本发明涉及用于治疗或预防黄病毒感染的一系列喹唑啉衍生物。

黄病毒科的病毒是小的二十面体包膜病毒，其包含正义RNA基因 组。这个病毒科包括三个属：黄病毒属、瘟病毒属和肝炎病毒属。

很多黄病毒科病毒是重要的人类病原体。当然，肝炎病毒属包括 丙型肝炎属病毒。然而，迄今为止还无有效而安全地治疗黄病毒感染 的方法。

WO 98/02434公开了作为蛋白酪氨酸激酶抑制剂的喹唑啉类化合 物。该文献中没有特别公开任何化合物在6位引进三唑苯胺基。

现在令人吃惊地发现式(I)喹唑啉衍生物具有抑制黄病毒科病毒 复制的活性，因而可有效地治疗或预防黄病毒感染。本发明因此提供 了式(I)喹唑啉衍生物，或其药学上可接受的盐：

其中：

-R1代表卤素、C1-6烷基、C1-4卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-4卤代烷氧 基或结构部分-A、-A-A’、-A-Het-A’、-A-L-A’、-A-Het-L-A’、 -A-L-Het-A’、-A-Het-L-Het’-A’或-A-Het-L-Het’-L’；

-R2代表氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代 烷氧基或结构部分-Het-A’、-Het-L-A’、-Het-L-Het’-A’ 或-Het-L-Het’-L’；

-R3代表氢或C1-6烷基；

-每一个R4相同或不同，代表卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C1-4卤 代烷基；

-R5代表氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4氨基烷基或 结构部分-Het-L-Het’-L’；

-R6代表氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4氨基烷基或 结构部分-Het-L-Het’-L’、-CO-X或-L-X，其中X代 表-OR’、-NR’R”或5-10元杂芳基或杂环基，其中R’和R”独立地 是氢或C1-4烷基；

-n是0、1或2；

-每个A和A’相同或不同，代表苯基、5-10元杂芳基、5-10元杂 环基或C3-6碳环基，其任选地与另一个苯基、5-10元杂芳基、5-10 元杂环基或C3-6碳环基稠合；

-每一个Het和Het’相同或不同，代表-O-、-S-或-NR’，其中R’ 是氢或C1-4烷基；

-每一个L相同或不同，代表C1-4亚烷基；以及

-每一个L’相同或不同，代表氢或C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟 基烷基或C1-4氨基烷基，

R1、R2和R6中的苯基、杂芳基、杂环基和碳环结构部分是未取代 的，或被1、2或3个相同或不同的无取代的取代基取代，所述取代基 选自卤素原子和C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、 羟基、氰基、硝基和-NR’R”，其中每一个R’和R”相同或不同，代表氢 或C1-4烷基。

在另一个实施方案中，本发明提供了如上文所定义的式(I)喹唑啉 衍生物，或其药学上可接受的盐，其中：

-R1代表卤素、C1-6烷基、C1-4卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-4卤代烷氧 基或结构部分-A、-A-A’、-A-Het-A’、-A-L-A’、-A-Het-L-A’、 -A-L-Het-A’、-A-Het-L-Het’-A’或-A-Het-L-Het’-L’；

-R2代表氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代 烷氧基或结构部分-Het-A’、-Het-L-A’、-Het-L-Het’-A’ 或-Het-L-Het’-L’；

-R3代表氢或C1-6烷基；

-每一个R4相同或不同，代表卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C1-4卤 代烷基；

-R5代表氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4氨基烷基或 结构部分-Het-L-Het’-L’；

-R6代表氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4氨基烷基或 结构部分-Het-L-Het’-L’、-CO-X或-L-X，其中X代 表-OR’、-NR’R”或5-10元杂芳基或杂环基，其中R’和R”独立 地是氢或C1-4烷基；

-n是0、1或2；

-每一个A和A’相同或不同，代表一个苯基、5-10元杂芳基、5-10 元杂环基或C3-6碳环基，其任选地与另一个苯基、5-10元杂芳基、 5-10元杂环基或C3-6碳环基稠合；

-每一个Het和Het’相同或不同，代表-O-、-S-或-NR’，其中R’ 是氢或C1-4烷基；

-每一个L相同或不同，代表C1-4亚烷基；以及

-每一个L’相同或不同，代表氢或C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4羟 基烷基，

A和A’中的苯基、杂芳基、杂环基和碳环结构部分是未取代的， 或被1、2或3个相同或不同的无取代的取代基取代，所述取代基选自 卤素原子和C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、羟 基、氰基、硝基和-NR’R”，其中每一个R’和R”相同或不同，代表氢或 C1-4烷基。

本文中，C1-6烷基或结构部分是包含1-6个碳原子的直链或支链烷 基基团或结构部分，例如1-4个碳原子。C1-6烷基或结构部分的例子包 括C1-4烷基或结构部分，例如包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁 基、异丁基和叔丁基。为了避免歧义，当一个基团中存在两个烷基时， 这两个烷基基团可以相同或不同。

本文中，C1-4亚烷基基团或结构部分是直链或支链亚烷基基团或结 构部分。例子包括次甲基、正亚乙烷基和正亚丙烷基基团和结构部分。

本文中，卤素典型地是氯、氟、溴或碘，优选氯、溴或氟，更优 选氯、氟或碘。

本文中，典型的C1-6烷氧基是在所述C1-6烷基上连接一个氧原子。 卤代烷基或卤代烷氧基典型地是被一个或多个所述卤素原子取代的烷 基或烷氧基。典型地，其被1、2或3个卤素原子所取代。优选的卤代 烷氧基包括被一个或两个氯原子取代的烷氧基，更优选被一个氯原子 取代。特别优选的卤代烷基包括-O-(CH2)3-Cl。其他优选的卤代烷基和 卤代烷氧基包括全卤代烷基和全卤代烷氧基，例如-CX3和-OCX3，其中 X是所述卤素原子，例如氯和氟。特别优选的卤代烷基是-CF3和-CCl3。

本文中，C1-4羟基烷基是被一个或多个羟基取代的C1-4烷基。典型 地，其被1、2或3个羟基所取代。优选地，其仅被一个羟基取代。优 选的羟基烷基是-(CH2)2-OH。

本文中，C1-4氨基烷基是被一个或多个-NR’R”基团取代的C1-4烷基 基团，其中每一个R’和R”相同或不同，代表氢或C1-4烷基。典型地， 其被1、2或3个-NR’R”基团所取代，其中每一个R’和R”相同或不同， 代表氢或C1-4烷基。优选地，每一个R’和R”相同或不同，代表氢或C1-2 烷基，更优选氢或甲基。优选地，C1-4烷基仅被一个如上文所述的-NR’R” 基团取代。更优选地，C1-4烷基仅被一个-N(CH3)2基团取代。

本文中，5-10元杂芳基基团或结构部分是5-10元芳香环单环， 例如5元环或6元环，含有至少一个杂原子，例如1、2或3个杂原子， 所述杂原子选自O、S和N。例子包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪 基、呋喃基、噻吩基、吡咯烷基、吡咯基、噁二唑基、噁唑基、异噁唑 基、噻唑基、噻二唑基、咪唑基和吡唑基，优选呋喃基、噻吩基、吡 啶基和嘧啶基。

当A或A’是与有苯基、5-10元杂芳基、5-10元杂环基或C3-6碳环 基稠合的5-10元杂芳基时，其典型地与苯基、5-6元杂芳基或5-6元 杂环基稠合。更优选地，其与苯基稠合。

当A或A’是与苯基、5-10元杂芳基、5-10元杂环基或C3-6碳环基 稠合的苯基时，其优选与苯基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基稠合。更 优选地，其与5-6元杂芳基或杂环基稠合。更优选地，其与1，4-二氧 环己烷环稠合。

本文中，5-10元杂环基或结构部分是单环非芳香族的、其中一个 或更多个碳原子，例如1、2或3个碳原子被选自N、O、S、S(O)和S(O)2 的结构部分取代的饱和或不饱和C5-C10碳环。典型地，其是5-6元环。

适合的杂环基或结构部分包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、硫代 吗啉基、S-氧代-硫代吗啉基、S，S-二氧代-硫代吗啉基、吗啉基、吡 咯烷基、吡咯啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、1，3-二氧戊环基、1，4-二 氧戊环基、1，2-二氧杂环己基、1，3-二氧杂环己基、1，4-二氧杂环己 基和吡唑啉基及其结构部分。优选的杂环基是哌嗪基、吡咯烷基、吗 啉基和1，4-二氧杂环己烷基团，特别是吗啉基和1，4-二氧杂环己烷基 团。

当A或A’是所述稠合有苯基、5-10元杂芳基、5-10元杂环基或 C3-6碳环基的5-10元杂环基时，其优选与苯基、5-6元杂芳基或5-6元 杂环基稠合。更优选，其与苯基环稠合。

为了避免产生歧义，虽然上述定义的杂芳基和杂环基指的是环中 存在N的结构部分，然而化学领域技术人员能够明显地意识到当N原 子通过单键与邻近的环原子相连接时，其可以被质子化(或者带有如上 文所定义的取代基)。

本文中，C3-6碳环基团是具有3-6个碳原子的单环非芳香族饱和或 不饱和碳氢环。优选其是具有3-6个碳原子的饱和碳氢环(即环烷基)。 例子包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

当A或A’是所述稠合有苯基、5-10元杂芳基、5-10元杂环基或 C3-6碳环基的C3-6碳环基时，其优选与苯基、5-6元杂芳基或5-6元杂环 基环稠合。

当所述苯基、杂芳基、杂环基和碳环基团被两个或三个取代基取 代时，优选不超过一个取代基，取代基选自氰基和硝基。

典型地，R1、R2和R6中的苯基、杂芳基、杂环基和碳环结构部分 是未取代的，或被1、2或3个相同或不同的未被取代的取代基所取代， 这些取代基选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷 氧基、羟基和-NR’R”，其中每个R’和R”相同或不同，代表氢或C1-4烷 基。更典型地，在此实施方案中，R6中的环基是未取代的，A和A’中的 苯基、杂芳基、杂环基和碳环结构部分是未取代的，或被1、2或3个 相同或不同的未被取代的取代基所取代，这些取代基选自卤素、C1-4烷 基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、羟基和-NR’R”，其中 每个R’和R”相同或不同，代表氢或C1-4烷基。

优选地，R1、R2和R6中的苯基、杂芳基、杂环基和碳环结构部分 是未取代的，或被1、2或3个相同或不同的未被取代的取代基所取代， 所述取代基选自卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4 卤代烷氧基。更典型地，在优选的实施方案中，R6中的环基是未取代的， A和A’中的苯基、杂芳基、杂环基和碳环结构部分是未取代的，或被1、 2或3个相同或不同的未被取代的取代基所取代，所述取代基选自卤素、 C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4卤代烷氧基。

更优选地，R1、R2和R6中的苯基、杂芳基、杂环基和碳环结构部 分是未取代的，或被1或2个相同或不同的未被取代的取代基所取代， 所述取代基选自卤素例如氯和氟、羟基、C1-4烷基例如甲基和C1-4烷氧 基。更典型地，在此实施方案中，R6中的环基是未取代的，A和A’中的 苯基、杂芳基、杂环基和碳环结构部分是未取代的，或被1或2个相 同或不同的未被取代的取代基所取代，所述取代基选自卤素例如氯和 氟、C1-4烷基例如甲基和C1-2烷氧基。

典型地，每一个A相同或不同，是苯基、5-6元杂芳基或5-6元 杂环基，其可任选地与其他苯基、5-6元杂芳基、5-6元杂环基或C3-6 碳环基稠合。优选地，每一个A相同或不同，是苯基或5-6元杂芳基， 其任选地与其他苯基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基稠合。更优选地， 每一个A相同或不同，是非稠合的苯基或5-6元杂芳基、或者是与其 他苯基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基稠合的苯环。当A是5-6元杂芳 基时，其优选是嘧啶基、呋喃基或噻吩基。当A是稠合基团时，其优 选是与5-6元杂环基稠合的苯基，最优选是1，4-二氧杂环己基。

典型地，A是未取代的，或被1或2个相同或不同的未被取代的 取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基、C1-4烷基和C1-4烷氧基。更 典型地，这些取代基选自卤素、C1-4烷基和C1-2烷氧基。

典型地，每一个A’相同或不同，是苯基、5-6元杂芳基或5-6元 杂环基，并且任选与其他的苯基、5-6元杂芳基、5-6元杂环基或C3-6 碳环基稠合。更典型地，A’是非稠合的苯基、5-6元杂芳基或5-6元杂 环。更典型地，A’是非稠合的5-6元杂芳基或杂环基，例如吡啶基、吡 咯烷基和吗啉基，特别是吡啶基和吗啉基。

典型地，A’是未取代的，或被1或2个相同或不同的未被取代的 取代基取代，所述取代基选自卤素、C1-4烷基和C1-2烷氧基。优选A’不 被取代。

典型地，Het是-O-、-S-或-NR’-，其中R’是氢或C1-2烷基。更优 选地，Het是-O-或-NR’-，其中R’是氢或C1-2烷基。更优选地，Het是-O-。

典型地，Het’是-O-、-S-或-NR’-，其中，R’是氢或C1-2烷基。更 优选地，Het’是-O-或-NR’-，其中R’是氢或C1-2烷基。当Het’ 是-NR’-时，优选R’是甲基。

典型地，每一个L相同或不同，代表C1-4亚烷基。更优选地，每 一个L独立地选自次甲基、正亚乙烷基或正亚丙烷基。

优选地，每一个L’相同或不同，代表氢或C1-2烷基、C1-2卤代烷基、 C1-2羟基烷基或C1-2氨基烷基。典型地，这些优选的L’基团选自氢和C1-2 烷基、C1-2卤代烷基和C1-2羟基烷基。

更优选地，每一个L’相同或不同，代表氢、C1-2烷基、C1-2氨基烷 基或C1-2羟基烷基。典型地，那些更优选的L’基团选自氢、C1-2烷基和 C1-2羟基烷基。

当L’是C1-2烷基时，其优选是甲基。当L’是C1-2羟基烷基时，其 优选是-(CH2)2OH。当L’是C1-2氨基烷基时，其优选是-(CH2)2-N(CH3)2。

当R1是-A时，优选R1是苯基或5-6元杂芳基，并且任选其与其 他的苯基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基稠合。更优选地，R1是苯基、 5-6元杂芳基或与其他的苯基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基稠合的苯 基。更优选地，R1是苯基、嘧啶基、呋喃基或噻吩基或是与1、4-二氧 杂环己基稠合的苯基。

当R1是-A时，优选R1是未取代的，或被1或2个相同或不同的 未被取代的取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基、C1-4烷基和C1-4 烷氧基。典型地，优选的取代基选自卤素、C1-4烷基和C1-2烷氧基。优 选的卤素取代基包括氟。优选的C1-4烷基取代基包括甲基。优选的C1-2 烷氧基取代基包括甲氧基和乙氧基。

当R1是-A-A’时，典型地，R1是-苯基-A’，其中A’是非稠合的5-6 元杂环基。更优选地，A’是吗啉基。

当R1是-A-Het-L-Het’-L’时，典型地，R1是-苯基-O-L-Het’-L’。 典型地，L是正亚乙烷基。典型地，Het’是-O-或-NR’-，其中R’是氢或 C1-2烷基。更优选地，Het’是-O-或-NMe-。典型地，L’是甲基或C1-2氨基 烷基，例如-(CH2)2-N(CH3)2。优选地，L’是甲基。

当R1是-A-Het-L-A’时，典型的R1是-苯基-O-L-A’。典型的L是次 甲基或正亚丙烷基，优选次甲基。典型的A是5-6元杂芳基或5-6元 杂环基。典型地，A’是非稠合的。更优选地，A’是非稠合的5-6元杂芳 基或杂环基、更优选地，是未取代的吡啶基、吡咯烷基或吗啉代基团。 更典型地，在此实施方案中，这些优选的A’基团选自非稠合的5-6元 杂芳基，优选未取代的吡啶基。

当R1是-A-A’、-A-Het-A’、-A-L-A’、-A-Het-L-A’、 -A-L-Het-A’、-A-Het-L-Het’-A’或-A-Het-L-Het’-L’时，典型的A是未 取代的，或被1或2个相同或不同的未被取代的取代基取代，所述取 代基选自卤素、C1-4烷基和C1-2烷氧基。更优选地，A未被取代，或者被 卤素原子，优选氟取代。更优选地，A未被取代。相似地，当R1 是-A-A’、-A-Het-A’、-A-L-A’、-A-Het-L-A’、-A-L-Het-A’、-A-Het- L-Het’-A’或-A-Het-L-Het’-L’时，典型的A’是未取代的，或被1或2 个相同或不同的未被取代的取代基取代，所述取代基选自卤素、C1-4烷 基和C1-2烷氧基。更优选地，A’未被取代。

当R1是卤素时，典型的是氯、溴或碘原子，更优选是溴或碘原子、 最优选是碘原子。

当R1是C1-6烷基时，典型的是C1-4烷基，例如叔-丁基。

当R1是C1-4烷氧基时，典型的是C1-2烷氧基，更优选是甲氧基。

优选地，R1代表卤素、C1-4烷基、C1-2烷氧基或基 团-A、-A-A’、-A-Het-A’、-A-L-A’、-A-Het-L-A’、-A-L-Het-A’、-A- Het-L-Het’-A’或-A-Het-L-Het’-L’，其中A、A’、Het、Het’、L和L’ 如上文所定义。

