技术领域
[0001] 本
发明属于农业
害虫生物防治领域，特别涉及开臂反颚茧蜂的人工繁殖生产方法。
背景技术
[0002] 果蝇属于果蝇科，
双翅目环裂亚目有缝组无瓣类中的1科。世界性分布，目前已知约2500余种，分隶于横眼果蝇亚科与果蝇亚科的57属。中国迄今有记录者计17属180 余种。其中
黑腹果蝇Drosophila melanogaster是生物学研究中最重要的模式生物之一。同时，果蝇食性非常广泛，可为害多种瓜果蔬菜，从而成为了农业上，尤其是果蔬业上的重要害虫。
近年来，果蝇，特别是发源于东南亚的班翅果蝇，对果蔬的危害不断扩大，目前已蔓延到欧洲、北美洲、南美洲等30多个国家和地区。果蝇发育历期短、繁殖能
力强，其幼虫常在果实内取食，常规的防治方法难以防治，且容易破坏生态环境，不利于农业可持续发展。在我国，果蝇严重危害南方杨梅种植区杨梅的品质与产量。在杨梅上，果蝇的危害具有爆发性。6月上旬开始，杨梅果蝇便从附近瓜田、菜地及其他果园迁向杨梅园；6月中旬虫口数量渐增；至6月下旬采收时达到高峰。在杨梅成熟采收期，雌性果蝇产卵于杨梅果实乳柱上，幼虫在果实内部取食为害的过程中，还会引发
真菌、细菌等病害，造成二次侵染。杨梅成熟采收季时间短，果实为浆果，不易清洗，采用传统的
化学防治喷施
农药后将直接影响杨梅果实安全性，因而
生物防治显得尤为重要。
[0003] 寄生性昆虫，特别是寄生蜂，是一类寄生于其他昆虫及
节肢动物的膜翅目昆虫，是一类农林害虫的重要天敌。利用天敌控制害虫是害虫综合治理的重要手段之一。科学家们通过保护天敌、释放天敌等不同的手段增强天敌控制害虫的能力。其中天敌的大量释放涉及天敌的种群繁育。公告号为CN102578052A的中国
专利申请公开了属于天敌昆虫人工饲养技术的一种杨梅园黑腹果蝇及其蛹期寄生蜂蝇蛹金小蜂的人工饲养方法；公告号为CN105794728A和CN107439491A的中国专利申请分别公开了果蝇蛹期寄生蜂毛
角锤角细蜂室内繁殖的方法和加强果蝇类蛹期寄生蜂人工繁育生产方法。以上三个专利申请都只是涉及果蝇蛹期寄生蜂室内繁殖，而没有涉及幼虫期寄生蜂人工饲养方法。
[0004] 茧蜂科Braconidae开臂反颚茧蜂属Asobara是一类重要的果蝇幼虫寄生蜂，其在欧洲、北美、南美洲、澳大利亚、日本等地均有报道和研究，但是我国关于果蝇该属寄生蜂的研究比较少。2016年，首次在
云南发现开臂茧蜂属5个新种，分别是Asobara brevicauda、A.elongata、A.mesocauda、A.unicolorata和A.triangulata。
申请人在系统调查浙江省杭州市、台州市、温州市、宁波市杨梅果园果蝇天敌种类的
基础上，在台州、温州和宁波市等地均发现一种杨梅果蝇寄生蜂优势种，经形态和COI分子鉴定为日本开臂反颚茧蜂A.japonica。作为幼虫寄生蜂，将其与蛹期寄生蜂同时在果园同时释放，处于幼虫期和蛹期的果蝇均有被寄生的可能性，这样能减少果园放蜂次数，减小防治成本，有效的防治果蝇，避免果蝇的再次危害。但是目前尚未见对开臂反颚茧蜂A.japonica规模化繁殖及果园大面积应用等方面的报道。
[0005] 因此，鉴于开臂反颚茧蜂潜在控制和应用价值，本发明提出开臂反颚茧蜂人工繁殖饲养的方法。
发明内容
[0006] 本发明要解决的技术问题是，克服
现有技术中的不足，提供一种开臂反颚茧蜂的人工繁殖生产方法。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明的解决方案是：
[0008] 提供一种开臂反颚茧蜂人工繁殖生产方法，包括下述步骤：
[0009] (1)蜂种采集
[0010] 收集被开臂反颚茧蜂寄生的果蝇，置于
