用于治疗和/或预防寄生虫病的二肽基醛
阅读：832发布：2020-05-22
专利汇可以提供用于治疗和/或预防寄生虫病的二肽基醛专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且作为 哺乳动物 疾病 病因的几种寄生虫依赖于半胱 氨 酸蛋白酶来实现各种生命周期功能。对特定半胱氨酸蛋白酶的抑制或降低功能可用于 治疗 和/或 预防 这些寄生虫病，包括毛滴虫病、 组织滴虫病 、球虫病、锥虫病和隐孢子虫病。本 发明 的式I化合物能够治疗和/或预防哺乳动物中的上述疾病，例如，诸如包括鸡、火鸡、鸭、鹅、松鸡、珍珠鸡、孔雀、鹌鹑、鹧鸪和野鸡的鹑鸡目，隼形目，雀形目，鸽形目(例如家鸽)，鹦形目，和家养哺乳动物如 牛 、 绵羊 、山羊、 马 、猪、骆驼、美洲驼、羊驼、猫和狗。，下面是用于治疗和/或预防寄生虫病的二肽基醛专利的具体信息内容。
1.用于治疗或预防寄生虫病的化合物，所述化合物是式I
Z-Phe-X-CHO
或这些二肽基醛的衍生物、或其药学上可接受的盐或其立体异构体，
其中，
X是酪氨酸、甲基酪氨酸、丁基酪氨酸、丙氨酸或亮氨酸；且
Z表示N-苄氧基羰基。
2.根据权利要求1所述的使用的化合物，其中所述化合物是N-(苄氧基-羰基)-L-苯丙氨酰-L-酪氨酸(Z-FY-CHO)，或其衍生物或药学上可接受的盐或其立体异构体。
3.根据权利要求1或2所述的使用的化合物，其中所述寄生虫病选自毛滴虫病、组织滴虫病、锥虫病、球虫病和隐孢子虫病。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的使用的化合物，其中将所述化合物施用于非人哺乳动物。
5.根据权利要求4所述的使用的化合物，其中所述非人哺乳动物是鸟类，优选鸽。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的使用的化合物，其中所述化合物与抗寄生虫剂一起施用。
7.根据权利要求6所述的使用的化合物，其中所述抗寄生虫剂选自硝呋莫司、青蒿素、苏拉明、乙啶盐(Ethidium，Novidium)、硫酸喹嘧胺、醋酸三氮脒、氮氨菲啶、甲硝唑、二甲硝咪唑、卡硝唑、罗硝唑、妥曲珠利、磺胺类和氨丙啉。
8.根据权利要求6或7所述的使用的化合物，其中所述抗寄生虫剂在施用根据权利要求
1或2所述的化合物之前、同时或之后施用。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的使用的化合物，其中所述化合物每天至少给药一次，持续至少3天。
根据权利要求9所述的使用的化合物，其中所述化合物每天至少给药两次，持续至少3天。
用于治疗和/或预防寄生虫病的二肽基醛
技术领域
背景技术
[0002] 作为哺乳动物疾病病因的几种寄生虫依赖于半胱氨酸蛋白酶来实现各种生命周期功能。这些对寄生生物活动至关重要的蛋白酶主要分为组织蛋白酶B样和组织蛋白酶L样。这些酶在各种宿主-寄生虫相互作用中起重要作用，例如逃避宿主免疫攻击，适应宿主和组织入侵。因此，可预计组织蛋白酶L样蛋白酶(包括cruzain，即克氏锥虫组织蛋白酶L半胱氨酸蛋白酶)的特异性抑制剂可被视为抗寄生虫治疗的潜在新靶标。最近已发现禽毛滴虫(Trichomonas gallinae)分泌某些半胱氨酸蛋白酶，其可能在对宿主组织的致细胞病变作用中起关键作用(1)。Amin等(2012)描述了由禽毛滴虫分泌的半胱氨酸肽酶参与了在永久性鸡肝细胞培养中的致细胞病变作用。这些观察结果导致了这样的假设：半胱氨酸蛋白酶的特异性抑制剂在治疗和/或预防几种寄生虫疾病中具有治疗价值，其中包括毛滴虫病、组织滴虫病、球虫病、锥虫病和隐孢子虫病。