更优选地，R1代表卤素例如溴和碘、C1-4烷基、C1-2烷氧 基、-A、-A-A’、-A-Het-L-A’或-A-Het-L-Het’-L’。更优选地，R1代表 卤素例如溴和碘、C1-4烷基、C1-2烷氧基、-A、-A-A’、-A-O-L-A’ 或-A-O-L-Het’-L’。

在本发明另一个实施方案中，R1代表-A、-A-A’、-A-Het-A’、 -A-L-A’、-A-Het-L-A’、-A-L-Het-A’、-A-Het-L-Het’-A’或 -A-Het-L-Het’-L’，其中A是任选与其他苯基、5-10元杂芳基、5-10 元杂环基或C3-6碳环基稠合的苯基，A’、Het、L、Het’和L’如上文所定 义。

当R2是C1-4卤代烷氧基时，优选其被1或2个卤素原子所取代。 优选的卤素原子是氯原子。当R2是C1-4卤代烷氧基时，其优选 是-O-(CH2)3-Cl。

当R2代表-Het-L-A’时，R2典型是-O-L-A’。L优选是正亚丙烷基。 典型地，A’是非稠合的5-6元杂环基，例如吗啉。当R2代表-Het-L-A’ 时，优选A’未被取代。

当R2代表-Het-L-Het’-L’时，Het’优选是-O-或-NR’-，其中R’是 氢或C1-2烷基。更优选地，Het’是-NMe-。当R2代表-Het-L-Het’-L’时， Het优选是-O-。当R2代表-Het-L-Het’-L’时，L优选是正亚丙烷基。当 R2代表-Het-L-Het’-L’时，L’优选是-(CH2)2-OH。

优选R2代表氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4 卤代烷氧基或结构部分-Het-L-A’或-Het-L-Het’-L’，其中Het、Het’、 L、L’和A’如上文所定义。更优选地，R2代表氢、C1-4烷氧基、C1-4卤代 烷氧基或结构部分-Het-L-A’或-Het-L-Het’-L’，其中Het、Het’、L、L’ 和A’如上文所定义。

更优选地，R2代表氢、C1-4卤代烷氧基或结构部分-Het-L-A’ 或-Het-L-Het’-L’，其中Het、Het’、L、L’和A’如上文所定义。

优选地，R3是氢或C1-2烷基。更优选地，R3是氢。

优选地，每一个R4相同或不同，代表卤素或C1-4烷基。更优选地， 每一个R4相同或不同，代表C1-2烷基，特别是甲基。优选n是0或1。 更优选地，n是0。

优选地，R5是氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基或C1-4氨基 烷基。更优选地，R5是氢或C1-4烷基，更优选地是氢或甲基，最优选是 氢。

典型地，R6结构部分中的X代表-OR’、-NR’R”或5-6元杂芳基或 杂环基，其中R’和R”如上文所定义。典型地，所述杂芳基或杂环基是 未取代的，或被1或2个未被取代的取代基所取代，所述取代基选自 卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C1-4烷氧基。优选地，所述杂芳基或杂 环基是杂环基，特别是哌嗪基，其不被取代或者被C1-2烷基取代。典型 地，-NR’R”基团中的R’和R”相同或不同，代表氢或C1-2烷基。

典型地，R6是氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4氨基 烷基或-CO-X，其中X如上文所定义。

优选地，R6是氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基或C1-4氨基烷 基。更优选地，R6是氢。

本发明优选的化合物为其中：

-R1是卤素、C1-4烷基、C1-2烷氧基或结构部分-A、-A-A’、 -A-Het-A’、-A-L-A’、-A-Het-L-A’、-A-L-Het-A’、-A-Het-L-He t’-A’或-A-Het-L-Het’-L’；

-R2是氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷 氧基或结构部分-Het-L-A’或-Het-L-Het’-L’；

-R3是氢或C1-2烷基；

-R4是氢、卤素或C1-4烷基；

-R5是氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基或C1-4氨基烷基；

-R6是氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4氨基烷基或-CO-X， 其中X是-OR’、-NR’R”或5-6元杂芳基或杂环基，是未取代的， 或被1或2个未被取代的取代基所取代，所述取代基选自卤素、 C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷氧基，R’和R”相同或不同，代表 氢或C1-4烷基；

-n是0或1；

-每一个A相同或不同，是苯基或5-6元杂芳基，并且任选地与其 他苯基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基稠合；

-每一个A’相同或不同，是非稠合的苯基、5-6元杂芳基或5-6元 杂环；

-每一个Het和Het’相同或不同，是-O-、-S-或-NR’，其中R’是氢 或C1-2烷基；

-每一个L相同或不同，是C1-4亚烷基；以及

-每一个L’相同或不同，是氢或C1-2烷基、C1-2卤代烷基、C1-2羟基 烷基或C1-2氨基烷基；

A和A’中的苯基、杂芳基、杂环基是未取代的，或被1、2或3个 相同或不同的未被取代的取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基、 C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4卤代烷氧基。

本发明其他优选的化合物为其中：

-R1是卤素、C1-4烷基、C1-2烷氧基或结构部 分-A、-A-A’、-A-Het-A’、-A-L-A’、-A-Het-L-A’、-A-L-Het-A’ 、-A-Het-L-Het’-A’或-A-Het-L-Het’-L’；

-R2是氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷 氧基或结构部分-Het-L-A’或-Het-L-Het’-L’；

-R3是氢或C1-2烷基；

-R4是氢、卤素或C1-4烷基；

-R5是氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基或C1-4氨基烷基；

-R6是氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基或C1-4氨基烷基；

-n是0或1；

-每一个A相同或不同，是苯基或5-6元杂芳基，其任选地与其他 苯基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基稠合；

-每一个A’相同或不同，是非稠合的苯基、5-6元杂芳基或5-6元 杂环；

-每一个Het和Het’相同或不同，是-O-、-S-或-NR’，其中R’是氢 或C1-2烷基；

-每一个L相同或不同，是C1-4亚烷基；

-每一个L’相同或不同，是氢或C1-2烷基、C1-2卤代烷基或C1-2羟基 烷基；

A和A’中的苯基、杂芳基、杂环基是未取代的，或被1、2或3个 相同或不同的未被取代的取代基取代，所述取代基选自卤素、C1-4烷基、 C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4卤代烷氧基。

本发明进一步优选的化合物为其中：

-R1是卤素、C1-4烷基、C1-2烷氧基、-A、-A-A’、-A-O-L-A’或 -A-O-L-Het’-L’；

-R2是氢、C1-4卤代烷氧基或结构部分-O-L-A’或-O-L-Het’-L’；

-R3是氢；

-R4是C1-2烷基；

-n是0或1；

-R5是氢或C1-4烷基；

-R6是氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4氨基烷基或 -CO-X，其中X是-OR’、-NR’R”或5-6元杂环基，其被C1-2烷基取 代或不取代，R’和R”相同或不同，代表氢或C1-2烷基；

-每一个A相同或不同，是非稠合的苯基或5-6元杂芳基，或者是 与其他苯基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基稠合的苯环，所述A 基团被1或2个相同或不同的未被取代的取代基取代或不取代， 所述取代基选自卤素、羟基、C1-4烷基和C1-4烷氧基；

-每一个A’相同或不同，是未取代的5-6元杂芳基或杂环基；

-每一个Het’相同或不同，是-O-或-NR’-，其中R’是氢或C1-2烷基；

-每一个L相同或不同，是次甲基、正亚乙烷基或正亚丙烷基；以 及

-每一个L’相同或不同，是氢、C1-2烷基、C1-2卤代烷基、C1-2羟基烷 基或C1-2氨基烷基。

典型地，在本发明这些进一步优选的化合物中，R1是-A、-A-A’、 -A-O-L-A’或-A-O-L-Het’-L’，每一个A是非稠合的苯基，或者是与其 他苯基、5-6元杂芳基或5-6元杂环基稠合的苯基。

本发明更优选的化合物是式(Ia)喹唑啉衍生物及其药学可接受的 盐：

其中：

-R1是卤素、C1-4烷基、C1-2烷氧基、-A、-A-A’、-A-O-L-A’ 或-A-O-L-Het’-L’；

-R2是氢、C1-4卤代烷氧基或结构部分-O-L-A’或-O-L-Het’-L’；

-每一个A相同或不同，是苯基、5-6元杂芳基或与其他苯基、5-6 元杂芳基或5-6元杂环基稠合的苯基，所述A基团是未取代的， 或被1或2个相同或不同的未被取代的取代基取代，所述取代基 选自卤素、C1-4烷基和C1-2烷氧基；

-每一个A’相同或不同，是未取代的5-6元杂芳基或杂环基；

-每一个Het’相同或不同，是-O-或-NR’-，其中R’是氢或C1-2烷基；

-每一个L相同或不同，是次甲基、正亚乙烷基或正亚丙烷基；以 及

-每一个L’相同或不同，是氢、C1-2烷基或C1-2羟基烷基。

本发明进一步优选的化合物是式(Ib)喹唑啉衍生物及其药学上可 接受的盐：

其中：

-每一个R4相同或不同，代表卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选 C1-4烷基，更优选C1-2烷基；

-n是0、1或2；

-每一个R’相同或不同，代表卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选C1-2 烷氧基；以及

-m是0、1或2。

本发明进一步优选的化合物是式(Ic)喹唑啉衍生物及其药学上可 接受的盐：

其中：

-每一个R4相同或不同，代表卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选 C1-4烷基、更优选C1-2烷基；

-n是0、1或2；以及

-R”是-A’、-Het-A’、-L-A’、-Het-L-A’、-L-Het-A’、 -Het-L-Het’-A’或-Het-L-Het’-L’，其中A’、Het、L、Het’和L’ 如上文所定义

特别优选的式(I)化合物包括：

1.(6-碘-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺。

2.(6-叔-丁基-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺。

3.[7-(3-氯-丙氧基)-6-甲氧基-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1- 基-苯基)-胺。

4.[6-甲氧基-7-(3-吗啉-4-基-丙氧基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4] 三唑-1-基-苯基)-胺。

5.[6-(3，4-二氟-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯 基)-胺。

6.[6-(4-氯-3-氟-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯 基)-胺。

7.[6-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基- 苯基)-胺。

8.[6-(4-乙氧基-3-氟-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基- 苯基)-胺。

9.{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4-基}-(4-[1，2，4] 三唑-1-基-苯基)-胺。

10.[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基 -苯基)-胺。

11.[6-(3，4-二乙氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基 -苯基)-胺。

12.{6-[4-(2-二甲基氨基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺。

13.{6-[4-吡啶-4-基甲氧基)-苯基]-喹唑啉-4-基}-(4-[1，2，4]三 唑-1-基-苯基)-胺。

14.[6-(4-吗啉-4-基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基- 苯基)-胺。

15.[6-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁环己-6-基)-喹唑啉-4- 基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺。

16.[6-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1- 基-苯基)-胺。

17.(6-噻吩-2-基-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺。

18.[6-(4-甲基-噻吩-2-基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基- 苯基)-胺。

19.(6-呋喃-2-基-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4-三唑-1-基-苯基)-胺。

20.{6-[4-(2-二甲基氨基-乙氧基)-3-氟-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺。

21.(6-溴-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺。

22.N-(2-{2-氟-4-[4-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基氨基)-喹唑啉-6- 基]-苯氧基}-乙基)-N，N/，N/-三甲基-乙烷-1，2-二胺.

23.[6-(3-异丙氧基-4-甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三 唑-1-基-苯基)-胺。

24.[6-(4-氟-3-异丙氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑 -1-基-苯基)-胺。

25.{6-[3-氟-4-(3-吡咯烷-1-基-丙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺。

26.{6-[3-氟-4-(3-吗啉-4-基-丙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺。

27.[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(2-甲基-4-[1，2，4]三 唑-1-基-苯基)-胺。

28.1-(4-{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4-基氨 基}-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸。

29.1-{4-[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基氨基]-苯基}-5-甲 基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸。

30.1-{4-[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基氨基]-苯基}-5-甲 基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸二甲基酰胺。

31.1-(4-{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4-基氨 基}-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸甲基酰胺。

32.1-(4-{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4-基氨 基}-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸二甲基酰胺。

33.(6-溴-喹唑啉-4-基)-(2-甲基-4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺。

34.[1-(4-{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4-基氨 基}-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲 酮。

35.2-甲氧基-4-[4-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基氨基)-喹唑啉-6- 基]-苯酚。

36.2-甲氧基-5-[4-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基氨基)-喹唑啉-6-基] 苯酚。

37.{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4-基}-(2-甲基 -4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺。

及其药学上可接受的盐。

式(I)化合物包含一个或多个手性中心，可以应用其纯的对映体 或者非对映异构体，或者应用异构体的混合物。为了避免产生歧义， 如有需要，式(I)化合物以溶剂合物的形式应用。再者，为了避免产生 歧义，本发明化合物可以应用其任何互变异构形式。

本文中，药学可接受的盐是与药学可接受的酸或碱形成的盐。 药学可接受的酸既包括无机酸例如盐酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氢溴 酸或硝酸，也包括有机酸例如柠檬酸、反丁烯二酸、马来酸、苹果酸、 抗坏血酸、琥珀酸、酒石酸、苯甲酸、乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺 酸或对-甲苯磺酸。药学可接受的碱包括碱金属(例如钠或钾)和碱土金 属(例如钙或镁)氢氧化物，以及有机碱例如烷基胺、芳烷基胺和杂环 胺。

本发明化合物可以按如下举例的反应路线制备。在下述反应路 线中，为了清楚起见，R3、R5和R6基团显示为氢原子。同样，R4基团被 略掉(即n为0)。用R3、R4、R5和R6位置具有适当取代基的4-三唑苯胺 衍生物，可以制备R3、R5和R6不是氢和/或其中n为1或2的类似的化 合物。

反应路线1

在反应路线1，通过将式(II)化合物的4-羟基转化为适当的离 去基团(例如氯)从而将式(II)化合物转变为式(I)化合物，这一反应利 用试剂例如亚硫酰氯作为溶剂，并且加入催化活性剂(例如二甲基甲酰 胺)，然后与4-三唑苯胺在适当溶剂(例如乙腈)中进行反应。

参见反应路线1，式(III)化合物转变为式(II)化合物对于本领 域技术人员而言是熟知的方法，可以利用甲酰胺作为溶剂在升高的温 度下(例如回流)很容易地完成。

R1 为-A、-A-A’、-A-Het-A’、-A-L-A’、-A-Het-L-A’、-A-L-Het-A’、-A- Het-L-Het’-A’或-A-Het-L-Het’-L’的式(I)化合物作为备选方案根据下 述反应路线2反应制备。该反应通常在醋酸存在下，约120℃温度下 反应约1小时完成。

反应路线2

反应路线2中应用的起始原料式(IV)化合物可以通过下述反应 路线3描述的反应路线之一制备。在反应路线3中，基团S1和S2可 代表保护基团，例如苯甲基，其可在随后的反应中以本领域已知的方 法被想得到的基团所取代。脱保护反应可在式(IV)化合物转化为式(I) 化合物之前或之后进行。

参见反应路线3，使用有机金属试剂(VII)处理式(VIII)化合 物，或者使用有机金属试剂(V)处理式(VI)化合物，均可在适当溶剂 (例如四氢呋喃、二甲基甲酰胺、甲苯或2-丙醇)及适当温度(例如环境 温度至回流)下方便地进行。本反应适宜在钯催化剂(例如10mol％三(二 苯亚甲基丙酮)二钯(II)、10mol％二氯二(三苯基膦)钯(O)、1mol％二 (苄腈)钯(II)氯化物或0.02mol％四(三苯基膦)钯(O))催化下，在有 机碱(例如三乙胺)或无机碱(例如2N碳酸钠或磷酸氢二钾)存在下完 成。当试剂(VII)是有机锡烷(organostannane)(例如M＝SnBu3)时， 本领域技术人员可以理解该反应是Stille偶合反应的一个例子，反应 中加入某些物质是有益的(例如氯化锂)，氧化银，在甲苯中及回流温 度下完成该反应。当试剂(VII)是硼酸衍生物时，本领域技术人员可以 理解该反应是Suzuki-Miyaura偶合反应的一个例子，其可在2-丙醇中 于60℃完成反应。

本领域技术人员应当理解的是，反应路线3中所述化合物中的 基团X是适当的离去基团例如I或Br。

反应路线3

上述反应路线中的起始原料都是已知化合物，或者通过已知的 类似方法能够制备得到。

本发明化合物具有治疗有效性。因此本发明提供了如上文所定 义的式(I)喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐，用于治疗人类或动 物。本发明还提供了包括如上文所定义的式(I)喹唑啉衍生物或其药学 上可接受的盐和药学可接受的载体或稀释剂的药物组合物。

典型地，所述药物组合物包括最多85wt％的本发明化合物。更 典型地，其包括最多50wt％的本发明化合物。优选的药物组合物是无 菌和无热原的。另外，典型地，本发明药物组合物包含一种本发明化 合物，其基本是纯的光学异构体。

如上文所述，本发明化合物具有对抗黄病毒感染的活性。本发 明因而提供如上文所述的式(I)喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐 在制备用于治疗或预防黄病毒科感染的药物中的用途。本发明还提供 了一种治疗受到黄病毒科感染的患者和易感者的方法，该方法包括对 所述患者使用有效量的式(I)喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐。

