一种分离纯化烟草中两种致香前体物的方法专利检索-至少有1个羟基或氧-金属基连接在除六元芳环以外的环的碳原子上的化合物专利检索查询-专利查询网

一种分离纯化烟草中两种致香前体物的方法
申请号	CN201010617666.3	申请日	2010-12-30	公开(公告)号	CN102206138A	公开(公告)日	2011-10-05
申请人	上海烟草集团有限责任公司;			发明人	孙文梁; 高伟;
摘要	本发明属于分离纯化技术领域，涉及烟草中有效成分的分离纯化技术，具体涉及一种从新鲜烟叶中提取、分离和纯化α-4,8,13-西柏三烯-1,3-二醇和β-4,8,13-西柏三烯-1,3-二醇的方法。本发明分离纯化方法，包括如下步骤：（1）浸取；（2）液-液萃取；（3）正相硅胶柱色谱分离；（4）正相氰基柱色谱分离；（5）反相C18柱色谱分离，获得两种致香前体物。本发明分离纯化方法获得的两种致香前体物的纯度均大于99%，可以作为标准品应用于相关科学研究中；整个分离纯化产品回收率高，工艺操作简便，自动化程度高，易实现大批量制备。
权利要求	1.一种分离纯化烟草中α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1， 3-二醇的方法，包括如下步骤： (1)浸取：采用浸洗法萃取新鲜烟叶的表面分泌物，萃取液浓缩至干，得到深褐色浸膏S1； (2)液-液萃取：采用液-液萃取法得到含西柏烷类化合物的提取液S2； (3)正相硅胶柱色谱分离：采用正相硅胶柱对获得的提取液S2进行梯度洗脱，得到主要物质为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的洗脱液S3，所述流动相选用逐渐增加极性的梯度洗脱剂； (4)正相氰基柱色谱分离：采用正相氰基制备柱对获得的洗脱液S3进行梯度洗脱，得到主要物质为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的洗脱液S4，所述流动相选用逐渐增加极性的梯度洗脱剂； (5)反相C18柱色谱分离：采用反相C18制备柱对获得的洗脱液S4进行梯度洗脱，洗脱时在210nm处先后出现两个强吸收峰，分别收集两个强吸收峰对应的洗脱液S5和洗脱液S6，将洗脱液S5和洗脱液S6分别减压浓缩干燥后得到α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇。 2.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述萃取液为二氯甲烷或三氯甲烷。 3.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，所述液-液萃取法具体包括如下步骤：将深褐色浸膏S1加入混合萃取溶剂中，超声至浸膏全部溶解后，进行液-液萃取分离，分别收集上层液相和下层液相；然后采用混合萃取溶剂对上层液相和下层液相分别萃取多次，合并所有下层液相的提取液，得到含西柏烷类化合物的提取液S2。 4.如权利要求3所述的分离纯化方法，其特征在于，所述混合萃取溶剂为正己烷、甲醇和水的混合溶剂，所述正己烷、甲醇和水的体积比为100∶(50-90)∶(10-50)。 5.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中，所述正相硅胶柱色谱分离具体包括如下步骤：采用正相硅胶柱，选用正己烷和乙酸乙酯作为梯度洗脱剂，对获得的提取液S2进行梯度洗脱，收集体积比为60∶40-40∶60的洗脱流出液，减压浓缩得到主要物质为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的洗脱液S3。 6.如权利要求6所述的分离纯化方法，其特征在于，所述正相硅胶柱色谱分离中，对获得的提取液S2进行梯度洗脱，收集体积比为(45-50)∶(50-55)的洗脱流出液。 7.如权利要求7所述的分离纯化方法，其特征在于，所述正相硅胶柱色谱分离中，收集体积比为50∶50的洗脱流出液。 8.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(4)中，所述正相氰基柱色谱分离具体包括如下步骤：采用正相氰基制备柱，选用正己烷和乙酸乙酯的混合体系作为梯度洗脱剂，对获得的洗脱液S3进行梯度洗脱，收集体积比为85∶15-65∶35的洗脱流出液，减压浓缩得到主要物质为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1， 3-二醇的洗脱液S4。 9.如权利要求9所述的分离纯化方法，其特征在于，所述正相氰基柱色谱分离中，对获得的洗脱液S3进行梯度洗脱，收集体积比为(80-75)∶(20-25)的洗脱流出液。 10.如权利要求10所述的分离纯化方法，其特征在于，所述正相氰基柱色谱分离中，收集体积比为75∶25的洗脱流出液。 11.