(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺的盐形式和多晶型物 |
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| 申请号 | CN201680075353.5 | 申请日 | 2016-12-21 | 公开(公告)号 | CN108602782A | 公开(公告)日 | 2018-09-28 |
| 申请人 | 德克萨斯大学系统董事会; | 发明人 | P·琼斯; 迈克尔·J·索思; 詹森·B·伯克; 乐康; 刘刚; | ||||
| 摘要 | 本文披露了化合物(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁 氧 基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰胺基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺、和其盐形式和多晶型物，其在口服给予后证明了改进的暴露。还提供了抑制人类或动物受试者中的GLS1活性的方法。 | ||||||
| 权利要求 | 1.化合物 |
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| 说明书全文 | (R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三 唑-4-甲酰胺的盐形式和多晶型物 [0001] 本申请要求于2015年12月22日提交的美国临时申请号62/271,018优先权的权益，其披露内容通过引用以其全部内容结合在此(就像在此所写)。本申请还通过引用以其全文结合了2015年7月2日提交的美国申请号14/791,186的披露内容。 [0004] 图2是在丙酮(多晶型物D)中重结晶后实例1的XRPD。 [0005] 图3描绘了在丙酮(多晶型物D)中重结晶后实例1的偏振光显微术。 [0006] 图4描绘了在丙酮(多晶型物D)中纯化后实例1的DSC和TGA行为。 [0008] 图6显示纯化的游离碱实例1(多晶型物D)的1H NMR光谱。 [0009] 图7描绘了纯化的游离碱实例1(多晶型物D)的DVS。顶部的图描绘了为P/P0函数的质量变化(纵坐标，“质量变化(％)-参考”，从0变为0.2，增量为0.02；横坐标，“目标％P/P0”，从0至100，增量为10)。底部的图描述了为时间函数的质量变化(纵坐标，“质量变化(％)-参考”，从0变为0.2，增量为0.02；横坐标，“时间/mins”从0至200，增量为20)。 [0010] 图8是在DVS分析之前和之后聚合物D的XRPD的叠加。 [0011] 图9是由方法1制备的候选盐的XRPD的叠加。 [0012] 图10是由方法1制备的另外的候选盐的XRPD的叠加。 [0013] 图11是从各种溶剂中重结晶的氯化物盐的XRPD的叠加。 [0014] 图12是从各种溶剂中重结晶的硫酸盐的XRPD的叠加。 [0015] 图13是从各种溶剂中重结晶的甲磺酸盐的XRPD的叠加。 [0016] 图14是由方法2制备的候选盐的XRPD的叠加。 [0017] 图15是由方法3制备的候选盐的XRPD的叠加。 [0018] 图16是通过方法3制备的并从EtOAc中重结晶的氯化物盐的XRPD的叠加。 [0019] 图17是通过方法3制备的并从EtOAc中重结晶的硫酸盐的XRPD的叠加。 [0020] 图18是通过方法3制备的并从EtOAc中重结晶的甲磺酸盐的XRPD的叠加。 [0021] 图19是通过方法3制备的并从EtOAc中重结晶的甲苯磺酸盐的XRPD的叠加。 [0022] 图20是来自方法3放大试验的候选盐的XRPD的叠加。 [0023] 图21是通过方法3放大试验制备的甲磺酸盐的XRPD。 [0024] 图22是通过方法3放大试验制备的并从EtOAc中重结晶的氯化物盐的XRPD。 [0025] 图23是通过方法3放大试验制备并从EtOAc中重结晶的甲苯磺酸盐的XRPD。 [0026] 图24描绘了实例1的纯化的氯化物盐的放大试验的MeOD中的1H NMR。 [0027] 图25描绘了实例1的纯化的甲磺酸盐的放大试验的MeOD中的1H NMR。 [0028] 图26描绘了实例1的纯化的甲苯磺酸盐的放大试验的MeOD中的1H NMR。 [0029] 图27描绘了实例1的纯化的氯化物盐的放大试验的PLM。 [0030] 图28描绘了实例1的纯化的甲磺酸盐的放大试验的PLM。 [0031] 图29描绘了实例1的纯化的甲苯磺酸盐的放大试验的PLM。 [0032] 图30描绘了实例1的纯化的氯化物盐的放大试验的DSC和TGA的叠加。 [0033] 图31描绘了实例1的纯化的甲磺酸盐的放大试验的DSC和TGA的叠加。 [0034] 图32描绘了实例1的纯化的甲苯磺酸盐的放大试验的DSC和TGA的叠加。 [0035] 代谢失调是癌症的标志，因为肿瘤表现出对营养物和大分子的增加的需求，以促进其快速增殖。谷氨酰胺(Gln)是循环中最丰富的氨基酸，在向癌细胞提供支持增殖和存活所需的生物合成中间体方面起重要作用。具体地，谷氨酰胺分解或谷氨酰胺到谷氨酸的酶促转化为增殖性癌细胞提供了用于氨基酸和核苷酸合成的氮源，并且通过TCA循环为燃料ATP和NADPH合成提供了碳骨架。除了支持细胞生长，谷氨酰胺代谢在维持细胞氧化还原稳态中起关键作用，因为谷氨酸可以转化为谷胱甘肽(主要的细胞内抗氧化剂)。 [0036] 谷氨酰胺分解由线粒体谷氨酰胺酶(GLS)调节，线粒体谷氨酰胺酶是催化Gln转化为谷氨酸和氨的速率限制酶。哺乳动物细胞包含2个编码谷氨酰胺酶的基因：肾型(GLS1)和肝型(GLS2)酶。每种都已在多种组织类型中检测到，其中GLS1广泛分布在整个身体中。GLS1是作为两种主要剪接变体(长形式(称为KGA)和短形式(GAC))存在于人类中的磷酸激活酶，这两者仅在其C-末端序列上不同。认为两种形式的GLS1都在哺乳动物细胞中与线粒体的内膜结合，尽管至少一个报道表明谷氨酰胺酶可能存在于膜内的空间中，从膜上解离。GLS在人类肿瘤中经常过表达，并且已显示受癌基因诸如Myc的正调节。与观察到的癌细胞系对谷氨酰胺代谢的依赖性一致，GLS的药理学抑制提供了靶向Gln成瘾肿瘤的潜力。 [0037] 因此，需要特异性且能够配制用于体内使用的谷氨酰胺酶抑制剂。 [0038] 因此，在此披露了用于抑制谷氨酰胺酶活性新的组合物和方法。 [0039] 提供了化合物或其盐、溶剂化物、或多晶型物。 [0040] 还提供了化合物或其盐、溶剂化物、或多晶型物。 [0041] 还提供了化合物或其盐、溶剂化物、或多晶型物。 [0042] 在某些实施例中，该化合物是溶剂化物。在某些实施例中，该溶剂化物是DMSO。在某些实施例中，其中DMSO与化合物以1:1的比率结合。 [0043] 还提供了具有结构式I的盐或其溶剂化物或多晶型物，其中： R-选自Cl-、Br-、I-、HSO4-、SO42-、NO3-、CH3SO3-、PhSO3-、4-MePhSO3-、和萘SO3-； n为0至2的整数；并且 Y是任选的溶剂化物。· [0044] 在某些实施例中，R-选自Cl-、HSO4-、CH3SO3-、和4-MePhSO3-。 [0045] 在某些实施例中，n是1。 [0046] 在某些实施例中，Y不存在(即，该盐是无水的)。 [0047] 在某些实施例中，R-是CH3SO3-(即，该盐是甲磺酸盐)。 [0048] 在某些实施例中，该甲磺酸盐被表征为具有选自以下的一个或多个X-射线粉末衍射峰：约9.2度2θ、约10.8度2θ、约13.8度2θ、约16.7度2θ、约17.3度2θ、约18.4度2θ、约18.7度2θ、约19.9度2θ、约20.6度2θ、约21.4度2θ、约22.1度2θ、约22.3度2θ、约22.6度2θ、约22.9度2θ、约24.1度2θ、和约32.1度2θ。在某些实施例中，该盐具有这些峰中的三个或更多个。在某些实施例中，该盐具有这些峰中的五个或更多个。 [0049] 在某些实施例中，该甲磺酸盐在DSC显示吸热峰，起始为：180℃±1℃。在某些实施例中，该甲磺酸盐在30℃至200℃在DSC中显示小于1.0％的重量损失。在某些实施例中，该甲磺酸盐是无水的。 [0050] 在某些实施例中，R-是Cl-(即，该盐是氯化物)。 [0051] 在某些实施例中，该氯化物盐被表征为具有选自以下的一个或多个X-射线粉末衍射峰：约4.6度2θ、约9.26度2θ、约11.0度2θ、约12.6度2θ、约13.2度2θ、约13.8度2θ、约16.5度2θ、约19.0度2θ、约20.8度2θ、约22.0度2θ、约22.4度2θ、约22.7度2θ、约24.2度2θ、约25.0度2θ、和约33.4度2θ。在某些实施例中，该盐具有这些峰中的三个或更多个。在某些实施例中，该盐具有这些峰中的五个或更多个。 [0052] 在某些实施例中，R-是4-MePhSO3-(即，该盐是甲苯磺酸盐)。 [0053] 在某些实施例中，该甲苯磺酸盐被表征为具有选自以下的一个或多个X-射线粉末衍射峰：约4.5度2θ、约9.0度2θ、约10.3度2θ、约10.5度2θ、约10.7度2θ、约11.1度2θ、约11.7度2θ、约13.6度2θ、约14.3度2θ、约17.1度2θ、约17.3度2θ、约17.6度2θ、约18.5度2θ、约18.9度2θ、约19.0度2θ、约19.2度2θ、约19.8度2θ、约20.1度2θ、约20.4度2θ、约20.8度2θ、约21.4度2θ、约21.8度2θ、约22.4度2θ、约22.6度2θ、约23.4度2θ、约24.3度2θ、约25.1度2θ、约26.0度2θ、约26.3度2θ、约27.2度2θ、约27.4度2θ、和约28.2度2θ。在某些实施例中，该盐具有这些峰中的三个或更多个。在某些实施例中，该盐具有这些峰中的五个或更多个。 [0054] 在某些实施例中，该甲苯磺酸盐在DSC中显示吸热峰，起始为185℃±1℃。在某些实施例中，该甲苯磺酸盐在30℃至200℃在DSC中显示小于1.0％的重量损失。在某些实施例中，该甲苯磺酸盐是无水的。 [0055] 在某些实施例中，R-是HSO4-(即，该盐是硫酸盐)。 [0056] 还提供了固体化合物或其多晶型物。在某些实施例中，该化合物或其多晶型物是结晶。 [0057] 在某些实施例中，该多晶型物是多晶型物A。 [0058] 在某些实施例中，该多晶型物是多晶型物B。 [0059] 在某些实施例中，该多晶型物是多晶型物C。 [0060] 在某些实施例中，该多晶型物是多晶型物D。 [0061] 本文中提供了化合物的固体多晶型物D。 [0062] 在某些实施例中，多晶型物D被表征为具有选自以下的一个或多个X-射线粉末衍射峰：约4.0度2θ、约8.0度2θ、约11.6度2θ、约11.9度2θ、约14.9度2θ、约15.9度2θ、约17.6度2θ、约19.9度2θ、约20.2度2θ、约22.4度2θ、约23.7度2θ、和约23.9度2θ。在某些实施例中，多晶型物D具有这些峰中的三个或更多个。在某些实施例中，多晶型物D具有这些峰中的五个或更多个。 [0063] 在某些实施例中，多晶型物D在DSC中显示吸热峰，起始为197℃±1℃。在某些实施例中，多晶型物D是无水的。在某些实施例中，多晶型物D在30℃至200℃在DSC中显示小于1％的重量损失。 [0064] 还提供了包含如本文所述的化合物、盐、溶剂化物、或多晶型物和药学上可接受的载体、佐剂、或媒介物的组合物。 [0065] 还提供了抑制生物样品中的GLS1活性的方法，包括使生物样品与本文所述的化合物、盐、溶剂化物、或多晶型物接触。 [0066] 还提供了治疗对其有需要的受试者的GLS1介导的障碍的方法，包括向受试者给予如本文所述的化合物、盐、溶剂化物、或多晶型物的步骤。 [0067] 在某些实施例中，该受试者是人类。 [0068] 在某些实施例中，该GLS1介导的障碍选自癌症、免疫性障碍、和神经性障碍。 [0069] 在某些实施例中，该GLS1介导的障碍是癌症。 [0070] 在某些实施例中，该癌症选自急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、肾上腺皮质癌、艾滋病相关癌症(卡波西肉瘤和淋巴瘤)、肛门癌、阑尾癌、非典型畸胎样/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌(包括肝外)、膀胱癌、骨癌(包括骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤)、脑肿瘤(诸如星形细胞瘤、脑和脊髓肿瘤、脑干胶质细胞瘤、中枢神经系统非典型畸胎样/横纹肌样瘤、中枢神经系统胚胎性肿瘤、颅咽管瘤、成室管膜细胞瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、髓上皮瘤、中级分化的松质实质肿瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤和松果体母细胞瘤)、乳腺癌、支气管癌、伯基特淋巴瘤、基底细胞癌、胆管癌(包括肝外)、膀胱癌、骨癌(包括骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤)、类癌瘤、原发灶不明的转移癌、中枢神经系统(诸如非典型畸胎样/横纹肌样瘤、胚胎性肿瘤和淋巴瘤)、宫颈癌、儿童癌症、脊索瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、慢性骨髓增殖性疾病、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、原发性皮肤的T细胞淋巴瘤(蕈样真菌病和塞加里综合症)，胆管、胆汁(肝外)、导管原位癌(DCIS)，胚胎性肿瘤(中枢神经系统)、子宫内膜癌、成室管膜细胞瘤、室管膜瘤、食管癌、鼻腔神经胶质瘤、尤文肉瘤家族肿瘤、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼癌(如眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤)、骨纤维组织细胞瘤(包括恶性骨肉瘤)胆囊癌症、胃部(胃)癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质肿瘤(GIST)、生殖细胞肿瘤(颅外、外阴、卵巢)、妊娠滋养细胞肿瘤、神经胶质瘤、毛细胞白血病、头颈癌、心脏癌症、肝细胞(肝)癌、组织细胞增多症、朗格汉斯细胞、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞肿瘤(内分泌、胰腺)、卡波西肉瘤、肾脏(包括肾细胞)、朗格汉斯细胞组织细胞增多症、喉癌、白血病(包括急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞性白血病(CML)、毛细胞)、唇癌和口腔癌、肝癌(原发)、小叶原位癌(LCIS)、肺癌(非小细胞和小细胞)、淋巴瘤(艾滋病相关、伯基特、皮肤的T细胞(蕈样真菌病和塞加里综合征)、霍奇金、非霍奇金、原发性中枢神经系统(CNS)、巨球蛋白血症、瓦尔登斯特伦病、男性乳癌、骨恶性纤维组织细胞瘤和骨肉瘤、成神经管细胞瘤、髓上皮瘤、黑色素瘤(包括眼内(眼))、梅克尔细胞癌、间皮瘤(恶性)、具隐匿性原发灶的转移性鳞状颈癌、涉及NUT基因的中线道癌、嘴癌、多发性内分泌腺瘤、多