1、技术领域

本发明涉及一种主要由甘草酸或其药学上可接受的盐、人参或其提取物和灵芝或其提取物制成的药物 组合物及其制备方法，属于医药技术领域。

2、背景技术

肝炎是常见的严重传染病之一，其中以病毒性肝炎为主。据不完全统计，目前我国人群中有8～10％ 为乙肝病毒携带者，且每年仍有相当数量的新患者增加。病毒性肝炎从类型上可分为：急性肝炎、慢性肝 炎、重症肝炎和胆性肝炎。肝纤维化是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时，肝脏内纤维结构结缔组织异常增 生的病理过程，轻者称为肝纤维化，重者进而使肝小叶结构改建，假小叶及结节形成，形成肝硬化。目前 虽然治疗肝病的药物有许多种，但由于肝病的发病机制未完全阐明，多为改善肝脏功能，促进肝细胞再生， 增强肝脏的解毒能力等功能的药物。目前迫切需要一种标本兼治，攻补兼施的药物。

甘草酸为豆科植物甘草、光果甘草、胀果甘草的根及根茎的精制提取物。由甘草精制提取的甘草酸有 皮质激素样作用，能提高肝炎病人血清氢化可的松的浓度，降低慢性肝炎患者血清及外周单个核细胞中白 介素-6和肿瘤坏死因子，减轻免疫病理反应，促进肝功能恢复，清除症状，缩小肝脾肿大，降酶快，退 黄疸显著。甘草酸单铵和甘草酸二铵为甘草酸的单铵盐和二铵盐，甘草酸单铵对各型急慢性肝炎、肝纤维 化，中毒性肝炎、外伤性肝炎以及癌症有一定的辅助治疗作用。甘草酸二铵为20β-羧基-11氧代正齐墩果 烷-12-烯-3β基-2-β-D-葡萄吡喃糖苷醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸二铵盐，按干燥品计，含C42H68N2O16 应为97.0％～103.0％，具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用，可阻碍可的松与醛固酮的 灭活，从而发挥类固醇样作用，但无皮质激素的不良反应。

人参为五加科植物人参(PanaxginsengC.A.Mey.)的干燥根及根茎，以其根部入药，具有“大补元气， 固脱生津，安神益智”等良好作用，是著名的珍贵药材。经国内外学者研究证实，人参中含人参总皂苷、 人参多糖、人参挥发油等有效成分，现代医学及药理实验研究证实：人参具有增强机体抵抗力，调整机体 的功能，促进物质代谢，调节中枢神经和内分泌等作用，人参还具有加速肝脏排毒的功能，保护肝脏，抑 制肝纤维增生的作用。

灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Ley-ss.ex Fr.)Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao， Xu etZhang的干燥子实体。性甘，平，归心、肺、肝、肾经。具有补气安神，止咳平喘之功效，主要用于 眩晕不眠，心悸气短，虚劳咳嗽。灵芝是家喻户晓的中药，俗称“仙草”。始载于《神农本草经》，被认 为能“益心气”“安精魂”“补肝益气”“坚筋骨”，列为上品。灵芝的化学成分复杂，目前已知含有多 糖(肽)类、三萜类、核苷类、生物碱、氨基酸及微量元素等，多糖类化合物是灵芝所含主要化学成分之 一。灵芝的应用非常广泛。其根本原因就在于灵芝具有扶正固本，增强免疫功能，提高机体免疫力的巨大 作用。在整体上双向调节人体机能平衡，调节机体内部活力，调节人体新陈代谢机能，提高自身免疫力， 促进内脏或器官机能正常化。

目前利用甘草酸或其药学上可接受的盐、人参或其提取物和灵芝或其提取物的相互作用，配伍组方， 用于治疗肝炎方面的药物，尚未见报道。

3、发明内容

为了满足临床需要，更好的治疗肝脏疾病，提高人民健康水平，本发明提供了一种药物组合物及其制 备方法，主要由甘草酸或其药学上可接受的盐、人参或其提取物和灵芝或其提取物制备而成，在用于制备 治疗肝炎、防治肝纤维化、肝硬化等方面，产生了意想不到的效果。

本发明药物组合物，主要由甘草酸或其药学上可接受的盐、人参或其提取物和灵芝或其提取物制备而 成，其重量份数为：甘草酸或其药学上可接受的盐4～800份、人参250～16000份、灵芝500～20000份； 优选为：甘草酸或其药学上可接受的盐10～400份、人参500～8000份、灵芝2000～10000份；最优为： 甘草酸或其药学上可接受的盐20～200份、人参1000～4000份、灵芝4000份。

上述药物组合物中的原药材可以用适宜的溶剂和方法单提或混提制备得到提取物，总提取物再与甘草 酸或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。得到的总提取物的主要的有效成分 为：人参多糖或皂苷、灵芝多糖，总提取物中主要有效成分的总含量不低于30％。

上文所述的人参可以用适宜的溶剂经过提取加工得到人参提取物，提取溶剂优选水或乙醇，提取方法 可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法，提取物的有效成分为人参总皂苷或人参多糖。

人参的提取方法也可参照文献方法制备：如人参总皂苷可根据中国专利申请CN00110418.7制备，人 参多糖可根据中国专利申请CN200410000209.4制备。

本发明提供了人参的优选提取工艺，具体过程如下：

以人参多糖为主要有效成分的优选提取制备工艺如下：

取人参药材，切碎，用75％乙醇，回流提取4小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液， 加入0.3％活性炭，搅拌30分钟，静置过夜，滤过，滤液过树脂柱，收集流出液，减压浓缩，加乙醇使含 醇量达95％，冷藏，滤过，取沉淀用丙酮洗涤，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎即得。

通过本工艺制备的人参多糖的含量不低于50％，得率为0.5～2％。

人参多糖还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法：

方法一：取人参，切碎，加水回流提取三次，每次2小时，第一次加水10倍量，二、三次为8、8倍 量，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.16～1.24，过大孔树脂柱，收集流出液，减压浓缩至 稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制备的人参多糖的含量不低于40％，得率为4～6％。

方法二：取人参，切碎，用80％乙醇，回流提取3小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮三次，每次1.5 小时，加水10倍量，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.20，过大孔树脂，流出液减 压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的人参多糖含量不低于45％，得率为2～4％。

以人参总皂苷为主要有效成分的优选提取制备工艺，具体如下：

取人参药材，粉碎成细粒，加10倍量乙醇回流提取二次，每次3小时，合并提取液，冷藏，滤过，滤 液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液加于已处 理好的大孔树脂柱上，先用2V～3V柱体积的水进行洗脱，弃去水洗液，再用3倍柱体积的80％乙醇洗脱， 收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。

