抗血栓形成剂

本发明涉及可作为抗凝血剂用于哺乳动物体内的凝血酶抑制剂。具 体地说，它涉及具有高抗血栓形成活性、抗凝血剂活性和经口生物药效 的肽衍生物。

血液凝固过程，即血栓形成，是由一个导致凝血酶生成的复杂蛋白 质分解系列反应触发的。凝血酶以蛋白质分解方式脱除可溶于血浆中的 纤维蛋白原的Aα-链和Bβ-链上的活化肽，引发不可溶血纤维蛋白 形成。

目前，抗血凝是通过肝素和香豆素给药实现的。

血凝和血栓形成的非经肠药物学控制是以通过使用肝素抑制凝血酶 为基础的。肝素通过加速内生抗凝血酶III(凝血酶的主要生理抑制剂) 的抑制效应而间接作用于凝血酶。由于抗凝血酶III水平在血浆中是变化 的，而且由于结合到表面上的凝血酶看来对这种间接机制有抗性，因而 肝素可能是一种无效的治疗。由于血凝试验据信与药效有关，而且与安 全性有关，因而血凝试验(尤其活化部分促凝血酶原激酶时间(APTT) 试验)时必须监测肝素水平。香豆素通过阻止凝血酶原及同类其它蛋白 的合成中的转译后羧基化而妨碍凝血酶产生。由于其作用机制，香豆素 的效果只能在给药后6～24小时慢慢表现出来。此外，它们不是选择性 抗凝血剂。血凝试验(尤其凝血酶原时间(PT)试验)时，香豆素也需 要监测。

最近，对于能以类似于天然基质的方式被蛋白质水解酶认识的小合 成肽的兴趣已经增长。D-Phe-Pro-Arg-H、Boc-D-Phe-Pro-Arg -H和D-MePhe-Pro-Arg-H等三肽醛[Bajusz et al.，J.Med.Chem.， 33，1729-1735(1990)]显示出对凝血酶的强烈直接抑制。证实D- MePhe-Pro-Arg-H硫酸盐是一种人体抗凝血剂的早期临床研究已有 报告〔见Sinoons et al.，Circulation，90，I-231，Abstr.1241(1994)]。 很多研究者在开发药剂的努力中已经合成了类似物，例如Shuman et al.， J.Med.Chem.，36，314-319(1993)。美国专利No.4,346,078 公开了一系列含有鲱精胺(1-氨基-4-胍基丁烷)基团的抗凝血肽。 鲱精胺衍生物及有关化合物也公开于国际公报号WO 93/11152的PCT 申请中，以及1994年6月15日出版、公报号601459的欧洲专利申请中。 此类化合物与前一系列的区别在于鲱精胺化合物缺少一个在含有Arg基 团的类似化合物中发现的羰基残基。

尽管肝素和香豆素是有效的抗凝血剂，而且迄今为止尚无药物源于 已知的三肽醛，以及尽管此类化合物依然有前景，但存在着对如下抗凝 血剂的需要：能选择性作用于凝血酶，与抗凝血酶III无关，给药，较好 经口给药后迅速产生抑制作用，而且不干扰保持止血所需要的血块溶 解。

本发明的目的在于发现：如下面定义的本发明的化合物是有效的凝 血酶抑制剂，这种抑制剂经口服投药后可能具有高生物利用率。此外， 本发明的某些化合物还可能显示出对因子Xa的抑制作用，它与血凝固分 级有关。

因此，本发明的主要目的是提供新的肽衍生物，这种肽衍生物是有 效的凝血酶抑制剂，可用作抗凝血剂。

对于精通本技术的行家来说，在读过下面的说明书和权利要求书之 后，其它目的、特点及优点将是一目了然的。

本发明提供式I所示的一类能抑制凝血酶的化合物或其药物上可接 受的盐；或所述化合物的药物上可接受的溶剂化物或其盐：

      X-Y-NH-(CH2)r-G    I 其中：

X是脯氨酰基、高脯氨酰基、Rm-(CH2)g-NH-CH2C(O)-、 其中：

Rd是羧基或甲磺酰；

Re是NHRc、NHCORc或NHCOORc；其中Rc是C1-C10烷基、 C3-C8环烷基或含有4-10个碳原子的(C3-C8)环烷基(C1-C6) 烷基基团；

T是C3-C8环烷基、C1-C8烷基、

a是0、1或2；以及

O是-OH、C1-C4烷氧基，或-NH-A；

A是氢、C1-C4烷基、R”SO2-、R”OC(O)-、R”C(O)-、 RnC(O)-或-(CH2)g-Rm；

g是1、2或3；

B是氢或C1-C4烷基；

R’是氢或C1-C4烷基；

R”是C1-C4烷基，C1-C4全氟烷基、-(CH2)d-Rm，或未取代 的或取代的芳基，这里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代的或 取代的芳族杂环，该杂环含有1个或2个选自硫、氧和氮的相同或不同 的杂原子，或是一个9元或10元的未取代的或取代的稠合双环芳族杂环 基团，该基团含有1个或2个选自硫、氧和氮的相同或不同的杂原子；

Rm是COORb、-SO2(C1-C4烷基)、SO3H、-P(O)(ORb)2或四唑 -5-基；

Rn是COORb或四唑-5-基；

各个Rb独立地是氢或C1-C4烷基；

d是1、2或3；

m是0、1或2；

n是0、1或2；和

Z是氢、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、卤素或RaSO2NH-、 其中Ra是C1-C4烷基；

Y是 其中：

Rg是C1-C6烷基、C3-C8环烷基，或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’；

Rp是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’；

其中p是0、1、2、3或4；L是一个键，-O-、-S-或 -NH-；q是0、1、2或3；T’是氢、C1-C4烷基、C3-C8环烷 基、-COOH、-CONH2，或Ar，其中Ar是未取代的或取代的芳基， 这里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代的或取代的芳族杂环， 该杂环含有1个或2个选自硫、氧和氮的相同或不同的杂原子，或是一 个9元或10元的未取代的或取代的稠合双环芳族杂环基团，该基团含有 1个或2个选自硫、氧和氮的相同或不同的杂原子；

Ry是-CH2-、-O-、-S-，或-NH-；和

Rz是一个键，或当与Ry及3个邻接的碳原子合在一起时形成一个含 有5-8个原子的饱和碳环，其中一个原子可以是-O-、-S-， 或-NH-；

r是1、2或3；和

G是-(CH2)s-R，其中s是0-5，-CH＝CH-(CH2)t-R， 其中t是0-3，或者G是： 其中D和E各自独立地是N或CH； k是0或1； b是0或1； M是S、O、或NH； 各个W独立地是N或CH；以及 R是-NH2、 或者G是

而且其中下面的芳环或杂芳环中的一个至所有其余未取代的碳原子 可以带有一个氟取代基：

但其条件是：

(1)当G是-(CH2)s-NH-C(NH)NH2、y是未取代的脯氨酰 基(Rp是氢)、及T是 时，A不是氢或叔丁氧羰基；

(2)当r＝1及s＝0时，R不是氨基或胍基；

(3)当G是-(CH2)s-R，其中R是

Y是 未取代的脯氨酰基(Rp是氢)或4-羟基脯 氨酰基(Rp是OH)、R’是氢，T是环己基以及Q是-NH-A时，A 不是氢、C1-C4烷基、甲磺酰或-(CH2)g-Rm；

(4)当G是-(CH2)s-R，其中R是 y是未 取代的脯氨酰基(Rp是氢)或4-甲基-硫代脯氨酰基(Rp是-SCH3)， 及Q是-NH-A时，R”SO2不是芳基磺酰；

(5)当G是： T是C1-C8烷基、 及Q是-NH-A时，A不是R”SO2-。

上述式I化合物中一组具体的化合物由下面定义的那些式I化合物组 成，或其药物上可接受的盐；或所述化合物的药物上可接受的溶剂化物 或其盐，其中：

X是脯氨酰基、高脯氨酰基、 T是C3-C8环烷基、C1-C8烷基、

a是0或1；

Q是OH、C1-C4烷氧基、或-NH-A；

A是氢或C1-C4烷基、R”SO2-、R”OC(O)-、R”C(O)-、或 -(CH2)g-COOH；

g是1、2或3；

B是氢或C1-C4烷基；

R’是氢或C1-C4烷基；

R”是C1-C4烷基、C1-C4全氟烷基、-(CH2)d-COOH，或未 取代的或取代的芳基，这里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代 的或取代的芳族杂环，该杂环含有1个或2个选自硫、氧和氮的相同或 不同的杂原子，或是一个9元或10元的未取代的或取代的稠合双环芳族 杂环基团，该基团含有1个或2个选自硫、氧和氮的相同或不同的杂原 子；

d是1、2或3；

m是0、1或2；

n是0、1或2；和

Z是氢、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟基、卤素，或RaSO2NH-， 其中Ra是C1-C4烷基；

Y是 其中：

Rg是C1-C6烷基、C3-C8环烷基，或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’；

Rp是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’；

其中p是0、1、2、3或4；L是一个键，-O-、-S-或 -NH-；q是0、1、2或3；T＇是氢、C1-C4烷基、C3-C8环烷 基、-COOH、-CONH2，或Ar，其中Ar是未取代的或取代的芳基， 这里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代的或取代的芳族杂环， 该杂环含有1个或2个选自硫、氧和氮的相同或不同的杂原子，或是一 个9元或10元的未取代的或取代的稠合双环芳族杂环基团，该基团含有 1个或2个选自硫、氧和氮的相同或不同的杂原子；

Ry是-CH2-、-O-、-S-，或-NH-；和

Rz是一个键，或当与Ry及3个邻接的碳原子合在一起时形成一个含 有5-8个原子的饱和碳环，其中一个原子可以是-O-、-S-， 或-NH-；

r是1或2；及

G是-(CH2)s-R，其中s是0-5，-CH＝CH-(CH2)t-R， 其中t是0-3，

式中D和E各自独立地是N或CH；

k是0或1；

b是0或1；

M是S、O、或NH；

各个W独立地是N或CH；以及

R是-NH2、

但其条件是：

(1)当G是-(CH2)s-NH-C(NH)NH2、y是未取代的脯氨酰 基(Rp是氢)、及T是 时，A不是氢或叔丁氧羰基；

(2)当r＝1及s＝0时，R不是氨基或胍基；

(3)当G是-(CH2)s-R，其中R是 Y是 未取代的脯氨酰基(Rp是氢)或4-羟基脯 氨酰基(Rp是OH)、R’是氢，T是环己基以及Q是-NH-A时，A 不是氢、C1-C4烷基、甲磺酰或-(CH2)g-COOH；

(4)当G是-(CH2)s-R，其中R是 y是未 取代的脯氨酰基(Rp是氢)或4-甲基-硫代脯氨酰基(Rp是-SCH3)， 及Q是-NH-A时，R”SO2不是芳基磺酰；

(5)当G是： T是C1-C8烷基、 及Q是-NH-A时，A不是R”SO2-。

本发明除了提供式I的化合物外，还提供含有式I化合物及药物上可 接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物制剂。

本发明也提供一种抑制哺乳动物中血栓形成的方法，包括对需要治 疗的哺乳动物施用抗血栓形成剂量的式I化合物。

本发明还提供一种抑制凝血酶的方法，包括对需要治疗的哺乳动物 施用凝血酶抑制剂量的式I化合物。

本发明涉及新型凝血酶抑制剂、含有该化合物作为活性组分的医药 组合物以及该化合物作为抗凝血剂用于预防和治疗血栓栓塞疾病，如静 脉血栓形成、肺栓塞、动脉血栓形成、尤其心肌缺血、心肌栓塞形成和 脑血栓形成，普遍凝固性过高状态和局部凝固性过高状态，如血管成形 术和冠状动脉分流术之后出现的此类状态，以及与发炎过程有关的全身 化组织伤害。

“烷基”这一术语本身或作为另一个取代基的组成部分，系指有所 述碳原子数的直链或支链烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁 基、叔丁基、异丁基和仲丁基。“全氟烷基”这一术语本身或作为另一 个取代基的组成部分，系指其每个氢原子都被氟原子所取代、有所述碳 原子数的直链或支链烷基，如三氟甲基、全氟乙基、全氟正丙基、全氟 并丙基、全氟正丁基、全氟叔丁基、全氟异丁基和全氟仲丁基。

“C3-C8环烷基”这一术语系指有3～8个碳原子的饱和脂族环， 如环丙基、甲基环丙基、环丁基、环戊基、环己基、4-甲基环己基、 环辛基等。

“烷氧基”这一术语系指一个氧原子键合到母体部分、有所述碳原 子数的直链或支链烷基。“卤素”这一术语系指氯、氟、溴或碘。“乙 酰”这一术语系指CH3-C(O)-。“叔丁氧碳酰”这一术语系指(CH3)3C-O-C(O)-， 缩略为“Boc”。“苄氧碳酰”这一术语系指C6H5CH2-O-C(O)-， 缩略为“Cbz”。

“五元或六元杂环”这一术语系指含有一个或两个氮原子、一个硫 原子、一个氧原子、一个氮原子和一个硫原子、或一个氮原子和一个氧 原子、能提供稳定结构的任何一个五元或六元环。这种五元环有一个或 两个双键，而这种六元环有两个或三个双键。这样的杂环系统包括呋喃 基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、、噻唑基、异噻唑 基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噁嗪基和噻嗪基。

“九元或十元杂环”这一术语系指任何一种双环基团，其中上述任 何一种五元或六元环稠合到一个苯环或另一个以上定义的六元杂环上， 提供一种稳定结构。这些杂环系统包括吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃 基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并吡唑基、喹啉基、异喹啉基、苯 并咪唑基和苯并噻唑基。

要知道的是，上述许多杂环可能以互变异构形式存在。所有这样的 形式都纳入本发明的范围。

为定义Ar或R”而列出的芳族基团或杂芳族基团全部独立地是无取 代的或者有一个或两个能提供稳定结构的取代基取代的，所述取代基独 立地选自卤素、羟基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、氨基(-NH2)、 -(C1-C4烷基)氨基、-(CH2)iCOOH、巯基、-S(O)h(C1-C4烷基)、 -NHS(O)h(C1-C4烷基)、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-S(O)hNH2、 -S(O)hNH(C1-C4烷基)或-S(O)hN(C1-C4烷基)2，h是0、1或2， 且j是0、1、2、3或4。取代基R”(C)O-的一个特别好的此类数值 是1-甲基吲哚-2-酰基。

在通式I的表述中，基团X的羰基官能度连接到Y基团的胺官能度 上。然后，Y的羰基官能度连接到通式I中所画的氨基上。

基团 ，式中Z和A均为氢，在此时时称为苯基 甘氨酰并缩略为Phg。其A为诸如甲基的化合物称为Nα-甲基苯基甘 氨酰基团，并缩略为MePhg。其Z为氢以外的其它取代基的有取代化合 物按取代基的类型和位置称谓，如3’-氯苯基甘氨酰或Phg(3-Cl)。

基团 ，式中Z和A均为氢，在此时时称为 苯基丙氨酰并缩略为Phe。其A为诸如甲基的化合物称为Nα-甲基苯 基丙氨酰基团，并缩略为MePhe。其Z为氢以外的其它取代基的有取代 化合物按取代基的类型和位置称谓，如3＇-氯苯基丙氨酰或Phe(3- Cl)。

基团 和 ，当R’ 是氢时，在此时时分别称为1-和3-四氢异喹啉碳酰，并分别缩略为 1-Tiq和3-Tiq。

基团 和 ，当R’ 是氢时，在此时时分别称为1-和3-全氢异喹啉碳酰，并分别缩略为 1-Piq和3-Piq。如波纹线所指出的，存在着这些取代基的各种环稠 合异构体-本发明期待任何一种单个异构体及其组合。

基团 和 分别称为脯氨酰和氮杂环丁 烷-2-碳酰，并分别缩略为Pro和Azt。

基团 代表4，5、5，5、6，5、7，5或8，5类 型的饱和双环系统。3a的立体化学对羰基是顺式的；另一个桥头键可以 是顺式的也可以是反式的，但对于4，5和5，5系统来说在这个桥头必须是 顺式的。Ry和Rz的定义规定，这个包括所示三个碳原子在内的可变环是 一个有4～8个原子的饱和碳环系统。环原子可以全部是碳，或这些环 原子之一可以是一个选自-O-、-S-和-NH-的杂原子。这个定 义包括如 所代表的、从八氢吲哚-2-羧酸(缩略为“Ohi”)衍生的较好部分。 这个部分的各种顺式和反式形式都是本发明所期待的。

基团Y中的星号表示-个(L)手性中心。基团X中的星号表示一 个(D)或(DL)手性中心；基团X中的井号表示一个(L)手性中 心。

此外，因烷基取代基的枝化而异，也可能存在非对映异构体。本发 明的化合物包括两种或多种非对映体的混合物以及每种单个异构体。

本发明的较好化合物包括这样的通式I化合物，其中X是 高脯氨酰、1-或3-Tiq、或1-或3-Piq，且Y是脯氨酰，及其 药物上可接受的盐和溶剂化物。具体地说，其Q为NHA且A为氢或氨 磺酰(如A＝R”SO2-)、R’为氢、Z为氢和B为氢的化合物全都是较 好的。此外，其R为胍基或尤其脒基的化合物也是较好的。

一种尤其好的取代基组合是其G为有R取代的苯基(即D＝E＝ CH，K＝0)；特别好的是其G为一个4-脒基苯基基团。

在其中 的芳环或杂芳环上一个至所有其它无取代的碳原子带有一个氟取代基的 化合物中，较好的一组是当D或E为N时其D或E的α-或γ-位上没 有氟取代基的那些化合物。

本发明的另一组较好化合物包括其X为 的如上所定义通式I化合物，其中T是环己基，a是1，R’是氢，且Q 是-NH-A。一个特定的亚组是其A为氢的亚组。第二个特定的亚组 是其A为R”SO2-、尤其R”为乙基的亚组。第三个特定的亚组是其A 为-(CH2)g-COOH、较好g为1的亚组。

对于其X、r和G有如上定义的通式I化合物，Y的特定值包括 (L)-脯氨酰(Pro)、(S)-顺式-八氢-1H-吲哚-2-碳酰 (ohi)和N-(2-苯基乙基)甘氨酰〔N(PhCH2CH2)G1y〕。

对于其R为-NH2的通式I化合物，较好的是X和Y的值选自以上 定义的值，且r和G的值选自

a)r为1且G为 式中苯胺基环可以带有一个或两 个氟取代基；

b)r为1且G为 和

c)r为1或2且G为

一组特别好的通式I化合物是这样的化合物，其中Y为(L)-脯 氨酰、r为1且G值为 ，式中D和E均为CH、 k为0且R为脒基，而且可以通式Ia代表 式中苄脒环是无取代的、也可以带有一个或两个氟取代基、较好在脒基 的间位，而且X有以上定义的任何值。

通式Ia化合物的一个更具体的值是其苄脒环无取代基这样的值。

另一组特别好的通式I化合物是这样的化合物，其中Y为(L)- 脯氨酰、r为1且G值为 ，式中M为S、W均 为CH且R为脒基，而且可以用通式Ib代表 式中X有以上定义的任何值。

还有一组较好的通式I化合物是这样的化合物，其中Y为(L)- 脯氨酰、r为1且G值为 ，式中D为N或 CH、k为0且R为脒基，而且可以用通式Ic代表 式中X有以上定义的任何值，且D为N或CH。 通式Ia、Ib或Ic化合物中X的一个较好的值是 式中R’为氢、a为1、T为环己基或苯基且Q为-NH-A。更具体地 说，A是氢、乙磺酰或羧甲基。X的一个特别好的值是N-羧甲基-D -环己基丙氨酰。X的另一个较好的值是N-羧甲基-D-苯丙氨酰。

本发明通式I的特定化合物在实例中加以描述。可以作为药物上可 接受的盐或溶剂化物使用的一个较好的化学种，可以选自作为实例15、 18、23、44、45、46、48、49、51、52、56、65、66、68、 69、70、71、72、80、86、87、88和92公开的那些化学种。一 个更好的化学种可以选自实例45、46、48、51、65、70、71和72 所公开的化合物。以其意外优异的性质为依据，一种最好的化学种是实 例48。另一种高度优选的化学种是实例65。

如以上提到的，本发明包括上述通式I所定义的化合物的药物上可 接受的盐。本发明的一种特定化合物可以具有一个或多个有足够碱性的 官能团，因而能与许多无机酸和有机酸中的任何一种反应，生成一种药 物上可接受的盐。常用来生成酸加成盐的酸是无机酸，如盐酸、氢溴酸、 氢碘酸、硫酸、磷酸等，和有机酸，如对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对 溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸等。因此，这样一些 药物上可接受的盐的实例是硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、 亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸-氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、 氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、甲酸盐、 异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、 辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔 -1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸、 羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸 盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、r-羟基丁 酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、 萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐等。较好的药物上可接受的酸加成盐是与盐酸、 氢溴酸、硫酸等无机酸生成的盐。

本发明的化合物已知能与适当溶剂生成水合物和溶剂化物。用于制 备溶剂化物形态的较好溶剂包括水、醇类、四氢呋喃、DMF和DMSO。 较好的醇是甲醇和乙醇。其它适用溶剂可以根据溶剂分子的大小来选 择。小溶剂分子较好，有利于对应的溶剂化物生成。溶剂化物或水合物 典型地是在重结晶过程中或在盐生成过程中形成的。关于溶剂化物的一 篇有用的参考文献是Sykes，Peter，A Guidebook to Mechanism in Organic Chemistry，6th Ed.(1986，John Wiley & Sons，New York)。本 文中使用的“溶剂化物”这一术语包括水合物形态，如一水合物和二水 合物。

通式I化合物是用已知的肽偶合方法制备的。按照一种这样的方法， 酸P-X’-COOH(其中-X’-C(O)-是-X-，其含义与对通 式I的定义相同，且P是一个氨基保护基)必要时与一种有羧基保护的Y 化合物偶合，生成二肽(a)。然后将Y部分的羧基保护酯基脱除(解 封或脱酯化)，并使该二肽的游离酸形式(b)与受保护的试剂(d) 偶合。上述反应序列用如下方案1说明： 式中G’与G相同，只是R为-CN、-NHP、 ；每 个P代表-个氨基保护基团，必要时P’为H或P，alk是低级烷基或某 种类似的羧酸保护基团，且-Y’-与Y相同，也有可见的氨基和羧基官 能度，即-Y-与-N-Y’-C(O)-目同。

若存在的话，G’中的氰基被精心制作成R的一种值；然后，用本门 技术行家已知的步骤例如用金属催化剂加氢使(c)中的保护基团脱除， 提供通式I化合物。

P-X’-COOH化合物与NH-Y’-COO-alk的偶合是首先保 护该氨基酸的氨基(若有的话)来进行的。采用的是常用于氨基基团暂 时保护或封闭的普通氨基保护基团。

氨基保护基团系指该氨基上的取代基，它们常用来封闭或保护氨基 官能度同时使该化合物上的其它官能团能发生反应。此类氨基保护基团 的实例包括甲酰基、三苯甲基、邻苯二甲酰亚胺基、三氯乙酰基、氯乙 酰基、溴乙酰基和碘乙酰基，尿烷型封闭基团如苄氧碳酰、叔丁氧碳酰、 4-苯基苄氧碳酰、2-甲基苄氧碳酰、4-甲氧基苄氧碳酰、4-氟苄 氧碳酰、4-氯苄氧碳酰、3-氯苄氧碳酰、2-氯苄氧碳酰、2，4-二 氯苄氧碳酰、4-溴苄氧碳酰、3-溴苄氧碳酰、4-硝基苄氧碳酰、 4-氰基苄氧碳酰、2-(4-联苯基)异丙氧碳酰、1，1-二苯基乙- 1-基氧碳酰、1，1-二苯基丙-1-基氧碳酰、2-苯基丙-2-基氧 碳酰、2-(对甲苯基)丙-2-基氧碳酰、环戊基氧碳酰、1-甲基 环戊基氧碳酰、环己基氧碳酰、1-甲基环己基氧碳酰、2-甲基环己 基氧碳酰、2-(4-甲苯磺酰)乙氧碳酰、2-(甲磺酰)乙氧碳酰、 2-(三苯膦基)乙氧碳酰、9-芴基甲氧碳酰(“FMOC”)、2- (三甲基甲硅烷基)乙氧碳酰、烯丙氧碳酰、1-(三甲基甲硅烷基甲 基)丙-1-烯氧碳酰、5-苯并异噁唑基甲氧基碳酰、4-乙酰氧基 苄氧碳酰、2，2，2-三氯乙氧碳酰、2-乙炔基-2-丙氧碳酰、环丙基 甲氧碳酰、4-(癸氧基)苄氧碳酰、异冰片基氧碳酰、1-哌啶基氧 碳酰等；苯甲酰甲磺酰基、2-(硝基)苯亚磺酰基、二苯氧膦基及诸 如此类的氨基保护基团。所采用的氨基保护基团化学种并不十分重要， 只要所衍生的氨基基团适合于随后在该分子其它位置上发生反应的条件 而且能在适当时候脱除而不破坏该分子其余部分即可。较好的氨基保护 基团是苄氧碳酰、烯丙氧碳酰、叔丁氧碳酰和三苯甲基等基团。以上术 语也涵盖头孢菌素、青霉素和肽技术上使用的类似氨基保护基团。以上 术语所指的基团的进一步实例可参阅J.W.Barton，“有机化学中的保护 基”，J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，N.Y.，1973， Chapter 2，和T.W.Greene，“有机合成中的保护基”，John Wiley and Sons，New York，N.Y.，1981，Chapter 7。“受保护氨基”这一相关术语 定义有以上所讨论氨基保护基取代的氨基。

在进行偶合反应时，对NH-Y’-COOH采用的酯保护基是一种可 用能使氨基保护基团保持原样不变的条件脱除的保护基。因此，酰化酸 P-X’-COOH的氨基保护基在随后与胺(d)偶合生成(c)期间仍能 充分保护该氨基。

本说明书中使用的羧基保护酯基系指在对该化合物的其它官能团进 行反应时常用来封闭或保护羧酸基团的羧酸基团酯衍生物之一。这类羧 酸保护基团的实例包括C1-C4烷基、苄基、4-硝基苄基、4-甲氧 基苄基、3，4-二甲氧基苄基、2，4-二甲氧基苄基、2，4，6-三甲氧基 苄基、2，4，6-三甲基苄基、五甲基苄基、3，4-亚甲基二氧苄基、二苯 甲基、4，4’-二甲氧基二苯甲基、2，2’，4，4’-四甲氧基二苯甲基、叔丁 基、叔戊基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4，4’-二甲氧基三苯甲 基、4，4’，4”-三甲氧基三苯甲基、2-苯基丙-2-基、三甲基甲硅烷 基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苯甲酰甲基、2，2，2-三氯乙基、β-(三 甲基甲硅烷基)乙基、β-(二正丁基甲基甲基甲硅烷基)乙基、对甲 苯磺酰乙基、4-硝基苄基磺酰乙基、烯丙基、肉桂基、1-(三甲基 甲硅烷基甲基)丙-1-烯-3-基和诸如此类的基团。所采用的羧基 保护基团的化学种并不十分重要，只要所衍生的羧酸对于该分子其它部 位上后续反应的条件是稳定的而且可以在适当时候脱除而不破坏该分子 的其余部分即可。具体地说，重要的是不要让该羧基保护的分子遭遇强 亲核碱或采用高度活化的金属催化剂例如Raney镍等还原性条件。(如 此严厉的脱除条件在脱除以下讨论的氨基保护基团时也是要避免的。) 这些基团的进一步实例详见E.Haslam，“有机化学中的保护基”，J.G. W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，N.Y.，1973，Chapter 5，和T. W.Greene，“有机合成中的保护基”，John Wiley and Sons，New York，N.Y.，1981，Chapter 5。

通式I化合物的制备也可以先合成HN-Y’-CONH(CH2)r-G’酰 胺前体，然后与受保护的X-部分反应。按照一种这样的方法，制备(d) 并如以下所示那样使之与PN-Y’-COOH(g)偶合，给出酰胺(h)。

PN-Y＇-COOH+H2N-(CH2)r-G＇→PN-Y＇-CONH-(CH2)r-G

    (g)       (d)                         (h) 式中P代表一个氨基保护基团如苄氧碳酰(Cbz)基团，叔丁氧碳酰 (Boc)、对甲苯磺酰等。较好的是，所用的氨基保护基团可通过加氢 或者用一种温和的酸(如三氟乙酸)或一种强酸(如HCl)处理来脱除。 其它适用氨基保护基团的实例可参阅“有机化学中的保护基”，第二版， T.W.Greene和Peter G.M.Wuts著，第7章，第309-405页(1919)， John Wiley & Sohs，Inc.出版。Boc或其它适用保护基团从Y残基的氨 基氮上脱除，然后用所希望的氨基酸酰基基团使之酰化，给出以下所示 的二肽。

P-X＇-COOH+HN-Y＇-CONH-(CH2)r-G＇→p-X＇-CO-N-Y＇-CONH-(CH2)r-G＇

                                              (c) 氰基若存在于G’中则加以精心制作，并按以上所述脱除(C)上的保护 基团。

P-X’-COOH化合物的偶合是通过先保护氨基酸的氨基(如果有 的话)来进行的。采用的是常用于氨基暂时保护或封闭的普通氨基保护 基团。此类保护基团的实例见上述。

上述偶合反应是在较低温度下、较好在大约-20℃与大约15℃之 间的温度进行。偶合反应是在惰性有机溶剂如二甲基甲酰胺、二甲基乙 酰胺、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿等常用溶剂或此类溶剂的混合物中进 行的。一般来说，当在偶合反应中使用该酰化酸的一种活泼酯时，要使 用无水条件。

中间体(d)和(g)是通过下列方案中所总结的有机化学标准技 术制备的：

H2N-K-NH2→H2N-K-NHP 式中-K-R是-(CH2)r-G。

按照以上序列，受保护的胍可以通过对S-甲基异硫脲进行双保护 来制备。较好的封闭基团是叔丁氧碳酰(Boc)基团，它可以通过在草 酸二叔丁酯存在下让S-甲基异硫脲发生反应来引进。通常采用S-甲 基异硫脲的一种酸盐形式，可以通过使该盐溶于水中并用碱水溶液处理 而使之就地转化成游离碱形式。然后，在一种水可混溶溶剂如叔丁醇中， 把草酸二叔丁酯引进该反应，给出双保护的S-甲基异硫脲。然后，在 一种非活泼溶剂或溶剂组合中用适当二胺H2N-K-NH2处理，生成所 希望的双保护的胍。典型地说，采用二甲基甲酰胺或水或其混合物等水 可混溶溶剂是行之有效的。这样的反应一般在大约3～72小时内完成。 然后，可以如前面所述那样使所得到的受保护的胍偶合，提供其R为 的通式I化合物的受保护中间体。