温度为25±1℃、
相对湿度RH为50％的恒温箱中发育；待开臂反颚茧蜂从被寄生的果蝇蛹中
羽化出蜂后，转入装有寄生蜂食物的培养管中，饲养于温度为16±1℃、RH 50％的恒温箱饲养，充分补充营养和糖分；
[0011] (2)寄主接种繁殖
[0012] 将羽化一周左右且充分交配的成年果蝇转入装有果蝇食物的培养瓶中，在25±1℃
培养箱中培育至产卵200-300头后取出果蝇；将带有果蝇卵的培养瓶置于25±1℃、RH 为50％的恒温箱中培养，观察并记录果蝇卵的数量和发育情况；
[0013] (3)开臂反颚茧蜂接种；
[0014] 待步骤(2)中果蝇卵孵化1-2天后，按雌蜂和果蝇卵1∶20的比例，选取步骤(1) 中饲养的开臂反颚茧蜂中的雌蜂，转入果蝇培养瓶中；观察开臂反颚茧蜂对果蝇卵进行寄生，6小时后取出寄生蜂；
[0015] (4)开臂反颚茧蜂培养和收集
[0016] 将步骤(3)中被寄生的果蝇卵置于25±1℃、RH为50％的恒温箱中培养中，待寄生蜂在寄主体内发育至18天时陆续开始羽化，收集羽化的开臂反颚茧蜂；
[0017] (5)蜂种保存
[0018] 将步骤(4)中收集到的开臂反颚茧蜂放入装有寄生蜂食物的培养管中，培养管置于16±1℃、RH 50％的恒温箱内保存，每管80-100头，用于下次育种时的接种。
[0019] 本发明中，在步骤(3)中进行接种时，要保证开臂反颚茧蜂处于羽化期，果蝇处于1-2龄幼虫期。
[0020] 本发明中，所述果蝇是黑腹果蝇Drosophila melanogaster、斑翅果蝇D.suzukii，或者是黑果蝇D.virilis。
[0021] 本发明中，所述的开臂反颚茧蜂是下述的任意一种：日本开臂反颚茧蜂A.japonica，或者是开臂反颚茧蜂Asobara brevicauda、开臂反颚茧蜂A.elongata、开臂反颚茧蜂A. mesocauda、开臂反颚茧蜂A.unicolorata、开臂反颚茧蜂A.triangulate、开臂反颚茧蜂 A.rufescens、开臂反颚茧蜂A.pleuralis、开臂反颚茧蜂A.rossica。
[0022] 本发明中，在培养瓶中放置
滤纸盒，滤纸盒中装有寄生蜂食物；在步骤(3)中进行接种前，先将步骤(1)中饲养的开臂反颚茧蜂以CO2麻醉，选取雌蜂移至培养瓶中，备用。
[0023] 本发明中，所述寄生蜂食物的配制方法为：
[0024] 取27g琼脂加入1000ml
水中，充分搅拌混匀后，120℃高温
蒸汽灭菌，然后加入 33g红糖和330ml纯苹果汁，充分搅拌混匀后自然冷却至60℃，将100g尼泊金甲酯溶于900ml的95％
乙醇中，然后加入冷却好的混合物中，充分搅拌混匀，4℃冷藏备用。
[0025] 本发明中，所述果蝇食物的配制方法为：
[0026] 取干
酵母120g，以1000ml温水溶解，称取玉米粉318.75g、琼脂57g、蛋白胨 60g，红糖90g、
葡萄糖180g、酵母提取物60g加入5000ml温水中充分搅拌混匀后加入已溶解的1000ml酵母液，加热并搅拌；待混匀物煮熟时依次加入1.5g MgSO4·7H2O和1.5g CaCl2·
2H2O，煮沸后自然冷却至50-60℃，加入180ml尼泊金甲酯溶液和丙酸50ml，搅拌均匀，冷却6～7h后，用纱布密封，放入4℃
冰箱冷藏备用；所述尼泊金甲酯溶液是以100g尼泊金甲酯溶于900ml 95％乙醇而成。
[0027] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0028] 1、本发明提供的技术方案完善了果蝇优势蜂种田间诱集和繁蜂技术，实现优质、高效、大批量繁殖日本开臂反颚茧蜂；