通过本工艺制备得到的人参总皂苷得率为1～2％，人参总皂苷含量不低于50％，人参皂苷Re、人参皂 苷Rg1含量不低于30％。

人参总皂苷还可由如下工艺制备，但不仅限于下述方法：

方法一：取人参药材，粉碎成细粒，加乙醇回流提取二次，每次4小时，每次加醇10倍量，合并提 取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水稀释至相对密度为1.15～1.20，加1/2倍量水饱和 正丁醇提取3次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的人参总皂 苷得率为4～5％，人参总皂苷含量不低于35％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量和不低于20％。

方法二：取人参药材，粉碎成细粒，加乙醇回流提取三次，第一次加醇10倍量，二、三次为8、8倍 量，每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量，搅匀，冷藏，滤过，滤液加 1/2倍量水饱和正丁醇提取3次减压浓缩，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，喷雾干燥即得。通 过本工艺制备的人参总皂苷得率为3～5％，人参总皂苷含量为不低于40％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含 量和不少于20％。

上文所述的灵芝可以用适宜的溶剂经过提取加工得到灵芝多糖，其中的溶剂优选水或乙醇，灵芝的提 取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。如可通过水提醇沉制备得到灵芝多糖。

本发明提供了灵芝的优选提取制备工艺(以灵芝多糖为主要有效成分)，具体如下：

取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水3倍量润湿过夜，次日煎煮三次，第一次3小时加水12倍量，第二 次2小时加水10倍量，第三次1小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06， 放冷，加乙醇使含醇量为65％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇 使含醇量为80％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过， 滤液浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制备的灵芝多糖得率为0.5～3％，灵芝多糖的含量不低于50％。

除采用上述方法外，灵芝还可通过以下方法制备，但不仅限于下述方法：

方法一：取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水煎煮三次，第一次3小时加水12倍量，第二、三次2小时 加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.03～1.08，放冷，加乙醇使含醇量为65％，搅匀， 在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇使含醇量为80％，搅匀，在4℃放置24 小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得。 通过本工艺制备的灵芝多糖得率为5～8％，灵芝多糖的含量不低于30％。

方法二：取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水3倍量润湿过夜，次日煎煮二次，第一次3小时加水12倍 量，第二次2小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，放冷，加乙醇使含 醇量为70％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇使含醇量为85％， 搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏 状，喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的灵芝多糖得率为3～6％，灵芝多糖的含量不低于40％。

本发明药物组合物除可用上述药材直接投料制得外，还可以由甘草酸或药学上可接受的盐和人参的提 取物、灵芝的提取物投料制成，人参多糖含量不低于40％，最好不低于50％，或者人参总皂苷含量不低于 35％，最好不低于50％，其中的人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量和不低于20％，最好不低于30％；灵芝多 糖含量不低于30％，最好不低于50％。按照提取物相对于药材的得率计算，可以有以下两种不同配比，其 重量份数分别为：

配比1：甘草酸或其药学上可接受的盐4～800份、人参多糖2～40份、灵芝多糖10～600份；优选为： 甘草酸或其药学上可接受的盐10～400份、人参多糖5～20份、灵芝多糖30～200份；最优为：甘草酸或 其药学上可接受的盐20～200份、人参多糖10份、灵芝多糖60份。

配比2：甘草酸或其药学上可接受的盐4～800份、人参总皂苷10～160份、灵芝多糖10～600份；优 选为：甘草酸或其药学上可接受的盐10～400份、人参总皂苷20～80份、灵芝多糖30～200份；最优为： 甘草酸或其药学上可接受的盐20～200份、人参总皂苷40份、灵芝多糖60份。

以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为 单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的 比例不变。

以上组成，若以克为单位，可以制成100～10000次用量的制剂，如作为注射剂，可制成100～10000支， 每次用量1～10支。如作为片剂，可制成100～10000片，每次服用1～10片。

以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减 少不超过100％。

本发明药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具 有较好疗效。

本发明药物组合物，甘草酸药学上可接受的盐为金属盐或有机氮盐，金属盐可以是钠盐、钾盐、镁盐、 钙盐、锌盐，有机氮盐优选甘草酸单铵和甘草酸二铵。

本发明提供了一种用于制备治疗肝脏疾病方面的药物。本发明药物组合物具有抗肝炎，防治肝纤维化、 肝硬化作用，甘草酸能提高肝炎病人血清氢化可的松的浓度，降低慢性肝炎患者血清及外周单个核细胞中 白介素-6和肿瘤坏死因子，减轻免疫病理反应，促进肝功能恢复，清除症状，缩小肝脾肿大，降酶快， 退黄疽，其衍生的盐甘草酸单铵对各型急慢性肝炎、肝纤维化，中毒性肝炎、外伤性肝炎以及癌症有一定 的辅助治疗作用，甘草酸二铵具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用，可阻碍可的松与醛固 酮的灭活，从而发挥类固醇样作用，但无皮质激素的不良反应，人参具有加速肝脏排毒的功能，保护肝脏， 抑制肝纤维增生的作用，灵芝具有扶正固本，增强免疫功能，提高机体免疫力的巨大作用。三药配伍组方 共同发挥治疗肝炎，保护肝脏等作用，用于治疗肝炎，防治肝纤维化、肝硬化方面有意想不到的好效果。

本发明的药物组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服、鼻吸入或肠胃外给药的方式施 用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、软胶囊、分散片、 口服液、颗粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊，制成液体制剂如水或油 悬浮剂或其它液体制剂如糖浆等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油悬浮剂等，如水 针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。本组合物优选的剂型是注射剂或口服制剂。

本发明的药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受 的载体。所述的载体包括药学领域常规的赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面 活性剂、吸附载体、润滑剂等。

本发明的药物组合物在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯80等增溶剂。输液中 可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木 糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。

本发明经过药效动物实验研究结果表明，由甘草酸或其药学上可接受的盐、人参或其提取物和灵芝或 其提取物制成的药物，对四氯化碳(CCl4)中毒致大鼠急性肝损伤有保护作用，使肝脏的ALT和AST有 明显的恢复作用；对四氯化碳(CCl4)中毒小鼠的肝、脾指数有很好的降低作用；对鸭感染的DHBV病毒 有明显抑制的作用；对小鼠肝纤维化后血清生化指标有明显的恢复作用，使血清ALT、AST、TP含量降 低，Alb、A/G明显升高，有明显的抗肝纤维化的作用。本发明实验研究结果表明，甘草酸或其药学上可 接受的盐、人参或其提取物和灵芝或其提取物合并用药呈协同作用，药效明显增强。