对于R＝-NH2的通式I化合物来说，中间体是一种单保护的二胺。 在多数情况下，这种中间体只需让一种无保护的二胺与一摩尔当量的保 护试剂反应就能制备。最终胺(R＝-NH2)的其它引进方法对于有机 化学家是显而易见的。例如，这种胺可以从某种其它前体官能度如一个 硝基基团或一个氰基基团得到。在硝基基团的情况下，转化成氨基基团 通常是依靠那些有硝基直接连接到芳环、尤其苯基上的基质来完成的。 在这样的情况下，利用技术上已知的许多方法中的任何一种，使硝基苯 基还原成对应的苯胺官能度。一种特别有效的方法是在一种非活泼溶剂 如乙醇、水或其混合物中用亚硫酸氢钠处理该硝基化合物。当该硝基化 合物在亚硫酸氢钠存在下在一种水/乙醇混合物中加热回流时，还原通常 在苦干小时内完成。氰基可类似地进行还原，适当时在一种溶剂如四氢 呋喃中在一种还原剂如氢化铝锂、硼烷的存在下，或用金属促进的硼氢 化钠还原法进行。

本发明的脒 也可以从一种腈前体制备。用于实 现这种转化的许多步骤是技术上已知的。具体地说，在吡啶和三乙胺的 混合物中使用硫化氢、随后用丙酮和甲基碘处理、最后在甲醇中用乙酸 铵处理，是进行这种转化的一种较好和高效率的方法。此外，该腈与羟 胺盐酸盐和一种碱如N，N-二异丙基乙胺一起在一种羟基溶剂如乙醇中 加热，随后催化加氢(例如用炭载钯氢解)，也可以用来进行这种转变。 这种工艺提供了作为中间体的羟基脒 如果愿意 可将其分离。

在本发明化合物的合成中用作最初起始原料的其它化合物是众所周 知的，而且在商业上不可得的情况下，也容易用技术上一般熟练人员常 用的标准步骤合成。

用于制备本发明化合物的4-取代脯氨酸(Rp是C1-C6烷基、C3 -C8环烷基或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’)的4-取代基相对于羰基部分 全都具有顺式构型。用于将这种官能度引进通式I化合物中的中间体是 用标准技术制备的。

例如，其Rp基团在与脯氨酸环的连接点上含有一个亚甲基基团的4 -取代脯氨酸衍生物可以用如下方式制备： 式中R4＝R3CH2＝一个在与脯氨酸环的连接点上含有亚甲基基团的Rp 基团。

4-羟基脯氨酸(顺式和反式这两种形态都是商业上可得的)首先用 氨基保护基团保护，Cbz基团尤其可用于这一序列。然后将所得到的中 间体酯化(甲酯或尤其乙酯是特别方便的)，然后氧化，给出对应的酮。 这种氧化是在Jones氧化或氯铬酸吡啶鎓等许多氧化条件中任何一种条 件下实现的，尤其可用于这种转化的是在一种干的非活泼溶剂例如二氯 甲烷中使用氯铬酸吡啶鎓。当令其进行8～16小时反应时，这个反应一 般在常温进行时就能完成。然后，让这种易变的酮中间体与一种适用的 Wittig试剂反应，给出所希望的烯烃。典型地说，将有适当Rp取代的卤 化三苯鏻添加到一种含有强碱(如叔丁醇钾)的干惰性溶剂(如四氢呋 喃)中。将这种酮引进，在常温下大约三小时后，可以分离出所希望的 烯烃中间体。为了得到该烯烃的良好产率，较好是采用相对于该酮而言 过量0.4～0.6摩尔的Wittig试剂。然后，用标准还原技术将该烯烃还原成 所希望的Rp取代脯氨酸。催化加氢是在实验室中实现这种转化的最简便 方法。在一种惰性溶剂如乙醇中在一种催化剂(如5％炭载钯)存在下， 该烯烃的加氢可在常压进行。在其氨基保护基为Cbz的中间体的情况 下，加氢也使该保护基脱除，提供一种可用于偶合到P-X’-COOH上 的化合物。如熟悉本门技术的人员将要知道的，这种工艺不能用于制备 那些其Rp基团通过一个杂原子或一个芳环连接到脯氨酸环上的化合物。 因此，在以上方案中，R3是烷基、芳烷基(如苄基)、(环烷基)烷基 等。

以下方案总结了一种用制备这些中间体的有关方法：

以上反应方案是上述Wittig反应的一种替代，而且可用于制备那些 无法为其制备Wittig试剂的化合物。例如，为了制备其Ra为烷基、苯基 等的中间体，让吡咯烷酮中间体与一种适当Grignard试剂反应。典型地 说，采用稍微摩尔过量的Grignard试剂，通常在低温(如-80～-60℃) 在一种低凝固点惰性溶剂如四氢呋喃中进行。在这些试剂添加后，可以 让反应混合物回升到室温，此后，反应通常在若干小时内完成。使所得 到的中间体脱水，例如，用三氟乙酸处理。然后，用与以上对烯烃中间 体还原所述相同的还原条件，使3，4-脱氢中间体还原成所希望的顺式中 间体。

其杂“L”基团为氧并直接连接到脯氨酸环上(即P＝O)的中间 体可以用Mitsunobu反应(M1tsunobu，Synthesis，1(1981))制备：

在这个反应中，反式羟基吡咯烷羧酸酯在一种溶剂中，在Ar-O-H存 在下，用三苯膦处理。将混合物冷却至大约0℃，添加偶氮二羧酸二乙 酯。回收至室温后，对反应混合物进行后处理，提供所希望的顺式中间 体。虽然上述方案说明了其L＝-O-、p＝q＝0且T＝Ar的化合物的 反应，但这一序列也适用于制备其p＝0且L为-O-的其它化合物。

其L是硫且直接连接到环上的中间体，制备时可先将羟基转化成甲 苯磺酸盐或其它类似离去基团，然后用硫醇盐阴离子置换(见，例如， Krapcho等，J.Med.Chem.，31，1148-1160(1988)；Smith等人， J.Med.Chem.，31，875-855(1988))。

其L是氮且直接连接到环上的中间体，制备时可先将羟基转化成甲苯 磺酸盐或其它类似离去基团，然后用叠氮化物置换。这种叠氮化物可以 用已知方法还原，然后烷基化，从而提供所希望的官能度(见，例如， Smith等人，J.Med.Chem.，31，875-855(1988))。

含有顺式-Ohi官能度的本发明化合物，其制备时先从对应的酸制 备(S)-二氢吲哚羧酸乙酯(见Vincent等人，Drug Design and Discovery，Vol.9，pp 11-28 (1992))，然后在乙醇中用5％Pd/C 加氢使这种中间体还原，给出八氢吲哚-2-羧酸酯，一般称之为Ohi -酯，如以下所总结。

含有反式-Ohi官能度的本发明化合物，是用Vincent等人〔Drug Design and Discovery，Vol.9，pp 11-28(1992)〕的方法制备的。 这总结在以下所示方案中：

含有双环系统(有或无杂原子)的本发明化合物可以用Teetz等人 〔Tetrahedron Letters，25，4479(1984)〕的方法制备。一般地是： 式是P是一个保护基团，Rx是烷基。

引进用于制备本发明化合物的N-取代甘氨酸官能度(Y)所需的 中间体是用标准技术制备的。

例如，一种卤代乙酸酯如溴乙酸叔丁酯当用适当的伯胺处理时可转 化成有所希望取代的化合物：

BrCH2COO-叔丁基+RgNH2→HNRgCH2COO-叔丁基

让这种溴乙酸叔丁酯与适当的胺反应，可在纯态下或较好在一种非 活泼溶剂如一种醇中进行。较好的是，用摩尔过量的胺迫使该反应完成。 较好的是，反应混合物也含有一种非活泼的酸清除剂，例如至少一摩尔 当量的三乙胺。虽然反应物合并时通常要冷却(如0℃)，但通常让反 应混合物回升到室温，此后该反应通常在24小时内完成。尽管溴乙酸酯 较好，但也可以采用其它卤代乙酸酯如碘乙酸酯和氯乙酸酯进行这种转 化。类似地，也可以采用其它酯基。叔丁酯之所以较好，是因为在后来 用茴香醚和三氟乙酸处理时可容易地使之脱除。

用于制备这些中间体的第二种方法可用以下方案概括：

R°-CHO+H2NCH2COOEt→R°-CH＝NCH2COOEt-R°→CH2-NHCH2COOEt 式中R°-CH2-是一个在与甘氨酸部分的连接点的相邻位置有一个无取 代的亚甲基基团的Rg-基团。

在以上反应方案中，适当的醛在一种非活泼溶剂如甲醇或乙醇中与 甘氨酸酯混合。如果使用该甘氨酸酯的盐形式，则可以添加一摩尔当量 的碱如氢氧化钾，使得能产生该氨酸酯的游离碱。醛与甘氨酸酯的反应 生成Schiff碱中间体，然后可以用一种还原剂如氰基硼氢化钠处理使之 就地还原。Schiff碱生成通常在不到1小时后发生；还原一般在10～15 小时后完成。甲酯或乙酯是特别适用的，因为这些基团在二噁烷水溶液 中用氢氧化锂处理时可以脱除(解封闭)。采用一种适用的酮代替醛 R°-CHO，可制备其与甘氨酸胺连接的亚甲基基团有取代的中间体。

此外，且尤其对于那些其Rg为Ar(即没有介在烷基)的化合物， 较好的是用标准技术(例如让活化形式的P-X’-COOH与ArNH2反 应)制备中间体P-X’-CONHAr，然后按以上所述使这种中间体与卤 代乙酸烷酯反应，给出P-X’-CONHAr-CH2-COO-alk，然后 可以用常用方法使之进一步转化。

本发明的最终化合物或其中间体多数可以用标准技术相互转化。例 如，可以使有硝基取代的芳基化合物还原(例如，在亚硫酸氢钠存在下， 在一种非活泼溶剂如乙醇、水或其混合物中进行)。当该硝基化合物在 亚硫酸氢钠存在下在水/乙醇混合物中加热回流时，还原通常在若干小时 内完成。所生成的胺可能存在于最终产物中；如果这种胺存在于一种中 间体中，则可能理想的是将其转化成其最终所希望的形式(例如，酰化， 以提供酰化的胺)或加以保护，以避免在随后的化学反应期间发生副反 应。如果游离胺是所希望的化合物，则Cbz保护基团在这一方面是特别 有用的。这种类型的其它转变和相互转化对于熟练的有机化学家来说是 显而易见的。

如同本门技术的熟练人员将要知道的那样，上述转变可以依靠以上所 说明的起始原料进行，或者在大多数情况下也可以依靠含有各自相同官 能团的二肽或三肽中间体来实现。在后者的情况下，可以不管是否需要 保护各种基团；因此，所涉及的化学反应顺序与类型将制约保护基团的 需要与类型以及合成的进行顺序。如同熟练的技师们也将知道的，人们 可以选用其它保护基团，只要它们能在随后的化学反应期间达到保护官 能团的目的但也能在适当条件下以适当顺序脱除从而能进行随后的转化 即可。例如，在方案1中，上述G’包括其R为-CN的取代基；这种腈 基可以转化成脒或还原成胺，后者可以任选地进一步制作成本发明的 胍。

本发明的化合物最好是以酸加成盐的形式分离。通式I化合物与诸 如以上提到的那些酸生成的盐可作为药物上可接受的盐用于抗血栓形成 剂给药和用于制备这些药剂的配方。其它酸加成盐也可以制备，和用于 此类肽的分离与纯化。例如，与甲磺酸、正丁磺酸、对甲苯磺酸和萘磺 酸等磺酸生成的盐就可以这样使用。

通式I的化合物是按如下制备的：

a)同时或依次脱除通式II对应化合物的保护基团P，

       (P)X-Y-NH-(CH2)r-G(P)    II 式中(P)X代表一个可带有一个或多个保护基团P的残基X，所述P独立 地选自其X包含碱性NH残片的通式I化合物的氨基保护基P，和其X 包含羧基残片的通式I化合物的羧基保护基P，而G(P)代表一个可带有 一个或多个独立选择的氨基保护基P的残基G；或

b)对于其R为 的通式I化合物，使其R为 的通式I对应化合物氢解；然后，当需要通式I化合物的一种盐时，与一 种药物上可接受的酸生成盐。

可能较好的是，过程b)与过程a)同时进行。对于其酸保护基为 叔丁酯和/或其氨基保护基为叔丁氧碳酰的通式I化合物，可通过在茴香 醚存在下在一种惰性溶剂如二噁烷或二氯甲烷中用一种强酸如三氟乙酸 或无水氯化氢处理来脱除保护基。对于其酸保护基为苄酯和/或其氨基保 护基为苄氧碳酰的通式I化合物，可通过氢解、方便地在乙醇-HCl中用 炭载钯催化剂进行来脱除保护基。

在制备所希望的稳定盐形式的同时使通式I化合物纯化的较好方法 是美国专利5,250,660中所述的方法。按照该方法，稳定的硫酸盐或盐酸 盐是通过用C18逆相色谱法的制备型纯化来提供的，其中含水部分包含 pH2.5的硫酸或盐酸，而乙腈是有机部分。这种酸性洗脱液的pH是用一 种羟基形式的阴离子交换树脂如Bio-Rad AG-1X8调节到约pH4 与约pH6之间的。在pH调整之后，将三肽硫酸盐或盐酸盐的溶液冻干， 提供干粉形式的纯盐。在这种工艺的一个实例中，可将粗 D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2硫酸盐溶解在水中，并将溶液装到Vydac C18 RP HPLC 5cm×50cm柱上。用10小时时间，使用2-10％B(A ＝0.01％H2SO4；B＝乙腈)的梯度。收集多个级分，把分析型RP HPLC 测定表明含有产物的级分合并在一起。合并级分的pH用氢氧化物形式的 AG-1X8树脂(Bio-Rad，3300 Ragatta Blvd.，Richmond， CA94804)调至pH4.0-4.5。将溶液过滤，滤液冻干，提供硫酸盐形式 的纯D-、L-二酰胺。

这些非对映体在残基X上的光学活性异构体也被认为是本发明的组 成部分。这样的光学活性异构体可以从其各自的光学活性前体物用上述 步骤制备，或通过使外消旋混合物拆析来制备。这种拆析可以通过与一 种手性试剂衍生化、随后用色谱法或用重复结晶法进行。用标准方法将 手性助剂脱除，提供基本上光学纯的本发明化合物或其前体的异构体。 关于拆析的进一步细节可参阅Jacques等人，Enantiomers，Racemates， and Resolutiorns.，John Wiley & Sons，1981。

作为本发明化合物合成中最初起始原料采用的化合物是众所周知 的，而且在商业上不可得的情况下，容易用有本门技术普通技能的人员 常用的标准步骤合成。

下列实例是为进一步描述本发明和提供比较例而提供的，不要理解 成对本发明的限制。

本说明书中使用的缩略语有如下含义。

氨基酸残基：Arg＝精氨酰，Glu＝谷氨酰，Gly＝甘氨酰，Pro ＝脯氨酰，hPro＝高脯氨酰，Azt＝氮杂环丁烷-2-碳酰，Phg＝苯 甘氨酰，Phe＝苯丙氨酰，hPhe＝高苯丙氨酰，1-Tiq＝1，2，3，4-四 氢异喹啉-1-碳酰，3-Tiq＝1，2，3，4-四氢异喹啉-3-碳酰，Cha ＝β-环己基丙氨酰，hCha＝α-氨基-γ-环己基丁酰，NMI＝N -甲基吲哚-2-甲酰，Ohi＝顺式-八氢吲哚-2-甲酰，1-Piq ＝全氢异喹啉-1-碳酰，3-Piq＝全氢异喹啉-3-碳酰，Met＝ 甲硫氨酰，Met(O2)＝S，S-二氧代甲硫氨酰。

Agm＝胍基丁胺；鲱精胺

Boc＝叔丁氧碳酰

Bn＝苄基

Cbz＝苄氧碳酰

DCC＝二环己基碳化二亚胺

DMF＝二甲基甲酰胺

Et＝乙基

DMSO＝二甲基亚砜

EtOAc＝乙酸乙酯

Et2O＝二乙醚

EtOH＝乙醇

Fmoc＝9-芴基甲氧碳酰

FAB-MS＝快原子轰击质谱

FD-MS＝场解吸质谱

IS-MS＝离子喷雾质谱

HRMS＝高分辨率质谱

HOBT＝1-羟基苯并三唑水合物

IR＝红外光谱

RPHPLC＝逆相高性能液体色谱法

Ph＝苯基

TFA＝三氟乙酸

THF＝四氢呋喃

TLC＝薄层色谱法

采用了下列RPHPLC参数：溶剂A：0.05％盐酸水溶液(3L水中 1.5ml浓盐酸)；溶剂B：乙腈；梯度：如每个实例中所定义；方法1： 柱：Vydac C18-2.5cm×25cm；流量率：5ml/分；方法2：柱：Vydac C18-5cm×25cm；流量率：10ml/分；方法3：柱：VydacC18-2.5cm ×50cm；流量率：10ml/分。

除非另有说明，否则pH调节和后处理都是用酸或碱水溶液进行。

在显示1H-NMR的实例中，反应所给出的产品是用质子NMR表 征的，以证实得到了所指出的化合物；无此类数据的IR类似地指出得到 了令人满意的红外光谱。HRMS用来证实那些没有为所述步骤的产物获 得令人满意的元素分析的化合物的准确质量；指出了所观察离子(如 MH+)的元素组成。

                       实例1 

      EtSO2-D-Phe-Pro-Agm·HCl

A)Boc-D-Phe-Pro-OBn的制备

在0℃，向Boc-D-Phe-OH(89.1g，336mmol)、Pro-OBn 盐酸盐(81.2g，336mmol)、HOBT(50g，370mmol)和N，N-二异丙 基乙胺(176ml，1,008mmol)的二氯甲烷(600ml)溶液中添加1-(3 -二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(71g，370mmol)。搅 拌18小时后，混合物用二乙醚(1L)稀释，并依次用1N柠檬酸 (250ml)洗涤3次、用水(250ml)洗涤1次、用饱和碳酸氢钠水溶 液(250ml)洗涤3次、用饱和氯化钠水溶液(250ml)洗涤1次。有 机相干燥(Na2SO4)、过滤、真空浓缩，给出140g(92.5％)淡黄色 泡沫状物。

FD-MS，m/e 452(M+)

1H NMR

B)D-Phe-Pro-OBn·TFA的制备

在0℃搅拌下，向Boc-D-Phe-Pro-OBn(68g，150mmol)的二氯甲 烷(50ml)溶液中添加茴香醚(20ml)，随后添加三氟乙酸(400ml)。 搅拌3小时后，溶剂真空蒸发，将稠油状残留物溶解在二乙醚(1.5L)， 冷藏(72小时)。将白色沉淀物滤出、用二乙醚(300ml)洗涤、干燥， 给出59.4g(85％)白色粉末。

1H NMR

C)EtSO2-D-Phe-Pro-OBn的制备

在-78℃搅拌下，向D-Phe-Pro-OBn·TFA(12g，25.7mmol)和 三乙胺(7ml，50.2mmol)的二氯甲烷(200ml)溶液中，通过加料漏斗 滴加乙磺酰氯(2.65ml，28.3mmol)。让反应容器回升到0℃，搅拌4 小时后加水(10ml)。有机相用1N盐酸(100ml)洗涤3次、用饱和 氯化钠溶液(100ml)洗涤1次，然后真空脱除溶剂。产物用硅胶闪急 色谱法纯化，以乙酸乙酯/己烷(6∶4)洗脱。含产物的级分(用TLC 判断)合并、浓缩，给出6.62g(58％)黄色油状物，放置后凝固。 1H NMR FD-MS，m/e 445(M+) 分析C23H28N2O5S：

计算：C，62.14；H，6.35；N，6.30

实测：C，61.87；H，6.37；N，6.18。

D)EtSO2-D-Phe-Pro-OH的制备

在搅拌下，向EtSO2-D-Phe-Pro-OBn(4.5g，10.1mmol)的对二噁烷 (150ml)溶液中添加氢氧化锂一水合物(2.1g，50.5mmol)的水 (75ml)溶液。搅拌16小时后，真空浓缩使溶液体积减半，溶液用水 (300ml)和0.1N NaOH(100ml)稀释。然后，水相用二乙醚(250ml) 洗涤2次，用固体柠檬酸酸化，然后用乙酸乙酯(150ml)萃取3次。 合并的乙酸乙酯萃取液用饱和氯化钠水溶液(200ml)洗涤、干燥 (MgSO4)、过滤、浓缩，给出3.6g(90％)白色固体。 FD-MS，m/e 335(M+) 分析C16H22N2O5S：

计算：C，54.22；H，6.26；N，7.90

实测：C，54.40；H，6.42；N，7.85。

E)N，N’-二Boc-S-甲基异硫脲的制备

在搅拌下，向草酸二叔丁酯(100g，458mmol)的叔丁醇(300ml) 溶液中添加二-S-甲基异硫脲硫酸盐(32.7g，117mmol)的水(150ml) 溶液，随后添加氢氧化钠(19.2g，480mmol)的水(150ml)溶液。搅 拌48小时后，混合物真空浓缩至原体积的大约1/3，用二乙醚(500ml) 稀释。有机相用水(250ml)洗涤1次，用1N柠檬酸(250ml)洗涤3 次，再用水(250ml)洗涤1次。然后，将有机相干燥(MgSO4)、过 滤、真空浓缩，给出42g(62％)白色固体。 1H NMR

F)Ng，Ng’-二Boc-胍基丁胺的制备

在搅拌下，向1，4-丁二胺(23g，258mmol)的2∶1二甲基甲酰胺： 水(300ml)溶液中，通过加料漏斗添加N，N’-二Boc-S-甲基异硫 脲(15g，52mmol)的二甲基甲酰胺(100ml)溶液。搅拌2小时后， 真空脱除溶剂，将残留物溶解在1N柠檬酸(250ml)中，用水(250ml) 稀释，用乙酸乙酯(250ml)洗涤。乙酸乙酯相用1N柠檬酸(100ml) 反萃，合并的水相用碳酸钠碱化，用固体氯化钠饱和，用乙酸乙酯 (250ml)萃取2次。合并的乙酸乙酯萃取物用饱和氯化钠水溶液 (200ml)洗涤、干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，给出12.5g(73％) 稠糖浆状物。 1H NMR

G)EtSO2-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2的制备

在搅拌下，向Ng，Ng’-二Boc-胍基丁胺(2g，6mmol)的二氯甲 烷(30ml)溶液中添加EtSO2-D-Phe-Pro-OH(2.1g，6mmol)、HOBT (810mg，6mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.6g，12mmol)，随后添 加1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.4g， 73mmol)。搅拌20小时后，溶液用乙酸乙酯(300ml)稀释，用1N 柠檬酸(150ml)洗涤3次、用水(150ml)洗涤1次、用饱和碳酸氢 钠水溶液洗涤2次。然后，将有机相干燥(MgSO4)、过滤、真空浓缩。 残留物用硅胶柱色谱法纯化，以乙酸乙酯∶己烷(1∶4)直至乙酸乙酯 的步进梯度洗脱。含产物的级分(用TLC判断)合并、浓缩，给出2.4g (60％)稠油状物。 1H NMR FD-MS，m/e 668(M+)

H)EtSO2-D-Phe-Pro-Agm·HCl的制备

在搅拌下，将EtSO2-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2(1.6g，2.4mmol)的茴香 醚(1ml)悬浮液溶解在三氟乙酸(20ml)中，在室温搅拌14时。真 空脱除溶剂，将残留物分配在水(100ml)和二乙醚(50ml)之间。水 相再次用二乙醚(50ml)洗涤，然后部分浓缩、冻干，得到1.4g粗三 氟乙酸盐。然后将此物料的一半溶解在水中，用RPHPLC(方法1； 98/2(A/B)；递减至50/50(A/B)；60分钟)纯化，给出490mg(81％) 白色粉末。 1H NMR FD-MS，m/e 467(M+) 分析C21H34N6O4S·HCl·H2O

计算：C，48.41；H，7.16；N，16.13；Cl，6.80；

实测：C，48.01；H，6.81；N，16.15；Cl，6.97。

                  实例2

         EtSO2-D-Cha-Pro-Agm·HCl

A)Boc-D-Cha-Pro-OBn的制备

用大体上相当于实例1-A中所述的那种方法，从Boc-D-Cha-OH和 Pro-OBn·HCl制备Boc-D-Cha-Pro-OBn，产率91％(109g)。 FD-MS，m/e 458(M+)    

B)D-Cha-Pro-OBn·TFA的制备

用基本上相当于实例1-B所述的那种方法，制备D-Cha-Pro- OBn·TFA(理论产率的116％，130g)。     1H NMR FD-MS，m/e 359(M+)

C)EtSO2-D-Cha-Pro-OBn的制备

用基本上相当于实例1-C所述的那种方法，制备EtSO2-D-Cha- Pro-OBn(产率20％，2.3g)。 1H NMR FD-MS，m/e 450(M+) 分析C23H34N2O5S：

计算：C，61.31；H，7.61；N，6.22；

实测：C，61.55；H，7.59；N，6.28。

D)EtSO2-D-Cha-Pro-OH的制备

用基本上相当于实例1-D所述的那种方法，制备EtSO2-D-Cha- Pro-OH(产率48％，0.78g)。 1H NMR FD-MS，m/e 361(M+)

E)EtSO2-D-Cha-Pro-Agm(Boc)2的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从EtSO2-D-Cha-Pro- OH和Ng-Ng-di-Boc-Agm制备400mg(40％)EtSO2-D-Cha-Pro- Agm(Boc)2。 1H NMR FD-MS，m/e 674(MH+)

F)EtSO2-D-Cha-Pro-Agm·HCl的制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备EtSO2-D-Cha- Pro-Agm·HCl(产率45％，100mg)。产品用RPHPLC(方法1， 98/2(A/B)，递减至50/50(A/B)，60分钟)纯化。 1H NMR FD-MS，m/e 473(M+) 分析C21H40N6O4S·1.2HCl·H2O

计算：C，47.20；H，8.15；N，15.73；Cl，7.96；

实测：C，47.47；H，7.84；N，16.10；Cl，7.80。

                 实例3

        EtOCO-D-Phe-Pro-Agm·HCl

A)EtOCO-D-Phe-Pro-OH的制备

用基本上相当于实例1-C和1-D所述的那些方法，用氯甲酸乙 酯代替乙磺酰氯，制备了6.59g(92％)EtOCO-D-Phe-Pro-OH。 1H NMR FD-MS，m/e 335(M+) 分析C17H22N2O5：

计算：C，61.07；H，6.63；N，8.38；

实测：C，60.88；H，6.72；N，8.14。

B)EtOCO-D-Phe-Pro-Agm·HCl的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从EtOCO-D-Phe- Pro-OH和Ng-Ng’-di-Boc-Agm制备2.1g(54％)EtOCO-D-Phe-Pro- Agm(Boc)2。然后，用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备 390mg(77％)EtOCO-D-Phe-Pro-Agm·HCl产品用RPHPLC(方法 1，98/2(A/B)，递减至50/50(A/B)，60分钟)纯化。 1H NMR FD-MS，m/e 447(M+) 分析C22H34N6O4·0.9HCl·0.2TFA·H2O：

计算：C，51.70；H，7.22；N，16.15；Cl，6.13；

实测：C，51.73；H，7.20；N，16.54；Cl，6.36。

                实例4

         NMI-D-Phe-Pro-Agm·HCl (N-[(1-甲基-1H-吲哚-2-基)碳酰]-D-苯丙氨酰-N- [4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]丁基]-L-脯氨酰胺·-盐酸盐)

A)NMI-D-Phe-Pro-OH的制备

向N-甲基吲哚-2-羧酸(2.6g，14.9mmol)的干四氢呋喃(45ml) 溶液中添加五氟苯酚(3g，16.5mmol)，随后添加1-(3-二甲胺基 丙基)-3-乙基碳化二亚胺(3.2g，16.5mmol)。让混合物搅拌回流 3.5小时，然后冷却到室温。向此混合物中添加D-Phe-Pro-OBn·TFA(7g， 14.9mmol)和N，N-二异丙基乙胺(4g，30mmol)的四氢呋喃(25ml) 溶液。在额外搅拌2小时后，真空脱除溶剂，残留物溶解在乙酸乙酯 (500ml)中，然后用0.1N硫酸氢钠水溶液(250ml)洗涤3次。用1N碳 酸钾水溶液(250ml)洗涤3次。有机相干燥(Na2SO4)、过滤、真空 浓缩，给出6.5g无定形固体(沾污了五氟苯酚的、所希望产品的混合物)。 然后，用基本上相当于实例1-D所述的那种方法使这种粗产品水解， 给出3.8g(62％)泛白色固体。 1H NMR FD-MS，m/e 419(M+)

B)NMI-D-Phe-Pro-Agm·HCl的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，制备了900mg(20％) NMI-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2。然后用基本上相当于实例1-H所述的那种 方法，制备了144mg(31％)NMI-D-Phe-Pro-Agm·HCl。这种粗产 品溶解在冰乙酸中，用RPHPLC纯化(方法1，90/10(A/B)，递减 至40/60(A/B)，80分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 532(M+) 分析C29H37N7O3·0.9HCl·0.6TFA·0.5H2O：

计算：C，56.46；H，6.29；N，15.27；Cl，4.97；

实测：C，56.77；H，6.58；N，15.35；Cl，5.28。

             实例5

       D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NH)NH2·HCl

A)Boc-D-Phe-Pro-OH的制备

向Boc-D-Phe-Pro-OBn(145g，320mmol)的对二噁烷(660ml)溶 夜中添加氢氧化锂一水合物(54g，1,280mmol)的水(300ml)溶液， 猛烈搅拌。4小时后，溶液真空浓缩到原体积的大约1/4，用水(350ml) 和0.1N氢氧化钠(100ml)稀释。水相用二乙醚(250ml)洗涤3次， 然后用固体柠檬酸酸化到pH3，引起一种沉淀物生成。将固体滤出、用 水洗涤2次，然后高真空干燥，得到91g(78％)白色固体。 1H NMR FD-MS，m/e 363(M+)

B)Ng，Ng’-二Boc-6-氨基己基胍的制备

用基本上相当于实例1-F所述的那种方法，从1，6-己二胺制备 4.7g(66％)Ng，Ng’-二Boc-6-氨基己基胍。

C)Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NBoc)NH(Boc)的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-D-Phe-Pro-OH 和Ng，Ng’-二Boc-6-氨基己基胍制备1.3g(62％)Boc-D-Phe- Pro-NH(CH2)6NHC(NBoc)NH(Boc)。 1H NMR FD-MS，m/e 703(M+)

D)D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备了大约100mg D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NH)NH2·HCl。 FD-MS，m/e 389(M+) 分析C21H34N6O2·0.9HCl·0.9TFA·0.5H2O：

