技术领域
[0001] 本
发明涉及一种在减肥中确定受试者体型的方法，该方法通过检测受试者中饮食响应相关SNP位点等位基因型和锻炼响应相关SNP位点的等位基因型的表型，确定受试者体型。
背景技术
[0002] 美国麦肯
锡公司的调查报告数字表明，全球超重(含肥胖)人群达21亿，占全球人口1/3，称中国已成为“肥胖事业”的重要贡献
力量，与此同时，青少年肥胖的趋势也越发明显。
[0003] 肥胖是败坏健康的万恶之源。世界卫生组织(WHO)认为，肥胖已然是“流行病”，且与多种非传染
疾病有关，包括II型糖尿病、癌症及心脏病。每年与超重相关的死亡人数超过280万。而伴随其发生的，是个人、家庭、社会共同承担的沉重的经济负担。
[0004] 随着中国的超重和肥胖人群日益增多，不仅直接经济负担增加，肥胖带来的间接经济成本更是急剧上升。张永建指出，肥胖早已经成为不折不扣的经济问题。在全球范围内，从成因上看，肥胖最初是和富裕正相关的，但逐渐向相对贫困地区扩散。后来，相对富裕地区不富裕人群，成为肥胖的主力军。
[0005] 数据显示，在中国BMI大于28以上的肥胖人群现已突破1亿人口，肥胖率已突破10％，并且城市成年人体重超重者已经突破40％，我国肥胖患者的增
加速度已经超过部分发达国家。中国目前已成为世界第二大肥胖国，肥胖人数仅次于美国。而肥胖正是大健康的重要敌人，肥胖问题已不仅仅是健康问题，已经成为重大的社会问题。
[0006] 因此，需要一种个性化减肥方案以改善没有考虑到遗传信息的类似的方案所得到的减肥和体重保持结果的方法。需要一种将主体代谢基因型与响应饮食和/或锻炼相联系的方法。但由于个性化的基因检测中，通常需要检测的核酸类型较多，会造成检测成本大幅度上升，且减肥方案制定中影响因素较多，
数据处理时间较长等缺点。因此，实际应用中亟待一种简便快捷但又相对准确的个性化减肥方案。本发明解决了该问题，即
申请人通过实验数据发现某些具体的饮食响应相关SNP位点等位基因型和锻炼响应相关SNP位点的等位基因型的表型可以将受试者人群划分为五种，根据体型特点制定减肥方案同样取得较好的效果。
发明内容
[0007] 一方面，本发明提供了一种确定受试者体型的方法，其中，该方法包括从受试者获得的样本中提取核酸，并检测所述核酸中的饮食响应相关SNP位点等位基因型和锻炼响应相关SNP位点的等位基因型，通过饮食或锻炼相关表SNP位点的等位基因型的表型，确定受试者的体型，并根据所述体型的特点，制定减肥计划以及饮食和锻炼指导。
[0008] 其中，上述确定受试者体型的方法还包括如下步骤：检测所述核酸中的肥胖易感性相关SNP位点、肥胖测量相关SNP位点，综合每个SNP位点基因型对应的相对肥胖增加累积
风险之乘积、肥胖测量相关SNP位点对应的体重增值之和。
[0009] 在本发明的一个
实施例中，所述样本包括体液样本、组织样本，优选地包括唾液、
血液样本。
[0010] 在本发明的一个实施例中，所述饮食响应相关SNP位点包括rs662799和rs1801282。
[0011] 在本发明的一个实施例中，所述饮食响应相关SNP位点还包括rs5082。
[0012] 在本发明的一个实施例中，所述锻炼响应相关SNP位点包括rs4994、rs1800588中的至少一种。
[0013] 在本发明的一个实施例中，所述锻炼响应相关SNP位点还包括rs9939609、rs1801282中的至少一种。
[0014] 在本发明的一个实施例中，所述肥胖易感性相关SNP位点包括rs3751812、rs10871777、rs6548238、rs13130484、rs7647305、rs925946、rs4788102、rs6232、rs7566605、rs574367、rs6545814、rs10938397、rs261967、rs4715210、rs9356744、rs6265、rs652722、rs4776970、rs17817449、rs12597579、rs6567160和rs11671664中的至少一种。
[0015] 在本发明的一个实施例中，所述肥胖测量相关SNP位点包括rs6548238、rs925946、rs7138803、rs9939609、rs13130484、rs4788102、rs10838738、rs10871777、rs12970134中的至少一种。
[0016] 在本发明的一个具体实施例中，所述饮食响应相关SNP位点的等位基因型可以是以rs662799方式存在的等位基因AA、AG、GG中的一种；以rs1801282方式存在的等位基因GG、CG、CC中的一种。
[0017] 在本发明的一个具体实施例中，所述饮食响应相关SNP位点的等位基因型可以是以rs5082方式存在的等位基因GG、AG、AA中的一种。
[0018] 在本发明的一个具体实施例中，所述饮食响应相关SNP位点的等位基因型具有如下表型：
[0019] 1)在rs662799方式存在的等位基因AA、AG、GG中，AA表明高脂肪饮食相关较高BMI，AG或GG表明食物脂肪消费不相关BMI变化。
[0020] 2)在rs1801282方式存在的等位基因GG、CG、CC中，GG或CG表明低脂肪的饮食可能导致
腰围增加，饮食中的不饱和脂肪可以防止腰围增加并可能导致减少体重，CC表明饮食中高不饱和脂肪似乎不对BMI降低有好处或防止腰围增加；
[0021] 在本发明的一个具体实施例中，所述饮食响应相关SNP位点的等位基因型具有如下表型：
[0022] 1)在rs5082方式存在的等位基因GG、AG、AA中，其中GG表明高饱和脂肪饮食会增加肥胖可能性，低饱和脂肪饮食不会增加肥胖可能性，AG或AA表明典型肥胖可能性相关高饱和及低饱和脂肪饮食；
[0023] 在本发明的一个具体实施例中，所述锻炼响应相关SNP位点的等位基因型可以是以rs4994方式存在的等位基因AA、AG、GG中的一种；以rs1800588方式存在的等位基因CC、CT、TT中的一种。
