[0001] 本申请是名称为“用于治疗HBV感染的新颖治疗剂”、申请号为201780056904.8、申请日为2017年7月10日的专利申请的分案申请。

[0002] 相关申请的引用

[0003] 本申请主张2016年7月29日提交的美国临时申请US 62/368,165、2016年11月7日提交的美国临时申请US 62/418,684、2017年4月18日提交的美国临时申请US No. 62/486,946、以及2017年6月7日提交的美国临时申请US 62/516,569的申请日权利。前述申请案各自的整体内容通过引用并入本文。

[0004] 尽管有效疫苗和抗病毒疗法具有实用性，但乙型肝炎仍然是主要的全球性健康问题，全世界人类的三分之一都在一段时间内被乙肝病毒(HBV)感染。在2016年，超过2.40亿人罹患慢性乙型肝炎，导致每年有超过780,000人死于乙型肝炎所发展的肝病如肝硬化、肝癌、或其它并发症。对于罹患慢性乙型肝炎的患者的治疗方式包括，两种形式的干扰素 -α(IFN-α)作为免疫系统调节剂以及核苷(酸)类似物。IFN-α疗法对于高达60％的患者有效，但仅对7％的患者达到完全治愈，且该疗法也与毒副作用的高发生率相关。

[0005] 乙肝病毒(HBV)是一种具有包膜的、部分双链的DNA病毒。该病毒颗粒由病毒核心已经围绕该病毒核心的嵌布有表面蛋白(HBsAg)的脂质包膜构成。该核心由以120个核心蛋白(Cp)二聚体构建的蛋白质壳或衣壳组成，其依次含有松弛的环状DNA(rcDNA)病毒基因组以及病毒和宿主蛋白。在被感染的细胞内，该基因组作为在该宿主细胞的细胞核内的共价闭合环状DNA(cccDNA)而被发现。该cccDNA是病毒RNA的模板，并因此是病毒蛋白的模板。在细胞质中，Cp组装在全长度病毒RNA(所谓前基因组RNA或pgRNA)与病毒聚合酶(P)的复合体周围。组装之后，在该衣壳范围内，P将该pgRNA逆转录为rcDNA，以生成充满DNA的病毒核心。

[0006] 慢性乙型肝炎的经典标志之一是患者血清中的高水平的乙肝病毒(HBsAg)，该水平可能达到400μg/mL(总血清蛋白的0.4％)。亚病毒颗粒的产生所导致的抗原血症被认为在阻抑HBV特异性免疫应答中扮演重要角色。此外，近来的报导已经指出，HBsAg直接作用于树突细胞以限制细胞因子产生和适应性免疫。使用实验性的克拉夫定(clevudine)造成的抗原血症的减轻，导致对病毒特异性免疫应答的部分恢复。因此，HBsAg分泌之抑制剂将会潜在地令HBV疫苗的治疗性用途成为可能，或能令其与治疗HBV感染的核苷(酸)药物的联合疗法成为可能。

[0007] WO/2015/113990和WO/2016/107832报导了一类用于治疗及预防乙肝病毒感染的HBsAg抑制剂。论文J Med Chem.2011,54(16):5660-5670报导了一种作为新颖的HBsAg 分泌抑制剂的新颖的三唑-嘧啶衍生物。尽管那些药剂已经在该领域中做出显着贡献，仍需在这一领域中继续探索改良之药物。发明内容

[0008] 本发明提供式(I)化合物或其N-氧化物，或所述式(I)或其N-氧化物的药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体：

[0009]

[0010] 其中，

[0011] R7是卤素、低级烷基、CF3、CN、硝基、OH、ORa、或NH2；

[0012] Z1不存在，或是O、N(Ra)、或C(RbRc)；

[0013] X是C(R0)或N，其中R0是H、D、或CF3；

[0014] Z2和Z3各自独立为不存在、O、(CH2)pO、O(CH2)pO、N(H)、(CH2)p、S、C(O)、SO2、 OC(O)、C(O)O、OSO2、S(O)2O、C(O)S、SC(O)、C(O)C(O)、C(O)N(H)、N(H)C(O)、S(O)2N(H)、 N(H)S(O)2、OC(O)O、OC(O)S、OC(O)N(H)、N(H)C(O)O、N(H)C(O)S、N(H)C(O)N(H)、 (CH2)pN(H)(CH2)q、(CH2)pO(CH2)q、(CH2)pN(H)C(O)(CH2)q、(CH2)pC(O)N(H)(CH2)q、 OC(O)N(H)(CH2)p+1N(H)(CH2)q、二价烯基、或二价炔基；

[0015] R1、R2、R3、R4、R5、及R6各自独立为H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基、卤素、硝基、氧代、氰基、-(CH2)pRa、-ORa、-SRa、 -NH(CH2)pRa、-C(O)Ra、-S(O)Ra、-SO2Ra、-C(O)ORa、-OC(O)Ra、-NRbRc、-P(O)RbRc、 -C(O)N(Rb)Rc、-N(Rb)C(O)Rc、-SO2N(Rb)Rc、或-N(Rb)SO2Rc，其中所述烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基任选经一个或多个Rd取代；

[0016] p和q各自独立为0、1、2、3、4、5、6、7、或8；

[0017] Ra、Rb、Rc和Rd独立为H、D、CD3、烷基、烯基、炔基、卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、C(O)NHOH、烷氧基、烷氧基烷基、卤代烷基、羟基烷基、氨基烷基、烷基羰基、烷氧基羰基、烷基羰基氨基、烷基氨基、氧代、卤素-烷基氨基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、或杂芳基；

[0018] R4和R5与它们所附接的原子一起形成任选经取代的环烷基或杂环烷基；以及[0019] R1和R6与它们所附接的原子一起形成任选经取代的环烷基或杂环烷基。

[0020] 某些具体实施例中，该化合物以式(II)表示：

[0021]

[0022] 其中，R1是H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、或杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基任选经一个或多个Rd取代。

[0023] 更优选的具体实施例中，R0是H或D；R1是烷基、环烷基、芳基、或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、芳基、或杂芳基任选经一个或多个Rd取代；Z2不存在，或是O；R4是H、卤素、任选经一个或多个Rd取代的烷基；Z3不存在，或是O或O(CH2)pO；R5是H、任选经一个或多个Rd取代的烷基；以及，R7是卤素。

[0024] 更优选的具体实施例中，R1是烷基或环烷基，其中所述烷基或环烷基任选经一个或多个Rd取代；R4是H、卤素、任选经一个或多个D取代的烷基；R5是H、任选经一个或多个D取代的烷基；以及，R7是F。

[0025] 某些具体实施例中，该化合物以式(III)表示：

[0026]

[0027] 其中，R1是H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、或杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基任选经一个或多个Rd取代。

[0028] 更优选的具体实施例中，R1是烷基、环烷基、芳基、或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、芳基、或杂芳基任选经一个或多个Rd取代；Z2不存在或是O；R4是H、卤素、任选经一个或多个Rd取代的烷基；Z3不存在，或是O、或O(CH2)pO；R5是H、任选经一个或多个Rd取代的烷基；以及，R7是卤素。

[0029] 更优选的具体实施例中，R1是烷基或环烷基，其中所述烷基或环烷基任选经一个或多个Rd取代；R4是H、卤素、任选经一个或多个D取代的烷基；R5是H、任选经一个或多个D取代的烷基；以及，R7是F。

[0030] 某些具体实施例中，该化合物以式(A)表示：

[0031]

[0032] 式中，

[0033] X是C(R0)或N，其中R0是H、D、或CF3；

[0034] Z1是O、N(Ra)、或C(RbRc)，且须满足，若Z1是C(RbRc)，则X是N；

[0035] Z2和Z3各自独立为不存在、O、(CH2)pO、O(CH2)pO、N(H)、(CH2)p、S、C(O)、SO2、 OC(O)、C(O)O、OSO2、S(O)2O、C(O)S、SC(O)、C(O)C(O)、C(O)N(H)、N(H)C(O)、S(O)2N(H)、 N(H)S(O)2、OC(O)O、OC(O)S、OC(O)N(H)、N(H)C(O)O、N(H)C(O)S、N(H)C(O)N(H)、 (CH2)pN(H)(CH2)q、(CH2)pO(CH2)q、(CH2)pN(H)C(O)(CH2)q、(CH2)pC(O)N(H)(CH2)q、 OC(O)N(H)(CH2)p+1N(H)(CH2)q、二价烯基、或二价炔基；

[0036] R1、R2、R3、R4、R5、及R6各自独立为H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基、卤素、硝基、氧代、氰基、-(CH2)pRa、-ORa、-SRa、 -NH(CH2)pRa、-C(O)Ra、-S(O)Ra、-SO2Ra、-C(O)ORa、-OC(O)Ra、-NRbRc、-P(O)RbRc、 -C(O)N(Rb)Rc、-N(Rb)C(O)Rc、-SO2N(Rb)Rc、或-N(Rb)SO2Rc，其中所述烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基任选经一个或多个Rd取代；

[0037] p及q各自独立为0、1、2、3、4、5、6、7、或8；

[0038] Ra、Rb、Rc及Rd各自独立为H、D、烷基、烯基、炔基、卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、C(O)NHOH、烷氧基、烷氧基烷基、卤代烷基、羟基烷基、氨基烷基、烷基羰基、烷氧基羰基、烷基羰基氨基、烷基氨基、氧代、卤素-烷基氨基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、或杂芳基；

[0039] R4和R5与它们所附接的原子一起形成任选经取代的环烷基或杂环烷基；以及[0040] R1和R6与它们所附接的原子一起形成任选经取代的环烷基或杂环烷基。

[0041] 某些具体实施例中，该化合物以式(B)表示：

[0042]

[0043] 式中，

[0044] R1是氟烷基、氟环烷基、芳基、或杂芳基，其中所述氟烷基、氟环烷基、芳基、或杂芳基任选经一个或多个Rd取代；

[0045] Z2和Z3各自独立为不存在、O、(CH2)pO、O(CH2)pO、N(H)、(CH2)p、S、C(O)、SO2、 OC(O)、C(O)O、OSO2、S(O)2O、C(O)S、SC(O)、C(O)C(O)、C(O)N(H)、N(H)C(O)、S(O)2N(H)、 N(H)S(O)2、OC(O)O、OC(O)S、OC(O)N(H)、N(H)C(O)O、N(H)C(O)S、N(H)C(O)N(H)、 (CH2)pN(H)(CH2)q、(CH2)pO(CH2)q、(CH2)pN(H)C(O)(CH2)q、(CH2)pC(O)N(H)(CH2)q、 OC(O)N(H)(CH2)p+1N(H)(CH2)q、二价烯基、或二价炔基；

[0046] R1、R2、R3、R4、及R5各自独立为H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基、卤素、硝基、氧代、氰基、-(CH2)pRa、-ORa、-SRa、-NH(CH2)pRa、 -C(O)Ra、-S(O)Ra、-SO2Ra、-C(O)ORa、-OC(O)Ra、-NRbRc、-P(O)RbRc、-C(O)N(Rb)Rc、 -N(Rb)C(O)Rc、-SO2N(Rb)Rc、或-N(Rb)SO2Rc，其中所述烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基任选经一个或多个Rd取代；

[0047] p和q各自独立为0、1、2、3、4、5、6、7、或8；

[0048] Ra、Rb、Rc及Rd独立为H、D、烷基、烯基、炔基、卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、 C(O)NHOH、烷氧基、烷氧基烷基、卤代烷基、羟基烷基、氨基烷基、烷基羰基、烷氧基羰基、烷基羰基氨基、烷基氨基、氧代、卤素-烷基氨基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、或杂芳基；以及

[0049] R4和R5与它们所附接的原子一起形成任选经取代的环烷基或杂环烷基。

[0050] 更优选的具体实施例中，R1是 芳基、或杂芳基。

[0051] 本发明的化合物可含有一个或多个不对称碳原子。据此，该化合物可作为非对映异构体、对映异构体、或其混合物而存在。每个不对称碳原子可以是R构型或S构型，且这两种构型都处于本发明范畴内。

[0052] 包括具备被未改性化合物改良的(如，增强的、更大的)药学溶解度、稳定性、生物利用性、及/或治疗指数的改性的任何一种此类化合物的改性化合物，也在预期之内。例示性的改性包括(但不限于)可应用的前药衍生物、及富含氘的化合物。

[0053] 应意识到，本发明的化合物可以盐或溶剂合物的形式存在并任选以此形式给药。本发明涵盖上述化合物及其修饰物中任何一种的任何药学可接受的盐及溶剂合物。

[0054] 含有一种或多种该化合物、其修饰物及/或盐及溶剂合物且用于治疗疾病的组合物、其治疗性用途、及该化合物在制造用于治疗该疾病/病变的用途，也处于本发明的范畴内。

[0055] 本发明的化合物可抑制HBsAg的分泌，并抑制HBV基因表达。据此，本发明的化合物可用于治疗或预防HBV感染。

[0056] 本发明涉及式(I)化合物用于抑制HBsAg产生或分泌的用途。

[0057] 本发明涉及式(I)化合物用于抑制HBV DNA产生的用途。

[0058] 本发明涉及式(I)化合物用于抑制HBV基因表达的用途。

[0059] 本发明涉及式(I)化合物用于治疗或预防HBV感染的用途。

[0060] 式(I)化合物在制备可用于治疗或预防与HBV感染相关的疾病中的用途是本发明的目的。

[0061] 本发明尤其涉及式(I)化合物在制备用于治疗或预防HBV感染的医疗用品中的用途。

[0062] 本发明也涉及，通过向有此需要的受试者给药有效量的一种或多种上述化合物、其修饰物、及/或盐、及其组合物，而治疗或预防HBV感染的方法。

[0063] 本发明的一种或多种具体实施例的细节详述于下文中。从本说明书及权利要求书中清晰可见本发明的其它特征、目的、及优点。应理解，除非不适用或明确否认，本文中揭示的本发明的所有具体实施例/特征(化合物、药物组合物、制备/使用方法等)，包括实施例及原始权利要求书中揭示的任何具体特征，可彼此组合。

[0064] 例示性的本文中揭示的化合物包括，但不限于，下述化合物：

[0065]

[0066]

[0067]

[0068]

[0069]

[0070]

[0071] 本发明的化合物可含有一个或多个不对称碳原子。据此，该化合物可作为非对映异构体、对映异构体或其混合物而存在。该化合物的合成可采用外消旋体、非对映异构体或对映异构体作为起始材料或作为中间体。非对映异构化合物可通过色谱方法或结晶方法而分离。同样，对映异构混合物可使用相同技术或该领域中其它已知技术分离。

[0072] 每个不对称碳原子可以是R构型或S构型，这两种构型均处于本发明的范畴内。

[0073] 任何一种此类化合物的包括具有比未改性化合物改良的(如，增强的、更大的)药学溶解度、稳定性、生物利用性及/或治疗指数的改性化合物，也在预期之内。改性的实例包括但不限于前药衍生物、以及富含氘的化合物。例如：

[0074] 前药衍生物：当给药至受试者时，前药将在体内转化为本发明的活性化合物[Nature Reviews of Drug Discovery,2008,Volume 7,p255]。注意，在多个例子中，这些前药本身也落入根据本发明的化合物的范围范畴内。本发明的化合物的前药可通过标准有机反应制备，例如，通过与氨甲酰化剂(如，氯甲酸1,1-酰氧基烷基酯、碳酸对硝基苯酯等)或酰化剂反应而制备。制作前药的方法及策略的其它实例揭示于Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,1994,Vol.4,p.1985中。

[0075] 富含氘的化合物：氘(D或2H)是氢的稳定的非放射性同位素，其原子量为2.0144。自然界中，氢作为同位素XH(氢或氕)、D(2H或氘)、及T(3H或氚)的混合物而出现。氘的天然丰度是0.015％。该领域技术人员知道，在所有具有H源自的化合物中，该H原子实际上以H和D的混合物存在，该混合物中约0.015％是D。因此，具备已经富集至大于其天然丰度0.015％的氘含量的化合物，应视为非天然的化合物，结果，相对于其非富集的对应体，该化合物是新颖的。

[0076] 应意识到，本发明的化合物可以盐及溶剂合物的形式存在并以此形式任选给药。例如，根据该领域中周知的过程，将本发明的化合物转化为衍生自多种有机酸和无机酸以及有机碱和无机碱的其药学可接受的形式并以此形式使用该化合物，处于本发明的范畴内。