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤、蕈样真菌病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤、骨髓性白血病、慢性髓性白血病(CML)、髓性白血病、急性髓性白血病(AML)、骨髓瘤和多发性骨髓瘤、骨髓增生性疾病(慢性)、鼻腔及副鼻窦癌、鼻咽癌、成神经细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、口癌、口腔癌、唇和口咽癌、骨肉瘤和骨恶性纤维组织细胞瘤、卵巢癌(诸如上皮、生殖细胞肿瘤、和低恶性潜能肿瘤)、胰腺癌(包括胰岛细胞肿瘤)、乳头瘤样增生、副神经节瘤、副鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、鼻咽癌、嗜铬细胞瘤、中级分化的松质实质肿瘤、松果体母细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤、垂体肿瘤、浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺母细胞瘤、妊娠期乳腺癌、原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞(肾脏)癌、肾盂和输尿管癌、移行细胞癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤(如尤文肉瘤家族肿瘤、卡波西、软组织、子宫肿瘤)、塞加里综合征、皮肤癌(诸如黑色素瘤、梅克尔细胞癌、非黑色素瘤)、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、具隐匿性原发灶的鳞状颈癌、转移性胃(胃部)癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、T细胞淋巴瘤(皮肤的、蕈样真菌病和塞加里综合征)、睾丸癌、咽喉癌、胸腺癌、甲状腺癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、滋养细胞肿瘤(妊娠)、未知原发灶的、童年异常癌症、输尿管和肾盂癌、移行细胞癌、尿道癌症、子宫癌、子宫内膜肉瘤、子宫肉瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症和威尔姆氏瘤、或其变体。 [0071] 本文还提供了在对其有需要的受试者中治疗GLS1介导的障碍的方法，包括依次或共同给予如本文所述的化合物、盐、溶剂化物、或多晶型物、和另一种治疗剂。 [0072] 在某些实施例中，治疗剂选自紫杉烷、bcr-abl的抑制剂、EGFR的抑制剂、DNA损伤剂、和抗代谢物。 [0073] 在某些实施例中，该治疗剂选自氨鲁米特、安吖啶、阿那曲唑、天冬酰胺酶、卡介苗、比卡鲁胺、博来霉素、布舍瑞林、白消安、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氯喹、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、秋水仙碱、环磷酰胺、环丙孕酮、阿糖孢苷、达卡巴嗪、更生霉素、道诺霉素、脱甲绿胶酶素、二氯乙酸盐、双烯雌酚、己烯雌酚、多西他赛、阿霉素、表阿霉素、雌二醇、雌莫司汀、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、非格司亭、氟达拉滨、氟氢可的松、氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、吉西他滨、染料木素、戈舍瑞林、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素、伊立替康、依立替康、来曲唑、亚叶酸、亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、氯尼达明、氮芥、甲羟孕酮、甲地孕酮、美法仑、巯嘌呤、美司钠、二甲双胍、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、尼鲁米特、诺考达唑、奥曲肽、奥沙利铂、紫杉醇、氨羟二磷酸二钠、喷司他丁、哌立福辛、普卡霉素、卟菲尔钠、丙卡巴肼、雷替曲塞、利妥昔单抗、索拉非尼、链脲霉素、舒尼替尼、苏拉明、三苯氧胺、替莫唑胺、替西罗莫司、替尼泊苷、睾酮、硫鸟嘌呤、噻替派、二氯二茂钛、拓扑替康、曲妥单抗、维甲酸、长春花碱、长春新碱、长春地辛、和长春瑞滨。 [0074] 在某些实施例中，治疗剂是多西他赛。 [0075] 在某些实施例中，该方法进一步包括给予癌症治疗的非化学方法。 [0076] 在某些实施例中，该方法还包括给予放射疗法。 [0078] 本文还提供了用于人类疗法的如本文所述的化合物、盐、溶剂化物、或多晶型物。 [0079] 本文还提供了用于治疗GLS1介导的疾病的如本文所述的化合物、盐、溶剂化物、或多晶型物。 [0080] 本文还提供了如本文所述的化合物、盐、溶剂化物、或多晶型物用于制造治疗GLS1介导的疾病的药物的用途。 具体实施方式缩写与定义 [0081] 为了促进对本披露的理解，如在此使用的大量术语和缩写定义如下： [0082] 当介绍本披露或其一个或多个优选实施例的要素时，冠词“一个/一种”(“a”、“an”)、“该”和“所述”旨在表示存在这些要素中的一个或多个。术语“包括”、“包含”和“具有”旨在为包括在内的并且意指可存在除所列要素之外的另外的要素。 [0083] 当术语“和/或”在两项或更多个项的列表中使用时，意指所列出项的任何一项可以单独或与所列出项的任何一项或多项组合使用。例如，表述“A和/或B”旨在意指A和B之一或二者，即单独A、单独B或A和B组合。表述“A、B和/或C”旨在意指单独A、单独B、单独C、A和B组合、A和C组合、B和C组合或A、B和C组合。 [0084] 当披露数值范围，以及使用符号“从n1…到n2”或“在n1…和n2之间”时，其中n1和n2是数字，则除非另外说明，该符号旨在包括这些数字本身以及它们之间的范围。该范围可以是整的或在这些端值之间连续的并且包括这些端值。通过举例，范围“从2至6个碳原子”旨在包括两个、三个、四个、五个、以及六个碳原子，因为碳原子以整数单位出现。比较，通过举例，范围“从1至3μM(微摩尔)”(其旨在包括1μM、3μM、以及之间所有数)与重要附图的任何数字(例如，1.255μM、2.1μM、2.9999μM等)。 [0085] 如在此使用的术语“约”旨在限定它所修饰的数值，表示这个值为在误差界限之内的变量。当未列出具体误差界限(如图表或数据表中给出的平均值的标准差)时，术语“约”应理解为意指涵盖所列举值的范围以及还有通过四舍五入到该数字而被包括的范围，考虑到了有效数字。 [0086] 本文的任何定义可以与任何其他定义结合使用，来描述复合结构基团。按照惯例，任何此类定义的尾随元素是附接到母体部分上的元素。例如，复合基团烷基酰胺基表示通过酰胺基基团附接到母体分子上的烷基基团，并且术语烷氧基烷基表示通过烷基基团附接到母体分子上的烷氧基基团。 [0087] 不对称中心存在于本文披露的化合物中。这些中心由符号“R”或“S”指定，取决于手性碳原子周围的取代基的构型。应当理解的是本披露涵盖了所有立体化学同分异构形式，这些形式报包括非对映异构体的、对映异构体的、以及差向异构体的形式，连同d-异构体和1-异构体，及其混合物。化合物的单独立体异构体可以从可商购的包含手性中心的起始材料合成制备，或通过制备对映异构体的产物的混合物随后分离，如转化为非对映体的混合物随后分离或重结晶、层析技术、直接在手性层析柱上的对映异构物的分离，或本领域中已知的任何其他适当的方法制备。特定立体化学的起始化合物是可商购的，或可以通过本领域中已知的技术进行制备并拆分。此外，在此披露的化合物可以作为几何异构体存在。本披露包括所有的顺式、反式、同义、反义、异侧(E)和同侧(Z)异构体及其适当的混合物。此外，化合物可以作为互变异构体存在；本披露提供了所有互变异构的异构体。此外，在此披露的化合物可以按非溶剂化形式以及与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂化形式存在。通常，认为溶剂化形式等效于非溶剂化形式。 [0088] 如在此使用的，术语“疾病”旨在为一般同义的，并且可以与术语“障碍”、“症状”和“病症”(在医学症状时)互换使用，因为所有这些都反映了人类或动物体的或者损害了其正常功能的部分之一的异常情况，典型地表现为区别的体征和症状，并且使人类或动物有减少的寿命期限或生活质量。 [0089] 术语“组合疗法”意指给予两种或更多种治疗剂来治疗本披露中所述的治疗的疾病或障碍。这种给予包括以基本上同时的方式共同给予这些治疗剂，诸如具有固定比例活性组分的单个胶囊或者针对每种活性成分的多个分开的胶囊。此外，这种给予还包括以连续方式使用每种类型的治疗剂。在任一情况下，治疗方案可将在治疗本文所述的病症或障碍中提供药物组合的有益作用。 [0090] 本文使用的GLS1抑制剂是指显示出关于GLS1活性不多于约100μM和更典型地不多于约50μM的IC50的化合物，如总体上在下文所述的GLS1酶试验中测量的。IC50是减少酶(如GLS1)的活性至最大水平的一半的抑制剂的浓度。已经发现本文披露的某些化合物显示出针对GLS1的抑制。在某些实施例中，化合物将显示出关于GLS1的不多于约10μM的IC50；在另外的实施例中，化合物将显示出关于GLS1的不多于约5μM的IC50；在又另外的实施例中，化合物将显示出关于GLS1的不多于约1μM的IC50；在又另外的实施例中，化合物将显示出关于GLS1的不多于约200nM的IC50，如在于此所述的GLS1结合测定中测量的。 [0091] 短语“治疗有效的”旨在限制在疾病或障碍的治疗中或对临床终点产生效果使用的活性成分的量。 [0093] 用于本文时，提及“治疗”患者旨在包括预防。治疗也可以是自然地抢占先机，即，它可以包括疾病的预防。疾病的预防可以涉及完全免受疾病，例如像在预防病原体感染的情况下，或可以涉及疾病进展的预防。例如，疾病的预防可以不意指完全圈定任何水平的与疾病相关的任何效果，而是可以将疾病的症状预防至临床上显著的或可检测的水平。疾病的预防也可以意指预防疾病进展至疾病的更晚阶段。 [0094] 通常，术语“患者”与术语“受试者”是同义的，并且包括所有哺乳动物，包括人类。患者的实例包括人类、牲畜(农场动物)例如牛、山羊、绵羊、猪和兔)，和宠物例如，狗、猫、兔和马。优选地，患者是人类。 [0095] 术语“前药”是指在体内变得更具活性的化合物。本文披露的某些化合物还可以作为前药存在，如在Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism:Chemistry,Biochemistry,and Enzymology[在药物和前药代谢中的水解：化学、生物化学、以及酶学](Testa,Bernard和Mayer,Joachim M.Wiley-VHCA，苏黎世，瑞士2003)中所描述。本文所述化合物的前药是以下化合物的结构改良型：所述化合物在生理条件下容易进行化学变化来提供所述化合物。此外，在离体环境中，通过化学方法或生物化学方法可以将前药转变成所述化合物。例如，当前药置于经皮贴片贮器内部时用适合的酶试剂或化学试剂可以将前药缓慢地转变成化合物。因为在一些情况下前药比化合物或母体药物更容易进行给予，所以它们经常是有用的。例如，它们可以是通过口服给予而生物可利用的，而这种母体药物却不行。前药还可以在药物组合物中具有改进的超过母体药物的溶解性。本领域中已知多种多样的前药衍生物，如依赖于前药的水解裂解或氧化激活的那些。前药的实例(但不限于)是作为酯(所述“前药”)给予的化合物，但是然后代谢水解为羧酸，活性实体。另外的实例包括化合物的肽基衍生物。 [0096] 本文披露的化合物可以作为治疗上可接受的盐存在。本披露包括以上以盐形式列出的化合物，包括酸加成盐。适合的盐包括用有机或无机酸形成的那些。此类酸加成盐通常是药学上可接受的。然而，非药学上可接受的盐的盐可以是在所讨论的化合物的制备和纯化中是有效用的。也可以形成碱加成盐，并且是药学上可接受的。对于盐的制备和选择的更完整的讨论，参考以下文献：Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use[药用盐：特性、选择与使用](Stahl,P.Heinrich.威利-VHCA，苏黎世，瑞士，2002)。 [0097] 术语“治疗学上可接受的盐”用于本文时代表本文披露的化合物的盐或两性离子形式，其是水溶性的或油溶性的或可分散的并且是如本文限定的治疗学上可接受的。这些盐可以在化合物的最后分离和纯化期间制备，或是通过游离碱形式的适当的化合物的与适合的酸反应分别地制备。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、L-抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐(besylate)、重硫酸盐(HSO4-)、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、二葡萄糖酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、龙胆酸盐、戊二酸盐、甘油磷酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐(HCl、氯化物、Cl-)、氢溴酸盐(HBr、溴化物、Br-)、氢碘酸盐(HI、碘化物、I-)、2-羟乙磺酸盐(羟乙基磺酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、DL-扁桃酸盐、均三甲苯磺酸盐、甲磺酸盐(甲磺酸盐(mesylate)、MsOH、MeSO3H、- -CH3SO3H、CH3SO3)、萘磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、硝酸盐(NO3)、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、焦谷氨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(SO42-)、磺酸盐、酒石酸盐、L-酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐(甲苯磺酸盐(tosylate)、TsOH、Ts、p-tosylate、甲基苯磺酸盐- - - - (methylbenzenesulfonate)、4-MePhSO3 )、苯磺酸盐(PhSO3 )、HOSO2CH2CH2SO3 、OSO2CH2CH2SO3-、以及十一烷酸盐。酸加成盐可以根据用于形成盐的酸或盐中存在的阴离子来命名。因此，例如，术语“氯化物盐”和“盐酸盐”被理解为表示相同的盐。并且，可以将在本文披露的化合物中的碱性基团用甲基、乙基、丙基、以及丁基的氯化物、溴化物、以及碘化物；二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸酯；癸基、月桂基、豆蔻基、以及甾醇基的氯化物、溴化物、以及碘化物；以及苯甲基和苯乙基的溴化物进行季铵化。