[0024] 在本发明的一个具体实施例中，所述锻炼响应相关SNP位点的等位基因型可以是以rs9939609方式存在的等位基因AA、AT、TT中的一种；以rs1801282方式存在的等位基因GG、CG、CC中的一种。
[0025] 在本发明的一个具体实施例中，所述锻炼响应相关SNP位点的等位基因型具有如下表型：
[0026] 1)在rs4994方式存在的等位基因AA、AG、GG中，AA表明通过走路，降低
能量吸收和增加体力活动，相关降低体重，AG或GG表明通过走路，降低能量吸收和增加体力活动，不相关降低体重。
[0027] 2)在rs1800588方式存在的等位基因CC、CT、TT中，CC或CT表明锻炼相关5％改善胰岛素敏感性，TT表明锻炼不相关改善胰岛素敏感性；
[0028] 在本发明的一个具体实施例中，所述锻炼响应相关SNP位点的等位基因型具有如下表型：
[0029] 1)在rs9939609方式存在的等位基因AA、AT、TT中，AA表明趋向高BMI的人，锻炼相关大幅降低BMI，AT表明趋向典型BMI的人，锻炼相关典型降低BMI，TT表明趋向较低BMI的人，锻炼稍降低BMI；
[0030] 2)在rs1801282方式存在的等位基因GG、CG、CC中，GG或CG表明坚持锻炼改善
葡萄糖耐受，CC表明坚持锻炼几乎不会改变葡萄糖耐受。
[0031] 在本发明的一个实施例中，所述的肥胖易感性相关SNP位点的等位基因型可以是以rs3751812方式存在的等位基因GG、GT、TT中的一种；以rs10871777方式存在的等位基因GG、AG、AA中的一种；以rs6548238方式存在的等位基因CC、CT、TT中的一种；以rs13130484方式存在的等位基因TT、CT、CC中的一种；以rs7647305方式存在的等位基因CC、CT、TT中的一种；以rs925946方式存在的等位基因TT、GT、GG中的一种；以rs4788102方式存在的等位基因AA、AG、GG中的一种；以rs6232方式存在的等位基因CC、CT、TT中的一种；以rs7566605方式存在的等位基因CC、CG、GG中的一种；以rs574367方式存在的等位基因TT、GT、GG中的一种；以rs6545814方式存在的等位基因GG、AG、AA中的一种；以rs10938397方式存在的等位基因GG、AG、AA中的一种；以rs261967方式存在的等位基因CC、AC、AA中的一种；以rs4715210方式存在的等位基因TT、CT、CC中的一种；以rs9356744方式存在的等位基因TT、CT、CC中的一种；以rs6265方式存在的等位基因中CC、CT、TT的一种；以rs652722方式存在的等位基因CC、CT、TT中的一种；以rs4776970方式存在的等位基因AA、AT、TT中的一种；以rs17817449方式存在的等位基因GG、GT、TT中的一种；以rs12597579方式存在的等位基因CC、CT、TT中的一种；以rs6567160方式存在的等位基因CC、CT、TT中的一种、以rs11671664方式存在的等位基因GG、AG、AA中的一种。
[0032] 在本发明的一个实施例中，所述的肥胖测量相关SNP位点的等位基因型可以是以rs6548238方式存在的等位基因CC、CT、TT中的一种；以rs925946方式存在的等位基因TT、GT、GG中的一种；以rs7138803方式存在的等位基因AA、AG、GG中的一种；以rs9939609方式存在的等位基因AA、AT、TT中的一种；以rs13130484方式存在的等位基因TT、CT、CC中的一种；以rs4788102方式存在的等位基因AA、AG、GG中的一种；以rs10838738方式存在的等位基因GG、AG、AA中的一种；以rs10871777方式存在的等位基因GG、AG、AA中的一种；以rs12970134方式存在的等位基因AA、AG、GG中的一种。
[0033] 在本发明中，所述体型包括体型A(“狼”型)、体型B(“猴”型)、体型C(“猫”型)、体型D(“熊猫”型)和体型E(“考拉”型)。
[0034] 在本发明的一个实施例中，当所述核酸中的rs662799等位基因型为AG或GG、rs1801282等位基因型为CG或GG，则受试者的体型为体型A(“狼”型)。
[0035] 在本发明的一个实施例中，当所述核酸中的rs662799等位基因型为AG或GG、rs1801282等位基因型为CC，则受试者的体型为体型B(“猴”型)。
[0036] 在本发明的一个实施例中，当所述核酸中的rs662799等位基因型为AA、rs1801282等位基因型为CC、rs4994等位基因型为AA，则受试者的体型为体型C(“猫”型)。
[0037] 在本发明的一个实施例中，当所述核酸中的rs662799等位基因型为AA、rs1801282等位基因型为CC、rs4994等位基因型为AG或GG、rs1800588等位基因型为CT或CC，则受试者的体型为体型D(“熊猫”型)。
[0038] 在本发明的一个实施例中，当所述核酸中的rs662799等位基因型为AA、rs1801282等位基因型为CC、rs4994等位基因型为AG或GG、rs1800588等位基因型为TT，则受试者的体型为体型E(“考拉”型)。
[0039] 其中，当受试者的体型为体型A(“狼”型)时，饮食指导为：
[0040] 主食：适宜食用
大麦、泰国香米、燕麦(煮熟)，不宜食用荞麦、小米、糙米、玉米、燕麦(干)、黑麦；
[0041] 豆类：适宜食用除豌豆、荷兰豆之外的豆类，不宜食用豌豆、荷兰豆；
[0042] 蔬菜类：适宜食用甜味的和苦味的蔬菜、西兰花、包菜、花菜、豆