计算：C，49.97；H，6.95；N，15.34；

实测：C，49.60；H，7.13；N，15.23。

                  实例6

         D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NH)NH2·HCl

A)Ng，Ng’-二Boc-5-氨基戊基胍的制备

用基本上相当于实例1-F所述的那种方法，从1，5-戊二胺制备 1.73g(72％)Ng，Ng’-二Boc-5-氨基戊基胍。 FD-MS，m/e 345(M+) 1H NMR

B)Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NBoc)NH(Boc)的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-D-Phe-Pro-OH 和Ng，Ng’-二Boc-5-氨基戊基胍制备1.9g(92％)Boc-D-Phe-Pro- NH(CH2)5NHC(NBoc)NH(Boc)。 1H NMR FD-MS，m/e 689(M+)

C)D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备了大约100mg D- Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NH)NH2·HCl。此产品用RPHPLC纯化(方法1， 98/2(A/B)，递减至40/60(A/B)，40分钟)。 FD-MS，m/e 389(M+) 分析C20H32N6O2·0.9HCl·0.9TFA·0.7H2O：

计算：C，48.71；H，6.79；N，15.63；

实测：C，48.34；H，6.68；N，16.01。

                 实例7

        D-Phe-Pro-NH(CH2)3NHC(NH)NH2·HCl

A)Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)3NHC(NBoc)NH(Boc)的制备

向1，3-二氨基丙烷(2.2g，30mmol)的二甲基甲酰胺(25ml)溶 液中添加N，N’-二Boc-S-甲基异硫脲(2.9g，10mmol)的二甲基甲 酰胺(25ml)溶液。搅拌1小时后，混合物用二氯甲烷(400ml)稀释， 用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液的混合液(200ml)洗涤2 次，用饱和氯化钠水溶液(250ml)洗涤1次。有机相干燥(MgSO4)、 过滤、真空法部分浓缩至约200ml体积。

然后，向此溶液中添加Boc-D-Phe-Pro-OH(3.6g，10mmol)、HOBT (1.3g，10mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.3g，10mmol)，随后添加 1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺· HCl(2.1g， 11mmol)。搅拌16小时后，真空脱除溶剂，残留物用乙酸乙酯(250ml) 收集。有机相用1N柠檬酸(200ml)洗涤3次，用水(100ml)洗涤1 次，用饱和碳酸氢钠水溶液(200ml)洗涤2次，用饱和氯化钠水溶液 洗涤1次。然后将有机相干燥(MgSO4)、过滤、真空浓缩。然后，残 留物用硅胶柱色谱法纯化，以乙酸乙酯/己烷(1∶4)直至乙酸乙酯的步 进梯度洗脱。含产品的级分(用TLC判断)浓缩，得到2.6g(40％) 粘稠无色油状物。 1H NMR FD-MS，m/e 661(M+)

B)D-Phe-Pro-NH(CH2)3NHC(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备460mg(71％) D-Phe-Pro-NH(CH2)3NHC(NH)NH2·HCl。产品用RPHPLC纯化(方法1，

98/2(A/B)，递减至40/60(A/B)，40分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 361(M+) 分析C18H28N6O2·HCl·1.1TFA·1.1H2O：

计算：C，44.66；H，6.20；N，15.47；

实测：C，44.69；H，6.10；N，15.19。

                实例8

    D-Phe-Pro-NHCH2-trans-CH＝CHCH2NHC(NH)NH2·HCl

A)Ng，Ng’-二Boc-4-氨基-反式-2-丁烯基胍的制备

用基本上相当于实例1-F所述的那种方法，从1，4-二氨基-反式 -2-丁烯制备2.4g(42％)Ng，Ng’-二Boc-4-氨基-反式-2 -丁烯基胍。

B)Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-反式-CH＝CHCH2NHC(NBoc)NHBoc 的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-D-Phe-Pro-OH和 Ng，Ng’-二Boc-4-氨基-反式-2-丁烯基胍制备2.7g(55％) Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-反式-CH＝CHCH2NHC(NBoc)NHBoc。 1H NMR FD-MS，m/e 673(M+)

C)D-Phe-Pro-NHCH2-反式-CH＝CHCH2NHC(NH)NH2·HCl的 制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备大约100mg D- Phe-Pro-NHCH2-反式-CH＝CHCH2NHC(NH)NH2·HCl。此产品用 RPHPLC纯化(方法1，98/2(A/B)，递减至40/60(A/B)，40分 钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 373(M+) 分析C19H28N6O2·HCl·0.5TFA·2.5H2O：

计算：C，47.01；H，6.81；N，16.45；

实测：C，47.36；H，6.53；N，16.70。

                实例9

      D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NHC(NH)NH2·2TFA

A)p-H2NCH2C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc的制备

用基本上相当于实例1-F所述的那种方法，从对二甲苯二胺制备 2.3g(42％)p-H2NCH2C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc。

1H NMR

B)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-D-Phe-Pro-OH 和p-H2NCH2C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc制备2.8g(63％)Boc-D-Phe- Pro-p-NHCH2-C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc。 1H NMR FD-MS，m/e 723(M+)

C)D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CH2NHC(NH)NH2·2TFA的制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备725mg(81％) 标题二TFA盐，但没有用RPHPLC进一步纯化。 1H NMR FD-MS，m/e 423(M+) 分析C23H30N6O2·2.1TFA·H2O：

计算：C，48.05；H，5.05；N，12.36；

实测：C，48.06；H，4.85；N，12.28。

                  实例10

          D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl

A)N-Boc-对(氨基甲基)苄胺的制备

在搅拌下，向对二甲苯二胺(10g，73mmol)的二甲基甲酰胺/水 (1∶1，100ml)溶液中添加草酸二叔丁酯(8g，37mmol)。搅拌20 小时后，混合物真空浓缩，残留物在二乙醚(200ml)和1N柠檬酸 (200ml)之间分配。水相再次用二乙醚(200ml)洗涤，然后用固体 碳酸氢钠碱化，用固体氯化钠饱和。然后，水相用乙酸乙酯(200ml) 萃取4次。合并的乙酸乙酯萃取液干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，给出 2.1g(24％)稠油状物。 1H NMR FD-MS，m/e 237(M+) 分析C13H20N2O2

计算：C，66.07；H，8.53；N，11.85；

实测：C，66.33；H，8.44；N，12.11。

B)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NHBoc的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-D-Phe-Pro-OH 和N-Boc-对(氨基甲基)苄胺制备1.1g(63％)Boc-D-Phe-Pro-p- NHCH2C6H4CH2NHBoc。 1H NMR FD-MS，m/e 581(M+) 分析C32H44N4O6

计算：C，66.19；H，7.64；N，9.65；

实测：C，65.99；H，7.63；N，9.42。

C)D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备大约100mg D- Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl。此产品用RPHPLC纯化(方法1， 98/2(A/B)，递减至40/60(A/B)，40分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 381(M+) 分析C22H28N4O2·HCl·1.1TFA·H2O

计算：C，51.87；H，5.77；N，10.00；

实测：C，51.78；H，5.88；N，10.28。

                  实例11

        D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl

A)N-Boc-间(氨基甲基)苄胺的制备

用基本上相当于实例10-A所述的那种步骤，从间二甲苯二胺制备 2.6g(30％)N-Boc-间(氨基甲基)苄胺。 1H NMR FD-MS，m/e 237(MH+) 分析C13H20N2O2

计算：C，66.07；H，8.53；N，11.85；

实测：C，65.81；H，8.48；N，11.98。

B)Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CH2NHBoc的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-D-Phe-Pro-OH 和N-Boc-间(氨基甲基)苄胺制备1.6g(95％)Boc-D-Phe-Pro- m-NHCH2C6H4CH2NHBoc。 1H NMR FD-MS，m/e 581(M-)

C)D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备约100mg D- Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 381(M+) 分析C22H28N4O2·HCl·TFA·H2O

计算：C，52.51；H，5.87；N，10.21；

实测：C，52.13；H，6.21；N，10.48。

                实施例12

D-Phe-Pro-NHCH2-反式-4-(氨基甲基)环己烷·HCl

A)N-Boc-反式-4-(氨基甲基)环己烷羧酸的制备

向反式-4-(氨基甲基)环己烷羧酸(50g，318mmol)的1N氢 氧化钠(334ml，334mmol)和叔丁醇(400ml)溶液中添加草酸二叔丁 酯(73g，334mmol)的四氢呋喃(50ml)溶液。搅拌20小时后，真空 脱除溶剂，残留物在水(500ml)和二乙醚(250ml)之间分配。水相 再次用二乙醚(250ml)洗涤，然后用固体柠檬酸酸化，导致生成白色 沉淀。将此固体过滤、用水(100ml)洗涤2次、真空干燥，给出48g (59％)白色粉末。 1H NMR

B)HOCH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)环己烷的制备

在0℃搅拌下，向N-Boc-反式-4-(氨基甲基)环己烷羧酸 (15g，58mmol)的四氢呋喃(150ml)溶液中添加N-甲基吗啉(5.9g， 58mmol)，随后添加氯甲酸乙酯(6.3g，58mmol)。搅拌30分钟后， 添加硼氢化钠(6.5g，175mmol)，然后用5分钟时间通过加料漏斗添加 甲醇(300ml)。让混合物搅拌1小时，然后真空脱除溶剂。将残留物 溶解在乙酸乙酯(500ml)中，用1N柠檬酸(250ml)洗涤2次，用 水(100ml)洗涤1次，用饱和碳酸氢钠水溶液(250ml)洗涤2次， 用饱和氯化钠水溶液(250ml)洗涤1次。将有机相干燥(MgSO4)、 过滤、浓缩，给出13g(91％)标题化合物。 1H NMR

C)NH2CH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)环己烷的制备

在搅拌下，向HOCH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)环己 烷(13g，53mmol)和三苯膦(21g，80mmol)的四氢呋喃(300ml)溶 液中添加偶氮二羧酸二乙酯(13.9g，80mmol)，随后添加二苯基磷酰叠 氮(22g，80mmol)的四氢呋喃(100ml)溶液。搅拌16小时后，真空 脱除溶剂，残留物用硅胶柱色谱法分离，用乙酸乙酯/己烷(1∶3)直至 乙酸乙酯/己烷(3∶1)的步进梯度洗脱。含产品的级分(用TLC判断) 合并、浓缩，给出17.4g粗产品(有较高Rf化合物沾污)。这种粗叠氮 化物溶解在甲醇(200ml)中，此溶液添加到正在搅拌的微细 Na2S·9H2O(51g，212mmol)和三乙胺(lg，11mmol)的甲醇 (100ml)悬浮液中。所形成的混合物加热回流(16小时)，然后冷却 到室温，真空脱除溶剂。残留物用水(250ml)稀释，用固体柠檬酸酸 化。水相用乙酸乙酯(250ml)洗涤2次，用固体碳酸氢钠碱化，用固 体氯化钠饱和。然后，水相用乙酸乙酯(200ml)萃取3次，合并的萃 取液干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，给出6.4g(45％)稠油状物。 1H NMR

D)N-Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)环 己烷的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-D-Phe-Pro-OH 和NH2CH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)环己烷制备4.5g(74％) N-Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)环己烷。 1H NMR FD-MS，m/e 587(M+)

E)D-Phe-Pro-NHCH2-反式-4-(氨基甲基)环己烷·HCl的 制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备了588mg(75 ％)D-Phe-Pro-NHCH2-反式-4-(氨基甲基)环己烷·HCl。在这 种情况下，中间体TFA盐的分析型RPHPLC纯化是非常清洁的，但该盐 是吸湿的。因此，将该盐溶解在0.1N HCl(20ml)中，把pH调到5， 将此样品再次冻干，得到稳定的白色固体盐酸盐。 1H NMR FD-MS，m/e 387(M+) 分析C22H34N4O2·HCl·TFA·2H2O

计算：C，50.30；H，7.04；N，9.78；

实测：C，50.44；H，7.20；N，9.62。

                      实例13

          D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2·HCl

A)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-D-Phe-Pro-OH 和对-NO2-苄胺·HCl制备8g Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NO2。 将此中间体溶解在乙醇(250ml)中，加热回流。在搅拌下，向此溶液 中添加Na2S2O4(12.3g，70mmol)的水(125ml)溶液。搅拌回流2小 时后，真空脱除溶剂，残留物分配在乙酸乙酯(250ml)和水(250ml) 之间。水相再次用乙酸乙酯(250ml)萃取，将合并的有机相干燥 (MgSO4)、过滤、真空浓缩，给出2.4g(21％)淡黄色固体。 1H NMR FD-MS，m/e 466(M+) 分析C26H34N4O4：

计算：C，66.93；H，7.34；N，12.01；

实测：C，66.69；H，7.32；N，12.28。

B)D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备了180mg(60 ％)D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2·HCl。此产品用RPHPLC纯化(方 法1，98/2(A/B)，递减至60/40(A/B)，60分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 366(M+) 分析C21H26N4O2·HCl·0.6TFA·0.5H2O

计算：C，55.51；H，6.00；N，11.66；

实测：C，55.16；H，6.14；N，11.57。

              实例14

        D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2·HCl

A)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2的制备

用基本上相当于实例13-A所述的那种方法，从Boc-D-Phe-Pro-OH 和对-NO2-苯乙胺·HCl制备3g(23％)Boc-D-Phe-Pro-p- NHCH2CH2C6H4NH2。 1H NMR FD-MS，m/e 480(M+) 分析C27H36N4O4：

计算：C，67.48；H，7.55；N，11.66；

实测：C，67.30；H，7.54；N，12.34。

B)D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备了175mg(58 ％)D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2·HCl。此产品用RPHPLC纯化(方 法1，98/2(A/B)，递减至60/40(A/B)，60分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 380(M+) 分析C22H28N4O2·HCl·0.7TFA·0.7H2O

计算：C，55.18；H，6.15；N，11.00；

实测：C，55.12；H，6.18；N，10.99。

                  实例15

        D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl (D-苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]L-脯氨酰 胺·盐酸盐)

A)对(氨基甲基)苄腈·TFA的制备

在搅拌下，向氢化钠(2.2g，56mmol，60％油分散液)的四氢呋喃 (100ml)悬浮液中添加4-(溴甲基)苄腈(10g，51mmol)。通过 加料漏斗向此混合物中缓缓添加亚氨基二羧酸二叔丁酯(12.2g， 56mmol)溶液。搅拌16小时后，此混合物用二乙醚(300ml)稀释， 用水(150ml)洗涤2次。然后，将有机相干燥(MgSO4)、过滤、浓 缩。然后，将所生成的固体溶解在少量二氯甲烷中。添加茴香醚 (10ml)，使溶液冷却到0℃。然后，此溶液用三氟乙酸(200ml)稀 释，将其搅拌1小时。然后真空脱除溶剂，油状残留物与二乙醚(100ml) -起猛烈搅拌，几分钟后此产品凝固。将沉淀物过滤、用二乙醚洗涤、 真空干燥，给出11.3g(90％)白色粉末。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 132(M+)

B)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-D-Phe-Pro-OH 和对(氨基甲基)苄腈·TFA制备7.4g(78％)Boc-D-Phe-Pro-p- NHCH2C6H4CN。在这种情况下，产品用二乙醚重结晶法纯化。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 476(M+)

C)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2的制备

硫化氢气体通过Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN(2g，4.2mmol) 的吡啶(25ml)和三乙胺(2.5ml)溶液鼓泡30分钟。然后将反应容 器密封，在室温静置2天。然后该溶液用水(100ml)稀释，用乙酸乙 酯(200ml)萃取2次。合并的有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤2次， 干燥(MgSO4)、过滤、真空浓缩。

将残留物溶解在丙酮(50ml)中，添加甲基碘(10ml)，溶液加 热回流(2小时)。真空脱除溶剂，将残留物溶解在甲醇(20ml)中， 添加NH4OAc(712mg，9.2mmol)，溶液加热回流(12小时)。再 次真空脱除溶剂，残留物溶解在1N柠檬酸(100ml)中，水相用乙酸乙 酯(200ml)洗涤2次，然后用固体碳酸氢钠碱化，用固体氯化钠饱和， 用乙酸乙酯(200ml)萃取2次。合并的乙酸乙酯萃取液干燥(MgSO4)、 过滤、浓缩，给出1.4g(67％)稠油状物。 1H NMR FD-MS，m/e 494(M+)

D)D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-H所述的那种方法，制备了7.7g(57％) D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。此产品用RPHPLC纯化(方 法3，98/2(A/B)，递减至70/30(A/B)，300分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 394(M+) 分析C22H27N5O2·HCl·1.4TFA·0.5H2O

计算：C，49.76；H，5.12；N，11.70；

实测：C，49.75；H，5.19；N，11.58。

                    实例16

D-phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2·0.75HCl

A)间(氨基甲基)苄腈·TFA的制备

用基本上相当于实例15-A所述的那种方法，从间(溴甲基)苄腈 制备10.8g(86％)间(氨基甲基)苄腈·TFA。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 132(M+)

B)Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CN的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-D-Phe-Pro-OH 和间(氨基甲基)苄腈·TFA制备7.5g(79％)Boc-D-Phe-Pro-m- NHCH2C6H4CN。在这种情况下，产品用二乙醚重结晶法纯化。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 476(M+) 分析C27H32N4O4：

计算：C，68.05；H，6.77；N，11.76；

实测：C，68.27；H，6.82；N，11.96。

C)Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2的制备

用基本上相当于实例15-C所述的那种方法，制备了1.1g(53％) Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2。 FD-MS，m/e 494(M+)

D)D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2·0.75HCl的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，制备了0.65g(63％) D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2·0.75HCl。此产品用RPHPLC纯化 (方法2，98/2(A/B)，递减至75/25(A/B)，120分钟)。 FD-MS，m/e 394(M+) 分析C22H27N5O2·0.75HCl·1.2TFA·0.5H2O

计算：C，51.72；H，5.33；N，12.36；Cl，4.69；

实测：C，51.79；H，4.93；N，11.96：Cl，4.82。

                  实例17

        D-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl (D-高脯氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨 酰胺·盐酸盐)

A)Cbz-D-hPro-OH的制备

D-hPro-OH(5.0g，38.7mmol)溶解在四氢呋喃(100ml)和水 (30ml)中。溶液的pH用2N氢氧化钠调节到9.5，滴加氯甲酸苄酯 (5.5ml，38.7mmol)，pH用2N氢氧化钠保持在9.5。反应混合物在室 温再搅拌1小时。有机溶剂真空蒸发，向残留物中添加二乙醚(100ml) 和水(50ml)。将水层分离，溶液的pH用3N盐酸调节至2.8，添加乙 酸乙酯(150ml)。将有机层分离、干燥(MgSO4)；滤液真空浓缩， 给出9.6g(95％)透明油状物。 1H NMR FD-MS，m/e 264(MH+)

B)Cbz-D-hPro-Pro-OH的制备

Cbz-D-hPro-OH(9.5g，36mmol)溶解在乙酸乙酯(100ml)中， 将溶液冷却到0℃。向溶液中添加2，4，5-三氯苯酚(7.1g，36mmol)和 1，3-二环己基碳化二亚胺(7.4g，36mmol)。反应混合物在0℃搅拌 1小时，并在室温搅拌1小时。把沉淀物滤出，滤液真空浓缩成油状物。 此油状溶解在吡啶(100ml)中，添加Pro-OH(4.2g，36mmol)和三乙 胺(5.0ml，36mmol)。反应混合物在室温搅拌(24小时)。反应溶剂 真空脱除，成为一种油状物。残留物溶解在水(100ml)中，添加二乙 醚(50ml)，pH用2N氢氧化钠调节至9.5。水层用二乙醚萃取2次。 将水层分离，pH用3N盐酸调节至2.8，添加乙酸乙酯(150ml)。将 有机层分离、干燥(MgSO4)，滤液真空浓缩，成为一种无定形固体 (11.4g，88％)。 FD-MS，m/e 361(M+) 分析C19H24N2O5：

计算：C，63.32；H，6.71；N，7.77；

实测：C，63.42；H，6.84；N，7.96。

C)Cbz-D-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4CN的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Cbz-D-hPro-Pro-OH 和p-NH2CH2C6H4CN·TFA制备了2.2g(84％)Cbz-D-hPro-Pro-p- NHCH2C6H4CN。 1H NMR FD-MS，m/e 474(M+) 分析C27H30N4O4：

计算：C，68.34；H，6.37；N，11.81；

实测：C，68.36；H，6.47；N，11.57。

D)D-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例15-C所述的那种方法，制备了Cbz-hPro- Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2(28mmol，理论值)。然后将这种粗材料 溶解在乙酸(35ml)中，HBr气体通过该溶液鼓泡30分钟。在另外搅 拌1小时后，溶剂真空脱除，将残留物溶解在水(200ml)中，用乙酸 乙酯(100ml)洗涤2次。然后，水相用离子交换树脂(BiO Rad AG1-X8，碱性形式)调节到pH4、冻干，给出松散白色固体。然后将 此产物重新溶解在水(25ml)中，用制备型RPHPLC纯化(方法3， 98/2(A/B)，递减至70/30(A/B)，300分钟)，给出5g(41％) hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·0.9HCl·0.9HBr·0.5H2O。 1H NMR FD-MS，m/e 357(M+) 分析C19H27N5O2·0.9HCl·0.9HBr·0.5H2O

计算：C，48.34；H，6.36；N，14.83；Cl，6.76；Br，15.23；

实测：C，48.66；H，6.36；N，14.62；Cl，7.14；Br，14.90。

                      实例18

      1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl (N-[[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-1-[[(4aS，8aS)-十氢- 1(R)-异喹啉基]碳酰]-L-脯氨酰胺·二盐酸盐)

A)Cbz-D-1-Piq-Pro-OH的制备

1-异喹啉羧酸(50g，0.288mol)的EtOH(150ml)和60ml 5N HCl溶液用5％Rh/Al2O3(14g)、以52巴(750psi)氢、在高压装 置中于50℃还原17小时。还原混合物通过一层硅藻土过滤，滤液真空 浓缩。固体与水一起研制、过滤、干燥，给出DL-全氢化-1-异喹啉 羧酸(DL-1-Piq-OH)(30g，48％)FD-MS184(MH+)。

DL-1-Piq-OH(30.2g，137mmol)溶解在四氢呋喃(150ml) 和水(150ml)中。溶液的pH用5N NaOH调节至9.8，滴加氯甲酸苄 酯(21.6ml，151mmol)，用2N NaOH使pH保持在9.5。反应混合物在 室温搅拌另外2小时。有机溶剂真空蒸发，向残留物中添加二乙醚 (150ml)和水(50ml)。将水层分离，溶液的pH用5H HCl调节至 2.5，添加乙酸乙酯(200m1)。将有机层分离、干燥(MgSO4)，滤 液真空浓缩，给出一种透明油。将该油溶解在二乙醚(150ml)中，溶 液在室温静置(24小时)。将沉淀物滤出、干燥，给出2-Cbz-DL -全氢化-1-异喹啉羧酸(Cbz-DL-1-Piq-OH)(32g，75％) FD-MS 318(MH+)。

Cbz-DL-1-Piq-OH(31.8g，100mmol)溶解在DMF (100ml)中，冷却至0℃。向反应混合物中添加脯氨酸叔丁酯(17.1g， 100mmol)、1-羟基苯并三唑(13.5g，100mmol)和DCC(20.6g， 100mmol)。反应混合物在0℃搅拌3小时，在温室搅拌24小时。将反 应沉淀滤出，滤液真空浓缩成一种油状物。该油状物溶解在EtOAc(200ml)和水(100ml)中。将有机层分离，依次用1N NaHCO3、 水、1.5N柠檬酸和水洗涤。有机层干燥(MgSO4)，滤液蒸发成油状物、 干燥，给出2-Cbz-DL-全氢化-1-异喹啉碳酰-L-脯氨酸叔 丁酯(Cbz-DL-1-Piq-Pro-O-t-Bu)(47.0g，100％) FAB-MS 470 (MH+)。

(Cbz-DL-1-Piq-Pro-O-t-Bu)(47.0g，100mmol)放入一个盛有三氟 乙酸(100ml)、CH2Cl2(35ml)、茴香醚(5ml)的圆底烧瓶中， 在室温搅拌(1小时)。反应混合物真空浓缩而无加热，添加二乙醚 (100ml)和水(100ml)。溶液的pH用5N NaOH调节至9.8。水 层分离，溶液的pH用5N HCl调节至2.5，添加乙酸乙酯(200ml)。 将有机层分离、干燥(MgSO4)，滤液真空浓缩，给出一种透明油状物。 该油状物溶解在二乙醚(700ml)中，向溶液中添加(L)-(-)-α -甲基苄胺。让该溶液在室温静置5天。将所生成的固体滤出，用二乙 醚洗涤。滤液用1.5N柠檬酸和水洗涤。有机层干燥(MgSO4)，滤液 蒸发成油状物。将该油状物溶解在二乙醚(400ml)中，在室温静置(48 小时)。将所生成的固体滤出，用二乙醚洗涤、干燥，给出2-Cbz-D-全 氢化-1-异喹啉碳酰-L-脯氨酸(Cbz-D-1-Piq-Pro-OH)(5.86g，36％)FAB- MS 415(MH+)；[α]D＝-34.2°(C＝0.5，MeOH)。

B)N-Boc-对(氨基甲基)苄腈的制备

在搅拌下，向氢化钠(4.6g，115mmol，60％油分散液)的四氢呋喃 (150ml)悬浮液中添加4-(溴甲基)苄腈(20.5g，105mmol)。向此 混合物中(通过加料漏斗缓慢)添加亚氨基二羧酸二叔丁酯 (25g，115mmol)溶液。在搅拌16小时后，混合物用二乙醚(500ml) 稀释，用水(250ml)洗涤2次。然后将有机相干燥(MgSO4)、过滤、 浓缩，给出40.2g粗固体。

然后，将所生成的固体(28.3g，85mmol)溶解在四氢呋喃(150ml) 中，添加氢氧化钠(3.4g，85mmol)的甲醇(300ml)溶液。搅拌过滤 之后，将溶液浓缩至大约一半体积，加水以促进产品沉淀。将沉淀物滤 出、真空干燥，给出18.5g(94％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 232(M+) 分析 C13H16N2O2： 计算 C，67.22；H，6.94；N，12.06； 实测 C，67.19；H，7.16；N，11.82。

C)P-(BocNHCH2)C6H4C(NH)NHCbz的制备

用基本上相当于实例15-C所述的那种方法，把N-Boc-对(氨基 甲基)苄腈(32.7g，140mmol)精心制作成P-(BocNHCH2)C6H4C (NH)NH2。将此步骤的残留物溶解在二甲基甲酰胺(700ml)中， 添加N，N-二异丙基乙胺(72g，560mmol)。在搅拌下，向此溶液中 滴加氯甲酸苄酯(48g，280mmol)。搅拌16小时后，加水(100ml)， 然后真空脱除溶剂。将残留物分配在水(250ml)和乙酸乙酯(500ml) 之间。将两相分离，有机相用饱和氯化铵水溶液(250ml)洗涤3次，用 水(200ml)洗涤1次，用饱和碳酸氢钠水溶液(250ml)洗涤2次。 然后将有机相干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，产品用二乙醚重结晶，给 出14g(26％)白色固体。

1H NMR

FD-MS，m/e 384(M+)    

D)P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl的制备

在0℃向P-(BocNHCH2)C6H4C(NH)NHCbz(11g，28.7mmol)的 二氯甲烷(125ml)溶液中添加茴香醚(10ml)，随后添加三氟乙酸 (125ml)。搅拌2小时后，真空脱除溶剂，将残留物溶解在1N盐酸 (50ml)中，用二乙醚(50ml)洗涤2次。用离子交换树脂(Bio Rad AG1-X8，碱形式)将PH调节至3，将该溶液冻干，给出9.2g(90％)白色粉 末。

1H NMR

FD-MS，m/e 284(M+)

E)Cbz-1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Cbz-1-Piq-Pro-OH 和P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制备了4.4g(79％)Cbz-1- Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。在这种情况下，由于溶解度问题， 反应是用P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl。在二甲基甲酰胺中进行 的。

1H NMR

FD-MS，m/e 681(MH+)

分析 C39H45N5O6

计算 C，68.91；H，6.67；N，10.30；

实测 C，68.71；H，6.93；N，10.38。

F)1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制备

向Cbz-1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz(4.2g，6.1mmol)的 乙醇(200ml)溶液中添加1N盐酸(18.3ml，18.3mmol)和水(100ml)。 在搅拌下向此溶液中添加5％Pd/C(1g)，让氢气通过该溶液鼓泡2 小时。然后，该混合物用氮气吹扫，然后通过一层硅藻土过滤。然后将 滤液真空浓缩、重新溶解于水(25ml)中，用RPHPLC纯化(方法2， 98/2(A/B)，递减至60/40(A/B)，300分钟)，给出1.3g(53％)1-Piq- Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。

1H NMR

FD-MS，m/e 412(M+)

分析  C23H33N5O2·1.9HC·2.5H2O：

计算  C，52.53；H，7.65；N，13.32；Cl，12.81

实测  C，52.63；H，7.36；N，13 47；Cl，12.95。

                      实例19

        D-3-Piq-Pro-p-NH-CH2C6H4C(NH)NH2·3HCl

A)Cbz-D-3-Piq-Pro-OH的制备

D-苯丙氨酸(50g，302mmol)与37％甲醛溶液(120ml)和浓 HCl(380ml)回流反应。30分钟后，再添加50ml甲醛，反应继续进 行3小时。让反应混合物冷却到-10℃，把沉淀物过滤出来。此固体真 空干燥，给出D-1，2，3，4-四氢-3-异喹啉羧酸(24.2g，45％)， FD-MS 178(MH+)。

D-1，2，3，4-四氢-3-异喹啉羧酸(17g，96mmol)的水(200ml) 和20ml 5N HCl溶液用5％Rh/Al2O3(8.5g)以138巴(2000psi)在高 压装置中于120℃加氢16小时。反应混合物通过一层硅藻土过滤，滤液 冷冻干燥，给出D-全氢化-3-异喹啉羧酸(D-3-Piq-OH) (21g，100％)FD-MS 184(MH+)。

D-3-Piq-OH(21.0g，95.8mmol)溶解在四氢呋喃(75ml) 和水(50ml)中。溶液的pH用5N NaOH调节至10.0，滴加氯甲酸苄 酯(16.4ml，115mmol)，pH用2N  NaOH保持在9.5。反应混合物 在室温又搅拌1小时。有机溶剂真空蒸发，向残留物中添加二乙醚 (100ml)和水(50ml)。将水层分离，溶液的pH用3N HCl调节至 3.0，添加乙酸乙酯(250ml)。将有机层分离、干燥(MgSO4)。滤 液真空浓缩，给出2-Cbz-D-全氢化-3-异喹啉羧酸(Cbz-D- 3-Piq-OH)的透明油状物(25.8g，85％)，FD-MS318(MH+)。