[0077] 当本发明的化合物为游离碱形式时，可通过令该游离碱形式的化合物与药学可接受的无机酸或有机酸反应而将该化合物制备为药学可接受的酸加成盐，例如，氢卤酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐；其它矿物酸盐，如硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等；以及烷基和单芳基磺酸盐如乙磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐；以及其它有机酸及其相对应的盐，如醋酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐和抗坏血酸盐。本发明的其它酸加成盐包括但不限于：己二酸盐、藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、盐酸盐、氯苯甲酸盐、环戊基丙酸盐、双葡萄糖酸盐、磷酸二氢盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、延胡索酸盐、半乳糖酸盐(来自粘酸)、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、2-羟基乙磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基苯甲酸盐、磷酸一氢盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、苯乙酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐及邻苯二甲酸盐。应意识到，这些游离碱形式的物理性质，如在极性溶剂中的溶解度，典型地在某种程度上不同于其各自的盐形式，但用于本发明的目的时，该盐与其各自的游离碱形式等效。

[0078] 当本发明的化合物为游离酸形式时，可通过令该游离酸形式的化合物与药学可接受的无机碱或有机碱反应而制备药学可接受的碱加成盐。此类碱的实例是，碱金属氢氧化物，包括氢氧化钾、氢氧化钠和氢氧化锂；碱土金属氢氧化物，如氢氧化钡和氢氧化钙；碱金属烷氧化物，如乙醇钾和丙醇钠；以及各种有机碱，如氢氧化铵、哌啶、二乙醇胺和N- 甲基谷氨酰胺。还包括本发明的化合物的铝盐。本发明的其它碱加成盐包括但不限于：铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐和锌盐。有机碱加成盐包括但不限于，伯胺盐、仲胺盐、叔胺盐、包括天然取代胺在内的取代胺的盐、环状胺的盐和碱性离子交换树脂的盐，如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、氯普鲁卡因(chloroprocaine)、胆碱、 N,N’-二苄基乙二胺(苄星青霉素(benzathine))、二环己基胺、二乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、 2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、海巴青霉素(hydrabamine)、异丙胺、利多卡因(lidocaine)、赖氨酸、葡甲胺、N-甲基-D-葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因(procaine)、嘌呤、可可碱、三乙醇胺、三乙胺、三甲胺、三丙胺和叁(羟基甲基)甲胺(氨丁三醇)。应意识到，这些游离酸形式的物理性质，如在极性溶剂中的溶解度，典型地在某种程度上不同于其各自的盐形式，但用于本发明的目的时，该盐与其各自的游离酸形式等效。

[0079] 一方面，药学可接受的盐是盐酸盐、氢溴酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、醋酸盐、延胡索酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、马来酸盐、硝酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、碳酸盐、氢氧化钠盐、氢氧化钙盐、氢氧化钾盐、氨丁三醇盐、或其混合物。

[0080] 本发明的包含具有叔氮的基团的化合物可使用例如下述试剂季胺化：(C1-4)烷基卤化物，如甲基、乙基、异丙基及叔丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二(C1-4)烷基酯，如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二戊酯；烷基卤化物，如癸基、十二烷基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；以及芳基(C1-4)烷基卤化物，如苄基氯和苯乙基溴。这些盐令制备水溶性和油溶性两类本发明的化合物成为可能。

[0081] 具有叔氮原子的抗癌剂的氨氧化物，亦称氨-N-氧化物和N-氧化物，已经作为前药被研发[Mol Cancer Therapy.2004 Mar；3(3):233-44]。包含叔氮原子的本发明的化合物可通过试剂，例如过氧化氢(H2O2)、Caro酸或过酸如间氯过氧苯甲酸(mCPBA)氧化以形成氨氧化物。

[0082] 本发明涵盖包含本发明的化合物和药学赋形剂、以及传统的无药学活性剂的药物组合物。一般用作载体或稀释剂的任何惰性赋形剂均可用于本发明的组合物中，如糖、多元醇、可溶性聚合物、盐和脂质。可采用的糖和多元醇包括而不限于，乳糖、蔗糖、甘露醇、及山梨醇。例示性的可采用的可溶性聚合物为聚氧乙烯、泊洛沙姆(poloxamer)、聚乙烯基吡咯烷酮、及葡萄聚醣。可用的盐包括而不限于，氯化钠、氯化镁和氯化钙。可采用的脂质包括而不限于，脂肪酸、甘油脂肪酸酯、糖脂质、及磷脂质。

[0083] 此外，该药物组合物可进一步包含粘合剂(如，阿拉伯树胶、玉米淀粉、明胶、卡波姆、乙基纤维素、瓜尔胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚维酮)、崩解剂(如，玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸、二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、瓜尔胶、羧基乙酸淀粉钠、Primogel)、各种pH和离子强度的缓冲剂(如，tris-HCL、醋酸盐、磷酸盐)、用以防止吸收至表面的添加剂如白蛋白或明胶、洗涤剂(如，Tween 20、Tween 80、Pluronic F68、胆汁酸盐)、蛋白酶抑制剂、表面活性剂(如，月桂基硫酸钠)、渗透促进剂、增溶剂(如，甘油、聚乙烯甘油、环糊精)、助流剂(如，胶体二氧化硅)、抗氧化剂(如，抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠、丁酸化羟基苯甲醚)、稳定剂(如，羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素)、黏度增强剂(如，卡波姆、胶体二氧化硅、乙基纤维素、瓜尔胶)、甜味剂(如，蔗糖、阿斯巴甜、柠檬酸)、芳香剂(如，薄荷油、水杨酸甲酯、或橙味剂)、防腐剂(如，Thimerosal、苯甲醇、对羟基苯甲酸酯类)、润滑剂(如，硬脂酸、硬脂酸镁、聚乙二醇、月桂基硫酸钠)、流动助剂(如，胶体二氧化硅)、增塑剂(如，对苯二甲酸二乙酯、柠檬酸三乙酯)、乳化剂(如，卡波姆、羟丙基纤维素、月桂基硫酸钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠)、聚合物涂层(如，泊洛沙姆或泊洛沙胺)、涂层及膜形成剂(如，乙基纤维素、丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯)及/或佐剂。

[0084] 一种具体实施例中，该药物组合物被制备为具有将会保护该化合物不被从身体快速清除的载体，如控释配方，包括植入物和微胶囊化的递送系统。可使用生物可降解的、生物相容的聚合物，如乙烯-醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、及聚乳酸。制备此类配方的方法是该领域技术人员所熟知的。该材料亦可从阿尔扎公司(Alza Corporation)和诺华制药公司(Nova Pharmaceuticals,Inc.)商购。脂质体悬浮体(包括具有病毒抗原的单克隆抗体的以被感染细胞为载体的脂质体)也可用作药学可接受的载体。
这些可根据该领域技术人员已知的方法制备，该方法为例如US 4,522,811中揭示的方法。

[0085] 据此，本发明涵盖包含任何固体或液体物理形式的本发明化合物的药物组合物。例如，该化合物可以是晶体形式或无定形的形式，且具有任何颗粒尺寸。该颗粒可以是微粒化的或者可以是成块的微粒、粉末、油、油状悬浮体或任何其它固体或液体物理形式。

[0086] 当根据本发明的化合物展现不足够的溶解度时，可使用令该化合物增溶的方法。此类方法是该领域技术人员已知的，且包括但不限于，pH调节和盐形成；使用助溶剂如乙醇、丙二醇、聚乙二醇(PEG)300、PEG 400、DMA(10-30％)、DMSO(10-20％)、NMP(10-20％)；使用表面活性剂如聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20(1-10％)、聚氧乙烯氢化蓖麻油(cremophor EL)、Cremophor RH40、Cremophor RH60(5-10％)、Pluronic F68/Poloxamer 188(20-
50％)、Solutol HS15(20-50％)、维生素E TPGS、以及d-α-生育酚PEG 1000琥珀酸酯(20-
50％)；使用络合作用如HPβCD和SBEβCD(10-40％)；以及使用先进的途径，如胶束、聚合物的加入、纳米颗粒悬浮体、以及形成脂质体。

[0087] 多种给药方法可与本发明的化合物联用。本发明的化合物可口服、不经肠道、腹膜内、静脉内、动脉内、透皮、舌下、肌肉内、直肠内、经口含、鼻内、脂质体内、经由吸入、阴道内、眼内、经由局部递送(例如，通过导管或支架)、皮下、脂肪内、关节内、或鞘内给药或联合给药。根据本发明的化合物亦可以缓释剂型给药或联合给药。化合物可以是气体、液体、半液体或固体形式，以适用于待使用的给药途径的模式配制。对于口服给药，适当的固体口服制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、微丸剂、袋剂和泡腾剂、粉末剂等。适当的液体口服制剂包括溶液、悬浮体、分散体、乳液、油等。对于不经肠道给药，典型使用冻干粉末的。重构[0088] 本文中，“酰基”以及以式-C(O)-R表示的含有羰基的取代基，其中，R是H、烷基、碳环、杂环、碳环取代的烷基或杂环取代的烷基，其中，该烷基、烷氧基、碳环和杂环如本文中定义。酰基包括烷酰基(如，乙酰基)、芳酰基(如，苯甲酰基)、及杂芳酰基。

[0089] “脂肪族”意为，以构造碳原子的直链或支链排列为特征的部分，且可以是饱和的，或是具有一个或多个双键或三键的部分不饱和的。

[0090] 术语“烷基”指的是含有1至20个碳原子的直链或支链烃(如，C1-C10)。烷基的实例包括但不限于，甲基、亚甲基、乙基、亚乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和叔丁基。优选该烷基具有1至10个碳原子。更优选该烷基具有1至4个碳原子。

[0091] 术语“烯基”指的是，含有2至20个碳原子(如，C2-C10)和一个或多个双键的直链或支链烃。烯基的实例包括但不限于，乙烯基、丙烯基和烯丙基。该烯基优选具有2至10 个碳原子。该烯基更优选具有2至4个碳原子。

[0092] 术语“炔基”指的是，含有2至20个碳原子(如，C2-C10)和一个或多个三键的直链或支链烃。炔基的实例包括但不限于，乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基和1-甲基-2- 丁炔基。该炔基优选具有2至10个碳原子。该炔基更优选具有2至4个碳原子。

[0093] 术语“烷基氨基”指的是–N(R)-烷基，其中，R可以是H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、或杂芳基。

[0094] “烷氧基”意为进一步具有烷基取代基的氧部分。

[0095] “烷氧基羰基”意为附接至羰基的烷氧基。

[0096] “氧代烷基”意为进一步经羰基取代的烷基。该羰基可以是醛、酮、酯、酰胺、酸或酰氯。

[0097] 术语“环烷基”指的是，具有3至30个碳原子(如，C3-C12、C3-C8、C3-C6)的饱和烃环系统。环烷基的实例包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、及环辛基。术语“环烯基”指的是，具有3至30个碳原子(如，C3-C12)和一个或多个双键的非芳烃环系统。实例包括环戊烯基、环己烯基、及环庚烯基。

[0098] 术语“杂环烷基”指的是非芳香族的5至8元的单环状、8至12元的双环状、或11 至14元的三环状的环系统，该环系统具有一个或多个杂原子(如，O、N、S、P、或Se)。杂环烷基的实例包括但不限于，哌嗪基、吡咯烷基、二氧六环基、吗啉基和四氢呋喃基。

[0099] 术语“杂环烯基”指的是指的是非芳香族的5至8元的单环状、8至12元的双环状、或11至14元的三环状的环系统，该环系统具有一个或多个杂原子(如，O、N、S、P、或 Se)和一个或多个双键。

[0100] 术语“芳基指的是6个碳原子的单环状、10个碳原子的双环状、14个碳原子的三环状的芳环系统。芳基的实例包括但不限于，苯基、萘基和蒽基。

[0101] 术语“杂芳基”指的是5至8元的单环状、8至12元的双环状、或11至14元的三环状的芳香族环系统，该环系统具有一个或多个杂原子(如，O、N、S、P、或Se)。杂芳基的实例包括吡啶基、呋喃基、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、噻吩基、喹啉基、吲哚基和噻唑基。

[0102] 上文提及的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、烷基氨基、芳基和杂芳基包括饱和基团及不饱和基团两类。位于烷基氨基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、芳基和杂芳基上的可能的取代基包括但不限于，C1-C10烷基、C2-C10烯基、 C2-C10炔基、C3-C20环烷基、C3-C20环烯基、C1-C20杂环烷基、C1-C20杂环烯基、C1-C10烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、氨基、C1-C10烷基氨基、芳基氨基、羟基、卤素、氧代(O＝)、硫代(S＝)、硫基、硅基、C1-C10烷硫基、芳硫基、C1-C10烷基磺酰基、芳基磺酰基、酰基氨基、氨基酰基、氨基硫代酰基、脒基、巯基、酰氨基、硫脲基、硫氰酸酯基、磺酰胺基、胍、脲基、氰基、硝基、酰基、硫代酰基、酰氧基、脲基、氨甲酰基、羧基和羧酸酯。另一方面，位于烷基、烯基或炔基上的可能的取代基包括除C1-C10烷基以外的上文提及的全部取代基。环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基和杂芳基也可彼此稠合。

[0103] “氨基”意为进一步具有两个取代基的氮部分，其中，每个取代基具有与该氮进行α键结的氢或碳原子。除非明确指出，否则本发明的含有氨基部分的化合物可包括其经保护的衍生物。用于氨基部分的适当的保护基包括乙酰基、叔丁氧羰基、苄氧羰基等。

[0104] “芳香族”意为一种基团，其中，构造原子构成不饱和的环系统，该环系统中所有原子均为sp2杂化，且π电子总数等于4n+2。芳香族环可以是该等环原子仅为碳原子的环，或可包括碳原子和非碳原子(见，杂芳基)。

[0105] “氨甲酰基”意为基团-OC(O)NRaRb，其中，Ra和Rb各自独立为两个进一步的取代基，该取代基中，氢或碳原子位于该氮的α位。注意，氨甲酰基可包括其经保护的衍生物。适用于氨甲酰基的保护基的实例包括乙酰基、叔丁氧羰基、苄氧羰基等。注意，未保护的衍生物和经保护的衍生物均落入本发明的范畴内。

[0106] “羰基”意为基团-C(O)-。注意，羰基可进一步经多种取代基取代以形成不同的羰基，包括酸、酰卤、酰胺、酯和酮。

[0107] “羧基”意为基团-C(O)O-。注意，本发明的含有羧基部分的化合物可包括其经保护的衍生物，即，氧原子经保护基取代的衍生物。适用于羧基的保护基包括苄基、叔丁基等。

[0108] “氰基”意为基团CN。

[0109] “甲酰基”意为基团CH＝O。

[0110] “亚胺甲基”意为基团–HC＝NH。

[0111] “卤素”意为氟、氯、溴或碘。

[0112] 作为独立的基团或较大基团的一部分，“卤素取代的烷基”意为经一个或多个“卤素”原子取代的“烷基”，此等术语如本申请书中所定义。卤素取代的烷基包括，卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基、全卤代烷基等。

[0113] “羟基”意为基团-OH。

[0114] “亚胺衍生物”意为包含-C(＝NR)-部分的衍生物，其中，R包含位于该氮的α位的氢或碳原子。

[0115] “异构体”意为任何具有相同分子式，但其原子键结的特性或序列不同或其原子在空间中的排列不同的化合物。其原子在空间中的排列不同的异构体称为“立体异构体”。彼此不是镜像的立体异构体称为“非对映异构体”，而彼此互为无法重叠的镜像的立体异构体称为“对映异构体”，有时也称为“光学异构体”。键结有四个不同取代基的碳原子称为“手性中心”。具有一个手性中心的化合物具有两种相反手性的对映异构形式。两种对映异构形式的混合物称为“外消旋混合物”。

[0116] “硝基”意为基团-NO2。

[0117] “经保护的衍生物”意为化合物的衍生物，其中，反应活性位点被保护基所阻断。经保护的衍生物可用于制备药物或其本身可能具有抑制剂活性。适用保护基的综合列表可见于T.W.Greene所著《有机合成中的保护基(第三版)》(Protecting Groups in Organic Synthesis, 3rd edition,Wiley&Sons,1999)中。

[0118] 术语“经取代的”意为，一个原子或多个原子组成的基团已经作为取代基替换了附接至另一基团的氢。对于芳基和杂芳基，术语“经取代的”指的是其中此类取代被允许的任何水平的取代，即所谓单取代、二取代、三取代、四取代或五取代。该取代被独立选自，且该取代可位于任何化学上许可的位置。术语“未取代的”意为，给定部分可仅有氢取代基通过可用的价态组成(未取代的)。