本发明组合物具有以下优点：

(1)提供了一种用于治疗肝脏疾病的药物组合物及其制备方法，满足了临床急需；

(2)首次对本发明组合物的相互作用和配伍组方进行了药效学研究，发现了组合物具有明显的抗肝 炎、肝纤维化作用，对四氯化碳(CCl4)中毒致大鼠急性肝损伤有保护作用，使肝脏的ALT和AST有明 显的恢复作用，对四氯化碳(CCl4)中毒小鼠的肝、脾指数有很好的降低作用，对鸭感染的DHBV病毒有 明显抑制的作用，对小鼠肝纤维化后血清生化指标有明显的恢复作用，使血清ALT、AST、TP含量降低， Alb、A/G明显升高，有明显的抗肝纤维化的作用；上述各实验组中，组合物实验组与单用甘草酸二铵或 甘草酸单铵组或人参多糖组或人参总皂苷组或灵芝多糖组相比，统计学差异均显著(p＜0.05)，表明甘草 酸或其药学上可接受的盐、人参或其提取物和灵芝或其提取物三药合用抗肝炎、抗肝纤维化效果显著，其 结果是本技术领域的普通技术人员所意想不到的；

(3)对本发明组合物各配比进行了药效学研究，得出了本发明组合物的最优配比；

(4)本发明可以以原料或提取物直接投料，制备工艺简单，不同批次药品间质量差异小，药品质量 更均匀稳定；

(5)进行的急性毒性实验表明本发明药物组合物注射液的最大耐受量相当于50kg体重人日最大用量 20ml的100倍，表明了本发明药物组合物低毒，安全性高；

(6)进行的稳定性实验表明本发明药物组合物注射液各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全；

(7)本发明组合物三药合并用药疗效确切，且减小了相对用药剂量，具有广泛的应用前景。

以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果。下列实验例中：甘草酸单铵或甘草酸二铵、 人参多糖和灵芝多糖的组合物以下简称 甘参芝组合物I，甘草酸单铵或甘草酸二铵、人参总皂苷和灵芝多 糖的组合物以下简称 甘参芝组合物Ⅱ。实验例中所用的人参多糖取自实施例1，人参总皂苷取自实施例2， 灵芝多糖取自实施例3。

实验例1  甘参芝组合物合并用药药效研究-对四氯化碳(CCl4)致大鼠急性肝损伤的保护作用

供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，市购；

模型组：CCl4注射液，自制；

甘草酸二铵组：甘草酸二铵注射液10ml：150mg，自制；

人参多糖组：人参多糖注射液，自制；

人参总皂苷组：人参总皂苷注射液，自制；

灵芝多糖组：灵芝多糖注射液，自制；

甘参芝组合物注射液I组，自制(制备方法参见实施例5)；

甘参芝组合物注射液II组，自制(制备方法参见实施例5)。

受试动物：Wistar大鼠，体重200～220g，240只，随机分为24组。

试剂盒：谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)试剂盒，市购，卫生部上海生物制品研究所。

实验方法：取大鼠240只，随机分为24组，分别为空白对照组、模型组、甘草酸二铵组、人参多糖组、 人参总皂苷组、灵芝多糖组、甘参芝组合物注射液I不同剂量配比组、甘参芝组合物注射液II不同剂量配 比组，每组10只。空白对照组腹腔注射0.9％生理盐水10ml/kg，其余各组大鼠连续给药三天(腹腔注射)， 禁食5.5h，末次给药2h后分别给予25％CCl4花生油溶液，给药剂量见表1。给予四氯化碳后大鼠进食。于给 予四氯化碳24小时禁食12小时，颈静脉取各大鼠血，3000r/min离心10min分离血清，按ALT，AST测定说明 书，进行谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性测定。结果见表1。

表1 甘参芝组合物注射液对四氯化碳(CCl4)致大鼠急性肝损伤的保护作用

组别 重量配比 给药剂量 (mg/kg) ALT (n mol/s.L) AST (n mol/s.L) 空白对照组 模型组 甘草酸二铵组 人参多糖组 人参总皂苷组 灵芝多糖组 - - - - - - - 20 30 30 30 30 230.56±20.76 389.24±83.34** 309.43±36.68*# 325.84±42.43*# 321.34±40.68*# 339.46±39.67*# 221.78±31.39 393.59±48.57** 326.54±33.36u 346.72±37.56*# 343.58±36.45*# 350.43±37.64*# 甘参芝组合物注射液 I组(甘草酸二铵+ 人参多糖+灵芝多 糖) 10mg+5mg+30mg 20mg+5mg+40mg 50mg+50mg+50mg 100mg+10mg+60mg 150mg+10mg+60mg 200mg+10mg+60mg 250mg+15mg+100mg 300mg+15mg＋150mg 400mg+20mg+200mg 30 30 30 30 30 30 30 30 30 276.38±29.48##&★△ 273.64±28.87##&★△ 266.81±25.93##&★△ 262.53±24.72##&★△ 252.34±21.56##&★△ 256.35±22.46##&★△ 261.66±24.39##&★△ 269.68±26.15##&★△ 275.55±28.99##&★△ 286.48±29.57##&★△ 282.67±29.26##&★△ 276.46±26.37##&★△ 261.63±23.38##&★△ 246.06±20.22##&★△ 252.69±21.67##&★△ 263.64±24.85##&★△ 270.48±26.94##&★△ 279.18±27.82##&★△ 甘参芝组合物注射液 II组(甘草酸二铵+ 人参总皂苷+灵芝多 糖) 10mg+20mg+30mg 20mg+20mg+40mg 50mg+30mg+50mg 100mg＋40mg+60mg 150mg+40mg+60mg 200mg+50mg+60mg 250mg+50mg+100mg 300mg+60mg+150mg 400mg+80mg+200mg 30 30 30 30 30 30 30 30 30 275.84±31.38##&◆△ 269.35±28.51##&◆△ 262.76±26.57##&◆△ 257.56±24.31##&◆△ 250.52±20.76##&◆△ 254.24±23.15##&◆△ 260.58±25.64##&◆△ 272.81±27.64##&◆△ 276.58±29.86##&◆△ 293.53±30.36##&◆△ 284.53±28.67##&◆△ 278.62±27.35##&◆△ 269.46±25.88##&◆△ 253.14±22.61##&◆△ 259.63±23.26##&◆△ 265.76±25.43##&◆△ 275.59±27.49##&◆△ 286.48±30.64##&◆△