黄病毒科包括三个属：丙型肝炎病毒属、黄病毒属和瘟病毒属。 本发明化合物可有效地治疗或预防丙型肝炎属病毒感染、黄病毒属感 染或瘟病毒属感染。

典型地，能够以本发明化合物治疗的瘟病毒属感染包括牛病毒 性腹泻病毒、猪瘟病毒和羊边界病毒。

典型地，能够以本发明化合物治疗的黄病毒科感染包括黄热病 病毒、登革热病毒、日本脑炎病毒和蜱传脑炎病毒。

典型地，能够以本发明化合物治疗的丙型肝炎病毒属感染包括 丙型肝炎病毒。

本发明化合物对于对抗丙型肝炎特别有效。典型地，所述黄病 毒科病毒指的是丙型肝炎病毒。

本发明化合物可以以各种剂型应用。因此，它们可以口服给药， 例如片剂、含片、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒。本发明 化合物还可以胃肠外给药，如皮下注射、静脉注射、肌肉注射、胸骨 内注射、经皮注射或输注。化合物还可以以栓剂的形式使用。

本发明化合物通常和药学可接受的载体或稀释剂组合制备制 剂。例如，固态口服制剂中除了活性化合物还包括稀释剂如乳糖、葡 萄糖、蔗糖、纤维素、玉米淀粉或土豆淀粉；润滑剂如二氧化硅、滑 石、硬脂酸、硬脂酸镁或硬脂酸钙和/或聚乙二醇；粘合剂如淀粉、阿 拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解 剂如淀粉、海藻酸、藻酸盐或羧甲基淀粉钠；泡腾混合剂；着色剂； 甜味剂；湿润剂如卵磷脂、聚山梨酯、硫酸月桂酯；和通常药物制剂 中使用的无毒无活性物质。上述药物制剂可通过已知方法制备，例如 混合、制粒、压片、包糖衣或薄膜包衣。

口服给药的液体分散体可以是糖浆剂、乳剂和混悬液。糖浆可 包括载体例如蔗糖，或蔗糖与甘油和/或甘露醇和/或山梨醇。

混悬液和乳剂可包括载体例如天然胶、琼脂、海藻酸钠、果胶、 甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯醇。用于肌肉注射的混悬液或溶 液除了包括活性化合物以外，还可包括药学可接受的载体例如无菌水、 橄榄油、油酸乙酯、二醇例如丙二醇，如有需要，还包括适量的盐酸 利多卡因。

用于注射或输注的溶液可包括载体例如无菌水，或者优选其为 无菌的等渗盐水溶液。

本发明化合物可与已知抗病毒剂联合应用。本发明中优选的已 知抗病毒剂是干扰素和利巴韦林及其衍生物，已知这些药物可用于治 疗丙型肝炎(Clinical Microbiology Reviews，Jan.2000，67-82)。 因此，所述药物典型地还包括干扰素或其衍生物和/或利巴韦林或其衍 生物。另外，本发明提供了一种药物组合物，包括：

(a)如上文所述的式(I)喹唑啉衍生物或其药学上可接受的 盐：

(b)干扰素或其衍生物和/或利巴韦林或其衍生物；和

(c)药学可接受的载体或稀释剂。

本发明还提供了一种产品，包括：

(a)如上文所述的式(I)喹唑啉衍生物或其药学上可接受的 盐；和

(b)干扰素或其衍生物和/或利巴韦林或其衍生物，

产品中的成分可分别、同时或先后使用，以治疗人类或动物体。

优选的干扰素衍生物是PEG-干扰素。优选的利巴韦林衍生物是 viramidine。

另外，还发现本发明化合物与干扰素具有协同相互作用。因此， 优选上述药物组合物或产品的成分(b)是干扰素，更典型的是I型干扰 素，优选干扰素α。

优选的干扰素是干扰素α 2b，其通常为聚氧乙烯化的 (pegylated)，例如PEG-干扰素(Schering Plough Corp)或蛋白融合 产物例如Albuferon(Human Genome Sciences)。干扰素α2b还可制 备成控制释放制剂。

另一种优选的干扰素是干扰素α 2a。优选地，干扰素α 2a是聚 氧乙烯化的，例如Pegasys(罗氏)和Roferon A(罗氏)。

另一种优选的干扰素是干扰素α 8(Riotech)。

另一种优选的干扰素是干扰素α-1(Intermune)，优选peg化 的干扰素α-1。

另一个实施方案中，干扰素是干扰素β，优选干扰素β-1a。 (Serono SA)。

另一个实施方案中，干扰素是干扰素γ(Intarcia)。

优选地，干扰素被包含在制剂或装置中，所述制剂或装置以控 制的方式释放干扰素。例如ALZA Corp研发的DUROS输入技术和Durect Corp研发的SABER药物释放技术。

本发明还提供了如上文所述的式(I)喹唑啉衍生物或其药学上 可接受的盐在制备与所述干扰素或干扰素衍生物联合给药以用于治疗 或预防HCV感染的药物中的用途。本发明还提供了所述干扰素或干扰 素衍生物在制备与如上文所述的式(I)喹唑啉衍生物或其药学上可接 受的盐联合给药以用于治疗或预防HCV感染的药物中的用途。

将治疗有效量的本发明化合物，如有需要，连同所述干扰素或 干扰素衍生物用于患者。通常剂量为约0.01-100mg/kg体重，根据特 定化合物的活性、年龄、体重、被治疗对象的状况、疾病的类型和严 重程度以及给药频率和途径决定。优选地，日给药剂量为0.05-16mg/kg 体重，更优选地，为0.05-1.25mg/kg体重。

本发明化合物还可与其他抗病毒剂联合应用。本发明中优选的 抗病毒剂是环孢菌素、白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、 干扰RNA或反义RNA，所有这些药物已知可用于治疗丙型肝炎。本发 明化合物还可与其他的HCV核酸序列抑制剂或HCV蛋白靶剂联合应用。 优选的HCV蛋白靶剂包括HCV丝氨酸蛋白酶，如来自Vertex的VX-950 和来自Scering Plough的SCH-503034，此两者均为蛋白酶抑制剂；HCV 聚合酶，如Wyeth的HCV-796；HCV解螺旋酶；HCV NS4B和HCV NS5A。 此外，本发明化合物还可与HCV进入细胞的抑制剂或HCV与宿主细胞 蛋白质相互作用的抑制剂联合应用。

下述实施例用于解释本发明。但不以任何方式限制本发明。根 据此观点，理解下述内容是非常重要的：用于实施例部分的具体实验 仅用于提供抗病毒活性的效果。有很多实验方法可测定这种活性，因 此任何一种测定方法中的阴性结果都不是决定性的。

实施例

物质和方法：

所有的温度单位均为℃。薄层色谱法(TLC)在覆盖有Si 60G的 塑料板上使用uv254指示剂(Polygram)进行。除非另有说明，所有的NMR 光谱都在d6-DMSO中于250MHz处获得，化学位移单位为ppm，表观偶 合常数(J)为多重。

“浓缩”是指真空条件下去除溶剂。所有的固体均在40℃干燥。

LC-MS条件

将样品在MicroMass ZMD上运行，用电喷射同时检测正负离子。

柱：Synergi Hydro-RP，30 x 4.6mm I.D，4μm。

梯度：95:5-5:95 v/v H2O/CH3CN+0.05％甲酸，历时4.0分钟， 保持3分钟，返回95:5 v/v H2O/CH3CN+0.05％甲酸，历时0.2分钟， 在95:5 v/v H2O/CH3CN+0.05％甲酸保持3分钟。

检测：PDA 250-340nm。

流速：1.5mL/分钟。

所有的保留时间(rt)均以分钟计。

实验：

中间体1：2-氨基-5-碘苄腈

根据方法A制备。Rosowsky & H.Chen，J.Org.Chem.2001， 66，7522-7526。

1H NMR(CDCl3)δ 7.64(1H，s)，7.55(1H，dd，J 8.5，2.5Hz)， 6.53(1H，d，J 8.5Hz)，4.66(2H，br s)；LC-MS rt 2.42 m/z 243 ES-。

中间体2：N’-(2-氰基-4-碘-苯基)-N，N-二甲基-甲脒

将2-氨基-5-碘苄腈(50g，0.2mol)在DMF-DMA(2.5eq，6ml) 中的溶液加热至120℃，加热2小时。通过浓缩除去过量的DMF-DMA， 得到标题化合物，为粘稠褐色油状物(61g，量子)。4℃放置凝固。

1H NMR(CDCl3)δ 7.79(1H，d，J 1.9Hz)，7.65(1H，dd，J 1.9， 8.5Hz)，7.57(1H，s)，6.70(1H，d，J 8.2Hz)，3.08(6H，s)；LC-MS rt 2.1 M/z 300 ES+。

中间体3：2-氨基-5-溴苄腈

使用溴化铵(10.3g，0.105mol)和过氧化氢(10.2ml，35％水 溶液，0.105mol)处理2-氨基苄腈(11.8g，0.1mol)在AcOH(120ml) 中的溶液。室温下搅拌混合物大约24小时，直至LCMS分析显示反应 完全。浓缩混合物，去除AcOH，之前先在残渣中加入30％NaOH水溶液 至碱性。过滤出形成的固体，在干燥前用水洗涤。然后将此固体溶解 在过量的DCM中。浓缩溶液直至开始形成沉淀，然后静置直至结晶完 全。过滤出形成的固体，用少量DCM洗涤。得到标题化合物，为灰白 色结晶固体(19.2g，97％)。

1H NMR δ 7.61(1H，d，J 2.5Hz)，7.43(1H，dd，J 9，2.5Hz)， 6.75(1H，d，J 9Hz)，6.28(2H，br s)；LC-MS rt 2.24。

中间体4：N’-(4-溴-2-氰基-苯基)-N，N-二甲基-甲脒

将2-氨基-5-溴苄腈(10.25g，52mmol)在DMF-DMA(20ml) 中的溶液加热至回流1小时。冷却混合物，浓缩至干燥，然后使用叔- 丁基-甲基-醚(TBME)(10ml)研磨。加入汽油(30ml)刮固体，静置1 小时。滤出固体产物，使用TBME/汽油(1:2)洗涤，得到结晶固体(11.95 g，91.2％)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.55(1H，d，J 2Hz)，7.51(1H，s)，7.41 (1H，dd，J 2，9Hz)，6.75(1H，d，J 9Hz)，3.01(6H，s)；LC-MS rt 1.95 m/z 252/254 ES-。

中间体5：2-氨基-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二噁硼杂环戊-2-基)- 苄腈

使用中间体1(10g)处理PdCl2(dppf)(3.35g)、醋酸钾(12.07 g)和双戊酰二硼(12.48g)在干燥DMF(80ml)中的混合物，加热至80°， 加热4小时。冷却的混合物在水(400ml)和DCM(400ml)中分开，进 一步用DCM(2 x 100ml)萃取水相，将合并的有机相干燥、浓缩。利 用色谱法在硅胶(90g，MPLC)上纯化残留物，洗脱剂为10-30％ EtOAc 在汽油中的溶液。浓缩含产物的部分，加入汽油研磨，得到目标产物， 为白色固体(6.91g，69％)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.87(1H，s)，7.72(2H，d，J 8.21)，6.7(1H， d，J 8.2Hz)，4.57(2H，br s)，1.31(12H，s)；LC-MS rt 2.84 m/z 244 ES+。

中间体6：N’-[2-氰基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二噁硼杂环戊-2- 基)-苯基]-N，N-二甲基-甲脒

N2环境下，将中间体5(750mg)在DMF-DMA(1ml)中的悬浮液加 热至100℃，加热30分钟，然后冷却至室温。去除溶剂，利用SPE在 硅胶(5g)上纯化残留物，洗脱剂为10％ EtOAc/汽油。得到的标题化合 物为澄清油状物，放置结晶(915mg，100％)。

1H NMR(CDCl3)7.98(1H，s)，7.817(1H，d，J 8.2Hz)，7.62 (1H，s)，6.92(1H，d，J 7.6Hz)，3.1(3H，s)，3.07(3H，s)，1.33 (12H，s)；LC-MS rt 2.73 m/z 300 ES+。

中间体7：4-(4-碘-苯氧基甲基)-吡啶

将4-碘代苯酚(1g)、K2CO3(粉末，1.88g)和4-吡啶甲基氯 化物(822mg)在丙酮(15ml)中的混合物加热回流16小时。再加入4- 吡啶甲基氯化物(411mg)，继续加热6小时。冷却，过滤，将滤液吸附 在二氧化硅上，使用MPLC(35g Si、10-50％ EtOAc在汽油中的溶液 梯度洗脱30分钟)纯化。浓缩，得到白色固体(710mg，50％)。

1H NMR(CDCl3)δ 8.64(2H，d，J 5.69Hz)，7.6(2H，d，J 8.85Hz)， 7.35(2H，d，J 5.69Hz)，6.76(2H，d，J 8.85Hz)，5.08(2H，s)。

中间体8：4-溴-1，2-二乙氧基-苯

在搅拌均匀的二乙氧基苯(500mg)和溴化铵(323mg，1.1eq) 在MeCN(20ml)的混合物中加入过硫酸氢钾制剂(oxone)(2.03g， 1.1eq)。室温下搅拌混悬液4小时，然后过滤混悬液，浓缩滤液得到 标题化合物(723mg，>90％)，无需进一步纯化。

1H NMR(CDCl3)6.98(2H，m)，6.73(1H，d，J 8.85Hz)，4.05 (4H，m)，1.44(6H，m)；LC-MS rt 2.48 m/z 279 ES+。

中间体9：4-溴-1-(2-溴乙氧基)-2-氟苯

0℃、氮气条件下，搅拌4-溴-2-氟苯酚(3.5g，18.3mmol， 1eq)、2-溴乙醇(3.44g，27.5mmol，1.5eq)和三苯基膦(7.21g， 27.5mmol，1.5eq)在THF(50mL)中的溶液，使用注射器在其中逐滴加 入DEAD(4.78g，27.5mmol，1.5eq)。然后将反应物温度升至室温。2 小时后，在真空条件下浓缩反应液至干燥，将灰白色残留物放置在矮 层二氧化硅的顶部，以9:1石油蒸馏物：EtOAc(3 x 50mL)洗涤。浓 缩滤液，得到澄清油状标题化合物(5.28g，97％)。

1H-NMR(DMSO-d6)3.57(t，2H)，4.26(t，2H)，6.80(m，1H)， 7.12(m，1H)，7.19(m，1H)。LC-MS rt 2.90 m/z无离子。

中间体10：N-[2-(4-溴-2-氟苯氧基)乙基]-N’，N’，N’-三甲基乙烷-1，2- 二胺

将中间体9(3g，10mmol，1eq)、N，N，N’-三甲基乙二胺(1.54g， 15mmol，1.5eq)和碳酸钾(2.09g，15mmol，1.5eq)在丙酮中的混合物 加热至回流。16小时后，反应冷却至室温，然后过滤。真空下浓缩滤 液得到淡橙色浆液。利用快速柱色谱纯化该浆液，先用100％ CH2Cl2洗 脱，再用100:8:1 CH2Cl2:EtOH:NH3洗脱。分离标题化合物，为淡橙色 浆液(2.24g，70％)。Rf＝0.12(100:8:1 CH2Cl2:EtOH:NH3)。

1H-NMR(DMSO-d6)2.41(s，3H)，2.57(s，6H)，2.82(m，4H)， 2.91(t，2H)，4.14(t，2H)，6.89(m，1H)，7.21(m，1H)，7.27(m， 1H)。LC-MS rt 1.79 m/z 320 ES+。

中间体11：N’-(3-氰基-4’-{2-[(2-二甲基氨基乙基)甲基氨基]乙氧 基}-3’-氟二苯基-4-基)-N，N-二甲基甲脒

氮气条件下，将中间体10(950mg，2.98mmol，1eq)、双戊酰二 硼(1.51g，5.95mmol，2eq)、醋酸钾(1.02g，10.43mmol，3.5eq)和 PdCl2(dppf)2CH2Cl2(245mg，0.30mool，0.1eq)在DMF(10mL)中的混 合物加热至80°C。16小时后，将反应物冷却至室温，真空浓缩得到 褐色残留物。使用EtOAc(3 x 20mL)萃取残留物，合并萃取液，真空 浓缩至干燥，得到褐色油状物(1.09g)。将得到的油状物(1.09g)、N’-(2- 氰基-4-碘代苯基)-N，N-二甲酰胺(811mg，2.71mmol)和四(三苯基膦) 钯(162mg，0.14mmol)在DME(10mL)的混合物和饱和Na2CO3水溶液(5mL) 加热回流。20小时后，将反应物冷却至室温，然后真空浓缩得到褐色 残留物。利用快速柱色谱纯化残留物，洗脱液为800:8:1、200:8:1和 100:8:1的CH2Cl2:EtOH:NH3。分离标题化合物，得到淡棕色油状物 (273mg，22％)。Rf＝0.08(100:8:1 CH2Cl2:EtOH:NH3)。

1H-NMR(DMSO-d6)2.20(s，6H)，2.33(s，3H)，2.41(t，2H)， 2.57(t，2H)，2.81(t，2H)，3.03(s，3H)，3.05(s，3H)，4.11(t， 2H)，6.95(m，2H)，7.17(m，2H)，7.58(m，2H)，7.61(m，1H)。 LC-MS rt 1.86 m/z 412 ES+。

中间体12：2-甲氧基-5-溴苯酚

利用下述方法制得：Meyers and Snyder，J.Org.Chem，1993， 58，1，42。

1H NMR(CDCl3)7.00(1H，d，J 2.25Hz)，6.90(1H，dd，J 8.5， 2.25Hz)，6.66(1H，d，J 8.75Hz)，5.57(1H，s)，3.81(3H，s)。

中间体13：5-溴-2-氟苯酚

利用下述方法制得：M Elliott，N Janes & B Khambay， GB2187731.