[0003] 毛滴虫病由禽毛滴虫(Trichomonas gallinae)引起，该滴虫是一种单细胞梨形原生动物，有4个鞭状前鞭毛和延伸约占全身长度的2/3的鳍状波动膜。禽毛滴虫是上消化道的寄生虫，其影响许多禽类物种并导致口腔和食道中坏死物质的积累。其主要是幼鸟疾病且通常是致命的。该疾病已在家养或普通的白鸽、灰鸽、鹌鹑、火鸡、鸡、隼、鹰、各种雀、爪哇禾雀和金丝雀中发现。滴虫病也被称为口坏疽(Canker)(在白鸽和灰鸽中)和卷缩病(Frounce)(在猛禽中)。治疗仅适用于圈养鸟类，因为用于治疗的药物必须口服给药，不管是通过强制喂食还是通过食物和/或水来给药。已使用的抗原虫药物包括二甲硝唑(50mg/kg体重，或在饮用水中以0.05％给药5-6天)、甲硝唑(60mg/kg体重)、硫酸铜、季铵、卡那唑和罗丹唑(20mg/kg，或3-5天内按每10只鸟1g/L饮用水的量)。遗憾的是，对这些硝基咪唑类的抗原虫剂(即甲硝唑、二甲硝咪唑、卡那唑、罗硝唑)的抗性已有描述，被认为是一个主要的临床问题。上述数据表明需要新的治疗剂来预防和/或治疗滴虫感染。
[0004] 球虫病是一种高度传染性且非常普遍的疾病，由原生动物球虫(球虫亚纲)引起，感染鹑鸡类鸟，包括白鸽、鸡、火鸡、鸭、鹅、松鸡、珍珠鸡、孔雀、鹌鹑、鹧鸪和野鸡。家鸽的感染通常混合艾美耳球虫。并且通常包括柱状艾美耳球虫(Eimeria columbarum)，鸽艾美耳球虫(Eimeria columbae)和labbeana艾美耳球虫(Eimeria labbeana)。报告的感染流行率为5.1％-71.9％，幼鸽的全球死亡率从5％到70％不等，大多数死亡发生在生命的第三和第四个月。使用的化学治疗选择包括氨丙啉、磺胺类、克拉珠利和托曲珠利。使用托曲珠利的原因包括对其他药物(如磺胺类药物和氨丙啉)的抗药性增强。在试验性感染前用托曲珠利(Baycox，20mg/kg体重)治疗达14天的鸽子显示出在个体粪便样品中卵囊数量减少平均超过97％。球虫病的症状包括很少或无进食欲或进水欲。患有球虫病的鸽子将会在栖息地上肿胀，缺乏任何移动的欲望，经常闭着眼睛。粪便通常非常松散，颜色呈绿色，并且可能变得非常湿。另一种症状是体重减少，幼鸟可能会死亡。鸽子中存在球虫会降低整体抵抗力，导致动物更容易受到其他感染。
[0005] 组织滴虫(Histomonas meleagridis)是一种寄生原生动物，可感染多种鹑鸡类鸟，包括鸡、火鸡、鸭、鹅、松鸡、珍珠鸡、孔雀、鹌鹑、鹧鸪和野鸡，引起黑头病、传染性肠炎或组织滴虫病。组织滴虫是鹑鸡类鸟组织滴虫病的致病生物。它诱导盲肠的粘膜及粘膜下层组织和肝实质组织广泛和严重的坏死。这些病变有时会被其他病原体如大肠杆菌和球虫加剧。目前针对该疾病没有处方治疗药物。因此，预防是唯一的治疗方式。在美国，唯一用于控制(预防)的药物是硝苯胂酸(4-硝基苯基胂酸)，以饲料的0.01875％饲喂直至销售前5天。该药剂未获准在欧盟使用。然而，有争论认为，与洛克沙胂类似，硝苯胂酸可能会导致禽肉中无机砷的浓度达到不可接受的浓度，可能对人类消费者有害(2)。硝呋莫司(NFX)为一种具有已知抗原虫活性的化合物，被证明在300-400ppm有效，并且被火鸡耐受。然而，使用硝呋莫司进行的试验性毒性研究证实了在肾上腺、结肠、食管和乳腺组织中具有神经毒性、睾丸损伤、卵巢毒性和有害作用。此外，一些研究中还显示了显著的诱变效应和致瘤或致癌作用。
[0006] 隐孢子虫(Cryptosporidium)是一种微观寄生虫，引起腹泻病隐孢子虫病。寄生虫和该疾病通常都被称为“Crypto”。有许多种隐孢子虫可以感染人类和动物。该寄生虫被一个外壳保护，使其能够在体外长时间存活，并对氯消毒非常耐受。虽然这种寄生虫可以通过几种不同的方式传播，但水(饮用水和娱乐用水)是最常见的传播方式。
[0007] 在哺乳动物中，有描述由牛隐孢子虫(C.bovis)、犬隐孢子虫(C.canis)、猫隐孢子虫(C.felis)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)、微小隐孢子虫(C.parvum)和鹿的基因型引起的感染；在鸟类中，已经描述了以下种类和基因型：贝氏隐孢子虫(C.baileyi)、鸡隐孢子虫(C.galli)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)、微小隐孢子虫(C.parvum)及其鸟类基因型I、II、III。在人类中也描述了一些种类，例如微小隐孢子虫(C.parvum)、人隐孢子虫(C.hominis)，以及一些适应动物宿主的种类，例如犬隐孢子虫(C.canis)、猫隐孢子虫(C.felis)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)。
