一种牛角的检测方法
专利汇可以提供一种牛角的检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且一种 牛 角 的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括采用高效液相色谱‑质谱联用技术(HPLC‑MS)进行牛角检测的步骤，其中，以牛角对照药材为对照品，以m/z 680.8±0.5(双电荷)→617.1±0.5(单电荷)和m/z 680.8±0.5(双电荷)→817.0±0.5(单电荷)作为检测离子对，该检测方法操作步骤简单，专属性强，准确度高，可重复性好，使得牛角在临床疗效和安全性等方面也更有保障。，下面是一种牛角的检测方法专利的具体信息内容。
1.一种牛角的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括采用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)进行牛角检测的步骤，其中，以牛角对照药材为对照品，以m/z 680.8±0.5(双电荷)→617.1±0.5(单电荷)和m/z 680.8±0.5(双电荷)→817.0±0.5(单电荷)作为检测离子对。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的条件为：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶，流动相A选自甲酸、乙酸、甲酸水溶液或乙酸水溶液中的至少一种，优选自0.1％(v/v)甲酸的水溶液或0.1％(v/v)乙酸的水溶液；
流动相B选自乙腈、甲醇或甲酸的乙腈溶液中的至少一种，优选为0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液，进行梯度洗脱；
优选地，所述高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以0.1％(v/v)甲酸的水溶液为流动相A，以0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱：0～25分钟，A 95％→80％，B 5％→20％；25～40分钟，A 80％→50％，B 20％→50％；40～41分钟，A
50％→1％，B 50％→99％；41～45分钟，A 1％→1％，B 99％→99％。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述质谱采用质谱检测器，电喷雾正离子模式(ESI+)，进行多反应监测。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括将所述牛角进行酶解的步骤；优选地，所述酶解包括向牛角中依次加入尿素，二硫苏糖醇(DTT)，碘乙酰胺(IAA)和酶的步骤；更优选地，所述酶解包括如下步骤：向牛角中加入尿素，再加入DTT，60±5℃加热30±5min，冷却，加入IAA，黑暗中放置30±5min，加碱稀释至10ml，加酶于
37℃反应12h以上。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述酶选自胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的至少一种，优选胰蛋白酶。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述碱为碳酸氢铵(NH4HCO3)。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：
(1)将牛角按所述的酶解的步骤制得供试品溶液；
(2)取牛角对照药材按所述的酶解的步骤制得对照品溶液；
(3)分别吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱-质谱联用仪测定，以m/z
680.8±0.5(双电荷)→617.1±0.5(单电荷)和m/z 680.8±0.5(双电荷)→817.0±0.5(单电荷)作为检测离子对。
优选地，所述检测方法包括如下步骤：
(1)将牛角粉碎，取牛角粉末10mg，加8M尿素1ml，加入1M的DTT 10μl，60℃加热30min，冷却，加入1M的IAA 30μl，黑暗静置30min，加入浓度为0.01g/ml的NH4HCO3溶液稀释至10ml，加入由浓度为0.01g/ml的NH4HCO3溶液配制的浓度为1μg/μl的胰蛋白酶溶液20μl，37℃反应
12h以上，得酶解溶液，取适量酶解溶液过0.22μm的滤膜，续滤液置进样瓶中，制得供试品溶液；
(2)取牛角对照药材，按步骤(1)的方法制得对照品溶液；
(3)照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)和质谱法(中国药典2010年版二部附录ⅨJ)，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪测定，其中，高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，色谱柱内径为
2.1mm，长度为100mm，粒径1.8μm，柱温40℃，以0.1％(v/v)甲酸的水溶液为流动相A，以
0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱：0～25分钟，A 95％→80％，B 5％→
20％；25～40分钟，A 80％→50％，B 20％→50％；40～41分钟，A 50％→1％，B 50％→
99％；41～45分钟，A 1％→1％，B 99％→99％；流速为0.3ml/min，质谱的条件为采用质谱检测器，电喷雾正离子模式(ESI+)，进行多反应监测，毛细管电压为4kV，锥孔电压为40V，除溶剂温度为450℃，除溶剂气体为600L/h，离子源温度为120℃，以m/z 680.8±0.5(双电荷)→617.1±0.5(单电荷)和m/z 680.8±0.5(双电荷)→817.0±0.5(单电荷)作为检测离子对。
8.权利要求1-7中任一项所述的检测方法在牛角药材鉴别中的用途。
9.权利要求1-7中任一项所述的检测方法在羚羊角药材质量控制中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，包括检测牛角的步骤，所述步骤按照权利要求1-7中任一项所述的检测方法进行。
一种牛角的检测方法
技术领域
背景技术
发明内容
0～25分钟，A 95％→80％，B 5％→20％；25～40分钟，A 80％→50％，B 20％→50％；40～
41分钟，A 50％→1％，B 50％→99％；41～45分钟，A 1％→1％，B 99％→99％。
37℃反应12h以上，得酶解溶液，取适量酶解溶液过0.22μm的滤膜，续滤液置进样瓶中，制得供试品溶液；
20％；25～40分钟，A 80％→50％，B 20％→50％；40～41分钟，A 50％→1％，B 50％→
99％；41～45分钟，A 1％→1％，B 99％→99％；流速为0.3ml/min，质谱的条件为采用质谱检测器，电喷雾正离子模式(ESI+)，进行多反应监测，毛细管电压为4kV，锥孔电压为40V，除溶剂温度为450℃，除溶剂气体为600L/h，离子源温度为120℃，以m/z 680.8±0.5(双电荷)→617.1±0.5(单电荷)和m/z 680.8±0.5(双电荷)→817.0±0.5(单电荷)作为检测离子对。
具体实施方式
80％→50％，B 20％→50％；40～41分钟，A 50％→1％，B 50％→99％；41～45分钟，A 1％→1％，B 99％→99％；流速为0.3ml/min；采用质谱检测器，电喷雾正离子模式(ESI+)，进行多反应监测，毛细管电压为4kV，锥孔电压为40V，除溶剂温度为450℃，除溶剂气体为600L/h，离子源温度为120℃，以m/z 680.8(双电荷)→617.1(单电荷)和m/z 680.8(双电荷)→
817.0(单电荷)作为检测离子对。结果见图1。
391.9(单电荷)和m/z459.7(双电荷)→505.1(单电荷)、检测离子对m/z 673.3(双电荷)→
764.0(单电荷)和m/z 673.3(双电荷)→920.0(单电荷)对样品溶液进行检测，所检出的色谱图中都没有色谱峰出现，无法用于牛角的检测，结果表明只有采用本发明特定的检测离子对才能对牛角进行检测。
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