1H NMR(CDCl3)7.08(1H，m)，6.89(2H，m)，5.14(1H，s)。

中间体14：4-溴-2-异丙氧基-1-甲氧基-苯

在中间体12(279mg，1.37mmol)在DMF(5ml)的溶液中加入碳 酸钾(945mg，6.85mmol)和2-碘代丙烷(684μl，6.85mmol)。90℃搅拌 反应混合物4小时。LC-MS分析显示还剩余20％的起始原料苯酚，再在 其中加入另一份2-碘代丙烷(684μl，6.85mmol)，90℃搅拌混合物过 夜。

LC-MS显示所有的起始原料苯酚都已反应完全，然后过滤反应混 合物，以水(50ml)稀释滤液，用乙酸乙酯萃取三次。将合并的萃取液 在硫酸镁上干燥、过滤、减压蒸发得到深褐色油状物(294mg，87％)。

1H NMR(D6-DMSO)6.93(2H，m)，6.68(1H，d，J 8.75Hz)，4.43 (1H，m)，3.75(3H，s)，1.31(6H，d，J 6Hz)；LC-MS rt 2.80。

中间体15：4-溴-1-氟-2-异丙氧基-苯

在中间体13(262mg，1.37mmol)在DMF(5ml)中的溶液中加入 碳酸钾(945mg，6.85mmol)和2-碘代丙烷(684μl，6.85mmol)。90℃搅 拌反应混合物4小时。LCMS分析显示还剩余20％的起始原料苯酚，因 此再加入另一份2-碘代丙烷(684μl，6.85mmol)，90℃搅拌反应混合 物过夜。

LC-MS显示所有的起始原料苯酚都已反应完全，然后过滤反应混 合物，以水(50ml)稀释滤液，用乙酸乙酯萃取三次。将合并的萃取液 在硫酸镁上干燥、过滤、减压蒸发得到深褐色油状物(274mg，86％)。

1H NMR(D6-DMSO)7.00(1H，dd，J 2.25Hz)，6.92(2H，m)，4.45 (1H，m)，1.30(6H，d，J 6.25Hz)

LC-MS rt 2.93。

中间体16：4-氨基-3’-异丙氧基-4’-甲氧基-二苯基-3-腈

在中间体14(294mg，1.2mmol)在二甲氧基乙烷(4ml)中的溶液 中加入中间体5(439mg，1.8mmol)，然后加入饱和碳酸钠水溶液(2ml) 和四(三苯基膦)钯(0)(139mg，0.12mmol)。80℃搅拌反应混合物过夜。 LC-MS分析显示所有的起始原料都已反应完全，然后以水稀释反应混合 物，二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取液在硫酸镁上干燥、过滤、减 压蒸发。利用柱色谱法(梯度0-50％ EtOAc在石油醚中)得到目标产物， 为黄色固体(137mg，40％)。

1H NMR(CDCl3)7.47(2H，m)，6.94(2H，m)，6.87(1H，d，J 9Hz)，6.75(1H，d，J 8.5Hz)，4.55(1H，quin，J 6.25Hz)，4.37(2H， s)，3.81(3H，s)，1.34(6H，d，J 6.25Hz)；LC-MS rt 2.70。

中间体17：4-氨基-4’-氟-3’-异丙氧基-二苯基-3-腈

在中间体15(274mg，1.18mmol)在二甲氧基乙烷(4ml)的溶液 中加入中间体5(439mg，1.8mmol)，然后加入饱和aq.碳酸钠(2ml) 和四(三苯基膦)钯(O)(139mg，0.12mmol)。80℃搅拌反应混合物过夜。

LC-MS分析显示所有的起始原料都已反应完全，然后以水稀释反 应混合物，二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取液在硫酸镁上干燥、过 滤、减压蒸发。利用柱色谱法(梯度0-50％ EtOAc在石油醚中)得到目 标产物，为黄色固体(196mg，60％)。

1H NMR(CDCl3)7.41(2H，m)，6.97(3H，m)，6.72(2H，d，J 8Hz)，4.53(1H，五重峰，J 6Hz)，4.40(2H，s)，1.33(6H，d，J 6Hz)； LC-MS rt 2.86。

中间体18：N’-(3-氰基-3’-异丙氧基-4’-甲氧基-二苯基-4-基)-N，N- 二甲基-甲脒

将中间体16(137mg，0.41mmol)在DMF-DMA(2ml)中的溶液在 80℃搅拌过夜。LCMS分析显示所有的起始原料均已反应完全。减压蒸 发反应混合物，然后将其重新溶于甲苯，再次减压蒸发。利用柱色谱 法(梯度20-40％ EtOAc在石油醚中)得到标题化合物，为深黄色油状 物，静置固化(120mg，87％)。

1H NMR(CDCl3)7.63(1H，d，J 2Hz)，7.57(1H，s)，7.54(1H， dd，J 8.5Hz，2.25Hz)，7.00(2H，s)，6.91(2H，m)，4.54(1H，quin， J 6Hz)，3.82(1H，s)，3.05(6H，d，J 6.5Hz)，1.35(6H，d，J 6Hz)； LC-MS rt 2.40 m/z 338 ES+。

中间体19：N’-(3-氰基-4’-氟-3’-异丙氧基-二苯基-4-基)-N，N-二甲基 -甲脒

将中间体17(196mg，0.60mmol)在DMF-DMA(2ml)中的溶液在 80℃搅拌过夜。LCMS分析显示所有的起始原料均已反应完全。减压蒸 发反应混合物，将其再溶于甲苯中，再次减压蒸发。利用柱色谱法(梯 度20-40％ EtOAc在石油醚中)得到标题化合物，为深黄色油状物，静 置固化(190mg，97％)。

1H NMR(CDCl3)7.57(2H，m)，7.49(1H，dd，J 8.5Hz，2.25Hz)， 6.99(4H，m)，4.53(1H，quin，J 6Hz)，3.02(6H，d，J 5.75Hz)， 1.32(6H，d，J 6Hz)；LC-MS rt 2.71 m/z 326 ES+。

中间体20：1-(3-甲基-4-硝基-苯基)-1H-[1，2，4]三嗪

在50ml圆底烧瓶中加入4-氟-2-甲基-1-硝基苯(0.5g， 3.22mmol)、Na2CO3(0.36g，3.38mmol)和1，2，4-三唑(0.22g，3.22 mmol)在DMF(DRY 10ml)中的溶液。氮气条件下，125℃拌混合物24小 时。蒸出DMF至干燥，将粗产品置于二氧化硅柱上，以2.5％MeOH：DCM 洗脱，分离出0.47g(72％)白色固体。

1H n.m.r(D6-DMSO)9.52(1H，s)，8.39(1H，s)，8.27(1H， d，J＝8.85Hz)，8.13(1H，d，J＝1.89Hz)，8.02(1H，dd，J＝8.85Hz， 2.53Hz)，2.68(3H，s)；LC-MS rt 2.26 m/z 205 ES+。

中间体21：2-甲基-4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基胺

在50ml圆底烧瓶中加入中间体20(0.47g，2.3mmol)和EtOH (10ml)。室温下，在此搅拌的混合物中加入SnCl2.2H2O(2.5g， 11.5mmol)。然后在80℃加热混合物4小时。冷却混合物，加入2N NaOH 调节溶液pH至8。过滤混合物，浓缩至干燥，然后将其在 DCM:H2O(50ml:25ml)中分离。分出水层，再用DCM(25ml)洗涤。合并 DCM部分，使其通过疏水玻璃料以去除水分。浓缩滤液至干燥，得到褐 色固体0.3g(75％)。

1H n.m.r(D6-DMSO)9.02(1H，s)，8.15(1H，s)，7.43(1H， d，J＝1.89Hz)，7.37(1H，dd，J＝8.20Hz，2.52Hz)，6.76(1H，d， J＝8.85Hz)，5.20(2H，s)，2.18(3H，s)；LC-MS rt 1.33 m/z 175 ES+。

中间体22：N’-[3-氰基-3’-氟-4’-(2-甲氧基-乙氧基)-二苯基-4- 基]-N，N-二甲基-甲脒

步骤1：4-溴-2-氟-1-(2-甲氧基-乙氧基)-苯

将4-氟苯酚(9.8ml)、粉末状碳酸钾(2eq，24g)和溴乙基甲基 醚(1.1eq，20.16ml)在丙酮(60ml)中的混合物加热至回流，过夜。冷 却反应混合物，以水稀释，EtOAc萃取。合并的有机相使用碳酸钠水溶 液洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩得到可流动的油状产物(22g，定量)。

1H n.m.mr.(CDCl3)δ 7.14(2H，m)，6.84(1H，t，J 8.85Hz)， 4.09(2H，m)，3.69(2H，m)，3.38(3H，s)；LC-MS rt 2.67 m/z无 离子。

步骤2：3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基硼酸

在4-溴-2-氟-1-(2-甲氧基-乙氧基)-苯(4.98g)在THF(40ml) 中的溶液中加入小晶体碘，然后分次加入Mg(730mg，1.5eq)。加完后， 加热回流混合物4小时。将灰色混合物冷却至-78°。加入三甲基硼酸 盐(1.2eq，2.25ml)，室温过夜。加入1N HCl(水溶液，60ml)，搅拌 30分钟，然后以乙醚(2 x 50ml)萃取。将合并的有机相干燥、浓缩，使 用乙醚/石油研磨得到的固体，过滤分离，干燥得到标题化合物，为灰 白色固体(3.122g，73％)。

1H NMR(CDCl3)δ 8.04(2H，br s)，7.53(2H，m)，7.12(1H， t，J 8.85Hz)，4.17(2H，m)，3.67(2H，m)，3.3(3H，s)；LC-MS rt 1.97 m/z 213 ES-。

步骤3：N’-[3-氰基-3’-氟-4’-(2-甲氧基-乙氧基)-二苯基-4-基]-N，N- 二甲基-甲脒

使用二氯(二苄腈)钯(II)(1％，30mg)处理3-氟-4-(2-甲氧基 乙氧基)-苯基硼酸(1.83g，1.2eq)、中间体2(2.32g)、碳酸钾(1.29g， 1.2eq)在DMF/H2O(3:1，40ml)中的混合物，在环境温度和氮气条件下 搅拌4小时。加入水(100ml)稀释混合物，过滤，然后以EtOAc(2 x 50ml) 萃取，将有机萃取液加入滤饼中，干燥，浓缩。将残留物溶于DCM中， 置于二氧化硅短柱上，分段洗脱，洗脱液为DCM/EtOH/NH3 400-200:8:1。 浓缩，使用DCM/乙醚/汽油研磨，以另外的汽油(60ml)稀释结晶，得到 褐色油状物。过滤分离标题化合物，得到灰白色固体(1.665g，63％)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.74(1H，d，J 1.9Hz)，7.7(1H，s)，7.60 (1H，dd，J 8.85，1.9Hz)，7.29(3H，m)，7.1(1H，d，J 8.2Hz)，7.05 (1H，d，J 8.85Hz)，4.28(2h，m)，3.84(2H，m)，3.52(3H，s)，3.16 (3H，s)，3.14(3H，s)；LC-MS rt 2.32 m/z 342 ES+。

中间体23：N’-(3-氰基-3’，4’-二甲氧基-二苯基-4-基)-N，N-二甲基- 甲脒

使用2N碳酸钠水溶液(10ml)和四-(三苯基膦)钯(O)(5mg， 0.04mol％)处理中间体4(2.52g，10mmol)和3，4-二甲氧基苯基硼酸 (1.9g，1.2eq)在异丙醇(30ml)中的混合物，60°加热搅拌。2小时后， LCMS显示反应进行了80％。然后冷却反应混合物，以水(30ml)稀释。 滤出得到的固体，再以水洗涤(2 x 20ml)，然后抽气干燥。固体在乙醚 (2 x 5ml)中再成浆两次，抽气干燥，最后干燥得到二苯基中间体灰白色 固体(2.24g，72％)。

1H NMR(D6-DMSO)δ 7.99(1H，s)7.91(1H，d，J 1.9Hz)，7.79 (1H，dd，J 8.2，1.9Hz)，7.2(3H，m)，6.99(1H，d，J 8.2Hz)，3.84 (3H，s)，3.78(3H，s)，3.08(3H，s)3.01(3H，s)；LC-MS rt 2.31 m/z 309 ES-。

中间体24：1-(4-氨基-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸

在大气压下，温度设置为25℃，将5-甲基-1-(4-硝基苯 基)-1H-1，2，3-三唑-3-羧酸(100mg，0.403mM)在甲醇(8ml)中的溶液 以1mL/分钟的速度注射入氢化器“H-立方体”(“the H-Cube”)中， 所述“H-立方体”包括内部产生氢气及可随意储存结合的系统(Pd/C)。

浓缩得到的溶液，得到白色固体(82mg，93％)。

1H NMR(D6-DMSO)δ 8.72(1H，宽s)，8.59(1H，宽s)，7.42 (2H，d，J 8Hz)，7.23(1H，d，J 8Hz)，6.99(2H，d，J 8Hz)，6.70 (1H，d，J 8Hz)，2.48(3H，s)，2.45(3H，s)。

中间体25：1-(4-氨基-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸二甲基 酰胺

步骤1：5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸二甲 基酰胺

-10℃，在5-甲基-1(4-硝基苯基)-1H-1，2-4-三唑-3-羧酸(关 键有机物400mg，1.61mM)和Hunig’s碱(667ul，3.86mM)在DCM:DMF (6ml:1ml)中的溶液中滴加异丁基氯甲酸酯(250ul，1.93mM)。反应物 在-10℃搅拌30分钟，然后缓慢加入2M二甲基胺溶液(965ul， 1.93mM)。加热混合物至室温，再搅拌1小时。使用饱和NaHCO3洗涤粗 混合物，萃取，MgSO4干燥。蒸发得到黄色固体(412mg，93％)，可直接 用于下一反应而无需进一步纯化。LC-MS rt 2.09 m/z 275 ES+

1H NMR(D6-DMSO)δ 8.42(2H，d，J 7Hz)，7.95(2H，d，J 7Hz)， 3.13(3H，s)，3.03(3H，s)，2.62(3H，s)。

步骤2：1-(4-氨基-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸二甲基酰 胺

在大气压下，温度设置为25℃，将步骤1得到的5-甲基-1-(4- 硝基苯基)-1H-1，2，3-三唑-3-羧酸甲基酰胺(100mg，0.36mM)在甲醇 (8ml)中的溶液以1mL/分钟的速度注射入氢化器“H-立方体”(“the H-Cube”)中，所述“H-立方体”包括内部产生氢气及可随意储存结合 的系统(Pd/C)。

浓缩得到的溶液，得到白色固体(87mg，98％)。LC-MS：rt 1.54 m/z 245 ES+

1H NMR(D6-DMSO)δ 8.71(1H，宽s)，8.54(2H，d，J 7Hz)， 7.12(2H，d，J 7Hz)，3.13(3H，s)3.03(3H，s)，2.62(3H，s)。

实施例1：(6-碘-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

使用4-三唑苯胺(28mg，1eq)在MeCN中的溶液处理4-氯-6- 碘代喹唑啉(WO9609294 A1，150mg)，回流6小时。冷却过夜，过滤 得到标题化合物(70mg)。

1H NMR δ 11.75(1H，br s)，9.4(2H，s)，9.04(1H，s)，8.43 (1H，d，J 8.85Hz)，8.34(1H，s)，8.0(4H，m)，7.82(1H，d，J 8.85Hz)； LC-MS rt 2.32 m/z 415 ES+。

实施例2：(6-叔-丁基-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)- 胺

将2-氨基-5-叔-丁基苯甲酸(商业获得，500mg)和甲脒醋酸盐 (404mg)在EtOH(5ml)中的溶液回流18个小时。过滤冷却的混合物， 使用冰冷却的EtOH洗涤沉淀，干燥得到羟基喹唑啉(394mg)，将羟基 喹唑啉加入亚硫酰氯化物(10ml)和DMF(cat.)中，加热回流过夜。冷 却混合物，使用EtOAc稀释，然后将其倒在碳酸氢钠水溶液上。分离 有机相，干燥，浓缩至褐色固体(327mg)，将此部分固体(105mg)立 即使用4-三唑基苯胺(125mg)在MeCN(4ml)中的溶液处理，回流过 夜。将冷却的混合物分散于DCM和碳酸氢钠之间，浓缩有机相。柱色 谱法纯化，洗脱液为DCM:EtOH:NH3(200:8:1)，得到标题化合物。

1H NMR δ 10.16(1H，s)，9.48(1H，s)，8.77(1H，s)，8.62(1H， s)，8.41(1H，d)，8.2(4H，m)，7.95(1H，d)，1.64(9H，s)；LC-MS rt 2.18 m/z 343 ES-。

实施例3：[7-(3-氯-丙氧基)-6-甲氧基-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三 唑-1-基-苯基)胺

将N’-[5-(3-氯-丙氧基)-2-氰基-4-甲氧基-苯基]-N，N-二甲基 -甲脒(WO03055491，580mg)、4-(1，2，4-三唑)苯胺(314mg)和AcOH(4 mL)加热至90℃，加热1小时，然后冷却。浓缩油状物，将得到的浆状 物溶于MeOH，声波处理，过滤得到的白色粉末，干燥，得到标题化合 物(765mg)。

1H NMR δ 9.65(s，1H)，9.25(s，1H)，8.5(s，1H)，8.23(s， 1H)，8.02(d，2H， J9Hz)，7.89(s，1H)，7.87(d，2H，J＝9)，7.24 (s，1H)，4.28(t，2H，J＝6)，3.95(s，3H)，3.83(t，2H，J 6Hz)， 2.27(q，2H，J 6Hz)；LC-MS rt 2.13 m/z 411 ES+。