[0008] WO02/048097A1公开了可用作抗寄生虫剂，特别是用于治疗、预防或改善疟疾或恰加斯病的一种或多种症状的化合物和药物组合物。Choe Y.等(Bioorg Med Chem.2005年3月15日；13(6)：2141-56)公开了用于治疗人类恰加斯病的基于α-酮基的cruzain(克氏锥虫组织蛋白酶L半胱氨酸蛋白酶)抑制剂。
[0009] 尽管隐孢子虫是感染多种动物(例如牛、绵羊、啮齿动物、猫和狗、以及鸟类、鱼和爬行动物)的肠道寄生虫，但人类感染也会由于微小隐孢子虫而发生，该虫也影响家养动物。贝氏隐孢子虫(C.baileyi)可引起鸡和火鸡的呼吸道疾病，也会导致鸡、火鸡和鸭的后肠和泄殖腔滑囊感染。火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)也感染这两个物种。另一种物种在鹌鹑中引起呼吸道疾病。卵囊在粪便中排出，随时可以形成孢子，并通过吸入和摄入发生感染。不幸的是，目前在家禽中没有已知的有效治疗方法。没有有效的预防药物或饲料添加剂。
[0010] 锥虫病是一种寄生虫病，由属于锥虫属(Trypanosoma)的鞭毛原生动物引起，其栖息在血浆和各种身体组织和体液中。这些寄生虫在许多动物身上都有发现，但似乎只对包括人类在内的哺乳动物具有致病性。非洲动物锥虫病可由几种锥虫引起。刚果锥虫(T.congolenseis)存在于大多数家养哺乳动物中，如牛、绵羊、山羊、马、猪、骆驼和狗，也存在于许多野生动物中。活跃锥虫(T.vivaxis)是家养和野生的反刍动物和马的寄生虫。猿猴锥虫(T.simiaeis)主要存在于家猪和野猪中。布氏锥虫(T.bruceiis)是一种非常接近冈比亚锥虫(T.gambiense)和罗得西亚(T.rhodesiense)的寄生虫，它们是人类昏睡病的原因。事实上它可以在所有家养和野生动物中发现。伊氏锥虫(T.evansiis)在非洲仅可在撒哈拉和萨赫勒地区的非洲发现，主要是骆驼寄生虫，但也可能是马、牛和狗的寄生虫。它也发生在亚洲(通常在骆驼和马中引起疾病，在牛、水牛、大象和狗中不常见)以及在中美洲和南美洲。目前使用的锥虫剂是：乙啶盐(Ethidium，Novidium)，硫酸喹嘧胺(Antrycide)，醋酸三氮脒(Berenil)，氯化氮氨菲啶(Samorin，Trypamidium)和苏拉明磺酸钠。然而，副作用以及耐药锥虫(取决于物种以及所使用的药剂)在锥虫病的治疗中引起了相当大的问题。
[0011] 因此对寄生虫引起的疾病，迫切需要新的、更安全的、和有效的治疗和/或预防。
发明内容
[0012] 本发明的目的是提供治疗或预防寄生虫病的新疗法。
[0013] 该目的通过本发明的主题解决。
[0014] 根据本发明，提供了用于治疗或预防寄生虫病的化合物，所述化合物是式I[0015] Z-Phe-X-CHO
[0016] 或这些二肽基醛的衍生物、或其药学上可接受的盐或其立体异构体，
[0017] 其中，
[0018] X是酪氨酸、甲基酪氨酸、丁基酪氨酸、丙氨酸或亮氨酸；且
[0020] 本发明的一个实施方案涉及用于治疗或预防寄生虫病的N-(苄氧基羰基)-L-苯丙氨酰-L-酪氨酸(Z-FY-CHO，表1的化合物b，图1)，以及进一步地其药学上可接受的盐和立体异构体的二肽基醛衍生物和类似物(参见表1)。
[0021] 表1
[0022] 组织蛋白酶L(IC50nM)**
a Z-Phe-Phe-CHO 0.74
b Z-Phe-Tyr-CHO 0.85
c Z-Phe-Leu-CHO 0.78
d Z-Phe-Ala-CHO 15.5
e Z-Phe-Tyr(Me)-CHO 2.95