[0119] 如果官能团被揭示为“任选经取代”，则该官能团可以是(1)没有被取代或(2)经取代。如果官能团的碳被揭示为任选经一系列取代基中的一个或多个取代，则该碳上的一个或多个氢原子(只要存在，可为任何程度)可独立地及/或一起被替换为独立选定的任选的取代基。

[0120] “硫化物”意为-S-R，其中，R是H、烷基、碳环、杂环、碳环烷基或杂环烷基。硫化物基团尤其是巯基；烷基硫，例如，甲基硫(-S-Me)；芳基硫，如苯基硫；芳烷基硫，如，苄基硫。

[0121] “亚磺酰基”意为基团-S(O)-。注意，亚磺酰基可进一步经多种取代基取代以形成不同的亚磺酰基团，包括亚磺酸、亚磺酰胺、亚磺酸酯和亚砜。

[0122] “磺酰基”意为基团-S(O)(O)-。注意，该磺酰基团可进一步经多种取代基取代以形成不同的磺酰基团，包括磺酸、磺酰胺、磺酸酯和砜。

[0123] “硫代羰基”意为基团-C(S)-。注意，该硫代羰基可进一步经多种取代基取代以形成不同的硫代羰基，包括硫代酸、硫代酰胺、硫代酯、和硫代酮。

[0124] “动物”包括人、分人类哺乳动物(如，非人灵长动物、啮齿动物、小鼠、大鼠、仓鼠、狗、猫、兔、牛、马、绵羊、山羊、猪、鹿等)和非哺乳动物(如，鸟类等)。

[0125] 本文中使用的“生物利用度”是，所给药剂量的药物或药物组合物中，完整到达体循环的分数或百分比。通常，当经静脉给药时，其生物利用度是100％。但当经由其它途径(如，口服)给药时，其生物利用度下降(如，由于不完全吸收和首过代谢而造成生物利用度下降)。改善生物利用度的方法包括前药途径、盐合成、减小粒径、络合、改变物理形态、固体分散体、喷干和热熔融挤出。

[0126] “疾病”具体包括动物或其身体部位的任何不健康状况，且包括可能由施加至该动物的医疗或兽药治疗造成的不健康状况或易发生这些不健康状况，即，该疗法的“副作用”。

[0127] “药学可接受的”意为，可用于制备药物组合物的通常为安全、非毒性、且既不在生物学上也不在其它方面是不希望的，且包括可为兽医学用途以及人类医药用途所接受的。

[0128] “药学可接受的盐”意为，本发明的化合物的如上文定义的药学可接受的有机盐或无机盐，且该盐具备所希望的药理活性。此类盐包括与无机酸或有机酸形成的酸加成盐。药学可接受的盐也包括碱加成盐，其可在存在能与无机碱或有机碱反应的酸性质子存在时形成。例示性的盐包括但不限于，硫酸盐、枸橼酸盐、醋酸盐、草酸盐、氯盐、溴盐、碘盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸性枸橼酸盐、酒石酸盐、油酸盐、单宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、延胡索酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐(mesylate)、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、双羟萘酸盐(即，1,1'-亚甲基-双(2-羟基-3-耐酸盐))、碱金属(如，钠和钾)盐、碱土金属(如，镁)盐和铵盐。药学可接受的盐可牵涉包合另一分子如醋酸根离子、琥珀酸根离子或其它抗衡离子。该抗衡离子可以是任何令母体化合物电荷稳定的有机部分或无极部分。此外，药学可接受的盐在其结构中可具有超过一个的带电原子。对于多个带电原子作为药学可接受的盐的一部分的例子，该盐可具有多个抗衡离子。因此，药学可接受的盐可具有一个或多个带电原子及/或一个或多个抗衡离子。

[0129] “药学可接受的载体”意为，为了形成药物组合物即能给药至患者的剂型，与本发明的化合物混合的非毒性的溶剂、分散剂、赋形剂、佐剂、或其它材料。药学可接受的载体的实例包括适当的聚乙二醇(如，PEG400)、表面活性剂(如，Cremophor)、或环聚糖(如，羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚β-环糊精)、聚合物、脂质体、胶束、纳米球等。

[0130] 如国际纯化学和应用化学联合会(The International Union of Pure and Applied Chemistry) 所界定，“药效团”是确保与特定生物学靶点的最优超分子相互作用并触发(或阻断)其生物学应答所必需的空间和电子特征的集合。例如，喜树碱(Camptothecin)是周知的药物拓扑替康(topotecan)和伊立替康(irinotecan)的药效团。
二氯甲基二乙胺是一系列广泛使用的氮芥药物如美法仑(Melphalan)、环磷酰胺
(Cyclophosphamide)、苯达莫司汀(Bendamustine)等的药效团。

[0131] “前药”意为一种化合物，其在体内可代谢性地改变为根据本发明的活性药物。例如，包含羟基的抑制剂可以酯的形式给药，而该酯在体内可通过水解转化为该羟基化合物。

[0132] “稳定性”通常指的是，药物保留其特性而不丧失潜能的时间长度。有时这指的是保质期。影响药物稳定性的因素还包括，该药物的化学结构、配方中的杂质、pH、含水量、以及环境因素如温度、氧化性、光和相对湿度。可通过提供适当的化学及/或晶体修饰(如，可改变水合作用动力学的表面修饰；可能具有不同性质的不同晶体)、赋形剂(如，除该剂型中该活性物质外的任何物质)、封装条件、存储条件等，而改善稳定性。

[0133] 本文中揭示的组合物的“治疗有效量”意为，以适用于任何医疗处置的合理的效益/ 风险比，对所治疗的受试者提供疗效的该组合物的量。该疗效可以是客观的(即，可通过一些测试或标记物测量)或主观的(即，受试者呈现效果的迹象或感觉)。上述组合物的有效量可以是从约0.1mg/kg至约500mg/kg的范围，优选从约0.2至约50mg/kg。有效剂量还将依据给药途径以及与其它药剂合用的可能性而改变。但应理解，本发明的组合物的每日总剂量将由主治医生在可靠医疗判断的范畴内决定。对于特定患者的具体治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括被治疗的病症和该病症的严重性；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康情况、性别和饮食；给药时间、给药途径、以及所采用的具体化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；以及医疗英语周知的类似因素。

[0134] 本文中，术语“治疗”指的是将化合物给药至具有HBV感染、或具有其症状或倾向的受试者，给药目的为治愈、痊愈、缓解、解除、改变、补救、减轻、改善或影响该病症、该病症的症状或该病症的倾向。术语“有效量”指的是，在该受试者体内证实所希望的疗效所需的活性剂的量。如该领域技术人员所知，有效量可依据给药途径、赋形剂的使用、以及与其它试剂功用的可能性而改变。

[0135] “受试者”指的是人类和非人类动物。非人类动物的实例包括所有脊椎动物，如哺乳动物，如非人灵长动物(尤其是高级灵长动物)、狗、啮齿动物(如，小鼠或大鼠)、豚鼠、猫、和非哺乳动物如鸟类、两栖动物、爬行动物等。优选的具体实施例中，该受试者是人类。另一具体实施例中，该受试者是试验动物或适合作为疾病模型的动物。

[0136] “组合疗法”包括对该受试者给药本发明的化合物以及与该化合物进一步组合的另一生物活性成分(例如但不限于，第二种且不同的抗HBV感染剂)。举例而言，本发明的化合物可与其它抗HBV剂组合，如干扰素α-2b、干扰素α-2a和干扰素αcon-1(聚乙二醇化和未聚乙二醇化)、利巴韦林(ribavirin)、拉米夫定(lamivudine(3TC))、恩替卡韦(entecavir)、替诺福韦(tenofovir)、替比夫定(telbivudine(LdT))、阿德福韦
(adefovir)、或其它新兴的抗 HBV剂如HBV RNA复制抑制剂、HBsAg分泌抑制剂、HBV核心蛋白变构修饰剂、HBV 衣壳抑制剂、反义寡聚物、siRNA、HBV治疗性疫苗、HBV预防性疫苗、HBV抗体疗法 (单克隆抗体或多克隆抗体)以及用于治疗或预防HBV的TLR 2、3、7、8和9激动剂。
本发明的化合物可与其它治疗剂同步给药(作为单一制剂或分离的制剂)或依序给药。通常，组合疗法设想在单个治疗周期或单个疗程中给药两种或多种药物/进行两种或多种治疗。

[0137] 本发明进一步提供预防或治疗HBV感染疾病的方法。一种具体实施例中，本发明涉及治疗需要进行治疗的受试者的HBV感染的方法，包含对所述受试者给药治疗有效量的本发明的化合物。一种具体实施例中，本发明进一步提供，本发明的化合物在制造用于迟滞或减轻HBV感染的药物中的用途。

[0138] 应理解，本发明并不限于本文中显示和揭示的特定具体实施例，可做出多种改变和修饰而不悖离由权利要求书所界定的本发明的精神和范畴。

[0139] 根据本发明的化合物可根据多种反应式合成。必要的起始材料可通过标准有机化学过程获得。联系下述代表性的合成反应式和实施例，可更好地理解本发明的化合物和过程，这些反应式和实施例仅用作例示性说明而非试图限制本发明的范畴。对于所揭露的具体实施例的各种改变和修饰对于该领域技术人员是显而易见的，且可做出对包括但不限于化学结构、取代基、衍生物、及/或本发明的方法做出的改变和修饰，而不悖离本发明的精神和所附权利要求书的范畴。

[0140] 用以合成中间体 的典型路径揭示于反应式1中。反应式1中，R1、 R2、R3、R4和R5与上述概要部分中所揭示者相同。

[0141]

[0142] 反应式1中，适宜的起始材料1-1可与适宜的醇反应以给出中间体1-2，该中间体可进行脱Boc过程以获得胺中间体1-3。之后，将1-3与甲酸乙酯或甲酸在诸如乙醇或二氧六环的溶剂中一起加热，得到中间体1-4，该中间体可进行环化反应以形成亚胺中间体 IM-1。

[0143] 用以合成中间体 的典型路径揭示于反应式2中。反应式2中，R1、 R2、R3、R4和R5与上述概要部分中所揭示者相同。

[0144]

[0145] 反应式2中，适宜的起始材料2-1可与乙烯基硼酸反应以给出中间体2-2，该中间体可进行烯烃复分解反应以给出中间体2-3。将2-3还原，之后进行脱Boc反应以获得胺中间体2-5。之后，将2-5与甲酸乙酯或甲酸在诸如乙醇或二氧六环的溶剂中一起加热，得到中间体
2-6，该中间体可进行环化反应以形成亚胺中间体IM-2。

[0146] 用以合成中间体 的典型路径揭示于反应式3中。反应式3中，R1、 R2、R3、R4和R5与上述概要部分中所揭示者相同。

[0147]

[0148] 反应式3中，适宜的起始材料3-1可与适宜的胺反应以给出中间体3-2，该中间体可进行脱Boc过程以获得胺中间体3-3。之后，将3-3与甲酸乙酯或甲酸在诸如乙醇或二氧六环的溶剂中一起加热，得到中间体3-4，该中间体可进行环化反应以形成亚胺中间体 IM-3。

[0149] 用以合成中间体 的典型路径揭示于反应式4中。反应式4中，R1、R2、 R3、R4和R5与上述概要部分中所揭示者相同。

[0150]

[0151] 反应式4中，适宜的起始材料4-1可与适宜的胺反应以给出中间体4-2，该中间体可进行脱Boc过程以获得胺中间体4-3。之后，将4-3与甲酸乙酯或甲酸在诸如乙醇或二氧六环的溶剂中一起加热，得到中间体4-4，该中间体可进行环化反应以形成亚胺中间体 IM-4。

[0152] 用以合成中间体 的典型路径揭示于反应式5中。反应式5中，R1、 R2、R3、R4和R5与上述概要部分中所揭示者相同。

[0153]

[0154] 反应式5中，适宜的起始材料1-1进行还原性胺化反应以给出中间体5-2，该中间体可进行脱Boc过程以获得胺中间体5-3。之后，将5-3与甲酸乙酯或甲酸在诸如乙醇或二氧六环的溶剂中一起加热，得到中间体5-4，该中间体可进行环化反应以形成亚胺中间体 IM-5。

[0155] 用以合成中间体 的典型路径揭示于反应式6中。反应式6中，R1、R2、 R3、R4和R5与上述概要部分中所揭示者相同。

[0156]

[0157] 反应式6中，6-1与6-2的偶合反应得到6-3。该反应可在Pd催化剂如Pd2(dba)3、 Pd(PPh3)4或PdCh(PPh3)2、配体如Xantphos、以及适当的碱如t-BuONa、Na2CO3或Cs2CO3的存在下，在适当的溶剂如THF、甲苯或1,4-二氧六环中，在室温至130℃进行。6-3的还原性胺化反应给出中间体6-4，该中间体可与甲酸乙酯或甲酸在诸如乙醇或二氧六环的溶剂中一起加热而得到中间体6-5。之后，在-10℃至室温下，将中间体6-5先以草酰氯处理再以FeCl3处理，分离后，将该中间体与浓H2SO4的甲醇溶液一起加热以给出中间体 IM-6。

[0158] 用以合成式(I)化合物 的典型路径揭示于反应式A中：

[0159]

[0160] 反应式A中，IM-1与2-(二甲基氨基亚甲基)-3-氧代-丁酸烷基酯在溶剂如DMSO、 DMF、乙醇中反应，或与3-(乙氧基亚甲基)-4-三甲基硅氧基-戊-4-烯酸烷基酯、BF3-Et2O 和TFA在DCM中反应，以给出中间体A-2。通过p-氯醌脱氢后，获得A-3。通过氢氧化锂或氢氧化钠在适当的溶剂如THF/H2O、EtOH/H2O或MeOH/H2O中令A-3水解，得到式 (I)化合物，该化合物可通过制备HPLC和手性HPLC进一步分离，以给出异构体。

[0161] 同样，下述化合物

[0162]

[0163]

[0164] 可分别使用下述适宜的中间体制备

[0165]

[0166] 用以合成经氟化的化合物 的典型路径揭示于反应式B中：

[0167]

[0168] 反应式B

[0169] 反应式B中，式(I)化合物可通过Selectfluor试剂一步氟化，以得到目标化合物。

[0170] 同样，下述经氟化的化合物

[0171]

[0172]

[0173] 可通过与Selectfluor试剂进行类似于反应式B的氟化反应而制备。

[0174] 用以合成化合物 的优选路径揭示于反应式I中。反应式I中的 Z2、Z3、R1、R4和R5与上文概要部分中所揭示的相同。

[0175]

[0176] 反应式I中，适宜的起始材料I-1与I-2的偶合反应得到I-3。该反应可在Pd催化剂如Pd2(dba)3、Pd(PPh3)4或PdCh(PPh3)2、配体如Xantphos、以及适当的碱如t-BuONa、Na2CO3或Cs2CO3的存在下，在适当的溶剂如THF、甲苯或1,4-二氧六环中，在室温至130℃进行。I-3的还原性胺化反应给出中间体I-4，该中间体可与甲酸乙酯或甲酸在诸如乙醇或二氧六环的溶剂中一起加热而得到中间体I-5。之后，在-10℃至室温下，将中间体I-5先以草酰氯处理再以FeCl3处理，分离后，将该中间体与浓H2SO4的甲醇溶液一起加热以给出中间体I-6。接着，I-6与2-(二甲基氨基亚甲基)-3-氧代-丁酸烷基酯在溶剂如DMSO、DMF、乙醇中反应，或与3-(乙氧基亚甲基)-4-三甲基硅氧基-戊-4-烯酸烷基酯、BF3-Et2O和TFA 在DCM中反应，以给出中间体I-7。通过p-氯醌脱氢后，获得I-8。通过氢氧化锂或氢氧化钠在适当的溶剂如THF/H2O、EtOH/H2O或MeOH/H2O中令I-8水解，得到中间体I-9，该中间体可通过Selectfluor试剂进行一步氟化以得到目标化合物I-10。最后，I-10可通过制备HPLC和手性HPLC进一步分离，以给出异构体。

[0177] 用以合成手性化合物 的优选路径揭示于反应式II中。反应式II 中的Z2、Z3、R1、R4和R5与上文概要部分中所揭示的相同。

[0178]