实施例4：[6-甲氧基-7-(3-吗啉-4-基-丙氧基)-喹唑啉-4- 基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

将实施例3化合物(118.6mg，0.289mmol)、吗啉(120μL) 和二甲基乙酰胺(1.1mL)加热至90℃，加热12个小时，然后冷却， 浓缩，以柱色谱法纯化得到的油状物，洗脱液为200:8:1， DCM:MeOH:NH3。采用MeCN重结晶该油状物，得到无色结晶标题化合物 (126mg)。

1H NMR δ 9.55(s，1H)，8.57(s，1H)，8.02(s，1H)，7.80(d， 2H，J8.9)7.35(s，1H)，7.19(d，2H，J＝8.9)，4.38(t，2H，J6Hz)， 4.15(s，3H)，4-3.92(m，4H)，3.83-3.75(m，4H)，3.36-3.28(m， 4H)；LC-MS rt 1.78 m/z 462 ES+。

实施例5：[6-(3，4-二氟-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基- 苯基)-胺

步骤1：N’-(3-氰基-3’，4’-二氟-二苯基-4-基)-N，N-二甲基-甲脒

将3，4-二氟苯基硼酸(Lancaster，396mg，1.5eq)、中间体 2(500mg)和四(三苯基膦)钯(O)(5％，96mg)的混合物在DME/2N碳 酸钠(水溶液，2:1，13.5ml)中加热回流16小时。浓缩混合物，以水 和乙醚洗涤残留物，干燥，得到浅褐色固体(386mg，81％)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.57(1H，d，J＝2Hz)，7.54(1H，s)，7.45 (1H，dd，J＝8.5，2.25Hz)，7.13(3H，m)，6.90(1H，d，J＝8.5Hz)， 3.0(3H，s)，2.99(3H，s)；LC-MS rt 2.51；m/z 286 ES+。

步骤2：[6-(3，4-二氟-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基- 苯基)-胺

将步骤1的甲脒(150mg)和4-三唑基-苯胺(88mg，1eq)的混合 物在AcOH(2ml)中加热至80℃，加热16小时。冷却，浓缩，使用碳 酸氢钠水溶液小心处理。过滤分离出得到的固体，用水洗涤，然后加 入DCM:EtOH:NH3(20:8:1)，再次过滤。浓缩滤液直至产生沉淀，过滤 出沉淀，用乙醚洗涤，干燥得到标题化合物(82mg，34％)。

1H NMR δ 10.0(1H，s)，9.18(1H，s)，8.75(1H，s)，8.54(1H， s)，8.12(2H，m)，7.97(1H，m)，7.92(2H，m)，7.78(3H，m)，7.66 (1H，m)，7.53(1H，m)；LC-MS rt 2.52 m/z 401 ES+。

实施例6：[6-(4-氯-3-氟-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1- 基-苯基)-胺

步骤1：N’-(4’-氯-3-氰基-3’-氟-二苯基-4-基)-N，N-二甲基-甲脒

将4-氯-3-氟苯基硼酸(Combiblocks，759mg，1.3eq)、中间 体2(1g)和四(三苯基膦)钯(O)(5％，193mg)的混合物在DME/2N碳 酸钠(水溶液，2:1，27ml)中回流16小时。过滤混合物，浓缩滤液， 以饱和碳酸氢钠、水和乙醚洗涤残留物，干燥得到产物(310mg)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.58(1H，d，J 2.0Hz)，7.53(1H，s)，7.46 (1H，dd，J 8.5，2.25Hz)，7.31(1H，t，J 8.0Hz)，7.14(1H，m)， 7.12(1H，m)，6.9(1H，d， J 8.5Hz)，3.0(3H，s)，2.98(3H，s)； LC-MS rt 2.70；m/z 302 ES+。

步骤2：[6-(4-氯-3-氟-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基- 苯基)-胺

将步骤1的甲脒(300mg)和4-三唑基-苯胺(167mg，1eq)的混 合物在AcOH(3ml)中加热至80℃，加热2小时。冷却，过滤分离出 得到的固体，使用碳酸氢钠、水和MeCN洗涤。利用柱色谱法在二氧化 硅胶上纯化固体，洗脱液为DCM:EtOH:NH3(400:8:1 to 200:8:1)，得 到标题化合物。

1H NMR δ 10.36(1H，br s)，9.29(1H，s)，8.93(1H，s)，8.63 (1H，s)，8.25(2H，m)，8.03(3H，m)，7.86(2H，d，J9.25Hz)，7.81 (3H，m)；LC-MS rt 2.61 m/z 418 ES+。

实施例7：[6-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑 -1-基-苯基)-胺

步骤1：N’-(3-氰基-3’-氟-4’-甲氧基-二苯基-4-基)-N，N-二甲基-甲脒

将3-氟-4-甲氧基苯基硼酸(Aldrich，427mg，1.5eq)、中间 体2(500mg)和四(三苯基膦)钯(O)(5％，96mg)的混合物在DME/2N 碳酸钠(水溶液，2:1，13.5ml)中回流16小时。浓缩混合物，使用 水和乙醚洗涤残留物，干燥，得到浅褐色固体(436mg，88％)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.71(1H，d，J＝2.25Hz)，7.67(1H，s)， 7.59(1H，dd，J＝9.122.25Hz)，7.32(1H，m)，7.27(1H，m)，7.05 (2H，m)，3.96(3H，s)，3.14(3H，s)，3.12(3H，s)；LC-MS rt 2.33 m/z 298 ES+。

步骤2：[6-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1- 基-苯基)-胺

将步骤1的甲脒(200mg)和4-三唑基-苯胺(112mg，1eq)的混 合物在AcOH(2ml)中加热至80℃，加热16小时。冷却，浓缩，使用 碳酸氢钠水溶液小心处理。过滤分离得到的固体，用水洗涤，然后加 入DCM:EtOH:NH3(20:8:1)，再次过滤。浓缩滤液，直至形成沉淀，滤 出沉淀，用乙醚洗涤，干燥得到标题化合物(129mg，47％)。

1H NMR δ 10.06(1H，s)，9.29(1H，s)，8.81(1H，s)，8.63 (1H，s)，8.23(2H，m)，8.07(2H，d，J 10.0Hz)，7.93(1H，s)，7.88 (2H，m)，7.83(1H，m)，7.73(1H，d，J 7.50Hz)，7.35(1H，t，J 8.75Hz)，3.92(3H，s)；LC-MS rt 2.42 m/z 413 ES+。

实施例8：[6-(4-乙氧基-3-氟-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑 -1-基-苯基)-胺

步骤1：N’-(3-氰基-4’-乙氧基-3’-氟-二苯基-4-基)-N，N-二甲基-甲脒

将4-乙氧基-3-氟苯基硼酸(Combiblocks，800mg，1.3eq)、 中间体2(1g)和四(三苯基膦)钯(O)(5％，193mg)的混合物在DME/ 2N碳酸钠(水溶液，2:1，27ml)中回流16小时。过滤混合物，浓缩 滤液，使用饱和碳酸氢钠、水和乙醚洗涤残留物，干燥，得到产物 (410mg)。

1H NMR δ 7.71(1H，d，J＝2.0Hz)，7.67(1H，s)，7.60(1H， dd，J＝8.5 2.25Hz)，7.31(1H，m)，7.25(1H，m)，7.02(2H，m)， 4.17(2H，q，7.0Hz)，3.14(3H，s)，3.12(3H，s)，1.5(3H，t，7.0Hz)； LC-MS rt 2.51 m/z 312 ES+。

步骤2：[6-(4-乙氧基-3-氟-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1- 基-苯基)-胺

将步骤1的甲脒(400mg)和4-三唑基-苯胺(214mg，1eq)的混 合物在AcOH(3ml)中加热至80℃，加热2小时。冷却，过滤分离出得 到的固体，使用碳酸氢钠、水和MeCN洗涤，干燥，得到纯标题化合物。

1H NMR δ 10.27(1H，br s)，9.29(1H，s)，8.86(1H，s)，8.63 (1H，s)，8.26(1H，s)，8.22(1H，dd，J 8.752.5Hz)，8.10(2H， d，J 7.50Hz)，7.88(4H，m)，7.72(1H，d，7.5Hz)，7.34(1H，t， 7.5Hz)，4.21(2H，q，7.5Hz)，1.41(3H，t，7.5Hz)；LC-MS rt 2.53 m/z 427 ES+。

实施例9：{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

步骤1：4-溴-2-氟-1-(2-甲氧基-乙氧基)-苯

将4-氟苯酚(9.8ml)、粉末状碳酸钾(2eq，24g)和溴乙基甲 醚(1.1eq，20.16ml)的混合物在丙酮(60ml)中加热回流过夜。冷却 反应混合物，以水稀释，EtOAc萃取。合并有机相，以碳酸钠水溶液洗 涤，干燥(Na2SO4)，浓缩得到可流动的油状产物(22g，定量)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.14(2H，m)，6.84(1H，t，J 8.85Hz)，4.09 (2H，m)，3.69(2H，m)，3.38(3H，s)；LC-MS rt 2.67 m/z无离子。

步骤2：3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基硼酸

在4-溴-2-氟-1-(2-甲氧基-乙氧基)-苯(4.98g)在THF(40ml) 中的溶液中加入小晶体碘，然后分次加入Mg(730mg，1.5eq)。加入 后，加热回流混合物4小时。然后将灰色混合物冷却至-78℃，加入三 甲基硼酸盐(1.2eq，2.25ml)，室温过夜。加入1N HCl(水溶液，60 ml)，搅拌30分钟。使用乙醚(2 x 50ml)萃取。将合并的有机相干燥、 浓缩，使用乙醚/汽油研磨得到的固体，过滤分离，干燥，得到奶油色 固体标题化合物(3.122g，73％)。

1H NMR δ 8.04(2H，br s)，7.53(2H，m)，7.12(1H，t，J 8.85Hz)， 4.17(2H，m)，3.67(2H，m)，3.3(3H，s)；LC-MS rt 1.97 m/z 213 ES-。

步骤3：N’-[3-氰基-3’-氟-4’-(2-甲氧基-乙氧基)-二苯基-4-基]-N，N- 二甲基-甲脒

使用二氯(二苄腈)钯(II)(1％，30mg)处理3-氟-4-(2-甲氧 基乙氧基)-苯基硼酸(1.83g，1.2eq)、中间体2(2.32g)、碳酸钾 (1.29g，1.2eq)在DMF/H2O(3:1，40ml)中的混合物，在环境温度 和氮气条件下搅拌4小时。以水(100ml)稀释混合物，过滤，然后以 EtOAc(2 x 50ml)萃取，将这些有机萃取液加入滤饼，干燥，浓缩。 将残留物溶于DCM，置于二氧化硅短柱的顶部，抽气条件下分段洗脱， 洗脱液为DCM/EtOH/NH3 400-200:8:1。浓缩，得到褐色油状物，使用 DCM/乙醚/汽油研磨，再用汽油(60ml)稀释结晶。过滤分离标题化合 物，为奶油色固体(1.665g，63％)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.74(1H，d，J 1.9Hz)，7.7(1H，s)，7.60 (1H，dd，J 8.85，1.9Hz)，7.29(3H，m)，7.1(1H，d，J 8.2Hz)，7.05 (1H，d，J 8.85Hz)，4.28(2h，m)，3.84(2H，m)，3.52(3H，s)，3.16 (3H，s)，3.14(3H，s)；LC-MS rt 2.32 m/z 342 ES+。

步骤4：{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

将步骤3的甲脒(594mg)和4-三唑基-苯胺(279mg，1eq)的混 合物在AcOH(6ml)中加热至125℃，加热2小时。冷却，使用水(20ml) 洗涤，过滤分离出黄色沉淀，加入1N NaOH，成浆，水洗。干燥后，使 用MeOH/水/丙酮～10:5:5研磨物质，过滤，干燥，得到浅奶油色 固体(510mg，64％)。

1H NMR δ 10.1(1H，br s)，9.27(1H，s)，8.8(1H，s)，8.58 (1H，s)，8.24(1H，s)，8.18(1H，d，J 8.85Hz)，8.03(2H，d， J8.85Hz)，7.84(4H，m)，7.68(1H，d，J9.5Hz)，7.35(1H，t，J 8.85Hz)，4.26(2H，m)，3.72(2H，m)，3.35(3H，被H2O模糊)；LC-MS rt 2.4 m/z 457 ES+。

实施例10：[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑 -1-基-苯基)-胺

步骤1：N’-(3-氰基-3’，4’-二甲氧基-二苯基-4-基)-N，N-二甲基-甲脒

使用2N碳酸钠水溶液(10ml)和四-(三苯基膦)钯(0)(5mg， 0.04mol％)处理中间体4(2.52g，10mmol)和3，4-二甲氧基苯基硼 酸(1.9g，1.2eq)在异丙醇(30ml)中的混合物，搅拌加热至60℃。 2小时后，LCMS显示反应完成了80％。然后冷却反应混合物，以水(30ml) 稀释。滤出得到的固体，再用水(2 x 20ml)洗涤，抽气干燥。固体在 乙醚(2 x 5ml)中再成浆2次，抽气干燥，得到二苯基中间体，为灰 白色固体(2.24g，72％)。

1H NMR δ 7.99(1H，s)7.91(1H，d，J 1.9Hz)，7.79(1H，dd， J 8.2，1.9Hz)，7.2(3H，m)，6.99(1H，d，J 8.2Hz)，3.84(3H， s)，3.78(3H，s)，3.08(3H，s)3.01(3H，s)；LC-MS rt 2.31 m/z 309。

步骤2：[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1- 基-苯基)-胺

将步骤1的甲脒(2.96g，9.6mmol)和4-三唑基苯胺(1.54g， 9.6mmol)的混合物在AcOH(10ml)中加热至回流，加热3小时。冷却 溶液，用乙醚(200ml)洗涤，滤出得到的沉淀。使用乙醚洗涤滤饼， 抽气条件下干燥，加入2N NaOH(100ml)成浆，搅拌30分钟。再次过 滤分离出的固体，用水洗涤，干燥，得到浅黄色固体(3.81g，93％)。

1H NMR δ 10.11(1H，s)，9.30(1H，s)，8.80(1H，s)，8.65(1H， s)，8.26(1H，s)，8.23(1H，s)，8.10(2H，d，J 10Hz)，7.92(2H， d，J 10Hz)，7.88(1H，d，J 7.5Hz)，7.47(2H，重叠s)，7.16(1H， d，J 7.5Hz)，3.93(3H，s)，3.85(3H，s)；LC-MS rt 2.17 m/z 425 ES+。

实施例11：[6-(3，4-二乙氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑 -1-基-苯基)-胺

将中间体8(200mg)和中间体6(490mg)的混合物与四(三苯 基膦)钯(O)(95mg)在DME(3ml)和碳酸钠(1ml)中混合，加热至 100℃，过夜。冷却混合物，以水稀释，DCM萃取。合并有机相，浓缩， 柱色谱法纯化，洗脱液为CH2Cl2/EtOH/NH3(200:8:1)，得到偶合物。 取此一部分偶合物(70mg)在醋酸(1ml)和4-三唑基苯胺(37mg)中加 热至80℃，加热1小时。浓缩混合物，用饱和NaHCO3进行碱化，过滤 分离出得到的沉淀，使用水和乙醚洗涤，干燥，然后使用EtOAc、MeCN、 乙醚洗涤，干燥，得到标题化合物(32mg，34％)。

1H NMR δ 10.4(1H，br s)，9.27(1H，s)，8.82(1H，s)，8.6 (1H，s)，8.23(1H，s)，8.16(2H，d，J 8.85Hz)，7.95(2H，d，J 8.85Hz)，7.44(2H，m)，7.13(1H，d，J 8.2Hz)，4.15(4H，m)，1.37 (6H，m)；LC-MS rt 2.44，m/z 453 ES+。

实施例12：(6-[4-(2-二甲基氨基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

步骤1：N’-[3-氰基-4’-(2-二甲基氨基-乙氧基)-二苯基-4-基]-N，N- 二甲基-甲脒

使用二氯(二苄腈)钯(II)(1％，12mg)处理4-(2-二甲基氨基 -乙氧基)-硼酸(根据下述文献制得：C.Zhou and R.C.Larock， Journal of Organic Chemistry，Vol.70，No.10，pp 3765，915mg， 1.2eq)、中间体2(934mg)和碳酸钾(1.2eq，520mg)在DMF/H2O(3:1， 20ml)中的混合物，在环境温度和氮气条件下搅拌4小时。浓缩混合 物，分散在水和EtOAc之间。将合并的有机相干燥、浓缩，置于SPE(20 g，Si)上，抽气条件下分段洗脱，洗脱液为DCM-DCM/EtOH/NH3-200:8:1 梯度。浓缩，得到褐色油状物(1.0g，定量)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.71(1H，d，J2.5Hz)，7.64(1H，s)，7.6 (1H，dd，J8.2，2.5Hz)，7.44(2H，d，8.2Hz)，6.98(3H，m)，4.1 (2H，m)，3.11(3H，s)，3.08(3h，s)2.75(2H，m)，2.29(6H，s)； LC-MS rt 1.71 m/z 337 ES+。

步骤2：{6-[4-(2-二甲基氨基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

将步骤1的甲脒(528mg)和4-三唑基苯胺(294mg)的混合物在 AcOH(5ml)中加热至125℃，加热3小时。冷却后，稀释混合物，使 用1N NaOH(80ml)碱化。过滤分离出得到的奶油色沉淀物，干燥得到 标题化合物(495mg，70％)。