可以使用以形成治疗学上可接受的加成盐的酸的实例包括无机酸(例如硝酸、硼酸、盐酸、氢溴酸、硫酸、和磷酸)和有机酸(例如草酸、马来酸、琥珀酸、和柠檬酸)。盐还可以通过这些化合物与碱金属或碱土离子的配位形成。因此，本披露考虑了本文披露的化合物的钠、钾、镁、以及钙盐等。 [0098] 碱加成盐可以在化合物最后的分离和纯化过程中制备，通过将羧基与适合的碱如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐、或碳酸氢盐反应，或者与氨或有机伯、仲、叔胺反应。治疗学上可接受盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁、和铝，连同无毒季胺阳离子如铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因、二苄胺、N,N-二苄基苯乙胺、1-二苯羟甲胺、以及N,N’-二苄基乙二胺。可用于形成碱加成盐的其他的代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。 [0099] 化合物的盐可以通过使适当的游离碱形式的化合物与适当的酸反应来制备。化合物 [0100] 本披露提供了化合物或其盐、溶剂化物、或多晶型物。 [0101] 还提供了化合物或其盐、溶剂化物、或多晶型物。 [0102] 还提供了化合物或其盐、溶剂化物、或多晶型物。 [0103] 还提供了如本文披露的具有结构式I的盐、或其实施例。 [0104] 在某些实施例中，该化合物、其盐、或多晶型物选自：药物组合物 [0105] 虽然本披露的化合物可能作为原始化学物质给予，它们还可能作为药物配制品来提供。因此，在此提供了药物配制品，这些药物配制品包含在此披露的某些化合物中的一种或多种，或者其一种或多种药学上可接受的盐、酯、前药、酰胺或溶剂化物，以及一种或多种其药学上可接受的载体和任选地一种或多种其他治疗成分。这种或这些载体必须在与配制品的其他成分相容且对于其接受者无害的意义上是“可接受的”。适当的配制品取决于所选择的给予途径。任何熟知的技术、载体和赋形剂可合适地使用，并且是本领域已知的；例如在雷明顿的药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)中。在此披露的药物组合物可以用任何本领域中已知的方式制造，例如通过常规的混合、溶解、造粒、造糖衣片、研磨、乳化、包囊、包埋或压缩方法进行制造。 [0106] 配制品包括适合用于口服、肠胃外(包括皮下、皮内、肌内、静脉内、关节内和髓内)、腹膜内、经粘膜、经皮、直肠和局部(包括皮肤、经颊、舌下和眼内)给予的那些，但最适合的途径可以取决于例如接受者的病症和障碍。配制品可以方便地以单位剂型呈现，并且可以通过配药学领域公知的任何方法来制备。典型地，这些方法包括使本披露的化合物或其药学上可接受的盐、酯、酰胺、前药或溶剂化物(“活性成分”)与构成一种或多种辅助成分的载体混合的步骤。通常，配制品通过以下方式制备：均匀且密切地使活性成分与液体载体或细粉碎的固体载体或与这两者混合，并且然后如果需要的话，使产物成形为所希望的配制品。 [0107] 本文所述的化合物可以如下给予：口服给予 [0108] 本发明的化合物可以口服给予，包括吞咽，使化合物进入胃肠道，或包括舌下或口腔含化给予，使化合物从口直接吸收到血液流。 [0109] 用于口服给予的合适的组合物包括固体配制品如片剂、丸剂、扁囊剂、锭剂、以及硬或软的胶囊，其可包含液体、凝胶，粉末或颗粒。 [0110] 在片剂或胶囊剂型中，本发明药物的量可以是按重量计从约0.05％至约95％的剂型，更典型地按剂型的重量计从约2％至约50％。 [0111] 此外，片剂或胶囊可以包含崩解剂，其包含按重量计从约0.5％至约35％的剂型，更典型地从约2％至约25％的剂型。崩解剂的实例包括甲基纤维素、钠或钙羧甲基纤维素、交联羧甲基钠、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、淀粉等。 [0115] 可以通过任选地与一种或多种辅助成分一起压制或模压来制造片剂。可以通过在适合的机器中压制处于自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性成分来制备压制片，这些活性成分任选地与粘合剂、惰性稀释剂或润滑剂、表面活性剂或分散剂混合。模制片剂可以通过在适合的机器中将用液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物模塑而制造。可将染料或颜料添加至到片剂中，以用于鉴别或表征活性化合物剂量的不同组合。 [0116] 液体配制品可以包括乳液、溶液、糖浆、酏剂和悬浮液，其可在软或硬的胶囊中使用。这种配制品可以包括药学上可接受的载体，例如，水、乙醇、聚乙二醇、纤维素、或油。该配制品还可以包括一种或多种乳化剂和/或助悬剂。 [0117] 用于口服给予的组合物可以配制为即刻释放或改进释放，包括延迟或持续释放，任选地具有肠溶包衣。 [0118] 在另一个实施例中，药物组合物包含治疗有效量的化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。肠胃外给予 [0119] 本发明的化合物可以通过注射，例如通过推注或连续输注直接给予到血流、肌肉或内部器官中。用于肠胃外给予的合适的方式包括静脉内、肌内、皮下动脉内、腹膜内、鞘内、颅内等。用于肠胃外给予的合适的装置包括喷射器(包括带针和无针注射器)和输液装置。该配制品可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶。 [0121] 肠胃外配制品也可以脱水的形式(例如通过冻干法)或作为无菌非水溶液来制备。这些配制品可以与合适的媒介物(如无菌水)一起使用。溶解度增强剂也可用于制备肠胃外溶液。 [0122] 用于肠胃外给予的组合物可被配制成即刻释放或改进释放，包括延迟或持续释放。还可将化合物配制为贮库制剂。此类长效配制品可以通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射给予。因而，例如，所述化合物可用适合的聚合物或疏水物质(例如作为在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂来配制，或配制为微溶的衍生物，例如微溶的盐。 [0123] 局部给予 [0124] 本发明的化合物可以局部给予(例如给予于皮肤、粘膜、耳朵、鼻子或眼睛)或经皮给予。用于局部给予的配制品可以包括但不限于洗剂、溶液、霜剂、凝胶剂、水凝胶、软膏、泡沫剂、植入剂、贴剂等。用于局部给予的药学上可接受的载体可包括水、乙醇、矿物油、甘油、聚乙二醇等。局部给予还可以通过(例如)电穿孔、离子电渗疗法、超声透入疗法等进行。 [0125] 典型地，局部给予的活性成分可以是配制品的从0.001％至10％w/w(按重量计)。在某些实施例中，该活性成分可以是多达10％w/w；小于5％w/w；从2％w/w至5％w/w；是配制品的从0.1％至1％w/w。 [0126] 用于局部给予的组合物可以配制为即刻释放或改进释放，包括延迟或持续释放。经直肠、经颊、和经舌下给予 [0127] 用于本发明化合物的直肠给予的栓剂可通过将活性药剂与合适的无刺激性的赋形剂混合来制备，这些赋形剂例如是可可脂，合成的单-、二-、或三甘油酯，脂肪酸或聚乙二醇，它们在常温下是固体，但在直肠温度下为液体，并因此熔化于直肠和释放药物。 [0128] 对于含服或舌下给予，这些组合物可以按常规方式采用片剂、锭剂、软锭剂、或凝胶剂的形式。此类组合物可以包含调味基料如蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶中的活性成分。吸入给予 [0129] 针对通过吸入给予，化合物可以方便地从吹入器、喷雾器加压包或其他递送气雾剂喷雾或粉末的方便的手段来递送。加压包可以包含适合的推进剂如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适合的气体。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可以通过提供用于递送一个计量的量的阀门来确定。可替代地，用于通过吸入或吹入给予，根据本披露的化合物可以采取干燥粉末组合物的形式，例如化合物和适合的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。粉末组合物可以按单位剂型呈现在例如胶囊、药筒、明胶或泡罩包装中，粉末从中可借助于吸入器或吹入器给予。 [0130] 也可使用其他制药领域所公知的载体材料和给予方式。本发明的药物组合物可以通过任何药学上熟知的技术来制备，例如有效配制和给予程序。优选的单位剂量配制品是包含活性成分的(如本文所述的)有效剂量或其适当部分的那些。给予患者的化合物的精确量是巡诊医生的职责。针对任何特定患者的具体剂量水平将取决于多种因素，包括所使用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康情况、性别、饮食、给予时间、给予途径、排泄速率、药物组合、所治疗的确切的障碍以及所治疗适应症或病症的严重程度。此外，给予途径可以取决于病症及其严重程度而变化。关于有效配制和给予程序的上述考虑在本领域中是众所周知的，并且在标准教科书中有描述。药物的配制品在例如以下文献中描述：Hoover,John E.,Remington's Pharmaceutical Sciences[雷明顿制药科学]，宾夕法尼伊斯顿亚州麦克出版公司(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.)，1975；Liberman等人编辑，Pharmaceutical Dosage Forms[药物剂型]，纽约州纽约市马塞尔德克尔公司(Marcel Decker,New York,N.Y.)，1980；以及Kibbe等人编辑，Handbook of Pharmaceutical Excipients(3rd Ed.)[药物赋形剂手册第3版]，华盛顿美国医药学会(American Pharmaceutical Association,Washington)，1999。 治疗方法 [0131] 本披露提供抑制谷氨酰胺酶活性(特别是GLS1活性)的化合物和药物组合物，因此这些化合物和药物组合物在治疗或预防与GLS1有关的障碍中是有用的。本披露的化合物和药物组合物选择性地调节GLS1，因此可用于治疗或预防与GLS1相关的一系列障碍，并且包括但不限于与GLS1相关的癌症、免疫性或神经性障碍。神经性障碍 [0132] 在一些实施例中，本披露的化合物和药物组合物可用于治疗或预防神经性障碍。 [0133] 最常见的神经递质是谷氨酸，衍生自谷氨酰胺通过谷氨酰胺酶的酶转化。高水平的谷氨酸已被证明是神经毒性的。在对神经元细胞的创伤性损伤后，发生神经递质(特别是谷氨酸)释放的增加。因此，已经假设谷氨酰胺酶的抑制作为缺血损伤后诸如中风的治疗手段。 [0134] 亨廷顿舞蹈病是一种进行性的、致命的神经系统病症。在亨廷顿病的遗传小鼠模型中，观察到疾病的早期表现与谷氨酸释放失调相关(Raymond等人，Neuroscience[神经科学]，2011)。在HIV相关性痴呆中，HIV感染的巨噬细胞表现出上调的谷氨酰胺酶活性和增加的谷氨酸释放，导致神经元损伤(Huang等人，J.Neurosci.[神经科学杂志]，2011)。类似地，在另一种神经性障碍中，瑞特综合征中的活化的小胶质细胞释放谷氨酸，引起神经元损伤。过量谷氨酸的释放与谷氨酰胺酶的上调相关(Maezawa等人，J.Neurosci.[神经科学杂志]， 2010)。在培育具有减少的谷氨酰胺酶水平的小鼠中，对精神刺激药物(例如安非他明)的敏感性显著降低，因此表明谷氨酰胺酶抑制可能有益于精神分裂症的治疗(Gaisler-Salomon等人，Neuropsychopharmacology[神经精神药理学]，2009)。双相性精神障碍是一种破坏性疾病，其特征是反复发作的躁狂和抑郁症。这种疾病用诸如锂和丙戊酸钠的情绪稳定剂来治疗；然而，长期使用这些药物似乎增加了谷氨酸受体的丰度(Nanavati等人， J.Neurochem.[神经科学杂志]，2011)，这可能导致药物的效力随时间的降低。因此，替代治疗可以是通过抑制谷氨酰胺酶来减少谷氨酸的量。这可以或可以不与情绪稳定剂结合。美金刚，N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)的部分拮抗剂，是治疗阿尔茨海默氏病的已批准的治疗剂。目前，正在进行研究以美金刚作为治疗血管性痴呆和帕金森病的方法(Oliverares等人，Curr.Alzheimer Res.[最新阿尔茨海默研究]，2011)。由于美金刚已显示部分阻断NMDA谷氨酸受体，所以推测通过抑制谷氨酰胺酶降低谷氨酸水平也可治疗阿尔茨海默氏病、血管性痴呆和帕金森病并不是不合理的。阿尔茨海默氏病、双相性精神障碍、HIV相关性痴呆、亨廷顿病、缺血性损伤、帕金森病、精神分裂症、中风、外伤性损伤和血管性痴呆仅是与谷氨酸水平升高相关的几种神经性障碍。因此，用本文所述的化合物抑制谷氨酰胺酶可以减少或预防神经性障碍。因此，在某些实施例中，这些化合物可用于治疗或预防神经性障碍。 免疫性障碍 [0135] 在一些实施例中，本披露的化合物和药物组合物可用于治疗或预防免疫性疾病。 [0136] T淋巴细胞的激活诱导细胞生长，增殖和细胞因子产生，从而对细胞产生能量和生物合成需求。谷氨酰胺作为用于核苷酸合成的胺基供体，且谷氨酸(谷氨酰胺代谢的第一组分)在氨基酸和谷胱甘肽合成中起直接作用，并且能够进入克雷布斯循环用于能量产生(Carr等人，J.Immunol.[免疫学杂志]，2010)。促分裂原诱导的T细胞增殖和细胞因子产生需要高水平的谷氨酰胺代谢，因此抑制谷氨酰胺酶可以作为免疫调节的手段。在多发性硬化(一种炎性自身免疫疾病)中，活化的小胶质细胞表现出上调的谷氨酰胺酶并释放增加的细胞外谷氨酸水平。谷氨酰胺水平通过败血症、损伤、烧伤、手术和耐力运动降低(Calder等人，Amino Acids[氨基酸]，1999)。这些情况使个体处于免疫抑制的风险中。事实上，一般来说，谷氨酰胺酶基因表达和酶活性在T细胞活性期间都增加。在骨髓移植后给予谷氨酰胺的患者导致较低的感染水平和减少的移植物抗宿主病(克罗塞(Crowther)，营养学会论文集(Proc Nutr Soc)，2009)。T细胞增殖和活化涉及许多免疫性疾病，例如炎性肠病、克罗恩病、败血症、牛皮癣、关节炎(包括类风湿性关节炎)、多发性硬化、移植物宿主病、感染、狼疮和糖尿病。在本发明的一个实施例中，本文所述的化合物可用于治疗或预防免疫性疾病。癌症 [0137] 在一些实施例中，本披露的化合物和药物组合物可用于治疗或预防癌症。 [0138] 除了作为蛋白质合成的基本结构单元之外，已经显示氨基酸有助于对生长和分裂细胞关键的许多过程，并且这对于癌细胞尤其如此。癌症的几乎所有定义包括参考失调增殖。许多关于癌症中谷氨酰胺代谢的研究表明许多肿瘤是狂热的谷氨酰胺消费者(Souba,Ann.Surg.,1993；Collins等人，J.Cell.Physiol.[细胞生理学杂志],1998；Medina,J.Nutr.,2001；Shanware等人，J.Mol.Med.[分子医学],2011)。本发明的一个实施例是本文所述的化合物用于治疗癌症的用途。 [0139] 在一些实施例中，本披露的化合物可用于预防或治疗癌症，其中所述癌症是以下各项中的一种或变体：急性淋巴细胞性白血病(ALL)，急性髓性白血病(AML)，肾上腺皮质癌，艾滋病相关癌症(卡波西肉瘤(Kaposi Sarcoma)和淋巴瘤)，肛门癌，阑尾癌，非典型畸胎样/横纹肌样瘤，基底细胞癌，胆管癌(包括肝外)，膀胱癌，骨癌(包括骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤)，脑肿瘤(例如星形细胞瘤，脑和脊髓肿瘤，脑干胶质细胞瘤，中枢神经系统非典型畸胎样/横纹肌样瘤，中枢神经系统胚胎性肿瘤，颅咽管瘤，成室管膜细胞瘤，室管膜瘤，成神经管细胞瘤，髓上皮瘤，中级分化的松质实质肿瘤，幕上原始神经外胚层肿瘤和松果体母细胞瘤)，乳腺癌，支气管癌，伯基特淋巴瘤(Burkitt Lymphoma)，基底细胞癌，胆管癌(包括肝外)，膀胱癌，骨癌(包括骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤)，类癌瘤，原发灶不明的转移癌，中枢神经系统(如非典型畸胎样/横纹肌样瘤，胚胎性肿瘤和淋巴瘤)，宫颈癌，儿童癌症，脊索瘤，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，慢性髓性白血病(CML)，慢性骨髓增殖性疾病，结肠癌，结肠直肠癌，颅咽管瘤,原发性皮肤的T细胞淋巴瘤蕈样真菌病和塞加里综合症，胆管、胆汁(肝外)、导管原位癌(DCIS)，胚胎性肿瘤(中枢神经系统)，子宫内膜癌，成室管膜细胞瘤，室管膜瘤，食管癌，鼻腔神经胶质瘤，尤文肉瘤家族肿瘤(Ewing Sarcoma Family of Tumors)，颅外生殖细胞肿瘤，性腺外生殖细胞肿瘤，肝外胆管癌，眼癌(如眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤)，骨纤维组织细胞瘤(包括恶性骨肉瘤)胆囊癌症，胃部(胃)癌，胃肠道类癌肿瘤，胃肠道间质肿瘤(GIST)，生殖细胞肿瘤(颅外，外阴，卵巢)，妊娠滋养细胞肿瘤，神经胶质瘤，毛细胞白血病，头颈癌，心脏癌症，肝细胞(肝)癌，组织细胞增多症，朗格汉斯细胞，霍奇金淋巴瘤，下咽癌，眼内黑色素瘤，胰岛细胞肿瘤(内分泌，胰腺)，卡波西肉瘤(Kaposi Sarcoma)，肾脏(包括肾细胞)，朗格汉斯细胞组织细胞增多症(Langerhans Cell Histiocytosis)，喉癌，白血病(包括急性淋巴细胞白血病(ALL)，急性髓性白血病(AML)，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，慢性粒细胞性白血病(CML)，毛细胞)，唇癌和口腔癌，肝癌(原发)，小叶原位癌(LCIS)，肺癌(非小细胞和小细胞)，淋巴瘤(艾滋病相关，伯基特，皮肤的T细胞(蕈样真菌病和塞加里综合征)，霍奇金，非霍奇金，原发性中枢神经系统(CNS)，巨球蛋白血症，瓦尔登斯特伦病 男性乳癌，骨恶性纤维组织细胞瘤和骨肉瘤，成神经管细胞瘤，髓上皮瘤，黑色素瘤(包括眼内(眼))，梅克尔细胞癌(Merkel Cell Carcinoma)，间皮瘤(恶性)，具隐匿性原发灶的转移性鳞状颈癌，涉及NUT基因的中线道癌，嘴癌，多发性内分泌腺瘤，多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤，蕈样真菌病，骨髓增生异常综合征，骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤，粒细胞性白血病,慢性粒细胞白血病(CML)，髓性白血病，急性髓性白血病(AML)，骨髓瘤和多发性骨髓瘤，骨髓增生性疾病(慢性)，鼻腔及副鼻窦癌，鼻咽癌，成神经细胞瘤，非霍奇金淋巴瘤，非小细胞肺癌，口癌,口腔癌，唇,口咽癌，骨肉瘤和骨恶性纤维组织细胞瘤，卵巢癌(如上皮，生殖细胞肿瘤，和低恶性潜能肿瘤)，胰腺癌(包括胰岛细胞肿瘤)，乳头瘤样增生,副神经节瘤，副鼻窦和鼻腔癌，甲状旁腺癌，阴茎癌，鼻咽癌，嗜铬细胞瘤，中级分化的松质实质肿瘤，松果体母细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤，垂体肿瘤，浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤，胸膜肺母细胞瘤，妊娠期乳腺癌，原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤，前列腺癌，直肠癌，肾细胞(肾脏)癌，肾盂和输尿管，移行细胞癌，成视网膜细胞瘤，横纹肌肉瘤，唾液腺癌，肉瘤(如尤文肉瘤家族肿瘤，卡波西、软组织、子宫肿瘤)，塞加里综合征(Sézary Syndrome)，皮肤癌(例如黑色素瘤，梅克尔细胞癌，非黑色素瘤)，小细胞肺癌，小肠癌，软组织肉瘤，鳞状细胞癌，具隐匿性原发灶的鳞状颈癌，转移性胃(胃部)癌，幕上原始神经外胚层肿瘤，T细胞淋巴瘤(皮肤的，蕈样真菌病和塞加里综合征)，睾丸癌，咽喉癌，胸腺癌，甲状腺癌，肾盂和输尿管癌，移行细胞癌，滋养细胞肿瘤(妊娠)，未知原发灶的、童年异常癌症，输尿管和肾盂癌，移行细胞癌，尿道癌症、子宫癌，子宫内膜肉瘤，子宫肉瘤，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症( Macroglobulinemia)或威尔姆氏瘤 (Wilms Tumor)。 [0140] 在某些实施例中，待治疗的癌症是对T细胞具有特异性的癌症，例如T细胞淋巴瘤和淋巴母细胞性T细胞白血病。 [0141] 在一些实施例中，本文所述的方法被用于治疗疾病病症，该方法包括向对其有需要的受试者给予治疗有效量的具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中该病症是已发展成对化疗药物和/或电离辐射产生抗性的癌症。组合物与组合疗法 [0142] 本发明的化合物可单独或与其他药学活性化合物组合用于治疗(例如)先前在上文描述的那些病症。本发明的一种或多种化合物与一种或多种其他药学活性化合物可同时(以相同的剂型或以不同的剂型)或顺序给予。相应地，在一个实施例中，本发明包括通过给予受试者治疗有效量的本发明的一种或多种化合物和一种或多种另外的药学活性化合物来治疗病症的方法。 [0143] 在另一个实施例中，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括一种或多种本发明的化合物、一种或多种另外的药学活性化合物和药学上可接受的载体。 [0144] 在另一个实施例中，该一种或多种另外的药学活性化合物是选自下组，该组由以下各项组成：抗癌药物、抗增生药物、和抗炎症药物。 [0145] 本文所述的GLS1抑制剂组合物还任选地与其他治疗试剂组合使用，这些其他治疗试剂是根据他们对于待治疗的病症的治疗值来选择的。通常，本文所述的化合物和在应用组合疗法的实施例中的其他药剂没有必要以相同的药物组合物来给予，并且因为不同的物理和化学性质任选地通过不同途径来给予。通常，首次给予是根据已建立的方案来进行，然后是基于观察到的效果，剂量、给予的模式和给予的时间随后进行改变。在某些情况下，如本文所述，适合将GLS1抑制剂化合物与其他治疗剂组合给予。仅通过实例，GLS1抑制剂的治疗有效性通过给予另一种也具有治疗益处的治疗剂(其也包括治疗方案)被提高。不管正在治疗何种疾病、障碍或病症，患者经历的整体益处是两种治疗剂的简单加和或患者经历增加的(即，协同)益处。可替代地，如果在此披露的化合物具有副作用，则可能适当的是给予药物以减少副作用；或者本文所述化合物的治疗效果可通过给予佐剂来增强。 [0146] 当药物在组合治疗中使用时，有效的剂量会改变。用实验方法测定在组合治疗方案中使用的药物和其他药剂的治疗有效剂量的方法被记录称为方法论。组合治疗进一步包括在不同的时间启动和停止以辅助患者的临床管理的周期治疗。在任何情况下，多种治疗剂(其中之一是本文所述的GLS1抑制剂)可以任何顺序给予，或同时给予。如果是同时给予，多种治疗剂任选地以单一、统一的形式或以多种形式(仅通过举例的方式，作为单一丸剂或作为两种分开的丸剂)来提供。 [0147] 在一些实施例中，治疗剂中的一种以多剂量给出，或者两者都以多剂量给出。如果不是同时给予，多剂量之间的时间任选地在大于0周到小于12周之间变化。 [0148] 此外，组合方法、组合物和配制品不限于仅使用两种试剂，也设想使用多种治疗组合。可以理解的是，治疗、预防和改善一种或多种病症(从中观察到缓解的病症)的剂量方案根据各种因素任选地改变。这些因素包括受试者患有的障碍，以及受试者的年龄、体重、性别、饮食、和医疗状况。因此，在一些实施例中，实际应用的剂量方案变化很大，从而偏离本文所述的剂量方案。 [0149] 本文披露的构成组合疗法的药物制剂是任选的组合剂型或旨在基本上同时给予的分开的剂型。构成组合疗法的药物制剂任选地依次给予，其中任一药剂通过要求两步给予的方案来给予。两步给予方案任选地要求活性药剂的顺序给予或分开的活性剂的间隔给予。多次给予步骤之间的时间范围从几分钟到几个小时，取决于各药物制剂的特性，例如药物制剂的效力、溶解度、生物利用度、血浆半衰期和动力学情况。 [0150] 在另一个实施例中，GLS1抑制剂任选地与给患者提供另外的益处的程序组合使用。GLS1抑制剂和任何另外的疗法任选地在疾病或病症的发生之前、过程中或之后给予，并且给予包含GLS1抑制剂的组合物的时间在一些实施例中是变化的。因此，例如，GLS1抑制剂用作预防，并且对倾向发展病症或疾病的受试者连续给予以防止疾病或病症的发生。GLS1抑制剂和组合物任选地给予症状发作期间或症状刚刚发作之后的受试者。虽然已经示出和在本文所述了本发明的实施例，仅通过举例的方式来提供这样的实施例对本领域技术人员将是显而易见的。许多变化、改变和替换将会对本领域的技术人员发生而不脱离本发明的范围。应当理解的是，在本发明的一些实施例中，本文所描述的实施例的各种替代在实施本发明中应用。 [0151] GLS1抑制剂可以与抗癌药物组合使用，这些抗癌药物包括但不限于以下种类：烷化剂、抗代谢物、植物生物碱和萜类化合物、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒性抗生素、血管生成抑制剂和酪氨酸激酶抑制剂。 [0152] 针对在癌症和肿瘤疾病中的使用，GLS1抑制剂可以最优地与以下抗癌剂的非限制性实例中的一种或多种一起使用：1)烷化剂，包括但不限于：卡莫司汀、苯丁酸氮芥(LEUKERAN)、顺铂(PLATIN)、卡铂(PARAPLATIN)、奥沙利铂(ELOXATIN)、链脲菌素(ZANOSAR)、白消安(MYLERAN)、达卡巴嗪、异环磷酰胺、洛莫司汀(CCNU)、美法仑(ALKERAN)、丙卡巴肼(MATULAN)、替莫唑胺(TEMODAR)、噻替派、和环磷酰胺(ENDOXAN)； 2)抗代谢药，包括但不限于：克拉屈滨(LEUSTATIN)、巯嘌呤(PURINETHOL)、硫鸟嘌呤、喷司他丁(NIPENT)、阿糖胞苷(cytarabine，ARA-C)、吉西他滨(GEMZAR)、氟脲嘧啶(5-FU，CARAC)、卡培他滨(XELODA)、亚叶酸(FUSILEV)、甲氨蝶呤(RHEUMATREX)、雷替曲塞； 3)抗有丝分裂剂，其通常是植物生物碱和萜类化合物、或其衍生物，包括但不限于：紫杉烷例如多西他赛(TAXITERE)和紫杉醇(ABRAXANE，TAXOL)；长春花生物碱例如长春新碱(ONCOVIN)、长春花碱、长春地辛、和长春瑞滨(NAVELBINE)； 4)拓扑异构酶抑制剂，包括但不限于：喜树碱(CTP)、伊立替康(CAMPTOSAR)、拓扑替康(HYCAMTIN)、替尼泊苷(VUMON)、和依托泊苷(EPOSIN)； 5)细胞毒性抗生素，包括但不限于：放线菌素D(dactinomycin，COSMEGEN)、博莱霉素(BLENOXANE)、阿霉素(ADRIAMYCIN)、柔红霉素(CERUBIDINE)、表柔比星(ELLENCE)、氟达拉滨(FLUDARA)、伊达比星、丝裂霉素(MITOSOL)、米托蒽醌(NOVANTRONE)、普卡霉素； 6)芳香酶抑制剂，包括但不限于：氨鲁米特、阿那曲唑(ARIMIDEX)、来曲唑(FEMARA)、伏氯唑(RIVIZOR)、依西美坦(AROMASIN)； 7)血管生成抑制剂，包括但不限于染料木黄酮、舒尼替尼(SUTENT)和贝伐单抗 (AVASTIN)； 8)抗类固醇类药物和抗雄激素类例如氨鲁米特(CYTADREN)、比卡鲁胺(CASODEX)、环丙孕酮、氟他胺(EULEXIN)、尼鲁米特(NILANDRON)； 9)酪氨酸激酶抑制剂，包括但不限于伊马替尼(GLEEVEC)、埃罗替尼(TARCEVA)、拉帕替尼(lapatininb)(TYKERB)、索拉非尼(NEXAVAR)、和阿西替尼(INLYTA)； 10)mTOR抑制剂，例如依维莫司(everolimus)、坦罗莫司(temsirolimus)(TORISEL)、和西罗莫司(sirolimus)； 11)单克隆抗体例如曲妥珠单抗(HERCEPTIN)和利妥昔单抗(RITUXAN)； 12)其他药剂，例如安吖啶；卡介苗(B-C-G)；布舍瑞林(ETILAMIDE)；氯喹(ARALEN)；氯膦酸盐、帕米膦酸二钠和其他的二膦酸盐；秋水仙碱；脱甲绿胶酶素；二氯乙酸盐；雌莫司汀；非格司亭(NEUPOGEN)；氟氢可地松(FLORINEF)；戈舍瑞林(ZOLADEX)；干扰素；亚叶酸；亮丙瑞林(LUPRON)；左旋咪唑；氯尼达明；美司钠；二甲双胍；米托坦(o,p'-DDD，LYSODREN)；诺考达唑；奥曲肽(SANDOSTATIN)；哌立福辛；卟菲尔钠(尤其是与光线疗法和放射疗法结合)； 苏拉明；三苯氧胺；二茂基二氯化钛；维甲酸；合成类固醇例如氟甲睾酮(HALOTESTIN)；雌激素类例如雌二醇、己烯雌(DES)、和双烯雌酚；孕酮例如醋酸甲羟孕酮(MPA)和甲地孕酮；和睾酮。 [0153] 当受试者正在遭受或具有遭受炎性病症的风险时，本文所述的GLS1抑制剂化合物可以任选地与治疗炎性病症的一种或多种药剂或方法以任意组合一起使用。用于治疗自身免疫和/或炎性病症的治疗剂/治疗，包括(但不限于)以下实例：1)皮质类固醇，包括(但不限于)可的松、地塞米松和甲泼尼龙； 2)非类固醇抗炎药(NSAIDs)，包括(但不限于)布洛芬、萘普生、对乙酰氨基酚、阿司匹林、非诺洛芬(NALFON)、氟比洛芬(ANSAID)、酮洛芬、奥沙普秦(DAYPRO)、双氯芬酸钠(VOLTAREN)、双氯芬酸钾(CATAFLAM)、依托度酸(LODINE)、消炎痛(INDOCIN)、酮咯酸(TORADOL)、舒林酸(CLINORIL)、托美丁(TOLECTIN)、甲氯芬那(MECLOMEN)、甲芬那酸(PONSTEL)、萘丁美酮(RELAFEN)和吡罗昔康(FELDENE)； 3)免疫抑制剂，包括(但不限于)甲氨蝶呤(RHEUMATREX)、来氟米特(ARAVA)、硫唑嘌呤(IMURAN)、环孢菌素(NEORAL，SANDIMMUNE)、他克莫司和环磷酰胺(CYTOXAN)； 4)CD20阻断剂，包括(但不限于)利妥昔单抗(RITUXAN)； 5)肿瘤坏死因子(TNF)受体阻滞剂，包括(但不限于)依那西普(ENBREL)、英夫利昔单抗(REMICADE)和阿达木单抗(HUMIRA)； 6)白介素-1受体拮抗剂，包括(但不限于)阿那白滞(KINERET)； 7)白介素-6抑制剂，包括(但不限于)托珠单抗(ACTEMRA)； 8)白细胞介素-17抑制剂，包括(但不限于)AIN457； 9)Janus激酶抑制剂，包括(但不限于)托法替尼；和 10)脾酪氨酸激酶抑制剂，包括(但不限于)福他替尼。 