f Z-Phe-Tyr(Bu)-CHO 6.96
a Z-Phe-Phe-CHO 0.74
b Z-Phe-Tyr-CHO 0.85
c Z-Phe-Leu-CHO 0.78
d Z-Phe-Ala-CHO 15.5
e Z-Phe-Tyr(Me)-CHO 2.95
f Z-Phe-Tyr(Bu)-CHO 6.96
[0023] **来自J-T Woo等的数据。(4)
[0024] 肽基醛衍生物是组织蛋白酶L的有效和选择性抑制剂(4)。例如，化合物Z-FY-CHO(N-(苄氧基羰基)-L-苯丙氨酰-L-酪氨酸，CAS 167498-29-5)对组织蛋白酶L半胱氨酸蛋白酶的IC50值为0.85nM。因此，Z-FY-CHO是特别有价值的。
[0025] 本发明的另一个实施方案涉及如本文描述用途的化合物，其中该化合物是N-(苄氧基-羰基)-L-苯丙氨酰基-L-酪氨酸(Z-FY-CHO)，或其类似物和衍生物或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0026] 本发明的另一个实施方案涉及如本文所描述用途的化合物，其中所述寄生虫病选自毛滴虫病、组织滴虫病、锥虫病、球虫病和隐孢子虫病的组。
[0027] 本发明的另一个实施方案涉及如本文所描述用途的化合物，其中将该化合物施用于非人哺乳动物。
[0028] 本发明的一个实施方案涉及如本文所描述用途的化合物，其中非人哺乳动物为鸟，优选鸽。
[0029] 本发明的一个实施方案涉及如本文所描述用途的化合物，其中该化合物与抗寄生虫剂一起施用。
[0030] 本发明的一个实施方案涉及如本文所描述用途的化合物，其中所述抗寄生虫剂选自由硝呋莫司、青蒿素、苏拉明、乙啶盐(Ethidium，Novidium)、硫酸喹嘧胺、醋酸三氮脒、氮氨菲啶、甲硝唑、二甲硝咪唑、卡硝唑、罗硝唑、妥曲珠利、磺胺类和氨丙啉组成的组。
[0031] 本发明的另一个实施方案涉及如本文所描述用途的化合物，其中所述抗寄生虫化合物在该化合物给药之前、同时或之后施用。
[0032] 本发明的另一个实施方案涉及如本文所描述用途的化合物，其中所述化合物每天至少给药一次，持续至少3天。
[0034] 图1：Z-FY-CHO的结构；
[0035] 图2：用Z-FY-CHO(即图2中的化合物A)处理24小时后的总禽毛滴虫滋养体数的相对平均值(相对于1％DMSO处理的参照组NCA归一化为百分比；*与NCA组相比降低，P<0.05)。
具体实施方式
[0036] 蛋白酶根据其催化位点分为四大类：丝氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶和金属蛋白酶。半胱氨酸蛋白酶为分子量约21-30kDa的蛋白质。它们在pH4-6.5下显示出最高的水解活性。由于巯基氧化的高倾向，该酶的环境应含有还原组分，谷胱甘肽在细胞中用作活化剂，而巯基乙醇或二硫苏糖醇是体外实验所必需的。因此，半胱氨酸蛋白酶的特征通常在于存在独特的反应性硫醇，其已显示通过硫酯中间体催化酰胺键水解，该中间体S-酰基-酶基团是水解的基本步骤。化合物的抑制活性可在体外进行评估，通过将分离或重组的半胱氨酸蛋白酶与诸如苄氧羰基-L-苯丙氨酰-L-精氨酸4-甲基-香豆酰-7-酰胺(Z-Phe-Arg-MCA)等底物一起孵育并监测荧光强度的变化，其是本领域技术人员公知的。
[0037] 本发明涉及抑制或降低特定半胱氨酸蛋白酶活性的化合物，即cruzain和其他组织蛋白酶L-样半胱氨酸蛋白酶。因为一些寄生虫(例如毛滴虫(Trichomonas spcc)、组织滴虫(Histomonas spcc)、球虫(Coccidinae spcc)、锥虫(Trypanosoma spcc)、隐孢子虫(Cryptosporidia spcc))的各种生命周期功能需要包括cruzain的组织蛋白酶L型半胱氨酸蛋白酶，本发明的化合物特别地可用于抑制和/或减少和/或防止上述寄生虫的生长和/或存活。因此，通过将本发明化合物施用于有需要的患者，可以治疗和/或预防诸如毛滴虫病、组织滴虫病、球虫病、锥虫病和隐孢子虫病等寄生虫疾病。