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(5)中，所述反相C18柱色谱分离具体包括如下步骤：使用C18制备柱，选用甲醇和水的混合体系作为梯度洗脱剂，对获得的洗脱液S4进行梯度洗脱；同时采用紫外检测器监测流出液在210nm处的吸光度，并记录紫外吸收梯度洗脱曲线；体积比为90∶10-95∶5的甲醇和水洗脱剂洗脱时在210nm处先后出现两个强吸收峰，分别收集两个吸收峰对应的洗脱液S5和洗脱液S6，将洗脱液S5和洗脱液S6分别减压浓缩干燥后得到α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇。 12.如权利要求10所述的分离纯化方法，其特征在于，所述反相C18柱色谱分离中，采用体积比为95∶5的甲醇和水洗脱剂洗脱时，分别收集210nm处先后出现的两个强吸收峰对应的洗脱液S5和洗脱液S6。 13.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)和(4)中，所述减压浓缩的操作条件均为：水浴温度40-50℃，真空度240-300mbar；步骤(5)中，所述减压浓缩的操作条件为：水浴温度40-50℃，真空度60-72mbar。
说明书全文	一种分离纯化烟草中两种致香前体物的方法技术领域 [0001] 本发明属于分离纯化技术领域，涉及烟草中有效成分的分离纯化技术，具体涉及一种从新鲜烟叶中提取、分离和纯化α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的方法。背景技术 [0002] α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇是烟草中重要的致香前体物，主要来源于新鲜烟叶和烟花的表面分泌物，在调制后大部分会发生降解，生成重要的致香成分茄酮及其衍生物，对烟叶的香气风格和品质具有决定性影响，是开展烟叶品质研究的关键化学物质之一。另一方面，α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇具有较强的抗肿瘤活性、抑菌和调节植物生长等生物活性，对于尼古丁上瘾也有一定的抑制作用，因此也日益受到越来越多生物化学家和药物化学家的关注。然而，α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的分离纯化较为困难，涉及浸取、萃取、多步柱色谱分离和重结晶等多种技术的联用，工艺操作复杂，制备成本较高，目前国内外尚没有标准品出售，相关科学研究所用纯品多为国外大型烟草公司赞助，技术专属性强，极大地限制了我国相关研究的发展。因此，开展烟草中α-4，8， 13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的分离研究，制备高纯度标准品，对于提高我国相关科学研究水平具有十分重要的意义。发明内容 [0003] 本发明的目的是提供一种从新鲜烟叶中提取、分离和纯化α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的方法。 [0004] 本发明的两种致香前体物为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇，化学结构式分别如下： [0005] [0006] 本发明的分离纯化烟草中α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的方法，其工艺流程如图1所示，包括以下步骤： [0007] (1)浸取：采用浸洗法萃取新鲜烟叶的表面分泌物，萃取液浓缩至干，得到深褐色浸膏S1。 [0008] 所述萃取液为二氯甲烷或三氯甲烷。 [0009] (2)液-液萃取：采用液-液萃取法得到含西柏烷类化合物的提取液S2。 [0010] 所述液-液萃取法具体包括如下步骤：将深褐色浸膏S1加入混合萃取溶剂中，超声至浸膏全部溶解后，进行液-液萃取分离，分别收集上层液相和下层液相；然后采用混合萃取溶剂对上层液相和下层液相分别萃取多次，合并所有下层液相的提取液，得到含西柏烷类化合物的提取液S2。 [0011] 进一步的，所述混合萃取溶剂为正己烷、甲醇和水的混合溶剂，所述正己烷、甲醇和水的体积比为100∶(50-90)∶(10-50)。 [0012] 更进一步的，所述混合萃取溶剂中甲醇和水的体积比为80∶20，所述甲醇和水的总体积与正己烷的体积相等，即所述正己烷、甲醇和水的体积比为100∶80∶20。 [0013] 所述对上层液相和下层液相分别萃取多次如至少3次。 [0014] (3)正相硅胶柱色谱分离：采用正相硅胶柱对获得的提取液S2进行梯度洗脱，得到主要物质为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的洗脱液S3，所述流动相选用逐渐增加极性的梯度洗脱剂。 [0015] 所述正相硅胶柱色谱分离具体包括如下步骤：采用正相硅胶柱，选用正己烷和乙酸乙酯作为梯度洗脱剂，对获得的提取液S2进行梯度洗脱，收集体积比为60∶40-40∶60的洗脱流出液，减压浓缩得到主要物质为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的洗脱液S3。 [0016] 进一步的，所述正相硅胶柱色谱分离中，对获得的提取液S2进行梯度洗脱，收集体积比为(45-50)∶(50-55)的洗脱流出液。 [0017] 优选的，所述正相硅胶柱色谱分离中，对获得的提取液S2进行梯度洗脱，收集体积比为50∶50的洗脱流出液。 [0018] 所述梯度洗脱剂可采用正己烷和乙酸乙酯的体积比依次为100∶0、75∶25、50∶50、25∶75、0∶100的梯度洗脱剂。 [0019] (4)正相氰基柱色谱分离：采用正相氰基制备柱对获得的洗脱液S3进行梯度洗脱，得到主要物质为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的洗脱液S4，所述流动相选用逐渐增加极性的梯度洗脱剂。 [0020] 所述正相氰基柱色谱分离具体包括如下步骤：采用正相氰基制备柱，选用正己烷和乙酸乙酯的混合体系作为梯度洗脱剂，对获得的洗脱液S3进行梯度洗脱，收集体积比为85∶15-65∶35的洗脱流出液，减压浓缩得到主要物质为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的洗脱液S4。 [0021] 进一步的，所述正相氰基柱色谱分离中，对获得的洗脱液S3进行梯度洗脱，收集体积比为(80-75)∶(20-25)的洗脱流出液。 [0022] 优选的，所述正相氰基柱色谱分离中，对获得的洗脱液S3进行梯度洗脱，收集体积比为75∶25的洗脱流出液。 [0023] 所述正相氰基柱色谱分离中，所述梯度洗脱剂可采用正己烷和乙酸乙酯的体积比依次为90∶10、75∶25、50∶50的洗脱剂。 [0024] (5)反相C18柱色谱分离：采用反相C18制备柱对获得的洗脱液S4进行梯度洗脱，洗脱时在210nm处先后出现两个强吸收峰，分别收集两个强吸收峰对应的洗脱液S5和洗脱液S6，将洗脱液S5和洗脱液S6分别减压浓缩干燥后得到α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇。 [0025] 所述反相C18柱色谱分离具体包括如下步骤：：使用C18制备柱，选用甲醇和水的混合体系作为梯度洗脱剂，对获得的洗脱液S4进行梯度洗脱；同时采用紫外检测器监测流出液在210nm处的吸光度，并记录紫外吸收梯度洗脱曲线；体积比为90∶10-95∶5的甲醇和水洗脱剂洗脱时在210nm处先后出现两个强吸收峰，分别收集两个吸收峰对应的洗脱液S5和洗脱液S6，将洗脱液S5和洗脱液S6分别减压浓缩干燥后得到α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇。 [0026] 优选的，所述反相C18柱色谱分离中，对获得的洗脱液S4进行梯度洗脱，体积比为95∶5的甲醇和水洗脱剂洗脱时，分别收集210nm处先后出现的两个强吸收峰对应的洗脱液S5和洗脱液S6。 [0027] 所述反相C18柱色谱分离中，可采用甲醇和水的体积比依次为75∶25、85∶15、95∶5、100∶0的洗脱剂。 [0028] 步骤(1)中，所述新鲜烟叶选自任何品种的烤烟、香料烟和白肋烟。 [0029] 步骤(1)中，所述浸洗法为浸蘸萃取、浸泡萃取或超声波萃取。 [0030] 步骤(3)、(4)、(5)中的色谱分离可以采用低压、中压或高压制备液相色谱。 [0031] 步骤(3)和(4)中，所述减压浓缩的操作条件为：水浴温度40-50℃，真空度240-300mbar。优选的水浴温度为40℃。 [0032] 步骤(5)中，所述减压浓缩的操作条件为：水浴温度40-50℃，真空度60-72mbar。优选的水浴温度为45℃。 [0033] 步骤(3)、(4)、(5)中涉及的有机溶剂可经回收后循环使用。 [0034] 本发明的突出优点在于：能够有效地对新鲜烟叶表面分泌物中α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇实现完全提取；最终产物α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇纯度均大于99％，可以作为标准品应用于相关科学研究中；整个分离纯化产品回收率高，工艺操作简便，自动化程度高，易实现大批量制备。附图说明 [0035] 图1：新鲜烟叶中制备α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的工艺流程。 [0036] 图2：新鲜烟叶表面分泌物浸膏的气质联用图。 [0037] 图3：α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇纯品的气质联用图。 [0038] 图4：β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇纯品的气质联用图。具体实施方式 [0039] 下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。 [0040] 实施例1 [0041] 分离纯化烟草中α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的方法，其工艺流程如图1所示，包括以下步骤： [0042] (1)浸取：在云南省玉溪市烟叶产地，以K326烤烟烟叶为对象，采集1000片新鲜烟叶。将叶片在10L二氯甲烷中连续浸蘸3次，每次2s，浸洗后溶液用装有无水硫酸钠的滤纸过滤。滤液在40℃下减压(10-13kPa)浓缩至干，得到深褐色浸膏约80g。经GC/MS检测，得到如图2所示的新鲜烟叶表面分泌物浸膏的色谱图，从图中可知，目标物α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的总含量为67.6％。 [0043] (2)液-液萃取：称取20g烟叶表面分泌物浸膏置于250ml三角瓶中，加入50ml甲醇-水(80∶20)混合溶液和50ml正己烷，加盖超声20min。样品充分溶解后，将溶液转移至250ml分液漏斗中，剧烈振荡2-3min，使两相分离，分别收集下层水相和上层有机相。将甲醇-水相和正己烷相分别用同体积正己烷和甲醇-水(80∶20)混合溶液反复萃取3次，合并所有甲醇-水相提取液用滤纸过滤，得到滤液约300ml。经GC/MS检测，甲醇/水提取液中，目标物α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的总含量为73.5％。 [0044] (3)正相硅胶柱色谱分离：使用硅胶柱(粒径40-60μm，规格35.0×500mm)，选用正己烷/乙酸乙酯混合体系作为洗脱剂，以逐渐增加极性的体积比顺序(100∶0，75∶25，50∶50，25∶75，0∶100)对步骤(2)得到的提取液进行梯度洗脱，收集体积比50∶50的流出液，在40℃减压条件下，用旋转蒸发仪(240mbar)浓缩至200ml左右。经GC/MS检测，甲醇/水萃取液在经过硅胶硅色谱分离后，目标物α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的总含量为83.65％。 [0045] (4)正相氰基柱色谱分离：使用Ultimate XB-CN制备柱(粒径5μm，规格21.2×250mm)，选用正己烷/乙酸乙酯混合体系作为洗脱剂，以逐渐增加极性的体积比顺序(90∶10，75∶25，50∶50)对步骤(3)得到的样品进行梯度洗脱，收集体积比75∶25的流出液，在40℃减压条件下，用旋转蒸发仪(真空度240mbar)浓缩至200ml左右。经GC/MS检测，经过氰基柱色谱分离后，目标物α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的总含量为95.41％。 [0046] (5)反相C18柱色谱分离：使用Ultimate XB-C18制备柱(粒径5μm，规格21.2×250mm)，选用甲醇/水混合体系作为洗脱剂，以体积比(75∶25，85∶15，95∶5， 100∶0)的顺序对步骤(4)得到的样品进行梯度洗脱，紫外检测器监测流出液在210nm处的吸光度，记录紫外吸收梯度洗脱曲线。体积比95∶5洗脱时在210nm处先后出现两个强吸收峰，分别收集两个峰对应的流出液，在40℃减压条件下，用旋转蒸发仪(真空度 72mbar)浓缩至干，分别得到2.3g α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和760mg β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的纯品。经GC/MS检测，得到如图3所示的α-4，8，13-西柏三烯-1， 3-二醇纯品的气/质联用图和如图4所示的β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇纯品的气/质联用图，从图中可知，经过C18柱色谱分离后，所得目标物α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的含量分别为99.54％和99.21％；α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇相对于烟叶表面分泌物浸膏的回收率分别为11.5％和3.8％。 [0047] GC/MS检测条件：GC条件：色谱柱：DB-5MS石英毛细管柱；进样口温度：250℃；载气：He，1.0mL/min；分流比：10∶1；进样量：1.0μL。程度升温：120℃保持5min，以20℃/min升温到210℃，再以0.5℃/min升温到220℃，然后以10℃/min升温到280℃，保持30min。MS条件：传输线温度280℃；四级杆温度150℃；EI离子源温度230℃；电离能量 70eV；质量数范围30-800amu。 [0048] 实施例2 [0049] 分离纯化烟草中α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的方法，其工艺流程如图1所示，包括以下步骤： [0050] (1)浸取：在云南省玉溪市烟叶产地，以K326烤烟烟叶为对象，采集1000片新鲜烟叶。