化合物合成 [0154] 本发明的化合物可以使用在下面详述的通用合成方案和实验程序中阐明的方法来制备。通用合成方案和实验程序是为了说明的目的而呈现，而不旨在是限制性的。用于制备本发明化合物的起始材料是可商购的或可以使用本领域已知的常规方法制备。缩写列表 [0155] Ac2O＝乙酸酐；AcCl＝乙酰氯；AcOH＝乙酸；AIBN＝偶氮二异丁腈；aq.＝水溶液；BAST＝双(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫；Bu3SnH＝三丁基氢化锡；CD3OD＝氘代甲醇；CDCl3＝氘代氯仿；CDI＝1,1′-羰基二咪唑；DAST＝(二乙基氨基)三氟化硫；DBU＝1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯；DCM＝二氯甲烷；DEAD＝偶氮二甲酸二乙酯；DIBAL-H＝二异丁基氢化铝；DIEA＝DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺；DMAP＝4-二甲氨基吡啶；DMF＝N,N-二甲基甲酰胺；DMSO-d6＝氘代二甲亚砜；DMSO＝二甲亚砜；DPPA＝二苯基磷酰基叠氮化物；EDC.HCl＝EDCI.HCl＝1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐；Et2O＝乙醚；EtOAc＝乙酸乙酯； EtOH＝乙醇；h＝小时；HATU＝2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐甲铵；HMDS＝六甲基二硅氮烷；HOBT＝1-羟基苯并三唑；i-PrOH＝异丙醇；LAH＝氢化铝锂；LDA＝二异丙基酰胺锂；LiHMDS＝双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂；MeCN＝乙腈；MeOH＝甲醇；MP-碳酸酯树脂＝大孔三乙基铵甲基聚苯乙烯碳酸酯树脂；MsCl＝甲磺酰氯；MTBE＝甲基叔丁基醚；n-BuLi＝正丁基锂；NaHMDS＝双(三甲基甲硅烷基)氨基钠；NaOMe＝甲醇钠； NaOtBu＝叔丁醇钠；NBS＝N-溴代琥珀酰亚胺；NCS＝N-氯代琥珀酰亚胺；NMP＝N-甲基-2-吡咯烷酮；Pd(Ph3)4＝四(三苯基膦)钯(0)；Pd2(dba)3＝三(二亚苄基丙酮)二钯(0)；PdCl2(PPh3)2＝双(三苯基膦)二氯化钯(II)；PG＝保护基团；制备型-HPLC＝制备型高效液相色谱；PMBCl＝对甲氧基苄基氯；PyBop＝(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基膦六氟磷酸盐；Pyr＝吡啶；RT＝室温；RuPhos＝2-二环己基膦基-2′,6′-二异丙氧基联苯；sat.＝饱和的；ss＝饱和溶液；t-BuOH＝叔丁醇；T3P＝丙基膦酸酐；TEA＝Et3N＝三乙胺；TFA＝三氟乙酸；TFAA＝三氟乙酸酐；THF＝四氢呋喃；Tol＝甲苯；TsCl＝甲苯磺酰氯；Xantphos＝4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽；X-Phos＝2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯。 制备化合物的通用方法 [0156] 以下方案可以用来实践本发明。可以并入另外的结构基团，包括但不限于在说明书中其他地方定义的并且在方案中描述的化合物中未显示的那些，以给出本文披露的各种化合物，或在使用本领域技术人员所熟知的技术进行进一步处理之后可以转化为本发明的化合物的中间体化合物。例如在某些实施例中，方案中所述的结构中的A环(其中A是杂芳环)可以被本文定义的各种基团取代。 [0157] 非限制性实例包括以下化合物及其药学上可接受的盐。实例1：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪- 3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺 步骤1：3,6-二碘哒嗪。 [0158] 将3,6-二氯哒嗪(60.00g，402.7mmol)和55％碘化氢水溶液(51.51g，402.7mmol，30.30mL)的混合物在90℃搅拌12h。将固体通过过滤分离并且然后在饱和NaHCO3水溶液(300mL)中悬浮。将固体通过过滤分离，用石油醚(2x 200mL)洗涤以给出呈黄色固体的标题化合物，其不经进一步纯化使用(120.0g，90％)。MS(ES+)C4H2I2N2要求：332，发现：333[M+H]+。 步骤2：二-叔-丁基2-(6-碘哒嗪-3-基)丙二酸酯。 [0159] 向在THF(750mL)中的NaH(27.12g，678.0mmol，60％在矿物油中)的悬浮液中添加二-叔-丁基丙二酸酯(97.75g，452.0mmol，100.8mL)并且将混合物在28℃搅拌15min。添加3,6-二碘哒嗪(75.00g，225.99mmol，)并且将反应混合物回流搅拌8h。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(500mL)淬灭并用1:1EtOAc/石油醚(3x 500mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过SiO2凝胶色谱法(10:1石油醚/EtOAc)纯化以给出呈白色固体的标题化合物(83.00g，87％)。MS(ES+)C15H21IN2O4要求：420，发现：421[M+H]+。 步骤3：(R)-1-叠氧基-3-(苄氧基)丙烷-2-醇。 [0160] 向在MeOH(39.5ml)和水(5.92ml)中的(R)-2-((苄氧基)甲基)环氧乙烷(2.423ml，15.89mmol)和NH4Cl(1.70g，31.8mmol)的溶液中添加叠氮化钠(5.17g，79.0mmol)并且将所得的混合物在RT搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩并且将残余物在EtOAc(50mL)和水(60mL)之间分配。将这两层分离并且将该水性层用EtOAc(3x 50mL)萃取。合并有机层，经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩，以给出呈无色油状物的标题化合物(3.01g，91％)。MS(ES+)C10H13N3O2要求：207，发现：208[M+H]+。 步骤4：(R)-1-(3-(苄氧基)-2-羟基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸叔丁酯。 [0161] 向在DCM(58.1ml)中的(R)-1-叠氮基-3-(苄氧基)丙-2-醇(3.01g，14.5mmol)、叔-丁基丙炔酸酯(2.393ml，17.43mmol)、DIEA(0.253ml，1.45mmol)和AcOH(0.083ml，1.45mmol)的溶液中添加CuI(0.138g，0.726mmol)并且将所得的混合物在RT搅拌过夜。将SiO2凝胶(10g)添加至搅拌的混合物中并且将所得的悬浮液过滤并且用DCM(20mL)和EtOAc(20mL)洗涤。在减压下浓缩滤液，以给出呈橙色油状物的粗标题化合物，将其不经进一步纯化使用(3.95g，82％)。MS(ES+)C17H23N3O4要求：333，发现：334[M+H]+。 步骤5：(S)-1-(3-(苄氧基)-2-氟丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸叔丁酯。 [0162] 向0℃的(R)-1-(3-(苄氧基)-2-羟基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸叔丁酯(3.95g，11.8mmol)和吡啶(1.909mL，23.70mmol)在DCM(23.70mL)中的溶液中添加DAST(3.13mL，23.7mmol)。将所得混合物在RT搅拌2.5h，然后通过SiO2凝胶塞过滤，用DCM(50mL)冲洗。将滤液在减压下浓缩，将残余物吸附到Celite上，并且通过SiO2色谱法(0至50％EtOAc的己烷溶液)纯化，以给出呈褐色结晶固体的标题化合物(1.781g，45％产率)。MS(ES+)C17H22FN3O3要求：335，发现：336[M+H]+。 步骤6：(S)-1-(2-氟-3-羟基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸叔丁酯。 在N2气氛下，在反应容器中添加(S)-1-(3-(苄氧基)-2-氟丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸叔丁酯(1.78g，5.31mmol)和EtOAc(53.1mL)。将溶液用N2吹扫持续10min并且然后在仍然流动的N2中，添加碳负载的Pd(OH)2(0.746g，1.06mmol)。搅拌所得的悬浮液，同时用H2吹扫 2min。将反应混合物在H2的气氛中在1atm搅拌12h，然后用N2吹扫，通过Celite过滤并且在减压下浓缩以给出呈淡黄色晶体的标题化合物(1.32g，101％产率)。MS(ES+)C10H16FN3O3要求： + 245，发现：246[M+H]。 步骤7：(S)-1-(2-氟-3-(甲苯磺酰氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸叔丁酯。 [0163] 向在DCM(26.9ml)中的(S)-1-(2-氟-3-羟基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸叔丁酯(1.32g，5.38mmol)和DMAP(0.986g，8.07mmol)的溶液中添加4-甲苯-1-磺酰氯(1.23g，6.46mmol)，同时将溶液通过水浴维持在RT。将所得的混合物在RT搅拌1.5h，然后用EtOAc(100mL)稀释并且用饱和NH4Cl水溶液(2x 40mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩，以给出粗的标题化合物，将其不经进一步纯化使用(1.803g，84％)。MS(ES+)C17H22FN3O5S要求：399，发现：400[M+H]+。 步骤8：(S)-1-(2-氟-3-碘丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸叔丁酯。 [0164] 向在丙酮(26.5ml)中的(S)-1-(2-氟-3-(对甲苯磺酰氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸叔丁酯(2.12g，5.31mmol)的溶液中添加碘化钠(0.796g，5.31mmol)并且将所得的混合物在80℃搅拌3h。添加另外的碘化钠(1.6g)并且将该混合物在90℃搅拌2h。将混合物冷却至RT，然后用1:1的EtOAc/己烷(150mL)稀释并且依次用H2O(2x 50mL)和饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物吸收在Celite上并且通过SiO2凝胶色谱法(0至50％EtOAc/己烷)纯化以给出呈白色结晶固体的标题化合物(1.71g，91％)。MS(ES+)C10H15FIN3O2要求：355，发现：356[M+H]+。步骤9：(R)-2-(3-(4-(叔丁氧基羰基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-氟丙基)-2-(6-碘哒嗪-3-基)丙二酸二叔丁酯。 [0165] 将在小瓶中的碳酸钾(0.412g，2.98mmol)、二-叔-丁基2-(6-碘哒嗪-3-基)丙二酸酯(1.25g，2.98mmol)和(S)-1-(2-氟-3-碘丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸叔丁酯(1.00g，2.82mmol)的混合物脱气并且然后添加DMF(9.39ml)。将混合物脱气并用氮气回填三个循环，并且然后在25℃搅拌80小时。用乙酸乙酯和己烷(1:1，200mL)稀释混合物并用水洗涤两次(100mL+100mL)。将合并的水层用乙酸乙酯、己烷(1:1，100mL)萃取。浓缩合并的有机层，添加盐水并将有机层在减压下浓缩。通过SiO2凝胶色谱法(5％至60％的在己烷中的EtOAc)纯化残余物以给出呈黄色液体的标题化合物(1.36g，74.6％产率)。MS(ES+)C25H35FIN5O6要+ 求：647，发现：648[M+H]。 步骤10：2,6-二氯-4-(3,3-二氟环丁氧基)吡啶。 [0166] 在0℃下向NaH(8.88g，60％在矿物油中，222mmol)在THF(800ml)中的悬浮液中在10min滴加3,3-二氟环丁醇(20g，185mmol)。加完后(鼓泡迅速停止)立即分批添加2,6-二氯-4-硝基吡啶(35.7g，185mmol)，并将所得混合物在0℃搅拌1h。添加饱和NH4Cl水溶液(200mL)和水(800ml)，并且将层分离。将该水层用EtOAc(3x 500mL)萃取，并将这些合并的有机层用饱和水性NaCl洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过SiO2凝胶色谱法(在己烷中的0％至8％EtOAc)纯化，以给出呈白色结晶固体的标题化合物(45.0g， 96％)。MS(ES+)C9H7Cl2F2NO要求：253，发现：254[M+H]+。 步骤11：2-氯-4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶。 [0167] 在0℃下向2,6-二氯-4-(3,3-二氟环丁氧基)吡啶(45g，177mmol)、THF(800ml)、NMP(200ml)和乙酰丙酮铁(1.877g，5.31mmol)的溶液中滴加甲基溴化镁(3M在乙醚中，77ml，230mmol)，并且将所得混合物在0℃下搅拌0.5h。将反应物用饱和NH4Cl水溶液(100mL)在0℃下淬灭，添加水(900ml)，并且将层分离。将该水层用EtOAc(3x 500mL)萃取，并将这些合并的有机层用饱和水性NaCl洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过SiO2凝胶色谱法纯化(在己烷中的0％至20％EtOAc)以给出呈无色液体的标题化合物(36.5g，88％)。MS(ES+)C10H10ClF2NO要求：233，发现：234[M+H]+。 步骤12：2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酸乙酯。 [0168] 将2-氯-4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶(33.0g，141mmol)、(2-乙氧基-2-氧代乙基)溴化锌(II)(0.5M在THF中，706ml，353mmol)、Pd2(dba)3(6.47g，7.06mmol)和XPhos(3.37g，7.06mmol)的脱气溶液在50℃下搅拌1h。