角、生菜、秋葵、西芹、西葫芦、芦笋、抱子甘蓝、黄瓜、芹菜、绿叶蔬菜、菌类、青椒、绿色的豆类、豆芽，不宜食用红辣椒、菠菜、茄子、番茄；
[0043] 薯类/根茎类：适宜食用土豆，不宜食用胡萝卜、大蒜、红萝卜、洋葱(生)；
[0044] 油类：适宜食用
葵花籽油、
橄榄油、豆油，不宜食用玉米油、芝麻油；
[0045] 调味料：适宜食用丁香、孜然，不宜食用香料和辣味；
[0046]
水果：适宜食用葡萄干、甜味的水果、
牛油果、无花果、芒果、桔子(甜)、菠萝(甜)、石榴、苹果、葡萄(深色)、甜瓜、梨、李(甜)、西梅；不宜食用酸味的水果、莓类、樱桃、葡萄柚、柠檬、西梅(酸)、桃子、柿子、杏、香蕉、蔓延莓、桔子(酸)、木瓜、菠萝(酸)；
[0047] 坚果：不适宜食用坚果；
[0048] 牛奶和奶制品：适宜食用黄油(无盐)、酥油、农家鲜干酪、、牛奶，不适宜食用酸奶油、奶酪、酸奶；
[0049] 饮料和酒：适宜食用甜味的饮料、果汁、菊花茶、柠檬草茶、丁香、玫瑰花茶等花草茶，不适宜食用酸味的饮料、
酒精饮料；
[0050] 糖类：适宜食用除糖浆、蜂蜜之外的糖类，不适宜食用糖浆、蜂蜜；
[0051] 肉：适宜食用禽类、兔肉、蛋白、鹿肉、虾(少量)、
淡水鱼；不适宜食用牛肉、羊肉、海鲜、蛋黄、猪肉；
[0052] 饮水：适宜食用冷水、
冰水，不适宜食用热水、咖啡、乌龙茶、红茶、普洱茶、姜茶。
[0053] 其中，当受试者的体型为体型B(“猴”型)时，饮食指导为：
[0054] 主食：适宜食用大麦、大米，泰国香米、燕麦(煮熟)、黑米、藜麦、小麦，不宜食用面包、荞麦、小米、糙米、玉米、燕麦(干)、黑麦；
[0055] 豆类：适宜食用
豆腐、红扁豆，不宜食用除豆腐、红扁豆之外的其他豆类；
[0056] 蔬菜类：适宜食用熟蔬菜黄瓜、西葫芦、绿叶蔬菜、豆类、芦笋、小茴香、秋葵(熟)、红薯、大蒜、南瓜，不宜食用生蔬菜，花菜、番茄，豆芽，芹菜、茄子、苦瓜、西兰花、抱子甘蓝、菠菜、胡椒、大头菜、蘑菇、西芹、包菜(生)；
[0057] 薯类/根茎类：适宜食用甜菜根、洋葱(熟)、红萝卜、胡萝卜、大蒜、红薯，不宜食用土豆、洋葱(生)；
[0058] 油类：适宜食用芝麻油、橄榄油，无不宜食用油类；
[0059] 调味料：适宜食用姜(新鲜)、小茴香、肉桂、柠檬草，不宜食用辣椒、干姜、辣根；
[0060] 水果：适宜食用甜水果、牛油果、各种莓类、柑橘类、西梅、梅子、甜瓜、哈密瓜、枣(新鲜)、木瓜、杏、香蕉(熟)、樱桃、无花果(新鲜)、葡萄、芒果、菠萝、桃子、西梅脯，不宜食用干果、果脯、柿子、西瓜、未成熟水果、苹果(生)、梨、石榴、蔓越莓。
[0061] 坚果：适宜食用当季的坚果，但不要过量；
[0062] 牛奶和奶制品：适宜食用除奶酪之外的其他奶制品，优选酥油，不宜食用奶酪；
[0063] 饮料和酒：适宜食用新鲜果汁、薄荷茶、姜茶，不宜食用
碳酸饮料；
[0064] 糖类：适宜食用除绵白糖、砂糖等精制的糖之外的糖类，不适宜食用绵白糖、砂糖等精制的糖；
[0065] 肉：适宜食用牛肉、鸡蛋、三文鱼、禽类、海鲜、金枪鱼等深海鱼、淡水鱼，不宜食用羊肉、兔肉、猪肉、鹿肉；
[0066] 饮水：适宜食用热水、薄荷茶、姜茶，无不适宜食用的饮水。
[0067] 其中，当受试者的体型为体型C(“猫”型)时，饮食指导为：
[0068] 主食：适宜食用红米、小麦、
高粱，不宜食用玉米、大麦；
[0069] 豆类：适宜食用绿豆、小黄豆、蚕豆、黄豆、黑绿豆，不宜食用鹰嘴豆(鸡心豆)、腰豆、花生；
[0070] 蔬菜类：适宜食用冬瓜、黄瓜、丝瓜、南瓜、苦瓜、茭白、金针菇、莲藕、芹菜、秋葵、紫甘蓝及所有绿叶蔬菜，不适宜食用包心菜、花菜、土豆、西红柿、茄子、胡椒、辣椒；
[0071] 薯类/根茎类：适宜食用胡萝卜、甜菜根、红薯、洋葱、萝卜，不适宜食用山药、土豆、大蒜；
[0072] 油类：适宜食用
椰子油、橄榄油、芝麻油、葵花籽油，不适宜食用
花生油、
动物油、
亚麻籽油；
[0073] 调味料：适宜食用香菜、干生姜、长椒、姜黄，不适宜食用黑椒、丁香；
[0074] 水果：适宜食用枣子、成熟芒果、西瓜、柠檬、山竹、牛油果、杏仁、无花果、腰果、橘子、苹果、人参果、山楂、红毛丹、梨、火龙果、荔枝、李子，不适宜食用榴莲、未成熟芒果、番石榴、石榴、木瓜、草莓、桃子、猕猴桃、槟榔、枇杷、杨桃、青柠檬、杨梅、
蓝莓；
[0075] 坚果：适宜食用当季的坚果，但一定要控制摄入量，少量；
[0076] 牛奶和奶制品：适宜食用普通酥油、牛奶、山羊奶、奶酪，不宜食用酸奶；
[0077] 饮料和酒：适宜食用玫瑰花茶、花茶、水果茶、绿茶，不适宜食用咖啡、红茶、普洱、乌龙茶、
铁观音、酒精饮料、
碳酸饮料(汽水)；
[0078] 糖类：适宜食用白糖，不适宜食用过多蜂蜜，蜂蜜与热的食物混合；
[0079] 肉：适宜食用羊肉、羊骨汤、牛肉、猪肉，不宜食用海鱼、鸡肉、火鸡；
[0080] 饮水：适宜食用冷水、热水(在不被烫伤的情况下越热越好)，不适宜食用盐水。
[0081] 其中，当受试者的体型为体型D(“熊猫”型)时，饮食指导为：
[0082] 主食：适宜食用红米、米饭、玉米、高粱，不宜食用小麦；
[0083] 豆类：适宜食用绿豆、去皮小黄豆，不宜食用蚕豆、黑豆、豇豆、豌豆、花生；
[0084] 蔬菜类：适宜食用苦瓜、冬瓜、荷兰豆角、胡萝卜、黄瓜、丝瓜、南瓜、芦笋、茼蒿、茭白、莲藕、芹菜以及所有绿叶蔬菜，不宜食用茄子、包心菜、香菇、莴笋叶；
[0085] 薯类/根茎类：适宜食用胡萝卜、白萝卜、甜菜根、山药，不宜食用土豆、洋葱、大蒜；
[0086] 油类：适宜食用橄榄油、葵花籽油，不宜食用芥末油、芝麻油、亚麻籽油、花生油；
[0087] 调味料：适宜食用姜黄、香菜、小茴香籽、鲜姜，不宜食用黑胡椒；