注：*p＜0.05，**p＜0.01与空白对照组相比；#p＜0.05，##p＜0.01，与模型组相比；&p＜0.05，与甘草酸二铵组相比；★p＜0.05， 与人参多糖组相比；◆p＜0.05，与人参总皂苷组相比；△p＜0.05，与灵芝多糖组相比。

实验结果：模型组与空白对照组相比有显著差异(**p＜0.01)，说明造模成功。各给药组都对四氯化 碳(CCl4)中毒致大鼠急性肝损伤有保护作用，肝脏的ALT和AST有明显的恢复作用(#p＜0.05和##p＜0.01)。 其中甘参芝组合物注射液I和甘参芝组合物注射液II的不同剂量配比组与单用甘草酸二铵或人参多糖或 人参总皂苷或灵芝多糖相比，差别显著(&p＜0.05、★p＜0.05、◆p＜0.05和△p＜0.05)。表明甘草酸二铵、人 参和灵芝联合应用呈协同作用；与空白组相比，没有显著差异(p＞0.05)，对四氯化碳中毒致大鼠急性肝 损伤有保护作用，使肝脏的ALT和AST水平恢复正常，表明恢复肝功的效果显著，其疗效与组合物的剂量 配比有关，甘参芝组合物注射液I中甘草酸二铵+人参多糖+灵芝多糖＝150mg+10mg+60mg、甘参芝组 合物注射液II中甘草酸二铵+人参总皂苷+灵芝多糖＝150mg+40mg+60mg时作用最好。

实验例2  甘参芝组合物对四氯化碳(CCl4)中毒所致急性肝损伤小鼠的肝、脾指数的影响

供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，市购；

CCl4模型组：CCl4注射液，自制；

甘草酸单铵组：甘草酸单铵注射液10ml：40mg，自制；

人参多糖组：人参多糖注射液，自制；

人参总皂苷组：人参总皂苷注射液，自制；

甘参芝组合物注射液I组(甘草酸单铵+人参多糖+灵芝多糖＝40mg+10mg+60mg)：分 为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5)；

甘参芝组合物注射液II组(甘草酸单铵+人参总皂苷+灵芝多糖＝40mg+40mg+60mg)： 分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5)。

受试动物：健康昆明种小鼠，体重18～22g，110只，随机分为11组。

实验方法：取小鼠110只，随机分为11组，分别为空白对照组、CCl4模型组、甘草酸单铵组、人参 多糖组、人参总皂苷组、甘参芝组合物注射液I低、中、高三个剂量组、甘参芝组合物注射液II低、中、 高三个剂量组，每组10只。空白对照组腹腔注射0.9％生理盐水10ml/kg，其余各组动物均腹腔注射CCl4 10ml/kg，禁食过夜。给药组腹腔注射给药，每日1次，给药剂量见表2，连续10d，对照组给相应体积的 生理盐水，于最后一次给药后，断头处死动物，取肝脏和脾脏，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精确称重。 结果见表2。

表2 甘参芝组合物对四氯化碳(CCl4)中毒所致急性肝损伤小鼠的肝、脾指数的影响(X±SD)

组别 动物数 (只) 给药剂量 (mg/kg) 肝指数(g/100g) 脾指数(g/100g) 空白对照组 CCl4模型组 甘草酸单铵组 人参多糖组 人参总皂苷组 甘参芝组合物注射液I组(低剂量) 甘参芝组合物注射液I组(中剂量) 甘参芝组合物注射液I组(高剂量) 甘参芝组合物注射液II组(低剂量) 甘参芝组合物注射液II组(中剂量) 甘参芝组合物注射液II组(高剂量) 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 - 10 20 20 20 10 15 20 10 15 20 6.318±1.016 8.163±0.648** 7.164±0.728*# 7.298±0.759*# 7.265±0.746*# 6.726±0.738##&★ 6.635±0.749##&★ 6.404±0.823##&★ 6.802±0.726##&△ 6.684±0.753##&△ 6.396±0.845##&△ 0.628±0.118 0.744±0.063** 0.664±0.047*# 0.681±0.061*# 0.692±0.065*# 0.649±0.076##&★ 0.637±0.082##&★ 0.630±0.086##&★ 0.646±0.073##&△ 0.638±0.085##&△ 0.632±0.088##&△

注：*p＜0.05，**p＜0.01，与空白对照组相比；#p＜0.05，##p＜0.01，与CCl4模型组相比；&p＜0.05，与甘草酸单铵组相比； ★p＜0.05，与人参多糖组相比；△p＜0.05，与人参总皂苷组相比。

实验结果：各给药组都能明显的降低四氯化碳(CCl4)中毒小鼠的肝、脾指数(#p＜0.05和##p＜0.01)。 其中甘参芝组合物注射液I、甘参芝组合物注射液II与单用甘草酸单铵或人参多糖或人参总皂苷相比，差 别显著(&p＜0.05、★p＜0.05和△p＜0.05)。表明甘草酸单铵、人参和灵芝配伍有显著降低四氯化碳(CCl4) 中毒小鼠的肝、脾指数的作用，与空白对照组相比没有显著差异(p＞0.05)。且与组合物的给药剂量有关， 高剂量时作用最好。

实验例3  甘参芝组合物对DHBV-DNA的抑制作用

供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，市购；

阳性对照组：阿昔洛韦(ACV)注射液，自制；

甘草酸二铵组：甘草酸二铵注射液10m1：150mg，自制；

人参多糖组：人参多糖注射液，自制；

人参总皂苷组：人参总皂苷注射液，自制；

甘参芝组合物注射液I组(甘草酸二铵+人参多糖+灵芝多糖＝150mg+10mg+60mg)： 分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5)；

甘参芝组合物注射液II组(甘草酸二铵+人参总皂苷+灵芝多糖＝150mg+40mg+60mg)： 分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5)。

受试动物：市售1日龄北京鸭。

病毒：DHBV阳性血清。

实验方法：(1)动物模型北京鸭经足静脉注射0.2ml DHBV阳性血清，7d后取血，分离血清，-20 ℃保存检验。

(2)药物治疗  筛选出感染成功的阳性鸭66只，随机分为11组，每组6只。分别为空白对照组、 阳性对照组、甘草酸二铵组、人参多糖组、人参总皂苷组、甘参芝组合物注射液I低、中、高三个剂量组、 甘参芝组合物注射液II低、中、高三个剂量组。静脉注射给药，给药剂量见表3，给药2周。分别于药前、 用药第7天、用药第14天和停药后第3天，自鸭腿静脉抽血，分离血清，-20℃保存待验。

