露水草(Cyanotis，arachnoidea，C，B，Clarke)为鸭跖草科兰耳草属多年生植物，露水草又名珍珠露水草，分布在云南、台湾、广东等地。其性辛，微苦，具有祛风活络，利湿消肿的功效。蜕皮激素是从露水草中提取得到的主要含有一类具有昆虫蜕皮活性的天然甾体化合物，其中最主要的成分为β-蜕皮激素。目前β-蜕皮激素按兽药标准检测，其标准号为DB53/兽药034-2000，其测定方法为紫外分光光度法。
蜕皮激素作用于人体有促进蛋白质的合成，排除体内的胆固醇，降血脂，抑制血糖上升等生理活性，民间用于风湿性关节炎。在蚕业上，用于促使桑蚕龄期缩短，促进吐丝结茧；在养殖业上，对虾、蟹的养殖上也广泛运用；在化妆品中，蜕皮激素用为特殊添加剂也得到应用；蜕皮激素加入化妆品中，可防止皮肤干燥，使皮肤更加细嫩。蜕皮激素能影响昆虫从孵化的幼虫到成虫的全部发育阶段，因而它控制或杀死农业害虫，现已将它作为第3代农药进行开发和应用；蜕皮激素对农作物的生理过程也有某些影响，在农作物丰产助剂方面也有很好的开发应用前景。
现有技术中提取蜕皮激素常有以下三种方法：1、水浸提露水草，浸液经过滤、减压浓缩、制膏，制得水膏后，用乙醇冼脱水膏中的糖分等杂质，乙醇洗脱液经过滤、减压浓缩、制膏，所制得的乙醇膏再用工业乙酸乙酯萃取(以下简称常规方法1)。2、用乙醇浸提露水草，在常压下，浸液经过滤、减压浓缩、制膏，所得到的乙醇膏再用工业乙酸乙酯萃取(以下简称常规方法2)，常规方法1和2源于文献：杨俊峰.植物蜕皮激素的提取方法究.化学，1991(7)：335-336。3、现有的大生产方法多为将露水草的水提液上大孔吸附树脂，乙醇洗脱浓缩液，用乙醇-乙酸乙酯萃取的工艺(以下简称常规方法3)。  这些工艺所得蜕皮激素的收率都很低。

本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中蜕皮激素的收率低的技术缺陷。    
本发明的目的之一是提供一种从露水草中提取蜕皮激素的方法，该方法能提高蜕皮激素的收率。
本发明的另目的之一是提供一种蜕皮激素，所述的蜕皮激素是用本发明方法制备得到。
为解决上述技术问题，本发明的关键技术在于萃取剂用正丁醇-乙酸乙酯混合溶剂，并且使用的比例适当，该萃取剂与水分层很好，萃取完全，且萃取前使用碱调pH，使酸性杂质、色素成盐而不被正丁醇-乙酸乙酯混合溶剂萃取，从而与蜕皮激素分离，再进一步用阴离子交换树脂除杂，最终提高蜕皮激素收率和纯度。其技术方案如下：
一、一种从露水草中提取蜕皮激素的方法，按以下步骤进行：
(1)取露水草原料，用水煎煮，用水量与露水草投料量的比为10L∶0.5kg～1kg，或用1％-95％的甲醇或1％-95％的乙醇提取，所述甲醇或乙醇的用量与露水草投料量的比为5L～10L∶1kg，煎煮次数或提取次数为2～3次，煎煮获得的液体或提取液过滤，并减压浓缩至相对密度1.05～1.20的液体，其液体称为减压浓缩液；
(2)将获得的减压浓缩液用碱调pH至6～10，其液体称为调pH后的浓缩液；
(3)将调pH后的浓缩液用正丁醇和乙酸乙酯混合溶剂萃取，所述的混合溶剂中，按体积比，正丁醇∶乙酸乙酯为4∶6～0.5∶9.5；所述的混合溶剂用量为调pH后的浓缩液的1～3倍，萃取次数为1～3次。
(4)萃取得到的正丁醇和乙酸乙酯混合溶剂层用饮用水或纯化水洗涤，所述的饮用水或纯化水的用量为调pH后的浓缩液的1～3倍，洗涤次数为1～2次；
(5)用饮用水或纯化水洗涤后的正丁醇和乙酸乙酯混合溶剂层减压浓缩至相对密度为1.2～1.3的流浸膏，加入50％～95％甲醇或50％～95％乙醇溶解稀释，获得的液体称为稀释液，所述的50％～95％甲醇或50％～95％乙醇的用量为所述的流浸膏的10～50倍。
(6)将稀释液过强碱型阴离子交换树脂，用50％～95％甲醇或50％～95％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，并减压干燥即得所述的蜕皮激素。
在上述方法中，步骤(1)中所述的露水草原料，可以是新鲜的露水草或干燥的露水草。