[0088] 水果：适宜食用葡萄、香蕉、熟芒果、西瓜、甜瓜、牛油果、石榴、苹果、菠萝、柠檬、莲雾、山竹、杏仁、橄榄、人参果、山楂、哈密瓜、红毛丹、梨、火龙果、李子、荔枝、核桃、可少量食用干果，不宜食用不成熟的芒果、番石榴、木瓜(不成熟)、腰果、猕猴桃；
[0089] 坚果：适宜食用葵花子、南瓜子、西瓜子、山核桃，其他都不宜；
[0090] 牛奶和奶制品：适宜食用牛奶、羊奶、黄油，不宜食用原味酸奶、奶酪；
[0091] 饮料和酒：适宜食用绿茶，不宜食用咖啡、酒精饮料；
[0092] 糖类：适宜食用粗糖、不宜食用蜂蜜、白糖；
[0093] 肉：适宜食用羊肉、羊骨汤、牛肉、猪肉，不宜食用海鱼、鸡肉、火鸡、禽类的红肉(翅膀和腿)；
[0094] 饮水：适宜食用温水、柠檬水、蜂蜜水，不宜食用热水、冰水、盐水。
[0095] 其中，当受试者的体型为体型E(“考拉”型)时，饮食指导为
[0096] 主食：适宜食用大麦、泰国香米、燕麦(煮熟)，不宜食用荞麦、小米、糙米、玉米、燕麦(干)、黑麦；
[0097] 豆类：适宜食用除蚕豆、黄豆、黑豆、绿豆之外的豆类，不宜食用蚕豆、黄豆、黑豆、绿豆；
[0098] 蔬菜类：适宜食用苦味蔬菜、甜菜、抱子甘蓝、芹菜、大蒜、生菜、秋葵、西芹、胡椒、红萝卜、豆芽、西兰花、包菜、花菜、茄子、绿叶蔬菜、菌类、洋葱、豆角、菠菜，不宜食用甜味多汁的蔬菜、番茄，黄瓜，西葫芦；
[0099] 薯类/根茎类：适宜食用红萝卜、土豆，不宜食用红薯；
[0100] 油类：适宜食用少量玉米油、葵花籽油，其他都不适合；
[0101] 调味料：适宜食用除盐之外的调味料，不宜食用盐；
[0102] 水果：适宜食用苹果、莓类、蔓越莓、芒果、梨、石榴、葡萄干、杏、樱桃、无花果(干)、桃子、柿子、西梅，不宜食用甜味和酸味的水果、香蕉、无花果(新鲜)、葡萄、甜瓜、哈密瓜、菠萝、牛油果、葡萄柚、柠檬、桔子、木瓜、李子；
[0103] 坚果：适宜食用葵花籽、南瓜子，其他都不适合；
[0104] 牛奶和奶制品：适宜食用酥油、羊奶，其他基本不适合；
[0105] 饮料和酒：适宜食用绿茶，柚子茶、黑咖啡，不适宜酒
精度高的酒，甜味的饮料、果汁；
[0106] 糖类：适宜食用蜂蜜，其他都不适合；
[0107] 肉：适宜食用禽类(红肉，即翅膀和腿)、兔肉、鹿肉、虾，不宜食用牛肉、猪肉、羊肉、海鲜；
[0108] 饮水：适宜食用温水，不宜食用热水、冷水、冰水。
[0109] 本发明的另一方面提供了一种在减肥过程中确定体型的
基因芯片，其中，所述基因芯片包括固相载体和固定于该固相载体上用于SNP位点检测的特异性寡核苷酸探针，所述SNP位点为饮食响应相关SNP位点和锻炼响应相关SNP位点的等位基因型。
[0110] 其中，所述基因芯片还包括肥胖易感性相关SNP位点和/或肥胖测量相关SNP位点。
[0111] 在本发明的一个实施例中，所述饮食响应相关SNP位点包括rs662799和rs1801282。
[0112] 在本发明的一个实施例中，所述饮食响应相关SNP位点还包括rs5082。
[0113] 在本发明的一个实施例中，所述锻炼响应相关SNP位点包括rs4994、rs1800588中的至少一种。
[0114] 在本发明的一个实施例中，所述锻炼响应相关SNP位点还包括rs9939609、rs1801282中的至少一种。
[0115] 在本发明的一个实施例中，所述的肥胖易感性相关SNP位点包括rs3751812、rs10871777、rs6548238、rs13130484、rs7647305、rs925946、rs4788102、rs6232、rs7566605、rs574367、rs6545814、rs10938397、rs261967、rs4715210、rs9356744、rs6265、rs652722、rs4776970、rs17817449、rs12597579、rs6567160、rs11671664中的至少一种。
[0116] 在本发明的一个实施例中，所述肥胖测量相关SNP位点包括rs6548238、rs925946、rs7138803、rs9939609、rs13130484、rs4788102、rs10838738、rs10871777、rs12970134中的至少一种。
[0117] 本发明还提供了一种在本发明中所述的用于指导减肥健身的基因芯片的制备方法，其中，具体步骤包括：
[0118] (1)将固相载体预处理，将
载玻片用铬
酸洗液洗涤，浸泡过夜，水洗，20％-25％
氨水浸泡中过夜，水洗，然后浸入氨丙基三甲
氧基
硅烷的
乙醇溶液中，用冰
醋酸调节pH值至4.0-6.0，乙醇超声清洗，烘干4-5小时，戊二
醛醛基化处理，待用；
[0119] (2)人工合成寡核苷酸芯片探针，其中每条寡核苷酸芯片探针在合成时5’端经氨基基团修饰；
[0120] (3)将上述各寡核苷酸芯片探针溶解在点样液中，点样时每点点样体积约为0.4-0.6mL，点样间距为500-600μm，点样直径为200-300μm，每条探针重复点样2-3次；室温放置
24-26小时
固化处理即得。
[0121] 本发明还提供了一种试剂盒，其中，所述试剂盒包含如本发明中所述的基因芯片，所述的试剂盒还包括PCR扩增所用的PCR缓冲液、MgC12、dNTPmix和Taq酶，所述试剂盒用于确定受试者体型。
[0122] 本发明还公开了使用本发明所述的方法的应用程序的
硬件设备，其中所述应用程序安装在所述硬件设备中。
[0123] 其中，所述硬件设备包括手机、电脑、可穿戴移动设备、可植入设备中的至少一种或其组合。
[0124] 上述硬件设备进行健康管理的方法，其中，包括步骤：在所述硬件设备中录入或接收如本发明所述的方法中SNP对应的数据；所述应用程序基于录入和接收的数据判断受试者的体型类型，根据体型特点为用户设定饮食、运动计划；进一步在所述硬件设备中录入或接收用户实时运动状况、体重、饮食等数据；所述应用程序给予分析并反馈