(3)检测方法采用DHBV-DNA Dot Blot法，以杂交斑点吸光度值(A)作为标本DHBV-DNA水平 值。

(4)统计学处理用药组不同时间DNA含量与用药前比较，采用配对t检验；用药组同一时间DNA 含量与病毒对照组比较，采用t检验。结果见表3。

实验结果：各给药组都明显抑制DHBV病毒(&p＜0.05和&&p＜0.01)。其中甘参芝组合物注射液I、 甘参芝组合物注射液II与单用甘草酸二铵或人参多糖或人参总皂苷相比，差别显著(&p＜0.05、★p＜0.05和 △p＜0.05)，且停药后无反跳与给药前比较差异显著(*p＜0.05和**p＜0.01)，而阳性对照组在停药后与给药 前比较无显著差异(p＞0.05)。且与组合物的给药剂量有关，高剂量作用最好。

表3 甘参芝组合物对DHBV-DNA的抑制作用(X±SD)

组别 给药剂量 (mg/kg) 治疗前 DHBV-DNA 滴度 治疗后7d DHBV-DNA滴 度 治疗后14d DHBV-DNA滴 度 停药后3d DHBV-DNA滴度 空白对照组 阳性对照组 甘草酸二铵组 人参多糖组 人参总皂苷组 甘参芝组合物注射液I组(低剂量) 甘参芝组合物注射液I组(中剂量) 甘参芝组合物注射液I组(高剂量) 甘参芝组合物注射液II组(低剂量) 片参芝组合物注射液II组(中剂量) 甘参芝组合物注射液II组(高剂量) - 50 30 30 30 10 20 30 10 20 30 1.58±0.05 1.61±0.03 1.56±0.05 1.59±0.02 1.60±0.03 1.55±0.04 1.60±0.04 1.58±0.03 1.56±0.05 1.59±0.04 1.60±0.03 1.59±0.06 0.86±0.15**&& 1.26±0.07*& 1.31±0.06*& 1.32±0.05*& 1.02±0.12**&&#★ 0.93±0.15**&&#★ 0.82±0.16**&&#★ 1.00±0.13**&&#△ 0.95±0.14**&&#△ 0.85±0.15**&&#△ 1.59±0.04 0.81±0.17**&& 1.23 ±0.08*& 1.28±0.07*& 1.27±0.07*& 0.95±0.13**&&#★ 0.88±0.14**&&#★ 0.80±0.18**&&#★ 0.96±0.13**&&#△ 0.92±0.15**&&#△ 0.82±0.16**&&#△ 1.57±0.04 1.59±0.04 1.39±0.05*& 1.36±0.06*& 1.38±0.05*& 1.05±0.10**&&#★ 0.98±0.11**&&#★ 0.86±0.15**&&#★ 1.03±0.11**&&#△ 0.95±0.13**&&#△ 0.89±0.15**&&#△

注：*p＜0.05，**p＜0.01，与同组治疗前相比；&p＜0.05，&&p＜0.01，与空白对照组相比；#p 0.05，与甘草酸二铵组相比； ★p＜0.05，与人参多糖组相比；△p＜0.05，与人参总皂苷组相比。

实验例4  甘参芝组合物抗小鼠肝纤维化作用

供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，市购；

模型组：CCl4注射液，自制；

甘草酸二铵组：甘草酸二铵注射液10ml：150mg，自制；

人参多糖组：人参多糖注射液，自制；

人参总皂苷组：人参总皂苷注射液，自制；

甘参芝组合物注射液I组(甘草酸二铵+人参多糖+灵芝多糖＝150mg+10mg+60mg)： 分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5)；

甘参芝组合物注射液II组(甘草酸二铵+人参总皂苷+灵芝多糖＝150mg+40mg+60mg)： 分为低、中、高三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5)。

受试动物：健康昆明种小鼠，体重24～28g，雌雄兼用，110只，随机分为11组。

实验方法：取小鼠110只，随机分为11组，分别为空白对照组、模型组、甘草酸二铵组、人参多糖 组、人参总皂苷组、甘参芝组合物注射液I低、中、高三个剂量组、甘参芝组合物注射液II低、中、高三 个剂量组，每组10只。空白对照组皮下注射NS 10mg/kg，首剂加倍，5d注射1次，连续5周，其余各组动 物均皮下注射40％CCl4花生油10mg/kg，首剂加倍，5d注射1次，连续5周，除空白对照组、模型组外的 各给药组皮下注射给药，给药剂量见表4，5d注射1次，连续5周。在实验过程中每天观察各组小鼠进食、 饮水、活动情况及皮毛变化，每周称重1次，第五周全部停用CCl4，继续给药治疗1周，于末次给药后第 2天摘眼球取血，分离血清检测血中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白 (Alb)的含量和A/G(白蛋白/球蛋白)的比值。结果见表4。

表4 甘参芝组合物注射液对小鼠肝纤维化后血清生化指标的影响(X±SD，n＝10)

组别 给药剂量 (mg/kg) ALT/U·L-1 AST/U·L-1 TP/g·L-1 Alb/g·L-1 A/G 空白对照组 模型组 甘草酸二铵组 人参多糖组 人参总皂苷组 甘参芝组合物注射液I组 (低剂量) 甘参芝组合物注射液I组 (中剂量) 甘参芝组合物注射液I组 (高剂量) 甘参芝组合物注射液II组 (低剂量) 甘参芝组合物注射液II组 (中剂量) 甘参芝组合物注射液II组 (高剂量) 10 10 30 30 30 10 20 30 10 20 30 54.0±12.6 110.1±15.8** 79.6±13.9*# 83.4±12.8*# 81.5±13.6*# 65.8±9.2##&★ 62.4±8.9##&★ 58.6±8.5##&★ 64.6±9.6##&△ 59.9±9.5##&△ 56.5±9.4##&△ 82.2±16.0 105.8±12.5** 91.8±1 5.7*# 91.6±1 5.9*# 91.3±15.5*# 85.5±1 5.8##&★ 84.3±16.1##&★ 81.6±17.5##&★ 85.7±15.9##&△ 83.1±15.8##&△ 82.7±16.3##&△ 51.4±5.8 85.6±9.8** 70.4±8.7*# 72.5±9.1*# 71.8±8.9*# 63.8±7.3##&★ 60.5±6.8##&★ 55.1±6.3##&★ 64.0±7.6##&△ 58.6±6.6##&△ 54.9±6.4##&△ 24.9±2.7 15.9±3.1** 19.6±2.2*# 18.8±2.3*# 19.8±2.0*# 21.6±2.3##&★ 22.5±2.5##&★ 23.6±2.8##&★ 21.5±2.2##&△ 22.8±2.4##&△ 23.4±2.7##&△ 0.94±0.42 0.23±0.09** 0.38±0.16*# 0.35±0.13*# 0.38±0.15*# 0.51±0.29##&★ 0.59±0.34##&★ 0.75±0.39##&★ 0.51±0.31##&△ 0.64±0.35##&△ 0.74±0.37##&△