1H NMR δ 10.3(1H，br s)，9.34(1H，s)，8.9(1H，s)，8.67 (1H，s)，8.31(1H，s)，8.23(1H，dd，J 8.85，1.9Hz)，8.15(2H， d，J 8.85Hz)，7.92(4H，m)，7.19(2H，d，J 8.85Hz)，4.2(2H，m)， 2.72(2H，m)，2.3(6H，s)；LC-MS rt 1.96 m/z 452 ES+。

实施例13：{6-[4-吡啶-4-基甲氧基)-苯基]-喹唑啉-4-基}-(4-[1，2，4] 三唑-1-基-苯基)-胺

步骤1：4-氨基-4’-(吡啶-4-基甲氧基)-二苯基-3-腈

将中间体5(835mg，1.5eq)、中间体7(710mg)和四(三苯 基膦)钯(0)(5％，263mg)的混合物在DME/2N碳酸钠(水溶液，2:1， 15ml)中在80℃加热16小时。在水和EtOAc之间逐步进行水性处理 (aqueous workup)，得到残留物，使用MPLC(35g Si，10-100％ EtOAc 在汽油梯度洗脱剂中，超过30分钟)纯化此残留物。浓缩，得到标题 化合物(310mg，45％)。

1H NMR(CDCl3)δ 8.63(2H，m)，7.5(2H，m)，7.38(3H，m)， 6.99(2H，d，J 8.65Hz)，6.79(1H，d，J 8.65Hz)，5.127(2H，s)， 4.42(2H，br s)。

步骤2：{6-[4-吡啶-4-基甲氧基)-苯基]-喹唑啉-4-基}-(4-[1，2，4] 三唑-1-基-苯基)-胺

使用DMF-DMA(5ml)在DMF(3ml)中于80℃处理步骤1中间体 (310mg)3小时。蒸发混合物，将其溶于甲苯，浓缩得到浅黄色固体， 干燥过夜。使用4-三唑基苯胺(57mg)在AcOH(1ml)的溶液在80℃处 理一部分上述物质(74mg)2小时。冷却混合物，使用碳酸氢钠水溶液 碱化，过滤得到的沉淀，以水、乙醚和MeCN洗涤，得到标题化合物(88 mg，59％)。

1H NMR δ 10.5(1H，brs)，9.26(1H，s)，8.87(1H，s)，8.59 (3H，m)，8.23(1H，s)，8.1(3H，m)，7.84(5H，m)7.47(5H，m)， 7.18(2H，m)，5.29(2H，s)；LC-MS rt 2.23 m/z 472 ES+。

实施例14：[6-(4-吗啉-4-基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑 -1-基-苯基)-胺

步骤1：N’-(3-氰基-4’-吗啉-4-基-二苯基-4-基)-N，N-二甲基-甲脒

将4-吗啉基苯基硼酸(Maybridge，992mg，1.5eq)、中间体2 (955mg)和四(三苯基膦)钯(0)(5％，185mg)的混合物在DME/2N碳 酸钠(水溶液，2:1，12ml)中于90℃加热16小时。将其在水和EtOAc 之间进行逐步水性处理，得到褐色残留物，抽气条件下使用SPE(Si，20 g)分段洗脱进行纯化，洗脱液为DCM/EtOH/NH3 600-200:8:1，得到褐 色固体，使用DCM/汽油对其进行研磨，过滤得到浅褐色固体(430mg， 40％)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.45(3H，m)，7.29(2H，d，J8.85Hz)，6.81 (3H，m)，3.71(4H，m)，3.03(4H，m)，2.94(3H，s)，2.91(3H，s)； LC-MS rt 2.16 m/z 335 ES+。

步骤2：[6-(4-吗啉-4-基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1- 基-苯基)-胺

将步骤1的甲脒(76mg)和4-三唑基苯胺(24mg)的混合物在AcOH (2ml)中于125℃加热1小时。冷却后，稀释混合物，使用1N NaOH(20 ml)进行碱化。过滤分离出得到的沉淀物，使用DCM洗涤，然后使用MeOH /丙酮研磨。浓缩滤液，得到浅绿色固体目标化合物(22mg)。

1H NMR δ 10.45(1H，br s)，9.3(1H，s)，8.88(1H，s)，8.6 (1H，s)，8.26(1H，s)，8.14(3H，m)，7.87(5H，m)，7.12(2H，d， J 8.85Hz)，3.78(4H，m)，3.21(4H，m)；LC-MS rt 2.28 m/z 450 ES+。

实施例15：[6-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁环己-6-基)-喹唑啉-4- 基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

步骤1：N’-[2-氰基-4-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁环己-6-基)-苯 基]-N，N-二甲基-甲脒

将1，4-(亚乙基二氧)苯-6-硼酸(Lancaster，785mg，1.2eq)、 中间体2(1.08g)和四(三苯基膦)钯(0)(205mg)在DME/2N碳酸 钠(水溶液，2:1，12ml)中于80℃加热18小时。将其在水和EtOAc 之间进行逐步水性处理，得到褐色固体，抽气条件下利用SPE(Si，20g) 分段洗脱纯化，洗脱液为DCM/EtOH/NH3 600-200:8:1，得到浅褐色固 体(430mg，41％)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.68(1H，d，J 2.5Hz)，7.63(1H，s)，7.56(1H， dd，J 8.2，2.5Hz)，6.96(4H，m)，4.29(4H，s)，3.1(3H，s)，3.08 93H，s)。LC-MS rt 2.22 m/z 308 ES+。

步骤2：[6-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁环己-6-基)-喹唑啉-4- 基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

将步骤1的甲脒(304mg)和4-三唑基苯胺(75mg)的混合物在 AcOH(2ml)中加热至125℃，加热1.5小时。冷却后，稀释混合物， 并使用1N NaOH(20ml)碱化。过滤分离出得到的沉淀物，干燥得到目 标化合物(136mg，71％)，为黄色固体。

1H NMR δ 10.07(1H，s)，9.28(1H，s)，8.78(1H，s)，8.62 (1H，s)，8.25(1H，s)，8.16(1H，d，J 8.85Hz)，8.07(2H，d，J 8.85Hz)，7.86(2H，d，J 8.85Hz)，7.82(1H，d，J 8.85Hz)，7.47 (1H，d，J 1.9Hz)，7.38(1H，dd，J 8.2，1.9Hz)，7.03(1H，d，J 8.85Hz)4.32(4H，s)；LC-MS rt 2.35 m/z 423 ES+。

实施例16：[6-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三 唑-1-基-苯基)-胺

步骤1：2-氨基-5-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-苄腈

将中间体3(602mg)、2-甲氧基嘧啶-5-硼酸(Frontier，1.5eq， 706mg)和四(三苯基膦)钯(O)(352mg)的混合物在DME/2N碳酸钠 (水溶液，2:1，20ml)中于100℃加热12小时。将其在水和EtOAc之 间进行逐步水性处理，得到褐色固体，利用SPE(Si，20g)洗脱纯化， 洗脱液先是DCM(4 x 10ml)，然后是EtOAc(4 x 10ml)，得到固体，使 用DCM/汽油研磨该固体，过滤得到浅褐色固体(660mg)。

1H NMR δ 8.85(2H，s)，7.8(1H，s)，7.6(>3H，m)，6.88(1H， d，J 8.85Hz)，6.3(2H，s)，3.93(3H，s)；LC-MS rt 2.39 m/z 226 ES-。

步骤2：[6-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑 -1-基-苯基)-胺

将步骤1的产品(645mg)在DMF-DMA(4ml)中加热2小时。在冷 却过程中浓缩混合物，使用乙醚/汽油对其进行研磨，得到固体甲脒 (664mg)。以4-三唑基-苯胺(35mg)在AcOH(1.5ml)中于100℃处理 一部分上述物质(56mg)，处理时间为2小时，冷却，用水(25ml)稀 释。以NaOH碱化，过滤，干燥固体，得到目标化合物(66mg)。

1H NMR δ 10.04(1H，s)，9.24(1H，s)，9.13(2H，s)，8.86(1H， s)，8.63(1H，s)，8.25(2H，m)，8.04(2H，m)，7.89(3H，m)，3.99 (3H，s)；LC-MS rt 2.32 m/z 395 ES-。

实施例17：(6-噻吩-2-基-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯 基)-胺

步骤1：N’-(2-氰基-4-噻吩-2-基-苯基)-N，N-二甲基-甲脒

将中间体2(2g)、氯化锂(1.42g)、二氯二-(三苯基膦)钯(II) (0.235g)和2-(三丁基甲锡烷基)噻吩(2.74g)的混合物在甲苯(40ml) 中于120℃加热24小时。冷却反应混合物，浓缩，将其置于二氧化硅 胶柱上，使用DCM:MeOH(2.5％)洗脱，得到目标化合物(0.4g)。

1H NMR δ 8.02(1H，s)，7.88(1H，d，J 1.9Hz)，7.74(1H，dd， J 8.85，2.5Hz)，7.52(1H，s)，7.50(1H，s)，7.2(1H，d，J 8.85Hz)， 7.11(1H，t，J 4.4Hz)，3.09(3H，s)，3.0(3H，s)；LC-MS rt 2.32 m/z 256 ES+。

步骤2：(6-噻吩-2-基-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)- 胺

将步骤1的甲脒(151mg)和4-三唑基苯胺(100mg)在AcOH(5ml) 中于125℃加热3小时。冷却反应混合物，以2N NaOH碱化，过滤分离 出沉淀，使用柱色谱法在二氧化硅胶上纯化，洗脱液为DCM:MeOH (2.5％)，得到目标化合物(200mg)。

1H NMR δ 10.1(1H，s)，9.3(1H，s)，8.83(1H，s)，8.63(1H， s)，8.26(1H，s)，8.19(1H，d，J 8.85Hz)，8.07(2H，d，J 8.85Hz)， 7.92(2H，d，J 8.85Hz)，7.85(1H，d，J 8.85Hz)，7.76(1H，d，J 2.5Hz)，7.70(1H，d，J 5Hz)，7.27(1H，m)；LC-MS rt 2.39 m/z 369 ES-。

实施例18：[6-(4-甲基-噻吩-2-基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑 -1-基-苯基)-胺

步骤1：2-氨基-5-(4-甲基-噻吩-2-基)-苄腈

将中间体3(1g)、4-甲基-2-噻吩基硼酸(Acros，2eq，1.44g) 和四(三苯基膦)钯(O)(586mg)的混合物在DME/2N碳酸钠(水溶液， 2:1，30ml)中于100℃加热2.5小时。将其在水和EtOAc之间进行逐 步水性处理，得到褐色固体。使用DCM/汽油研磨该固体，过滤，用乙 醚洗涤，得到浅褐色固体(865mg，80％)。

1H NMR δ 7.6(1H，d，J 2.52Hz)，7.54(1h，dd，J 8.85，2.5Hz)， 7.16(1H，s)，6.98(1H，s)，6.80(1H，d，J 8.85Hz)，6.25(2H， br s)，2.19(3H，s)；LC-MS rt 2.91 m/z 215 ES+。

步骤2：N’-[2-氰基-4-(4-甲基-噻吩-2-基)-苯基]-N，N-二甲基-甲脒

将步骤1的产品(850mg)在DMF-DMA(1.32ml)中加热1.5小时。 冷却过程中，以乙醚稀释混合物，过滤，再用乙醚洗涤，得到灰色甲 脒固体(564mg)。使用4-三唑基-苯胺(35mg)在AcOH(1.5ml)中于 100℃条件下处理一部分上述物质(54mg)，处理时间为2小时，冷却， 用水稀释(25ml)。用NaOH碱化，过滤，干燥固体，得到目标化合物 (54.4mg，70％)。

1H NMR δ 10.0(1H，s)，9.18(1H，s)8.67(1H，s)，8.51(1H， s)，8.14(1H，s)，8.0(3H，m)，7.8(2H，d)，7.72(1H，d，J 8.85Hz)， 7.48(1H，s)，7.15(1H，s)，2.2(3H，s)；LC-MS rt 2.72 m/z 385 ES+。

实施例19：(6-呋喃-2-基-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4-三唑-1-基-苯 基)-胺

步骤1：N’-(2-氰基-4-呋喃-2-基-苯基)-N，N-二甲基-甲脒

将中间体2(1g)、氯化锂(0.71g)、二氯二(三苯基膦)钯(II) (0.717g)和2-(三丁基甲锡烷基)呋喃(1.31g)的混合物在甲苯(25 ml)中于90℃加热24小时。冷却反应混合物，浓缩，置于二氧化硅胶 柱上，先后以DCM和DCM:MeOH(2.5％)洗脱，得到产物(0.32g)。

1H NMR δ 8.05(1H，s)，7.91(1H，d，J 1.9Hz)，7.8(1H，dd， J 8.85，1.9Hz)，7.73(1H，d，J 1.9Hz)，7.25(1H，d，J 8.85Hz)， 6.95(1H，d，J 3.2Hz)，6.58(1H，m)，3.1(3H，s)，3.02(3H，s)； LC-MS rt 2.04 m/z 240 ES-。

步骤2：(6-呋喃-2-基-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4-三唑-1-基-苯基)- 胺

将步骤1甲脒(100mg)和4-三唑基苯胺(73mg)在AcOH(3ml)中 于125℃加热3小时。冷却反应混合物，浓缩，以柱色谱法在二氧化硅 胶柱上纯化，洗脱液为DCM:MeOH(2.5％)，得到产物(54mg)。

1H NMR δ 10.14(1H，s)，9.28(1H，s)，8.87(1H，s)，8.62(1H， s)，8.25(2H，m)，8.06(2H，m)，7.9(4H，m)，7.16(1H，m)，6.73 (1H，m)；LC-MS rt 2.25 m/z 353 ES-。

实施例20：{6-[4-(2-二甲基氨基-乙氧基)-3-氟-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)胺

步骤1：[2-(4-溴-2-氟-苯氧基)-乙基]-二甲基-胺。

将4-溴-2-氟苯酚(20mmol，2.19ml)、二甲基氨基乙基氯化 物.HCl(25mmol，3.6g)、粉末状碳酸钾(80mmol，11.06g)在干乙醇 (200ml)和干甲苯(200ml)中的溶液加热至80°，加热过夜。冷却反应混 合物，真空浓缩，分散到乙酸乙酯和水中。合并的有机相使用碳酸钠 水溶液洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩得到黄色油状产物。柱色谱法纯化， 洗脱液为DCM:EtOH:NH3(200:8:1)，得到目标化合物，为浅色油 状物(4.11g，78％)。

步骤2：3-氟-4-(2-二甲基胺-乙氧基)-苯基硼酸

在步骤1的[2-(4-溴-2-氟-苯氧基)-乙基]-二甲基-胺在THF (40ml)的溶液中加入小晶体碘，然后分部分加入Mg(570mg，1.5eq)。 加入后，加热混合物至回流，加热1小时。将灰色混合物冷却至-78°， 滴加三甲基硼酸盐(1.2eq，2.1ml)，温热过夜。加入1N HCl(水溶液， 60ml)，搅拌30分钟，乙醚(2 x 50ml)萃取。将合并的有机相干燥、浓 缩，使用丙酮/乙醚研磨得到的固体，过滤分离，干燥得到目标化合物， 为褐色固体(2.6g，73％)。无需进一步纯化，粗产品即可使用。

步骤3：N’-[3-氰基-3’-氟-4’-(2-甲氧基-乙氧基)-二苯基-4- 基]-N，N-二甲基-甲脒

使用二氯(二苄腈)钯(II)(1％，27mg)处理3-氟-4-(2-二甲基 胺-乙氧基)-苯基硼酸(1.96g，1.2eq)、中间体2(2.14g)、碳酸钾 (1.19g，1.2eq)在DMF/H2O(3:1，20ml)中的混合物，在环境温度和 氮气条件下搅拌2小时。使用水(200ml)稀释混合物，过滤，然后用乙 酸乙酯(2 x 50ml)萃取，将有机萃取液加入滤饼，干燥，浓缩得到褐色 固体。

将残留物溶于DCM，置于二氧化硅短柱上，抽气条件下分段洗脱， 洗脱液为DCM/EtOH/NH3 400-200:8:1。浓缩，得到浅褐色固体(1.88g， 74％)。

LC-MS rt 1.75 m/z 355 ES+。

步骤4：{6-[4-(2-二甲基氨基-乙氧基)-3-氟-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)胺

在步骤3的甲脒(250mg，0.73mM)在醋酸(2ml)中的溶液中加入 4-三唑基苯胺(117mg，0.73mM)。将反应物在125℃加热2小时。冷 却混合物，加入15ml 2N NaOH。粉碎产物，过滤分离。利用柱(SiOH) 纯化固体，洗脱液为DCM:EtOH:NH3 400-200:8:1，分离得到黄色固体 (258mg，75％)。

1H NMR(D6-DMSO)δ 10.06(1H，宽s)，9.29(1H，s)，8.81 (1H，s)8.63(1H，s)，8.25(2H，m)，8.09(1H，s)，8.05(1H，s)， 7.83(4H，m)，7.70(1H，d，J 10Hz)，7.39(1H，t，J 10Hz)，4.21 (2H，t，J 7.5Hz)，2.68(2H，t，J 7.5Hz)，2.24(6H，s)。