在上述方法中，步骤(1)中所述的提取，为冷浸提取、温浸提取或热回流提取。
在上述方法中，步骤(2)中所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾。
在上述方法中，步骤(6)中所述的强碱型阴离子交换树脂为201×2型阴离子交换树脂、201×4型阴离子交换树脂、201×7型阴离子交换树脂、201×8型阴离子交换树脂或7170型阴离子交换树脂；或为201×2型阴离子交换树脂、201×4型阴离子交换树脂、201×7型阴离子交换树脂、201×8型阴离子交换树脂、7170型阴离子交换树脂的两种或两种以上型号的阴离子交换树脂的任意组合的阴离子交换树脂。
二、一种蜕皮激素，所述的蜕皮激素是用上述从露水草中提取蜕皮激素的方法制备得到。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、用上述现有技术的常规方法1或常规方法2，均由于蜕皮激素水溶性很好，在乙酸乙酯中的溶解度差，故用乙酸乙酯萃取蜕皮激素极不完全，收率很低，而用常规方法3所用的乙醇-乙酸乙酯混合溶剂萃取蜕皮激素，由于乙醇能与水或乙酸乙酯互溶，导致乙醇有很大部分分配于水中，一部分分配于乙酸乙酯中，使大量蜕皮激素分配于含大量乙醇的水层，使乙醇-乙酸乙酯层萃取蜕皮激素很不完全，收率很低，而本发明用正丁醇-乙酸乙酯萃取蜕皮激素，正丁醇微量分配于水中，分层好，萃取完全，解决了现有工艺萃取很不完全，收率低的问题。实施例表明，取用干燥的露水草时，发明方法的收率在2.01％～2.15％，而常规方法的收率为0.77％～0.85％，发明方法收率比常规方法提高1.16％～1.38％。单用正丁醇作萃取剂时所得到的蜕皮激素杂质含量高、蜕皮激素纯度低为48.3％，而本发明萃取得的蜕皮激素纯度均大于90％，比单用正丁醇作萃取剂时所得到的蜕皮激素的纯度提高41.7％以上。
2、本发明制备方法简单，解决了传统方法乙酸乙酯用量大的问题，整个工艺溶剂用量小，易于工业化生产。

通过下面的具体实施例，可以进一步清楚的了解本发明，但它们不是对本发明的限定。
以下各实施例中无论含水量多少的干燥露水草或新鲜露水草的用量均取100kg。纯化水为蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制得供药用的水，不含任何附加剂。标准来源为《中国药典》2000年版二部附录XVI。实施例1～实施例9为使用本发明方法的实施例，除表1和表2所列具体措施有所不同外，其余方法均与实施例1相同，不再赘述(详见表1和表2)。实施例10和实施例11为对照实施例。
实施例1  本发明的实施例之一
本发明的一种从露水草中提取蜕皮激素的方法按以下步骤进行，本发明所提供的蜕皮激素也按下述方法获得：
(1)取含水量为7％的干燥露水草100kg，加入1000 L水，加水量与露水草的比为10L∶1kg，煎煮2次，每次提取2h，合并提取液，过滤，减压回收水液至相对密度1.10，获得的液体称为减压浓缩液。
(2)获得的减压浓缩液用化学纯的20％碳酸钠调pH至8，其获得的液体称为调pH后的浓缩液；
(3)用工业级的正丁醇和工业级的乙酸乙酯混合溶剂萃取上述调PH后的浓缩液，所述的混合溶剂中，按体积比，正丁醇∶乙酸乙酯＝2∶8，所述的混合溶剂的用量为调PH后的浓缩液的2倍，萃取3次。
(4)萃取得到的正丁醇和乙酸乙酯混合溶剂层用饮用水洗涤2次，所述饮用水的用量为调PH后的浓缩液的2倍。
(5)用饮用水洗涤后的正丁醇和乙酸乙酯混合溶剂层减压浓缩至相对密度1.25的流浸膏，加入85％甲醇溶解稀释，获得的液体称为稀释液，85％甲醇用量是流浸膏的20倍。
(6)稀释液过201×7型阴离子交换树脂，用85％甲醇洗脱，洗脱液浓缩，并减压干燥，得蜕皮激素2.15Kg，蜕皮激素含量按兽药标准检测，其标准号为DB53/兽药034-2000，按该标准中规定的用紫外分光光度法及其检测条件测定其中蜕皮激素含量，得到蜕皮激素含量为91.3％，收率为2.15％。