Cbz-D-3-Piq-OH(17.2g，54mmol)溶解在DMF(50ml) 中，冷却至0℃。向此反应混合物中添加脯氨酸叔丁酯(9.2g， 54mmol)、1-羟基苯并三唑(7.3g，54mmol)和DCC(11.1g， 54mmol)。反应混合物在0℃搅拌3小时，在室温搅拌24小时。将反 应沉淀物滤出，滤液真空浓缩成油状物。将该油状物溶解在EtOAc(200ml)和水(100ml)中。将有机层分离，依次用1N NaHCO3、水、 1.5N柠檬酸和水洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，滤液蒸发成油状物， 干燥后给出2-Cbz-D-全氢化-3-异喹啉碳酰-L-脯氨酸叔丁 酯(Cbz-D-3-Piq-Pro-O-Bu)(23.8，94％)FAB- MS 471(MH+)。

Cbz-D-3-Piq-Pro-O-t-Bu(31.2g，66.3mmol)放置 在一个盛有三氟乙酸(100ml)、茴香醚(5ml)的圆底烧瓶中，在室 温搅拌(1时)。反应混合物真空浓缩而无加热，添加二乙醚(150ml) 和水(100ml)。溶液的pH用5N NaOH调节至9.8。将水层分离，溶 液的pH用3N HCl调节至2.8，添加乙酸乙酯(200ml)。将有机层分 离、干燥(MgSO4)、过滤。滤液真空浓缩，给出一种透明油状物。该 油状物溶解在二乙醚(300ml)中，溶液在室温静置(24小时)。将所 形成的固体滤出、用二乙醚洗涤、干燥，给出2-Cbz-全氢化-3- 异喹啉碳酰-L-脯氨酸(Cbz-D-3-Piq-Pro-OH)(13.5g， 49％)FAB-MS 415(MH+)。 分析C23H30N2O5：

计算：C，66.65；H，7.29；N，6.76；

实测：C，66.90；H，7.33；N，6.81。

B)Cbz-D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制备

用基本上相当于实例18-E所述的那种方法，从Cbz-D-3-Piq -Pro-OH和P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制备了1.6g (49％)Cbz-D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。 MD-MS，m/e 680(M+)。

C)D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·3HCl的制备

用基本上相当于实例17-C所述的那种方法，制备150mg D-3 -Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·3HCl。产品用RPHPLC纯化(方 法2，98/2(A/B)，递减至60/40(A/B)，240分钟)。 1H NMR

FD-MS，m/e 412 (M+) 分析  C23H33N5O2·3HCl·0.5H2O： 计算  C，52.13；H，7.04；N，13.22； 实测  C，52.35；H，7.23；N，12..95。

                  实施例20

        D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·3HCl ((S-顺式)-N[[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-八氢-1-D-高脯氨酰-1H-吲 哚-2-甲酰胺·三盐酸盐) A)Cbz-D-hPro-Ohi-OH的制备

HCl气体通入正在搅拌的(S)-二氢吲哚-2-羧酸(20g，110mmol) 的乙醇(500ml)悬浮液中。当这种酸完全溶解时，让溶液开始回流。 16小时后，使溶液冷却，真空脱除溶剂。残留物用二乙醚研制，所形成 的灰白色固体用过滤法收集、用乙烷洗涤、在30℃的真空烘箱中干燥过 夜，给出(S)-二氢吲哚-2-羧酸乙酯·HCl(25.7g，78％)。

将此固体溶解在乙醇(800ml)中，添加5％Pd/C(25g)，所形 成的悬浮液在帕尔摇动器上加氢8小时(4.1巴，60psi)。溶液过滤， 真空脱除溶剂。残留物溶解、与二乙醚研制，用过滤法收集18.8g(73％) 灰白色固体(顺式-Ohi-OEt·HCl )。

用基本上相当于实例1-A所述的那种方法，从Cbz-D-hPro-OH和 顺式-Ohi-OEt·HCl制备了13.5(93％)Cbz-D-hPro-顺式- Ohi-OEt 1H NMR FD-MS，m/e 442(M+) 分析  C25H34N2O5： 计算  C，67.85；H，7.74；N，6.33； 实测  C，67.59；H，7.72；N，6.48。

用基本上相当于实例1-D所述的那种方法，制备了12.5g(102 ％)Cbz-D-hPro-顺式-Ohi-OH。 1H NMR FD-MS，m/e 414(M+) 分析  C23H30N2O5： 计算  C，66.65；H，7.29；N，6.76； 实测  C，66.46；H，7.30；N，6.86。

B)  Cbz-D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制备

用基本上相当于实例18-E所述的那种方法，从Cbz-D-hPro -Ohi-OH和P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制备了3.3g(67 ％)Cbz-D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。 1H  NMR PD-MS，m/e 681 (MH+)

C)D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·3HCl的制备

用基本上相当于实例18-F所述的那样方法，制备了2.2g(66％) D-hPro-Ohi-p-NHCH2-C6H4C(NH)NH2·3HCl。此产品用RPHPLC纯化 (方法2，98/2(A/B)，递减至60/40(A/B)，3000分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 412 (M+) 分析  C23H33N5O2·3HCl·0.5H2O计算  C，52.13；H，7.04；N，13.22； 实测  C，51.98；H，7.04；N，13.35。

                实施例21

D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl (D-高脯氨酰-N(α)-(2-苯基乙基)-N-〔〔4-(氨基 亚氨基甲基)苯基〕甲基〕甘氨酰胺·二盐酸盐)

A)Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-OH的制备

在0℃向苯乙胺(58ml，461mmol)和三乙胺(21ml，154mmol) 的乙醇(200ml)溶液中添加溴乙酸叔丁酯(30g，154mmol)的乙醇 (50ml)溶液，在一小时内完成。撤去冷浴，让溶液回升室温。搅拌过 夜后，真空脱除溶剂，将残留物溶解在1N柠檬酸中。该水溶液用二乙醚 洗涤2次，用固体碳酸氢钠碱化，然后用乙酸乙酯(200ml)萃取3次。 合并的乙酸乙酯萃取液干燥(MgSO4)、过滤、静置24小时。所形成的 沉淀物滤出、用二乙醚洗涤、干燥，给出10.5g白色固体。母液浓缩至约 100ml体积，然后用二乙醚(400ml)稀释。静置30分钟后，将溶液过 滤，得到另外23.5g白色固体，合计34g(94％)N(PhCH2CH2)Gly -O-t-Bu。 1H-NMR FD-MS、m/e 235(M+)

用基本上相当于实例1-A所述的那种方法，从Cbz-D-hPro -OH和N(PhCH2CH2)Gly-O-t-Bu制备了10.8g(56％) Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-o-t-Bu。 1H NMR FD-MS，m/e 480 (M+) 分析  C28H36N2O5： 计算  C，69.98；H，7.55；N，5.83； 实测  C，69.68；H，7.56；N，5.77。

用基本上相当于实例18-A所述的那种方法，即Cbz-DL-1- Piq-Pro-O-t-Bu脱保护，制备了9.2g(100％)Cbz-D-hPro -N(PhCH2CH2)Gly-OH。 1H NMR FD-MS，m/e 425 (M+) 分析  C24H28N2O5： 计算  C，67.91；H，6.65；N，6.60 实测  C，68.19；H，6.68；N，6.71

B)  Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2-C6H4C(NH)NHCbz的制 备

用基本上相当于实例18-E所述的那种方法，从Cbz-D-hPro- N(PhCH2CH2)Gly-OH和P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl 制备了3.2g(55％)Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p- HNCH2C6H4C(NH)NHCbz。 1H NMR FD-MS，m/e 690(M+) 分析  C40H43N5O6： 计算  C，69.65；H，6.28，N，10.15 实测  C，69.80；H，6.46，N，10.14

C)D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2-C6H4C(NH)NH2·2HCl的 制备

用基本上相当于实例19-F所述的那种方法，制备了770mg(54％) D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。此产品用 RPHLC纯化(方法2，98/2(A/B)，递减至85/15(A/B)，120分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 423(MH+)     分析  C24H31N5O2·2HCl： 计算  C，58.30；H，6.73；N，14.16； 实测  C，58.05；H，6.60；N，14.28。

                实施例22

D-hPro-Pro(4-cis-Pho)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl (顺式-D-高脯氨酸-N-[[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-4 -苯氧基-L-脯氨酰胺·二盐酸盐)

A)Cbz-D-hPho-Pro(4-cis-Pho)-OH的制备

在0℃向Cbz-Pro(4-反式-OH)-Et(58.8g，200mmol)、 三苯膦(65.6g，250mmol)和苯酚(23.5g，250mmol)的四氢呋喃 (500ml)溶液中，在1小时内滴加偶氮二羧酸二乙酯(40ml， 250mmol)的四氢呋喃(50ml)溶液。然后撤去冷裕，让溶液回升到室 温(16小时)。然后真空脱除溶剂，剩余的琥珀糖浆状物用二乙醚研制。 过滤法除去白色固体，滤液浓缩。然后，残留物用硅胶(1kg)柱色谱 法纯化，用乙烷直至1∶1乙酸乙酯/己烷的步进梯度洗脱。含纯产品的 级分(用TLC判断)合并，真空浓缩，给出36.3g(50％)无色糖浆状 Cbz-Pro(4-顺式-苯氧基)-OEt。 1H NMR FD-MS，m/e 369(M+) 分析  C21H23NO5： 计算  C，68.28；H，6.28；N，3.79； 实测  C，68.38；H，6.30；N，3.89。

向Cbz-Pro(4-顺式-苯氧基)-OEt(25g，67.7mmol)的 乙醇(400ml)溶液中添加5％Pd/C(5g)。在向该溶液中通入氢气 3小时之后，溶液通过一层硅藻土过滤，添加3ml浓盐酸，将溶液真空 浓缩。残留物悬浮在二乙醚中，猛烈搅拌，然后过滤、干燥，给出14.2g (77％)白色固体状Pro(4-顺式-苯氧基)-OEt.HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 235(M+) 分析  C13H18NO3Cl： 计算  C，57.46；H，6.68；N，5.15； 实测  C，57.68；H，6.78；N，5.18；

用基本上相当于实例1-A所述的那种方法，从Cbz-D-hPro -OH和Pro(4-顺式-苯氧基)-OEt·HCl制备了19.4g(100％) Cbz-D-hPro-Pro(4-顺式-苯氧基)-OEt。 1H NMR FD-MS，m/e 480(M+) 分析  C27H32N2O6： 计算  C，67.48；H，6.71；N，5.83； 实测  C，67.71；H，6.79；N，5.89。

用基本上相当于实例1-D所述的那种方法，制备了16g(100％) Cbz-D-hPro-Pro(4-顺式-苯氧基)-OH。 1H NMR FD-MS，m/e 452(M+) 分析  C25H28N2O6： 计算  C，66.36；H，6.24；N，6.19； 实测  C，66.22；H，6.18；N，6.17。

B)Cbz-D-hPro-Pro-(4-cis-Pho)-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的 制备

用基本上相当于实例18-E所述的那种方法，从Cbz-D-hPro- Pro(4-cis-Pho)-OH和p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl 制备了4.55g(75％)Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-Pho)-p- NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。 1H NMR FD-MS，m/e 718(M+)

C)D-hPro-Pro(4-cis-Pho)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制备

用基本上相当于实例18-F所述的那种方法，制备了873mg(40 ％)D-hPro-Pro(4-Cis-Pho)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。此产品用 RPHPLC纯化(方法2，98/2(A/B)，递减到85/15(A/B)，120 分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 451(MH+) 分析  C25H31N5O3·2HCl：

计算  C，57.47；H，6.37；N，13.40；

实测  C，57.22；H，6.29；N，13.47。

                  实例23

    EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl     (N-(乙磺酰)-D-苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨 酰胺·盐酸盐)

A)p-NH2CH2-C6H4CN·HCl的制备

正在0℃搅拌的、N-Boc-对氨基甲基苄腈(15g，64.6mmol)的乙 酸乙酯(400ml)溶液中通入HCl气体10分钟。撤去冷浴，搅拌1.5小 时后，真空脱除溶剂，将残留物悬浮在二乙醚中、过滤、用二乙醚洗涤、 干燥，给出10.1g(93％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 132(M+) 分析  C8H9N2Cl： 计算；C，56.98；H，5.38；N，16.61；Cl，21.02； 实测：C，56.36；H，5.46；N，16.22；Cl，21.31。

B)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CN的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从EtSO2-D-Phe-Pro- OH和p-NH2CH2-C6H4CN·HCl制备了1.5g(80％)EtSO2-D-Phe-Pro-p- NHCH2-C6H4CN。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 468(M+) 分析  C24H28N4O4S： 计算  C，61.52；H，6.02；N，11.90； 实测  C，61.23；H，6.13；N，11.80。

C)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(＝NOH)NH2  HCl的制备

向EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CN(1g，2.1mmol)的绝对乙醇 (35ml)溶液中添加N，N-二异丙基乙胺-(0.47ml，2.7mmol)， 随后添加盐酸羟胺(185mg，2.7mmol)，使溶液开始回流。16小时后， 使溶液冷却、真空脱除溶剂。此物料取250mg继续进行下一步，其余部 分用RPHPLC纯化(方法1，90/10(A/B)；在200分钟内递减至60/60 (A/B))。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 501(M+) 分析  C24H31N5O5S·1.2HCl·H2O： 计算  C，51.17；H，6.12；N，12.42；Cl，7.55； 实测  C，51.04；H，5.81；N，12.39；Cl，7.18。

D)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制备

向EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl(250mg， 0.52mmol)的乙醇(40ml)和水(19ml)溶液中添加1N HCl(1ml)， 随后添加5％Pd/C(250mg)。这种搅拌的悬浮液在氢气氛下放置18 小时，然后过滤、浓缩、用RPHPLC纯化(方法1，90/10(A/B)， 在200分钟内递减至60/40(A/B))，给出140mg(52％)EtSO2- D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 486(M+) 分析C24H31N5O4S·HCl·1.5H2O：

计算：C，52.50；H，6.42；N，12.75；

实测：C，52.56；H，6.19；N，12.59。

另5g产品用实例15所述的方法制备，用RPHPLC纯化(方法3； 98/2(A/B)，60分钟，在300分钟内递减至60/40(A/B))。

                  实例24

    EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl

A)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(＝NOH)NH2的制备

用基本上相当于实例23所述的那些方法，用m-BrCH2-C6H4CN代替 p-BrCH2-C6H4CN，制备了EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2-C6H4C(＝NOH)NH2。 此结晶中间体的140mg(13％)予以保留，其余部分继续进行步骤B。 1H NMR FD-MS，m/e 502(M+) 分析C24H31N5O5S：

计算：C，57.47；H，6.23；N，13.96；

实测：C，57.28；H，6.21；N，13.66。

B)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例23-C和23-D所述的那种方法，制备了 0.27g(28％，2步)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 486(M+) 分析C24H31N5O4S·1.1HCl·2H2O：

计算：C，51.32；H，6.48；N，12.47；Cl，6.94；

实测：C，51.33；H，6.09；N，12.20；Cl，6.66。

                  实例25

      D-1-Piq-Pro-m-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl

用基本上相当于实例23所述的那种方法，从Cbz-D-1-Piq-Pro-OH和 m-NH2CH2-C6H4CN·HCl制备了0.86g D-1-Piq-Pro-m- NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 412(M+) 分析C23H33N5O2·2.5HCl·0.5H2O：

计算：C，53.99；H，7.19；N，13.69；

实测：C，54.19；H，7.02；N，13.81。

                  实例26

    EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl

A)对氰基-反式-肉桂酸甲酯的制备

在0℃搅拌下，向NaH(6.1g 60％油悬浮液，153mmol)和对 氰基苯甲醛(20g，1531mmol)的四氢呋喃(250ml)悬浮液中，通过加 料漏斗添加膦酰乙酸三甲酯(28g，153mmol)的四氢呋喃(50ml)溶 液。搅拌48小时后，真空脱除溶剂，粗残留物溶解在乙酸乙酯(500ml) 中。乙酸乙酯溶液用水洗涤1次，用饱和NaHSO3水溶液洗涤3次，用 盐水洗涤1次。然后，有机相用MgSO4干燥、过滤、真空浓缩，给出28g (98％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 187(M+)

B)对氰基-二氢肉桂酸甲酯的制备

向对氰基-反式-肉桂酸甲酯(13.6g，73mmol)的甲苯(485ml) 溶液中添加5％Pd/ BaSO4(2.7g)。在4巴(60psi)的氢气下9 小时后，将溶液过滤、真空浓缩、硅胶柱色谱法纯化，用己烷直至30％ 乙酸乙酯/己烷的步进梯度洗脱。含产品的级分合并、浓缩，给出10.6g (77％)无色油状物。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 189(M+)

C)对氰基-二氢肉桂酸的制备

用基本上相当于实例1-D所述的那种方法，利用1.1当量 LiOH·H2O，从对氰基-二氢肉桂酸甲酯制备5.1g(58％)对氰基-二氢 肉桂酸。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 175(M+)

D)Boc-p-NHCH2CH2-C6H4CN的制备

向对氰基-二氢肉桂酸(6.7g，38.2mmol)和三乙胺(5.9ml， 42mmol)的叔丁醇(150ml)溶液中添加二苯基磷酰叠氮(11.6g， 42mmol)，使溶液开始回流。搅拌过夜后，使溶液冷却，真空脱除溶剂。 残留物溶解在乙酸乙酯中，用1N柠檬酸洗涤3次，用盐水洗涤1次，用 饱和NaHCO3水溶液洗涤2次，然后干燥(MgSO4)、过滤、真空浓缩。 然后，残留物用硅胶柱色谱法纯化，以10％乙酸乙酯/己烷直到50％乙 酸乙酯/己烷洗脱。用TLC判断的含产品级分合并、浓缩，给出5.4g(57 ％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 246(M+) 分析C14H18N2O2：

计算：C，68.27；H，7.37；N，11.37 ；

实测：C，68.39；H，7.50；N，11.40.

E)p-NH2CH2CH2-C6H4CN·HCl的制备

用基本上相当于实例23-A所述的那些方法，制备了3.6g(98％) p-NH2CH2CH2-C6H4CN·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 147(MH+) 分析C9H11N2Cl：

计算：C，59.18；H，6.07；N，15.34；Cl，19.41；

实测：C，58.90；H，6.16；N，15.20；Cl，19.30.

F)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4CN的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那些方法，从EtSO2-D-Phe-Pro- OH和p-NH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制备了1.5g EtSO2-D-Phe-Pro-p- NHCH2CH2-C6H4CN.。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 482(M+)

G) EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl的制 备

在搅拌下，向EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4CN(1g， 2.07mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.45ml，2.59mmol)的溶液中添加 盐酸羟胺(180mg，2.59mmol)，使溶液开始回流。18小时后，让溶液 冷却、真空脱除溶剂、残留物溶解在乙酸(15ml)中，用RPHPLC纯化(方 法2，90/10(A/B)；在200分钟内递减至60/40(A/B))。用分析型RPHPLC 确定的、含有纯EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl 的级分合并，像以上所述那样调节pH、冻干，给出0.35g(31％)EtSO2- D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 516(M+) 分析  C25H33N5O5S·HCl·H2O：

计算：C，52.67；H，6.36；N，12.28；Cl，6.22；

实测：C，52.40；H，6.10；N，12.25；Cl，6.51

H)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例23-D所述的那种方法，从EtSO2-D-Phe-Pro- p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl制备了0.098g(50％)EtSO2- D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 500(M+) 分析  C25H33N5O4S·2.6HCl·H2O：

计算：C，49.03；H，6.19；N，11.44；

实测：C，48.87；H，5.79；N，11.15.

                实例27

    EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl

A)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2的制备

用基本上相当于实例26-A至26-E和24-A所述的那些方法， 从间氰基苯甲醛制备了0.15g EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-  C6H4C(＝NOH)NH2。 1H NMR FD-MS，m/e 516(M+) 分析  C25H33N5O5S：

计算：C，58.23；H，6.45；N，13.50；

实测：C，57.99；H，6.57；N，13.28.

B)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于24-B所述的那种方法，从EtSO2-D-Phe-Pro-m- NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2制备了0.21g(20％)EtSO2-D-Phe-Pro- m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 500(M+) 分析  C25H33N5O4S·2.1HCl·0.7H2O

计算：C，51.00；H，6.25；N，11.89；

实测：C，50.79；H，5.86；N，11.54.

                  实例28

    D-l-Piq-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·2HCl

用基本上相当于实例23所述的那种方法，从Cbz-D-1-Piq-Pro-OH和 p-NH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制备了0.85g 1-Piq-Pro-p-NHCH2CH2- C6H4C(＝NH)NH2·2HCl。 1H NMR FD-MS、m/e 426 (M+) 分析   C24H35N5O2·2HCl·2H2O：

计算：C，53.93；H，7.73；N，13.10 ；

实测：C，53.94；H，7.60；N，13.06.

                      实例29

        D-1-Piq-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·2HCl

用基本上相当于实例23所述的那种方法，从Cbz-D-1-Piq-Pro-OH和 m-NH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制备了0.8g 1-Piq-Pro-m-NHCH2CH2- C6H4C(＝NH)NH2·2HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 426(M+) 分析  C24H35N5O2·2HCl·2H2O：

计算：C，53.93；H，7.73；N，13.10 ；

实测：C，53.62；H，7.57；N，13.18.

                  实例30

    EtSO2-3-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl

A)p-HOCH2CH2CH2-C6H4CN的制备

在搅拌下，向对氰基-二氢肉桂酸甲酯(10g，53mmol)的四氢呋 喃(150ml)溶液中添加LiBH4(1.15g，53mmol)，溶液加热回流。2 小时后，将溶液冷却，滴加磷酸钠缓冲剂(pH7)。气体释放完成后， 添加乙酸乙酯和水，将两层分离。水相用乙酸乙酯萃取1次，合并的乙 酸乙酯相用盐水洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤。浓缩，给出8.1g(95 ％)粘稠无色油状物。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 161(M+)

B)p-BrCH2CH2CH2-C6H4CN的制备

在搅拌下，向p-HOCH2CH2CH2-C6H4CN(8.1g，50mmol)的四氢呋 喃(100ml)溶液中添加三苯膦(14.4g，55mmol)，随后添加四溴化碳 (18.2g，55mmol)。搅拌18小时后，真空脱除溶剂，残留物用硅胶柱 色谱法纯化，以己烷直至20％乙酸乙酯/己烷的步进梯度洗脱。用TLC判 断的含产品级分合并、浓缩，给出7.3g(65％)粘稠无色油状物。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 223 (M+) 分析C10H10BrN：

计算：C，53.60；H，4.50；N，6.25；

实测：C，53.90；H，4.67；N，6.24.

C)p-Boc2NCH2CH2CH2-C6H4CN的制备

在搅拌下，向NaH(1.4g 60％油分散液，34mmol)的DMF (100ml)悬浮液中，通过加料漏斗滴加亚氨基二羧酸二叔丁酯(7.4g， 34mmol)的DMF(20ml)溶液。气体释放完成后，通过加料漏斗添加 p-BrCH2CH2CH2-C6H4CN(7g，31mmol)的DMF溶液，把溶液加热到 70℃。搅拌12小时后，将溶液冷却、真空脱除溶剂。残留物溶解在二乙 醚中，用水洗涤3次。有机相用MgSO4干燥、过滤、浓缩，残留物用硅 胶柱色谱法纯化，以己烷直至20％乙酸乙酯/己烷洗脱。含产品的级分 合并、浓缩，给出9.38g(84％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 361(M+) 分析C20H28N2O4：

计算：C，66.64；H，7.83；N，7.77；

实测：C，66.40；H，7.81；N，7.57.

D)p-NH2CH2CH2CH2-C6H4CN·HCl的制备

用基本上相当于实例23-A所述的那种方法，制备了4.3g(84％) p-NH2CH2CH2CH2-C6H4CN·HCl。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 160(M+)

E)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl的 的制备

用基本上相当于实例1-G和26-G所述的那些方法，从EtSO2-D- Phe-Pro-OH和p-NHCH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制备了0.32g EtSO2-D- Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 530(M+) 分析  C26H35N5O5S·1.2HCl·H2O：

计算：C，52.88；H，6.51；N，11.84；

实测：C，52.71；H，6.26；N，11.76.

F)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制 备

用基本上相当于实例23-D所述的那种方法，从EtSO2-D-Phe-Pro- p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl制备了0.13g(67％) EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 514 (M+) 分析  C26H35N5O4S·1.5HCl·2H2O：

计算：C，51.67；H，6.75；N，11.59；

实测：C，51.36；H，6.46；N，11.28.

                  实例31

    EtSO2-D-phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl

A)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl 的制备

用基本上相当于实例1-G和26-G所述的那些方法，从间氰基 -二氢肉桂酸制备了0.32g EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2- C6H4C(＝NOH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 530(M+) 分析  C26H35N5O5S·HCl·1.1H2O：

计算：C，53.30；H，6.57；N，11.95；Cl，6.05；

实测：C，52.97；H，6.19；N，11.96；Cl，6.13.

B)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制 备

用基本上相当于实例23-D所述的那种方法，从EtSO2-D-Phe-Pro- m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl制备了0.12g(62％) EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 514(M+) 分析  C26H35N5O4S·1.5HCl·H2O：

计算：C，53.26；H，6.62；N，11.94 ；

实测：C，53.19；H，6.25；N，12.00.

                  实例32

  1-Piq-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·2HCl

用基本上相当于实例23所述的那种方法，从1-Piq-Pro-OH 和p-NH2CH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制备了0.66g(48％)1-Piq-Pro-p- NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 440(M+) 分析  C25H37N5O2·2.1HCl·H2O：

计算：C，56.21；H，7.75；N，13.11；

实测：C，56.36；H，7.44；N，12.79.

                  实例33

    1-Piq-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·2HCl

用基本上相当于实例23所述的那种方法，从1-Piq-Pro-OH 和m-NH2CH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制备了0.64g(46％)1-Piq-Pro- m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 440(M+) 分析 C25H37N5O2·2HCl·H2O：

计算：C，56.60；H，7.79；N，13.20；

实测：C，56.92；H，7.55；N，13.26.

                实例34

    EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl

A)Boc-p-NHCH2C6H4NO2的制备

在搅拌下，向4-硝基苄胺盐酸盐(15g，79mmol)和N，N-二异 丙基乙胺(14ml，79mmol)的二氯甲烷(200ml)溶液中添加草酸二叔 丁酯(17g，79mmol)。48小时后，真空脱除溶剂，残留物溶解在乙酸 乙酯(500ml)中，用1M柠檬酸洗涤2次，用水洗涤1次，用饱和NaHCO3水溶液洗涤1次。有机相用MgSO4干燥、过滤、真空浓缩，给出一种灰 白色固体，后者用氯仿/己烷重结晶。将三茬晶体合并、用己烷洗涤、真 空干燥，给出11.5g(58％)灰白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 252(M+) 分析C12H16N2O4：

计算：C，57.13；H，6.39；N，11.10；

实测：C，57.27；H，6.60；N，11.13.

B)p-BocNHCH2C6H4NH2的制备

在0℃搅拌下，向p-BocNHCH2C6H4NO2(7.5g，29.7mmol)和 NiCl2·6H2O(17.7g，74.3mmol)的甲醇(150ml)溶液中，在30分 钟内分若干小批添加NaBH4(5.6g，149mmol)。NaBH4添加完成之后15 分钟，使溶液真空蒸发，残留物溶解在浓氢氧化铵中，用二氯甲烷萃取2 次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用MgSO4干燥、过滤、真空浓缩， 给出6.4g(97％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 222  (M+) 分析C12H18N2O2：

计算：C，64.84；H，8.16；N，12.60 ；

实测：C，65.10；H，8.42；N，12.76.

C)N，N’二Cbz-S-甲基异硫脲的制备

在搅拌下，向二-S-甲基异硫脲硫酸盐(20g，144mmol)的二氯 甲烷(200ml)悬浮液中添加5N氢氧化钠(16ml)。使溶液冷却到0℃， 滴加氯甲酸苄酯(41ml，288mmol)。同时，以能使溶液的pH保持在大 约11的速率添加2N氢氧化钠。然后撤去冷浴，回升到室温后，将两相 分离，水相用二氯甲烷(250ml)萃取。然后，合并的有机相用0.1N HCl(250ml)洗涤2次、用盐水(250ml)洗涤1次。然后，有机相用MgSO4干燥、过滤、真空浓缩，给出41g(79％)粘稠无色糖浆状物。 1H NMR

D)p-BocNHCH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz的制备

在搅拌下，向p-BocNHCH2C6H4NH2(5g，22.5mmol)的四氢呋喃 (50ml)溶液中添加N，N,N’二Cbz-S-甲基异硫脲(8.9g， 24.7mmol)。48小时后，真空脱除溶剂，残留物溶解在氯仿中，添加 硅胶，真空脱除溶剂，给出一种灰白色粉末，然后将其干装填到硅胶柱 上。然后，该柱以5％乙酸乙酯/己烷直至30％乙酸乙酯/己烷的步进梯 度洗脱。含产品的级分(用TLC确定)合并、真空浓缩，给出7.6g(63％) 白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 532(M+) 分析C29H32N4O6：

计算：C，65.40；H，6.06；N，10.52；

实测：C，65.66；H，6.35；N，10.59.

E)HCl·p-NH2CH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz的制备

用基本上相当于实例23-A所述的那种方法，从p- BocNHCH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz制备4.7g(89％)白色固体状 HCl·p-NH2CH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 433(MH+)

F)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-G和实例18-F所述的那些方法，从 EtSO2-D·Phe-ProOH和HCl·p-NH2CH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz制备了 1.1g EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 501 (M+) 分析C24H32N6O4S·HCl·H2O：

计算：C，51.73；H，6.36；N，15.14；

实测：C，52.32；H，5.99；N，14.79.

              实例35

    EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl    

用基本上相当于实例34所述的那些方法，从4-硝基苯乙胺·HCl 制备1.8g EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4CNH(NH)NH2·HCl。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 515(MH+) HRMS(FAB)，m/e计算C25H35N6O4S：515.2441

实测：515.2483。

            实例36

    EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl

用基本上相当于实例30-C和34-B直至34-F所述的那些方 法，从3-硝基苄基溴制备了1.8g EtSO2-D-Phe-Pro-m- NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 501(MH+) HRMS(FAB)，m/e计算C24H33N6O4S：501.2284

实测：501.2280。

                    实例37

    EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl

用基本上相当于实例26-D、26-B(用5％Pd/C代替Pd/BaSO4，用乙 酸乙酯代替甲苯)和34-D直至34-F所述的那些方法，从3-硝基肉桂酸制 备了0.85g EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 515(MH+) 分析 C25H34N6O4S·2.2HCl·0.5H2O：

计算：C，49.73；H，6.21；N，13.92 ；

实测：C，49.45；H，5.82；N，13.55.