允许将反应混合物冷却至RT，并且添加饱和NH4Cl水溶液(100mL)和水(900mL)。通过过滤去除沉淀，并且将滤液层分离。将该水层用EtOAc(3x 500mL)萃取，并将这些合并的有机层用饱和水性NaCl洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过SiO2凝胶色谱法纯化(在己烷中的0至60％EtOAc)以给出呈黄色液体的标题化合物(27.8g，69％)。MS(ES+)C14H17F2NO3要求：285，发现：286[M+H]+。步骤13：2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰胺。 [0169] 在耐压瓶中将2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酸乙酯(27.8g，97.0mmol)和NH3/MeOH(7M，557ml，3898mmol)的溶液在85℃搅拌20h。允许将反应混合物冷却至RT，然后在减压下浓缩。将所得固体与乙醚研磨并且通过过滤分离以给出为灰白色固体的标题化合物(22.4g，90％)。MS(ES+)C12H14F2N2O2要求：256，发现：257[M+H]+。 步骤14：(R)-2-(3-(4-(叔丁氧基羰基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-氟丙基)-2-(6-(-2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪-3-基)丙二酸二叔丁酯。 [0170] 将(R)-二-叔-丁基2-(3-(4-(叔-丁氧羰基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-氟丙基)-2-(6-碘哒嗪-3-基)丙二酸酯(42.4g，65.6mmol)、2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶- 2-基)乙酰胺(14.0g，54.6mmol)、碳酸铯(35.6g，109mmol)、Xantphos(6.32g，10.9mmol)和氯化烯丙基钯二聚物(1.00g，2.73mmol)在二噁烷(300ml)中的脱气的溶液在70℃搅拌16h。 使反应混合物冷却至RT，并且然后过滤并将滤液在减压下浓缩。将残余物通过SiO2凝胶色谱法(在DCM中的0至3％MeOH)以给出呈泡沫状黄色固体的标题化合物(36.5g，86％)。MS(ES+)C37H48F3N7O8要求：775，发现：776[M+H]+。 步骤15：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸。 [0171] 将在二噁烷溶液(4.0M，696.0ml，2784mmol)中的在HCl中的(R)-二-叔-丁基2-(3-(4-(叔-丁氧基羰基)-1H-1,2,3-三唑-1-yl)-2-氟丙基)-2-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰胺基)哒嗪-3-基)丙二酸酯(36.0g，46.4mmol)的溶液在70℃搅拌16h。形成了白色沉淀。允许反应混合物冷却至RT。通过过滤分离沉淀物，用EtOAc洗涤，并且真空干燥以给出呈灰白色固体的标题化合物，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ES+)C23H24F3N7O4要求：519，发现：520[M+H]+。步骤16：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺 [0172] 在0℃，向在前一步骤中制备的粗(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰胺基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸盐酸盐(假定为46.4mmol)在DMF(200ml)中的溶液中添加在THF(2.0M，27.8ml，55.7mmol)中的HATU(17.64g，46.4mmol)、DIEA(40.5ml，232mmol)和甲胺,并且将所得混合物在20℃搅拌1h。将挥发物在减压下去除。添加水(1000mL)和DCM(500ml)，并且将各层分离。将水相用DCM(3× 300mL)萃取，并且将合并的有机层用饱和NaCl水溶液洗涤、用MgSO4干燥、过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过SiO2凝胶色谱法(在DCM中的0至8％MeOH)以给出呈白色固体的标题化合物(16.8g，68.0％产率)。MS(ES+)C24H27F3N8O3要求：532，发现：533[M+H]+。1H NMR(DMSO-d6)δ11.30(s,1H),8.51(s,1H),8.47(q,J＝4.4,1H),8.22(d,J＝9.1Hz,1H),7.60(d,J＝ 9.3Hz,1H),6.79(d,J＝2.5Hz,1H),6.72(d,J＝2.5Hz,1H),5.09-4.96(m,1H),4.90-4.70(m,3H),3.87(s,2H),3.28-3.18(m,2H),3.08-2.98(m,2H),2.76(d,J＝4.9Hz,3H),2.75- 2.63(m,2H),2.39(s,3H),2.20-1.95(m,2H)。 步骤17：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺二盐酸盐。 [0173] 在0℃，向(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰胺基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(12.71g，23.87mmol)在MeOH(20ml)和DCM(60ml)的溶液中添加在二噁烷(4.0M，11.93ml，47.70mmol)中的HCl，并且将所得的混合物搅拌5min，然后在减压下浓缩。将残余物在MeCN和水中重新溶解，冷冻干燥，并且将所得的固体用EtOAc研磨并且在真空中干燥，以给出呈白色固体的标题化合物(14.03g，97％)。MS(ES+)C24H27F3N8O3要求：532，发现：533[M+H]+。1H NMR(DMSO-d6)δ11.66(s,1H),8.53(s,1H),8.47(q,J＝5.3,1H),8.23(d,J＝9.1Hz,1H),7.73(d,J＝9.5Hz,1H),7.44(d,J＝2.0Hz,1H),7.39(d,J＝2.0Hz,1H),4.96-5.11(m,2H),4.67-4.86(m,2H),4.36(s, 2H),3.34(m,2H),3.07(m,2H),2.87(m,2H),2.76(d,J＝4.9Hz,3H),2.68(s,3H),2.24-1.95(m,2H)。在具有卢克斯纤维素4柱(Lux Cellulose 4 column)(4.6X 150毫米，5微米，1mL/min)的日本岛津公司卓越HPLC系统上使用水:乙腈(50:50)的流动相分析标题化合物(2mg/mL，每次注射10μL)，并且显示ee>98％。保留时间：11.3min。 [0174] 以上披露的实例1也可以通过方案2制备。方案2： 实例2：(S)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪- 3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺二盐酸盐 [0175] 按照与实例1相同的方式制备。MS(ES+)C24H27F3N8O3要求：532，发现：533[M+H]+。在具有卢克斯纤维素4柱(Lux Cellulose 4 column)(4.6X 150毫米，5微米，1mL/min)的日本岛津公司卓越HPLC系统上使用水:乙腈(50:50)的流动相分析标题化合物(2mg/mL，每次注射10μL)，并且显示ee>98％。保留时间：9.3min。实例3：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪- 3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺盐酸盐 [0176] 在RT向在二噁烷(1.8mL)中的(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰胺基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(20mg，0.038mmol)的溶液中滴加HCl(37.6μl，0.038mmol，1.00M)水溶液。立即形成了白色沉淀。将所得混合物在RT搅拌15min。将混合物用Et2O(1.8mL)稀释，冷却至0℃，并且除去上清液。将剩余的固体用水(2mL)稀释以形成澄清溶液并冻干，以获得呈白色固体的标题化合物(19mg，89％)。MS(ES+)C24H27F3N8O3·HCl要求：532，发现：533[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ15.20(br s,1H),11.55(s,1H),8.52(s,1H),8.50-8.44(m,1H),8.17(d,J＝9.1Hz, 1H),7.64(d,J＝9.2Hz,1H),7.38(d,J＝21.5Hz,2H),5.11-4.95(m,2H),4.86-4.69(m,2H), 4.29(s,2H),3.37-3.30(m,2H),3.12-2.99(m,2H),2.91-2.80(m,2H),2.76(d,J＝4.5Hz, 3H),2.66(s,3H),2.21-2.07(m,1H),2.07-1.96(m,1H)。 实例4：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪- 3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺硫酸盐。 [0177] 使用实例3中的程序制备，以给出呈白色固体的标题化合物(89％)。MS(ES+)C24H27F3N8O3·H2SO4要求：532，发现：533[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ14.70(br s,1H),11.55(s,1H),8.52(s,1H),8.50-8.43(m,1H),8.17(d,J＝9.1Hz,1H),7.65(d,J＝9.1Hz, 1H),7.39(d,J＝14.5Hz,2H),5.12-4.95(m,2H),4.87-4.70(m,2H),4.24(s,2H),3.39-3.28(m,2H),3.11-2.99(m,2H),2.92-2.81(m,2H),2.76(d,J＝4.6Hz,3H),2.65(s,3H),2.22- 2.08(m,1H),2.08-1.92(m,1H)。 实例5：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪- 3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺甲磺酸盐。 [0178] 使用实例3中的程序使用MeSO3H(1.0M在CH2Cl2中)制备以给出呈白色固体的标题化合物(93％)。MS(ES+)C24H27F3N8O3·CH3SO3H要求：532，发现：533[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ14.71(br s,1H),11.53(s,1H),8.52(s,1H),8.50-8.44(m,1H),8.17(d,J＝9.1Hz,1H),7.64(d,J＝9.1Hz,1H),7.34(d,J＝17.3Hz,2H),5.12-4.96(m,2H),4.86-4.68(m,2H),4.21(s,2H),3.34-3.28(m,2H),3.10-3.00(m,2H),2.91-2.80(m,2H),2.76(d,J＝ 4.6Hz,3H),2.63(s,3H),2.30(s,3H),2.21-2.07(m,1H),2.07-1.94(m,1H)。 实例6：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪- 3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺氢溴化物。 [0179] 使用实例3中的程序制备，以给出呈白色固体的标题化合物(87％)。MS(ES+)C24H27F3N8O3·HBr要求：532，发现：533[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ14.76(br s,1H),11.56(s,1H),8.52(s,1H),8.50-8.43(m,1H),8.17(d,J＝9.2Hz,1H),7.65(d,J＝9.2Hz, 1H),7.41(d,J＝15.7Hz,2H),5.11-4.97(m,2H),4.86-4.70(m,2H),4.26(s,2H),3.39-3.29(m,2H),3.11-2.99(m,2H),2.92-2.80(m,2H),2.76(dd,J＝4.8,1.2Hz,3H),2.66(s,3H), 2.22-2.08(m,1H),2.08-1.93(m,1H)。 实例7：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪- 3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺4-甲基苯磺酸盐。 [0180] 使用实例A中的程序使用TsOH(1.0M)水溶液制备，以给出呈白色固体的标题化合物(86％)。MS(ES+)C24H27F3N8O3·TsOH要求：532，发现：533[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ14.69(br s,1H),11.54(s,1H),8.52(s,1H),8.49-8.44(m,1H),8.17(d,J＝9.1Hz,1H),7.64(d,J＝9.1Hz,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,2H),7.37(d,J＝15.9Hz,2H),7.10(dd,J＝8.1, 1.0Hz,2H),5.12-4.94(m,2H),4.88-4.68(m,2H),4.23(s,2H),3.37-3.27(m,2H),3.10- 2.99(m,2H),2.92-2.80(m,2H),2.76(d,J＝4.7Hz,3H),2.64(s,3H),2.28(s,3H),2.22- 2.07(m,1H),2.07-1.94(m,1H)。 [0181] 为了获得结晶固体，将标题化合物(5.0mg)作为浆液在EtOH(200μL)中在密封的小瓶中搅拌48h。在光学显微镜下观察，悬浮液最初溶解，并且然后缓慢地重新形成小的针状晶体。