注：*p＜0.05，**p＜0.01，与空白对照组相比；#p＜0.05，##p＜0.01，与模型组相比；&p＜0.05，与甘草酸二铵组相比；★p＜0.05， 与人参多糖组相比；△p＜0.05，与人参总皂苷组相比。

实验结果：模型组各项指标与空白对照组相比有极显著差异(**p＜0.01)，说明造模成功。各给药组 与模型组相比血清ALT、AST、TP都有明显的降低，而Alb、A/G明显升高，差异显著(#p＜0.05和##p＜0.01)。 其中甘参芝组合物注射液I、甘参芝组合物注射液II与单用甘草酸二铵或人参多糖或人参总皂苷相比，差 别显著(&p＜0.05、★p＜0.05和△p＜0.05)。表明甘草酸二铵、人参和灵芝配伍对小鼠肝纤维化后血清生化指 标有明显的恢复作用，使血清ALT、AST、TP含量降低，Alb、A/G明显升高，与空白对照组相比没有明 显差异(p＞0.05)。且与组合物的给药剂量有关，高剂量作用最好。

实验例5  小鼠注射给药急性毒性实验

(1)实验方法

供试品：甘参芝组合物注射液I

(自制，10ml：甘草酸二铵+人参多糖+灵芝多糖＝150mg+10mg+60mg)；

(自制，10ml：甘草酸单铵+人参多糖+灵芝多糖＝40mg+10mg+60mg)；

甘参芝组合物注射液II

(自制，10ml：甘草酸二铵+人参总皂苷+灵芝多糖＝150mg+40mg＋60mg)；

(自制，10ml：甘草酸单铵+人参总皂苷+灵芝多糖＝40mg+40mg+60mg)。 受试动物：小鼠，每组雌雄各5只，雄性体重25～28g，雌性体重21～24g。 给药途径：静脉注射、腹腔注射。

观察项目：死亡数、一般状态、体重、剖检、半数致死量。

(2)实验结果

按照急性毒性实验要求进行预试，腹腔注射及静脉注射两给药途径皆无法测出药物的半数致死量，也 未见明显的毒性反应，故进行一日内最大给药量实验。给药剂量：尾静脉注射0.2ml/10g，腹腔注射0.2ml/ 10g，一日2次。

死亡数：未出现死亡。

一般状态：未见异常变化。

体重：于给药前1天，给药日，给药后1、3、7、14天测量；未见异常变化。

剖检：心、肝、肺、肾等组织未见异常变化。

(3)结论

本实验中未出现死亡，推测甘参芝组合物注射液对雌雄小鼠静脉和腹腔注射给药的最大耐受量均为0.4 ml/10g，相当于50kg体重人日最大用量20ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。

实验例6  甘参芝组合物注射液稳定性实验

供试品：甘参芝组合物注射液I

(自制，10ml：甘草酸二铵+人参多糖+灵芝多糖＝150mg+10mg+60mg)；

(自制，10ml：甘草酸单铵+人参多糖+灵芝多糖＝40mg+10mg+60mg)；

甘参芝组合物注射液II

(自制，10ml：甘草酸二铵+人参总皂苷+灵芝多糖＝150mg+40mg+60mg)；

(自制，10ml：甘草酸单铵+人参总皂苷+灵芝多糖＝40mg+40mg+60mg)。

考察项目：性状、pH值、澄明度。

长期稳定性实验方法及结果：将本品各组合物置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置 6个月、12个月，各项指标均无明显变化，实验结果表明本品组合物注射液长期放置基本稳定。

4、具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为 本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。 以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例4～9中的实验例中 所用的人参多糖取自实施例1，人参总皂苷取自实施例2，灵芝多糖取自实施例3。

实施例1  以多糖为主要有效成分的人参提取物即人参多糖的制备

人参多糖制备工艺：

取人参，切碎，用75％乙醇，回流提取4小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入 0.3％活性炭，搅拌30分钟，静置过夜，滤过，滤液过树脂柱，收集流出液，减压浓缩，加乙醇使含醇量 达95％，冷藏，滤过，取沉淀用丙酮洗涤，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎即得。

人参多糖鉴别实验

(1)取本品约0.2g，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤 过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节PH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml， 水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。

(2)取本品约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液 面交界处显紫红色环。

人参多糖的含量测定

对照品溶液的制备  精密称取60℃真空干燥至恒重的半乳糖醛酸约100mg，置100ml量瓶中，加水至 刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备  精密称取本品50mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法  精密量取对照品溶液、供试品溶液及水各1ml，分别精密加入0.25mol/L硼砂硫酸溶液6ml， 置水浴中加热30分钟，放冷，再分别精密加入0.125％咔唑无水乙醇溶液0.4ml，置水浴中加热10分钟， 放冷至室温，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V B)实验，在530nm波长处测定吸收度，计 算，即得。

根据上述工艺，制得人参多糖三批样品，其含量和得率见下表。由结果可以看出，通过本工艺制备的 人参多糖的含量不低于50％，得率为0.5～2％。

人参多糖含量和得率

批号 人参多糖含量(％) 得率(％) 1 83.36 0.98 2 88.42 1.13 3 92.51 1.33 平均 88.10 1.14

实施例2  以总皂苷为主要有效成分的人参提取物即人参总皂苷的制备

人参总皂苷制备工艺：

取人参药材，粉碎成细粒，乙醇回流提取二次，每次3小时，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏， 滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液 加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2V～3V柱体积的水进行洗脱，弃去水洗液，再用3倍柱体积的80％ 乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。

人参总皂苷的鉴别

取本品0.5g，加水0.5ml搅拌润湿，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量 氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Re、 Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2ul，分别点于 同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为 展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。

人参总皂苷的含量测定

对照品溶液制备：取人参皂甙Rg1对照品约10mg，经60℃真空干燥2小时，精密称定，置100ml 量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1ml含Rg1对照品0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液制备：精密称取本品50mg，置50ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取 2ml，置10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法  精密量取供试品溶液和对照品溶液各1ml，分别置10ml具塞试管中，在水浴上蒸干，放冷， 加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml，于60℃保温15分钟，冷却至室温，加冰醋酸5ml， 摇匀；同时作空白对照。照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V B)，在560nm波长处测定吸收 度，计算，即得。