                  实例38

D-1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl

用基本上相当于实例34所述的那些方法，制备了0.94g D-1-Piq- Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl。最终产品用RPHPLC纯化(方 法2，98/2(A/B)，递减至70/30(A/B)，180分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 427(MH+) 分析  C23H34N6O2·2HCl：

计算：C，55.31；H，7.26；N，16.82；Cl，14.20；

实测：C，55.05；H，7.23；N，16.55；Cl，14.24.

                    实例39

    D-1-piq-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl

用基本上相当于实例35所述的那些方法，制备了1.03g D-I-Piq- Pro-p-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl。最终产品用RPHPLC纯化 (方法2，98/2(A/B)，递减至70/30(A/B)，180分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 441(M+) 分析  C24H36N6O2·2HCl·1.5H2O：

计算：C，53.33；H，7.65；N，15.55；Cl，13.12；

实测：C，53.41；H，7.45；N，15.37；Cl，13.48.

                    实例40

      D-1-Piq-Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl

用基本上相当于实例36所述的那些方法，制备了1.04g D-1-Piq- Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl。最终产品用RPHPLC纯化(方 法2，98/2(A/B)，递减至70/30(A/B)，180分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 427(M+) 分析  C23H34N6O2·2HCl·H2O：

计算：C，53.38；H，7.40；N，16.24；Cl，13.70；

实测：C，53.25；H，7.50；N，16.23；Cl，13.88.

                  实例41

    D-1-Piq-Pro-m-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl

用基本上相当于实例37所述的那些方法，制备了0.96g D-1-Piq- Pro-m-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl。最终产品用RPHPLC纯化 (方法2，98/2(A/B)，递减至70/30(A/B)，180分钟)。 1H NMR FD-MS，m/e 441(M+) 分析  C24H36N6O2·2.1HCl·1.5H2O： 计算：C，52.97；H，7.61；N，15.44；Cl，13.68 ； 实测：C，52.80；H，7.57；N，15.46；Cl，13.35.

                      实例42

    D-l-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl

A)Cbz-DL-1-Piq-Cis-Ohi-OEt的制备

用基本上相当于实例1-A所述的那种方法，从Cbz-DL-1-Piq-OH 和Cis-Ohi-OEt·HCl制备了16.6g(100％)Cbz-DL-1-Piq-cis-Ohi-OEt。 1H NMR FD-MS，m/e 496(M+) 分析C29H40N2O5：

计算：C，70.13；H，8.12；N，5.64 ；

实测：C，69.96；H，8.23；N，5.73.

B)Cbz-D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制备

用基本上相当于实例1-D和18-E所述的那些方法，从Cbz-D，L- 1-Piq-Pro-OH和p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制备了Cbz-D-1-Piq- cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz和Cbz-L-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C (NH)NHCbz。这些非对映体用硅胶柱色谱法分离，利用乙酸乙酯/己烷 梯度洗脱。含前导非对映体的级分(Rf＝0.31，乙酸乙酯)合并、浓缩， 给出1.3g Cbz-L-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。含拖尾非对 映体的级分(Rf＝0.19，乙酸乙酯)合并、浓缩，给出1.5g白色泡沫 状Cbz-D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。 1H NMR FD-MS，m/e 735(MH+) 分析C43H51N5O6：

计算：C，70.37；H，7.00；N，9.54；

实测：C，70.20；H，7.22；N，9.36

C)D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制备

用基本上相当于实例18-F所述的那种方法，从Cbz-D-1-Piq-cis- Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz制备了0.61g(63％)D-1-piq-cis-Ohi- p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。这种情况下使用的HPLC梯度是在120 分钟内从98/2(A/B)递减至70/30(A/B)。 1H NMR FAB-MS，m/e 466.4(MH+) 分析  C27H39N5O2·2HCl·1H2O：

计算：C，58.27；H，7.79；N，12.58；

实测：C，58.66；H，7.56；N，12.78.

                  实例43

    D-3-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl

A)D-3-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制备

用基本上相当于实例1-A、1-D、18-E和18-F所述的那 些方法，制备了1.3g 3-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。 这种情况下使用的HPLC梯度是在120分钟内从98/2(A/B)递减至 70/30(A/B)。 1H NMR FAB-MS，m/e 466.4(MH+) 分析  C27H39N5O2·2HCl：

计算：C，60.22； H，7.67；N，13.00；

实测：C，59.95； H，7.73；N，12.89.

                      实例44

    EtSO2-Phg-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl ((S-顺式)-N-[[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-1-[N- (乙磺酰)-D-苯甘氨酰]-1H-引哚-2-羧酰胺·盐酸盐)

A)Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt的制备

用基本上相当于实例1-A所述的那种方法，从Boc-D-Phg-OH和 (S)-顺式-八氢吲哚-2-羧酸乙酯·HCl制备了14.9g(58％) Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt。 1H NMR FD-MS，m/e 430(M+) 分析C24H34N2O5：

计算：C，66.95；H，7.96；N，6.51；

实测：C，66.69；H，8.02；N，6.40.

B)D-Phg-cis-Ohi-OEt·HCl的制备

向冷(0℃)搅拌的Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt的乙酸乙酯溶液中通入 HCl气体10分钟。在回升到室温同时搅拌2小时之后，真空脱除溶剂。 所形成的固体悬浮在二乙醚中，随后用过滤法分离，给出10.7g(97％) D-Phg-cis-Ohi-OEt·HCl。 1H NMR     FD-MS，m/e 331(M+) 分析C19H27N2O3Cl：

计算：C，62.20；H，7.41；N，7.64；

实测：C，62.42；H，7.36；N，7.85.

C)EtOS2-D-Phg-cis-Ohi-OEt的制备

在-78℃，向D-Phg-cis-Ohi-OEt·HCl(10g，27mmol)和N，N -二异丙基乙胺(10.7ml，61mmol)的THF(200ml)溶液中，通过加 料漏斗滴加乙磺酰氯(3.9g，30mmol)的THF(20ml)溶液。然后撤 去冷浴，让溶液慢慢回升至室温。约18小时后，溶液真空浓缩。残留物 溶解在乙酸乙酯(200ml)中，用1N柠檬酸(200ml)、饱和NaHCO3水溶液(200ml)和盐水(200ml)各洗涤2次。然后，有机相用MgSO4干燥、过滤，真空浓缩，给出11.2g(97％)黄色泡沫状物。 1H NMR FD-MS，m/e 422(M+) 分析C21H30N2O5S：

计算：C，59.69；H，7.16；N，6.63；

实测：C，59.94；H，7.08；N，6.78.

D)EtSO2-Phg-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-D、18-E和18-F所述的那些方法， 得到了0.62g EtSO2-Phg-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。这种 情况下使用的HPLC梯度是在120分钟内从90/10(A/B)递减至60/40 (A/B)。 1H NMR FAB-MS，m/e 526.3(MH+) 分析C27H35N5O4S·HCl

计算：C，57.69；H，6.45；N，12.46；

实测：C，57.47；H，6.48；N，12.20.

                    实例45

    EtSO2-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl ((S-顺式)-N-[[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-1-[N- (乙磺酰)-D-苯丙氨酰]-1H-引哚-2-羧酰胺·盐酸盐)

A) EtSO2-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制备

用基本上相当于实例44所述的那些方法，从Boc-D-Phe-OH制备了 1.5g EtSO2-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。 1H NMR FAB-MS，m/e 540.3(MH+) 分析C28H37N5O4S·HCl·H2O

计算：C，56.51； H，6.94；N，11.77；

实测：C，56·24；H，6.55；N，11.72.

                    实例46

    HOOCCH2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl (N-(羧甲基)-D-苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲基)苯 基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

A)N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OBn的制备

向D-Phe-Pro-OBn·HCl(20g，51mmol)的DMF(100ml)溶液中 一次性添加溴乙酸叔丁酯(9.9g，56mmol)，并在30分钟内滴加N，N -二异丙基乙胺(17.4ml，101mmol)。此混合物在室温搅拌18小时。 然后，一次性添加草酸二叔丁酯(16.6g，76mmol)和N，N-二异丙基 乙胺(13.2ml，76mmol)，反应混合物再搅拌24小时。真空脱除溶剂， 让残留物在乙酸乙酯(1L)和1 M柠檬酸水溶液(500ml)之间分配。 将两层分离，有机相用1M柠檬酸水溶液洗涤1次、用饱和碳酸氢钠水 溶液洗涤2次、用盐水洗涤1次(各500ml)。有机相干燥(Na2SO4)、 过滤、真空浓缩。这种琥珀色油状物用硅胶柱色谱法纯化，以乙酸乙酯/ 己烷梯度(己烷到30％乙酸乙酯/己烷)洗脱，含产品的级分合并、浓 缩，给出19.0g(66％)无色油状物，静置时慢慢结晶。 1H NMR FD-MS，m/e 566(M+) 分析C32H42N2O7：

计算：C，67.82；H，7.47；N，4.94；

实测：C，68.06；H，7.33；N，5.17.

B)N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH的制备

向N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OBn(18.5g，33mmol)的乙 酸乙酯(250ml)溶液中添加5％Pd/C催化剂(5g)。此溶液真空脱 气若干次，在氢气氛下搅拌放置2小时。取走氢气源，添加硅藻土，浆 状物用一层硅藻土过滤。滤液真空浓缩，给出13.2g(84％)白色泡沫 状物。 1H NMR FD-MS，m/e 476(M+) 分析C25H36N2O7：

计算：C，63.01；H，7.61；N，5.88；

实测：C，63.23；H，7.73；N，5.59.

C)N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz 的制备

用基本上相当于实例18-E的方法，从N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D- Phe-Pro-OH和p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制备了2.7g(90％) N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。 1H NMR FD-MS，m/e 743 (MH+) 分析C41H51N5O8：

计算：C，66.38；H，6.93；N，9.44；

实测：C，66.08；H，6.92；N，9.16.

D)HOOCCH2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制备

向冷却的(℃)，N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro -p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz(2.2g，3mmol)的二噁烷(100ml)溶液 中通入HCl气体10分钟。在回升至室温的同时搅拌3小时之后，真空脱 除二噁烷。残留物溶解在绝对乙醇(150ml)、水(75ml)和1N HCl(6ml)的混合液中。向其中添加5％Pd/C(1g)。真空脱气之后， 此混合物在氢气氛下放置16小时同时在室温搅拌。添加硅藻土，形成的 浆状物用一层硅藻土过滤。滤液真空浓缩成残留物，此残留物立即用 HPLC方法2纯化(2小时内从98/2(A/B)递减至70/30(A/B))。 含纯产品的级分合并、冻干，给出1.1g(72％)白色固体。 1H NMR FAB-MS，m/e 452.3(MH+) 分析C24H29N5O4·2HCl：

计算：C，54.97；H，5.96；N，13.35；

实测：C，55.21；H，6.11；N，13.39.

                  实例47

    HOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl

A)t-BuOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-OEt的制备

向D-Phe-cis-Ohi-OEt·HCl(30g，79mmol)的乙腈(400ml)溶 液中添加N，N-二异丙基乙胺(41ml，236mmol)和溴乙酸叔丁酯(14ml， 87mmol)。将此溶液温热至50℃，并在此温度保持3小时。冷却至室 温后，溶液真空浓缩。残留物溶解在乙酸乙酯(300ml)中，此溶液用 饱和氯化铵水溶液(200ml)洗涤2次、用饱和碳酸氢钠水溶液 (200ml)洗涤2次、用盐水(200ml)洗涤2次。有机层干燥(MgSO4)、 过滤、真空浓缩，给出一种橙色油状物，用硅胶柱色谱法纯化，以己烷 至1∶1己烷/乙酸乙酯的梯度洗脱。含产品的级分(用TLC判断)合并、 浓缩，给出33,2g(92％)无色油状物。 1H NMR FD-MS，m/e 458(M+) 分析C26H38N2O5：

计算：C，68.10；H，8.35；N，6.11 ；

实测：C，68.37；H，8.47；N，5.90.

B)N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-cis-Ohi-OH的制备

向t-BuOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-OEt(30g，65mmol)的THF(200ml) 溶液中添加N，N-二异丙基乙胺(17ml，98mmol)和草酸二叔丁酯 (15.7g，72mmol)。让此溶液开始缓缓回流并使之保持16小时。停止加 热，一旦冷却就使溶液真空浓缩。残留物溶解在乙酸乙酯(400ml)中， 用1.0M柠檬酸(200ml)洗涤2次、用饱和碳酸氢钠水溶液(200ml) 洗涤2次、用盐水(200ml)洗涤2次。有机溶液干燥(MgSO4)、过 滤、真空浓缩，给出一种黄色油状物。将一份这种油状物(24.8g， 44mmol)溶解在300ml二噁烷中。向其中添加一种含有2.05g LiOH·H2O(49mmol)和150ml水的溶液。此混合物在室温搅拌5小 时，此时添加100ml饱和氯化铵水溶液。真空脱除溶剂，残留物在饱和 碳酸氢钠水溶液与二乙醚之间分配。将两层分离，水层用柠檬酸酸化到 pH3。这种酸性水溶液用二乙醚(200ml)萃取3次，这些萃取物合并、 干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，给出24.3g白色泡沫状N-(t-BuOOCCH2)- N-Boc-D-Phe-cis-Ohi-OH。 1H NMR FD-MS，m/e 530(M+) 分析C29H42N2O7：

计算：C，65.64；H，7.98；N，5.28 ；

实测：C，65.39；H，8.04；N，5.39.

C)HOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制 备

用基本上相当于实例18-E和46-D所述的那些方法，得到1.2g (67％)HOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。 1H NMR FAB-MS，m/e 506.3(MH+) 分析C28H35N5O4·2HCl·H2O：

计算：C，57.24；H，6.52；N，11.92 ；

实测：C，57.40；H，6.30；N，11.69.

                  实例48

    HOOCCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl (N-(羧甲基)-D-环己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲基) 苯基]甲基]-L-脯氨酰胺)

A)HOOCCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例46所述的那些方法，制备了0.92g HOOCCH2- D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 458(M+) 分析C24H35N5O4·HCl·0.5H2O：

计算：C，57.30；H，7.41；N，13.92；

实测：C，57.52；H，7.29；N，13.83.

                    实例49

    HOOCCH2-D-Cha-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl ((S-顺式)-N-[[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-1-[N- (羧甲基)-D-环己基丙氨酰]-1H-吲哚-2-羧酰胺·盐酸盐)

A)HOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制 备

用基本上相当于实例实例1-A和1-D、18-E、44-B、47 -A(用溴乙酸苄酯)和18-F所述的那些方法，从Boc-D-Cha和cis -Ohi-OEt·HCl出发，得到了0.75g HOOCCH2-D-Cha-cis-Ohi-p- NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。用HPLC方法2，利用在3小时内从98/2 (A/B)至70/30(A/B)的梯度，进行这种材料的纯化。 1H NMR FAB-MS，m/e 512.3(MH+) 分析C28H41N5O4·HCl：

计算：C，61.36；H，7.72；N，12.78；

实测：C，61.08；H，7.47；N，12.53.

                      实例50

    HOOCCH2-D-Phe-Pro(4-顺-异戊基)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl

A)Cbz-Pro(4-反式-OH)-OEt的制备

向Cbz-Pro(4-反式-OH)-OH(33g，124mmol)的乙醇 (500ml)溶液中添加对甲苯磺酸(1g)，溶液加热回流。16小时后， 将溶液冷却至室温，真空脱除溶剂。残留物溶解在乙酸乙酯(400ml) 中，用饱和NaHCO3水溶液洗涤2次、用饱和氯化钠水溶液洗涤2次。 该乙酸乙酯溶液用MgSO4干燥、过滤、真空浓缩，给出34.5g(95％) 无色油状物。 1H NMR FD-MS，m/e 293(M+) 分析C15H19NO5：

计算：C，61.42；H，6.53；N，4.77 ；

实测：C，61.20；H，6.65；N，4.73.

B)Cbz-Pro(4-氧代)-OEt的制备

在1L圆底烧瓶中，用机械搅拌法，使Cbz-Pro(4-顺式-OH) -OEt(32.7g，111mmol)溶解在二氯甲烷(500ml)中。向此溶液中 分批添加3A分子筛(100g)和氯铬酸吡啶鎓(60g，278mmol)，每批 数量要小到足以保持有效搅拌。在室温搅拌12小时之后，添加二乙醚 (200ml)，将黑色浆状物从焦油状残留物中滗析出来，并使之迅速通 过硅胶(200g)柱。残留物用二氯甲烷(200ml)洗涤2次，合并的洗 涤液也通过该硅胶柱。滤液迅速通过一根硅胶柱，以1∶1乙酸乙酯/己烷 (4L)洗脱，收集500ml级分。所有含产品的级分(用TLC判断)合 并、真空浓缩，给出23.8g(74％)无色油状物。 1H NMR FD-MS，m/e 291(M+) 分析C15H17NO5：

计算：C，61.85；H，5.88；N，4.81；

实测：C，61.57；H，5.82；N，4.71.

C)Cbz-Pro(4-异丁基次甲基)-OEt的制备

在-个配备氮气入口、磁搅拌棒和加料漏斗的、烘箱干燥的2颈2L 圆底烧瓶中，使叔丁醇钾(34g，288mmol)悬浮在四氢呋喃(800ml) 中。向此悬浮液中分若干批添加溴化异戊基三苯鏻(120g，288mmol)。 搅拌30分钟后，用1小时时间通过加料漏斗滴加Cbz-Pro(4-氧代) -OEt(70g，240mmol)的四氢呋喃(150ml)溶液。再搅拌2小时后， 添加饱和NH4Cl水溶液(100ml)。此溶液用乙酸乙酯(750ml)稀释， 将各层分离。有机层用1N柠檬酸洗涤2次、用饱和NaHCO3水溶液洗涤 2次、用饱和氯化钠水溶液洗涤2次。有机溶液用MgSO4干燥、过滤、 浓缩，给出一种黄色油状物。这种油状物用硅胶闪急色谱法纯化，以 2∶1己烷/乙酸乙酯洗脱。含产品的级分(用TLC判断)合并，真空浓缩， 给出37g(45％)无色油状物。 1H NMR FD-MS，m/e 345(M+) 分析C20H27NO4：

计算：C，69.54；H，7.88；N，4.05；

实测：C，69.74；H，7.85；N，3.99.

D)Pro(4-顺式-异戊基)-OEt·HCl的制备

向Cbz-Pro(4-异丁基次甲基)-OEt(37g，107mmol)的乙 醇(500ml)溶液中添加5％Pd/C(5g)。向此溶液中通入氮气5分 钟，然后通入氢气3小时。此溶液通过一层硅藻土过滤。然后，向该溶 液中通入氯化氢气体直至饱和，然后将该溶液真空浓缩，给出26g(97 ％)琥珀色油状物。 1H NMR FD-MS，m/e 214(M+) 分析C12H24ClNO2：

计算：C，57.70；H，9.68；N，5.61；

实测：C，57.46；H，9.50；N，5.82.

E)HOOCCH2-D-Phe-Pro(4-cis-异戊基)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl 的制备

用基本上相当于实例1-A和1-D、18-E、44-B、47- A(用溴乙酸苄酯)与18-F所述的那些方法，从Boc-D-Cha和 Pro(4-cis-异戊基)-OEt·HCl出发，得到0.27g HOOCCH2- D-Phe-Pro(4-cis-异戊基)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。用HPLC 方法2，以在3小时内从98/2(A/B)到50/50(A/B)的梯度，进行 此材料的纯化。 1H NMR FAB-MS，m/e 528.4(MH+) 分析C29H45N5O4·1.9HCl：

计算：C，58.34；H，7.92；N，11.73；Cl，11.28；

实测：C，58.30；H，7.85；N，11.83；Cl，11.27.

                      实例51

    D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl (D-环己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]甲基]-L- 脯氨酰胺·二盐酸盐)

A)Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制备

用基本上相当于实例1-A、46-E和18-E所述的那些方法， 从Boc-D-Cha-Pro-OH出发，制备了32.5g(94％)Boc-D-Cha-Pro-p- NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。 1H NMR FD-MS，m/e 634(MH+) 分析C35H47N5O6：

计算：C，66.33；H，7.47；N，11.05；

实测：C，66.30；H，7.47；N，11.26.

B)D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl的制备

用基本上相当于实例23-A所述的那种方法，从Boc-D-Cha-Pro-p- NHCH2C6H4C(NH)NHCbz制备了9.6g(101％)D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C (NH)NHCbz·2HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 534(M+) 分析C30H41N5O4Cl2：

计算：C，59.40；H，6.81；N，11.54；Cl，11.69；

实测：C，59.54；H，6.80；N，11.77；Cl，11.21.

C)D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制备

用基本上相当于实例18-F所述的那种方法，制备了0.74g(62％) D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。用HPLC方法2，以在2.5 小时内从98/2(A/B)到75/25(A/B)的梯度，进行此材料的纯化。 1H NMR FAB-MS，m/e 400.3(M+) 分析C22H33N5O2·2.1HCl：

计算：C，55.50；H，7.43；N，14.71；Cl，15.64；

实测：C，55.64；H，7.50；N，14.65；Cl，15.81.

                      实例52

    HOOCCH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl (N-(2-羧乙基)-D-环己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基 甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

A)HOOCCH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制 备

在搅拌下，将D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl(2.5g， 4.1mmol)悬浮在EtOAc(100ml)中。向此悬浮液中添加1M KHCO3溶液(100ml)，混合物搅拌直至所有固体溶解。把混合物转移到分液 漏斗中，将两层分离。有机层干燥(MgSO4)、过滤、真空浓缩，给出 1.24g白色固体状游离碱。此固体溶解在EtOH(100ml)中。添加丙烯 酸苄酯(0.41g，2.6mmol)，此溶液在室温搅拌2天。然后，向此溶液 中添加水(50ml)、1N HCl(4.6ml)和5％Pd/C(0.5g)，使正 在搅拌的悬浮液脱气并置于氢气氛之下。16小时后。添加硅藻土，浆状 物用一层硅藻土过滤。滤液真空浓缩到25ml体积，用制备型RPHPLC 方法2、以在2.5小时内从98/2(A/B)到75/25(A/B)的梯度纯化。 含纯产品的级分(用分析型HPLC判断)合并、浓缩、冻干，给出0.27g (23％)HOOCCH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。 1H NMR FAB-MS，m/e 472.4(MH+) 分析C25H37N5O4·1.9HCl：

计算：C，55.50；H，7.25；N，12.94；Cl，12.45；

实测：C，55.26；H，7.26；N，13.21；Cl，12.85.

                实例53

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-哌啶·HCl

A)Boc-4-(氨基甲基)吡啶的制备

用基本上相当于实例34-A所述的那种方法，从4-(氨基甲基) 吡啶制备19g(87％)Boc-4-(氨基甲基)吡啶。 1H NMR

B)4-BocNHCH2-N-Cbz-哌啶的制备

4-BocNHCH2-吡啶(10g，48m0l)溶解在乙醇(280ml)中， 添加5％Rh/C(10g)。此悬浮液在60℃、在氢气氛(4.1巴，60psi) 下摇荡过夜。然后将催化剂滤出，溶液真空浓缩，给出9.0g灰色固体。 将1份3.2g该固体溶解在四氢呋喃(75ml)中，添加碳酸钾(4.2g， 30mmol)水溶液(75ml)。向这种正在搅拌的溶液中添加氯甲酸苄酯 (2.3ml，16mmol)。15分钟后，溶液真空浓缩到原体积的约1/2，然 后用乙酸乙酯稀释。将有机相分离、用盐水洗涤、然后干燥(MgSO4)、 过滤、真空浓缩，给出4.6g(76％)白色固体。 1H NMR FD-MS，m/e 349(M+)

C)4-NH2CH2-N-Cbz-哌啶·HCl的制备

用基本上相当于实例23-A所述的那种方法，从4-BocNHCH2-N- Cbz-哌啶制备了3g(84％)4-NH2CH2-N-Cbz-哌啶·HCl。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 249(MH+)

D)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH的制备

N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH(13g，27mmol)溶解在乙醇 (750ml)中，添加PtO2(13g)。此悬浮液在40℃、在4.1巴(60psi) 氢气氛下摇荡16小时。然后将催化剂滤出、滤液真空浓缩，给出11.7g (90％)白色泡沫状物。 IR     1H NMR FD-MS，m/e 483(M+) 分析C25H42N2O7：

计算：C，62.22；H，8.77；N，5.80；

实测：C，62.99；H，8.96；N，5.48.

E)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-哌啶·HCl的制备

用基本上相当于实例1-G和实例46-D所述的那些方法，从N- (t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH和HCl·4-NH2CH2-N-Cbz-哌啶制 备了1.1g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-哌啶·HCl。此产品用 RPHPLC方法2以在2小时内从98/2(A/B)递减至70/30(A/B)的 梯度纯化。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 423(M+) 分析  C22H38N4O4·2HCl.1.5H2O：

计算：C，50.57；H，8.29；N，10.72；

实测：C，50.31；H，8.46；N，10.93.

                实例54

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-哌啶·HCl

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-哌啶·HCl的制备

用基本上相当于实例52所述的那些方法，从4-氨基乙基吡啶制备 了0.59g  HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-哌啶·HCl。此产品用 RPHPLC方法2以在2小时内从98/2(A/B)直至70/30(A/B)的梯 度纯化。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 437(M+) 分析C23H40N4O4·2.5HCl·1.5H2O： 计算：C，49.80；H，8.27；N，10.10； 实测：C，49.95；H，8.08；N，10.34.

              实例55

  HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-哌啶·HCl

A)4-羟丙基-N-Cbz-哌啶的制备

用基本上相当于实例53-B所述的那些方法，从4-羟丙基吡啶制 备28g(67％)4-羟丙基-N-Cbz-哌啶。 1H NMR

B)4-(NH2CH2CH2CH2)-N-Cbz-哌啶·HCl的制备

用基本上相当于实例30-B、30-C和30-D所述的那些方法， 从4-羟丙基-N-Cbz-哌啶制备了7.3g 4-(NH2CH2CH2CH2)-N-Cbz -哌啶·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 276(M+)

C)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-哌啶·HCl的制备

用基本上相当于实例53-D和53-E所述的那些方法，从N-(t- BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH和4-氨基丙基-N-Cbz-哌啶·HCl 制备了0.39g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-哌啶·HCl。此 产品用RPHPLC方法2以在2小时内从98/2(A/B)直到70/30(A/B) 的梯度纯化。 IR 1H NMR IS-MS，m/e 451.4(MH+) 分析  C24H42N4O4·2HCl·H2O：

计算：C，53.23；H，8.56；N，10.35；

实测：C，53.43；H，8.63；N，10.19.

                  实例56

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基哌啶·HCl (N-(羧甲基)-D-环己基丙氨酰-N-[[1-(氨基亚氨基甲基) -六氢吡啶-4-基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基哌啶·HCl的制备

用基本上相当于34-D、23-A、1-G(用N-(t-BuO2CCH2)- N-Boc-D-Cha-Pro-OH)、18-E和1-H所述的那些方法，从4- BocNHCH2哌啶制备了0.35g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基哌 啶·HCl。最终产品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)递减至75/25 (A/B)，150分钟)纯化。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 465(MH+) 分析  C23H40N6O4·2HCl：

计算：C，51.39；H，7.88；N，15.63；Cl，13.19；

实测：C，51.66；H，7.98；N，15.80；Cl，13.48.

