一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法及其用途
专利汇可以提供一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法及其用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种 马 匹常用13个微卫星位点快速检测方法及其用途，该检测结果可用于进口马匹的身份识别和新生马驹的亲子鉴定，同时也具备性别鉴定能 力 。本发明对用于马匹DNA检测的大部分常用微卫星引物进行了重新设计，并构建了13重微卫星多重PCR体系，通过两种 荧光 标记的引物对待测马匹DNA进行多重PCR扩增，对扩增产物的荧光 信号 进行检测，获得待测马匹在13个微卫星位点上的基因分型数据，从而达到身份识别、亲子鉴定和性别鉴定的目的。，下面是一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法及其用途专利的具体信息内容。
1.一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法的用途，其特征在于：用于快速完成马匹的身份识别、新生马驹的亲子鉴定和性别鉴定的用途。
2.一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法，其特征在于：所述的检测方法包括合成微卫星标记引物、马匹DNA提取并检测、PCR扩增反应、PCR产物检测和分析检测结果。
3.根据权利要求2所述的一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法，其特征在于：所述的合成微卫星标记引物步骤为根据引物序列合成带有荧光标记的微卫星标记引物并按照相应的浓度配置引物混合液。
4.根据权利要求2所述的一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法，其特征在于：所述的马匹DNA提取并检测步骤为提取马匹DNA作为模板DNA，琼脂电泳检测DNA质量，紫外分光光度计测定DNA浓度。
5. 根据权利要求2所述的一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法，其特征在于：
所述的PCR扩增反应步骤为将5份2xEasyTaq Supermix、2.5 3.9份引物混合液、0.5 1.4份~ ~
模板DNA混合，并用双蒸水定容到10份；PCR反应条件为：95℃ 5分钟，95℃ 30秒、58℃ 30秒、72℃ 1分钟、循环30次，72度℃ 1小时，4度保持待检测。
6.根据权利要求2所述的一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法，其特征在于：所述的PCR产物检测步骤为用琼脂电泳检测PCR扩增质量，用毛线管电泳及测序仪对PCR产物进行检测。
7. 根据权利要求2所述的一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法，其特征在于：
所述的分析检测结果步骤为使用Genemapper V4.0 软件分析检测结果，确定待测马匹在13个STR位点上的基因分型结果。
8.根据权利要求2所述的一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法，其特征在于：所述的合成微卫星标记引物步骤中ASB17或AHT5或HTG10或ASB23或HMS3或AHT4和HMS7或VH20或HMS6或HTG4或YJ10或ASB2或HMS2分别以两种颜色不同的荧光进行标记；微卫星位点的引物序列包括
微卫星位点：ASB17；引物序列：F: ACCATTCAGGATCTCCACCG，引物混合液浓度为0.125µM；R: GAGTTTGAGTATCGCTGATGG，引物混合液浓度为0.125µM，产物长度为98 140bp；
~
或微卫星位点：AHT5；引物序列：F: CAACCAGCCACGGACACATC，引物混合液浓度为0.15µM；R: TACTCTGACTTCCCCCTCTAAGC，引物混合液浓度为0.15µM，产物长度为186-204bp；
或微卫星位点：HTG10；引物序列：F: ATTGGGCTTTTTATTCTGATCTGTC，引物混合液浓度为
0.15µM；R: CCCTCTGTCTATTTCTCATTTCTGG，引物混合液浓度为0.15µM，产物长度为282-
306bp；
或微卫星位点：ASB23；引物序列：F: GCCTTTATCTCCCCTTTTCAAC，引物混合液浓度为0.2µM；R: GAAAGTCTTGGTTTTGGCATTG，引物混合液浓度为0.2µM，产物长度为344-380bp；