[0029] 2、本发明所述果蝇寄生蜂诱捕装置与现有的寄生蜂诱捕装置相比，材料简单，制作简便，成本低廉，能适应不同生境、不同时间、不同种类寄生蜂的诱捕。本装置底部利器盒盖因有开合的缝隙适合排水，无需特异添加
排水管。本装置盒盖的红色与盒体的黄色，在田间对果蝇和寄生蜂有很好的诱集效果，从而提高诱集效率，同时便于作业人员在果园发现回收；
[0030] 3、本发明所述的生产接种过程中，尽量使寄主黑腹果蝇幼虫龄期一致，与日本开臂反颚茧蜂寄生龄期相吻合，为寄生蜂的寄生及在寄主体内发育提供了更多机会，从而提高寄生效率；
[0031] 4、本发明所述的生产接种过程中，优化日本开臂反颚茧蜂接种方法，尽量保证日本开臂反颚茧蜂存活率和寄生活力，为寄生蜂的寄生、产卵提供了更多机会，从而提高了产卵量和寄生率；
[0032] 5、本发明所述的日本开臂反颚茧蜂寄生范围广，除黑腹果蝇外，其在室外诱捕蜂种同时还发现其寄生果蝇属其他品种，如斑翅果蝇D.suzukii，或者是黑果蝇D.virilis 等，这些果蝇可作为日本开臂反颚茧蜂替代寄主。
[0033] 6、本发明所述的日本开臂反颚茧蜂人工繁殖方法，同样适用于其近缘种如开臂反颚茧蜂Asobara brevicauda、开臂反颚茧蜂A.elongata、开臂反颚茧蜂A.mesocauda、开臂反颚茧蜂A.unicolorata、开臂反颚茧蜂A.triangulate、开臂反颚茧蜂A.rufescens、开臂反颚茧蜂A.pleuralis、开臂反颚茧蜂A.rossica。
[0034] 7、本发明生产方法能够进行大规模连续生产，应用于农业害虫防治领域，不仅能用于防治杨梅果园果蝇，同时也适用于其他果蝇危害的果园特别是
蓝莓等浆果类果园，从而更大程度上满足农业生产需要，为果园害虫的生物治提供了很大便利。
附图说明
[0035] 图1为本发明中果蝇寄生蜂诱捕装置结构示意图。
[0036] 附图标记：1
铁丝；2中空堵塞部件；3盒身；4通气孔；5盒盖；6排水缝。
[0037] 图2为本发明中培养瓶的示意图。
[0038] 附图标记：11瓶塞；12果蝇培养瓶；13滤纸盒；14寄生蜂食物。具体实施方案
[0039] 下面结合附图，通过实施案例的描述，对本发明具体实施方式作进一步详细说明，以帮助本领域的技术人员对发明的技术方案有更完整、准确和深入的了解。
[0040] 本
实施例以日本开臂反颚茧蜂A.japonica的田间诱集和室内人工繁殖为例：
[0041] (1)蜂种采集
[0042] (A)果蝇寄生蜂诱捕装置如图1所示，包括用于放置诱饵和容纳果蝇寄生蜂的中空利器盒(由红色的盒盖5和黄色的盒身3组成)，内部空间用于放置诱饵和容纳果蝇寄生蜂，盒身3的
侧壁上开设多个通气孔4。盒盖5位于下方，其中心设一个直径约0.2 cm左右小孔。盒身3顶部设铁丝1和中空堵塞部件2，后者用于防止铁丝1脱落。铁丝 1穿过中空堵塞部件2后，再穿过盒盖5中心的小孔。
[0043] (B)杨梅果园诱集果蝇寄生蜂：选择4-6月份在浙江省杨梅主要产区宁波、台州、温州等地杨梅果园进行果蝇寄生蜂诱捕。此时极端天气相对较少，晴天相对较多且昆虫较为活跃，在果园开花
植物较多的处放置诱捕装置，装置悬挂于离地面约70-90cm。每个果园放置50个诱捕装置，装置内装有香蕉、葡萄和哈密瓜等水果作为诱饵，三周后对装置进行回收。
[0044] (C)寄生蜂食物配置：取27g琼脂加入1000ml水中，充分搅拌混匀后，120℃高温蒸汽灭菌，然后加入33g红糖和330ml纯苹果汁，充分搅拌混匀后自然冷却至60℃，将100g尼泊金甲酯溶于900ml的95％乙醇中，然后加入冷却好的混合物中，充分搅拌混匀，4℃冷藏备用。