                    实例57

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-1-咪基哌啶·HCl

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-1-咪基哌啶·HCl的制备

用基本上相当于实例34-D、23-A、1-G(用N-(t- BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH)，18-E和1-H所述的那些方法， 从4-BocNHCH2CH2-哌啶制备了0.34g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4- NHCH2CH2-1-咪基哌啶·HCl。此最终产品用RPHPLC方法2(98/2 (A/B)递减至75/25(A/B)，150分钟)纯化。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 479.4(MH+) 分析C24H42N6O4·2HCl：

计算：C，52.26；H，8.07；N，15.24；Cl，12.86；

实测：C，52.56；H，8.15；N，15.37；Cl，13.07。

                    实例58

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，4-脱氢哌啶·HCl

A)4-BocNHCH2-N-甲基吡啶鎓碘化物的制备

在搅拌下，向4-BocNHCH2-吡啶(20g，96mmol)的乙腈 (200ml)溶液中添加碘甲烷(8.9ml，144mmol)。16小时后，溶液真 空浓缩，给出33.8g(96％)粘稠淡黄色油状物。 FD-MS，m/e 223.1(M+)

B)4-BocNHCH2-N-Fmoc-3，4-脱氢哌啶的制备

在搅拌下，向碘化4-BocNHCH2-N-甲基吡啶鎓(7.7g， 34mmol)的1，2-二氯乙烷(100ml)溶液中添加1，8-二(二甲胺基) 萘(1.5g，6.8mmol)，随后添加氯甲酸2-氯乙酯(5.3g，37ml)。溶 液加热回流，2小时后将溶液冷却到室温，真空脱除溶剂，残留物迅速 通过硅胶柱，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱。真空脱除有机溶剂，残留物 溶解在甲醇(300ml)中，加热回流20分钟。然后添加饱和NaHCO3水溶液(100ml)，真空脱除溶剂。残留物溶解在水(200ml)中，用 己烷洗涤2次，然后用固体NaCl饱和，用乙酸乙酯萃取若干次。合并的 乙酸乙酯萃取液干燥(MgSO4)、过滤、真空浓缩，给出淡黄色油状物， 后者溶解在二氯甲烷(75ml)中。然后，向这种正在搅拌的溶液中添加 N，N-二异丙基乙胺(2.1ml，12.2mmol)，然后添加氯甲酸9-芴基甲 酯(3.2g，12.2mmol)。2小时后，真空脱除溶剂，残留物溶解在乙酸 乙酯(250ml)中，用1N柠檬酸洗涤2次、用盐水洗涤1次、用饱和 NaHCO3水溶液洗涤2次、最后用盐水洗涤1次。然后将有机相干燥 (MgSO4)、过滤、真空浓缩，残留物用硅胶柱色谱法纯化，以5％乙 酸乙酯/己烷直至50％乙酸乙酯/己烷的步进梯度洗脱。含产品的级分(用 TLC判断)合并、浓缩，给出4g(27％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 435(M+)

C)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-N-Fmoc-3，4-脱氢 哌啶的制备

用基本上相当于实例23-A和1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc- D-Cha-Pro-OH)所述的那些方法，从4-BocNHCH2-N-Fmoc-3，4 -脱氢哌啶制备了2.5g N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2- N-Fmoc-3,4-脱氢哌啶。 IR 1H NMR FD-MS,m/e 799(M+)

D)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，4-脱氢哌啶的 制备

N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-N-Fmoc-3，4-脱氢哌 啶(1.5g，1.9mmol)溶解在吗啉(25ml)中，搅拌5小时后真空蒸发 溶剂。残留物溶解在乙酸乙酯中，用饱和NaHCO3水溶液洗涤2次、干 燥(MgSO4)、过滤、真空浓缩。然后将残留物溶解在少量氯仿中，用 硅胶柱色谱法纯化，以5％～10％A/B(A＝9∶1甲醇/浓NH4OH； B＝氯仿)的梯度洗脱。用TLC判断的含产品级分合并、真空浓缩，给 出890mg(82％)白色固体。 1H NMR FD-MS，m/e 576(MH+)

E)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，4-脱氢哌啶·HCl的制备

向N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，4-脱氢哌啶 (820mg，1.4mmol)和茴香醚(1ml)的二噁烷(25ml)溶液中，在0 ℃通入HCl气体10分钟。搅拌12小时后，真空脱除溶剂，残留物溶解 在水(50ml)中，用二乙醚洗涤2次。然后将水相真空浓缩到约20ml 的体积，用RPHPLC纯化(方法2，98/2(A/B)直到70/30(A/B)， 2小时)。用分析型RPHPLC判断的含产品的级分合并、部分地真空浓 缩、冻干，给出442mg(68％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 423(MH+) 分析C22H36N4O4·2HCl·1.5H2O：

计算：C，50.57；H，8.29；N，10.72；

实测：C，50.31；H，8.46；N，10.93。

                    实例59

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-3，4-脱氢哌啶·HCl

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-3，4-脱氢哌啶·HCl的制备

用基本上相当于实例58所述的那些方法，从4-BocNHCH2CH2- 吡啶制备了73mg HO2CCH2-D-Cha·Pro-4-NHCH2CH2-3，4-二氢哌 啶.HCl。最终产品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)直至70/30 (A/B)，2小时)纯化。 IR 1H NMR IS-MS，m/e 435.2(MH+) 分析C23H38N4O4·2.3HCl·3H2O：

计算：C，48.26；H，8.15；N，9.79；Cl，14.24；

实测：C，48.31；H，7.93；N，9.66；Cl，14.56。

                  实例60

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-3，4-脱氢哌啶·HCl

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-3，4-脱氢哌啶·HCl的制备

用基本上相当于实例5 8所述的那些方法，从4-BocNHCH2CH2CH2 -吡啶制备了205mg HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-3，4-脱氢哌 啶·HCl。 IR 1H NMR IS-MS，m/e 449.2(MH+) 分析C24H40N4O4·2.3HCl·H2O：

计算：C，52.37；H，3.11；N，10.18；

实测：C，51.64；H，7.72；N，10.31；Cl，14.69。

                  实例61

        (1R，4aR，8aR)-1-Piq-Pro-Agm·3HCl (N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]丁基]-1-[[(4aR，8aR)-十氢- 1(R)-异喹啉基]碳酰]-1-脯氨酰胺·三盐酸盐)

本实例中的Rf值是用硅胶薄层色谱法(Kieselgel 60F-254)以 下列系统(体积比)：

(A)氯仿∶甲醇∶乙酸(135∶15∶1)

(B)乙酸乙酯∶乙酸∶绝对乙醇( 90∶10∶10)

(C)乙酸乙酯∶己烷(70∶30)

(D)氯仿

A)N-甲氧碳酰苯乙胺

在搅拌下，向苯乙胺(75.2ml，0.6mol)和三乙胺(83ml，0.6mol) 的THF(500ml)溶液中缓缓地加入氯甲酸甲酯(46.2ml，0.6mol)的 THF(50ml)溶液。反应混合物在室温再搅拌1小时后，添加二乙醚 (2L)和1N HCl(800ml)。有机层用水洗涤、干燥(MgSO4)、 过滤、滤液真空浓缩，给出纯标题化合物的透明油状物(102g，95％)。

B)2-甲氧碳酰-DL-1.2，3,-4-四氢异喹啉-l-羧酸

向N-甲氧碳酰苯乙胺(102g，0.57mol)的三氟乙酸(300ml)溶 液中添加二羟乙酸(63g，0.68mol)，将混合物加热到回流温度。回流 4小时后，将反应混合物冷却到室温，真空脱除溶剂、向残留物中添加二 乙醚(800ml)/水(100ml)。用5N NaOH使反应混合物pH上升到 12，将水层分离。向水层中添加二乙醚(500ml)，用5N HCl使溶液 酸化到pH 2.5。将有机层分离、干燥(MgSO4)、过滤、滤液真空浓缩， 给出纯标题化合物的油状物(107g，80％)；FAB-MS 236(MH+)。

C)2-甲氧碳酰-DL-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羧酸叔丁酯

在搅拌、冷却(0℃)下，向2-甲氧碳酰-DL-1，2，3，4-四氢 异喹啉-1-羧酸(2)(105g，0.45mol)的CH2Cl2(200ml)溶液中 添加叔丁醇(52ml，0.54mol)和DCC(92g，0.45mol)。在0℃2小 时和在室温24小时后，真空脱除溶剂，  向残留物中添加乙酸乙酯 (800ml)/1N NaHCO3(300ml)。将有机层分离，用水、1.5N柠 檬酸和水洗涤。有机层干燥(MgSO4)、过滤、滤液真空浓缩，给出纯 标题化合物的油状物(106g，81％)；FAB-MS 292(MH+)；TLC Rf (A)0.61；元素分析(计算值)C16H21NO4：C，65.96；H，7.27；N，4.81； 实测值：C，66.24；H，7.28；N，4.73。

D)2-甲氧碳酰-(1RS，4aSR，8aSR)-全氢化异喹啉-1-羧 酸叔丁酯

2-甲基碳酰-DL-1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羧酸叔丁酯(105g， 0.36mol)的叔丁醇(800ml)溶液用5％Rh/Al2O3(52.5g)、以55 巴(800psi)氢气、在高压装置中于50℃还原24小时，反应混合物通 过一层硅藻土过滤，滤液真空浓缩。所形成的油状物干燥，给出纯标题 化合物(96.5g，90％)FD-MS 298(MH+)；TLC Rf(C)0.63。

E)2-甲氧碳酰-(1RS，4aRS，8aRS)-全氢化异喹啉-1-羧 酸乙酯

向2-甲氧碳酰-(1RS，4aSR，8aSR)-全氢化异喹啉-1-羧酸 叔丁酯(81.2g，273mmol)的EtOH(500ml)溶液中添加乙醇钠(21 ％乙醇溶液)(88.4ml，273mmol)，反应混合物回流(24小时)。有 机溶剂真空蒸发，向残留物中添加乙酸乙酯(400ml)和水(100ml)。 将有机层分离、用水洗涤2次、干燥(MgSO4)、过滤、滤液真空浓缩， 给出纯标题化合物的油状物(70g,95％)；FAB-MS 270(MH+)； TLC Rf(A)0.61。

F)2-甲氧碳酰-(1RS，4aRS，8aRS)-全氢化异喹啉-1-羧 酸

向步骤E的产品(70g，260mmol)的THF(250ml)溶液中添加 2N NaOH(156ml，312mmol)，反应混合物在室温搅拌(30小时)。 有机溶剂真空蒸发，向残留物中添加二乙醚(400ml)和水(100ml)。 将水层分离，添加乙酸乙酯(400ml)。溶液的pH用5N  HCl调至2.0。 有机层干燥(MgSO4)、过滤、滤液真空浓缩，给出一种透明油状物。 该油状物用己烷(200ml)结晶，给出纯标题化合物(46.4g，74％)； FAB-MS 242(MH+)；TLC Rf(A)0.36；元素分析(计算值) C12H19NO4：C，59.74；H，7.94；N，5.81；实测值：C，59.95；H，7.88；N， 5.54。NMR排布是同核去偶、COSY、HMQC和DEPT实验确定的。

G)2-Cbz-(1RS，4aRS，8aRS)-全氢化异喹啉-1-羧酸

在室温搅拌下，在惰性气氛下，向步骤F的产品(46g，191mmol) 的无水CH3CN(200ml)溶液中添加碘三甲基甲硅烷(62.4ml， 440mmol)的CH3CN(60ml)溶液。反应混合物在55℃搅拌30分钟， 冷却到室温。反应用水(100ml)终止，随后添加偏亚硫酸氢钠(1g)。 用5N NaOH使反应混合物的pH上升到10.0，滴加氯甲酸苄酯(27.3ml， 191mmol)，同时用2N NaOH使pH保持在10。反应混合物在室温再 搅拌30分钟后，真空蒸发有机溶剂，添加二乙醚(200ml)。让反应混 合物在室温静置(2小时)，添加乙酸乙酯(200ml)。水溶液用5N HCl酸化到pH2.5；将有机层分离、干燥(MgSO4)、过滤、滤液真空浓缩， 给出油状纯标题化合物(39.5g，65％)；  FAB-MS 318(MH+)；元 素分析(计算值)C18H23NO4：C，68.12；H，7.30；N，4.41；实测值：  C， 66.37；H，7.52；N，4.37。

H)2-Cbz-(1RS，4aRS，8aRS)-全氢化异喹啉-1-碳酰-Pro -O-t-Bu

在搅拌、冷却(0℃)下，向步骤G的产品(39g，123mmol)的 DMF(200ml)溶液中添加脯氨酸叔丁酯(21.1g，123mmol)、1-羟 基苯并三唑(16.6g，123mmol)和DCC(25.3g，123mmol)。反应混合 物在0℃搅拌2小时、在室温搅拌24小时。将反应沉淀物滤出，滤液真 空浓缩成油状物。该油状物溶解在EtOAc(200ml)和水(100ml)中。 有机层依次用1N NaHCO3、水、1.5N柠檬酸、水洗涤。有机层干燥 (MgSO4)、过滤、滤液蒸发成标题化合物的无定形固体，呈非对映体 混合物形式(52.7g，91％)FAB-MS 471(MH+)。

I)2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R)-碳酰-Pro-OH

在搅拌下，向步骤H的产品(52.4g，111mmol)的CH2Cl2(20ml) 溶液中添加三氟乙酸(70ml)和茴香醚(5ml)。反应混合物在室温搅 拌1小时，真空浓缩而无加热。残留物用二乙醚(400ml)、水(100ml) 稀释，溶液的pH用5N NaOH调节到10.0。将水层分离，添加乙酸乙 酯(300ml)。溶液的pH用5N HCl调节到2.5；将有机层分离、干 燥(MgSO4)、过滤，滤液真空浓缩，给出一种透明油状物。该油状物 溶解在二乙醚(500ml)中，向该溶液中添加(L)-(-)-α-甲 基苄胺。让此溶液在室温静置(24小时)。将所形成的固体滤出、用二 乙醚洗涤、干燥。将此固体悬浮在乙酸乙酯中，用1.5N柠檬酸和水洗涤。 有机层干燥(MgSO4)、过滤、滤液蒸发，给出油状标题化合物(20.2g， 44％)FAB-MS 415(MH+)；[α]D＝3.2°(c＝0.5，MeOH)；元素 分析(计算值)C23H30N2O5：C，66.65；H，7.30；N，6.76。实测值： C，66.38；H，7.36；N，6.63。

J)2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R)-碳酰-Pro -NH-(CH2)4-NH-Boc

在烧瓶1中，将步骤I的产品(1.06g，2.55mmol)溶解在DMF(10ml) 中，冷却到-15℃，添加N-甲基吗啉(0.28ml，2.55mmol)，随后添 加氯甲酸异丁酯(0.33ml，2.55mmol)。反应混合物在-15℃搅拌2分 钟。

在烧瓶2中，将N-Boc-1，4-二氨基丁烷(0.48g，2.55mmol) 溶解在DMF(10ml)中、冷却至0℃，向该溶液中添加N-甲基吗啉 (0.28ml，2.55mmol)。反应混合物在0℃搅拌2分钟。

将烧瓶2的内容物添加到烧瓶1中，反应混合物搅拌4小时(-15℃) 并在室温搅拌24小时。向该反应混合物中添加1N NaHCO3(1ml)， 将反应溶剂真空脱除，给出一种油状物。将此残留物溶解在EtOAc(200ml)中，依次用1.5N柠檬酸、水、1N NaHCO3(100ml)和水 洗涤。有机溶液干燥(MgSO4)、过滤、真空浓缩至干，给出固体状粗 标题化合物(1.47g，99％)；FAB-MS 585(MH+)；TLC Rf (A)0.70。

K)(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R)-碳酰-Pro-Agm·3HCl

在搅拌下，向步骤J的产品(1.4g，2.4mmol)的CH2Cl2(2ml)溶 液中添加三氟乙酸(25ml)和茴香醚(2.5ml)。反应混合物在室温搅 拌30分钟，真空浓缩而无加热。反应混合物用二乙醚(100ml)稀释， 将上清液滗析。所得到的油状物用二乙醚研制2次、干燥。干燥的油状 物溶解在THF(20ml)中，向混合物中添加三乙胺(0.66ml，4.8mmol) 和二Cbz-S-甲基异硫脲(0.859g，2.4mmol)。反应混合物在室温搅 拌48小时。有机溶剂真空蒸发，残留物溶解在EtOAc(200ml)中， 依次用1N NaHCO3(100ml)和水洗涤。有机溶液干燥(MgSO4)、 过滤、真空浓缩至干，给出一种粗固体(1.5g，79％)：TLC Rf(D) 0.33。此粗固体(1.5g，1.93mmol)溶解在乙醇(50ml)、水(10ml) 和1N HCl(5.8ml，5.8mmol)中，在5％Pd/C催化剂(2.5g)存在下， 在常温、常压下加氢。用过滤法除去催化剂，滤液真空浓缩成油状物。 此油状物溶解在三氟乙酸(10ml)中，向该混合物中添加硫代茴香醚 (1.0ml)和三氟甲磺酸(1.0ml)。反应混合物在室温搅拌0.5小时， 添加二乙醚(100ml)。将上清液滗析，所得到的油用二乙醚研制2次、 真空干燥，给出一种粗固体(1.3g)。将该固体(1.3g)溶解在0.05％ HCl中，加到一根5×25cm Vydac C18树脂柱中。用CH3CN浓度递增 (2％至25％)的梯度使肽从该柱上洗脱。根据分析型RPHPLC分布， 将各级分收集、合并、冻干，给出纯标题化合物(0.139g，15％)： FAB-MS 393(MH+)；元素分析(计算值)C20H36N6O2·5HCl·3H2OC，38.28；实测值：C，38.34。

                      实例62

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4NH2·HCl

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha- ProOH)、23-D和5 8-E所述的那些方法，从4-硝基苄胺盐酸盐 制备了0.17g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4NH2·HCl。最终产品 用RPHPLC方法2纯化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小时)。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 431.3(MH+) 分析C23H34N4O4·2.2HCl·1.5H2O：

计算：C，51.37；H，7.35；N，10.42；Cl，14.50；

实测：C，50.87；H，6.72；N，10.41；Cl，14.18.

                  实例63

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2C6H4NH2·HCl

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2C6H4NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例62所述的那些方法，从4-硝基苯乙胺盐酸盐 制备了0.19g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2C6H4NH2·HCl。最终产品 用RPHPLC方法2纯化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小时)。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 445.3(MH+) 分析  C24H36N4O4·2.2HCl·0.5H2O：

计算：C，54.00；H，7.40；N，10.50；Cl，14.61；

实测：C，53.65；H，7.59；N，10.24；Cl，14.33.

                    实例64

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HCl

A)4-BoC2NCH2-3-F-C6H3NO2的制备

在搅拌下，向2-氟-4-硝基甲苯(5g，32mmol)的四氯化碳 (160ml)溶液中添加N-溴琥珀酰亚胺(5.7g，32mmol)，随后添加 过氧化苯甲酰(0.78g，3.2mmol)，将溶液加热到回流、12小时后，除 去热量，混合物用四氯化碳(100ml)稀释，用水洗涤。然后，有机相 用乙酸乙酯(300ml)稀释、干燥(MgSO4)、过滤、真空浓缩。残留 物溶解在四氢呋喃(50ml)中，并添加到正在搅拌的NaH(60％油分 散液；1.3g，32mmol)和亚氨基二羧二叔丁酯(6.9g，32mmol)的四氢 呋喃(100ml)溶液中。搅拌过夜后，溶剂真空脱除，残留物用硅胶柱 色谱法纯化，以己烷直至20％乙酸乙酯/己烷的步进梯度洗脱。含产品 的级分(用TLC判断)合并、真空浓缩，给出3.9g(33％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS、m/e 370(M+) 分析C17H23N2O6：

计算：C，55.13；H，6.26；N，7.56；

实测：C，55.27；H，6.23；N，7.44.

B)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例23-A、1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D- Cha-ProOH)、23-D和58-E所述的那些方法，制备了0.44g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HCl。最终产品用RPHPLC 方法2纯化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小时)。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 449.3(MH+) 分析 C23H33N4O4F·1.3HCl：

计算：C，55.70；H，6.97；N，11.30；Cl，9.29；

实测：C，55.38；H，6.97；N，11.05；Cl，9.31.

                    实例65

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-咪基噻吩·HCl (N-(羧甲基)-D-环己基丙氨酰-N-[[5-(氨基亚氨基甲基) 噻吩-2-基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

A)2-氰基-5-甲酰噻吩的制备

在氮气氛下，向火焰干燥的3颈1L圆底烧瓶中添加二异丙胺(9ml， 66mmol)和THF(150ml)。将该烧瓶冷却到瓶内温度为-78℃(干 冰/丙酮)。在搅拌下，通过注射器向此溶液中添加正丁基锂(1.6M 己烷溶液，41.3ml，66.1mmol)，将混合物搅拌5分钟。用10分钟时间 向此溶液中添加2-噻吩腈(6.55g，60mmol)的THF(30ml)溶液。 所形成的亮红色溶液在-78℃搅拌45分钟，此时通过注射器添加二甲 基甲酰胺(23.3ml，300mmol)。此混合物在-78℃搅拌2小时，然后 添加固体柠檬酸(约10g)，随后加水(60ml)。真空脱除挥发性溶剂， 将残留物分配于二乙醚和盐水(各200ml)之间。将两层分离，水相用 二乙醚洗涤1次。合并的有机相用盐水洗涤1次，干燥(MgSO4)、过 滤、真空浓缩，给出一种黄色固体，再用硅胶柱色谱法纯化，以乙酸乙 酯/己烷梯度(己烷至50％乙酸乙酯/己烷)洗脱。含纯产品的级分合并、 真空浓缩，给出6.9g(84％)2-氰基-5-甲酰噻吩。 1H NMR

B)2-氰基-5-(羟甲基)噻吩的制备

向2-氰基-5-甲酰噻吩(6.9g，50mmol)的EtOH(100ml) 溶液中分批添加硼氢化钠(1.9g，50mmol)。搅拌5分钟后，真空脱除 溶剂，残留物分配于乙酸乙酯与盐水之间。将两层分离，有机相用1M 柠檬酸洗涤1次、用盐水洗涤1次，然后干燥(MgSO4)、过滤、真空 浓缩，给出6.1g(88％)2-氰基-5-(羟甲基)噻吩。 1H NMR FD-MS，m/e 140(M+) 分析C6H5NOS：

计算：C，51.78；H，3.62；N，10.06；

实测：C，51.54；H，3.62；N，9.86.

C)2-氰基-5-(溴甲基)噻吩的制备

向2-氰基-5-(羟甲基)噻吩(6.0g，43mmol)的THF(50ml) 溶液中添加三苯膦(15.7g，47mmol)和四溴化碳(12.3g，47mmol)。 在氮气氛下在室温搅拌过夜，真空脱除溶剂，残留物溶解在氯仿中，然 后吸附到硅胶上并装进-根硅胶柱中。产品用乙酸乙酯/己烷梯度洗脱。 含纯产品的级分(用TLC判断)合并、真空浓缩，给出6.5g(75％)2 -氰基-5-(溴甲基)噻吩。 1H NMR FD-MS，m/e 203(M+) 分析C6H4NSBr：

计算：C，35.66；H，1.99；N，6.93；

实测：C，35.71；H，2.03；N，6.95.

D)2-氰基-5-(氨基甲基)噻吩·HCl的制备

向2-氰基-5-(溴甲基)噻吩(6.0g，30mmol)的THF(50ml) 冷(0℃)溶液中，在氮气氛下分批添加NaH(60％油分散液，1.3g， 33mmol)。在搅拌下，向此悬浮液中添加亚氨基二羧酸二叔丁酯(7.1g， 33mmol)的THF(50ml)溶液，在30分钟内加完。搅拌3小时后， 添加饱和氯化铵水溶液(100ml)。然后真空脱除挥发性溶剂，残留物 分配于乙酸乙酯与水之间。将两层分离，有机相用盐水洗涤2次、干燥 (MgSO4)、过滤、真空浓缩，给出10.5g(100％)2-氰基-5- Boc2NCH2-噻吩，静置时结晶。这种固体溶解在EtOAc(200ml)中， 用冰/水浴冷却到0℃。该溶液通入无水HCl气体10分钟，混合物搅拌2 小时同时使之回升至室温。真空脱除溶剂，所形成的固体悬浮在二乙醚 中，用过滤法分离。此白色固体真空干燥过夜，给出5.2g(100％) 2-氰基-5-(氨基甲基)噻吩·HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 139(M+) 分析C6H7N2SCl：

计算：C，41.26；H，4.04；N，16.04；

实测：C，41.19；H，4.12；N，15.82.

E)N-(t-BuO2CCH2)·N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氰基噻吩 的制备

用基本上相当于实例1-G (用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha- ProOH)所述的那种方法，从2-氰基-5-(氨基甲基)噻吩·HCl 制备了4.6g(93％)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2 -氰基噻吩。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 602(M+)

F)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-C(NH)NHBoc- 噻吩的制备

向N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氰基噻吩 (1.5g，2.5mmol)和三乙胺(4.5ml)的吡啶(45ml)溶液中通入硫化 氢气体5分钟，然后将反应器密封、静置过夜。次日早上向该溶液中通 入氮气5分钟，真空脱除溶剂。残留物溶解在乙酸乙酯中，用水洗涤1 次、用盐水洗涤1次，然后干燥(MgSO4)、过滤、真空浓缩。然后， 将残留物溶解在甲苯中，真空浓缩2次。

然后将残留物溶解在丙酮(100ml)中，添加碘甲烷(5ml)。在 室温搅拌过夜后，真空脱除溶剂。然后把所形成的金色泡沫状物溶解在 甲醇(20ml)中，添加NH4OAc(0.39g，5mmol)，溶液加热回流。1 小时后真空脱除溶剂，残留物溶解在四氢呋喃(10ml)中。在搅拌下， 向此溶液中添加K2CO3(1.73g，12.5mmol)的水(10ml)溶液，随后 添加草酸二叔丁酯(2.2g，10mm0l)。搅拌1小时后，悬浮液用乙酸乙 酯(400ml)稀释，用水洗涤，然后用盐水洗涤。然后，有机相真空浓 缩、用硅胶柱色谱法纯化、以10％乙酸乙酯/己烷直至75％乙酸乙酯/ 己烷的步进梯度洗脱。用TLC判断的含产品级分合并、真空浓缩，给出 1.1g(61％)白色泡沫状物。 1H NMR FD-MS，m/e 720(M+) 分析C36H57N5O8S：

计算：C，60.06；H，7.98；N，9.73；

实测：C，59.76；H，8.07；N，9.52.

G)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-咪基噻吩·HCl的制备

用基本上相当于实例58-E所述的那种方法，制备了500mg HO2CCH2 -D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-咪基噻吩·HCl。此产品用RPHPLC方法2 纯化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小时)。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 464.2(MH+) 分析  C22H33N5O4S·2HCl·H2O：

计算：C，47.65；H，6.73；N，12.63；Cl，12.79；

实测：C，47.53；H，6.57；N，12.59；Cl，12.67.

                    实例66

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基吡啶·HCl (N-(羧甲基)-D-环己基丙氨酰-N-[[5-(氨基亚氨基甲基) 吡啶-2-基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

A)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-氰基比啶的制 备

用基本上相当于实例64-A、23-A和1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N- Boc-D-Cha-ProOH)所述的那些方法，从2-甲基-5-氰基吡啶制备 了4.4g N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-氰基吡啶。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 597(M+)

B)HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基吡啶·HCl的制备

用基本上相当于实例65-F和65-G所述的那些方法，从N-(t- BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-氰基吡啶制备了130mg HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基吡啶·HCl。此产品用RPHPLC 方法2纯化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小时)。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 459.3(MH+) HRMS (FAB)，m/e计算值C23H35N6O4：459.2720实测值： 459 2707

                  实例67

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基哌啶·HCl

HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基哌啶·HCl的制备

用基本上相当于实例23-A、23-B和1-B所述的那些方法， 精心制作了N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-氰基吡啶 (1.2g，2mmol)。此产品用RPHPLC方法2纯化(98/2(A/B)直至 70/30(A/B)，2小时)。分析型RPHPLC判断的含少量产品的级分 合并、真空部分浓缩、冻干，给出93mg(9％)淡绿色固体。 IR 1H NMR IS-MS，m/e 465.5(MH+) HRMS(FAB)，m/e计算值C23H41N6O4：465.3189实测值： 465.3191

                  实例68

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基-5，6-脱氢哌啶·HCl (N-(羧甲基)-D-环己基丙氨酰-N-[[5-(氨基亚氨基甲基) -l，2，3，4-四氢吡啶-2-基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基-5，6-脱氢哌啶·HCl的 制备

用基本上相当于实例23-A、23-B和1-B所述的那些方法， 精心制作了N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-氰基吡啶 (1.2g，2mmol)。此产品用RPHPLC方法2纯化(98/2(A/B)直至 70/30(A/B)，2小时)。用分析型RPHPLC判断的含大量产品的级 分合并、部分浓缩、冻干，给出422mg(39％)白色固体。 IR 1H NMR IS-MS，m/e 463.3(MH+) 分析C23H38N6O4·2.9HCl·2H2O：

计算：C，45.71；H，7.49；N，13.91；Cl，17.01 ；

实测：C，45.51；H，6.83；N，13.66；Cl，16.83.

                      实例69

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-3-NHCH2-6-咪基哒嗪·3HCl (N-(羧甲基)-D-环己基丙氨酰-N-[[6-(氨基亚氨基甲基) 哒嗪-3-基]甲基]-L-脯氨酰胺·三盐酸盐

A)3-甲基-6-氰基哒嗪的制备

在搅拌下，向3-甲基哒嗪(11g，118mmol)的二氯甲烷(200ml) 溶液中添加AlCl3(0.05g)，随后添加三甲基甲硅烷基氰(21g，211mmol)。 20分钟后，通过加料漏斗添加对甲苯磺酰氯(38g，201mmol)的二氯甲 烷(50ml)溶液，该溶液继续搅拌过夜。次日早上真空脱除溶剂，将残 留物悬浮在乙醇中，搅拌15分钟，然后过滤，给出一种白色固体。此固 体溶解在四氢呋喃(200ml)中，在搅拌下向此溶液中添加1，8-二氮 杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(16ml，105mmol)。1小时后，真空脱除 溶剂，残留物分配于己烷和饱和NH4Cl水溶液之间。将两相分离，水相 用固体Na2CO3碱化，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的乙酸乙酯相干燥 (MgSO4)、过滤、真空浓缩，给出9g(64％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 119.1(M+)

B)HO2CCH2-D-Cha-Pro-3-NHCH2-6-咪基哒嗪·HCl的制备

用基本上相当于实例66所述的那些方法，从3-甲基-6-氰基哒 嗪制备了90mg HO2CCH2-D-Cha-Pro-3-NHCH2-6-咪基哒嗪·HCl。 此产品用RPHPLC方法2纯化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2  小时)。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 460.3(MH+) 分析C22H33N7O4·3HCl·2H2O：   计算：C，43.68；H，6.66；N，16.21；   实测：C，44.04；H，6.45；N，15.57.

                    实例70

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基-3，4-脱氢哌啶·HCl (N-(羧甲基)-D-环己基丙氨酰-N-[[1-(氨基亚氨基甲基) -1，2，3，6-四氢吡啶-4-基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

A)N，N’-Boc2-硫脲的制备

在0℃搅拌下，向NaH(60％油分散，9.4g，234mmol)的四氢呋 喃(500ml)悬浮液中添加硫脲(4.0g，52mmol)。30分钟后，撤去冷 浴，让反应混合物在室温搅拌30分钟。再次使反应器冷却到0℃，通过 加料漏斗添加草酸二叔丁酯(25g，115mmol)的四氢呋喃(100ml)溶 液。在0℃搅拌30分钟并在室温再搅拌2小时后，添加饱和NaHCO3水 溶液。然后，将溶液真空浓缩至原体积的大约一半，添加乙酸乙酯。然 后，有机相用饱和NaHCO3水溶液洗涤、随后用盐水洗涤，然后用MgSO4干燥、过滤、浓缩，给出11.9g(83％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 276(M+) 分析C11H20N2O4S：   计算：C，47.81；H，7.30；N，10.14；   实测：C，47.69；H，7.28；N，10.34.

B)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-(N，N’-Boc2 -咪基)-3，4-脱氢哌啶的制备

在搅拌下，向N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，4- 脱氢哌啶(0.6g，1mmol)和三乙胺(0.35g，3.4mmol)的二甲基甲酰胺 (10ml)溶液中添加N，N’-Boc2-硫脲(0.28g，1mmol)，随后添加 HgCl2(0.28g，1mmol)。4小时后，真空脱除溶剂，残留物溶解在乙酸 乙酯中，用盐水洗涤2次。然后，有机相用MgSO4干燥、过滤、真空浓 缩。产品用硅胶柱色谱法纯化，以20％乙酸乙酯/己烷直至75％乙酸乙 酯/己烷的梯度洗脱。用TLC判断的含产品级分合并、真空浓缩，给出 800mg(94％)白色泡沫状物。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 820(MH+) 分析C42H70N6O10：   计算：C，61.59；H，8.61；N，10.26；   实测：C，61.81；H，8.79；N，10.45.

C)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基-3，4-脱氢哌啶·HCl 的制备

用基本上相当于实例58-E所述的那些方法，从N·(t-BuO2CCH2)- N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-(N，N’-Boc2-咪基)-3，4-脱氢哌 啶制备了0.22g(55％)  HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基-3，4 -脱氢哌啶·HCl。此产品用RPHPLC方法2纯化(98/2(A/B)直至 70/30(A/B)，2小时)。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 463.3(MH+) 分析C23H38N6O4·2.2HCl·2H2O：   计算：C，47.73；H，7.70；N，14.52；Cl，13.47；   实测：C，47.49；H，7.64；N，14.55；Cl，13.48.

                    实例71

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-苄脒·HCl (N-(羧甲基)-D-环己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲基) -2-氟苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-苄脒·HCl的制备

用基本上相当于实例66所述的那些方法，从3-F-4-Me-苄 腈制备了0.27g  HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-苄脒·HCl。此产 品用RPHPLC方法2纯化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小时)。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 476.3(MH+) 分析  C24H34N5O4F·2HCl·1.5H2O：   计算：C，50.09；H，6.83；N，12.17；Cl，12.32；   实测：C，49.89；H，6.65；N，12.17；Cl，12.42.