人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量测定

色谱条件与系统适用性实验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(22∶78)为流动相； 检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取人参皂苷Rg1对照品、Re对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合 溶液。

供试品溶液的制备  取本品0.2g，精密称定，精密加入水饱和正丁醇30ml，密塞，放置过夜，超声处理 (功率250W，频率50kHz)30分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液15ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加 甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

测定法  分别精密吸取对照品和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见下表。

根据上述工艺，制得人参总皂苷三批样品，其含量和得率见下表。由结果可以看出，通过本工艺制备 得到的人参总皂苷得率为1～2％，人参总皂苷含量不低于50％，人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量不低于 30％。

人参总皂苷含量测定结果及得率

批号 人参总皂苷含量(％) 人参皂苷Re、人参皂苷Rg1含量(％) 得率(％) 1 72.06 41.03 1.10 2 68.24 39.85 1.08 3 65.98 37.81 1.03 平均 68.76 39.56 1.07

实施例3  以多糖为主要有效成分的灵芝提取物即灵芝多糖的制备

灵芝多糖制备工艺

取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水3倍量润湿过夜，次日煎煮三次，第一次3小时加水12倍量，第二 次2小时加水10倍量，第三次1小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06， 放冷，加乙醇使含醇量为65％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇 使含醇量为80％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置8小时，滤过， 滤液浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得。

灵芝多糖的鉴别

取本品50mg，加乙醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试 品溶液。另取灵芝对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul， 分别点于同一硅胶G板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展 开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相 同颜色的荧光斑点。

灵芝多糖的含量测定

对照品溶液的制备  精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml含0.1mg的溶 液，即得。

标准曲线的制备  分别精密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具 塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(精密称取蒽酮0.1g，加80％硫酸溶液100ml使溶解， 摇匀)6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放入水浴中冷却15分钟，以相应的溶剂为空白，在625nm 下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备  取本品20mg，置50ml量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得。

测定法  精密吸取供试品溶液2ml，置10ml具试管中，照标准曲线下测定方法，依法测定吸光度，从 标准曲线上读出供试品溶液的葡萄糖的重量，计算，即得。

根据上述工艺，制得灵芝多糖三批样品，提取物得率和含量见下表。由结果可以看出，通过本工艺制 备的灵芝多糖的含量不低于50％，得率为0.5～3％。

灵芝多糖得率和含量测定结果

批号 多糖含量(％) 得率(％) 1 63.64 1.96 2 61.05 1.63 3 53.21 1.24 平均 59.30 1.61

实施例4  甘参芝组合物粉针剂的制备

处方：

甘参芝组合物I处方1

甘草酸单铵                40g

人参多糖                  10g

灵芝多糖                  60g

甘氨酸                    400g

盐酸半胱氨酸              20g

聚山梨酯80                20g

甘露醇                    400g

无菌注射用水              加至3000ml

共制备                    1000支

甘参芝组合物I处方2

甘草酸二铵                150g

人参多糖                  10g

灵芝多糖                  60g

聚山梨酯80                20g

甘露醇                    400g

无菌注射用水              加至3000ml

共制备                    1000支

甘参芝组合物II处方1

甘草酸单铵                40g

人参总皂苷                40g

灵芝多糖                  60g

甘氨酸                    400g

盐酸半胱氨酸              20g

聚山梨酯80                20g

甘露醇                    400g

无菌注射用水              加至3000ml

共制备                    1000支

甘参芝组合物II处方2

甘草酸二铵                150g

人参总皂苷                40g

灵芝多糖                  60g

聚山梨酯80                20g

甘露醇                    400g

无菌注射用水              加至3000ml

共制备                    1000支

制备工艺：

1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将甘草酸单铵(或甘草酸二铵)和 人参多糖(或人参总皂苷)加入少量注射用水，根据处方需要加入氨基酸，加入处方量的聚山梨酯80加 热搅拌溶解。合并上述溶液，补加无菌注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。

6)经0.22um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干 燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥4小时。

9)冻干结束，压塞，轧盖。

10)成品全检，包装入库

实施例5  本发明组合物水针剂的制备

处方：

甘参芝组合物I处方1

甘草酸单铵              40g

人参多糖                10g

灵芝多糖                60g

甘氨酸                  400g

盐酸半胱氨酸            20g

聚山梨酯80              50g

注射用水                加至10000ml

共制备                  1000支

甘参芝组合物I处方2

甘草酸二铵              150g

人参多糖                10g

灵芝多糖                60g

聚山梨酯80              50g

注射用水                加至10000ml

共制备                  1000支

甘参芝组合物II处方1

甘草酸单铵              40g

人参总皂苷              40g

灵芝多糖                60g

甘氨酸                  400g

盐酸半胱氨酸            20g

聚山梨酯80              50g

注射用水                加至10000ml

共制备                      1000支

甘参芝组合物II处方2

甘草酸二铵                150g

人参总皂苷                40g

灵芝多糖                  60g

聚山梨酯80                50g

注射用水                  加至10000ml

共制备                    1000支

制备工艺：

1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将甘草酸单铵(或甘草酸二铵)和 人参多糖(或人参总皂苷)加入少量注射用水，根据处方需要加入氨基酸，加入处方量的聚山梨酯80加 热搅拌溶解。

3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。

9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。

10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。

11)灯检，成品全检，包装入库。

实施例6  本发明组合物输液的制备

氯化钠输液：

处方：

甘参芝组合物I处方1

甘草酸单铵               40g

人参多糖                 10g

灵芝多糖                 60g

甘氨酸                   400g

盐酸半胱氨酸             20g

聚山梨酯80               20g

氯化钠                   900g

注射用水                 加至100000ml

共制备                       1000瓶

甘参芝组合物I处方2

甘草酸二铵                 150g

人参多糖                   10g

灵芝多糖                   60g

聚山梨酯80                 20g

氯化钠                     900g

注射用水                   加至100000ml

共制备                     1000瓶

甘参芝组合物II处方1

甘草酸单铵                 40g

人参总皂苷                 40g

灵芝多糖                   60g

甘氨酸                     400g

盐酸半胱氨酸               20g

聚山梨酯80                 20g

氯化钠                     900g

注射用水                   加至100000ml

共制备                     1000瓶

甘参芝组合物II处方2

甘草酸二铵                 150g

人参总皂苷                 40g

灵芝多糖                   60g

聚山梨酯80                 20g

氯化钠                     900g

注射用水                   加至100000ml

共制备                     1000瓶

制备工艺：

1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将甘草酸单铵(或甘草酸二铵)和 人参多糖(或人参总皂苷)加入少量注射用水，根据处方需要加入氨基酸，加入处方量的聚山梨酯80加 热搅拌溶解。将氯化钠用适量注射用水溶解完全，合并上述溶液，补加注射用水至全量。