[0179] 反应式II中，适宜的起始材料II-1与II-2的偶合反应得到II-3。该反应可在Pd催化剂如Pd2(dba)3、Pd(PPh3)4或PdCh(PPh3)2、配体如Xantphos、以及适当的碱如t-BuONa、 Na2CO3或Cs2CO3的存在下，在适当的溶剂如THF、甲苯或1,4-二氧六环中，在室温至130℃进行。II-3的还原性胺化反应给出中间体II-4，该中间体可与适当的有机酸如L-(+)-酒石酸、L-(-)-DTTA、L-(-)-DBTA和(R)-扁桃酸在适当的有机溶剂如MeOH、EtOH、IPA、IPAc、 MIBK、EA、MTBE、DIPE、CPME和甲苯中选择性地形成对映异构盐II-5。其它对映异构盐保留在母液中。通过令II-5的所希望的对映异构盐与适量的碱如TEA、DIPEA、NaOH、 Na2CO3、NaHCO3及其混合物在适当的溶剂如DCM、IPAc或MeTHF中反应，回收对映异构盐II-5，导致对映异构中间体II-6。之后，可将II-6与甲酸乙酯或甲酸在溶剂如乙醇或二氧六环中一起加热，得到中间体II-7，在-10℃至室温下，将该中间体先以草酰氯再以FeCl3处理，分离后，将该中间体与浓H2SO4的甲醇溶液一起加热以给出中间体II-8。接着，令II-8与2-(二甲基氨基亚甲基)-3-氧代-丁酸烷基酯在溶剂如DMSO、DMF、乙醇中反应，或与3-(乙氧基亚甲基)-4-三甲基硅氧基-戊-4-烯酸烷基酯、BF3-Et2O和TFA在 DCM中反应，以给出中间体II-9。通过p-氯醌脱氢后，获得II-10。通过氢氧化锂或氢氧化钠在适当的溶剂如THF/H2O、EtOH/H2O或MeOH/H2O中令II-10水解，得到中间体II-11，该中间体可使用Selectfluor试剂进行一步氟化，以得到目标化合物II-12。

[0180] 用以合成手性氘代化合物 的优选路径揭示于反应式III中。反应式III中的Z2、Z3、R1、R4和R5与上文概要部分中所揭示的相同。

[0181]

[0182] 反应式III中，适宜的起始材料III-1与III-2的偶合反应得到III-3。该反应可在Pd 催化剂如Pd2(dba)3、Pd(PPh3)4或PdCh(PPh3)2、配体如Xantphos、以及适当的碱如t-BuONa、 Na2CO3或Cs2CO3的存在下，在适当的溶剂如THF、甲苯或1,4-二氧六环中，在室温至130℃进行。使用适宜的氘代试剂NaBD3CN进行III-3的还原性胺化反应，给出中间体III-4，该中间体可与适当的有机酸如L-(+)-酒石酸、L-(-)-DTTA、L-(-)-DBTA和(R)-扁桃酸在适当的有机溶剂如MeOH、EtOH、IPA、IPAc、MIBK、EA、MTBE、DIPE、CPME和甲苯中选择性地形成对映异构盐III-5。其它对映异构盐保留在母液中。通过令III-5的所希望的对映异构盐与适量的碱如TEA、DIPEA、NaOH、Na2CO3、NaHCO3及其混合物在适当的溶剂如DCM、IPAc或MeTHF中反应，回收对映异构盐III-5，导致对映异构中间体III-6。之后，可将III-6与甲酸乙酯或甲酸在溶剂如乙醇或二氧六环中一起加热，得到中间体 III-7，在-10℃至室温下，将该中间体先以草酰氯再以FeCl3处理，分离后，将该中间体与浓H2SO4的甲醇溶液一起加热以给出中间体II-8。接着，令III-8与2-(二甲基氨基亚甲基)-3-氧代-丁酸烷基酯在溶剂如DMSO、DMF、乙醇中反应，或与3-(乙氧基亚甲基)-4- 三甲基硅氧基-戊-4-烯酸烷基酯、BF3-Et2O和TFA在DCM中反应，以给出中间体III-9。通过p-氯醌脱氢后，获得III-10。通过氢氧化锂或氢氧化钠在适当的溶剂如THF/H2O、 EtOH/H2O或MeOH/H2O中令III-10水解，得到中间体III-
11，该中间体可使用Selectfluor 试剂进行一步氟化，以得到目标化合物III-12。

[0183] 用以合成手性化合物 的优选路径揭示于反应式IV中，其中，R0是H或D；而R7是卤素、低级烷基、CF3、CN、硝基、或NH2。反应式IV中的Z2、Z3、 R1、R4和R5与上文概要部分中所揭示的相同。

[0184]

[0185] 反应式IV中，来自反应式II的中间体II-10或来自反应式III的III-10，可与卤化反应剂NCS或NBS反应，以获得化合物IV-Cl或IV-Br(其中，R7是Cl或Br)；通过标准有机反应，化合物IV-Br可一步转化为IV-CN、IV-CF3或IV-CH3；此外，中间体II-10 或III-10可进行亚硝化反应以获得化合物IV-NO2(其中，R7是NO2)，该化合物可进一步还原，以获得化合IV-NH2(其中，R7是NH2)。

[0186] 用以合成手性化合物 (其中，Z2是O)的优选路径揭示于反应式V 中。反应式V中的Z3、R0、R1、R4、R5和R7与上文概要部分中所揭示的相同。

[0187]

[0188] 反应式V中，V-1(其中，R4-Z2-是Cl)可通过与反应式I至III类似的方法制备。之后， V-1可与适宜的NaB(OR4)4反应以得到目标化合物。

[0189] 用以合成化合物 (其中，R7是卤素、低级烷基、CF3、CN、硝基或NH2)的优选方法揭示于反应式(i)中。反应式(i)中的Z2、Z3、R1、R4和R5与上文概要部分中所揭示的相同。

[0190]

[0191] 反应式(i)中，起始材料i-1可进行水解以得到羧酸中间体i-2，该中间体随后转化为内酯中间体i-3。内酯i-3经水解和保护以给出羧酸中间体i-4，该中间体转变为酰氯中间体 i-5。与乙烯基胺缩合以给出4-吡喃酮中间体i-6，该中间体与肼反应以给出中间体i-7。中间体i-7的去保护和后续的环闭合产生三环状的中间体i-9。中间体i-9水解，给出羧酸i-
10，羧酸i-10最终使用与反应式I至IV类似的方法官能化，其中，R7不是H。

[0192] 可通过与反应式(i)类似的方法合成化合物 其中，R1是氟烷基、氟环烷基、芳基、或杂芳基。

[0193] 联系下述实施例，将更好地理解本发明的化合物和过程，该等实施例仅用于例示性说明而非限制本发明的范畴。对所揭露的具体实施例的各种改变和修饰对于该领域技术人员是显而易见的，且可作出这些包括但不限于关于本发明的化学结构、取代基、衍生物、配方及/或方法的改变和修饰，而不悖离本发明的精神以及所附权利要求书的范畴。

[0194] [实施例]

[0195] 若呈递NMR数据，则使用XL400(400MHz)获得1H谱，记录为以Me4Si为基准、以 ppm计的位移，并顺便说明质子数、峰重数和以赫兹(Hertz)计的耦合常数。若呈递HPLC 数据，则使用安捷伦公司(Agilent)的Agilent 1100系统实施分析。若呈递LC/MS数据，则使用应用生物系统公司(Applied Biosystems)的Applied Biosystems API-100质谱仪和岛津公司的(Shimadzu)Shimadzu SCL-10A LC色谱柱实施分析：

[0196] 实施例1：6-叔丁基-10-氯-1-氟-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a] 异喹啉-3-甲酸的合成

[0197]

[0198] 将5-溴-2-氯-苯酚(5.00克(g),24.10毫摩尔(mmol),1.00当量(eq))、1-溴-3-甲氧基-丙烷 (5.00g,32.68mmol,1.36eq)和K2CO3(9.99g,72.30mmol,3.00eq)在DMF(50.00毫升(mL)) 中的混合物在50℃搅拌15小时(h)。TLC(PE:EA＝10:1)指示反应完全。过滤后，在减压下浓缩滤液。残渣通过硅胶色谱纯化，以PE至PE:EA＝5:1洗脱，给出无色油状的4-溴-1- 氯-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(6.20g,22.18mmol,92.02％产率)，产物直接用于下一步。

[0199] 将4-溴-1-氯-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(4.00g,14.31mmol,1.00eq)、3,3-二甲基丁-2-酮 (4.30g,42.93mmol,5.31mL,3.00eq)、Pd(dba)2(411.42毫克(mg),715.50微摩尔(μmol),0.05 eq)、Xantphos(414.00mg,715.50μmol,0.05eq)和t-BuONa(4.54g,47.22mmol,3.30eq)在 THF(30.00mL)中的混合物于50℃搅拌3小时。冷却至30℃后，过滤该混合物。滤液在减压下浓缩，给出褐色油状的粗产物1-[4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-
3,3-二甲基-丁-2-酮 (9.00g,粗产物)，粗产物直接用于下一步。

[0200] 将粗产物1-[4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-3,3-二甲基-丁-2-酮(24.00g,56.22mmol, 1.00eq)、CH3COONH4(43.34g,562.20mmol,10.00eq)和NaBH3CN(7.07g,
112.44mmol, 2.00eq)在MeOH(300.00mL)中的混合物于30℃搅拌4天。将饱和K2CO3水溶液(100mL) 加入该混合物中，将该混合物在30℃搅拌20分钟(min)。以DCM(100mL×3)萃取混合物，合并有机相，在减压下浓缩。粗产物通过硅胶色谱纯化，以PE至PE:EA＝1:1洗脱，给出黄色油状的1-[4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-3,3-二甲基-丁-2-胺(13.20g,
35.22mmol, 62.64％产率,80％纯度)，通过LC-MS确认产物并直接用于下一步。

[0201] 将1-[4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-3,3-二甲基-丁-2-胺(13.20g,30.82mmol,1.00eq) 和甲酸(1.70g,36.98mmol,1.40mL,1.20eq)在HCOOEt(100.00mL)中的混合物于90℃搅拌15小时。移除溶剂后，残渣通过硅胶色谱纯化，以PE至EA洗脱。得到浅黄色油状的 N-[1-[[4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]甲基]-2,2-二甲基-丙基]甲酰胺(13.10g,25.97mmol, 84.27％产率,65％纯度)，产物通过LC-MS确认。

[0202] 将N-[1-[[4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]甲基]-2,2-二甲基-丙基]甲酰胺(3.10g,9.46 mmol,1.00eq)和POCl3(1.74g,11.35mmol,1.05mL,1.20eq)在CH3CN(50.00mL)中的混合物于60℃搅拌2小时。使用冰浴冷却至0℃后，以NH4OH将调节为8。以DCM(100mL ×2)萃取该混合物。合并有机相，在减压下浓缩，给出褐色油状的3-叔丁基-7-氯-6-(3-甲氧基丙氧基)-3,4-二氢异喹啉(2.30g,7.42mmol,78.47％产率)，产物不经进一步纯化而直接使用。

[0203] 将3-叔丁基-7-氯-6-(3-甲氧基丙氧基)-3,4-二氢异喹啉(2.30g,7.42mmol,1.00eq)和 (2E)-2-(甲氧基亚甲基)-3-氧代-丁酸乙酯(5.11g,29.69mmol,4.00eq)在EtOH(100.00mL) 中的混合物于100℃搅拌22小时。移除溶剂后，残渣通过硅胶色谱纯化，以PE:
EA＝10:1 至1:1洗脱，给出褐色油状的粗产物6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-1,6,7,11b- 四氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸乙酯(4.50g,粗产物)，粗产物与在EW5403-112中的EW5403-102 一起进一步纯化，给出6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-1,6,
7,11b-四氢苯并[a] 喹嗪-3-甲酸乙酯(4.78g)。

[0204] 将6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-1,6,7,11b-四氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸乙酯  (580.00mg,1.29mmol,1.00eq)和2,3,5,6-四氯-1,4-苯醌(317.18mg,
1.29mmol,1.00eq)在 DME(10.00mL)中的混合物于70℃搅拌1.5小时。冷却至30℃后，将H2O(60mL)加至该混合物中。以DCM(50mL×3)萃取该混合物。合并有机层，以饱和NaHCO3水溶液(100 mL)洗涤，在减压下浓缩，给出黄色固体的6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7- 二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸乙酯(710.00mg,粗产物)，产物直接用于下一步。

[0205] 将6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]-喹嗪-3-甲酸乙酯 (710.00mg,1.58mmol,1.00eq)和NaOH(253.60mg,6.34mmol,4.00eq)在MeOH(16.00 mL)和H2O(4.00mL)中的混合物于30℃搅拌40分钟。使用HCl水溶液(12 M，H2O中) 将该混合物中和至pH＝7。过滤沉淀并干燥，得到浅黄色固体的6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸(338.60mg,806.38μmol,51.04％产率)，通过 LC-MS和1H NMR确认产物。

[0206] 将6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸(400.00mg, 952.61μmol,1.00eq)、1-(氯甲基)-4-氟-1,4-二氮阳离子双环[2.2.2]辛烷二-四氟硼酸盐 (401.59mg,1.13mmol,1.19eq)的混合物溶解于CH3CN(20mL)与AcOH(2.10g,34.97 mmol,2.00mL,36.71eq)的混合物中。将所得混合物于30℃搅拌7天。移除溶剂后，残渣通过以HCOOH作为添加剂的反相色谱纯化，随后通过制备型HPLC(HCl)纯化，给出灰白色固体的6-叔丁基-10-氯-1-氟-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(13.50mg,3.24％产率)。LC-MS：(M+H+＝438.0)。1H NMR：EW5403-147-P1B 400MHz CDCl3δ14.96(s,1H),8.45(s,1H),8.14(s,1H),6.87(s,1H),4.21-4.24(m,2H), 4.14(s,1H),3.61-3.65(m,2H),3.43-3.48(m,1H),3.38(s,3H),3.21-3.27(m,
1H),2.13-2.19 (m,2H),0.82(s,9H)。

[0207] 实施例2A和2B：(+)-6-叔丁基-10-氯-1-氟-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H- 吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸和(-)-6-叔丁基-10-氯-1-氟-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0208]

[0209] 通过手性HPLC拆分6-叔丁基-10-氯-1-氟-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H- 吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸，提供(+)-6-叔丁基-10-氯-1-氟-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7- 二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸和(-)-6-叔丁基-10-氯-1-氟-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代 -6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。2A：LC-MS:(M+H+＝438.0)；[α]D20＝+51.23° (0.100％,CH3CN)。2B：LC-MS:(M+H+＝438.0)；[α]D20＝-
56.347°(0.100％,CH3CN)。

[0210] 实施例3：6-叔丁基-1,10-二氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a] 异喹啉-3-甲酸

[0211]

[0212] 将6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(100.00mg,238.15μmol,1.00eq)与NCS(95.40mg,714.45μmol,3.00eq)在DCM(20.00 mL)中的混合物于15℃搅拌3天。移除溶剂后，残渣通过制备型HPLC(HCl作为添加剂) 纯化，给出灰白色固体的6-叔丁基-1,10-二氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(4.10mg,9.02μmol,3.79％产率)，通过LC-MS、1H NMR和2D NMR 确认产物。LC-MS：(M+H+＝454.1,M+2+H+＝456.1)；1HNMR：400MHz CDCl3,δ15.19(s, 1H),8.34(s,2H),6.88(s,1H),4.12-4.29(m,3H),3.65-3.67(m,2H),3.40(s,
4H),3.22-3.24 (m,1H),2.17-2.20(m,2H),0.80(s,9H)。

[0213] 实施例4：1-溴-6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a] 异喹啉-3-甲酸

[0214]

[0215] 将6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(300.00mg,714.46μmol,1.00eq)和NBS(254.32mg,1.43mmol,2.00eq)在EA(10.00mL) 中的混合物于15℃搅拌7小时。移除溶剂后，残渣通过制备型HPLC(HCl作为添加剂) 纯化，给出灰白色固体的1-溴-6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢苯并[a] 喹嗪-3-甲酸(52.00mg,104.25μmol,14.59％产率)，通过LC-MS、1H NMR和2D NMR+ + 1确认产物。LC-MS：(M+H ＝498.0,M+2+H ＝500.0)；HNMR:400MHz CDCl3,δ8.61(s,1H), 
8.54(s,1H),6.86(s,1H),4.28-4.30(m,2H),4.20(s,1H),3.63-3.67(m,2H),3.41(s,4H), 
3.22-3.24(m,1H),2.15-2.21(m,2H),0.79(s,9H).