                  实例72

    HO2CCH2-0-Cha-Pro-4-NHCH2-3，5-F2-苄脒·HCl (N-(羧甲基)-D-环己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲基) -2，6-二氟苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，5-F2-苄脒·HCl的制备

用基本上相当于实例65所述的那些方法，从3，5-F2-苄腈制备了 0.28g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，5-F2-苄脒·HCl。此产品用 RPHPLC方法2纯化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，150分钟)。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 494.2(MH+) 分析C24H33N5O4F2·2HCl·1.5H2O：   计算：C，48.57；H，6.45；N，11.80；Cl，11.95；   实测：C，48.26；H，6.17；N，11.89；Cl，11.90.

                    实例73

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl

A)4-甲基-2-邻苯二甲酰亚胺基吡啶的制备

在搅拌下，向4-甲基-2-氨基吡啶(50g，460mmol)的乙酸 (1L)溶液中添加邻苯二甲酸酐(68g，460mmol)，反应混合物加热 回流。12小时后，添加乙酸酐(43ml，460mmol)，溶液继续搅拌回流 另外48小时。然后真空脱除溶剂，将固体残留物悬浮在甲苯中，真空浓 缩2次。然后将固体悬浮在乙酸乙酯中，猛烈搅拌、过滤。重复这种乙 酸乙酯洗涤步骤之后，固体真空干燥过夜，给出46.6g(42％)白色固 体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 238(M+) 分析C14H10N2O2：   计算：C，70.58；H，4.23；N，11.76；   实测：C，70.42；H，4.29；N，11.70.

B)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-邻苯二甲酰 亚胺基吡啶的制备

用基本上相当于实例64-A、23-A和1-G(用N-(t-BuO2CCH2) -N-Boc-D-Cha-ProOH)所述的那些方法，从4-甲基-2-邻苯二甲 酰亚胺基吡啶制备了2.4g N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2 -2-邻苯二甲酰亚胺基吡啶。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 717.7(M+)

C)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl的制备

在搅拌下，向N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-邻苯 二甲酰亚胺基吡啶(1-6g，2.2mmol)的乙醇(25ml)溶液中添加水合 肼(0.52ml，10.4mmol)。1小时后，真空脱除溶剂，残留物溶解在乙 酸乙酯中、真空浓缩2次。残留物用基本上相当于实例58-E所述的那 种步骤精心制作，给出380mg(37％)白色固体。此产品用RPHPLC 方法2纯化(98/2(A/B)直至70/30(AB)，150分钟)。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 432.3(MH+) 分析  C22H33N5O4·2.1HCl·H2O：   计算：C，50.23；H，7.11；N，13.31；   实测：C，50.05；H，7.08；N，13.54.

                      实例74

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl

HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl的制备

用基本上相当于实例73所述的那些方法，从5-甲基-2-氨基吡 啶制备了0.88g  HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl。 此产品用RPHPLC方法2纯化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，150 分钟)。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 432.3(MH+) 分析  C22H33N5O4·2HCl·H2O：   计算：C，50.58；H，7.14；N，13.40；   实测：C，50.79；H，7.20；N，13.58.

                  实例75

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2-2-氨基吡啶·HCl

A)5-Me-2-Boc2N-吡啶的制备

在0℃搅拌下，向5-甲基-2-氨基吡啶(10.5g，100mmol)的 二氯甲烷(200ml)溶液中添加N，N-二异丙基乙胺(25.8g，200mmol)， 随后添加草酸二叔丁酯(55g，250mmol)，最后添加4-(N，N-二甲 基氨基)吡啶(12.2g，100mmol)。撤去冷浴，让溶液继续搅拌过夜。 然后，混合物用乙酸乙酯(600ml)稀释，用饱和NH4Cl水溶液洗涤3 次，用盐水洗涤1次，用饱和NaHCO3水溶液洗涤2次，再用盐水洗涤1 次。然后，有机相干燥(MgSO4)、过滤、真空浓缩，用硅胶柱色谱法 纯化，以10％乙酸乙酯/己烷直至75％乙酸乙酯/己烷的梯度洗脱。用 TLC判断的含产品级分合并、真空浓缩，给出12.8g(42％)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 308(M+) 分析C16H24N2O4：

计算：C，62.32；H，7.84；N，9.08；

实测：C，62.51；H，8.11；N，9.37.

B)5-BrCH2-2-Boc2N-吡啶的制备

用基本上相当于实例64-A所述的那些方法，从5-Me-2-Boc2N- 吡啶制备了大约11.6g 5-BrCH2-2-Boc2N-吡啶(沾污了起始原 料)。 1H NMR FD-MS，m/e 386.3(M+) 分析C16H23N2O4Br：   计算：C，49.62；H，5.99；N，7.23；   实测：C，49.86；H，6.00；N，7.07.

C)5-NCCH2-2-Boc2N-比啶的制备

在搅拌下，向轻微不纯的5-BrCH2-2-Boc2N-吡啶(9.7g， 25mmo1)的二甲基甲酰胺(150ml)溶液中添加18-冠醚-6(1.32g， 5mmol)，随后添加KCN(1.95g，30mmol)。在搅拌6小时之后，真 空脱除溶剂，残留物用硅胶柱色谱法纯化，以己烷直到40％乙酸乙酯/ 己烷的步进梯度洗脱。用TLC判断的含产品级分合并、真空浓缩，给出 2.6g(31％，用2步)白色固体。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 333.4(M+) 分析C17H23N3O4：   计算：C，61.25；H，6.95；N，12.60；   实测：C，61.09；H，6.92；N，12.53.

D)HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2-2-氨基吡啶·HCl的制 备

在搅拌下，向5-NCCH2-2-Boc2N-吡啶(2.5g，7.5mm0l) 的甲醇(150ml)溶液中添加CoCl2(0.97g，7.5mmol)和水(0.81g， 45mmol)。5分钟后，用15分钟时间分小批添加NaBH4(2.84g， 75mmol)。再过15分钟之后真空脱除溶剂，残留物溶解在浓NH4OH水 溶液中，用乙酸乙酯萃取若干次。合并的乙酸乙酯萃取液用MgSO4干燥、 过滤、真空浓缩。

然后，用基本上相当于实例1-A和73-C所述的那些方法，将 残留物精心制作，给出1.2g(33％)HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2 -2-氨基吡啶·HCl。此产品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)直至 60/40(A/B)，150分钟)纯化。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 446.3(MH+) HRMS(FAB)计算值C23H36N5O4：446.2767 实测值：446.2769。

                      实例76

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-2-氨基吡啶·HCl

A)4-BocNHCH2CH2-2-CN-吡啶的制备

向4-BocNHCH2CH2-吡啶(2.22g，10mmol)的丙酮(50ml) 溶液中，在10分钟内通过加料漏斗添加间氯过苯甲酸(5.2g，30mmol) 的丙酮(50ml)溶液。在搅拌过夜后，真空脱除溶剂，残留物分配于水 (100ml)和二乙醚(100ml)之间。将有机相分离，用水萃取3次。 然后，合并的水相用固体NaCl饱和，用二氯甲烷(100ml)萃取3次。 合并的二氯甲烷萃取液用盐水洗涤1次，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓 缩成小体积，然后添加二乙醚。将白色沉淀物(2.0g)滤出、真空干燥。

将所分离固体的一半(4.2mmol)溶解在二氯甲烷(10ml)中，在 搅拌下向此溶液中添加三甲基甲硅烷基氰(0.84ml，6.3mmol)，随后添 加N，N-二甲基氨基甲酰氯(0.58ml，6.3mmol)。搅拌过夜后，缓缓 添加1M KHCO3水溶液(1ml)，将混合物分配在乙酸乙酯和水之间。 然后，有机相用盐水洗涤2次，用MgSO4干燥、过滤、真空浓缩，给出 0.6g(58％)琥珀色油状物，静置时结晶。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 247(M) 分析C13H17N3O2：   计算：C，63.31；H，7.02；N，16.99；   实测：C，63.31；H，7.02；N，16.71.

B)4-BocNHCH2CH2-2-CbzNH-吡啶的制备

在搅拌下，向4-BocNHCH2CH2-2-CN-比啶(0.5g，2mmol) 的甲醇(2.4ml)溶液中添加5N NaOH(1.6ml，8mmol)，此溶液 加热回流。24小时后，将溶液冷却到室温，并使之再搅拌48小时。然 后用1N HCl将pH调节至7，真空脱除溶剂。

残留物悬浮在甲苯(50ml)中，加热回流。在搅拌下，向此溶液中 依次添加三乙胺(0.36ml，2.6mmol)、苄醇(0.27ml，2.6mmol)和二 苯磷酰叠氮(0.72g，2.6mmol)。搅拌回流过夜之后，使溶液冷却，然 后用乙酸乙酯(200ml)稀释，用饱和NH4Cl水溶液洗涤2次，用盐水 洗涤2次。然后，有机相用MgSO4干燥、过滤、真空浓缩。然后，残留 物用硅胶柱色谱法纯化，以己烷直至50％乙酸乙酯/己烷的步进梯度洗 脱。由TLC确定的含产品级分合并、真空浓缩，给出0.37g(50％)白 色固体。 1H NMR FD-MS，m/e 371.2(M+) 分析C20H25N3O4：   计算：C，64.67；H，6.78；N，11.31；   实测：C，64.90；H，7.07；N，11.06.

C)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-2-氨基吡啶·HCl的制 备

用基本上相当于实例23-A、1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha- ProOH)、23-D和58-E所述的那些方法，从4-BocNHCH2CH2 -2-CbzNH-吡啶制备了48mg HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2 -2-氨基吡啶·HCl。此产品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)直至 70/30(A/B)，150分钟)纯化。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 446.4(MH+) 分析  C23H35N5O4·1.5HCl·H2O：   计算：C，53.30；H，7.49；N，13.51；   实测：C，53.64；H，7.27；N，13.80.

                实例77

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-F-苯胺·HCl

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-F-苯胺·HCl的制备

用基本上相当于实例64所述的那些方法，从3-F-4-NO2-甲 苯制备了0.55g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-F-苯胺·HCl。此产 品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)直至60/40(A/B)，180分钟) 纯化。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 449.3(MH+) 分析  C23H33N4O4F·0.9HCl·H2O：   计算：C，55.32；H，7.25；N，11.22；Cl，6.39；   实测：C，55.49；H，6.93；N，11.15；Cl，6.23.

                 实例78

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例10所述的那些方法，以N-(t-BuO2CCH2)- N-Boc-D-Cha-ProOH代替Boc-D-Phe-ProOH，制备了0.53g HO2CCH2- D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl。此产品用RPHPLC方法2(98/2 (A/B)直至70/30(A/B)，150分钟)纯化。 IR 1H NMR FD-MS，m/e 445.4(MH+) 分析  C24H36N4O4·2.2HCl·0.5H2O：   计算：C，54.00；H，7.40；N，10.50；Cl，14.61；   实测：C，54.18；H，7.54；N，10.31；Cl，14.86.

                    实例79

    HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H10CH2NH2·HCl

HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H10CH2NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例12所述的那些方法，以N-(t-BuO2CCH2)-N- Boc-D-Cha-ProOH代替Boc-D-Phe-ProOH，制备了0.04g HO2CCH2-D- Cha-Pro-4-NHCH2C6H10CH2NH2·HCl。此产品用RPHPLC方法2(98/2 (A/B)直至70/30(A/B)，150分钟)纯化。 1H NMR FD-MS，m/e 451(MH+) 分析  C24H42N4O4·2.7HCl·0.5H2O：   计算：C，51.65；H，8.25；N，10.04；   实测：C，51.47；H，7.87；N，9.97.

                  实例80

    EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl (N-(乙磺酰)-D-环己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲基) 苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例18所述的那些方法，以EtSO2-D-Cha-ProOH代 替Cbz-D-1-Piq-ProOH，制备了3.6g EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4C (NH)NH2·HCl。此产品用RPHPLC方法2(90/10(A/B)直至50/50 (A/B)，180分钟)纯化。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 492.3(MH+) 分析  C24H37N5O4S·HCl；   计算：C，54.58；H，7.25；N，13.26；Cl，6.71；   实测：C，54.31；H，7.31；N，13.37；Cl，6.71.

                    实例81

    EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl

EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例10所述的那些方法，以EtSO2-D-Cha-ProOH 代替Boc-D-Phe-ProOH，制备了EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2 NH2·HCl。此产品用RPHPLC方法2(90/10(A/B)直至50/50 (A/B)，180分钟)纯化。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 479.4(MH+) 分析  C24H38N4O4S·HCl·H2O：   计算：C，54.07；H，7.75；N，10.51；Cl，6.65；   实测：C，54.13；H，7.44；N，10.51；Cl，6.78.

                  实例82

    EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HCl

EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例64所述的那些方法，以EtSO2-D-Cha-ProOH代 替N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH，制备了0.35g EtSO2-D-Cha- Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HCl。此产品用RPHPLC方法2(90/10 (A/B)直至50/50(A/B)，180分钟)纯化。 IR 1H NMR FAB-MS，m/e 483.3(MH+) 分析  C23H35N4O4SF·1.1HCl·0.5H2O：   计算：C，51.95；H，7.03；N，10.54；Cl，7.33；   实测：C，52.09；H，6.94；N，10.39；Cl，7.24.

                        实例83

    EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl

EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl的制备

用基本上相当于实例73所述的那些方法，以EtSO2-D-Cha-ProOH代 替N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH，从4-甲基-2-氨基吡啶制 备了0.22g EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl。此产品用 RPHPLC方法2(90/10(A/B)直至50/50(A/B)，180分钟)纯化。 1H NMR FAB-MS，m/e  466.4(MH+) 分析  C22H35N5O4S·1.1HCl：

计算：C，52.25；H，7.19；N，13.85；Cl，7.71；

实测：C，52.49；H，6.96；N，13.96；Cl，7.76.

                        实例84

    EtSO2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl

EtSO2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl的制备

用基本上相当于实例73所述的那些方法，以EtSO2-D-Cha-ProOH代 替N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH，从5-甲基-2-氨基吡啶制 备了0.24g EtSO2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl。此产品用 RPHPLC方法2(90/10(A/B)直至50/50(A/B)，180分钟)纯化。 1H NMR FAB-MS，m/e 466.4(MH+) 分析  C22H35N5O4S·1.15HCl：   计算：C，52.06；H，7.18；N，13.80；Cl，8.03；   实测：C，52.38；H，6.97；N，14.20；Cl，8.46.

                        实例85

    HOOCCH2CH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl (N-(3-羧基丙基)-D-环己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨 基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

A)  Cbz-MeOOCCH＝CHCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz 的制备

向D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl(2.5g，4.1mmol) 的DMF(50ml)溶液中添加N，N-二异丙基乙胺(2.2ml，12.2mmol) 和3-溴巴豆酸甲酯(0.95g，4.5gmmol)。搅拌48小时后，添加Cbz-Cl (0.7ml，5mmol)和额外的N，N-二异丙基乙胺(0.85ml，5mmol)。 再搅拌16小时后，真空脱除挥发物。残留物分配于乙酸乙酯(100ml) 和饱和氯化铵水溶液(100ml)之间。将两层分离，有机相用饱和氯化 铵(50ml)水溶液洗涤1次，用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)洗涤2 次，用盐水(50ml)洗涤2次。有机相干燥(MgSO2)、过滤、真空 浓缩。粗产品用闪急色谱法(乙酸乙酯/己烷梯度)纯化，给出660mg(22 ％)白色泡沫状物。 1H NMR FD-MS，m/e 766(M+) 分析C43H51N5O8：   计算：C，67.43；H，6.71；N，9.14；   实测：C，67.22；H，6.57；N，8.98.

B)HOOCCH2CH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl 的制备

向Cbz-MeOOCCH＝CHCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz (0.5g，0.65mmol)的乙醇(5ml)溶液中添加1N氢氧化钠(0.65ml)。 在室温搅拌5小时后，添加1N HCl(3ml)、10％Pd/C(0.5g)、 H2O(15ml)和乙醇(25ml)。在搅拌下使该悬浮液真空脱气，然后 在氢气氛下放置18小时。添加硅藻土，然后将浆状物过滤。滤液真空浓 缩，用RPHPLC(方法2，98/2(A/B)，在150分钟内递减至75/25 (A/B))纯化。含纯产品的级分合并、冻干，给出46mg(13％)。 1H NMR FAB-MS，m/e 486.3(MH+) 分析C26H39N5O4·2.1HCl：

计算：C，55.15；H，7.35；N，12.19；Cl，13.24；

实测：C，55.55；H，7.37；N，12.19；Cl，13.58.

                  实例86

    HOOCCH2-D-Chg-Pro-p-N-HCH2C6H4C(NH)NH2·HCl (N-(羧甲基)-D-环己基甘氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲基) 苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

A)D-环己基甘氨酸的制备

用基本上相当于实例53-B所述的那种方法，从D-苯基甘氨酸 出发制备了16.1g(16％)D-环己基甘氨酸。 1H NMR FD-MS，m/e 117(M+) 分析C8H15NO2：   计算：C，61.12；H，9.62；N，8.91；   实测：C，61.23；H，9.56；N，8.73. B)Boc-D-环己基甘氨酸的制备

用基本上相当于实例1 7-A所述那种方法(采用草酸二叔丁酯)， 制备了22g(90％)Boc-D-环己基甘氨酸。 1H NMR FD-MS，m/e 258(M+) 分析C13H23NO4：   计算：C，60.68；H，9.01；N，5.44；   实测：C，60.91；H，9.18；N，5.38.

C)Boc-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-Pro-OH 和NH2CH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制备了20.5g(76％)Boc-Pro-p- NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。 1H NMR FD-MS，m/e 481(M+) 分析C26H32N4O5：   计算：C，64.98；H，6.71；N，11.66；   实测：C，64.76；H，6.78；N，11.62.

D)Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl的制备

用基本上相当于实例23-A所述的那种方法，制备了18.4g(100％) Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 381(M+) 分析C21H26N4O3Cl2：   计算：C，55.63；H，5.78；N，12.36；   实测：C，54.19；H，6.27；N，12.15.

E)Boc-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，制备了3.6g(97％) Boc-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。 1H NMR FD-MS，m/e 619(M+) 分析C34H45N5O6：   计算：C，65.89；H，7.32；N，11.30；   实测：C，67.59；H，8.07；N，10.99.

F)Cbz-t-BuOOCCH2-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制 备

用基本上相当于实例23-A和85-A(使用溴乙酸叔丁酯和氯甲 酸苄酯)所述的那些方法，制备了1.6g(45％)N-Cbz-N-(t-BuOOCCH2) -D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。 1H NMR FD-MS，m/e 769(M+) 分析C43H53N5O8：   计算：C，67.26；H，6.96；N，9.12；   实测：C，67.50；H，6.97；N，9.11.

G)HOOCCH2-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例23-A(以二噁烷作为溶剂)和18-F所述的 那些方法，制备了411mg(61％)HOOCCH2-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C (NH)NH2·HCl。 1H NMR FAB-MS，m/e 444.3(MH+) 分析C23H33N5O4·2.5HCl：   计算：C，51.67；H，6.69；N，13.10；   实测：C，51.84；H，6.50；N，13.15.

                        实例87

    HOOCCH2-D-hPhe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl (N-(羧甲基)-D-高苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲基) 苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

A)HOOCCH2-D-hPhe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例86所述的那些方法，从Boc-D-hPhe-OH出发制 备了335mg HOOCCH2-D-hPhe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。 1H NMR FAB-MS，m/e 466.3(MH+) 分析  C25H31N5O4·2.1HCl.H2O：   计算：C，53.61；H，6.32；N，12.50；Cl，13.29；   实测：C，53.58；H，6.08；N，12.59；Cl，13.67.

                    实例88

    HOOCCH2-D-hCha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl (N-(羧甲基)-D-高环己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基甲 基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

A)Boc-D-hCha-OH的制备

用基本上相当于实例53-D所述的那种方法，从Boc-D-hPhe-OH制 备了5.1g(100％)Boc-D-hCha-OH。 1H NMR FD-MS，m/e 240(M+) 分析C15H27NO4：   计算：C，63.13；H，9.54；N，4.91；   实测：C，63.38；H，9.39；N，5.12.

B)HOOCCH2-D-hCha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例86所述的那些方法，制备了135mg HOOCCH2-D-hPhe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。 1H NMR FAB-MS，m/e 472.3(MH+) 分析  C25H37N5O4·2.2HCl·0.5H2O：   计算：C，53.54；H，7.22；N，12.49；Cl，13.91；   实测：C，53.29；H，7.01；N，12.46；Cl，14.30.

                    实例89

    HOOCCH2-Gly-N-C6H5CH2CH2Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl

A)HOOCCH2-Gly-N-C6H5CH2CH2Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl 的制备

用基本上相当于实例1-G、1-D、1-G、23-A、85-A 和18-F所述的那些方法，制备了365mg N-HOOCCH2-Gly-N- C6H5CH2CH2-Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。 1H NMR FAB-MS，m/e 426.2(MH+) 分析  C22H27N5O4·2.2HCl·1.5H2O：   计算：C，49.60；H，6.09；N，13.15；Cl，14.64；   实测：C，49.79；H，5.71；N，13.31；Cl，14.49.

                        实例90

      (C2H5)2CHCO-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl

A)Boc-(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制备

用基本上相当于实例1-G所述的那种方法，从Boc-(γ-OBn)-Glu- OH和Pro-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl出发，制备了2.7g(64％) Boc-(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。 1H NMR FD-MS，m/e 700(M+) 分析C38H45N5O8：   计算：C，65.22；H，6.48；N，10.01；   实测：C，65.00；H，6.56；N，10.06.   B)(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl的制备

用基本上相当于实例23-A所述的那种方法，制备了2.38g(98 ％)(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl。 1H NMR FD-MS，m/e 600(M+) 分析C33H39N5O6Cl2：   计算：C，58.93；H，5.84；N，10.41；   实测：C，58.64；H，6.00；N，10.63.   C)(C2H5)2CHCO-(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制 备

在搅拌下，向(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl (1.3g，2mmol)的THF/H2O(各50ml)混合物中添加K2CO3(1.38g， 10mmol)和2-乙基丁酰氯(0.3g，2.2mmol)。搅拌10分钟后，真空 脱除挥发物。所形成的残留物分配于水和乙酸乙酯(各100ml)之间。 将两层分离，有机相用饱和氯化铵水溶液和盐水各洗涤2次，干燥 (MgSO4)、过滤、真空浓缩，给出1.45g(100％)。 1H NMR FD-MS，m/e 698(M+) 分析C39H47N5O7：   计算：C，67.13；H，6.79；N，10.04 ；   实测：C，67.11；H，6.70；N，9.74.

D)(C2H5)2CHCO-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例18-F所述的那种方法，制备了425mg(47 ％)(C2H5)2CHCO-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。此产品用 HPLC方法2(在150分钟内从98.2(AB)递减至75/25(A/B))。 1H NMR FAB-MS，m/e 474.3(MH+) 分析  C24H35N5O5·1.5HCl·1.1H2O：   计算：C，51.10；H，6.91；N，12.41；Cl，9.43；   实测：C，51.10；H，6.81；N，12.41；Cl，9.62.

                    实例91

    (C2H5)2CHCO-Met(O2)-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl

A)(C2H5)2CHCO-Met(O2)-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制 备

用基本上相当于实例90所述的那些方法，制备了530mg (C2H5)2CHCOMet(O2)-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。 1H NMR     FAB-MS，m/e 508.2(MH+) 分析  C24H37N5O5S·1.1HCl：   计算：C，52.63；H，7.01；N，12.79；Cl，7.12；   实测：C，52.42；H，7.03；N，12.80；Cl，6.99.

                      实例92

    MeSO2CH2CO-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl (N-(甲磺酰乙酰)-L-环己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亚氨基 甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·盐酸盐)

MeSO2CH2CO-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制备

用基本上相当于实例1-G和18-F所述的那些方法，制备了550mg MeSO2CH2CO-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。 1H NMR FAB-MS，m/e 520.5(MH+) 分析C25H37N5O5S·1.2HCl·H2O：   计算：C，51.64；H，6.97；N，12.04；Cl，7.32；   实测：C，51.58；H，6.84；N，12.18；Cl，7.61.

相信本发明化合物能选择性抑制凝血酶而不抑制其它蛋白酶和非酶 蛋白参与血凝，无显著干扰人体天然的血块溶解能力(此类化合物对血 纤维蛋白溶解作用的抑制效应低)。进而，相信这样的选择性使得能使 用血栓溶解剂而无实质性干扰血栓溶解作用和血纤维蛋白溶解作用。此 外，相信本发明化合物有经口活性。

在其诸多方面之一，本发明提供哺乳动物体内凝血酶的抑制方法， 包括对需要治疗的哺乳动物给药一有效(凝血酶抑制)剂量的通式I化 合物。

本方法所期待的凝血酶抑制包括适当的医学治疗性处理和/或预防 性处理。

在一个进一步的实施方案中，本发明涉及治疗人体或哺乳动物中需 要凝血酶抑制的病症。预期本发明化合物可在包括人在内的动物中用于 治疗或预防血栓形成和血液与组织中的过高可凝固性。此类化合物有潜 在效用的疾病状态就在于血栓形成和血液与组织中过高可凝固性的治疗 或预防。此类化合物在治疗和/或预防中有潜在效用的疾病状态包括静脉 血栓形成和肺栓塞、动脉血栓形成、例如心几缺血、心肌梗塞形成、不 稳定心绞痛、血栓形成引起的中风和未梢动脉形成。进而，此类化合物 在动脉粥样硬化疾病如冠状动脉病、脑动脉病和末梢动脉病的预防方面 有预期效用。进而，此类化合物预期可与血栓溶解剂一起用于(预防和 治疗)心肌梗塞形成。进而，此类化合物在血栓溶解、经皮穿透血管成 形术(PTCA)和冠状动脉旁通手术之后重新闭合的治疗或预防方面有 预期的效用。进而，此类化合物在防止显微外科之后重新形成血栓方面 有预期效用。进而，此类化合物预期可用于与人造器官和心瓣膜有关的 抗血凝治疗。进而，此类化合物在血液透析和播散性血管内凝血的抗凝 血治疗方面有预期效用。进一步的预期效用在于患者活体使用的导管与 机械器具的漂洗，和作为抗凝剂用于血液、血浆及其它血液产品的离体 保存。再进一步，此类化合物在血液凝固可能成为其基本贡献过程或二 次病理学来源的其它疾病如癌症(包括转移瘤)和发炎性疾病(包括关 节炎和糖尿病)方面也有预期效用。这种抗凝化合物是经口或非经肠如 静脉内输注(iv)、肌内注射(im)或皮下注射(sc)给药的。

按照本发明给药的化合物获得治疗和/或预防效果的具体剂量，当然 将决定于围绕该病例的特定情况，包括诸如给药的化合物、给药速率和 所治疗的病症。

以上各效用的典型日剂量在约0.01mg/kg和约1000mg/kg之间。剂 量制度可以不同，例如，对于预防用途，可以给药单一日剂量，或者每 日3～5次这样的多剂量也可能是合适的。在危急的护理情况下，本发明 化合物是以约0.01mg/kg/h和约20mg/kg/h之间、较好在约0.1mg/kg/h和 约5mg/kg/h之间的速率，用iv输注法给药的。

本发明的方法也与血块溶解剂如组织纤维蛋白溶酶原激酶(t- PA)、改性t-PA、链激酶或尿激酶结合实施。在血块形成已经发生而且 动脉或静脉被部分阻塞或完全阻塞的情况下，通常采用一种血块溶解 剂。本发明化合物可在该溶解剂之前或与其一起或在其单独使用之后给 药，进而较好的是与阿司匹林一起给药，以防止血块形成的再发生。

本发明的方法也与能抑制血小板凝聚的血小板糖蛋白受体(IIb/IIIa) 拮抗药结合实施。本发明的化合物可在(IIb/IIIa)拮抗药之前或与其一 起或其使用之后给药，以防止血块形成的再发生。

本发明的方法也与阿司匹林结合实施。本发明的化合物可在阿司匹 林之前或与其一起给药，或在其使用之后给药，以防止血块形成的再发 生。如上所述，较好的是本发明化合物与血块溶解剂及阿司匹林结合给 药。

本发明也提供可用于上述治疗方法的医药配方。本发明的医药配方包含有 效凝血酶抑制  量的通式I化合物，以及药物上可接受的载体、赋形剂 或稀释剂。为了经口给药，把抗血栓形成化合物配制成明胶胶囊或片剂， 它们可以含有粘结剂、润滑剂、崩解剂等这样一些赋形剂。为了非经肠 给药，把抗血栓形成剂配制在一种药物上可接受的稀释剂如生理盐水 (0.9％)、5％右旋葡萄糖、林格溶液等中。

本发明的化合物可以配制成含有约0.1mg至约1000mg剂量的单元 剂量配方。较好的是，此类化合物呈药物上可接受的盐的形式，例如， 硫酸盐、乙酸盐或磷酸盐。单元剂量配方的实例是在10ml无菌玻璃安瓿 中含有5mg作为药物上可接受的盐的本发明化合物。单元剂量配方的另 一个实例是在一个无菌安瓿所含的20ml等渗盐水中含有约10mg作为药物 上可接受的盐的本发明化合物。

此类化合物可以经各种各样的途径给药，其中包括经口、经直肠、 经皮、经皮下、经静脉内、经肌内和经鼻内。本发明化合物较好在给药 之前制成配方。因此，本发明的另一种实施方案是一种医药配方，其中 包含有效量的通式I化合物或其药物上可接受的盐或溶剂化物，及其药 物上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

此类配方中的活性组分占该配方重量的0.1％至99.9％。所谓“药 物上可接受”，系指该载体、稀释剂或赋形剂必须能与该配方的其它组 分兼容，而且对其接受者无害。

本发明医药配方是用众所周知和容易得到的组分通过已知步骤制备 的。在制作本发明的组合物时，通常使活性组分掺合一种载体、或用一 种载体稀释、或包容在一种载体内，后者可以呈胶囊、小药囊、纸或其 它容器的形式。当载体起稀释剂作用时，它可以是一种固体、半固体或 液体材料，充当该活性组分的载体、赋形剂或介质。因此，此类组合物 可以呈片剂、丸剂、粉末剂、锭剂、小药囊剂、小扁囊剂、酏剂、悬浮 液剂、乳液剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂(固体状或在液体介质中)、 软和硬胶囊剂、栓剂、无菌可注射溶液、无菌包装的粉末剂等形式。本 发明的组合物可以用技术上已知的步骤配制，使得能在对患者给药之后 迅速、持久或延时释放出活性组分。

以下配方实例只是举例说明，无意以任何方式限制本发明的范围。 “活性组分”当然是指按照通式I的化合物或其药物上可接受的盐或溶 剂化物。

                          配方1

用下列组分制备硬胶囊剂：

                          数量

                        (mg/胶囊)

活性组分                  250

干燥淀粉                  200

硬脂酸镁                   10

合计                      460

                配方2

用下列组分制备一种片剂：

                         数量

                        (mg/片)