健康状态。
[0125] 发明的有益效果：
[0126] 由于个性化的基因检测中，通常需要检测的核酸类型较多，会造成检测成本大幅度上升，且减肥方案制定中影响因素较多，数据处理时间较长等缺点。因此，实际应用中亟待一种简便快捷但又相对准确的个性化减肥方案。本发明解决了该问题，即申请人通过实验数据发现某些具体的饮食响应相关SNP位点等位基因型和锻炼响应相关SNP位点的等位基因型的表型可以将受试者人群有效划分为五种，根据体型特点制定减肥方案同样取得较好的减肥效果。
[0127] 本试剂盒具有成本低廉、方便快捷的优点。
具体实施方式
[0128] 下面通过具体实施方式及实验数据对本发明作进一步的说明。尽管为了清楚的目的，在下文中使用了专用术语，但这些术语并不意味着定义或限制本发明的范围。
[0129] 如本文中所使用，术语“等位基因”是指位于一对同源
染色体的相同
位置上控制着相对性状的一对基因。它可能出现在染色体某特定座位上的两个或多个基因中的一个。
[0130] 如本文中所使用，术语“BMI”(身体
质量指数)是一种基于身高和体重并适用于男性和女性的人体脂肪的计量。当BMI在18.5-24.9之间时，认为BMI属于“典型”范围。根据这本发明，体重过轻主体的BMI＜18.5；一个超重主体的BMI在25-29.9之间，一个肥胖主体的BMI在30-39.9之间，BMI为40或更大的主体被认为是极端肥胖。
[0131] 如本文中所使用，术语“增加风险”是指在一个携带一种特定的多态性等位基因的主体中发生疾病或情况的较高统计
频率与在不携带这种特定多态性等位基因的一定数量的人群中发生这种疾病或情况的频率比较。
[0132] 本发明所使用的术语“核酸”，是指多聚核苷酸或低聚核苷酸，如脱氧核糖核酸(DNA)，以及，在适当情况下的，核糖核酸(RNA)。这个词也可以理解为包括，作为由核苷酸类似物制得的RNA或DNA的等价物的类似物，以及适用于本发明所述的实施例的单(正义或反义)和双链多聚核苷酸。
[0133] 本发明所使用的术语“SNP”是指单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism)，主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。
多态性指的是一种基因或其
片段多个以一个以上的形式共存(如，等位基因变异)。一个具有至少两种不同形式(如，两种不同的核苷酸序列)的基因的片段，其中至少有两种不同的形式，即两个不同的核苷酸序列，被称为是“一个基因多态性区域”。在一个基因的多态性区域的一个特定的基因序列是一个等位基因。一个多态性区域可以是一个单核苷酸，不同的等位基因差异的特征。一个多态性区域，也可以有几个核苷酸长。
[0134] 本发明所使用的术语“白肉”是指禽类的胸脯肉，术语“红肉”是指禽类的翅膀和腿，其中鸡肉的红肉是指鸡翅膀和鸡腿。
[0135] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0136] 具体实施例：
[0137] 实施例1 SNP的等位基因与其对应表型
[0138] 世界HapMap全基因组相关性分析(GWAS，Genome Wide Association Study)计划的数据几年前还不完整，2014年以后才趋向完整，可以进行性状评估。该分析是通过提取疾病组个体(上千例)和正常组个体(上千例)的基因组DNA，利用基因芯片对每一例做全基因组SNP分析，用统计学的方法找出两组之间有显著不同的SNP位点，从而将疾病的病因
定位于那些SNP位点上，而那些SNP的基因可能是疾病的“易感基因”位点。再选择独立样本进行验证，最好上万样本。最后确定那些SNP相关的基因是疾病的“易感基因。这里
整理获得的SNP位点是至少两个以上独立研究得到重复的位点。
[0139] 根据世界HapNap全基因组相关性研究计划生成的海量公开的人类基因组单核苷酸变异(SNP)数据中进行分析，结合海量公开数据中相关肥胖、不同类型脂肪摄入对肥胖的影响、不同类型运动对降低体重和血糖降低的影响的数据，从功能基因组学连
锁和系统
生物学全局分析计算个体肥胖易感性风险、个体降低体重的潜力、饮食对个体体重的影响以及个体锻炼运动对体重控制效应，即整理获得SNP的等位基因与其对应表型，并将数据分类为肥胖易感性相关SNP位点、肥胖测量相关SNP位点、饮食响应相关SNP位点和锻炼响应相关SNP位点的等位基因型及其对应的表型。其中每一个rs对应的OR值是通过GWAS中的关联检验计算得到的。具体的SNP的等位基因对应表型详见表1至表4。
[0140] 表1肥胖易感性相关SNP位点的等位基因与其对应表型
[0141]
[0142]
[0143] 表2肥胖测量相关SNP位点的等位基因与其对应表型
[0144]
[0145]
[0146] 表3饮食响应相关SNP位点的等位基因与其对应表型
[0147]
[0148]
[0149] 表4锻炼响应相关SNP位点的等位基因型与其对应表型
[0150]
[0151] 同时，本发明中31个SNP列表，包括不同性状分析中交叉出现的SNP。由于考虑到生理学、生物化学，分子生物学和营养学的经典研究结论，根据世界HapMap全基因组相关性研究计划的数据分析结果，少数单个核甘酸变异(SNP)在不同性状中出现重复是合理的和必然的，但是它们在不同性状中的风险因子和功能效应是不同的，甚至可以完全相反。本发明中共用到31个SNPs，其中24个不交叉；其中7个在不同性状中有交叉(如表5所示)，它们在不同性状中的风险因子和功能效应可以不同。
[0152] 表5本发明中31个SNP列表，包括不同性状分析中交叉出现的SNP
[0153]
[0154]
[0155] 实施例2 SNP基因芯片、试剂盒的制备方法以及使用方法