[0038] 另外，通过施用本发明化合物，也可以治疗和/或预防由使用cruzain或类似的组织蛋白酶L样半胱氨酸蛋白酶实现生命周期功能的寄生虫引起的其它寄生虫疾病。
[0039] 本发明的范围内还包括一种药物组合物，其包含本文所描述的化合物和药学上可接受的载体以及本申请中具体公开的任何化合物。根据本文包含的教导，本发明的这些和其他方面将是显而易见的。
[0041] 本发明化合物可与增溶剂和/或乳化剂结合使用。这些试剂可包括例如聚乙二醇(15)-羟基硬脂酸酯( HS 15)，聚山梨醇酯80(吐温80)，聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)和chremophore。
[0042] 本发明化合物可以以来自环状低聚糖的类别的胶束形式给药。这些环糊精可包括例如α-环糊精、β-环糊精、甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、γ-环糊精和δ-环糊精。
[0043] 本发明化合物可与作为靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这些聚合物可包括例如聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷聚赖氨酸。
[0044] 本发明化合物还可与用于治疗或预防寄生虫病(包括毛滴虫病，组织滴虫病，球虫病，锥虫病和隐孢子虫病)的已知药剂联合使用。
[0045] 如果配制成固定剂量，这种组合产品使用下述剂量范围内的本发明化合物和其批准剂量范围内的其它药物活性剂。当组合制剂不合适时，本发明化合物可以替代地与已知药学上可接受的试剂依次使用。
[0046] 关于本发明化合物，术语“给药”及其变体(例如“给予”化合物)是指将化合物或化合物的前药引入需要治疗的患者的系统中。当本发明化合物或其前药与一种或多种其它活性剂(例如细胞毒性剂等)组合提供时，“给药”及其变体各自理解为包括同时和依次引入化合物或其前药以及其他药剂。
[0047] 本发明在其范围内包括本发明化合物的前药。通常，这种前药是本发明化合物的功能性衍生物，它们在体内易于转化成所需化合物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“给药”应包括使用明确体公开的化合物或使用虽未明确公开但在向患者施用后在体内可转化为明确化合物的化合物进行各种条件的治疗。给患者服用后。这些化合物的代谢物包括在将本发明化合物引入生物环境中时产生的活性物质。
[0048] 根据标准药学实践，本发明化合物可以单独或优选与药学上可接受的载体或稀释剂组合给予哺乳动物，任选地与药物组合物中的已知佐剂组合。所述化合物可以通过口服或胃肠外给药一种或多种给药，包括静脉内，肌肉内，腹膜内，皮下，直肠和局部给药途径。
[0049] 在口服片剂的情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉，并且通常加入润滑剂，例如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服给药，有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。对于根据本发明的治疗化合物的口服使用，所选化合物可以例如以片剂或胶囊的形式，或作为水溶液或悬浮液给药。对于片剂或胶囊形式的口服给药，活性药物组分可与口服，无毒，药学上可接受的惰性载体组合，例如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、甘露醇、山梨糖醇等；对于液体形式的口服给药，口服药物组分可以与任何口服用、无毒、药学上可接受的惰性载体如乙醇、甘油、聚乙二醇、甘油、二甲基亚砜(DMSO)、水等组合。此外，当需要或必要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、乳化剂(即吐温80)、悬浮剂和崩解剂和着色剂引入混合物中。