3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。

5)经0.45um的微孔滤膜精滤。

6)检查溶液的澄明度，半成品化验。

7)灌装于100ml的输液瓶中。

8)115℃热压灭菌30分钟。

9)灯检，成品全检，包装入库。

葡萄糖输液：

处方：

甘参芝组合物I处方1

甘草酸单铵             40g

人参多糖               10g

灵芝多糖               60g

甘氨酸                 400g

盐酸半胱氨酸           20g

聚山梨酯80             20g

葡萄糖                 5000g

注射用水               加至100000ml

共制备                 1000瓶

甘参芝组合物I处方2

甘草酸二铵             150g

人参多糖               10g

灵芝多糖               60g

聚山梨酯80             20g

葡萄糖                 5000g

注射用水               加至100000ml

共制备                 1000瓶

甘参芝组合物II处方1

甘草酸单铵             40g

人参总皂苷             40g

灵芝多糖               60g

甘氨酸                 400g

盐酸半胱氨酸           20g

聚山梨酯80             20g

葡萄糖                 5000g

注射用水               加至100000ml

共制备                 1000瓶

甘参芝组合物II处方2

甘草酸二铵             150g

人参总皂苷             40g

灵芝多糖               60g

聚山梨酯80             20g

葡萄糖                 5000g

注射用水               加至100000ml

共制备                 1000瓶

制备工艺：

1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)将灵芝多糖加入配液量30％的注射用水中加热搅拌溶解完全。将甘草酸单铵(或甘草酸二铵)和 人参多糖(或人参总皂苷)加入少量注射用水，根据处方需要加入氨基酸，加入处方量的聚山梨酯80加 热搅拌溶解。合并上述溶液，补加注射用水至全量。将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加热煮 沸15分钟。

3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)灌装于100ml的输液瓶中。

9)115℃热压灭菌30分钟。

10)灯检，成品全检，包装入库。

实施例7  本发明组合物片剂的制备

处方：

甘参芝组合物I处方1

甘草酸单铵            40g

人参多糖              10g

灵芝多糖              60g

蛋氨酸                40g

甘氨酸                40g

淀粉                  40g

微晶纤维素            40g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁              5.0g

羧甲淀粉钠            10.0g

共制备                1000片

甘参芝组合物I处方2

甘草酸二铵            150g

人参多糖              10g

灵芝多糖              60g

淀粉                  40g

微晶纤维素            40g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁              5.0g

羧甲淀粉钠            10.0g

共制备                1000片

甘参芝组合物II处方1

甘草酸单铵            40g

人参总皂苷            40g

灵芝多糖              60g

蛋氨酸                40g

甘氨酸                40g

淀粉                  40.0g

微晶纤维素            40.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁              5.0g

羧甲淀粉钠            10.0g

共制备                1000片

甘参芝组合物II处方2

甘草酸二铵            150g

人参总皂苷            40g

灵芝多糖              60g

淀粉                  40.0g

微晶纤维素            40.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁              5.0g

羧甲淀粉钠            10.0g

共制备                1000片

制备工艺：

1)将灵芝多糖、人参多糖(或人参总皂苷)和甘草酸单铵(或甘草酸二铵)粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

4)将人参多糖(或人参总皂苷)、甘草酸单铵(或甘草酸二铵)、灵芝多糖、淀粉、微晶纤维素混 合均匀，根据处方需要加入氨基酸，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按化验结果确定片重压片。

10)成品全检，包装入库。

实施例8  本发明组合物胶囊剂的制备

处方：

甘参芝组合物I处方1

甘草酸单铵        40g

人参多糖          10g

灵芝多糖          60g

蛋氨              40g

甘氨酸            40g

淀粉              20.0g

微晶纤维素        60.0g

2％HPMC水溶液     适量

硬脂酸镁          5.0g

共制备            1000粒

甘参芝组合物I处方2

甘草酸二铵        150g

人参多糖          10g

灵芝多糖          60g

淀粉              20.0g

微晶纤维素        60.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁          5.0g

共制备            1000粒

甘参芝组合物II处方1

甘草酸单铵        40g

人参总皂苷        40g

灵芝多糖          60g

蛋氨酸            40g

甘氨酸            40g

淀粉              20.0g

微晶纤维素        60.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁          5.0g

共制备            1000粒

甘参芝组合物II处方2

甘草酸二铵        150g

人参总皂苷        40g

灵芝多糖          60g

淀粉              20.0g

微晶纤维素        60.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁          5.0g

共制备            1000粒

制备工艺：

1)将灵芝多糖、人参多糖(或人参总皂苷)和甘草酸单铵(或甘草酸二铵)粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

4)将人参多糖(或人参总皂苷)、甘草酸单铵(或甘草酸二铵)、灵芝多糖、淀粉、微晶纤维素混 合均匀，根据处方需要加入氨基酸，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按照化验确定的装量装入胶囊。

10)成品全检，包装入库。

实施例9  本发明组合物颗粒剂的制备

处方： 

甘参芝组合物I处方1

甘草酸单铵           40g

人参多糖             10g

灵芝多糖             60g

蛋氨酸               40g

甘氨酸               40g

糖粉                 2000.0g

2％HPMC50％乙醇溶液  适量

共制备               1000包

甘参芝组合物I处方2

甘草酸二铵           150g

人参多糖             10g

灵芝多糖             60g

糖粉                 2000.0g

2％HPMC50％乙醇溶液  适量

共制备               1000包

甘参芝组合物II处方1

甘草酸单铵           40g

人参总皂苷           40g

灵芝多糖             60g

蛋氨酸               40g

甘氨酸               40g

糖粉                 2000.0g

2％HPMC50％乙醇溶液  适量

共制备               1000包

甘参芝组合物II处方2

甘草酸二铵              150g

人参总皂苷              40g

灵芝多糖                60g

糖粉                    2000.0g

2％HPMC50％乙醇溶液     适量

共制备                  1000包

制备工艺：

1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将灵芝多糖、人参多糖(或人参总皂苷)、甘草酸单铵(或甘草酸 二铵)粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将灵芝多糖、人参多糖(或人参总皂苷)、甘草酸单铵(或甘草酸二铵)与糖粉以等量递加的方 法混合均匀，根据处方需要加入氨基酸，加入 2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

4)过20目筛制颗粒。

5)颗粒在60℃的条件下烘干。

6)干颗粒过18目筛整粒。

7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。

8)包装，成品全检，包装入库。