[0156] 应用于健美指导的基因芯片的设计原则为，它包括固相载体和固定于该固相载体上用于与肥胖易感性、个体降低体重在潜力、饮食响应和锻炼响应相关基因单核苷酸多态性位点检测的特异性寡核苷酸探针，相关基因单核苷酸多态性位点为：
[0157] 与饮食响应有关的基因SNPs；
[0158] 与锻炼响应有关的基因SNPs；
[0159] 相关基因单核苷酸多态性位点还可以包括：
[0160] 与肥胖易感性风险相关SNPs；
[0161] 与个体降低体重潜力相关SNPs。
[0162] 相关基因单核苷酸多态性位点，设计了一组寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针的核苷酸序列，具体见表6：
[0163] 表6用于体重控制的基因芯片的寡核苷酸探针序列
[0164]
[0165] 按上述方案，所述固相载体为
硝酸纤维素膜、尼龙膜或载玻片，所述的固相载体经不同的化学修饰使其表面带有可以固定核酸分子的活性基团。本发明的基因芯片所采用的固相载体选自任何可用于制备基因芯片的材料，包括但不限于硝酸
纤维素膜、尼龙膜或载玻片，所述的固相载体经不同的化学修饰，在其表面带有可以固定核酸分子的活性基团如醛基(-CHO)等。
[0166] 基于以上方案，制作用于体重控制的基因芯片，首先，
[0167] (1)将固相载体预处理，待用；
[0168] (2)根据表6所设计的探针序列，如SEQ ID No.1-31所示，人工合成每条寡核苷酸芯片探针；
[0169] (3)将上述各寡核苷酸芯片探针溶解在点样液中，点样固化即得。
[0170] 将上述方案，所述固相载体为载玻片，所述的预处理为将载玻片用铬酸洗液洗涤，浸泡过夜，水洗，20％-25％氨水浸泡中过夜，水洗，然后浸入氨丙基三甲氧基硅烷的乙醇溶液中，用冰醋酸调节pH值至4.0-6.0，乙醇超声清洗，烘干4-5小时，戊二醛醛基化处理。
[0171] 按上述方案，所述每条寡核苷酸芯片探针在合成时5’端经氨基基团修饰。点样时每点点样体积约为0.4-0.6mL，点样间距为500-600μm,点样直径为200-300μm，每条探针重复点样2-3次；所述的固化处理为室温放置24-26小时固化。
[0172] 样品制备的过程，还包括包括DNA样品的扩增。按上述方案，所述的DNA样品扩增试剂盒还包括PCR扩增所用的PCR缓冲液、MgC12、dNTP mix和Taq酶。
[0173] 上述用于减肥指导的基因芯片的使用方法，具体包括以下步骤：
[0174] (1)待测样本的制备：
[0175] ①提取样品DNA；
[0176] ②采用PCR方法对DNA进行扩增；
[0177] ③PCR结束后经
电泳检测确认，然后回收目的片段条带；
[0179] 对步骤1中回收得到的目的片段进行荧
光标记；
[0180] (3)芯片杂交实验
[0181] 将步骤2中标记后的目的片段对应滴加到基因芯片上，与固定于上述基因芯片上的寡核苷酸芯片探针进行杂交，然后进行洗涤处理；
[0182] 扫描和结果判定，扫描分析获取杂交
信号，判定得到结果。
[0183] 实施例3体型的确定
[0184] 根据实施例2所述的设计制作芯片，检测了30多个样本。
[0185] (1)提取样品DNA；
[0186] 可按照本领域常规方法进行提取，样本为人唾液，本发明采用唾液DNA提取试剂盒提取一中年微胖女性唾液；
[0187] (2)采用引物对DNA样品进行扩增。配制50u下述PCR反应体系，并根据如下反应条件，分别进行PCR扩增。
[0188] PCR反应体系
[0189]组分及其浓度 各组分的加入量
10×PCR Buffer 5μl
MgCl2 3μl
dNTP mix(10mmol/μl) 1μl
上游引物，10pmol/μl 1μl
下游引物，10pmol/μl 1μl
Taq酶(10U/μl) 0.5μl
血液或唾液DNA 1μl
H2O 37.5μl
总体积 50μl
[0190] PCR反应条件
[0191]
[0192] (3)PCR扩增结束后各取产物5μl，质量体积比为1％的琼脂糖凝胶电泳检测观察确认。然后采用百泰克DNA回收试剂盒对PCR产物进行纯化，回收目的片段。
[0193] (4)荧光素标记
[0194] 将回收的目的片段于25μl含200mM二甲胂酸
钾(potassium cacodylate)，25mM Tris-HC1缓冲液(pH7.2)，1mM二氧化钴(CoC12)，0.01％聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100，v/v)，20μM Cy3-dCTP(20U)脱氧核苷酸末端转移酶的标记体系中，37℃荧光素标记1小时。
[0195] (5)杂交
[0196] 将荧光素标记后的DNA扩增产物即点样液2μl分别与杂交液等体积混合后对应滴加到基因芯片表面，杂交液为5×SSC(0.5wt％SDS，50％(v/v)甲酰胺)，加盖玻片，然后放入杂交盒中65℃杂交6小时。
[0197] (6)洗涤
[0198] 以终浓度为2×SSC+0.2wt％SDS的溶液洗片，每次2分钟，再用2×SSC冲洗2次，每次2分钟，最后用三蒸水清洗2次，每次2分钟，然后以1000转数/分的速度离心5分钟。
[0199] (7)结果检测和分析
[0200] 用
扫描仪扫描：合理设定激光强度，
光电倍增管(PMT)参数。
[0201] 用定量分析
软件分析扫描图像的荧光强度值。根据各个探针杂交信号采用基因芯片标准化的方法，以及聚类(Cluster)方法来判定杂交结果，即得出SNP位点的等位基因型。检测结果应用我们的HapMap大
数据库进行定量和定性分析，得到风险率(OR)，在计算综合风险率(OR)。最后结合人群对应位点的平均风险率，进行综合评估。