[0050] 如本文所用的术语“治疗有效量”是指有效预防或减缓受试者正接受治疗的特定疾病、病症或感染的发展、或者部分或完全缓解其中的现有症状的活性化合物或药剂的量(例如由寄生虫引起的寄生虫病，该寄生虫依赖于cruzain或类似的组织蛋白酶L样半胱氨酸蛋白酶完成一种或多种生命周期功能，如禽毛滴虫、柱状艾美耳球虫、枯氏锥虫病、组织滴虫或刚果锥虫)。治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内。
[0051] 本文所用的术语“治疗”包括减轻、改善、减少和/或抑制疾病，例如导致疾病的临床症状或疾病的发展减轻、减少、阻止或消失；或缓解疾病，例如引起疾病或其临床症状消退。
[0052] 本文所用的术语“预防”疾病包括使可能暴露于或易患疾病的或有可能患病(即，通过旅行或穿越受影响的地理区域或具有遗传倾向)但尚未感受到疾病表现症状的哺乳动物中不发生疾病的临床症状；抑制疾病。
[0053] 本文所用的术语“每日一次至七天”和“每周一次”是指单位剂量，例如本发明化合物的单位剂量，至少一天给药一次，持续一到七天。在每周一次的给药方案中，单位剂量通常为每七天施用一次。
[0054] 还感兴趣的是任何药学上可接受的衍生物，包括本文所述化合物的盐、酯、酸、烯醇醚和酯、碱、溶剂化物、水合物和前药。药学上可接受的盐，包括但不限于胺盐，例如但不限于N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、氨、二乙醇胺和其他羟烷基胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、1-对氯苄基-2-吡咯烷-1'-基-甲基-苯并咪唑、二乙胺和其他烷基胺、哌嗪和三(羟甲基)氨基甲烷；碱金属盐，例如但不限于锂、钾和钠；碱土金属盐，例如但不限于钡、钙和镁；过渡金属盐，例如但不限于锌；和其他金属盐，例如但不限于磷酸氢钠和磷酸二钠；并且还包括但不限于无机酸盐，例如但不限于盐酸盐和硫酸盐；有机酸盐，例如但不限于乙酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、丁酸盐、戊酸盐和富马酸盐。
[0055] 在一个示例性应用中，将合适量的化合物给予正在接受寄生虫病治疗的哺乳动物。当用于所示效果时，本发明的口服剂量范围为约1至100mg/kg/天，最优选为5至30mg/kg/天。此外，本发明化合物可以通过口服使用本领域普通技术人员熟知的合适载体给药。
[0056] 在另一个示例性应用中，当用于所示效果时，本发明的口服剂量范围为约10mg/kg/周至约700mg/kg/周，优选35-250mg/kg/周。
[0057] 本发明化合物可与其它用于治疗寄生虫病的药剂联合使用。这些组合的各个组分可以在治疗过程中的不同时间分别给药，或者以分开的或单一的组合形式同时给药。因此，本发明应理解为包括所有这些同时或交替治疗的方案，并且术语“给药”应相应地解释。
[0058] 本发明的化合物可以具有不对称中心、手性轴和手性平面，并且以外消旋物、外消旋混合物和单独的非对映异构体形式存在，其中包括所有可能的异构体及其混合物，包括光学异构体，包括在本发明中。此外，本文公开的化合物可以互变异构体形式存在，并且两种互变异构形式都包括在本发明的范围内，即使仅描述了一种互变异构结构。
[0059] 本发明化合物的药学上可接受的盐包括本发明化合物的常规无毒盐，其形成无机或有机酸。例如，常规的无毒盐包括衍生自无机酸的盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等，以及由有机酸制备的盐，例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等等。Berge等人更全面地描述了上述药学上可接受的盐和其它典型的药学上可接受的盐的制备。(3)
[0060] 实施例