或微卫星位点：HMS3；引物序列：F: TCAGATAGTGATAATGCCGTGG，引物混合液浓度为0.1µM；R: GCTCTAAAGCCCCAACTCTTTG，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为438-460bp；
或微卫星位点：HMS7；引物序列：F: TGTTGTTGAAACATACCTTGACTGT，引物混合液浓度为
0.2µM；R: ACAACCAGGAAACTCATGTTGATAC，引物混合液浓度为0.2µM，产物长度为170-190bp；
或微卫星位点：VH20；引物序列：F: TGTGGTCAATGGTGCTGTCAAG，引物混合液浓度为
0.125µM；R: GTCAATCCAGAGGTGATTCACATC，引物混合液浓度为0.125µM，产物长度为387-
405bp；
或微卫星位点：HMS6；引物序列：F: AGGTGAGACGCACTTCTGTTATCAG，引物混合液浓度为
0.125µM；R: GTCATTCCCTGCATTTCATCACTAA，引物混合液浓度为0.125µM，产物长度为483-
495bp；
或微卫星位点：HTG4；引物序列：F: CTATCTCAGTCTTGATTGCAGGAC，引物混合液浓度为
0.75µM；R: GCTCCCTCCCTCCCTCTGTTCTC，引物混合液浓度为0.75µM，产物长度为126-138bp；
或微卫星位点：YJ10；引物序列：F: AGTTCCCCTGCACACCT，引物混合液浓度为0.1µM；R: TGCCTCCCACAGCCATAC，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为213bp；
或微卫星位点：ASB2；引物序列：F: CACTAAGTGTCGTTTCAGAAGG，引物混合液浓度为
0.175µM；R: GCACAACTGAGTTCTCTGATAGG，引物混合液浓度为0.175µM，产物长度为220-
254bp；
或微卫星位点：HMS2；引物序列：F: ACGGTGGCAACTGCCAAGGAAG，引物混合液浓度为0.1µM；R :GATCTCTAGCTCAGTAAATCACAGG，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为305-325bp；
或微卫星位点：AHT4；引物序列：F: AACCGCCTGAGCAAGGAAGT，引物混合液浓度为0.1µM；
R: GCTCCCAGAGAGTTTACCCT，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为144-164bp。
一种马匹常用13个微卫星位点快速检测方法及其用途
技术领域
背景技术
发明内容
~
或微卫星位点：AHT5；引物序列：F: CAACCAGCCACGGACACATC，引物混合液浓度为0.15µM；R: TACTCTGACTTCCCCCTCTAAGC，引物混合液浓度为0.15µM，产物长度为186-204bp；
或微卫星位点：HTG10；引物序列：F: ATTGGGCTTTTTATTCTGATCTGTC，引物混合液浓度为
0.15µM；R: CCCTCTGTCTATTTCTCATTTCTGG，引物混合液浓度为0.15µM，产物长度为282-
306bp；
或微卫星位点：ASB23；引物序列：F: GCCTTTATCTCCCCTTTTCAAC，引物混合液浓度为0.2µM；R: GAAAGTCTTGGTTTTGGCATTG，引物混合液浓度为0.2µM，产物长度为344-380bp；
或微卫星位点：HMS3；引物序列：F: TCAGATAGTGATAATGCCGTGG，引物混合液浓度为0.1µM；R: GCTCTAAAGCCCCAACTCTTTG，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为438-460bp；
或微卫星位点：HMS7；引物序列：F: TGTTGTTGAAACATACCTTGACTGT，引物混合液浓度为
0.2µM；R: ACAACCAGGAAACTCATGTTGATAC，引物混合液浓度为0.2µM，产物长度为170-190bp；
或微卫星位点：VH20；引物序列：F: TGTGGTCAATGGTGCTGTCAAG，引物混合液浓度为
0.125µM；R: GTCAATCCAGAGGTGATTCACATC，引物混合液浓度为0.125µM，产物长度为387-
405bp；
或微卫星位点：HMS6；引物序列：F: AGGTGAGACGCACTTCTGTTATCAG，引物混合液浓度为
0.125µM；R: GTCATTCCCTGCATTTCATCACTAA，引物混合液浓度为0.125µM，产物长度为483-