浓缩混合物，并且通过HNMR分析结晶固体，其与母体化合物相同。实例8：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰氨基)哒嗪- 3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺二盐酸盐 [0182] 向在MeOH(5mL)和DCM(15mL)中的(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰胺基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(5.00g，9.39mmol)的溶液中在0℃添加HCl(4.69ml，18.7mmol，4M在二噁烷中)。并且将所得混合物搅拌5min。将挥发物在减压下去除。将残余物重新溶于MeCN和水中并冻干以给出呈白色固体的标题化合物(5.69g，100％)。MS(ES+)C24H27F3N8O3·2HCl要求：532，发现：533[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ14.85(br s,1H),11.55(s,1H),8.52(s,1H),8.47(m,1H),8.17(d,J＝9.1Hz,1H),7.64(d,J＝9.1Hz,1H),7.39(d,J＝12.8Hz,2H),5.11-4.97(m,2H), 4.85-4.71(m,2H),4.25(s,2H),3.38-3.29(m,2H),3.10-3.00(m,2H),2.91-2.81(m,2H), 2.76(d,J＝4.7Hz,3H),2.65(s,3H),2.20-1.96(m,2H)。 实例9：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰胺基)哒嗪- 3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺的多晶型物 [0183] 多晶型物A：将标题化合物(5.00mg，9.39μmol)悬浮于50uL的丙酮中的20％水(v/v)中，并且将混合物在95℃加热10min。悬浮液变成澄清溶液，并将样品放置在RT静置结晶。在光学显微镜下观察到了形成的固体，并且发现其是非常细的毛发状针状物。 [0184] 多晶型物B：将标题化合物(5.00mg，9.39μmol)悬浮于50uL的DMSO中的10％水(v/v)中，并且将混合物在95℃加热10min。悬浮液变成澄清溶液，并将样品放置在RT静置结晶。在光学显微镜下观察到了形成的固体，并且发现其是棒状晶体。 [0185] 多晶型物C：将标题化合物(5.00mg，9.39μmol)悬浮于100uL的苯甲醚中的40％乙醇(v/v)中，并且将混合物在95℃加热10min。悬浮液变成澄清溶液，并将样品放置在RT静置结晶。在光学显微镜下观察到了形成的固体，并且发现其纤细，呈片状。实例10：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰胺基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺1:1DMSO溶剂化物 [0186] 将(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰胺基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(100mg，0.188mmol)在1mL的DMSO中的 15％水(v/v)中的悬浮液在95℃加热1min。将所得澄清溶液冷却至80℃并搅拌10min。停止搅拌并允许混合物每20min冷却10℃直至温度达到40℃。然后允许混合物冷却至RT过夜。将混合物用1mL的丙酮稀释，非常短暂地涡旋以分解悬浮液，并过滤。将收集的固体用丙酮(2x 1mL)冲洗。将固体在高真空下干燥过夜以获得呈澄清的结晶固体的标题化合物(86mg， 79％)。这种材料在光学显微镜下呈现为棒状晶体。MS(ES+)C24H27F3N8O3·DMSO要求：532，发现：533[M+H]+。1H NMR(600MHz,CD3OD)δ8.36(d,J＝9.1Hz,1H),8.34(s,1H),7.61(d,J＝ 9.2Hz,1H),6.79(d,J＝1.9Hz,1H),6.72(d,J＝1.9Hz,1H),4.90-5.15(m,1H),4.68-4.83(m,3H),3.91(s,2H),3.01-3.23(m,4H),2.92(s,3H),2.67-2.78(m,2H),2.65(s,6H),2.49(s,3H),2.24-1.99(m,2H)。 实例1游离碱和盐的物理表征 [0187] 实例1游离碱和盐通过XRPD、DSC、TGA、PLM和DVS表征。详细的程序如下列出： [0188] X射线粉末衍射(XRPD)称量约10mg测试化合物并将其均匀分布在单晶硅板上。将样品以10°/min旋转。将衍射图用Bruker D8ADVANCE使用CuKα源 以40KV的管电压和40mA的管电流运行来测量。散射角以10°/min的步进率扫描从2θ＝3°至40°。 [0189] 热重量分析(TGA)TGA在TA仪器公司的Q5000IR仪器上进行。称量约5mg测试化合物并转移到氧化铝坩埚中。将样品在50mL/min N2吹扫下，以10℃/min的速率从RT加热至400℃。 [0190] 差示扫描量热法(DSC)DSC在TA仪器公司的Q2000装置上进行。称量约1mg测试化合物并转移至带有针孔的卷曲铝盘中。将样品以10℃/min的速率从30℃加热至400℃。 [0191] 偏振光显微镜(PLM)将作为粉末的测试化合物的量分散在硅油中，并且用配备有500万像素CCD、10X目镜和选自20X和50X的物镜的Nikon LV100POL检查形态。选择适当的物镜用于在检查的样品。 [0192] 在Thermo Nicolet 380 FT-IR光谱仪上使用具有KBr窗口的DTGS检测器和KBr分束器上的Ge进行红外光谱测定法(IR)。收集并平均32次扫描，其具有4cm-1的分辨率和4000cm-1至400cm-1的波长范围。 [0193] 高效液相色谱法(HPLC)在装备有Amide_80，TSK_Gel(4.6mm*150mm，3μm)柱的Agilent 1200系列HPLC仪器上运行。流动相由溶剂“A”:溶剂“B”的80:20混合液组成，其中“A”是85％的CH3CN:15％的NH4OAc水溶液，并且“B”是10％的CH3CN:90％的NH4OAc水溶液。在25℃，流速为1.0mL/min，总运行时间为10min。用ELSD(SEDEX85，45℃，3.5巴，氮气)检测器完成检测。 [0194] 1H核磁共振(1H NMR)记录在Bruker AVANCE III上，其具有手动相位，脉冲宽度300毫秒，3.98秒的采集时间与1秒的弛豫延迟，时域为24K，收集了的8个瞬变，和谱线增宽的0.5的指数函数法。 [0195] 用SMS Advantage仪器检查了动态蒸气吸附(DVS)。将约10mg的样品转移至仪器中，并且相应地记录了相对于25℃的大气湿度的重量变化，具有以下参数：平衡：dm/dt：0.01％/min。(针对min：10min和最大值：180min)；干燥：0％RH，持续120min；RH(％)测量步进量：10％；RH(％)测量步进量范围：0％-90％-0％。 [0196] 如XRPD所确定的，实例1游离碱是不完全结晶并且可能包含部分无定形内容物。PLM显示了双折射现象和不规则块形状。而且，DSC示出了一个吸热峰，起始为196℃，这归因于熔化，如TGA所示的从30℃到200℃的大约0.9％的重量损失表明实例1的游离碱很可能是呈无水形式。 [0197] 实例11：(R)-1-(4-(6-(2-(4-(3,3-二氟环丁氧基)-6-甲基吡啶-2-基)乙酰胺基)哒嗪-3-基)-2-氟丁基)-N-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺的多晶型物D：进行初步浆液测试以纯化实例1游离碱的晶形。称量约30mg的标题化合物并转移至2mL玻璃小瓶中。向小瓶中添加1mL的选择的溶剂(丙酮、乙腈、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、1:1甲醇:水、和四氢呋喃)以实现匀质的悬浮液。将所得的悬浮液在40℃在热混合器上搅拌1天，然后以10000rpm的速度离心。丢弃上清液，以给出片状的晶体(图3)。 [0198] 基于XRPD结果(图1)，在大多数溶剂中，特别是在丙酮中，经由该纯化程序减少了无定形内容物(图2)。基于TGA-DSC曲线(图4)在丙酮中重结晶后，没有发现明显的热动态变化，DSC示出了在197℃起始的归因于熔化的吸热峰。TGA中示出的从30℃到200℃的大约为0.6％的损失表明实例1多晶型物D很可能呈无水形式。图5显示了多晶型物D的IR光谱。图10 1 显示了多晶型物D的 H NMR光谱。 [0199] 1H NMR(400Mhz,甲醇-d4)δppm 2.03-2.26(m,2H),2.51(s,3H),2.67-2.81(m,2H),2.95(s,3H),3.08-3.30(m,4H),3.94(s,2H),4.71-5.05(m,4H),6.75(d,J＝2.01Hz,1H), 6.81(d,J＝2.01Hz,1H),7.62(d,J＝9.29Hz,1H),8.37(s,1H),8.39(d,J＝8.46Hz,1H)。 [0200] 本文提供了固体实例1(例如多晶型物D)，其特征在于具有如上所披露的NMR峰。在某些实施例中，固体实例1(例如多晶型物D)的特征在于具有如上所披露的峰中的至少一个、至少三个、或至少五个。在某些实施例中，固体实例1(例如多晶型物D)的特征在于具有如上所披露的峰中的五个和十个之间。这样的峰可以它们的百万分率的位移来指代。 [0201] 本文提供了固体实例1(例如，多晶型物D)，其特征在于具有在以下的一个或多个1H核磁共振(NMR)化学位移：约2.0百万分率-约2.3百万分率、约2.5百万分率、约2.7百万分率-约2.8百万分率、约3.0百万分率、约3.1百万分率-约3.3百万分率、约3.9百万分率、约 4.7百万分率-约5.1百万分率、约6.8百万分率、约7.6百万分率、或约8.4百万分率。在某些实施例中，固体实例1(例如多晶型物D)的特征在于具有这些位移中的两个、三个、四个、五个、或更多个。在某些实施例中，固体实例1(例如多晶型物D)的特征在于具有这些位移中的三个或更多个。在某些实施例中，固体实例1(例如多晶型物D)的特征在于具有这些位移中的五个或更多个。 [0202] DVS结果(图7和表1)示出了实例1多晶型物D是非吸湿性的，其在0-80％RH具有0.1％的吸水率，并且在DVS后没有发现形式转化(图8)。 表1.纯化的游离碱实例1(多晶型物D)的DVS。 表2.多晶型物D的XRPD。 [0203] 本文提供了固体实例1(例如多晶型物D)，其特征在于具有如上所披露的XRPD峰。在某些实施例中，固体实例1(例如多晶型物D)的特征在于具有如上所披露的XRPD峰中的至少一个、至少三个、或至少五个。在某些实施例中，固体实例1(例如多晶型物D)的特征在于具有如上所披露的XRPD峰中的五个和十个之间。这样的峰可以用它们的2θ位移来指代。 [0204] 本文提供了固体实例1(例如多晶形物D)，其特征在于具有选自以下的一个或多个X-射线粉末衍射峰：约4.0度2θ、约8.0度2θ、约11.6度2θ、约11.9度2θ、约14.9度2θ、约15.9度2θ、约17.6度2θ、约19.9度2θ、约20.2度2θ、约22.4度2θ、约23.7度2θ、和约23.9度2θ。在某些实施例中，实例1(例如多晶型物D)的特征在于具有这些峰中的两个、三个、四个、五个、或更多个。在某些实施例中，实例1(例如多晶型物D)的特征在于具有这些峰中的三个或更多个。在某些实施例中，实例1(例如多晶型物D)的特征在于具有这些峰中的五个或更多个。还提供了固体实例1(例如多晶型物D)，其特征在于具有如图2所示的X射线粉末衍射图。盐制备 [0205] 盐制备方法1：选择表3中列出的酸与实例1在MeOH中形成盐。 [0206] 步骤1：将大约50mg的实例1游离碱溶解于具有5mL的MeOH的8mL玻璃小瓶中以实现匀质的悬浮液。 [0207] 步骤2：将一定量的固体酸溶解在具有MeOH的8mL玻璃小瓶中。 [0208] 步骤3：在磁力搅拌器上缓慢滴定一定体积的足以获得实例1：酸的所需摩尔比的酸溶液(所添加的酸溶液的体积列于表3中)至游离碱溶液中。 [0209] 步骤4：将所得的液相在室温下搅拌24小时，以给出沉淀，将其通过离心分离。 [0210] 用XRPD分析固体以确定是否获得新的结晶形式，并且然后在40℃真空干燥过夜用于进一步表征。使用悬浮于MeOH中的实例1和纯固体酸作为XRPD标准物。 [0211] 结果披露在表3和图9中。从盐酸、硫酸和甲磺酸获得的固体与游离碱相比示出不同的XRPD衍射图，这表明分别形成了氯化物、硫酸盐和甲磺酸盐。如通过XRPD所确定的，使用选自不同基团的酸仅提供游离碱(图10)。表3.使用方法1的盐制备。 [0212] 方法1产物的重结晶：将用方法1产生的潜在盐(氯化物、硫酸盐和甲磺酸盐)在若干种溶剂中重结晶以改进结晶度。 [0213] 将约2mg的候选盐称重放入1.5mL玻璃小瓶中，并且然后添加0.2mL的溶剂(EtOH、ACN、丙酮、EtOAc和THF)。将所得的悬浮液在40℃在热混合器上搅拌1天，然后以10000rpm离心。将所得的固体在40℃真空干燥过夜以进行XRPD分析。 [0214] XRPD结果(图11、图12、图13)证明了三种盐中的两种的结晶度在某些溶剂中经由该重结晶方法得到了改进：ACN中的氯化物盐、EtOH中的硫酸盐。 [0216] 步骤1：将约10mg实例1游离碱溶解于具有0.2mL EtOH的1.5mL玻璃小瓶中以实现匀质的悬浮液。 [0217] 步骤2：接着，将适量的固体酸溶解于具有EtOH的8mL玻璃小瓶中。 [0218] 步骤3：伴随在磁力搅拌器上搅拌，缓慢滴定一定体积的足以获得实例1:酸的所需摩尔比的酸溶液至游离碱溶液中。表4列出了添加的酸溶液的体积。 [0219] 步骤4：将由此获得的液相在室温下搅拌24小时以给出沉淀。 [0220] 通过离心获得的固体通过XRPD分析以确定是否获得新的结晶形式，并且然后在40℃真空干燥过夜用于进一步表征。将悬浮于MeOH中的实例1和纯固体酸分别用作实例1和纯固体酸的标准物。 [0221] 基于表4和图14中披露的结果，可能形成了氯化物、硫酸盐、甲磺酸盐和硫酸盐；然而这些盐的结晶度差。表4.使用方法2的盐制备。 [0222] 盐制备，方法3：第三轮盐合成用优化的程序进行以产生高度结晶的盐形式。详细内容如以下列出： [0223] 步骤1：在40℃，将大约100mg的实例1游离碱溶解于具有2mL的ACN的8mL玻璃小瓶中以实现匀质的悬浮液。 [0224] 步骤2：将适量的固体酸溶解于具有ACN的4mL玻璃小瓶中。 [0225] 步骤3：在磁力搅拌器上以150rpm的速度缓慢滴定一定体积的足以获得实例1:酸的所需摩尔比的酸溶液至游离碱溶液中。表5列出了添加的酸溶液的体积。 [0226] 步骤4：将澄清溶液在没有盖的情况下在室温下保持搅拌，并用具有针孔的铝箔覆盖24小时以允许溶剂蒸发。 [0227] 步骤5：所获得的悬浮液通过离心机以10000rpm的速度分离。 [0228] 弃去上清液，并且通过XRPD分析所得的固体以确定是否获得了新的结晶形式，并且然后在40℃真空干燥过夜用于进一步表征。将悬浮于ACN中的实例1和纯固体酸分别用作实例1和纯固体酸对照的标准物。 [0229] 基于表5和图15中披露的结果，平衡离子中的两种(氯化物和甲苯磺酸盐)提供了表现出良好晶体形式的盐。所获得的盐被重结晶以试图改进结晶度。表5.使用方法3的盐制备。 [0230] 方法3产物的重结晶：四种潜在的盐(氯化物、硫酸盐、甲磺酸盐和甲苯磺酸盐)在若干种溶剂中重结晶以改进结晶度。将约10mg候的选盐分别称重放入1.5mL玻璃小瓶中，并且然后添加0.2mL的所选的溶剂(EtOH、丙酮、EtOAc和THF)。将所得的悬浮液在40℃在热混合器上搅拌1天，并且然后以10000rpm离心。将所得的固体在40℃真空干燥过夜以进行XRPD测试。 [0231] XRPD结果(图16、图17、图18、图19)证明了三种盐(氯化物、甲磺酸盐和甲苯磺酸盐)的结晶度经由该重结晶方法采用EtOAc略微有改进。 [0232] 方法3放大试验：在更大的规模上对氯化物、甲磺酸盐和甲苯磺酸盐重复进行方法3，随后进行任选的EtOAc重结晶。 [0233] 步骤1：在40℃，将约200mg的实例1游离碱溶解于具有4mL的ACN的8mL玻璃小瓶中以实现匀质的悬浮液。 [0234] 步骤2：将一定量的固体酸溶解在具有ACN的4mL玻璃小瓶中。 [0235] 步骤3：在磁力搅拌器上以150rpm缓慢滴定一定体积的足以获得实例1：酸的所需摩尔比的酸溶液(所添加的酸溶液的体积列于表6中)至游离碱溶液中。 [0236] 步骤4：将澄清溶液在没有盖的情况下在环境温度下搅拌，并用具有针孔的铝箔覆盖24小时以获得沉淀。 [0237] 步骤5：所获得的悬浮液通过离心机以10000rpm的速度分离。 [0238] 弃去上清液，并且通过XRPD分析所得的固体以确定是否获得了新的结晶形式，并且然后在40℃真空干燥过夜用于进一步表征。 [0239] 基于表6和图20中列出的结果，成功再生产了氯化物、甲磺酸盐和甲苯磺酸盐。甲磺酸盐(图21和表7)似乎在盐合成期间结晶良好，而氯化物和甲苯磺酸盐都需要在EtOAc中重结晶以改进结晶度。 [0240] 方法3放大试验产物的重结晶：将约100mg的盐分别称重放入1.5mL玻璃小瓶中，并且然后添加1mL的EtOAc。将所得的悬浮液在40℃在热混合器上搅拌1天，并且然后以10000rpm离心。将所得的固体在40℃真空干燥过夜以进行XRPD测试。 [0241] XRPD结果(图22、图23和表8、表9)示出了使用该重结晶方法时氯化物和甲苯磺酸盐的结晶度得到了改进。由于这个原因，重新制备的氯化物盐(在EtOAc中重结晶)，甲磺酸盐和甲苯磺酸盐(在EtOAc中重结晶)用于进一步表征。表6.使用方法3放大试验的盐制备。 表7.来自方法3放大试验的甲磺酸盐的XRPD峰列表。 表8.来自方法3放大试验和EtOAc重结晶的氯化物盐的XRPD峰列表。 表9.来自方法3放大试验和EtOAc重结晶的甲苯磺酸盐的XRPD峰列表。 [0242] 本文提供了实例1的盐，其特征在于具有如上所披露的XRPD峰。在某些实施例中，盐的特征在于具有如上所披露的XRPD峰中的至少一个、至少三个、或至少五个。在某些实施例中，盐的特征在于具有如上所披露的XRPD峰中的五个和十个之间。这样的峰可以用它们的2θ位移来指代。 [0243] 相应地，本文提供了实例1的甲磺酸盐(即，其中R-是CH3SO3-)。在某些实施例中，该甲磺酸盐被表征为具有选自以下的一个或多个X-射线粉末衍射峰：约9.2度2θ、约10.8度2θ、约13.8度2θ、约16.7度2θ、约17.3度2θ、约18.4度2θ、约18.7度2θ、约19.9度2θ、约20.6度2θ、约21.4度2θ、约22.1度2θ、约22.3度2θ、约22.6度2θ、约22.9度2θ、约24.1度2θ、和约32.1度2θ。在某些实施例中，该甲磺酸盐的特征在于具有这些峰中的两个、三个、四个、五个、或更多个。在某些实施例中，该甲磺酸盐的特征在于具有这些峰中的三个或更多个。在某些实施例中，该甲磺酸盐的特征在于具有这些峰中的五个或更多个。 [0244] 相应地，本文提供了实例1的氯化物盐(即，其中R-是Cl-)。在某些实施例中，该氯化物盐被表征为具有选自以下的一个或多个X-射线粉末衍射峰：约4.6度2θ、约9.26度2θ、约11.0度2θ、约12.6度2θ、约13.2度2θ、约13.8度2θ、约16.5度2θ、约19.0度2θ、约20.8度2θ、约22.0度2θ、约22.4度2θ、约22.7度2θ、约24.2度2θ、约25.0度2θ、和约33.4度2θ。在某些实施例中，该氯化物盐的特征在于具有2个、3个、4个、5个或更多个该峰。在某些实施例中，该氯化物盐的特征在于这些峰中的三个或更多个。在某些实施例中，该氯化物盐的特征在于这些峰中的五个或更多个。 [0245] 相应地，本文提供了实例1的甲苯磺酸盐(即，其中R-是4-MePhSO3-)。在某些实施例中，该氯化物盐被表征为具有选自以下的一个或多个X-射线粉末衍射峰：约4.5度2θ、约9.0度2θ、约10.3度2θ、约10.5度2θ、约10.7度2θ、约11.1度2θ、约11.7度2θ、约13.6度2θ、约14.3度2θ、约17.1度2θ、约17.3度2θ、约17.6度2θ、约18.5度2θ、约18.9度2θ、约19.0度2θ、约19.2度2θ、约19.8度2θ、约20.1度2θ、约20.4度2θ、约20.8度2θ、约21.4度2θ、约21.8度2θ、约22.4度2θ、约22.6度2θ、约23.4度2θ、约24.3度2θ、约25.1度2θ、约26.0度2θ、约26.3度2θ、约27.2度2θ、约27.4度2θ、和约28.2度2θ。在某些实施例中，该甲苯磺酸盐的特征在于具有这些峰中的两个、三个、四个、五个、或更多个。在某些实施例中，该甲苯磺酸盐的特征在于这些峰中的三个或更多个。在某些实施例中，该甲苯磺酸盐的特征在于这些峰中的五个或更多个。 [0246] 还提供了实例的盐，其特征在于具有如相关附图所示的X射线粉末衍射图。 [0247] 本文还提供了实例1的硫酸盐(即，其中R-是HSO4-)。 [0248] 氯化物、甲磺酸盐、和甲苯磺酸盐的1HNMR结果(图24、图25、图26)示出形成了单甲磺酸盐和单甲苯磺酸盐，其具有计算的摩尔比(API:酸)，证实为1:1。氯化物、甲磺酸盐、和甲苯磺酸盐的PLM分别描绘于图27、图28、和图29中。对氯化物、甲磺酸盐、和甲苯磺酸盐的DSC和TGA的叠加分别描绘在图30、图31、和图32中。 [0249] 氯化物盐的1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 2.03-2.27(m,2H),2.74(s,3H),2.84-2.96(m,5H),3.08-3.21(m,2H),3.25-3.31(m,2H),4.25-4.30(m,2H),4.70-5.13(m,4H), 7.32(d,J＝2.51Hz,1H),7.35(d,J＝2.51Hz,1H),7.65(d,J＝9.29Hz,1H),8.33-8.39(m, 2H)。 [0250] 甲磺酸盐的1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 2.06-2.24(m,2H),2.72(s,3H),2.74(s,3H),2.87-2.96(m,5H),3.09-3.23(m,2H),3.26-3.31(m,2H),4.28(s,2H),4.73-5.13(m,4H),7.33(dd,J＝14.93,2.38Hz,2H),7.65(d,J＝9.29Hz,1H),8.33-8.38(m,2H)。 [0251] 甲苯磺酸盐的1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 2.04-2.27(m,2H),2.38(s,3H),2.74(s,3H),2.83-2.96(m,5H),3.10-3.22(m,2H),3.25-3.31(m,2H),4.26-4.31(m,2H,由于与溶剂的缓慢交换积分低),4.70-5.10(m,4H),7.24(d,J＝7.78Hz,2H),7.31(d,J＝2.01Hz,1H),7.35(d,J＝2.26Hz,1H),7.68-7.74(m,3H),8.35-8.41(m,2H)。 [0252] 本文提供了特征在于具有如上所披露的核磁共振NMR峰的盐。在某些实施例中，盐的特征在于具有如上所披露的峰的至少一个、至少三个、或至少五个。在某些实施例中，盐的特征在于具有如上所披露的峰中的五个和十个之间。这样的峰可以它们的百万分率的位移来指代。 [0253] 本文提供了实例1的氯化物盐，其特征在于具有在以下的一个或多个1H核磁共振(NMR)化学位移：约2.0百万分率-约2.3百万分率、约2.7百万分率、约2.8百万分率-约3.0百万分率、约3.1百万分率-约3.2百万分率、约3.3百万分率、约4.3百万分率、约4.7百万分率-约5.1百万分率、约7.3百万分率、约7.4百万分率、约7.7百万分率、或约8.3百万分率-约8.4百万分率。在某些实施例中，实例1的氯化物盐的特征在于具有这些位移中的三个或更多个。在某些实施例中，实例1的氯化物盐的特征在于具有这些位移中的五个或更多个。 [0254] 本文提供了实例1的甲磺酸盐，其特征在于具有在以下的一个或多个1H核磁共振(NMR)化学位移：约2.1百万分率-约2.2百万分率、约2.7百万分率、约2.9百万分率-约3.0百万分率、约3.1百万分率-约3.2百万分率、约3.3百万分率、约4.3百万分率、约4.7百万分率-约5.1百万分率、约7.3百万分率、约7.7百万分率、或约8.3百万分率-约8.4百万分率。在某些实施例中，实例1的甲磺酸盐的特征在于具有这些位移中的三个或更多个。在某些实施例中，实例1的甲磺酸盐的特征在于具有这些位移中的五个或更多个。 [0255] 本文提供了实例1的甲苯磺酸盐，其特征在于具有在以下的一个或多个1H核磁共振(NMR)化学位移：约2.0百万分率-约2.3百万分率、约2.4百万分率、约2.7百万分率、约2.8百万分率-约3.0百万分率、约3.1百万分率-约3.2百万分率、约3.3百万分率、约4.3百万分率、约4.7百万分率-约5.1百万分率、约7.2百万分率、约7.3百万分率、约7.4百万分率、约7.7百万分率、或约8.4百万分率。在某些实施例中，实例1的甲苯磺酸盐的特征在于具有这些位移中的三个或更多个。在某些实施例中，实例1的甲苯磺酸盐的特征在于具有这些位移中的五个或更多个。 [0256] 还提供了实例1的盐，其特征在于具有以上披露的这些XRPD峰/位移中的至少一个，和这些NMR峰/位移中的至少一个，其中峰/位移均与具体盐有关。在某些实施例中，盐的特征在于具有以上披露的这些XRPD峰/位移中的至少三个和这些NMR峰/位移中的至少两个、三个、四个、或五。在某些实施例中，盐的特征在于具有以上披露的这些XRPD峰/位移中的至少三个和这些NMR峰/位移中的至少三个。在某些实施例中，盐的特征在于具有以上披露的这些XRPD峰/位移中的至少五个和这些NMR峰/位移中的至少五个。 [0257] 根据PLM结果(图31-图33)，3种候选盐显示出了双折射现象，这与在前的XRPD结果一致。甲磺酸盐示出了棒状的形状，而氯化物和甲苯磺酸盐均为不规则的块状。 [0258] 使用DSC和TGA的热特性(图34-图36)示出，对于HCl盐，图33中示出的起始温度为169℃的宽吸热峰可能是盐的熔化，并且从30℃到150℃的约4％的重量损失应该是残留溶剂的蒸发。对于甲磺酸盐，在图34中示出的在180℃的起始温度的吸热峰可能是盐的融化，并且可忽略的重量损失表明是无水形式。对于甲苯磺酸盐，在图35中示出的在185℃的起始温度的吸热峰可能是盐的融化，并且可忽略的重量损失表明是无水形式。 [0259] 本文提供了实例1的甲苯磺酸盐和甲磺酸盐，其特征在于具有如上所披露的XRPD峰。在某些实施例中，实例1的甲苯磺酸盐或甲磺酸盐的特征在于具有如上文一个或多个相关表中所披露的XRPD峰中的至少五个。在某些实施例中，实例1的甲苯磺酸盐或甲磺酸盐的特征在于具有如上所披露的XRPD峰中的五个和十个之间。这样的峰可以用它们的2θ位移来指代。 [0260] 通常，本文提供了实例1的盐和多晶型物，其特征在于具有如上文和一个或多个下图中所披露的光谱峰(XRPD、NMR、IR等)。在某些实施例中，实例1的盐或多晶型物的特征在于具有如上文一个或多个相关表或一个或多个下图中所披露的X光谱峰中的至少五个。在某些实施例中，实例1的盐或多晶型物的特征在于具有如上或下文所披露的光谱峰中的五个和十个之间。此类的峰可以用它们的2θ位移(在XRPD的情况下)；通过它们以ppm计的化学位移和/或强度、和/或分组(在NMR的情况下)、和吸光度和/或频率(在IR的情况下)来指代。生物学活性测定 [0261] 以下是可用于评估本文披露的化合物及其盐的生物功效的测定。 [0262] GLS1酶活性测定通过双偶联酶促测定来评估通过不同浓度的抑制剂对纯化的重组人类GAC的抑制。通过谷氨酰胺酶反应产生的谷氨酸盐被谷氨酸氧化酶用于产生α-酮戊二酸、氨和过氧化氢，随后在阿普勒克斯超红(Amplex UltraRed)存在下，该过氧化氢被辣根过氧化物酶用于产生试卤灵(resorufin)。测定缓冲液由50mM Hepes(pH 7.4)、0.25mM EDTA和0.1mM Triton X-100组成。在与抑制剂孵育(在室温下10分钟)之前，将GAC与磷酸钾(室温下10分钟)一起孵育。最终反应条件如下：2nM GAC，50mM磷酸钾，100mU/mL谷氨酸氧化酶(西格马公司(Sigma))，1mM谷氨酰胺(西格马公司)，100mU/mL辣根过氧化物酶(西格马公司)，75μM阿普勒克斯超红(生命科技公司(Life Technologies))和1％(v/v)DMSO。在动力学或终点模式(在20分钟处)，在珀金埃尔默预想(Perkin Elmer Envision)板读数器(激发530nm，发射590nm)上监测试卤灵的产生。使用四参数对数曲线拟合计算IC 50值。 [0263] 增殖测定使用湿润的培养箱(37℃，5％CO2和环境O2)常规地将A549细胞维持在补充有10％透析的胎牛血清的RPMI 1640培养基(吉博科目录号(Gibco catalog number)11875-093)中。在活力测定准备中，将细胞以1000细胞/孔的密度接种到384孔黑色培养板(铂金埃尔默公司(Perkin Elmer))中，体积为40uL。在37℃，5％的CO2和环境O2中孵育24小时后，用最终DMSO浓度为0.5％(v/v)的化合物(10uL)处理细胞。然后将微板孵育72小时(37℃，5％的CO2和环境O2)。随后添加细胞滴度荧光剂(Cell Titer Fluor)(普洛麦格公司(Promega))(10uL 6x试剂)，并且在室温下混合15分钟。然后将板孵育30分钟(37℃，5％CO2和环境O2)，随后在珀金埃尔默预想(Envision)板读数器上读取荧光。使用四参数对数曲线拟合计算IC 50值。 [0264] 实例1具有<100nM的针对GLS1的IC50和针对A549细胞增殖的EC50。预期实例1(例如实例2-11)的盐、溶剂化物、和多晶型物具有类似的活性。其他实施例 |
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