将叶片在10L三氯甲烷中连续浸蘸3次，每次2s，浸洗后溶液用装有无水硫酸钠的滤纸过滤。滤液在40℃下减压(10-13kPa)浓缩至干，得到深褐色浸膏约80g。经GC/MS检测，目标物α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的总含量为67.6％。 [0051] (2)液-液萃取：称取20g烟叶表面分泌物浸膏置于250ml三角瓶中，加入50ml甲醇-水(50∶50)混合溶液和50ml正己烷，加盖超声20min。样品充分溶解后，将溶液转移至250ml分液漏斗中，剧烈振荡2-3min，使两相分离，分别收集下层水相和上层有机相。将甲醇-水相和正己烷相分别用同体积正己烷和甲醇-水(50∶50)混合溶液反复萃取3次，合并所有甲醇-水相提取液用滤纸过滤，得到滤液约300ml。经GC/MS检测，甲醇/水提取液中，目标物α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的总含量为73.5％。(3)正相硅胶柱色谱分离：使用硅胶柱(粒径40-60μm，规格35.0×500mm)，选用正己烷/乙酸乙酯混合体系作为洗脱剂，以逐渐增加极性的体积比顺序(100∶0，75∶25， 45∶55，25∶75，0∶100)对步骤(2)得到的提取液进行梯度洗脱，收集体积比45∶55的流出液，在40℃减压条件下，用旋转蒸发仪(240mbar)浓缩至200ml左右。经GC/MS检测，甲醇/水萃取液在经过硅胶硅色谱分离后，目标物α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的总含量为83.65％。 [0052] (4)正相氰基柱色谱分离：使用Ultimate XB-CN制备柱(粒径5μm，规格21.2×250mm)，选用正己烷/乙酸乙酯混合体系作为洗脱剂，以逐渐增加极性的体积比顺序(90∶10，80∶20，50∶50)对步骤(3)得到的样品进行梯度洗脱，收集体积比80∶20的流出液，在40℃减压条件下，用旋转蒸发仪(真空度240mbar)浓缩至200ml左右。经GC/MS检测，经过氰基柱色谱分离后，目标物α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的总含量为95.41％。 [0053] (5)反相C18柱色谱分离：使用Ultimate XB-C18制备柱(粒径5μm，规格21.2×250mm)，选用甲醇/水混合体系作为洗脱剂，以体积比(75∶25，85∶15，95∶10， 100∶0)的顺序对步骤(4)得到的样品进行梯度洗脱，紫外检测器监测流出液在210nm处的吸光度，记录紫外吸收梯度洗脱曲线。体积比95∶10洗脱时在210nm处先后出现两个强吸收峰，分别收集两个峰对应的流出液，在40℃减压条件下，用旋转蒸发仪(真空度72mbar)浓缩至干，分别得到2.2g α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和700mg β-4，8， 13-西柏三烯-1，3-二醇的纯品。经GC/MS检测，经过C18柱色谱分离后，所得目标物α-4， 8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的含量分别为99.50％和 99.20％；α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇相对于烟叶表面分泌物浸膏的回收率分别为11.0％和3.5％。 [0054] GC/MS检测条件：GC条件：色谱柱：DB-5MS石英毛细管柱；进样口温度：250℃；载气：He，1.0mL/min；分流比：10∶1；进样量：1.0μL。程度升温：120℃保持5min，以20℃/min升温到210℃，再以0.5℃/min升温到220℃，然后以10℃/min升温到280℃，保持30min。MS条件：传输线温度280℃；四级杆温度150℃；EI离子源温度230℃；电离能量 70eV；质量数范围30-800amu。 [0055] 实施例3 [0056] 除了步骤(2)中，混合萃取溶剂中正己烷、甲醇和水的体积比为100∶90∶10，步骤(3)和步骤(4)中旋转蒸发仪的真空度为300mbar以及步骤(5)中旋转蒸发仪的真空度为60mbar以外，其他步骤与实施例1相同，所得的α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇分别为2.1g和680mg，纯度均大于99％；α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇相对于烟叶表面分泌物浸膏的回收率分别为10.5％和3.4％。

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