495bp；
或微卫星位点：HTG4；引物序列：F: CTATCTCAGTCTTGATTGCAGGAC，引物混合液浓度为
0.75µM；R: GCTCCCTCCCTCCCTCTGTTCTC，引物混合液浓度为0.75µM，产物长度为126-138bp；
或微卫星位点：YJ10；引物序列：F: AGTTCCCCTGCACACCT，引物混合液浓度为0.1µM；R: TGCCTCCCACAGCCATAC，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为213bp；
或微卫星位点：ASB2；引物序列：F: CACTAAGTGTCGTTTCAGAAGG，引物混合液浓度为
0.175µM；R: GCACAACTGAGTTCTCTGATAGG，引物混合液浓度为0.175µM，产物长度为220-
254bp；
或微卫星位点：HMS2；引物序列：F: ACGGTGGCAACTGCCAAGGAAG，引物混合液浓度为0.1µM；R :GATCTCTAGCTCAGTAAATCACAGG，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为305-325bp；
或微卫星位点：AHT4；引物序列：F: AACCGCCTGAGCAAGGAAGT，引物混合液浓度为0.1µM；
R: GCTCCCAGAGAGTTTACCCT，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为144-164bp。其中，ASB17或AHT5或HTG10或ASB23或HMS3或AHT4和HMS7或VH20或HMS6或HTG4或YJ10或ASB2或HMS2分别以两种颜色不同的荧光进行标记。
具体实施方式
如图1 2所示，一种马匹常用13个微卫星（STR）位点快速检测方法，包括合成微卫星标~
记引物、马匹DNA提取并检测、PCR扩增反应、PCR产物检测和分析检测结果。
~
或微卫星位点：AHT5；引物序列：F: CAACCAGCCACGGACACATC，引物混合液浓度为0.15µM；R: TACTCTGACTTCCCCCTCTAAGC，引物混合液浓度为0.15µM，产物长度为186-204bp；
或微卫星位点：HTG10；引物序列：F: ATTGGGCTTTTTATTCTGATCTGTC，引物混合液浓度为
0.15µM；R: CCCTCTGTCTATTTCTCATTTCTGG，引物混合液浓度为0.15µM，产物长度为282-
306bp；
或微卫星位点：ASB23；引物序列：F: GCCTTTATCTCCCCTTTTCAAC，引物混合液浓度为0.2µM；R: GAAAGTCTTGGTTTTGGCATTG，引物混合液浓度为0.2µM，产物长度为344-380bp；
或微卫星位点：HMS3；引物序列：F: TCAGATAGTGATAATGCCGTGG，引物混合液浓度为0.1µM；R: GCTCTAAAGCCCCAACTCTTTG，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为438-460bp；
或微卫星位点：HMS7；引物序列：F: TGTTGTTGAAACATACCTTGACTGT，引物混合液浓度为
0.2µM；R: ACAACCAGGAAACTCATGTTGATAC，引物混合液浓度为0.2µM，产物长度为170-190bp；
或微卫星位点：VH20；引物序列：F: TGTGGTCAATGGTGCTGTCAAG，引物混合液浓度为
0.125µM；R: GTCAATCCAGAGGTGATTCACATC，引物混合液浓度为0.125µM，产物长度为387-
405bp；
或微卫星位点：HMS6；引物序列：F: AGGTGAGACGCACTTCTGTTATCAG，引物混合液浓度为
0.125µM；R: GTCATTCCCTGCATTTCATCACTAA，引物混合液浓度为0.125µM，产物长度为483-
495bp；
或微卫星位点：HTG4；引物序列：F: CTATCTCAGTCTTGATTGCAGGAC，引物混合液浓度为
0.75µM；R: GCTCCCTCCCTCCCTCTGTTCTC，引物混合液浓度为0.75µM，产物长度为126-138bp；
或微卫星位点：YJ10；引物序列：F: AGTTCCCCTGCACACCT，引物混合液浓度为0.1µM；R: TGCCTCCCACAGCCATAC，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为213bp；
或微卫星位点：ASB2；引物序列：F: CACTAAGTGTCGTTTCAGAAGG，引物混合液浓度为
0.175µM；R: GCACAACTGAGTTCTCTGATAGG，引物混合液浓度为0.175µM，产物长度为220-