[0216] 实施例5：6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-1-甲基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0217]

[0218] 将1-溴-6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸(55.00 mg,110.27μmol,1.00eq)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧三硼环己烷(138.42mg,1.10mmol, 153.80uL,10.00eq)、Pd(PPh3)4(127.42mg,110.27μmol,1.00eq)和K2CO3(76.20mg,551.33 μmol,5.00eq)在DMF(10.00mL)中的混合物于110℃搅拌11小时。移除溶剂后，残渣通过制备型TLC(EA)纯化，给出无色油状的6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-1-甲基-2- 氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(2.80mg,6.45μmol,
5.85％产率)，通过 LC-MS和1H NMR确认产物。LC-MS：(M+H+＝434.1)；1HNMR:400MHz CDCl3,δ8.71(s, 1H),7.84(s,1H),7.23(s,1H),4.22-4.31(m,2H),3.61-3.65(m,3H),3.37(s,
3H),3.35(s,1 H),2.90(s,1H),2.44(s,3H),2.27(s,1H),2.09-2.13(m,2H),0.75-0.77(m,
9H)。

[0219] 实施例6：6-叔丁基-10-氯-1-氰基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0220]

[0221] 向6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸乙酯(1.50 g,3.35mmol,1.00eq)的EtOAc(20.00mL)溶液中，加入NBS(715.48mg,4.02mmol,1.20 eq)。将该混合物于25℃搅拌16小时。移除溶剂后，残渣通过柱色谱(PE至PE/EA＝0/1) 纯化，给出黑褐色固体的1-溴-6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-
2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯(700.00mg,1.33mmol,39.70％产率)，通过LC-MS确+ +
认产物 (M+H＝526.0,M+2+H＝528.0)。

[0222] 向1-溴-6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸乙酯(600mg,1.14mmol,1eq)的DMF(30mL)溶液中，加入CuCN(122.40mg,1.37mmol,
1.2 eq)。将该混合物于170℃在N2气氛下搅拌3小时。移除溶剂后，残渣通过柱色谱(PE to PE/EA＝5/1)纯化，给出灰白色油状的6-叔丁基-10-氯-1-氰基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代 -6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯(502mg,1.06mmol,93.20％产率)，通过LC-MS确认产物。LC-MS：(M+H+-14＝459.1，注意：由于质谱分析使用的溶剂是甲醇，乙酯在质谱分析中变成了甲酯)。

[0223] 向6-叔丁基-10-氯-1-氰基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯(502mg,1.06mmol,1eq)在MeOH(30mL)和H2O(5mL)的溶液中，加入 NaOH(127.36mg,3.18mmol,3eq)。将该混合物于25℃搅拌12小时，移除溶剂后，残渣通过制备型HPLC(色谱柱：PhenomenexSynergi C18 150×25×10μm；流动相：[水 (0.05％HCl)-ACN]；B％：48％-68％,7.8分钟)纯化，给出浅黄色固体的6-叔丁基-10-氯-1- 氰基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(58mg,130.36 μmol,12.28％产率)，通过LC-MS和1H NMR确认产物。LC-MS：(M+H+＝445.1)；1HNMR: 400MHz CDCl3,δ14.42(s,1H),8.76(s,2H),6.90(s,1H),4.05-4.28(m,3H),3.62-3.63(m, 2H),
3.28-3.39(m,4H),2.17(s,1H),2.02(s,2H),0.82(s,9H).

[0224] 实施例7：6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-1-硝基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0225]

[0226] 向5-溴-2-甲氧基-苯酚(67.00g,330.00mmol,1.00eq)和1-溴-3-甲氧基-丙烷(100.99g, 660.00mmol,2.00eq)在DMF(300.00mL)中的溶液加入K2CO3(136.83g,990.00mmol, 3.00eq)。将该混合物于25℃搅拌8小时。在LC-MS上观察到所希望的产物。将反应混合物真空浓缩，并以乙酸乙酯(40mL×3)萃取。粗产物通过快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝ 5/1)纯化，给出无色油状的4-溴-1-甲氧基-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(90.00g,
327.11mmol, 99.12％产率)。LC-MS：EW6108-59-P1Z(M+H+＝274.9，M+2+H+＝276.9)。

[0227] 向4-溴-1-甲氧基-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(87.00g,316.20mmol,1.00eq)和3-甲基丁-2- 酮(27.23g,316.20mmol,33.62mL,1.00eq)在二氧六环(300.00mL)中的溶液加入Pd2(dba)3 (28.96g,31.62mmol,0.10eq)、Xantphos(36.59g,63.24mmol,0.20eq)和t-BuONa(91.16g, 948.61mmol,3.00eq)。将该混合物于100℃在N2气氛下搅拌4小时。移除溶剂后，向该混合物加入DCM(300mL)，以H2O(200mL×3)洗涤，随后在减压下浓缩以给出残渣。粗产物通过快速柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，给出褐色油状的1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3-甲基丁-2-酮(34.25g,122.16mmol,38.64％产率)，通过LC-MS确认产物。 LC-MS：EW6108-65-P1C1(M+H+＝281.1)。

[0228] 向1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3-甲基丁-2-酮(35.00g,124.84mmol,1.00eq) 和CH3COONH4(96.23g,1.25mol,10.00eq)在MeOH(100.00mL)中的溶液加入NaBH3CN (78.45g,1.25mol,10.00eq)。该混合物于40℃搅拌8小时。在LC-MS上观察到所希望的产物。移除溶剂后，向该混合物加入EA(300mL)。混合物以H2O(300mL×3)洗涤，随后在减压下浓缩。残渣通过快速柱层析(DCM:MeOH＝50:1)纯化，给出黄色油状的1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3-甲基丁-2-胺(24.12g,85.72mmol,68.66％产率)。LC-MS： EW6108-73-P1A1(M+H+＝282.1)。

[0229] 将1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3-甲基丁-2-胺(24.12g,85.72mmol,1.00eq) 和ORMIC ACID(39.46g,857.17mmol,32.34mL,10.00eq)在二氧六环(80.00mL)中的混合物于100℃搅拌6小时。在LC-MS上观察到所希望的产物。将反应混合物真空浓缩以给出黄色油状的粗产物N-(1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3-甲基丁-2-基)甲酰胺 (12.70g,41.05mmol,47.89％产率)，粗产物直接用于下一步。LC-MS：EW6108-74-P1Z01 (M+H+＝310.1)。

[0230] 向N-(1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3-甲基丁-2-基)甲酰胺(12.70g,41.05 mmol,1.00eq)的CH3CN(100.00mL)溶液中加入POCl3(31.47g,205.24mmol,19.07mL, 
5.00eq)。将该混合物于60℃搅拌12小时。在LC-MS上观察到所希望的产物。使用NH4OH 将反应混合物中和至pH＝8，随后以DCM(100mL×3)萃取。真空浓缩有机层，残渣通过以TFA作为添加剂的反相柱纯化，给出黄色油状的3-异丙基-7-甲氧基-6-(3-甲氧基丙氧基)-3,4-二+
氢异喹啉(11.25g,38.61mmol,94.05％产率)。LC-MS：EW6108-76-P1Z(M+H＝ 292.1)。

[0231] 将3-异丙基-7-甲氧基-6-(3-甲氧基丙氧基)-3,4-二氢异喹啉(11.25g,38.61mmol,1.00 eq)和(2E)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代-丁酸乙酯(7.19g,38.61mmol,
1.00eq)在EtOH(30.00 mL)中的混合物于100℃搅拌4天。在LC-MS上观察到所希望的产物。
在真空下浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过快速柱层析(乙酸乙酯)纯化，给出褐色油状的6-异丙基-10- 甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-2,6,7,11b-四氢-1H-吡啶并[2,
1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯 (12.25g,28.39mmol,73.53％产率)。LC-MS：EW6108-79-P1B(M+H+＝432.1)。

[0232] 向6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-2,6,7,11b-四氢-1H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯(12.25g,28.39mmol,1.00eq)的DME(50.00mL)溶液中加入2,3,5,6-四氯 -1,4-苯醌(13.96g,56.78mmol,2.00eq)。将混合物于70℃搅拌5小时。在LC-MS上观察到所希望的产物。在真空下浓缩反应混合物，残渣通过快速柱层析(DCM:MeOH＝30:
1)纯化，给出黄色油状的6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-
2H-吡啶并 [2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯(8.10g,18.86mmol,66.43％产率)。LC-MS：EW6108-+
82-P1A (M+H＝430.1)。

[0233] 向6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉 -3-甲酸乙酯(1.00g,2.33mmol,1.00eq)在MeOH(5.00mL)和H2O(3.00mL)中的溶液加入 NaOH(372.52mg,9.32mmol,4.00eq)。将混合物在30℃搅拌12小时。使用HCl(12 M， H2O溶液)将反应混合物中和至pH＝7。滤出固体，以H2O(20mL)洗涤。该固体通过制备型-TLC(DCM:MeOH＝15:1)纯化，给出灰白色固体的6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(409.12mg,1.02mmol,43.74％产率)，通过LC-MS和1H NMR确认产物。LC-MS：EW6108-83-P1M1(M+H+＝402.2)；1HNMR： EW6108-
83-P1M 400MHz CDCl3,δ8.37(s,1H),7.10(s,1H),6.98(s,1H),6.71(s 1H), 4.12-4.09(m,2H),3.86(s,3H),3.81-3.75(m,1H),3.56-3.47(m,2H),3.32-3.23(m,4H), 3.03-2.96(m,1H)2.12-2.04(m,2H),1.80-1.70(m,1H),0.85-0.9(m,3H),0.80-0.70(m,3H)。

[0234] 向6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉 -3-甲酸(100mg,249.10μmol,1eq)的AcOH(20mL)溶液加入KNO3(25.18mg,
249.10μmol, 1eq)和H2SO4(1.84g,18.76mmol,1mL,75.31eq)。将混合物在25℃搅拌16小时。
将反应混合物加入冰水(300mL)中，以DCM(50mL×3)萃取，合并有机层，并在减压下浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(色谱柱：PhenomenexSynergi C18 150×25×10μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：40％-60％,7.8分钟)纯化，给出黑褐色固体的6-异丙基-
10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-1-硝基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸 (3.1mg,6.88μmol,2.76％产率)，通过LC-MS和1H NMR确认产物。LC-MS：(M+H+＝ 
447.1)；1HNMR：400MHz CDCl3,δ15.67(s,1H),8.51(s,1H),6.97(s,1H),6.80(s,1H), 4.25-
4.26(m,2H),3.63-3.99(m,4H),3.60-3.61(m,2H),3.17-3.39(m,4H),2.02-2.18(m,2 H),
1.77-1.79(m,2H),0.93-0.95(m,6 H)。

[0235] 实施例8：6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]酞嗪 -3-甲酸

[0236]

[0237] 将3-氯-4-羟基苯甲酸甲酯(10.0g,53.59mmol,1.00eq)的N,N-二甲基甲酰胺(100mL) 溶液、1-溴-3-甲氧基丙烷(12.3g,80.38mmol,1.50eq)、碳酸钾(22.3g,161.35mmol,3.00eq) 置于250mL三颈圆底烧瓶内。将所得溶液在50℃搅拌3小时。随后通过加入100mL的水而淬灭反应。所得溶液以乙酸乙酯(3×70mL)萃取，合并有机层。所得混合物以3×100 mL的水和1×100mL的氯化钠溶液洗涤。混合物使用无水硫酸钠干燥。滤除固体。
所得混合物在真空下浓缩。残渣加载至硅胶柱，以乙酸乙酯/石油醚(1:2)洗脱。得到13.1g(94％) 的橙色固体状的3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯甲酸甲酯。1H NMR：PHNW-1-2-1(300MHz, DMSO)δ7.91-7.87(m,2H),7.25(d,J＝8.4Hz,1H),4.19(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,3H), 3.50(t,J＝6.3Hz,2H),3.25(s,3H),2.04-2.00(m,2H)。

[0238] 将3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯甲酸甲酯(13.1g,50.64mmol,1.00eq)的四氢呋喃/H2O (120/40mL)溶液、氢氧化钠(4.06g,101.50mmol,2.00eq)置于250mL圆底烧瓶内。所得溶液在50℃搅拌过夜。所得混合物在真空下浓缩。使用盐酸(3mol/L)将该溶液的pH值调节为5。过滤收集固体。得到11.1g(90％)白色固体的3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯甲酸。1H NMR：PHNW-1-2-2(300MHz,DMSO),δ12.97(s,1H),7.92-7.86(m,2H),7.24(d,J＝8.4Hz, 1H),4.19(t,J＝6.3Hz,2H),3.50(t,J＝6.3Hz,2H),3.25(s,3H),2.04-1.96(m,2H)。

[0239] 向250mL三颈圆底烧瓶内充入惰性气体氮气，并维持在氮气氛下，将3-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯甲酸(10.5g,42.91mmol,1.00eq)的CH2Br2(150mL)溶液、Pd(OAc)2(963.2mg, 4.29mmol,0.10eq)、K2HPO4(15.0g,86.26mmol,2.00eq)置于该烧瓶内。将所得溶液在 110℃搅拌过夜。所得混合物在真空下浓缩。将残渣加载至硅胶柱，以乙酸乙酯/石油醚(1:1) 洗脱。得到3.0g(27％)白色固体的6-氯-5-(3-甲氧基丙氧基)-1,3-二氢-2-苯并呋喃-1-酮。
1H  NMR：PHNW-1-2-3(300MHz,DMSO),δ7.89(s,1H),7.45(s,1H),5.35(s,2H),4.23(t,J＝ 
6.3Hz,2H),3.52(t,J＝6.3Hz,2H),3.25(s,3H),2.08-1.99(m,2h)。

[0240] 将6-氯-5-(3-甲氧基丙氧基)-1,3-二氢-2-苯并呋喃-1-酮(3.0g,11.69mmol,1.00eq)的甲醇(30mL)溶液、氢氧化钾(788mg,14.04mmol,1.20eq)置于100mL圆底烧瓶内。
将所得溶液在75℃搅拌过夜。所得混合物在真空下浓缩。向上述浓缩物中加入TBDPS-Cl(6.42g, 24.81mmol,2.00eq)、1H-咪唑(2.4g,35.25mmol,3.00eq)、N,N-二甲基甲酰胺(20mL)。所得溶液在室温搅拌5小时。随后通过加入20mL的水而淬灭反应。所得溶液以3×
30mL 的乙酸乙酯萃取，合并有机层。所得混合物以3×20mL的水和1×20mL的氯化钠溶液洗涤。将所得混合物以无水硫酸钠干燥。滤除固体。所得混合物在真空下浓缩。将残渣加载至硅胶柱，以乙酸乙酯/石油醚(1:2)洗脱。得到3.0g(50％)白色固体的2-[[(叔丁基二苯基硅基)氧]甲基]-5-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯甲酸。1H NMR：PHNW-1-2-4(300MHz, DMSO),δ
12.89(s,1H),7.90(s,1H),7.66-7.64(m,5H),7.51-7.41(m,6H),5.13(s,2H),4.20 (t,J＝
6.3Hz,2H),3.50(t,J＝6.3Hz,2H),3.25(s,3H),2.07-1.99(m,2H),1.08(s,9H)。

[0241] 将2-[[(叔丁基二苯基硅基)氧]甲基]-5-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯甲酸(5.0g,9.74mmol, 1.00eq)的二氯甲烷(50mL)溶液、N,N-二甲基甲酰胺(7mg,0.10mmol,0.01eq)、草酰氯(1.85 g,14.58mmol,1.50eq)置于250mL圆底烧瓶内。所得溶液在0℃搅拌1h。所得混合物在真空下浓缩。得到5.0g(粗产物)无色油状的2-[[(叔丁基diphenylsilyl)oxy]甲基]-5-氯-4-(3- 甲氧基丙氧基)苯甲酰氯。

[0242] 向250mL三颈圆底烧瓶内充入惰性气体氮气，并保持在氮气氛下，将LDA(12.3mL, 1.50eq,1.2mol/L)的四氢呋喃(50mL)溶液置于该烧瓶内。之后，在-70℃加入(2Z)-2-[(二甲基氨基)亚甲基]-3-氧代丁酸叔丁酯(2.5g,11.72mmol,1.20eq)的四氢呋喃(20mL)溶液。
在30分钟内，在-70℃加入2-[[(叔丁基二苯基硅基)氧]甲基]-5-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯甲酰氯(5.2g,9.78mmol,1.00eq)的四氢呋喃(30mL)溶液。向该混合物中加入AcOH(25mL)、盐酸叔丁基肼(2.43g,19.50mmol,2.00eq)。所得溶液在60℃搅拌过夜。所得混合物在真空下浓缩。将残渣加载至硅胶柱，以乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱。得到1.1g(15％)褐色油状的1-(叔丁基氨基)-6-(2-[[(叔丁基二苯基硅基)氧]甲基]-5-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酸叔丁酯。1H NMR：PHNW-1-2-6(300MHz,CDCl3)δ8.26(s,1H), 7.65-7.63(m,4H),7.49-7.37(m,7H),7.24(s,1H),6.50(s,1H),4.78(s,2H),4.14(t,J＝6.3Hz, 2H),3.62(t,J＝6.3Hz,2H),3.40(s,3H),2.17-2.09(m,2H),1.59(s,9H),
1.09(s,9H)。