[0045] (D)收集被日本开臂反颚茧蜂寄生的黑腹果蝇，置于温度为25±1℃，RH为50％的恒温箱(MLR-352H，三洋SANYO)中发育，待日本开臂反颚茧蜂从被寄生的果蝇蛹中羽化出蜂后，转入装有寄生蜂食物的培养管中，饲养于温度为16±1℃、RH 50％的恒温箱(MLR-352H，三洋SANYO)饲养，充分补充营养和糖分。
[0046] (2)寄主接种繁殖
[0047] (A)黑腹果蝇食物配制：取干酵母120g，以1000ml温水溶解，称取玉米粉318.75 g、琼脂57g、蛋白胨60g，红糖90g、葡萄糖180g、酵母提取物60g加入5000ml 温水中充分搅拌混匀后加入已溶解的1000ml酵母液，加热并搅拌；待混匀物煮熟时依次加入1.5g MgSO4·7H2O和1.5g CaCl2·2H2O，煮沸后自然冷却至50-60℃，加入180ml 尼泊金甲酯溶液(以100g尼泊金甲酯溶于900ml 95％乙醇而成)和丙酸50ml，搅拌均匀，冷却6～7h后，用纱布密封，放入4℃冰箱冷藏备用。
[0048] (B)取200头羽化一周左右且充分交配的黑腹果蝇，以CO2麻醉后转入装有步骤 (A)中果蝇食物的培养瓶中，在25±1℃培养箱中产卵200-300头后取出果蝇；
[0049] (C)将步骤(B)中带有果蝇卵的培养瓶置于25±1℃，RH为50％的恒温箱中培养，观察并记录果蝇卵数量及发育情况。
[0050] (3)日本开臂反颚茧蜂接种；
[0051] (A)待步骤(2-C)中果蝇卵孵化1-2天后，从步骤(1-D)饲养的日本开臂反颚茧蜂按雌蜂和果蝇卵1：20的比例选取一定数量的雌蜂，以CO2麻醉后放入培养瓶中；培养瓶提前准备好，瓶中放置4cm×4cm×2cm的滤纸盒，在滤纸盒中放入一小
块寄生蜂食物(如图2)；其的是为寄生蜂苏醒提供缓冲区，以免寄生蜂粘到果蝇食物上影响寄生效率，同时在寄生过程中为其提供食物补充营养。
[0052] (B)将步骤(A)中滤纸小盒转入果蝇培养瓶中，观察日本开臂反颚茧蜂对黑腹果蝇卵进行寄生，6小时后取出寄生蜂。
[0053] (4)日本开臂反颚茧蜂培养和收集
[0054] (A)将步骤(3-B)中被寄生的黑腹果蝇卵置于25±1℃，RH为50％的恒温箱中培养中，定期清理未成功寄生而变为成虫的果蝇，便于后期寄生蜂收集。待寄生蜂在寄主体内发育至18天时(此时被寄生的寄主处于蛹期)，寄生蜂陆续开始羽化，收集羽化的寄生蜂。
[0055] (5)蜂种保存
[0056] 将步骤(4)中收集到的日本开臂反颚茧蜂放入装有步骤(1-C)寄生蜂食物的培养管中，培养管置于16±1℃、RH 50％的恒温箱内保存，每管80-100头左右，用于下次育种时的日本开臂反颚茧蜂接种。
[0057] 该方法通过饲养黑腹果蝇获得了果蝇幼虫，日本开臂反颚茧蜂在果蝇幼虫上接蜂、寄生蜂发育羽化，寄生蜂成蜂饲养等步骤成功繁育可控制杨梅园黑腹果蝇的日本开臂反颚茧蜂。由于该寄生蜂同时寄生果蝇属其他果蝇品种，实现该寄生蜂的连续饲养，可向果蝇危害严重的杨梅园、蓝莓园等浆果果园提供大量寄生蜂，以减轻果蝇对杨梅、蓝莓等作物造成的危害。本发明的日本开臂反颚茧蜂人工饲养方法简单易行，工作量小，特别适合室内大量饲养日本开臂反颚茧蜂，为果园果蝇生物防治提供了很好的技术基础。
[0058] 最后，需要注意的是，以上列举的仅是本发明的具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有很多
变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容中直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