254bp；
或微卫星位点：HMS2；引物序列：F: ACGGTGGCAACTGCCAAGGAAG，引物混合液浓度为0.1µM；R :GATCTCTAGCTCAGTAAATCACAGG，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为305-325bp；
或微卫星位点：AHT4；引物序列：F: AACCGCCTGAGCAAGGAAGT，引物混合液浓度为0.1µM；
R: GCTCCCAGAGAGTTTACCCT，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为144-164bp。其中，ASB17或AHT5或HTG10或ASB23或HMS3或AHT4和HMS7或VH20或HMS6或HTG4或YJ10或ASB2或HMS2分别以两种颜色不同的荧光进行标记。
记引物、马匹DNA提取并检测、PCR扩增反应、PCR产物检测和分析检测结果。
~
或微卫星位点：AHT5；引物序列：F: CAACCAGCCACGGACACATC，引物混合液浓度为0.15µM；R: TACTCTGACTTCCCCCTCTAAGC，引物混合液浓度为0.15µM，产物长度为186-204bp；
或微卫星位点：HTG10；引物序列：F: ATTGGGCTTTTTATTCTGATCTGTC，引物混合液浓度为
0.15µM；R: CCCTCTGTCTATTTCTCATTTCTGG，引物混合液浓度为0.15µM，产物长度为282-
306bp；
或微卫星位点：ASB23；引物序列：F: GCCTTTATCTCCCCTTTTCAAC，引物混合液浓度为0.2µM；R: GAAAGTCTTGGTTTTGGCATTG，引物混合液浓度为0.2µM，产物长度为344-380bp；
或微卫星位点：HMS3；引物序列：F: TCAGATAGTGATAATGCCGTGG，引物混合液浓度为0.1µM；R: GCTCTAAAGCCCCAACTCTTTG，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为438-460bp；
或微卫星位点：HMS7；引物序列：F: TGTTGTTGAAACATACCTTGACTGT，引物混合液浓度为
0.2µM；R: ACAACCAGGAAACTCATGTTGATAC，引物混合液浓度为0.2µM，产物长度为170-190bp；
或微卫星位点：VH20；引物序列：F: TGTGGTCAATGGTGCTGTCAAG，引物混合液浓度为
0.125µM；R: GTCAATCCAGAGGTGATTCACATC，引物混合液浓度为0.125µM，产物长度为387-
405bp；
或微卫星位点：HMS6；引物序列：F: AGGTGAGACGCACTTCTGTTATCAG，引物混合液浓度为
0.125µM；R: GTCATTCCCTGCATTTCATCACTAA，引物混合液浓度为0.125µM，产物长度为483-
495bp；
或微卫星位点：HTG4；引物序列：F: CTATCTCAGTCTTGATTGCAGGAC，引物混合液浓度为
0.75µM；R: GCTCCCTCCCTCCCTCTGTTCTC，引物混合液浓度为0.75µM，产物长度为126-138bp；
或微卫星位点：YJ10；引物序列：F: AGTTCCCCTGCACACCT，引物混合液浓度为0.1µM；R: TGCCTCCCACAGCCATAC，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为213bp；
或微卫星位点：ASB2；引物序列：F: CACTAAGTGTCGTTTCAGAAGG，引物混合液浓度为
0.175µM；R: GCACAACTGAGTTCTCTGATAGG，引物混合液浓度为0.175µM，产物长度为220-
254bp；
或微卫星位点：HMS2；引物序列：F: ACGGTGGCAACTGCCAAGGAAG，引物混合液浓度为0.1µM；R :GATCTCTAGCTCAGTAAATCACAGG，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为305-325bp；
或微卫星位点：AHT4；引物序列：F: AACCGCCTGAGCAAGGAAGT，引物混合液浓度为0.1µM；
R: GCTCCCAGAGAGTTTACCCT，引物混合液浓度为0.1µM，产物长度为144-164bp。其中，ASB17或AHT5或HTG10或ASB23或HMS3或AHT4和HMS7或VH20或HMS6或HTG4或YJ10或ASB2或HMS2分别以两种颜色不同的荧光进行标记。
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