LC-MS rt 1.99 m/z 470 ES+

实施例21：(6-溴-喹唑啉-4-基)-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

将N’-(4-溴-2-氰基-苯基)-N，N-二甲基-甲脒(0.5g，2mmol， 1eq)和4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基胺(0.32g，2mmol，1eq)在醋酸(4mL) 中的溶液搅拌加热回流2小时，冷却。冷却后，加入二乙醚，产生黄 色沉淀。过滤收集沉淀，使用二乙醚洗涤，真空干燥得到醋酸盐形式 的目标化合物(0.53g，62％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ 1.88(s，3H)， 7.77(d，1H)，7.90(d，2H)，8.02(dd，1H)，8.08(d，2H)，8.25 (s，1H)，8.68(s，1H)，8.90(d，1H)，9.29(dd，1H)，10.04(s， 1H)。LC-MS rt 2.30 m/z 368 ES+。

实施例22：N-(2-{2-氟-4-[4-(4-[1，2，4]-三唑-1-基-苯基氨基)喹唑 啉-6-基)乙基)-N’，N’，N’-三甲基乙烷-1，2-二胺

将中间体11(96mg，0.23mmol，1eq)和4-(1H-1，2，4-三唑-1-基) 苯胺(38mg，0.24mmol，1.05mmol)在醋酸(2mL)中的溶液加热回流。1 小时后，冷却反应至室温，真空浓缩，使用饱和K2CO3水溶液处理，直 至泡腾现象终止。然后真空浓缩得到的混合物至干燥，得到褐色残留 物。利用快速柱色谱纯化残留物，先用200:8:1的CH2Cl2:EtOH:NH3洗 脱，再用100:8:1的CH2Cl2:EtOH:NH3洗脱。分离目标化合物，得到灰 白色固体(48mg，40％)。Rf＝0.39(40:8:1 CH2Cl2:EtOH:NH3)。1H-NMR (DMSO-d6)2.11(s，6H)，2.17(s，3H)，2.43(m，2H)，2.68(t，2H)， 4.08(t，2H)，7.23(m，1H)，7.56(m，1H)，7.75(m，3H)，7.93(m， 2H)，8.08(m，2H)，8.50(s，1H)，8.68(s，1H)，9.14(s，1H)，9.92 (br.s，1H)。LC-MS rt 2.08 m/z 527 ES+

实施例23：[6-(3-异丙氧基-4-甲氧基-苯基)-喹唑啉-4- 基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

在中间体18(60mg，0.18mmol)的醋酸(1ml)溶液中加入4-三唑 基苯胺(35mg，0.22mmol)，将溶液在80℃搅拌超过2个小时。LCMS分 析显示起始原料反应完全后，冷却反应混合物，减压蒸发去除过量的 醋酸。使用饱和碳酸氢钠水溶液处理残留物，至停止冒泡。过滤得到 的沉淀，真空干燥得到的固体。

使用制备色谱法进行纯化，得到灰白色固体目标化合物(18mg， 22％)。

1H NMR(D6-DMSO)10.21(1H，bs)，9.07(1H，s)，8.57(1H， s)，8.42(1H，s)，8.04(1H，s)，8.00(1H，dd，J 8.75Hz，1.5Hz)， 7.90(2H，d，J 9Hz)，7.72(1H，s)，7.68(2H，d，J 3.25Hz)，7.27 (2H，s)，6.96(1H，d，J 9Hz)，4.53(1H，quin，J 6Hz)，3.64(3H， s)，1.12(6H，d，J 6.25Hz)

LC-MS rt 2.48 m/z 454 ES+

实施例24：[6-(4-氟-3-异丙氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4] 三唑-1-基-苯基)-胺

在中间体19(95mg，0.29mmol)的醋酸(1ml)溶液中加入4-三唑 基苯胺(56mg，0.35mmol)，80℃下搅拌该溶液超过2小时。LCMS分析 显示起始原料反应完全。冷却反应混合物，减压蒸发去除过量的醋酸。 使用饱和碳酸氢钠水溶液处理残留物，至停止冒泡。过滤得到的沉淀， 真空干燥得到的固体。使用制备色谱法进行纯化，得到灰白色固体目 标化合物(33mg，25％)

1H NMR(D6-DMSO)10.24(1H，bs)，9.27(1H，s)，8.82(1H， s)，8.64(1H，s)，8.36(1H，s)，8.24(1H，s)，8.22(1H，dd，J 9Hz，1.75Hz)，8.09(2H，d，J 9Hz)，7.92(3H，m)，7.64(1H，dd， J 8.25Hz，2Hz)，7.46(1H，m)，4.87(1H，quin，J 6Hz)，1.36(6H， d，J 6Hz)

LC-MS rt 2.66 m/z 441 ES+

实施例25：{6-[4-(2-二甲基氨基-乙氧基)-3-氟-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)胺

步骤1：4-溴-1-(3-氯-丙氧基)-2-氟-苯

将2-氟-4-溴苯酚(162.6mmol，31.07g)、粉末碳酸钾 (731.7mmol，103g)、1-溴-3-氯丙烷(270mmol，26.6ml)在乙腈(250ml) 中的溶液加热回流3小时。冷却反应混合物，通过硅藻土过滤，真空 浓缩。得到浅色油状物(43.5g，100％)。

1H NMR(CDCl3)δ 6.99(2H，t，J 8.75Hz)，6.67(1H，t，J 8.75Hz)，3.97(2H，t，J 6.00Hz)，3.57(2H，t，J 6.00Hz)，2.04 (2H，m)。

步骤2：1-[3-(4-溴-2-氟-苯氧基)-丙基]-吡咯烷

将步骤1的4-溴-1-(3-氯-丙氧基)-2-氟-苯(0.046mM，11.94g) 和吡咯烷(0.138mM，11.43ml)在DMA(50ml)中的混合物加热回流48 小时。冷却反应混合物，将其分配于乙酸乙酯和饱和NaHCO3之间。将 合并的有机相在硫酸镁之上干燥，浓缩，分离得到褐色油状物(13.5g， 98％)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.11(2H，m)，6.79(1H，t，J 8.75Hz)，4.01 (2H，t，J 6.25Hz)，2.52(2H，t，J 7Hz)，2.42(6H，m)，1.95(3H， m)，1.69(1H，m，被H2O模糊)。

步骤3：3-氟-4-(3-吡咯烷-1-基-丙氧基)-苯基硼酸

将步骤2的1-[3-(4-溴-2-氟-苯氧基)-丙基]吡咯烷(5.31g， 17.57mmol)在THF(10ml)中的溶液逐滴加入到下述搅拌的浆状液中： Mg(640mg，1.5eq)的THF(2ml)混悬液和小晶体碘。滴加完毕后，混 合物加热回流3小时。将灰色混合物冷却至-78°，滴加三甲基硼酸盐 (1.2eq，2.4ml)，温热过夜。加入2N HCl(水溶液，60ml)并搅拌30 分钟，然后使用乙醚(2 x 50ml)萃取。将合并的有机相干燥、浓缩，产 生的褐色油状物用丙酮/乙醚/汽油研磨，得到褐色固体。粗产品无需 进一步纯化即可使用。

1H NMR(d6-DMSO)δ 8.08(2H，宽s)，7.55(1H，t，J 8.75Hz)， 7.15(2H，m)，4.04(2H，t，J 6.25Hz)，2.50(3H，m)，2.45(6H， m)，1.84(3H，m)。

步骤4：N’-[3-氰基-3’-氟-4’-(3-吡咯烷-1-基-丙氧基)-二苯基-4- 基]-N，N-二甲基-甲脒

使用二氯(二苄腈)钯(II)(2％，44mg)处理3-氟-4-(3-吡咯烷 -1-基-丙氧基)-苯基硼酸(3.074g，2eq)、中间体2(1.72g，1eq)、 碳酸钾(0.954g，1.2eq)在DMF/H2O(3:1，40ml)中的混合物，在环境 温度和氮气条件下搅拌18小时。用水(200ml)稀释混合物，乙酸乙酯 (2x50ml)萃取。在硫酸镁之上干燥后，浓缩有机相，得到褐色胶状物。

将残留物溶于DCM中，置于二氧化硅短柱上，抽气条件下分段 洗脱，洗脱液为DCM/EtOH/NH3 200:8:1至50:8:1，浓缩，得到浅褐色 固体(1.63g，71％)。

LC-MS rt 1.99 m/z 395 ES+。

步骤5：{6-[3-氟-4-(3-吡咯烷-1-基-丙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)胺

在步骤4的甲脒(257mg，0.653mM)的醋酸(3ml)溶液中加入4- 三唑基苯胺(115mg，0.73mM)。将反应物加热至125℃，加热1小时。 冷却混合物，加入15ml 2N NaOH碱化，用乙酸乙酯萃取。在硫酸镁之 上干燥后，浓缩有机相得到黄色固体。使用DCM/Et2O/汽油研磨该 固体，分离得到黄色固体(163mg，44％)。

1H NMR(D6-DMSO)δ 10.07(1H，宽s)，9.29(1H，s)，8.83 (1H，s)，8.64(1H，s)8.26(2H，m)，8.07(2H，m)，7.85(5H，m)， 7.69(1H，d，J 10Hz)，7.35(1H，dd，J 10Hz，5Hz)，4.22(2H，t， J 7.5Hz)，2.46(6H，m，被H2O模糊)，2.08(2H，t，J 7.5Hz)，1.70 (4H，m)。

LC-MS rt 2.13 m/z 509 ES+。

实施例26：{6-[-3-氟-4-(3-吗啉-4-基-丙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)胺

步骤1：4-溴-1-(3-氯-丙氧基)-2-氟-苯

将2-氟-4-溴苯酚(162.6mmol，31.07g)、粉末状碳酸钾 (731.7mmol，103g)、1-溴-3-氯丙烷(270mmol，26.6ml)在乙腈(250ml) 中的溶液加热至回流，加热3小时。冷却反应混合物，硅藻土过滤， 真空浓缩，得到浅色油状物(43.5g，100％)。

1H NMR(CDCl3)δ 6.99(2H，t，J 8.75Hz)，6.67(1H，t，J 8.75Hz)，3.97(2H，t，J 6.00Hz)，3.57(2H，t，J 6.00Hz)，2.04 (2H，m)。

步骤2：4-[3-(4-溴-2-氟-苯氧基)-丙基]-吗啉

将步骤1的4-溴-1-(3-氯-丙氧基)-2-氟-苯(0.038mM，10.02g) 和吗啉(0.114mM，10.1ml)的混合物在DMA(50ml)中加热至回流，加 热48小时。冷却反应混合物，分配于乙酸乙酯和饱和NaHCO3之间。将 合并的有机相在硫酸镁之上干燥、浓缩，分离出褐色油状物(12g，98％)。

1H NMR(CDCl3)δ 7.36(1H，m)，7.32(1H，m)，6.98(1H，t， J 8.75Hz)，4.24(2H，t，J 6.25Hz)，3.87(4H，m)，2.62(6H，m)， 2.12(2H，m)。

LC-MS rt 1.98 m/z 320 ES+。

步骤3：3-氟-4-(3-吗啉-1-基-丙氧基)-苯基硼酸

将步骤2的4-[3-(4-溴-2-氟-苯氧基)-丙基]-吗啉(5.08g， 15.96mmol)在THF(10ml)中的溶液滴加入下述搅拌的浆状液中：Mg (582mg，1.5eq)在THF(2ml)中的混悬液和小晶体碘。滴加完毕后， 将混合物在90°加热1小时。将灰色混合物冷却至-78°，滴加三甲基 硼酸盐(1.2eq，2.15ml)，温热过夜。加入2N HCl(水溶液，60ml)， 搅拌30分钟，然后用乙醚(2 x 50ml)萃取。在水层中加入三乙胺，使用 乙酸乙酯和乙醚萃取。将合并的有机相干燥、浓缩得到褐色油状物 (3.8g，84％)。粗产品无需进一步纯化即可使用。

1H NMR(D6-DMSO)δ 8.08(2H，宽s)，7.55(1H，t，J 8.75Hz)， 7.15(2H，m)，4.04(2H，t，J 6.25Hz)，3.57(4H，m)，2.37(6H， m)，1.84(2H，m)。

LC-MS：rt 1.95 m/z 284 ES+。

步骤4：N’-[3-氰基-3’-氟-4’-(3吗啉-1-基-丙氧基)-二苯基-4- 基]-N，N-二甲基-甲脒

使用二氯(二苄腈)钯(II)(2％，68mg)处理3-氟-4-(3-吗啉-1- 基-丙氧基)-苯基硼酸(3.8g，1.5eq)、中间体2(2.67g，1eq)、碳酸 钾(1.48g，1.2eq)在DMF/H2O(3:1，40ml)中的混合物，在环境温度 和氮气条件下搅拌18小时。用水(200ml)稀释混合物，以EtOAc(2 x 50ml) 萃取。在硫酸镁之上干燥，浓缩有机相，得到褐色胶状物。

将残留物溶于DCM中，置于二氧化硅短柱上，抽气条件下分段 洗脱，洗脱液为DCM/EtOH/NH3 200:8:1，浓缩，得到可流动的褐 色固体(3.16g，85％)。产品静置固化。

1H NMR(CDCl3)δ 7.79(1H，宽s)，7.42(1H，m)，7.02(1H， m)，6.79(3H，m)3.88(2H，m)，3.49(4H，m)，2.87(2H，d，J 5.5Hz)， 2.73(3H，s)，2.66(3H，s)，2.30(5H，m)，1.75(2H，m)。

LC-MS rt 1.91 m/z 411 ES+。

步骤5：(6-[3-氟-4-(3-吗啉-4-基-丙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)胺

在步骤4的甲脒(429mg，1.045mmol)的醋酸(3ml)溶液中加入4- 三唑基苯胺(184mg，1.15mmol)。反应物在125℃加热1小时。冷却 混合物，使用15ml 2N NaOH碱化，过滤分离出得到的沉淀，然后将其 溶于DCM中，利用柱色谱法在二氧化硅上纯化，洗脱液为DCM/EtOH/ NH3 400:8:1至50:8:1，浓缩得到奶油色固体(136mg，25％)。

LC-MS rt 2.1 m/z 526 ES+。

1H NMR(D6-DMSO)δ 10.06(1H，宽s)，9.29(1H，s)，8.82 (1H，s)，8.65(1H，s)8.21(2H，m)，8.07(2H，m)，7.83(4H，m)， 7.69(1H，d，J 10Hz)，7.32(1H，dd，J 10Hz，5Hz)，4.17(2H，t， J 7.5Hz)，3.58(4H，t，J 2.5Hz)，3.34(2H，m，被H2O模糊)，2.40 (4H，t，J 2.5Hz)，1.92(2H，t，J 7.5Hz)。

实施例27：[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(2-甲基 -4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

在圆盘传送装置的试管中加入甲脒(实施例10步骤1)(0.05g， 0.16mmol)、中间体21(0.031g，0.18mmol)和AcOH(1.5ml)。120℃ 搅拌混合物3小时。冷却混合物，浓缩至干燥，置于二氧化硅柱上， 以2.5％ MeOH:DCM洗脱。分离出白色固体0.015g(21％)。

1H n.m.r(D6-DMSO)9.69(1H，s)，9.10(1H，s)，8.54(1H， s)，8.23(1H，s)，8.06(1H，s)，8.02(1H，m)，7.69-7.24(6H，m)， 6.94(1H，d，J＝8.85Hz)，3.71(3H，s)，3.64(3H，s)，2.11(3H， s)；

LC-MS rt 2.18 m/z 438 ES+。

实施例28：1-(4-{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基氨基}-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸

在中间体22(55mg，0.16mM)的醋酸(3ml)溶液中加入中间体24 (42mg，0.19mM)。反应物加热至100℃，加热2小时。冷却混合物， 加入15ml 2N NaOH。粉碎产物，过滤分离。利用制备HPLC法纯化固体， 分离得到白色固体(26mg，32％)。

1H NMR(D6-DMSO)δ 10.15(1H，宽s)，8.82(1H，s)，8.56 (1H，s)8.15(1H，d，J 7.5Hz)，8.00(2H，d，J 7.5Hz)，7.80(2H， m)，7.68(1H，d，J 7.5Hz)，7.56(2H，d，J 7.5Hz)，7.32(1H，t， J 7.5Hz)，4.27(3H，s)，3.73(3H，s)；LC-MS：rt 2.31 m/z 512 ES-。

实施例29：1-(4-{6-[3，4-二甲氧基-苯基]-喹唑啉-4-基氨基}-苯 基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸

在中间体23(50mg，0.16mM)的醋酸(3ml)溶液中加入中间体24 (42mg，0.19mM)。反应物加热至100℃，加热2小时。冷却混合物， 加入15ml 2N NaOH。粉碎产物，过滤分离。利用制备HPLC法纯化固体， 分离得到白色固体(27mg，34％)。

1H NMR(D6-DMSO)δ 10.11(1H，宽s)，8.82(1H，s)，8.68 (1H，s)8.26(1H，dd，J 10Hz，J 2.5Hz)，8.14(2H，d，J 10Hz)， 7.87(1H，d，J 10Hz)，7.67(2H，d，J 10Hz)，7.46(2H，dd，J 10Hz， J 2.5Hz)，7.14(1H，d，J 10Hz)，3.93(3H，s)，3.85(3H，s)；LC-MS： rt 2.16 m/z 482 ES+。

实施例30：1-{4-[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基氨基]-苯 基}-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸二甲基酰胺

在中间体23(50mg，0.16mM)的醋酸(3ml)溶液中加入中间体25 (49mg，0.19mM)。将反应物加热至100℃，加热2小时。冷却混合物， 加入15ml 2N NaOH。粉碎产物，过滤收集固体。利用制备HPLC法纯化 固体，分离得到白色固体(23mg，28％)。

1H NMR(D6-DMSO)δ 10.09(1H，宽s)，8.82(1H，s)，8.67 (1H，s)8.26(1H，dd，J 8.75Hz，J 1.5Hz)，8.13(2H，d，J 8.75Hz)， 7.87(1H，d，J 8.7Hz)，7.66(2H，d，J 8.7Hz)，7.46(2H，m)，7.14 (1H，d，J 8.7Hz)，3.93(3H，s)，3.85(3H，s)，3.15(3H，s)，3.03 (3H，s)，2.55(3H，s)；LC-MS：rt 2.22 m/z 510 ES+。

实施例31：1-(4-{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基氨基}-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸甲基酰胺

步骤1：5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸甲基酰胺.