表1本发明实施例1-4具体措施的区别
  实施例1   实施例2   实施例3   实施例4   步骤  (1)   原料：含水量为  7％的干燥露水  草；  加入1000L水提  取；  水量∶露水草  ＝10L∶1kg；  煎煮2次；  减压浓缩后相对  密度1.10；   原料：含水量为10％的  干燥露水草；  加入500L70％乙醇提  取；  70％乙醇∶露水草＝5L  ∶1kg煎煮2次；  减压浓缩后相对密度  1.15   原料：新鲜露水  草；  加入500L60％甲醇  提取；  60％甲醇∶露水草  ＝5L∶1kg  浸泡3次  减压浓缩后相对  密度1.05   原料：新鲜露水  草；  加入2000L水提  取；  水量∶露水草  ＝10L∶0.5kg  煎煮2次；  减压浓缩后相  对密度1.20   步骤  (2)   用化学纯的20％  碳酸钠调pH至8   用化学纯的10％氢氧  化钠调pH至10   用分析纯的20％碳  酸钾调pH至9   用化学纯的5％  氢氧化钾调pH  至10   步骤  (3)   工业级的正丁  醇∶工业级的乙  酸乙酯＝2∶8；  混合溶剂的用量  为调PH后的浓缩  液的2倍，萃取3  次；   工业级的正丁醇∶化  学纯的乙酸乙酯＝4∶  6；  混合溶剂的用量为调  PH后的浓缩液的2倍，  萃取2次   化学纯的正丁醇  ∶化学纯的乙酸  乙＝3∶7；  混合溶剂的用量  为调PH后的浓缩  液的1倍，萃取3  次。   分析纯的正丁  醇∶分析纯的  乙酸乙酯＝1∶  9；  混合溶剂的用  量为调PH后的  浓缩液的3倍，  萃取3次。   步骤  (4)   用饮用水洗涤2  次，所述饮用水  的用量为调PH后  的浓缩液的2倍。   用纯化水洗涤2次，纯  化水的用量为调PH后  的浓缩液的2倍。   用饮用水洗涤1  次，饮用水的用量  为调PH后的浓缩  液的3倍。   用饮用水洗涤1  次  饮用水的用量  为调PH后的浓  缩液的3倍。   步骤  (5)   减压浓缩至相对  密度1.25的流浸  膏，加入85％甲醇  溶解稀释，85％甲  醇用量是流浸膏  的20倍；   减压浓缩至相对密度  1.30的流浸膏，加入  85％乙醇溶解稀释，85％  乙醇用量是流浸膏的  30倍。   减压浓缩至相对  密度1.28的流浸  膏，加入70％乙醇  溶解稀释，70％乙  醇用量是流浸膏  的15倍。   减压浓缩至相  对密度1.20的  流浸膏，加入  70％甲醇溶解稀  释，70％甲醇用  量是流浸膏的  15倍。
  实施例1   实施例2   实施例3   实施例4   步骤  (6)   过201×7型阴离  子交换树脂，用  85％甲醇洗脱。   过201×4型阴离子交  换树脂，用85％乙醇洗  脱。   过7170型阴离子  交换树脂，用70％  乙醇洗脱。   过201×2型阴  离子交换树脂，  用70％甲醇洗  脱。
表2本发明实施例5-9具体措施的区别
  实施例5 实施例6   实施例7   实施例8   实施例9   步  骤  (1)  原料：新鲜露水 草；加500L 30％ 乙醇提取；乙醇 ∶露水草＝5L ∶1kg；温浸提 取2次；减压浓 缩后相对密度 1.10 原料：含水量为5％的干燥露水草；加1000L 1％甲醇提取；甲醇∶露水草＝10L∶1kg；温浸提取3次：减压浓缩后相对密度1.13   原料：含水量为  8％的干燥露水  草；加800L 1％  乙醇提取，乙  醇∶露水草  ＝8L∶1kg；温  浸提取3次：减  压浓缩后相对  密度1.13   原料：新鲜露  水草；加600L  95％甲醇提  取，甲醇∶  露水草＝6L∶  1kg，热回流  提取2次：减  压浓缩后相  对密度1.18   原料：新鲜露  水草；加700L  95％乙醇提  取，乙醇∶  露水草＝7L∶  1kg，热回流  提取2次：减  压浓缩后相  对密度1.15   步  骤  (2)  用工业级的 20％碳酸氢钠调 pH至6  15％碳酸氢钾调 pH至9   20％碳酸氢钾调  pH至9   用工业级的  10％碳酸氢钠  调pH至7，   用工业级的  10％氢氧化钾  调pH至9，   步  骤  (3)  工业级的正丁 醇∶分析纯的 乙酸乙酯＝0.5 ∶9.5，所述的 混合溶剂的用 量为调PH后的 浓缩液的2倍， 萃取3次。 