[0243] 将1-(叔丁基氨基)-6-(2-[[(叔丁基二苯基硅基)氧]甲基]-5-氯-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酸叔丁酯(1.1g,1.50mmol,1.00eq)的四氢呋喃(10mL)溶液、 TBAF/THF(2.25mL,1mol/L,1.50eq)置于100mL圆底烧瓶内。所得溶液在室温搅拌2小时。所得混合物在真空下浓缩。将残渣加载至硅胶柱，以乙酸乙酯/石油醚(2:1)洗脱。得到510mg(69％)无色油状的1-(叔丁基氨基)-6-[5-氯-2-(羟基甲基)-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酸叔丁酯。1H NMR：PHNW-1-2-7(300MHz,DMSO),δ8.35(s, 1H),7.72(s,1H),7.54(s,1H),5.76(s,1H),5.39(t,J＝5.1Hz,1H),4.97(s,2H),
4.70(d,J＝ 5.4Hz,2H),4.23(t,J＝6.3Hz,2H),3.52(t,J＝6.3Hz,2H),3.27(s,3H),2.08-
1.99(m,2H), 1.55(m,9H),1.36(s,9H)。

[0244] 将1-(叔丁基氨基)-6-[5-氯-2-(羟基甲基)-4-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酸叔丁酯(510mg,1.03mmol,1.00eq)的二氯甲烷(5mL)溶液、TEA(156.4mg,1.55 mmol,1.50eq)、甲磺酰氯(129.5mg,1.13mmol,1.10eq)置于50mL圆底烧瓶内。将所得溶液在25℃搅拌过夜。所得混合物在真空下浓缩。残渣加载至硅胶柱，以乙酸乙酯/石油醚 (1:1)洗脱。得到210mg(43％)浅黄色固体的6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代 -2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]酞嗪-3-甲酸叔丁酯。1H NMR：PHNW-1-2-8(300MHz,DMSO)δ 8.14(s,1H),7.66(s,1H),7.29(s,1H),6.06(s,1H),5.28(s,2H),4.16(t,J＝
6.3Hz,2H), 3.53-3.47(m,2H),3.26(s,3H),2.05-1.97(m,2H),1.59(s,9H),1.32(s,9H)。

[0245] 将6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]酞嗪-3-甲酸叔丁酯(100mg,0.21mmol,1.00eq)的二氯甲烷(2.5mL)溶液和三氟乙酸(0.5mL)置于50mL 圆底烧瓶内。将所得溶液在室温搅拌过夜。所得混合物在真空下浓缩。粗产物通过制备型 HPLC(SHIMADZU(HPLC-10))在下述条件下纯化：色谱柱：X Bridge Prep C18 OBD Column19×150mm 5umC-0013；流动相：A为水(含有0.1％FA)，B为CH3CN；梯度： 14分钟内，80％B至95％B(流速：20mL/min)；检测器：254nm。得到20mg(23％)白色固体6-叔丁基-10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]酞嗪-3-甲酸。1H  NMR：PHNW-
1-2-0(300MHz,DMSO)δ11.78(br,1H),8.14(s,1H),7.69(s,1H),7.26(s,1H), 6.06(s,H),
5.26(s,2H),4.16(t,J＝6.3Hz,2H),3.51(t,J＝6.3Hz,2H),3.26(s,3H), 2.05-1.97(m,
2H),1.59(s,9H),1.55(s,1H)。

[0246] 实施例9：(S)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0247]

[0248] 将10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6-(丙-2-基)-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯(900mg,2.10mmol,1.00eq)的乙酸(20mL)溶液置于100mL圆底烧瓶内。之后分几部分加入F-TEDA-BF4(4.5g,12.71mmol,6.00eq)。所得溶液在50℃油浴中搅拌
72 小时。所得混合物在真空下浓缩。粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge)使用下述条件纯化：色谱柱：RP18 19×150mm,5um；流动相：A为0.05％氨水，B为ACN；检测器： UV 
254nm&220nm。得到70mg(7％)白色固体的1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯。LC-MS(M+1)：448；RT＝1.78分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 
2.6u XB-C18,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至
100％乙腈，3.5分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min。

[0249] 将1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯(70mg,0.16mmol,1.00eq)的甲醇(5mL)溶液置于50mL圆底烧瓶内。所得溶液通过手性制备型HPLC(SHIMADZU LC-20AD)使用下述条件纯化：色谱柱： CHIRALPAK AD-3；流动相A：乙醇；流动相B：甲醇；检测器：SPD-M20A，190nm至 500nm。得到28mg(38％)的白色固体(S)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2- 氧代-6,
7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯。LC-MS(M+1)：448；RT＝1.33分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u  XB-C18,
2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈，
3.5分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min。

[0250] 将(S)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a] 异喹啉-3-甲酸乙酯(28mg,0.07mmol,1.00eq)的甲醇/H2O(2/0.2mL)溶液置于50mL圆底烧瓶内。之后分几部分加入氢氧化钠(10mg,0.25mmol,4.00eq)。所得溶液在40℃油浴中搅拌2小时。所得混合物在真空下浓缩。所得溶液以3mL的水稀释。使用醋酸(100％)将该溶液的pH值调节为6至5。所得溶液以3×10mL的乙酸乙酯萃取，合并有机层。有机层以无水硫酸钠干燥，真空浓缩。得到18mg(66％)的白色固体(S)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。LC-MS(M+1)： 420；RT＝1.37分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50× 3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈，3.5分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min。H-NMR(300 MHz,CDCl3,ppm)：δ15.0(bs,1H),8.46(s,1H),7.65(s,1H),6.84(s,1H),4.26-4.23(m,2 H),
3.94-3.90(m,4H),3.63-3.61(m,2H),3.39-3.35(m,4H),3.11-3.06(m,1H),2.19-2.11(m, 
2H),1.86-1.82(m,1H),0.96(d,J＝8.4Hz,3H),0.86(d,J＝8.4Hz,3H)。

[0251] 实施例10：(R)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0252]

[0253] 将1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯(70mg,0.16mmol,1.00eq)的甲醇(5mL)溶液置于50mL圆底烧瓶内。所得溶液通过手性制备型HPLC(SHIMADZU LC-20AD)使用下述条件纯化：色谱柱： CHIRALPAK AD-3；流动相A：乙醇；流动相B：甲醇；检测器：SPD-M20A，190nm至 500nm。得到28mg(38％)白色固体的(R)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2- 氧代-6,
7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯。LC-MS(M+1):448；RT＝1.33分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u  XB-C18,
2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈，
3.5分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min。

[0254] 将(R)-1-氟-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a] 异喹啉-3-甲酸乙酯(28mg,0.07mmol,1.00eq)的甲醇/H2O(2/0.2mL)溶液置于50mL圆底烧瓶内。之后分几部分加入氢氧化钠(10mg,0.25mmol,4.00eq)。所得溶液在40℃油浴中搅拌2小时。所得混合物在真空下浓缩。所得溶液以3mL的水稀释。使用醋酸(100％)将该溶液的pH值调节为6至5。所得溶液以3×10mL的乙酸乙酯萃取，合并有机层。有机层以无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。得到18mg(66％)白色固体的(R)-1-氟-6-异丙基 -10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。
LC-MS (M+1)：420；RT＝1.37分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 
2020； 50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈，3.5分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min。H-NMR (300MHz,CDCl3,ppm)：δ15.0(bs,1H),8.46(s,1H),7.65(s,1H),6.84(s,1H),4.26-4.23 (m,2H),3.94-3.90(m,4H),3.63-3.61(m,2H),3.39-3.35(m,4H),3.11-3.06(m,1H), 2.19-
2.11(m,2H),1.86-1.82(m,1H),0.96(d,J＝8.4Hz,3H),0.86(d,J＝8.4Hz,3H)。

[0255] 实施例11：1-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0256]

[0257] 将10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6-(丙-2-基)-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]异喹啉 -3-甲酸乙酯(900mg,2.10mmol,1.00eq)的醋酸(20mL)溶液置于100mL圆底烧瓶内。之后分几部分加入F-TEDA-BF4(4.5g,12.71mmol,6.00eq)。所得溶液在50℃油浴中搅拌72 小时。所得混合物在真空下浓缩。粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge)使用下述条件纯化：色谱柱：RP18 19×150mm,5um；流动相A：0.05％氨水，流动相B：ACN；检测器：UV 
254nm&220nm。得到100mg(10％)白色固体的1-乙酰氧基-6-异丙基-10-甲氧基 -9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯。LC-MS(M+1)： 488；
RT＝1.67分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50× 3.0 Shim-pack XR-ODS,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈，3.5分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min.

[0258] 将1-乙酰氧基6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯(100mg,0.21mmol,1.00eq)的甲醇/H2O(2/0.2mL)溶液置于50 mL圆底烧瓶内。之后分几部分加入氢氧化钠(33mg,0.84mmol,4.00eq)。所得溶液在40℃油浴中搅拌2小时。所得混合物在真空下浓缩。所得溶液以3mL的水稀释。使用醋酸(100％) 将该溶液的pH值调节为6至5。所得溶液以3×10mL的乙酸乙酯萃取，合并有机层。
有机层使用无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。得到30mg(33％)白色固体的1-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。LC-MS [M+1]：420；RT＝1.66分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020； 50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈，3.5分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min。H-NMR (DMSO,ppm)：δ10.23(bs,1H),8.72(s,1H),8.80(s,1H),6.68(s,1H),4.37-4.35(m,
1H), 4.13-4.05(m,2H),3.74(s,3H),3.53-3.49(m,2H),3.19(s,3H),3.11-3.06(m,2H), 
2.02-1.98(m,2H),1.62-1.59(m,1H),0.88(d,J＝8.4Hz,3H),0.71(d,J＝8.4Hz,3H)。

[0259] 实施例12：(S)-10-氯-1-氟-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2,1-a]异喹啉-3-甲酸和(R)-10-氯-1-氟-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H- 吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0260]

[0261] 将5-溴-2-氯-苯酚(10.00g,48.20mmol,1.00eq)、1-溴-3-甲氧基-丙烷(14.75g,96.41 mmol,2.00eq)和K2CO3(19.99g,144.61mmol,3.00eq)在丙酮(100.00mL)中的混合物于 50℃搅拌15小时。过滤后，减压浓缩滤液。残渣通过以PE至PE:EA＝5:1洗脱的硅胶色谱纯化。获得无色油状的4-溴-1-氯-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(13.40g,47.93mmol,99.44％产率)，通过LC-MS确认产物并直接用于下一步。LC-MS：EW5403-239-P1Z0(M+H+＝278.9， M+2+H+＝280.9)。

[0262] 将4-溴-1-氯-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(5.00g,17.89mmol,1.00eq)、3-甲基丁-2-酮(3.08g, 35.77mmol,3.80mL,2.00eq)、Pd(dba)2(1.03g,1.79mmol,0.10eq)、Xantphos(2.07g,3.58 mmol,0.20eq)和t-BuONa(5.16g,53.67mmol,3.00eq)在二氧六环(100.00mL)中的混合物于100℃搅拌3小时。过滤后，减压浓缩滤液。获得褐色油状的粗产物1-[4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-3-甲基-丁-2-酮(7.10g,粗产物)，粗产物通过LC-MS确认并直接用于下一步。LC-MS：EW5403-247-P1A2(M+H+＝285.2)。

[0263] 将粗产物1-[4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-3-甲基-丁-2-酮(7.10g,24.93mmol,1.00 eq)、CH3COONH4(19.22g,249.32mmol,10.00eq)和NaBH3CN(15.67g,
249.32mmol,10.00 eq)在MeOH(300.00mL)中的混合物于15℃搅拌56小时。以DCM(100mL×
3)萃取该混合物，合并的有机层在减压下浓缩。粗产物通过以TFA作为添加剂的反相柱纯化，给出黄色油状的1-[4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-3-甲基丁-2-胺(3.00g,
10.50mmol,42.10％产率)，产物通过LC-MS(EW5403-249-P1A0)确认。LC-MS：EW5403-249-P1A0(M+H+＝286.1)。

[0264] 将1-[4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]-3-甲基丁-2-胺(3.00g,10.50mmol,1.00eq)和甲酸 (3.87g,84.00mmol,3.17mL,8.00eq)在二氧六环(100.00mL)中的混合物于
100℃搅拌48 小时。移除溶剂后，残渣通过以PE至EA洗脱的硅胶色谱纯化，得到浅黄色固体的N-[1-[[4- 氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基]甲基]-2-甲基-丙基]甲酰胺(2.10g,
6.69mmol,63.73％产率)，产物通过LC-MS确认。LC-MS：EW5403-257-P1A2(M+H+＝314.1)。

[0265] 将N-(1-(4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)背景)-3-甲基丁-2-基)甲酰胺(2.00g,6.37mmol,1.00 eq)和POCl3(2.93g,19.11mmol,1.78mL,3.00eq)在MeCN(50.00mL)中的混合物于60℃搅拌1小时。移除溶剂后，粗产物通过以PE至PE:EA＝1:1洗脱的硅胶色谱纯化，给出黑色油状的7-氯-3-异丙基-6-(3-甲氧基丙氧基)-3,4-二氢异喹啉(1.3g)，产物通过LC-MS确认。 LC-MS：EW5403-263-P1A3(M+H+＝296.2)。

[0266] 将7-氯-3-异丙基-6-(3-甲氧基丙氧基)-3,4-二氢异喹啉(510.00mg,1.72mmol,1.00eq) 和(2E)-2-(甲氧基亚甲基)-3-氧代-丁酸乙酯(1.48g,8.62mmol,5.00eq)在EtOH(10.00mL) 中的混合物于100℃搅拌4天。移除溶剂后，残渣通过以NH4OH作为添加剂的反相柱纯化，给出黄色油状的10-氯-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-2,6,7,11b-四氢-
1H-吡啶并 [2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯(140.00mg,279.40μmol,16.24％产率,87％纯度)，产物通过 LC-MS确认。LC-MS：EW5403-267-P1A1(M+H+＝436.0)。

[0267] 向10-氯-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-2,6,7,11b-四氢-1H-吡啶并[2,1-a]异喹啉 -3-甲酸乙酯(150.00mg,344.08μmol,1.00eq)的DME(20.00mL)溶液中加入2,3,5,6-四氯 -1,4-苯醌(169.21mg,688.17μmol,2.00eq)。将该混合物于70℃搅拌5小时。
反应混合物在真空中浓缩以给出残渣。残渣通过快速柱层析(DCM:MeOH＝30:1)纯化。获得褐色油状的化合物10-氯-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3- 甲酸乙酯(50.24mg,115.78μmol,33.65％产率)，并通过LC-MS确认。LC-MS： EW6108-43-P1A3(M+H+＝434.1)。

[0268] 将10-氯-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6-(丙-2-基)-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯(1.5g,3.46mmol,1.00eq)的乙醇(5mL)溶液置于100mL圆底烧瓶内。粗产物通过手性制备HPLC使用下述条件纯化：色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IC 20×250mm,5um；流动相A：正己烷/DCM＝5/1，流动相B：乙醇，A/B＝50/50；检测器：220nm。得到580 mg(39％)白色固体的(S)-10-氯-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯，以及580mg(39％)白色固体的(R)-10-氯-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯。

[0269] 将(S)-10-氯-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3- 甲酸乙酯(300mg,0.69mmol,1.00eq)的甲醇/H2O(3/1mL)溶液、氢氧化钠(111mg,2.77 mmol,4.00eq)置于40mL圆底烧瓶内。所得溶液在室温搅拌过夜。所得溶液以
40mL的 H2O稀释。使用AcOH将该溶液的pH值调节为6。过滤收集固体。得到200mg(71％)白色固体的(S)-10-氯-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。LC-MS-PH-PHNW-1-12-S-0：(ES,m/z)：M+1＝406，RT＝1.46分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,2.6 microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度，从5％乙腈至100％乙腈，3.5分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min。H-NMR-PH-PHNW-1-12-S-0(CDCl3, 300ppm)：8.48(s,
1H),7.75(s,1H),7.04(s,1H),6.83(s,1H),4.27-4.20(m,2H),3.90-3.88(m, 1H),3.63-
3.56(m,2H),3.48(s,4H),3.18-3.09(m,1H),2.18-2.10(m,2H),1.93-1.91(m,1H), 0.96-
0.80(m,6H)。

