(10):胰岛素(10IU/kg;皮下)。*p< 0.05,与对照相比;#p<0.05,与STZ组相比。 [0226] 药物制剂对体重(gm)的作用 [0227] 表‑8: [0228] [0229] STZ:链脲霉素(45mg/kg;腹膜内);药物制剂(90):药物制剂(90mg/kg;经口管饲);药物制剂(180):药物制剂(180mg/kg;经口管饲);药物制剂(360):药物制剂(360mg/kg;经口管饲);Sat(60):Satcol(60mg/kg;经口管饲);胰岛素(10):胰岛素(10IU/kg;皮下)。*p< 0.05,与对照相比;#p<0.05,与STZ组相比。 [0230] 药物制剂对食物摄取(gm)的作用 [0231] 表‑9: [0232] [0233] STZ:链脲霉素(45mg/kg;腹膜内);药物制剂(90):药物制剂(90mg/kg;经口管饲);药物制剂(180):药物制剂(180mg/kg;经口管饲);药物制剂(360):药物制剂(360mg/kg;经口管饲);Sat(60):Satcol(60mg/kg;经口管饲);胰岛素(10):胰岛素(10IU/kg;皮下)。*p< 0.05,与对照相比;#p<0.05,与STZ组相比。 [0234] 药物制剂对水摄取(ml)的作用 [0235] 表‑10: [0236] [0237] STZ:链脲霉素(45mg/kg;腹膜内);药物制剂(90):药物制剂(90mg/kg;经口管饲);药物制剂(180):药物制剂(180mg/kg;经口管饲);药物制剂(360):药物制剂(360mg/kg;经口管饲);Sat(60):Satcol(60mg/kg;经口管饲);胰岛素(10):胰岛素(10IU/kg;皮下)。*p< 0.05,与对照相比;#p<0.05,与STZ组相比。 [0238] 药物制剂对尿排出(ml)的作用 [0239] 表‑11: [0240] [0241] STZ:链脲霉素(45mg/kg;腹膜内);药物制剂(90):药物制剂(90mg/kg;经口管饲);药物制剂(180):药物制剂(180mg/kg;经口管饲);药物制剂(360):药物制剂(360mg/kg;经口管饲);Sat(60):Satcol(60mg/kg;经口管饲);胰岛素(10):胰岛素(10IU/kg;皮下)。*p< 0.05,与对照相比;#p<0.05,与STZ组相比。 [0242] 药物制剂对血浆胰岛素的作用 [0243] 血浆胰岛素的变化百分比 [0244] 表‑12: [0245] [0246] [0247] 研究的发现: [0248] 链脲霉素导致血糖水平、食物摄取、水摄取和尿排出逐步提高。链脲霉素导致体重显著降低。 [0249] 药物制剂对血浆葡萄糖的作用: [0250] ·从第7天起,药物制剂(90)开始显示出作用。 [0251] ·药物制剂(90)在控制血浆葡萄糖水平方面显示出非常好的效力。 [0252] ·然而,药物制剂(90)+胰岛素(10)组合显示出累加效力。 [0253] 药物制剂对OGTT的作用: [0254] ·药物制剂(90)和药物制剂(90)+胰岛素(10)可良好地处理经口葡萄糖负载。 [0255] 药物制剂对体重的作用: [0256] ·体重的逐步降低与血浆葡萄糖水平相关。 [0257] ·发现药物制剂(90)在控制STZ处理的大鼠的体重方面是最好的。 [0258] ·此外,药物制剂(90)+胰岛素(10)组合显示出另外的益处。 [0259] 药物制剂对食物摄取的作用: [0260] ·食物摄取的逐步提高与胰岛素水平降低以及来自全身循环的葡萄糖摄取降低(血浆葡萄糖水平升高)相关。 [0261] ·与其他相比,药物制剂(90)显著降低了食物摄取。 [0262] ·此外,药物制剂(90)+胰岛素(10)组合累加地降低食物摄取。 [0263] 药物制剂对水摄取的作用: [0264] ·水摄取的逐步提高与糖尿病的严重程度相关。 [0265] ·药物制剂(90)使糖尿病大鼠的水摄取向正常恢复。 [0266] 药物制剂对尿排出的作用: [0267] ·尿排出的逐步提高与水摄取提高相关。 [0268] ·与其他处理组相比,药物制剂(90)显著降低了尿排出 [0269] 药物制剂对血浆胰岛素水平的作用: [0270] ·血浆胰岛素的显著降低与血浆葡萄糖水平提高相关。 [0271] ·药物制剂未对血浆胰岛素水平产生显著变化。 [0272] 然而,血浆葡萄糖水平在所有时间点都显著降低。当本发明人将药物制剂与胰岛素组合时,药物制剂可能增强胰岛素向作用部位(肌肉、肝和脂肪组织)的运输及其随后与胰岛素受体的结合,以便发生合适的葡萄糖利用。这可能是全身胰岛素水平降低以及葡萄糖水平得到控制的原因。可得出结论,药物制剂显示出胰岛素增敏特性。因此,药物制剂可表现出同噻唑烷二酮(thiazolidinedione,TZD)一样的胰岛素增敏特性。TZD也显示出降低血浆胰岛素水平。 [0273] 表‑13(A): [0274] [0275] 表‑13(B): [0276] [0277] 药物制剂对2型糖尿病的作用: [0278] 本研究的目的是在2型糖尿病(T2DM)方面对药物制剂进行评价以及将这些的效力与标准降血糖剂吡格列酮相比来进行比较。 [0279] 实验模型:链脲霉素‑烟酰胺诱导的2型糖尿病(T2DM):施用单次腹膜内注射的烟酰胺和链脲霉素。 [0280] 剂量:STZ(45mg/kg,对于大鼠)+烟酰胺(230mg/kg,对于大鼠)用于T2DM药物制剂(45、90和180mg/kg)。 [0281] 途径:腹膜内(i.p.)施用STZ和烟酰胺。口服(经口管饲)施用药物制剂和吡格列酮。 [0282] 施用体积:大鼠‑5mL/kg [0283] 动物:无论性别的体重为150至200g的Wistar品系大鼠用于研究。将动物安置在最佳实验室环境下,维持自然(12小时)光照和(12小时)黑暗循环,并且可不限量地自由获取食物和水。在测试之前使动物适应实验室环境。 [0284] 研究设计:将动物分为6组,每组5至8只动物: [0285] a)第I组:对照或载剂处理组 [0286] b)第II组:2型糖尿病组 [0287] c)第III组:糖尿病动物+药物制剂(45mg/kg) [0288] d)第IV组:糖尿病动物+药物制剂(90mg/kg) [0289] e)第V组:糖尿病动物+药物制剂(180mg/kg) [0290] f)第VI组:糖尿病动物+吡格列酮(5mg/kg) [0291] 确认糖尿病之后施用药物制剂,持续28天。 [0292] 待评价的参数:在确认糖尿病之后第1、7、14、21和28天评价以下参数。 [0293] a)监测体重、水和食物摄取。 [0294] b)血糖水平:使用诊断试剂盒通过GOD‑POD法估计葡萄糖并按照制造商的说明进行实验。 [0295] c)糖基化血红蛋白(Glycosylated Haemoglobin,HbA1c)的估计:HbA1c是蛋白质糖基化的良好指示剂。过量的葡萄糖与蛋白质缀合形成糖基化部分。使用商业试剂盒通过离子树脂法进行估计。 [0296] 结果: [0297] 药物制剂对平均血浆葡萄糖(mg/dl)的作用 [0298] 表‑14: [0299] [0300] NAD+STZ:烟酰胺(230mg/kg;腹膜内)+链脲霉素(45mg/kg;腹膜内);(G45:药物制剂(45mg/kg;经口管饲);G90:药物制剂(90mg/kg;经口管饲);G180:药物制剂(180mg/kg;经口管饲);Pio(5):吡格列酮(5mg/kg;经口管饲)。*p<0.05,与对照相比;#p<0.05,与NAD+STZ相比。 [0301] 药物制剂对糖基化血红蛋白的作用 [0302] 表‑15: [0303] [0304] NAD+STZ:烟酰胺(230mg/kg;腹膜内)+链脲霉素(45mg/kg;腹膜内);(G45:药物制剂(45mg/kg;经口管饲);G90:药物制剂(90mg/kg;经口管饲);G180:药物制剂(180mg/kg;经口管饲);Pio(5):吡格列酮(5mg/kg;经口管饲)。*p<0.05,与对照相比;#p<0.05,与NAD+STZ相比。 [0305] 研究的发现: [0306] a)烟酰胺‑链脲霉素导致血糖水平和糖基化血红蛋白逐步提高。 [0307] b)药物制剂对血浆葡萄糖的作用: [0308] ·药物制剂降低了血浆葡萄糖水平并且从第14天起作用明显。 [0309] ·药物制剂(90)已显示出与吡格列酮(5)相当的效力。 [0310] c)药物制剂对糖基化血红蛋白的作用: [0311] ·血糖的逐步提高与糖基化血红蛋白提高相关。 [0312] ·药物制剂降低了血红蛋白的糖基化并且其从第14天起开始显示出作用。 [0313] ·药物制剂(90)已显示出与吡格列酮(5)相当的效力。 [0314] 对软膏剂的研究: [0315] 材料和方法 [0316] 实验动物 [0317] 使用体重250至300g的成年雌性wistar大鼠。将所有动物维持在标准条件(25±2℃,60%至70%湿度)下的12小时光照/黑暗循环中。对其用商业标准的大鼠饮食和水不限量地饲喂。在实验开始之前7天,使大鼠适应动物安置环境。本实验方案经机构动物伦理委员会(Institutional Animal Ethics Committee,IAEC)批准。所有实验均根据印度政府的出于动物实验控制和监督目的的委员会(Committee for the Purpose of Control and Supervision of Experimentation on Animals,CPCSEA)的指南进行。 [0318] 软膏剂的制备 [0319] 将羊毛脂和凡士林按1∶1的比率混合并添加浓度为5%的药物制剂来制备软膏剂。在处理过程期间,每天用0.5g的软膏剂处理大鼠的伤口。 [0320] 化学品和试剂 [0321] 分别地,药物制剂Cipladine(聚维酮碘5%)购自CIPLA India.Ltd,针对TNF‑α和IL‑6的酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒获自R&DSystems,Minneapolis MN,USA。NF‑κβ、NRF‑2和HO‑1夹心ELISA试剂盒购自Elab science,China。 [0322] 糖尿病的诱导 [0323] 使用以55mg/kg体重的浓度单次腹膜内注射在柠檬酸盐缓冲液(0.1M,pH 4.5)中新鲜制备的链脲霉素(STZ)来诱导禁食过夜大鼠的实验性高血糖。对照大鼠改为施用柠檬酸盐缓冲液。为了抗衡低血糖休克,在第一个24小时期间给予大鼠葡萄糖(5%w/v)溶液。七十二小时之后,使用FreeStyl Optimum (Abbott Diabetes Care Ltd.,UK)数字化血糖仪从尾部尖端穿刺来测量血糖水平。 [0324] 血糖水平≥250mg/dL的动物定义为高血糖动物,并保持在观察下或另外的7天。然后,考虑将维持高血糖水平的高血糖大鼠用于体内实验。 [0325] 结果 [0326] 对伤口闭合百分比的作用 [0327] 图3描述了对照和实验组中在第一天、第七天和第十四天的伤口闭合变化。与非糖尿病大鼠相比,糖尿病对照大鼠的伤口闭合在第7天和第14天显著延迟。在经药物制剂和软膏剂处理的大鼠中,糖尿病对照大鼠的伤口闭合%在第7天和第14天得到显著改善。 [0328] 结论: [0329] ·本研究旨在探究药物制剂对STZ诱导的糖尿病大鼠的伤口愈合潜力。 [0330] ·药物制剂施用显著减弱了由高血糖诱导的氧化应激,并通过提高Nrf2和HO‑1的表达显示出强的抗氧化活性,其中通过提高Nrf2和HO‑1的表达抗氧化酶(如GSH、GPx、SOD、过氧化氢酶)的水平也提高了。 [0331] ·炎症标志物(如TNF‑α、NFκβ、IL‑1β、IL‑6)的升高的水平通过药物制剂施用也降低了,这表明了药物制剂的抗炎活性。 [0332] ·通过羟脯氨酸测定评估,胶原合成也通过药物制剂提高了。 [0333] ·总之,表面施用所制备的软膏剂通过其抗炎、抗氧化和抗糖尿病活性在糖尿病大鼠中显示出伤口愈合作用。 [0334] 分析证明 [0335] 临床药理学: |