活性组分                  250

微晶纤维素                400

烟气二氧化硅               10

硬脂酸                      5

合计                      665

将这些成分掺合、压片、形成每片重665mg的片剂。

                  配方3

制备含有下列成分的气溶胶溶液：

                          重量

活性组分                  0.25

乙醇                      25.75 推进剂22(氯二氟甲烷)    70.00 合计                    100.00

将活性化合物与乙醇混合，把混合物添加到一部分推进剂22中，冷 却到-30℃，并转移到一台灌装机中。然后，将所需数量灌入一个不锈 钢容器中，用该推进剂的剩余部分稀释.然后给该容器装上阀门单元。

                  配方4

每片含有60mg活性组分的片剂制作如下： 活性组分                     60mg 淀粉                         45mg 微晶纤维素                   35mg 聚乙烯基吡咯烷酮(10％水溶液) 4mg 羧甲基淀粉钠                 4.5mg 硬脂酸镁                     0.5mg 滑石粉                       1mg 合计                         150mg 让活性组分、淀粉和纤维素通过45号目美国筛、充分混合。使含有聚乙 烯基吡咯烷酮的水溶液与所形成的粉末混合，然后让混合物通过14号目 美国筛。这样产生的颗粒在50C干燥，并使之通过18号目美国筛。然 后，把事先通过60号目美国筛的羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石粉添加 到该颗粒中，混合后在压片机上压片，得到每片重150mg的片剂。

                      配方5

每个含有80mg活性组分的胶囊制作如下： 活性组分      80mg 淀粉          59mg 微晶纤维素    59mg 硬脂酸镁      2mg 合计          200mg

将活性组分、纤维素、淀粉和硬脂酸镁掺合、通过45号目美国筛、 以小200mg数量灌装到硬胶囊中。

                  配方6

每个含有225mg活性组分的栓剂制作如下： 活性组分    225mg 包和脂肪酸甘油酯    2.000mg 合计                2.225mg

让活性组分通过60号目美国筛，并悬浮在事先用必要的最低限度热 量熔融的饱和脂肪酸甘油酯中。然后把混合物倾入标称2g容量的栓剂模 具中，并使之冷却。

                    配方7 每5ml剂量各含50mg活性组分的悬浮液剂制作如下： 活性组分          50mmg 羧甲基纤维素钠    50mg 糖浆              1.25ml 苯甲酸溶液        0.10ml 芳香剂            适量 色素              适量 纯化水添加至总量  5ml

使活性组分通过45号目美国筛，与羧甲基纤维素钠和糖浆混合，形 成一种均匀膏状物。苯甲酸溶液、芳香剂和色素用一部分水稀释，在搅 拌下添加到膏状物中。然后添加足够的水以产生所需要的体积。

                    配方8

一种静脉内配方可以制备如下： 活性组分    100mg 等渗盐水    1,000ml

上述组分的溶液一般是以1ml/分钟的速率对患者静脉内给药的。

本发明(通式I)所提供的化合物是有经口活性的，而且能选择性 抑制哺乳动物中凝血酶的作用。

本发明化合物作为一种有效并具有经口活性的凝血酶抑制剂的能力 是用下列一种或多种试验评估的。

凝血酶的抑制是用凝血酶的酰胺酶活性的离体抑制证实的，这是用 凝血酶使产色基质N-苯甲酰-L-苯丙氨酰-L-缬氨酰-L-精氨酰 -对硝基苯胺水解的试验测定的。

此试验按如下进行：使50μl缓冲剂(0.03M Tris，0.15M NaCl， pH7.4)与25μl牛凝血酶或人凝血酶溶液(0.21mg/ml血栓性郁血牛 凝血酶，Parke-Davis，或纯化的人凝血酶，印第安纳州南本德市酶研究 实验室，大约8NIH单位/ml，缓中剂相同)和25μl试验化合物溶液(溶 剂是50％甲醇水溶液，体积比)混合。添加150μ产色基质水溶液 (0.25mg/ml)，通过在405nm监测对硝基苯胺的释放反应，测定该基 质的水解速度。以游离凝血酶浓度对水解速度作图，制作标准曲线。然 后，把用试验化合物观察到的水解速度，利用标准曲线换算成各试验中 的“游离凝血酶”值。  (与试验化合物结合的)结合凝血酶是通过从试 验中所用的凝血酶的已知初始量减去每个试验中观察到的游离凝血酶数 量计算得到的。每个试验中的游离抑制剂数量是通过从所添加抑制剂(试 验化合物)的摩尔数减去结合凝血酶的摩尔数计算得到的。

Kass值是凝血酶与试验化合物(I)之间的反应的假设平衡常数。

凝血酶+I凝血酶-I

Kass是对试验化合物的一系列浓度计算的，其平均值以升/摩尔的单 位报告。

大体上遵照以上对人体凝血酶所述的步骤，并使用其它人体血凝系 统丝氨酸蛋白酶和血纤维蛋白溶解系统蛋白酶以及以下识别的适当产色 基质，评估了本发明化合物对血凝因子丝氨酸蛋白酶和对血纤维蛋白溶 解系统丝氨酸蛋白酶的选择性，以及它们基  本上不干扰血纤维蛋白溶 解系统的丝氨酸蛋白酶。凝血酶抑制剂较好应不伤害尿激酶、组织纤维 蛋白溶酶原激酶(t-PA)和链激酶诱发的血纤维蛋白溶解。这对于此类 药剂作为链激酶、t-PA或尿激酶血栓溶解治疗的辅助药物的治疗用途， 和对于此类药剂作为不伤害内生血纤维蛋白溶解(相对于t-PA和尿激 酶)的抗血栓形成剂的用途，都会是重要的。除了不干扰血纤维蛋白溶 解蛋白酶的酰胺酶活性外，这样的血纤维蛋白溶解系统保护还可以利用 人体血浆块及其被各自的血纤维蛋白溶酶原激酶溶解来研究。

人体因子X、Xa、IXa、XIa和XIIa购自酶研究实验室(印第安 纳州南本德)；人体尿激酶购自Leo医药公司(丹麦)；重组体活化的 蛋白C(aPC)是在Eli Lilly公司基本上按照美国专利4,981,952制备的。 产色基质：N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-对硝基苯胺(用于因子Xa)； N-Cbz-D-Arg-Gly-Arg-对硝基苯胺(用于因子IXa试验作为因子Xa基 质)；焦谷氨酰-Pro-Arg-对硝基苯胺(用于因子XIa和用于aPC)： H-D-Pro-Phe-Arg-对硝基苯胺(用于因子XIIa)；和焦谷氨酰-Gly-Arg- 对硝基苯胺(用于尿激酶)；这些购自Kabi Vilrum(瑞典斯德尔摩)或 购自Midwest Biotech(印第安纳州Fishers)。牛胰蛋白酶购自 Worthington Biochemieals(新译西州弗里霍尔德)；人体血浆激肽释放 酶购自Kabi Vitrum(瑞典斯德哥尔摩)。用于血浆激肽释放酶的产色基 质H-D-Pro-Phe-Arg-对硝基苯胺购自Kabi Vitrum(瑞典斯德哥尔摩)。 N-苯甲酰-Phe-Val-Arg-对硝基苯胺这种用于人体凝血酶和用于胰蛋 白酶的基质是按照以上对本发明化合物所述的步骤用已知的肽偶合方法 从商业上可得的反应物合成的，或购自Midwest Biotech(印第安纳州 Fishers)。

人体血纤维蛋白溶酶购自Boehringer Mannheim(印第安纳州印第安 纳波利斯)；nt-PA以单链活性参考物形式购自American Diagnostica (康涅狄格州格林威治)；改性的t-PA6(mt-PA6)是在El；Lilly公司用技 术上已知的步骤(见Burck等人，J，Biol，Chem，265,5120-5177(1990)) 制备的。血纤维蛋白溶酶产色基质H-D-Val-Leu-Lys-对硝基苯胺和组织血 纤维蛋白溶酶原激酶(t-PA)基质H-D-Ile-Pro-Arg-对硝基苯胺购自Kabi Vitrum(瑞典斯德哥尔摩)。

在以上所述的产色基质中，三字母符号Ile、Glu、Gly、Pro、 Arg、Phe、Val、Leu和Lys分别用来指出对应的氨基酸基团异亮氨 酸、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和 赖氨酸。

以下表1列出了用所指出的、通式I代表的化合物得到的Kass值。

                          表1

                        抑制性能

                  -----Kass×106(1/摩尔)---- 实例  人体凝血酶    Xa       胰蛋白酶  血纤维蛋白溶酶  t-PA 1          3.3     0.0017      0.38         0.010      0.082 2          4.4     0.0092      1.0          0.045      0.023 3          2.1     0.0021      0.24         0.0046     0.033 4          13.     0.0057      0.076        0.0033     0.074 5          0.035   0.00039     0.00015      0.00022  ＜0.001 6          2.3     0.00024     0.0016       0.00023  ＜0.001 7          1.9     0.0041      0.0081       0.00022    0.0037 8          5.3     0.00038     0.022        0.00080    0.0012 9          0.033   0.00058     0.00017    ＜0.001    ＜0.001 10         1.4     0.000024    0.077        0.0045     0.00055 11         0.064   0.000068    0.0036       0.0060   ＜0.001 12         0.44    0.000042    0.0022       0.00087    0.000042 13         0.49    0.00098     0.00066      0.00011  ＜0.001 14         0.021   0.00014     0.000056     0.000046 ＜0.001 15         220     0.0070      2.6          0.017      0.004 16         0.97    0.0051      0.02         0.0017     0.0012 17         33      0.049       3.8          0.024      0.0034 18         180     0.21        14           0.085      0.0094 19         11      0.14        41           0.16       0.0056 20         10      0.10        19           0.10       0.0077 21         3.6     0.62        0.96         0.031      0.002 22         3.0     0.043       8.5          0.042      0.004 23         770     0.14        21           0.44       0.31 24         0.78  ＜0.001       0.03       ＜0.001    ＜0.001 25         0.43  ＜0.001       0.01       ＜0.001      0.01 26         13.     0.01        0.21         0.01       0.01 27        0.29     0.02        0.02       ＜0.001      0.02 28        0.95     0.01        0.11       ＜0.001    ＜0.001 29        0.76     0.02        0.02       ＜0.001    ＜0.001 30        0.55     0.02        0.03       ＜0.001    ＜0.001

  31              0.07         0.14         0.05       ＜0.001     ＜0.001

  32              0.13         0.03         0.04       ＜0.001       0.01

  33              0.04         0.04         0.02       ＜0.001     ＜0.001

  34              0.65       ＜0.001        0.49         0.01        0.01

  35              0.09       ＜0.001        0.04       ＜0.001     ＜0.001

  36              0.06       ＜0.001        0.01       ＜0.001     ＜0.001

  37              0.02                    ＜0.009

  38              1.1        ＜0.001        0.07       ＜0.001

  39              0.12       ＜0.001      ＜0.02       ＜0.001

  40              0.03       ＜0.001        0.01       ＜0.001

  41              0.01       ＜0.001      ＜0.001      ＜0.001

  42              38.          0.07         43           0.12        0.01

  43              1.4          0.05         100          0.30        0.01

  44              630          0.66         2,600        1.8         0.04

  45              610          1.5          110          1.1         0.77

  46              240          0.07         48           0.13        0.01

  47              45           0.04         82           0.18        0.01

  48              4,100        5.5          250          0.43        0.05

  49              400          3.4          940          0.84        0.04

  50              40           4.3          2,200        1.8         0.04

  51              1,300        0.84         27           0.13        0.01

  52              700          0.46         47           0.11        0.01

  53              0.36       ＜0.001        0.1        ＜0.001     ＜0.001

  54              2.8        ＜0.001        0.52         0.01      ＜0.001

  55              0.01       ＜0.001        0.1        ＜0.001     ＜0.001

  56              490          0.20         3.6          0.01      ＜0.001

  57              39           0.01         0.24         0.01      ＜0.001

  58              0.60       ＜0.001        0.40       ＜0.001     ＜0.001

  59              1.10       ＜0.001        0.21       ＜0.001     ＜0.001

  60              0.24       ＜0.001        0.03       ＜0.001     ＜0.001

  61              63           0.03         1.0          0.004       0.008

  62              7.6

  63              0.31

  64              15           0.01

  65              4,500                     570.

  66              120                       4.6

  67              11 68           600 69           340                   3.7 70           430                   9.8 71           1,400                 240. 72           2,300                 280 73           28 74           29 75           0.45 76           12                    0.36 77           11 78           11                    8.6 79           2.0                   0.24 80           1,700.                90. 81           5.3                   2.1 82           5.0 83           2.4                   0.03 84           2.9                   0.07 85           265                   30.8 86           200                   0.63 87           30                    2.5 88           410                   3.9 89           0.14                  0.071 90           0.61                  0.002 91           3.6                   0.007 92           130                   7.7

要说明的是，其X含有D-环己基丙氨酰部分的化合物意外地 改善了关于凝血酶抑制的强度，而且当与其X含有D-苯丙氨酰部分的 对应化合物比较时显示出特别令人惊讶地增强的关于因子Xa抑制的强 度。

材料

狗血浆是从有意识混种狗(任意一种性别的Hazelton-LRE， Kalamazoo，美国密歇根州)用静脉穿刺到3.8％柠檬酸盐中得到的。血纤 维蛋白原是从新鲜狗血浆制备的，而人血纤维蛋白原则是按照以前的步 骤和规格从当日ACD人血以I-2级分制备的(Smith，Biochem.J.， 185，1-11(1980)；和Smith等人，Biochemistry，11，2958-2967(1972))。 人血纤维蛋白原(98％纯度/无血纤维蛋白溶酶)购自American Diagnostica(康涅狄格州格林威治)。血纤维蛋白原I-2制剂的放射 标记是按以前报告的方法进行的(Smith等人，Biochemistry，11、2958- 2967，)(1972))。尿激酶购自Leo医药公司(丹麦)，2200 Ploug 单位/管形瓶。链激酶购自Hoechst-Roussel医药公司(新泽西州萨默维 尔)。

方法：对人体血浆块被t-PA溶解的影响

人体血浆块是通过在微试管中向100μl含有0.0229μCi碘-125 标记的血纤维蛋白原的人体血浆中添加50μl凝血酶(73NIH单位/ml) 形成的。该血浆块溶解是通过在血浆块上叠加50μl尿激酶或链激酶 (50，100或1000单位/ml)并在室温培养20小时进行的。培养后， 这些试管用一台Beckman微离心机离心分离。把25μl上清液添加到 1.0ml体积的0.03M Tris/0.15M NaCl缓冲剂中进行r计数。100％溶 解计数对照是通过省略凝血酶(且用缓冲剂代替)而得到的。通过在叠 加溶液中以1、5和10μg/ml浓度包括本化合物，评估凝血酶抑制剂 对血纤维蛋白溶解的可能干扰。通过把数据点线性外推到一个能代表该 血纤维蛋白溶解剂特定浓度的50％溶解的数值，估计IC50值的粗略近 似。

抗凝血剂活性

材料

狗血浆和大鼠血浆是从有意识混种狗(任意性别，Hazelton-LRE， Kalamazoo，美国密歇根州)或从麻醉的雄性Sprague-Dawley大鼠(Harlan Sprague-Dawley公司，美国印第安纳州印第安纳波利斯)静脉穿刺到3.8 ％柠檬酸盐得到的。血纤维蛋白原是按照以前的步骤和规格(Smith， Biochem.J.185，1-11(1980)；和Smith等人，Biochemistry，11，2958- 2967(1972)从当日ACD人体血液以I-2级分形式制备的。人体血 纤维蛋白原也以98％纯度/无血纤维蛋白溶酶形式购自American Diagnostica(康涅狄格州格林威治)。血凝试剂ACTIN、组织促凝血酶 原激酶和人体血浆购自Baxter Healthcare公司Dade分公司(佛罗里达州 迈阿密)。购自Parke-Davis(密歇根州安底特律)的牛凝血酶用于血浆 凝固试验

方法

抗凝血测定

凝血试验步骤如以前所述(Smith等人，Thrombosis Research，50， 163-174(1988))。用一台CoASCreener凝血仪(American LABor公司) 进行所有凝血试验测定。凝血酶原时间(PT)是通过向0.05ml试验血 浆中添加0.05ml盐水和0.05ml组织促凝血酶原激酶-C试剂测定的。 活化的部分组织促凝血酶原激酶时间(APTT)是用0.05ml试验血浆与 0.05ml肌动蛋白试剂一起温育120秒随后添加0.05ml CaCl2(0.02M)测 定的。凝血酶时间(TT)是通过向0.05ml试验血浆中添加0.05ml盐水 和0.05ml凝血酶(10NIH单位/ml)测定的。向人体或动物血浆中添加 浓度范围广泛的通式I化合物，以确定其对APTT、PT和TT试验的延 时效应。进行线性外推，以估计使每个试验的凝固时间延长一倍所需要 的浓度。

动物

雄性Sprague Dawley大鼠)350-425g，Harlan Sprague Dawley公 司，印第安纳州印第安纳波利斯)用甲苯噻嗪(20mg/kg，皮下注射)和 氯胺酮(120mg/kg，皮下注射)麻醉，并在加热水毯(37℃)上保温。 给颈静脉插上导管以便输注。

动静脉支路模型

左颈静脉和右颈动脉各插入一根20cm长度的PE60聚乙烯管。其腔 内有一根棉线(5cm)的一根6cm长中心段大管(PE190)摩擦配合于 两根较长的管段之间，以完成该动静脉分支回路。血液通过该支路循环 15分钟，然后小心取出棉线并称重。湿棉线的重量从该棉线与血栓的总 重量中扣除(见JR.Smith，Br.J.Pharmacol.，77，29(1982))。

当实例48的化合物与D-MePhe-Pro-Arg-H(以上第2页讨论的)在 此动静脉支路模中比较时，发现抗血栓形成强度在连续静脉内输注期间 大9倍。为了使血栓重量减少到相同程度(减少到对照组的大约20％)， 实例48的化合物使血浆凝血酶时间延长了约3倍，而在标准化合物输注 期间血浆凝血酶时间被延长了20倍以上。在实例48化合物输注期间， 凝血酶原时间和APTT只被延长到对照组的约120％(少数几秒)。

FeCl3动脉损伤模型

颈动脉是通过中线前侧颈切口分离的，每根动脉下设置一只热电 偶，用纸带式记录仪连续记录血管温度。一个沿纵向切开的管套 (0.058ID×0.077OD×4mm，Baxter Med.Grade Silicone)放置在 紧贴该热电偶上面的每根颈动脉周围。六水合FeCl3溶解在水中，浓度 (20％)仅以FeCl3的实际重量表达。为了伤害该动脉和诱发血栓形成， 用移液管取2.85μl置于该管套上，以浸蚀该热电偶探针上方的动脉。温 度迅速下降时表明动脉闭塞。闭塞时间以分钟报告，代是施用FeCl3和血 管温度迅速下降之间经过的时间(见K.D.Kurz，Thromb.Res.，60， 269(1990))。

自发血栓溶解模型

离体数据表明，肽凝血酶抑制剂能抑制凝血酶及其它丝氨酸蛋白 酶，如血纤维蛋白溶酶和组织血纤维蛋白溶酶原激酶。为了评价本发明 化合物是否会抑制活体血纤维蛋白溶解，通过把一种有标记的全血块移 植到肺循环中，测定自发血栓溶解速度。将大鼠血液(1ml)与牛凝血 酶(4IU，Parke Davis)和125I人体血纤维蛋白原(5μCi，ICN)迅速 混合，立即吸入硅橡胶管中，在37℃温育1小时。将老化的血栓从该管 中挤出，切成1cm段，用常用盐水洗涤3次，每段都用r计数器计数。 把一个有已知计数的血栓段吸进一根导管中，随后将其移植到颈静脉 中。把导管前端推进到右心房附近，将该血栓块挤出，使之漂移到肺 循环中。移植后1小时，将心脏和肺脏摘取、分别计数。血栓溶解用百 分率表示，其中： 移植的血栓块的血纤维蛋白溶解是依赖于时间而发生的(见J.P.Clozel， Cardiovas.Pharmacol.，12，520(1988))。

血凝参数

血浆凝血酶时间(TT)和活化的部分组织促凝血酶原激酶时间 (APTT)是用血纤维计(firometer)测定的。血液从颈导管采样，并 收集在含有柠檬酸钠(3.8％，1份对9份血液)的注射器中。测定TT时， 将大鼠血浆(0.1ml)与盐水(0.1ml)和牛凝血酶(0.1ml，30U/ml Tris 缓冲剂溶剂；Parke Davis)在37℃混合。测定APTT时，血浆(0.1ml) 和APTT溶液(0.1ml，Organon Teknika)一起温育5分钟(37℃)， 添加CaCl2(0.01ml，0.025M)以开始凝固。试验重复进行，取平均值。

生物利用度指数

生物活性的量度，即血浆凝血酶时间(TT)，用来代替母体化合物 试验所依据的假设是，TT的增量仅源于母体化合物的凝血酶抑制作 用。凝血酶抑制剂对TT的影响的时程是在对麻醉大鼠经静脉内(iv) 浓缩药团给药之后和在对禁食的有意识大鼠经口(po)处理之后测定 的。由于血液体积的限制，和确定从处理时间到其响应回到处理前数值 的时间的时程所需要的点数，使用了两个大鼠种群。每个样品种群代表 交替顺序的时点。该时程内的平均TT用来计算曲线下面积(AUC)。 生物利用度指数是用以下所示公式计算的，并以百分相对活性表示。

确定血浆TT时程的曲线下面积(AUC)，并按剂量加以调整。这 种生物利用度指数称为“％相结活性”，按如下计算：

化合物

化合物溶液是每日用常用盐水新鲜制备的，以浓缩药团方式注射， 或在实验干扰前15分钟开始输注并在整个实验干扰中继续输注，这种实 验干扰在动静脉支路模型中是15分钟，而在FeCl3动脉损伤模型中和在 自发血栓溶解模型中是60分钟。浓缩药团注射体积对iv(经静脉内)是 1ml/kg，对po(经口给药)是5ml/kg，输注体积是3ml/hr。

统计

结果用平均+/-SEM表示。用单向方差分析来检测统计上显著的差 异，然后运用Dunnett试验来确定哪些平均值是不同的。等平均值零假设 剔除的显著水平是P＜0.05。

动物

雄性狗(Beagles；18个月～2年；12～13kg，Marshall Farms，North Rose，New York 14516)被禁食过夜，并在给药后240分钟喂养Purina 认证的配方食谱(Purina Mills，St.Louis，Missouri)。水可随意摄取。 室温保持在66～74°F，  相对湿度45～50％：照明时间早6时至晚6 时。

药物动力学模型

试验化合物是在给药前即时配制的，将其溶解在无菌0.9％盐水中配 成5mg/ml制剂。用经口管饲法给狗以单剂量2mg/kg试验化合物。血样 在给药后0.25、0.5、0.75、1、2、3、4和6小时采自头侧静脉。 样品用加柠檬酸的Vacutainer管收集。并在用离心法还原成血浆之前在 冰上保存。血浆样品用二硝基苯肼衍生，用HPLC(Zorbax SB-C8柱) 分析，以用磷酸调至pH7的甲醇/500mM乙酸钠(60∶40，体积比)洗脱。 记录血浆中的试验化合物浓度，用来计算药物动力学参数：消除速度常 数，Ke；总清除率，Clt；分布体积，VD；血浆中试验化合物最大浓度 的时间，tmax；tmax的试验化合物最大浓度，Cmax；血浆半衰期； t0.5，曲线下面积，A.U.C.；和吸收的试验化合物分数，F。

犬冠状动脉血栓形成模型

狗的外科准备和仪器化按Jackson等人(Circulation，82，930-940 (1990))所述那样进行。混种狗(6～7)个同龄，任意性别， Hazelton-LRE，Kalamazoo，MI，USA)用戊巴比妥钠(30mg/kg经静脉 内)i.v.))麻醉、插管、用室内空气通气。调整潮间体积和呼吸速度， 以使血液PO2、PCO2和pH保持在正常极限之内。插入皮下针状电极，以记 录导程II心电图。

通过左中侧颈切口分离左颈静脉和共用颈动脉。用插入颈动脉中的 预标定Millar换能器(MPC-500型，Millar Instruments，美国得克萨斯州 休斯顿)连续测量动脉血压(ABP)。颈静脉中插入套管，用于在实验 期间采血样。此外，两只后脚的股静脉都插入套管，用于试验化合物给 药。

在第五肋间空间进行左胸廓造口术，使心脏悬在一个心包支架上。 在靠近第一主对角线心室分支的位置分离出一段1～2cm长的左弯曲冠 状动脉(LCX)。一根3～4cm长的、有26号针尖的导线阳极电极(有 Teflon涂层的30号镀银铜丝)插入LCX中，使之与该动脉的内膜表面 接触(在实验结束时予以证实)。此模拟电路是通过在皮下位置(s.c) 放置阴极完成的。在电极区上方的LCX周围放置一个可调塑料合器。 在靠近该阳极的LCX周围放置一个预标定的电磁流量探针(Carolina Medical Electronics，King，NC，USA)用于测定冠状血液流量(CBF)。 调节该合器，以产生在LCX 10秒钟机械闭塞后观察到的充血性血液流 动反应的40～50％抑制作用。用数据采集系统(M3000型，Modular Instruments，Malvern，PA，USA)记录和分析所有血液动测量与心电图测 量。

血栓形成与化合物给药方案

通过给该阳极施加100μA直流电(DC)，产生LCX内膜的电解 性损伤。此电流保持60分钟，然后使之中断，不管血管是否已经闭塞。 血栓形成自发进行，直至LCX完全闭塞(根据零CBF和S-T段增大 来确定)。使闭塞性血栓能老化1小时之后，开始化合物给药。本发明 化合物以0.5和1mg/kg/h的剂量输注2小时，同时开始输注血栓溶解剂 (如组织血纤维蛋白溶酶原激酶、链激酶、APSAC)。试验化合物给药 后进行3小时再灌注。成功的血栓溶解之后冠状动脉的再闭塞定义为零 CBF持续≥30分钟。

血液学和模板流血时间测定

用血液学分析仪(Cell-Dyn 900，Sequoia-Turner，Mount View，CA，USA)，以40μl加柠檬酸盐(3.8％)的血液样品(1份柠 檬酸盐：9份血液)，测定全血细胞数、血红蛋白和血细胞比容值。用 一台Simplate II流血时间测定仪(Organon Teknika Durham，N.C.， USA)测定牙龈模板流血时间。用该测定仪在狗的上或下左颚牙龈上做 2个横向切口。每个切口均为3mm宽×2mm深。在做切口时，用秒表 测定出血到底发生多长时间。当血液从切口渗出时用棉签吸取血液。模 板流血时间是从切口到流血停止的时间。流血时间是在试验化合物临给 药前(0分钟)、输注60分钟、试验化合物给药结束时(120分钟)和 实验结束时取值的。

所有数据都进行单向方差分析(ANOVA)，随后进行Student- Neuman-Kuels此后t检验，以确定其显著性水平。用重复测定ANOVA 来确定各实验期间各时点之间的显著差异。各数值均确定为至少在 p＜0.05的水平上是有统计差异的。所有数值都是平均±SEM。所有研究 都按照美国生理学学会的指导原则进行。关于这些步骤的进一步细节， 详见Jackson等人，J.Cardiovasc.pharmacol.，21，587-599(1993)。

                  表2

             人体血浆抗凝血

   2×凝固时间(ng/ml)        ％经口/经静脉内 实例      TT        APTT     PT     活性(大鼠)  1        250       NT       NT           8  2        170       NT       NT           NT  3        590       NT       NT           NT  4        230       NT       NT           NT  5     30,000       NT       NT           NT  6        390       NT       NT           NT  7        490       NT       NT           NT  8        130       NT       NT           NT  9   ＞91,000       NT       NT           NT 10        420       NT       NT           NT 11      8,800       NT       NT           NT 12      1,700       NT       NT           NT 13        660       NT       NT           NT 14     21,000       NT       NT           NT 15          9       89      200            4 16        650    8,600    8,500           NT 17         26      370      400           15 18          7       79      170           12 19         58      300      540           NT 20         62      550      600           23 21        160    2,000    1,000           NT 22        170    2,300    1,000           NT 23          7       86      120           12 24      1,000   25,900   25,000           NT 25      1,430   34,600   40,400           NT 26         37      870      750          NC1 27      1,940   27,800   27,000           NT 28        520    8,100    8,300           NT 29        750    9,800   15,800           NT 30      1,000   14,000   14,400           NT 31     10,800   34,500   30,000           NT 32        3,100     28,500      47,800              NT 33       18,900     59,300      70,900              NT 34          530      4,900       5,500              NT 35        4,500     50,400      78,400              NT 36        7,700   ＞91,000    ＞91,000              NT 37      ＞9,000    ＞9,000     ＞9,000              NT 38          540      6,100      11,100              NT 39        5,300     69,200      78,600              NT 40       35,100   ＞91,000    ＞91,000              NT 41       82,200   ＞91,000    ＞91,000              NT 42           20        270         320              NC2 43          280      1,100         930              NT 44            4.       100         170              NT 45            8        200         330              NC2 46            2.        67          77              NC3 47           12.       140         270              NC2 48            2.        33          59              22 49            5        130         130              NC2 50           35        460         420              NT 51            2         48         110              NT 52            6         80         170              NT 53        1,400     33,800      34,500              NT 54          140      3,300       2,200              NT 55       55,800   ＞91,000    ＞91,000              NT 56            5        160         200              NT 57           14        360         340              NT 58          710     14,300      11,400              NT 59          420      5,500       7,000              NT 60        3,200     22,200      77,700              NT 61           45        679         756              NT 62           54                                     NT 63          680                                     NT 64           23        900         650              NC3 65            1         48          85              NT 66          7.9        180         270              NT 67           34.     1,800        1,300             NT 68              4.           49          190          NT 69              5.          110          220          NT 70              2           160          180          NT 71              1            89          150          NC1 72              1           160          160          NC1 73             21           340          330          NT 74             20           420          350          NT 75                                                    NT 76             29           490          560          NT 77             53         1,600          890          NT 78             46           430          760          NT 79            140         1,700        2,400          NT 80              4            40          130          NT  81           110         1,500        2,700          NT  82           130         3,800        3,000          NT  83            91         1,000        1,300          NT  84           110         1,500        1,900          NT  85           4.9           100          197          NT  86             4            81          180          NT  87             9           260          310          NT  88             4           100          200          NT  89           570        51,000       37,000          NT  90           330        14,500       14,600          NT  91            63         3,000        3,500          NT  92           8.9           210          340          NT

表2注释

NC1表示筛选没有完成；在20mg/kg(经口给药)时观察到低或非 常低的活性。

NC2表示筛选没有完成；在60mg/kg(经口给药)时观察到低或非 常低的活性。

NC3表示筛选没有完成；在50mg/kg(经口给药)时观察到低或非 常低的活性。

NT表示没有试验，视为空白项目。