[0270] 将(R)-10-氯-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3- 甲酸乙酯(300mg,0.69mmol,1.00eq)的甲醇/H2O(3/1mL)溶液、氢氧化钠(111mg,2.77 mmol,4.00eq)置于40mL圆底烧瓶内。所得溶液在室温搅拌1夜。所得溶液以
40mL的 H2O稀释。使用AcOH将该溶液的pH值调节为6。得到200mg(71％)白色固体的(R)-10- 氯-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。
(ES, m/z)：M+1＝406，RT＝1.45分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度。H-NMR(CDCl3,300ppm)：8.48(s,1H),7.75(s,1H),7.04(s,1H),6.83(s,
1H), 4.27-4.20(m,2H),3.90-3.88(m,1H),3.63-3.56(m,2H),3.48(s,4H),3.18-3.09(m,
1H), 2.18-2.10(m,2H),1.93-1.91(m,1H),0.96-0.80(m,6H)。

[0271] 将(S)-10-氯-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3- 甲酸(385mg,0.95mmol,1.00eq)的CH3CN/AcOH(20/2mL)溶液、F-TEDA-BF4(1g,2.83 mmol,3.00eq)置于40mL圆底烧瓶内。所得溶液在30℃搅拌48小时。随后通过加入
100 mL的水淬灭反应。过滤收集固体。得到400mg(粗产物)白色固体的(S)-10-氯-1-氟-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。

[0272] 将(S)-10-氯-1-氟-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(400mg,0.94mmol,1.00eq)的甲醇/DCM(4/2mL)溶液置于25mL三颈圆底烧瓶内。之后在搅拌下滴加TMS-CHN2(2M)(2.8mL,6.00eq)。所得溶液在室温搅拌5小时。随后加入5mL的水淬灭反应。所得溶液以3×20mL的二氯甲烷萃取。合并有机层，以无水硫酸钠干燥，并真空浓缩。粗产物通过制备型HPLC(Prep-HPLC-007)使用下述条件纯化：色谱柱：SunFire Prep C18 OBD柱,19×150mm 5um 10nm；流动相：水0.1％FA) 和ACN(7分钟内，ACN从48.0％升至53.0％，在95.0％保持1分钟，1分钟内降至48.0％，在48.0％保持1分钟)；检测器：UV 220nm。得到125mg(两步总产率为30％)白色固体的 (S)-10-氯-1-氟-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3- 甲酸甲酯。LC-MS(ES,m/z)：M+1＝438，RT＝1.03分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18) 进行。
Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％ TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈，2分钟；柱箱温度：40℃；流速：
1.5mL/min。

[0273] 将(S)-10-氯-1-氟-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸甲酯(35mg,0.08mmol,1.00eq)的甲醇/H2O(1/0.5mL)溶液、氢氧化钠(12.8mg, 0.32mmol,4.00eq)置于8mL圆底烧瓶内。所得溶液在室温搅拌过夜。使用AcOH(1M)将该溶液的pH值调节为6。过滤收集固体。得到23.3mg(68.8％)白色固体的(S)-10-氯-1-氟 -6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。LC-MS- (ES,m/z)：M+1＝424，RT＝2.58分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈，3.5分钟；柱箱温度：40℃；
流速：1.5mL/min。 H-NMR(300MHz,CDCl3,ppm)：8.48(s,1H),8.15(s,1H),6.80(s,1H),
4.28-4.21(m,2H), 3.91-3.84(m,1H),3.75-3.62(m,2H),3.48-3.37(m,4H),3.19-3.09(m,
1H),2.15-2.01(m,2H), 1.51-1.35(m,2H),0.94-0.75(m,6H)。

[0274] 将(R)-10-氯-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3- 甲酸(385mg,0.95mmol,1.00eq)的CH3CN/AcOH(20/2mL)溶液、F-TEDA-BF4(1g,2.83 mmol,3.00eq)置于40mL圆底烧瓶内。所得溶液在30℃搅拌48小时。随后加入
100mL 的水淬灭反应。过滤收集固体。得到400mg(粗产物)白色固体的(R)-10-氯-1-氟-6-异丙基 -9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。

[0275] 将(R)-10-氯-1-氟-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(400mg,0.94mmol,1.00eq)的甲醇/DCM(4/2mL)溶液置于25mL三颈圆底烧瓶内。之后在搅拌下滴加TMS-CHN2(2M)(2.8mL,6.00eq)。所得溶液在室温搅拌5小时。随后加入5mL的水淬灭反应。所得溶液以3×20mL的二氯甲烷萃取。合并有机层，以无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。粗产物通过制备型HPLC(Prep-HPLC-007)使用下述条件纯化：色谱柱：SunFire Prep C18 OBD柱,19×150mm 5um 10nm；流动相：水(0.1％FA) 和ACN(7分钟内，ACN从48.0％增加至53.0％，在95.0％保持1分钟，1分钟内降至48.0％，在48.0％保持1分钟)；检测器：UV 220nm。得到125mg(两步总产率为30％)白色固体的 (R)-10-氯-1-氟-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3- 甲酸甲酯。LC-MS(ES,m/z)：M+1＝438，RT＝1.03分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18) 进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％ TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈in 2分钟；柱箱温度：40℃；流速：
1.5mL/min.

[0276] 将(R)-10-氯-1-氟-6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸甲酯(35mg,0.08mmol,1.00eq)的甲醇/H2O(1/0.5mL)溶液、氢氧化钠(12.8mg, 0.32mmol,4.00eq)置于8mL圆底烧瓶内。所得溶液在室温搅拌过夜。使用AcOH(1M)将该溶液的pH值调节为6。过滤收集固体。得到23.3mg(68.8％)白色固体的(R)-10-氯-1-氟 -6-异丙基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。LC-MS- (ES,m/z)：M+1＝424，RT＝2.58分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈in 3.5分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min。H-NMR(300MHz,CDCl3,ppm)：8.48(s,1H),8.15(s,1H),6.80(s,1H), 
4.28-4.21(m,2H),3.91-3.84(m,1H),3.75-3.62(m,2H),3.48-3.37(m,4H),3.19-3.09(m,
1H), 2.15-2.01(m,2H),1.51-1.35(m,2H),0.94-0.75(m,6H)。

[0277] 实施例13：(S)-6-叔丁基-1-氟-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸和(R)-6-叔丁基-1-氟-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7- 二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0278]

[0279] 在50mL圆底烧瓶中,放入甲醇(25mL)，硼酸钠(1.9g,51.60mmol,1.00eq)。將所得溶液於室溫攪拌14小时。所得混合物在真空下浓缩。将所得混合物以2x15 mL醚冲洗。這得到5g白色固体的NaB(OCH3)4(61％)。H-NMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ.3.34(s,12 H).[0280] 向50mL圆底烧瓶内充入惰性气体氮气，并将其维持在氮气氛下，将6-叔丁基-10-氯 -1-氟-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸甲酯(400mg,0.89 mmol,1.00eq)、NaB(OCH3)4(420mg,2.66mmol,3.00eq)、Pd2(dba)3(81.1mg,0.09mmol, 0.10eq)、t-Buxphos(75mg,0.18mmol,0.20eq)、N,N-二甲基甲酰胺(10mL)置于该烧瓶内。所得溶液在80℃油浴中搅拌1小时。所得溶液以50mL的H2O稀释。所得溶液以3×
15 mL的乙酸乙酯萃取，合并有机层。所得混合物以1×10mL的水和1×10mL的盐水洗涤。所得混合物以Na2SO4干燥并过滤，在真空下浓缩滤液。残渣加载至硅胶柱，以二氯甲烷/ 甲醇(10:1)洗脱。得到180mg(45％)浅褐色固体的6-叔丁基-1-氟-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸甲酯。LC-MS：(M+1)＝448；RT＝ 
1.35分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 
2.6u XB-C18,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至
100％乙腈in 2.6分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min。

[0281] 6-叔丁基-1-氟-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸甲酯(100mg)通过手性制备HPLC(Chiral-A(IC)001IC00CE-LC020)使用下述条件纯化：色谱柱：Chiralpak IC4.6×250mm,5um；流动相：甲醇:EtOH＝1:1；检测器：254nm。得到40mg(40％)白色固体的(S)-6-叔丁基-1-氟-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7- 二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸甲酯，以及50mg(50％)白色固体的(R)-6-叔丁基-1- 氟-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸甲酯。

[0282] 将(S)-6-叔丁基-1-氟-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a] 异喹啉-3-甲酸甲酯(40mg,0.09mmol,1.00eq)、甲醇(1mL,2.00eq)、水(0.2mL,3.00eq)、氢氧化钠(14mg,0.35mmol,4.00eq)置于8mL小瓶内。所得溶液在室温搅拌14小时。所得混合物在真空下浓缩。使用醋酸将该溶液的pH值调节为6。过滤收集固体。得到
16.4mg (42％)白色固体的(S)-6-叔丁基-1-氟-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-
6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。LC-MS[M+1]：434；RT＝1.41分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,
2.6microm；洗脱剂 A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈，
3.0分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min H-NMR-PH-PHNW-1-11-S-0(300MHz,CDCl3,ppm)：δ8.43 (s,1H),7.60(s,1H),6.79(s,1H),4.30–4.12(m,2H),4.11–3.98(m,1H),3.91(s,3H), 3.67–3.52(m,2H),3.50–3.30(m,4H),3.17(d,J＝16.8Hz,1H),2.22–2.10(m,2H),
081 (s,9H)。

[0283] 将(R)-6-叔丁基-1-氟-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a] 异喹啉-3-甲酸甲酯(50mg,0.11mmol,1.00eq)、甲醇(1mL)、水(0.2mL)、氢氧化钠(17.8mg, 0.45mmol,4.00eq)置于8mL小瓶内。所得溶液在室温搅拌14小时。所得混合物在真空下浓缩。使用醋酸将该溶液的pH值调节为6。过滤收集固体。得到22.2mg(46％)白色固体的(R)-6-叔丁基-1-氟-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。LC-MS(M+1)：434；RT＝2.26分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。 Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％ TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈，5.0分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min.H-NMR:(300MHz,CDCl3,ppm):δ8.43(s,1H),7.60(s,1H),6.79(s,
1H), 4.30–4.12(m,2H),4.11–3.98(m,1H),3.91(s,3H),3.67–3.52(m,2H),3.50–3.30(m,4 H),3.17(d,J＝17.1Hz,1H),2.22–2.10(m,2H),081(s,9H)。

[0284] 实施例14：(S)-6-叔丁基-1-氟-10-(甲氧基-d3)-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢 -2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0285]

[0286] 将硼氢化钠(1.15g,31.23mmol,1.00eq)、CD3OD(15mL)置于50mL圆底烧瓶内。所得溶液在室温搅拌14小时。所得混合物在真空下浓缩。所得溶液以20mL的乙醚稀释。过滤收集固体。得到3.5g(66％)白色固体的NaB(OCD3)4。B-NMR(300MHz,CD3OD,ppm)：δ.2.99(s,1B)。

[0287] 向50mL圆底烧瓶充入惰性气体氮气，并将其维持在氮气氛下，将(S)-6-叔丁基-10- 氯-1-氟-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸甲酯(100mg, 0.22mmol,1.00eq)、NaB(OCD3)4(150.7mg,0.89mmol,4.00eq)、DMA(5mL)、Pd2(dba)3 (20.2mg,0.02mmol,0.10eq)、t-Buxphos(18.8mg,0.04mmol,0.20eq)置于该烧瓶内。所得溶液在110℃油浴中搅拌5小时。将该反应混合物冷却至室温。所得溶液以50mL的H2O 稀释。所得溶液以3×15mL的乙酸乙酯萃取，合并有机层。所得混合物以1×15mL的水和
1×15mL的盐水洗涤。合并有机相，以Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残渣加载至硅胶柱，以二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱以给出粗产物，粗产物通过制备型HPLC(Waters 2767)使用下述条件纯化：色谱柱：SunFire Prep C18 OBD,19×150mm,5μm；流动相A：水/0.05％ TFA，流动相B：
ACN；(6分钟内从34％增加至51％，保持6分钟)；流速：20ml/min；检测器：220nm。得到20mg(20％)浅黄色固体的(S)-6-叔丁基-1-氟-10-(甲氧基-d3)-9-(3- 甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸三氘代甲酯。 LC-MS-PH-PHNW-1-14-S-2(ES,m/z)：LC-MS(M+1)：454；RT＝1.38分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。
Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,2.6 microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈in 2.6分钟；柱箱温度：40℃；流速：
1.5mL/min。

[0288] 将(S)-6-叔丁基-1-氟-10-(甲氧基-d3)-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2,1-a]异喹啉-3-甲酸三氘代甲酯(20mg,0.04mmol,1.00eq)、甲醇(1mL)、水(0.2mL)、氢氧化钠(7mg,0.17mmol,4.00eq)置于8mL圆底烧瓶内。所得溶液在室温搅拌14小时。所得混合物在真空下浓缩。使用醋酸将该溶液的pH值调节为6。过滤收集固体。得到6.4mg (33％)白色固体的(S)-6-叔丁基-1-氟-10-(甲氧基-d3)-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢 -2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。LC-MS(M+1)：437；RT＝3.01分钟.保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XB-C18,
2.6microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈，
7.0分钟；柱箱温度：40℃；流速：1.5mL/min。H-NMR(300MHz,CDCl3,ppm)：δ8.3(s,1H),7.60 (s,1H),6.79(s,1H),4.28–4.11(m,2H),4.10–3.96(m,1H),3.65–3.50(m,2H),3.50– 3.28(m,4H),3.17(d,J＝13.5Hz,1H),2.20–2.10(m,2H),081(s,9H)。

[0289] 实施例15：(S)-1-氟-6-异丙基-10-(甲氧基-d3)-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢 -2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0290]

[0291] 向25mL圆底烧瓶充入惰性气体氮气，并将其维持在氮气氛下，将(6S)-10-氯-1-氟 -9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6-(丙-2-基)-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸甲酯(100 mg,0.23mmol,1.00eq)、DMF(3mL)、Pd2(dba)3(20mg,0.02mmol,0.10eq)、t-Buxphos(19 mg,0.04mmol,0.20eq)、NaB(OCD3)4(194mg,1.14mmol,5.00eq)置于该烧瓶内。所得溶液在100℃油浴中搅拌1小时。将该反应混合物冷却至室温。所得溶液以15mL的H2O稀释。所得溶液以3×10mL的乙酸乙酯萃取，合并有机层。所得混合物以1×10mL的水和1×10mL的盐水洗涤。餐咋通过制备型TLC使用二氯甲烷/甲醇(10:1)纯化量测。得到 (6S)-1-氟-10-(2H3)甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6-(丙-2-基)-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a] 异喹啉-3-甲酸(2H3)甲酯与(6S)-1,10-双(2H3)甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6-(丙-2- 基)-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(2H3)甲酯的褐色固体混合物(25mg)。LC-MS-PH-PHNW-1-15-S-1(ES,m/z)：LC-MS(M+1)＝440；RT＝2.26分钟。 LC-MS-PH-PHNW-1-15-S-1BP(ES,m/z)：LC-MS(M+1)＝455；RT＝2.24分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。
Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XR-ODS.6 microm；洗脱剂A：水(0.05％TFA)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈in 5.0分钟；柱箱温度：40℃；流速：
1.5mL/min。

[0292] 将(6S)-1-氟-10-(2H3)甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6-(丙-2-基)-2H,6H,7H-吡啶并 [2,1-a]异喹啉-3-甲酸(2H3)甲酯与(6S)-1,10-双(2H3)甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代 -6-(丙-2-基)-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(2H3)甲酯的混合物(25mg)、氢氧化钠 (11mg)、MeOH(1mL)和谁(0.2mL)置于8mL圆底烧瓶内。所得溶液在室温搅拌3小时。使用醋酸将该溶液的pH值调节为6。所得混合物在真空下浓缩。所得粗产物通过制备型 HPLC(Prep-HPLC-013)使用下述条件纯化：色谱柱：SunFire Prep C18 OBD柱,19×150mm 5um 10nm；流动相：水(0.05％TFA)和ACN(6分钟内，ACN从41.0％增加至46.0％)；
检测器：UV 220nm。得到4.3mg的褐色固体的(6S)-1-氟-10-(2H3)甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6-(丙-2-基)-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。LC-MS-PH-PHNW-1-
15-S-0 (ES,m/z)：LC-MS(M+1)＝423；RT＝0.97分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。 Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XR-ODS.6microm；洗脱剂A：水(0.05％ ammonia water)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈in 3.5分钟；柱箱温度：
40℃；流速：1.0mL/min。H-NMR：(300MHz,CD3OD,ppm):δ8.70(s,1H),7.68(s, 1H),7.09(s,
1H),4.39–4.10(m,3H),3.70–3.60(m,2H),3.64(s,3H),3.29–3.21(m,1H), 2.18–2.08(m,
2H),1.80–1.60(m,1H),1.05–0.90(m,3H),0.90–0.78(m,3H)。