[0061] 以下实施例用于帮助理解本发明，但并不试图也不应解释为以任何方式限制本发明的范围。实施例不包括常规方法的详细描述；这些方法是本领域普通技术人员所熟知的。
[0062] 实施例1-体外对毛滴虫(T.gallinae)生长和活力的影响
[0063] 在两种毛滴虫菌株(Vienna株和ATCC 30095)中体外测试Z-FY-CHO对生长和活力的影响。在无菌条件下体外培养毛滴虫。两种菌株均在 2154(LYI Entamoeba培养基)中培养，该培养基根据ATCC的推荐制备。培养条件为37℃厌氧环境。将培养物保持在无菌的50ml塑料管中，总体积为10ml。毛滴虫培养物预先定期传代(以两天为间隔)以维持供研究的菌株。
[0064] 总寄生虫数量的定量：对每个管分别计算总寄生虫数。因此，将每个管的内容物离心并将沉淀物重新悬浮在给定体积中。在Neubauer计数室中检查子样品的稀释度，计算寄生虫的总数和相应管中寄生虫的数量。
[0065] 每个试验组由3个相同的重复组成，即3个相同处理的管(一式三份)。
[0066] 用每种物质的五种浓度(即1nM、10nM、100nM、1000nM和10000nM)测试抗毛滴虫效应。用于药效测定的测试化合物的总暴露时间为72小时；培养基每隔24小时新换一次。孵育24小时后测量药效。
[0067] 对于两种研究的菌株，在给药24小时后，高剂量试验组(10,000nM)中的总毛滴虫滋养体数量最低(参见图2)。在10,000nM试验组中，ATCC 30095菌株的滋养体数量为26.3％，相对的NCA组(即对照组)的Vienna株的滋养体数量为24.0％。
[0068] 在进行活寄生虫和死寄生虫计数的子样本前，计算总的寄生虫数。通过DAPI细胞核染色对寄生虫染色以区分活的和死的寄生虫。
[0069] 在处理24小时后，与对照组NCA相比，在用不同浓度的Z-FY-CHO处理的毛滴虫培养物中可发现明显更低的存活-死亡比。
[0070] 这些数据显示了Z-FY-CHO对毛滴虫培养物的体外生长抑制和潜在的细胞毒性作用。
[0071] 实施例2：体内功效研究
[0072] 通过具有从Vienna菌株培养的200万株毛滴虫通过注射器口服接种30只两种性别均有的家鸽(两组，每组15只)。鸽子的初始年龄为4-5个月。两天后，以每天两次口服5mg/kg的Z-FY-CHO或安慰剂(即仅载体)在4天内给药鸽子。该制剂由加入1.0ml 96g/v％乙醇的50mg药剂和4g预热的Solutol HS15组成。将制剂搅拌成澄清溶液，然后用预热的蒸馏水加满至10ml的体积。将该溶液以每100g体重0.1ml(即5mg/kg)给药。随后对这些鸟每天进行两次一般健康检查以及饲料和水消耗的测量。感染14天后，对禽类实施安乐死并对器官进行组织学检查。安慰剂组的鸽子中反流明显更常发生(15只鸽子中的7只，p＝0.018)。在感染的当天晚上，安慰剂组的一只鸽子首先检测到反流。安慰剂组的一只或两只不同的鸽子在接下来的几天内直至研究结束显示出这种临床症状。治疗组中只有一只鸽子在研究第28天早晨反流。反流不受性别、年龄、其他临床发现或滴虫再分离的影响。在尸体剖检期间未检测到食道或嗉囊的严重病理结果。然而，已经在总共八只鸽子(27％)中检测到粘膜中以及粘膜下组织中的嗜异性浸润以及粘膜下组织中的淋巴细胞和浆细胞。在安慰剂组的鸽子中明显更常检测到卡他性侵蚀性食管炎和嗉囊炎(8只鸽中有7只患有食道和嗉囊的炎症反应，88％；p＝0.018)。治疗组的鸽子只有一只发现了这一结果。本研究的另一个发现是几只鸽子患有球虫病，在用Z-FY-CHO处理后，在这些鸟类中没有检测到球虫，而安慰剂组中的3只鸽子(15只中的)仍然表现出球虫病。总体而言，在Z-FY-CHO按10mg/kg/天施用的期间未检测到明显和/或统计学上显著的副作用。
[0073] 因此，数据显示Z-FY-CHO可用于防止侵入的毛滴虫进入食道和嗉囊的粘膜并最终进入其他器官，以及减少肠内球虫的数量。
[0074] 参考文献
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