[0202] 用基因芯片检测肥胖易感性相关SNP位点、肥胖测量相关SNP位点、饮食响应相关SNP位点和锻炼响应相关SNP位点的等位基因型，对照表1至4中显示的具体表型，得出该受试者自身的数据。并对数据进行分析。
[0203] (8)肥胖易感性风险分析：
[0204] 其中群体平均风险＝中国人群的发病率(％)，为5％，该数据来自世界卫生组织WHO流行病学调查结果。
[0205] 累积风险的计算公式为：累积风险＝OR1×OR2×OR3×OR4×…×ORn，其中n为SNP位点的个数，ORn为每一个SNP对应的风险率。
[0206] 受检者风险＝受检者累积风险率×中国人群的发病率(％)。
[0207] (9)肥胖测量分析
[0208] (10)锻炼响应
[0209] (11)饮食响应
[0210] 表7受试者中SNP的基因型性状
[0211]
[0212]
[0213]
[0214]
[0215]
[0216]
[0217]
[0218]
[0219]
[0220] 3号染色体上PPARG，过氧化物酶体增殖物激活受体γ；
[0221] 11号染色体上APOA5，载脂蛋白A5；
[0222] 1号染色体上APOA2，载脂蛋白A2。
[0223] 3号染色体上PPARG，过氧化物酶体增殖物激活受体；
[0224] 8号染色体上ADRB3，肾上腺素能受体B3；
[0225] 16号染色体上FTO，脂肪量和肥胖相关蛋白；
[0226] 15号染色体上LIPC，肝脏酯酶C。
[0227] 通过实测样品的分析可以分为5种类型的体型。区分的标准是具体SNP的等位基因，详见表8。
[0228] 表8受试者体型与主要的SNP的基因型表型之间的对应关系
[0229]
[0230] 类型一：“狼”型多吃脂肪也不会发胖，且低脂饮食导致发胖。属于可以多吃肉，体型中等不胖不瘦的类型。
[0231] 类型二：“猴子”型多吃脂肪也不会发胖，表现为体态轻盈，不容易胖。
[0232] 类型三：“猫”型多吃脂肪会发胖，通过走路等轻微的运动体重就会下降，表现为体态矫健，精力充沛，控制不当比较容易胖，也比较容易瘦。类型四：“熊猫”型多吃脂肪会发胖，通过走路等轻微的运动体重不会下降，只有剧烈运动体重才能下降。运
动能够改善糖代谢。表现为体态略胖或胖，平时饮食与运动控制不当就比较容易胖。
[0233] 类型五：“考拉”型多吃脂肪导致肥胖，通过走路等轻微的运动体重不会下降，只有剧烈运动体重才能下降。运动不能够改善糖代谢。表现为体重较大，而且不容易瘦。
[0234] 根据分类提供了相应的饮食运动的指导方案。在实施过程中取得了非常好的体重控制效果。
[0235] 狼型：
[0236] 适宜：
[0237] 1、肉食；
[0238] 2、甜味或苦涩味的食物(咖啡除外)；
[0239] 3、每天喝大量和冷水或芦荟汁；
[0240] 4、每周两次苦瓜汁；
[0241] 5、晚10点之前入睡；
[0242] 6、在凉爽的环境中放松和运动，特别是游泳、滑冰、滑
雪；
[0243] 7、冥想；
[0244] 8、音乐和阅读。
[0245] 不宜
[0246] 1、深度油炸的食物，以及快餐食物；
[0247] 2、避免酸味，辣味，以及口味重的食物；
[0248] 3、避免节食；
[0249] 4、避免酒精饮品；
[0250] 5、运动过度和竞技类运动；
[0251] 6、压力特别大的工作和事务；
[0252] 7、炎热的环境中运动；
[0253] 最佳的锻炼方式：凉爽的环境中，比如湖边、海边、夜晚的时候散步、
瑜伽、冥想、游泳、滑冰、
滑雪。
[0254] 详细的食物建议，见表9：
[0255] 表9狼型体型的详细食物建议
[0256]
[0257] 猴型：
[0258] 适宜：
[0259] 1、甜食和糖分比较高的米饭，面食；
[0260] 2、多吃各种坚果和奶制品；
[0261] 3、保证充足的睡眠，每天至少7小时；
[0262] 4、多一些放松的活动，比如听音乐，阅读，冥想，散步；
[0263] 5、保持规律的用餐时间和作息规律；
[0265] 不宜：
[0266] 1、避免生冷的食物；
[0267] 2、不要节食；
[0268] 3、避免工作压力大；
[0269] 4、避免运动过度或长跑，跳跃等运动；
[0270] 5、避免碳酸饮料。
[0271] 最佳的锻炼方式：在温暖的环境中散步。瑜伽、冥想，
骑车等非剧烈运动。详细的食物建议，见表10。
[0272] 表10猴子型体型的详细食物建议
[0273]
[0274]
[0275] 猫型：
[0276] 适宜：
[0277] 1、甜食和糖分比较高的米饭，面食；
[0278] 2、苦瓜等苦味的食物(除了咖啡)；
[0279] 3、新鲜水果和绿叶蔬菜；
[0280] 4、每天早晨喝柠檬水；
[0281] 5、每周一次苦瓜汁；
[0282] 6、睡前喝一杯牛奶加糖；
[0283] 7、大量饮用绿茶和水；
[0284] 8、散步，基础瑜伽，游泳等非剧烈运动。
[0285] 不宜：
[0286] 1、深度油炸的食物，以及快餐食物；
[0288] 3、避免猪肉，牛羊肉，海鲜；
[0289] 4、避免过度节食；
[0290] 5、避免酒精饮品和碳酸饮料。
[0291] 详细的食物建议，见表11：
[0292] 表11猫型体型的详细食物建议
[0293]
[0294]
[0295] 最佳的锻炼方式：在优美的自然环境中散步。瑜伽冥想，一边听音乐一边做一些轻松的运动，比如游泳或肌肉拉伸。
[0296] 熊猫型：
[0297] 适宜：
[0298] 1、苦涩味的食物；
[0299] 2、新鲜的生蔬菜和干果；
[0300] 3、进食时要在安静的环境中，细嚼慢咽，有规律的吃饭时间；
[0301] 4、每天早晨喝柠檬蜂蜜水；
[0302] 5、每周一次苦瓜汁；