[0293] 实施例16：(S)-6-异丙基-1,10-双(甲氧基-d3)-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H- 吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸

[0294]

[0295] 将(6S)-1-氟-10-(2H3)甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6-(丙-2-基)-2H,6H,7H-吡啶并 [2,1-a]异喹啉-3-甲酸(2H3)甲酯与(6S)-1,10-双(2H3)甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代 -6-(丙-2-基)-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸(2H3)甲酯的混合物(25mg)、氢氧化钠 (11mg,0.28mmol)、MeOH(1mL)和水(0.2mL)置于8mL圆底烧瓶内。所得溶液在室温搅拌3小时。使用醋酸将该溶液的pH值调节为6。所得混合物在真空下浓缩。所得粗产物通过制备型HPLC(Prep-HPLC-013)使用下述条件纯化：色谱柱：SunFire Prep C18 OBD柱, 19×150mm 5um 10nm；流动相：水(0.05％TFA)和ACN(6分钟内，ACN从41.0％增加至
46.0％)；检测器：UV 220nm。得到褐色固体的(6S)-1,10-双(2H3)甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6-(丙-2-基)-2H,6H,7H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸。 LC-MS-PH-PHNW-1-
15-S-0(ES,m/z)：LC-MS(M+1)＝438；RT＝1.01分钟。保留时间的测量使用反相柱(C18)进行。Shimadzu LCMS 2020；50×3.0 Kinetex 2.6u XR-ODS.6 microm；洗脱剂A：水(0.05％ammonia water)；洗脱剂B：乙腈；线性梯度：从5％乙腈至100％乙腈in 3.5分钟；柱箱温度：
40℃；流速：1.0mL/min。H-NMR(300MHz,CD3OD, ppm)：δ8.63(s,1H),8.10(s,1H),7.04(s,
1H),4.30–4.12(m,2H),3.70–3.60(m,2H),3.38(s, 3H),3.29–3.11(m,1H),2.18–2.05(m,
2H),1.80–1.60(m,1H),1.01–0.90(m,3H),0.90– 0.78(m,3H)。

[0296] 实施例A：通过基本上等同、类似于或近似于反应式A至E、反应式I至V、和上述实施例中揭露的方法制备下述化合物。

[0297]

[0298] 实施例B：通过基本上等同、类似于或近似于反应式A至E、反应式I至V、和上述实施例中揭露的方法制备下述化合物。

[0299]

[0300] 实施例C：通过基本上等同、类似于或近似于反应式A至E、反应式I至V、和上述实施例中揭露的方法制备下述化合物。

[0301]

[0302] 实施例D：通过基本上等同、类似于或近似于反应式A至E、反应式I至V、和上述实施例中揭露的方法制备下述化合物。

[0303]

[0304] 实施例E：通过基本上等同、类似于或近似于反应式A至E、反应式I至V、和上述实施例中揭露的方法制备下述化合物。

[0305]

[0306]

[0307] 生物学实施例1：HBsAg分析

[0308] 将HepG2.2.15细胞(Acs et al.Proc Natl Acad Sci US A,84,(1987),4641-4)，一种构成性的HBV表达细胞系，在DMEM+Glutamax-I培养基(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)中培养，该培养基以10％胎牛血清(Invitrogen)和G418(Invitrogen)补充，最终浓度为200mg/L，并保持在37℃的5％CO2下。将HepG2.2.15细胞以1.5×104细胞/孔一式两份地种植在白色 96孔板中。使用该等化合物在DMSO中的三倍逐级稀释溶液处理该细胞。所有孔内的最终DMSO浓度为1％，并使用DMSO作为无药物对照。

[0309] 使用HBsAg化学发光免疫分析(CLIA)试剂盒(郑州安图生物有限公司(Autobio  Diagnostics Co.,Zhengzhou,China)，产品编号：CL03 l 0-2)半定量地测量所分泌的HBV抗原的水平。将50μL/孔培养物上清液用于该检测，并使用HBsAg化学发光免疫分析(CLIA) 试剂盒(郑州安图生物有限公司(Autobio Diagnostics Co.,Zhengzhou,China)，产品编号：CL0310-2)纯化HBsAg。将50μL上清液转移至CLIA分析板，将50μL酶共轭试剂加入各孔内。密封该板，并在室温轻柔搅动1小时。丢弃该上清液与酶的混合物，并以300μL 的PBS将各孔洗涤6次。通过将该CLIA板右侧象限置于吸水纸上而移除残留液体。将 25μL的底物A和B加入各孔中。孵化10分钟后，使用光度计(Mithras LB 940多功能酶标仪(Multimode Microplate Reader))测量发光。使用E-WorkBook Suite(ID Business  Solutions Ltd.,Guildford,UK)生成剂量反应曲线并推测IC50值。该IC50定义为化合物的浓度(或条件培养基log稀释)，在该浓度下，HBsAg分泌比在无药物对照情况下降低50％。如本文中所述，测试本发明的化合物抑制HBsAg的能力。

[0310] 生物学实施例2：HBV DNA分析

[0311] 该分析采用实时qPCR(TaqMan)直接测量细胞外的HBV DNA拷贝数。将HepG2.2.15 细胞置于96孔微量滴定板中。仅使用内部的孔来降低细胞培养过程中观察到的“边缘效应”，外部的孔完全填充培养基以帮助最小化样品蒸发。次日，洗涤该HepG2.2.15细胞，并将培养基替换为含有各种浓度的化合物的完全培养基，进行三份平行实验。使用3TC 作为阳性对照，同时将单独的培养基加入细胞中作为阴性对照(病毒对照，VC)。三天后，将培养基替换为含有适当稀释的药物的新鲜培养基。最初给药该测试化合物的六天后，收集细胞培养上清液，以链霉蛋白酶处理，随后用于实时qPCR/TaqMan分析以测定HBV  DNA拷贝数。使用TDF(富马酸替诺福韦酯(tenofovir disoproxil fumarate))作为阳性对照参照物。从HBV DNA水平(IC50)的下降计算抗病毒活性。如下表中所示，结果显示，实施例2A是高潜能的抗HBV剂。

[0312]

[0313] 生物学实施例3：化合物细胞毒性分析

[0314] 使用DMSO以3倍、11点方案稀释化合物：测试化合物的最高浓度为30mM。将0.25 μL的使用Echo 550滴定测量的化合物加入384孔细胞毒性分析板中。将50μL的 HepG2.2.15细胞加入各孔中(每孔4,000个细胞)。加入细胞后，最终的最高浓度为150μM。对于溶剂对照孔(0％效果，ZPE)，加入0.25μL的DMSO(最终的DMSO浓度为0.5％)。在 37℃、5％CO2孵化器中孵化4天。进行4天的孵化后，通过Promega CellTiter-Glo试剂测量化合物细胞毒性，简单地说：

[0315] ·将Celltiter-Glo试剂平衡至室温

[0316] ·将该细胞毒性板在室温平衡20分钟

[0317] ·将50μl的CellTiter-Glo试剂加入各孔中

[0318] ·在振荡器上振荡2分钟

[0319] ·于室温在黑暗中孵化10分钟

[0320] ·在Envision读板器上读板(0.1秒积分时间/孔)

[0321] 使用一定范围剂量的测试化合物进行的这些分析，令测定本发明化合物的细胞IC50成为可能。如下表中所示，结果显示，实施例2A具备较低的细胞毒性。

[0322]

[0323]

[0324] 生物学实施例4：hERG分析(自动膜片箝)

[0325] 人类ether-a-go-go相关基因(hERG)编码心脏中的向内整流电压门控钾通道(IKr)，该通道牵涉入心脏复极化中。对hERG电流的抑制造成QT间隔延长，导致可能致命的施行快速性心律失常，即所谓的扭转型室性心动过速。大量药物已经由于这些心脏中毒效果而从末期临床试验中撤回，因此，在药物发现的早期鉴定抑制剂非常重要。

[0326] 通过在药物潜伏期之前和之后测量由两秒脉冲至+20mV后的一秒脉冲至-40mV而引起的尾电流振幅，测量抑制的程度(％)(不同电流被归一化至对照，并乘以100而获得抑制的百分比)。将浓度(log)响应曲线拟合至logistic方程(假设在非常高的测试化合物浓度下完全阻断该电流的三个参数)，以生成对10％抑制浓度(IC10)的预估。从连续浓度的电流振幅的下降百分比构建每一化合物的浓度-响应关系。如下表中所示，结果显示，实施例2A 具有较低的心脏毒性。

[0327]

[0328] 生物学实施例5：大鼠PK研究

[0329] 经由静脉给药和口服给药评估化合物在雌性Sprague-Dawley大鼠体内的药代动力学。静脉给药通过颈静脉慢速推注进行，而口服给药通过强饲法进行。IV给药的配方是水中的20％DMSO和60％PEG 400，而PO配方(悬浮体)是水中的1％MC、0.4％Kolliphor EL。 IV方式的PK时间点是给药后的5分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、 6小时、8小时、12小时、24小时；而PO方式则是给药后的15分钟、30分钟、1 小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时。在每个时间点将采集大约0.2mL的血液。将每一样品的血液转移至含有EDTA-K2的微量离心管内，通过在4℃以4000g在离心机内离心5分钟而在15分钟内收集血浆。将血浆样品存储在聚丙烯管中。分析之前，将该样品在-75±15℃存储于冰箱中。使用LC-MS/MS方法分析血浆样品中化合物的浓度。使用WinNonlin(PhoenixTM,6.1版)或其它类似的软件进行药代动力学计算。只要可能，就从该血浆浓度VS时间数据计算下述药代动力学参数：IV给药：C0、CL、 Vd、T1/2、AUCinf、AUClast、MRT、用于回归分析的点数；PO给药：Cmax、Tmax、T1/2、 AUCinf、AUClast、F％、用于回归分析的点数。使用描述统计学如均值、标准偏差来揭示该药代动力学数据。其它药代动力学或统计分析可由科研人员灵活实施，并标注在数据整合中。

[0330] 如下表中所示，口服给药20mg/kg的结果显示，实施例2A的口服PK情况优于 WO2015113990中报导的化合物203。

[0331]

[0332] 如下表中所示，口服10mg/kg的结果显示，实施例14的氘代类似物具有比实施例13 好得多的口服PK情况。PK改善的原因可能是：氘-碳键比氢-碳键更强，因此，该同位素将帮助该化合物更好地抵抗药物代谢酶如细胞色素P450。

[0333]

[0334] 本申请还包括以下项目。

[0335] 1.式(I)的化合物或其N-氧化物，或所述式(I)的化合物或其N-氧化物的药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体：

[0336]

[0337] 式中，

[0338] R7是卤素、低级烷基、CF3、CN、硝基、OH、ORa、NH2；

[0339] Z1不存在，或是O、N(Ra)、或C(RbRc)；

[0340] X是C(R0)或N，其中R0是H、D、或CF3；

[0341] Z2和Z3各自独立为不存在、O、(CH2)pO、O(CH2)pO、N(H)、(CH2)p、S、C(O)、 SO2、OC(O)、C(O)O、OSO2、S(O)2O、C(O)S、SC(O)、C(O)C(O)、C(O)N(H)、N(H)C(O)、 S(O)2N(H)、N(H)S(O)2、OC(O)O、OC(O)S、OC(O)N(H)、N(H)C(O)O、N(H)C(O)S、 N(H)C(O)N(H)、(CH2)pN(H)(CH2)q、(CH2)pO(CH2)q、(CH2)pN(H)C(O)(CH2)q、 (CH2)pC(O)N(H)(CH2)q、OC(O)N(H)(CH2)p+1N(H)(CH2)q、二价烯基、或二价炔基；

[0342] R1、R2、R3、R4、R5、及R6各自独立为H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基、卤素、硝基、氧代、氰基、-(CH2)pRa、 -ORa、-SRa、-NH(CH2)pRa、-C(O)Ra、-S(O)Ra、-SO2Ra、-C(O)ORa、-OC(O)Ra、-NRbRc、 -P(O)RbRc、-C(O)N(Rb)Rc、-N(Rb)C(O)Rc、-SO2N(Rb)Rc、或-N(Rb)SO2Rc，其中所述烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基任选经一个或多个Rd取代；

[0343] p和q各自独立为0、1、2、3、4、5、6、7、或8；

[0344] Ra、Rb、Rc和Rd独立为H、D、烷基、烯基、炔基、卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、C(O)NHOH、烷氧基、烷氧基烷基、卤代烷基、羟基烷基、氨基烷基、烷基羰基、烷氧基羰基、烷基羰基氨基、烷基氨基、氧代、卤素-烷基氨基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、或杂芳基；

[0345] R4和R5与它们所附接的原子一起形成任选经取代的环烷基或杂环烷基；以及[0346] R1和R6与它们所附接的原子一起形成任选经取代的环烷基或杂环烷基。

[0347] 2.根据项目1所述的化合物或其N-氧化物，或其药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体，其中，所述化合物是由式(II)表示：

[0348]

[0349] 式中，

[0350] R1是H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、或杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基任选经一个或多个Rd取代。

[0351] 3.根据项目2所述的化合物或其N-氧化物，或其药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体，其中：

[0352] R0是H或D；

[0353] R1是烷基、环烷基、芳基、或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、芳基、或杂芳基任选经一个或多个Rd取代；

[0354] Z2不存在，或是O；

[0355] R4是H、卤素、任选经一个或多个Rd取代的烷基；

[0356] Z3不存在，或是O或O(CH2)pO；

[0357] R5是H、任选经一个或多个Rd取代的烷基；以及

[0358] R7是卤素。

[0359] 4.根据项目3所述的化合物或其N-氧化物，或其药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体，其中：

[0360] R1是烷基或环烷基，其中所述烷基或环烷基任选经一个或多个Rd取代；

[0361] R4是H、卤素、任选经一个或多个D取代的烷基；

[0362] R5是H、任选经一个或多个D取代的烷基；以及

[0363] R7是F。

[0364] 5.根据项目1所述的化合物或其N-氧化物，或其药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体，其中，所述化合物是由式(III)表示：

[0365]

[0366] 式中，

[0367] R1是H、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、或杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、杂芳基任选经一个或多个Rd取代。

[0368] 6.根据项目5所述的化合物或其N-氧化物，或其药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体，其中：

[0369] R1是烷基、环烷基、芳基、或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、芳基、或杂芳基任选经一个或多个Rd取代；

[0370] Z2不存在，或是O；

[0371] R4是H、卤素、任选经一个或多个Rd取代的烷基；

[0372] Z3不存在，或是O或O(CH2)pO；

[0373] R5是H、任选经一个或多个Rd取代的烷基；以及

[0374] R7是卤素。

[0375] 7.根据项目6所述的化合物或其N-氧化物，或其药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体，其中：

[0376] R1是烷基或环烷基，其中所述烷基或环烷基任选经一个或多个Rd取代；

[0377] R4是H、卤素、任选经一个或多个D取代的烷基D；

[0378] R5是H、任选经一个或多个D取代的烷基；以及

[0379] R7是F。

[0380] 8.根据项目1所述的化合物或其N-氧化物，或其药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体，其中，所述化合物是

[0381]

[0382]

[0383]

[0384]

[0385] 9.根据项目1所述的化合物或其N-氧化物，或其药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体，其中，所述化合物是

[0386]

[0387] 10.一种药物组合物，包含项目1中定义的式(I)的化合物或其N-氧化物或所述式(I) 化合物或其N-氧化物的药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体，以及药学可接受的稀释剂或载体。

[0388] 11.一种治疗或预防HBV的方法，包含向有此需要的受试者给药有效量的项目1中定义的式(I)的化合物或其N-氧化物或所述式(I)化合物或其N-氧化物的药学可接受的盐、溶剂合物、多形体或互变异构体。