化学纯的正丁醇∶分析纯的乙酸乙酯＝1∶9，所述的混合溶剂的用量为调PH后的浓缩液的3倍，萃取2次。   化学纯的正丁  醇∶工业级的  乙酸乙酯  ＝3.5-6.5，所  述的混合溶剂  的用量为调PH  后的浓缩液的  2倍，萃取3次。   分析纯的正  丁醇∶化学  纯的乙酸乙  酯＝4∶6，所  述的混合溶  剂的用量为  调PH后的浓  缩液的3倍，  萃取2次。   分析纯的正  丁醇∶化学  纯的乙酸乙  酯＝0.5∶9，所  述的混合溶  剂的用量为  调PH后的浓  缩液的3倍，  萃取3次。   步  骤  (4)  用饮用水洗涤 2次，饮用水的 用量为调PH后 的浓缩液的1 倍。 用纯化水洗涤2次，纯化水的用量为调PH后的浓缩液的1倍。   用纯化水洗涤  1次，纯化水的  用量为调PH后  的浓缩液的2  倍。   用纯化水洗  涤2次，纯化  水的用量为  调PH后的浓  缩液的2倍。   用纯化水洗  涤1次，纯化  水的用量为  调PH后的浓  缩液的3倍。
  实施例5 实施例6   实施例7   实施例8   实施例9   步  骤  (5)  减压浓缩至相 对密度1.23的 流浸膏，加入 80％乙醇溶解稀 释，80％乙醇用 量是流浸膏的 40倍。 减压浓缩至相对密度1.20的流浸膏，加入50％乙醇溶解稀释，50％乙醇用量是流浸膏的50倍。   减压浓缩至相  对密度1.22的  流浸膏，加入  95％乙醇溶解稀  释，95％乙醇用  量是流浸膏的  10倍。   减压浓缩至  相对密度  1.26的流浸  膏，加入50％  甲醇溶解稀  释，50％甲醇  用量是流浸  膏的50倍。   减压浓缩至  相对密度  1.28的流浸  膏，加入95％  甲醇溶解稀  释，95％甲醇  用量是流浸  膏的10倍。   步  骤  (6)  过201×8型阴 离子交换树脂 ， 用80％乙醇洗 脱 过201×8型阴离子交换树脂和201×2型阴离子交换树脂的混合树脂，用50％乙醇洗脱   过201×4型阴   离子交换树脂  和201×7型阴  离子交换树脂  的混合树脂，用  95％乙醇洗脱   过7107型阴  离子交换树  脂和201×2  型阴离子交  换树脂的混  合树脂，用  50％甲醇洗脱   过201×2型  阴离子交换  树脂和201×  4型阴离子交  换树脂的混  合树脂，用  95％甲醇洗脱
表3本发明实施例1-9的蜕皮激素含量和收率
  实施例   原料   蜕皮激素的含量   蜕皮激素的收率   实施例1   含水量7％为干燥露水草   91.3％   2.15％   实施例2   含水量10％为干燥露水草   90.4％   2.03％   实施例3   新鲜露水草   92.4％   0.48％   实施例4   新鲜露水草   93.8％   0.61％   实施例5   新鲜露水草   92.4％   0.43％   实施例6   含水量为5％的干燥露水草   93.1％   2.12％   实施例7   含水量为8％的干燥露水草   92.3％   2.01％   实施例8   新鲜露水草   92.8％   0.55％   实施例9   新鲜露水草   91.7％   0.57％
实施例10对照1