[0303] 6、新鲜水果和新鲜的蔬菜，芽苗菜；
[0304] 7、适合有一定强度的运动。
[0305] 不宜：
[0306] 1、白天睡觉；
[0307] 2、限制食用酸味，辣味，发酵的食物；
[0308] 3、尽量少吃发酵的食物、腌制食品、洋葱、大蒜和辣椒。
[0309] 最佳的锻炼方式：每周坚持1-2次运动。适当强度的运动比如慢跑、
羽毛球、跳绳等。
[0310] 详细的食物建议，见表12：
[0311] 表12熊猫型体型的详细食物建议
[0312]
[0313] 考拉型：
[0314] 适宜：
[0315] 1、苦涩味的食物；
[0316] 2、新鲜的生蔬菜和干果；
[0317] 3、进食时要在安静的环境中，细嚼慢咽，有规律的吃饭时间；
[0318] 4、8点以前起床；
[0319] 5、大量喝温热的水或绿茶；
[0320] 6、新鲜的绿叶蔬菜，芽苗菜；
[0321] 7、坚持有一定强度的运动；
[0322] 8、旅行。
[0323] 不宜：
[0324] 1、白天睡觉，睡懒觉；
[0325] 2、限制食用酸味，辣味，咸味的食物；
[0326] 3、尽量少吃发酵的食物、腌制食品、洋葱、大蒜和辣椒。
[0327] 最佳的锻炼方式：每周坚持2-3次运动。适当强度的运动比如慢跑、
羽毛球、跳绳等。
[0328] 详细的食物建议，见表13：
[0329] 表13考拉型体型的详细食物建议
[0330]
[0331]
[0332] 实施例4受试者按照体型分类的运动饮食指导
[0333] 1、某中年女性；基因分型结果：猫型。
[0334]
[0335] 根据推荐的饮食，运动方案，3个月体重从68公斤下降到65公斤。BMI指数从23.81下降到22.75达到正常水平。然后一直保持正常水平。
[0336] 2、某中年女性；基因分型结果：狼型。
[0337]
[0338]
[0339] 一直节食，减少脂肪摄入，仍然易胖，检测以为是非常易胖的体制。其实是饮食结构不合理导致的。根据推荐的饮食，运动方案。不在节食，BMI一直保持正常水平。
[0340] 3、中年男性；基因分型结果：考拉型。
[0341]
[0342] 4个月，BMI指数从29.3(肥胖)降低到27.5(过重)。现在还在持续下降。
[0343] 4、某中年女性；基因分型结果：猫型
[0344]
[0345]
[0346] 母亲体重一直超重，而且很难减重。为了防止发胖一直节食和每周坚持肌肉训练，无氧运动2-3次。因此，BMI一直控制在正常偏低的水平。根据测试结果，合理饮食，不再节食。6个月来，体重仍然没有增加。
[0347] 5、某中年女性；基因分型结果：猴型
[0348]
[0349] 平时不锻炼，也不节食，而且食量很大。BMI一直保持在正常水平。通过检测结果，了解了自身情况。根据食谱和进行适量运动有9个月。感觉体质更好。
[0350] 6、某中年女性；基因分型结果：猴型
[0351]
[0352] 平时经常锻炼，也适当节食。BMI一直保持在正常水平。通过检测结果，了解了自身情况。根据食谱不再节食和进行适量运动有9个月。体重不变。
[0353] 7、某中年男性；基因分型结果：猴型
[0354]
[0355] 平时经常锻炼，不节食。BMI一直保持在正常水平。通过检测结果，了解了自身情况。根据食谱和进行适量运动有9个月。体重不变。
[0356] 8、某中年男性；基因分型结果：考拉型
[0357]
[0358]
[0359] 每周坚持运动量比较大的运动，比如
足球，肌肉训练，有氧运动。至少3次。控制饮食。体重一直控制在正常的BMI水平。
[0360] 9、某中年男性；基因分型结果：熊猫型
[0361]
[0362] 一直坚持规律的有氧运动，并且控制饮食。根据检测结果。通过检测结果，了解了自身情况。根据食谱和进行适量运动有6个月。感觉体质更好。
[0363] 实施例5硬件设备及健康管理方法
[0364] 数据录入或接收
[0365] 硬件设备包括如手机、电脑、可穿戴设备、可植入设备等，该硬件设备中安装有本发明个性化基因分型指导减肥的方法的应用程序。符合本发明相关需求的可穿戴设备可以是智能手环、
手表、戒指、项链、眼镜、心率带等形式中的一种以上或其组合。
[0366] 所述硬件设备内置一定容量的物理存储空间，并且可以具有有线连接
接口，诸如目前
电子产品常用的microUSB数据接口等。
[0367] 使用前，采用本发明的试剂盒检测使用者的体液样本中的SNP，获得相应数据。然后，使用者可以向所述硬件设备直接录入或蓝牙数据传输模
块接收上述数据。
[0368] 数据分析和输出
[0369] 所述应用程序基于录入和接收的数据综合分析，为用户
指定饮食计划、膳食推荐、运动计划以及提供体重保持技巧；
[0370] 数据再录入或接收
[0371] 使用者基于指定饮食计划、运动计划等，开展健身。可通过安装有本发明个性化基因分型指导减肥的方法的应用程序的手机、电脑、可穿戴设备等，全时监测、数据录入或接收个体日常相关的体重、运动、体温、饮食信息等参数，如锻炼距离、饮食糖分、脂肪消耗等基本信息。硬件设备使用者对个人饮食、运动等相关数据进行主动，录入方式包括文字和照片等多种方式。
[0372] 其中，可穿戴设备可以与其他智能设备包括智能手机、智能
平板电脑或个人计算机等装置有蓝牙传输模块及相应软件的设备进行数据传输，也可以通过无线网络连接进行通讯，或者通过microUSB接口有线连接传输数据等。
[0373] 数据分析和反馈
[0374] 硬件设备中的应用程序会对输入的饮食、运动信息进行分析，提出对目前饮食运动等减肥健身方案的反馈建议。
[0375] 本发明的基于本发明个性化基因分型指导减肥的方法的应用程序的硬件设备，及其健康管理方法不限于上述实施例，可以进行多种变型。总之，在不脱离本发明精神范围内的所有改进都落入本发明范围内。