-10℃，在5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-1，2，4-三唑-3-羧酸 (Key Organics，400mg，1.61mM)和Hunig’s碱(667ul，3.86mM)在 DCM:DMF(6ml:1ml)中的溶液中滴加异丁基氯甲酸酯(250ul，1.93mM)。 反应物在-10℃搅拌30分钟，然后缓慢加入2M甲基胺溶液(965ul， 1.93mM)。将混合物温热至室温，再搅拌1小时。使用饱和NaHCO3洗涤 粗混合物，萃取，在MgSO4之上干燥。蒸发后，得到的固体可直接用于 下一步反应而无需进一步纯化(374mg，89％)。LC-MS：rt 2.01 m/z 261 ES+。

1H NMR(d-DMSO)δ 8.42(2H，d，J 7Hz)，7.95(2H，d，J 7Hz)， 2.73(3H，d，J 4.75Hz)，2.60(3H，s)。

步骤2：1-(4-氨基-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸甲基酰 胺.

以1ml/分钟的速度将步骤1得到的5-甲基-1-(4-硝基苯 基)-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸甲基酰胺(100mg，0.38mmol)在甲醇(8ml) 中的溶液注射入氢化器“H-立方体”中，所述“H-立方体”是内部产 生氢气和可随意储存结合的系统(Pd/C)，大气压下温度设置为25℃。

浓缩得到的溶液，得到白色固体(86mg，97％)。LC-MS：rt 1.15 m/z 231 ES+。

1H NMR(d-DMSO)δ 8.61(1H，宽s)，8.54(2H，d，J 7Hz)， 7.12(2H，d，J 7Hz)，2.73(3H，d，J 4.75Hz)，2.60(3H，s)。

步骤3：1-(4-(6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4-基氨 基}-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸甲基酰胺.

在中间体22(50mg，0.16mM)的醋酸(3ml)溶液中加入步骤2得 到的1-(4-氨基-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸甲基酰胺 (44mg，0.19mM)。反应物在100℃下搅拌2小时。冷却混合物，加入 15ml的2N NaOH。粉碎产物，过滤收集固体。利用制备HPLC纯化固体， 分离得到白色固体(6mg，8％)。LC-MS：rt 2.33 m/z 528 ES+。

1H NMR(d-DMSO)δ 10.02(1H，宽s)，8.74(1H，s)，8.56 (1H，s)8.21(1H，dd，J8.75Hz，J 1.5Hz)，8.01(2H，d，J 8.7Hz)， 7.79(2H，m)，7.60(2H，d，J 8.7Hz)，7.57(1H，s)，7.27(1H，t， J 8.7Hz)，4.15(2H，t，J 4.5Hz)，3.62(2H，t，J 4.5Hz)，3.24 (3H，s)，2.67(3H，d，J 4.7Hz)，2.44(3H，s)。

实施例32：1-(4-{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基氨基}-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸二甲基酰胺

在中间体22(50mg，0.16mM)的醋酸(3ml)溶液中加入中间体25 (47mg，0.19mM)。反应物在100℃加热2小时。冷却混合物，加入15ml 2N NaOH。粉碎产物，过滤收集固体。利用制备HPLC纯化固体，分离 得到白色固体(23mg，27％)。

1H NMR(d-DMSO)δ 10.09(1H，宽s)，8.83(1H，s)，8.66 (1H，s)8.22(1H，dd，J 7.5Hz，J 1.5Hz)，8.14(1H，d，J 5Hz)， 8.10(1H，s)，7.85(2H，m)，7.70(2H，s)，7.66(1H，s)，7.33(1H，dd， J 10Hz，J 7.5Hz)，4.25(2H，t，J 5Hz)，3.71(2H，t，J 5Hz)，3.14 (3H，s)，3.01(3H，s)，2.67(3H，s)，2.44(3H，s)；LC-MS：rt 2.37 m/z 542 ES+。

实施例33：(6-溴-喹唑啉-4-基)-(2-甲基-4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基 -胺

在圆盘传送装置的试管中加入6-溴-4-氯-喹唑啉(0.1g， 0.41mmol)、中间体Y(0.078g，0.45mmol)和CH3CN(无水，4ml)，混 合物在氮气条件下于90℃搅拌24小时。形成橙色沉淀，过滤出沉淀， 用水洗涤，再用1N NaOH和水再次洗涤，真空40℃条件下干燥。分离 得到0.1g(51％)固体。

1H n.m.r(D6-DMSO)9.26(1H，s)，9.05(1H，s)，8.76(1H， s)，8.20(1H，s)，8.17(1H，d，J＝1.26Hz)，7.85(2H，bs)，7.81 (1H，s)，7.74(1H，dd，J＝8.85Hz，2.53Hz)，7.47(1H，d，J＝ 8.21Hz)，2.25(3H，s)；LC-MS rt 2.19 m/z 382 ES+。

实施例34：[1-(4-{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基氨基}-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-(4-甲基-哌嗪-1-基) 甲酮

步骤1：[5-甲基-1-(4-硝基-苯基-)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-(4-甲基 -哌嗪-1-基)-甲酮.

-10℃，在5-甲基-1-(4-硝基苯基)-1H-1，2，4-三唑-3-羧酸 (Key Organics，400mg，1.61mM)和Hunig’s碱(667ul，3.86mM)在 DCM:DMF(6ml:1ml)的溶液中滴加异丁基氯甲酸酯(250ul，1.93mM)。 反应物在-10℃搅拌30分钟，然后缓慢加入甲基哌嗪(214ul， 1.93mM)。将混合物温热至室温，再搅拌1小时。使用饱和NaHCO3洗涤 混合物，萃取，在MgSO4之上干燥。蒸发后，得到的固体可直接用于下 一步反应而无需进一步纯化(335mg，63％)。LC-MS：rt 1.26 m/z 330 ES+。

1H NMR(D6-DMSO)δ 8.39(2H，d，J7Hz)，7.92((2H，d，J 7Hz)，3.58(4H，m)，3.30(4H，m)，2.58(3H，s)，2.15(3H，s)。

步骤2：[1-(4-氨基-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-(4-甲基- 哌嗪-1-基)甲酮.

大气压下，温度设置为25℃时，以1ml/分钟的速度将步骤1得 到的[5-甲基-1-(4-硝基-苯基-)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-(4-甲基-哌 嗪-1-基)-甲酮(100mg，0.302mmol)在甲醇(8ml)中的溶液注射入氢化 器“H-立方体”中，所述“H-立方体”内部产生氢气及可随意储存结 合的系统(Pd/C)。

浓缩得到的溶液，得到白色固体(87mg，96％)。LC-MS：rt 2.22 m/z 301 ES+。

1H NMR(D6-DMSO)δ 8.60(1H，宽s)，7.51(2H，d，J 7Hz)， 7.09((2H，d，J 7Hz)，3.58(4H，m)，3.30(4H，m)，2.58(3H，s)， 2.15(3H，s)。

步骤3：[1-(4-{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4-基 氨基}-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-(4-甲基-哌嗪-1-基)甲 酮.

在中间体22(55mg，0.16mM)的醋酸(3ml)溶液中加入步骤2的 [1-(4-氨基-苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]-三唑-3-基]-(4-甲基-哌嗪 -1-基)甲酮(58mg，0.19mM)。反应物在100℃加热2小时。冷却混 合物，加入15ml 2N NaOH。粉碎产物，过滤收集固体。利用制备HPLC 纯化固体，分离得到白色固体(25mg，26％)。LC-MS：rt 2.11 m/z 597 ES+。

1H NMR(D6-DMSO)δ 10.32(1H，宽s)，9.05(1H，s)，8.88 (1H，s)8.45(1H，dd，J 7.5Hz，J 1.5Hz)，8.35(1H，d，J 5Hz)， 8.31(1H，s)，8.08(2H，m)，7.92(2H，s)，7.86(1H，s)，7.58(1H，dd， J 10Hz，J 7.5Hz)，4.47(2H，t，J 5Hz)，3.95(2H，t，J 5Hz)，3.88 (4H，m)，3.57(3H，被H2O模糊)，3.53(4H，被H2O模糊)，2.78(3H， s)，2.43(3H，s)。

实施例35：2-甲氧基-4-[4-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基氨基)-喹唑啉 -6-基]-苯酚

步骤1：N’-(3-氰基-4’-羟基-3’-甲氧基-二苯基-4-基)-N，N-二甲基- 甲脒

使用PdCl2(PhCN)2(2％，13mg)处理硼酸盐(Aldrich，2-甲氧 基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼杂环戊-2-基)苯酚，500mg， 1.2eq)和中间体2(1eq，498mg)、碳酸钾(1.2eq，276mg)在DMF/H2O (3:1，12ml)中的混合物，在氮气条件下室温搅拌12小时。使用水(50ml) 洗涤混合物，抽气条件下使用塑性玻璃料过滤。以二乙醚洗涤滤饼， 真空干燥，得到酒红色固体(390mg，79％)。

1H NMR(D6-DMSO)δ 3.18(6H，d)；3.98(3H，s)；6.94(1H，d)， 7.2(1H，d)；7.32(3H，m)；7.88(1H，d)；7.99(1H，s)；8.11(1H， s)；9.23(1H，s)；LCMS rt 1.93m/z 295 ES+。

步骤2：2-甲氧基-4-[4-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基氨基)-喹唑啉-6- 基]-苯酚

将N’-(3-氰基-4’-羟基-3’-甲氧基-二苯基-4-基)-N，N-二甲基- 甲脒(220mg)和三唑基苯胺(113mg)的混合物在醋酸(2ml)中加热至 125℃，加热2小时。冷却混合物，以水洗涤，抽气过滤过夜。将所 得的固体在乙酮(20ml)中声波化，并温热过滤。干燥固体，得到黄 色固体目标化合物(28mg)。

.1H NMR(D6-DMSO)δ 3.86(3H，s)；6.88(1H，d)；7.28(1H， d)；7.36(1H，s)；7.82(3H，m)；8.03(2H，m)；8.15(2H，m)；8.56 (1H，s)；8.69(1H，s)；9.2(2H，s)；9.98(1H，s)；LC-MS rt 2.14 m/z 411 ES+。

实施例36：2-甲氧基-5-[4-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基氨基)-喹唑啉 -6-基]-苯酚

根据实施例35所述方法制备本化合物，由5-溴-2-甲氧基苯酚 制备得到适当的硼酸盐，制备方法为桑德迈尔反应(参见JOC，1993，58， 1，42)。所需的硼酸/硼酸盐可通过下述方法制得：双戊酰二硼进行钯 催化的硼化反应；或者用二氢吡喃对苯酚进行临时保护，然后锂化， 与三甲氧基硼酸盐反应，然后水解并去除保护基团。

实施例37：{6-[3-氟-4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-4- 基}-(2-甲基-4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺

根据实施例27所述方法制备本化合物，使用适当的所述甲脒作 为中间体22。

实施例38：HCV复制子活性

材料：

HCV复制子细胞株

1b复制子(Huh.7)，(Science 285，110-113所述)

Huh-9B：带有永久性双顺反子HCV基因型1b编码序列的肝脏 细胞株：[I389lucubineo_3-3’_ET]，包括荧光素酶-泛素-新霉素磷酸转 移酶融合蛋白和EMCV-I RES驱动性非结构性HCV(NS3至NS5B)编码序 列，所述编码序列包括细胞培育的适应性突变E1202G，T1280I和 K1846T(Lohmann et al，2001)。

方法：

该测试在平底96-孔板的所有96个孔中进行。在加入化合物的前 一天建立此板。测试共进行4天，ELISA试验在第5天开始进行。

第1天

建立测试板

使用无菌PBS洗涤以指数增长的Huh-9B单细胞层以去除血清， 然后用胰岛素处理以从烧瓶中去除细胞。

细胞悬浮在生长培养基中，使用血细胞计数器计数。在复制的96 孔板上以104细胞/孔的密度接种Hun-9B，生长培养基的总体积为100 μL/孔，其中不包括下文所述的抗生素。

其中一个板是不透光的白色96孔板，用于根据荧光素酶信号测 定IC50(称作复制子板)，另一个板是透明的96孔板，利用亚甲蓝染 剂用于平行测定药物毒性(称作毒性板)。毒性板的G12孔和H12孔中 不放置细胞，仅放用作背景读数的缓冲液。

然后将板在37℃，5％ CO2环境下培养24小时，得到90％汇合 的单层细胞。

第2天

加入化合物和化合物稀释

将二倍稀释的每个化合物置于高容积容量圆底板的96个分开的 孔中，使用不含抗生素的生长培养基使此测试中化合物的初始浓度翻 倍。

下文所述的每一个测试板上的5个化合物(C1-C5)和对照化合物 都被进行测试，每个板上还包括一个对照化合物。

化合物的测试包括8个二倍稀释系列。每个化合物最开始被稀释 为25μM，对照化合物稀释为12.5μM。

仅在(A1和A2)有DMSO，浓度为1％，以提供相应的荧光素酶检测 最强信号(100％)。之前的最佳实验显示包括细胞和作为检测背景(不 确定的)水平的对照孔的非复制子的可忽略荧光素酶信号通常是不包 括的。1％DMSO孔的信号(最强信号)组成了测试窗口。

对于两个96孔稀释板上的每个化合物稀释而言，使用多通道移 液管将100μl转移到复制子和毒性孔上，其中包括100μl介质以获 得理想的最终浓度。

第5天

复制子板上的荧光素酶检测阶段

将孔中的介质轻拍至Virkon中，在温PBS中洗涤一次板，轻轻 甩干。

使用多通道移液管在每个孔中加入20μl溶胞缓冲液。然后稳定 溶胞产物数小时。

将荧光素酶检测缓冲液置于光度计中(Lmax，分子装置)。

使用4 x 300μl荧光素酶检测缓冲液预处理M注射器。将被检测 的板放在光度计中，在一个孔中自动注入100μl荧光素酶检测缓冲 液，4秒后读数。

1秒后，在另一个孔中注入100μl荧光素酶检测缓冲液，4秒后 读数。进行相同的操作，直至96个孔都被检测。

读数完成后，使用去离子水洗涤光度计注射系统。

使用SOFTmax的SOFTmax软件包获得数据。

毒性板上的毒性检测

将孔中的介质轻拍至Virkon中，在温PBS中洗涤一次板，轻轻 甩干。在所有包括空白对照的孔(G12和H12)中加入100μl 0.5％亚甲 基蓝在50％甲醇中的溶液。将板在室温下放置至少1小时。然后使用 水在塑料箱中轻轻漂洗板，轻轻甩干，敞开放置直至完全干燥。在每 个孔中加入100μl 1％月桂酰肌氨酸，溶解染料，37℃振摇1小时。 使用SOFTmax Pro软件包，利用SpectraMax分光光度计在620nm波长 处读板。

结果：

SOFTmax数据外存储器输出为Excel或文本文件。由每个化合物 的数据进行标准四参数非线性回归分析，然后用于计算IC50。

在上述检测中，所有的复制子孔都是平均值。然后在每个浓度点 计算对照％，作为DMSO对照孔的百分数。

  复制子IC50 ***<5μM；**＝5-20μM； *>20μM 复制子TD50 **>25μM，*<25μM 实施例号 uM uM 1 *** * 2 ** ** 3 *** ** 4 ** ** 5 *** ** 6 * ** 7 *** ** 8 *** **

  9 *** ** 10 *** * 11 *** ** 12 *** * 13 *** * 14 *** * 15 *** ** 16 *** ** 17 *** ** 18 *** ** 19 *** ** 20 *** * 21 *** ** 22 *** * 23 *** * 24 *** ** 25 *** * 26 *** * 27 *** * 28 *** ** 29 *** ** 30 *** * 31 *** ** 32 *** * 33 *** ** 34 *** ** 35 36 37

实施例39：HCV复制抑制剂和人干扰素α A之间的协同作用

对HCV复制抑制剂[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4- 基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺和干扰素α A(Sigma Hu-INF-α A序数14276)进行联合用药的ELISA试验。

如实施例38的ELISA方案

对于干扰素α A的每一个本底浓度，计算出[6-(3，4-二甲氧基- 苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺的IC50值。类 似地，对于[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑 -1-基-苯基)-胺的每一个本底浓度，计算出干扰素α A的IC50值。

[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑-1- 基-苯基)-胺对抗HCV复制子1b的ELISAI C50为0.2μM。

干扰素α A对抗HCV复制子1b的ELISA IC50为6u/ml。

联合用药，在低于[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4- 基]-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-胺的IC50值的浓度下，干扰素α A 的IC50值从6u/ml降低至至少0.008u/ml。在低于干扰素αA的IC50 的浓度下，[6-(3，4-二甲氧基-苯基)-喹唑啉-4-基]-(4-[1，2，4]三唑 -1-基-苯基)-胺的IC50值从0.2μM降低至至少0.067μM。

分级抑制浓度(FIC)可用于检测协同效果：

其中FIC值      <0.5           协同作用

               0.5-1.0        加合作用

               1.0-2.0        无差别

               >2.0           拮抗作用