1、常规方法1：取干燥露水草100kg(含水量7％)，加入1000kg水，加水量与露水草的比为10L∶1kg，煎煮2次，每次提取2h，合并提取液，过滤，减压回收水液至相对密度1.25，获得水膏，加入95％乙醇除水膏中的糖分等杂质，乙醇上清液经过滤，减压浓缩至相对密度1.10，所得的乙醇浓缩膏再用3倍量于浓缩膏的工业乙酸乙酯萃取4次，乙酸乙酯层减压浓缩至有沉淀析出，静置，过滤，沉淀浓缩干燥，得蜕皮激素0.82Kg，蜕皮激素含量为92.1％，收率0.82％。蜕皮激素含量按兽药标准检测，其标准号为DB53/兽药034-2000，其测定方法为紫外分光光度法。
2、常规方法2：取干燥露水草(含水量10％)100kg，加入500kg70％乙醇，加乙醇量与露水草的比为5L∶1kg，热回流2次，每次提取2h，合并提取液，过滤，减压回收提取液至相对密度1.15，所得的乙醇浓缩膏再用3倍量于浓缩膏的工业乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯层减压浓缩至有沉淀析出，静置，过滤，沉淀浓缩干燥，得蜕皮激素0.77Kg，蜕皮激素含量为91.7％，收率0.77％。蜕皮激素含量按兽药标准检测，其标准号为DB53/兽药034-2000，其测定方法为紫外分光光度法。
3、常规方法3：取干燥露水草100kg(含水量7％)，加入1000kg水，加水量与露水草的比为10L∶1kg，煎煮2次，每次提取2h，合并提取液，过滤，减压回收水液至400Kg过滤，滤液用200KgAB-8大孔吸附树脂吸附，先用600Kg饮用水洗脱，再用400Kg80％乙醇洗脱，乙醇洗脱液减压浓缩至相对密度1.10，所得的乙醇浓缩膏再用3倍量于浓缩膏的工业乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯层减压浓缩至有沉淀析出，静置，过滤，沉淀浓缩干燥，得蜕皮激素0.85Kg，蜕皮激素含量为92.3％，收率0.85％。蜕皮激素含量按兽药标准检测，其标准号为DB53/兽药034-2000，其测定方法为紫外分光光度法。
实施例11对照2
为进一步证明本发明的创造性和优点，我们在此实施例只用正丁醇作为萃取剂作为对照实验。
本实施例除所用萃取剂用正丁醇代替实施例1步骤(3)所用的正丁醇和乙酸乙酯的混合萃取剂外，其余操作步骤、试剂及用量等均与实施例1相同，不再赘述。其实验结果为：单用正丁醇作萃取剂时所得到的蜕皮激素杂质含量高、蜕皮激素纯度低仅为48.3％，而实施例1萃取得的蜕皮激素纯度为91.3％，比单用正丁醇作萃取剂时所得到的蜕皮激素的纯度提高43％。
本发明实施例与实施例10的蜕皮激素收率对比
 干燥露水草   蜕皮激素  含量(％)   蜕皮激素收率  (％)   蜕皮激素收率(％)  比常规方法1-3提高  实施例1  含水量7％   91.3   2.15   1.30-1.38  实施例2  含水量10％   90.4   2.03   1.18-1.26-  实施例6  含水量为5％   93.1   2.12   1.27-1.36  实施例7  含水量为8％   92.3   2.01   1.16-1.24  常规方法1   含水量7％   92.1   0.82
 干燥露水草   蜕皮激素  含量(％)   蜕皮激素收率  (％)   蜕皮激素收率(％)  比常规方法1-3提高  常规方法2   含水量10％   91.7   0.77  常规方法3   含水量7％   92.3   0.85
以上实施例还表明：
1、正丁醇和乙酸乙酯均可以是工业级或化学纯或分析纯的产品或者这些品级的产品的任意组合，并不影响提取蜕皮激素的收率。
2、用新鲜的露水草或干燥的露水草为原料均不影响提取蜕皮激素的收率。
3、所述的碱，如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾可以是工业级或化学纯或分析纯及其任意组合，并不影响提取蜕皮激素的收率。只要能将pH调到所要求的pH值即可，因此，所述的碱，如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾的浓度大小也不影响提取蜕皮激素的收率。